アジリジニル−エポチロン化合物
本発明は、式（Ｘ）：
を有する本明細書でさらに説明した通りのアジリジニルエポチロン化合物、および／またはその医薬的に許容される塩および／または溶媒和物に関する。該化合物は、標的薬物デリバリー、特に葉酸についてのコンジュゲートの製造のために、癌治療に用いられうる。
を有する本明細書でさらに説明した通りのアジリジニルエポチロン化合物、および／またはその医薬的に許容される塩および／または溶媒和物に関する。該化合物は、標的薬物デリバリー、特に葉酸についてのコンジュゲートの製造のために、癌治療に用いられうる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、参照により本明細書にその全体を援用する、２００６年５月２５日出願の米国仮特許出願第６０／８０８，３６６号の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、アジリジニル−エポチロン類似体を含むアジリジニル−エポチロン類似体医薬組成物およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
エポチロンＡおよびＢは、Hoefle et al.によって発見され、微生物、ソランジウム・セルロースムの発酵生成物から単離された天然の化合物である（例えば、ＷＯ９３／１０１２１参照）。Hoefle et al.は、３７種の天然のエポチロン変異体、ならびにエポチロンＣ、Ｄ、Ｅ、Ｆおよびその他の異性体および変異体を含む、ソランジウム・セルロースムによって生成された関連の化合物も発見した。例えば、米国特許第６，６２４，３１０号参照。１９９３年、Hoefle et al.がエポチロンＡおよびＢの細胞毒性作用について報告したが、１９９５年、Ｍｅｒｃｋの研究者らはエポチロンＢがパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））と同様の微小管安定化作用を発揮することを報告した（D.M. Bollag, "Epothilones, a New Class of Microtubule-Stabilizing Agents with a Taxol-like Mechanism of Action," Cancer Research, Vol. 55 (June 1995), pp. 2325-2333参照）。
【０００４】
天然エポチロンの種々の誘導体および類似体がＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏで発見されている。エポチロン類似体の例としては、イクサベピロンとして知られるアザ−エポチロンＢ類似体、２１−アミノ類似体を含むエポチロンＢの２１−置換類似体、２，３−オレフィン類似体、Ｃ−３シアノ類似体、シクロプロピル類似体、およびアジリジニル−エポチロン類似体を含むヘテロ環類似体がある。例えば、それぞれ参照により本明細書に援用する、米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，２６２，０９４号；同第６，３９９，６３８号；同第６，４９８，２５７号；同第６，３８０，３９５号；および同第６，８００，６５３号を参照されたい。その他のものもその他のエポチロン誘導体および類似体の発見について報告している。例えば、全て参照によりその全体を援用する、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／６５９１３、ＷＯ９８／２５９２９；ＷＯ００／９９／０７６９２；ＷＯ９９／６７２５２；ＷＯ００／００４８５；ＷＯ００／３７４７３；ＷＯ０１／８３８００；ＷＯ９９／６７２５３、ＷＯ９９／０７６９２、ＷＯ００／００４８５、ＷＯ００／４９０２１、ＷＯ００／６６５８９、ＷＯ０３／０４５３２４、ＷＯ０４／０１４９１９、ＷＯ０４／０５６８３２、ＷＯ０３／０２２８４４；米国特許第６，４４１，１８６号；同第６，２８４，７８１号；同第６，６６０，７５８号；同第６，３８０，３９４号；同第６，２４２，４６９号；同第６，５３１，４９７号；同第６，４４１，１８６号；同第６，４８９，３１４号；同第６，５８９，９６８号；同第６，９３０，１０２号；米国特許出願公開番号ＵＳ２００４／００７２８７０Ａ１；ＵＳ２００３／００２３０８２Ａ１；ＵＳ２００４／００５３９１０Ａ１；ＵＳ２００４／０１５２７０８Ａ１を参照されたい。
【０００５】
その他の微小管安定化剤のような天然エポチロンおよびそれらの類似体は、癌などの増殖性疾患の治療に有用である場合があり、腫瘍細胞、その他の病原性細胞および外来病原体を殺す（またはその増殖を止める）ことによって典型的に作用する。しかし、抗癌剤は腫瘍細胞だけでなく正常組織も攻撃することが多く、望ましくない副作用につながる。さらに、抗癌剤は、その作用物質の製剤およびデリバリーが問題を提示するような溶解性の問題を典型的に示し、これはＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）などの溶解剤の使用につながる。いくつかの抗癌剤および／または製剤成分の細胞毒性は、神経障害または超過敏反応などのその他の副作用を引き起こすことが知られている。これらの有害副作用は、病原性細胞集団に選択的な、したがって宿主毒性が減少した抗癌療法の必要性を強調する。
【０００６】
しかし、ＷＯ２００４／０５４６２２Ａ１で論じられた通り、科学者は長年、患者に化学療法剤をデリバリーする標的薬物療法においてモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用することを試みてきたが、とりわけ、切断可能部分、リンカー、および細胞に放出された薬物の形について欠点があった。ｍＡｂによる腫瘍の療法の成功は、抗体の腫瘍への不適切な浸透によって、および腫瘍組織の対応する腫瘍関連抗原の不均一な分布によって制限されることが報告されている。Klar et al.、ＷＯ０５／０７４９０１（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧに譲渡）を参照されたい。
【０００７】
米国特許出願公開第２００５／０００２９４２号は、標的薬物デリバリーに有用なビタミン受容体結合性薬物デリバリーコンジュゲートを開示している。当技術分野では、癌治療用の標的薬物デリバリーを提供するために、ＵＳ２００５／０００２９４２に記載されているものなどのコンジュゲートの作製に使用し得る抗癌剤の同定が求められている。
【０００８】
発明の概要
本発明は、以下の式Ｘ：
【化１】
Ｘ
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を対象とする。
【０００９】
本発明はさらに、式Ｘを有する化合物を使用して癌を治療する方法、ならびに医薬的に許容される担体を有する癌治療用の医薬組成物の調製における式Ｘの化合物の使用を対象とする。式Ｘの化合物は、標的薬物療法用の組成物の調製に特に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、エポチロン類似体化合物ＡＡの６つの葉酸コンジュゲート（コンジュゲート番号ＡＡ．ＩからＡＡ−ＶＩ）の化学構造、相対的親和性、およびＫＢ腫瘍細胞に対するＥＣ５０（ｎＭ）値である。
【００１１】
【図２】図２は、エポチロン類似体化合物ＢＢの３つの葉酸コンジュゲート（コンジュゲート番号ＢＢ．ＩからＢＢ．ＩＩＩ）の化学構造、相対的親和性、およびＫＢ腫瘍細胞に対するＥＣ５０（ｎＭ）値である。
【００１２】
【図３】図３は、化合物Ｇ（横棒）、化合物ＣＣ（三角形）、化合物ＡＡ（菱形）またはイクサベピロン（正方形）の増大濃度（濃度（ｎＭ）；ｘ軸）で処理した後の生存ＫＢクローンの率（生存率；ｙ軸）を表す。
【００１３】
【図４】図４は、非処置（対照；黒丸）と比較した、様々な濃度の化合物Ｊ（灰色正方形、白色正方形、灰色菱形）またはイクサベピロン（黒色横棒）の、（Ａ）腫瘍移植数日後（ｘ軸）の腫瘍重量中央値（ｍｇ；ｙ軸）または（Ｂ）腫瘍移植数日後（ｘ軸）の体重減少（体重変化％；ｙ軸）を尺度としたヌードマウスにおけるＫＢ鼻咽頭類表皮癌異種移植片の処置のインビボ抗腫瘍効果を表す。
【００１４】
【図５】図５は、非処置（対照；黒丸）と比較した、化合物Ｊ（灰色正方形）またはイクサベピロン（白色正方形）の、腫瘍移植数日後（ｘ軸）の腫瘍重量中央値（ｍｇ；ｙ軸）を尺度としたＦＲ（−）Ｍ１０９ネズミ肺癌に対するインビボ抗腫瘍効果を表す。
【００１５】
【図６】図６は、非処置（対照、黒丸）、化合物Ｊのみでの処置（灰色正方形）、葉酸類似体の存在下での化合物Ｊ（黒色横棒）、または化合物Ｇでの処置（灰色菱形）の、腫瘍移植数日後（ｘ軸）の腫瘍重量中央値（ｍｇ；ｙ軸）を尺度としたインビボ抗腫瘍効果を表す。
【００１６】
発明の詳細な説明
用語の定義
以下は、本明細書で使用した用語の定義である。本明細書の基または用語に提供した最初の定義は、別段の記載がない限り、個々にまたは別の基の部分として、本明細書にわたるその基または用語に適用される。
【００１７】
本明細書で使用される用語「葉酸結合部分またはその類似体もしくは誘導体」は、癌細胞で過剰発現されるまたは優先的に発現される葉酸受容体タンパク質（モノクローナル抗体ではない）に結合する部分を意味する。例えば、葉酸受容体（ＦＲ）は卵巣癌細胞およびその他の癌細胞で過剰発現されることが知られている。葉酸の例示的な類似体および誘導体は、参照により本明細書に援用する、Vlahov et al.の米国特許出願公開番号２００５／０００２９４２（以下「Vlahov」）に開示されている。
【００１８】
本明細書で使用される用語「解離可能なリンカー」は、生理学的条件下で切断されることがある（例えば、ｐＨ不安定、還元不安定、酸不安定、酸化不安定または酵素不安定結合）少なくとも１つの切断性結合を含む二価リンカーを意味する。結合の切断につながるそのような生理学的条件には、例えば、生理学的ｐＨで、または細胞器官への区画化の結果として、例えば細胞質ｐＨより低いｐＨを有するエンドソーム、またはグルタチオンなどの細胞還元剤との反応の結果として生じる普通の化学加水分解反応があることを理解すべきである。
【００１９】
切断性結合は、解離可能なリンカー内の２つの隣接する原子を結合できる、および／または本明細書に記載したＱおよびＫなどの解離可能なリンカーにその他の基をリンカーのいずれかの末端または両方の末端に結合できることが理解される。
【００２０】
用語「アルキル」および「アルク」は、単独で、またはあるその他の基と組み合わせて、任意の可能な炭素原子で結合した、炭素原子１個から１０個、好ましくは炭素原子１個から６個、より好ましくは炭素原子１個から４個を含有する、直鎖または分枝鎖アルカン（炭化水素）基を指す。そのような基の例として、これらだけに限定するものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチルなどがある。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、炭素原子１個から４個を有する直鎖または分枝鎖アルキルを意味する。アルキルまたはその他の基に関して下付き文字が使用されている場合、その下付き文字はその基が含有し得る炭素原子の数を指す。例えば、用語「Ｃ0~4アルキル」には、結合および炭素原子１個から４個のアルキル基が含まれ、用語「Ｃ1~4アルキル」は炭素原子１個から４個のアルキル基を意味する。
【００２１】
用語「アルキレン」は、「アルキル」について上記した通りの、しかし２つの結合点を有する二価炭化水素基を指す。例えば、メチレン基は−ＣＨ2−基であり、エチレン基は−ＣＨ2−ＣＨ2−基である。
【００２２】
ヘテロシクロアルキルまたはシクロアルキルアルキルのように、用語アルキルが別の基とつなげて使用される場合、これは確認された他方の（出だしの名称の）基が上記定義のアルキル基を直接介して結合していることを意味する（例えば、それは分枝鎖であっても直鎖であってもよい）。したがって、用語「アルキル」は、この場合、アルキレン、例えば、２つの結合可能点を有する二価アルキル基を指すように使用される。例えば、シクロプロピルＣ1~4アルキルは、炭素原子１個から４個を有する直鎖または分枝鎖アルキレンを介して結合したシクロプロピル基を意味し、ヒドロキシアルキルは、炭素原子１個から１０個、好ましくは炭素原子１個から６個、より好ましくは炭素原子１個から４個を有する直鎖または分枝鎖アルキレンを介して結合したＯＨ基を意味する。「置換シクロアルキルアルキル」などの置換基の場合、その基のアルキレン部分は、分枝鎖または直鎖である以外に、置換アルキル基について挙げた通りに置換されていてよく、かつ／または出だしの名称の基（例えば、シクロアルキル）は、その名称の基（例えば、シクロアルキル）について挙げた通りに置換されていてよい。
【００２３】
「置換アルキル」は、１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で、任意の使用できる結合点において置換されているアルキル基を指す。しかし、アルキル基が複数のハロ置換基で置換されている場合、そのアルキルは、原子価により許容されれば、最大１０個の置換基、より好ましくは最大７個の置換基を含有し得る。アルキル置換基は以下の基の１個または複数を含み得る：ハロ（例えば、単一ハロ置換基または多重ハロ置換基、後者の場合、ペルフルオロアルキル基またはＣｌ3もしくはＣＦ3を保持するアルキル基などの基を形成する）、シアノ、−ＯＲa、−ＳＲa、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒa、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲa、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒa、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲa、−ＮＲaＲb、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒa、−Ｓ（Ｏ）2Ｒa、−ＮＨＳ（Ｏ）2Ｒa、−ＮＨＳ（Ｏ）2ＮＨＲa、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨＲa、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒa、−ＮＨＣ（Ｏ）2Ｒa、−ＮＨＣ（＝Ｎ−ＣＮ）Ｒa、アリール、ヘテロ環、シクロアルキルおよび／またはヘテロアリール、ここで、Ｒa基およびＲb基は、独立して、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクロ、アリールおよびヘテロアリールから選択され、各Ｒaおよび／またはＲbは、さらには、アルキル、アルケニル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アミノアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、チオール、アルキルチオ、フェニル、ベンジル、フェニルオキシ、ベンジルオキシ、Ｃ3-7シクロアルキル、５員もしくは６員ヘテロシクロもしくはヘテロアリール、および／または低級アルキルもしくは低級アルケニル（ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、ハロＣ1~4アルキル、ハロＣ1~4アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ1~4アルキルアミノ、アミノＣ1~4アルキル、ヒドロキシＣ1~4アルキル、Ｃ1~4アルコキシ、チオールおよび／またはＣ1~4アルキルチオから選択される１個から４個の基で置換されている）から選択される１個から４個の基で所望により置換されている。疑いを回避するために、「置換低級アルキル」は、炭素原子１個から４個、および置換アルキル基について直前で挙げたものから選択される１個から４個の置換基を有するアルキル基を意味する。置換低級アルキルの場合、好ましくは、Ｒa基およびＲb基は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、Ｃ3~7シクロアルキル、フェニル、ならびに５員から６員単環式ヘテロシクロおよび／またはヘテロアリール（さらには上記の通り所望により置換されている）から選択される。
【００２４】
用語「アルケニル」は、炭素原子２個から１２個および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する直鎖または分枝鎖炭化水素基を指す。例示的なそのような基としては、エテニルまたはアリルがある。「置換アルケニル」は、１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で、任意の使用できる結合点において置換されているアルケニル基を指す。例示的な置換基としては、アルキル、置換アルキル、およびアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００２５】
用語「アルコキシ」および「アルキルチオ」は、それぞれ酸素結合（−Ｏ−）または硫黄結合（−Ｓ−）を介して結合した上記の通りのアルキル基を指す。用語「置換アルコキシ」および「置換アルキルチオ」は、それぞれ酸素結合または硫黄結合を介して結合した上記の通りの置換アルキル基を指す。「低級アルコキシ」またはＣ1~4アルコキシはＯＲ基であり、ここで、Ｒは低級アルキル（炭素原子１個から４個のアルキル）である。
【００２６】
「アミノ」はＮＨ2である。アルキルアミノは−ＮＲcＲdであり、ここで、ＲcおよびＲdの少なくとも一方はアルキルまたは置換アルキルであり、ＲcおよびＲdの他方は、水素、アルキルおよび置換アルキルから選択される。「アミノアルキル」はアルキレン基を介して結合したアミノ基（−アルキレン−ＮＨ2）を意味し、アルキルアミノアルキルはアルキレン基を介して結合した上記定義の通りのアルキルアミノ（−アルキレン−ＮＲcＲd）を意味する。
【００２７】
用語「アリール」は、１個から３個の芳香環を有する環式芳香族炭化水素基、特にフェニルまたはナフチルなどの単環式または二環式基を指す。二環式または三環式であるアリール基は少なくとも１個の完全芳香族炭素環を含まなければならないが、その他の縮合環（単数または複数）は芳香族または非芳香族であってよく、ヘテロ原子を所望により含有してもよく、但し、そのような場合、結合点は芳香族炭素環である。さらに、アリール基にヘテロ環またはシクロアルキル環が縮合している場合、ヘテロ環および／またはシクロアルキル環は１個または複数のカルボニル炭素原子を有していてよく、即ち、二重結合を介して酸素原子に結合してカルボニル基を確定し得る。したがって、「アリール」の例としては限定することなく、
【化２】
などが挙げられる。
【００２８】
用語「アリーレン」は、二価アリール基、即ち、アリール環の任意の使用できる結合点に、２個のその他の基への２個の結合点を有する上記定義の通りのアリール基を指す。アリーレン環はまた、本明細書で定義したアリール基の置換に適切な任意の基で置換されていてもよい。
【００２９】
「置換アリール」は、任意の結合点で１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で置換された上記定義の通りのアリール基またはアリーレン基を指す。置換基としては、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、ならびにアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００３０】
用語「炭素環式」は、飽和または不飽和単環式、二環式または三環式環（好ましくは単環式または二環式）を意味し、ここで、全ての環の全ての原子は炭素である。したがって、この用語にはシクロアルキルおよびアリール環が含まれる。炭素環は置換されていてよく、その場合、置換基はシクロアルキルおよびアリール基について上記で挙げたものから選択される。
【００３１】
用語「シクロアルキル」は、１個から３個の環を含有し、環１個当たり炭素原子３個から７個を含有する完全飽和または部分飽和環式炭化水素基を指す。例示的な完全飽和シクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルがある。例示的な部分飽和シクロアルキル基としては、シクロブテニル、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルがある。用語「シクロアルキル」には、炭素原子３個から４個の架橋を有する基が含まれる。さらに、二環式または三環式であるシクロアルキル基は少なくとも１個の完全飽和または部分飽和炭化水素環を含まなければならないが、その他の縮合環（単数または複数）は芳香族または非芳香族であってよく、ヘテロ原子を含有してもよく、但し、そのような場合、結合点は環式非芳香族炭化水素基である。さらに、シクロアルキル基の１個または複数の炭素原子は炭素−酸素二重結合を形成してカルボニル基を確定し得る。したがって、「シクロアルキル」基の例としては限定することなく、
【化３】
などが挙げられる。
【００３２】
用語「シクロアルキレン」は、二価シクロアルキル基、即ち、シクロアルキル環の任意の使用できる２個の結合点に、２個のその他の基への２個の結合点を有する上記定義の通りのシクロアルキル基を指す。
【００３３】
「置換シクロアルキル」は、任意の使用できる結合点において１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で置換されている上記定義の通りのシクロアルキル基を指す。シクロアルキル置換基としては、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、およびアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００３４】
用語「グアニジニル」は、
【化４】
基を意味する。したがって、グアニジニルアルキルは、式
【化５】
を有する基などのグアニジニルに結合したアルキル基を意味する。
【００３５】
用語「ハロゲン」または「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。
【００３６】
用語「ヘテロ原子」には、酸素、硫黄および窒素が含まれる。
【００３７】
用語「ハロアルキル」は、１個または複数のハロ置換基を有するアルキルを意味し、限定することなく、−ＣＨ2Ｆ、−ＣＨＦ2および−ＣＦ3などの基が含まれる。
【００３８】
用語「ハロアルコキシ」は１個または複数のハロ置換基を有するアルコキシ基を意味する。例えば、「ハロアルコキシ」には−ＯＣＦ3が含まれる。
【００３９】
用語「不飽和」が環または基に対して本明細書で使用される場合、その環または基は完全不飽和であっても部分不飽和であってもよい。
【００４０】
用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１個のヘテロ原子を含有する少なくとも１個の環を有する、４員から７員単環式、７員から１１員二環式、または１０員から１５員三環式の環系である芳香族基を指す。ヘテロ原子を含有するヘテロアリール基の各環は、１個または２個の酸素原子または硫黄原子および／または１個から４個の窒素原子を含有することができ、但し、各環のヘテロ原子の総数は４個以下であり、各環は少なくとも１個の炭素原子を有する。二環式基および三環式基を完成する縮合環は、炭素原子のみを含有していてもよく、飽和、部分飽和または不飽和であってよい。その窒素原子および硫黄原子は所望により酸化されていてよく、その窒素原子は所望により四級化されていてよい。二環式または三環式であるヘテロアリール基は、少なくとも１個の完全芳香環を含まなければならないが、その他の縮合環（単数または複数）は芳香族または非芳香族であってよく、炭素環式であってよく、但し、そのような場合、結合点は芳香族へテロ原子含有環の任意の使用可能な窒素原子または炭素原子である。さらに、ヘテロアリール基自体の定義には、その炭素原子の１個または複数が二重結合を介して酸素原子に結合してカルボニル基を確定する（但し、そのヘテロアリール基は芳香族である）環が含まれ、また、ヘテロアリール基にヘテロ環またはシクロアルキル環が縮合している場合、ヘテロ環および／またはシクロアルキル環は１個または複数のカルボニル基を有していてよい。
【００４１】
例示的な単環式ヘテロアリール基としては、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾリニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル（即ち、
【化６】
）、チアジアゾリル、イソチアゾリル、フラニル、チエニル、オキサジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアジニルなどがある。さらに、ヘテロアリール基自体の定義は、その炭素原子の１個または複数がカルボニル基を確定する環を含むので、２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン（即ち、
【化７】
）などの環が含まれる。
【００４２】
例示的な二環式ヘテロアリール基としては、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾキサソリル（ｂｅｎｚｏｘａｘｏｌｙｌ）、ベンゾチエニル、キノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾピラニル、インドリジニル、ベンゾフラニル、クロモニル、クマリニル、ベンゾピラニル、シンノリニル、キノキサリニル、インダゾリル、ピロロピリジル、フロピリジニル、ジヒドロイソインドリル、テトラヒドロキノリニルなどがある。
【００４３】
例示的な三環式ヘテロアリール基としては、カルバゾリル、ベンジドリル（ｂｅｎｚｉｄｏｌｙｌ）、フェナントロリニル、アクリジニル、フェナントリジニル、キサンテニルなどがある。
【００４４】
用語「ヘテロアルキレン」は、二価ヘテロアリール基、即ち、ヘテロアリール環の任意の使用できる２個の結合点に、２個のその他の基への２個の結合点を有する上記定義の通りのヘテロアリール基を指す。
【００４５】
「置換ヘテロアリール」基は、任意の使用できる結合点において１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で置換されている上記定義の通りのヘテロアリール基である。例示的な置換基としては、これらだけに限定するものではないが、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、ならびにアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００４６】
用語「ヘテロ環」、「ヘテロ環」および「ヘテロシクロ」は、交換可能に使用され、それぞれ完全飽和または部分不飽和非芳香族環式基を指し、置換されていても置換されていなくてもよく、例えば、４員から７員単環式、７員から１１員二環式、または１０員から１５員三環式環系であり、少なくとも１個の炭素原子含有環に少なくとも１個のヘテロ原子を有する。ヘテロ原子を含有するヘテロ環基の各環は、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選択される１個、２個または３個のヘテロ原子を有してよく、その窒素ヘテロ原子および硫黄ヘテロ原子はまた所望により酸化されていてよく、その窒素ヘテロ原子はまた所望により四級化されていてよい。好ましくは、２個の隣接するヘテロ原子酸素および窒素から同時に選択されることはない。二環式または三環式であるヘテロ環基は少なくとも１個の非芳香族非炭素環を含まなければならないが、その他の縮合環（単数または複数）は芳香族または非芳香族であってよく、炭素環式であってよく、但し、そのような場合、結合点は非芳香族ヘテロ原子含有環の任意の使用可能な窒素原子または炭素原子である。さらに、ヘテロ環基自体の定義には、その炭素原子の１個または複数が二重結合を介して酸素原子に結合してカルボニル基を確定する（但し、そのヘテロ環基は非芳香族である）環が含まれ、また、ヘテロ環基にさらなる環が縮合している場合、そのようなさらなる環は１個または複数のカルボニル基を有していてよい。
【００４７】
例示的な単環式ヘテロ環基としては、ピロリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフリル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、ピロリニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チアモルホリニルなどがある。
【００４８】
「置換ヘテロ環（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」、「置換ヘテロ環（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ）」および「置換ヘテロシクロ」は、１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で、任意の使用できる結合点において置換された上記定義の通りのヘテロ環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）、ヘテロ環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ）またはヘテロシクロ基を指す。例示的な置換基としては、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、ならびに例示的なアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００４９】
「ヒドロキシ」は−ＯＨを指す。
【００５０】
「チオール」は−ＳＨ基を指す。
【００５１】
用語「第四級窒素」は、例えば、テトラアルキルアンモニウム基（例えば、テトラメチルアンモニウムまたはＮ−メチルピリジニウム）の正に帯電した窒素、プロトン化アンモニウム種（例えば、トリメチルヒドロアンモニウムまたはＮ−ヒドロピリジニウム）の正に帯電した窒素、アミンＮ−オキシド（例えば、Ｎ−メチル−モルホリン−Ｎ−オキシドまたはピリジン−Ｎ−オキシド）の正に帯電した窒素、およびＮ−アミノ−アンモニウム基（例えば、Ｎ−アミノピリジニウム）の正に帯電した窒素を含む四価の正に帯電した窒素原子を指す。
【００５２】
官能基が「保護された」と呼ばれる場合、その基が、保護された部位の望ましくない副反応を軽減、特に防止する変形形態であることを意味する。本明細書に記載の方法および化合物に適切な保護基としては、限定することなく、参照により本明細書に援用する、Greene, T.W. et al., Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, N.Y. (1991)を含む標準テキストに記載されているものがある。
発明の代替の実施形態
【００５３】
本発明は、課題を解決するための手段で挙げた通りの以下の式Ｘを有する化合物を含む。
【００５４】
本発明は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、式Ｘ’：
【化８】
Ｘ’
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
による立体特異性形態を有する化合物を含む。
【００５５】
別の実施形態では、本発明の化合物は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、式Ｘ：
【化９】
Ｘ
［式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである］
または上記の立体特異性の式Ｘ’を有する。
【００５６】
別の実施形態では、本発明の化合物は、医薬的に許容されるその塩および／または溶媒和物を含む上記定義の通りの式ＸまたはＸ’を有し、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素であり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである。
【００５７】
別の実施形態では、本発明の化合物は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む上記定義の通りの式ＸまたはＸ’を有し、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルである。
【００５８】
別の実施形態では、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、式Ｘａ：
【化１０】
Ｘａ
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは、−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキルまたは置換アルキルであり、
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
を有する化合物が提供される。
【００５９】
本発明の別の実施形態では、Ｘ’について示した立体化学に対応する立体特異性形態Ｘａ’を有する式Ｘａ’の化合物を含む式Ｘａの化合物が提供される。
【００６０】
別の実施形態では、Ｋが−Ｏ−であり、Ｒ13が、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルであり、残りの基が上記定義の通りの直前の式ＸａまたはＸａ’を有する化合物が提供される。
【００６１】
別の実施形態では、Ｋが−Ｏ−であり；ＡがＣ2~4アルキレンであり；Ｒ6が水素またはメチルであり；Ｒ12が、Ｈ、低級アルキルまたはハロゲンであり；Ｒ13が、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルである上記の式ＸａまたはＸａ’を有する化合物が提供される。
【００６２】
本発明の化合物はまた、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、式Ｘｂ：
【化１１】
Ｘｂ
［式中、Ｒ6は水素またはメチルである］
を有してもよい。
【００６３】
別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｘｂを有し、ここで、Ｒ6は水素である。
【００６４】
別の実施形態では、本発明の化合物は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、立体特異性の式Ｘｂ’：
【化１２】
Ｘｂ’
［式中、Ｒ6は水素またはメチルである］
を有してもよい。
【００６５】
別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｘｂ’を有し、ここで、Ｒ6は水素である。
【００６６】
本発明の一実施形態では、方法は、癌、例えば、葉酸受容体関連状態を治療するために提供され、以下の式Ｘ：
【化１３】
Ｘ
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療有効量で患者を治療することを特徴とする。
【００６７】
一実施形態では、方法は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、立体特異性の式Ｘ’：
【化１４】
Ｘ’
［式中、Ｋ、Ａ、Ｂ1 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11 Ｒ12、Ｒ13およびｍは、式Ｘの化合物について上記定義の通りである］
を有する化合物の治療有効量で患者を治療することを特徴とする。
【００６８】
別の実施形態では、方法は、上記の通りの式Ｘ’を含め、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む式Ｘを有する化合物の治療有効量で患者を治療することを含み、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである。
【００６９】
別の実施形態では、方法は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む上記の通りの式ＸまたはＸ’を有する化合物の治療有効量で患者を治療することを含み、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素であり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである。
【００７０】
別の実施形態では、方法は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む上記の通りの式ＸまたはＸ’を有する化合物の治療有効量で患者を治療することを含み、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルである。
【００７１】
本発明の方法はまた、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む上記の式Ｘａまたはその立体特異性形態Ｘａ’を有する化合物の治療有効量でそのような治療の必要な患者を治療することを含んでもよく、式中、Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；Ｒ6は水素またはメチルであり；Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素、アルキルまたは置換アルキルであり、Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；ｍは０から６である。
【００７２】
本発明の方法はまた、Ｒ6が水素またはメチルである上記の式ＸｂまたはＸｂ’を有する化合物の治療有効量でそのような治療の必要な患者を治療することを含んでよい。さらに別の実施形態では、方法は、Ｒ6が水素である式ＸｂまたはＸｂ’の化合物で患者を治療することを含む。
【００７３】
本発明の別の実施形態は、上記の化合物（式Ｘ、Ｘａ、Ｘａ’、Ｘｂおよび／またはＸｂ’の化合物、式中、Ｋ、Ａ、Ｂ1 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11 Ｒ12およびＲ13基は上記で挙げた通りに選択し得る）の任意のものの、患者の癌を治療するための医薬組成物の作製における使用、特に、葉酸受容体を過剰発現または優先的に発現する腫瘍への標的薬物デリバリーのためのコンジュゲート化合物を含有する医薬組成物の作製における使用を含む。
【００７４】
