ＣＤ２７アゴニストを単独でまたは他の免疫調節剤と併用して用いる、ヒト免疫療法
癌、感染、炎症、アレルギーおよび自己免疫などの、抗原特異的Ｔ細胞免疫応答が療法的に望ましい状態を治療するため、そしてワクチンの有効性を増進するため、ｉｎ ｖｉｖｏでＴ細胞増殖および拡大を誘導する方法を提供する。これらの方法は、少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、好ましくはアゴニスト性ＣＤ２７抗体の、単独の、あるいは抗ＣＤ４０、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ、もしくはＣＴＬＡ−４抗体、または制御性細胞を枯渇させる剤、またはサイトカインなどの、免疫刺激剤または免疫調節剤などの別の部分に付随した、投与を含む。これらの単一および併用療法にはまた、望ましくはＴ細胞応答（しばしばＣＤ８＋）が誘発される、腫瘍抗原、アレルゲン、自己抗原、または感染性病原体もしくは病原体に特異的な抗原などの所望の抗原の投与も含まれてもよい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［０００１］本発明は、一般的に、必要がある被験体、例えば癌、感染、自己免疫疾患、アレルギーまたは炎症性障害を伴う被験体、あるいはワクチンを投与されている被験体における、Ｔ細胞免疫を促進するためのアジュバントとしてのＣＤ２７アゴニスト、好ましくはＣＤ２７アゴニスト性抗体の使用に関する。最も好ましくは、ＣＤ２７アゴニストは、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）ヒト、ヒト化、もしくはキメラ抗体またはその断片であるか、あるいはヒトＣＤ２７に特異的に結合するｓｃＦｖなどの一本鎖抗体を含んでもよい。あるいは、アゴニストは、宿主エフェクター系との相互作用を増進するかまたは減少させるか、あるいは副作用を減少させるように修飾されている、操作された抗体を含んでもよい。いくつかの好ましい態様において、免疫細胞へのこれらのアゴニスト性抗ＣＤ７０抗体の結合は、ＣＤ７０または関連リガンドによって遮断されないであろう。
【０００２】
［０００２］さらに、本発明は、Ｔ細胞免疫応答増進を誘発する必要がある被験体において、Ｔ細胞免疫応答増進を誘発するための新規アジュバント併用、好ましくは相乗的併用であって、（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、および（ｉｉ）別の免疫刺激剤または免疫調節剤、例えばＣＤ４０抗体、ＣＤ２８抗体、ＯＸ４０抗体、４−１ＢＢ抗体、抗ＣＴＬＡ−４、ＴＬＲ（ｔｏｌｌ様受容体）アゴニスト、または制御性Ｔ細胞を枯渇させる部分、あるいはインターロイキン、例えばＩＬ−２、またはインターフェロン（ベータ、ベータ、ガンマ等）などのサイトカインを含む、前記併用を提供する。同様に、これらのアジュバント併用は、癌、感染性疾患、アレルギー、自己免疫、炎症性障害などの、Ｔ細胞免疫増進が療法的に望ましい状態を治療する際に、そしてワクチンの有効性を増進するのに有用である。
【０００３】
［０００３］免疫細胞への結合が好ましい、ＣＤ２７アゴニスト、好ましくはアゴニスト性ＣＤ２７抗体の投与を伴う、本単一療法は、ＣＤ７０によって遮断されず、そしてＣＤ２７アゴニスト、および別の免疫調節剤または療法剤などの別の部分の投与を伴う併用療法は、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＴＬ免疫およびＴ細胞増殖および生存を増進する際に有用である。以下により詳細に論じるように、本発明は、ＣＤ２７：ＣＤ７０相互作用が、ＣＤ４０抗体のアゴニスト性活性に必要であるという、本発明者らの驚くべき観察に少なくとも部分的に基づく（抗ＣＤ７０ ｍＡｂは、アゴニスト性ＣＤ４０の活性を完全に遮断し、これは、ＣＤ２７：ＣＤ７０相互作用が、ＣＤ４０誘発に必要な「下流」であることを示す）。この観察によって、療法アジュバントとしての、そして抗原特異的Ｔ細胞、特にＣＤ８＋ Ｔ細胞、すなわちエフェクターおよびメモリーＣＤ８＋エフェクター細胞の拡大を活性化し、そして誘導するための、ＣＤ２７アゴニスト性抗体の療法的潜在能力が示唆された。本出願者らは、これらの仮説に束縛されることを望まないが、Ｔ細胞に対する本抗ＣＤ２７抗体のアゴニスト特性が、少なくとも部分的に、こうした抗体の結合がＣＤ７０によって遮断不能であるという事実に起因しうると理論づけられる。しかし、本発明はそれに限定されず、そしてＴ細胞免疫に対してアゴニスト効果を有するいかなる抗ＣＤ２７アゴニスト性抗体あるいはそのコンジュゲートまたは断片の使用も含む。以下に詳細に記載するように、本単一および併用療法は、抗原特異的ＣＴＬ免疫応答の増進が療法的に望ましい、リンパ腫および他の癌または感染状態を伴うヒトまたは他の哺乳動物を治療する際に、特に有用である。
【０００４】
［０００４］記載するように、ＣＤ２７アゴニストを単独で、あるいは他の免疫アジュバントまたは免疫刺激剤または免疫調節剤などの他の療法部分と組み合わせて、癌ペプチドなどの適切な抗原を伴いまたは伴わずに、投与可能である。例えば、１つの態様において、ＣＤ２７アゴニストを、ＣＤ４０アゴニスト性抗体に付随して投与してもよい。本発明のこの態様において、ＣＤ４０アゴニストは、本明細書においてＬＯＢ７／４と称されるキメラアゴニスト性抗ヒトＣＤ４０抗体またはそのヒト化変異体を含んでもよい。このキメラ抗体は、ＣＤ４０を発現しているある範囲の腫瘍に対する強力な抗腫瘍効果を誘発し、そして細胞性免疫を増強することが、本発明者らによって示されている。これらの結果に基づいて、癌（ＣＤ４０陽性および陰性）、特に固形腫瘍を含む、多様な慢性疾患を治療するための、免疫アジュバントまたは療法剤としての、このキメラ抗体およびその変異体、例えばそのヒトまたはヒト化型の使用、ならびに感染性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性および炎症性疾患を治療するための免疫アジュバントとしての使用は、本明細書の本発明者のうちの何人かによる、先の特許出願に解説されている。
【０００５】
［０００５］本発明の好ましい態様において、本ＣＤ２７アゴニストは、癌、感染性疾患、自己免疫障害、アレルギー性障害、または炎症性障害を治療するため、単独で、または抗原とともに用いられるか、あるいはワクチンまたは他の療法剤もしくは免疫療法剤、例えばＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、もしくは４−１ＢＢに対する抗体；ＴＬＲアゴニスト；制御性Ｔ細胞を枯渇させる部分；サイトカイン；抗血管生成剤；または化学療法剤と組み合わせて投与される。本出願全体で、併用療法に言及する際、アゴニスト性抗体などのそれぞれの部分を、別個に、または例えば同じもしくは異なる組成物中で併用して、投与してもよく、そしてそれぞれの部分の投与は、いかなる順で達成してもよいことを理解すべきである。また、これらの併用および単一療法は、特定の疾患または状態を治療する際に有用なさらなる部分の投与を含むよう意図される。
【背景技術】
【０００６】
［０００６］防御免疫の生成は、抗原への曝露だけでなく、抗原に出会う背景にも依存することが、現在、広く認識されている。非炎症背景における、宿主への新規抗原の導入が、長期免疫でなく免疫寛容を生じる一方、炎症剤（アジュバント）の存在下での抗原への曝露が免疫を誘導する、多くの例が存在する（Ｍｏｎｄｉｎｏら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９３：２２４５（１９９６）； Ｐｕｌｅｎｄｒａｎら， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８８：２０７５（１９９８）； Ｊｅｎｋｉｎｓら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：４４３（１９９４）；およびＫｅａｒｎｅｙら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：３２７（１９９４））。これは、寛容および免疫の間の相違を意味しうるため、抗原提示に適した免疫原性背景を生成する際に関与する分子経路を刺激する、感染性病原体内に存在する「アジュバント」を発見するために多くの努力がなされてきた。
【０００７】
［０００７］ＣＤ２７は、Ｉ型およびＩＩ型ＴＮＦＲ（ＣＤ１２０ａおよびｂ）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ）、ＣＤ３０、Ｆａｓ／Ａｐｏ−１（ＣＤ９５）、ＣＤ４０、４−１ＢＢおよびＯＸ４０も含む、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。これらのタンパク質は、細胞増殖、生存、および分化、ならびにアポトーシスまたはプログラム細胞死において重要な役割を果たすことが知られる。これらのファミリーメンバー間の相同性は、細胞外領域に限定され、そしてＣＤ２７中に３回存在するシステイン・ノット・モチーフの存在によって特徴付けられる（ＭｃＤｏｎａｌｄら， Ｃｅｌｌ ７３：４１２１−４２４（１９９３））。
【０００８】
［０００８］ＣＤ２７は、約５５キロダルトンのグリコシル化されたＩ型膜貫通タンパク質であり、そして２つの単量体を連結するジスルフィド架橋を持つホモ二量体として存在する。ジスルフィド架橋は、膜に近い細胞外ドメインに存在する（Ｃａｍｅｒｉｎｉら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：３１６５−６９（１９９１））。ＣＤ２７のリガンド、ＣＤ７０は、リガンドのＴＮＦファミリーに属する。ＣＤ７０は、５０ｋｄの見かけの分子量を持つＩＩ型膜貫通タンパク質である（Ｇｏｏｄｗｉｎら， Ｃｅｌｌ ７３：４４７−４５６（１９９３））。ＴＮＦアルファおよびベータに対する相同性に基づいて、ＣＤ７０は、３つのＣＤ２７ホモ二量体と相互作用する、３つの同一のサブユニットで構成される、三量体構造を有すると予測された（Ｐｅｉｔｓｃｈら， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５２：１７５６−１７６１（１９９４））。やはりＩＩ型膜貫通タンパク質であるＴＮＦアルファは、タンパク質分解的切断によって細胞から放出される一方、ＴＮＦベータおよびＮＧＦは分泌される。
【０００９】
［０００９］ＣＤ２７およびそのリガンドＣＤ７０は、ＴおよびＢ細胞の別個の集団上で発現される。ＣＤ２７は、休止Ｔ細胞上で発現され、そしてＣＤ７０は、活性化されたＴおよびＢ細胞、ならびに樹状細胞上で発現される。Ｔ細胞サブセット内で、ＣＤ２７は、活性化後であってもＣＤ４５ＲＡ＋細胞上で安定して発現される一方、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞上では弱く発現され、そして活性化後には失われる（Ｓｕｇｉｔａら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４９：３２０８−３２１６（１９９２）； Ｈｉｎｔｚｅｎら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２４２６−２４５３（１９９３））。ＣＤ４５ＲＡ＋細胞上で、多様な手段による活性化は、ＣＤ２７発現の上方制御を生じる（Ｈｉｎｔｚｅｎら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２４２６−２４５３（１９９３））。ＣＤ２７は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病の大部分で高発現される（Ｒａｎｈｅｉｍら， Ｂｌｏｏｄ ８５：３５５６−３５６５）。Ｂ細胞株ＲａｍｏｓおよびＲａｊｉもまた、有意なレベルのＣＤ２７およびＣＤ７０を発現する。
【００１０】
［００１０］最適以下の用量のＰＭＡ、ＰＨＡ、抗ＣＤ２または抗ＣＤ３抗体でのＴ細胞の処置を伴う、ＣＤ２７の連結はまた、Ｔ細胞増殖を生じることが知られており、したがってＣＤ２７の共刺激上の役割が明示されている。ＣＤ２７が仲介する共刺激効果が、抗ＣＤ２７抗体、あるいは組換え可溶性ＣＤ２７または抗ＣＤ７０抗体を用いて、特異的に阻害可能であり、そしてリガンドであるＣＤ７０を介したＣＤ２７の連結が、細胞溶解性Ｔ細胞を生じうることもまた報告されている（Ｇｏｏｄｗｉｎら， Ｃｅｌｌ ７３：４４７−４５６（１９９３））。
【００１１】
［００１１］獲得免疫を制御することが知られる別の共刺激分子はＣＤ４０である。ＣＤ４０は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーであり、そしてある範囲の細胞仲介性免疫応答に必須であり、そしてＴ細胞依存性体液性免疫の発展に必要である（Ａｒｕｆｆｏら， Ｃｅｌｌ ７２：２９１（１９９３）； Ｆａｒｒｉｎｇｔｏｎら， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９１ ：１０９９（１９９４）； Ｒｅｎｓｈａｗら， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８０：１８８９（１９９４））。天然の役割において、ＣＤ４＋ Ｔ細胞上に発現したＣＤ４０リガンドは、ＤＣまたはＢ細胞上に発現したＣＤ４０と相互作用し、ＡＰＣの活性化増加、および同時に、Ｔ細胞のさらなる活性化を促進する（Ｌｉｕら Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：２３５（１９９４）； Ｂｉｓｈｏｐら， Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ １４：２９７（２００３））。ＤＣに関しては、ＣＤ４０連結は、古典的には、活性化マーカー上方制御および炎症性サイトカイン産生などの、ＴＬＲを通じた刺激に似た応答を導く（Ｑｕｅｚａｄａら Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：３０７（２００４）； Ｏ'Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＢおよびＴｈｏｍａｓ Ｒ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：８３（２００３））。ＣＤ８応答におけるその重要性は、ＣＤ４０を通じたＡＰＣの刺激が、ＣＤ４細胞の非存在下でのＣＤ４依存性ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答をレスキューすることを示す研究によって立証された（Ｌｅｆｒａｎｃｏｉｓら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６４：７２５（２０００）； Ｂｅｎｎｅｔｔら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７８（１９９８）； Ｒｉｄｇｅら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７４（１９９８）； Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７４（１９９８））。この発見は、いくつかの疾患セッティングにおいて、ＣＤ４０アゴニストが単独で、不全ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を潜在的にレスキュー可能であるという多くの推測を刺激した（Ｆｒｅｎｃｈら， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９９９）。
【００１２】
［００１２］しかし、他の研究によって、ＣＤ４０刺激のみでは、長期免疫を促進するには不十分であることが立証された。いくつかのモデル系において、抗ＣＤ４０処置のみでは、長期免疫を促進するには不十分であり、すなわち無効な炎症性サイトカイン産生とともに、抗原特異的Ｔ細胞の枯渇（Ｍａｕｒｉら Ｎａｔ Ｍｅｄ ６：６７３（２００１）； Ｋｅｄｌら Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９８：１０８１１（２００１））およびＢ細胞応答の終結（Ｅｒｉｃｋｓｏｎら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０９：６１３（２００２））が生じた。また、可溶性三量体化ＣＤ４０リガンドが、ＣＤ４０経路のアゴニストとして病院で用いられており、そしてほとんど報告がないことは、ＣＤ４０単独での刺激が、長期ＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫に必要なすべてのシグナルを再構成することは出来ないという結論と一致する（Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９：３２８０ （２００１））。
【００１３】
［００１３］ＣＤ４０に特異的なアゴニスト性およびアンタゴニスト性抗体の両方が、ヒト療法剤としての潜在能力を有することが示唆されてきている。アンタゴニスト性抗ＣＤ４０抗体には、（１）ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用を少なくとも９０％遮断し、そして抗新生物特性を有すると言われるもの（Ａｒｍｉｔａｇｅら、米国特許第５６７４４９２号； Ｆａｎｓｌｏｗら， １９９５， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ Ｖ Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎら監修， １：５５５−５５６）；（２）ＣＤ４０を通じたシグナル伝達をアンタゴナイズするもの（ｄｅＢｏｅｒら、米国特許第５６７７１６５号）および（３）ＣＤ４０を通じて刺激性シグナルを送達するが、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ間の相互作用を増加させないもの、例えばＧ２８−５（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、米国特許第５１８２３６８号； ＰＣＴ ＷＯ ９６／１８４１３）が含まれる。
【００１４】
［００１４］アゴニスト性抗ＣＤ４０抗体は、いくつかのグループによって報告されている。例えば、１つのｍＡｂ、ＣＤ４０．４（５Ｃ３）（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、カリフォルニア州サンディエゴ）は、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ間の相互作用をおよそ３０〜４０％増加させると報告されている（Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎら監修， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ， １９９５， １：５４７−５５６）。さらに、米国特許第６８４３９８９号において、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓは、抗ヒトＣＤ４０抗体を用いて、ヒトにおいて癌を治療する方法を提供すると主張する。これらの抗体は、刺激性シグナルを送達して、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ間の相互作用を少なくとも４５％増進し、そしてＣＤ４０Ｌ仲介性刺激を増進し、そしてｉｎ ｖｉｖｏ新生物活性を所持すると主張される。Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ特許に開示される典型的な抗体は、Ｂリンパ球に強い増殖促進性シグナルを送達することが以前示されたアゴニスト性抗ヒトＣＤ４０抗体である、Ｓ２Ｃ６に由来した（Ｐａｕｌｉｅら， １９８９， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４２：５９０−５９５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】Ａｒｍｉｔａｇｅら、米国特許第５６７４４９２号
【特許文献２】ｄｅＢｏｅｒら、米国特許第５６７７１６５号
【特許文献３】Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、米国特許第５１８２３６８号
【特許文献４】ＰＣＴ ＷＯ ９６／１８４１３
【特許文献５】米国特許第６８４３９８９号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｍｏｎｄｉｎｏら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９３：２２４５（１９９６）
【非特許文献２】Ｐｕｌｅｎｄｒａｎら， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８８：２０７５（１９９８）
【非特許文献３】Ｊｅｎｋｉｎｓら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：４４３（１９９４）
【非特許文献４】Ｋｅａｒｎｅｙら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：３２７（１９９４）
【非特許文献５】ＭｃＤｏｎａｌｄら， Ｃｅｌｌ ７３：４１２１−４２４（１９９３）
【非特許文献６】Ｃａｍｅｒｉｎｉら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：３１６５−６９（１９９１）
【非特許文献７】Ｇｏｏｄｗｉｎら， Ｃｅｌｌ ７３：４４７−４５６（１９９３）
【非特許文献８】Ｐｅｉｔｓｃｈら， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５２：１７５６−１７６１（１９９４）
【非特許文献９】Ｓｕｇｉｔａら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４９：３２０８−３２１６（１９９２）
【非特許文献１０】Ｈｉｎｔｚｅｎら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２４２６−２４５３（１９９３）
【非特許文献１１】Ｒａｎｈｅｉｍら， Ｂｌｏｏｄ ８５：３５５６−３５６５
【非特許文献１２】Ａｒｕｆｆｏら， Ｃｅｌｌ ７２：２９１（１９９３）
【非特許文献１３】Ｆａｒｒｉｎｇｔｏｎら， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ ＳｃＬ， ＵＳＡ ９１ ：１０９９（１９９４）
【非特許文献１４】Ｒｅｎｓｈａｗら， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８０：１８８９（１９９４）
【非特許文献１５】Ｌｉｕら Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：２３５（１９９４）
【非特許文献１６】Ｂｉｓｈｏｐら， Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ １４：２９７（２００３）
【非特許文献１７】Ｑｕｅｚａｄａら Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：３０７（２００４）
【非特許文献１８】Ｏ'Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＢおよびＴｈｏｍａｓ Ｒ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：８３（２００３）
【非特許文献１９】Ｌｅｆｒａｎｃｏｉｓら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６４：７２５（２０００）
【非特許文献２０】Ｂｅｎｎｅｔｔら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７８（１９９８）
【非特許文献２１】Ｒｉｄｇｅら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７４（１９９８）
【非特許文献２２】Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７４（１９９８）
【非特許文献２３】Ｆｒｅｎｃｈら， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９９９
【非特許文献２４】Ｍａｕｒｉら Ｎａｔ Ｍｅｄ ６：６７３（２００１）
【非特許文献２５】Ｋｅｄｌら Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９８：１０８１１（２００１）
【非特許文献２６】Ｅｒｉｃｋｓｏｎら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０９：６１３（２００２）
【非特許文献２７】Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９：３２８０ （２００１）
【非特許文献２８】Ｆａｎｓｌｏｗら， １９９５， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ Ｖ Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎら監修， １：５５５−５５６
【非特許文献２９】Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎら監修， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ， １９９５， １：５４７−５５６
【非特許文献３０】Ｐａｕｌｉｅら， １９８９， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４２：５９０−５９５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
［００１５］しかし、これらの先の報告にもかかわらず、Ｔｈ１免疫を促進し、そして抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞、すなわちＣＤ８＋エフェクターおよびメモリー細胞の活性化および拡大を増進するアジュバントを用いた、改善法およびヒト療法が必要である。特に、安全であり、そして有効である、すなわち望ましくない副作用を誘発しないが、実質的な療法効果、例えば抗腫瘍効果を誘発する、療法アジュバントを用いて、ヒト癌および他の疾患を治療する改善法が必要である。本発明はこの必要性を満たし、そして他の利点もまた提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
［００１６］本発明は、ＣＤ２７アゴニスト、例えばアゴニスト性ＣＤ２７抗体を、単独で、あるいは別の療法剤、例えば別の免疫刺激剤または免疫調節剤、例えばアゴニスト性ＣＤ４０抗体、可溶性ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢ：４−１ＢＢＬアゴニスト、ＯＸ４０アゴニスト、ＴＬＲアゴニスト、制御性Ｔ細胞を枯渇させる部分、またはインターロイキンもしくはインターフェロンなどのサイトカインと組み合わせて用いる新規ヒト治療法を提供する。上述のように、好ましい態様において、免疫細胞へのこれらのＣＤ２７アゴニスト性抗体の結合は、ＣＤ７０によって遮断されず、これは、このことがＴ細胞に対するこれらの抗体のアゴニスト活性に有益な効果を有しうるためである。これらの併用は、通常、ワクチンと一緒に、タンパク質、ペプチド、免疫原性細胞またはＤＮＡの形で使用されるであろう。以下の結果は、ＣＤ２７の共刺激を遮断すると、４−１ＢＢ共刺激を遮断するよりもはるかに高く、アゴニスト性抗ＣＤ４０抗体によって誘発される抗腫瘍免疫に対する広範囲の影響があり、そしてこれは、ＣＤ２７−ＣＤ７０遮断中のＣＤ８＋ Ｔ細胞拡大における重度の機能障害の結果であるようであることを示す。これらの結果は、ＣＤ２７アゴニスト、例えばアゴニスト抗ＣＤ２７抗体を、ＣＤ８＋ Ｔ細胞拡大を促進するための療法的アジュバントとして、そして癌、感染性障害、自己免疫、アレルギー性障害、および炎症性障害などの、これが療法的に望ましい状態を治療する際に、使用可能であることを示唆する。また、これは、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫を促進するため、ＣＤ２７アゴニスト、例えばＣＤ２７アゴニスト性抗体を、抗原またはワクチンに付随して投与してもよいことを示唆する。特に好ましい態様において、ＣＤ２７アゴニストを用いて、リンパ腫または以下に同定する他の癌などの癌を治療する。
【００１９】
［００１７］抗ＣＤ４０モノクローナル抗体がヒトおよびげっ歯類において腫瘍に対する免疫応答を生じる機構は完全には理解されていないが、樹状細胞の刺激を通じて、ＣＴＬ応答をブーストし、そしてＣＤ４ヘルパー細胞に対する必要性を回避するレベルまで働くようである。本明細書において、アゴニスト性ＣＤ４０モノクローナル抗体は、拡大しているＣＤ８細胞上の４−１ＢＢの強い発現を促進し、それとともに、エフェクターＣＴＬが生成されるにつれて、ＣＤ２７が中程度に喪失されることが示される。興味深いことに、ＣＤ４０ ｍＡｂ処置は、腫瘍所持マウスにおいて、樹状細胞の顕著な活性化を引き起こす一方、それぞれ４−１ＢＢおよびＣＤ２７のリガンドである、４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０の発現は、比較的弱くそして一過性であった。ＣＤ７０の相互作用を遮断するｍＡｂ（ＡＴ１１３−２：抗４−１ＢＢＬ、およびＴＡＮ１−６：抗ＣＤ７０）がＣＤ４０ ｍＡｂ処置の療法的有効性を遮断することを示すことによって、この発現の欠如にもかかわらず、これらの関与が確立された。同様に、これらは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのいずれでも、腫瘍特異的ＣＴＬ細胞の細胞毒性活性に影響を及ぼさなかった。これらに基づいて、本発明者らは、４−１ＢＢ：４−１ＢＢＬ、および特にＣＤ２７：ＣＤ７０相互作用は、ＣＤ４０アゴニスト性抗体の活性を説明する際に極めて重要であり、そしてこれらの抗体は、ＣＤ８ Ｔ細胞増殖および生存を誘発することによって作用すると結論づけた。さらに、本発明者らは、本明細書において、はじめて、アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体が、リンパ腫所持マウス（Ａ３１およびＢＣＬ１）を防御する際に、それ自体、非常に有効であることを示し、これは、ＣＴＬがＤＣより遅い段階で生じる可能性があり、そしてアゴニスト性ＣＤ２７抗体を用いて、細胞性免疫増進が必要な癌および他の疾患を治療可能であることを示す。重要なことに、この抗ＣＤ２７ ｍＡｂは、これらの同じ腫瘍から、免疫無防備状態のＳＣＩＤマウスを防御せず、この防御を提供するには、機能する免疫系（ＣＤ８ Ｔ細胞）が必要であることが強調された。
【００２０】
［００１８］したがって、本発明は、Ｔ細胞免疫促進が必要な被験体、例えばリンパ腫を伴う被験体において、Ｔ細胞免疫を促進するための新規単一および併用療法であって、少なくとも１つのＣＤ２７アゴニストおよび場合によってＣＤ４０アゴニストなどの別の部分の投与を含む、前記療法を提供する。上述のように、ＣＤ４０アゴニストが、本ＣＤ２７アゴニスト性抗体に付随して利用される場合、ＣＤ４０アゴニストは、好ましくは、抗ヒトＣＤ４０抗体、例えば本明細書においてＬＯＢ７／４と称されるキメラ抗体、あるいはその誘導体、例えばＬＯＢ７／４抗体由来の可変重鎖および軽鎖配列またはＣＤＲを含有するヒト化抗体またはその断片を含むであろう。本発明者らは、このキメラ抗体が、例えば癌、特にＣＤ４０を発現しているリンパ腫および固形腫瘍の治療のための療法剤として用いた際に、好適な特性を所持することを見出した。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】［００１９］図１は、ＴＡＮ１−６（抗ＣＤ７０抗体）およびＡＴ１１３−２（抗４−１ＢＢＬ）が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、そしてｉｎ ｖｉｖｏ応答中に、それぞれ４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用を遮断することを示す実験結果を含有する。
【図２】［００２０］図２は、ＢＣＬ１マウスにおいて、抗ＣＤ４０の療法活性に対する抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）および抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）の効果を示す実験結果を含有する。
【図３】［００２１］図３は、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ療法後、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の集積およびＢＣＬ１腫瘍の根絶に対する、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０の効果を示す実験結果を含有する。
【図４】［００２２］図４は、抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）および抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）が、抗ＣＤ４０が誘導する表現型変化またはＢＣＬ１マウスからの脾臓ＤＣの数の変化に影響を及ぼさないことを示す実験結果を含有する。
【図５Ａ】［００２３］図５Ａは、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、応答のエフェクター段階を阻害しないことを示す実験結果を含有する。
【図５Ｂ】図５Ｂは、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、応答のエフェクター段階を阻害しないことを示す実験結果を含有する。
【図５Ｃ】図５Ｃは、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、応答のエフェクター段階を阻害しないことを示す実験結果を含有する。
【図６】［００２４］図６は、２つのＢ細胞リンパ腫（ＢＣＬ１およびＡ３１）に対するアゴニスト性ＣＤ２７モノクローナル抗体の療法的有効性および強度を立証する実験結果を含有する。
【図７】［００２５］図７は、抗ＣＤ２７ ｍＡｂが、ＯＴ−Ｉ細胞において、ＣＤ７０リガンドよりも強い応答（より高くそしてより長い）を誘発することを示す実験を含有する。この図は、Ａｇ＋対照Ａｂ、Ａｇ＋可溶性組換えＣＤ７０または本発明にしたがったアゴニスト性ＣＤ２７抗体を投与されたマウスにおいて、Ａｇ特異的（ＯＴ−１）細胞の拡大を示す。この図の結果は、アゴニスト性ＣＤ２７ ｍＡｂを用いたＣＤ８＋ ＯＴ−１の実質的な拡大を示す（実施例６を参照されたい）。
【図８】［００２６］図８は、抗マウスＣＤ２７抗体で標識したマウスＣＤ２７一過性発現細胞を示す。ここに示すように、試験抗ラット抗マウスＣＤ２７（ＡＴ１２４−１）および陽性対照ハムスター抗マウスＣＤ２７（ＬＧ３Ａ１０）はどちらも、マウストランスフェクション細胞を標識した。どちらの抗体も非トランスフェクション細胞には結合しなかった（データ未提示）。
【図９】［００２７］図９は、抗ＣＤ２７ ｍＡｂでのＣＤ７０およびＣＤ２７の遮断を示す。この図は、ＡＴ１２４−１が、活性化されたマウスＴ細胞表面上のＣＤ２７に結合し、そしてこの結合が、天然リガンドＣＤ７０とＣＤ２７の相互作用によって阻害されないことを示す。対照的に、比較用の商業的に入手可能な抗ＣＤ７０抗体（ＬＧ３Ａ１０；非アゴニスト）は、ＣＤ７０との結合に関して競合することが示された。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
