アセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせた特定のα７ニコチン酸受容体を用いた認知障害の治療
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を患者に投与することを含む、認知機能を改善する方法が、関連する組成物と共に記載される。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
ニコチン性アセチルコリン受容体（ｎＡＣｈＲ）は、アセチルコリンによって活性化されるイオンチャンネルのファミリーを形成する。機能的受容体は５つのサブユニットを含有し、数多くの受容体サブタイプがある。研究により中枢性ニコチン性アセチルコリン受容体が学習及び記憶に関与することが示されている。α７サブタイプのニコチン性アセチルコリン受容体は海馬及び大脳皮質に分布している。
【０００２】
WO 03/055878には、α７ ｎＡＣｈＲの種々のアゴニストが認知機能の改善に有用と言われていることが記載されている。WO 03/055878は、α７ ｎＡＣｈＲの特定のアゴニストが知覚（perception）、集中（concentration）、学習又は記憶の改善、特に、例えば、軽度認知機能障害、加齢に伴う学習及び記憶の障害、加齢に伴う記憶喪失、アルツハイマー病（ＡＤ）、統合失調症及び特定の他の認知障害のような状態／疾患／症候群において生じるもののような認知機能障害後の知覚、集中、学習又は記憶の改善に有用であることを示唆している。これらの化合物の中で、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドが記載される。
【０００３】
一部の人は、アルツハイマー病患者において観察される認知低下及び機能低下が中枢神経系におけるコリン作動性欠損に起因すると考えている。ＡＤを治療するために使用されている少なくとも４つの薬物（タクリン、ドネペジル（塩酸ドネペジル；１−ベンジル−４−［（５，６−ジメトキシ−１−インダノン）−２−イル］メチルピペリジン一塩酸塩）、リバスチグミン（（Ｓ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−３−［１−（ジメチルアミノ）エチル］−フェニルカルバメート）及びガランタミン（臭化水素酸ガランタミン;（４ａＳ，６Ｒ，８ａＳ）−４ａ，５，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−３−メトキシ−１１−メチル−６Ｈ−ベンゾフロ［３ａ，３，２−ｅｆ］［２］ベンズアゼピン−６−オール臭化水素酸塩））は、ＣＮＳにおいてアセチルコリンを増加させるアセチルコリンエステラーゼ阻害剤として働くように見える。
【発明の概要】
【０００４】
驚いたことに、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドが、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ドネペジル又はリバスチグミン）を用いて治療されているアルツハイマー病患者において認知機能を改善しうることが見出されている。この方法は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の投与から生じる認知機能の１以上の側面における増進から既に利益を得ている患者の認知機能を改善しうる。従って、認知機能の１以上の側面においてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤から既に利益を得ている患者が、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びその製薬上許容しうる塩の投与から、認知機能の１以上の側面において、さらに利益を得ることができる。
【０００５】
驚いたことに、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドが無症候性投与量（即ち、記憶を改善しない投与量）でアセチルコリンエステラーゼ阻害剤（これも無症候性投与量で投与される）と組み合わせて投与される場合、記憶が改善されうることも見出されている。従って、患者は、非常に少なく、副作用を低減するか又は副作用を回避する投与量でそれぞれが投与される薬物の組み合わせから、利益（例えば、記憶の改善又は認知機能の改善）を体験することができる。更に、薬物の組み合わせは、より広い範囲の患者のために及び／又はより長い治療期間にわたり、利益を提供しうる。例えば、特定のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、数ヶ月間の治療の後に有効性の減少を示しうるのに対し、この組み合わせはより長期間の有効性を提供しうる。
【０００６】
