【課題】Ｔ−ｂｅｔをコードする単離された核酸分子、および単離されたＴ−ｂｅｔタンパク質を提供する。
【解決手段】マウス、ヒトのＴ−ｂｅｔをコードする核酸分子を単離し、それを用いてアンチセンス核酸分子、組換え発現ベクター、発現ベクターが導入された宿主細胞およびＴ−ｂｅｔ導入遺伝子を有する非−ヒトトランスジェニック動物を作製し、Ｔ−ｂｅｔタンパク質、Ｔ−ｂｅｔ融合タンパク質および抗Ｔ−ｂｅｔ抗体も作製する。それらは、Ｔ−ｂｅｔ組成物を使用する方法として、生物学的試料内のＴ−ｂｅｔ活性を検出するための方法、細胞内のＴ−ｂｅｔ活性を調節する方法、およびＴ−ｂｅｔの活性を調節する薬剤を同定するための方法に使用される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に示される核酸分子の全鎖長相補体に対して４５℃の６Ｘ ＳＳＣにおいて、次いで６５℃の０．２Ｘ ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳにおける１回以上の洗浄を行うストリンジェントな条件下でハイブリダイズする単離された核酸分子であって、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合するペプチドをコードし、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記核酸分子。
【請求項２】
配列番号３に示される核酸分子の全鎖長相補体に対して４５℃の６Ｘ ＳＳＣにおいて、次いで６５℃の０．２Ｘ ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳにおける１回以上の洗浄を行うストリンジェントな条件下でハイブリダイズする単離された核酸分子であって、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合するペプチドをコードし、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記核酸分子。
【請求項３】
全鎖長を通して配列番号１の少なくとも７００個の連続するヌクレオチドと少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列有する単離された核酸分子であって、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合するペプチドをコードし、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記核酸分子。
【請求項４】
全鎖長を通して配列番号３の少なくとも５００個の連続するヌクレオチドと少なくとも９０％同一のヌクレオチド配列有する単離された核酸分子であって、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合するペプチドをコードし、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記核酸分子。
【請求項５】
配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離された核酸分子であって、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合するペプチドをコードし、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記核酸分子。
【請求項６】
配列番号４のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離された核酸分子であって、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合するペプチドをコードし、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記核酸分子。
【請求項７】
配列番号１の少なくとも７００個の連続するヌクレオチド含んでなり、かつ、Ｔ−ｂｏｘをコードする単離された核酸分子、または配列番号１の少なくとも７００個の連続するヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項８】
配列番号３の少なくとも６００個の連続するヌクレオチド含んでなり、かつ、Ｔ−ｂｏｘをコードする単離された核酸分子、または配列番号３の少なくとも６００個の連続するヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列を含んでなる単離された核酸分子。
【請求項９】
配列番号１の少なくとも７００個の連続するヌクレオチドからなり、かつ、Ｔ−ｂｏｘをコードする単離された核酸分子、または配列番号１の少なくとも７００個の連続するヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列からなる単離された核酸分子。
【請求項１０】
配列番号３の少なくとも６００個の連続するヌクレオチドからなり、かつ、Ｔ−ｂｏｘをコードする単離された核酸分子、または配列番号３の少なくとも６００個の連続するヌクレオチドに相補的なヌクレオチド配列からなる単離された核酸分子。
【請求項１１】
配列番号１に示されるヌクレオチド配列を含んでなり、かつ、検出可能な物質で標識されている単離された核酸分子。
【請求項１２】
配列番号３に示されるヌクレオチド配列を含んでなり、かつ、検出可能な物質で標識されている単離された核酸分子。
【請求項１３】
請求項１〜１０のいずれかに記載の核酸分子を含んでなるベクター。
【請求項１４】
構成的プロモーターを含んでなる請求項１３記載のベクター。
【請求項１５】
誘導性プロモーターを含んでなる請求項１３記載のベクター。
【請求項１６】
組織特異的調節エレメントを含んでなる請求項１３記載のベクター。
【請求項１７】
請求項５または６記載の核酸分子であって、該ペプチドがＩＬ−２の産生の阻害、並びにＴｈｐ細胞およびＴｈ２細胞のＴｈ１細胞への分化の誘導からなる群より選択される少なくとも一つの活性を有する、上記核酸分子。
【請求項１８】
配列番号１の核酸配列によりコードされるアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
【請求項１９】
配列番号３の核酸配列によりコードされるアミノ酸配列を含んでなる単離されたポリペプチド。
【請求項２０】
配列番号４に示されるポリペプチドと全鎖長を通して少なくとも９０％同一のアミノ酸を有する単離されたポリペプチドであって、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合し、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記ポリペプチド。
