Ｃ型肝炎ウイルスの増殖を抑制する医薬組成物
【課題】ＨＣＶ感染量を低減させる抗ＨＣＶ療法に用いる医薬組成物の提供。
【解決手段】有効成分として、式（Ｉ）
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基、又は、それを有する炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状炭化水素基を表す。）で表される化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩を含有する。上記式（Ｉ）で表される化合物のうち、好ましい化合物は、Ｒ１が置換基を有していても良いモルホリノ基であり、Ｒ２が置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフタレン−１−イル基である化合物である。
【解決手段】有効成分として、式（Ｉ）
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基、又は、それを有する炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状炭化水素基を表す。）で表される化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩を含有する。上記式（Ｉ）で表される化合物のうち、好ましい化合物は、Ｒ１が置換基を有していても良いモルホリノ基であり、Ｒ２が置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフタレン−１−イル基である化合物である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス感染症の予防や治療に有用な化合物、及びそれらを含む医薬組成物に関し、詳しくは、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）感染による肝疾患の予防や治療に用いるための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＣＶの感染者は世界で１〜２億人、日本国内では２００万人以上と推測されている。
これらの患者の約５０％が慢性肝炎に移行し、そのうち約２０％が感染後３０年以上たって肝硬変、肝癌となる。肝癌の約９０％の原因がＣ型肝炎といわれている。日本国内では、毎年２万人以上の患者がＨＣＶ感染に伴う肝癌により死亡している。
【０００３】
ＨＣＶは、１９８９年に輸血後の非Ａ非Ｂ型肝炎の主要な原因ウイルスとして発見された。ＨＣＶはエンベロープを有するＲＮＡウイルスであり、そのゲノムは１本鎖（＋）ＲＮＡからなり、フラビウイルス科のヘパシウイルス（Ｈｅｐａｃｉｖｉｒｕｓ）属に分類される。
【０００４】
ＨＣＶは、いまだ明らかでない原因により宿主の免疫機構を回避するため、免疫機構の発達した大人に感染した場合でも持続感染が成立することが多く、慢性肝炎、肝硬変、肝癌へと進行し、手術により摘出しても、非癌部で引き続き起こる炎症のため肝癌が再発する患者が多いことも知られている。
【０００５】
よって、Ｃ型肝炎の有効な治療法の確立が望まれており、その中でも、抗炎症剤により炎症を抑える対症療法とは別に、患部である肝臓においてＨＣＶを減らすあるいは根絶させる薬剤の開発が強く望まれている。
ＨＣＶが感染後に消失すると、ＨＣＶ感染によって起こる疾患の予防または治療に効果があることが認められており、ＨＣＶ量を低減させるための抗ＨＣＶ薬剤治療が行われている（非特許文献１）。
【０００６】
現在、抗ＨＣＶ薬剤療法に用いられる代表的な医薬品は各種のインターフェロン（ＩＦＮ）製剤である。ＩＦＮはウイルスが感染した細胞の膜に結合し、細胞内を抗ウイルス状態にすることによりさまざまな種類のウイルスの増殖を抑制することが知られていた（非特許文献２）。ＨＣＶレプリコン試験系を用いて、ＩＦＮがＨＣＶに対してもこの作用様式により増殖を抑えることが示され、ＨＣＶウイルスのＮＳ５Ａタンパク質がＩＦＮ−αの効果に関係することが明らかとなっている（非特許文献３、４）。
【０００７】
ヒトの産生するＩＦＮにはさまざまな種類が存在するが、一般的にＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γのいずれも抗ＨＣＶ作用を示すことが認められている（非特許文献５）。臨床で用いられるＩＦＮ製剤の有効成分には、ヒトリンパ芽球由来のＩＦＮ−α、リコンビナントＩＦＮ−α−２ａ、リコンビナントＩＦＮ−α−２ｂ、ヒト線維芽細胞由来のＩＦＮ−βなどさまざまな種類がある。また、これらの天然型のＩＦＮの代わりに修飾を施したＩＦＮを用いた製剤、すなわちアミノ酸配列を一部改変したコンセンサスＩＦＮや、ポリエチレングリコールを結合させたＰＥＧ化ＩＦＮもある。
【０００８】
しかしながら、ＩＦＮは、抗ＨＣＶ療法に用いられる用量において高率に副作用を生じさせる。生じる副作用には、発熱、全身倦怠感、食欲不振、白血球減少、血小板減少、脱毛、精神症状などがある。また、ＩＦＮに対する抗体が産生される場合がある。さらに、ＩＦＮ製剤単独による治療では、ＨＣＶ感染を消失できない患者やＨＣＶ量が低減しない患者が数多く存在する。
【０００９】
一方、抗ウイルス剤であるリバビリンをＩＦＮ製剤と併用し、ＨＣＶ量を低減させる効果を高める治療法も行われるようになった。リバビリン単独、及びＩＦＮとの併用による抗ＨＣＶ効果はＨＣＶレプリコン試験系において確認されている（非特許文献６）。
【００１０】
しかしながら、この２剤を併用することによっても依然として十分な臨床効果は認められていない。例えば、Ｈｅｒｒｉｎｅ Ｓ．Ｋ．は、この２剤の併用療法を一般的な抗ＨＣＶ療法として挙げ、慢性感染患者に対してＰＥＧ化インターフェロンの皮下注射を週一回行いリバビリンの経口服用を毎日行う治療を施した際の治療成績を要約し、その持続的なウイルス学的反応が見られた患者の割合はおおよそ５５％と述べている（非特許文献７）。すなわち、この報告は、おおよそ患者の４５％では十分な臨床効果が認められないことを示している。
【００１１】
また、リバビリンを用いた治療では副作用として重篤な貧血が生じる場合があり、その場合には薬剤の用量を少なくするか中止せざるを得ない。また、リバビリンはＩＦＮと同様に妊娠の可能性がある女性への使用に慎重になる必要があるが、これに加えて、リバビリンは精子形成に悪影響を及ぼすため男性の場合も使用中は避妊を推奨されるという問題点がある。以上のことから、リバビリンに代わる薬剤が求められている。
【００１２】
抗ＨＣＶ活性を示す化合物及び医薬組成物としては、例えば特許文献１には、フザリウム・エスピー（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．）Ｆ１４７６株から単離される化合物が、ＨＣＶの複製阻害活性を有することが記載されている。また、特許文献２には、ベンゾフラン誘導体とインターフェロンを併用し、ＨＣＶ感染症を予防又は治療する医薬が開示されている。
【００１３】
また、本発明者らは、生体内に存在するタンパク質である骨形成因子７（ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ７；ＢＭＰ−７）を有効成分とする、ＨＣＶ感染による肝疾患を予防又は治療するための医薬組成物を報告した（特許文献３）。これらは一定の効果を奏するものであるが、より効果的にＨＣＶレプリコン増殖抑制効果を示し、且つ安全性の高い化合物及び医薬組成物の開発が望まれている。
【００１４】
一方、下記一般式（Ｉ）で表される化合物は、オキサジアゾリル環形成の前駆体としての合成例は報告されているが、当該化合物の抗ＨＣＶ活性についてこれまでに報告はなされていない（特許文献４〜６）。
【００１５】
【化１】
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開２００６−７７００４号公報
【特許文献２】特開２０１０−２４１７５０号公報
【特許文献３】特開２００８−１６９１１６号公報
【特許文献４】特表２００２−５０５３２９号公報
【特許文献５】特表２００２−５２６４９５号公報
【特許文献６】特開２００４−９９６１８号公報
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Liang and Heller, Gastroenterology 2004, 127: S62-71
【非特許文献２】Friedman, Bacteriol Rev 1977, 41: 453-567
【非特許文献３】Blight et al., Science 2000, 290: 1972-1974
【非特許文献４】Frese et al., J Gen Virol 2001, 82: 723-733
【非特許文献５】Okuse et al., Antiviral Res 2005, 65: 23-34
【非特許文献６】Tanabe et al., J Infect Dis 2004, 189: 1129-1139
【非特許文献７】Herrine, Ann Internal Med 2002, 136: 747-757
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明は、このような事情に鑑みてなされたものであり、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染による肝疾患の予防または治療方法として、ＨＣＶ感染量を低減させる抗ＨＣＶ療法に用いる医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、式（Ｉ）で表される化合物が高い抗ＨＣＶレプリコン活性、更にはＨＣＶの増殖抑制効果を有し、且つ、細胞毒性が低いことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００２０】
すなわち、本発明は
（１）式（Ｉ）
【化２】
【００２１】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基、又は、それを有する炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状炭化水素基を表す。）
で表される化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩を含有する、ＨＣＶ感染による肝疾患を予防または治療するための医薬組成物、
【００２２】
（２）Ｒ１が置換基を有していても良いモルホリノ基である上記（１）に記載の医薬組成物、
（３）Ｒ２が置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフタレン−１−イル基である上記（１）又は（２）に記載の医薬組成物、
（４）化合物が、下記の化合物群：
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−ナフタレン−１−イルエチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３，４−ジメトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ（フェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−クロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（２，６−ジクロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ニトロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ヨードフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−（４−ニトロフェニル）エチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ブロモフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
から選ばれる化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩である上記（１）〜（３）のいずれかに記載の医薬組成物、及び、
（５）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩と、インターフェロン及びリバビリンから選ばれる少なくとも１種とを含有することを特徴とする医薬組成物に関する。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によれば、高い抗ＨＣＶレプリコン活性、更にはＨＣＶの増殖抑制効果を有し、且つ細胞毒性の軽微な新規医薬組成物が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】化合物Ａ−Ｄそれぞれの用量反応曲線である。