患者は、以下の１以上において利益を得ることができる：処理速度、注意力／ビジランス、作業記憶、視覚学習、言語学習、視覚学習、推論／問題解決、実行機能、及び社会的認知。重要なことに、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びその製薬上許容しうる塩は、認知機能を改善するために、そのような既に治療された患者において少ない投与量で、例えば以下の１日経口投与量（又はそれ以下）で使用されうる：３ｍｇ、２．７０ｍｇ、２．５０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２ｍｇ、１．７５ｍｇ、１．５０ｍｇ、１．２５ｍｇ、１ｍｇ、０．７、０．５、０．３ｍｇ又はわずか０．１ｍｇ。従って、例えば、それは０．０５〜１．５ｍｇの１日投与量で、好ましくは１ｍｇ／日又は０．３ｍｇ／日で投与されうる。無症候性投与量を投与する場合において、認知機能の改善のための他の薬剤の非存在下で投与される場合、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びその製薬上許容しうる塩は、０．５ｍｇ未満、０．３ｍｇ未満、０．１ｍｇ未満、０．０５ｍｇ未満、０．０３ｍｇ未満又は０．０１ｍｇ未満の１日経口投与量で使用されうる。無症候性レベルでの使用のために、認知機能を改善するための他の薬剤の非存在下で投与される場合、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びその製薬上許容しうる塩は、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満又は０．１ｎＭ未満で使用されうる。
【０００７】
ドネペジル（donepizil）について、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩と共に使用される１日投与量は、１０ｍｇ、５ｍｇ、４．５ｍｇ、４ｍｇ、３．５ｍｇ、３ｍｇ、２．５ｍｇ、２ｍｇ、１ｍｇ又は０．５ｍｇでありうる。１日投与量は、５から０．５ｍｇの間（例えば、４．５〜１．０ｍｇ／日、４．５〜２．０ｍｇ／日、４．０〜２．０又は２．５ｍｇ／日）でありうる。リバスチグミン（rivistigmine）について、併用のための１日投与量は、１１、１０、９、８、７、６又は５ｍｇでありうる。ガランタミンについて、併用のための１日投与量は、２０、１５、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６又は５ｍｇでありうる。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤について、記憶又は認知機能の改善における有効性のために、それらは少なくとも６５％の赤血球アセチルコリンエステラーゼ阻害を達成するように投与されなければならないことが理解される。本明細書中に記載される方法において、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、わずか５５％（５０、４５、４０、３５又は３０％阻害）を達成する、より少ない投与量で投与されうる。
【０００８】
本明細書中に、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を患者に投与することを含む、認知機能を改善する方法が記載される。種々の場合において：患者はアルツハイマー病又はプレアルツハイマー病と診断されており、患者は軽度から中等度のアルツハイマー病と診断されており、患者は中等度から重度のアルツハイマー病と診断されており、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はタクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択され、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択され、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル及びリバスチグミンから選択され、患者は（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を投与されるより先に一定期間アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与されており、先の投与は少なくとも１ヶ月間であり、先の投与は少なくとも３ヶ月間であり、そして先の投与は少なくとも６ヶ月間である。特定の場合において：該方法は以下の１以上を改善する：学習、遅延記憶（delayed memory）、注意力、作業記憶、視覚学習、処理速度、ビジランス、言語学習、視覚運動（visual motor）機能、社会的認知、長期記憶又は実行機能。
【０００９】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を無症候性投与量（アセチルコリンエステラーゼ（acetylcholinestesterase）阻害剤の非存在下で投与された場合、記憶を改善しない投与量）で、そしてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤も無症候性投与量（（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩の非存在下で投与された場合、記憶を改善しない投与量）で、患者に投与することを含む、認知機能を改善する方法も記載される。種々の場合において：（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩は、１．０ｍｇ／日；０．５ｍｇ／日；０．３ｍｇ／日；又は０．１ｍｇ／日で経口投与される。種々の場合において：アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジルであり、且つ５ｍｇ／日；４．５ｍｇ／日；４．０ｍｇ／日；２．５ｍｇ／日；１．５ｍｇ／日又はそれ以下；１．０ｍｇ／日で経口投与され；そしてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、定常状態で１０〜６５％の赤血球アセチルコリンエステラーゼ阻害を達成する投与量で投与される。