本発明の別の実施形態は、式Ｘ、Ｘａ、Ｘａ’、Ｘｂおよび／またはＸｂ’（式中、Ｋ、Ａ、Ｂ1 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11 Ｒ12およびＲ13基は上記で挙げた通りに選択し得る）を有する化合物の治療有効量でそのような治療の必要な患者を治療することを含み、ここで、化合物は腫瘍部位で放出されて、治療は腫瘍部位で生じる。この実施形態では、コンジュゲート化合物は腫瘍部位にデリバリーされ、次いで上記定義の通りの式Ｘ、Ｘａ、Ｘａ’、ＸｂまたはＸｂ’の化合物が腫瘍部位で放出され、患者の腫瘍部位を治療する。したがって、本明細書では、用語「治療」が患者の治療に関して使用される場合はいつでも、腫瘍部位の治療を包含するが、例えば、コンジュゲート化合物を介してデリバリーされることが理解される。
【００７５】
葉酸受容体（ＦＲ）のレベルを上方調節する作用物質の使用は、一定の癌細胞または腫瘍のタイプにおけるＦＲ発現を増大させるのに有効であることができ、本発明の化合物を患者に投与して得られる利点を強化し、および／または本発明による葉酸受容体結合化合物で治療できる種々の疾患または腫瘍のタイプを増す。一定の癌での葉酸受容体の発現は、癌細胞での葉酸受容体のレベルを選択的に増大させ、したがって葉酸受容体標的療法の効力を増大させる葉酸受容体誘導物質の投与により上方調節されてもよい。例えば、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）の乳癌は低レベルの葉酸受容体を発現する。葉酸受容体誘導物質、そのようなタモキシフェン、エストロゲンアンタゴニストは、ＥＲ＋乳癌での葉酸受容体の発現を上方調節し、葉酸受容体標的療法による治療に対するＥＲ＋乳癌細胞の感受性を増大させる。
【００７６】
本発明の一態様は、有効量の少なくとも１種の葉酸受容体誘導物質を患者に所望により投与すること、および有効量の式Ｘの少なくとも１種の化合物で患者を治療することを含む、患者の癌または増殖性疾患を治療する方法を提供する。葉酸受容体誘導物質は、患者が式Ｘによる化合物で治療される前、治療中、または治療された後に投与されてよい。一実施形態では、葉酸受容体誘導物質は式Ｘの化合物での治療前に投与される。葉酸受容体誘導物質の有効量は、所望の細胞における葉酸受容体を上方調節して化合物による治療を治療的に有効にする量を指す。
【００７７】
葉酸受容体α（ＦＲα）を上方調節する葉酸受容体誘導物質の例としては、タモキシフェンなどのエストロゲン受容体アンタゴニスト；プロゲスチンなどのプロゲステロン受容体アゴニスト；テストステロンおよびジヒドロキシテストステロンなどのアンドロゲン受容体アゴニスト、ならびにデキサメタゾンなどのグルココルチコイド受容体アゴニストがある。
【００７８】
葉酸受容体β（ＦＲβ）を上方調節する葉酸受容体誘導物質の例としては、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）、テトラメチルナフタレニルプロペニル安息香酸（ＴＴＮＰＢ）、９−シスレチノイン酸（９−シスＲＡ）、ＣＤ３３３３６、ＬＧ１０１０９３およびＣＤ２７８１などのレチノイン酸受容体アゴニストがある。
【００７９】
一実施形態では、有効量の少なくとも１種の葉酸受容体誘導物質を投与し、また式Ｘの少なくとも１種の化合物で患者を治療することを含む、その必要のある患者において癌または増殖性疾患を治療する方法が提供され、ここで、前記葉酸受容体誘導物質は葉酸受容体αを上方調節する。好ましくは、前記癌または増殖性疾患は、乳癌、例えばＥＲ＋乳癌、および卵巣癌から選択される。
【００８０】
本発明の一実施形態では、有効量の少なくとも１種の葉酸受容体誘導物質を投与すること、および有効量の式Ｘの少なくとも１種の化合物を投与することを含む、その必要のある患者において癌または増殖性疾患を治療する方法が提供され、ここで、前記葉酸受容体誘導物質は葉酸受容体βを上方調節する。好ましくは、前記癌または増殖性疾患は白血病から選択され、より好ましくは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）から選択される。
【００８１】
さらなる実施形態では、有効量の少なくとも１種の葉酸受容体誘導物質を投与すること、少なくとも１種のヒストンデアセチラーゼ阻害剤を投与すること、および有効量の式Ｘの少なくとも１種の化合物で患者を治療することを含む、その必要のある患者において癌または増殖性疾患を治療する方法が提供される。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤の例はトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）である。米国特許出願公開番号２００３／０１７０２９９Ａ１、ＷＯ２００４／０８２４６３、Kelly, K. M., B.G. Rowan, and M. Ratnam, Cancer Research 63, 2820-2828 (2003), Wang, Zheng, Behm, and Ratnam, Blood, 96:3529-3536 (2000)。
【００８２】
本発明の化合物は、これも本発明の範囲内に含まれる塩または溶媒和物を形成し得る。別段の記載がない限り、本明細書中の式（Ｘ）の化合物への言及は、その塩および溶媒和物、そのラセミ化合物、ジアステレオマーおよび鏡像異性体への言及を含むと理解される。本明細書で使用される用語「塩（複数可）」は、無機および／または有機酸および塩基と形成した酸性および／または塩基性塩を表す。さらに、式（Ｘ）の化合物が、これらだけに限定するものではないピリジニルイミダゾリル、アミンまたはグアニジニルなどの塩基性部分と、これだけに限定するものではないカルボン酸などの酸性部分との両方を含有する場合、両性イオンが形成されることがあり、これは本明細書で使用される用語「塩（複数可）」に含まれる。医薬的に許容される（即ち、非毒性、生理学的に許容される）塩が好ましいが、その他の塩も、例えば、調製中に用いることがある単離または精製ステップで有用である。式（Ｘ）の化合物の塩は、例えば式（Ｘ）の化合物を当量など、ある量の酸または塩基と、塩が沈殿するものなどの媒体中または水性媒体中で反応させ、次いで凍結乾燥することによって形成してよい。
【００８３】
これらだけに限定するものではないが、アミン、グアニジニル基、またはピリジルもしくはイミダゾリル環などの塩基性部分を含有する式（Ｘ）の化合物は、種々の有機および無機酸と塩を形成することができる。例示的な酸付加塩としては、酢酸塩（例えば、酢酸またはトリハロ酢酸、例えば、トリフルオロ酢酸と形成したものなど）、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩（例えば、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩（例えば、２−ナフタレンスルホン酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、蓚酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩（例えば、３−フェニルプロピオン酸塩）、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、琥珀酸塩、硫酸塩（硫酸と形成したものなど）、スルホン酸塩（本明細書で言及したものなど）、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシレートなどのトルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩などがある。
【００８４】
これだけに限定するものではないが、カルボン酸などの酸性部分を含有する式（Ｘ）の化合物は、種々の有機および無機塩基と塩を形成することができる。例示的な塩基性塩としては、アンモニウム塩；アルカリ金属塩、例えばナトリウム、リチウムおよびカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムおよびマグネシウム塩；有機塩基との塩（例えば、有機アミン）、例えばベンズアチン、ジシクロヘキシルアミン、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ−ビス（デヒドロアビエチル）エチレンジアミンと形成した）、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グリカミド、ｔ−ブチルアミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩などがある。塩基性窒素含有基は、作用物質、例えばハロゲン化低級アルキル（例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチル）、ジアルキル硫酸塩（例えば、硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミル）、長鎖ハライド（例えば、塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル）、ハロゲン化アラルキル（例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル）などがある。
【００８５】
本発明の化合物の溶媒和物も本明細書で企図されている。式（Ｘ）の化合物の溶媒和物には、例えば水和物がある。
【００８６】
鏡像異性体形態およびジアステレオマー形態を含む本化合物の立体異性体の全て（例えば、種々の置換基上の不斉炭素により存在し得るもの）は、本発明の範囲内に企図される。したがって、例えば、式Ｘの化合物への各言及は、式Ｘ’の化合物を包含することを意図する。本発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば、実質的にその他の異性体を含まなくてよく（例えば、特定の活性を有する純粋なまたは実質的に純粋な光学異性体として）、または例えば、ラセミ化合物として、もしくは全てのその他のもしくはその他の選択された立体異性体と混合されていてよい。本発明のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ １９７４ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓで定義されたＳまたはＲ立体配置を有してよい。ラセミ形態は、例えば、ジアステレオマー誘導体の分別結晶、分離もしくは結晶化、またはキラルカラムクロマトグラフィーによる分離によって分割できる。個々の光学異性体は立体特異的方法から得ることができ、ここで、出発物質および／または中間体は、最終生成物に望まれるものに対応する立体化学を有するように選択され、その立体化学は反応の間にわたって維持され、かつ／または異性体は、限定することなく、例えば、光学活性酸との塩形成、その後の結晶化などの慣用の方法を含む任意の適切な方法によってラセミ化合物から得ることができる。
【００８７】
本発明の化合物の配置異性体の全ては、混合物として、または純粋なもしくは実質的に純粋な形態のいずれかで企図される。理解されるように、好ましい立体配置は、望ましい特定の化合物および活性の関数であることができる。配置異性体は、立体選択的であってよい本明細書に記載の方法によって調製してよい。換言すれば、最終化合物の望ましい立体化学は、対応する所望の立体化学を有し、次いでその立体選択性を調製のプロセスの間にわたって維持する出発物質を使用して達成することができる。別法として、本化合物はラセミ化合物またはジアステレオマーとして調製してよく、次いで所望の立体化学は、例えばカラムクロマトグラフィーなどの当技術分野で知られた任意の適切な方法によって達成できる配置異性体の分離を介して達成してよい。
【００８８】
本明細書を通じて、その基および置換基は、医薬的に許容される化合物を作製するのに有用な医薬的に許容される化合物および／または中間体化合物として有用な安定な部分および化合物を提供するように選択され得る。当業者は、安定な化合物を達成する変数を適切に選択するであろう。
【００８９】
例示的または好ましいものとして本明細書で示された実施形態は、例示であることを意図し、限定するものではない。
【００９０】
本発明の他の実施形態は、例えば上記で挙げた実施形態の組合せを考えると当業者には明らかであろうし、本明細書の発明の範囲内に入ることが企図される。
有用性
【００９１】
一定の癌細胞で過剰発現または優先的に発現されるタンパク質の１つは葉酸受容体である。葉酸はＤＮＡ合成に必要であり、一定のヒト腫瘍細胞は葉酸結合タンパク質を過剰発現することが知られている。例えば、Campbell et al., "Folate Binding Protein is a Marker for Ovarian Cancer," Cancer Research, Vol. 51 (Oct. 1, 1991), pp. 5329-38およびConey et al., "Cloning of a Tumor-Associated Antigen: MOv18 and MOv19 Antibodies Recognize Folate-binding Protein," Cancer Research, Vol. 51 (Nov. 15, 1991), pp. 6125-31の両方は、葉酸結合タンパク質が卵巣癌のマーカーであると報告している。葉酸受容体の過剰発現はまた、その他の癌、例えば、皮膚、腎臓、胸部、肺、結腸、鼻、咽喉、乳腺および脳の癌、ならびに本明細書で挙げられたその他の癌について知られている。
【００９２】
本発明の化合物は、葉酸受容体を発現する腫瘍のエポチロン誘導微小管安定化剤として有用であり、デリバリーされ得る。本発明の化合物は、種々の癌およびその他の増殖性疾患、特に葉酸受容体を発現する癌細胞または腫瘍を特徴とする癌の治療に有用である。本明細書で使用される用語「葉酸受容体関連状態」は、葉酸受容体の発現を特徴とする疾患または障害、あるいは換言すれば、正常組織と比較した疾患組織での葉酸受容体の発現レベルに基づいて診断または治療できる疾患または障害を含む。本発明の化合物はコンジュゲートの形成に有用である。例えば、本発明の化合物を使用して以下の式Ｉ：
【化１５】
Ｉ
［式中、
Ｖは、葉酸、またはその類似体もしくは誘導体であり；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＲ7であり；
Ｍは解離可能なリンカーであり；
Ｋは、Ｏ、ＳまたはＮＲ7aであり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６であり；
Ｔは、式：
【化１６】
を有しており、その中で、
Ｒ14は、各々独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、置換シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキルであり；
ｑは１から１０であり；
Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は、独立して、水素、アルキル、置換アルキルまたはシクロアルキルである］
のコンジュゲート化合物を形成してよい。
【００９３】
別の非限定的な例として、本発明の化合物を使用して、以下の式Ｉａ：
【化１７】
Ｉａ
［式中、Ｖは葉酸受容体結合部分である］
のコンジュゲート化合物を形成してよい。例えば、Ｖは以下の式：
【化１８】
［式中、ＷおよびＸは、独立して、ＣＨまたは窒素であり；
Ｒ20は、水素、アミノまたは低級アルキルであり；
Ｒ21は、水素、低級アルキルであり、またはＲ23とシクロアルキル基を形成し；
Ｒ22は、水素、低級アルキル、低級アルケニルまたは低級アルキニルであり；
Ｒ23は水素であり、またはＲ21とシクロアルキルを形成する］
を有してよい。好ましくは、Ｖは、
【化１９】
である。
【００９４】
本発明の化合物はコンジュゲートして、以下の式Ｉｂ：
【化２０】
Ｉｂ
［式中、
Ｖは葉酸受容体結合部分であり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＲ7であり；
Ｍは以下の式を有する解離可能なリンカー
【化２１】
好ましくは
【化２２】
であり；
Ｒ14は、各々独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、置換シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキルであり；好ましくは、Ｈ、メチル、グアニジニルプロピル、−（ＣＨ2）1~2−ＣＯ2Ｈ、−ＣＨ2−ＳＨ、−ＣＨ2−ＯＨ、イミダゾリル（メチル）、アミノブチルおよび−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ3から選択される基であり；より好ましくは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨまたは−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ2の１つで置換されたＣ1からＣ3アルキルであり；
ｑは１から１０；好ましくは１から５であり；
Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は、独立して、水素、低級アルキルまたは置換低級アルキルであり；
Ｒ18、Ｒ19、Ｒ31、Ｒ32、Ｒ33、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28およびＲ29はそれぞれ、独立して、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり、あるいはＲ18とＲ19、Ｒ31とＲ32、Ｒ19とＲ31、Ｒ33とＲ24、Ｒ25とＲ26、Ｒ24とＲ25、またはＲ27とＲ28はいずれも一緒になって、シクロアルキルを形成してもよい］
を有する化合物を形成することができる。
【００９５】
本発明の化合物は、その医薬的に許容される塩および溶媒和物を含む、以下の式：
【化２３】
を有するコンジュゲート化合物を形成するのに特に有用である。
【００９６】
式Ｉ：
【化２４】
Ｉ
の化合物に挿入できる−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−など、本明細書に挙げた任意の二価基について、その挿入は左から右へなされるべきである。例えば、Ａが−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−と定義される以下の場合、以下の通り、メチレン基はＫに結合し、Ｚ基はアジリジニル環の窒素に結合している。
【化２５】
【００９７】
非限定的実施例として、そのような葉酸受容体関連の癌としては、卵巣癌、ならびに皮膚、胸部、肺、結腸、鼻、咽喉、乳腺、肝臓、腎臓、脾臓および／または脳の癌；中皮腫、下垂体腺腫、子宮頚癌、腎細胞癌またはその他の腎臓癌、脈絡叢癌および上皮性腫瘍がある（Asok, Antony, "Folate Receptors: Reflections on a Personal Odyssey and a Perspective on Unfolding Truth," Advanced Drug Delivery Reviews 56 (2004) 1059-66参照）。
【００９８】
さらに、抗エストロゲン（タモキシフェン、ＩＣＩ１８２、７８０など）の使用は、一定の癌細胞または腫瘍タイプにおけるＦＲ発現を増大させて本発明の化合物を患者に投与したときに得られる利点を強化するのに、および／または本発明による化合物で治療できる種々の疾患もしくは腫瘍タイプを増加させるのに有効であり得る。
【００９９】
例えば、本発明の化合物で、および／または本発明の化合物を抗エストロゲンと組み合わせて含む併用療法で治療できる疾患としては、限定することなく、さらに以下のものがある：
− 上掲のものを含む癌腫および／または膀胱、膵臓、胃、甲状腺および前立腺の癌腫；
− 急性リンパ球性白血病および急性リンパ芽球性白血病などの白血病、ならびにＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫およびバーキットリンパ腫などのリンパ腫を含む、リンパ球系列の造血腫瘍；
− 急性および慢性骨髄性白血病および前骨髄球性白血病を含む、骨髄系列の造血腫瘍；
− 星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫および神経鞘腫を含む、中枢および末梢神経系の腫瘍；
− 線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含む、間葉由来の腫瘍；ならびに
− 黒色腫、色素性乾皮症、精上皮腫、角化棘細胞腫、甲状腺濾胞癌および奇形癌を含む、その他の腫瘍。
【０１００】
本発明の化合物は、以前に癌の治療をしたことのある患者、ならびに以前に癌の治療をしたことのない患者を治療するのに有用である。本発明の方法および組成物は、一次および二次癌治療で使用できる。さらに、式（Ｘ）の化合物は、難治性または抵抗性癌を治療するのに有用であり得る。
【０１０１】
本発明の化合物は、これらだけに限定するものではないが、関節炎、特に炎症性関節炎および活性化マクロファージに媒介されるその他の炎症性状態、ならびにアルツハイマー病などの中枢神経系障害を含む、葉酸受容体を介してデリバリーされる微小管安定化剤に反応性のその他の状態の治療にも有用であり得る。
【０１０２】
さらに、本発明の化合物で治療される患者は、例えば、その他の抗癌剤および細胞毒性剤での治療、または癌もしくはその他の増殖性疾患の治療で有用なその他の治療との組合せを受けてよい。癌の治療では、本発明の化合物および１種または複数の追加の作用物質および／またはその他の治療の組合せは有利であり得る。第２の作用物質は式（Ｘ）の化合物と同じまたは異なる作用機序を有してよい。特に有用なのは、選択された第２の薬物が本発明の本化合物の活性薬物部分と異なる様式でまたは細胞周期の異なる相で作用する抗癌剤および細胞毒性剤の組合せである。
【０１０３】
抗癌剤および細胞毒性剤のクラスの例としては、これらだけに限定するものではないが、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、エチレンイミンおよびトリアゼン；代謝拮抗物質、例えば、葉酸アンタゴニスト、プリン類似体およびピリミジン類似体；抗生物質または抗体、例えば、モノクローナル抗体；酵素；ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ホルモン剤、例えば、グルココルチコイド、エストロゲン／抗エストロゲン、アンドロゲン／抗アンドロゲン、プロゲスチンおよび黄体ホルモン放出アンタゴニスト；微小管破壊剤、例えば、エクチナサイジンまたはそれらの類似体および誘導体；微小管安定化剤；植物誘導生成物、例えば、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシンおよびタキサン；トポイソメラーゼ阻害剤；プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；白金配位錯体；マルチキナーゼ阻害剤および／またはＳｒｃキナーゼもしくはＳｒｃ／ａｂｌの阻害剤を含むキナーゼ阻害剤；情報伝達阻害剤；ならびに抗癌剤および細胞毒性剤として使用されるその他の作用物質、例えば、生物学的応答調節物質、成長因子および免疫調節剤がある。式Ｘの化合物は放射線療法と組み合わせて使用してもよい。
【０１０４】
本発明の化合物と組み合わせて使用してよい抗癌剤のさらなる例としては、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤、‘Ｎ−（２−クロロ−６−メチルフェニル）−２−［［６−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］−２−メチル−４−ピリミジニル］アミノ］−５−チアゾールカルボキサミド、ならびに参照により本明細書に援用する米国特許第６，５９６，７４６号および２００５年２月４日出願の米国特許出願第１１／０５１，２０８号に記載のその他の化合物；イクサベピロン、アザ−エポチロンＢ類似体および／または米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，２６２，０９４号；同第６，２８８，２３７号；同第６，２９１，６８４号；同第６，３５９，１４０号；同第６，３６５，７４９号；同第６，３８０，３９５号；同第６，３９９，６３８号；同第６，４９８，２５７号；同第６，５１８，４２１号；同第６，５７６，６５１号；同第６，５９３，１１５号；同第６，６１３，９１２号；同第６，６２４，３１０号、２００３年３月公開の米国出願公開第２００３／００６０６２３号；ドイツ国特許第４１３８０４２．８号；ＷＯ９７／１９０８６、ＷＯ９８／２２４６１、ＷＯ９８／２５９２９、ＷＯ９８／３８１９２、ＷＯ９９／０１１２４、ＷＯ９９／０２２２４、ＷＯ９９／０２５１４、ＷＯ９９／０３８４８、ＷＯ９９／０７６９２、ＷＯ９９／２７８９０、ＷＯ９９／２８３２４、ＷＯ９９／４３６５３、ＷＯ９９／５４３３０、ＷＯ９９／５４３１８、ＷＯ９９／５４３１９、ＷＯ９９／６５９１３、ＷＯ９９／６７２５２、ＷＯ９９／６７２５３、ＷＯ００／００４８５、米国特許出願公開番号２００４／００５３９１０および２００４／０１５２７０８に記載のその他のエポチロン類似体；ＷＯ９９／２４４１６（米国特許第６，０４０，３２１号も参照）に見い出されるサイクリン依存性キナーゼ阻害剤；ＷＯ９７／３０９９２およびＷＯ９８／５４９６６に見い出されるプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；米国特許第６，０１１，０２９号に記載のファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ剤；ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／１４４２４に記載のＣＴＬＡ−４抗体、および／またはＰＣＴ公開番号ＷＯ００／３７５０４に記載のＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＣＰ−６７５２０６（チシリムマブ(ticilimunab)）として知られている抗体、またはＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）；ＭＤＸ−０１０；ビンフルニン（Ｊａｖｌｏｒ（商標））およびＥｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）がある。
【０１０５】
本発明の化合物と組み合わせるのに潜在的に有用なその他の作用物質としては、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、雑多な作用物質、例えば、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、ミトタン、ヘキサメチルメラミン、シスプラチンおよびカルボプラチン；Ａｖａｓｔｉｎ；およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎが挙げられる。
【０１０６】
本発明に従って調製された医薬組成物はまた、上記の状態に関連する療法の投与において特に有用であるために選択されたその他の治療剤と共に製剤されるか、共投与することができる。例えば、医薬組成物は、吐き気、過敏症および胃の不快感を予防する作用物質、例えば、制吐薬、ならびにＨ1およびＨ2抗ヒスタミン剤と製剤してよい。
【０１０７】
上記のその他の治療剤は、本発明の化合物と組み合わせて用いる場合、例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）で示された量、さもなければ当業者が決定した量で使用できる。
【０１０８】
本発明の一実施形態は、癌を治療する医薬組成物の調製における本発明化合物の使用、特に、葉酸受容体を過剰発現または優先的に発現する腫瘍への標的薬物デリバリーで使用する医薬組成物の調製における使用を含む。本発明の医薬組成物は、本明細書で記載の使用の任意のものに、任意の適切な手段、例えば、非経口的に、例えば、皮下、静脈内、筋肉内または胸骨内注射または注入技術（例えば、滅菌注射水性または非水性溶液または懸濁液）によって、および／または非毒性、医薬的に許容されるビヒクルもしくは希釈剤を含有する用量単位製剤で投与できる。医薬組成物は、例えば、即時放出または持続放出に適した形態で投与できる。即時放出または持続放出は、本化合物を含む適切な医薬組成物の使用により、または特に持続放出の場合、例えば皮下インプラントまたは浸透圧ポンプなどのデバイスの使用によって達成できる。
【０１０９】
非経口投与用の例示的な組成物としては、例えば、適切な非毒性、非経口的に許容される希釈剤または溶媒、例えば、マンニトール、１，３−ブタンジオール、水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム溶液（０．９％塩化ナトリウム注射［生理食塩水］または５％デキストロース注射）、または合成モノグリセリドもしくはジグリセリドおよび脂肪酸を含むその他の適切な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁化剤を含有できる注射溶液または懸濁液がある。医薬的に許容される組成物および／または本発明の化合物を投与する方法は、限定するものではないが、エタノール、Ｎ，Ｎジメチルアセトアミド、プロピレングリコール、グリセロールおよびポリエチレングリコール、例えば、ポリエチレングリコール３００および／またはポリエチレングリコール４００を含む共溶媒の使用を含むことがあり、限定することなく、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、ＳＯＬＵＴＯＬ ＨＳ １５（登録商標）、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー、ピロリドン、例えばＮ−アルキルピロリドン（例えば、Ｎ−メチルピロリドン）および／またはポリビニルピロリドンを含む界面活性物質（その表面張力を減少させることによって化合物の拡散性または湿潤性を増大するのに使用し得る医薬的に許容される界面活性剤）の使用を含むことがあり；限定することなく、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−アラニン、グリシン、炭酸ナトリウム、トロメタミン（ａ／ｋ／ａトリス［ヒドロキシメチル］アミノメタンまたはＴｒｉｓ）および／またはその混合物を含む１種または複数の「バッファー」（例えば、酸または塩基を少しずつ加えたときに媒体の有効酸性度またはアルカリ性度の変化に抵抗する能力を付与する成分）の使用を含むこともある。
【０１１０】
本発明の化合物の有効量は、当業者が決定でき、１日当たり１から４回など、単回用量または個々の分割用量で投与できる、１日当たりの活性化合物の約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の成人の例示的な用量を含む。好ましい範囲には約０．０２から５ｍｇ／ｋｇ体重の用量が含まれ、約０．０５〜０．３の範囲が最も好ましい。任意の特定の対象の特定の用量レベルおよび投与頻度は変化することができ、用いる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、対象の種、年齢、体重、総体的な健康、性別および食事、投与の様式および時間、排泄率、薬物の組合せおよび特定の状態の重篤度を含む種々の要因に応じる。治療に好ましい対象としては、微小管安定化関連状態の動物、最も好ましくはヒトなどの哺乳動物種、イヌ、ネコなどの愛玩動物が挙げられる。
【０１１１】
以下の実施例の１つまたは複数に開示された化合物など、本発明の化合物は、下記のアッセイおよび／または当技術分野で知られたアッセイの１つまたは複数で試験されており、微小管安定化剤として測定可能なレベルの活性を示す。
アッセイ
クローン原性細胞生存アッセイ
【０１１２】
ＲＰＭＩ１６４０培地１０ｍｌを含み、葉酸を含まず、１０％ウシ胎仔血清および２５ｍＭのＨＥＰＥＳを含有するＴ７５フラスコに３．０×１０5細胞で癌細胞を播種した。５％のＣＯ2を含有する３７℃のインキュベーター中で細胞を２日間増殖させた。２日目に、上清をフラスコから除去し、フラスコを２つのグループに分けた。１つのグループの細胞は、１００Ｍの葉酸（Ｓｉｇｍａ）を含有する培地５ｍｌと共に３０分間インキュベートし、その他は葉酸を加えていない培地５ｍｌ中で増殖させた。次いで細胞を２０ｎＭのエポチロン、エポチロン類似体、複合エポチロンまたは複合エポチロン類似体で１時間処理した。インキュベーションの終わりに、薬物をフラスコから除去し、細胞をＰＢＳバッファーで３回洗浄した。洗浄後、完全培地５ｍｌを各フラスコに加え、細胞をＣＯ2インキュベーターで２３時間増殖させた。翌朝、細胞をフラスコからトリプシン処理によって除去し、細胞数を判定し、次いで細胞を６ウェルプレートに播いた。プレートに播いた１０日後、コロニーをクリスタルバイオレットで染色し、計数した。生存率を判定した。
インビトロＭＴＳ増殖／細胞毒性アッセイ
【０１１３】
ＭＴＳ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内塩）の、４９２ｎｍで光を吸収する還元型への代謝変換を利用するテトラゾリウム系比色アッセイを使用して腫瘍細胞におけるインビトロ細胞毒性を評価した。エポチロン、エポチロン類似体、複合エポチロンまたは複合エポチロン類似体を加える２４時間前に細胞を播種した。３７℃で段階希釈した化合物と共に７２時間インキュベートした後、電子カップリング剤メト硫酸フェナジンと組み合わせたＭＴＳを細胞に加えた。インキュベーションを３時間続け、次いで４９２ｎｍでの培地の吸光度を分光光度計で測定して、対照集団と比較した生存細胞の数を得た。結果は中央細胞毒性濃度（ＩＣ50値）として表す。
葉酸受容体アッセイ
【０１１４】
ＦＲアッセイに使用した試料調製手順全てを４℃で実施した。均質化バッファー（１０ｍＭトリス、ｐＨ８．０、ロイペプチンおよびアプロチニンそれぞれ０．０２ｍｇ／ｍｌ；バッファー１ｍｌ／組織５０ｍｇ）中、ＰｏｗｅｒＧｅｎ １２５ホモジナイザーを使用して組織試料を均質化した。大きな破片は穏やかな遠心分離（３０００×ｇで１５分間）で除去した。次いで膜ペレットを４０，０００×ｇで６０分間の遠心分離によって集め、溶化バッファー（５０ｍＭトリス、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭ ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、５ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁した。不溶性物質を第２の４０，０００×ｇで６０分間の遠心分離によって除去し、上清の総タンパク質濃度はビシンコニン酸（ＢＣＡ）法（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）で測定した。次いで、各試料を可溶化バッファー中０．２５ｍｇ／ｍｌに希釈し、２つのＭｉｃｒｏｃｏｎ−３０ミクロ濃縮器（３０，０００−ＭＷカットオフ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）のそれぞれの内部に１００μｌを入れた。次いで、試料を１４，０００×ｇで１０分間、室温で遠心分離し、全液体を膜に通し、ならびに可溶化ＦＲをミクロ濃縮器の膜の表面に保持した。これらの同じパラメータを使用して全てのその後の遠心分離工程を実施した。次いで、３０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ３．０）５５μｌを各ミクロ濃縮器に加え、その後、遠心分離工程を続けた。次に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）５５μｌを各ミクロ濃縮器に分配し、その後、別の遠心分離を続けた。次いで、５０μｌの［3Ｈ］葉酸結合試薬（５００ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌおよび２５ｍＭ ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有する１０ｍＭ Ｎａ2ＰＯ4、１．８ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4、ｐＨ７．４中の１２０ｎＭ ［3Ｈ］葉酸（Ａｍｅｒｓｈａｍ））または５０μｌの競合試薬（結合試薬＋１２０μＭ非標識葉酸）を適切な濃縮器に加えた。２０分間室温でインキュベートした後、ＰＢＳ、ｐＨ７．４中の５０ｍＭ ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、０．７Ｍ ＮａＣｌの７５μｌで３回濃縮器を洗浄／遠心分離した。最終洗浄の後、４％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ １００μｌで２回すすぐことによりミクロ濃縮器の膜表面から可溶化ＦＲを含有する濃縮水を回収した。次いで試料を液体シンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で計数した。カウント毎分（ｃｐｍ）値は、既知の標準のｃｐｍに基づいてＦＲのピコモルに変換し、最終結果は試料のタンパク質含量に対して正規化した。
動物および腫瘍
【０１１５】
制御環境中に維持し、水および食物を自由に与えた雌性ＣＤ２Ｆ１マウス（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ Ｉｎｃ．、２０〜２２ｇ）を、これらの試験で使用した。ネズミＦＲα（−）Ｍａｄｉｓｏｎ １０９（Ｍ１０９）肺癌（Marks et al.、１９７７）およびＦＲ発現（ＦＲα（＋））９８Ｍ１０９変異体を使用して、エポチロン、エポチロン類似体（例えば、エポチロン誘導体）、葉酸−エポチロンコンジュゲートまたは葉酸−エポチロン類似体コンジュゲートの効力を評価した。さらに、ヌードマウスで増殖させたヒト頭頸部類表皮癌ＫＢもこの目的で使用した。
薬物治療および抗腫瘍効力評価
【０１１６】
エポチロンまたはエポチロン類似体をマウスに投与するために、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）／エタノール／水（１：１：８、ｖ／ｖ）からなる賦形剤を使用した。化合物をまず、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）／エタノール（５０：５０）の混合物に溶解させた。所要の用量強度への最終希釈は、薬物投与前１時間未満に行った。ボーラスＩＶ注射により尾静脈からマウスに作用物質を投与した。葉酸−エポチロンコンジュゲートまたは葉酸−エポチロン類似体コンジュゲートは、滅菌リン酸緩衝食塩水中で調製し、ＩＶボーラス注射により尾静脈から０．０１ｍＬ／ｇマウスの容量で投与した。各動物の処置は個々の体重に基づいた。