【図２】化合物Ａ−Ｄそれぞれの、ＨＣＶ−ＪＦＨ１株増殖阻害活性を示すグラフである。
【図３】化合物Ａ１−Ａ４それぞれの用量反応曲線である。
【図４】化合物Ａ１−Ａ４それぞれの、ＨＣＶ−ＪＦＨ１株増殖阻害活性を示すグラフである。
【図５】化合物Ａ５−Ａ１７それぞれを５μｍｏｌ／Ｌ用いた際の、ルシフェラーゼ活性及び細胞毒性試験の結果を表すグラフである。
【図６】化合物Ａ５−Ａ８それぞれの用量反応曲線である。
【図７】化合物Ａ９−Ａ１２それぞれの用量反応曲線である。
【図８】化合物Ａ１３−Ａ１５それぞれの用量反応曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明において、「Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）」とは、Ｃ型肝炎を発症させる能力を持つウイルスの全てを意味する。ＨＣＶのサブタイプとしては、例えば遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）の違いに基づくもの及びセログループ（ｓｅｒｏｇｒｏｕｐ）の違いに基づくものが挙げられる。遺伝子型としては、例えば１ａ、１ｂ、２ａ、２ｂ、３ａ、３ｂ、４、５及び６が挙げられるが、本発明において、遺伝子型としては１ａ及び１ｂが好ましく、特に、ＩＦＮ療法において難治性といわれる１ｂ型が、本発明の効果が顕著に見られる点で好ましい。
セログループは抗原抗体反応に基づく血清学的グルーピングであり、その具体例としては、セログループ１、セログループ２、及び前記の２グループのいずれにも該当しないセログループが挙げられる。また、遺伝子型１ａ及び１ｂはセログループ１に、遺伝子型２ａ及び２ｂはセログループ２に、それぞれ対応する。
【００２６】
本発明において、「ＨＣＶ感染による肝疾患」とは、前記ＨＣＶの生体（ヒト及びチンパンジーなどのサルを含む）への感染によって引き起こされる症状の全てを意味し、具体例としては、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、肝癌などが挙げられる。Ｃ型肝炎は、慢性肝炎、急性肝炎、劇症肝炎等に分類することができ、また、これらの各々の肝炎におけるウイルス血症も含まれる。生体がＨＣＶに感染しているか否かは、例えば、血清中のＨＣＶ抗体量の測定、血清中のＨＣＶのコア抗原の検出及び血清中のＨＣＶのＲＮＡの検出、ならびにこれらの組み合わせにより判断することができる。
【００２７】
本明細書において「治療」とは、本発明の薬物を被験者に投与することによって、ＨＣＶを消滅あるいは減少させること、さらなるＨＣＶの広がりを抑制すること、ＨＣＶの感染による症状を軽減することを意味し、具体例としては、ＨＣＶの排除、肝炎の沈静化、並びに肝炎から肝硬変、肝繊維化及び肝癌への進展の阻止並びに軽減が挙げられる。また「予防」とは、ＨＣＶが感染する前に、被験者に投与され、ＨＣＶの感染を防いだり、増殖を抑制させることを意味する。
【００２８】
（式（Ｉ）で表される化合物）
本発明の化合物は以下の式（Ｉ）で表される化合物である。
【００２９】
【化３】
【００３０】
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基、又は、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基を有する炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状炭化水素基を表す。
ここで、員数とは、環を構成する炭素及び他の原子の数を意味する。また、置換基を有ししている場合、上記員数、炭素数には、その置換基の原子の数は含まれない。
【００３１】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、「飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基」とは、炭素数が３〜１０のシクロアルキル基、炭素数が３〜１０のシクロアルケニル基、炭素数が６〜１０のアリール基、員数が５〜１１の複素環基等を包含する。
【００３２】
「炭素数が３〜１０のシクロアルキル基」としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基が挙げられる。
【００３３】
「炭素数が３〜１０のシクロアルケニル基」としては、シクロプロペニル基、シクロブタ−１−エン−１−イル基、シクロペンタ−１−エン−１−イル基、シクロヘキサ−１−エン−１−イル基、シクロオクタ−１−エン−１−イル基等が挙げられる。
【００３４】
「炭素数が６〜１０のアリール基」は、単環又は多環のアリール基を意味する。多環アリール基の場合は、完全不飽和に加え、部分飽和の基も包含する。例えばフェニル基、ナフチル基、アズレニル基、インデニル基、インダニル基、テトラリニル基等が挙げられる。
【００３５】
「員数が５〜１１の複素環基」は、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子、又は硫黄原子を１〜４個有する５〜７員の芳香族複素環、飽和複素環、不飽和複素環又はこれらの複素環とベンゼン環が縮合した縮合複素環を意味し、例えば、フラン−２−イル基、フラン−３−イル基、チオフェン−２−イル基、チオフェン−３−イル基、ピロ−ル−１−イル基、ピロ−ル−２−イル基、ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基、ピリジン−４−イル基、ピラジン−２−イル基、ピラジン−３−イル基、ピリミジン−２−イル基、ピリミジン−４−イル基、ピリダジン−３−イル基、ピリダジン−４−イル基、１，３−ベンゾジオキソール−４−イル基、１，３−ベンゾジオキソール−５−イル基、１，４−ベンゾジオキサン−５−イル基、１，４−ベンゾジオキサン−６−イル基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−６−イル基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−７−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−６−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イル基、ベンゾフラン−２−イル基、ベンゾフラン−３−イル基、ベンゾチオフェン−２−イル基、ベンゾチオフェン−３−イル基、キノキサリン−２−イル基、キノキサリン−５−イル基、インドール−１−イル基、インドール−２−イル基、イソインドール−１−イル基、イソインドール−２−イル基、イソベンゾフラン−１−イル基、イソベンゾフラン−４−イル基、クロメン−２−イル基、クロメン−３−イル基、イミダゾール−１−イル基、イミダゾール−２−イル基、イミダゾール−４−イル基、ピラゾール−１−イル基、ピラゾール−３−イル基、チアゾール−２−イル基、チアゾール−４−イル基、オキサゾール−２−イル基、オキサゾール−４−イル基、イソオキサゾール−３−イル基、イソオキサゾール−４−イル基、ピロリジン−２−イル基、ピロリジン−３−イル基、ベンゾイミダゾール−１−イル基、ベンゾイミダゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−４−イル基、ベンゾオキサゾール−２−イル基、ベンゾオキサゾール−４−イル基、キノリン−２−イル基、キノリン−３−イル基、イソキノリン−１−イル基、イソキノリン−３−イル基、１，３，４−チアジアゾール−２−イル基、１，２，３−トリアゾール−１−イル基、１，２，３−トリアゾール−４−イル基、テトラゾール−１−イル基、テトラゾール−２−イル基、インドリン−４−イル基、インドリン−５−イル基、モルホリン−１−イル基、モルホリン−４−イル基、チオモルホリン−１−イル基、チオモルホリン−４−イル基、ピペラジン−２−イル基、ピペリジン−２−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル基等が挙げられる。
【００３６】
「飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基を有する炭素数１〜６の直鎖又は分岐した炭化水素基」とは、炭素数１〜６の直鎖又は分岐した炭化水素基の一部に１又は２以上の飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基を有する基を意味する。
ここで、炭素数１〜６の直鎖又は分岐した炭化水素基とは、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数２〜６のアルケニル基、炭素数２〜６のアルキニル基を意味する。
【００３７】
「炭素数１〜６のアルキル基」としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−へキシル基等が挙げられる。
【００３８】
「炭素数２〜６のアルケニル基」としては、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、１，３−ブテニル基、１−ペンテニル基、１−ヘキセニル基等が挙げられる。
【００３９】
「炭素数２〜６のアルキニル基」としては、エチニル基、１−プロペニル基、１−ブチニル基、１−ペンチニル基、１−ヘキシニル基等が挙げられる。
「飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基」は、上記と同様であるである。
【００４０】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、「置換基を有していても良い」の置換基としては、アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、複素環基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボキシル基、アジド基、アルキルスルホニル基、アルコキシカルボニル基、ハロアルキル基等が挙げられる。また、置換基としては、環状構造、たとえば、アルキレン環やベンゼン環等を形成する場合も包含される。
【００４１】
アルキル基は、炭素数１〜１０の直鎖状または分岐状のアルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−へキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基等が挙げられる。
【００４２】
アルコキシ基は、炭素数１〜１０の直鎖状または分岐状のアルコキシ基であり、例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、ｎ−へキシルオキシ基、ｎ−ヘプチルオキシ基、ｎ−オクチルオキシ基、ｎ−ノニルオキシ基、ｎ−デシルオキシ基等が挙げられる。
【００４３】
アルケニル基は、炭素数２〜１０の直鎖状または分岐状のアルケニル基であり、例えば、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、１，３−ブテニル基、１−ペンテニル基、１−ヘキセニル基、１−ヘプテニル基、１−オクテニル基、１−ノネニル基、１−デセニル基等が挙げられる。
【００４４】
アルキニル基は、置換されていてもよい炭素数２〜１０の直鎖状または分岐状のアルキニル基である。例えば、エチニル基、１−プロペニル基、１−ブチニル基、１−ペンチニル基、１−ヘキシニル基、１−ヘプチニル基、１−オクチニル基、１−ノニル基等が挙げられる。
【００４５】
シクロアルキル基は、炭素数３〜１０のシクロアルキル基であり、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【００４６】
アリール基は、炭素数６〜１０のアリール基であり、例えば、フェニル基、ペンタレニル基、インデニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、テトラヒドロナフチル基、アズレニル基等が挙げられる。
【００４７】