【００１０】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含有する医薬組成物も記載される。種々の場合において：アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はタクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル及びリバスチグミンから選択される；そしてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジルである。
【００１１】
１．０ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤及び製薬上許容しうる担体を含有する１日単位投与量医薬組成物も記載される。種々の場合において、１日単位投与量医薬組成物は、０．５（０．３、又は０．１）ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する。種々の場合において、１日単位投与量医薬組成物は、５、４、３、２、１、又は０．５ｍｇ以下のドネペジルを含有する。
【００１２】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する第１の単位投与量医薬組成物、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含有する第２の単位投与量医薬組成物を含むパッケージを含む、包装された医薬品も記載される。
【００１３】
別の態様において、患者は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて、式Ｉ:
【００１４】
【化１】
【００１５】
（式中、
Ｒ１は１−アザビシクロ［２．２．２］オクト−３−イルを表し、
Ｒ２は水素又はＣ１−Ｃ６−アルキルを表し、
Ｒ３は水素、ハロゲン又はＣ１−Ｃ６−アルキルを表し、
Ａは酸素又は硫黄を表し、そして
Ｚはハロゲン、ホルミル、カルバモイル、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、アミノ、ホルムアミド、アセトアミド、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ（alkyoxy）、Ｃ１−Ｃ６−アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノ、ヘテロアリール−カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルスルホニルアミノ、ジ（アリールスルホニル）アミノ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルメチル又はアミノ（ヒドロキシイミノ）メチルを表す）のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、又はその塩、その溶媒和物若しくはその塩の溶媒和物を用いて治療されうる。
【００１６】
別の態様において、患者は、式Ｉ（式中、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は水素であり、Ａは硫黄であり、そしてＺはハロゲン、ホルミル、カルバモイル、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、アミノ、ホルムアミド、アセトアミド、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ（alkyoxy）、Ｃ１−Ｃ６−アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノ、ヘテロアリール−カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルスルホニルアミノ、ジ（アリールスルホニル）アミノ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルメチル又はアミノ（ヒドロキシイミノ）メチル（具体的にはハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、メチル、エチル、メトキシ、及びエトキシ；より具体的にはハロゲン又はシアノ、なおより具体的にはクロロ又はシアノ）を表す）の化合物を用いて治療される。
【００１７】