［００２８］ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーおよびそのＴＮＦファミリーリガンド間の相互作用は、病原体および腫瘍に対する有効な抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答の発展中、いくつかの段階で共刺激を提供する際に、非常に重要な役割を果たす。応答初期、樹状細胞（ＤＣ）上のＣＤ４０に、活性化されたＴｈ細胞上のそのリガンド、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）が連結すると、ＤＣの活性化またはライセンシングが誘導され、そして未処置（ｎａｉｖｅ）ＣＤ８ Ｔ細胞に抗原を提示する能力が増強される（Ｂｅｎｎｅｔｔ， Ｃａｒｂｏｎｅら １９９８； Ｒｉｄｇｅ， Ｄｉ Ｒｏｓａら １９９８； Ｔｏｅｓ， Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒら １９９８）。ＤＣライセンシングに関して、Ｔｈ細胞に代用可能な抗ＣＤ４０ ｍＡｂまたは可溶性ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）は、ワクチン接種、ならびに腫瘍（Ｆｒｅｎｃｈ， Ｃｈａｎら １９９９； Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２； ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏ， ｄｅｎ Ｂｏｅｒら ２００２； Ｍｕｒｒａｙ， Ｌｕら ２００３）、ウイルスおよび感染（ＲｏｌｐｈおよびＫａｕｆｍａｎ ２００１； Ｍｕｒｒａｙ， Ｌｕら ２００３）の治療を含めて、Ｔ細胞応答を必要とするいくつかのセッティングにおいて、療法的潜在能力を有することが示されている。ＣＤ４０が誘導するＤＣの活性化は、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＣＤ７０および４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を含む接着および共刺激分子の発現増加によって特徴付けられる（Ｃｅｌｌａ， Ｓｃｈｅｉｄｅｇｇｅｒら １９９６； Ｄｉｅｈｌ， ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏら ２００２； Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ｘｉａｏら ２００３）。最初の抗原特異的ＣＴＬ活性化／プライミングは、ＣＤ２８：Ｂ７結合に依存する（Ｌｅｎｓｃｈｏｗ， Ｗａｌｕｎａｓら １９９６； ＣａｒｒｅｎｏおよびＣｏｌｌｉｎｓ ２００２）が、エフェクター細胞の続く拡大および生存は、大量のさらなる共刺激性相互作用によって調節される。メモリー応答を維持する際のこれらの経路各々の正確な役割は、現在、活発な研究領域である。ＣＴＬ応答を維持する際に非常に重大なようである２つの受容体は、主にＤＣ上に発現されるそれぞれのリガンド、４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０と相互作用する、ＴＮＦＲファミリーメンバー、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）（ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ， Ｓｈａｈｉｎｉａｎら １９９７； Ｆｕｔａｇａｗａ， Ａｋｉｂａら ２００２）およびＣＤ２７（Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ｘｉａｏら ２００３）である。例えば、抗ＣＤ４０ ｍＡｂが駆動するＣＴＬ応答がヘルパー独立性である一方、これらは、ＣＤ２８：Ｂ７およびＣＤ２７：ＣＤ７０相互作用の両方に依存性のままであることが知られる（Ｐｒｉｌｌｉｍａｎ， Ｌｅｍｍｅｎｓら ２００２； Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２； Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）。抗ＣＤ４０ ｍＡｂが駆動するＣＴＬ応答中の４−１ＢＢの重要性に関しては、より少ない情報しか現在知られていないが、Ｔヘルパー細胞に依存するＣＴＬプライミングは、４−１ＢＢに少なくとも部分的に依存し、そして４−１ＢＢ遮断によって顕著に損なわれることが明らかである（Ｄｉｅｈｌ， ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏら ２００２）。
【００２３】
［００２９］本発明者らは、先に、抗ＣＤ４０ ｍＡｂが、いくつかの同系リンパ腫に対して、ヘルパー独立性ＣＴＬ応答を刺激し、現存する腫瘍の根絶に成功し、そしてマウスを再曝露に耐性のままにすることを立証した（Ｆｒｅｎｃｈ， Ｃｈａｎら １９９９； Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２）。抗ＣＤ４０ ｍＡｂでの初期の臨床試験は、臨床的成功および患者利益を示す。
【００２４】
［００３０］対照的に、本発明は、例えばリンパ腫被験体において、療法的免疫アジュバントとしての、そしてＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫を促進するための、ＣＤ２７の役割に関する。Ｏｖａモデル系において、本発明者らは、最近、ＣＤ２７を介した共刺激が、オボアルブミン特異的ＣＴＬのＣＤ４０ ｍＡｂが仲介するプライミングに必須であることを示した。ＣＤ７０−ＣＤ２７相互作用が抑止されている場合は、内因性オボアルブミン特異的Ｔ細胞のプライミングは見られないが、オボアルブミン特異的ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞（ＯＴ−Ｉ）のプライミングは、顕著に減少したレベルではあったが、検出された。さらに、ＣＤ２７シグナル伝達の非存在下でプライミングされたＯＴ−Ｉ Ｔ細胞は、細胞毒性Ｔ細胞に分化可能である一方、二次応答を開始する能力は不全であった。これらの発見に鑑みて、本発明者らは、ＣＤ４０ ｍＡｂが仲介するリンパ腫の免疫療法におけるＣＤ２７共刺激の役割に取り組み、そしてこれをその緊密な類縁体４−１ＢＢの役割と比較することを望んだ。以下の実施例に提供する、これらの研究の結果は、ＣＤ２７を介した共刺激の遮断が、アゴニスト性抗体によって誘発される抗腫瘍応答に対してより効果を有し、そしてこの効果が４−１ＢＢ共刺激を遮断するよりはるかにより顕著であることを示す。本発明者らはさらに、これが、ＣＤ２７−ＣＤ７０遮断中のＣＤ８＋ Ｔ細胞拡大における重度の機能障害のためであると考えている。
【００２５】
［００３１］これらに基づいて、本発明は、免疫学的に促進性の（アジュバント）または療法的に有効な量の（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、および（ｉｉ）ＣＤ４０アゴニスト、ＯＸ−４０アゴニスト、４−１ＢＢアゴニスト、抗ＣＴＬＡ−４、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させる部分、またはインターフェロンもしくはインターロイキンなどのサイトカインを含んでもよいか、あるいは薬剤または化学療法剤を含んでもよい、場合による別の療法部分を投与することによる、新規ヒト療法を提供する。ＣＤ２７アゴニストは、単独で、または併用して、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖およびＣＴＬ免疫応答、例えばアゴニスト性ＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アゴニストによって誘発されるものの増加の増強を生じる。
【００２６】
［００３２］本発明はさらに、はじめて、Ｔ細胞免疫を促進するのに有用なアゴニスト性抗ＣＤ２７抗体を提供する。好ましい態様において、これらのアゴニスト性抗体の結合は、ＣＤ７０によって影響（阻害）されないであろう。これは、本発明に必須ではないが、ＣＤ７０と競合しないアゴニスト性抗体は、例えばリンパ腫などの癌の治療において、免疫アジュバントとして用いた際に好適な特性を所持しうると考えられる。
【００２７】
［００３３］ＣＤ２７アゴニストは、好ましくは、アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体を含むであろう。ＣＤ７０と競合してもまたはしなくてもよいこの抗体は、好ましくは、ヒト、ヒト化、キメラアゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体を含み、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２ヒト定常ドメインであってもよい、ヒト定常ドメインを含む。所望の場合、エフェクター機能を増進するかまたは修飾するため、これらの定常ドメインを修飾してもよい。また、抗体を突然変異させて、グリコシル化を除去するかまたは改変してもよい。同様に、ＣＤ２７アゴニスト性抗体と一緒に別のアゴニスト性抗体を用いる場合、これらは同様に、好ましくはヒト定常ドメインを含有する、好ましくは、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体であり、そしてＣＤ２７アゴニスト性抗体に関して上述するように突然変異されていていてもよい。また、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ミニボディ等の一本鎖抗体および抗体断片が本発明の範囲内である。
【００２８】
［００３４］典型的な態様において、ＣＤ４０アゴニストがＣＤ２７アゴニストと共投与される場合、ＣＤ４０アゴニストは、本明細書においてＬＯＢ７／４と称されるキメラ抗ヒトＣＤ４０抗体、あるいはその変異体またはその断片、特にそのヒト化型、および／またはＬＯＢ７／４と同じエピトープ特異性を所持するか、またはヒトＣＤ４０への結合に関して、ＬＯＢ７／４と競合する、抗体断片を含むであろう。
【００２９】
［００３５］典型的な態様において、本発明は、療法的有効量の、アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体などのＣＤ２７アゴニストを投与することによる、固形腫瘍およびリンパ腫などのヒト癌を治療する新規方法を提供する。場合によって、このアゴニストを、別のアゴニストまたはサイトカイン、例えばＣＤ４０アゴニスト、４−１ＢＢＬアゴニスト性抗体などの４−１ＢＢ：４−１ＢＢＬアゴニスト、アゴニスト性４−１ＢＢ抗体などの４−１ＢＢアゴニスト、抗ＣＴＬＡ−４、あるいはＩＬ−２などのインターロイキンまたはアルファ、ベータもしくはガンマインターフェロンなどのインターフェロン、あるいはＴｒｅｇ枯渇を生じる部分などの、相乗的効果を誘発するものに付随して投与可能である。これらの免疫併用を一緒にまたは併用して投与してもよい。これらのアゴニストまたはアゴニスト／サイトカイン併用は、同じ組成物中でもまたは異なる組成物中でもよい。好ましくは、これらを互いに同時に、またはほぼ同時に投与する。典型的には、これらの療法部分は、互いに２４時間以内に、より典型的には８時間以内に、そしてさらにより典型的には互いに１〜４時間以内に投与される。
【００３０】
［００３６］本ＣＤ２７アゴニスト、すなわちＣＤ２７アゴニスト性抗体で治療可能な癌には、例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、骨髄芽球性前骨髄球性骨髄単球性単球性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫、および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜性腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平細胞癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭癌腫、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝腫瘍、胆管癌腫、絨毛癌、精上皮腫、胚癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、非小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽腫、網膜芽腫、鼻咽頭癌腫、および食道癌腫が含まれる。好ましい態様において、ＣＤ４０を発現している黒色腫、非小細胞肺癌腫、浸潤性乳管癌腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、およびＣＤ４０を発現する他の固形腫瘍などの、ＣＤ４０を発現している固形腫瘍を治療するために、本抗体を用いる。
【００３１】
［００３７］さらに、本発明は、単独で、またはサイトカインなどの別の活性剤および場合によって抗原と併用して、細胞性免疫を増強する必要がある患者に、ある量の本アジュバントアゴニスト併用を投与することによる、こうした治療が必要なヒト被験体において、細胞性免疫を増強する新規方法を提供する。
【００３２】
［００３８］さらに、本発明は、本アジュバント併用を単独で、または他の免疫に基づく療法および免疫に基づかない療法と組み合わせて用いて、ヒト炎症性疾患および不全を治療することに向けられる。こうした状態には、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症（例えばＣＲＳＴ症候群）、炎症性筋炎、シェーグレン症候群（ＳＳ）、混合性結合組織病（例えばＭＣＴＤ、シャープ症候群）、関節リウマチ、多発性硬化症、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）、急性呼吸促迫症候群、肺炎症、骨粗鬆症、遅延型過敏症、喘息、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、および特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）が含まれる。
【００３３】
［００３９］好ましくは、アゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体、および場合によって別の免疫刺激剤または免疫調節剤、例えばアゴニスト性ＣＤ４０、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ、またはＣＴＬＡ−４抗体、制御性Ｔ細胞を枯渇させる部分、あるいはサイトカインを投与する本方法は、抗原特異的抗腫瘍または細胞性免疫応答の増進を誘発するため、こうした治療が必要な宿主に投与されるであろう。好ましい態様において、これらの抗体は、癌、感染、特に慢性感染性疾患、例えばウイルス、細菌または寄生虫を伴う疾患；あるいは自己免疫、炎症またはアレルギー状態を有するか、またはこれらを発展させるリスクを有する被験体に投与されるであろう。例えば、本抗体または併用を用いて、ＨＩＶに対する抗原特異的細胞性免疫応答を誘発可能である。ＨＩＶは、防御免疫が、ほぼ確実に、ウイルスに対する強力でそして長期に存続する細胞性免疫応答の生成を必要とする疾患のよく認識される例である。
【００３４】
［００４０］記載するように、本発明は、有効な治療が、強力な細胞性抗原特異的免疫応答の誘発を必要とする、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫を伴う慢性感染性疾患、ならびに癌などの増殖性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性障害、および炎症性疾患の治療に使用可能な、アゴニスト性抗体療法および併用療法を提供する。
【００３５】
［００４１］本ＣＤ２７アゴニストは、場合によって、リンホカインおよびサイトカインなどの他の免疫アジュバントと併用投与可能である。これらの例には、アルファ、ベータ、およびガンマーインターフェロンなどのインターフェロン、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３など、コロニー刺激因子、ＴＮＦ等のインターロイキンが含まれる。
【００３６】
［００４２］さらに、本抗ヒトＣＤ４０抗体を、癌を治療するために一般的に用いられる化学療法剤および細胞毒素、血管生成を阻害する剤などの他の抗腫瘍剤と併用投与してもよい。これらのさらなる療法剤を本アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体と、別個に、または併用して投与してもよい。また、いくつかの態様において、化学療法剤などのエフェクター部分を、直接または間接的に、例えばリンカーの使用によって、本抗ヒトＣＤ２７、あるいは抗ヒトＣＤ４０、抗ＯＸ−４０、抗４−１ＢＢ、抗ＣＴＬＡ−４等の、他の場合によって含まれるアゴニスト性抗体に付着させてもよい。
【００３７】
［００４３］さらに、いくつかの態様において、本抗ヒトＣＤ２７抗体またはアゴニスト性ＣＤ２７抗体を含有する療法的併用を、所望の抗原と併用して投与してもよいし、または抗原に付着させてもよい。
【００３８】
［００４４］典型的な抗原には、限定されるわけではないが、細菌、ウイルス、寄生虫、アレルゲン、自己抗原および腫瘍関連抗原が含まれる。ＤＮＡに基づくワクチンを用いる場合、抗原は、投与されたＤＮＡ構築物の配列によってコードされるであろう。あるいは、コンジュゲートとして抗原を投与する場合、抗原は、投与したコンジュゲートに含まれるタンパク質であろう。さらに、抗原をＣＤ２７抗体と別個に投与し、そして抗原が任意の形を取ってもよい。特に、抗原には、タンパク質抗原、ペプチド、全不活性化生物等が含まれてもよい。
【００３９】
［００４５］本発明で使用可能な抗原の特定の例には、Ａ、Ｂ、ＣまたはＤ型肝炎、インフルエンザウイルス、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、結核菌、ツラレミア、大痘瘡（疱瘡）、ウイルス性出血熱、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）ペスト、ＨＩＶ、ヘルペス、パピローマウイルス由来の抗原、および感染性病原体に付随する他の抗原が含まれる。他の抗原には、腫瘍細胞に付随する抗原、自己免疫状態、アレルギーおよび喘息に付随する抗原が含まれる。本アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体と組み合わせたこうした抗原の投与は、こうした疾患状態に対して免疫を与えるための療法的または予防的ワクチンにおいて使用可能である。
【００４０】
［００４６］いくつかの態様において、感染性病原体由来の抗原を含むことによって、感染を有するリスクがあるかまたは感染を有する個体を治療するのに、該方法および組成物を用いてもよい。感染は、宿主における外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）生物または宿主内で生殖する病原体の存在に起因する疾患または状態を指す。感染を有するリスクがある被験体は、感染を発展させる傾向がある被験体である。こうした個体には、例えば、感染性生物または病原体への曝露が知られるかまたは推測される被験体が含まれてもよい。感染を有するリスクがある被験体にはまた、感染性病原体または生物に対する免疫応答を開始する能力が損なわれたことに関連する状態を伴う被験体、例えば先天性または後天性免疫不全を伴う被験体、乳児、高齢者、放射療法または化学療法を受けている被験体、火傷を伴う被験体、外傷性傷害を伴う被験体、手術、または他の侵襲性医学的もしくは歯科学的処置を受けている被験体、あるいは他の免疫無防備状態の個体が含まれてもよい。
【００４１】
［００４７］潜在的に他の免疫増強剤と併用される本アゴニスト性抗体併用を用いて治療または予防可能な感染には、細菌、ウイルス、真菌、および寄生虫感染が含まれる。やはり含まれる、感染の他のより一般的でないタイプは、リケッチア、マイコプラズマ、ならびにスクレイピー、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、およびプリオン病（例えばクールーおよびクロイツフェルト・ヤコブ病）を引き起こす病原体である。ヒトが感染する細菌、ウイルス、真菌、および寄生虫の例は、周知である。感染は、急性、亜急性、慢性または潜在性であってもよく、そして局所的でもまた全身性でもよい。さらに、感染は、宿主における感染性生物または病原体の生活環の少なくとも１つの期の間に、主に細胞内性でもまたは細胞外性でもよい。
【００４２】
［００４８］本抗体を用いて、細胞性免疫応答を増強してもよい細菌感染には、グラム陰性およびグラム陽性細菌の両方が含まれる。グラム陽性細菌の例には、限定されるわけではないが、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、およびストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）種が含まれる。グラム陰性細菌の例には、限定されるわけではないが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、およびサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種が含まれる。感染性細菌の具体的な例には、限定されるわけではないが、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉｓ）、ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えば、結核菌（Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．アビウム（Ｍ． ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ． ｉｎｔｒａｃｅｌｌｉｌａｒｅ）、カンサシ菌（Ｍ． ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドナエ（Ｍ． ｇｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｒｓ）、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群ストレプトコッカス属）、ストレプトコッカス・アガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群ストレプトコッカス）、ストレプトコッカス属（ビリダンス群）、フェカリス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ボビス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ）、ストレプトコッカス属（嫌気性種）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種、フソバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）、トレポネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、およびアクチノミセス・イスラエリ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｉｉ）が含まれる。
【００４３】
［００４９］ヒトにおいて感染を引き起こすウイルスの例には、限定されるわけではないが、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩとも称される）、ＨＩＶ−ＩＩ、ＬＡＣまたはＩＤＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶまたはＨＩＶ−ＩＩＩおよびＨＩＶ−ＬＰなどの他の単離体）、ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）、カリシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を引き起こす株）、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えばデングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばコロナウイルス）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばエボラウイルス）、パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばパラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばインフルエンザウイルス）、ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばハンタン（Ｈａｔａａｎ）ウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス（ｐｈｌｅｏｂｏｖｉｒｕｓ）およびナイロウイルス）、アレナウイルス科（Ａｒｅｎａ ｖｉｒｉｄａｅ）（出血熱ウイルス）、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばレオウイルス、オルビウイルス、ロタウイルス）、ビマウイルス科（Ｂｉｍａｖｉｒｉｄａｅ）、ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）（Ｂ型肝炎ウイルス）、パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）（パルボウイルス）、パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（アデノウイルス）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｖｉｒｉｄａｅ）（例えば単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＩおよびＩＩ、帯状疱疹ウイルス、ポックスウイルス）、およびイリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばアフリカブタ熱ウイルス）、ならびに未分類ウイルス（例えば海綿状脳疾患の病原体、デルタ肝炎の病原体、非Ａ非Ｂ肝炎の病原体（クラス１腸管伝染；Ｃ型肝炎などのクラス２非経口感染）；ノーウォークおよび関連ウイルスおよびアストロウイルス）が含まれる。
【００４４】
［００５０］真菌の例には、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）および他のカンジダ属種、ブラストミセス・デルマティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、トラコーマクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、ノカルジア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）種、およびカリニ肺炎菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）が含まれる。
【００４５】
［００５１］寄生虫には、限定されるわけではないが、血液感染性および／または組織寄生虫、例えば、ネズミバベシア（Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ）、バベシ・ディベルガンス（Ｂａｂｅｓｉ ｄｉｖｅｒｇａｎｓ）、赤痢アメーバ（Ｅｎｔｏｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄａ ｌａｍｂｌｉａ）、熱帯リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｔｒｏｐｉｃａ）、リーシュマニア属種、ブラジルリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ドノバンリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖｄｎｉ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ）、三日熱マラリア（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ガンビアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）およびローデシアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ）（アフリカ睡眠病）、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）（シャーガス病）およびトキソプラズマ原虫、扁平動物、および回虫が含まれる。
【００４６】
［００５２］記載するように、本発明は、好ましくは、癌などの増殖性疾患を治療する際の、アゴニスト性抗ヒトＣＤ４０、ＯＸ−４０、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ抗体またはサイトカイン、あるいは制御性Ｔ細胞を枯渇させる剤などの別の部分が場合によって付随する、アゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体の使用に関する。癌は、体の臓器および系の正常な機能に干渉する、細胞の制御されない増殖の状態である。癌を有する被験体は、被験体の体内に存在する客観的に測定可能な癌細胞を有する被験体である。癌を発展させるリスクがある被験体は、例えば家族歴、遺伝的素因に基づいて、癌を発展させる素因がある被験体、放射線または他の癌を引き起こす剤に曝露された被験体である。元来の位置から遊走し、そして生命維持に必要な臓器に播種する癌は、最終的に、影響を受けた臓器の機能の悪化を通じて、被験体の死を導きうる。白血病などの造血性癌は、被験体において、正常造血区画を競合して追い出し（ｏｕｔ−ｃｏｍｐｅｔｅ）、それによって造血不全（貧血、血小板減少症および好中球減少症の形）を導き、最終的には死を引き起こす。
【００４７】
［００５３］ＣＤ２７アゴニスト、および上述のような場合による別の部分を含む本発明の組成物を用いて、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含むことによって、多様な癌、または癌を発展させるリスクがある被験体を治療してもよい。これは、腫瘍細胞中に発現される抗原である。こうした癌の例には、乳癌、前立腺癌、結腸癌、白血病、慢性リンパ球性白血病等の血液癌が含まれる。腫瘍関連抗原はまた、腫瘍細胞によって主に発現されるが独占的に発現されるのではない抗原であってもよい。
【００４８】
［００５４］さらなる癌には、すでに言及されたもの、ならびに基底細胞癌種、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化系の癌、子宮内膜癌、食道癌、目の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞、大細胞）、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫；黒色腫；神経芽腫；口腔癌（例えば唇、舌、口および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；網膜芽腫；横紋筋肉腫；結腸癌；呼吸器系の癌；肉腫；皮膚癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮癌；泌尿器系の癌；ならびに他の癌腫および肉腫が含まれる。
【００４９】
［００５５］また、本ＣＤ２７アゴニスト、および含有組成物または先に定義したような併用療法を用いて、多発性硬化症、関節リウマチ、１型糖尿病、乾癬または他の自己免疫障害などの自己免疫疾患を治療してもよい。本発明の免疫アジュバントで潜在的に治療可能な他の自己免疫疾患には、クローン病、および潰瘍性大腸炎などの他の炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、グレーブス病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症、混合性結合組織疾患、多発性筋炎（ｐｏｌｙｐｙｏｓｉｔｉｓ）、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫関連不妊、糸球体腎炎（例えば半月体性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、類天疱瘡、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、インスリン耐性、自己免疫糖尿病（１型糖尿病；インスリン依存性糖尿病）、自己免疫肝炎、自己免疫血友病、自己免疫リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫肝炎、自己免疫血友病、自己免疫リンパ増殖性症候群、自己免疫網膜ブドウ膜炎、およびギラン−バレー症候群が含まれる。最近、動脈硬化症およびアルツハイマー病が自己免疫疾患と認識された。したがって、本発明のこの態様において、本ＣＤ２７アゴニスト、典型的にはアゴニスト性ＣＤ２７抗体を、単独で、または宿主が組織破壊および正常組織への損傷に寄与する望ましくない免疫応答を誘発する、自己抗原と併用して、投与してもよい。
【００５０】
［００５６］本抗ＣＤ２７抗体および併用療法はまた、喘息、ならびにアレルギー性および炎症性疾患を治療するのにも使用可能である。喘息は、炎症および気道狭窄、ならびに吸入した物質への気道の反応性増加によって特徴付けられる呼吸系の障害である。喘息は、独占的ではないが、しばしば、アトピー性またはアレルギー性症状と関連づけられる。アレルギーは、物質（アレルゲン）に対する後天性過敏症である。アレルギー状態には、湿疹、アレルギー性鼻炎、または鼻感冒、枯草熱、気管支喘息、蕁麻疹、および食物アレルギー、ならびに他のアトピー性状態が含まれる。アレルゲンは、感受性の被験体において、アレルギー性または喘息性応答を誘導可能な物質である。花粉、昆虫毒、動物のふけ、ほこり、真菌胞子、および薬剤を含む、多くのアレルゲンがある。
【００５１】
［００５７］天然および植物アレルゲンの例には、以下の属に特異的なタンパク質が含まれる：イヌ科（Ｃａｎｉｎｅ）、ダニ属（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ）、ネコ属（Ｆｅｌｉｓ）、ブタクサ属（Ａｍｂｒｏｓｉａ）、ドクムギ属（Ｌｏｔｉｕｍ）、スギ属（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、ハンノキ属（Ａｌｄｅｒ）、アルヌス属（Ａｌｉｎｕｓ）、カバノキ属（Ｂｅｔｕｌａ）、カシ属（Ｑｕｅｒｃｕｓ）、オリーブ属（Ｏｌｅａ）、ヨモギ属（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ）、オオバコ属（Ｐｌａｎｔａｇｏ）、ヒカゲミズ属（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ）、チャバネゴキブリ属（Ｂｌａｔｅｌｌａ）、ミツバチ属（Ａｐｉｓ）、イトスギ属（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ）、ビャクシン属（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ）、クロベ属（Ｔｈｕｙａ）、ヒノキ属（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ）、ゴキブリ属（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔ）、カモジグサ属（Ａｇｏｐｙｒｏｎ）、ライムギ属（Ｓｅｃａｌｅ）、コムギ属（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）、カモガヤ属（Ｄａｃｔｙｌｉｓ）、ウシノケグサ属（Ｆｅｓｔｕｃａ）、イチゴツナギ属（Ｐｏａ）、カラスムギ属（Ａｖｅｎａ）、シラゲガヤ属（Ｈｏｌｃｕｓ）、ハルガヤ属（Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ）、オオカニツリ属（Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ）、コヌカグサ属（Ａｇｒｏｓｔｉｓ）、アワガエリ属（Ｐｈｌｅｕｍ）、クサヨシ属（Ｐｈａｌａｒｉｓ）、スズメノヒエ属（Ｐａｓｐａｌｕｍ）、モロコシ属（Ｓｏｒｇｈｕｍ）、およびブロミス属（Ｂｒｏｍｉｓ）。
【００５２】
［００５８］本抗体、抗体含有組成物、およびそのコンジュゲートを、特定の状態、例えば感染性疾患、癌または自己免疫状態を治療するための他の療法と併用してもよいことが理解される。例えば、癌の場合、本発明の方法を化学療法または放射療法と併用してもよい。
【００５３】
［００５９］所望の抗原に対する抗体を作製する方法が周知である。しかし、本発明までは、アゴニスト性ＣＤ２７ ｍＡｂは報告されておらず、また本明細書に請求するような、免疫療法のためのその使用は示唆されてこなかった。
【００５４】
［００６０］対照的に、上述のように、アゴニスト性ＣＤ４０抗体が知られており、免疫療法におけるその使用も知られている。また、図９において、本出願は、好ましい典型的なキメラアゴニスト性ＣＤ４０抗体ＬＯＢ７／４の重鎖および軽鎖の可変配列を提供し、これによって、当業者は、組換え法により、この抗体を作製可能であろう。ＣＤ２７抗体が、ＣＤ４０アゴニスト性抗体に付随して用いられる場合、本ＣＤ４０アゴニストおよびＣＤ２７アゴニストの有効量は、実験的に、または動物モデルにおける免疫学的有効量に基づいて、決定可能である。相対的な量は、ｉｎ ｖｉｖｏで、ＣＴＬ応答増進およびＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖を生じるものである。考慮すべきさらなる要因には、抗原性、配合、投与経路、投与すべき免疫用量の回数、個体の身体状態、体重、および年齢、副作用等が含まれる。こうした要因は、当業者に周知であり、そして当業者によって決定可能である（例えばＰａｏｌｅｔｔｉおよびＭｃｌｎｎｅｓ監修， Ｖａｃｃｉｎｅｓ， ｆｒｏｍ Ｃｏｎｃｅｐｔ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ： Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（１９９９）を参照されたい）。本ＣＤ２７アゴニストを単独でまたは他のアジュバントと組み合わせて投与してもよいことが理解される。
【００５５】
［００６１］限定されるわけではないが、筋内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、鼻内、経口または他の粘膜経路を含む、当該技術分野に知られる任意の方法によって、本アゴニストまたはその併用、例えばＣＤ４０／ＣＤ２７アゴニスト性抗体併用を局所的または全身性に投与してもよい。さらなる経路には、頭蓋内（例えば槽内、または脳室内）、眼窩内、眼性、嚢内、脊椎内、および局所投与が含まれる。本発明のアジュバントおよびワクチン組成物を、適切な非毒性薬学的キャリアー中で投与してもよいし、あるいはマイクロカプセルまたは持続性放出移植物中で配合してもよい。所望の細胞性免疫応答を維持するため、望ましい場合は、本発明の免疫原性組成物を多数回投与してもよい。適切な経路、配合、および免疫化スケジュールは、当業者によって決定可能である。
【００５６】