複素環基は、員数５〜１１の複素環基であり、例えば、フラン−２−イル基、フラン−３−イル基、チオフェン−２−イル基、チオフェン−３−イル基、ピロ−ル−１−イル基、ピロ−ル−２−イル基、ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基、ピリジン−４−イル基、ピラジン−２−イル基、ピラジン−３−イル基、ピリミジン−２−イル基、ピリミジン−４−イル基、ピリダジン−３−イル基、ピリダジン−４−イル基、１，３−ベンゾジオキソール−４−イル基、１，３−ベンゾジオキソール−５−イル基、１，４−ベンゾジオキサン−５−イル基、１，４−ベンゾジオキサン−６−イル基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−６−イル基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−７−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−６−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イル基、ベンゾフラン−２−イル基、ベンゾフラン−３−イル基、ベンゾチオフェン−２−イル基、ベンゾチオフェン−３−イル基、キノキサリン−２−イル基、キノキサリン−５−イル基、インドール−１−イル基、インドール−２−イル基、イソインドール−１−イル基、イソインドール−２−イル基、イソベンゾフラン−１−イル基、イソベンゾフラン−４−イル基、クロメン−２−イル基、クロメン−３−イル基、イミダゾール−１−イル基、イミダゾール−２−イル基、イミダゾール−４−イル基、ピラゾール−１−イル基、ピラゾール−３−イル基、チアゾール−２−イル基、チアゾール−４−イル基、オキサゾール−２−イル基、オキサゾール−４−イル基、イソオキサゾール−３−イル基、イソオキサゾール−４−イル基、ピロリジン−２−イル基、ピロリジン−３−イル基、ベンゾイミダゾール−１−イル基、ベンゾイミダゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−４−イル基、ベンゾオキサゾール−２−イル基、ベンゾオキサゾール−４−イル基、キノリン−２−イル基、キノリン−３−イル基、イソキノリン−１−イル基、イソキノリン−３−イル基、１，３，４−チアジアゾール−２−イル基、１，２，３−トリアゾール−１−イル基、１，２，３−トリアゾール−４−イル基、テトラゾール−１−イル基、テトラゾール−２−イル基、インドリン−４−イル基、インドリン−５−イル基、モルホリン−１−イル基、モルホリン−４−イル基、ピペラジン−２−イル基、ピペリジン−２−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル基等が挙げられる。
【００４８】
ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００４９】
アルキルスルホニル基としては、上述したアルキル基がスルホニル基に結合した基を表し、アルコキシカルボニル基は、上述したアルコキシ基がカルボニル基に結合した基を表す。
【００５０】
ハロアルキル基としては、上述したアルキル基の水素原子の一部または全部がハロゲン原子で置き換わった置換基が挙げられる。
【００５１】
上述した置換基は、さらに同一又は異なる置換基を有していても良い。
【００５２】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ１として好ましくは置換基を有していても良い複素環式基であり、より好ましくは無置換のモルホリノ基である。
また、Ｒ２として好ましくは、置換基を有していても良いアリール基又はアリールアルキル基であり、より好ましくは置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフチルメチル基であり、特に好ましくは、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン原子、ハロアルキル基、及びニトロ基からなる群から選ばれる置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフチルメチル基ある。
【００５３】
式（Ｉ）で表される化合物として特に好ましくは、下記の化合物群：
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−ナフタレン−１−イルエチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３，４−ジメトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ（フェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−クロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（２，６−ジクロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ニトロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ヨードフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−（４−ニトロフェニル）エチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ブロモフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
が挙げられる。
【００５４】
式（Ｉ）で表される化合物が、酸性又は塩基性の部分を含む場合、当該化合物の製薬上許容し得る塩も本発明の医薬組成物の有効成分として含有し得る。
【００５５】
製薬上許容し得る塩の調製において使用するのに適した酸としては、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化したアミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ホウ酸、（＋）−ショウノウ酸、カンファースルホン酸、（＋）−（１Ｓ）−カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−グルタミン酸、α−オキソグルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、過塩素酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サッカリン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ウンデシレン酸、吉草酸等が挙げられる。
【００５６】
製薬上許容し得る塩の調製において使用するのに適した塩基としては、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、水酸化亜鉛、又は水酸化ナトリウムのような無機塩基；並びにＬ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、ジメチルアミン、ジプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチルアミン、エチレンジアミン、イソプロピルアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リジン、モルフォリン、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルフォリン、メチルアミン、ピペリジン、ピペラジン、プロピルアミン、ピロリジン、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、ピリジン、キヌクリジン、キノリン、イソキノリン、第二級アミン、トリエタノールアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、及びトロメタミンを含む、第一級、第二級、第三級、及び第四級の、脂肪族及び芳香族アミンのような有機塩基が挙げられる。
【００５７】
また、本発明の医薬組成物の有効成分としては、式（Ｉ）で表される化合物の溶媒和物や結晶多形も含まれる。
ここで溶媒和物とは、非共有結合分子間力によって結合した化学量論的又は非化学量論的な量の溶媒をさらに含む、本発明の化合物又はその塩を指す。溶媒が水である場合、溶媒和物は水和物である。
【００５８】
（式（Ｉ）で表される化合物の製造法）
本発明で用いられる式（Ｉ）で表される化合物は、市販されているものを購入して入手できるほか、前記特許文献４〜６等に記載の公知の方法に基づいて合成することができ、例えば、以下に示した製造工程を用いることができる。
【００５９】
【化４】
【００６０】
上記反応式において、Ｒ１、Ｒ２は式（Ｉ）における定義と同じである。
式（ａ）で示したカルボン酸を、酸ハロゲン化合物等を用いてアミド（ｂ）へと変換する。次いで、五酸化二リン等を用いて脱水反応を行い、ニトリル（ｃ）を得る。次に、塩基の存在下、塩酸ヒドロキシルアミンとの反応によって、ヒドロキシアミド（ｄ）を得る。
最後に、式（ｅ）で表されるカルボン酸、又は当該カルボン酸のハロゲン化物との縮合反応によって、式（Ｉ）で表される化合物を得ることができる。
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、上記の方法によって得られるが、さらに必要に応じて再結晶法、カラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて精製することができる。また必要に応じて、常法によって前記した所望の塩又は溶媒和物にすることもできる。
【００６１】
（インターフェロン等との併用）
本発明において、式（Ｉ）で表される化合物及び他の抗ＨＣＶ剤であるインターフェロン、リバビリン等を、ＨＣＶ感染症の治療または予防において同時に、別々に、又は順次に投与するために組み合わせることができる。本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）で表される化合物とインターフェロン等を同一医薬組成物中に含有してもよい（すなわち、配合剤であってもよい）し、また式（Ｉ）で表される化合物とインターフェロン等を別々の医薬組成物に含有するものであってもよい。なお、配合剤中の式（Ｉ）で表される化合物とインターフェロン等との配合割合は、予め一定の割合とすることも、症状の軽重や医師の判断などにより、投与時に任意の割合に変更することもできる。また、本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）で表される化合物を含有する医薬組成物とインターフェロン等を含有する医薬組成物とをキットとしたものであってもよい。
【００６２】
ここで、式（Ｉ）で表される化合物とインターフェロン等が別々の医薬組成物に含有される場合には、それぞれの製剤の剤型は同じであってもよいし、別々であってもよい。例えば、いずれか一方又は両方が、非経口製剤、注射剤、点滴剤、静脈内点滴剤であってもよい。
【００６３】
（医薬組成物）
本発明の医薬組成物は、当業者に公知の方法で製剤化することができる。例えば、薬学的に許容しうる担体もしくは媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤などと適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。
【００６４】
経口投与用には、式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許容しうる担体と混合することにより、錠剤、丸薬、糖衣剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等として処方することができる。担体としては、当該技術分野において公知のものを広く使用することができ、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、澱粉等の保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の潤沢剤等を用いることができる。さらに錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠、あるいは二重錠、多層錠とすることができる。
【００６５】
非経口投与用には、式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許容しうるベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。
【００６６】
注射剤用の水溶性ベヒクルとしては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０と併用してもよい
【００６７】
油性ベヒクルとしてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