【請求項２１】
配列番号２に示されるポリペプチドと全鎖長を通して少なくとも９０％同一のアミノ酸を有する単離されたポリペプチドであって、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合し、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記ポリペプチド。
【請求項２２】
配列番号１に示されるポリヌクレオチドと全鎖長を通して少なくとも９０％同一のヌクレオチドを有するヌクレオチド配列を含んでなる核酸によりコードされた単離されたポリペプチドであって、かつ、該ヌクレオチド配列がＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合し、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導するポリペプチドをコードする、上記ポリペプチド。
【請求項２３】
配列番号３に示されるポリヌクレオチドと全鎖長を通して少なくとも９０％同一のヌクレオチドを有するヌクレオチド配列を含んでなる核酸によりコードされた単離されたポリペプチドであって、かつ、該ヌクレオチド配列がＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合し、さらにＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導するポリペプチドをコードする、上記ポリペプチド。
【請求項２４】
配列番号１の少なくとも７００個の連続するヌクレオチドを含んでなるヌクレオチド配列を含んでなる核酸分子によりコードされている単離されたポリペプチドであって、かつ、該ヌクレオチド配列がコンセンサスＴ−ＢＯＸドメインと結合しそしてＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記ポリペプチド。
【請求項２５】
配列番号３の少なくとも６００個の連続するヌクレオチドを含んでなるヌクレオチド配列を含んでなる核酸分子によりコードされている単離されたポリペプチドであって、かつ、該ヌクレオチド配列がコンセンサスＴ−ＢＯＸドメインと結合しそしてＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導する、上記ポリペプチド。
【請求項２６】
配列番号２に示されるアミノ酸配列を含んでなり、かつ、検出可能な物質で標識されている単離されたポリペプチド。
【請求項２７】
配列番号４に示されるアミノ酸配列を含んでなり、かつ、検出可能な物質で標識されている単離されたポリペプチド。
【請求項２８】
異種アミノ酸配列をさらに含んでなる請求項１８または１９記載の単離されたポリペプチド。
【請求項２９】
請求項２０または２１記載のポリペプチドであって、ＩＬ−２の産生の阻害、並びにＴｈｐ細胞およびＴｈ２細胞のＴｈ１細胞への分化の誘導からなる群より選択される活性を有する、上記ポリペプチド。
【請求項３０】
配列番号２のアミノ酸配列のエピトープに特異的に結合する単離された抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３１】
配列番号１の核酸分子によりコードされたタンパク質のエピトープに特異的に結合する単離された抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３２】
配列番号２の全鎖長を通して少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドに特異的に結合し、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合しそしてＣＤ４＋細胞においてＩＦＮ−γを誘導し、さらに配列番号２に少なくとも９０％同一性を有するポリペプチド部分に結合する単離された抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３３】
配列番号２のアミノ酸配列に特異的に結合し、かつ、細胞内抗体である、単離された抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３４】
配列番号４のアミノ酸配列のエピトープに特異的に結合する単離された抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３５】
配列番号３の核酸分子によりコードされるタンパク質のエピトープに特異的に結合する抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３６】
配列番号４の全鎖長を通して少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含んでなり、かつ、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合しそしてＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γ産生を誘導するポリペプチドに特異的に結合し、さらに、配列番号４に少なくとも９０％同一性を有するポリペプチド部分に結合する抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３７】
配列番号４のアミノ酸配列に特異的に結合し、かつ、細胞内抗体である、単離された抗体、またはその抗原結合性断片。
【請求項３８】
キメラ抗体またはヒト化抗体である請求項３１または３５記載の抗体、または抗原結合性断片。
【請求項３９】
生物学的試料から配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドの単離方法であって、生物学的試料を請求項３０、３１または３４記載の抗体、またはその抗原結合性断片と、該抗体が試料中に存在するポリペプチドと結合して複合体を形成する条件下で接触せしめ、こうして生物学的試料からポリペプチドを単離する工程を含んでなる、上記方法。
【請求項４０】
生物学的試料から配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドの検出方法であって、生物学的試料を請求項３０、３１または３４記載の抗体、またはその抗原結合性断片と、該抗体が試料中に存在するポリペプチドと結合して複合体を形成する条件下で接触せしめ、こうして生物学的試料からポリペプチドを単離する工程を含んでなる、上記方法。
【請求項４１】
生物学的試料から配列番号４のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドの単離方法であって、生物学的試料を請求項３０、３１または３４記載の抗体、またはその抗原結合性断片と、該抗体が試料中に存在するポリペプチドと結合して複合体を形成する条件下で接触せしめ、こうして生物学的試料からポリペプチドを単離する工程を含んでなる、上記方法。