【０１１７】
意味のある応答を検出するのに必要な動物の所要数は、実験の開始時にプールし、それぞれに腫瘍ブライ(tumor brei)（２％ｗ／ｖ）を皮下接種した。腫瘍を４日間増殖させた。４日目に、動物を種々の処置群および対照群に均等に区分した。処置した動物を処置に関連する毒性／死亡率について毎日チェックした。動物の各群は処置の開始前に体重を計り（Ｗｔ１）、次いで再び最後の処置投薬後に計った（Ｗｔ２）。体重の差（Ｗｔ２−Ｗｔ１）は処置に関連する毒性の尺度となる。
【０１１８】
腫瘍が１ｇの所定の「目的の」サイズに達するまで、腫瘍の応答は週に２回のカリパスでの腫瘍の測定により判定した。腫瘍の重さ（ｍｇ）は次式から見積もった。
腫瘍の重さ＝（長さ×幅2）÷２
【０１１９】
抗腫瘍活性は、過度の毒性（即ち、複数の死亡）が起こる直前の用量レベルとして定義される最大許容用量（ＭＴＤ）で評価した。死亡した場合は、死亡した日を記録した。腫瘍が目的のサイズに達する前に死亡した処置したマウスは、薬物毒性で死亡したと考えた。目的のサイズ未満の腫瘍を有する対照マウスは死亡しなかった。薬物の毒性が原因で複数の死亡があった処置群は、過度の毒性処置があったと考え、そのデータは化合物の抗腫瘍効力の評価には含めなかった。
【０１２０】
腫瘍の応答の終点は、処置された腫瘍が所定の目的のサイズに達するのに要求される時間（日）（Ｔ）を対照群の時間（Ｃ）と比較した差として定められる腫瘍の増殖の遅れ（Ｔ−Ｃ値）によって表した。
【０１２１】
腫瘍細胞の死滅を見積もるため、腫瘍容量倍加時間（ＴＶＤＴ）はまず次式で計算した。
ＴＶＤＴ＝対照の腫瘍が目的のサイズに達する時間（日）の中央値−対照の腫瘍が目的のサイズの半分に達する時間（日）の中央値
および
Ｌｏｇ（細胞死滅）＝Ｔ−Ｃ÷（３．３２×ＴＶＤＴ）
データの統計的評価は、Ｇｅｈａｎの一般化Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定を使用して行った。
略語
【０１２２】
参照し易いように、本明細書のスキームおよび実施例では以下の略語を使用する。
ＣＢＺ−ＯＳｕ＝Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＥＡ＝ジエチルアミン
ＤＩＡＤ＝アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ＝ジメチルアミン
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ＝１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥｔＯＨ＝エタノール
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＦＲ＝葉酸受容体
ＨＯＢｔ＝ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＣＬ＝高速液体クロマトグラフィー
ｉＰｒ−ＯＨまたはＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＬＣ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー／質量スペクトル
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
ＭｅＯＨ＝メタノール
ＯＴＥＳ＝ｏ−トリエチルシリル；
ＯＭｓ＝メシレート；
Ｐｈ＝フェニル
Ｐｄ／Ｃ＝炭素付パラジウム
ＰｙＢＯＰ＝ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩
Ｐｙ＝ピリジル
ＲＴ＝室温
Ｓａｔ’ｄ＝飽和
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー
ＴＥＳＣＬ＝クロロトリエチルシラン
ＵＶ＝紫外線。
調製方法
【０１２３】
本発明の化合物は一般に、以下のスキームおよび当業者の知識に従って、ならびに／または参照によりおよび／もしくは以下の実施例にその開示が本明細書で援用される米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，８３１，０９０号；同第６，８００，６５３号；同第６，２９１，６８４号；同第６，７１９，５４０号；同第７，１７２，８８４号、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２号、およびOrganic Letters, 2001, 3, 2693-2696で挙げられた方法を使用して調製してよい。
【０１２４】
スキーム１で示した通り、式Ｘの化合物は式ＩＩの化合物から調製できる。式ＩＩの化合物は発酵（例えば、参照によりその開示が本明細書で援用されるGerth et al., "Studies on the Biosynthesis of Epothilones: The Biosynthetic Origin of the Carbon Skeleton," Journal of Antibiotics, Vol. 53, No. 12 (Dec. 2000)およびHofle et al., "Epothilone A and B- Novel 16-Membered Macrolides: Isolation, Crystal Structure, and Conformation in Solution", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, No. 13/14, 1567-1569 (1996)参照）、または合成（例えば参照によりその開示全体が本明細書で援用されるVite et al.、米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，２４２，４６９号；同第６，８６７，３３３号および米国特許出願公開２００６／００４０６５およびJohnson et al. Organic Letters, 2000, 2:1537-1540参照）によって得ることができる。例えば、式ＩＩの化合物（Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ12は、メチルであり、Ｂ1はヒドロキシルであり、Ｒ1およびＲ6は水素であり、Ｒ2は２−メチルチアゾール−４−イルである）はエポチロンＡと呼ばれ、上記の通りソランジウム・セルロースムの発酵から得ることができる。式ＩＩの化合物は式ＩＩＩの化合物に変換でき、Ｐは、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリルなどのシリル保護基である（例えば、Greene et al., "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Inc.参照）。例えば、式ＩＩＩの化合物（Ｐはトリエチルシリルである）は、ヒューニッヒ塩基の存在下で式ＩＩの化合物をクロロトリエチルシランで処理することによって調製できる。式ＩＩの化合物でＢ1がヒドロキシルである場合、Ｂ1はまた対応するシリルエーテルに変換される。式ＩＶ（Ｙは、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである）のハロヒドリンは、式ＩＩＩの化合物から当技術分野で知られた方法によってハロゲン化金属塩で処理することにより調製できる。例えば、マグネシウムブロミドエーテレートを使用して低温（−２０から−５℃）でエポキシド開環することにより、Ｙが臭素であるジアステレオマーハロヒドリンを得ることができる。式Ｖの化合物は、式ＩＶの化合物から、例えば、ジメチルホルムアミドなどの極性溶媒中アジ化ナトリウムを使用してハロゲンを置き換えることによって調製できる。当業者は、スキームＩに示したＣ12の立体化学が限定的なものではなく例示的なものと解釈すべきであることを理解するであろう。所望により、Ｃ12位での立体化学の反転は、当技術分野でよく確立された光延プロトコールに従って達成できる。例えば、式Ｖの化合物をｐ−ニトロ安息香酸、ジエチルアゾジカルボキシレートおよびトリフェニルホスフィンで処理すると、対応するニトロ安息香酸エステルが得られ、次いでこれを、例えばアンモニアのメタノール溶液を使用する穏やかなエステル加水分解で切断して式ＶＩの化合物を得ることができる。再び、化合物ＶＩについて示したＣ12の立体化学は、限定するものではなく、記載した通りに化合物Ｖを処理することによりその位置の立体化学を反転させることを示すものとして描かれている。別法として、他の有機酸、アゾジカルボキシレートおよびオルガノホスフィンを使用して光延反転を実施することができる。ＯＧが、メシレート、トシレート、ノシレート、トリフレートなどの脱離基である式ＶＩＩの化合物は、式ＶＩの化合物から当技術分野で知られた方法によって調製できる。例えば、ＶＩをジクロロメタンなどの適切な有機溶媒中、塩化メタンスルホニルおよびトリエチルアミンで処理することにより、ＯＧがメシレートである式ＶＩＩの化合物を得る。式ＶＩＩＩの化合物は、式ＶＩＩの化合物からアジド基をオルガノホスフィン（例えば、トリメチルホスフィン）などの還元剤で還元することによって調製できる。別法として、式ＶＩＩＩの化合物は、式ＶＩの化合物からトリフェニルホスフィンなどのオルガノホスフィン還元剤を使用することによって直接調製できる。式ＩＸの化合物は式ＶＩＩＩの化合物から当技術分野で知られた方法によって調製できる（例えば、米国特許第６，８００，６５３号；およびRegueiro-Ren et al., Organic Letters, 2001, 3, 2693-2696参照）。例えば、Ｈ−Ｋ−Ａ−が２−ヒドロキシエチルである式ＩＸの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物から、例えば、過剰の２−ブロモエタノールおよび炭酸カリウムなどの塩基を使用してアジリジン環をアルキル化することによって調製できる。式Ｘの化合物は式ＩＸの化合物から当技術分野で知られた方法を使用してシリルエーテル保護基を除去することによって調製できる（例えば、Greene et al., "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Inc.参照）。例えば、Ｐがトリエチルシリルである場合、式ＩＸの化合物をジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸で処理することにより脱保護して式Ｘの化合物を得る。
【化２６】
【０１２５】
スキーム２は、葉酸類似体または誘導体Ｖ、および本発明の化合物と一緒に使用して、例えば上記の式Ｉのような標的薬物デリバリーのための複合分子を作製し得る以下の式ＸＩを有する二価リンカーＴ−Ｑを作製する方法を示す。スキーム２で示した通り、葉酸類似体および二価リンカーは、当技術分野で知られた方法を使用して、特に、Ｖが、例えば、その開示を参照により本明細書に援用するJackson, et al., Advanced Drug Delivery Rev. 56(2004) 1111-1125で記載の通りの葉酸または葉酸類似体であり、Ｔ−Ｑがペプチドである場合、結合させることができる。例えば、ペプチジル葉酸ＸＩはスキーム２で示した通りに調製できる。システイン保持ポリスチレン樹脂とＦｍｏｃ保護されたアスパルテート、アルギニン、アスパルテート、さらにグルタメートとの連続的ペプチドカップリングは、ＰｙＢＯＰをカップリング剤として、およびピペリジンをＦｍｏｃ脱保護剤として使用して実施できる。Ｎ10−トリフルオロアセトアミド保護プテロイン酸は、葉酸からプテロイン酸への酵素的（カルボキシペプチダーゼＧ）、次いで無水トリフルオロ酢酸を使用するＮ10−保護の２ステップで調製できる。次に、Ｎ10−保護プテロイン酸を樹脂結合ペプチドにカップリングさせ、次いで樹脂からトリフルオロ酢酸で切断し、水酸化アンモニウムを使用してＮ10−トリフルオロアセチル基を除去すると、式Ｉの化合物のＶ−Ｔ−Ｑ断片（Ｖは葉酸であり、Ｔ−Ｑは−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−ＯＨである）が得られる。別法として、プテロイン酸類似体は、プテロイン酸およびその他のアミノ酸の代わりに使用することができ、スキーム２で例示されたものの代わりに使用することができる。
【化２７】
【０１２６】
以下のスキーム３は、本発明のエポチロン誘導体を使用して、標的薬物デリバリーで使用するための式Ｉの複合分子を調製する方法を示す。スキーム３で示す通り、式Ｉの化合物のアセンブリーは、解離可能なリンカーＭを段階的に取り込むことにより式Ｘの化合物を断片Ｖ−Ｔ−Ｑとカップリングさせることによって達成できる。例として、−Ａ−Ｋ−Ｈが−ＣＨ2ＣＨ2ＯＨである式Ｘの化合物は、式ＸＩＩの活性化ベンゾトリアゾール化合物を使用して炭酸ジスルファニルエチルＸＩＩＩに変換できる。式ＸＩＩの化合物は、メルカプトエタノール、メトキシカルボニルスルフェニルクロリド、および適宜置換された２−メルカプトピリジンから調製して、中間体２−（２−ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノールを提供することができ、次いでこれは、ジホスゲンおよび適宜置換された１−ヒドロキシベンゾトリアゾールで処理することによって式ＸＩＩの化合物に変換できる。ＸＩなどのペプチジル葉酸でのそれに続くジスルフィド交換により、式Ｉの化合物（Ｖは葉酸であり、Ｔ−Ｑは−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−ＯＨであり、Ｍは−ＳＣＨ2ＣＨ2Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ａは−ＣＨ2ＣＨ2−であり、ＫはＯである）が得られる。
【化２８】
【０１２７】
スキーム４は、式Ｘの化合物を式ＸＩＶの化合物から作製する代替法を説明する（その全体を参照により本明細書に援用する、２００６年５月２５日出願の米国特許出願第６０／９４０，０８８号参照）。式ＸＩＶの化合物は、当技術分野でよく知られた方法によって、例えば、発酵によって（例えば、参照によりその開示が本明細書で援用されるGerth et al., "Studies on the Biosynthesis of Epothilones: The Biosynthetic Origin of the Carbon Skeleton," Journal of Antibiotics, Vol. 53, No. 12 (Dec. 2000)およびHofle et al., "Epothilone A and B- Novel 16-Membered Macrolides: Isolation, Crystal Structure, and Conformation in Solution", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, No. 13/14, 1567-1569 (1996)参照）、または全合成によって（例えば、参照によりその開示全体が本明細書で援用されるVite et al.米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，２４２，４６９号；同第６，８６７，３３３号および米国特許出願公開２００６／００４０６５参照）得ることができる。例えば、式ＸＩＶの化合物（Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ12はメチルであり、Ｂ1はヒドロキシルであり、Ｒ1およびＲ6は水素であり、Ｒ2は２−メチルチアゾール−４−イルである）はエポチロンＣと呼ばれ、上記の通りソランジウム・セルロースムの発酵から得ることができる。式ＸＩＶの化合物は、Ｐが、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリルなどのシリル保護基である式ＸＶの化合物に変換できる（例えば、Greene et al., "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Inc.参照）。例えば、Ｐがトリエチルシリルである式ＸＶの化合物は、式ＸＩＶの化合物をクロロトリエチルシランにより、ヒューニッヒ塩基などの塩基の存在下で処理することにより調製できる。式ＸＩＶの化合物においてＢ1がヒドロキシルである場合、Ｂ1はまた対応するシリルエーテルに変換し得る。式ＸＶＩまたはＸＶＩＩ（Ｙは、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである）のハロヒドリンは、式ＸＶの化合物から、Ｙ2などのハロゲン化剤で処理することによって調製できる。例えば、ヨウ素を使用してアセトニトリルなどの極性溶媒中で求電子付加することにより、Ｙがヨウ素である式ＸＶＩおよびＸＶＩＩの位置異性体ハロヒドリンを立体選択的に得ることができる。別法として、Ｎ−ハロスクシンイミドも同じ変換に使用できる。式ＸＶＩＩＩの化合物は、式ＸＶＩおよび／またはＸＶＩＩの化合物から、アセトニトリル／水などの極性／水性溶媒系中のトリエチルアミンまたはヒューニッヒ塩基などの塩基の存在下でのエポキシド閉環により調製できる。所望により、化合物ＸＩＶは式ＸＶＩおよび／またはＸＶＩＩ（ＰはＨである）の化合物に直接変換でき、次いでこれはエポキシドＸＶＩＩＩ（ＰはＨである）に変換できる。式ＸＶＩＩＩの化合物は、アルコール溶媒中の無機アジド塩またはテトラ−アルキルアンモニウムアジドの存在下でアジド置換することにより式ＶＩおよびＸＩＸのアジド−アルコールに変換できる。Ｐがシリル保護基である場合、ＯＧが、メシレート、トシレート、ノシレート、トリフレートなどの脱離基である式ＸＸおよび／またはＸＸＩの化合物は、式ＶＩおよび／またはＸＩＸの化合物から当技術分野で知られた方法によって調製できる。例えば、ＶＩおよび／またはＸＩＸを塩化メタンスルホニルおよびトリエチルアミンでジクロロメタンなどの適切な有機溶媒中で処理することにより、ＯＧがメシレートである式ＸＸおよびＸＸＩの化合物を得る。式ＶＩＩＩの化合物は、式ＸＸおよび／またはＸＸＩの化合物から、当技術分野で知られた方法でアジド基を還元することにより調製できる。例えば、化合物ＶＩＩＩは、式ＸＸおよび／またはＸＸＩの化合物から、アセトニトリルなどの極性溶媒中、オルガノホスフィン（例えば、トリメチルホスフィン）などの還元剤との反応で調製できる。別法として、ＰがＨの場合、式ＶＩＩＩの化合物は、式ＶＩおよび／またはＸＩＸの化合物から、アセトニトリルなどの極性溶媒中、オルガノホスフィン（例えば、トリフェニルホスフィン）などの還元剤でアジド基を還元することにより直接調製できる。式ＩＸの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物から当技術分野で知られた方法によって調製できる（例えば、米国特許第６，８００，６５３号；およびRegueiro-Ren et al., Organic Letters, 2001, 3, 2693-2696参照）。Ｈ−Ｋ−Ａ−が２−ヒドロキシエチルである式ＩＸの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物から、例えば、過剰の２−ブロモエタノールおよび炭酸カリウムなどの塩基を使用してアジリジン環をアルキル化することによって調製できる。Ｐがトリアルキルシリルである場合、式Ｘの化合物は、式ＩＸの化合物から当技術分野で知られた方法を使用してシリルエーテル保護基を除去することによって調製できる（例えば、Greene et al., "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Inc.参照）。例えば、Ｐがトリエチルシリルである場合、式ＩＸの化合物をトリフルオロ酢酸によりジクロロメタン中で処理することによって脱保護すると、式Ｘの化合物が得られる。
【化２９】
【０１２８】
次に本発明を以下の例示的実施例を参照してさらに説明する。
実施例
（実施例１）
葉酸複合エポチロン類似体
【０１２９】
上記の詳細な説明で記載した通り、葉酸の類似体および誘導体はVlahovに記載されている。腫瘍細胞を標的とする葉酸受容体を対象とする複合エポチロンおよびエポチロン類似体化合物の研究開発において、いくつかの化合物が葉酸にコンジュゲートした。例えば、化合物ＡＡおよび化合物ＢＢは葉酸とのコンジュゲーションの候補として考えられる。
【化３０】
化合物ＡＡ 化合物ＢＢ
【０１３０】
化合物ＡＡは第二相臨床試験で活性を有しており、化合物ＡＡの６つの葉酸コンジュゲート（化合物ＡＡ．ＩからＡＡ．ＶＩ；図１参照）を調製し、細胞培養における化学安定性、ＦＲ結合およびＦＲ媒介活性について場合によって試験した。
【０１３１】
化合物ＡＡのこれらの葉酸コンジュゲートのＦＲへの結合を、集密に増殖したＫＢ腫瘍細胞で発現したＦＲからの放射性標識葉酸の置換を測定するアッセイで決定した。化合物ＡＡ．ＩおよびＡＡ．ＩＩの葉酸コンジュゲートのＦＲへの結合は許容されると思われる［相対的親和力（ＲＡ）＞０．２５；葉酸のＲＡ＝１．０］。しかし、驚いたことに、図１で示した化合物ＡＡの６つのコンジュゲートのいずれも、3Ｈ−チミジン取込みを測定する抗増殖アッセイでＫＢ腫瘍細胞に対して評価できる細胞毒性を示さなかった（データ示さず）。
【０１３２】
化合物ＡＡのコンジュゲートは腫瘍細胞に対して満足のいかない細胞毒性を示したので、化合物ＢＢ（化合物ＢＢ．ＩからＢＢ．ＩＩＩ）の３つのコンジュゲートを使用して試験を実施した。化合物ＢＢもエポチロンＦとして知られ、化合物ＡＡの類似体であり、ここで、２１−アミノ基は２１−ヒドロキシル基で置き換わっている。化合物ＢＢ．ＩＩ（図２）は高濃度で細胞毒性を示したが、過剰の葉酸を使用する競合試験で活性は弱まらなかった。したがって、観察された細胞毒性は化合物ＢＢ．ＩＩの非特異的放出によるものであった。
【０１３３】
その他のエポチロン類似体、例えば、アジリジニルエポチロンが当技術分野で知られており（例えば、米国特許第６，３９９、６３８号；Regueiro-Ren, A, et al. (2001) Org. Letters. 3:2693-96参照）、強力な抗腫瘍細胞毒性を示す。例えば、一対のタキサン抵抗性癌細胞系（ＨＣＴＶＭ４６およびＡ２７９０Ｔａｘ）に対するいくつかのエポチロン類似体の相対的細胞毒性効果を比較したＭＴＳアッセイを実施した（表１参照）。ＨＣＴＶＭ４６は、感受性ＨＣＴ１１６親系から誘導したヒト結腸癌腫細胞系であり、１７０ｋＤ ｐ−糖タンパク質薬物流出輸送体の過剰発現のため、タキサンに対して抵抗性である。Ａ２７８０Ｔａｘは、親Ａ２７８０系から誘導されたヒト卵巣癌腫細胞系であり、パクリタキセルの結合能を損なうチューブリンアミノ酸配列の変異の結果としてパクリタキセルに対して抵抗性である。
【０１３４】
表１に示されている通り、種々のアジリジニルエポチロン類似体（化合物ＣＣ〜ＥＥ）は、その他の知られている抗腫瘍剤、例えば、パクリタキセル、化合物ＡＡおよびエポチロンＢと比較して、ＨＣＴ１１６結腸癌腫細胞系およびＡ２７８０卵巣癌腫細胞系の両方に対して強力な抗腫瘍活性を示す。
表１．１２，１３−アジリジニルエポチロンのインビトロ活性
1 ４つの別個の実験から計算した平均IC50±SD
2 R/S比 = HCT116 IC50/HCT116VM46IC50
3 R/S比 = A2780 IC50/A2780Tax IC50
【０１３５】
アジリジニルエポチロン化合物ＣＣ〜ＥＥの抗腫瘍活性にも拘らず、葉酸へのコンジュゲーションに使用できるこれらの分子の唯一のヒドロキシル基は、Ｃ3およびＣ7炭素原子に見い出されるものである。その結果、いくつかのエポチロン化合物および類似体を調査したが、葉酸へのコンジュゲーションに容易に使用でき、活性エポチロン部分の特異的放出を介して腫瘍細胞において活性を表す化合物を発見することが依然として求められている。
【０１３６】
次式を有するアジリジニルエポチロン化合物Ｇが発見された。
【化３１】
化合物Ｇ
【０１３７】
化合物Ｇ（実施例２および３参照）は、驚くほど容易に葉酸にコンジュゲートして、葉酸に比較して、葉酸受容体に０．７７の相対的親和力を有する化合物Ｊ（実施例２参照）を形成する。
【０１３８】
意外にも、アジリジン側鎖上の極性ヒドロキシル基は、アジリジンエポチロン類似体の抗腫瘍活性に悪影響を与えなかった。葉酸からの放出に際して抗腫瘍効果を媒介するのはアジリジンエポチロン類似体、例えば、化合物Ｇなので、これは重要である。化合物Ｇおよび３つのその他の高度に強力なエポチロン類似体（イクサベピロン、化合物ＡＡおよび化合物ＢＢ）の効力を上記のコロニー形成アッセイで評価した。クローン原性ＫＢ癌細胞の９０％を死滅させるのに必要な濃度（ＩＣ90）を、１７時間の薬物曝露時間後に決定した。図３で示した通り、化合物Ｇは４．３ｎｍのＩＣ90を示し、化合物ＣＣ、化合物ＡＡおよびイクサベピロンよりそれぞれ約２、４および６倍強力だった。
【０１３９】
化合物Ｊを形成する化合物Ｇのコンジュゲーションは化合物Ｇの抗腫瘍活性に影響しなかった。化合物Ｊは腫瘍細胞に対してインビボで実質的な細胞毒性活性を示した。ＫＢインビホＦＲα（＋）腫瘍モデルでは、化合物Ｊは、最大許容用量（ＭＴＤ）および最小限の毒性を示す２つのより低い用量レベルの両方で活性を示した（図４参照）。対照的に、イクサベピロンはそのＭＴＤ（５μｍｏｌ／ｋｇ）でのみ活性だった。ＭＴＤで比較すると、化合物Ｊはイクサベピロンよりも優れた抗腫瘍効果を発揮した（図４）。
【化３２】
化合物Ｊ
【０１４０】
対照的に、ＦＲα（−）Ｍ１０９親腫瘍モデルでは、化合物Ｊは、そのＭＴＤ（２．４μｍｏｌ／ｋｇ）を含めて、試験した全ての用量レベルで活性が不十分であり、一方、イクサベピロンは５μｍｏｌ／ｋｇのそのＭＴＤで活性だった（図５）。これらの結果は、ＦＲα（−）Ｍ１０９がイクサベピロンに対して感受性であり、化合物Ｊの不活性は、主としてこの腫瘍によるＦＲα発現が存在しないことの結果であると思われる。これらの結果は、化合物Ｊの抗腫瘍活性がＦＲα受容体を介して媒介され得ることの証拠も提供する。
【０１４１】
化合物ＪのＦＲα媒介薬物デリバリー機序のさらなる証拠は、化合物Ｊの用量の２０倍過剰で葉酸類似体を同時投与することで受容体結合について化合物Ｊと実質的に競合でき、化合物Ｊの抗腫瘍効果からＦＲα（＋）９８Ｍ１０９腫瘍を保護できたという観察によって提供される。（図６）。化合物Ｇおよびコンジュゲート（化合物Ｊ）はインビトロおよびインビボの両方で驚くべき抗腫瘍効果を有し、化合物Ｊの抗腫瘍活性はＦＲα（＋）媒介効果によるものであり得るので、アジリジニルエポチロン類似体化合物Ｇ（実施例２および３参照）のコンジュゲーションによる化合物Ｊの形成も本明細書で記載される。（実施例２参照）。
（実施例２）
化合物Ｊの調製
【化３３】
（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｒ）−１−カルボキシ−２−（２−（２−（（２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチル）ジスルファニル）エチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸
Ａ．［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−７，１１−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン
【化３４】
【０１４２】
エポチロンＡ（５．０ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）、イミダゾール（３．４０ｇ、４９．９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２８．５ｍＬ、１６３．６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）撹拌溶液にＮ2雰囲気下で塩化トリエチルシリル（１５．０ｍＬ、８９．４ｍｍｏｌ）を加えた。添加完了後、反応溶液を５５℃（油浴温度）で１２時間加温して、シングルスポット（ｔｌｃ）の所望の生成物を得た。
【０１４３】
上記の反応をさらに２回繰り返した。合わせた溶液のＤＭＦを高真空下で蒸留した。泡沫状の残渣をカラムクロマトグラフィーで精製すると（シリカゲル、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ、２３０〜４００メッシュ、６００ｇ；５：９５、１０：９０および１５：８５のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、１９．４ｇ（８８．６％）の化合物Ａが白色の固形物として得られた。
【０１４４】
ＨＰＬＣ：ＥＳ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ＦｌｕｏｒｏＳｅｐ ＲＰ Ｐｈｅｎｙｌ、４．６×２５０ｍｍ、定組成、３０分間、１００％Ｂ、（Ｂ＝９０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．２％Ｈ3ＰＯ4）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２５４、ｔ＝２３．１５分間。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）７２２（Ｍ＋Ｈ）。
Ｂ．［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｓ＊，１４Ｓ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−ブロモ−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化３５】
【０１４５】
［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−７，１１−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン（５．０ｇ、６．９２ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１４０ｍＬ）撹拌溶液に、−２０℃でＮ2雰囲気下においてＭｇＢｒ2−Ｅｔ2Ｏ（３×２．１３ｇ、２４．７８ｍｍｏｌ）を２時間ごとに３回、内部温度を−５℃未満に維持しながら加えた。約７時間後、反応混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3（２×）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、真空蒸発させて、泡状物を得た。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製すると（シリカゲル、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ、２３０〜４００メッシュ、１８０ｇ；５：９５、７．５：９２．５および１２．５：８７．５ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、化合物Ｂ（２．５ｇ、収率４５％）が白色の泡状物として、回収された出発物質（０．９ｇ、１８％）と共に得られた。
【０１４６】
ＨＰＬＣ：ＥＳ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ＦｌｕｏｒｏＳｅｐ ＲＰ Ｐｈｅｎｙｌ、４．６×２５０ｍｍ、定組成、３０分間、１００％Ｂ、（Ｂ＝９０％ＭｅＯＨ／Ｈ2０＋０．２％Ｈ3ＰＯ4）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２５４、ｔ＝１４．３７分間。（純度１００％）ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）：８０２（Ｍ＋Ｈ）。
Ｃ．［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｓ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化３６】
【０１４７】
１．２ＬのＤＭＦ中の［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｓ＊，１４Ｓ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−ブロモ−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン（９．９ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）の溶液に、アジ化ナトリウム（８．０１ｇ、１２３．３ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６（３．２６ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）をＲＴでＮ2雰囲気下において加えた。透明な溶液をｒｔで７日間機械的に撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（６×３Ｌ）で洗浄した。有機層を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、次いで蒸発させて、粗生成物９．２ｇを得た。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル４５０ｇ、５〜１５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により６．７ｇ（収率７１％）の化合物Ｃが白色の泡状物として得られた。
【０１４８】
ＨＰＬＣ：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ Ｓ５、４．６×５０ｍｍ、定組成、３０分間、１００％Ｂ。（Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．２％のＨ3ＰＯ4）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２５４ｎｍ、ｔ＝２．００分間。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）７６５（Ｍ＋Ｈ）。
Ｄ．［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｒ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−１３−［（４−ニトロベンゾイル）オキシ］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化３７】
【０１４９】
［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｓ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン（７．０ｇ、９．１５ｍｍｏｌ）、４−ニトロ安息香酸（３．８２ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（６．０ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した。ジエチルアゾジカルボキシレート（トルエン中の４０％溶液９．０ｍＬ、２２．９ｍｍｏｌ）を５分間かけて加えた。反応混合物をＲＴで４時間維持し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製すると（５％の酢酸エチル／ヘキサンから１５％の酢酸エチル／ヘキサンまでの段階勾配）、ニトロ安息香酸エステルが白色の泡状物（７．３ｇ、８７％）として単離された。
【０１５０】
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、定組成、１５分間、１００％Ｂ。（Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２２０ｎｍ。保持時間＝８．９分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝８８６．７
Ｅ．［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｒ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化３８】
【０１５１】
ニトロ安息香酸エステル化合物Ｄ（７．３ｇ、７．９８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（３５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。メタノール中のアンモニア（メタノール中の２Ｍ溶液３５０ｍＬ）を加え、反応混合物をＲＴで４時間撹拌し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製すると（１０％の酢酸エチル／ヘキサンから３０％の酢酸エチル／ヘキサンまでの段階勾配）、［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｒ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンがガラス状の白色の固形物（５．９７ｇ、９８％）として単離された。
【０１５２】
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、定組成、５分間、１００％Ｂ。（Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２２０ｎｍ。保持時間＝２．２５分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝７６５．６６
Ｆ．［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−７，１１−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化３９】
【０１５３】