［００６２］本発明の方法において、いくつかの場合、抗体または抗体コンジュゲート併用を、１つまたはいくつかの抗原、あるいは他の活性剤、例えばサイトカインまたは化学療法剤と組み合わせて投与してもよい。これらの組成物および含有活性剤を、別個に、または細胞性免疫の所望の増進を達成する任意の順序で、併用して、投与してもよい。典型的には、互いに短期間内に、すなわち互いに約１日以内に、典型的には互いに数時間、そしてより典型的には互いに約１時間以下のうちに、これらの組成物を投与する。
【００５７】
［００６３］いくつかの例において、アフィニティー精製を促進する組換え抗体アゴニスト上の部分を含むことが有益でありうる。こうした部分には、コンジュゲート中のポリペプチドの機能に干渉しない、比較的小さい分子が含まれる。あるいは、タグは切断によって除去可能である。こうしたタグの例には、ポリ−ヒスチジンタグ、赤血球凝集素タグ、マルターゼ結合性タンパク質、レクチン、グルタチオン−Ｓトランスフェラーゼ、アビジン等が含まれる。他の適切なアフィニティータグには、ＦＬＡＧ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ｍｙｃ等が含まれる。
【００５８】
［００６４］本抗体および含有抗体コンジュゲートを、生理食塩水などの生理学的に許容されうるキャリアーとともに投与してもよい。組成物にはまた、クエン酸、リン酸、酢酸、および重炭酸などの緩衝剤、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、血清アルブミンなどのタンパク質、エチレンジアミン四酢酸、塩化ナトリウム、または他の塩、リポソーム、マンニトール、ソルビトール、グリセロール等の別のキャリアーまたは賦形剤が含まれてもよい。対応する投与経路にしたがって、本発明の剤を多様な方式で配合してもよい。例えば、摂取または注射用に液体配合物を作製してもよく、摂取、吸入、または局所適用のため、ゲルまたは手法を作製してもよい。こうした配合物を作製するための方法が周知であり、そして例えば、"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，" 第１８版， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， ペンシルバニア州イーストンに見出されうる。
【００５９】
［００６５］発現を導くことが可能な任意のベクター、例えばベクターで形質導入された細胞を用いて、本アゴニスト性抗体を発現させてもよい。使用可能なベクターには、例えば、バキュロウイルス、細菌で使用するためのＴ７に基づくベクター、酵母発現ベクター、哺乳動物発現ベクター、ウイルス発現ベクター等が含まれる。ウイルスベクターには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ベクター、ヘルペスウイルス、シミアンウイルスＳＶ、およびウシパピローマウイルスベクターが含まれる。
【００６０】
［００６６］本アゴニスト性抗体の発現を促進するのに使用可能な原核細胞および真核細胞には、例えば、微生物、植物および動物細胞、例えば大腸菌、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等の原核生物、Ｓｆ２１細胞などの昆虫細胞、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属、クリュイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロミセス属（Ｓｃｈｉｚｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、およびピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）などの酵母細胞、ならびにＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＩＨ ３Ｔ３、ＨｅＬａ等の哺乳動物細胞が含まれる。当業者は、特定の発現系に適した構成要素を容易に選択可能であり、これには、所望の細胞または生物に適した、発現ベクター、プロモーター、選択可能マーカー等が含まれる。多様な発現系の選択および使用は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら， "Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， ニューヨーク州ニューヨーク（１９９３）；およびＰｏｕｗｅｌｓら， Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ"， １９８５ Ｓｕｐｐｌ． １９８７に見出されうる。本ＤＮＡ構築物を含有し、そして発現する真核細胞もまた提供する。
【００６１】
［００６７］本明細書において、用語「抗体」は、最も広い意味において、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体、ならびにその抗原結合性断片を含むように用いられる。これには、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ミニボディ、一本鎖ＡｂおよびＦｖ断片が含まれる。
【００６２】
［００６８］さらに、用語「抗体」には、天然抗体、ならびに非天然存在抗体、例えば一本鎖抗体、キメラ抗体、二重官能性およびヒト化抗体が含まれる。本発明で使用するのに好ましいのは，キメラ、ヒト化、および完全ヒト抗体である。キメラ、ヒト化、ＣＤＲ移植、一本鎖および二重官能性抗体を合成するための方法は当業者に周知である。さらに、記載するように、ＣＤ２７に特異的な抗体が知られ、そして入手可能であり、そしてＣＤ２７抗原、好ましくはヒトＣＤ２７抗原で適切な宿主を免疫することによって作製可能である。本発明に記載するように、ＣＤ４０抗体を用いる場合、ＣＤ４０抗体は、図９に含有される可変重鎖および軽鎖配列を有するキメラＬＯＢ７／４を含んでもよく、その合成は図１０および１１に図示される。
【００６３】
［００６９］本発明のアゴニスト性ＣＤ２７抗体は、損なわれていなくても、または操作されていてもよい。例えば、ＣＤ２７ ｍＡｂは、補体、マクロファージなどのＦｃＲ所持エフェクターなどのヒトエフェクター系への結合増加または減少のために、あるいは半減期を延長するかまたは減少させるために、完全にまたは部分的にグリコシル化され、そして／または選択されていてもよい。これらの修飾を行って、有効性を改善し、そして潜在的にまた、毒性副作用を減少させてもよい。
【００６４】
［００７０］本発明の多様な態様の活性に実質的に影響を及ぼさない修飾もまた、本明細書に提供する本発明の定義内で提供されることが理解される。したがって、以下の実施例は、本発明を例示するが限定しないよう意図される。
【実施例】
【００６５】
［００７１］材料および方法
［００７２］（以下の材料および方法を実施例１〜６で用いた。）
［００７３］動物および細胞株。ＢＡＬＢ／ｃおよびＣ５７Ｂｌ／６マウスは、Ｈａｒｌａｎ（英国、オクソン、ブラックソーン）によって供給され、そして現地の動物施設で維持された。ＢＣＬ１（ＳｌａｖｉｎおよびＳｔｒｏｂｅｒ １９７８）マウスＢリンパ腫細胞株は、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるｉ．ｐ．継代によって、ｉｎ ｖｉｖｏで維持された。疾患の最終段階で脾臓を除去し、そして先に記載するように、単細胞懸濁物を調製した。Ｐ ＢＣＬ１細胞は、ＢＣＬ１由来の亜系統であり、そして培養中で増殖させた（Ｉｌｌｉｄｇｅ， Ｈｏｎｅｙｃｈｕｒｃｈら ２０００）。英国内務省認可指針にしたがった認可の下で動物実験を行い、そしてこれらは、サザンプトン大学倫理委員会によって認可された。
【００６６】
［００７４］抗体および試薬。本研究に用いた抗ＣＤ４０処置ｍＡｂは、３／２３であった（元来、Ｇ． Ｋｌａｕｓ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， 英国ロンドンによって提供されたもの）。それぞれ、４−１ＢＢＬ−Ｆｃ融合タンパク質または可溶性組換えＣＤ７０タンパク質でラットを免疫することによって、社内で、抗４−ｌＢＢＬ ｍＡｂ、ＡＴ１１３−２、および抗ＣＤ７０ ｍＡｂ、ＴＡＮ１−６を作製した（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）。ｍＡｂの調製のため、静置培養中でハイブリドーマ細胞を拡大し、そしてプロテインＧカップリングＳｅｐｈａｒｏｓｅビーズを用いて、ＩｇＧを上清から調製した。フローサイトメトリー分析に用いた抗体は：すべて社内で調製され、そしてＰＥまたはＦＩＴＣ標識されている、ＩＤ３（抗ＣＤ１９）（Ｋｒｏｐ， ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓら １９９６）、１６−１０Ａ１（抗Ｂ７−ｌ）およびＧＬ−１（抗Ｂ７−２）（どちらもＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、ＩＣＡＭ−１（参照）、Ｎ４１８（抗ＣＤ１１ｃ）（ＡＴＣＣ）、Ｍｃ１０−６Ａ５（抗ＢＣＬ１ Ｉｄ ｍＡｂ）（Ｇｅｏｒｇｅ， ＭｃＢｒｉｄｅら １９９１）、ＬＯＢ１２／３（抗４−ｌＢＢ）（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）、ＹＴＳ１６９（抗ＣＤ８）； ＰＥ標識抗ＣＤ２７およびＡＰＣ標識抗ＣＤ８（どちらもＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）であった。可溶性融合タンパク質、ｓＣＤ７０−Ｆｃおよびｓ４−１ＢＢＬ−Ｆｃを先に記載したように生成した（ＲｏｗｌｅｙおよびＡｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ ２００４）。
【００６７】
［００７５］ＢＩＡＣＯＲＥ分析。ＴＡＮ１−６およびＡＴ１１３−２の結合のＢｉａｃｏｒｅ分析を先に記載されるように行った（Ａｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ， Ｍａｌｌｅｔｔら １９９７）。
【００６８】
［００７６］ＯＴ−１細胞の養子免疫伝達。ＯＴ−Ｉマウス由来のＯＶＡ特異的Ｈ−２Ｋｂ制限ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞（１ｘ１０６）を、性別が一致したＣ５７ＢＬ／６レシピエントにｉ．ｖ．注射した。１または２日後：抗ＣＤ４０または対照抗Ａ３１リンパ腫Ｉｄ ｍＡｂ（各５００μｇ）、または抗ＣＤ４０および抗ＣＤ７０／抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂ（各５００μｇ）と併用したＯＶＡ（５ｍｇ）のｉ．ｐ．投与によって、Ｔ細胞をプライミングした。翌日、これらのマウスに、対照抗Ａ３１リンパ腫Ｉｄ ｍＡｂ、抗ＣＤ７０または抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂ（５００μｇ）をさらに注射した。Ａｇ特異的Ｔ細胞を追跡するため、血液試料（５０μｌ）をＰＥ標識Ｈ−２Ｋｂ ＯＶＡｐ四量体（ＰｒｏｉｍｍｕｎｅまたはＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）およびＡＰＣ標識抗ＣＤ８□（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色した（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）。
【００６９】
［００７７］内因性抗ＯＶＡ応答の監視。抗ＣＤ４０および対照（抗Ａ３１リンパ腫Ｉｄ）、抗ＣＤ７０または抗ＣＤ１３７Ｌ ｍＡｂのいずれか（各５００μｇ）と併用したＯＶＡ（５ｍｇ）のｉ．ｐ．投与によって、Ｃ５７ＢＬ／６マウスをプライミングした。翌日、マウスに、対照、抗ＣＤ７０または抗ＣＤ１３７Ｌ ｍＡｂのいずれか（５００μｇ）をさらに注射した。Ａｇ特異的Ｔ細胞を追跡するため、プライミング６日後、血液試料（５０μｌ）をＰＥ標識Ｈ−２Ｋｂ ＯＶＡｐ四量体およびＡＰＣ標識抗ＣＤ８０（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色し、そしてＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州マウンテンビュー）を用いて、フローサイトメトリー分析を行った。
【００７０】
［００７８］腫瘍および抗ＣＤ４０ ｍＡｂ後の、脾臓リンパ球およびＤＣのフローサイトメトリー分析
［００７９］年齢一致ＢＡＬＢ／ｃマウスに、５ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞を第０日に投与し（ｉ．ｖ．）、そして次いで、脾臓における腫瘍細胞レベルが、総細胞のおよそ５％に到達したとき、典型的には腫瘍後４日目に、１ｍｇの抗ＣＤ４０ ｍＡｂまたはアイソタイプ一致対照を投与した（ｉ．ｖ．）。抗ＣＤ４０ ｍＡｂ処置の応答に対する、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０ ｍＡｂの影響を見る実験において、抗ＣＤ４０注射の４時間前に０．５ｍｇの遮断性ｍＡｂをｉ．ｐ．注射し、そして次いで、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ後、１日目および３日目にも注射した。示した日に動物を屠殺し、脾臓を除去し、そして懸濁物を調製した。ＰＥ抗ＣＤ１９およびＦＩＴＣ抗ＢＣＬ１ Ｉｄを用いて、ＢＣＬ１腫瘍細胞を検出した。ＡＰＣ抗ＣＤ８ａおよびＰＥ抗４−１ＢＢおよび抗ＣＤ２７を用いて、ＣＤ８＋リンパ球の数および表現型の変化を追跡した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、フローサイトメトリー分析を行った。
【００７１】
［００８０］ＤＣ分析のため、全脾臓を荒く切り刻み、そしてＲＰＭＩ−１６４０ ５ｍｌ中の１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼＤ（Ｒｏｃｈｅ）および０．０５ｍｇ／ｍｌ ＤＮアーゼＩ（Ｓｉｇｍａ）で消化して、そして３７℃で３０分間、穏やかに攪拌した。次いで、２０ｍｌの培地を添加し、そして単細胞懸濁物を調製した。細胞を一度洗浄し、再懸濁し、そして抗ＦｃｇＩＩおよびＩＩＩ受容体ｍＡｂ、２．４Ｇ２の存在下で、ＰＥ抗ＣＤ１１ｃおよびＦＩＴＣ抗Ｂ７．１、Ｂ７．１、ＩＣＡＭ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢＬ、およびＣＤ７０を用いて、フローサイトメトリー用に試料を標識した。死亡した細胞および自己蛍光細胞がＦＬ３を用いてゲーティング可能であるように、分析１５分前に、最終濃度２μｇ／ｍｌの７−アミノアクチノマイシン−Ｄ（７ＡＡＤ）を添加した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒを用いて、フローサイトメトリー分析を行った。
【００７２】
［００８１］免疫療法。５匹の年齢一致マウスの群に、第０日に、１０７ ＢＣＬ１細胞をｉ．ｖ．注射し、そして次いで、第４〜７日に、抗ＣＤ４０をｉ．ｖ．注射し（２５０ｍｇ／日）、そして示した箇所で、第４、７、９および１１日に、遮断性ｍＡｂをｉ．ｐ．注射した（５００ｍｇ／日）。
【００７３】
［００８２］ｉｎ ｖｉｖｏ殺傷アッセイ。マウスに、２ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉ．ｐ．注射し、そして４８時間後に１ｍｇの抗ＣＤ４０をｉ．ｐ．注射した。８日後、３匹のマウスの群に、１ｍｇの適切な遮断性ｍＡｂをｉ．ｐ．注射し、そして次いで５時間後、末期ＢＣＬ１腫瘍所持マウス由来の２ｘ１０７ ＣＦＳＥ標識脾臓細胞を注射した。２４時間後、洗浄し、そしてＰＥ標識抗ＢＣＬ１ ＩｄおよびＡＰＣ標識抗ＣＤ８で染色することによって、腹腔から細胞を回収した。
【００７４】
［００８３］細胞毒性アッセイ。先に記載されるように（Ｔｕｔｔ， Ｏ’Ｂｒｉｅｎら ２００２）、標準的４時間５１Ｃｒ放出アッセイを用いて、脾臓エフェクターの細胞毒性活性を評価した。簡潔には、抗ＣＤ４０処置の４〜５日後、ＢＣＬ１所持マウスから、脾臓ホモジネートを調製した。ＦＩＴＣ抗Ｉｄ ｍＡｂを用いて残りの腫瘍細胞を除去し、その後、抗ＦＩＴＣ ＭＡＣＳビーズおよびＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ， Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ， Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いた。残りの細胞をエフェクターとして用いた。ＰＢＣＬ１細胞を５１Ｃｒで標識し、そしてターゲットとして用いた。細胞毒性に対するｍＡｂの効果を評価するため、最終濃度５０μｇ／ｍｌでこれらを含めた。１５０μｌの１％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０を添加しておいたターゲット細胞を用いて、放射能の最大放出を計算した。標準式を用いて、特異的５１Ｃｒ放出の割合を計算した：特異的放出の割合＝［（試料放出−バックグラウンド放出）／（最大放出−バックグラウンド放出）］ｘ１００。
【００７５】
［００８４］実施例１：ＴＡＮ１−６（抗ＣＤ７０）およびＡＴ１１３−２（抗４−１ＢＢＬ）は、それぞれｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用を遮断する。
【００７６】
［００８５］実施例１に含有される本実験において、１ａおよび１ｂのどちらにおいても、１マイクログラム／ｍｌの抗ＣＤ３で、ＢＡＬＢ／ｃ脾臓細胞を４８時間活性化して、Ｔ細胞上のＣＤ７０および４−１ＢＢの発現を上方制御した。３ａにおいては、ＴＡＮ１−６（実線）またはＡＴ１１３−２（点線）（５０マイクログラム／ｍｌ）の存在下で、ＦＩＴＣ標識抗ヒトＦｃ ｍＡｂ（ＳＢ２Ｈ２、１０マイクログラム／ｍｌ）を用いて、活性化された脾臓細胞へのｓＣＤ７０−ＩｇＦｃ融合タンパク質（１．１２５マイクログラム／ｍｌ）の結合を、そしてＦＩＴＣ標識抗ヒトＦｃ ｍＡｂ ＳＢ２Ｈ２を用いて、細胞へのｓ４−１ＢＢＬ−Ｉｇ Ｆｃ融合タンパク質（１．１２５マイクログラム／ｍｌ）の結合を検出した。ａおよび１ｂの両方において、塗りつぶしたヒストグラムは、ＳＢ２Ｈ２で検出されたｈＩｇＧの対照を示す。１ｃにおいては、対照ＩｇＧ（抗Ａ３１イディオタイプ）、抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）または抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）ｍＡｂ（各０．５ｍｇ）のいずれかと併用した、ＯＶＡ（５ｍｇ）および抗ＣＤ４０（１ｍｇ）のｉ．ｐ．投与後、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおける内因性Ｏｖａ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を監視した。２４時間後、マウスに対照、抗ＣＤ７０または抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂを反復注射した。６日後、ＡＰＣ標識抗ＣＤ８およびＰＥ標識Ｈ−２ Ｋｂ ＳＩＩＮＦＥＫＬ四量体を用いて、末梢血中のＯＶＡ特異的Ｔ細胞を検出した。
【００７７】
［００８６］実施例２：ＢＣＬ１マウスにおける抗ＣＤ４０の療法活性に対する抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）および抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）の影響。
【００７８】
［００８７］図２に示す本実験において、５匹のマウスの群に、第０日に、１ｘ１０７ＢＣＬ１腫瘍細胞をｉｖ接種し、そして腫瘍後４、５、６および７日目に、抗ＣＤ４０でｉｖ処置した（１日あたり５００マイクログラム）。示すように、群にはまた、第４、７、９および１１日に、抗４−１ＢＢＬおよび／または抗ＣＤ７０も投与した（５００マイクログラム／ｍＡｂ／日、ｉ．ｐ．）。腫瘍発展に関して、マウスを監視した。図４の結果は、３つの類似の実験の１つの結果を示し、そして含有する。
【００７９】
［００８８］実施例３：抗ＣＤ４０ ｍＡｂ療法後のＣＤ８＋ Ｔ細胞の集積およびＢＣＬ１腫瘍根絶に対する、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０の影響。
【００８０】
［００８９］結果が図３に含有される本実験において、マウスの群に、５ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉｖ接種し、そして４日後（図の第０日）、抗ＣＤ４０ ｍＡｂで処置し、その時点で、脾臓におけるＩｄ＋腫瘍細胞レベルは、３〜５％の間であった。示す箇所で、第０、１、および２日、マウスに、抗４−１ＢＢＬおよび／または抗ＣＤ７０ ｍＡｂもまた投与した（５００マイクログラム／ｍＡｂ／日）。示す日に、本明細書の材料および方法に記載するように、フローサイトメトリーによって、脾臓腫瘍およびＣＤ８＋ Ｔ細胞を監視した。図３ａの実験は、脾臓腫瘍細胞総数を示し、そして３ｂは、ＢＣＬ１処置後のＣＤ８＋細胞総数を示す。点は２つ組動物の平均であり、そして結果は４つの類似の実験結果を示す。
【００８１】
［００９０］実施例４：抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）および抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）は、抗ＣＤ４０が誘導する表現型変化、またはＢＣＬ１マウス由来の脾臓ＤＣ数の変化に影響を及ぼさない。
【００８２】
［００９１］図４の実験において、マウスに５ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉｖ接種し、そして４日後（図の第０日）、抗ＣＤ４０（１ｍｇ）ｍＡｂで処置した。示す箇所で、抗ＣＤ４０処置の４時間前、そして１および２日後に再び、マウスに抗４−１ＢＢＬまたは抗ＣＤ７０をｉ．ｐ．投与した（５００マイクログラム／日）。第３日、脾臓ＤＣの総数を図２におけるように分析した。図４の結果は２つ組マウスの平均を示し、そして２つの類似の実験のうちの１つの結果を含有する。
【００８３】
［００９２］実施例５：抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、応答のエフェクター段階を阻害しない。
【００８４】
［００９３］本実験は図５に含有される。図５ａにおいて、マウスに２ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉ．ｐ．注射し、そして４８時間後、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ（１ｍｇ）を注射した。さらに８日後、３匹のマウスの群に、１ｍｇの適切な遮断抗体をｉ．ｐ．注射し、そして次いで、５時間後、ＢＣＬ１腫瘍所持マウス由来の２ｘ１０７ ＣＦＳＥ標識脾臓細胞を注射した。２４時間後、腹腔より細胞を採取し、ＰＥ標識抗ＢＣＬ１ Ｉｄで染色し、そしてフローサイトメトリーによって評価した。ゲーティングされた二重陽性（ＣＦＳＥ＋およびＩｄ＋）細胞は、生存腫瘍細胞に相当する。５ｂ）において、マウスに５ｘ１０７ ＢＣＬ１をｉ．ｖ．接種し、そして４日後、抗ＣＤ４０ ｍＡｂを接種した（１ｍｇ、ｉ．ｖ．）。抗ＣＤ４０の５日後、脾臓リンパ球を調製し、そして材料および方法に記載するように、ＰＥ標識抗ＢＣＬ１ Ｉｄ ｍＡｂおよび抗ＰＥビーズを用いて、残った腫瘍細胞を除去した。残った脾臓細胞（およそ４０％ ＣＤ８＋）をエフェクターとして用いて、そして単独で、あるいは１００マイクログラム／ｍｌの抗ＣＤ４０、抗ＣＤ８、抗４−１ＢＢＬ、または抗ＣＤ７０の存在下で、ターゲットとしての５１Ｃｒ標識ＩＩＢＣＬ１細胞とインキュベーションした。この結果を、ターゲット細胞の特異的溶解パーセントとして示す。
【００８５】
［００９４］実施例６：Ａ３１およびＢＣＬ１リンパ腫に対する抗ＣＤ２７の療法強度
［００９５］図６に示す本実験において、マウスに、２ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉｖ注射し、そして次いで、後に、対照ＩｇＧ、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ、抗ＣＤ２７または抗４−１ＢＢ ｍＡｂ（１ｍｇ）でｉｖ処置した。マウスを毎日２回監視し、そして図中の結果は、２つの類似の実験のうちの１つを示す。特に、４ｘ１０６ＣＤ８＋ ＯＴ−Ｉリンパ球の養子免疫伝達１日後（第０日）、レシピエントＢ６マウスを３０ｍｍｏｌ ＯＶＡペプチド（ＳＩＮＦＥＫＬ、ＯＶＡ ２５７−２６４）でｉｖ免疫した。動物にはまた、組換え可溶性ＣＤ７０または抗マウスＣＤ２７（その調製を次の実施例に示す）または対照ｍＡｂを４回、ｉｖ注射した（第９０、１、２および３日；注射あたり２５０マイクログラム）。ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｖｏで追跡するため、血液試料をＰＥ Ｈ−２ＫＢ ＯＶＡ ２５７−２６４四量体およびＡＰＣ抗ＣＤ８アルファで染色した。ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の拡大は、応答のピーク時、第４日で示される。
【００８６】
［００９６］実施例７：抗マウスＣＤ２７ ｍＡｂ ＡＴ１２４−１の調製
［００９７］マウスＣＤ２７−ｈｕＦｃ分泌ＣＨＯ細胞を調製し、そしてそこからの上清をプロテインＡ上でプロセシングして、融合タンパク質を精製した。標準法にしたがって、ＣＦＡ、ＩＦＣＡ、次いでＰＢＳ中の５０マイクログラム／用量の融合タンパク質でＬｏｕラットを免疫した。最初に融合タンパク質に対して、そして次いで細胞に対して、ハイブリドーマをスクリーニングした。細胞はＣｏｎＡ活性化脾臓細胞、すなわち活性化Ｔ細胞であった。
【００８７】
［００９８］商業的ハムスターＣＤ２７（ＬＧ３Ａ１０（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ））、Ｐ ０４ ２ １１５に比較して、ＡＴ１２４−１（本発明の抗体）は、ＣＤ７０−Ｆｃによって部分的にしか、またはまったく遮断されず（１１０から８０ＭＦＩに減少）、一方、ＬＧ３Ａ１０−ＰＥは遮断されて、１５００から１８０ＭＦＩに減少した。この実験をＰ ０４ ２ １３０で反復して、類似の結果を得た。
【００８８】
［００９９］図７に示すように、本発明のラット抗マウスＣＤ２７（ＡＴ１２４−１）および陽性対照ハムスター抗マウスＣＤ２７（ＬＧ３Ａ１０）はどちらも、マウスＣＤ２７トランスフェクション細胞を標識した。どちらの抗体も非トランスフェクション細胞には結合しなかった。
【００８９】
［００１００］結果
［００１０１］ＢＣＬ１リンパ腫の抗ＣＤ４０処置中の脾臓ＣＤ８ Ｔ細胞およびＤＣの表現型変化
［００１０２］
［００１０３］
［００１０４］抗ＣＤ４０への療法的応答に対する、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用遮断の影響
［００１０５］本発明者らは、腫瘍所持マウスのＣＤ４０ ｍＡｂ処置後に見られる療法的応答への、４−１ＢＢおよびＣＤ２７分子の重要性を調べた。４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０に特異的な遮断性ｍＡｂを用いて、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用破壊の影響を調べた。ＡＴ１１３−２（抗４−１ＢＢＬ）およびＴＡＮ１−６（抗ＣＤ７０）が、それぞれ、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用を破壊可能であることは、これらが、活性化Ｔ細胞へのｓ４−１ＢＢＬ−ＦｃおよびｓＣＤ７０−Ｆｃの結合を遮断することを示すことによって、確認された（図１ａおよびｂ）。さらに、両ｍＡｂは、ＢＩＡＣｏｒｅ分析によって決定されたものと類似のアフィニティーで、ターゲット抗原に結合した。ＡＴ１１３−２（抗４−１ＢＢＬ）およびＴＡＮ１−６（抗ＣＤ７０）のＫＤ値は、それぞれ、３．８ｘ１０−９および３．０ｘ１０−９であった。抗ＣＤ７０および抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂがｉｎ ｖｉｖｏで応答を遮断可能であることを確認するため、本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＯＶＡに対する内因性ＣＤ８応答に対するその影響を調べた（図１ｃ）。先に示されるように（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）、ＣＤ４０が仲介する、内因性ＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の拡大は、抗ＣＤ７０ ｍＡｂによって、ほぼ完全に阻害された。比較すると、抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂは、抗ＣＤ４０が誘導するＯＶＡ特異的Ｔ細胞レベルの５０％の減少を生じた。
【００９０】
［００１０６］本発明者らは、次いで、抗ＣＤ４０ ｍＡｂへのＢＣＬ１腫瘍所持マウスの療法的応答に対する、抗ＣＤ７０および抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂの影響を決定した。マウスに、第０日、１ｘ１０７ ＢＣＬ１腫瘍細胞をｉ．ｖ．接種し、そして腫瘍後４、５、６および７日目に、抗ＣＤ４０で処置した。図２は、本発明者らが先に報告したように（Ｆｒｅｎｃｈ， Ｃｈａｎら １９９９； Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２）、抗ＣＤ４０で処置したＢＣＬ−１所持マウスが、リンパ腫に対して防御され、そして長期生存する（１００日を超えて生存する）ことを示す。しかし、ＣＤ７０ ｍＡｂは、ＣＤ４０ ｍＡｂ処置の療法活性を完全に遮断した。対照的に、遮断性４−１ＢＢＬ ｍＡｂを投与されたマウスは、未処置群が１８日であるのに比較して、中央値７３日間で生存し、そして次いで疾患で死亡し、４−１ＢＢ共刺激の非存在下では、長期免疫の発展に何らかの機能障害が示唆された。本発明者らは、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０の両方を投与されたＣＤ４０ ｍＡｂ処置マウスが、対照未処置動物よりわずかに早く腫瘍で死亡する（中央値生存１７日に比較して１４日）ことを一貫して見出し、この併用が、ＣＤ４０ ｍＡｂ療法活性を遮断し、そしてまた、おそらく腫瘍に対する弱い自発的応答も遮断することを示唆する。
【００９１】
［００１０７］本発明者らは、次に、ＣＤ４０ ｍＡｂ処置に対するＣＤ８応答の動力学に対する抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０ ｍＡｂでの遮断の効果を調べた。図３は、ＣＤ４０ ｍＡｂ処置マウスの脾臓におけるＢＣＬ１増殖（図３ａ）およびＣＤ８ Ｔ細胞応答（図３ｂ）に対する４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０ ｍＡｂの影響を示す。ＣＤ４０ ｍＡｂ単独に比較して、抗４−１ＢＢＬの存在下でのＣＤ４０ ｍＡｂでの処置は、ＣＤ８ Ｔ細胞拡大の約２日間の遅延を生じ、脾臓からの腫瘍細胞のより緩慢なクリアランスを生じた。しかし、遅延していても、ＣＤ８細胞の最終数は、抗ＣＤ４０単独と少なくとも同程度に高かった。興味深いことに、これらの実験において、大部分の免疫療法実験で用いる１ｘ１０７細胞ではなく、初期腫瘍用量が５ｘ１０７細胞である場合、ＣＤ４０ ｍＡｂおよび遮断性４−１ＢＢＬ ｍＡｂで処置したマウスは、長期生存し、そして腫瘍の再曝露に対して免疫ができた（結果は未提示）。
【００９２】
［００１０８］対照的に、抗ＣＤ７０ ｍＡｂは、抗ＣＤ４０が誘導する腫瘍細胞の根絶を完全に遮断した。この応答欠如は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞集団が拡大できないことに反映され、そして図２に示す、ＣＤ４０ ｍＡｂが仲介するＢＣＬ１腫瘍の療法を、ＣＤ７０ ｍＡｂが完全に遮断する能力を説明する。この結果は、抗ＣＤ７０／抗ＣＤ２７相互作用の遮断が、療法的応答に対して顕著な影響を有することを立証する。対照的に、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢ相互作用の影響は比較的穏やかであるようである。
【００９３】
［００１０９］抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０の両方が、ＣＤ４０ ｍＡｂが誘導するＣＤ８応答に影響を有することが観察された（未提示）ため、本発明者らは、これらが、腫瘍所持マウスにおいて、抗ＣＤ４０が誘導するＤＣ数および表現型の変化に何らかの影響を有するかどうかをさらに評価した。図４に示すように、抗４−１ＢＢＬまたは抗ＣＤ７０のいずれも、腫瘍所持マウスの抗ＣＤ４０処置後、Ｂ７．１、Ｂ７．２およびＩＣＡＭの発現増加（ａ）、または回収されるＤＣ数増加（ｂ）を阻害しなかった。したがって、これらの共受容体の遮断は、ＤＣ補充に影響を及ぼさず、そしてその活性化に影響を及ぼす可能性は低い。
【００９４】
［００１１０］ＣＤ２７および４−１ＢＢは、ＣＤ４０ ｍＡｂが仲介する抗腫瘍応答のエフェクター段階で作用しない。本発明者らは、ＢＣＬ１腫瘍細胞自体がＣＤ７０および４−１ＢＢＬの両方を発現することを観察していた（図５ａ）ため、そしてまた、ＣＤ７０が活性化Ｔ細胞によっても発現されると報告されている（ごく最近、Ｓｔｅｖｅ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇによる）ため、本発明者らは次いで、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０がＣＴＬ応答のエフェクター段階に影響を有するかどうかを調べた。腹腔においてＢＣＬ１腫瘍細胞を投与し、そして抗ＣＤ４０ｍＡｂで処置すると、その区画でのＣＤ８応答は、処置８日後にピークとなり、その時点で、回収されるリンパ球のおよそ３０％がＣＤ８＋であり（未処置マウスでは５％）、そして腫瘍を迅速にクリアランスすることが観察された（未公表の観察）。この系を用いて、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＴＬが仲介する殺傷のエフェクター段階を調べた。記載するように、マウスにＢＣＬ１および抗ＣＤ４０ ｍＡｂをｉ．ｐ．投与し、そして次いで８日後、１ｍｇの抗ＣＤ８、抗ＣＤ４、抗ＣＤ７０または抗４−１ＢＢＬ遮断性ｍＡｂ、あるいは対照ＰＢＳとともに抗ＣＤ４０をｉ．ｐ．注射した。５時間後、ＣＴＬターゲットとして、末期ＢＣＬ１所持マウス由来の２ｘ１０７ ＣＦＳＥ標識脾臓細胞をｉ．ｐ．注射した。また、比較として、標識脾臓細胞を未処置マウスに注射した。２４時間後、腹腔細胞を採取し、そしてＣＦＳＥ標識ＢＣＬ１腫瘍細胞の存在に関して分析した。未処置マウスから採取した腹腔細胞には、２２〜２７％のＣＦＳＥ標識腫瘍細胞が含まれた（図５）。対照的に、ＢＣＬ１の抗ＣＤ４０処置を受けたマウスでは、腫瘍細胞が完全に根絶され、この処置の有効性が強調された。予期されるように、抗ＣＤ８ ｍＡｂの注射は、腹腔からのＣＦＳＥ標識腫瘍細胞のクリアランスを遮断した。しかし、抗ＣＤ４、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０は、移入された腫瘍細胞のクリアランスにまったく影響を及ぼさなかった。これらの結果は、抗ＣＤ４０処置の５日後、エフェクターとしての、残った腫瘍細胞を除去した後の、ＢＣＬ１所持マウスから採取した脾臓細胞を用いた細胞毒性アッセイにおいて確認され、そしてこの結果を図５ｃに示す。抗４−１ＢＢＬまたは抗ＣＤ７０はいずれも、免疫脾臓細胞の細胞毒性に直接の影響を持たなかった。
【００９５】
［００１１１］４−１ＢＢおよびＣＤ２７を介した直接免疫療法
［００１１２］上記結果は、腫瘍接種およびＣＤ４０ ｍＡｂ処置後に見られる驚くべきＣＴＬ応答が、４−１ＢＢを介する誘発に部分的に依存し、そしてＣＤ２７およびＣＤ７０間の相互作用に完全に依存することを示唆する。したがって、ＣＤ４０を介したアゴニスト活性をショートカットし、そしてこれらの共受容体を直接刺激することが可能であるかを調べるため、本発明者らは次に、ＢＣＬ１リンパ腫に対する、アゴニスト性抗４−１ＢＢまたは抗ＣＤ２７の療法的有効性を調べる。図６に示すように、抗ＣＤ７０ ｍＡｂは、ＢＣＬ１腫瘍を完全に防御し、そして抗ＣＤ４０ ｍＡｂで得た結果と非常に類似の結果を生じた。対照的に、抗４−１ＢＢ ｍＡｂは、この腫瘍に関して穏やかな療法活性を有し、生存をほとんど延長しなかった。
【００９６】
［００１１３］アゴニスト性ＣＤ４０ ｍＡｂは、ヒトでの使用のため、現在研究中の、最もおもしろい試薬の１つである。しばらく前から、単一療法としてでさえ、ネズミモデルにおける、そしてより最近、患者における、腫瘍免疫の誘導を含めて、ある範囲のワクチンセッティングにおいて、抗ＣＤ４０ ｍＡｂが有効性を有することが知られている。例えば、Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅら（２００６）からの最近のデータは、完全ヒトＣＤ４０ ｍＡｂが、ＭＴＤ近くで投与された場合（０．２ｍｇ／ｋｇ）、黒色腫患者の２７％において、ＰＲを送達可能であることを示した。
【００９７】