【００６８】
また、式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の分散を制御するなどの目的で、担体、例えば、コラーゲン、ハイドロキシアパタイト、ヒアルロン酸、フィブリン、多糖、リポゾームと配合してもよい。調製された製剤は、経口剤または非経口投与剤として使用できる。
【００６９】
（投与形態）
本発明の医薬組成物の適当な投与経路には、限定されないが、経口、直腸内、経粘膜、または腸内投与、または筋肉内、皮下、骨髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、硝子体内、腹腔内、鼻腔内、または眼内注射が含まれる。投与経路は、患者の年齢や病状、併用する他の薬剤等を考慮して適宜選択することができる。
【００７０】
本発明の医薬組成物の投与量としては、例えば、一回につき体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇから１ｍｇの範囲で選ぶことが可能である。あるいは、例えば、患者あたり１回投与あたり０．０２〜１００ｍｇの範囲で投与量を選ぶことができるが、これらの数値に必ずしも制限されるものではない。投与量、投与方法は、患者の体重や年齢、症状、併用する他の薬剤など等を考慮して適宜選択することができる。また、本発明の医薬組成物をインターフェロン製剤またはリバビリン製剤と併用する場合には、これらの薬剤を同時に投与してもよく、別々に投与してもよい。
【００７１】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【００７２】
［レプリコンアッセイを用いた化合物のスクリーニング］
Ｌｉｐｉｎｓｋｉ則に則り、薬らしく、構造の多様性を重視した化合物として４０４６種の小分子化合物（市販品）を用い、ＨＣＶレプリコン試験系においてハイスループットスクリーニングを行った。
【００７３】
レプリコン試験系に用いた細胞としては、Ｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２００４，１８９：１１２９−１１３９に記載されるＨｕｈ７／Ｆｅｏ細胞を用いた。この細胞は、感染性ＨＣＶクローンＨＣＶ−Ｎ、遺伝子型１ｂから作成されたレプリコンプラスミドｐＨＣＶ１ｂｎｅｏ−ｄｅｌＳのＮｅｏ遺伝子の代わりに、ホタルルシフェラーゼをネオマイシンホスホトランスフェラーゼにインフレームで融合したキメラ遺伝子コーディング（Ｆｅｏ）を導入したＨＣＶレプリコンプラスミドを、ヒト肝臓癌細胞株Ｈｕｈ７にトランスフェクションし、定常的な発現を示す細胞を選択することにより樹立した細胞株である。
【００７４】
Ｈｕｈ７／Ｆｅｏ細胞を９６ウェル組織培養プレートの各ウェルに４０００個ずつ播種し、５％Ｃｏ２下で３７℃にて２４時間培養した。培地には、ダルベッコ改変最少必須培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）にウシ胎児血清１０％、ペニシリン１００ＩＵ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬ、Ｇ４１８（和光純薬工業株式会社製）２５０μｇ／ｍＬを加えたものを用いた。
【００７５】
各化合物をＤＭＳＯで溶解し培地にて希釈して培地に加え、５μｍｏｌ／Ｌ濃度とした。各化合物添加４８時間後に細胞を回収し、ルシフェラーゼ活性を測定した。ルシフェラーゼアッセイはＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）及びルミノメーター（ＡＲＶＯ ＭＸ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）を用いて定量した。培地全量に対してＤＭＳＯ０．０５質量％添加時の培養物の活性を１００％とし、それぞれ割合で評価した。数値が小さいほど、ＨＣＶレプリコンの増殖を阻害する活性が高いことを意味する。
【００７６】
ルシフェラーゼ活性が５０％未満であった１１７の化合物について、再度同様の培養を行い、ＭＴＳ試験にて細胞毒性を評価した。ＭＴＳ試験は、各化合物添加４８時間後の各培養細胞にＭＴＳ（（３−（４，５−ｄｉｍｅｔｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２ｙｌ）−５−（３−ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−（４−ｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ）を加え、さらに２時間培養した細胞を回収し、吸光度を測定した。培地全量に対してＤＭＳＯ０．０５質量％添加時の培養物の吸光度を１００％とし、それぞれ割合で評価した。数値が大きいほど、細胞生存率が高い（細胞毒性が低い）ことを意味する。
【００７７】
ルシフェラーゼ活性が５０％未満、且つ細胞生存率が７０％より大きいと評価された４３の化合物について、０．１、０．３、１、３、１０、３０μｍｏｌ／Ｌの各濃度で上記と同様の試験を行い、それぞれの化合物について５０％効果濃度（ＥＣ５０、５０％ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）及び５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０、５０％ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を評価した。また、ＣＣ５０／ＥＣ５０を各化合物の有効係数とした。ここで、ＣＣ５０／ＥＣ５０が大きいほど、細胞毒性が低く、且つＨＣＶレプリコンの増殖を阻害する活性が高いことを意味する。
【００７８】
ＥＣ５０が５μｍｏｌ／Ｌであり、且つＣＣ５０／ＥＣ５０が５より大きいと評価された化合物は１９種であり、代表的な化合物は以下の化学式Ａ−Ｄで表される。
【００７９】
【化５】
【００８０】
上記Ａ−Ｄの各化合物について、それぞれの用量反応曲線を図１に、各化合物のＥＣ５０、ＣＣ５０、ＣＣ５０／ＥＣ５０を表１に示した。
【００８１】
【表１】
【００８２】
［フルゲノムＨＣＶでの増殖抑制効果：ＨＣＶ−ＪＦＨ１株］
化学式Ａ−Ｄの化合物について、それぞれＨＣＶ−ＪＦＨ１株（遺伝子型２ａ）細胞培養系において、ウイルス増殖抑制効果を評価した。
フルゲノムＨＣＶ試験系に用いた細胞としては、Ｗａｋｉｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １１：７９１−７９６に記載されるＨＣＶ−ＪＦＨ１培養系を用いた。この細胞は、遺伝子型２ａ型ＨＣＶが細胞内で増殖し感染粒子を分泌する系である。
【００８３】
リン酸緩衝バッファー（ＰＢＳ）に１０７個／ｍＬのＨｕｈ７細胞を浮遊させた液０．５ｍＬにＨＣＶ−ＪＦＨ１合成ＲＮＡを１０μｇ添加し、エレクトロポレーション装置（Ｅａｓｙ Ｊｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ，ＥｑｕｉＢｉｏ社）にて、１０５０μＦ，２７０Ｖのパルスを加えた。５分間室温放置後１０ｃｍレートにて４８時間培養を行った。培地には、ダルベッコ改変最少必須培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）にウシ胎児血清１０％、ペニシリン１００ＩＵ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬを加えたものを用いた。
【００８４】
各化合物をＤＭＳＯで溶解し培地にて希釈して培地に加え、０、３、１０μｍｏｌ／Ｌ濃度とした。各化合物添加７２時間後に細胞及び培養上清を回収し、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法を用いてＨＣＶ−ＲＮＡを定量した。ここで、濃度が「０μｍｏｌ／Ｌ」のときは、各化合物に代えて、培地全量に対してＤＭＳＯを０．１質量％添加した。ＧＡＰＤＨあたりのＨＣＶｍＲＮＡ量を縦軸にとったグラフを図２に示した。数値が小さいほど、ＨＣＶの増殖を阻害する活性が高いことを意味する。
【００８５】
［化学式Ａ類似化合物の活性評価；レプリコンアッセイ１］
化合物Ａの類似化合物として、以下の化学式に示すＡ１−Ａ４の化合物について、上記と同様の方法により、ＨＣＶレプリコンの増殖抑制活性を評価した。
【００８６】
【化６】
【００８７】
Ａ１−Ａ４の各化合物について、それぞれの用量反応曲線を図３に、各化合物のＥＣ５０、ＣＣ５０、ＣＣ５０／ＥＣ５０を表２に示した。いずれの化合物においても、優れたＨＣＶレプリコンの増殖抑制効果を表し、細胞毒性も小さかった。
【００８８】
【表２】
【００８９】
［化学式Ａ類似化合物の活性評価；ＨＣＶ−ＪＦＨ１株］
上記と同様の方法により、化合物Ａ１−Ａ４のＨＣＶ−ＪＦＨ１株（遺伝子型２ａ）細胞培養系におけるウイルス増殖抑制効果を評価した。結果を図４に示した。いずれの化合物においても、濃度依存的なウイルス増殖抑制効果を示した。
【００９０】
［化学式Ａ類似化合物の活性評価；レプリコンアッセイ２］
さらに類似化合物として以下の化学式に示すＡ５−Ａ１７の化合物群について、ＨＣＶレプリコンの増殖活性を評価した。
【００９１】
【化７】
【００９２】
それぞれの化合物について、濃度５μｍｏｌ／Ｌ用いた際のルシフェラーゼ活性及び細胞毒性試験の結果を図５に示す。また、それぞれの用量反応曲線を図６−８に、各化合物のＥＣ５０、ＣＣ５０、ＣＣ５０／ＥＣ５０を表３に示した。いずれの化合物においても、優れたＨＣＶレプリコンの増殖抑制効果を表し、細胞毒性も小さかった。
【００９３】
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ウイルス感染症の予防や治療に有用な化合物、及びそれらを含む医薬組成物に関し、詳しくは、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）感染による肝疾患の予防や治療に用いるための医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ＨＣＶの感染者は世界で１〜２億人、日本国内では２００万人以上と推測されている。
これらの患者の約５０％が慢性肝炎に移行し、そのうち約２０％が感染後３０年以上たって肝硬変、肝癌となる。肝癌の約９０％の原因がＣ型肝炎といわれている。日本国内では、毎年２万人以上の患者がＨＣＶ感染に伴う肝癌により死亡している。
【０００３】
ＨＣＶは、１９８９年に輸血後の非Ａ非Ｂ型肝炎の主要な原因ウイルスとして発見された。ＨＣＶはエンベロープを有するＲＮＡウイルスであり、そのゲノムは１本鎖（＋）ＲＮＡからなり、フラビウイルス科のヘパシウイルス（Ｈｅｐａｃｉｖｉｒｕｓ）属に分類される。
【０００４】
ＨＣＶは、いまだ明らかでない原因により宿主の免疫機構を回避するため、免疫機構の発達した大人に感染した場合でも持続感染が成立することが多く、慢性肝炎、肝硬変、肝癌へと進行し、手術により摘出しても、非癌部で引き続き起こる炎症のため肝癌が再発する患者が多いことも知られている。
【０００５】
よって、Ｃ型肝炎の有効な治療法の確立が望まれており、その中でも、抗炎症剤により炎症を抑える対症療法とは別に、患部である肝臓においてＨＣＶを減らすあるいは根絶させる薬剤の開発が強く望まれている。
ＨＣＶが感染後に消失すると、ＨＣＶ感染によって起こる疾患の予防または治療に効果があることが認められており、ＨＣＶ量を低減させるための抗ＨＣＶ薬剤治療が行われている（非特許文献１）。
【０００６】
現在、抗ＨＣＶ薬剤療法に用いられる代表的な医薬品は各種のインターフェロン（ＩＦＮ）製剤である。ＩＦＮはウイルスが感染した細胞の膜に結合し、細胞内を抗ウイルス状態にすることによりさまざまな種類のウイルスの増殖を抑制することが知られていた（非特許文献２）。ＨＣＶレプリコン試験系を用いて、ＩＦＮがＨＣＶに対してもこの作用様式により増殖を抑えることが示され、ＨＣＶウイルスのＮＳ５Ａタンパク質がＩＦＮ−αの効果に関係することが明らかとなっている（非特許文献３、４）。
【０００７】
ヒトの産生するＩＦＮにはさまざまな種類が存在するが、一般的にＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γのいずれも抗ＨＣＶ作用を示すことが認められている（非特許文献５）。臨床で用いられるＩＦＮ製剤の有効成分には、ヒトリンパ芽球由来のＩＦＮ−α、リコンビナントＩＦＮ−α−２ａ、リコンビナントＩＦＮ−α−２ｂ、ヒト線維芽細胞由来のＩＦＮ−βなどさまざまな種類がある。また、これらの天然型のＩＦＮの代わりに修飾を施したＩＦＮを用いた製剤、すなわちアミノ酸配列を一部改変したコンセンサスＩＦＮや、ポリエチレングリコールを結合させたＰＥＧ化ＩＦＮもある。