本明細書中に、１以上のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を（例えば、以下の１日投与量で：３ ｍｇ、２．７０ｍｇ、２．５０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２ｍｇ、１．７５ｍｇ、１．５０ｍｇ、１．２５ｍｇ、１ｍｇ、０．７ｍｇ、０．５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．１ｍｇ、０．０３ｍｇ又は０．０１ｍｇ）含有する医薬組成物を投与することにより患者を治療する方法が記載される。該治療は、認知機能の１以上の面（facets）（例えば、視覚運動スキル、学習、遅延記憶、注意力、作業記憶、視覚学習、処理速度、ビジランス、言語学習、視覚運動機能、社会的認知、長期記憶、実行機能等）を改善しうる。患者は、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドの投与より先に一定期間、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を用いて治療されていることができる。例えば、患者は、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも６ヶ月間又は少なくとも１年間、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を用いて治療されていることができる。２つの薬剤は、同じ組成物中か又は２つの異なる組成物中で同時に投与されうる。また、これらの薬剤は異なる時間に投与されうる。
【００１８】
本明細書中に、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、タクリン、ドネペジル、リバスチグミン又はガランタミン）並びに製薬上許容しうる担体を含有する医薬組成物も記載される。
【００１９】
「投与量」は、患者に投与される原薬（active pharmaceutical ingredient）（ＡＰＩ）の量である。例えば、１ｍｇとは、各患者に１日あたり１ｍｇのＡＰＩが経口投与されたことを意味する。
【００２０】
「原薬」としては、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩一水和物及び（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩溶媒和物、並びに式Ｉの化合物が挙げられる。
【００２１】
溶媒和物は、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩又は（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドに対して化学量論比が０．１から１０分子の溶媒を表す。溶媒分子としては、水、メタノール、１，４−ジオキサン、エタノール、イソプロパノール又はアセトンが挙げられるがこれらに限定されない。場合によっては、水が好ましい溶媒和物である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（p.o.）及びドネペジル（p.o.）の組み合わせの、患者における認知機能試験への影響を示す。
【図２】図２は、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（p.o.）及びドネペジル（p.o.）の、５月齢のオスのウィスターラットにおけるスコポラミン処置（i.p.）後の物体認識タスクにおける識別指数（d2）への影響を示す（平均＋標準誤差）。ビヒクル／スコポラミン条件と比較した場合、ＥＶＰ−６１２４及びドネペジルの併用は、スコポラミン誘発性記憶能力障害を改善した。スコポラミン条件からの差異は、アスタリスクを用いて示される（ボンフェローニｔ検定、＊：Ｐ＜０．０５）。ゼロからの差異は、＃を用いて示される（１サンプルｔ検定、＃＃＃：Ｐ＜０．００１）。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
ＡＤ患者に投与される（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジル又はリバスチグミン
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩の安全性及び有効性を、安定なドネペジル（５又は１０ｍｇ／日）又はリバスチグミン（１日２回投与量として６〜１２ｍｇ／日で投与される（即ち、投与量あたり３又は６ｍｇ））に関して、４８名の軽度から中等度のＡＤ患者（年齢６０〜８０歳）の第１ｂ相試験において評価した。
【００２４】
偽薬又は２つの異なる投与量の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（０．３又は１．０ｍｇ／ｄ）を２８日間、患者に投与した。安全性は、有害事象、ＥＣＧ、及び臨床検査測定値によって評価した。認知作用は、ＣｏｇＳｔａｔｅのコンピュータ化された認知機能試験及びＮＴＢスケールの一部（カテゴリー流暢性（category fluency）、トレイル（Trails）Ａ及びＢ）によって測定した。この分析の結果を図１に示す。
【００２５】
偽薬の患者に対して、治療した患者においてより高頻度で報告された顕著な有害事象は無く、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドは安全であり、良好な耐容性を示すように見えた；重篤な有害事象（ＳＡＥ）は報告されなかった。ドネペジル又はリバスチグミンに加えて（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドにさらされた対象は、認知機能（主に非言語学習、記憶、及び実行機能の領域）の増進を示した。