［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｒ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン（５．９７ｇ、７．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．３４ｍＬ、３１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。メタンスルホニルクロリド（１．８ｍＬ、２３．４ｍｍｏｌ）を５分間にわたって滴下した。１０分後、反応混合物を氷浴から取り出し、ＲＴで撹拌した。３時間後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3（３００ｍＬ）に溶解し、ジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮し、さらに精製することなく次の工程で用いた。
【０１５４】
粗製メタンスルホネートエステルをＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（１２：１、１３０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（２．２ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）およびトリメチルホスフィン（１６ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液１６ｍＬ）を加え、反応混合物をＲＴで撹拌した。３時間後、反応を４５℃で７時間加熱し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製すると（２％のメタノール／クロロホルムから５％のメタノール／クロロホルムまでの段階勾配）、化合物Ｆが白色の固形物（２工程で５．０８ｇ、８８％）として単離された。
【０１５５】
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、定組成、５分間、１００％Ｂ。（Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２２０ｎｍ。保持時間＝０．２９８分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝７２１．５８
Ｇ．［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−７，１１−ジヒドロキシ−１７−［２−ヒドロキシエチル］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化４０】
【０１５６】
Ｋ2ＣＯ3（１．４ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）および２−ブロモエタノール（０．５２ｍＬ、７．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）中の［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−７，１１−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン（１．０５ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）に加え、８２℃に加熱した。４時間後、追加の２−ブロモエタノール（０．５２ｍＬ、７．３ｍｍｏｌ）およびＫ2ＣＯ3（１．４ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を加えた。５時間後、追加の２−ブロモエタノール（０．２１ｍＬ、２．９２ｍｍｏｌ）を加えた。３時間後、反応混合物を室温に冷却し、セライトで濾過し、アセトニトリル（５×５ｍＬ）、ジクロロメタン（２×５ｍＬ）で洗浄し、濃縮し、さらに精製することなく次の工程で用いた。
【０１５７】
粗製反応生成物をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（８．０ｍＬ）を加えた。１時間後、反応混合物を濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ3（２００ｍＬ）に溶解し、ジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製すると（１０％のメタノール／ジクロロメタン）、［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−７，１１−ジヒドロキシ−１７−［２−ヒドロキシエチル］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン（化合物Ｇ）が透明なフィルム（２工程で０．６２ｇ、７９％）として単離された。
【０１５８】
ＬＣ−ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、勾配、０から１００％Ｂで４分間。（Ａ＝１０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ；Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２２０ｎｍ。保持時間＝２．１２分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝５３７．５２。
Ｈ．（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−メルカプトエチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸の調製
【化４１】
【０１５９】
（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−メルカプトエチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸を固相ペプチド合成により５工程で、Ｈ−Ｃｙｓ（４−メトキシトリチル）−２−クロロトリチル−樹脂から出発して合成した。表２は合成で使用した試薬の量を示す。
表２
【０１６０】
以下の手順を使用した。
カップリングステップ
【０１６１】
ペプチド合成容器中の樹脂に、アミノ酸溶液、ＤＩＰＥＡおよびＰｙＢＯＰを加えた。混合物を１時間バブリングし、ＤＭＦおよびイソプロピルアルコールで３回洗浄した。各アミノ酸カップリングの前に、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで２回（１０分間）処理することによりＦＭＯＣ脱保護を実施した。各アミノ酸カップリング工程についてこの順序を繰り返した。
Ｎ10−ＴＦＡ−保護プテロイン酸の合成
【０１６２】
加熱マントルを備えた２２Ｌの機械的に撹拌された丸底フラスコ中の０．１Ｍトリス塩基溶液（水１０Ｌ中トリス塩基１２１．１ｇ）１０Ｌに葉酸２００ｇ（０．４５３ｍｏｌ）を加えた。混合物を撹拌して葉酸を溶解し、次いで塩化亜鉛５００ｍｇ（３．６７ｍｍｏｌ）を加えた。カルボキシペプチダーゼＧ（Ｓｉｇｍａ製１３×２０ユニットバイアル）を加え、１Ｎ ＨＣｌでｐＨを７．３に調整し、反応の間維持した。混合物を光から保護し、３０℃で８〜１０日間加熱した（自動滴定装置を使用してｐＨを一定に保持することによって変換時間を４〜５日間短縮した）。８０％の変換が達成されるまで（さらなる変換が望ましいが、最適化されていない）、分析用ＨＰＬＣで反応をモニターした。６Ｎ ＨＣｌを使用して溶液をｐＨ＝３．０に調整することにより、生成物を反応混合物から沈殿させた。スラリーを遠心分離用バイアルに写し、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清をデカントした。次いで湿潤固形物を以下の通りに直接精製した（湿潤固形物は保存のために冷凍することができ、またはまず凍結乾燥することができ；しかし、湿潤固形物は溶解まで冷凍器中で保存するのがより有効である）。水７００ｍＬ中の粗製プテロイン酸４０ｇに１．０Ｍ ＮａＯＨをｐＨ＝１１．５になるまで加えた。混合物を濾過し（Ｗｈａｔｍａｎタイプ１）、次いでクロマトグラフィー処理した（カラム：１０×１２０ｃｍ；固定相：８ｋｇ ＤＥＡＥセルロース；移動相：１．０Ｍ ＮａＣｌ／０．０１Ｍ ＮａＯＨ、ｐＨ＝１１．５；流速：１７ｍＬ／分）。１リットルの黄色の画分を集め、ＨＰＬＣで分析した。純粋なプテロイン酸を含有する画分を６Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝３に調整してプテロイン酸を沈殿させた。混合物を３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清をデカントし、水で洗浄した（３回）。固形物を少なくとも７２時間凍結乾燥した。次の反応における残留水の影響はわからない。
【０１６３】
プテロイン酸をＰ2Ｏ5で高真空下において２４時間さらに乾燥した（この追加の乾燥工程なしの保護工程で同様の結果が得られたことに留意されたい）。次に、機械的撹拌機およびアルゴン入口を備えた５Ｌの丸底フラスコにプテロイン酸１００ｇ（０．３２ｍｏｌ）を加え、高真空下で終夜保存した。アルゴン、次いで無水トリフルオロ酢酸３５００ｇ（２３１６ｍＬ）を加えた。ゴムストッパーまたはアルゴン入口アダプターでフラスコを密封し、次いで激しく撹拌した。フラスコを光から保護し、室温でアルゴン雰囲気下において７日間撹拌した（水およびＤＭＳＯでそれぞれ２０倍に希釈したアリコートのＨＰＬＣで反応をモニターした）。混合物をロータリーエバポレーターで蒸発乾燥し、水中の３％トリフルオロ酢酸２．５Ｌで処理した。混合物を室温で終夜撹拌して、無水物副生成物を加水分解した。ロータリーエバポレーションにより乾燥固形物が得られた。固形物を水２Ｌに懸濁し、次いで２５０ｍＬの遠心分離ボトル中、３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清を除去し、固形物を水で洗浄し、遠心分離した（４回）。固形物を３日間凍結乾燥し、茶色遮光瓶(amber bottle)に移し、高真空下でＰ2Ｏ5の存在下において２日間乾燥した（純度≧９５％；元素分析で評価した残留ＴＦＡ）。
切断工程：
【０１６４】
保護された中間体は樹脂から、９２．５％（５０ｍＬ）のＴＦＡ、２．５％（１．３４ｍＬ）のＨ2Ｏ、２．５％（１．３４ｍＬ）のトリイソプロピルシランおよび２．５％（１．３４ｍＬ）のエタンジチオールから調製した切断試薬を使用して放出された。切断試薬を反応容器に加えた（２５ｍＬ）。アルゴンを混合物に１．５時間バブリングさせた。液体を容器から排出させ、樹脂を残りの試薬（３×８ｍＬ）で洗浄した。揮発性物質をロータリーエバポレーションで濃縮して容量を１０ｍＬにした。ジエチルエーテル（３５．０ｍＬ）を加えて沈殿させた。固形物を遠心分離で集め、乾燥して、切断生成物１．２５ｇを得た。
脱保護工程：
【０１６５】
プテロイン酸部分のＮ10−トリフルオロアセチル保護基を塩基性状態下で除去した。水１０ｍＬ中の保護された中間体２５０ｍｇで出発し、４：１のＨ2Ｏ：水酸化アンモニウム（１〜２ｍＬ）を使用してｐＨを９．３に調整し、１時間維持した。１時間後、１Ｎ ＨＣｌ（約１ｍＬ）でｐＨを５に調整し、生成物を分取ＨＰＬＣで精製して１２５ｍｇの化合物Ｈを得た。
ＨＰＬＣ精製条件：
【０１６６】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＮｏｖａＰａｋ Ｃ18 ３００×１９ｍｍ
【０１６７】
溶媒Ａ：バッファー １０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ＝５
【０１６８】
溶媒Ｂ：アセトニトリル
【０１６９】
溶離：４０分間１５ｍＬ／分で１％Ｂから２０％Ｂ
【０１７０】
合わせた反応からの総収量：６２５ｍｇ
Ｉ．２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エチル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネートの調製
１．２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノールの調製
【化４２】
【０１７１】
０℃に冷却したメトキシカルボニルスルフェニルクロリド（１０ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液にメルカプトエタノール（７．６ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌させた。この時点で、２−メルカプトピリジン（１２．２ｇ、１１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１６０ｍＬ）溶液を加えた。溶液を０℃で１時間反応させ、次いでＲＴまでさらに１時間加温させた。固体生成物が溶液から出てくるのが認められた。ＴＬＣ（１：１のＰｅｔエーテル／ＥｔＯＡｃ）は、重大な生成物が形成したことを示した。反応混合物を濃縮して容量を１２５ｍＬにした。混合物をブフナー漏斗で濾過した。濾過ケーキをジクロロメタンで洗浄し、次いで終夜真空乾燥して、２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノール（２３．６ｇ）をＨＣｌ塩として得た。
【０１７２】
ＴＬＣ：Ｒf＝０．４５
【０１７３】
プレート−ＥＭＤ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０ Ｆ254、５×１０ｃｍ、２５０Ｍ
２．ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネートの調製
【化４３】
【０１７４】
ジホスゲン（２．２８ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）の１５ｍＬの無水ジクロロメタン溶液をアルゴン下、丸底フラスコ中で撹拌し、氷／塩浴で冷却した。６５ｍＬの無水ジクロロメタン中の２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタノール（５．０１ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．２５ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）の混合物を入れた添加用漏斗を丸底フラスコの上に置いた。混合物を２０分間滴下した。反応混合物をＲＴまで加温させ、さらに１時間撹拌した。反応混合物をＴＬＣ分析すると、出発物質が消費され、「線状（ｓｔｒｅａｋｉｎｇ）」の極性がより低いクロロギ酸生成物が形成したことが示された、ＴＬＣ（６：４のＥｔＯＡｃ：ヘキサン）：出発物質のＲF０．４；クロロギ酸生成物のＲF：０．８。
【０１７５】
反応混合物を丸底フラスコ中、アルゴン下で撹拌し、氷／塩浴で冷却した。１０ｍＬの無水ジクロロメタン中、３．０２ｇ、２２．４ｍｍｏｌのＨＯＢｔおよび２．２３ｇ、２２．０ｍｍｏｌのトリエチルアミンの混合物を、丸底フラスコに取り付けた滴下用漏斗に加えた。反応温度を２℃に維持した丸底フラスコに混合物をゆっくりと加えた。反応混合物をＲＴまで加温させ、終夜撹拌した。次いで反応混合物から大気圧でジクロロメタンおよそ２７ｍＬを蒸留した。次いで混合物をＲＴまで冷却させ、２時間撹拌させた。固形物を濾集し、濾過ケーキをジクロロメタン２０ｍＬで洗浄した。次いで固形物を真空下、４０oＣにおいてロータリーエバポレーターで乾燥して、オフホワイト色の固形物７．８１ｇを得た。この生成物を1Ｈ−ＮＭＲで分析し、所望の生成物であると決定した。
３．２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エチル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネートの調製
【化４４】
【０１７６】
［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−７，１１−ジヒドロキシ−１７−［２−ヒドロキシエチル］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの無水ジクロロメタン溶液に０℃でＤＭＡＰ（１．２当量）およびベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネート（１．０当量）を順次加えた。反応混合物を０℃、アルゴン下で撹拌し、ＴＬＣで１０分ごとにモニターした。化合物Ｇが全て消費されるまで、追加のＤＭＡＰ（１．２当量）および化合物Ｉ（２）（１．０当量）を必要に応じて加えた。反応をＭｅＯＨ（１ｍＬ）で０℃においてクエンチし、溶媒を真空除去し、残渣をクロマトグラフィーで精製して（シリカゲル、ＤＣＭ中２．５〜５％のＭｅＯＨ）、標題化合物をベージュ色の固形物として得た。化合物の量および回収率を下記の表３に挙げる。２．９５ｇの化合物Ｇからの総収量は２．８０ｇ（６７．９％）の化合物Ｉだった。
表３
* 各クロマトグラフィー精製により、いくらかの不純な（純度８０〜９０％）生成物と共に純粋な生成物が典型的には得られた。不純な生成物は、クロマトグラフィー精製のための次のバッチからの粗生成物と合わせた。バッチ＃２および４では、クロマトグラフィー精製を２回行った。
Ｊ．（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｒ）−１−カルボキシ−２−（２−（２−（（２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチル）ジスルファニル）エチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸の調製
【化４５】
【０１７７】
１５ｍＬのＨ2Ｏ（使用前にアルゴンを１０分間バブリングした）を５０ｍＬサイズの遠心分離管中の（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−メルカプトエチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸（４９８ｍｇ、０．５３４ｍｍｏｌ）に加えた。この懸濁液に、アルゴンをバブリングしながら、得られた溶液のｐＨが６．９に達するまで飽和ＮａＨＣＯ3溶液（使用前にアルゴンを１０分間バブリングした）を滴下した。ＴＨＦ中の２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エチル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネート（４００ｍｇ、０．５３４ｍｍｏｌ）を素早く加え、得られた均質な溶液をアルゴン下で３０分間撹拌した。反応の進行を分析用ＨＰＬＣで１５分たった時点でチェックした。生成物のピークは分析用ＨＰＬＣ条件下、約６．４分であった。混合物をリン酸バッファー約１５ｍＬで希釈し、ＴＨＦを真空除去した。曇った溶液を遠心分離し、濾過した。黄色の濾液を２つの部分に分け、分取ＨＰＬＣで精製した。純粋な画分（純度＞９８％）をプールし、凍結乾燥した。残りの画分（純度＜９８％）を集め、クロマトグラフィー処理３〜６回ごとに、標題化合物７００ｍｇを白色の粉末（カールフィッシャー分析および元素分析で判定して１１．８重量％の水および８．７重量％のナトリウムおよびリン酸ナトリウム塩を含有）として得た。
分取ＨＰＬＣパラメータ：
【０１７８】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｎｏｖａ−Ｐａｋ ＨＲ Ｃ１８ ６μｍ ３０×３００ｍＭ
【０１７９】
移動相Ａ：７．０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ＝７．２
【０１８０】
移動相Ｂ：アセトニトリル
【０１８１】
方法：３０分間、流速：４０ｍＬ／分で１０％Ｂ〜５０％Ｂ
分析用ＨＰＬＣパラメータ：
【０１８２】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８ ３．５μｍ ４．６×７５ｍＭ
【０１８３】
移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＯＡｃ）バッファー、ｐＨ＝７．５
【０１８４】
移動相Ｂ：アセトニトリル
【０１８５】
方法：１０分間、流速：１．０ｍＬ／分で２０％Ｂ〜４０％Ｂ
厳密な質量ｍ／ｚ（Ｃ67Ｈ92Ｎ16Ｏ22Ｓ3）：
【０１８６】
計算値：１５７０．５８９０７（Ｍ＋２Ｈ）、７８５．２９４５４（Ｍ＋２Ｈ）2+、５２３．８６５６３（Ｍ＋３Ｈ）3+、３９３．１５１１８（Ｍ＋４Ｈ）4+
【０１８７】
実測値：７８５．２９１００（４．５ｐｐｍ）で（Ｍ＋２Ｈ）2+、５２３．８６４３１（２．５ｐｐｍ）で（Ｍ＋３Ｈ）3+、３９３．１４９９６（３．１ｐｐｍ）で、（Ｍ＋４Ｈ）4+
（実施例３）
化合物Ｊの代替の調製
【化４６】
（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｒ）−１−カルボキシ−２−（２−（２−（（２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチル）ジスルファニル）エチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸
３Ａ．［４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，１０Ｒ，９Ｓ，１３Ｒ，１６Ｓ］−４，８，１３−トリヒドロキシ−１４−ヨード−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［（Ｅ）−１−［２−メチルチアゾール−４−イル］プロプ−１−エン−２−イル］オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化４７】
【０１８８】
エポチロンＣ（５４．３ｇ、１１３．７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４８０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）に溶解した。溶液を−５℃から−１０℃に冷却した。ヨウ素（１４４．３ｇ、５６８．４ｍｍｏｌ）を反応に加え、反応を少なくとも１５時間維持した。
【０１８９】
反応を１５％亜硫酸水素ナトリウム溶液（９００ｍＬ）でクエンチした。混合物を酢酸エチル（２×１．１Ｌ）で抽出した。有機相を集め、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（６７５ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム溶液（６７５ｍＬ）で連続的に洗浄した。溶媒を減圧蒸発させて粗製化合物Ａを黄色の油状物（８５．６ｇ）として得た。化合物Ａはさらなる精製なしに次の反応に使用した。
【０１９０】
ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２）３ｕｍ、４．６×１５０ｍｍ、定組成、１８分間、３６％Ｂ、１７分間、５６％Ｂ、（移動相Ａ＝ＡＣＮ：水（５：９５）中の０．０１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ、移動相Ｂ＝ＡＣＮ：水（９５：５）中０．０１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２４５、Ｒｔ＝２２．４分間。
３Ｂ．［１Ｒ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｓ］−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［（Ｅ）−１−［２−メチルチアゾール−４−イル］プロプ−１−エン−２−イル］−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化４８】
［４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，１０Ｒ，９Ｓ，１３Ｒ，１６Ｓ］−４，８，１３−トリヒドロキシ−１４−ヨード−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［（Ｅ）−１−［２−メチルチアゾール−４−イル］プロプ−１−エン−２−イル］オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン（８５．６ｇ）をアセトニトリル（６７０ｍＬ）および水（１３０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１３５ｍＬ、９６８．５ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。反応を５０℃から６０℃に少なくとも８時間加熱した。
【０１９１】
ＲＴに冷却後、溶液を減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）で希釈し、飽和塩化ナトリウム溶液（３×５００ｍＬ）で洗浄した。溶媒を減圧蒸発させて粗生成物を黄色の油状物として得た。シリカゲルパッド濾過（シリカゲル７００ｇ、ヘプタン中６６％ＥｔＯＡｃ、２×４Ｌおよび１×３Ｌ）で精製して、ＨＰＬＣ ＡＰ ８０で化合物Ｂを泡状物（５０．３ｇ、収率９０％）として得た。
ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２）３ｕｍ、４．６×１５０ｍｍ、定組成、１８分間、３６％Ｂ、１７分間、５６％Ｂ、（移動相Ａ＝ＡＣＮ：水（５：９５）中０．０１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ、移動相Ｂ＝ＡＣＮ：水（９５：５）中０．０１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２４５、Ｒｔ＝１５．０分間。
３Ｃ／３Ｄ．（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１６Ｓ）−１３−アジド−４，８，１４−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンおよび（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｓ）−１４−アジド−４，８，１３−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化４９】
【０１９２】
ｅｐｉ−エポチロン−Ａ(epi-Epothilone-A)（１４．３５ｇ、２９．０７ｍｍｏｌ）のエタノール（２４０ｍＬ）および水（４８ｍＬ）撹拌溶液にアジ化ナトリウム（１１．４５ｇ、１７４．４１ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム（３．１４ｇ、５８．１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で１７から２０時間撹拌した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで減圧下において５０℃未満で蒸発させた。残渣を酢酸エチル（２８７ｍＬ）および水（５０ｍＬ）の混合物に溶解した。相を分離し、底部の水相を酢酸エチル（１１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を２５％塩化ナトリウム水溶液（ブライン）で洗浄した。溶媒を減圧蒸発させ、残渣を酢酸エチル／ｎ−ヘプタン（２：１）混合物で溶離するシリカゲルのパッドに通した。溶媒を減圧蒸発させると、アジド−アルコール、（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１６Ｓ）−１３−アジド−４，８，１４−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンと（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｓ）−１４−アジド−４，８，１３−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの位置異性体混合物が約６：１の比率で（１２．８ｇ、８２％）白色の泡状物として得られた。
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２）カラム：３μｍ、４．６×５０ｍｍ。勾配：１５分間、０％Ｂから１００％Ｂ、１０分間、次いで１００％Ｂを５分間。移動相：Ａ＝ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ５：９５中０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ；Ｂ＝ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ９５：５中０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ。流速：３．０ｍＬ／分。波長：ＵＶ２５０ｎｍ。保持時間＝５．５２分間。ＭＳ（ＥＳＩ）（Ｍ＋Ｈ）+＝５３７．６９
【０１９３】
この反応は、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、２−プロパノール、ジメチルホルムアミド、メチルスルホキシドおよびＮ−メチル−ピロリジノンのような他の溶媒中でも生じる。
【０１９４】
アジ化ナトリウム／塩化アンモニウムの代わりにテトラブチルアンモニウムアジド試薬を使用することもできる。
３Ｅ．（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−４−オキサ−１７−アザビシクロ（１４．１．０）ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化５０】
【０１９５】
（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１６Ｓ）−１３−アジド−４，８，１４−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンおよび（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｓ）−１４−アジド−４，８，１３−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン混合物（１２．８ｇ、２３．８５ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（９０ｍＬ）撹拌溶液にトリフェニルホスフィン（９．４８ｇ、３５．７７ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で加えた。透明な溶液を２０〜４０℃で１９〜４０時間撹拌した。反応混合物を０〜５℃に３〜４時間冷却し、生成物を濾過した。ケーキをヘプタン（６４ｍＬ）で洗浄し、４０℃で減圧下において１５〜１８時間乾燥すると、（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−４−オキサ−１７−アザビシクロ（１４．１．０）ヘプタデカン−５，９−ジオンが白色の固形物（５．４１ｇ、４６％）として得られた。
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２）カラム：３μｍ、４．６×５０ｍＭ。勾配：１５分間、０％Ｂから１００％Ｂ、１０分間、次いで１００％Ｂを５分間。移動相：Ａ＝ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ５：９５中０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ；Ｂ＝ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ９５：５中０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ。流速：３．０ｍＬ／分。波長：ＵＶ２５０ｎｍ。保持時間＝４．４３分間。ＭＳ（ＥＳＩ）（Ｍ＋Ｈ）+＝４９３．６８
【０１９６】
この反応は、トリシクロヘキシルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリブチルホスフィンおよびトリ（４−メトキシフェニル）−ホスフィンおよび別の溶媒テトラヒドロフランのような他のホスフィンでも生じる。
３Ｇ．［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−７，１１−ジヒドロキシ−１７−［２−ヒドロキシエチル］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化５１】
【０１９７】
Ｅｔ3Ｎ（４．９５ｍＬ、３５．５２ｍｍｏｌ）および２−ブロモエタノール（３．０２ｍＬ、４２．６２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３５ｍＬ）中の（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン（３．５０ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）に加え、７２．５℃に加熱した。２０時間後、反応混合物を室温に冷却し、回転真空蒸留で濃縮乾固した。粗製物を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、脱イオン水（３５ｍＬ）と混合した。混合物を酢酸エチル（３×３５ｍＬ）で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮し、アセトニトリル（３５ｍＬ）中で結晶化し、アセトニトリル（２×５ｍＬ）で洗浄し、真空オーブン中４５．５℃で終夜乾燥すると、（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシエチル）−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンが白色の結晶粉末（２．６０ｇ、ＨＰＬＣ ＡＰ ９７．１、収率６８．２％）として単離した。
【０１９８】
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ８、３μｍ、４．６×１５０ｍｍ、勾配、１０から５０％Ｂで１０分間、２０分で停止。（Ａ＝５％ＭｅＣＮ／Ｈ2Ｏ＋０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ；Ｂ＝９５％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２５４ｎｍ。保持時間＝９．４３分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝５３７．２１。
【０１９９】
当業者は、この実施例３で調製した化合物３Ｇは実施例２で調製した化合物Ｇと同一であり、したがって化合物３Ｇを使用して、化合物Ｈ、ＩおよびＪを調製することができ、その調製方法および化合物は実施例２に記載されていることを理解するであろう。
【図１−１】
【図１−２】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、参照により本明細書にその全体を援用する、２００６年５月２５日出願の米国仮特許出願第６０／８０８，３６６号の優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、アジリジニル−エポチロン類似体を含むアジリジニル−エポチロン類似体医薬組成物およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
エポチロンＡおよびＢは、Hoefle et al.によって発見され、微生物、ソランジウム・セルロースムの発酵生成物から単離された天然の化合物である（例えば、ＷＯ９３／１０１２１参照）。Hoefle et al.は、３７種の天然のエポチロン変異体、ならびにエポチロンＣ、Ｄ、Ｅ、Ｆおよびその他の異性体および変異体を含む、ソランジウム・セルロースムによって生成された関連の化合物も発見した。例えば、米国特許第６，６２４，３１０号参照。１９９３年、Hoefle et al.がエポチロンＡおよびＢの細胞毒性作用について報告したが、１９９５年、Ｍｅｒｃｋの研究者らはエポチロンＢがパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））と同様の微小管安定化作用を発揮することを報告した（D.M. Bollag, "Epothilones, a New Class of Microtubule-Stabilizing Agents with a Taxol-like Mechanism of Action," Cancer Research, Vol. 55 (June 1995), pp. 2325-2333参照）。
【０００４】
天然エポチロンの種々の誘導体および類似体がＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏで発見されている。エポチロン類似体の例としては、イクサベピロンとして知られるアザ−エポチロンＢ類似体、２１−アミノ類似体を含むエポチロンＢの２１−置換類似体、２，３−オレフィン類似体、Ｃ−３シアノ類似体、シクロプロピル類似体、およびアジリジニル−エポチロン類似体を含むヘテロ環類似体がある。例えば、それぞれ参照により本明細書に援用する、米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，２６２，０９４号；同第６，３９９，６３８号；同第６，４９８，２５７号；同第６，３８０，３９５号；および同第６，８００，６５３号を参照されたい。その他のものもその他のエポチロン誘導体および類似体の発見について報告している。例えば、全て参照によりその全体を援用する、ＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／６５９１３、ＷＯ９８／２５９２９；ＷＯ００／９９／０７６９２；ＷＯ９９／６７２５２；ＷＯ００／００４８５；ＷＯ００／３７４７３；ＷＯ０１／８３８００；ＷＯ９９／６７２５３、ＷＯ９９／０７６９２、ＷＯ００／００４８５、ＷＯ００／４９０２１、ＷＯ００／６６５８９、ＷＯ０３／０４５３２４、ＷＯ０４／０１４９１９、ＷＯ０４／０５６８３２、ＷＯ０３／０２２８４４；米国特許第６，４４１，１８６号；同第６，２８４，７８１号；同第６，６６０，７５８号；同第６，３８０，３９４号；同第６，２４２，４６９号；同第６，５３１，４９７号；同第６，４４１，１８６号；同第６，４８９，３１４号；同第６，５８９，９６８号；同第６，９３０，１０２号；米国特許出願公開番号ＵＳ２００４／００７２８７０Ａ１；ＵＳ２００３／００２３０８２Ａ１；ＵＳ２００４／００５３９１０Ａ１；ＵＳ２００４／０１５２７０８Ａ１を参照されたい。