【０００８】
しかしながら、ＩＦＮは、抗ＨＣＶ療法に用いられる用量において高率に副作用を生じさせる。生じる副作用には、発熱、全身倦怠感、食欲不振、白血球減少、血小板減少、脱毛、精神症状などがある。また、ＩＦＮに対する抗体が産生される場合がある。さらに、ＩＦＮ製剤単独による治療では、ＨＣＶ感染を消失できない患者やＨＣＶ量が低減しない患者が数多く存在する。
【０００９】
一方、抗ウイルス剤であるリバビリンをＩＦＮ製剤と併用し、ＨＣＶ量を低減させる効果を高める治療法も行われるようになった。リバビリン単独、及びＩＦＮとの併用による抗ＨＣＶ効果はＨＣＶレプリコン試験系において確認されている（非特許文献６）。
【００１０】
しかしながら、この２剤を併用することによっても依然として十分な臨床効果は認められていない。例えば、Ｈｅｒｒｉｎｅ Ｓ．Ｋ．は、この２剤の併用療法を一般的な抗ＨＣＶ療法として挙げ、慢性感染患者に対してＰＥＧ化インターフェロンの皮下注射を週一回行いリバビリンの経口服用を毎日行う治療を施した際の治療成績を要約し、その持続的なウイルス学的反応が見られた患者の割合はおおよそ５５％と述べている（非特許文献７）。すなわち、この報告は、おおよそ患者の４５％では十分な臨床効果が認められないことを示している。
【００１１】
また、リバビリンを用いた治療では副作用として重篤な貧血が生じる場合があり、その場合には薬剤の用量を少なくするか中止せざるを得ない。また、リバビリンはＩＦＮと同様に妊娠の可能性がある女性への使用に慎重になる必要があるが、これに加えて、リバビリンは精子形成に悪影響を及ぼすため男性の場合も使用中は避妊を推奨されるという問題点がある。以上のことから、リバビリンに代わる薬剤が求められている。
【００１２】
抗ＨＣＶ活性を示す化合物及び医薬組成物としては、例えば特許文献１には、フザリウム・エスピー（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｐ．）Ｆ１４７６株から単離される化合物が、ＨＣＶの複製阻害活性を有することが記載されている。また、特許文献２には、ベンゾフラン誘導体とインターフェロンを併用し、ＨＣＶ感染症を予防又は治療する医薬が開示されている。
【００１３】
また、本発明者らは、生体内に存在するタンパク質である骨形成因子７（ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ７；ＢＭＰ−７）を有効成分とする、ＨＣＶ感染による肝疾患を予防又は治療するための医薬組成物を報告した（特許文献３）。これらは一定の効果を奏するものであるが、より効果的にＨＣＶレプリコン増殖抑制効果を示し、且つ安全性の高い化合物及び医薬組成物の開発が望まれている。
【００１４】
一方、下記一般式（Ｉ）で表される化合物は、オキサジアゾリル環形成の前駆体としての合成例は報告されているが、当該化合物の抗ＨＣＶ活性についてこれまでに報告はなされていない（特許文献４〜６）。
【００１５】
【化１】
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】特開２００６−７７００４号公報
【特許文献２】特開２０１０−２４１７５０号公報
【特許文献３】特開２００８−１６９１１６号公報
【特許文献４】特表２００２−５０５３２９号公報
【特許文献５】特表２００２−５２６４９５号公報
【特許文献６】特開２００４−９９６１８号公報
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Liang and Heller, Gastroenterology 2004, 127: S62-71
【非特許文献２】Friedman, Bacteriol Rev 1977, 41: 453-567
【非特許文献３】Blight et al., Science 2000, 290: 1972-1974
【非特許文献４】Frese et al., J Gen Virol 2001, 82: 723-733
【非特許文献５】Okuse et al., Antiviral Res 2005, 65: 23-34
【非特許文献６】Tanabe et al., J Infect Dis 2004, 189: 1129-1139
【非特許文献７】Herrine, Ann Internal Med 2002, 136: 747-757
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
本発明は、このような事情に鑑みてなされたものであり、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染による肝疾患の予防または治療方法として、ＨＣＶ感染量を低減させる抗ＨＣＶ療法に用いる医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、式（Ｉ）で表される化合物が高い抗ＨＣＶレプリコン活性、更にはＨＣＶの増殖抑制効果を有し、且つ、細胞毒性が低いことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００２０】
すなわち、本発明は
（１）式（Ｉ）
【化２】
【００２１】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基、又は、それを有する炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状炭化水素基を表す。）
で表される化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩を含有する、ＨＣＶ感染による肝疾患を予防または治療するための医薬組成物、
【００２２】
（２）Ｒ１が置換基を有していても良いモルホリノ基である上記（１）に記載の医薬組成物、
（３）Ｒ２が置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフタレン−１−イル基である上記（１）又は（２）に記載の医薬組成物、
（４）化合物が、下記の化合物群：
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−ナフタレン−１−イルエチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３，４−ジメトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ（フェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−クロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（２，６−ジクロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ニトロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ヨードフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−（４−ニトロフェニル）エチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ブロモフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
から選ばれる化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩である上記（１）〜（３）のいずれかに記載の医薬組成物、及び、
（５）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩と、インターフェロン及びリバビリンから選ばれる少なくとも１種とを含有することを特徴とする医薬組成物に関する。
【発明の効果】
【００２３】
本発明によれば、高い抗ＨＣＶレプリコン活性、更にはＨＣＶの増殖抑制効果を有し、且つ細胞毒性の軽微な新規医薬組成物が得られる。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】化合物Ａ−Ｄそれぞれの用量反応曲線である。
【図２】化合物Ａ−Ｄそれぞれの、ＨＣＶ−ＪＦＨ１株増殖阻害活性を示すグラフである。
【図３】化合物Ａ１−Ａ４それぞれの用量反応曲線である。
【図４】化合物Ａ１−Ａ４それぞれの、ＨＣＶ−ＪＦＨ１株増殖阻害活性を示すグラフである。
【図５】化合物Ａ５−Ａ１７それぞれを５μｍｏｌ／Ｌ用いた際の、ルシフェラーゼ活性及び細胞毒性試験の結果を表すグラフである。
【図６】化合物Ａ５−Ａ８それぞれの用量反応曲線である。
【図７】化合物Ａ９−Ａ１２それぞれの用量反応曲線である。
【図８】化合物Ａ１３−Ａ１５それぞれの用量反応曲線である。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明において、「Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）」とは、Ｃ型肝炎を発症させる能力を持つウイルスの全てを意味する。ＨＣＶのサブタイプとしては、例えば遺伝子型（ｇｅｎｏｔｙｐｅ）の違いに基づくもの及びセログループ（ｓｅｒｏｇｒｏｕｐ）の違いに基づくものが挙げられる。遺伝子型としては、例えば１ａ、１ｂ、２ａ、２ｂ、３ａ、３ｂ、４、５及び６が挙げられるが、本発明において、遺伝子型としては１ａ及び１ｂが好ましく、特に、ＩＦＮ療法において難治性といわれる１ｂ型が、本発明の効果が顕著に見られる点で好ましい。
セログループは抗原抗体反応に基づく血清学的グルーピングであり、その具体例としては、セログループ１、セログループ２、及び前記の２グループのいずれにも該当しないセログループが挙げられる。また、遺伝子型１ａ及び１ｂはセログループ１に、遺伝子型２ａ及び２ｂはセログループ２に、それぞれ対応する。
【００２６】
本発明において、「ＨＣＶ感染による肝疾患」とは、前記ＨＣＶの生体（ヒト及びチンパンジーなどのサルを含む）への感染によって引き起こされる症状の全てを意味し、具体例としては、Ｃ型肝炎、肝硬変、肝繊維化、肝癌などが挙げられる。Ｃ型肝炎は、慢性肝炎、急性肝炎、劇症肝炎等に分類することができ、また、これらの各々の肝炎におけるウイルス血症も含まれる。生体がＨＣＶに感染しているか否かは、例えば、血清中のＨＣＶ抗体量の測定、血清中のＨＣＶのコア抗原の検出及び血清中のＨＣＶのＲＮＡの検出、ならびにこれらの組み合わせにより判断することができる。
【００２７】
本明細書において「治療」とは、本発明の薬物を被験者に投与することによって、ＨＣＶを消滅あるいは減少させること、さらなるＨＣＶの広がりを抑制すること、ＨＣＶの感染による症状を軽減することを意味し、具体例としては、ＨＣＶの排除、肝炎の沈静化、並びに肝炎から肝硬変、肝繊維化及び肝癌への進展の阻止並びに軽減が挙げられる。また「予防」とは、ＨＣＶが感染する前に、被験者に投与され、ＨＣＶの感染を防いだり、増殖を抑制させることを意味する。
【００２８】
（式（Ｉ）で表される化合物）
本発明の化合物は以下の式（Ｉ）で表される化合物である。
【００２９】
【化３】
【００３０】
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基、又は、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基を有する炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状炭化水素基を表す。
ここで、員数とは、環を構成する炭素及び他の原子の数を意味する。また、置換基を有ししている場合、上記員数、炭素数には、その置換基の原子の数は含まれない。
【００３１】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、「飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基」とは、炭素数が３〜１０のシクロアルキル基、炭素数が３〜１０のシクロアルケニル基、炭素数が６〜１０のアリール基、員数が５〜１１の複素環基等を包含する。
【００３２】
「炭素数が３〜１０のシクロアルキル基」としては、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基が挙げられる。
【００３３】
「炭素数が３〜１０のシクロアルケニル基」としては、シクロプロペニル基、シクロブタ−１−エン−１−イル基、シクロペンタ−１−エン−１−イル基、シクロヘキサ−１−エン−１−イル基、シクロオクタ−１−エン−１−イル基等が挙げられる。
【００３４】
「炭素数が６〜１０のアリール基」は、単環又は多環のアリール基を意味する。多環アリール基の場合は、完全不飽和に加え、部分飽和の基も包含する。例えばフェニル基、ナフチル基、アズレニル基、インデニル基、インダニル基、テトラリニル基等が挙げられる。