［００１１４］ＣＤ４０が、免疫系において、特にＤＣなどのＡＰＣの活性化において、非常に重要な役割を果たすことが知られるが、活性化されたＤＣおよび応答するＣＴＬの間の共受容体：リガンド相互作用の役割に関しては、多くが知られていない。大量の証拠によって、ｍＡｂで送達されるものなどの、ＣＤ４０を介した誘発が、ＤＣを活性化し、ＭＨＣ、Ｂ７．１／２、ならびに多様な共受容体およびサイトカインの上方制御を生じて、エフェクターＣＴＬの生成を可能にすることが示される。さらに、適切なＣＤ４０アゴニストを用いると、Ｔヘルパー細胞に対する必要性が置換されることが一般的に見出されており、そして特定の腫瘍によって発現されるヘルパーエピトープが少量であることを考えると、おそらく、このことが、癌セッティングにおけるＣＤ４０アゴニストの成功を説明する。本発明において、本発明者らは、４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０の役割を調べ、そしてＣＴＬ応答を制御する際に、それぞれの受容体、４−１ＢＢおよびＣＤ２７を介したシグナルがいかに重要であるかを示した。さらに、本発明者らは、ＣＤ４０処置が、顕著なＤＣ拡大を促進し、そして広く報告されているように、脾臓ＤＣ上のＩ−ＣＡＭ−１、Ｂ７．１およびＢ７．２発現の増加が、その活性化または抗原提示の「ライセンシング」と一致することを見出した。ＣＤ４０ ｍＡｂが誘導する抗腫瘍応答が、活性化されたＡＰＣによる腫瘍抗原の交差提示のためであることが一般的に認められる（ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏ， Ｂｏｏｎｍａｎら ２００４）。これと一致して、本発明者らは、先に、ＣＤ４０ ｍＡｂ療法が、ＣＤ４０陰性腫瘍で少なくとも部分的に有効であることを示した（Ｆｒｅｎｃｈ， Ｃｈａｎら １９９９）。腫瘍のみを投与されたマウス由来の脾臓ＤＣは、ある度合いの活性化を示し、Ｂ７．１、Ｂ７．２およびＩＣＡＭ−１が部分的に上方制御されていた。しかし、リンパ腫に対する、ＣＤ４０が誘導する応答に対する、抗ＣＤ７０および抗４−１ＢＢＬ両方の明らかな影響（図２）に鑑みて、幾分驚くべきことに、数多くの試みにもかかわらず、抗ＣＤ４０処置後、ＣＤ７０および４−１ＢＢＬの発現において、わずかでそして一過性の増加しか検出されず、そしてこれらでさえも、腫瘍の存在下で抑止された。興味深いことに、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化されたＤＣ上の４−１ＢＢＬ発現もまた、低いことが示された（ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ， Ｓｈａｈｉｎｉａｎら １９９７； Ｆｕｔａｇａｗａ， Ａｋｉｂａら ２００２）が、Ｄｉｅｈｌら（Ｄｉｅｈｌ， ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏら ２００２）は、ｉｎ ｖｉｖｏで、抗ＣＤ４０に応答して、脾臓細胞上で強い発現があることを示した。
【００９８】
［００１１５］ｉｎ ｖｉｖｏで、脾臓ＤＣ上の４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０の発現が低いのは、これらの２つのリガンドの一過性発現、またはその受容体４−１ＢＢおよびＣＤ２７が結合することによる連続的な調節を反映する可能性もある。興味深いことに、本発明者らは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＢＭＤＣの処置が、ＣＤ７０発現を促進することを見出しており、これはおそらく、ＢＭＤＣがＣＤ２７と出会わないためである。ＣＤ７０発現は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化されたＤＣ上で示されている（Ｆｕｔａｇａｗａ， Ａｋｉｂａら ２００２； Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ｘｉａｏら ２００３）（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００２； ＢｕｌｌｏｃｋおよびＹａｇｉｔａ ２００５）が、ＤＣ上のＣＤ７０のｉｎ ｖｉｖｏ発現は、一般的に低く、そして一過性であり（Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ｘｉａｏら ２００３； Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００５）、これはおそらく、恒常的に発現されるＣＤ２７を介したＴ細胞の不適切な活性化を回避するためである（Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ａｒｅｎｓら ２００３）。
【００９９】
［００１１６］ＣＤ７０発現のこの欠如にもかかわらず、４−１ＢＢＬまたはＣＤ７０に対するｍＡｂは、抗腫瘍応答を遮断するのに有効であり、そして後者の場合、阻害は不完全であった。これらの遮断性ｍＡｂは細胞毒性Ｔ細胞の生成を防止するが、脾臓ＤＣの数または活性化には影響がなく、あるいはひとたび生成されたならばＣＤ８ Ｔ細胞の細胞毒性機能にも影響がないため、こうした遮断は、ＣＴＬ刺激レベルで作動するようである。総合すると、これらの研究は、４−１ＢＢおよび特にＣＤ２７が、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ処置中のＣＴＬ応答を制御する際に、非常に重要であり、これはＤＣおよび応答性ＣＤ８ Ｔ細胞間の相互作用のレベルで作用する可能性が最も高いことを示す。
【０１００】
［００１１７］ＣＤ４０が誘導する抗リンパ腫応答の発展中のＣＤ８ Ｔ細胞上の４−１ＢＢの発現は、確立されたパターンと一致し（ＶｉｎａｙおよびＫｗｏｎ １９９８； Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ｍｉｔｔｌｅｒら １９９９）、４−１ＢＢは、拡大するＣＤ４０誘導性脾臓ＣＴＬ集団上で迅速に誘導され（図１）、そして次いで、腫瘍細胞根絶と同時に失われたが、これはＣＴＬ集団が１〜２日後に収縮するより前であった（Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２）。応答中、４日間に渡って４−１ＢＢの発現が維持され、これはおそらく、連続して抗原が利用可能であるためであり、このことは、持続性感染および移植片拒絶中に見られるものと似ている（Ｔａｎ， Ｈａら ２０００； Ｓｅｏ， Ｐａｒｋら ２００３）。疾患の末期段階の未処置マウスにおいて、本発明者らは、４−１ＢＢ＋ＣＤ８ Ｔ細胞の明らかな集団を同定し、このことは、ＢＣＬ１単独で、弱い、効果のないＴ細胞応答を誘発可能であり、これが次いで、ＣＤ４０ ｍＡｂでの処置によって、有効なレベルにブーストされるという着想を支持する。
【０１０１】
［００１１８］４−１ＢＢがＴ細胞上で誘導され、そしてこれがＴ細胞増殖のための共刺激を提供するという証拠がある（２０）が、４−１ＢＢは、抗アポトーシスタンパク質の発現を誘導することによって（Ｌｅｅ， Ｐａｒｋら ２００２）、細胞生存に主に影響を及ぼすと考えられる（Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ｍｉｔｔｌｅｒら １９９９； Ｌｅｅ， Ｐａｒｋら ２００２）。４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ相互作用の遮断は、移植片生存増進を生じることが示されており、同種反応性Ｔ細胞の拡大の阻害およびＣＴＬ活性の減少が伴う、同種移植片状況で、ＣＴＬ応答の発展における４−１ＢＢの重要性が立証されている（Ｃｈｏ， Ｋｗｏｎら ２００４）が、４−１ＢＢ−／−および４−１ＢＢＬ−／−マウスにおける研究は、ウイルス感染に対する一次ＣＴＬ応答の比較的重要でない機能障害しか示さず（Ｔａｎ， Ｗｈｉｔｍｉｒｅら ２０００； Ｂｅｒｔｒａｍ， Ｄａｗｉｃｋｉら ２００４）、再曝露後のリコール応答に対してより顕著な影響があった（ＤａｗｉｃｋｉおよびＷａｔｔｓ ２００４）。重要なことに、ｉｎ ｖｉｖｏでのアゴニスト性抗４−１ＢＢ ｍＡｂを用いた研究は、これらが、ほとんど免疫原性でない腫瘍モデルのある範囲で、有効な療法を促進可能であり（Ｗｉｌｃｏｘ， Ｆｌｉｅｓら ２００２）、そして４−１ＢＢシグナル伝達が、主にＣＤ８応答中に重要である（Ｓｈｕｆｏｒｄ， Ｋｌｕｓｓｍａｎら １９９７）ことを示した。
【０１０２】
［００１１９］４−１ＢＢとは対照的に、ＣＤ２７は、未処置Ｔ細胞上で恒常的に発現される（Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ， Ｂｌｏｍら １９９３）。腫瘍の抗ＣＤ４０処置後、本発明者らは、拡大している脾臓ＣＤ８＋細胞において、ＣＤ２７高および低集団（図１ｃ）を検出可能であり、これはおそらく、それぞれ、ＣＤ２７の一過性上方制御でプライミングされた細胞（Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ， Ｂｌｏｍら １９９３； Ｌｅｎｓ， ｄｅ Ｊｏｎｇら １９９６）およびＫａｅｃｈら（Ｋａｅｃｈ， Ｔａｎら ２００３）に記載されるような老化末期エフェクター集団に相当する。ＤＣ上のリガンド、ＣＤ７０の発現は厳しく制御され、したがって、Ｔ細胞の不適切な活性化を防止する（Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ａｒｅｎｓら ２００３）。しかし、最近、ＣＤ７０によるＣＤ２７の恒常的な誘発が、ウイルスまたは腫瘍曝露に応答したＣＤ８＋細胞の拡大および活性の両方を増進することが示された（Ａｒｅｎｓ， Ｓｃｈｅｐｅｒｓら ２００４）。本発明者らは、最近、可溶性ＣＤ７０が、ｉｎ ｖｉｖｏで、強い一次および二次ＣＴＬ応答を促進することを示した（ＲｏｗｌｅｙおよびＡｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ ２００４）。逆に、ＣＤ２７不全マウスは、インフルエンザウイルスに対して、ＣＤ８＋応答機能障害を発展させ、そして４−１ＢＢ同様、ＣＤ２７は、一次応答中、活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の生存を促進するようである（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎら ２０００； Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００３）が、４−１ＢＢとは異なり、ＣＤ４＋応答においても重要であるようである。ＣＤ２７不全マウスはまた、再曝露に対して、損なわれた応答を示す（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎら ２０００）。
【０１０３】
［００１２０］Ｔ細胞拡大が、ＤＣ上のリガンドおよびＴ細胞上の共刺激受容体間の共刺激を必要とするというよく確立された着想に加えて、他の細胞種上にこれらの分子が検出されることから、Ｔ細胞応答中の相互作用のより複雑なネットワークに関する役割が示唆される。例えば、ＣＤ７０は活性化されたＴ細胞上に検出され（Ｂｏｒｓｔ， Ｈｅｎｄｒｉｋｓら ２００５； Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００５）、そして４−１ＢＢは、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏの両方で、活性化されたＤＣ上で検出されている。本発明者らは、本発明者らの研究において、活性化されたＴ細胞上でＣＤ７０を検出不能であったが、応答経過中、活性化されたＤＣ上で、４−１ＢＢが明らかに検出された（結果は未提示）。
【０１０４】
［００１２１］最後に、本発明者らは、マウスリンパ腫の療法剤としてアゴニスト性ＣＤ２７ ｍＡｂを用いるＣＤ７０を介した誘発の相対的な重要性を確認した。本明細書のデータは、腫瘍免疫を発展させる際に、ＣＤ２７ ｍＡｂが、ＣＤ４０ ｍＡｂと同程度に有効であることを示す。進行中の研究では、おそらくＴ細胞を直接刺激することによって作用する、このｍＡｂの作用機構を調べている。ＯＶＡおよびＢＣＬ１リンパ腫モデルの両方において、抗ＣＤ４０が誘導するＣＤ８ Ｔ細胞応答が、ＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用に完全に依存していることは、ウイルスモデルを用いた研究におけるＣＤ７０：ＣＤ２７共刺激経路の報告される効果と一致する。ＣＴＬ応答の発展における４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ相互作用の重要性は、４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ相互作用の遮断が移植片生存増進を生じる、同種移植状況において立証されている（ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ， Ｗｅｎら １９９９； Ｃｈｏ， Ｋｗｏｎら ２００４）が、４−１ＢＢ−／−および４−１ＢＢＬ−／−マウスにおける研究は、ＬＣＭＶおよびインフルエンザ感染に対する一次ＣＴＬ応答の比較的重要でない機能障害しか示さなかった（Ｂｅｒｔｒａｍ， Ｄａｗｉｃｋｉら ２００４）（Ｔａｎ， Ｗｈｉｔｍｉｒｅら １９９９）（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００５）。４−１ＢＢＬ−／−マウスが、脂質化ＬＣＭＶペプチドでの免疫後、応答により重度の欠損を示したことが観察され（Ｔａｎ， Ｗｈｉｔｍｉｒｅら ２０００）、このことは、抗原性刺激が弱いかまたは限定されている場合は、４−１ＢＢ共刺激がより重要であることを示唆した。対照的に、ＣＤ２７不全マウスは、肺および流入領域リンパ節において、インフルエンザウイルスに対して損なわれたＣＤ８＋応答を発展させるが、興味深いことに、この系において、脾臓における抗ウイルスＣＤ８細胞拡大は、比較的影響を受けなかった（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００３）。４−１ＢＢおよびＣＤ２７の両方が不全であるマウスは、ウイルス再曝露に対する二次応答の機能障害を示すことが示された（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎら ２０００）（ＤａｗｉｃｋｉおよびＷａｔｔｓ ２００４）。本発明者らの実験は、抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂの存在が、抗ＣＤ４０処置後の腫瘍の最初のクリアランスを防止しないことを示したが、本発明者らの免疫療法実験において、抗ＣＤ４０および抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂを投与された動物は、長期生存せず（図２）、このことは、長期免疫発展において、何らかの機能障害があることを示唆する。要約すると、上に列挙されるこれらの結果、およびこれに基づく根底にある結論は、アゴニスト性ＣＤ２７抗体、例えば相乗的アゴニスト併用を用いた単一および併用療法が、Ｔｈ１免疫およびＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖の新規手段を提供し、そしてこれを、癌、感染、炎症、アレルギーおよび自己免疫の治療に、そしてワクチンの有効性を促進するために使用可能であることを示唆する。
【０１０５】
［００１２２］本発明は、上記に列挙される態様に限定されず、そして例示する態様、および以下の請求の範囲内に含まれるすべての修飾に対して、権利が確保されることが理解されるものとする。
【０１０６】
［００１２３］本明細書に引用する学術雑誌、特許、および他の刊行物への多様な言及は、当該技術分野の最新技術を含み、そしてこれらは、完全に示されるかのように、本明細書に援用される。
【０１０７】
【化１−１】
【０１０８】
【化１−２】
【０１０９】
【化１−３】
【０１１０】
【化１−４】
【０１１１】
【化１−５】
【技術分野】
【０００１】
［０００１］本発明は、一般的に、必要がある被験体、例えば癌、感染、自己免疫疾患、アレルギーまたは炎症性障害を伴う被験体、あるいはワクチンを投与されている被験体における、Ｔ細胞免疫を促進するためのアジュバントとしてのＣＤ２７アゴニスト、好ましくはＣＤ２７アゴニスト性抗体の使用に関する。最も好ましくは、ＣＤ２７アゴニストは、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）ヒト、ヒト化、もしくはキメラ抗体またはその断片であるか、あるいはヒトＣＤ２７に特異的に結合するｓｃＦｖなどの一本鎖抗体を含んでもよい。あるいは、アゴニストは、宿主エフェクター系との相互作用を増進するかまたは減少させるか、あるいは副作用を減少させるように修飾されている、操作された抗体を含んでもよい。いくつかの好ましい態様において、免疫細胞へのこれらのアゴニスト性抗ＣＤ７０抗体の結合は、ＣＤ７０または関連リガンドによって遮断されないであろう。
【０００２】
［０００２］さらに、本発明は、Ｔ細胞免疫応答増進を誘発する必要がある被験体において、Ｔ細胞免疫応答増進を誘発するための新規アジュバント併用、好ましくは相乗的併用であって、（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、および（ｉｉ）別の免疫刺激剤または免疫調節剤、例えばＣＤ４０抗体、ＣＤ２８抗体、ＯＸ４０抗体、４−１ＢＢ抗体、抗ＣＴＬＡ−４、ＴＬＲ（ｔｏｌｌ様受容体）アゴニスト、または制御性Ｔ細胞を枯渇させる部分、あるいはインターロイキン、例えばＩＬ−２、またはインターフェロン（ベータ、ベータ、ガンマ等）などのサイトカインを含む、前記併用を提供する。同様に、これらのアジュバント併用は、癌、感染性疾患、アレルギー、自己免疫、炎症性障害などの、Ｔ細胞免疫増進が療法的に望ましい状態を治療する際に、そしてワクチンの有効性を増進するのに有用である。
【０００３】
［０００３］免疫細胞への結合が好ましい、ＣＤ２７アゴニスト、好ましくはアゴニスト性ＣＤ２７抗体の投与を伴う、本単一療法は、ＣＤ７０によって遮断されず、そしてＣＤ２７アゴニスト、および別の免疫調節剤または療法剤などの別の部分の投与を伴う併用療法は、ｉｎ ｖｉｖｏでＣＴＬ免疫およびＴ細胞増殖および生存を増進する際に有用である。以下により詳細に論じるように、本発明は、ＣＤ２７：ＣＤ７０相互作用が、ＣＤ４０抗体のアゴニスト性活性に必要であるという、本発明者らの驚くべき観察に少なくとも部分的に基づく（抗ＣＤ７０ ｍＡｂは、アゴニスト性ＣＤ４０の活性を完全に遮断し、これは、ＣＤ２７：ＣＤ７０相互作用が、ＣＤ４０誘発に必要な「下流」であることを示す）。この観察によって、療法アジュバントとしての、そして抗原特異的Ｔ細胞、特にＣＤ８＋ Ｔ細胞、すなわちエフェクターおよびメモリーＣＤ８＋エフェクター細胞の拡大を活性化し、そして誘導するための、ＣＤ２７アゴニスト性抗体の療法的潜在能力が示唆された。本出願者らは、これらの仮説に束縛されることを望まないが、Ｔ細胞に対する本抗ＣＤ２７抗体のアゴニスト特性が、少なくとも部分的に、こうした抗体の結合がＣＤ７０によって遮断不能であるという事実に起因しうると理論づけられる。しかし、本発明はそれに限定されず、そしてＴ細胞免疫に対してアゴニスト効果を有するいかなる抗ＣＤ２７アゴニスト性抗体あるいはそのコンジュゲートまたは断片の使用も含む。以下に詳細に記載するように、本単一および併用療法は、抗原特異的ＣＴＬ免疫応答の増進が療法的に望ましい、リンパ腫および他の癌または感染状態を伴うヒトまたは他の哺乳動物を治療する際に、特に有用である。
【０００４】
［０００４］記載するように、ＣＤ２７アゴニストを単独で、あるいは他の免疫アジュバントまたは免疫刺激剤または免疫調節剤などの他の療法部分と組み合わせて、癌ペプチドなどの適切な抗原を伴いまたは伴わずに、投与可能である。例えば、１つの態様において、ＣＤ２７アゴニストを、ＣＤ４０アゴニスト性抗体に付随して投与してもよい。本発明のこの態様において、ＣＤ４０アゴニストは、本明細書においてＬＯＢ７／４と称されるキメラアゴニスト性抗ヒトＣＤ４０抗体またはそのヒト化変異体を含んでもよい。このキメラ抗体は、ＣＤ４０を発現しているある範囲の腫瘍に対する強力な抗腫瘍効果を誘発し、そして細胞性免疫を増強することが、本発明者らによって示されている。これらの結果に基づいて、癌（ＣＤ４０陽性および陰性）、特に固形腫瘍を含む、多様な慢性疾患を治療するための、免疫アジュバントまたは療法剤としての、このキメラ抗体およびその変異体、例えばそのヒトまたはヒト化型の使用、ならびに感染性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性および炎症性疾患を治療するための免疫アジュバントとしての使用は、本明細書の本発明者のうちの何人かによる、先の特許出願に解説されている。
【０００５】
［０００５］本発明の好ましい態様において、本ＣＤ２７アゴニストは、癌、感染性疾患、自己免疫障害、アレルギー性障害、または炎症性障害を治療するため、単独で、または抗原とともに用いられるか、あるいはワクチンまたは他の療法剤もしくは免疫療法剤、例えばＣＤ４０、ＯＸ４０、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、もしくは４−１ＢＢに対する抗体；ＴＬＲアゴニスト；制御性Ｔ細胞を枯渇させる部分；サイトカイン；抗血管生成剤；または化学療法剤と組み合わせて投与される。本出願全体で、併用療法に言及する際、アゴニスト性抗体などのそれぞれの部分を、別個に、または例えば同じもしくは異なる組成物中で併用して、投与してもよく、そしてそれぞれの部分の投与は、いかなる順で達成してもよいことを理解すべきである。また、これらの併用および単一療法は、特定の疾患または状態を治療する際に有用なさらなる部分の投与を含むよう意図される。
【背景技術】
【０００６】
［０００６］防御免疫の生成は、抗原への曝露だけでなく、抗原に出会う背景にも依存することが、現在、広く認識されている。非炎症背景における、宿主への新規抗原の導入が、長期免疫でなく免疫寛容を生じる一方、炎症剤（アジュバント）の存在下での抗原への曝露が免疫を誘導する、多くの例が存在する（Ｍｏｎｄｉｎｏら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９３：２２４５（１９９６）； Ｐｕｌｅｎｄｒａｎら， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８８：２０７５（１９９８）； Ｊｅｎｋｉｎｓら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：４４３（１９９４）；およびＫｅａｒｎｅｙら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：３２７（１９９４））。これは、寛容および免疫の間の相違を意味しうるため、抗原提示に適した免疫原性背景を生成する際に関与する分子経路を刺激する、感染性病原体内に存在する「アジュバント」を発見するために多くの努力がなされてきた。
【０００７】
［０００７］ＣＤ２７は、Ｉ型およびＩＩ型ＴＮＦＲ（ＣＤ１２０ａおよびｂ）、神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ）、ＣＤ３０、Ｆａｓ／Ａｐｏ−１（ＣＤ９５）、ＣＤ４０、４−１ＢＢおよびＯＸ４０も含む、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。これらのタンパク質は、細胞増殖、生存、および分化、ならびにアポトーシスまたはプログラム細胞死において重要な役割を果たすことが知られる。これらのファミリーメンバー間の相同性は、細胞外領域に限定され、そしてＣＤ２７中に３回存在するシステイン・ノット・モチーフの存在によって特徴付けられる（ＭｃＤｏｎａｌｄら， Ｃｅｌｌ ７３：４１２１−４２４（１９９３））。
【０００８】
［０００８］ＣＤ２７は、約５５キロダルトンのグリコシル化されたＩ型膜貫通タンパク質であり、そして２つの単量体を連結するジスルフィド架橋を持つホモ二量体として存在する。ジスルフィド架橋は、膜に近い細胞外ドメインに存在する（Ｃａｍｅｒｉｎｉら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：３１６５−６９（１９９１））。ＣＤ２７のリガンド、ＣＤ７０は、リガンドのＴＮＦファミリーに属する。ＣＤ７０は、５０ｋｄの見かけの分子量を持つＩＩ型膜貫通タンパク質である（Ｇｏｏｄｗｉｎら， Ｃｅｌｌ ７３：４４７−４５６（１９９３））。ＴＮＦアルファおよびベータに対する相同性に基づいて、ＣＤ７０は、３つのＣＤ２７ホモ二量体と相互作用する、３つの同一のサブユニットで構成される、三量体構造を有すると予測された（Ｐｅｉｔｓｃｈら， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５２：１７５６−１７６１（１９９４））。やはりＩＩ型膜貫通タンパク質であるＴＮＦアルファは、タンパク質分解的切断によって細胞から放出される一方、ＴＮＦベータおよびＮＧＦは分泌される。
【０００９】
［０００９］ＣＤ２７およびそのリガンドＣＤ７０は、ＴおよびＢ細胞の別個の集団上で発現される。ＣＤ２７は、休止Ｔ細胞上で発現され、そしてＣＤ７０は、活性化されたＴおよびＢ細胞、ならびに樹状細胞上で発現される。Ｔ細胞サブセット内で、ＣＤ２７は、活性化後であってもＣＤ４５ＲＡ＋細胞上で安定して発現される一方、ＣＤ４５ＲＯ＋細胞上では弱く発現され、そして活性化後には失われる（Ｓｕｇｉｔａら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４９：３２０８−３２１６（１９９２）； Ｈｉｎｔｚｅｎら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２４２６−２４５３（１９９３））。ＣＤ４５ＲＡ＋細胞上で、多様な手段による活性化は、ＣＤ２７発現の上方制御を生じる（Ｈｉｎｔｚｅｎら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２４２６−２４５３（１９９３））。ＣＤ２７は、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫およびＢ細胞慢性リンパ球性白血病の大部分で高発現される（Ｒａｎｈｅｉｍら， Ｂｌｏｏｄ ８５：３５５６−３５６５）。Ｂ細胞株ＲａｍｏｓおよびＲａｊｉもまた、有意なレベルのＣＤ２７およびＣＤ７０を発現する。
【００１０】
［００１０］最適以下の用量のＰＭＡ、ＰＨＡ、抗ＣＤ２または抗ＣＤ３抗体でのＴ細胞の処置を伴う、ＣＤ２７の連結はまた、Ｔ細胞増殖を生じることが知られており、したがってＣＤ２７の共刺激上の役割が明示されている。ＣＤ２７が仲介する共刺激効果が、抗ＣＤ２７抗体、あるいは組換え可溶性ＣＤ２７または抗ＣＤ７０抗体を用いて、特異的に阻害可能であり、そしてリガンドであるＣＤ７０を介したＣＤ２７の連結が、細胞溶解性Ｔ細胞を生じうることもまた報告されている（Ｇｏｏｄｗｉｎら， Ｃｅｌｌ ７３：４４７−４５６（１９９３））。
【００１１】
［００１１］獲得免疫を制御することが知られる別の共刺激分子はＣＤ４０である。ＣＤ４０は、ＴＮＦ受容体スーパーファミリーのメンバーであり、そしてある範囲の細胞仲介性免疫応答に必須であり、そしてＴ細胞依存性体液性免疫の発展に必要である（Ａｒｕｆｆｏら， Ｃｅｌｌ ７２：２９１（１９９３）； Ｆａｒｒｉｎｇｔｏｎら， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９１ ：１０９９（１９９４）； Ｒｅｎｓｈａｗら， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８０：１８８９（１９９４））。天然の役割において、ＣＤ４＋ Ｔ細胞上に発現したＣＤ４０リガンドは、ＤＣまたはＢ細胞上に発現したＣＤ４０と相互作用し、ＡＰＣの活性化増加、および同時に、Ｔ細胞のさらなる活性化を促進する（Ｌｉｕら Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：２３５（１９９４）； Ｂｉｓｈｏｐら， Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ １４：２９７（２００３））。ＤＣに関しては、ＣＤ４０連結は、古典的には、活性化マーカー上方制御および炎症性サイトカイン産生などの、ＴＬＲを通じた刺激に似た応答を導く（Ｑｕｅｚａｄａら Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：３０７（２００４）； Ｏ'Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＢおよびＴｈｏｍａｓ Ｒ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：８３（２００３））。ＣＤ８応答におけるその重要性は、ＣＤ４０を通じたＡＰＣの刺激が、ＣＤ４細胞の非存在下でのＣＤ４依存性ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答をレスキューすることを示す研究によって立証された（Ｌｅｆｒａｎｃｏｉｓら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６４：７２５（２０００）； Ｂｅｎｎｅｔｔら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７８（１９９８）； Ｒｉｄｇｅら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７４（１９９８）； Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７４（１９９８））。この発見は、いくつかの疾患セッティングにおいて、ＣＤ４０アゴニストが単独で、不全ＣＤ８＋ Ｔ細胞応答を潜在的にレスキュー可能であるという多くの推測を刺激した（Ｆｒｅｎｃｈら， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９９９）。
【００１２】
［００１２］しかし、他の研究によって、ＣＤ４０刺激のみでは、長期免疫を促進するには不十分であることが立証された。いくつかのモデル系において、抗ＣＤ４０処置のみでは、長期免疫を促進するには不十分であり、すなわち無効な炎症性サイトカイン産生とともに、抗原特異的Ｔ細胞の枯渇（Ｍａｕｒｉら Ｎａｔ Ｍｅｄ ６：６７３（２００１）； Ｋｅｄｌら Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９８：１０８１１（２００１））およびＢ細胞応答の終結（Ｅｒｉｃｋｓｏｎら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０９：６１３（２００２））が生じた。また、可溶性三量体化ＣＤ４０リガンドが、ＣＤ４０経路のアゴニストとして病院で用いられており、そしてほとんど報告がないことは、ＣＤ４０単独での刺激が、長期ＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫に必要なすべてのシグナルを再構成することは出来ないという結論と一致する（Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９：３２８０ （２００１））。
【００１３】
［００１３］ＣＤ４０に特異的なアゴニスト性およびアンタゴニスト性抗体の両方が、ヒト療法剤としての潜在能力を有することが示唆されてきている。アンタゴニスト性抗ＣＤ４０抗体には、（１）ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用を少なくとも９０％遮断し、そして抗新生物特性を有すると言われるもの（Ａｒｍｉｔａｇｅら、米国特許第５６７４４９２号； Ｆａｎｓｌｏｗら， １９９５， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ Ｖ Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎら監修， １：５５５−５５６）；（２）ＣＤ４０を通じたシグナル伝達をアンタゴナイズするもの（ｄｅＢｏｅｒら、米国特許第５６７７１６５号）および（３）ＣＤ４０を通じて刺激性シグナルを送達するが、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ間の相互作用を増加させないもの、例えばＧ２８−５（Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、米国特許第５１８２３６８号； ＰＣＴ ＷＯ ９６／１８４１３）が含まれる。
【００１４】
［００１４］アゴニスト性抗ＣＤ４０抗体は、いくつかのグループによって報告されている。例えば、１つのｍＡｂ、ＣＤ４０．４（５Ｃ３）（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ、カリフォルニア州サンディエゴ）は、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ間の相互作用をおよそ３０〜４０％増加させると報告されている（Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎら監修， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ， １９９５， １：５４７−５５６）。さらに、米国特許第６８４３９８９号において、Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓは、抗ヒトＣＤ４０抗体を用いて、ヒトにおいて癌を治療する方法を提供すると主張する。これらの抗体は、刺激性シグナルを送達して、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ間の相互作用を少なくとも４５％増進し、そしてＣＤ４０Ｌ仲介性刺激を増進し、そしてｉｎ ｖｉｖｏ新生物活性を所持すると主張される。Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ特許に開示される典型的な抗体は、Ｂリンパ球に強い増殖促進性シグナルを送達することが以前示されたアゴニスト性抗ヒトＣＤ４０抗体である、Ｓ２Ｃ６に由来した（Ｐａｕｌｉｅら， １９８９， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４２：５９０−５９５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１５】
【特許文献１】Ａｒｍｉｔａｇｅら、米国特許第５６７４４９２号
【特許文献２】ｄｅＢｏｅｒら、米国特許第５６７７１６５号
【特許文献３】Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒら、米国特許第５１８２３６８号
【特許文献４】ＰＣＴ ＷＯ ９６／１８４１３
【特許文献５】米国特許第６８４３９８９号
【非特許文献】
【００１６】
【非特許文献１】Ｍｏｎｄｉｎｏら， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９３：２２４５（１９９６）
【非特許文献２】Ｐｕｌｅｎｄｒａｎら， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ． １８８：２０７５（１９９８）
【非特許文献３】Ｊｅｎｋｉｎｓら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：４４３（１９９４）
【非特許文献４】Ｋｅａｒｎｅｙら， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １：３２７（１９９４）
【非特許文献５】ＭｃＤｏｎａｌｄら， Ｃｅｌｌ ７３：４１２１−４２４（１９９３）
【非特許文献６】Ｃａｍｅｒｉｎｉら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４７：３１６５−６９（１９９１）
【非特許文献７】Ｇｏｏｄｗｉｎら， Ｃｅｌｌ ７３：４４７−４５６（１９９３）
【非特許文献８】Ｐｅｉｔｓｃｈら， Ｍｏｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５２：１７５６−１７６１（１９９４）
【非特許文献９】Ｓｕｇｉｔａら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４９：３２０８−３２１６（１９９２）
【非特許文献１０】Ｈｉｎｔｚｅｎら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５１：２４２６−２４５３（１９９３）
【非特許文献１１】Ｒａｎｈｅｉｍら， Ｂｌｏｏｄ ８５：３５５６−３５６５
【非特許文献１２】Ａｒｕｆｆｏら， Ｃｅｌｌ ７２：２９１（１９９３）
【非特許文献１３】Ｆａｒｒｉｎｇｔｏｎら， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ ＳｃＬ， ＵＳＡ ９１ ：１０９９（１９９４）
【非特許文献１４】Ｒｅｎｓｈａｗら， Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １８０：１８８９（１９９４）
【非特許文献１５】Ｌｉｕら Ｓｅｍｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：２３５（１９９４）
【非特許文献１６】Ｂｉｓｈｏｐら， Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ １４：２９７（２００３）
【非特許文献１７】Ｑｕｅｚａｄａら Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：３０７（２００４）
【非特許文献１８】Ｏ'Ｓｕｌｌｉｖａｎ ＢおよびＴｈｏｍａｓ Ｒ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２２：８３（２００３）
【非特許文献１９】Ｌｅｆｒａｎｃｏｉｓら， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １６４：７２５（２０００）
【非特許文献２０】Ｂｅｎｎｅｔｔら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７８（１９９８）