【０００５】
その他の微小管安定化剤のような天然エポチロンおよびそれらの類似体は、癌などの増殖性疾患の治療に有用である場合があり、腫瘍細胞、その他の病原性細胞および外来病原体を殺す（またはその増殖を止める）ことによって典型的に作用する。しかし、抗癌剤は腫瘍細胞だけでなく正常組織も攻撃することが多く、望ましくない副作用につながる。さらに、抗癌剤は、その作用物質の製剤およびデリバリーが問題を提示するような溶解性の問題を典型的に示し、これはＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）などの溶解剤の使用につながる。いくつかの抗癌剤および／または製剤成分の細胞毒性は、神経障害または超過敏反応などのその他の副作用を引き起こすことが知られている。これらの有害副作用は、病原性細胞集団に選択的な、したがって宿主毒性が減少した抗癌療法の必要性を強調する。
【０００６】
しかし、ＷＯ２００４／０５４６２２Ａ１で論じられた通り、科学者は長年、患者に化学療法剤をデリバリーする標的薬物療法においてモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用することを試みてきたが、とりわけ、切断可能部分、リンカー、および細胞に放出された薬物の形について欠点があった。ｍＡｂによる腫瘍の療法の成功は、抗体の腫瘍への不適切な浸透によって、および腫瘍組織の対応する腫瘍関連抗原の不均一な分布によって制限されることが報告されている。Klar et al.、ＷＯ０５／０７４９０１（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧに譲渡）を参照されたい。
【０００７】
米国特許出願公開第２００５／０００２９４２号は、標的薬物デリバリーに有用なビタミン受容体結合性薬物デリバリーコンジュゲートを開示している。当技術分野では、癌治療用の標的薬物デリバリーを提供するために、ＵＳ２００５／０００２９４２に記載されているものなどのコンジュゲートの作製に使用し得る抗癌剤の同定が求められている。
【０００８】
発明の概要
本発明は、以下の式Ｘ：
【化１】
Ｘ
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を対象とする。
【０００９】
本発明はさらに、式Ｘを有する化合物を使用して癌を治療する方法、ならびに医薬的に許容される担体を有する癌治療用の医薬組成物の調製における式Ｘの化合物の使用を対象とする。式Ｘの化合物は、標的薬物療法用の組成物の調製に特に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】図１は、エポチロン類似体化合物ＡＡの６つの葉酸コンジュゲート（コンジュゲート番号ＡＡ．ＩからＡＡ−ＶＩ）の化学構造、相対的親和性、およびＫＢ腫瘍細胞に対するＥＣ５０（ｎＭ）値である。
【００１１】
【図２】図２は、エポチロン類似体化合物ＢＢの３つの葉酸コンジュゲート（コンジュゲート番号ＢＢ．ＩからＢＢ．ＩＩＩ）の化学構造、相対的親和性、およびＫＢ腫瘍細胞に対するＥＣ５０（ｎＭ）値である。
【００１２】
【図３】図３は、化合物Ｇ（横棒）、化合物ＣＣ（三角形）、化合物ＡＡ（菱形）またはイクサベピロン（正方形）の増大濃度（濃度（ｎＭ）；ｘ軸）で処理した後の生存ＫＢクローンの率（生存率；ｙ軸）を表す。
【００１３】
【図４】図４は、非処置（対照；黒丸）と比較した、様々な濃度の化合物Ｊ（灰色正方形、白色正方形、灰色菱形）またはイクサベピロン（黒色横棒）の、（Ａ）腫瘍移植数日後（ｘ軸）の腫瘍重量中央値（ｍｇ；ｙ軸）または（Ｂ）腫瘍移植数日後（ｘ軸）の体重減少（体重変化％；ｙ軸）を尺度としたヌードマウスにおけるＫＢ鼻咽頭類表皮癌異種移植片の処置のインビボ抗腫瘍効果を表す。
【００１４】
【図５】図５は、非処置（対照；黒丸）と比較した、化合物Ｊ（灰色正方形）またはイクサベピロン（白色正方形）の、腫瘍移植数日後（ｘ軸）の腫瘍重量中央値（ｍｇ；ｙ軸）を尺度としたＦＲ（−）Ｍ１０９ネズミ肺癌に対するインビボ抗腫瘍効果を表す。
【００１５】
【図６】図６は、非処置（対照、黒丸）、化合物Ｊのみでの処置（灰色正方形）、葉酸類似体の存在下での化合物Ｊ（黒色横棒）、または化合物Ｇでの処置（灰色菱形）の、腫瘍移植数日後（ｘ軸）の腫瘍重量中央値（ｍｇ；ｙ軸）を尺度としたインビボ抗腫瘍効果を表す。
【００１６】
発明の詳細な説明
用語の定義
以下は、本明細書で使用した用語の定義である。本明細書の基または用語に提供した最初の定義は、別段の記載がない限り、個々にまたは別の基の部分として、本明細書にわたるその基または用語に適用される。
【００１７】
本明細書で使用される用語「葉酸結合部分またはその類似体もしくは誘導体」は、癌細胞で過剰発現されるまたは優先的に発現される葉酸受容体タンパク質（モノクローナル抗体ではない）に結合する部分を意味する。例えば、葉酸受容体（ＦＲ）は卵巣癌細胞およびその他の癌細胞で過剰発現されることが知られている。葉酸の例示的な類似体および誘導体は、参照により本明細書に援用する、Vlahov et al.の米国特許出願公開番号２００５／０００２９４２（以下「Vlahov」）に開示されている。
【００１８】
本明細書で使用される用語「解離可能なリンカー」は、生理学的条件下で切断されることがある（例えば、ｐＨ不安定、還元不安定、酸不安定、酸化不安定または酵素不安定結合）少なくとも１つの切断性結合を含む二価リンカーを意味する。結合の切断につながるそのような生理学的条件には、例えば、生理学的ｐＨで、または細胞器官への区画化の結果として、例えば細胞質ｐＨより低いｐＨを有するエンドソーム、またはグルタチオンなどの細胞還元剤との反応の結果として生じる普通の化学加水分解反応があることを理解すべきである。
【００１９】
切断性結合は、解離可能なリンカー内の２つの隣接する原子を結合できる、および／または本明細書に記載したＱおよびＫなどの解離可能なリンカーにその他の基をリンカーのいずれかの末端または両方の末端に結合できることが理解される。
【００２０】
用語「アルキル」および「アルク」は、単独で、またはあるその他の基と組み合わせて、任意の可能な炭素原子で結合した、炭素原子１個から１０個、好ましくは炭素原子１個から６個、より好ましくは炭素原子１個から４個を含有する、直鎖または分枝鎖アルカン（炭化水素）基を指す。そのような基の例として、これらだけに限定するものではないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチルなどがある。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、炭素原子１個から４個を有する直鎖または分枝鎖アルキルを意味する。アルキルまたはその他の基に関して下付き文字が使用されている場合、その下付き文字はその基が含有し得る炭素原子の数を指す。例えば、用語「Ｃ0~4アルキル」には、結合および炭素原子１個から４個のアルキル基が含まれ、用語「Ｃ1~4アルキル」は炭素原子１個から４個のアルキル基を意味する。
【００２１】
用語「アルキレン」は、「アルキル」について上記した通りの、しかし２つの結合点を有する二価炭化水素基を指す。例えば、メチレン基は−ＣＨ2−基であり、エチレン基は−ＣＨ2−ＣＨ2−基である。
【００２２】
ヘテロシクロアルキルまたはシクロアルキルアルキルのように、用語アルキルが別の基とつなげて使用される場合、これは確認された他方の（出だしの名称の）基が上記定義のアルキル基を直接介して結合していることを意味する（例えば、それは分枝鎖であっても直鎖であってもよい）。したがって、用語「アルキル」は、この場合、アルキレン、例えば、２つの結合可能点を有する二価アルキル基を指すように使用される。例えば、シクロプロピルＣ1~4アルキルは、炭素原子１個から４個を有する直鎖または分枝鎖アルキレンを介して結合したシクロプロピル基を意味し、ヒドロキシアルキルは、炭素原子１個から１０個、好ましくは炭素原子１個から６個、より好ましくは炭素原子１個から４個を有する直鎖または分枝鎖アルキレンを介して結合したＯＨ基を意味する。「置換シクロアルキルアルキル」などの置換基の場合、その基のアルキレン部分は、分枝鎖または直鎖である以外に、置換アルキル基について挙げた通りに置換されていてよく、かつ／または出だしの名称の基（例えば、シクロアルキル）は、その名称の基（例えば、シクロアルキル）について挙げた通りに置換されていてよい。
【００２３】
「置換アルキル」は、１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で、任意の使用できる結合点において置換されているアルキル基を指す。しかし、アルキル基が複数のハロ置換基で置換されている場合、そのアルキルは、原子価により許容されれば、最大１０個の置換基、より好ましくは最大７個の置換基を含有し得る。アルキル置換基は以下の基の１個または複数を含み得る：ハロ（例えば、単一ハロ置換基または多重ハロ置換基、後者の場合、ペルフルオロアルキル基またはＣｌ3もしくはＣＦ3を保持するアルキル基などの基を形成する）、シアノ、−ＯＲa、−ＳＲa、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒa、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲa、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒa、−ＯＣ（＝Ｏ）ＯＲa、−ＮＲaＲb、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲaＲb、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒa、−Ｓ（Ｏ）2Ｒa、−ＮＨＳ（Ｏ）2Ｒa、−ＮＨＳ（Ｏ）2ＮＨＲa、−ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨＲa、−ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｒa、−ＮＨＣ（Ｏ）2Ｒa、−ＮＨＣ（＝Ｎ−ＣＮ）Ｒa、アリール、ヘテロ環、シクロアルキルおよび／またはヘテロアリール、ここで、Ｒa基およびＲb基は、独立して、水素、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、ヘテロシクロ、アリールおよびヘテロアリールから選択され、各Ｒaおよび／またはＲbは、さらには、アルキル、アルケニル、ハロゲン、ハロアルキル、ハロアルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、アミノアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、チオール、アルキルチオ、フェニル、ベンジル、フェニルオキシ、ベンジルオキシ、Ｃ3-7シクロアルキル、５員もしくは６員ヘテロシクロもしくはヘテロアリール、および／または低級アルキルもしくは低級アルケニル（ヒドロキシ、シアノ、ハロゲン、ハロＣ1~4アルキル、ハロＣ1~4アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、Ｃ1~4アルキルアミノ、アミノＣ1~4アルキル、ヒドロキシＣ1~4アルキル、Ｃ1~4アルコキシ、チオールおよび／またはＣ1~4アルキルチオから選択される１個から４個の基で置換されている）から選択される１個から４個の基で所望により置換されている。疑いを回避するために、「置換低級アルキル」は、炭素原子１個から４個、および置換アルキル基について直前で挙げたものから選択される１個から４個の置換基を有するアルキル基を意味する。置換低級アルキルの場合、好ましくは、Ｒa基およびＲb基は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、Ｃ3~7シクロアルキル、フェニル、ならびに５員から６員単環式ヘテロシクロおよび／またはヘテロアリール（さらには上記の通り所望により置換されている）から選択される。
【００２４】
用語「アルケニル」は、炭素原子２個から１２個および少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含有する直鎖または分枝鎖炭化水素基を指す。例示的なそのような基としては、エテニルまたはアリルがある。「置換アルケニル」は、１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で、任意の使用できる結合点において置換されているアルケニル基を指す。例示的な置換基としては、アルキル、置換アルキル、およびアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００２５】
用語「アルコキシ」および「アルキルチオ」は、それぞれ酸素結合（−Ｏ−）または硫黄結合（−Ｓ−）を介して結合した上記の通りのアルキル基を指す。用語「置換アルコキシ」および「置換アルキルチオ」は、それぞれ酸素結合または硫黄結合を介して結合した上記の通りの置換アルキル基を指す。「低級アルコキシ」またはＣ1~4アルコキシはＯＲ基であり、ここで、Ｒは低級アルキル（炭素原子１個から４個のアルキル）である。
【００２６】
「アミノ」はＮＨ2である。アルキルアミノは−ＮＲcＲdであり、ここで、ＲcおよびＲdの少なくとも一方はアルキルまたは置換アルキルであり、ＲcおよびＲdの他方は、水素、アルキルおよび置換アルキルから選択される。「アミノアルキル」はアルキレン基を介して結合したアミノ基（−アルキレン−ＮＨ2）を意味し、アルキルアミノアルキルはアルキレン基を介して結合した上記定義の通りのアルキルアミノ（−アルキレン−ＮＲcＲd）を意味する。
【００２７】
用語「アリール」は、１個から３個の芳香環を有する環式芳香族炭化水素基、特にフェニルまたはナフチルなどの単環式または二環式基を指す。二環式または三環式であるアリール基は少なくとも１個の完全芳香族炭素環を含まなければならないが、その他の縮合環（単数または複数）は芳香族または非芳香族であってよく、ヘテロ原子を所望により含有してもよく、但し、そのような場合、結合点は芳香族炭素環である。さらに、アリール基にヘテロ環またはシクロアルキル環が縮合している場合、ヘテロ環および／またはシクロアルキル環は１個または複数のカルボニル炭素原子を有していてよく、即ち、二重結合を介して酸素原子に結合してカルボニル基を確定し得る。したがって、「アリール」の例としては限定することなく、
【化２】
などが挙げられる。
【００２８】
用語「アリーレン」は、二価アリール基、即ち、アリール環の任意の使用できる結合点に、２個のその他の基への２個の結合点を有する上記定義の通りのアリール基を指す。アリーレン環はまた、本明細書で定義したアリール基の置換に適切な任意の基で置換されていてもよい。
【００２９】
「置換アリール」は、任意の結合点で１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で置換された上記定義の通りのアリール基またはアリーレン基を指す。置換基としては、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、ならびにアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００３０】
用語「炭素環式」は、飽和または不飽和単環式、二環式または三環式環（好ましくは単環式または二環式）を意味し、ここで、全ての環の全ての原子は炭素である。したがって、この用語にはシクロアルキルおよびアリール環が含まれる。炭素環は置換されていてよく、その場合、置換基はシクロアルキルおよびアリール基について上記で挙げたものから選択される。
【００３１】
用語「シクロアルキル」は、１個から３個の環を含有し、環１個当たり炭素原子３個から７個を含有する完全飽和または部分飽和環式炭化水素基を指す。例示的な完全飽和シクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルがある。例示的な部分飽和シクロアルキル基としては、シクロブテニル、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルがある。用語「シクロアルキル」には、炭素原子３個から４個の架橋を有する基が含まれる。さらに、二環式または三環式であるシクロアルキル基は少なくとも１個の完全飽和または部分飽和炭化水素環を含まなければならないが、その他の縮合環（単数または複数）は芳香族または非芳香族であってよく、ヘテロ原子を含有してもよく、但し、そのような場合、結合点は環式非芳香族炭化水素基である。さらに、シクロアルキル基の１個または複数の炭素原子は炭素−酸素二重結合を形成してカルボニル基を確定し得る。したがって、「シクロアルキル」基の例としては限定することなく、
【化３】
などが挙げられる。
【００３２】
用語「シクロアルキレン」は、二価シクロアルキル基、即ち、シクロアルキル環の任意の使用できる２個の結合点に、２個のその他の基への２個の結合点を有する上記定義の通りのシクロアルキル基を指す。
【００３３】
「置換シクロアルキル」は、任意の使用できる結合点において１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で置換されている上記定義の通りのシクロアルキル基を指す。シクロアルキル置換基としては、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、およびアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００３４】
用語「グアニジニル」は、
【化４】
基を意味する。したがって、グアニジニルアルキルは、式
【化５】
を有する基などのグアニジニルに結合したアルキル基を意味する。
【００３５】
用語「ハロゲン」または「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す。
【００３６】
用語「ヘテロ原子」には、酸素、硫黄および窒素が含まれる。
【００３７】
用語「ハロアルキル」は、１個または複数のハロ置換基を有するアルキルを意味し、限定することなく、−ＣＨ2Ｆ、−ＣＨＦ2および−ＣＦ3などの基が含まれる。
【００３８】
用語「ハロアルコキシ」は１個または複数のハロ置換基を有するアルコキシ基を意味する。例えば、「ハロアルコキシ」には−ＯＣＦ3が含まれる。
【００３９】
用語「不飽和」が環または基に対して本明細書で使用される場合、その環または基は完全不飽和であっても部分不飽和であってもよい。
【００４０】
用語「ヘテロアリール」は、少なくとも１個のヘテロ原子を含有する少なくとも１個の環を有する、４員から７員単環式、７員から１１員二環式、または１０員から１５員三環式の環系である芳香族基を指す。ヘテロ原子を含有するヘテロアリール基の各環は、１個または２個の酸素原子または硫黄原子および／または１個から４個の窒素原子を含有することができ、但し、各環のヘテロ原子の総数は４個以下であり、各環は少なくとも１個の炭素原子を有する。二環式基および三環式基を完成する縮合環は、炭素原子のみを含有していてもよく、飽和、部分飽和または不飽和であってよい。その窒素原子および硫黄原子は所望により酸化されていてよく、その窒素原子は所望により四級化されていてよい。二環式または三環式であるヘテロアリール基は、少なくとも１個の完全芳香環を含まなければならないが、その他の縮合環（単数または複数）は芳香族または非芳香族であってよく、炭素環式であってよく、但し、そのような場合、結合点は芳香族へテロ原子含有環の任意の使用可能な窒素原子または炭素原子である。さらに、ヘテロアリール基自体の定義には、その炭素原子の１個または複数が二重結合を介して酸素原子に結合してカルボニル基を確定する（但し、そのヘテロアリール基は芳香族である）環が含まれ、また、ヘテロアリール基にヘテロ環またはシクロアルキル環が縮合している場合、ヘテロ環および／またはシクロアルキル環は１個または複数のカルボニル基を有していてよい。
【００４１】
例示的な単環式ヘテロアリール基としては、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾリニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル（即ち、
【化６】
）、チアジアゾリル、イソチアゾリル、フラニル、チエニル、オキサジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアジニルなどがある。さらに、ヘテロアリール基自体の定義は、その炭素原子の１個または複数がカルボニル基を確定する環を含むので、２，４−ジヒドロ−［１，２，４］トリアゾール−３−オン（即ち、
【化７】
）などの環が含まれる。
【００４２】
例示的な二環式ヘテロアリール基としては、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾキサソリル（ｂｅｎｚｏｘａｘｏｌｙｌ）、ベンゾチエニル、キノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾピラニル、インドリジニル、ベンゾフラニル、クロモニル、クマリニル、ベンゾピラニル、シンノリニル、キノキサリニル、インダゾリル、ピロロピリジル、フロピリジニル、ジヒドロイソインドリル、テトラヒドロキノリニルなどがある。
【００４３】
例示的な三環式ヘテロアリール基としては、カルバゾリル、ベンジドリル（ｂｅｎｚｉｄｏｌｙｌ）、フェナントロリニル、アクリジニル、フェナントリジニル、キサンテニルなどがある。
【００４４】
用語「ヘテロアルキレン」は、二価ヘテロアリール基、即ち、ヘテロアリール環の任意の使用できる２個の結合点に、２個のその他の基への２個の結合点を有する上記定義の通りのヘテロアリール基を指す。
【００４５】
「置換ヘテロアリール」基は、任意の使用できる結合点において１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で置換されている上記定義の通りのヘテロアリール基である。例示的な置換基としては、これらだけに限定するものではないが、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、ならびにアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００４６】
用語「ヘテロ環」、「ヘテロ環」および「ヘテロシクロ」は、交換可能に使用され、それぞれ完全飽和または部分不飽和非芳香族環式基を指し、置換されていても置換されていなくてもよく、例えば、４員から７員単環式、７員から１１員二環式、または１０員から１５員三環式環系であり、少なくとも１個の炭素原子含有環に少なくとも１個のヘテロ原子を有する。ヘテロ原子を含有するヘテロ環基の各環は、窒素原子、酸素原子および硫黄原子から選択される１個、２個または３個のヘテロ原子を有してよく、その窒素ヘテロ原子および硫黄ヘテロ原子はまた所望により酸化されていてよく、その窒素ヘテロ原子はまた所望により四級化されていてよい。好ましくは、２個の隣接するヘテロ原子酸素および窒素から同時に選択されることはない。二環式または三環式であるヘテロ環基は少なくとも１個の非芳香族非炭素環を含まなければならないが、その他の縮合環（単数または複数）は芳香族または非芳香族であってよく、炭素環式であってよく、但し、そのような場合、結合点は非芳香族ヘテロ原子含有環の任意の使用可能な窒素原子または炭素原子である。さらに、ヘテロ環基自体の定義には、その炭素原子の１個または複数が二重結合を介して酸素原子に結合してカルボニル基を確定する（但し、そのヘテロ環基は非芳香族である）環が含まれ、また、ヘテロ環基にさらなる環が縮合している場合、そのようなさらなる環は１個または複数のカルボニル基を有していてよい。
【００４７】
例示的な単環式ヘテロ環基としては、ピロリジニル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフリル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、ピロリニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チアモルホリニルなどがある。
【００４８】
「置換ヘテロ環（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）」、「置換ヘテロ環（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ）」および「置換ヘテロシクロ」は、１個または複数の置換基、好ましくは１個から４個の置換基で、任意の使用できる結合点において置換された上記定義の通りのヘテロ環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ）、ヘテロ環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ）またはヘテロシクロ基を指す。例示的な置換基としては、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、ならびに例示的なアルキル置換基として上記で挙げた基がある。
【００４９】
「ヒドロキシ」は−ＯＨを指す。
【００５０】
「チオール」は−ＳＨ基を指す。
【００５１】
用語「第四級窒素」は、例えば、テトラアルキルアンモニウム基（例えば、テトラメチルアンモニウムまたはＮ−メチルピリジニウム）の正に帯電した窒素、プロトン化アンモニウム種（例えば、トリメチルヒドロアンモニウムまたはＮ−ヒドロピリジニウム）の正に帯電した窒素、アミンＮ−オキシド（例えば、Ｎ−メチル−モルホリン−Ｎ−オキシドまたはピリジン−Ｎ−オキシド）の正に帯電した窒素、およびＮ−アミノ−アンモニウム基（例えば、Ｎ−アミノピリジニウム）の正に帯電した窒素を含む四価の正に帯電した窒素原子を指す。
【００５２】
官能基が「保護された」と呼ばれる場合、その基が、保護された部位の望ましくない副反応を軽減、特に防止する変形形態であることを意味する。本明細書に記載の方法および化合物に適切な保護基としては、限定することなく、参照により本明細書に援用する、Greene, T.W. et al., Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, N.Y. (1991)を含む標準テキストに記載されているものがある。
発明の代替の実施形態
【００５３】
本発明は、課題を解決するための手段で挙げた通りの以下の式Ｘを有する化合物を含む。
【００５４】
本発明は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、式Ｘ’：
【化８】
Ｘ’
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
による立体特異性形態を有する化合物を含む。
【００５５】
別の実施形態では、本発明の化合物は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、式Ｘ：
【化９】
Ｘ
［式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである］
または上記の立体特異性の式Ｘ’を有する。
【００５６】
別の実施形態では、本発明の化合物は、医薬的に許容されるその塩および／または溶媒和物を含む上記定義の通りの式ＸまたはＸ’を有し、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素であり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである。
【００５７】
別の実施形態では、本発明の化合物は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む上記定義の通りの式ＸまたはＸ’を有し、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルである。
【００５８】
別の実施形態では、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、式Ｘａ：
【化１０】
Ｘａ
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは、−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキルまたは置換アルキルであり、
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
を有する化合物が提供される。
【００５９】
本発明の別の実施形態では、Ｘ’について示した立体化学に対応する立体特異性形態Ｘａ’を有する式Ｘａ’の化合物を含む式Ｘａの化合物が提供される。
【００６０】
別の実施形態では、Ｋが−Ｏ−であり、Ｒ13が、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルであり、残りの基が上記定義の通りの直前の式ＸａまたはＸａ’を有する化合物が提供される。
【００６１】
別の実施形態では、Ｋが−Ｏ−であり；ＡがＣ2~4アルキレンであり；Ｒ6が水素またはメチルであり；Ｒ12が、Ｈ、低級アルキルまたはハロゲンであり；Ｒ13が、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルである上記の式ＸａまたはＸａ’を有する化合物が提供される。
【００６２】
本発明の化合物はまた、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、式Ｘｂ：
【化１１】
Ｘｂ
［式中、Ｒ6は水素またはメチルである］
を有してもよい。
【００６３】
別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｘｂを有し、ここで、Ｒ6は水素である。
【００６４】
別の実施形態では、本発明の化合物は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、立体特異性の式Ｘｂ’：
【化１２】
Ｘｂ’
［式中、Ｒ6は水素またはメチルである］
を有してもよい。
【００６５】
別の実施形態では、本発明の化合物は式Ｘｂ’を有し、ここで、Ｒ6は水素である。
【００６６】
本発明の一実施形態では、方法は、癌、例えば、葉酸受容体関連状態を治療するために提供され、以下の式Ｘ：
【化１３】
Ｘ
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の治療有効量で患者を治療することを特徴とする。
【００６７】
一実施形態では、方法は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む、立体特異性の式Ｘ’：
【化１４】
Ｘ’
［式中、Ｋ、Ａ、Ｂ1 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11 Ｒ12、Ｒ13およびｍは、式Ｘの化合物について上記定義の通りである］
を有する化合物の治療有効量で患者を治療することを特徴とする。
【００６８】
別の実施形態では、方法は、上記の通りの式Ｘ’を含め、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む式Ｘを有する化合物の治療有効量で患者を治療することを含み、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである。
【００６９】
別の実施形態では、方法は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む上記の通りの式ＸまたはＸ’を有する化合物の治療有効量で患者を治療することを含み、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素であり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである。
【００７０】
別の実施形態では、方法は、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む上記の通りの式ＸまたはＸ’を有する化合物の治療有効量で患者を治療することを含み、式中、
Ｋは−Ｏ−であり；
ＡはＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1は−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6は水素またはメチルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルである。
【００７１】
本発明の方法はまた、その医薬的に許容される塩および／または溶媒和物を含む上記の式Ｘａまたはその立体特異性形態Ｘａ’を有する化合物の治療有効量でそのような治療の必要な患者を治療することを含んでもよく、式中、Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；Ｒ6は水素またはメチルであり；Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素、アルキルまたは置換アルキルであり、Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；ｍは０から６である。
【００７２】
本発明の方法はまた、Ｒ6が水素またはメチルである上記の式ＸｂまたはＸｂ’を有する化合物の治療有効量でそのような治療の必要な患者を治療することを含んでよい。さらに別の実施形態では、方法は、Ｒ6が水素である式ＸｂまたはＸｂ’の化合物で患者を治療することを含む。
【００７３】
本発明の別の実施形態は、上記の化合物（式Ｘ、Ｘａ、Ｘａ’、Ｘｂおよび／またはＸｂ’の化合物、式中、Ｋ、Ａ、Ｂ1 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11 Ｒ12およびＲ13基は上記で挙げた通りに選択し得る）の任意のものの、患者の癌を治療するための医薬組成物の作製における使用、特に、葉酸受容体を過剰発現または優先的に発現する腫瘍への標的薬物デリバリーのためのコンジュゲート化合物を含有する医薬組成物の作製における使用を含む。
【００７４】
本発明の別の実施形態は、式Ｘ、Ｘａ、Ｘａ’、Ｘｂおよび／またはＸｂ’（式中、Ｋ、Ａ、Ｂ1 Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11 Ｒ12およびＲ13基は上記で挙げた通りに選択し得る）を有する化合物の治療有効量でそのような治療の必要な患者を治療することを含み、ここで、化合物は腫瘍部位で放出されて、治療は腫瘍部位で生じる。この実施形態では、コンジュゲート化合物は腫瘍部位にデリバリーされ、次いで上記定義の通りの式Ｘ、Ｘａ、Ｘａ’、ＸｂまたはＸｂ’の化合物が腫瘍部位で放出され、患者の腫瘍部位を治療する。したがって、本明細書では、用語「治療」が患者の治療に関して使用される場合はいつでも、腫瘍部位の治療を包含するが、例えば、コンジュゲート化合物を介してデリバリーされることが理解される。
【００７５】
葉酸受容体（ＦＲ）のレベルを上方調節する作用物質の使用は、一定の癌細胞または腫瘍のタイプにおけるＦＲ発現を増大させるのに有効であることができ、本発明の化合物を患者に投与して得られる利点を強化し、および／または本発明による葉酸受容体結合化合物で治療できる種々の疾患または腫瘍のタイプを増す。一定の癌での葉酸受容体の発現は、癌細胞での葉酸受容体のレベルを選択的に増大させ、したがって葉酸受容体標的療法の効力を増大させる葉酸受容体誘導物質の投与により上方調節されてもよい。例えば、エストロゲン受容体陽性（ＥＲ＋）の乳癌は低レベルの葉酸受容体を発現する。葉酸受容体誘導物質、そのようなタモキシフェン、エストロゲンアンタゴニストは、ＥＲ＋乳癌での葉酸受容体の発現を上方調節し、葉酸受容体標的療法による治療に対するＥＲ＋乳癌細胞の感受性を増大させる。
【００７６】
本発明の一態様は、有効量の少なくとも１種の葉酸受容体誘導物質を患者に所望により投与すること、および有効量の式Ｘの少なくとも１種の化合物で患者を治療することを含む、患者の癌または増殖性疾患を治療する方法を提供する。葉酸受容体誘導物質は、患者が式Ｘによる化合物で治療される前、治療中、または治療された後に投与されてよい。一実施形態では、葉酸受容体誘導物質は式Ｘの化合物での治療前に投与される。葉酸受容体誘導物質の有効量は、所望の細胞における葉酸受容体を上方調節して化合物による治療を治療的に有効にする量を指す。
【００７７】
葉酸受容体α（ＦＲα）を上方調節する葉酸受容体誘導物質の例としては、タモキシフェンなどのエストロゲン受容体アンタゴニスト；プロゲスチンなどのプロゲステロン受容体アゴニスト；テストステロンおよびジヒドロキシテストステロンなどのアンドロゲン受容体アゴニスト、ならびにデキサメタゾンなどのグルココルチコイド受容体アゴニストがある。
【００７８】
葉酸受容体β（ＦＲβ）を上方調節する葉酸受容体誘導物質の例としては、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）、テトラメチルナフタレニルプロペニル安息香酸（ＴＴＮＰＢ）、９−シスレチノイン酸（９−シスＲＡ）、ＣＤ３３３３６、ＬＧ１０１０９３およびＣＤ２７８１などのレチノイン酸受容体アゴニストがある。
【００７９】
一実施形態では、有効量の少なくとも１種の葉酸受容体誘導物質を投与し、また式Ｘの少なくとも１種の化合物で患者を治療することを含む、その必要のある患者において癌または増殖性疾患を治療する方法が提供され、ここで、前記葉酸受容体誘導物質は葉酸受容体αを上方調節する。好ましくは、前記癌または増殖性疾患は、乳癌、例えばＥＲ＋乳癌、および卵巣癌から選択される。
【００８０】
本発明の一実施形態では、有効量の少なくとも１種の葉酸受容体誘導物質を投与すること、および有効量の式Ｘの少なくとも１種の化合物を投与することを含む、その必要のある患者において癌または増殖性疾患を治療する方法が提供され、ここで、前記葉酸受容体誘導物質は葉酸受容体βを上方調節する。好ましくは、前記癌または増殖性疾患は白血病から選択され、より好ましくは、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）から選択される。
【００８１】