【００３５】
「員数が５〜１１の複素環基」は、ヘテロ原子として窒素原子、酸素原子、又は硫黄原子を１〜４個有する５〜７員の芳香族複素環、飽和複素環、不飽和複素環又はこれらの複素環とベンゼン環が縮合した縮合複素環を意味し、例えば、フラン−２−イル基、フラン−３−イル基、チオフェン−２−イル基、チオフェン−３−イル基、ピロ−ル−１−イル基、ピロ−ル−２−イル基、ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基、ピリジン−４−イル基、ピラジン−２−イル基、ピラジン−３−イル基、ピリミジン−２−イル基、ピリミジン−４−イル基、ピリダジン−３−イル基、ピリダジン−４−イル基、１，３−ベンゾジオキソール−４−イル基、１，３−ベンゾジオキソール−５−イル基、１，４−ベンゾジオキサン−５−イル基、１，４−ベンゾジオキサン−６−イル基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−６−イル基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−７−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−６−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イル基、ベンゾフラン−２−イル基、ベンゾフラン−３−イル基、ベンゾチオフェン−２−イル基、ベンゾチオフェン−３−イル基、キノキサリン−２−イル基、キノキサリン−５−イル基、インドール−１−イル基、インドール−２−イル基、イソインドール−１−イル基、イソインドール−２−イル基、イソベンゾフラン−１−イル基、イソベンゾフラン−４−イル基、クロメン−２−イル基、クロメン−３−イル基、イミダゾール−１−イル基、イミダゾール−２−イル基、イミダゾール−４−イル基、ピラゾール−１−イル基、ピラゾール−３−イル基、チアゾール−２−イル基、チアゾール−４−イル基、オキサゾール−２−イル基、オキサゾール−４−イル基、イソオキサゾール−３−イル基、イソオキサゾール−４−イル基、ピロリジン−２−イル基、ピロリジン−３−イル基、ベンゾイミダゾール−１−イル基、ベンゾイミダゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−４−イル基、ベンゾオキサゾール−２−イル基、ベンゾオキサゾール−４−イル基、キノリン−２−イル基、キノリン−３−イル基、イソキノリン−１−イル基、イソキノリン−３−イル基、１，３，４−チアジアゾール−２−イル基、１，２，３−トリアゾール−１−イル基、１，２，３−トリアゾール−４−イル基、テトラゾール−１−イル基、テトラゾール−２−イル基、インドリン−４−イル基、インドリン−５−イル基、モルホリン−１−イル基、モルホリン−４−イル基、チオモルホリン−１−イル基、チオモルホリン−４−イル基、ピペラジン−２−イル基、ピペリジン−２−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル基等が挙げられる。
【００３６】
「飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基を有する炭素数１〜６の直鎖又は分岐した炭化水素基」とは、炭素数１〜６の直鎖又は分岐した炭化水素基の一部に１又は２以上の飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基を有する基を意味する。
ここで、炭素数１〜６の直鎖又は分岐した炭化水素基とは、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数２〜６のアルケニル基、炭素数２〜６のアルキニル基を意味する。
【００３７】
「炭素数１〜６のアルキル基」としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−へキシル基等が挙げられる。
【００３８】
「炭素数２〜６のアルケニル基」としては、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、１，３−ブテニル基、１−ペンテニル基、１−ヘキセニル基等が挙げられる。
【００３９】
「炭素数２〜６のアルキニル基」としては、エチニル基、１−プロペニル基、１−ブチニル基、１−ペンチニル基、１−ヘキシニル基等が挙げられる。
「飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基」は、上記と同様であるである。
【００４０】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、「置換基を有していても良い」の置換基としては、アルキル基、アルコキシ基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アリール基、複素環基、ハロゲン原子、ニトロ基、シアノ基、アミノ基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボキシル基、アジド基、アルキルスルホニル基、アルコキシカルボニル基、ハロアルキル基等が挙げられる。また、置換基としては、環状構造、たとえば、アルキレン環やベンゼン環等を形成する場合も包含される。
【００４１】
アルキル基は、炭素数１〜１０の直鎖状または分岐状のアルキル基であり、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソアミル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−へキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基等が挙げられる。
【００４２】
アルコキシ基は、炭素数１〜１０の直鎖状または分岐状のアルコキシ基であり、例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、ｎ−へキシルオキシ基、ｎ−ヘプチルオキシ基、ｎ−オクチルオキシ基、ｎ−ノニルオキシ基、ｎ−デシルオキシ基等が挙げられる。
【００４３】
アルケニル基は、炭素数２〜１０の直鎖状または分岐状のアルケニル基であり、例えば、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、１，３−ブテニル基、１−ペンテニル基、１−ヘキセニル基、１−ヘプテニル基、１−オクテニル基、１−ノネニル基、１−デセニル基等が挙げられる。
【００４４】
アルキニル基は、置換されていてもよい炭素数２〜１０の直鎖状または分岐状のアルキニル基である。例えば、エチニル基、１−プロペニル基、１−ブチニル基、１−ペンチニル基、１−ヘキシニル基、１−ヘプチニル基、１−オクチニル基、１−ノニル基等が挙げられる。
【００４５】
シクロアルキル基は、炭素数３〜１０のシクロアルキル基であり、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【００４６】
アリール基は、炭素数６〜１０のアリール基であり、例えば、フェニル基、ペンタレニル基、インデニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、テトラヒドロナフチル基、アズレニル基等が挙げられる。
【００４７】
複素環基は、員数５〜１１の複素環基であり、例えば、フラン−２−イル基、フラン−３−イル基、チオフェン−２−イル基、チオフェン−３−イル基、ピロ−ル−１−イル基、ピロ−ル−２−イル基、ピリジン−２−イル基、ピリジン−３−イル基、ピリジン−４−イル基、ピラジン−２−イル基、ピラジン−３−イル基、ピリミジン−２−イル基、ピリミジン−４−イル基、ピリダジン−３−イル基、ピリダジン−４−イル基、１，３−ベンゾジオキソール−４−イル基、１，３−ベンゾジオキソール−５−イル基、１，４−ベンゾジオキサン−５−イル基、１，４−ベンゾジオキサン−６−イル基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−６−イル基、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−１，５−ベンゾジオキセピン−７−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−４−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−５−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−６−イル基、２，３−ジヒドロベンゾフラン−７−イル基、ベンゾフラン−２−イル基、ベンゾフラン−３−イル基、ベンゾチオフェン−２−イル基、ベンゾチオフェン−３−イル基、キノキサリン−２−イル基、キノキサリン−５−イル基、インドール−１−イル基、インドール−２−イル基、イソインドール−１−イル基、イソインドール−２−イル基、イソベンゾフラン−１−イル基、イソベンゾフラン−４−イル基、クロメン−２−イル基、クロメン−３−イル基、イミダゾール−１−イル基、イミダゾール−２−イル基、イミダゾール−４−イル基、ピラゾール−１−イル基、ピラゾール−３−イル基、チアゾール−２−イル基、チアゾール−４−イル基、オキサゾール−２−イル基、オキサゾール−４−イル基、イソオキサゾール−３−イル基、イソオキサゾール−４−イル基、ピロリジン−２−イル基、ピロリジン−３−イル基、ベンゾイミダゾール−１−イル基、ベンゾイミダゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−２−イル基、ベンゾチアゾール−４−イル基、ベンゾオキサゾール−２−イル基、ベンゾオキサゾール−４−イル基、キノリン−２−イル基、キノリン−３−イル基、イソキノリン−１−イル基、イソキノリン−３−イル基、１，３，４−チアジアゾール−２−イル基、１，２，３−トリアゾール−１−イル基、１，２，３−トリアゾール−４−イル基、テトラゾール−１−イル基、テトラゾール−２−イル基、インドリン−４−イル基、インドリン−５−イル基、モルホリン−１−イル基、モルホリン−４−イル基、ピペラジン−２−イル基、ピペリジン−２−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−５−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン−６−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−５−イル基、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル基等が挙げられる。
【００４８】
ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
【００４９】
アルキルスルホニル基としては、上述したアルキル基がスルホニル基に結合した基を表し、アルコキシカルボニル基は、上述したアルコキシ基がカルボニル基に結合した基を表す。
【００５０】
ハロアルキル基としては、上述したアルキル基の水素原子の一部または全部がハロゲン原子で置き換わった置換基が挙げられる。
【００５１】
上述した置換基は、さらに同一又は異なる置換基を有していても良い。
【００５２】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物において、Ｒ１として好ましくは置換基を有していても良い複素環式基であり、より好ましくは無置換のモルホリノ基である。
また、Ｒ２として好ましくは、置換基を有していても良いアリール基又はアリールアルキル基であり、より好ましくは置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフチルメチル基であり、特に好ましくは、アルキル基、アルコキシ基、ハロゲン原子、ハロアルキル基、及びニトロ基からなる群から選ばれる置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフチルメチル基ある。
【００５３】
式（Ｉ）で表される化合物として特に好ましくは、下記の化合物群：