【請求項４２】
生物学的試料における配列番号２のアミノ酸配列を含んでなるポリペプチドの試験管内検出方法であって、生物学的試料と請求項３１記載の抗体またはその抗原結合性断片を、試料中に存在するポリペプチドに該抗体が結合する条件下で接触させる工程、こうして試料中で形成されたポリペプチドと抗体複合体を検出する工程を含んでなる、上記方法。
【請求項４３】
Ｔ−ｂｅｔタンパク質の活性を調節する化合物の同定方法であって、Ｔ−ｂｅｔタンパク質を含んでなる指標組成物を提供する工程であって、該Ｔ−ｂｅｔタンパク質が、配列番号１に示される核酸分子であって、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合しそしてＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導するポリペプチドをコードする核酸分子の全鎖長相補体に対して、４５℃の６Ｘ ＳＳＣにて、次いで６５℃の０．２ＸＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳでの１回以上の洗浄によるストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によりコードされるポリペプチドを含んでなる、工程、
試験化合物を指標組成物と接触させる工程、および
試験化合物の存在または非存在下で指標組成物中のＴ−ｂｅｔタンパク質の活性に対して試験化合物の効果を決定し、こうしてＴ−ｂｅｔタンパク質の活性を調節する化合物を同定する工程を含んでなる、上記方法。
【請求項４４】
指標組成物がＴ−ｂｅｔタンパク質およびＴ−ｂｅｔタンパク質が結合するＤＮＡ分子を含んでなり、そして
Ｔ−ｂｅｔタンパク質の活性に対する試験化合物の効果が試験化合物の存在または非存在下で該ＤＮＡ分子に対するＴ−ｂｅｔタンパク質の結合性を評価する、請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
指標組成物がＴ−ｂｅｔタンパク質およびＴ−ｂｅｔタンパク質に対して応答性のレポーター遺伝子を含んでなり、そして
Ｔ−ｂｅｔタンパク質の活性に対する試験化合物の効果が試験化合物の存在または非存在下で該ＤＮＡ分子に対するＴ−ｂｅｔタンパク質の結合性を評価する、請求項４３記載の方法。
【請求項４６】
非ヒト哺乳動物における免疫応答に対して試験化合物の効果を決定し、そして試験化合物の存在または非存在下での免疫応答に対する試験化合物の効果を決定することにより、免疫応答を調節する化合物を同定する工程をさらに含んでなる、請求項４３記載の方法。
【請求項４７】
Ｔ−ｂｅｔタンパク質の活性を調節する薬剤と細胞を細胞内のＴ−ｂｅｔ活性が調節されるように接触させる工程を含んでなる細胞におけるＴ−ｂｅｔ活性の試験管内調節方法であって、該薬剤が、配列番号４のポリペプチドをコードする核酸分子、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド、配列番号３に示されるヌクレオチド配列に対してアンチセンスである核酸分子、配列番号３に示されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列に特異的に結合する細胞内抗体、またはそれらの組み合わせ物からなる群より選択される、上記方法。
【請求項４８】
Ｔ−ｂｅｔタンパク質の活性を調節する化合物の同定方法であって、Ｔ−ｂｅｔタンパク質を含んでなる指標組成物を提供する工程であって、該Ｔ−ｂｅｔタンパク質が、配列番号３に示される核酸分子であって、ＤＮＡ中のコンセンサスＴ−ｂｏｘ部位に結合しそしてＣＤ４＋細胞におけるＩＦＮ−γの産生を誘導するポリペプチドをコードする核酸分子の全鎖長相補体に対して、４５℃の６Ｘ ＳＳＣにて、次いで６５℃の０．２ＸＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳでの１回以上の洗浄によるストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子によりコードされるポリペプチドを含んでなる、工程、
試験化合物を指標組成物と接触させる工程、および
試験化合物の存在または非存在下で指標組成物中のＴ−ｂｅｔタンパク質の活性に対して試験化合物の効果を決定し、こうしてＴ−ｂｅｔタンパク質の活性を調節する化合物を同定する工程を含んでなる、上記方法。
【請求項４９】
請求項３４または４８記載の方法であって、ポリペプチドが結合するＤＮＡ分子が
コンセンサスＴ−ｂｏｘ結合部位である、上記方法。
【請求項５０】
請求項３４または４８記載の方法であって、ポリペプチドが結合するＤＮＡ分子がＩＬ−２プロモーターを含んでなる、上記方法。
【請求項５１】
請求項３４または４８記載の方法であって、ポリペプチドが結合するＤＮＡ分子がＩＦＮ−γプロモーターである、上記方法。
【請求項５２】
レポーター遺伝子がＴｈ１会合サイトカイン遺伝子である、請求項４５記載の方法。
【請求項５３】
Ｔｈ１会合サイトカイン遺伝子がＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、およびＬＴ（リンホトキシン）からなる群より選択される、請求項５２記載の方法。
【請求項５４】
Ｔｈ１会合サイトカイン遺伝子がＩＦＮ−γである、請求項５２記載の方法。
【請求項５５】
レポーター遺伝子が、クロラムフェにコールアセチルトランスフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼおよびルシフェラーゼをコードする遺伝子からなる群より選択される、請求項４５記載の方法。

【図２】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図３Ｄ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図９Ｄ】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１０Ｃ】

【図１０Ｄ】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【公開番号】特開２０１０−１１８５６（Ｐ２０１０−１１８５６Ａ）
【公開日】平成２２年１月２１日（２０１０．１．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−２００５４０（Ｐ２００９−２００５４０）
【出願日】平成２１年８月３１日（２００９．８．３１）
【分割の表示】特願２００１−５００７６５（Ｐ２００１−５００７６５）の分割
【原出願日】平成１２年６月１日（２０００．６．１）
【出願人】（５０１４６６６２８）プレジデント・アンド・フエローズ・オブ・ハーバード・カレツジ (2)
【Ｆターム（参考）】