【００２６】
無症候性投与量での（Ｒ）−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジルは記憶を改善する
【００２７】
以下に記載する研究では、５月齢のオスのウィスターラットにおける物体認識タスクにおいて、ムスカリンアンタゴニストであるスコポラミンによって誘導される短期記憶障害への、α７ニコチン性受容体アゴニスト（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びＡＣｈＥ阻害剤ドネペジルの閾値下投与量の影響を調べた。物体認識タスクは、（物体）情報の記憶への固定の評価を可能にする（Ennaceur and Delacour, 1988; Prickaerts et al., 1997）。このタスクにおいては、ラットに２つの試験（trials）を与える。第一の試験においては、ラットを２つの同一の物体が置かれた活動領域（arena）に入れる。通常、ラット（rate）は２つの物体を一定時間点検するであろう。一定の遅延時間の後、ラットに第二の試験を与える。この試験においては、ラットを、同じ活動領域であるが一方の物体が新規の物体に置き換えられている活動領域に再び置く。第一の試験と同様に、ラットは２つの物体を再び探索する。ラットが２つの物体を探索するのに異なる時間をかけたか否かを決定するために、各物体を探索する時間を記録する。この採点法に基づき、記憶能力を決定することができる。
【００２８】
いくつかの研究は、１時間の遅延時間が第一の試験と第二の試験の間に挿入される場合、ウィスターラットが優れた物体記憶能力を示すことを示している。しかしながら、２４時間の遅延時間が使用される場合、ラットは第二の試験において新規の物体と見慣れた物体とを識別せず、このことはラットが見慣れた物体（即ち、第一の試験及び第二の試験の両方において提示された物体）を記憶しないことを示している。６時間の遅延時間を使用すると、識別能力は１時間の遅延時間の場合の能力と２４時間の遅延時間の場合の能力との間であり、このことはこのタスクにおける遅延時間依存性の忘却を示唆している。
【００２９】
以前の研究は、０．３ｍｇ／ｋｇの（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（p.o.）がムスカリンアンタゴニストであるスコポラミン（０．１ｍｇ／ｋｇ、i.p.）によって誘導される物体記憶障害を完全に減衰させるのに対して、０．０３ｍｇ／ｋｇの投与量は効果がないことを見出した。０．３ｍｇ／ｋｇの投与量のドネペジル（p.o.）がスコポラミン誘導性物体記憶障害を減衰させるのに対して、０．１ｍｇ／ｋｇのドネペジルは効果がないことも見出された。予備的研究においては、驚いたことに、この閾値下投与量のドネペジルと閾値下投与量の（Ｒ）−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドとの併用投与（これらはいずれも、単独で閾値下投与量で与えられた場合、能力に影響しない）が、スコポラミンによって誘導された物体記憶障害を有するラットにおいて記憶能力を増強することが見出された。このことは、認知機能障害に対する両化合物間の相加相乗効果を示唆する。
【００３０】
本研究において、学習試験の３０分前に、ムスカリン性受容体アンタゴニストであるスコポラミンをラットに注射した（０．１ｍｇ／ｋｇ、i.p.投与）。スコポラミンによる処置の後、ラットは学習試験の１時間後には物体の記憶を示さないであろう。閾値下投与量の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（０．０３ｍｇ／ｋｇ、p.o.投与）及びドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ、p.o.投与）の組み合わせがスコポラミン誘導性物体記憶障害を減衰しうるか否かを検討した。全ての薬物を第一の試験の３０分前に与えた。
【００３１】
全ての実験手順は、動物実験のためのマーストリヒト大学の地方倫理委員会よって承認され、政府のガイドラインを満たした。２４匹の５月齢のオスのウィスターラット（Harlan、The Netherlands）を使用した（平均体重：４６５ｇ）。これらの２４匹の動物のうち、２３匹の動物のみを最終的な分析に含めたが、これは１匹のラットが逃げ続けたことに起因した。これらの動物を、空調された部屋（約２０℃）の中で、標準の３型マクロロンケージ内、おが屑の床敷の上に個別に収容した。それらを１２／１２時間の明暗周期（１９時から７時まで点灯）下で維持し、飼料及び水を自由摂取させた。ラットは、該動物を試験するのと同じ部屋に収容した。ラジオ（静かにかけた）で室内に背景雑音を提供した。全ての試験を９時から最長１８時までの間に行なった。
【００３２】
以前のスコポラミンの用量反応試験に基づき、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量が記憶障害を誘導するために最も効果的な投与量であると決定した。スコポラミン臭化水素酸塩は毎日調製し、生理食塩水に溶解させた。試験１の３０分前に、スコポラミンをi.p.投与した（注射量１ｍｌ／ｋｇ）。ＥＶＰ−６１２４はＨ２Ｏに溶解させた。溶液は毎日調製し、０．０３ｍｇ／ｋｇ p.o.の投与量で試験した（注射量２ｍｌ／ｋｇ）。投与は常に、スコポラミンの直後、試験１の３０分前に行なった。ドネペジルは生理食塩水に溶解させた。溶液は毎日調製し、０．１ｍｇ／ｋｇ p.o.の投与量で試験した（注射量２ｍｌ／ｋｇ）。投与は常に、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドの直後、試験１の３０分前に行なった。