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−ナフタレン−１−イルエチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３，４−ジメトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ（フェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−クロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（２，６−ジクロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ニトロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ヨードフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−（４−ニトロフェニル）エチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ブロモフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
が挙げられる。
【００５４】
式（Ｉ）で表される化合物が、酸性又は塩基性の部分を含む場合、当該化合物の製薬上許容し得る塩も本発明の医薬組成物の有効成分として含有し得る。
【００５５】
製薬上許容し得る塩の調製において使用するのに適した酸としては、酢酸、２，２−ジクロロ酢酸、アシル化したアミノ酸、アジピン酸、アルギン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、４−アセトアミド安息香酸、ホウ酸、（＋）−ショウノウ酸、カンファースルホン酸、（＋）−（１Ｓ）−カンファー−１０−スルホン酸、カプリン酸、カプロン酸、カプリル酸、ケイ皮酸、クエン酸、シクラミン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、ドデシル硫酸、エタン−１，２−ジスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、ガラクタル酸、ゲンチシン酸、グルコヘプトン酸、Ｄ−グルコン酸、Ｄ−グルクロン酸、Ｌ−グルタミン酸、α−オキソグルタル酸、グリコール酸、馬尿酸、臭化水素酸、塩酸、ヨウ化水素酸、（＋）−Ｌ−乳酸、（±）−ＤＬ−乳酸、ラクトビオン酸、ラウリン酸、マレイン酸、（−）−Ｌ−リンゴ酸、マロン酸、（±）−ＤＬ−マンデル酸、メタンスルホン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ナフタレン−１，５−ジスルホン酸、１−ヒドロキシ−２−ナフトエ酸、ニコチン酸、硝酸、オレイン酸、オロト酸、シュウ酸、パルミチン酸、パモ酸、過塩素酸、リン酸、Ｌ−ピログルタミン酸、サッカリン酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、セバシン酸、ステアリン酸、コハク酸、硫酸、タンニン酸、（＋）−Ｌ−酒石酸、チオシアン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ウンデシレン酸、吉草酸等が挙げられる。
【００５６】
製薬上許容し得る塩の調製において使用するのに適した塩基としては、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、水酸化亜鉛、又は水酸化ナトリウムのような無機塩基；並びにＬ−アルギニン、ベネタミン、ベンザチン、コリン、デアノール、ジエタノールアミン、ジエチルアミン、ジメチルアミン、ジプロピルアミン、ジイソプロピルアミン、２−（ジエチルアミノ）−エタノール、エタノールアミン、エチルアミン、エチレンジアミン、イソプロピルアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、ヒドラバミン、１Ｈ−イミダゾール、Ｌ−リジン、モルフォリン、４−（２−ヒドロキシエチル）−モルフォリン、メチルアミン、ピペリジン、ピペラジン、プロピルアミン、ピロリジン、１−（２−ヒドロキシエチル）−ピロリジン、ピリジン、キヌクリジン、キノリン、イソキノリン、第二級アミン、トリエタノールアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール、及びトロメタミンを含む、第一級、第二級、第三級、及び第四級の、脂肪族及び芳香族アミンのような有機塩基が挙げられる。
【００５７】
また、本発明の医薬組成物の有効成分としては、式（Ｉ）で表される化合物の溶媒和物や結晶多形も含まれる。
ここで溶媒和物とは、非共有結合分子間力によって結合した化学量論的又は非化学量論的な量の溶媒をさらに含む、本発明の化合物又はその塩を指す。溶媒が水である場合、溶媒和物は水和物である。
【００５８】
（式（Ｉ）で表される化合物の製造法）
本発明で用いられる式（Ｉ）で表される化合物は、市販されているものを購入して入手できるほか、前記特許文献４〜６等に記載の公知の方法に基づいて合成することができ、例えば、以下に示した製造工程を用いることができる。
【００５９】
【化４】
【００６０】
上記反応式において、Ｒ１、Ｒ２は式（Ｉ）における定義と同じである。
式（ａ）で示したカルボン酸を、酸ハロゲン化合物等を用いてアミド（ｂ）へと変換する。次いで、五酸化二リン等を用いて脱水反応を行い、ニトリル（ｃ）を得る。次に、塩基の存在下、塩酸ヒドロキシルアミンとの反応によって、ヒドロキシアミド（ｄ）を得る。
最後に、式（ｅ）で表されるカルボン酸、又は当該カルボン酸のハロゲン化物との縮合反応によって、式（Ｉ）で表される化合物を得ることができる。
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、上記の方法によって得られるが、さらに必要に応じて再結晶法、カラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて精製することができる。また必要に応じて、常法によって前記した所望の塩又は溶媒和物にすることもできる。
【００６１】
（インターフェロン等との併用）
本発明において、式（Ｉ）で表される化合物及び他の抗ＨＣＶ剤であるインターフェロン、リバビリン等を、ＨＣＶ感染症の治療または予防において同時に、別々に、又は順次に投与するために組み合わせることができる。本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）で表される化合物とインターフェロン等を同一医薬組成物中に含有してもよい（すなわち、配合剤であってもよい）し、また式（Ｉ）で表される化合物とインターフェロン等を別々の医薬組成物に含有するものであってもよい。なお、配合剤中の式（Ｉ）で表される化合物とインターフェロン等との配合割合は、予め一定の割合とすることも、症状の軽重や医師の判断などにより、投与時に任意の割合に変更することもできる。また、本発明の医薬組成物は、式（Ｉ）で表される化合物を含有する医薬組成物とインターフェロン等を含有する医薬組成物とをキットとしたものであってもよい。
【００６２】
ここで、式（Ｉ）で表される化合物とインターフェロン等が別々の医薬組成物に含有される場合には、それぞれの製剤の剤型は同じであってもよいし、別々であってもよい。例えば、いずれか一方又は両方が、非経口製剤、注射剤、点滴剤、静脈内点滴剤であってもよい。
【００６３】
（医薬組成物）
本発明の医薬組成物は、当業者に公知の方法で製剤化することができる。例えば、薬学的に許容しうる担体もしくは媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤などと適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することができる。
【００６４】
経口投与用には、式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許容しうる担体と混合することにより、錠剤、丸薬、糖衣剤、カプセル、液体、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁液等として処方することができる。担体としては、当該技術分野において公知のものを広く使用することができ、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、澱粉等の保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の潤沢剤等を用いることができる。さらに錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠、あるいは二重錠、多層錠とすることができる。
【００６５】
非経口投与用には、式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許容しうるベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。
【００６６】
注射剤用の水溶性ベヒクルとしては、例えば生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えばＤ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えばアルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ−５０と併用してもよい
【００６７】
油性ベヒクルとしてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えばベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
【００６８】
また、式（Ｉ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の分散を制御するなどの目的で、担体、例えば、コラーゲン、ハイドロキシアパタイト、ヒアルロン酸、フィブリン、多糖、リポゾームと配合してもよい。調製された製剤は、経口剤または非経口投与剤として使用できる。
【００６９】
（投与形態）
本発明の医薬組成物の適当な投与経路には、限定されないが、経口、直腸内、経粘膜、または腸内投与、または筋肉内、皮下、骨髄内、鞘内、直接心室内、静脈内、硝子体内、腹腔内、鼻腔内、または眼内注射が含まれる。投与経路は、患者の年齢や病状、併用する他の薬剤等を考慮して適宜選択することができる。
【００７０】
本発明の医薬組成物の投与量としては、例えば、一回につき体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇから１ｍｇの範囲で選ぶことが可能である。あるいは、例えば、患者あたり１回投与あたり０．０２〜１００ｍｇの範囲で投与量を選ぶことができるが、これらの数値に必ずしも制限されるものではない。投与量、投与方法は、患者の体重や年齢、症状、併用する他の薬剤など等を考慮して適宜選択することができる。また、本発明の医薬組成物をインターフェロン製剤またはリバビリン製剤と併用する場合には、これらの薬剤を同時に投与してもよく、別々に投与してもよい。
【００７１】
以下に実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。
【実施例】
【００７２】
［レプリコンアッセイを用いた化合物のスクリーニング］
Ｌｉｐｉｎｓｋｉ則に則り、薬らしく、構造の多様性を重視した化合物として４０４６種の小分子化合物（市販品）を用い、ＨＣＶレプリコン試験系においてハイスループットスクリーニングを行った。
【００７３】
レプリコン試験系に用いた細胞としては、Ｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ２００４，１８９：１１２９−１１３９に記載されるＨｕｈ７／Ｆｅｏ細胞を用いた。この細胞は、感染性ＨＣＶクローンＨＣＶ−Ｎ、遺伝子型１ｂから作成されたレプリコンプラスミドｐＨＣＶ１ｂｎｅｏ−ｄｅｌＳのＮｅｏ遺伝子の代わりに、ホタルルシフェラーゼをネオマイシンホスホトランスフェラーゼにインフレームで融合したキメラ遺伝子コーディング（Ｆｅｏ）を導入したＨＣＶレプリコンプラスミドを、ヒト肝臓癌細胞株Ｈｕｈ７にトランスフェクションし、定常的な発現を示す細胞を選択することにより樹立した細胞株である。
【００７４】
Ｈｕｈ７／Ｆｅｏ細胞を９６ウェル組織培養プレートの各ウェルに４０００個ずつ播種し、５％Ｃｏ２下で３７℃にて２４時間培養した。培地には、ダルベッコ改変最少必須培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）にウシ胎児血清１０％、ペニシリン１００ＩＵ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬ、Ｇ４１８（和光純薬工業株式会社製）２５０μｇ／ｍＬを加えたものを用いた。
【００７５】