【非特許文献２１】Ｒｉｄｇｅら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７４（１９９８）
【非特許文献２２】Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒら， Ｎａｔｕｒｅ ３９３：４７４（１９９８）
【非特許文献２３】Ｆｒｅｎｃｈら， Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １９９９
【非特許文献２４】Ｍａｕｒｉら Ｎａｔ Ｍｅｄ ６：６７３（２００１）
【非特許文献２５】Ｋｅｄｌら Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．， ＵＳＡ ９８：１０８１１（２００１）
【非特許文献２６】Ｅｒｉｃｋｓｏｎら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０９：６１３（２００２）
【非特許文献２７】Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅら， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ １９：３２８０ （２００１）
【非特許文献２８】Ｆａｎｓｌｏｗら， １９９５， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ Ｖ Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎら監修， １：５５５−５５６
【非特許文献２９】Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎら監修， Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｔｙｐｉｎｇ， １９９５， １：５４７−５５６
【非特許文献３０】Ｐａｕｌｉｅら， １９８９， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４２：５９０−５９５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
［００１５］しかし、これらの先の報告にもかかわらず、Ｔｈ１免疫を促進し、そして抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞、すなわちＣＤ８＋エフェクターおよびメモリー細胞の活性化および拡大を増進するアジュバントを用いた、改善法およびヒト療法が必要である。特に、安全であり、そして有効である、すなわち望ましくない副作用を誘発しないが、実質的な療法効果、例えば抗腫瘍効果を誘発する、療法アジュバントを用いて、ヒト癌および他の疾患を治療する改善法が必要である。本発明はこの必要性を満たし、そして他の利点もまた提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
［００１６］本発明は、ＣＤ２７アゴニスト、例えばアゴニスト性ＣＤ２７抗体を、単独で、あるいは別の療法剤、例えば別の免疫刺激剤または免疫調節剤、例えばアゴニスト性ＣＤ４０抗体、可溶性ＣＤ４０Ｌ、４−１ＢＢ：４−１ＢＢＬアゴニスト、ＯＸ４０アゴニスト、ＴＬＲアゴニスト、制御性Ｔ細胞を枯渇させる部分、またはインターロイキンもしくはインターフェロンなどのサイトカインと組み合わせて用いる新規ヒト治療法を提供する。上述のように、好ましい態様において、免疫細胞へのこれらのＣＤ２７アゴニスト性抗体の結合は、ＣＤ７０によって遮断されず、これは、このことがＴ細胞に対するこれらの抗体のアゴニスト活性に有益な効果を有しうるためである。これらの併用は、通常、ワクチンと一緒に、タンパク質、ペプチド、免疫原性細胞またはＤＮＡの形で使用されるであろう。以下の結果は、ＣＤ２７の共刺激を遮断すると、４−１ＢＢ共刺激を遮断するよりもはるかに高く、アゴニスト性抗ＣＤ４０抗体によって誘発される抗腫瘍免疫に対する広範囲の影響があり、そしてこれは、ＣＤ２７−ＣＤ７０遮断中のＣＤ８＋ Ｔ細胞拡大における重度の機能障害の結果であるようであることを示す。これらの結果は、ＣＤ２７アゴニスト、例えばアゴニスト抗ＣＤ２７抗体を、ＣＤ８＋ Ｔ細胞拡大を促進するための療法的アジュバントとして、そして癌、感染性障害、自己免疫、アレルギー性障害、および炎症性障害などの、これが療法的に望ましい状態を治療する際に、使用可能であることを示唆する。また、これは、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫を促進するため、ＣＤ２７アゴニスト、例えばＣＤ２７アゴニスト性抗体を、抗原またはワクチンに付随して投与してもよいことを示唆する。特に好ましい態様において、ＣＤ２７アゴニストを用いて、リンパ腫または以下に同定する他の癌などの癌を治療する。
【００１９】
［００１７］抗ＣＤ４０モノクローナル抗体がヒトおよびげっ歯類において腫瘍に対する免疫応答を生じる機構は完全には理解されていないが、樹状細胞の刺激を通じて、ＣＴＬ応答をブーストし、そしてＣＤ４ヘルパー細胞に対する必要性を回避するレベルまで働くようである。本明細書において、アゴニスト性ＣＤ４０モノクローナル抗体は、拡大しているＣＤ８細胞上の４−１ＢＢの強い発現を促進し、それとともに、エフェクターＣＴＬが生成されるにつれて、ＣＤ２７が中程度に喪失されることが示される。興味深いことに、ＣＤ４０ ｍＡｂ処置は、腫瘍所持マウスにおいて、樹状細胞の顕著な活性化を引き起こす一方、それぞれ４−１ＢＢおよびＣＤ２７のリガンドである、４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０の発現は、比較的弱くそして一過性であった。ＣＤ７０の相互作用を遮断するｍＡｂ（ＡＴ１１３−２：抗４−１ＢＢＬ、およびＴＡＮ１−６：抗ＣＤ７０）がＣＤ４０ ｍＡｂ処置の療法的有効性を遮断することを示すことによって、この発現の欠如にもかかわらず、これらの関与が確立された。同様に、これらは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのいずれでも、腫瘍特異的ＣＴＬ細胞の細胞毒性活性に影響を及ぼさなかった。これらに基づいて、本発明者らは、４−１ＢＢ：４−１ＢＢＬ、および特にＣＤ２７：ＣＤ７０相互作用は、ＣＤ４０アゴニスト性抗体の活性を説明する際に極めて重要であり、そしてこれらの抗体は、ＣＤ８ Ｔ細胞増殖および生存を誘発することによって作用すると結論づけた。さらに、本発明者らは、本明細書において、はじめて、アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体が、リンパ腫所持マウス（Ａ３１およびＢＣＬ１）を防御する際に、それ自体、非常に有効であることを示し、これは、ＣＴＬがＤＣより遅い段階で生じる可能性があり、そしてアゴニスト性ＣＤ２７抗体を用いて、細胞性免疫増進が必要な癌および他の疾患を治療可能であることを示す。重要なことに、この抗ＣＤ２７ ｍＡｂは、これらの同じ腫瘍から、免疫無防備状態のＳＣＩＤマウスを防御せず、この防御を提供するには、機能する免疫系（ＣＤ８ Ｔ細胞）が必要であることが強調された。
【００２０】
［００１８］したがって、本発明は、Ｔ細胞免疫促進が必要な被験体、例えばリンパ腫を伴う被験体において、Ｔ細胞免疫を促進するための新規単一および併用療法であって、少なくとも１つのＣＤ２７アゴニストおよび場合によってＣＤ４０アゴニストなどの別の部分の投与を含む、前記療法を提供する。上述のように、ＣＤ４０アゴニストが、本ＣＤ２７アゴニスト性抗体に付随して利用される場合、ＣＤ４０アゴニストは、好ましくは、抗ヒトＣＤ４０抗体、例えば本明細書においてＬＯＢ７／４と称されるキメラ抗体、あるいはその誘導体、例えばＬＯＢ７／４抗体由来の可変重鎖および軽鎖配列またはＣＤＲを含有するヒト化抗体またはその断片を含むであろう。本発明者らは、このキメラ抗体が、例えば癌、特にＣＤ４０を発現しているリンパ腫および固形腫瘍の治療のための療法剤として用いた際に、好適な特性を所持することを見出した。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】［００１９］図１は、ＴＡＮ１−６（抗ＣＤ７０抗体）およびＡＴ１１３−２（抗４−１ＢＢＬ）が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、そしてｉｎ ｖｉｖｏ応答中に、それぞれ４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用を遮断することを示す実験結果を含有する。
【図２】［００２０］図２は、ＢＣＬ１マウスにおいて、抗ＣＤ４０の療法活性に対する抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）および抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）の効果を示す実験結果を含有する。
【図３】［００２１］図３は、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ療法後、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の集積およびＢＣＬ１腫瘍の根絶に対する、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０の効果を示す実験結果を含有する。
【図４】［００２２］図４は、抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）および抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）が、抗ＣＤ４０が誘導する表現型変化またはＢＣＬ１マウスからの脾臓ＤＣの数の変化に影響を及ぼさないことを示す実験結果を含有する。
【図５Ａ】［００２３］図５Ａは、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、応答のエフェクター段階を阻害しないことを示す実験結果を含有する。
【図５Ｂ】図５Ｂは、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、応答のエフェクター段階を阻害しないことを示す実験結果を含有する。
【図５Ｃ】図５Ｃは、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０抗体が、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、応答のエフェクター段階を阻害しないことを示す実験結果を含有する。
【図６】［００２４］図６は、２つのＢ細胞リンパ腫（ＢＣＬ１およびＡ３１）に対するアゴニスト性ＣＤ２７モノクローナル抗体の療法的有効性および強度を立証する実験結果を含有する。
【図７】［００２５］図７は、抗ＣＤ２７ ｍＡｂが、ＯＴ−Ｉ細胞において、ＣＤ７０リガンドよりも強い応答（より高くそしてより長い）を誘発することを示す実験を含有する。この図は、Ａｇ＋対照Ａｂ、Ａｇ＋可溶性組換えＣＤ７０または本発明にしたがったアゴニスト性ＣＤ２７抗体を投与されたマウスにおいて、Ａｇ特異的（ＯＴ−１）細胞の拡大を示す。この図の結果は、アゴニスト性ＣＤ２７ ｍＡｂを用いたＣＤ８＋ ＯＴ−１の実質的な拡大を示す（実施例６を参照されたい）。
【図８】［００２６］図８は、抗マウスＣＤ２７抗体で標識したマウスＣＤ２７一過性発現細胞を示す。ここに示すように、試験抗ラット抗マウスＣＤ２７（ＡＴ１２４−１）および陽性対照ハムスター抗マウスＣＤ２７（ＬＧ３Ａ１０）はどちらも、マウストランスフェクション細胞を標識した。どちらの抗体も非トランスフェクション細胞には結合しなかった（データ未提示）。
【図９】［００２７］図９は、抗ＣＤ２７ ｍＡｂでのＣＤ７０およびＣＤ２７の遮断を示す。この図は、ＡＴ１２４−１が、活性化されたマウスＴ細胞表面上のＣＤ２７に結合し、そしてこの結合が、天然リガンドＣＤ７０とＣＤ２７の相互作用によって阻害されないことを示す。対照的に、比較用の商業的に入手可能な抗ＣＤ７０抗体（ＬＧ３Ａ１０；非アゴニスト）は、ＣＤ７０との結合に関して競合することが示された。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
［００２８］ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーおよびそのＴＮＦファミリーリガンド間の相互作用は、病原体および腫瘍に対する有効な抗原特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答の発展中、いくつかの段階で共刺激を提供する際に、非常に重要な役割を果たす。応答初期、樹状細胞（ＤＣ）上のＣＤ４０に、活性化されたＴｈ細胞上のそのリガンド、ＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）が連結すると、ＤＣの活性化またはライセンシングが誘導され、そして未処置（ｎａｉｖｅ）ＣＤ８ Ｔ細胞に抗原を提示する能力が増強される（Ｂｅｎｎｅｔｔ， Ｃａｒｂｏｎｅら １９９８； Ｒｉｄｇｅ， Ｄｉ Ｒｏｓａら １９９８； Ｔｏｅｓ， Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒら １９９８）。ＤＣライセンシングに関して、Ｔｈ細胞に代用可能な抗ＣＤ４０ ｍＡｂまたは可溶性ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）は、ワクチン接種、ならびに腫瘍（Ｆｒｅｎｃｈ， Ｃｈａｎら １９９９； Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２； ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏ， ｄｅｎ Ｂｏｅｒら ２００２； Ｍｕｒｒａｙ， Ｌｕら ２００３）、ウイルスおよび感染（ＲｏｌｐｈおよびＫａｕｆｍａｎ ２００１； Ｍｕｒｒａｙ， Ｌｕら ２００３）の治療を含めて、Ｔ細胞応答を必要とするいくつかのセッティングにおいて、療法的潜在能力を有することが示されている。ＣＤ４０が誘導するＤＣの活性化は、ＩＣＡＭ−１、Ｂ７．１、Ｂ７．２、ＣＤ７０および４−１ＢＢリガンド（４−１ＢＢＬ）を含む接着および共刺激分子の発現増加によって特徴付けられる（Ｃｅｌｌａ， Ｓｃｈｅｉｄｅｇｇｅｒら １９９６； Ｄｉｅｈｌ， ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏら ２００２； Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ｘｉａｏら ２００３）。最初の抗原特異的ＣＴＬ活性化／プライミングは、ＣＤ２８：Ｂ７結合に依存する（Ｌｅｎｓｃｈｏｗ， Ｗａｌｕｎａｓら １９９６； ＣａｒｒｅｎｏおよびＣｏｌｌｉｎｓ ２００２）が、エフェクター細胞の続く拡大および生存は、大量のさらなる共刺激性相互作用によって調節される。メモリー応答を維持する際のこれらの経路各々の正確な役割は、現在、活発な研究領域である。ＣＴＬ応答を維持する際に非常に重大なようである２つの受容体は、主にＤＣ上に発現されるそれぞれのリガンド、４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０と相互作用する、ＴＮＦＲファミリーメンバー、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）（ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ， Ｓｈａｈｉｎｉａｎら １９９７； Ｆｕｔａｇａｗａ， Ａｋｉｂａら ２００２）およびＣＤ２７（Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ｘｉａｏら ２００３）である。例えば、抗ＣＤ４０ ｍＡｂが駆動するＣＴＬ応答がヘルパー独立性である一方、これらは、ＣＤ２８：Ｂ７およびＣＤ２７：ＣＤ７０相互作用の両方に依存性のままであることが知られる（Ｐｒｉｌｌｉｍａｎ， Ｌｅｍｍｅｎｓら ２００２； Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２； Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）。抗ＣＤ４０ ｍＡｂが駆動するＣＴＬ応答中の４−１ＢＢの重要性に関しては、より少ない情報しか現在知られていないが、Ｔヘルパー細胞に依存するＣＴＬプライミングは、４−１ＢＢに少なくとも部分的に依存し、そして４−１ＢＢ遮断によって顕著に損なわれることが明らかである（Ｄｉｅｈｌ， ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏら ２００２）。
【００２３】
［００２９］本発明者らは、先に、抗ＣＤ４０ ｍＡｂが、いくつかの同系リンパ腫に対して、ヘルパー独立性ＣＴＬ応答を刺激し、現存する腫瘍の根絶に成功し、そしてマウスを再曝露に耐性のままにすることを立証した（Ｆｒｅｎｃｈ， Ｃｈａｎら １９９９； Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２）。抗ＣＤ４０ ｍＡｂでの初期の臨床試験は、臨床的成功および患者利益を示す。
【００２４】
［００３０］対照的に、本発明は、例えばリンパ腫被験体において、療法的免疫アジュバントとしての、そしてＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫を促進するための、ＣＤ２７の役割に関する。Ｏｖａモデル系において、本発明者らは、最近、ＣＤ２７を介した共刺激が、オボアルブミン特異的ＣＴＬのＣＤ４０ ｍＡｂが仲介するプライミングに必須であることを示した。ＣＤ７０−ＣＤ２７相互作用が抑止されている場合は、内因性オボアルブミン特異的Ｔ細胞のプライミングは見られないが、オボアルブミン特異的ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞（ＯＴ−Ｉ）のプライミングは、顕著に減少したレベルではあったが、検出された。さらに、ＣＤ２７シグナル伝達の非存在下でプライミングされたＯＴ−Ｉ Ｔ細胞は、細胞毒性Ｔ細胞に分化可能である一方、二次応答を開始する能力は不全であった。これらの発見に鑑みて、本発明者らは、ＣＤ４０ ｍＡｂが仲介するリンパ腫の免疫療法におけるＣＤ２７共刺激の役割に取り組み、そしてこれをその緊密な類縁体４−１ＢＢの役割と比較することを望んだ。以下の実施例に提供する、これらの研究の結果は、ＣＤ２７を介した共刺激の遮断が、アゴニスト性抗体によって誘発される抗腫瘍応答に対してより効果を有し、そしてこの効果が４−１ＢＢ共刺激を遮断するよりはるかにより顕著であることを示す。本発明者らはさらに、これが、ＣＤ２７−ＣＤ７０遮断中のＣＤ８＋ Ｔ細胞拡大における重度の機能障害のためであると考えている。
【００２５】
［００３１］これらに基づいて、本発明は、免疫学的に促進性の（アジュバント）または療法的に有効な量の（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、および（ｉｉ）ＣＤ４０アゴニスト、ＯＸ−４０アゴニスト、４−１ＢＢアゴニスト、抗ＣＴＬＡ−４、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）を枯渇させる部分、またはインターフェロンもしくはインターロイキンなどのサイトカインを含んでもよいか、あるいは薬剤または化学療法剤を含んでもよい、場合による別の療法部分を投与することによる、新規ヒト療法を提供する。ＣＤ２７アゴニストは、単独で、または併用して、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖およびＣＴＬ免疫応答、例えばアゴニスト性ＣＤ４０抗体などのＣＤ４０アゴニストによって誘発されるものの増加の増強を生じる。
【００２６】
［００３２］本発明はさらに、はじめて、Ｔ細胞免疫を促進するのに有用なアゴニスト性抗ＣＤ２７抗体を提供する。好ましい態様において、これらのアゴニスト性抗体の結合は、ＣＤ７０によって影響（阻害）されないであろう。これは、本発明に必須ではないが、ＣＤ７０と競合しないアゴニスト性抗体は、例えばリンパ腫などの癌の治療において、免疫アジュバントとして用いた際に好適な特性を所持しうると考えられる。
【００２７】
［００３３］ＣＤ２７アゴニストは、好ましくは、アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体を含むであろう。ＣＤ７０と競合してもまたはしなくてもよいこの抗体は、好ましくは、ヒト、ヒト化、キメラアゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体を含み、好ましくはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ１またはＩｇＡ２ヒト定常ドメインであってもよい、ヒト定常ドメインを含む。所望の場合、エフェクター機能を増進するかまたは修飾するため、これらの定常ドメインを修飾してもよい。また、抗体を突然変異させて、グリコシル化を除去するかまたは改変してもよい。同様に、ＣＤ２７アゴニスト性抗体と一緒に別のアゴニスト性抗体を用いる場合、これらは同様に、好ましくはヒト定常ドメインを含有する、好ましくは、ヒト、ヒト化またはキメラ抗体であり、そしてＣＤ２７アゴニスト性抗体に関して上述するように突然変異されていていてもよい。また、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、ミニボディ等の一本鎖抗体および抗体断片が本発明の範囲内である。
【００２８】
［００３４］典型的な態様において、ＣＤ４０アゴニストがＣＤ２７アゴニストと共投与される場合、ＣＤ４０アゴニストは、本明細書においてＬＯＢ７／４と称されるキメラ抗ヒトＣＤ４０抗体、あるいはその変異体またはその断片、特にそのヒト化型、および／またはＬＯＢ７／４と同じエピトープ特異性を所持するか、またはヒトＣＤ４０への結合に関して、ＬＯＢ７／４と競合する、抗体断片を含むであろう。
【００２９】
［００３５］典型的な態様において、本発明は、療法的有効量の、アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体などのＣＤ２７アゴニストを投与することによる、固形腫瘍およびリンパ腫などのヒト癌を治療する新規方法を提供する。場合によって、このアゴニストを、別のアゴニストまたはサイトカイン、例えばＣＤ４０アゴニスト、４−１ＢＢＬアゴニスト性抗体などの４−１ＢＢ：４−１ＢＢＬアゴニスト、アゴニスト性４−１ＢＢ抗体などの４−１ＢＢアゴニスト、抗ＣＴＬＡ−４、あるいはＩＬ−２などのインターロイキンまたはアルファ、ベータもしくはガンマインターフェロンなどのインターフェロン、あるいはＴｒｅｇ枯渇を生じる部分などの、相乗的効果を誘発するものに付随して投与可能である。これらの免疫併用を一緒にまたは併用して投与してもよい。これらのアゴニストまたはアゴニスト／サイトカイン併用は、同じ組成物中でもまたは異なる組成物中でもよい。好ましくは、これらを互いに同時に、またはほぼ同時に投与する。典型的には、これらの療法部分は、互いに２４時間以内に、より典型的には８時間以内に、そしてさらにより典型的には互いに１〜４時間以内に投与される。
【００３０】
［００３６］本ＣＤ２７アゴニスト、すなわちＣＤ２７アゴニスト性抗体で治療可能な癌には、例えば、白血病、急性リンパ球性白血病、急性骨髄球性白血病、骨髄芽球性前骨髄球性骨髄単球性単球性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性リンパ球性白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、固形腫瘍、肉腫、および癌腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、骨肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜性腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸肉腫、結腸直腸癌腫、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平細胞癌腫、基底細胞癌腫、腺癌、汗腺癌腫、皮脂腺癌腫、乳頭癌腫、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌腫、気管支原性癌腫、腎細胞癌腫、肝腫瘍、胆管癌腫、絨毛癌、精上皮腫、胚癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌腫、小細胞肺癌腫、非小細胞肺癌腫、膀胱癌腫、上皮癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、黒色腫、神経芽腫、網膜芽腫、鼻咽頭癌腫、および食道癌腫が含まれる。好ましい態様において、ＣＤ４０を発現している黒色腫、非小細胞肺癌腫、浸潤性乳管癌腫、びまん性大Ｂ細胞リンパ腫、およびＣＤ４０を発現する他の固形腫瘍などの、ＣＤ４０を発現している固形腫瘍を治療するために、本抗体を用いる。
【００３１】
［００３７］さらに、本発明は、単独で、またはサイトカインなどの別の活性剤および場合によって抗原と併用して、細胞性免疫を増強する必要がある患者に、ある量の本アジュバントアゴニスト併用を投与することによる、こうした治療が必要なヒト被験体において、細胞性免疫を増強する新規方法を提供する。
【００３２】
［００３８］さらに、本発明は、本アジュバント併用を単独で、または他の免疫に基づく療法および免疫に基づかない療法と組み合わせて用いて、ヒト炎症性疾患および不全を治療することに向けられる。こうした状態には、例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、強皮症（例えばＣＲＳＴ症候群）、炎症性筋炎、シェーグレン症候群（ＳＳ）、混合性結合組織病（例えばＭＣＴＤ、シャープ症候群）、関節リウマチ、多発性硬化症、炎症性腸疾患（例えば潰瘍性大腸炎、クローン病）、急性呼吸促迫症候群、肺炎症、骨粗鬆症、遅延型過敏症、喘息、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、および特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）が含まれる。
【００３３】
［００３９］好ましくは、アゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体、および場合によって別の免疫刺激剤または免疫調節剤、例えばアゴニスト性ＣＤ４０、ＯＸ−４０、４−１ＢＢ、またはＣＴＬＡ−４抗体、制御性Ｔ細胞を枯渇させる部分、あるいはサイトカインを投与する本方法は、抗原特異的抗腫瘍または細胞性免疫応答の増進を誘発するため、こうした治療が必要な宿主に投与されるであろう。好ましい態様において、これらの抗体は、癌、感染、特に慢性感染性疾患、例えばウイルス、細菌または寄生虫を伴う疾患；あるいは自己免疫、炎症またはアレルギー状態を有するか、またはこれらを発展させるリスクを有する被験体に投与されるであろう。例えば、本抗体または併用を用いて、ＨＩＶに対する抗原特異的細胞性免疫応答を誘発可能である。ＨＩＶは、防御免疫が、ほぼ確実に、ウイルスに対する強力でそして長期に存続する細胞性免疫応答の生成を必要とする疾患のよく認識される例である。
【００３４】
［００４０］記載するように、本発明は、有効な治療が、強力な細胞性抗原特異的免疫応答の誘発を必要とする、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫を伴う慢性感染性疾患、ならびに癌などの増殖性疾患、自己免疫疾患、アレルギー性障害、および炎症性疾患の治療に使用可能な、アゴニスト性抗体療法および併用療法を提供する。
【００３５】
［００４１］本ＣＤ２７アゴニストは、場合によって、リンホカインおよびサイトカインなどの他の免疫アジュバントと併用投与可能である。これらの例には、アルファ、ベータ、およびガンマーインターフェロンなどのインターフェロン、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−１３など、コロニー刺激因子、ＴＮＦ等のインターロイキンが含まれる。
【００３６】
［００４２］さらに、本抗ヒトＣＤ４０抗体を、癌を治療するために一般的に用いられる化学療法剤および細胞毒素、血管生成を阻害する剤などの他の抗腫瘍剤と併用投与してもよい。これらのさらなる療法剤を本アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体と、別個に、または併用して投与してもよい。また、いくつかの態様において、化学療法剤などのエフェクター部分を、直接または間接的に、例えばリンカーの使用によって、本抗ヒトＣＤ２７、あるいは抗ヒトＣＤ４０、抗ＯＸ−４０、抗４−１ＢＢ、抗ＣＴＬＡ−４等の、他の場合によって含まれるアゴニスト性抗体に付着させてもよい。
【００３７】
［００４３］さらに、いくつかの態様において、本抗ヒトＣＤ２７抗体またはアゴニスト性ＣＤ２７抗体を含有する療法的併用を、所望の抗原と併用して投与してもよいし、または抗原に付着させてもよい。
【００３８】
［００４４］典型的な抗原には、限定されるわけではないが、細菌、ウイルス、寄生虫、アレルゲン、自己抗原および腫瘍関連抗原が含まれる。ＤＮＡに基づくワクチンを用いる場合、抗原は、投与されたＤＮＡ構築物の配列によってコードされるであろう。あるいは、コンジュゲートとして抗原を投与する場合、抗原は、投与したコンジュゲートに含まれるタンパク質であろう。さらに、抗原をＣＤ２７抗体と別個に投与し、そして抗原が任意の形を取ってもよい。特に、抗原には、タンパク質抗原、ペプチド、全不活性化生物等が含まれてもよい。
【００３９】
［００４５］本発明で使用可能な抗原の特定の例には、Ａ、Ｂ、ＣまたはＤ型肝炎、インフルエンザウイルス、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、結核菌、ツラレミア、大痘瘡（疱瘡）、ウイルス性出血熱、エルシニア属（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）ペスト、ＨＩＶ、ヘルペス、パピローマウイルス由来の抗原、および感染性病原体に付随する他の抗原が含まれる。他の抗原には、腫瘍細胞に付随する抗原、自己免疫状態、アレルギーおよび喘息に付随する抗原が含まれる。本アゴニスト性抗ＣＤ２７抗体と組み合わせたこうした抗原の投与は、こうした疾患状態に対して免疫を与えるための療法的または予防的ワクチンにおいて使用可能である。
【００４０】
［００４６］いくつかの態様において、感染性病原体由来の抗原を含むことによって、感染を有するリスクがあるかまたは感染を有する個体を治療するのに、該方法および組成物を用いてもよい。感染は、宿主における外来（ｆｏｒｅｉｇｎ）生物または宿主内で生殖する病原体の存在に起因する疾患または状態を指す。感染を有するリスクがある被験体は、感染を発展させる傾向がある被験体である。こうした個体には、例えば、感染性生物または病原体への曝露が知られるかまたは推測される被験体が含まれてもよい。感染を有するリスクがある被験体にはまた、感染性病原体または生物に対する免疫応答を開始する能力が損なわれたことに関連する状態を伴う被験体、例えば先天性または後天性免疫不全を伴う被験体、乳児、高齢者、放射療法または化学療法を受けている被験体、火傷を伴う被験体、外傷性傷害を伴う被験体、手術、または他の侵襲性医学的もしくは歯科学的処置を受けている被験体、あるいは他の免疫無防備状態の個体が含まれてもよい。
【００４１】
［００４７］潜在的に他の免疫増強剤と併用される本アゴニスト性抗体併用を用いて治療または予防可能な感染には、細菌、ウイルス、真菌、および寄生虫感染が含まれる。やはり含まれる、感染の他のより一般的でないタイプは、リケッチア、マイコプラズマ、ならびにスクレイピー、ウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）、およびプリオン病（例えばクールーおよびクロイツフェルト・ヤコブ病）を引き起こす病原体である。ヒトが感染する細菌、ウイルス、真菌、および寄生虫の例は、周知である。感染は、急性、亜急性、慢性または潜在性であってもよく、そして局所的でもまた全身性でもよい。さらに、感染は、宿主における感染性生物または病原体の生活環の少なくとも１つの期の間に、主に細胞内性でもまたは細胞外性でもよい。
【００４２】
［００４８］本抗体を用いて、細胞性免疫応答を増強してもよい細菌感染には、グラム陰性およびグラム陽性細菌の両方が含まれる。グラム陽性細菌の例には、限定されるわけではないが、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）種、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、およびストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）種が含まれる。グラム陰性細菌の例には、限定されるわけではないが、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、およびサルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）種が含まれる。感染性細菌の具体的な例には、限定されるわけではないが、ピロリ菌（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉｓ）、ライム病菌（Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ）種（例えば、結核菌（Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．アビウム（Ｍ． ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラレ（Ｍ． ｉｎｔｒａｃｅｌｌｉｌａｒｅ）、カンサシ菌（Ｍ． ｋａｎｓａｉｉ）、Ｍ．ゴルドナエ（Ｍ． ｇｏｒｄｏｎａｅ））、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｒｓ）、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群ストレプトコッカス属）、ストレプトコッカス・アガラクチエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群ストレプトコッカス）、ストレプトコッカス属（ビリダンス群）、フェカリス菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ボビス（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｂｏｖｉｓ）、ストレプトコッカス属（嫌気性種）、肺炎球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）種、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）種、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、炭疽菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）種、ブタ丹毒菌（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉｅ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・マルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種、フソバクテリウム・ヌクレアツム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、梅毒トレポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ）、トレポネーマ・ペルテヌエ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、およびアクチノミセス・イスラエリ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｉｓｒａｅｌｉｉ）が含まれる。
【００４３】