【００３３】
ビヒクル及びスコポラミン条件を最初に試験した。続いてドネペジル、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及び両方の組み合わせを試験した（試験日あたり条件ごとにｎ＝８）。全てのラットを各投与量条件により１回処置した。しかしながら、装置から飛び出し続けたことに起因して１匹のラットを試験から除外したため、ｎ＝２３である。実験者は、試験される条件／薬物を知らなかった。
【００３４】
物体認識試験は、他の場所（Ennaceur and Delacour、1988）に記載されたように実施した。装置は、直径８３ｃｍの円形の活動領域から構成された。高さ４０ｃｍの壁の半分は灰色のポリ塩化ビニル製、残りの半分は透明のポリ塩化ビニル製であった。光の強さは装置の様々な部分において等しかった。２つの物体を、灰色の壁から約１０ｃｍ離れた対称の位置に置いた。各物体は三つ同じものが利用可能であった。これらの物体は以下であった：１）上に真ちゅう製のカラーを有する灰色のポリ塩化ビニルの底面（最大直径１８ｃｍ）から構成される円錐（全高１６ｃｍ）、２）水で満たした標準的な１ｌの褐色の透明ガラスボトル（直径１０ｃｍ、高さ２２ｃｍ）、３）２つの穴（直径１．９ｃｍ）を有する重い金属の立方体（１０．０ｘ５．０ｘ７．５ｃｍ）、及び４）先細りの上面を有する重いアルミニウムの立方体（１３．０ｘ８．０ｘ８．０ｃｍ）。ラットはこれらの物体を動かすことはできなかった。赤色の蛍光灯及び電球が、装置の床の上で約２０ルクスの一定の照明を提供した。
【００３５】
試験セッションは２つの試験から構成された。各試験の期間は３分であった。第一の試験（Ｔ１）の間、装置は２つの同一の物体（見本）を含んでいた。ラットは常に、前部の（透明な）区域の中央に、壁に向けて装置内に置いた。第１の探索期間の後、ラットをそのホームケージに戻した。続いて、所定の遅延間隔の後、ラットを第二の試験（Ｔ２）のために装置に戻したが、今度は２つの非類似の物体（見慣れたもの（見本）及び新しいもの）を用いた。Ｔ１及びＴ２の間に各物体を探索するのに費やした時間を、パーソナルコンピューターを用いて手作業で記録した。
【００３６】
探索は以下のように定義した：２ｃｍ以下の距離で物体に鼻を向けること及び／又は鼻で物体に触れること。物体の上に座ることは、探索行動とはみなさなかった。嗅覚的痕跡の存在を排除するために、物体を常に徹底的に洗浄した。物体の全ての組み合わせ及び位置をバランスの取れた様式で使用して、特定の位置又は物体に対する嗜好性に起因する潜在的なバイアスを低減させた。
【００３７】
いくつかの研究は、１時間の遅延時間が第一の試験と第二の試験との間に挿入される場合、ウィスターラットが優れた物体記憶能力を示すことを示している。しかしながら、２４時間の遅延時間が使用される場合、ラットは第二の試験において新規のものと見慣れたものとを識別せず、このことはラットが第一の試験において提示された物体を記憶しないことを示している。６時間の遅延時間を使用すると、識別能力は１時間の遅延時間の場合の能力と２４時間の遅延時間の場合の能力との間であり、このことはこのタスクにおける遅延時間依存性の忘却を示唆している。この研究においては、１時間の間隔を使用する。
【００３８】
２週間、動物に毎日手を触れ、２日間で手順に順応させた（即ち、動物に毎日２回３分間、装置（いかなる物体もない）を探索させた）。次いで、ラットが安定した識別能力（即ち１時間間隔ではよく識別し、２４時間間隔では識別しないこと）を示すまで、試験、並びに第一の試験の３０分前の生理食塩水注射によるi.p.注射及びp.o.注射（それぞれ１．０ｍｌ／ｋｇ及び２．０ｍｌ／ｋｇ）に順応させた。次に、コントロールセッション（ビヒクル及びスコポラミンを試験した）。続いて、薬物（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（０．０３ｍｇ／ｋｇ）及びドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ）の試験を開始した。化合物セッション間に十分なウォッシュアウト期間を置くために、化合物／ビヒクルは常に月曜日、水曜日及び金曜日（又は火曜日及び木曜日）に試験した。
【００３９】
基本的な尺度は、ラットがＴ１及びＴ２の間に物体を探索するのに費やした時間であった。２つの同一の見本を探索するのに費やした時間は、「ａ１」及び「ａ２」によって表される。Ｔ２において見本及び新しい物体を探索するのに費やした時間は、それぞれ「ａ」及び「ｂ」によって表される。以下の変数を計算した：ｅ１＝ａ１＋ａ２、ｅ２＝ａ＋ｂ、及びｄ２＝（ｂ−ａ）／ｅ２（表１を参照のこと）。ｅ１及びｅ２は、それぞれＴ１及びＴ２中の両方の物体の総探索時間の尺度である。ｄ２は、探索活動（ｅ２）に対して補正した識別の相対的尺度である。従って、同様の間隔での同様の処置による実験間では、ｄ２指数に差異はないはずである。本実験においては５つの条件があり、各ラットを各条件に供した：