各化合物をＤＭＳＯで溶解し培地にて希釈して培地に加え、５μｍｏｌ／Ｌ濃度とした。各化合物添加４８時間後に細胞を回収し、ルシフェラーゼ活性を測定した。ルシフェラーゼアッセイはＬｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ社）及びルミノメーター（ＡＲＶＯ ＭＸ，ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）を用いて定量した。培地全量に対してＤＭＳＯ０．０５質量％添加時の培養物の活性を１００％とし、それぞれ割合で評価した。数値が小さいほど、ＨＣＶレプリコンの増殖を阻害する活性が高いことを意味する。
【００７６】
ルシフェラーゼ活性が５０％未満であった１１７の化合物について、再度同様の培養を行い、ＭＴＳ試験にて細胞毒性を評価した。ＭＴＳ試験は、各化合物添加４８時間後の各培養細胞にＭＴＳ（（３−（４，５−ｄｉｍｅｔｙｌｔｈｉａｚｏｌ−２ｙｌ）−５−（３−ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−２−（４−ｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）−２Ｈ−ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ）を加え、さらに２時間培養した細胞を回収し、吸光度を測定した。培地全量に対してＤＭＳＯ０．０５質量％添加時の培養物の吸光度を１００％とし、それぞれ割合で評価した。数値が大きいほど、細胞生存率が高い（細胞毒性が低い）ことを意味する。
【００７７】
ルシフェラーゼ活性が５０％未満、且つ細胞生存率が７０％より大きいと評価された４３の化合物について、０．１、０．３、１、３、１０、３０μｍｏｌ／Ｌの各濃度で上記と同様の試験を行い、それぞれの化合物について５０％効果濃度（ＥＣ５０、５０％ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）及び５０％細胞毒性濃度（ＣＣ５０、５０％ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を評価した。また、ＣＣ５０／ＥＣ５０を各化合物の有効係数とした。ここで、ＣＣ５０／ＥＣ５０が大きいほど、細胞毒性が低く、且つＨＣＶレプリコンの増殖を阻害する活性が高いことを意味する。
【００７８】
ＥＣ５０が５μｍｏｌ／Ｌであり、且つＣＣ５０／ＥＣ５０が５より大きいと評価された化合物は１９種であり、代表的な化合物は以下の化学式Ａ−Ｄで表される。
【００７９】
【化５】
【００８０】
上記Ａ−Ｄの各化合物について、それぞれの用量反応曲線を図１に、各化合物のＥＣ５０、ＣＣ５０、ＣＣ５０／ＥＣ５０を表１に示した。
【００８１】
【表１】
【００８２】
［フルゲノムＨＣＶでの増殖抑制効果：ＨＣＶ−ＪＦＨ１株］
化学式Ａ−Ｄの化合物について、それぞれＨＣＶ−ＪＦＨ１株（遺伝子型２ａ）細胞培養系において、ウイルス増殖抑制効果を評価した。
フルゲノムＨＣＶ試験系に用いた細胞としては、Ｗａｋｉｔａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １１：７９１−７９６に記載されるＨＣＶ−ＪＦＨ１培養系を用いた。この細胞は、遺伝子型２ａ型ＨＣＶが細胞内で増殖し感染粒子を分泌する系である。
【００８３】
リン酸緩衝バッファー（ＰＢＳ）に１０７個／ｍＬのＨｕｈ７細胞を浮遊させた液０．５ｍＬにＨＣＶ−ＪＦＨ１合成ＲＮＡを１０μｇ添加し、エレクトロポレーション装置（Ｅａｓｙ Ｊｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ，ＥｑｕｉＢｉｏ社）にて、１０５０μＦ，２７０Ｖのパルスを加えた。５分間室温放置後１０ｃｍレートにて４８時間培養を行った。培地には、ダルベッコ改変最少必須培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）にウシ胎児血清１０％、ペニシリン１００ＩＵ／ｍＬ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍＬを加えたものを用いた。
【００８４】
各化合物をＤＭＳＯで溶解し培地にて希釈して培地に加え、０、３、１０μｍｏｌ／Ｌ濃度とした。各化合物添加７２時間後に細胞及び培養上清を回収し、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法を用いてＨＣＶ−ＲＮＡを定量した。ここで、濃度が「０μｍｏｌ／Ｌ」のときは、各化合物に代えて、培地全量に対してＤＭＳＯを０．１質量％添加した。ＧＡＰＤＨあたりのＨＣＶｍＲＮＡ量を縦軸にとったグラフを図２に示した。数値が小さいほど、ＨＣＶの増殖を阻害する活性が高いことを意味する。
【００８５】
［化学式Ａ類似化合物の活性評価；レプリコンアッセイ１］
化合物Ａの類似化合物として、以下の化学式に示すＡ１−Ａ４の化合物について、上記と同様の方法により、ＨＣＶレプリコンの増殖抑制活性を評価した。
【００８６】
【化６】
【００８７】
Ａ１−Ａ４の各化合物について、それぞれの用量反応曲線を図３に、各化合物のＥＣ５０、ＣＣ５０、ＣＣ５０／ＥＣ５０を表２に示した。いずれの化合物においても、優れたＨＣＶレプリコンの増殖抑制効果を表し、細胞毒性も小さかった。
【００８８】
【表２】
【００８９】
［化学式Ａ類似化合物の活性評価；ＨＣＶ−ＪＦＨ１株］
上記と同様の方法により、化合物Ａ１−Ａ４のＨＣＶ−ＪＦＨ１株（遺伝子型２ａ）細胞培養系におけるウイルス増殖抑制効果を評価した。結果を図４に示した。いずれの化合物においても、濃度依存的なウイルス増殖抑制効果を示した。
【００９０】
［化学式Ａ類似化合物の活性評価；レプリコンアッセイ２］
さらに類似化合物として以下の化学式に示すＡ５−Ａ１７の化合物群について、ＨＣＶレプリコンの増殖活性を評価した。
【００９１】
【化７】
【００９２】
それぞれの化合物について、濃度５μｍｏｌ／Ｌ用いた際のルシフェラーゼ活性及び細胞毒性試験の結果を図５に示す。また、それぞれの用量反応曲線を図６−８に、各化合物のＥＣ５０、ＣＣ５０、ＣＣ５０／ＥＣ５０を表３に示した。いずれの化合物においても、優れたＨＣＶレプリコンの増殖抑制効果を表し、細胞毒性も小さかった。
【００９３】
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基、又は、それを有する炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状炭化水素基を表す。）
で表される化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩を含有する、ＨＣＶ感染による肝疾患を予防または治療するための医薬組成物。
【請求項２】
Ｒ１が置換基を有していても良いモルホリノ基である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｒ２が置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフタレン−１−イル基である請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
化合物が、下記の化合物群：
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−ナフタレン−１−イルエチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３，４−ジメトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ（フェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−クロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（２，６−ジクロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ニトロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ヨードフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−（４−ニトロフェニル）エチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ブロモフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
から選ばれる化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩である請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩と、インターフェロン及びリバビリンから選ばれる少なくとも１種とを含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、置換基を有していても良い飽和若しくは不飽和の員数が３〜１１の環式基、又は、それを有する炭素数１〜６の直鎖状又は分岐状炭化水素基を表す。）
で表される化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩を含有する、ＨＣＶ感染による肝疾患を予防または治療するための医薬組成物。
【請求項２】
Ｒ１が置換基を有していても良いモルホリノ基である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
Ｒ２が置換基を有していても良いフェニル基、ベンジル基又はナフタレン−１−イル基である請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
化合物が、下記の化合物群：
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−ナフタレン−１−イルエチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メチルフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−メトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（３，４−ジメトキシフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ（フェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−クロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（２，６−ジクロロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ニトロフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ヨードフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−（１−アミノ−２−（４−ニトロフェニル）エチリデン）アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
［（Ｚ）−［アミノ−（４−ブロモフェニル）メチリデン］アミノ］モルフォリン−４−カルボキシレート；
から選ばれる化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩である請求項１〜３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物又はそれらの製薬上許容されうる塩と、インターフェロン及びリバビリンから選ばれる少なくとも１種とを含有することを特徴とする医薬組成物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公開番号】特開２０１３−５３１２２（Ｐ２０１３−５３１２２Ａ）
【公開日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１９４０８２（Ｐ２０１１−１９４０８２）
【出願日】平成２３年９月６日（２０１１．９．６）
【出願人】（５０４１７９２５５）国立大学法人 東京医科歯科大学 (228)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年９月６日（２０１１．９．６）
【出願人】（５０４１７９２５５）国立大学法人 東京医科歯科大学 (228)
【Ｆターム（参考）】
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