［００４９］ヒトにおいて感染を引き起こすウイルスの例には、限定されるわけではないが、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩとも称される）、ＨＩＶ−ＩＩ、ＬＡＣまたはＩＤＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶまたはＨＩＶ−ＩＩＩおよびＨＩＶ−ＬＰなどの他の単離体）、ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）、カリシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を引き起こす株）、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えばデングウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばコロナウイルス）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばエボラウイルス）、パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばパラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばインフルエンザウイルス）、ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばハンタン（Ｈａｔａａｎ）ウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルス（ｐｈｌｅｏｂｏｖｉｒｕｓ）およびナイロウイルス）、アレナウイルス科（Ａｒｅｎａ ｖｉｒｉｄａｅ）（出血熱ウイルス）、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばレオウイルス、オルビウイルス、ロタウイルス）、ビマウイルス科（Ｂｉｍａｖｉｒｉｄａｅ）、ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）（Ｂ型肝炎ウイルス）、パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）（パルボウイルス）、パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（アデノウイルス）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｖｉｒｉｄａｅ）（例えば単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ＩおよびＩＩ、帯状疱疹ウイルス、ポックスウイルス）、およびイリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばアフリカブタ熱ウイルス）、ならびに未分類ウイルス（例えば海綿状脳疾患の病原体、デルタ肝炎の病原体、非Ａ非Ｂ肝炎の病原体（クラス１腸管伝染；Ｃ型肝炎などのクラス２非経口感染）；ノーウォークおよび関連ウイルスおよびアストロウイルス）が含まれる。
【００４４】
［００５０］真菌の例には、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）種、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ）、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ）および他のカンジダ属種、ブラストミセス・デルマティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ）、ヒストプラズマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、トラコーマクラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、ノカルジア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）種、およびカリニ肺炎菌（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）が含まれる。
【００４５】
［００５１］寄生虫には、限定されるわけではないが、血液感染性および／または組織寄生虫、例えば、ネズミバベシア（Ｂａｂｅｓｉａ ｍｉｃｒｏｔｉ）、バベシ・ディベルガンス（Ｂａｂｅｓｉ ｄｉｖｅｒｇａｎｓ）、赤痢アメーバ（Ｅｎｔｏｍｏｅｂａ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄａ ｌａｍｂｌｉａ）、熱帯リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｔｒｏｐｉｃａ）、リーシュマニア属種、ブラジルリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ）、ドノバンリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｄｏｎｏｖｄｎｉ）、熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、四日熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｍａｌａｒｉａｅ）、卵形マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｏｖａｌｅ）、三日熱マラリア（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｖｉｖａｘ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ）、ガンビアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）およびローデシアトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ）（アフリカ睡眠病）、クルーズトリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）（シャーガス病）およびトキソプラズマ原虫、扁平動物、および回虫が含まれる。
【００４６】
［００５２］記載するように、本発明は、好ましくは、癌などの増殖性疾患を治療する際の、アゴニスト性抗ヒトＣＤ４０、ＯＸ−４０、ＣＴＬＡ−４、４−１ＢＢ抗体またはサイトカイン、あるいは制御性Ｔ細胞を枯渇させる剤などの別の部分が場合によって付随する、アゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体の使用に関する。癌は、体の臓器および系の正常な機能に干渉する、細胞の制御されない増殖の状態である。癌を有する被験体は、被験体の体内に存在する客観的に測定可能な癌細胞を有する被験体である。癌を発展させるリスクがある被験体は、例えば家族歴、遺伝的素因に基づいて、癌を発展させる素因がある被験体、放射線または他の癌を引き起こす剤に曝露された被験体である。元来の位置から遊走し、そして生命維持に必要な臓器に播種する癌は、最終的に、影響を受けた臓器の機能の悪化を通じて、被験体の死を導きうる。白血病などの造血性癌は、被験体において、正常造血区画を競合して追い出し（ｏｕｔ−ｃｏｍｐｅｔｅ）、それによって造血不全（貧血、血小板減少症および好中球減少症の形）を導き、最終的には死を引き起こす。
【００４７】
［００５３］ＣＤ２７アゴニスト、および上述のような場合による別の部分を含む本発明の組成物を用いて、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を含むことによって、多様な癌、または癌を発展させるリスクがある被験体を治療してもよい。これは、腫瘍細胞中に発現される抗原である。こうした癌の例には、乳癌、前立腺癌、結腸癌、白血病、慢性リンパ球性白血病等の血液癌が含まれる。腫瘍関連抗原はまた、腫瘍細胞によって主に発現されるが独占的に発現されるのではない抗原であってもよい。
【００４８】
［００５４］さらなる癌には、すでに言及されたもの、ならびに基底細胞癌種、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳および中枢神経系（ＣＮＳ）癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸直腸癌、結合組織癌、消化系の癌、子宮内膜癌、食道癌、目の癌、頭部および頸部の癌、胃癌、上皮内新生物、腎臓癌、喉頭癌、肝癌、肺癌（小細胞、大細胞）、ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫；黒色腫；神経芽腫；口腔癌（例えば唇、舌、口および咽頭）；卵巣癌；膵臓癌；網膜芽腫；横紋筋肉腫；結腸癌；呼吸器系の癌；肉腫；皮膚癌；胃癌；精巣癌；甲状腺癌；子宮癌；泌尿器系の癌；ならびに他の癌腫および肉腫が含まれる。
【００４９】
［００５５］また、本ＣＤ２７アゴニスト、および含有組成物または先に定義したような併用療法を用いて、多発性硬化症、関節リウマチ、１型糖尿病、乾癬または他の自己免疫障害などの自己免疫疾患を治療してもよい。本発明の免疫アジュバントで潜在的に治療可能な他の自己免疫疾患には、クローン病、および潰瘍性大腸炎などの他の炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、天疱瘡、グレーブス病、自己免疫溶血性貧血、自己免疫血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症、混合性結合組織疾患、多発性筋炎（ｐｏｌｙｐｙｏｓｉｔｉｓ）、悪性貧血、特発性アジソン病、自己免疫関連不妊、糸球体腎炎（例えば半月体性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、類天疱瘡、シェーグレン症候群、乾癬性関節炎、インスリン耐性、自己免疫糖尿病（１型糖尿病；インスリン依存性糖尿病）、自己免疫肝炎、自己免疫血友病、自己免疫リンパ増殖性症候群（ＡＬＰＳ）、自己免疫肝炎、自己免疫血友病、自己免疫リンパ増殖性症候群、自己免疫網膜ブドウ膜炎、およびギラン−バレー症候群が含まれる。最近、動脈硬化症およびアルツハイマー病が自己免疫疾患と認識された。したがって、本発明のこの態様において、本ＣＤ２７アゴニスト、典型的にはアゴニスト性ＣＤ２７抗体を、単独で、または宿主が組織破壊および正常組織への損傷に寄与する望ましくない免疫応答を誘発する、自己抗原と併用して、投与してもよい。
【００５０】
［００５６］本抗ＣＤ２７抗体および併用療法はまた、喘息、ならびにアレルギー性および炎症性疾患を治療するのにも使用可能である。喘息は、炎症および気道狭窄、ならびに吸入した物質への気道の反応性増加によって特徴付けられる呼吸系の障害である。喘息は、独占的ではないが、しばしば、アトピー性またはアレルギー性症状と関連づけられる。アレルギーは、物質（アレルゲン）に対する後天性過敏症である。アレルギー状態には、湿疹、アレルギー性鼻炎、または鼻感冒、枯草熱、気管支喘息、蕁麻疹、および食物アレルギー、ならびに他のアトピー性状態が含まれる。アレルゲンは、感受性の被験体において、アレルギー性または喘息性応答を誘導可能な物質である。花粉、昆虫毒、動物のふけ、ほこり、真菌胞子、および薬剤を含む、多くのアレルゲンがある。
【００５１】
［００５７］天然および植物アレルゲンの例には、以下の属に特異的なタンパク質が含まれる：イヌ科（Ｃａｎｉｎｅ）、ダニ属（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ）、ネコ属（Ｆｅｌｉｓ）、ブタクサ属（Ａｍｂｒｏｓｉａ）、ドクムギ属（Ｌｏｔｉｕｍ）、スギ属（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ）、アルテルナリア属（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ）、ハンノキ属（Ａｌｄｅｒ）、アルヌス属（Ａｌｉｎｕｓ）、カバノキ属（Ｂｅｔｕｌａ）、カシ属（Ｑｕｅｒｃｕｓ）、オリーブ属（Ｏｌｅａ）、ヨモギ属（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ）、オオバコ属（Ｐｌａｎｔａｇｏ）、ヒカゲミズ属（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ）、チャバネゴキブリ属（Ｂｌａｔｅｌｌａ）、ミツバチ属（Ａｐｉｓ）、イトスギ属（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ）、ビャクシン属（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ）、クロベ属（Ｔｈｕｙａ）、ヒノキ属（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ）、ゴキブリ属（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔ）、カモジグサ属（Ａｇｏｐｙｒｏｎ）、ライムギ属（Ｓｅｃａｌｅ）、コムギ属（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ）、カモガヤ属（Ｄａｃｔｙｌｉｓ）、ウシノケグサ属（Ｆｅｓｔｕｃａ）、イチゴツナギ属（Ｐｏａ）、カラスムギ属（Ａｖｅｎａ）、シラゲガヤ属（Ｈｏｌｃｕｓ）、ハルガヤ属（Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ）、オオカニツリ属（Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ）、コヌカグサ属（Ａｇｒｏｓｔｉｓ）、アワガエリ属（Ｐｈｌｅｕｍ）、クサヨシ属（Ｐｈａｌａｒｉｓ）、スズメノヒエ属（Ｐａｓｐａｌｕｍ）、モロコシ属（Ｓｏｒｇｈｕｍ）、およびブロミス属（Ｂｒｏｍｉｓ）。
【００５２】
［００５８］本抗体、抗体含有組成物、およびそのコンジュゲートを、特定の状態、例えば感染性疾患、癌または自己免疫状態を治療するための他の療法と併用してもよいことが理解される。例えば、癌の場合、本発明の方法を化学療法または放射療法と併用してもよい。
【００５３】
［００５９］所望の抗原に対する抗体を作製する方法が周知である。しかし、本発明までは、アゴニスト性ＣＤ２７ ｍＡｂは報告されておらず、また本明細書に請求するような、免疫療法のためのその使用は示唆されてこなかった。
【００５４】
［００６０］対照的に、上述のように、アゴニスト性ＣＤ４０抗体が知られており、免疫療法におけるその使用も知られている。また、図９において、本出願は、好ましい典型的なキメラアゴニスト性ＣＤ４０抗体ＬＯＢ７／４の重鎖および軽鎖の可変配列を提供し、これによって、当業者は、組換え法により、この抗体を作製可能であろう。ＣＤ２７抗体が、ＣＤ４０アゴニスト性抗体に付随して用いられる場合、本ＣＤ４０アゴニストおよびＣＤ２７アゴニストの有効量は、実験的に、または動物モデルにおける免疫学的有効量に基づいて、決定可能である。相対的な量は、ｉｎ ｖｉｖｏで、ＣＴＬ応答増進およびＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖を生じるものである。考慮すべきさらなる要因には、抗原性、配合、投与経路、投与すべき免疫用量の回数、個体の身体状態、体重、および年齢、副作用等が含まれる。こうした要因は、当業者に周知であり、そして当業者によって決定可能である（例えばＰａｏｌｅｔｔｉおよびＭｃｌｎｎｅｓ監修， Ｖａｃｃｉｎｅｓ， ｆｒｏｍ Ｃｏｎｃｅｐｔ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃ： Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｕｓｅ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（１９９９）を参照されたい）。本ＣＤ２７アゴニストを単独でまたは他のアジュバントと組み合わせて投与してもよいことが理解される。
【００５５】
［００６１］限定されるわけではないが、筋内、静脈内、皮内、皮下、腹腔内、鼻内、経口または他の粘膜経路を含む、当該技術分野に知られる任意の方法によって、本アゴニストまたはその併用、例えばＣＤ４０／ＣＤ２７アゴニスト性抗体併用を局所的または全身性に投与してもよい。さらなる経路には、頭蓋内（例えば槽内、または脳室内）、眼窩内、眼性、嚢内、脊椎内、および局所投与が含まれる。本発明のアジュバントおよびワクチン組成物を、適切な非毒性薬学的キャリアー中で投与してもよいし、あるいはマイクロカプセルまたは持続性放出移植物中で配合してもよい。所望の細胞性免疫応答を維持するため、望ましい場合は、本発明の免疫原性組成物を多数回投与してもよい。適切な経路、配合、および免疫化スケジュールは、当業者によって決定可能である。
【００５６】
［００６２］本発明の方法において、いくつかの場合、抗体または抗体コンジュゲート併用を、１つまたはいくつかの抗原、あるいは他の活性剤、例えばサイトカインまたは化学療法剤と組み合わせて投与してもよい。これらの組成物および含有活性剤を、別個に、または細胞性免疫の所望の増進を達成する任意の順序で、併用して、投与してもよい。典型的には、互いに短期間内に、すなわち互いに約１日以内に、典型的には互いに数時間、そしてより典型的には互いに約１時間以下のうちに、これらの組成物を投与する。
【００５７】
［００６３］いくつかの例において、アフィニティー精製を促進する組換え抗体アゴニスト上の部分を含むことが有益でありうる。こうした部分には、コンジュゲート中のポリペプチドの機能に干渉しない、比較的小さい分子が含まれる。あるいは、タグは切断によって除去可能である。こうしたタグの例には、ポリ−ヒスチジンタグ、赤血球凝集素タグ、マルターゼ結合性タンパク質、レクチン、グルタチオン−Ｓトランスフェラーゼ、アビジン等が含まれる。他の適切なアフィニティータグには、ＦＬＡＧ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、ｍｙｃ等が含まれる。
【００５８】
［００６４］本抗体および含有抗体コンジュゲートを、生理食塩水などの生理学的に許容されうるキャリアーとともに投与してもよい。組成物にはまた、クエン酸、リン酸、酢酸、および重炭酸などの緩衝剤、アミノ酸、尿素、アルコール、アスコルビン酸、リン脂質、血清アルブミンなどのタンパク質、エチレンジアミン四酢酸、塩化ナトリウム、または他の塩、リポソーム、マンニトール、ソルビトール、グリセロール等の別のキャリアーまたは賦形剤が含まれてもよい。対応する投与経路にしたがって、本発明の剤を多様な方式で配合してもよい。例えば、摂取または注射用に液体配合物を作製してもよく、摂取、吸入、または局所適用のため、ゲルまたは手法を作製してもよい。こうした配合物を作製するための方法が周知であり、そして例えば、"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，" 第１８版， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， ペンシルバニア州イーストンに見出されうる。
【００５９】
［００６５］発現を導くことが可能な任意のベクター、例えばベクターで形質導入された細胞を用いて、本アゴニスト性抗体を発現させてもよい。使用可能なベクターには、例えば、バキュロウイルス、細菌で使用するためのＴ７に基づくベクター、酵母発現ベクター、哺乳動物発現ベクター、ウイルス発現ベクター等が含まれる。ウイルスベクターには、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ベクター、ヘルペスウイルス、シミアンウイルスＳＶ、およびウシパピローマウイルスベクターが含まれる。
【００６０】
［００６６］本アゴニスト性抗体の発現を促進するのに使用可能な原核細胞および真核細胞には、例えば、微生物、植物および動物細胞、例えば大腸菌、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）等の原核生物、Ｓｆ２１細胞などの昆虫細胞、サッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、カンジダ属、クリュイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）、シゾサッカロミセス属（Ｓｃｈｉｚｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）、およびピキア属（Ｐｉｃｈｉａ）などの酵母細胞、ならびにＣＯＳ、ＨＥＫ２９３、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＩＨ ３Ｔ３、ＨｅＬａ等の哺乳動物細胞が含まれる。当業者は、特定の発現系に適した構成要素を容易に選択可能であり、これには、所望の細胞または生物に適した、発現ベクター、プロモーター、選択可能マーカー等が含まれる。多様な発現系の選択および使用は、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら， "Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， ニューヨーク州ニューヨーク（１９９３）；およびＰｏｕｗｅｌｓら， Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ"， １９８５ Ｓｕｐｐｌ． １９８７に見出されうる。本ＤＮＡ構築物を含有し、そして発現する真核細胞もまた提供する。
【００６１】
［００６７］本明細書において、用語「抗体」は、最も広い意味において、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体、ならびにその抗原結合性断片を含むように用いられる。これには、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ミニボディ、一本鎖ＡｂおよびＦｖ断片が含まれる。
【００６２】
［００６８］さらに、用語「抗体」には、天然抗体、ならびに非天然存在抗体、例えば一本鎖抗体、キメラ抗体、二重官能性およびヒト化抗体が含まれる。本発明で使用するのに好ましいのは，キメラ、ヒト化、および完全ヒト抗体である。キメラ、ヒト化、ＣＤＲ移植、一本鎖および二重官能性抗体を合成するための方法は当業者に周知である。さらに、記載するように、ＣＤ２７に特異的な抗体が知られ、そして入手可能であり、そしてＣＤ２７抗原、好ましくはヒトＣＤ２７抗原で適切な宿主を免疫することによって作製可能である。本発明に記載するように、ＣＤ４０抗体を用いる場合、ＣＤ４０抗体は、図９に含有される可変重鎖および軽鎖配列を有するキメラＬＯＢ７／４を含んでもよく、その合成は図１０および１１に図示される。
【００６３】
［００６９］本発明のアゴニスト性ＣＤ２７抗体は、損なわれていなくても、または操作されていてもよい。例えば、ＣＤ２７ ｍＡｂは、補体、マクロファージなどのＦｃＲ所持エフェクターなどのヒトエフェクター系への結合増加または減少のために、あるいは半減期を延長するかまたは減少させるために、完全にまたは部分的にグリコシル化され、そして／または選択されていてもよい。これらの修飾を行って、有効性を改善し、そして潜在的にまた、毒性副作用を減少させてもよい。
【００６４】
［００７０］本発明の多様な態様の活性に実質的に影響を及ぼさない修飾もまた、本明細書に提供する本発明の定義内で提供されることが理解される。したがって、以下の実施例は、本発明を例示するが限定しないよう意図される。
【実施例】
【００６５】
［００７１］材料および方法
［００７２］（以下の材料および方法を実施例１〜６で用いた。）
［００７３］動物および細胞株。ＢＡＬＢ／ｃおよびＣ５７Ｂｌ／６マウスは、Ｈａｒｌａｎ（英国、オクソン、ブラックソーン）によって供給され、そして現地の動物施設で維持された。ＢＣＬ１（ＳｌａｖｉｎおよびＳｔｒｏｂｅｒ １９７８）マウスＢリンパ腫細胞株は、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるｉ．ｐ．継代によって、ｉｎ ｖｉｖｏで維持された。疾患の最終段階で脾臓を除去し、そして先に記載するように、単細胞懸濁物を調製した。Ｐ ＢＣＬ１細胞は、ＢＣＬ１由来の亜系統であり、そして培養中で増殖させた（Ｉｌｌｉｄｇｅ， Ｈｏｎｅｙｃｈｕｒｃｈら ２０００）。英国内務省認可指針にしたがった認可の下で動物実験を行い、そしてこれらは、サザンプトン大学倫理委員会によって認可された。
【００６６】
［００７４］抗体および試薬。本研究に用いた抗ＣＤ４０処置ｍＡｂは、３／２３であった（元来、Ｇ． Ｋｌａｕｓ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， 英国ロンドンによって提供されたもの）。それぞれ、４−１ＢＢＬ−Ｆｃ融合タンパク質または可溶性組換えＣＤ７０タンパク質でラットを免疫することによって、社内で、抗４−ｌＢＢＬ ｍＡｂ、ＡＴ１１３−２、および抗ＣＤ７０ ｍＡｂ、ＴＡＮ１−６を作製した（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）。ｍＡｂの調製のため、静置培養中でハイブリドーマ細胞を拡大し、そしてプロテインＧカップリングＳｅｐｈａｒｏｓｅビーズを用いて、ＩｇＧを上清から調製した。フローサイトメトリー分析に用いた抗体は：すべて社内で調製され、そしてＰＥまたはＦＩＴＣ標識されている、ＩＤ３（抗ＣＤ１９）（Ｋｒｏｐ， ｄｅ Ｆｏｕｇｅｒｏｌｌｅｓら １９９６）、１６−１０Ａ１（抗Ｂ７−ｌ）およびＧＬ−１（抗Ｂ７−２）（どちらもＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）、ＩＣＡＭ−１（参照）、Ｎ４１８（抗ＣＤ１１ｃ）（ＡＴＣＣ）、Ｍｃ１０−６Ａ５（抗ＢＣＬ１ Ｉｄ ｍＡｂ）（Ｇｅｏｒｇｅ， ＭｃＢｒｉｄｅら １９９１）、ＬＯＢ１２／３（抗４−ｌＢＢ）（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）、ＹＴＳ１６９（抗ＣＤ８）； ＰＥ標識抗ＣＤ２７およびＡＰＣ標識抗ＣＤ８（どちらもＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）であった。可溶性融合タンパク質、ｓＣＤ７０−Ｆｃおよびｓ４−１ＢＢＬ−Ｆｃを先に記載したように生成した（ＲｏｗｌｅｙおよびＡｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ ２００４）。
【００６７】
［００７５］ＢＩＡＣＯＲＥ分析。ＴＡＮ１−６およびＡＴ１１３−２の結合のＢｉａｃｏｒｅ分析を先に記載されるように行った（Ａｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ， Ｍａｌｌｅｔｔら １９９７）。
【００６８】
［００７６］ＯＴ−１細胞の養子免疫伝達。ＯＴ−Ｉマウス由来のＯＶＡ特異的Ｈ−２Ｋｂ制限ＴＣＲトランスジェニックＴ細胞（１ｘ１０６）を、性別が一致したＣ５７ＢＬ／６レシピエントにｉ．ｖ．注射した。１または２日後：抗ＣＤ４０または対照抗Ａ３１リンパ腫Ｉｄ ｍＡｂ（各５００μｇ）、または抗ＣＤ４０および抗ＣＤ７０／抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂ（各５００μｇ）と併用したＯＶＡ（５ｍｇ）のｉ．ｐ．投与によって、Ｔ細胞をプライミングした。翌日、これらのマウスに、対照抗Ａ３１リンパ腫Ｉｄ ｍＡｂ、抗ＣＤ７０または抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂ（５００μｇ）をさらに注射した。Ａｇ特異的Ｔ細胞を追跡するため、血液試料（５０μｌ）をＰＥ標識Ｈ−２Ｋｂ ＯＶＡｐ四量体（ＰｒｏｉｍｍｕｎｅまたはＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）およびＡＰＣ標識抗ＣＤ８□（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色した（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）。
【００６９】
［００７７］内因性抗ＯＶＡ応答の監視。抗ＣＤ４０および対照（抗Ａ３１リンパ腫Ｉｄ）、抗ＣＤ７０または抗ＣＤ１３７Ｌ ｍＡｂのいずれか（各５００μｇ）と併用したＯＶＡ（５ｍｇ）のｉ．ｐ．投与によって、Ｃ５７ＢＬ／６マウスをプライミングした。翌日、マウスに、対照、抗ＣＤ７０または抗ＣＤ１３７Ｌ ｍＡｂのいずれか（５００μｇ）をさらに注射した。Ａｇ特異的Ｔ細胞を追跡するため、プライミング６日後、血液試料（５０μｌ）をＰＥ標識Ｈ−２Ｋｂ ＯＶＡｐ四量体およびＡＰＣ標識抗ＣＤ８０（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で染色し、そしてＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、カリフォルニア州マウンテンビュー）を用いて、フローサイトメトリー分析を行った。
【００７０】
［００７８］腫瘍および抗ＣＤ４０ ｍＡｂ後の、脾臓リンパ球およびＤＣのフローサイトメトリー分析
［００７９］年齢一致ＢＡＬＢ／ｃマウスに、５ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞を第０日に投与し（ｉ．ｖ．）、そして次いで、脾臓における腫瘍細胞レベルが、総細胞のおよそ５％に到達したとき、典型的には腫瘍後４日目に、１ｍｇの抗ＣＤ４０ ｍＡｂまたはアイソタイプ一致対照を投与した（ｉ．ｖ．）。抗ＣＤ４０ ｍＡｂ処置の応答に対する、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０ ｍＡｂの影響を見る実験において、抗ＣＤ４０注射の４時間前に０．５ｍｇの遮断性ｍＡｂをｉ．ｐ．注射し、そして次いで、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ後、１日目および３日目にも注射した。示した日に動物を屠殺し、脾臓を除去し、そして懸濁物を調製した。ＰＥ抗ＣＤ１９およびＦＩＴＣ抗ＢＣＬ１ Ｉｄを用いて、ＢＣＬ１腫瘍細胞を検出した。ＡＰＣ抗ＣＤ８ａおよびＰＥ抗４−１ＢＢおよび抗ＣＤ２７を用いて、ＣＤ８＋リンパ球の数および表現型の変化を追跡した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、フローサイトメトリー分析を行った。
【００７１】
［００８０］ＤＣ分析のため、全脾臓を荒く切り刻み、そしてＲＰＭＩ−１６４０ ５ｍｌ中の１ｍｇ／ｍｌコラゲナーゼＤ（Ｒｏｃｈｅ）および０．０５ｍｇ／ｍｌ ＤＮアーゼＩ（Ｓｉｇｍａ）で消化して、そして３７℃で３０分間、穏やかに攪拌した。次いで、２０ｍｌの培地を添加し、そして単細胞懸濁物を調製した。細胞を一度洗浄し、再懸濁し、そして抗ＦｃｇＩＩおよびＩＩＩ受容体ｍＡｂ、２．４Ｇ２の存在下で、ＰＥ抗ＣＤ１１ｃおよびＦＩＴＣ抗Ｂ７．１、Ｂ７．１、ＩＣＡＭ、４−１ＢＢ、４−１ＢＢＬ、およびＣＤ７０を用いて、フローサイトメトリー用に試料を標識した。死亡した細胞および自己蛍光細胞がＦＬ３を用いてゲーティング可能であるように、分析１５分前に、最終濃度２μｇ／ｍｌの７−アミノアクチノマイシン−Ｄ（７ＡＡＤ）を添加した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒを用いて、フローサイトメトリー分析を行った。
【００７２】
［００８１］免疫療法。５匹の年齢一致マウスの群に、第０日に、１０７ ＢＣＬ１細胞をｉ．ｖ．注射し、そして次いで、第４〜７日に、抗ＣＤ４０をｉ．ｖ．注射し（２５０ｍｇ／日）、そして示した箇所で、第４、７、９および１１日に、遮断性ｍＡｂをｉ．ｐ．注射した（５００ｍｇ／日）。
【００７３】
［００８２］ｉｎ ｖｉｖｏ殺傷アッセイ。マウスに、２ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉ．ｐ．注射し、そして４８時間後に１ｍｇの抗ＣＤ４０をｉ．ｐ．注射した。８日後、３匹のマウスの群に、１ｍｇの適切な遮断性ｍＡｂをｉ．ｐ．注射し、そして次いで５時間後、末期ＢＣＬ１腫瘍所持マウス由来の２ｘ１０７ ＣＦＳＥ標識脾臓細胞を注射した。２４時間後、洗浄し、そしてＰＥ標識抗ＢＣＬ１ ＩｄおよびＡＰＣ標識抗ＣＤ８で染色することによって、腹腔から細胞を回収した。
【００７４】
［００８３］細胞毒性アッセイ。先に記載されるように（Ｔｕｔｔ， Ｏ’Ｂｒｉｅｎら ２００２）、標準的４時間５１Ｃｒ放出アッセイを用いて、脾臓エフェクターの細胞毒性活性を評価した。簡潔には、抗ＣＤ４０処置の４〜５日後、ＢＣＬ１所持マウスから、脾臓ホモジネートを調製した。ＦＩＴＣ抗Ｉｄ ｍＡｂを用いて残りの腫瘍細胞を除去し、その後、抗ＦＩＴＣ ＭＡＣＳビーズおよびＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ， Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ， Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いた。残りの細胞をエフェクターとして用いた。ＰＢＣＬ１細胞を５１Ｃｒで標識し、そしてターゲットとして用いた。細胞毒性に対するｍＡｂの効果を評価するため、最終濃度５０μｇ／ｍｌでこれらを含めた。１５０μｌの１％Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０を添加しておいたターゲット細胞を用いて、放射能の最大放出を計算した。標準式を用いて、特異的５１Ｃｒ放出の割合を計算した：特異的放出の割合＝［（試料放出−バックグラウンド放出）／（最大放出−バックグラウンド放出）］ｘ１００。
【００７５】
［００８４］実施例１：ＴＡＮ１−６（抗ＣＤ７０）およびＡＴ１１３−２（抗４−１ＢＢＬ）は、それぞれｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用を遮断する。
【００７６】
［００８５］実施例１に含有される本実験において、１ａおよび１ｂのどちらにおいても、１マイクログラム／ｍｌの抗ＣＤ３で、ＢＡＬＢ／ｃ脾臓細胞を４８時間活性化して、Ｔ細胞上のＣＤ７０および４−１ＢＢの発現を上方制御した。３ａにおいては、ＴＡＮ１−６（実線）またはＡＴ１１３−２（点線）（５０マイクログラム／ｍｌ）の存在下で、ＦＩＴＣ標識抗ヒトＦｃ ｍＡｂ（ＳＢ２Ｈ２、１０マイクログラム／ｍｌ）を用いて、活性化された脾臓細胞へのｓＣＤ７０−ＩｇＦｃ融合タンパク質（１．１２５マイクログラム／ｍｌ）の結合を、そしてＦＩＴＣ標識抗ヒトＦｃ ｍＡｂ ＳＢ２Ｈ２を用いて、細胞へのｓ４−１ＢＢＬ−Ｉｇ Ｆｃ融合タンパク質（１．１２５マイクログラム／ｍｌ）の結合を検出した。ａおよび１ｂの両方において、塗りつぶしたヒストグラムは、ＳＢ２Ｈ２で検出されたｈＩｇＧの対照を示す。１ｃにおいては、対照ＩｇＧ（抗Ａ３１イディオタイプ）、抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）または抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）ｍＡｂ（各０．５ｍｇ）のいずれかと併用した、ＯＶＡ（５ｍｇ）および抗ＣＤ４０（１ｍｇ）のｉ．ｐ．投与後、Ｃ５７Ｂｌ／６マウスにおける内因性Ｏｖａ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞応答を監視した。２４時間後、マウスに対照、抗ＣＤ７０または抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂを反復注射した。６日後、ＡＰＣ標識抗ＣＤ８およびＰＥ標識Ｈ−２ Ｋｂ ＳＩＩＮＦＥＫＬ四量体を用いて、末梢血中のＯＶＡ特異的Ｔ細胞を検出した。
【００７７】
［００８６］実施例２：ＢＣＬ１マウスにおける抗ＣＤ４０の療法活性に対する抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）および抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）の影響。
【００７８】
［００８７］図２に示す本実験において、５匹のマウスの群に、第０日に、１ｘ１０７ＢＣＬ１腫瘍細胞をｉｖ接種し、そして腫瘍後４、５、６および７日目に、抗ＣＤ４０でｉｖ処置した（１日あたり５００マイクログラム）。示すように、群にはまた、第４、７、９および１１日に、抗４−１ＢＢＬおよび／または抗ＣＤ７０も投与した（５００マイクログラム／ｍＡｂ／日、ｉ．ｐ．）。腫瘍発展に関して、マウスを監視した。図４の結果は、３つの類似の実験の１つの結果を示し、そして含有する。
【００７９】
［００８８］実施例３：抗ＣＤ４０ ｍＡｂ療法後のＣＤ８＋ Ｔ細胞の集積およびＢＣＬ１腫瘍根絶に対する、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０の影響。
【００８０】
［００８９］結果が図３に含有される本実験において、マウスの群に、５ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉｖ接種し、そして４日後（図の第０日）、抗ＣＤ４０ ｍＡｂで処置し、その時点で、脾臓におけるＩｄ＋腫瘍細胞レベルは、３〜５％の間であった。示す箇所で、第０、１、および２日、マウスに、抗４−１ＢＢＬおよび／または抗ＣＤ７０ ｍＡｂもまた投与した（５００マイクログラム／ｍＡｂ／日）。示す日に、本明細書の材料および方法に記載するように、フローサイトメトリーによって、脾臓腫瘍およびＣＤ８＋ Ｔ細胞を監視した。図３ａの実験は、脾臓腫瘍細胞総数を示し、そして３ｂは、ＢＣＬ１処置後のＣＤ８＋細胞総数を示す。点は２つ組動物の平均であり、そして結果は４つの類似の実験結果を示す。
【００８１】
［００９０］実施例４：抗４−１ＢＢＬ（ＡＴ１１３−２）および抗ＣＤ７０（ＴＡＮ１−６）は、抗ＣＤ４０が誘導する表現型変化、またはＢＣＬ１マウス由来の脾臓ＤＣ数の変化に影響を及ぼさない。
【００８２】
［００９１］図４の実験において、マウスに５ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉｖ接種し、そして４日後（図の第０日）、抗ＣＤ４０（１ｍｇ）ｍＡｂで処置した。示す箇所で、抗ＣＤ４０処置の４時間前、そして１および２日後に再び、マウスに抗４−１ＢＢＬまたは抗ＣＤ７０をｉ．ｐ．投与した（５００マイクログラム／日）。第３日、脾臓ＤＣの総数を図２におけるように分析した。図４の結果は２つ組マウスの平均を示し、そして２つの類似の実験のうちの１つの結果を含有する。
【００８３】
［００９２］実施例５：抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０は、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで、応答のエフェクター段階を阻害しない。
【００８４】