【００４０】
１）ビヒクル（スコポラミン）、ビヒクル（ドネペジル）＆ビヒクル（（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド）
２）スコポラミン、ビヒクル（ドネペジル）＆ビヒクル（（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド）
３）スコポラミン、ドネペジル＆ビヒクル（（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド）
４）スコポラミン、ビヒクル（ドネペジル）＆（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド
５）スコポラミン、ドネペジル ＆（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド
【００４１】
ｄ２がゼロとは異なるか否かを処置条件ごとに評価するために、１サンプルｔ統計（t-statistics）を行なった。しかしながら、分散なしでのｄ２の値と値ゼロとの比較は、認識を分析するための最も適切な方法ではないかもしれない（タイプＩエラーをおかす危険性の増加）。従って、効果を被験者内（反復測定）ＡＮＯＶＡによっても評価した。条件間で有意差がある場合に備えて、ボンフェローニの補正を伴う事後解析を行なった。
【００４２】
【表１】
【００４３】
Ｔ１の３０分前のＥＶＰ−６１２４及びドネペジル処置の結果を表２にまとめる。Ｔ１における探索のレベルにおいて、処置条件間で差異は見出されなかった（ｅ１：Ｆ（４、８８）＝１．１３８、n.s.）。Ｔ２においても、Ｔ２における探索のレベルにおいて、処置条件間で差異は無かった（ｅ２：Ｆ（４、８８）＝０．８８８、n.s.）。
【００４４】
【表２】
【００４５】
１サンプルｔ検定により、併用条件及びビヒクル条件のｄ２値がゼロとは異なることが示された（表２Ｂを参照のこと）。これは、スコポラミン、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジルを別々に投与した条件（差異を示さなかった）とは対照的である。（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジル処置の相対的識別指数ｄ２への影響を図１に図示する。群間で比較した場合、ｄ２指数について差異が見出された（Ｆ（４、８８）＝８．１８１、Ｐ＜０．００１）。ｄ２は、スコポラミン条件、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド条件及びドネペジル条件よりも、併用条件及びビヒクル条件において、より高かった（ボンフェローニｔ検定；図２を参照のこと）。
【００４６】
スコポラミン投与（i.p.）後の、併用された閾値下投与量の薬物（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（p.o.で与えた）及びドネペジル（p.o.）の認知機能増進効果の評価のために、１ｈの遅延間隔を使用した。対照のビヒクル条件において、ラットがそのような間隔の後に見慣れた物体を記憶していることが見出された。これは、スコポラミン（０．１ｍｇ／ｋｇ）条件（見慣れた物体の記憶はもはや見出されなかった）とは対照的である。本研究において、薬物試験に使用するスコポラミンの投与量は、動物の探索活動に影響しなかった。
【００４７】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドもドネペジルも、探索行動を変化させなかった。相対的識別指数ｄ２は、探索活動における変化（これらは本研究においては観察されなかったが）を補正する。更にこれは、ｗｉｔｈｉｎ分析（即ちゼロとの比較）で物体認識へのわずかな影響を検出できるため、信頼できる尺度である。ドネペジル条件のｄ２、並びに（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド条件のｄ２は、ゼロと異ならなかった。同様に、ｂｅｔｗｅｅｎ分析（即ちスコポラミン単独で処置した動物との比較）は、閾値下投与量のＥＶＰ−６１２４（０．０３ｍｇ／ｋｇ）及びドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ）が、別々に与えられた場合には、動物の記憶を改善しないことを示した。これは、併用条件（一緒に与えた閾値下投与量の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジルがスコポラミンによって引き起こされる物体記憶障害を完全に改善した）とは対照的である。
【００４８】
参考文献
Boess, F.G., Hendrix, M., van der Staay, F.J., Erb, C., Schreiber, R., van Staveren, W., de Vente, J., Prickaerts, J., Blokland, A., Koenig, G., 2004. Inhibition of phosphodiesterase 2 increases neuronal cGMP, synaptic plasticity and memory performance. Neuropharmacology 47, 1081-1092.