さらなる実施形態では、有効量の少なくとも１種の葉酸受容体誘導物質を投与すること、少なくとも１種のヒストンデアセチラーゼ阻害剤を投与すること、および有効量の式Ｘの少なくとも１種の化合物で患者を治療することを含む、その必要のある患者において癌または増殖性疾患を治療する方法が提供される。ヒストンデアセチラーゼ阻害剤の例はトリコスタチンＡ（ＴＳＡ）である。米国特許出願公開番号２００３／０１７０２９９Ａ１、ＷＯ２００４／０８２４６３、Kelly, K. M., B.G. Rowan, and M. Ratnam, Cancer Research 63, 2820-2828 (2003), Wang, Zheng, Behm, and Ratnam, Blood, 96:3529-3536 (2000)。
【００８２】
本発明の化合物は、これも本発明の範囲内に含まれる塩または溶媒和物を形成し得る。別段の記載がない限り、本明細書中の式（Ｘ）の化合物への言及は、その塩および溶媒和物、そのラセミ化合物、ジアステレオマーおよび鏡像異性体への言及を含むと理解される。本明細書で使用される用語「塩（複数可）」は、無機および／または有機酸および塩基と形成した酸性および／または塩基性塩を表す。さらに、式（Ｘ）の化合物が、これらだけに限定するものではないピリジニルイミダゾリル、アミンまたはグアニジニルなどの塩基性部分と、これだけに限定するものではないカルボン酸などの酸性部分との両方を含有する場合、両性イオンが形成されることがあり、これは本明細書で使用される用語「塩（複数可）」に含まれる。医薬的に許容される（即ち、非毒性、生理学的に許容される）塩が好ましいが、その他の塩も、例えば、調製中に用いることがある単離または精製ステップで有用である。式（Ｘ）の化合物の塩は、例えば式（Ｘ）の化合物を当量など、ある量の酸または塩基と、塩が沈殿するものなどの媒体中または水性媒体中で反応させ、次いで凍結乾燥することによって形成してよい。
【００８３】
これらだけに限定するものではないが、アミン、グアニジニル基、またはピリジルもしくはイミダゾリル環などの塩基性部分を含有する式（Ｘ）の化合物は、種々の有機および無機酸と塩を形成することができる。例示的な酸付加塩としては、酢酸塩（例えば、酢酸またはトリハロ酢酸、例えば、トリフルオロ酢酸と形成したものなど）、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩（例えば、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩（例えば、２−ナフタレンスルホン酸塩）、ニコチン酸塩、硝酸塩、蓚酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩（例えば、３−フェニルプロピオン酸塩）、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、サリチル酸塩、琥珀酸塩、硫酸塩（硫酸と形成したものなど）、スルホン酸塩（本明細書で言及したものなど）、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシレートなどのトルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩などがある。
【００８４】
これだけに限定するものではないが、カルボン酸などの酸性部分を含有する式（Ｘ）の化合物は、種々の有機および無機塩基と塩を形成することができる。例示的な塩基性塩としては、アンモニウム塩；アルカリ金属塩、例えばナトリウム、リチウムおよびカリウム塩；アルカリ土類金属塩、例えばカルシウムおよびマグネシウム塩；有機塩基との塩（例えば、有機アミン）、例えばベンズアチン、ジシクロヘキシルアミン、ヒドラバミン（Ｎ，Ｎ−ビス（デヒドロアビエチル）エチレンジアミンと形成した）、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グリカミド、ｔ−ブチルアミン；およびアルギニン、リシンなどのアミノ酸との塩などがある。塩基性窒素含有基は、作用物質、例えばハロゲン化低級アルキル（例えば、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチル）、ジアルキル硫酸塩（例えば、硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミル）、長鎖ハライド（例えば、塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリル）、ハロゲン化アラルキル（例えば、臭化ベンジルおよびフェネチル）などがある。
【００８５】
本発明の化合物の溶媒和物も本明細書で企図されている。式（Ｘ）の化合物の溶媒和物には、例えば水和物がある。
【００８６】
鏡像異性体形態およびジアステレオマー形態を含む本化合物の立体異性体の全て（例えば、種々の置換基上の不斉炭素により存在し得るもの）は、本発明の範囲内に企図される。したがって、例えば、式Ｘの化合物への各言及は、式Ｘ’の化合物を包含することを意図する。本発明の化合物の個々の立体異性体は、例えば、実質的にその他の異性体を含まなくてよく（例えば、特定の活性を有する純粋なまたは実質的に純粋な光学異性体として）、または例えば、ラセミ化合物として、もしくは全てのその他のもしくはその他の選択された立体異性体と混合されていてよい。本発明のキラル中心は、ＩＵＰＡＣ １９７４ Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓで定義されたＳまたはＲ立体配置を有してよい。ラセミ形態は、例えば、ジアステレオマー誘導体の分別結晶、分離もしくは結晶化、またはキラルカラムクロマトグラフィーによる分離によって分割できる。個々の光学異性体は立体特異的方法から得ることができ、ここで、出発物質および／または中間体は、最終生成物に望まれるものに対応する立体化学を有するように選択され、その立体化学は反応の間にわたって維持され、かつ／または異性体は、限定することなく、例えば、光学活性酸との塩形成、その後の結晶化などの慣用の方法を含む任意の適切な方法によってラセミ化合物から得ることができる。
【００８７】
本発明の化合物の配置異性体の全ては、混合物として、または純粋なもしくは実質的に純粋な形態のいずれかで企図される。理解されるように、好ましい立体配置は、望ましい特定の化合物および活性の関数であることができる。配置異性体は、立体選択的であってよい本明細書に記載の方法によって調製してよい。換言すれば、最終化合物の望ましい立体化学は、対応する所望の立体化学を有し、次いでその立体選択性を調製のプロセスの間にわたって維持する出発物質を使用して達成することができる。別法として、本化合物はラセミ化合物またはジアステレオマーとして調製してよく、次いで所望の立体化学は、例えばカラムクロマトグラフィーなどの当技術分野で知られた任意の適切な方法によって達成できる配置異性体の分離を介して達成してよい。
【００８８】
本明細書を通じて、その基および置換基は、医薬的に許容される化合物を作製するのに有用な医薬的に許容される化合物および／または中間体化合物として有用な安定な部分および化合物を提供するように選択され得る。当業者は、安定な化合物を達成する変数を適切に選択するであろう。
【００８９】
例示的または好ましいものとして本明細書で示された実施形態は、例示であることを意図し、限定するものではない。
【００９０】
本発明の他の実施形態は、例えば上記で挙げた実施形態の組合せを考えると当業者には明らかであろうし、本明細書の発明の範囲内に入ることが企図される。
有用性
【００９１】
一定の癌細胞で過剰発現または優先的に発現されるタンパク質の１つは葉酸受容体である。葉酸はＤＮＡ合成に必要であり、一定のヒト腫瘍細胞は葉酸結合タンパク質を過剰発現することが知られている。例えば、Campbell et al., "Folate Binding Protein is a Marker for Ovarian Cancer," Cancer Research, Vol. 51 (Oct. 1, 1991), pp. 5329-38およびConey et al., "Cloning of a Tumor-Associated Antigen: MOv18 and MOv19 Antibodies Recognize Folate-binding Protein," Cancer Research, Vol. 51 (Nov. 15, 1991), pp. 6125-31の両方は、葉酸結合タンパク質が卵巣癌のマーカーであると報告している。葉酸受容体の過剰発現はまた、その他の癌、例えば、皮膚、腎臓、胸部、肺、結腸、鼻、咽喉、乳腺および脳の癌、ならびに本明細書で挙げられたその他の癌について知られている。
【００９２】
本発明の化合物は、葉酸受容体を発現する腫瘍のエポチロン誘導微小管安定化剤として有用であり、デリバリーされ得る。本発明の化合物は、種々の癌およびその他の増殖性疾患、特に葉酸受容体を発現する癌細胞または腫瘍を特徴とする癌の治療に有用である。本明細書で使用される用語「葉酸受容体関連状態」は、葉酸受容体の発現を特徴とする疾患または障害、あるいは換言すれば、正常組織と比較した疾患組織での葉酸受容体の発現レベルに基づいて診断または治療できる疾患または障害を含む。本発明の化合物はコンジュゲートの形成に有用である。例えば、本発明の化合物を使用して以下の式Ｉ：
【化１５】
Ｉ
［式中、
Ｖは、葉酸、またはその類似体もしくは誘導体であり；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＲ7であり；
Ｍは解離可能なリンカーであり；
Ｋは、Ｏ、ＳまたはＮＲ7aであり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６であり；
Ｔは、式：
【化１６】
を有しており、その中で、
Ｒ14は、各々独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、置換シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキルであり；
ｑは１から１０であり；
Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は、独立して、水素、アルキル、置換アルキルまたはシクロアルキルである］
のコンジュゲート化合物を形成してよい。
【００９３】
別の非限定的な例として、本発明の化合物を使用して、以下の式Ｉａ：
【化１７】
Ｉａ
［式中、Ｖは葉酸受容体結合部分である］
のコンジュゲート化合物を形成してよい。例えば、Ｖは以下の式：
【化１８】
［式中、ＷおよびＸは、独立して、ＣＨまたは窒素であり；
Ｒ20は、水素、アミノまたは低級アルキルであり；
Ｒ21は、水素、低級アルキルであり、またはＲ23とシクロアルキル基を形成し；
Ｒ22は、水素、低級アルキル、低級アルケニルまたは低級アルキニルであり；
Ｒ23は水素であり、またはＲ21とシクロアルキルを形成する］
を有してよい。好ましくは、Ｖは、
【化１９】
である。
【００９４】
本発明の化合物はコンジュゲートして、以下の式Ｉｂ：
【化２０】
Ｉｂ
［式中、
Ｖは葉酸受容体結合部分であり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
Ｑは、Ｏ、ＳまたはＮＲ7であり；
Ｍは以下の式を有する解離可能なリンカー
【化２１】
好ましくは
【化２２】
であり；
Ｒ14は、各々独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、置換シクロアルキルアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルまたは置換ヘテロシクロアルキルであり；好ましくは、Ｈ、メチル、グアニジニルプロピル、−（ＣＨ2）1~2−ＣＯ2Ｈ、−ＣＨ2−ＳＨ、−ＣＨ2−ＯＨ、イミダゾリル（メチル）、アミノブチルおよび−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ3から選択される基であり；より好ましくは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨまたは−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ2の１つで置換されたＣ1からＣ3アルキルであり；
ｑは１から１０；好ましくは１から５であり；
Ｒ15、Ｒ16およびＲ17は、独立して、水素、低級アルキルまたは置換低級アルキルであり；
Ｒ18、Ｒ19、Ｒ31、Ｒ32、Ｒ33、Ｒ24、Ｒ25、Ｒ26、Ｒ27、Ｒ28およびＲ29はそれぞれ、独立して、Ｈ、低級アルキル、置換低級アルキル、シクロアルキルまたは置換シクロアルキルであり、あるいはＲ18とＲ19、Ｒ31とＲ32、Ｒ19とＲ31、Ｒ33とＲ24、Ｒ25とＲ26、Ｒ24とＲ25、またはＲ27とＲ28はいずれも一緒になって、シクロアルキルを形成してもよい］
を有する化合物を形成することができる。
【００９５】
本発明の化合物は、その医薬的に許容される塩および溶媒和物を含む、以下の式：
【化２３】
を有するコンジュゲート化合物を形成するのに特に有用である。
【００９６】
式Ｉ：
【化２４】
Ｉ
の化合物に挿入できる−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−など、本明細書に挙げた任意の二価基について、その挿入は左から右へなされるべきである。例えば、Ａが−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−と定義される以下の場合、以下の通り、メチレン基はＫに結合し、Ｚ基はアジリジニル環の窒素に結合している。
【化２５】
【００９７】
非限定的実施例として、そのような葉酸受容体関連の癌としては、卵巣癌、ならびに皮膚、胸部、肺、結腸、鼻、咽喉、乳腺、肝臓、腎臓、脾臓および／または脳の癌；中皮腫、下垂体腺腫、子宮頚癌、腎細胞癌またはその他の腎臓癌、脈絡叢癌および上皮性腫瘍がある（Asok, Antony, "Folate Receptors: Reflections on a Personal Odyssey and a Perspective on Unfolding Truth," Advanced Drug Delivery Reviews 56 (2004) 1059-66参照）。
【００９８】
さらに、抗エストロゲン（タモキシフェン、ＩＣＩ１８２、７８０など）の使用は、一定の癌細胞または腫瘍タイプにおけるＦＲ発現を増大させて本発明の化合物を患者に投与したときに得られる利点を強化するのに、および／または本発明による化合物で治療できる種々の疾患もしくは腫瘍タイプを増加させるのに有効であり得る。
【００９９】
例えば、本発明の化合物で、および／または本発明の化合物を抗エストロゲンと組み合わせて含む併用療法で治療できる疾患としては、限定することなく、さらに以下のものがある：
− 上掲のものを含む癌腫および／または膀胱、膵臓、胃、甲状腺および前立腺の癌腫；
− 急性リンパ球性白血病および急性リンパ芽球性白血病などの白血病、ならびにＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫およびバーキットリンパ腫などのリンパ腫を含む、リンパ球系列の造血腫瘍；
− 急性および慢性骨髄性白血病および前骨髄球性白血病を含む、骨髄系列の造血腫瘍；
− 星状細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫および神経鞘腫を含む、中枢および末梢神経系の腫瘍；
− 線維肉腫、横紋筋肉腫および骨肉腫を含む、間葉由来の腫瘍；ならびに
− 黒色腫、色素性乾皮症、精上皮腫、角化棘細胞腫、甲状腺濾胞癌および奇形癌を含む、その他の腫瘍。
【０１００】
本発明の化合物は、以前に癌の治療をしたことのある患者、ならびに以前に癌の治療をしたことのない患者を治療するのに有用である。本発明の方法および組成物は、一次および二次癌治療で使用できる。さらに、式（Ｘ）の化合物は、難治性または抵抗性癌を治療するのに有用であり得る。
【０１０１】
本発明の化合物は、これらだけに限定するものではないが、関節炎、特に炎症性関節炎および活性化マクロファージに媒介されるその他の炎症性状態、ならびにアルツハイマー病などの中枢神経系障害を含む、葉酸受容体を介してデリバリーされる微小管安定化剤に反応性のその他の状態の治療にも有用であり得る。
【０１０２】
さらに、本発明の化合物で治療される患者は、例えば、その他の抗癌剤および細胞毒性剤での治療、または癌もしくはその他の増殖性疾患の治療で有用なその他の治療との組合せを受けてよい。癌の治療では、本発明の化合物および１種または複数の追加の作用物質および／またはその他の治療の組合せは有利であり得る。第２の作用物質は式（Ｘ）の化合物と同じまたは異なる作用機序を有してよい。特に有用なのは、選択された第２の薬物が本発明の本化合物の活性薬物部分と異なる様式でまたは細胞周期の異なる相で作用する抗癌剤および細胞毒性剤の組合せである。
【０１０３】
抗癌剤および細胞毒性剤のクラスの例としては、これらだけに限定するものではないが、アルキル化剤、例えば、ナイトロジェンマスタード、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、エチレンイミンおよびトリアゼン；代謝拮抗物質、例えば、葉酸アンタゴニスト、プリン類似体およびピリミジン類似体；抗生物質または抗体、例えば、モノクローナル抗体；酵素；ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ホルモン剤、例えば、グルココルチコイド、エストロゲン／抗エストロゲン、アンドロゲン／抗アンドロゲン、プロゲスチンおよび黄体ホルモン放出アンタゴニスト；微小管破壊剤、例えば、エクチナサイジンまたはそれらの類似体および誘導体；微小管安定化剤；植物誘導生成物、例えば、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシンおよびタキサン；トポイソメラーゼ阻害剤；プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；白金配位錯体；マルチキナーゼ阻害剤および／またはＳｒｃキナーゼもしくはＳｒｃ／ａｂｌの阻害剤を含むキナーゼ阻害剤；情報伝達阻害剤；ならびに抗癌剤および細胞毒性剤として使用されるその他の作用物質、例えば、生物学的応答調節物質、成長因子および免疫調節剤がある。式Ｘの化合物は放射線療法と組み合わせて使用してもよい。
【０１０４】
本発明の化合物と組み合わせて使用してよい抗癌剤のさらなる例としては、Ｓｒｃキナーゼ阻害剤、‘Ｎ−（２−クロロ−６−メチルフェニル）−２−［［６−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］−２−メチル−４−ピリミジニル］アミノ］−５−チアゾールカルボキサミド、ならびに参照により本明細書に援用する米国特許第６，５９６，７４６号および２００５年２月４日出願の米国特許出願第１１／０５１，２０８号に記載のその他の化合物；イクサベピロン、アザ−エポチロンＢ類似体および／または米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，２６２，０９４号；同第６，２８８，２３７号；同第６，２９１，６８４号；同第６，３５９，１４０号；同第６，３６５，７４９号；同第６，３８０，３９５号；同第６，３９９，６３８号；同第６，４９８，２５７号；同第６，５１８，４２１号；同第６，５７６，６５１号；同第６，５９３，１１５号；同第６，６１３，９１２号；同第６，６２４，３１０号、２００３年３月公開の米国出願公開第２００３／００６０６２３号；ドイツ国特許第４１３８０４２．８号；ＷＯ９７／１９０８６、ＷＯ９８／２２４６１、ＷＯ９８／２５９２９、ＷＯ９８／３８１９２、ＷＯ９９／０１１２４、ＷＯ９９／０２２２４、ＷＯ９９／０２５１４、ＷＯ９９／０３８４８、ＷＯ９９／０７６９２、ＷＯ９９／２７８９０、ＷＯ９９／２８３２４、ＷＯ９９／４３６５３、ＷＯ９９／５４３３０、ＷＯ９９／５４３１８、ＷＯ９９／５４３１９、ＷＯ９９／６５９１３、ＷＯ９９／６７２５２、ＷＯ９９／６７２５３、ＷＯ００／００４８５、米国特許出願公開番号２００４／００５３９１０および２００４／０１５２７０８に記載のその他のエポチロン類似体；ＷＯ９９／２４４１６（米国特許第６，０４０，３２１号も参照）に見い出されるサイクリン依存性キナーゼ阻害剤；ＷＯ９７／３０９９２およびＷＯ９８／５４９６６に見い出されるプレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；米国特許第６，０１１，０２９号に記載のファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ剤；ＰＣＴ公開番号ＷＯ０１／１４４２４に記載のＣＴＬＡ−４抗体、および／またはＰＣＴ公開番号ＷＯ００／３７５０４に記載のＣＴＬＡ−４抗体、例えば、ＣＰ−６７５２０６（チシリムマブ(ticilimunab)）として知られている抗体、またはＯＲＥＮＣＩＡ（登録商標）；ＭＤＸ−０１０；ビンフルニン（Ｊａｖｌｏｒ（商標））およびＥｒｂｉｔｕｘ（セツキシマブ）がある。
【０１０５】
本発明の化合物と組み合わせるのに潜在的に有用なその他の作用物質としては、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、雑多な作用物質、例えば、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、ミトタン、ヘキサメチルメラミン、シスプラチンおよびカルボプラチン；Ａｖａｓｔｉｎ；およびＨｅｒｃｅｐｔｉｎが挙げられる。
【０１０６】
本発明に従って調製された医薬組成物はまた、上記の状態に関連する療法の投与において特に有用であるために選択されたその他の治療剤と共に製剤されるか、共投与することができる。例えば、医薬組成物は、吐き気、過敏症および胃の不快感を予防する作用物質、例えば、制吐薬、ならびにＨ1およびＨ2抗ヒスタミン剤と製剤してよい。
【０１０７】
上記のその他の治療剤は、本発明の化合物と組み合わせて用いる場合、例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（ＰＤＲ）で示された量、さもなければ当業者が決定した量で使用できる。
【０１０８】
本発明の一実施形態は、癌を治療する医薬組成物の調製における本発明化合物の使用、特に、葉酸受容体を過剰発現または優先的に発現する腫瘍への標的薬物デリバリーで使用する医薬組成物の調製における使用を含む。本発明の医薬組成物は、本明細書で記載の使用の任意のものに、任意の適切な手段、例えば、非経口的に、例えば、皮下、静脈内、筋肉内または胸骨内注射または注入技術（例えば、滅菌注射水性または非水性溶液または懸濁液）によって、および／または非毒性、医薬的に許容されるビヒクルもしくは希釈剤を含有する用量単位製剤で投与できる。医薬組成物は、例えば、即時放出または持続放出に適した形態で投与できる。即時放出または持続放出は、本化合物を含む適切な医薬組成物の使用により、または特に持続放出の場合、例えば皮下インプラントまたは浸透圧ポンプなどのデバイスの使用によって達成できる。
【０１０９】
非経口投与用の例示的な組成物としては、例えば、適切な非毒性、非経口的に許容される希釈剤または溶媒、例えば、マンニトール、１，３−ブタンジオール、水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム溶液（０．９％塩化ナトリウム注射［生理食塩水］または５％デキストロース注射）、または合成モノグリセリドもしくはジグリセリドおよび脂肪酸を含むその他の適切な分散剤もしくは湿潤剤および懸濁化剤を含有できる注射溶液または懸濁液がある。医薬的に許容される組成物および／または本発明の化合物を投与する方法は、限定するものではないが、エタノール、Ｎ，Ｎジメチルアセトアミド、プロピレングリコール、グリセロールおよびポリエチレングリコール、例えば、ポリエチレングリコール３００および／またはポリエチレングリコール４００を含む共溶媒の使用を含むことがあり、限定することなく、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）、ＳＯＬＵＴＯＬ ＨＳ １５（登録商標）、ポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロキサマー、ピロリドン、例えばＮ−アルキルピロリドン（例えば、Ｎ−メチルピロリドン）および／またはポリビニルピロリドンを含む界面活性物質（その表面張力を減少させることによって化合物の拡散性または湿潤性を増大するのに使用し得る医薬的に許容される界面活性剤）の使用を含むことがあり；限定することなく、リン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−リシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−アラニン、グリシン、炭酸ナトリウム、トロメタミン（ａ／ｋ／ａトリス［ヒドロキシメチル］アミノメタンまたはＴｒｉｓ）および／またはその混合物を含む１種または複数の「バッファー」（例えば、酸または塩基を少しずつ加えたときに媒体の有効酸性度またはアルカリ性度の変化に抵抗する能力を付与する成分）の使用を含むこともある。
【０１１０】
本発明の化合物の有効量は、当業者が決定でき、１日当たり１から４回など、単回用量または個々の分割用量で投与できる、１日当たりの活性化合物の約０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の成人の例示的な用量を含む。好ましい範囲には約０．０２から５ｍｇ／ｋｇ体重の用量が含まれ、約０．０５〜０．３の範囲が最も好ましい。任意の特定の対象の特定の用量レベルおよび投与頻度は変化することができ、用いる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性および作用の長さ、対象の種、年齢、体重、総体的な健康、性別および食事、投与の様式および時間、排泄率、薬物の組合せおよび特定の状態の重篤度を含む種々の要因に応じる。治療に好ましい対象としては、微小管安定化関連状態の動物、最も好ましくはヒトなどの哺乳動物種、イヌ、ネコなどの愛玩動物が挙げられる。
【０１１１】
以下の実施例の１つまたは複数に開示された化合物など、本発明の化合物は、下記のアッセイおよび／または当技術分野で知られたアッセイの１つまたは複数で試験されており、微小管安定化剤として測定可能なレベルの活性を示す。
アッセイ
クローン原性細胞生存アッセイ
【０１１２】
ＲＰＭＩ１６４０培地１０ｍｌを含み、葉酸を含まず、１０％ウシ胎仔血清および２５ｍＭのＨＥＰＥＳを含有するＴ７５フラスコに３．０×１０5細胞で癌細胞を播種した。５％のＣＯ2を含有する３７℃のインキュベーター中で細胞を２日間増殖させた。２日目に、上清をフラスコから除去し、フラスコを２つのグループに分けた。１つのグループの細胞は、１００Ｍの葉酸（Ｓｉｇｍａ）を含有する培地５ｍｌと共に３０分間インキュベートし、その他は葉酸を加えていない培地５ｍｌ中で増殖させた。次いで細胞を２０ｎＭのエポチロン、エポチロン類似体、複合エポチロンまたは複合エポチロン類似体で１時間処理した。インキュベーションの終わりに、薬物をフラスコから除去し、細胞をＰＢＳバッファーで３回洗浄した。洗浄後、完全培地５ｍｌを各フラスコに加え、細胞をＣＯ2インキュベーターで２３時間増殖させた。翌朝、細胞をフラスコからトリプシン処理によって除去し、細胞数を判定し、次いで細胞を６ウェルプレートに播いた。プレートに播いた１０日後、コロニーをクリスタルバイオレットで染色し、計数した。生存率を判定した。
インビトロＭＴＳ増殖／細胞毒性アッセイ
【０１１３】
ＭＴＳ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、内塩）の、４９２ｎｍで光を吸収する還元型への代謝変換を利用するテトラゾリウム系比色アッセイを使用して腫瘍細胞におけるインビトロ細胞毒性を評価した。エポチロン、エポチロン類似体、複合エポチロンまたは複合エポチロン類似体を加える２４時間前に細胞を播種した。３７℃で段階希釈した化合物と共に７２時間インキュベートした後、電子カップリング剤メト硫酸フェナジンと組み合わせたＭＴＳを細胞に加えた。インキュベーションを３時間続け、次いで４９２ｎｍでの培地の吸光度を分光光度計で測定して、対照集団と比較した生存細胞の数を得た。結果は中央細胞毒性濃度（ＩＣ50値）として表す。
葉酸受容体アッセイ
【０１１４】
ＦＲアッセイに使用した試料調製手順全てを４℃で実施した。均質化バッファー（１０ｍＭトリス、ｐＨ８．０、ロイペプチンおよびアプロチニンそれぞれ０．０２ｍｇ／ｍｌ；バッファー１ｍｌ／組織５０ｍｇ）中、ＰｏｗｅｒＧｅｎ １２５ホモジナイザーを使用して組織試料を均質化した。大きな破片は穏やかな遠心分離（３０００×ｇで１５分間）で除去した。次いで膜ペレットを４０，０００×ｇで６０分間の遠心分離によって集め、溶化バッファー（５０ｍＭトリス、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２５ｍＭ ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、５ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．０２％アジ化ナトリウム）に再懸濁した。不溶性物質を第２の４０，０００×ｇで６０分間の遠心分離によって除去し、上清の総タンパク質濃度はビシンコニン酸（ＢＣＡ）法（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）で測定した。次いで、各試料を可溶化バッファー中０．２５ｍｇ／ｍｌに希釈し、２つのＭｉｃｒｏｃｏｎ−３０ミクロ濃縮器（３０，０００−ＭＷカットオフ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）のそれぞれの内部に１００μｌを入れた。次いで、試料を１４，０００×ｇで１０分間、室温で遠心分離し、全液体を膜に通し、ならびに可溶化ＦＲをミクロ濃縮器の膜の表面に保持した。これらの同じパラメータを使用して全てのその後の遠心分離工程を実施した。次いで、３０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ３．０）５５μｌを各ミクロ濃縮器に加え、その後、遠心分離工程を続けた。次に、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）５５μｌを各ミクロ濃縮器に分配し、その後、別の遠心分離を続けた。次いで、５０μｌの［3Ｈ］葉酸結合試薬（５００ｍＭ ＮａＣｌ、２．７ｍＭ ＫＣｌおよび２５ｍＭ ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシドを含有する１０ｍＭ Ｎａ2ＰＯ4、１．８ｍＭ ＫＨ2ＰＯ4、ｐＨ７．４中の１２０ｎＭ ［3Ｈ］葉酸（Ａｍｅｒｓｈａｍ））または５０μｌの競合試薬（結合試薬＋１２０μＭ非標識葉酸）を適切な濃縮器に加えた。２０分間室温でインキュベートした後、ＰＢＳ、ｐＨ７．４中の５０ｍＭ ｎ−オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、０．７Ｍ ＮａＣｌの７５μｌで３回濃縮器を洗浄／遠心分離した。最終洗浄の後、４％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＰＢＳ １００μｌで２回すすぐことによりミクロ濃縮器の膜表面から可溶化ＦＲを含有する濃縮水を回収した。次いで試料を液体シンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）で計数した。カウント毎分（ｃｐｍ）値は、既知の標準のｃｐｍに基づいてＦＲのピコモルに変換し、最終結果は試料のタンパク質含量に対して正規化した。
動物および腫瘍
【０１１５】
制御環境中に維持し、水および食物を自由に与えた雌性ＣＤ２Ｆ１マウス（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ Ｉｎｃ．、２０〜２２ｇ）を、これらの試験で使用した。ネズミＦＲα（−）Ｍａｄｉｓｏｎ １０９（Ｍ１０９）肺癌（Marks et al.、１９７７）およびＦＲ発現（ＦＲα（＋））９８Ｍ１０９変異体を使用して、エポチロン、エポチロン類似体（例えば、エポチロン誘導体）、葉酸−エポチロンコンジュゲートまたは葉酸−エポチロン類似体コンジュゲートの効力を評価した。さらに、ヌードマウスで増殖させたヒト頭頸部類表皮癌ＫＢもこの目的で使用した。
薬物治療および抗腫瘍効力評価
【０１１６】
エポチロンまたはエポチロン類似体をマウスに投与するために、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）／エタノール／水（１：１：８、ｖ／ｖ）からなる賦形剤を使用した。化合物をまず、ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）／エタノール（５０：５０）の混合物に溶解させた。所要の用量強度への最終希釈は、薬物投与前１時間未満に行った。ボーラスＩＶ注射により尾静脈からマウスに作用物質を投与した。葉酸−エポチロンコンジュゲートまたは葉酸−エポチロン類似体コンジュゲートは、滅菌リン酸緩衝食塩水中で調製し、ＩＶボーラス注射により尾静脈から０．０１ｍＬ／ｇマウスの容量で投与した。各動物の処置は個々の体重に基づいた。
【０１１７】
意味のある応答を検出するのに必要な動物の所要数は、実験の開始時にプールし、それぞれに腫瘍ブライ(tumor brei)（２％ｗ／ｖ）を皮下接種した。腫瘍を４日間増殖させた。４日目に、動物を種々の処置群および対照群に均等に区分した。処置した動物を処置に関連する毒性／死亡率について毎日チェックした。動物の各群は処置の開始前に体重を計り（Ｗｔ１）、次いで再び最後の処置投薬後に計った（Ｗｔ２）。体重の差（Ｗｔ２−Ｗｔ１）は処置に関連する毒性の尺度となる。
【０１１８】
腫瘍が１ｇの所定の「目的の」サイズに達するまで、腫瘍の応答は週に２回のカリパスでの腫瘍の測定により判定した。腫瘍の重さ（ｍｇ）は次式から見積もった。
腫瘍の重さ＝（長さ×幅2）÷２
【０１１９】
抗腫瘍活性は、過度の毒性（即ち、複数の死亡）が起こる直前の用量レベルとして定義される最大許容用量（ＭＴＤ）で評価した。死亡した場合は、死亡した日を記録した。腫瘍が目的のサイズに達する前に死亡した処置したマウスは、薬物毒性で死亡したと考えた。目的のサイズ未満の腫瘍を有する対照マウスは死亡しなかった。薬物の毒性が原因で複数の死亡があった処置群は、過度の毒性処置があったと考え、そのデータは化合物の抗腫瘍効力の評価には含めなかった。
【０１２０】
腫瘍の応答の終点は、処置された腫瘍が所定の目的のサイズに達するのに要求される時間（日）（Ｔ）を対照群の時間（Ｃ）と比較した差として定められる腫瘍の増殖の遅れ（Ｔ−Ｃ値）によって表した。
【０１２１】
腫瘍細胞の死滅を見積もるため、腫瘍容量倍加時間（ＴＶＤＴ）はまず次式で計算した。
ＴＶＤＴ＝対照の腫瘍が目的のサイズに達する時間（日）の中央値−対照の腫瘍が目的のサイズの半分に達する時間（日）の中央値
および
Ｌｏｇ（細胞死滅）＝Ｔ−Ｃ÷（３．３２×ＴＶＤＴ）
データの統計的評価は、Ｇｅｈａｎの一般化Ｗｉｌｃｏｘｏｎ検定を使用して行った。
略語
【０１２２】
参照し易いように、本明細書のスキームおよび実施例では以下の略語を使用する。
ＣＢＺ−ＯＳｕ＝Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド
ＤＣＭ＝ジクロロメタン
ＤＥＡ＝ジエチルアミン
ＤＩＡＤ＝アゾジカルボン酸ジイソプロピル
ＤＩＰＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡ＝ジメチルアミン
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド
ＥＤＣ＝１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥｔＯＨ＝エタノール
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＦＲ＝葉酸受容体
ＨＯＢｔ＝ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＣＬ＝高速液体クロマトグラフィー
ｉＰｒ−ＯＨまたはＩＰＡ＝イソプロピルアルコール
ＬＣ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー／質量スペクトル
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド
ＭｅＯＨ＝メタノール
ＯＴＥＳ＝ｏ−トリエチルシリル；
ＯＭｓ＝メシレート；
Ｐｈ＝フェニル
Ｐｄ／Ｃ＝炭素付パラジウム
ＰｙＢＯＰ＝ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩
Ｐｙ＝ピリジル
ＲＴ＝室温
Ｓａｔ’ｄ＝飽和
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー
ＴＥＳＣＬ＝クロロトリエチルシラン
ＵＶ＝紫外線。
調製方法
【０１２３】
本発明の化合物は一般に、以下のスキームおよび当業者の知識に従って、ならびに／または参照によりおよび／もしくは以下の実施例にその開示が本明細書で援用される米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，８３１，０９０号；同第６，８００，６５３号；同第６，２９１，６８４号；同第６，７１９，５４０号；同第７，１７２，８８４号、米国特許出願公開第２００５／０００２９４２号、およびOrganic Letters, 2001, 3, 2693-2696で挙げられた方法を使用して調製してよい。
【０１２４】