［００９３］本実験は図５に含有される。図５ａにおいて、マウスに２ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉ．ｐ．注射し、そして４８時間後、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ（１ｍｇ）を注射した。さらに８日後、３匹のマウスの群に、１ｍｇの適切な遮断抗体をｉ．ｐ．注射し、そして次いで、５時間後、ＢＣＬ１腫瘍所持マウス由来の２ｘ１０７ ＣＦＳＥ標識脾臓細胞を注射した。２４時間後、腹腔より細胞を採取し、ＰＥ標識抗ＢＣＬ１ Ｉｄで染色し、そしてフローサイトメトリーによって評価した。ゲーティングされた二重陽性（ＣＦＳＥ＋およびＩｄ＋）細胞は、生存腫瘍細胞に相当する。５ｂ）において、マウスに５ｘ１０７ ＢＣＬ１をｉ．ｖ．接種し、そして４日後、抗ＣＤ４０ ｍＡｂを接種した（１ｍｇ、ｉ．ｖ．）。抗ＣＤ４０の５日後、脾臓リンパ球を調製し、そして材料および方法に記載するように、ＰＥ標識抗ＢＣＬ１ Ｉｄ ｍＡｂおよび抗ＰＥビーズを用いて、残った腫瘍細胞を除去した。残った脾臓細胞（およそ４０％ ＣＤ８＋）をエフェクターとして用いて、そして単独で、あるいは１００マイクログラム／ｍｌの抗ＣＤ４０、抗ＣＤ８、抗４−１ＢＢＬ、または抗ＣＤ７０の存在下で、ターゲットとしての５１Ｃｒ標識ＩＩＢＣＬ１細胞とインキュベーションした。この結果を、ターゲット細胞の特異的溶解パーセントとして示す。
【００８５】
［００９４］実施例６：Ａ３１およびＢＣＬ１リンパ腫に対する抗ＣＤ２７の療法強度
［００９５］図６に示す本実験において、マウスに、２ｘ１０７ ＢＣＬ１細胞をｉｖ注射し、そして次いで、後に、対照ＩｇＧ、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ、抗ＣＤ２７または抗４−１ＢＢ ｍＡｂ（１ｍｇ）でｉｖ処置した。マウスを毎日２回監視し、そして図中の結果は、２つの類似の実験のうちの１つを示す。特に、４ｘ１０６ＣＤ８＋ ＯＴ−Ｉリンパ球の養子免疫伝達１日後（第０日）、レシピエントＢ６マウスを３０ｍｍｏｌ ＯＶＡペプチド（ＳＩＮＦＥＫＬ、ＯＶＡ ２５７−２６４）でｉｖ免疫した。動物にはまた、組換え可溶性ＣＤ７０または抗マウスＣＤ２７（その調製を次の実施例に示す）または対照ｍＡｂを４回、ｉｖ注射した（第９０、１、２および３日；注射あたり２５０マイクログラム）。ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞をｉｎ ｖｉｖｏで追跡するため、血液試料をＰＥ Ｈ−２ＫＢ ＯＶＡ ２５７−２６４四量体およびＡＰＣ抗ＣＤ８アルファで染色した。ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の拡大は、応答のピーク時、第４日で示される。
【００８６】
［００９６］実施例７：抗マウスＣＤ２７ ｍＡｂ ＡＴ１２４−１の調製
［００９７］マウスＣＤ２７−ｈｕＦｃ分泌ＣＨＯ細胞を調製し、そしてそこからの上清をプロテインＡ上でプロセシングして、融合タンパク質を精製した。標準法にしたがって、ＣＦＡ、ＩＦＣＡ、次いでＰＢＳ中の５０マイクログラム／用量の融合タンパク質でＬｏｕラットを免疫した。最初に融合タンパク質に対して、そして次いで細胞に対して、ハイブリドーマをスクリーニングした。細胞はＣｏｎＡ活性化脾臓細胞、すなわち活性化Ｔ細胞であった。
【００８７】
［００９８］商業的ハムスターＣＤ２７（ＬＧ３Ａ１０（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ））、Ｐ ０４ ２ １１５に比較して、ＡＴ１２４−１（本発明の抗体）は、ＣＤ７０−Ｆｃによって部分的にしか、またはまったく遮断されず（１１０から８０ＭＦＩに減少）、一方、ＬＧ３Ａ１０−ＰＥは遮断されて、１５００から１８０ＭＦＩに減少した。この実験をＰ ０４ ２ １３０で反復して、類似の結果を得た。
【００８８】
［００９９］図７に示すように、本発明のラット抗マウスＣＤ２７（ＡＴ１２４−１）および陽性対照ハムスター抗マウスＣＤ２７（ＬＧ３Ａ１０）はどちらも、マウスＣＤ２７トランスフェクション細胞を標識した。どちらの抗体も非トランスフェクション細胞には結合しなかった。
【００８９】
［００１００］結果
［００１０１］ＢＣＬ１リンパ腫の抗ＣＤ４０処置中の脾臓ＣＤ８ Ｔ細胞およびＤＣの表現型変化
［００１０２］
［００１０３］
［００１０４］抗ＣＤ４０への療法的応答に対する、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用遮断の影響
［００１０５］本発明者らは、腫瘍所持マウスのＣＤ４０ ｍＡｂ処置後に見られる療法的応答への、４−１ＢＢおよびＣＤ２７分子の重要性を調べた。４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０に特異的な遮断性ｍＡｂを用いて、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用破壊の影響を調べた。ＡＴ１１３−２（抗４−１ＢＢＬ）およびＴＡＮ１−６（抗ＣＤ７０）が、それぞれ、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢおよびＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用を破壊可能であることは、これらが、活性化Ｔ細胞へのｓ４−１ＢＢＬ−ＦｃおよびｓＣＤ７０−Ｆｃの結合を遮断することを示すことによって、確認された（図１ａおよびｂ）。さらに、両ｍＡｂは、ＢＩＡＣｏｒｅ分析によって決定されたものと類似のアフィニティーで、ターゲット抗原に結合した。ＡＴ１１３−２（抗４−１ＢＢＬ）およびＴＡＮ１−６（抗ＣＤ７０）のＫＤ値は、それぞれ、３．８ｘ１０−９および３．０ｘ１０−９であった。抗ＣＤ７０および抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂがｉｎ ｖｉｖｏで応答を遮断可能であることを確認するため、本発明者らは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおいて、ＯＶＡに対する内因性ＣＤ８応答に対するその影響を調べた（図１ｃ）。先に示されるように（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００４）、ＣＤ４０が仲介する、内因性ＯＶＡ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の拡大は、抗ＣＤ７０ ｍＡｂによって、ほぼ完全に阻害された。比較すると、抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂは、抗ＣＤ４０が誘導するＯＶＡ特異的Ｔ細胞レベルの５０％の減少を生じた。
【００９０】
［００１０６］本発明者らは、次いで、抗ＣＤ４０ ｍＡｂへのＢＣＬ１腫瘍所持マウスの療法的応答に対する、抗ＣＤ７０および抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂの影響を決定した。マウスに、第０日、１ｘ１０７ ＢＣＬ１腫瘍細胞をｉ．ｖ．接種し、そして腫瘍後４、５、６および７日目に、抗ＣＤ４０で処置した。図２は、本発明者らが先に報告したように（Ｆｒｅｎｃｈ， Ｃｈａｎら １９９９； Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２）、抗ＣＤ４０で処置したＢＣＬ−１所持マウスが、リンパ腫に対して防御され、そして長期生存する（１００日を超えて生存する）ことを示す。しかし、ＣＤ７０ ｍＡｂは、ＣＤ４０ ｍＡｂ処置の療法活性を完全に遮断した。対照的に、遮断性４−１ＢＢＬ ｍＡｂを投与されたマウスは、未処置群が１８日であるのに比較して、中央値７３日間で生存し、そして次いで疾患で死亡し、４−１ＢＢ共刺激の非存在下では、長期免疫の発展に何らかの機能障害が示唆された。本発明者らは、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０の両方を投与されたＣＤ４０ ｍＡｂ処置マウスが、対照未処置動物よりわずかに早く腫瘍で死亡する（中央値生存１７日に比較して１４日）ことを一貫して見出し、この併用が、ＣＤ４０ ｍＡｂ療法活性を遮断し、そしてまた、おそらく腫瘍に対する弱い自発的応答も遮断することを示唆する。
【００９１】
［００１０７］本発明者らは、次に、ＣＤ４０ ｍＡｂ処置に対するＣＤ８応答の動力学に対する抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０ ｍＡｂでの遮断の効果を調べた。図３は、ＣＤ４０ ｍＡｂ処置マウスの脾臓におけるＢＣＬ１増殖（図３ａ）およびＣＤ８ Ｔ細胞応答（図３ｂ）に対する４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０ ｍＡｂの影響を示す。ＣＤ４０ ｍＡｂ単独に比較して、抗４−１ＢＢＬの存在下でのＣＤ４０ ｍＡｂでの処置は、ＣＤ８ Ｔ細胞拡大の約２日間の遅延を生じ、脾臓からの腫瘍細胞のより緩慢なクリアランスを生じた。しかし、遅延していても、ＣＤ８細胞の最終数は、抗ＣＤ４０単独と少なくとも同程度に高かった。興味深いことに、これらの実験において、大部分の免疫療法実験で用いる１ｘ１０７細胞ではなく、初期腫瘍用量が５ｘ１０７細胞である場合、ＣＤ４０ ｍＡｂおよび遮断性４−１ＢＢＬ ｍＡｂで処置したマウスは、長期生存し、そして腫瘍の再曝露に対して免疫ができた（結果は未提示）。
【００９２】
［００１０８］対照的に、抗ＣＤ７０ ｍＡｂは、抗ＣＤ４０が誘導する腫瘍細胞の根絶を完全に遮断した。この応答欠如は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞集団が拡大できないことに反映され、そして図２に示す、ＣＤ４０ ｍＡｂが仲介するＢＣＬ１腫瘍の療法を、ＣＤ７０ ｍＡｂが完全に遮断する能力を説明する。この結果は、抗ＣＤ７０／抗ＣＤ２７相互作用の遮断が、療法的応答に対して顕著な影響を有することを立証する。対照的に、４−１ＢＢＬ／４−１ＢＢ相互作用の影響は比較的穏やかであるようである。
【００９３】
［００１０９］抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０の両方が、ＣＤ４０ ｍＡｂが誘導するＣＤ８応答に影響を有することが観察された（未提示）ため、本発明者らは、これらが、腫瘍所持マウスにおいて、抗ＣＤ４０が誘導するＤＣ数および表現型の変化に何らかの影響を有するかどうかをさらに評価した。図４に示すように、抗４−１ＢＢＬまたは抗ＣＤ７０のいずれも、腫瘍所持マウスの抗ＣＤ４０処置後、Ｂ７．１、Ｂ７．２およびＩＣＡＭの発現増加（ａ）、または回収されるＤＣ数増加（ｂ）を阻害しなかった。したがって、これらの共受容体の遮断は、ＤＣ補充に影響を及ぼさず、そしてその活性化に影響を及ぼす可能性は低い。
【００９４】
［００１１０］ＣＤ２７および４−１ＢＢは、ＣＤ４０ ｍＡｂが仲介する抗腫瘍応答のエフェクター段階で作用しない。本発明者らは、ＢＣＬ１腫瘍細胞自体がＣＤ７０および４−１ＢＢＬの両方を発現することを観察していた（図５ａ）ため、そしてまた、ＣＤ７０が活性化Ｔ細胞によっても発現されると報告されている（ごく最近、Ｓｔｅｖｅ Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇによる）ため、本発明者らは次いで、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０がＣＴＬ応答のエフェクター段階に影響を有するかどうかを調べた。腹腔においてＢＣＬ１腫瘍細胞を投与し、そして抗ＣＤ４０ｍＡｂで処置すると、その区画でのＣＤ８応答は、処置８日後にピークとなり、その時点で、回収されるリンパ球のおよそ３０％がＣＤ８＋であり（未処置マウスでは５％）、そして腫瘍を迅速にクリアランスすることが観察された（未公表の観察）。この系を用いて、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＴＬが仲介する殺傷のエフェクター段階を調べた。記載するように、マウスにＢＣＬ１および抗ＣＤ４０ ｍＡｂをｉ．ｐ．投与し、そして次いで８日後、１ｍｇの抗ＣＤ８、抗ＣＤ４、抗ＣＤ７０または抗４−１ＢＢＬ遮断性ｍＡｂ、あるいは対照ＰＢＳとともに抗ＣＤ４０をｉ．ｐ．注射した。５時間後、ＣＴＬターゲットとして、末期ＢＣＬ１所持マウス由来の２ｘ１０７ ＣＦＳＥ標識脾臓細胞をｉ．ｐ．注射した。また、比較として、標識脾臓細胞を未処置マウスに注射した。２４時間後、腹腔細胞を採取し、そしてＣＦＳＥ標識ＢＣＬ１腫瘍細胞の存在に関して分析した。未処置マウスから採取した腹腔細胞には、２２〜２７％のＣＦＳＥ標識腫瘍細胞が含まれた（図５）。対照的に、ＢＣＬ１の抗ＣＤ４０処置を受けたマウスでは、腫瘍細胞が完全に根絶され、この処置の有効性が強調された。予期されるように、抗ＣＤ８ ｍＡｂの注射は、腹腔からのＣＦＳＥ標識腫瘍細胞のクリアランスを遮断した。しかし、抗ＣＤ４、抗４−１ＢＢＬおよび抗ＣＤ７０は、移入された腫瘍細胞のクリアランスにまったく影響を及ぼさなかった。これらの結果は、抗ＣＤ４０処置の５日後、エフェクターとしての、残った腫瘍細胞を除去した後の、ＢＣＬ１所持マウスから採取した脾臓細胞を用いた細胞毒性アッセイにおいて確認され、そしてこの結果を図５ｃに示す。抗４−１ＢＢＬまたは抗ＣＤ７０はいずれも、免疫脾臓細胞の細胞毒性に直接の影響を持たなかった。
【００９５】
［００１１１］４−１ＢＢおよびＣＤ２７を介した直接免疫療法
［００１１２］上記結果は、腫瘍接種およびＣＤ４０ ｍＡｂ処置後に見られる驚くべきＣＴＬ応答が、４−１ＢＢを介する誘発に部分的に依存し、そしてＣＤ２７およびＣＤ７０間の相互作用に完全に依存することを示唆する。したがって、ＣＤ４０を介したアゴニスト活性をショートカットし、そしてこれらの共受容体を直接刺激することが可能であるかを調べるため、本発明者らは次に、ＢＣＬ１リンパ腫に対する、アゴニスト性抗４−１ＢＢまたは抗ＣＤ２７の療法的有効性を調べる。図６に示すように、抗ＣＤ７０ ｍＡｂは、ＢＣＬ１腫瘍を完全に防御し、そして抗ＣＤ４０ ｍＡｂで得た結果と非常に類似の結果を生じた。対照的に、抗４−１ＢＢ ｍＡｂは、この腫瘍に関して穏やかな療法活性を有し、生存をほとんど延長しなかった。
【００９６】
［００１１３］アゴニスト性ＣＤ４０ ｍＡｂは、ヒトでの使用のため、現在研究中の、最もおもしろい試薬の１つである。しばらく前から、単一療法としてでさえ、ネズミモデルにおける、そしてより最近、患者における、腫瘍免疫の誘導を含めて、ある範囲のワクチンセッティングにおいて、抗ＣＤ４０ ｍＡｂが有効性を有することが知られている。例えば、Ｖｏｎｄｅｒｈｅｉｄｅら（２００６）からの最近のデータは、完全ヒトＣＤ４０ ｍＡｂが、ＭＴＤ近くで投与された場合（０．２ｍｇ／ｋｇ）、黒色腫患者の２７％において、ＰＲを送達可能であることを示した。
【００９７】
［００１１４］ＣＤ４０が、免疫系において、特にＤＣなどのＡＰＣの活性化において、非常に重要な役割を果たすことが知られるが、活性化されたＤＣおよび応答するＣＴＬの間の共受容体：リガンド相互作用の役割に関しては、多くが知られていない。大量の証拠によって、ｍＡｂで送達されるものなどの、ＣＤ４０を介した誘発が、ＤＣを活性化し、ＭＨＣ、Ｂ７．１／２、ならびに多様な共受容体およびサイトカインの上方制御を生じて、エフェクターＣＴＬの生成を可能にすることが示される。さらに、適切なＣＤ４０アゴニストを用いると、Ｔヘルパー細胞に対する必要性が置換されることが一般的に見出されており、そして特定の腫瘍によって発現されるヘルパーエピトープが少量であることを考えると、おそらく、このことが、癌セッティングにおけるＣＤ４０アゴニストの成功を説明する。本発明において、本発明者らは、４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０の役割を調べ、そしてＣＴＬ応答を制御する際に、それぞれの受容体、４−１ＢＢおよびＣＤ２７を介したシグナルがいかに重要であるかを示した。さらに、本発明者らは、ＣＤ４０処置が、顕著なＤＣ拡大を促進し、そして広く報告されているように、脾臓ＤＣ上のＩ−ＣＡＭ−１、Ｂ７．１およびＢ７．２発現の増加が、その活性化または抗原提示の「ライセンシング」と一致することを見出した。ＣＤ４０ ｍＡｂが誘導する抗腫瘍応答が、活性化されたＡＰＣによる腫瘍抗原の交差提示のためであることが一般的に認められる（ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏ， Ｂｏｏｎｍａｎら ２００４）。これと一致して、本発明者らは、先に、ＣＤ４０ ｍＡｂ療法が、ＣＤ４０陰性腫瘍で少なくとも部分的に有効であることを示した（Ｆｒｅｎｃｈ， Ｃｈａｎら １９９９）。腫瘍のみを投与されたマウス由来の脾臓ＤＣは、ある度合いの活性化を示し、Ｂ７．１、Ｂ７．２およびＩＣＡＭ−１が部分的に上方制御されていた。しかし、リンパ腫に対する、ＣＤ４０が誘導する応答に対する、抗ＣＤ７０および抗４−１ＢＢＬ両方の明らかな影響（図２）に鑑みて、幾分驚くべきことに、数多くの試みにもかかわらず、抗ＣＤ４０処置後、ＣＤ７０および４−１ＢＢＬの発現において、わずかでそして一過性の増加しか検出されず、そしてこれらでさえも、腫瘍の存在下で抑止された。興味深いことに、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化されたＤＣ上の４−１ＢＢＬ発現もまた、低いことが示された（ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ， Ｓｈａｈｉｎｉａｎら １９９７； Ｆｕｔａｇａｗａ， Ａｋｉｂａら ２００２）が、Ｄｉｅｈｌら（Ｄｉｅｈｌ， ｖａｎ Ｍｉｅｒｌｏら ２００２）は、ｉｎ ｖｉｖｏで、抗ＣＤ４０に応答して、脾臓細胞上で強い発現があることを示した。
【００９８】
［００１１５］ｉｎ ｖｉｖｏで、脾臓ＤＣ上の４−１ＢＢＬおよびＣＤ７０の発現が低いのは、これらの２つのリガンドの一過性発現、またはその受容体４−１ＢＢおよびＣＤ２７が結合することによる連続的な調節を反映する可能性もある。興味深いことに、本発明者らは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＢＭＤＣの処置が、ＣＤ７０発現を促進することを見出しており、これはおそらく、ＢＭＤＣがＣＤ２７と出会わないためである。ＣＤ７０発現は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化されたＤＣ上で示されている（Ｆｕｔａｇａｗａ， Ａｋｉｂａら ２００２； Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ｘｉａｏら ２００３）（Ｔａｒａｂａｎ， Ｒｏｗｌｅｙら ２００２； ＢｕｌｌｏｃｋおよびＹａｇｉｔａ ２００５）が、ＤＣ上のＣＤ７０のｉｎ ｖｉｖｏ発現は、一般的に低く、そして一過性であり（Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ｘｉａｏら ２００３； Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００５）、これはおそらく、恒常的に発現されるＣＤ２７を介したＴ細胞の不適切な活性化を回避するためである（Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ａｒｅｎｓら ２００３）。
【００９９】
［００１１６］ＣＤ７０発現のこの欠如にもかかわらず、４−１ＢＢＬまたはＣＤ７０に対するｍＡｂは、抗腫瘍応答を遮断するのに有効であり、そして後者の場合、阻害は不完全であった。これらの遮断性ｍＡｂは細胞毒性Ｔ細胞の生成を防止するが、脾臓ＤＣの数または活性化には影響がなく、あるいはひとたび生成されたならばＣＤ８ Ｔ細胞の細胞毒性機能にも影響がないため、こうした遮断は、ＣＴＬ刺激レベルで作動するようである。総合すると、これらの研究は、４−１ＢＢおよび特にＣＤ２７が、抗ＣＤ４０ ｍＡｂ処置中のＣＴＬ応答を制御する際に、非常に重要であり、これはＤＣおよび応答性ＣＤ８ Ｔ細胞間の相互作用のレベルで作用する可能性が最も高いことを示す。
【０１００】
［００１１７］ＣＤ４０が誘導する抗リンパ腫応答の発展中のＣＤ８ Ｔ細胞上の４−１ＢＢの発現は、確立されたパターンと一致し（ＶｉｎａｙおよびＫｗｏｎ １９９８； Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ｍｉｔｔｌｅｒら １９９９）、４−１ＢＢは、拡大するＣＤ４０誘導性脾臓ＣＴＬ集団上で迅速に誘導され（図１）、そして次いで、腫瘍細胞根絶と同時に失われたが、これはＣＴＬ集団が１〜２日後に収縮するより前であった（Ｔｕｔｔ， Ｏ'Ｂｒｉｅｎら ２００２）。応答中、４日間に渡って４−１ＢＢの発現が維持され、これはおそらく、連続して抗原が利用可能であるためであり、このことは、持続性感染および移植片拒絶中に見られるものと似ている（Ｔａｎ， Ｈａら ２０００； Ｓｅｏ， Ｐａｒｋら ２００３）。疾患の末期段階の未処置マウスにおいて、本発明者らは、４−１ＢＢ＋ＣＤ８ Ｔ細胞の明らかな集団を同定し、このことは、ＢＣＬ１単独で、弱い、効果のないＴ細胞応答を誘発可能であり、これが次いで、ＣＤ４０ ｍＡｂでの処置によって、有効なレベルにブーストされるという着想を支持する。
【０１０１】
［００１１８］４−１ＢＢがＴ細胞上で誘導され、そしてこれがＴ細胞増殖のための共刺激を提供するという証拠がある（２０）が、４−１ＢＢは、抗アポトーシスタンパク質の発現を誘導することによって（Ｌｅｅ， Ｐａｒｋら ２００２）、細胞生存に主に影響を及ぼすと考えられる（Ｔａｋａｈａｓｈｉ， Ｍｉｔｔｌｅｒら １９９９； Ｌｅｅ， Ｐａｒｋら ２００２）。４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ相互作用の遮断は、移植片生存増進を生じることが示されており、同種反応性Ｔ細胞の拡大の阻害およびＣＴＬ活性の減少が伴う、同種移植片状況で、ＣＴＬ応答の発展における４−１ＢＢの重要性が立証されている（Ｃｈｏ， Ｋｗｏｎら ２００４）が、４−１ＢＢ−／−および４−１ＢＢＬ−／−マウスにおける研究は、ウイルス感染に対する一次ＣＴＬ応答の比較的重要でない機能障害しか示さず（Ｔａｎ， Ｗｈｉｔｍｉｒｅら ２０００； Ｂｅｒｔｒａｍ， Ｄａｗｉｃｋｉら ２００４）、再曝露後のリコール応答に対してより顕著な影響があった（ＤａｗｉｃｋｉおよびＷａｔｔｓ ２００４）。重要なことに、ｉｎ ｖｉｖｏでのアゴニスト性抗４−１ＢＢ ｍＡｂを用いた研究は、これらが、ほとんど免疫原性でない腫瘍モデルのある範囲で、有効な療法を促進可能であり（Ｗｉｌｃｏｘ， Ｆｌｉｅｓら ２００２）、そして４−１ＢＢシグナル伝達が、主にＣＤ８応答中に重要である（Ｓｈｕｆｏｒｄ， Ｋｌｕｓｓｍａｎら １９９７）ことを示した。
【０１０２】
［００１１９］４−１ＢＢとは対照的に、ＣＤ２７は、未処置Ｔ細胞上で恒常的に発現される（Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ， Ｂｌｏｍら １９９３）。腫瘍の抗ＣＤ４０処置後、本発明者らは、拡大している脾臓ＣＤ８＋細胞において、ＣＤ２７高および低集団（図１ｃ）を検出可能であり、これはおそらく、それぞれ、ＣＤ２７の一過性上方制御でプライミングされた細胞（Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎ， Ｂｌｏｍら １９９３； Ｌｅｎｓ， ｄｅ Ｊｏｎｇら １９９６）およびＫａｅｃｈら（Ｋａｅｃｈ， Ｔａｎら ２００３）に記載されるような老化末期エフェクター集団に相当する。ＤＣ上のリガンド、ＣＤ７０の発現は厳しく制御され、したがって、Ｔ細胞の不適切な活性化を防止する（Ｔｅｓｓｅｌａａｒ， Ａｒｅｎｓら ２００３）。しかし、最近、ＣＤ７０によるＣＤ２７の恒常的な誘発が、ウイルスまたは腫瘍曝露に応答したＣＤ８＋細胞の拡大および活性の両方を増進することが示された（Ａｒｅｎｓ， Ｓｃｈｅｐｅｒｓら ２００４）。本発明者らは、最近、可溶性ＣＤ７０が、ｉｎ ｖｉｖｏで、強い一次および二次ＣＴＬ応答を促進することを示した（ＲｏｗｌｅｙおよびＡｌ−Ｓｈａｍｋｈａｎｉ ２００４）。逆に、ＣＤ２７不全マウスは、インフルエンザウイルスに対して、ＣＤ８＋応答機能障害を発展させ、そして４−１ＢＢ同様、ＣＤ２７は、一次応答中、活性化ＣＤ８＋ Ｔ細胞の生存を促進するようである（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎら ２０００； Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００３）が、４−１ＢＢとは異なり、ＣＤ４＋応答においても重要であるようである。ＣＤ２７不全マウスはまた、再曝露に対して、損なわれた応答を示す（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎら ２０００）。
【０１０３】
［００１２０］Ｔ細胞拡大が、ＤＣ上のリガンドおよびＴ細胞上の共刺激受容体間の共刺激を必要とするというよく確立された着想に加えて、他の細胞種上にこれらの分子が検出されることから、Ｔ細胞応答中の相互作用のより複雑なネットワークに関する役割が示唆される。例えば、ＣＤ７０は活性化されたＴ細胞上に検出され（Ｂｏｒｓｔ， Ｈｅｎｄｒｉｋｓら ２００５； Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００５）、そして４−１ＢＢは、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏの両方で、活性化されたＤＣ上で検出されている。本発明者らは、本発明者らの研究において、活性化されたＴ細胞上でＣＤ７０を検出不能であったが、応答経過中、活性化されたＤＣ上で、４−１ＢＢが明らかに検出された（結果は未提示）。
【０１０４】
［００１２１］最後に、本発明者らは、マウスリンパ腫の療法剤としてアゴニスト性ＣＤ２７ ｍＡｂを用いるＣＤ７０を介した誘発の相対的な重要性を確認した。本明細書のデータは、腫瘍免疫を発展させる際に、ＣＤ２７ ｍＡｂが、ＣＤ４０ ｍＡｂと同程度に有効であることを示す。進行中の研究では、おそらくＴ細胞を直接刺激することによって作用する、このｍＡｂの作用機構を調べている。ＯＶＡおよびＢＣＬ１リンパ腫モデルの両方において、抗ＣＤ４０が誘導するＣＤ８ Ｔ細胞応答が、ＣＤ７０／ＣＤ２７相互作用に完全に依存していることは、ウイルスモデルを用いた研究におけるＣＤ７０：ＣＤ２７共刺激経路の報告される効果と一致する。ＣＴＬ応答の発展における４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ相互作用の重要性は、４−１ＢＢ／４−１ＢＢＬ相互作用の遮断が移植片生存増進を生じる、同種移植状況において立証されている（ＤｅＢｅｎｅｄｅｔｔｅ， Ｗｅｎら １９９９； Ｃｈｏ， Ｋｗｏｎら ２００４）が、４−１ＢＢ−／−および４−１ＢＢＬ−／−マウスにおける研究は、ＬＣＭＶおよびインフルエンザ感染に対する一次ＣＴＬ応答の比較的重要でない機能障害しか示さなかった（Ｂｅｒｔｒａｍ， Ｄａｗｉｃｋｉら ２００４）（Ｔａｎ， Ｗｈｉｔｍｉｒｅら １９９９）（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００５）。４−１ＢＢＬ−／−マウスが、脂質化ＬＣＭＶペプチドでの免疫後、応答により重度の欠損を示したことが観察され（Ｔａｎ， Ｗｈｉｔｍｉｒｅら ２０００）、このことは、抗原性刺激が弱いかまたは限定されている場合は、４−１ＢＢ共刺激がより重要であることを示唆した。対照的に、ＣＤ２７不全マウスは、肺および流入領域リンパ節において、インフルエンザウイルスに対して損なわれたＣＤ８＋応答を発展させるが、興味深いことに、この系において、脾臓における抗ウイルスＣＤ８細胞拡大は、比較的影響を受けなかった（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｘｉａｏら ２００３）。４−１ＢＢおよびＣＤ２７の両方が不全であるマウスは、ウイルス再曝露に対する二次応答の機能障害を示すことが示された（Ｈｅｎｄｒｉｋｓ， Ｇｒａｖｅｓｔｅｉｎら ２０００）（ＤａｗｉｃｋｉおよびＷａｔｔｓ ２００４）。本発明者らの実験は、抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂの存在が、抗ＣＤ４０処置後の腫瘍の最初のクリアランスを防止しないことを示したが、本発明者らの免疫療法実験において、抗ＣＤ４０および抗４−１ＢＢＬ ｍＡｂを投与された動物は、長期生存せず（図２）、このことは、長期免疫発展において、何らかの機能障害があることを示唆する。要約すると、上に列挙されるこれらの結果、およびこれに基づく根底にある結論は、アゴニスト性ＣＤ２７抗体、例えば相乗的アゴニスト併用を用いた単一および併用療法が、Ｔｈ１免疫およびＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖の新規手段を提供し、そしてこれを、癌、感染、炎症、アレルギーおよび自己免疫の治療に、そしてワクチンの有効性を促進するために使用可能であることを示唆する。
【０１０５】
［００１２２］本発明は、上記に列挙される態様に限定されず、そして例示する態様、および以下の請求の範囲内に含まれるすべての修飾に対して、権利が確保されることが理解されるものとする。
【０１０６】
［００１２３］本明細書に引用する学術雑誌、特許、および他の刊行物への多様な言及は、当該技術分野の最新技術を含み、そしてこれらは、完全に示されるかのように、本明細書に援用される。
【０１０７】
【化１−１】
【０１０８】
【化１−２】
【０１０９】
【化１−３】
【０１１０】
【化１−４】
【０１１１】
【化１−５】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ヒトＣＤ２７の細胞外部分を認識する、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項３】
前記抗体の結合が、ヒトＣＤ７０またはＣＤ７０関連リガンドによって認識可能に影響を受けない、請求項１のアゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体。
【請求項４】
前記抗体がＣＤ７０と競合する、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項５】
場合によってエフェクター部分に付着していてもよい、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）抗体および一本鎖抗体より選択される、アゴニスト性抗体。
【請求項６】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ定常ドメインより選択される、少なくとも１つのヒト定常ドメインを含有する、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項７】
抗体が、抗体エフェクター系への結合を修飾する（増進するかまたは減少させる）よう操作されている、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項８】
抗体が、Ｆｃグリコシル化、ＦｃＲへの結合、ＦｃＲｎへの結合、および補体系タンパク質との相互作用の少なくとも１つを改変するよう修飾されている、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項９】
ヒトにおけるＴ細胞免疫応答を促進する、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項１０】
Ｔｈ１免疫を促進する、請求項９のアゴニスト性抗体。
【請求項１１】
免疫を促進する必要がある被験体において、免疫を促進する方法であって、少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト性抗体または非抗体ＣＤ２７アゴニストを、増進された免疫が療法的に望ましい状態または治療を伴う被験体に、免疫を促進するのに有効な量で投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１２】
Ｔｈ１免疫を増進する、請求項１１の方法。
【請求項１３】
前記ＣＤ２７アゴニストが、抗原特異的Ｔ細胞の増殖または生存を促進する、請求項１１の方法。
【請求項１４】
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋ Ｔ細胞である、請求項１３の方法。
【請求項１５】
前記Ｔ細胞が未処置（ｎａｉｖｅ）Ｃｄ８ Ｔ細胞、ＣＤ８＋エフェクター細胞、またはメモリー細胞、あるいはｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大されて、そして次いでヒトに移植されたＴ細胞（遺伝子操作細胞を含む）である、請求項１３の方法。
【請求項１６】
抗原特異的メモリーＴ細胞の生成を生じる、請求項１３の方法。
【請求項１７】
ＣＤ２７アゴニストが、少なくとも１つの抗原に付随して投与される、請求項１１の方法。
【請求項１８】
ＣＤ２７アゴニストが、ヒトＣＤ２７に特異的に結合する抗体または抗体断片である、請求項１１の方法。
【請求項１９】
ＣＤ２７アゴニストが、抗原依存性方式で、Ｔ細胞の拡大を駆動可能な抗体または抗体断片である、請求項１１の方法。
【請求項２０】
前記抗体が、ヒト抗体、霊長類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体および一本鎖抗体より選択される、請求項１９の方法。
【請求項２１】
前記抗体が、抗体エフェクター系への結合を修飾する（増進するかまたは減少させる）よう操作されている、請求項１９における方法。
【請求項２２】
前記抗体が（ｉ）Ｆｃグリコシル化を欠くかまたは修飾されたＦｃグリコシル化を伴う抗体、（ｉｉ）突然変異Ｆｃアミノ酸を含む抗体、（ｉｉｉ）選択されたＦｃＲへの増進されたまたは減少した結合を所持する抗体、あるいは前記修飾の組み合わせを含む抗体を含む、請求項２１の方法。
【請求項２３】
前記抗体が、ＦｃＲｎ（Ｂｒａｍｂｅｌｌ受容体）への結合に干渉することによって、抗体半減期を増進するかまたは減少させる修飾を含有する、請求項２２の方法。
【請求項２４】
前記抗体が、（ｉ）補体系のタンパク質との相互作用を減少させるかまたは増進する修飾、あるいは（ｉｉ）望ましくない毒性の減少より選択される修飾を含む、請求項２２の方法。
【請求項２５】
望ましくない毒性がサイトカインの望ましくない放出を含む、請求項２４の方法。
【請求項２６】
抗体が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥ定常ドメインの少なくとも１つを含有する、請求項１０の方法。
【請求項２７】
抗体が：真核細胞においてグリコシル化されている、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）ＩｇＧ１抗体、損なわれていないＩｇＧ２抗体、損なわれていないＩｇＧ３抗体、損なわれていないＩｇＧ４抗体、損なわれていないＩｇＭ抗体、損なわれていないＩｇＡ１抗体、損なわれていないＩｇＡ２抗体、損なわれていない分泌性ＩｇＡ抗体、損なわれていないＩｇＤ抗体、損なわれていないＩｇＥ抗体からなる群より選択される、損なわれていない抗体である、請求項１９の方法。
【請求項２８】
癌、感染性疾患、炎症状態、自己免疫疾患、およびアレルギー状態より選択される状態を治療するのに用いられる、請求項１１の方法。
【請求項２９】
感染性疾患が、細菌、ウイルス、マイコバクテリウム、真菌、酵母または寄生虫によって引き起こされる、請求項２８の方法。
【請求項３０】
寄生虫が、バベシア属（Ｂａｂｅｓｉａ）種、エントアメーバ属（Ｅｎｔｏｍｏｅｂａ）種、ジアルジア属（Ｇｉａｒｄａ）種、プラスモジウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種、リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）種、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｅ）種、トキソプラズマ属（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）種、扁平動物および回虫寄生虫より選択される、請求項２９の方法。
【請求項３１】
細菌が、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ストレプトバチルス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、およびアクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）より選択される、請求項２９の方法。
【請求項３２】
ウイルスが、レトロウイルス、ピコルナウイルス、エンテロウイルス、肝炎ウイルス、ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス、カリシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ビマウイルス科（Ｂｉｍａｖｉｒｉｄａｅ）、パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、イリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、および未分類ウイルスより選択される、請求項２９の方法。
【請求項３３】
真菌が、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、コクシジオイデス属（Ｃｏｃｃｉｄｏｉｄｅｓ）、ブラストミセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）、ヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、ノカルジア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）、およびニューモシスチス属（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｔｉｓ）より選択される、請求項２９の方法。
【請求項３４】