スキーム１で示した通り、式Ｘの化合物は式ＩＩの化合物から調製できる。式ＩＩの化合物は発酵（例えば、参照によりその開示が本明細書で援用されるGerth et al., "Studies on the Biosynthesis of Epothilones: The Biosynthetic Origin of the Carbon Skeleton," Journal of Antibiotics, Vol. 53, No. 12 (Dec. 2000)およびHofle et al., "Epothilone A and B- Novel 16-Membered Macrolides: Isolation, Crystal Structure, and Conformation in Solution", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, No. 13/14, 1567-1569 (1996)参照）、または合成（例えば参照によりその開示全体が本明細書で援用されるVite et al.、米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，２４２，４６９号；同第６，８６７，３３３号および米国特許出願公開２００６／００４０６５およびJohnson et al. Organic Letters, 2000, 2:1537-1540参照）によって得ることができる。例えば、式ＩＩの化合物（Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ12は、メチルであり、Ｂ1はヒドロキシルであり、Ｒ1およびＲ6は水素であり、Ｒ2は２−メチルチアゾール−４−イルである）はエポチロンＡと呼ばれ、上記の通りソランジウム・セルロースムの発酵から得ることができる。式ＩＩの化合物は式ＩＩＩの化合物に変換でき、Ｐは、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリルなどのシリル保護基である（例えば、Greene et al., "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Inc.参照）。例えば、式ＩＩＩの化合物（Ｐはトリエチルシリルである）は、ヒューニッヒ塩基の存在下で式ＩＩの化合物をクロロトリエチルシランで処理することによって調製できる。式ＩＩの化合物でＢ1がヒドロキシルである場合、Ｂ1はまた対応するシリルエーテルに変換される。式ＩＶ（Ｙは、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである）のハロヒドリンは、式ＩＩＩの化合物から当技術分野で知られた方法によってハロゲン化金属塩で処理することにより調製できる。例えば、マグネシウムブロミドエーテレートを使用して低温（−２０から−５℃）でエポキシド開環することにより、Ｙが臭素であるジアステレオマーハロヒドリンを得ることができる。式Ｖの化合物は、式ＩＶの化合物から、例えば、ジメチルホルムアミドなどの極性溶媒中アジ化ナトリウムを使用してハロゲンを置き換えることによって調製できる。当業者は、スキームＩに示したＣ12の立体化学が限定的なものではなく例示的なものと解釈すべきであることを理解するであろう。所望により、Ｃ12位での立体化学の反転は、当技術分野でよく確立された光延プロトコールに従って達成できる。例えば、式Ｖの化合物をｐ−ニトロ安息香酸、ジエチルアゾジカルボキシレートおよびトリフェニルホスフィンで処理すると、対応するニトロ安息香酸エステルが得られ、次いでこれを、例えばアンモニアのメタノール溶液を使用する穏やかなエステル加水分解で切断して式ＶＩの化合物を得ることができる。再び、化合物ＶＩについて示したＣ12の立体化学は、限定するものではなく、記載した通りに化合物Ｖを処理することによりその位置の立体化学を反転させることを示すものとして描かれている。別法として、他の有機酸、アゾジカルボキシレートおよびオルガノホスフィンを使用して光延反転を実施することができる。ＯＧが、メシレート、トシレート、ノシレート、トリフレートなどの脱離基である式ＶＩＩの化合物は、式ＶＩの化合物から当技術分野で知られた方法によって調製できる。例えば、ＶＩをジクロロメタンなどの適切な有機溶媒中、塩化メタンスルホニルおよびトリエチルアミンで処理することにより、ＯＧがメシレートである式ＶＩＩの化合物を得る。式ＶＩＩＩの化合物は、式ＶＩＩの化合物からアジド基をオルガノホスフィン（例えば、トリメチルホスフィン）などの還元剤で還元することによって調製できる。別法として、式ＶＩＩＩの化合物は、式ＶＩの化合物からトリフェニルホスフィンなどのオルガノホスフィン還元剤を使用することによって直接調製できる。式ＩＸの化合物は式ＶＩＩＩの化合物から当技術分野で知られた方法によって調製できる（例えば、米国特許第６，８００，６５３号；およびRegueiro-Ren et al., Organic Letters, 2001, 3, 2693-2696参照）。例えば、Ｈ−Ｋ−Ａ−が２−ヒドロキシエチルである式ＩＸの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物から、例えば、過剰の２−ブロモエタノールおよび炭酸カリウムなどの塩基を使用してアジリジン環をアルキル化することによって調製できる。式Ｘの化合物は式ＩＸの化合物から当技術分野で知られた方法を使用してシリルエーテル保護基を除去することによって調製できる（例えば、Greene et al., "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Inc.参照）。例えば、Ｐがトリエチルシリルである場合、式ＩＸの化合物をジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸で処理することにより脱保護して式Ｘの化合物を得る。
【化２６】
【０１２５】
スキーム２は、葉酸類似体または誘導体Ｖ、および本発明の化合物と一緒に使用して、例えば上記の式Ｉのような標的薬物デリバリーのための複合分子を作製し得る以下の式ＸＩを有する二価リンカーＴ−Ｑを作製する方法を示す。スキーム２で示した通り、葉酸類似体および二価リンカーは、当技術分野で知られた方法を使用して、特に、Ｖが、例えば、その開示を参照により本明細書に援用するJackson, et al., Advanced Drug Delivery Rev. 56(2004) 1111-1125で記載の通りの葉酸または葉酸類似体であり、Ｔ−Ｑがペプチドである場合、結合させることができる。例えば、ペプチジル葉酸ＸＩはスキーム２で示した通りに調製できる。システイン保持ポリスチレン樹脂とＦｍｏｃ保護されたアスパルテート、アルギニン、アスパルテート、さらにグルタメートとの連続的ペプチドカップリングは、ＰｙＢＯＰをカップリング剤として、およびピペリジンをＦｍｏｃ脱保護剤として使用して実施できる。Ｎ10−トリフルオロアセトアミド保護プテロイン酸は、葉酸からプテロイン酸への酵素的（カルボキシペプチダーゼＧ）、次いで無水トリフルオロ酢酸を使用するＮ10−保護の２ステップで調製できる。次に、Ｎ10−保護プテロイン酸を樹脂結合ペプチドにカップリングさせ、次いで樹脂からトリフルオロ酢酸で切断し、水酸化アンモニウムを使用してＮ10−トリフルオロアセチル基を除去すると、式Ｉの化合物のＶ−Ｔ−Ｑ断片（Ｖは葉酸であり、Ｔ−Ｑは−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−ＯＨである）が得られる。別法として、プテロイン酸類似体は、プテロイン酸およびその他のアミノ酸の代わりに使用することができ、スキーム２で例示されたものの代わりに使用することができる。
【化２７】
【０１２６】
以下のスキーム３は、本発明のエポチロン誘導体を使用して、標的薬物デリバリーで使用するための式Ｉの複合分子を調製する方法を示す。スキーム３で示す通り、式Ｉの化合物のアセンブリーは、解離可能なリンカーＭを段階的に取り込むことにより式Ｘの化合物を断片Ｖ−Ｔ−Ｑとカップリングさせることによって達成できる。例として、−Ａ−Ｋ−Ｈが−ＣＨ2ＣＨ2ＯＨである式Ｘの化合物は、式ＸＩＩの活性化ベンゾトリアゾール化合物を使用して炭酸ジスルファニルエチルＸＩＩＩに変換できる。式ＸＩＩの化合物は、メルカプトエタノール、メトキシカルボニルスルフェニルクロリド、および適宜置換された２−メルカプトピリジンから調製して、中間体２−（２−ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノールを提供することができ、次いでこれは、ジホスゲンおよび適宜置換された１−ヒドロキシベンゾトリアゾールで処理することによって式ＸＩＩの化合物に変換できる。ＸＩなどのペプチジル葉酸でのそれに続くジスルフィド交換により、式Ｉの化合物（Ｖは葉酸であり、Ｔ−Ｑは−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−ＯＨであり、Ｍは−ＳＣＨ2ＣＨ2Ｏ（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ａは−ＣＨ2ＣＨ2−であり、ＫはＯである）が得られる。
【化２８】
【０１２７】
スキーム４は、式Ｘの化合物を式ＸＩＶの化合物から作製する代替法を説明する（その全体を参照により本明細書に援用する、２００６年５月２５日出願の米国特許出願第６０／９４０，０８８号参照）。式ＸＩＶの化合物は、当技術分野でよく知られた方法によって、例えば、発酵によって（例えば、参照によりその開示が本明細書で援用されるGerth et al., "Studies on the Biosynthesis of Epothilones: The Biosynthetic Origin of the Carbon Skeleton," Journal of Antibiotics, Vol. 53, No. 12 (Dec. 2000)およびHofle et al., "Epothilone A and B- Novel 16-Membered Macrolides: Isolation, Crystal Structure, and Conformation in Solution", Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 35, No. 13/14, 1567-1569 (1996)参照）、または全合成によって（例えば、参照によりその開示全体が本明細書で援用されるVite et al.米国特許第６，６０５，５９９号；同第６，２４２，４６９号；同第６，８６７，３３３号および米国特許出願公開２００６／００４０６５参照）得ることができる。例えば、式ＸＩＶの化合物（Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ12はメチルであり、Ｂ1はヒドロキシルであり、Ｒ1およびＲ6は水素であり、Ｒ2は２−メチルチアゾール−４−イルである）はエポチロンＣと呼ばれ、上記の通りソランジウム・セルロースムの発酵から得ることができる。式ＸＩＶの化合物は、Ｐが、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリルなどのシリル保護基である式ＸＶの化合物に変換できる（例えば、Greene et al., "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Inc.参照）。例えば、Ｐがトリエチルシリルである式ＸＶの化合物は、式ＸＩＶの化合物をクロロトリエチルシランにより、ヒューニッヒ塩基などの塩基の存在下で処理することにより調製できる。式ＸＩＶの化合物においてＢ1がヒドロキシルである場合、Ｂ1はまた対応するシリルエーテルに変換し得る。式ＸＶＩまたはＸＶＩＩ（Ｙは、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである）のハロヒドリンは、式ＸＶの化合物から、Ｙ2などのハロゲン化剤で処理することによって調製できる。例えば、ヨウ素を使用してアセトニトリルなどの極性溶媒中で求電子付加することにより、Ｙがヨウ素である式ＸＶＩおよびＸＶＩＩの位置異性体ハロヒドリンを立体選択的に得ることができる。別法として、Ｎ−ハロスクシンイミドも同じ変換に使用できる。式ＸＶＩＩＩの化合物は、式ＸＶＩおよび／またはＸＶＩＩの化合物から、アセトニトリル／水などの極性／水性溶媒系中のトリエチルアミンまたはヒューニッヒ塩基などの塩基の存在下でのエポキシド閉環により調製できる。所望により、化合物ＸＩＶは式ＸＶＩおよび／またはＸＶＩＩ（ＰはＨである）の化合物に直接変換でき、次いでこれはエポキシドＸＶＩＩＩ（ＰはＨである）に変換できる。式ＸＶＩＩＩの化合物は、アルコール溶媒中の無機アジド塩またはテトラ−アルキルアンモニウムアジドの存在下でアジド置換することにより式ＶＩおよびＸＩＸのアジド−アルコールに変換できる。Ｐがシリル保護基である場合、ＯＧが、メシレート、トシレート、ノシレート、トリフレートなどの脱離基である式ＸＸおよび／またはＸＸＩの化合物は、式ＶＩおよび／またはＸＩＸの化合物から当技術分野で知られた方法によって調製できる。例えば、ＶＩおよび／またはＸＩＸを塩化メタンスルホニルおよびトリエチルアミンでジクロロメタンなどの適切な有機溶媒中で処理することにより、ＯＧがメシレートである式ＸＸおよびＸＸＩの化合物を得る。式ＶＩＩＩの化合物は、式ＸＸおよび／またはＸＸＩの化合物から、当技術分野で知られた方法でアジド基を還元することにより調製できる。例えば、化合物ＶＩＩＩは、式ＸＸおよび／またはＸＸＩの化合物から、アセトニトリルなどの極性溶媒中、オルガノホスフィン（例えば、トリメチルホスフィン）などの還元剤との反応で調製できる。別法として、ＰがＨの場合、式ＶＩＩＩの化合物は、式ＶＩおよび／またはＸＩＸの化合物から、アセトニトリルなどの極性溶媒中、オルガノホスフィン（例えば、トリフェニルホスフィン）などの還元剤でアジド基を還元することにより直接調製できる。式ＩＸの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物から当技術分野で知られた方法によって調製できる（例えば、米国特許第６，８００，６５３号；およびRegueiro-Ren et al., Organic Letters, 2001, 3, 2693-2696参照）。Ｈ−Ｋ−Ａ−が２−ヒドロキシエチルである式ＩＸの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物から、例えば、過剰の２−ブロモエタノールおよび炭酸カリウムなどの塩基を使用してアジリジン環をアルキル化することによって調製できる。Ｐがトリアルキルシリルである場合、式Ｘの化合物は、式ＩＸの化合物から当技術分野で知られた方法を使用してシリルエーテル保護基を除去することによって調製できる（例えば、Greene et al., "Protective groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, Inc.参照）。例えば、Ｐがトリエチルシリルである場合、式ＩＸの化合物をトリフルオロ酢酸によりジクロロメタン中で処理することによって脱保護すると、式Ｘの化合物が得られる。
【化２９】
【０１２８】
次に本発明を以下の例示的実施例を参照してさらに説明する。
実施例
（実施例１）
葉酸複合エポチロン類似体
【０１２９】
上記の詳細な説明で記載した通り、葉酸の類似体および誘導体はVlahovに記載されている。腫瘍細胞を標的とする葉酸受容体を対象とする複合エポチロンおよびエポチロン類似体化合物の研究開発において、いくつかの化合物が葉酸にコンジュゲートした。例えば、化合物ＡＡおよび化合物ＢＢは葉酸とのコンジュゲーションの候補として考えられる。
【化３０】
化合物ＡＡ 化合物ＢＢ
【０１３０】
化合物ＡＡは第二相臨床試験で活性を有しており、化合物ＡＡの６つの葉酸コンジュゲート（化合物ＡＡ．ＩからＡＡ．ＶＩ；図１参照）を調製し、細胞培養における化学安定性、ＦＲ結合およびＦＲ媒介活性について場合によって試験した。
【０１３１】
化合物ＡＡのこれらの葉酸コンジュゲートのＦＲへの結合を、集密に増殖したＫＢ腫瘍細胞で発現したＦＲからの放射性標識葉酸の置換を測定するアッセイで決定した。化合物ＡＡ．ＩおよびＡＡ．ＩＩの葉酸コンジュゲートのＦＲへの結合は許容されると思われる［相対的親和力（ＲＡ）＞０．２５；葉酸のＲＡ＝１．０］。しかし、驚いたことに、図１で示した化合物ＡＡの６つのコンジュゲートのいずれも、3Ｈ−チミジン取込みを測定する抗増殖アッセイでＫＢ腫瘍細胞に対して評価できる細胞毒性を示さなかった（データ示さず）。
【０１３２】
化合物ＡＡのコンジュゲートは腫瘍細胞に対して満足のいかない細胞毒性を示したので、化合物ＢＢ（化合物ＢＢ．ＩからＢＢ．ＩＩＩ）の３つのコンジュゲートを使用して試験を実施した。化合物ＢＢもエポチロンＦとして知られ、化合物ＡＡの類似体であり、ここで、２１−アミノ基は２１−ヒドロキシル基で置き換わっている。化合物ＢＢ．ＩＩ（図２）は高濃度で細胞毒性を示したが、過剰の葉酸を使用する競合試験で活性は弱まらなかった。したがって、観察された細胞毒性は化合物ＢＢ．ＩＩの非特異的放出によるものであった。
【０１３３】
その他のエポチロン類似体、例えば、アジリジニルエポチロンが当技術分野で知られており（例えば、米国特許第６，３９９、６３８号；Regueiro-Ren, A, et al. (2001) Org. Letters. 3:2693-96参照）、強力な抗腫瘍細胞毒性を示す。例えば、一対のタキサン抵抗性癌細胞系（ＨＣＴＶＭ４６およびＡ２７９０Ｔａｘ）に対するいくつかのエポチロン類似体の相対的細胞毒性効果を比較したＭＴＳアッセイを実施した（表１参照）。ＨＣＴＶＭ４６は、感受性ＨＣＴ１１６親系から誘導したヒト結腸癌腫細胞系であり、１７０ｋＤ ｐ−糖タンパク質薬物流出輸送体の過剰発現のため、タキサンに対して抵抗性である。Ａ２７８０Ｔａｘは、親Ａ２７８０系から誘導されたヒト卵巣癌腫細胞系であり、パクリタキセルの結合能を損なうチューブリンアミノ酸配列の変異の結果としてパクリタキセルに対して抵抗性である。
【０１３４】
表１に示されている通り、種々のアジリジニルエポチロン類似体（化合物ＣＣ〜ＥＥ）は、その他の知られている抗腫瘍剤、例えば、パクリタキセル、化合物ＡＡおよびエポチロンＢと比較して、ＨＣＴ１１６結腸癌腫細胞系およびＡ２７８０卵巣癌腫細胞系の両方に対して強力な抗腫瘍活性を示す。
表１．１２，１３−アジリジニルエポチロンのインビトロ活性
1 ４つの別個の実験から計算した平均IC50±SD
2 R/S比 = HCT116 IC50/HCT116VM46IC50
3 R/S比 = A2780 IC50/A2780Tax IC50
【０１３５】
アジリジニルエポチロン化合物ＣＣ〜ＥＥの抗腫瘍活性にも拘らず、葉酸へのコンジュゲーションに使用できるこれらの分子の唯一のヒドロキシル基は、Ｃ3およびＣ7炭素原子に見い出されるものである。その結果、いくつかのエポチロン化合物および類似体を調査したが、葉酸へのコンジュゲーションに容易に使用でき、活性エポチロン部分の特異的放出を介して腫瘍細胞において活性を表す化合物を発見することが依然として求められている。
【０１３６】
次式を有するアジリジニルエポチロン化合物Ｇが発見された。
【化３１】
化合物Ｇ
【０１３７】
化合物Ｇ（実施例２および３参照）は、驚くほど容易に葉酸にコンジュゲートして、葉酸に比較して、葉酸受容体に０．７７の相対的親和力を有する化合物Ｊ（実施例２参照）を形成する。
【０１３８】
意外にも、アジリジン側鎖上の極性ヒドロキシル基は、アジリジンエポチロン類似体の抗腫瘍活性に悪影響を与えなかった。葉酸からの放出に際して抗腫瘍効果を媒介するのはアジリジンエポチロン類似体、例えば、化合物Ｇなので、これは重要である。化合物Ｇおよび３つのその他の高度に強力なエポチロン類似体（イクサベピロン、化合物ＡＡおよび化合物ＢＢ）の効力を上記のコロニー形成アッセイで評価した。クローン原性ＫＢ癌細胞の９０％を死滅させるのに必要な濃度（ＩＣ90）を、１７時間の薬物曝露時間後に決定した。図３で示した通り、化合物Ｇは４．３ｎｍのＩＣ90を示し、化合物ＣＣ、化合物ＡＡおよびイクサベピロンよりそれぞれ約２、４および６倍強力だった。
【０１３９】
化合物Ｊを形成する化合物Ｇのコンジュゲーションは化合物Ｇの抗腫瘍活性に影響しなかった。化合物Ｊは腫瘍細胞に対してインビボで実質的な細胞毒性活性を示した。ＫＢインビホＦＲα（＋）腫瘍モデルでは、化合物Ｊは、最大許容用量（ＭＴＤ）および最小限の毒性を示す２つのより低い用量レベルの両方で活性を示した（図４参照）。対照的に、イクサベピロンはそのＭＴＤ（５μｍｏｌ／ｋｇ）でのみ活性だった。ＭＴＤで比較すると、化合物Ｊはイクサベピロンよりも優れた抗腫瘍効果を発揮した（図４）。
【化３２】
化合物Ｊ
【０１４０】
対照的に、ＦＲα（−）Ｍ１０９親腫瘍モデルでは、化合物Ｊは、そのＭＴＤ（２．４μｍｏｌ／ｋｇ）を含めて、試験した全ての用量レベルで活性が不十分であり、一方、イクサベピロンは５μｍｏｌ／ｋｇのそのＭＴＤで活性だった（図５）。これらの結果は、ＦＲα（−）Ｍ１０９がイクサベピロンに対して感受性であり、化合物Ｊの不活性は、主としてこの腫瘍によるＦＲα発現が存在しないことの結果であると思われる。これらの結果は、化合物Ｊの抗腫瘍活性がＦＲα受容体を介して媒介され得ることの証拠も提供する。
【０１４１】
化合物ＪのＦＲα媒介薬物デリバリー機序のさらなる証拠は、化合物Ｊの用量の２０倍過剰で葉酸類似体を同時投与することで受容体結合について化合物Ｊと実質的に競合でき、化合物Ｊの抗腫瘍効果からＦＲα（＋）９８Ｍ１０９腫瘍を保護できたという観察によって提供される。（図６）。化合物Ｇおよびコンジュゲート（化合物Ｊ）はインビトロおよびインビボの両方で驚くべき抗腫瘍効果を有し、化合物Ｊの抗腫瘍活性はＦＲα（＋）媒介効果によるものであり得るので、アジリジニルエポチロン類似体化合物Ｇ（実施例２および３参照）のコンジュゲーションによる化合物Ｊの形成も本明細書で記載される。（実施例２参照）。
（実施例２）
化合物Ｊの調製
【化３３】
（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｒ）−１−カルボキシ−２−（２−（２−（（２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチル）ジスルファニル）エチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸
Ａ．［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−７，１１−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン
【化３４】
【０１４２】
エポチロンＡ（５．０ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）、イミダゾール（３．４０ｇ、４９．９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（２８．５ｍＬ、１６３．６ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１００ｍＬ）撹拌溶液にＮ2雰囲気下で塩化トリエチルシリル（１５．０ｍＬ、８９．４ｍｍｏｌ）を加えた。添加完了後、反応溶液を５５℃（油浴温度）で１２時間加温して、シングルスポット（ｔｌｃ）の所望の生成物を得た。
【０１４３】
上記の反応をさらに２回繰り返した。合わせた溶液のＤＭＦを高真空下で蒸留した。泡沫状の残渣をカラムクロマトグラフィーで精製すると（シリカゲル、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ、２３０〜４００メッシュ、６００ｇ；５：９５、１０：９０および１５：８５のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、１９．４ｇ（８８．６％）の化合物Ａが白色の固形物として得られた。
【０１４４】
ＨＰＬＣ：ＥＳ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ＦｌｕｏｒｏＳｅｐ ＲＰ Ｐｈｅｎｙｌ、４．６×２５０ｍｍ、定組成、３０分間、１００％Ｂ、（Ｂ＝９０％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．２％Ｈ3ＰＯ4）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２５４、ｔ＝２３．１５分間。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）７２２（Ｍ＋Ｈ）。
Ｂ．［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｓ＊，１４Ｓ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−ブロモ−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化３５】
【０１４５】
［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−７，１１−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン（５．０ｇ、６．９２ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（１４０ｍＬ）撹拌溶液に、−２０℃でＮ2雰囲気下においてＭｇＢｒ2−Ｅｔ2Ｏ（３×２．１３ｇ、２４．７８ｍｍｏｌ）を２時間ごとに３回、内部温度を−５℃未満に維持しながら加えた。約７時間後、反応混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3（２×）で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、真空蒸発させて、泡状物を得た。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製すると（シリカゲル、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ、２３０〜４００メッシュ、１８０ｇ；５：９５、７．５：９２．５および１２．５：８７．５ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、化合物Ｂ（２．５ｇ、収率４５％）が白色の泡状物として、回収された出発物質（０．９ｇ、１８％）と共に得られた。
【０１４６】
ＨＰＬＣ：ＥＳ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ＦｌｕｏｒｏＳｅｐ ＲＰ Ｐｈｅｎｙｌ、４．６×２５０ｍｍ、定組成、３０分間、１００％Ｂ、（Ｂ＝９０％ＭｅＯＨ／Ｈ2０＋０．２％Ｈ3ＰＯ4）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２５４、ｔ＝１４．３７分間。（純度１００％）ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）：８０２（Ｍ＋Ｈ）。
Ｃ．［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｓ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化３６】
【０１４７】
１．２ＬのＤＭＦ中の［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｓ＊，１４Ｓ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−ブロモ−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン（９．９ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）の溶液に、アジ化ナトリウム（８．０１ｇ、１２３．３ｍｍｏｌ）および１８−クラウン−６（３．２６ｇ、１２．３ｍｍｏｌ）をＲＴでＮ2雰囲気下において加えた。透明な溶液をｒｔで７日間機械的に撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で希釈し、Ｈ2Ｏ（６×３Ｌ）で洗浄した。有機層を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、次いで蒸発させて、粗生成物９．２ｇを得た。カラムクロマトグラフィー（シリカゲル４５０ｇ、５〜１５％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により６．７ｇ（収率７１％）の化合物Ｃが白色の泡状物として得られた。
【０１４８】
ＨＰＬＣ：ＹＭＣ ＯＤＳ−Ａ Ｓ５、４．６×５０ｍｍ、定組成、３０分間、１００％Ｂ。（Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．２％のＨ3ＰＯ4）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２５４ｎｍ、ｔ＝２．００分間。ＬＣ／ＭＳ（ＥＳ＋）７６５（Ｍ＋Ｈ）。
Ｄ．［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｒ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−１３−［（４−ニトロベンゾイル）オキシ］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化３７】
【０１４９】
［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｓ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン（７．０ｇ、９．１５ｍｍｏｌ）、４−ニトロ安息香酸（３．８２ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（６．０ｇ、２２．９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）に溶解した。ジエチルアゾジカルボキシレート（トルエン中の４０％溶液９．０ｍＬ、２２．９ｍｍｏｌ）を５分間かけて加えた。反応混合物をＲＴで４時間維持し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製すると（５％の酢酸エチル／ヘキサンから１５％の酢酸エチル／ヘキサンまでの段階勾配）、ニトロ安息香酸エステルが白色の泡状物（７．３ｇ、８７％）として単離された。
【０１５０】
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、定組成、１５分間、１００％Ｂ。（Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２２０ｎｍ。保持時間＝８．９分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝８８６．７
Ｅ．［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｒ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化３８】
【０１５１】
ニトロ安息香酸エステル化合物Ｄ（７．３ｇ、７．９８ｍｍｏｌ）を酢酸エチル（３５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。メタノール中のアンモニア（メタノール中の２Ｍ溶液３５０ｍＬ）を加え、反応混合物をＲＴで４時間撹拌し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製すると（１０％の酢酸エチル／ヘキサンから３０％の酢酸エチル／ヘキサンまでの段階勾配）、［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｒ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンがガラス状の白色の固形物（５．９７ｇ、９８％）として単離された。
【０１５２】
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、定組成、５分間、１００％Ｂ。（Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２２０ｎｍ。保持時間＝２．２５分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝７６５．６６
Ｆ．［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−７，１１−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化３９】
【０１５３】
［４Ｓ−［４Ｒ＊，７Ｓ＊，８Ｒ＊，９Ｒ＊，１３Ｒ＊，１４Ｒ＊，１６Ｒ＊（Ｅ）］］−１４−アジド−１３−ヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４，８−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−１−オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン（５．９７ｇ、７．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．３４ｍＬ、３１．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８５ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。メタンスルホニルクロリド（１．８ｍＬ、２３．４ｍｍｏｌ）を５分間にわたって滴下した。１０分後、反応混合物を氷浴から取り出し、ＲＴで撹拌した。３時間後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ3（３００ｍＬ）に溶解し、ジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮し、さらに精製することなく次の工程で用いた。
【０１５４】
粗製メタンスルホネートエステルをＴＨＦ／Ｈ2Ｏ（１２：１、１３０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（２．２ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）およびトリメチルホスフィン（１６ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液１６ｍＬ）を加え、反応混合物をＲＴで撹拌した。３時間後、反応を４５℃で７時間加熱し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製すると（２％のメタノール／クロロホルムから５％のメタノール／クロロホルムまでの段階勾配）、化合物Ｆが白色の固形物（２工程で５．０８ｇ、８８％）として単離された。
【０１５５】
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、定組成、５分間、１００％Ｂ。（Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２２０ｎｍ。保持時間＝０．２９８分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝７２１．５８
Ｇ．［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−７，１１−ジヒドロキシ−１７−［２−ヒドロキシエチル］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化４０】
【０１５６】
Ｋ2ＣＯ3（１．４ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）および２−ブロモエタノール（０．５２ｍＬ、７．３ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２０ｍＬ）中の［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−７，１１−ビス［（トリエチルシリル）オキシ］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン（１．０５ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）に加え、８２℃に加熱した。４時間後、追加の２−ブロモエタノール（０．５２ｍＬ、７．３ｍｍｏｌ）およびＫ2ＣＯ3（１．４ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を加えた。５時間後、追加の２−ブロモエタノール（０．２１ｍＬ、２．９２ｍｍｏｌ）を加えた。３時間後、反応混合物を室温に冷却し、セライトで濾過し、アセトニトリル（５×５ｍＬ）、ジクロロメタン（２×５ｍＬ）で洗浄し、濃縮し、さらに精製することなく次の工程で用いた。
【０１５７】
粗製反応生成物をジクロロメタン（４０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、トリフルオロ酢酸（８．０ｍＬ）を加えた。１時間後、反応混合物を濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ3（２００ｍＬ）に溶解し、ジクロロメタン（３×１００ｍＬ）で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製すると（１０％のメタノール／ジクロロメタン）、［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−７，１１−ジヒドロキシ−１７−［２−ヒドロキシエチル］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン（化合物Ｇ）が透明なフィルム（２工程で０．６２ｇ、７９％）として単離された。
【０１５８】
ＬＣ−ＭＳ：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８、４．６×５０ｍｍ、勾配、０から１００％Ｂで４分間。（Ａ＝１０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ；Ｂ＝９０％のＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．１％のＴＦＡ）、流速４．０ｍＬ／分、ＵＶ２２０ｎｍ。保持時間＝２．１２分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝５３７．５２。
Ｈ．（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−メルカプトエチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸の調製
【化４１】
【０１５９】
（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−メルカプトエチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸を固相ペプチド合成により５工程で、Ｈ−Ｃｙｓ（４−メトキシトリチル）−２−クロロトリチル−樹脂から出発して合成した。表２は合成で使用した試薬の量を示す。
表２
【０１６０】
以下の手順を使用した。
カップリングステップ
【０１６１】
ペプチド合成容器中の樹脂に、アミノ酸溶液、ＤＩＰＥＡおよびＰｙＢＯＰを加えた。混合物を１時間バブリングし、ＤＭＦおよびイソプロピルアルコールで３回洗浄した。各アミノ酸カップリングの前に、ＤＭＦ中の２０％のピペリジンで２回（１０分間）処理することによりＦＭＯＣ脱保護を実施した。各アミノ酸カップリング工程についてこの順序を繰り返した。
Ｎ10−ＴＦＡ−保護プテロイン酸の合成
【０１６２】
加熱マントルを備えた２２Ｌの機械的に撹拌された丸底フラスコ中の０．１Ｍトリス塩基溶液（水１０Ｌ中トリス塩基１２１．１ｇ）１０Ｌに葉酸２００ｇ（０．４５３ｍｏｌ）を加えた。混合物を撹拌して葉酸を溶解し、次いで塩化亜鉛５００ｍｇ（３．６７ｍｍｏｌ）を加えた。カルボキシペプチダーゼＧ（Ｓｉｇｍａ製１３×２０ユニットバイアル）を加え、１Ｎ ＨＣｌでｐＨを７．３に調整し、反応の間維持した。混合物を光から保護し、３０℃で８〜１０日間加熱した（自動滴定装置を使用してｐＨを一定に保持することによって変換時間を４〜５日間短縮した）。８０％の変換が達成されるまで（さらなる変換が望ましいが、最適化されていない）、分析用ＨＰＬＣで反応をモニターした。６Ｎ ＨＣｌを使用して溶液をｐＨ＝３．０に調整することにより、生成物を反応混合物から沈殿させた。スラリーを遠心分離用バイアルに写し、４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清をデカントした。次いで湿潤固形物を以下の通りに直接精製した（湿潤固形物は保存のために冷凍することができ、またはまず凍結乾燥することができ；しかし、湿潤固形物は溶解まで冷凍器中で保存するのがより有効である）。水７００ｍＬ中の粗製プテロイン酸４０ｇに１．０Ｍ ＮａＯＨをｐＨ＝１１．５になるまで加えた。混合物を濾過し（Ｗｈａｔｍａｎタイプ１）、次いでクロマトグラフィー処理した（カラム：１０×１２０ｃｍ；固定相：８ｋｇ ＤＥＡＥセルロース；移動相：１．０Ｍ ＮａＣｌ／０．０１Ｍ ＮａＯＨ、ｐＨ＝１１．５；流速：１７ｍＬ／分）。１リットルの黄色の画分を集め、ＨＰＬＣで分析した。純粋なプテロイン酸を含有する画分を６Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝３に調整してプテロイン酸を沈殿させた。混合物を３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清をデカントし、水で洗浄した（３回）。固形物を少なくとも７２時間凍結乾燥した。次の反応における残留水の影響はわからない。
【０１６３】
プテロイン酸をＰ2Ｏ5で高真空下において２４時間さらに乾燥した（この追加の乾燥工程なしの保護工程で同様の結果が得られたことに留意されたい）。次に、機械的撹拌機およびアルゴン入口を備えた５Ｌの丸底フラスコにプテロイン酸１００ｇ（０．３２ｍｏｌ）を加え、高真空下で終夜保存した。アルゴン、次いで無水トリフルオロ酢酸３５００ｇ（２３１６ｍＬ）を加えた。ゴムストッパーまたはアルゴン入口アダプターでフラスコを密封し、次いで激しく撹拌した。フラスコを光から保護し、室温でアルゴン雰囲気下において７日間撹拌した（水およびＤＭＳＯでそれぞれ２０倍に希釈したアリコートのＨＰＬＣで反応をモニターした）。混合物をロータリーエバポレーターで蒸発乾燥し、水中の３％トリフルオロ酢酸２．５Ｌで処理した。混合物を室温で終夜撹拌して、無水物副生成物を加水分解した。ロータリーエバポレーションにより乾燥固形物が得られた。固形物を水２Ｌに懸濁し、次いで２５０ｍＬの遠心分離ボトル中、３０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。上清を除去し、固形物を水で洗浄し、遠心分離した（４回）。固形物を３日間凍結乾燥し、茶色遮光瓶(amber bottle)に移し、高真空下でＰ2Ｏ5の存在下において２日間乾燥した（純度≧９５％；元素分析で評価した残留ＴＦＡ）。
切断工程：
【０１６４】
保護された中間体は樹脂から、９２．５％（５０ｍＬ）のＴＦＡ、２．５％（１．３４ｍＬ）のＨ2Ｏ、２．５％（１．３４ｍＬ）のトリイソプロピルシランおよび２．５％（１．３４ｍＬ）のエタンジチオールから調製した切断試薬を使用して放出された。切断試薬を反応容器に加えた（２５ｍＬ）。アルゴンを混合物に１．５時間バブリングさせた。液体を容器から排出させ、樹脂を残りの試薬（３×８ｍＬ）で洗浄した。揮発性物質をロータリーエバポレーションで濃縮して容量を１０ｍＬにした。ジエチルエーテル（３５．０ｍＬ）を加えて沈殿させた。固形物を遠心分離で集め、乾燥して、切断生成物１．２５ｇを得た。
脱保護工程：
【０１６５】
プテロイン酸部分のＮ10−トリフルオロアセチル保護基を塩基性状態下で除去した。水１０ｍＬ中の保護された中間体２５０ｍｇで出発し、４：１のＨ2Ｏ：水酸化アンモニウム（１〜２ｍＬ）を使用してｐＨを９．３に調整し、１時間維持した。１時間後、１Ｎ ＨＣｌ（約１ｍＬ）でｐＨを５に調整し、生成物を分取ＨＰＬＣで精製して１２５ｍｇの化合物Ｈを得た。
ＨＰＬＣ精製条件：
【０１６６】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＮｏｖａＰａｋ Ｃ18 ３００×１９ｍｍ
【０１６７】
溶媒Ａ：バッファー １０ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ＝５
【０１６８】
溶媒Ｂ：アセトニトリル
【０１６９】
溶離：４０分間１５ｍＬ／分で１％Ｂから２０％Ｂ
【０１７０】
合わせた反応からの総収量：６２５ｍｇ
Ｉ．２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エチル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネートの調製
１．２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノールの調製
【化４２】
【０１７１】
０℃に冷却したメトキシカルボニルスルフェニルクロリド（１０ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液にメルカプトエタノール（７．６ｍＬ、１１０ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を０℃で３０分間撹拌させた。この時点で、２−メルカプトピリジン（１２．２ｇ、１１０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１６０ｍＬ）溶液を加えた。溶液を０℃で１時間反応させ、次いでＲＴまでさらに１時間加温させた。固体生成物が溶液から出てくるのが認められた。ＴＬＣ（１：１のＰｅｔエーテル／ＥｔＯＡｃ）は、重大な生成物が形成したことを示した。反応混合物を濃縮して容量を１２５ｍＬにした。混合物をブフナー漏斗で濾過した。濾過ケーキをジクロロメタンで洗浄し、次いで終夜真空乾燥して、２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エタノール（２３．６ｇ）をＨＣｌ塩として得た。
【０１７２】
ＴＬＣ：Ｒf＝０．４５
【０１７３】
プレート−ＥＭＤ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０ Ｆ254、５×１０ｃｍ、２５０Ｍ
２．ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネートの調製
【化４３】
【０１７４】
ジホスゲン（２．２８ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）の１５ｍＬの無水ジクロロメタン溶液をアルゴン下、丸底フラスコ中で撹拌し、氷／塩浴で冷却した。６５ｍＬの無水ジクロロメタン中の２−（ピリジン−２−イルジスルファニル）エタノール（５．０１ｇ、２２．４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．２５ｇ、２２．２ｍｍｏｌ）の混合物を入れた添加用漏斗を丸底フラスコの上に置いた。混合物を２０分間滴下した。反応混合物をＲＴまで加温させ、さらに１時間撹拌した。反応混合物をＴＬＣ分析すると、出発物質が消費され、「線状（ｓｔｒｅａｋｉｎｇ）」の極性がより低いクロロギ酸生成物が形成したことが示された、ＴＬＣ（６：４のＥｔＯＡｃ：ヘキサン）：出発物質のＲF０．４；クロロギ酸生成物のＲF：０．８。
【０１７５】
反応混合物を丸底フラスコ中、アルゴン下で撹拌し、氷／塩浴で冷却した。１０ｍＬの無水ジクロロメタン中、３．０２ｇ、２２．４ｍｍｏｌのＨＯＢｔおよび２．２３ｇ、２２．０ｍｍｏｌのトリエチルアミンの混合物を、丸底フラスコに取り付けた滴下用漏斗に加えた。反応温度を２℃に維持した丸底フラスコに混合物をゆっくりと加えた。反応混合物をＲＴまで加温させ、終夜撹拌した。次いで反応混合物から大気圧でジクロロメタンおよそ２７ｍＬを蒸留した。次いで混合物をＲＴまで冷却させ、２時間撹拌させた。固形物を濾集し、濾過ケーキをジクロロメタン２０ｍＬで洗浄した。次いで固形物を真空下、４０oＣにおいてロータリーエバポレーターで乾燥して、オフホワイト色の固形物７．８１ｇを得た。この生成物を1Ｈ−ＮＭＲで分析し、所望の生成物であると決定した。
３．２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エチル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネートの調製
【化４４】
【０１７６】
［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−７，１１−ジヒドロキシ−１７−［２−ヒドロキシエチル］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの無水ジクロロメタン溶液に０℃でＤＭＡＰ（１．２当量）およびベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−イル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネート（１．０当量）を順次加えた。反応混合物を０℃、アルゴン下で撹拌し、ＴＬＣで１０分ごとにモニターした。化合物Ｇが全て消費されるまで、追加のＤＭＡＰ（１．２当量）および化合物Ｉ（２）（１．０当量）を必要に応じて加えた。反応をＭｅＯＨ（１ｍＬ）で０℃においてクエンチし、溶媒を真空除去し、残渣をクロマトグラフィーで精製して（シリカゲル、ＤＣＭ中２．５〜５％のＭｅＯＨ）、標題化合物をベージュ色の固形物として得た。化合物の量および回収率を下記の表３に挙げる。２．９５ｇの化合物Ｇからの総収量は２．８０ｇ（６７．９％）の化合物Ｉだった。
表３
* 各クロマトグラフィー精製により、いくらかの不純な（純度８０〜９０％）生成物と共に純粋な生成物が典型的には得られた。不純な生成物は、クロマトグラフィー精製のための次のバッチからの粗生成物と合わせた。バッチ＃２および４では、クロマトグラフィー精製を２回行った。
Ｊ．（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｒ）−１−カルボキシ−２−（２−（２−（（２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチル）ジスルファニル）エチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸の調製
【化４５】
【０１７７】
１５ｍＬのＨ2Ｏ（使用前にアルゴンを１０分間バブリングした）を５０ｍＬサイズの遠心分離管中の（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−カルボキシ−２−メルカプトエチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸（４９８ｍｇ、０．５３４ｍｍｏｌ）に加えた。この懸濁液に、アルゴンをバブリングしながら、得られた溶液のｐＨが６．９に達するまで飽和ＮａＨＣＯ3溶液（使用前にアルゴンを１０分間バブリングした）を滴下した。ＴＨＦ中の２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エチル２−（２−（ピリジン−２−イル）ジスルファニル）エチルカーボネート（４００ｍｇ、０．５３４ｍｍｏｌ）を素早く加え、得られた均質な溶液をアルゴン下で３０分間撹拌した。反応の進行を分析用ＨＰＬＣで１５分たった時点でチェックした。生成物のピークは分析用ＨＰＬＣ条件下、約６．４分であった。混合物をリン酸バッファー約１５ｍＬで希釈し、ＴＨＦを真空除去した。曇った溶液を遠心分離し、濾過した。黄色の濾液を２つの部分に分け、分取ＨＰＬＣで精製した。純粋な画分（純度＞９８％）をプールし、凍結乾燥した。残りの画分（純度＜９８％）を集め、クロマトグラフィー処理３〜６回ごとに、標題化合物７００ｍｇを白色の粉末（カールフィッシャー分析および元素分析で判定して１１．８重量％の水および８．７重量％のナトリウムおよびリン酸ナトリウム塩を含有）として得た。
分取ＨＰＬＣパラメータ：
【０１７８】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｎｏｖａ−Ｐａｋ ＨＲ Ｃ１８ ６μｍ ３０×３００ｍＭ
【０１７９】
移動相Ａ：７．０ｍＭリン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ＝７．２
【０１８０】
移動相Ｂ：アセトニトリル
【０１８１】
方法：３０分間、流速：４０ｍＬ／分で１０％Ｂ〜５０％Ｂ
分析用ＨＰＬＣパラメータ：
【０１８２】
カラム：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８ ３．５μｍ ４．６×７５ｍＭ
【０１８３】
移動相Ａ：１０ｍＭ酢酸トリエチルアンモニウム（ＴＥＡＯＡｃ）バッファー、ｐＨ＝７．５
【０１８４】
移動相Ｂ：アセトニトリル
【０１８５】
方法：１０分間、流速：１．０ｍＬ／分で２０％Ｂ〜４０％Ｂ
厳密な質量ｍ／ｚ（Ｃ67Ｈ92Ｎ16Ｏ22Ｓ3）：
【０１８６】
計算値：１５７０．５８９０７（Ｍ＋２Ｈ）、７８５．２９４５４（Ｍ＋２Ｈ）2+、５２３．８６５６３（Ｍ＋３Ｈ）3+、３９３．１５１１８（Ｍ＋４Ｈ）4+
【０１８７】
実測値：７８５．２９１００（４．５ｐｐｍ）で（Ｍ＋２Ｈ）2+、５２３．８６４３１（２．５ｐｐｍ）で（Ｍ＋３Ｈ）3+、３９３．１４９９６（３．１ｐｐｍ）で、（Ｍ＋４Ｈ）4+
（実施例３）
化合物Ｊの代替の調製
【化４６】
（Ｓ）−２−（４−（（２−アミノ−４−オキソ−３，４−ジヒドロプテリジン−６−イル）メチルアミノ）ベンズアミド）−５−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−３−カルボキシ−１−（（Ｒ）−１−カルボキシ−２−（２−（２−（（２−（（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−５，９−ジオキソ−４−オキサ−１７−アザ−ビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−１７−イル）エトキシ）カルボニルオキシ）エチル）ジスルファニル）エチルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−グアニジノ−１−オキソペンタン−２−イルアミノ）−１−オキソプロパン−２−イルアミノ）−５−オキソペンタン酸
３Ａ．［４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，１０Ｒ，９Ｓ，１３Ｒ，１６Ｓ］−４，８，１３−トリヒドロキシ−１４−ヨード−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［（Ｅ）−１−［２−メチルチアゾール−４−イル］プロプ−１−エン−２−イル］オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化４７】
【０１８８】
エポチロンＣ（５４．３ｇ、１１３．７ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４８０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）に溶解した。溶液を−５℃から−１０℃に冷却した。ヨウ素（１４４．３ｇ、５６８．４ｍｍｏｌ）を反応に加え、反応を少なくとも１５時間維持した。
【０１８９】
反応を１５％亜硫酸水素ナトリウム溶液（９００ｍＬ）でクエンチした。混合物を酢酸エチル（２×１．１Ｌ）で抽出した。有機相を集め、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（６７５ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム溶液（６７５ｍＬ）で連続的に洗浄した。溶媒を減圧蒸発させて粗製化合物Ａを黄色の油状物（８５．６ｇ）として得た。化合物Ａはさらなる精製なしに次の反応に使用した。
【０１９０】
ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２）３ｕｍ、４．６×１５０ｍｍ、定組成、１８分間、３６％Ｂ、１７分間、５６％Ｂ、（移動相Ａ＝ＡＣＮ：水（５：９５）中の０．０１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ、移動相Ｂ＝ＡＣＮ：水（９５：５）中０．０１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２４５、Ｒｔ＝２２．４分間。
３Ｂ．［１Ｒ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｓ］−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［（Ｅ）−１−［２−メチルチアゾール−４−イル］プロプ−１−エン−２−イル］−４，１７−ジオキサビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化４８】
［４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，１０Ｒ，９Ｓ，１３Ｒ，１６Ｓ］−４，８，１３−トリヒドロキシ−１４−ヨード−５，５，７，９−テトラメチル−１６−［（Ｅ）−１−［２−メチルチアゾール−４−イル］プロプ−１−エン−２−イル］オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン（８５．６ｇ）をアセトニトリル（６７０ｍＬ）および水（１３０ｍＬ）に溶解した。トリエチルアミン（１３５ｍＬ、９６８．５ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。反応を５０℃から６０℃に少なくとも８時間加熱した。
【０１９１】
ＲＴに冷却後、溶液を減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（１．２Ｌ）で希釈し、飽和塩化ナトリウム溶液（３×５００ｍＬ）で洗浄した。溶媒を減圧蒸発させて粗生成物を黄色の油状物として得た。シリカゲルパッド濾過（シリカゲル７００ｇ、ヘプタン中６６％ＥｔＯＡｃ、２×４Ｌおよび１×３Ｌ）で精製して、ＨＰＬＣ ＡＰ ８０で化合物Ｂを泡状物（５０．３ｇ、収率９０％）として得た。
ＨＰＬＣ：Ｐｈｅｎｏｍｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２）３ｕｍ、４．６×１５０ｍｍ、定組成、１８分間、３６％Ｂ、１７分間、５６％Ｂ、（移動相Ａ＝ＡＣＮ：水（５：９５）中０．０１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ、移動相Ｂ＝ＡＣＮ：水（９５：５）中０．０１Ｍ ＮＨ４ＯＡｃ）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２４５、Ｒｔ＝１５．０分間。
３Ｃ／３Ｄ．（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１６Ｓ）−１３−アジド−４，８，１４−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンおよび（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｓ）−１４−アジド−４，８，１３−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの調製
【化４９】
【０１９２】
ｅｐｉ−エポチロン−Ａ(epi-Epothilone-A)（１４．３５ｇ、２９．０７ｍｍｏｌ）のエタノール（２４０ｍＬ）および水（４８ｍＬ）撹拌溶液にアジ化ナトリウム（１１．４５ｇ、１７４．４１ｍｍｏｌ）および塩化アンモニウム（３．１４ｇ、５８．１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を６０℃で１７から２０時間撹拌した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで減圧下において５０℃未満で蒸発させた。残渣を酢酸エチル（２８７ｍＬ）および水（５０ｍＬ）の混合物に溶解した。相を分離し、底部の水相を酢酸エチル（１１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を２５％塩化ナトリウム水溶液（ブライン）で洗浄した。溶媒を減圧蒸発させ、残渣を酢酸エチル／ｎ−ヘプタン（２：１）混合物で溶離するシリカゲルのパッドに通した。溶媒を減圧蒸発させると、アジド−アルコール、（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１６Ｓ）−１３−アジド−４，８，１４−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンと（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｓ）−１４−アジド−４，８，１３−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンの位置異性体混合物が約６：１の比率で（１２．８ｇ、８２％）白色の泡状物として得られた。
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２）カラム：３μｍ、４．６×５０ｍｍ。勾配：１５分間、０％Ｂから１００％Ｂ、１０分間、次いで１００％Ｂを５分間。移動相：Ａ＝ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ５：９５中０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ；Ｂ＝ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ９５：５中０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ。流速：３．０ｍＬ／分。波長：ＵＶ２５０ｎｍ。保持時間＝５．５２分間。ＭＳ（ＥＳＩ）（Ｍ＋Ｈ）+＝５３７．６９
【０１９３】
この反応は、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、２−プロパノール、ジメチルホルムアミド、メチルスルホキシドおよびＮ−メチル−ピロリジノンのような他の溶媒中でも生じる。
【０１９４】
アジ化ナトリウム／塩化アンモニウムの代わりにテトラブチルアンモニウムアジド試薬を使用することもできる。
３Ｅ．（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−４−オキサ−１７−アザビシクロ（１４．１．０）ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化５０】
【０１９５】
（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｒ，１４Ｒ，１６Ｓ）−１３−アジド−４，８，１４−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオンおよび（４Ｓ，７Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１６Ｓ）−１４−アジド−４，８，１３−トリヒドロキシ−５，５，７，９−テトラメチル−１６−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）オキサシクロヘキサデカン−２，６−ジオン混合物（１２．８ｇ、２３．８５ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（９０ｍＬ）撹拌溶液にトリフェニルホスフィン（９．４８ｇ、３５．７７ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で加えた。透明な溶液を２０〜４０℃で１９〜４０時間撹拌した。反応混合物を０〜５℃に３〜４時間冷却し、生成物を濾過した。ケーキをヘプタン（６４ｍＬ）で洗浄し、４０℃で減圧下において１５〜１８時間乾燥すると、（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−４−オキサ−１７−アザビシクロ（１４．１．０）ヘプタデカン−５，９−ジオンが白色の固形物（５．４１ｇ、４６％）として得られた。
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２）カラム：３μｍ、４．６×５０ｍＭ。勾配：１５分間、０％Ｂから１００％Ｂ、１０分間、次いで１００％Ｂを５分間。移動相：Ａ＝ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ５：９５中０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ；Ｂ＝ＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ９５：５中０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ。流速：３．０ｍＬ／分。波長：ＵＶ２５０ｎｍ。保持時間＝４．４３分間。ＭＳ（ＥＳＩ）（Ｍ＋Ｈ）+＝４９３．６８
【０１９６】
この反応は、トリシクロヘキシルホスフィン、トリメチルホスフィン、トリブチルホスフィンおよびトリ（４−メトキシフェニル）−ホスフィンおよび別の溶媒テトラヒドロフランのような他のホスフィンでも生じる。
３Ｇ．［１Ｓ−［１Ｒ＊，３Ｒ＊（Ｅ），７Ｒ＊，１０Ｓ＊，１１Ｒ＊，１２Ｒ＊，１６Ｓ＊］］−７，１１−ジヒドロキシ−１７−［２−ヒドロキシエチル］−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−［１−メチル−２−（２−メチル−４−チアゾリル）エテニル］−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンの調製
【化５１】
【０１９７】
Ｅｔ3Ｎ（４．９５ｍＬ、３５．５２ｍｍｏｌ）および２−ブロモエタノール（３．０２ｍＬ、４２．６２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３５ｍＬ）中の（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオン（３．５０ｇ、７．１０ｍｍｏｌ）に加え、７２．５℃に加熱した。２０時間後、反応混合物を室温に冷却し、回転真空蒸留で濃縮乾固した。粗製物を酢酸エチル（５０ｍＬ）に溶解し、脱イオン水（３５ｍＬ）と混合した。混合物を酢酸エチル（３×３５ｍＬ）で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮し、アセトニトリル（３５ｍＬ）中で結晶化し、アセトニトリル（２×５ｍＬ）で洗浄し、真空オーブン中４５．５℃で終夜乾燥すると、（１Ｓ，３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１１Ｓ，１２Ｓ，１６Ｒ）−７，１１−ジヒドロキシ−１７−（２−ヒドロキシエチル）−８，８，１０，１２−テトラメチル−３−（（Ｅ）−１−（２−メチルチアゾール−４−イル）プロプ−１−エン−２−イル）−４−オキサ−１７−アザビシクロ［１４．１．０］ヘプタデカン−５，９−ジオンが白色の結晶粉末（２．６０ｇ、ＨＰＬＣ ＡＰ ９７．１、収率６８．２％）として単離した。
【０１９８】
ＬＣ−ＭＳ：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃ８、３μｍ、４．６×１５０ｍｍ、勾配、１０から５０％Ｂで１０分間、２０分で停止。（Ａ＝５％ＭｅＣＮ／Ｈ2Ｏ＋０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ；Ｂ＝９５％ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ＋０．０１Ｍ ＮＨ4ＯＡｃ）、流速１．０ｍＬ／分、ＵＶ２５４ｎｍ。保持時間＝９．４３分間。ＭＳ（ＥＳＩ）Ｍ＋Ｈ＝５３７．２１。
【０１９９】
当業者は、この実施例３で調製した化合物３Ｇは実施例２で調製した化合物Ｇと同一であり、したがって化合物３Ｇを使用して、化合物Ｈ、ＩおよびＪを調製することができ、その調製方法および化合物は実施例２に記載されていることを理解するであろう。
【図１−１】
【図１−２】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｘ：
【化１】
Ｘ
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11 Ｒ12は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｋが−Ｏ−であり；
ＡがＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1が−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5が、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6が水素またはメチルであり；
Ｒ13が適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ13が、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
式Ｘ’：
【化２】
Ｘ’
を有する請求項１、２もしくは３に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
式Ｘｂ：
【化３】
Ｘｂ
を有する、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
式Ｘｂ’：
【化４】
Ｘｂ’
を有する、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ6が水素である、請求項１、２、５または６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ6がメチルである、請求項１、２、５または６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
患者の癌を治療する医薬品の調製における、請求項１、２、３、４、５、６、７または８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
請求項１、２、３、４、５、６、７または８のいずれか一項に記載の化合物を解離可能なリンカーにコンジュゲートしてコンジュゲート化合物を形成することを含む、標的薬物デリバリーのための医薬組成物を作製する方法。
【請求項１１】
コンジュゲート化合物が葉酸結合部分を含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１】
式Ｘ：
【化１】
Ｘ
［式中、
Ｋは、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ7−であり；
Ａは−（ＣＲ8Ｒ9）−（ＣＨ2）m−Ｚ−であり、ここで、Ｚは、−（ＣＨＲ10）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＯＣ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ11）Ｃ（＝Ｏ）−、−ＳＯ2−または−Ｎ（Ｒ11）ＳＯ2−であり；
Ｂ1はヒドロキシルもしくはシアノであり、Ｒ1は水素であり、またはＢ1とＲ1は一緒になって二重結合を形成し；
Ｒ2、Ｒ3およびＲ5は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アリールもしくは置換アリールであり；またはＲ2とＲ3は、それらが結合している炭素と一緒になって適宜置換されたシクロアルキルを形成していてもよく；
Ｒ4は、水素、アルキル、アルケニル、置換アルキル、置換アルケニル、アリールまたは置換アリールであり；
Ｒ6は、水素、アルキルまたは置換アルキルであり；
Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11 Ｒ12は、独立して、水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロシクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
Ｒ12は、Ｈ、アルキル、置換アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ13は、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールであり；
ｍは０から６である］
を有する化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｋが−Ｏ−であり；
ＡがＣ2~4アルキレンであり；
Ｂ1が−ＯＨであり；
Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5が、独立して、水素または低級アルキルであり；
Ｒ6が水素またはメチルであり；
Ｒ13が適宜置換された５員または６員ヘテロアリールである、請求項１に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ13が、適宜置換されたチアゾリル、ピリジルまたはオキサゾリルである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
式Ｘ’：
【化２】
Ｘ’
を有する請求項１、２もしくは３に記載の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項５】
式Ｘｂ：
【化３】
Ｘｂ
を有する、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
式Ｘｂ’：
【化４】
Ｘｂ’
を有する、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ6が水素である、請求項１、２、５または６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ6がメチルである、請求項１、２、５または６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
患者の癌を治療する医薬品の調製における、請求項１、２、３、４、５、６、７または８のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項１０】
請求項１、２、３、４、５、６、７または８のいずれか一項に記載の化合物を解離可能なリンカーにコンジュゲートしてコンジュゲート化合物を形成することを含む、標的薬物デリバリーのための医薬組成物を作製する方法。
【請求項１１】
コンジュゲート化合物が葉酸結合部分を含む、請求項１０に記載の方法。
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【公表番号】特表２００９−５３８３４９（Ｐ２００９−５３８３４９Ａ）
【公表日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５１２３１７（Ｐ２００９−５１２３１７）
【出願日】平成１９年５月２５日（２００７．５．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６９７３６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４０２９７
【国際公開日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【出願人】（３９１０１５７０８）ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー (494)
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ−ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１１月５日（２００９．１１．５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年５月２５日（２００７．５．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６９７３６
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１４０２９７
【国際公開日】平成１９年１２月６日（２００７．１２．６）
【出願人】（３９１０１５７０８）ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー (494)
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ−ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
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