癌が、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、乳癌、前立腺癌、結腸癌、骨癌、膵臓癌、胃癌、肝癌、子宮頸癌、膀胱癌、精巣癌、腎臓癌、肺癌（小細胞および大細胞）、脳癌、網膜芽細胞種、食道癌、目の癌、頭部および頸部の癌、子宮内膜癌、喉頭癌、黒色腫、神経芽腫、神経芽腫、甲状腺癌、横紋筋肉腫、口腔癌、子宮癌、卵巣癌、肉腫、結合組織癌および皮膚癌より選択される、請求項２８の方法。
【請求項３５】
自己免疫疾患が、多発性硬化症、糖尿病、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ＳＬＥ、重症筋無力症、グッドパスチャー症候群、ＩＴＰ、グレーブス病、溶血性貧血、関節リウマチ、橋本甲状腺炎、強皮症、およびアジソン病より選択される、請求項２８の方法。
【請求項３６】
前記ＣＤ２７アゴニストが、被験体において投与され、該アゴニストが、ワクチンによって誘発される免疫応答を増進するために、ワクチンとともに投与される、請求項１１の方法。
【請求項３７】
前記ワクチンが抗腫瘍ワクチンである、請求項３６の方法。
【請求項３８】
前記ワクチンが、感染性病原体に対して免疫を与える、請求項３６の方法。
【請求項３９】
感染性病原体が、細菌、ウイルス、酵母、真菌、マイコバクテリウム、または寄生虫より選択される、請求項３８の方法。
【請求項４０】
ＣＤ２７アゴニストが、少なくとも１つの抗原またはアレルゲンと組み合わせて投与される、請求項１１の方法。
【請求項４１】
ＣＤ２７アゴニストが、ワクチン組成物の前に、後に、または該組成物と組み合わせて投与される、請求項３６の方法。
【請求項４２】
ＣＤ２７アゴニストが、併用組成物として、ワクチンと併用される、請求項４１の方法。
【請求項４３】
ワクチンが、肝炎ウイルス、ＨＩＶ、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス、風疹ウイルス、脳炎ウイルス、狂犬病ウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、ポリオーマウイルス、ＲＳＶ、アデノウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、パラインフルエンザウイルス、出血熱ウイルス、ポックスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、レオウイルス、オルビウイルス、ロタウイルス、パルボウイルス、アフリカブタ熱ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、およびノーウォークウイルスより選択されるウイルスに対する免疫を与えるウイルスワクチンである、請求項３６の方法。
【請求項４４】
ワクチンが、パスツレラ属、エシェリキア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、ヘリコバクター属、マイコバクテリウム属、カンピロバクター属、エンテロコッカス属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、トレポネーマ属、バクテロイデス属、フソバクテリウム属、フソバクテリウム属、ナイセリア属、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、ストレプトバチルス属、レプトスピラ属、ヘモフィルス属、ボレリア属（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、エリシペロスリクス属（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ）、およびリステリア属より選択される細菌に対する免疫を与える細菌ワクチンである、請求項３６の方法。
【請求項４５】
ワクチンが、バベシア属、エントアメーバ属、ジアルジア属、リーシュマニア属、プラスモジウム属、トキソプラズマ属、トリパノソーマ属、回虫および扁平動物より選択される寄生虫に特異的である、請求項３６の方法。
【請求項４６】
ＣＤ２７アゴニスト性抗体が、ＣＤ８ Ｔ細胞増殖増進、生存および／または細胞毒性リンパ球溶解性（ＣＴＬ）応答を誘発する必要がある被験体において、これらを誘発する、請求項１１の方法。
【請求項４７】
前記ＣＤ２７アゴニストが、別の療法部分と併用投与される、請求項１１〜３６のいずれか一項記載の方法。
【請求項４８】
前記の他の部分が、別の免疫アゴニスト、抗体、サイトカイン、化学療法剤、放射療法剤、免疫調節剤および免疫刺激剤からなる群より選択される、請求項４７の方法。
【請求項４９】
第二の免疫アゴニストおよび所望のターゲットに特異的な抗原と一緒の、ＣＤ２７アゴニストの投与を含む、請求項４８の方法。
【請求項５０】
ターゲットが腫瘍である、請求項４９の方法。
【請求項５１】
抗原が、腫瘍関連ペプチド（ＴＡＡ）、腫瘍溶解物、アポトーシス性腫瘍細胞、および腫瘍抗原所持樹状細胞からなる群より選択される、請求項５０の方法。
【請求項５２】
腫瘍ターゲットが黒色腫であり、そして併用が、ターゲット抗原を発現する腫瘍細胞に対して誘発される免疫応答を増進する（ブーストする）、請求項５１の方法。
【請求項５３】
他の部分が、免疫刺激性抗体またはタンパク質（正の共刺激剤）、負の共刺激剤として作用する免疫抗体またはタンパク質、Ｔ細胞への阻害性シグナルを遮断する抗体または他の部分、および腫瘍細胞または血管系または間質に結合する抗体からなる群より選択される、請求項４７の方法。
【請求項５４】
他の部分が、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗Ｂ７．１抗体、抗Ｂ７．２抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２８抗体、制御性Ｔ細胞を枯渇させるかまたは遮断する部分、およびサイトカインからなる群より選択される、請求項４７の方法。
【請求項５５】
他の部分が、アゴニスト性ＣＤ４０抗体またはアゴニスト性ＯＸ４０抗体またはアゴニスト性４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体である、請求項５４の方法。
【請求項５６】
アゴニスト性ＣＤ４０抗体がＬＯＢ７／４である、請求項５５の方法。
【請求項５７】
Ｔ細胞応答増進を付加的にまたは相乗的に誘発するための方法であって：
付加的にまたは相乗的に有効な量の（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、ならびに（ｉｉ）ＣＤ４０アゴニスト、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体、ＯＸ−４０抗体、ＣＤ２８抗体、およびＣＴＬＡ−４抗体より選択される少なくとも１つのアゴニスト
を、その必要がある被験体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項５８】
免疫応答がＴｈ１免疫応答である、請求項５７の方法。
【請求項５９】
ＣＤ４０アゴニストが、ＣＤ４０アゴニスト性抗体または可溶性ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質または可溶性ＣＤ４０断片あるいはそのコンジュゲートである、請求項５７の方法。
【請求項６０】
ＣＤ４０アゴニストが、ヒトＣＤ４０に特異的に結合する、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項５９の方法。
【請求項６１】
前記抗体が、ＳＣ２６、ＣＰ−８７０，８９３、ＬＯＢ７／４またはその誘導体、あるいは同じエピトープ特異性を所持する抗体である、請求項５９の方法。
【請求項６２】
ＣＤ２７アゴニストが、抗ＣＤ２７アゴニスト性抗体または可溶性ＣＤ７０融合タンパク質あるいはその可溶性断片または可溶性コンジュゲートである、請求項１１の方法。
【請求項６３】
腫瘍抗原、細菌抗原、ウイルス抗原、寄生虫抗原、アレルゲン、および自己抗原より選択される抗原の投与をさらに含む、請求項６２の方法。
【請求項６４】
アゴニスト性ＣＤ２７抗体が、損なわれていなくてもまたは修飾されていてもよい、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項５１の方法。
【請求項６５】
ＣＤ２７アゴニストまたは他のアゴニストが、エフェクター部分に付着している、請求項５８の方法。
【請求項６６】
エフェクター部分が毒素、薬剤または放射性核種である、請求項６５の方法。
【請求項６７】
ＣＤ２７アゴニストおよびＣＤ４０アゴニストが一緒にまたは別個に投与される、請求項５８の方法。
【請求項６８】
ＣＤ４０およびＣＤ２７アゴニストが、同じ組成物中に含有される、請求項６７の方法。
【請求項６９】
どちらかまたは両方のアゴニストがアゴニスト性抗体である、請求項６８の方法。
【請求項７０】
ＣＤ４０アゴニストが可溶性ＣＤ４０Ｌである、請求項６７の方法。
【請求項７１】
ＣＤ４０アゴニストおよびＣＤ２７アゴニストが、互いに別個に投与され、そして投与がどちらの順でも達成可能である、請求項６７の方法。
【請求項７２】
前記アゴニストが、互いに１日以内に投与される、請求項６７の方法。
【請求項７３】
前記アゴニストが、互いに８時間以内に投与される、請求項７１の方法。
【請求項７４】
前記アゴニストが、互いに１〜４時間以内に投与される、請求項７１の方法。
【請求項７５】
ＣＤ２７アゴニストが最初に投与される、請求項６７の方法。
【請求項７６】
ＣＤ４０アゴニストが最初に投与される、請求項６７の方法。
【請求項７７】
いずれかまたは両方のアゴニストがアゴニスト性抗体である、請求項６７の方法。
【請求項７８】
４−１ＢＢアゴニストの投与をさらに含む、請求項６７の方法。
【請求項７９】
前記アゴニストが抗体である、請求項７８の方法。
【請求項８０】
前記抗体が、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫をさらに増強する、請求項７９の方法。
【請求項８１】
ヒト癌を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項８２】
ＣＤ４０を発現している癌を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項８３】
前記癌が固形腫瘍を含む、請求項８１の方法。
【請求項８４】
前記癌が：乳癌、肝癌、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、腎臓癌、黒色腫、卵巣癌およびリンパ腫からなる群より選択される、請求項８１の方法。
【請求項８５】
前記リンパ腫が非ホジキンリンパ腫である、請求項７３の方法。
【請求項８６】
ＣＤ４０アゴニストが、キメラ、ヒトまたはヒト化抗ヒトＣＤ４０抗体である、請求項７０の方法。
【請求項８７】
投与される抗体が、ＬＯＢ７／４またはそのヒト化変異体を含む、請求項８６の方法。
【請求項８８】
治療される癌が非ホジキンリンパ腫である、請求項８１の方法。
【請求項８９】
治療される癌が腎臓癌である、請求項８１の方法。
【請求項９０】
前記療法が、少なくとも１つの化学療法剤をさらに含む、請求項７０の方法。
【請求項９１】
前記ＣＤ２７アンタゴニストが、少なくとも１つのサイトカインと併用して投与される、請求項１１の方法。
【請求項９２】
前記サイトカインが、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子またはコロニー刺激因子である、請求項９１の方法。
【請求項９３】
前記アゴニストが、ヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖定常領域を含むアゴニスト性抗体を含む、請求項１１の方法。
【請求項９４】
前記免疫グロブリンが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＡからなる群より選択される、請求項９３の方法。
【請求項９５】
自己免疫疾患、炎症状態、またはアレルギー状態を伴う被験体を治療するために用いられる、請求項５２の方法。
【請求項９６】
自己免疫疾患を治療するために用いられる、請求項８０の方法。
【請求項９７】
炎症状態を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項９８】
アレルギー状態を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項９９】
感染状態を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項１００】
ヒトにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏで、ＣＴＬ免疫応答およびＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖を増進する際に使用するために適応した、付加的または相乗的アゴニスト併用であって、相乗的に有効な量の（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、および（ｉｉ）少なくとも１つの抗ＣＤ４０、ＯＸ−４０、４−１ＢＢまたはＣＴＬＡ−４アゴニスト性抗体を含む、前記併用。
【請求項１０１】
ＣＤ４０アゴニストが、アゴニスト性ＣＤ４０抗体または可溶性ＣＤ４０Ｌ、断片、あるいは含有融合タンパク質である、請求項１００の相乗的アゴニスト併用。
【請求項１０２】
アゴニスト性抗体が、キメラ、ヒト、ヒト化、または別の方式で遺伝子操作された抗体である、請求項１００の相乗的アゴニスト併用。
【請求項１０３】
ＣＤ２７アゴニストがアゴニスト性ＣＤ２７抗体である、請求項１００の相乗的アゴニスト併用。
【請求項１０４】
ＣＤ２７抗体が、キメラ、ヒト、ヒト化、または別の方式で遺伝子操作された抗体である、請求項１０３の相乗的アゴニスト併用。
【請求項１】
アゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体またはその抗原結合性断片。
【請求項２】
ヒトＣＤ２７の細胞外部分を認識する、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項３】
前記抗体の結合が、ヒトＣＤ７０またはＣＤ７０関連リガンドによって認識可能に影響を受けない、請求項１のアゴニスト性抗ヒトＣＤ２７抗体。
【請求項４】
前記抗体がＣＤ７０と競合する、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項５】
場合によってエフェクター部分に付着していてもよい、ヒト抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二重特異性抗体、霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）抗体および一本鎖抗体より選択される、アゴニスト性抗体。
【請求項６】
ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥ定常ドメインより選択される、少なくとも１つのヒト定常ドメインを含有する、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項７】
抗体が、抗体エフェクター系への結合を修飾する（増進するかまたは減少させる）よう操作されている、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項８】
抗体が、Ｆｃグリコシル化、ＦｃＲへの結合、ＦｃＲｎへの結合、および補体系タンパク質との相互作用の少なくとも１つを改変するよう修飾されている、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項９】
ヒトにおけるＴ細胞免疫応答を促進する、請求項１のアゴニスト性抗体。
【請求項１０】
Ｔｈ１免疫を促進する、請求項９のアゴニスト性抗体。
【請求項１１】
免疫を促進する必要がある被験体において、免疫を促進する方法であって、少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト性抗体または非抗体ＣＤ２７アゴニストを、増進された免疫が療法的に望ましい状態または治療を伴う被験体に、免疫を促進するのに有効な量で投与する工程を含む、前記方法。
【請求項１２】
Ｔｈ１免疫を増進する、請求項１１の方法。
【請求項１３】
前記ＣＤ２７アゴニストが、抗原特異的Ｔ細胞の増殖または生存を促進する、請求項１１の方法。
【請求項１４】
前記Ｔ細胞がＣＤ８＋ Ｔ細胞である、請求項１３の方法。
【請求項１５】
前記Ｔ細胞が未処置（ｎａｉｖｅ）Ｃｄ８ Ｔ細胞、ＣＤ８＋エフェクター細胞、またはメモリー細胞、あるいはｉｎ ｖｉｔｒｏで拡大されて、そして次いでヒトに移植されたＴ細胞（遺伝子操作細胞を含む）である、請求項１３の方法。
【請求項１６】
抗原特異的メモリーＴ細胞の生成を生じる、請求項１３の方法。
【請求項１７】
ＣＤ２７アゴニストが、少なくとも１つの抗原に付随して投与される、請求項１１の方法。
【請求項１８】
ＣＤ２７アゴニストが、ヒトＣＤ２７に特異的に結合する抗体または抗体断片である、請求項１１の方法。
【請求項１９】
ＣＤ２７アゴニストが、抗原依存性方式で、Ｔ細胞の拡大を駆動可能な抗体または抗体断片である、請求項１１の方法。
【請求項２０】
前記抗体が、ヒト抗体、霊長類抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、霊長類化抗体および一本鎖抗体より選択される、請求項１９の方法。
【請求項２１】
前記抗体が、抗体エフェクター系への結合を修飾する（増進するかまたは減少させる）よう操作されている、請求項１９における方法。
【請求項２２】
前記抗体が（ｉ）Ｆｃグリコシル化を欠くかまたは修飾されたＦｃグリコシル化を伴う抗体、（ｉｉ）突然変異Ｆｃアミノ酸を含む抗体、（ｉｉｉ）選択されたＦｃＲへの増進されたまたは減少した結合を所持する抗体、あるいは前記修飾の組み合わせを含む抗体を含む、請求項２１の方法。
【請求項２３】
前記抗体が、ＦｃＲｎ（Ｂｒａｍｂｅｌｌ受容体）への結合に干渉することによって、抗体半減期を増進するかまたは減少させる修飾を含有する、請求項２２の方法。
【請求項２４】
前記抗体が、（ｉ）補体系のタンパク質との相互作用を減少させるかまたは増進する修飾、あるいは（ｉｉ）望ましくない毒性の減少より選択される修飾を含む、請求項２２の方法。
【請求項２５】
望ましくない毒性がサイトカインの望ましくない放出を含む、請求項２４の方法。
【請求項２６】
抗体が、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥ定常ドメインの少なくとも１つを含有する、請求項１０の方法。
【請求項２７】
抗体が：真核細胞においてグリコシル化されている、損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）ＩｇＧ１抗体、損なわれていないＩｇＧ２抗体、損なわれていないＩｇＧ３抗体、損なわれていないＩｇＧ４抗体、損なわれていないＩｇＭ抗体、損なわれていないＩｇＡ１抗体、損なわれていないＩｇＡ２抗体、損なわれていない分泌性ＩｇＡ抗体、損なわれていないＩｇＤ抗体、損なわれていないＩｇＥ抗体からなる群より選択される、損なわれていない抗体である、請求項１９の方法。
【請求項２８】
癌、感染性疾患、炎症状態、自己免疫疾患、およびアレルギー状態より選択される状態を治療するのに用いられる、請求項１１の方法。
【請求項２９】
感染性疾患が、細菌、ウイルス、マイコバクテリウム、真菌、酵母または寄生虫によって引き起こされる、請求項２８の方法。
【請求項３０】
寄生虫が、バベシア属（Ｂａｂｅｓｉａ）種、エントアメーバ属（Ｅｎｔｏｍｏｅｂａ）種、ジアルジア属（Ｇｉａｒｄａ）種、プラスモジウム属（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ）種、リーシュマニア属（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）種、トリパノソーマ属（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍｅ）種、トキソプラズマ属（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ）種、扁平動物および回虫寄生虫より選択される、請求項２９の方法。
【請求項３１】
細菌が、エシェリキア属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、クレブシエラ属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）、ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｏｂａｃｔｅｒ）、リステリア属（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、コリネバクテリウム属（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、ストレプトバチルス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、トレポネーマ属（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ）、レプトスピラ属（Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）、リケッチア属（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ）、およびアクチノミセス属（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）より選択される、請求項２９の方法。
【請求項３２】
ウイルスが、レトロウイルス、ピコルナウイルス、エンテロウイルス、肝炎ウイルス、ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス、カリシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）、パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、オルトミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ビマウイルス科（Ｂｉｍａｖｉｒｉｄａｅ）、パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｖｉｒｉｄａｅ）、イリドウイルス科（Ｉｒｉｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、および未分類ウイルスより選択される、請求項２９の方法。
【請求項３３】
真菌が、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、コクシジオイデス属（Ｃｏｃｃｉｄｏｉｄｅｓ）、ブラストミセス属（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ）、ヒストプラズマ属（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ）、クラミジア属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）、ノカルジア属（Ｎｏｃａｒｄｉａ）、およびニューモシスチス属（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｔｉｓ）より選択される、請求項２９の方法。
【請求項３４】
癌が、リンパ腫、白血病、慢性リンパ球性白血病、乳癌、前立腺癌、結腸癌、骨癌、膵臓癌、胃癌、肝癌、子宮頸癌、膀胱癌、精巣癌、腎臓癌、肺癌（小細胞および大細胞）、脳癌、網膜芽細胞種、食道癌、目の癌、頭部および頸部の癌、子宮内膜癌、喉頭癌、黒色腫、神経芽腫、神経芽腫、甲状腺癌、横紋筋肉腫、口腔癌、子宮癌、卵巣癌、肉腫、結合組織癌および皮膚癌より選択される、請求項２８の方法。
【請求項３５】
自己免疫疾患が、多発性硬化症、糖尿病、乾癬、クローン病、炎症性腸疾患、ＳＬＥ、重症筋無力症、グッドパスチャー症候群、ＩＴＰ、グレーブス病、溶血性貧血、関節リウマチ、橋本甲状腺炎、強皮症、およびアジソン病より選択される、請求項２８の方法。
【請求項３６】
前記ＣＤ２７アゴニストが、被験体において投与され、該アゴニストが、ワクチンによって誘発される免疫応答を増進するために、ワクチンとともに投与される、請求項１１の方法。
【請求項３７】
前記ワクチンが抗腫瘍ワクチンである、請求項３６の方法。
【請求項３８】
前記ワクチンが、感染性病原体に対して免疫を与える、請求項３６の方法。
【請求項３９】
感染性病原体が、細菌、ウイルス、酵母、真菌、マイコバクテリウム、または寄生虫より選択される、請求項３８の方法。
【請求項４０】
ＣＤ２７アゴニストが、少なくとも１つの抗原またはアレルゲンと組み合わせて投与される、請求項１１の方法。
【請求項４１】
ＣＤ２７アゴニストが、ワクチン組成物の前に、後に、または該組成物と組み合わせて投与される、請求項３６の方法。
【請求項４２】
ＣＤ２７アゴニストが、併用組成物として、ワクチンと併用される、請求項４１の方法。
【請求項４３】
ワクチンが、肝炎ウイルス、ＨＩＶ、ピコルナウイルス、ポリオウイルス、エンテロウイルス、ヒト・コクサッキーウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス、風疹ウイルス、脳炎ウイルス、狂犬病ウイルス、ヘルペスウイルス、パピローマウイルス、ポリオーマウイルス、ＲＳＶ、アデノウイルス、黄熱病ウイルス、デングウイルス、パラインフルエンザウイルス、出血熱ウイルス、ポックスウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、パラインフルエンザウイルス、レオウイルス、オルビウイルス、ロタウイルス、パルボウイルス、アフリカブタ熱ウイルス、麻疹ウイルス、ムンプスウイルス、およびノーウォークウイルスより選択されるウイルスに対する免疫を与えるウイルスワクチンである、請求項３６の方法。
【請求項４４】
ワクチンが、パスツレラ属、エシェリキア属、スタフィロコッカス属、ストレプトコッカス属、サルモネラ属、ヘリコバクター属、マイコバクテリウム属、カンピロバクター属、エンテロコッカス属、クロストリジウム属、コリネバクテリウム属、トレポネーマ属、バクテロイデス属、フソバクテリウム属、フソバクテリウム属、ナイセリア属、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）、エンテロバクター属（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ）、ストレプトバチルス属、レプトスピラ属、ヘモフィルス属、ボレリア属（Ｂｏｒｒｅｌｉａ）、レジオネラ属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ）、エリシペロスリクス属（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ）、およびリステリア属より選択される細菌に対する免疫を与える細菌ワクチンである、請求項３６の方法。
【請求項４５】
ワクチンが、バベシア属、エントアメーバ属、ジアルジア属、リーシュマニア属、プラスモジウム属、トキソプラズマ属、トリパノソーマ属、回虫および扁平動物より選択される寄生虫に特異的である、請求項３６の方法。
【請求項４６】
ＣＤ２７アゴニスト性抗体が、ＣＤ８ Ｔ細胞増殖増進、生存および／または細胞毒性リンパ球溶解性（ＣＴＬ）応答を誘発する必要がある被験体において、これらを誘発する、請求項１１の方法。
【請求項４７】
前記ＣＤ２７アゴニストが、別の療法部分と併用投与される、請求項１１〜３６のいずれか一項記載の方法。
【請求項４８】
前記の他の部分が、別の免疫アゴニスト、抗体、サイトカイン、化学療法剤、放射療法剤、免疫調節剤および免疫刺激剤からなる群より選択される、請求項４７の方法。
【請求項４９】
第二の免疫アゴニストおよび所望のターゲットに特異的な抗原と一緒の、ＣＤ２７アゴニストの投与を含む、請求項４８の方法。
【請求項５０】
ターゲットが腫瘍である、請求項４９の方法。
【請求項５１】
抗原が、腫瘍関連ペプチド（ＴＡＡ）、腫瘍溶解物、アポトーシス性腫瘍細胞、および腫瘍抗原所持樹状細胞からなる群より選択される、請求項５０の方法。
【請求項５２】
腫瘍ターゲットが黒色腫であり、そして併用が、ターゲット抗原を発現する腫瘍細胞に対して誘発される免疫応答を増進する（ブーストする）、請求項５１の方法。
【請求項５３】
他の部分が、免疫刺激性抗体またはタンパク質（正の共刺激剤）、負の共刺激剤として作用する免疫抗体またはタンパク質、Ｔ細胞への阻害性シグナルを遮断する抗体または他の部分、および腫瘍細胞または血管系または間質に結合する抗体からなる群より選択される、請求項４７の方法。
【請求項５４】
他の部分が、抗ＣＤ４０抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗４−１ＢＢ抗体、抗ＣＤ７０抗体、抗Ｂ７．１抗体、抗Ｂ７．２抗体、抗ＣＴＬＡ−４抗体、抗ＣＤ２８抗体、制御性Ｔ細胞を枯渇させるかまたは遮断する部分、およびサイトカインからなる群より選択される、請求項４７の方法。
【請求項５５】
他の部分が、アゴニスト性ＣＤ４０抗体またはアゴニスト性ＯＸ４０抗体またはアゴニスト性４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体である、請求項５４の方法。
【請求項５６】
アゴニスト性ＣＤ４０抗体がＬＯＢ７／４である、請求項５５の方法。
【請求項５７】
Ｔ細胞応答増進を付加的にまたは相乗的に誘発するための方法であって：
付加的にまたは相乗的に有効な量の（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、ならびに（ｉｉ）ＣＤ４０アゴニスト、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）抗体、ＯＸ−４０抗体、ＣＤ２８抗体、およびＣＴＬＡ−４抗体より選択される少なくとも１つのアゴニスト
を、その必要がある被験体に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項５８】
免疫応答がＴｈ１免疫応答である、請求項５７の方法。
【請求項５９】
ＣＤ４０アゴニストが、ＣＤ４０アゴニスト性抗体または可溶性ＣＤ４０Ｌ融合タンパク質または可溶性ＣＤ４０断片あるいはそのコンジュゲートである、請求項５７の方法。
【請求項６０】
ＣＤ４０アゴニストが、ヒトＣＤ４０に特異的に結合する、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項５９の方法。
【請求項６１】
前記抗体が、ＳＣ２６、ＣＰ−８７０，８９３、ＬＯＢ７／４またはその誘導体、あるいは同じエピトープ特異性を所持する抗体である、請求項５９の方法。
【請求項６２】
ＣＤ２７アゴニストが、抗ＣＤ２７アゴニスト性抗体または可溶性ＣＤ７０融合タンパク質あるいはその可溶性断片または可溶性コンジュゲートである、請求項１１の方法。
【請求項６３】
腫瘍抗原、細菌抗原、ウイルス抗原、寄生虫抗原、アレルゲン、および自己抗原より選択される抗原の投与をさらに含む、請求項６２の方法。
【請求項６４】
アゴニスト性ＣＤ２７抗体が、損なわれていなくてもまたは修飾されていてもよい、キメラ、ヒトまたはヒト化抗体である、請求項５１の方法。
【請求項６５】
ＣＤ２７アゴニストまたは他のアゴニストが、エフェクター部分に付着している、請求項５８の方法。
【請求項６６】
エフェクター部分が毒素、薬剤または放射性核種である、請求項６５の方法。
【請求項６７】
ＣＤ２７アゴニストおよびＣＤ４０アゴニストが一緒にまたは別個に投与される、請求項５８の方法。
【請求項６８】
ＣＤ４０およびＣＤ２７アゴニストが、同じ組成物中に含有される、請求項６７の方法。
【請求項６９】
どちらかまたは両方のアゴニストがアゴニスト性抗体である、請求項６８の方法。
【請求項７０】
ＣＤ４０アゴニストが可溶性ＣＤ４０Ｌである、請求項６７の方法。
【請求項７１】
ＣＤ４０アゴニストおよびＣＤ２７アゴニストが、互いに別個に投与され、そして投与がどちらの順でも達成可能である、請求項６７の方法。
【請求項７２】
前記アゴニストが、互いに１日以内に投与される、請求項６７の方法。
【請求項７３】
前記アゴニストが、互いに８時間以内に投与される、請求項７１の方法。
【請求項７４】
前記アゴニストが、互いに１〜４時間以内に投与される、請求項７１の方法。
【請求項７５】
ＣＤ２７アゴニストが最初に投与される、請求項６７の方法。
【請求項７６】
ＣＤ４０アゴニストが最初に投与される、請求項６７の方法。
【請求項７７】
いずれかまたは両方のアゴニストがアゴニスト性抗体である、請求項６７の方法。
【請求項７８】
４−１ＢＢアゴニストの投与をさらに含む、請求項６７の方法。
【請求項７９】
前記アゴニストが抗体である、請求項７８の方法。
【請求項８０】
前記抗体が、抗原特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞免疫をさらに増強する、請求項７９の方法。
【請求項８１】
ヒト癌を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項８２】
ＣＤ４０を発現している癌を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項８３】
前記癌が固形腫瘍を含む、請求項８１の方法。
【請求項８４】
前記癌が：乳癌、肝癌、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、胃癌、腎臓癌、黒色腫、卵巣癌およびリンパ腫からなる群より選択される、請求項８１の方法。
【請求項８５】
前記リンパ腫が非ホジキンリンパ腫である、請求項７３の方法。
【請求項８６】
ＣＤ４０アゴニストが、キメラ、ヒトまたはヒト化抗ヒトＣＤ４０抗体である、請求項７０の方法。
【請求項８７】
投与される抗体が、ＬＯＢ７／４またはそのヒト化変異体を含む、請求項８６の方法。
【請求項８８】
治療される癌が非ホジキンリンパ腫である、請求項８１の方法。
【請求項８９】
治療される癌が腎臓癌である、請求項８１の方法。
【請求項９０】
前記療法が、少なくとも１つの化学療法剤をさらに含む、請求項７０の方法。
【請求項９１】
前記ＣＤ２７アンタゴニストが、少なくとも１つのサイトカインと併用して投与される、請求項１１の方法。
【請求項９２】
前記サイトカインが、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子またはコロニー刺激因子である、請求項９１の方法。
【請求項９３】
前記アゴニストが、ヒト免疫グロブリン重鎖および軽鎖定常領域を含むアゴニスト性抗体を含む、請求項１１の方法。
【請求項９４】
前記免疫グロブリンが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＥおよびＩｇＡからなる群より選択される、請求項９３の方法。
【請求項９５】
自己免疫疾患、炎症状態、またはアレルギー状態を伴う被験体を治療するために用いられる、請求項５２の方法。
【請求項９６】
自己免疫疾患を治療するために用いられる、請求項８０の方法。
【請求項９７】
炎症状態を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項９８】
アレルギー状態を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項９９】
感染状態を治療するために用いられる、請求項６７の方法。
【請求項１００】
ヒトにおいて、ｉｎ ｖｉｖｏで、ＣＴＬ免疫応答およびＣＤ８＋ Ｔ細胞増殖を増進する際に使用するために適応した、付加的または相乗的アゴニスト併用であって、相乗的に有効な量の（ｉ）少なくとも１つのＣＤ２７アゴニスト、および（ｉｉ）少なくとも１つの抗ＣＤ４０、ＯＸ−４０、４−１ＢＢまたはＣＴＬＡ−４アゴニスト性抗体を含む、前記併用。
【請求項１０１】
ＣＤ４０アゴニストが、アゴニスト性ＣＤ４０抗体または可溶性ＣＤ４０Ｌ、断片、あるいは含有融合タンパク質である、請求項１００の相乗的アゴニスト併用。
【請求項１０２】
アゴニスト性抗体が、キメラ、ヒト、ヒト化、または別の方式で遺伝子操作された抗体である、請求項１００の相乗的アゴニスト併用。
【請求項１０３】
ＣＤ２７アゴニストがアゴニスト性ＣＤ２７抗体である、請求項１００の相乗的アゴニスト併用。
【請求項１０４】
ＣＤ２７抗体が、キメラ、ヒト、ヒト化、または別の方式で遺伝子操作された抗体である、請求項１０３の相乗的アゴニスト併用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公表番号】特表２０１０−５０６９２５（Ｐ２０１０−５０６９２５Ａ）
【公表日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３３３６４（Ｐ２００９−５３３３６４）
【出願日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２２１９３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５１４２４
【国際公開日】平成２０年５月２日（２００８．５．２）
【出願人】（３０４０３２２７３）ユニバーシティ・オブ・サザンプトン (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年３月４日（２０１０．３．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２２１９３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５１４２４
【国際公開日】平成２０年５月２日（２００８．５．２）
【出願人】（３０４０３２２７３）ユニバーシティ・オブ・サザンプトン (1)
【Ｆターム（参考）】
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