Blokland, A., Prickaerts, J., Honig, W., De Vente, J., 1998. State-dependent impairment in object recognition after hippocampal NOS inhibition. NeuroReport 9, 4205-4208.
Ennaceur, A., Delacour, J., 1988. A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data. Behav. Brain Res. 31, 47-59.
Ennaceur, A., Meliani, K., 1992. Effects of physostigmine and scopolamine on rats' performances in object-recognition and radial-maze tests. Psychopharmacology 109, 321-330.
Ennaceur, A., Cavoy, A., Costa, J. C., Delacour, J. 1989. A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. II: Effects of piracetam and pramiracetam. Behav. Brain Res. 33, 197-207.
De Bruin, N.M.W.J., Prickaerts, J., Akkerman, S., Lange, J.H.M., Andriambeloson, E., De Haan, M., Wijnen, J., Van Drimmelen, M., Hissink, E., Heijnk, L. Kruse, C.G. (In Press) SLV330, a cannabinoid CB1 receptor antagonist, ameliorates deficits in the T-maze, object recognition and social recognition tasks in rodents. Neurobiol. Learn. Mem.
Prickaerts, J., Steinbusch, H.W.M., Smits, J.F.M., De Vente, J., 1997. Possible role of nitric oxide-cyclic GMP pathway in object recognition memory: Effects of 7-nitroindazole and zaprinast. Eur. J. Pharmacol. 337, 125-136.
Prickaerts, J., Sik, A., van Staveren, W.C., Koopmans, G., Steinbusch, H.W., van der Staay, F.J., de Vente, J., Blokland, A., 2004. Phosphodiesterase type 5 inhibition improves early memory consolidation of object information. Neurochem Int. 45, 915-928.
Prickaerts, J., Sik, A., van der Staay, F.J., de Vente, J., Blokland, A., 2005. Dissociable effects of acetylcholinesterase inhibitors and phosphodiesterase type 5 inhibitors on object recognition memory: acquisition versus consolidation. Psychopharmacology 177, 381-390.
【背景技術】
【０００１】
ニコチン性アセチルコリン受容体（ｎＡＣｈＲ）は、アセチルコリンによって活性化されるイオンチャンネルのファミリーを形成する。機能的受容体は５つのサブユニットを含有し、数多くの受容体サブタイプがある。研究により中枢性ニコチン性アセチルコリン受容体が学習及び記憶に関与することが示されている。α７サブタイプのニコチン性アセチルコリン受容体は海馬及び大脳皮質に分布している。
【０００２】
WO 03/055878には、α７ ｎＡＣｈＲの種々のアゴニストが認知機能の改善に有用と言われていることが記載されている。WO 03/055878は、α７ ｎＡＣｈＲの特定のアゴニストが知覚（perception）、集中（concentration）、学習又は記憶の改善、特に、例えば、軽度認知機能障害、加齢に伴う学習及び記憶の障害、加齢に伴う記憶喪失、アルツハイマー病（ＡＤ）、統合失調症及び特定の他の認知障害のような状態／疾患／症候群において生じるもののような認知機能障害後の知覚、集中、学習又は記憶の改善に有用であることを示唆している。これらの化合物の中で、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドが記載される。
【０００３】
一部の人は、アルツハイマー病患者において観察される認知低下及び機能低下が中枢神経系におけるコリン作動性欠損に起因すると考えている。ＡＤを治療するために使用されている少なくとも４つの薬物（タクリン、ドネペジル（塩酸ドネペジル；１−ベンジル−４−［（５，６−ジメトキシ−１−インダノン）−２−イル］メチルピペリジン一塩酸塩）、リバスチグミン（（Ｓ）−Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−３−［１−（ジメチルアミノ）エチル］−フェニルカルバメート）及びガランタミン（臭化水素酸ガランタミン;（４ａＳ，６Ｒ，８ａＳ）−４ａ，５，９，１０，１１，１２−ヘキサヒドロ−３−メトキシ−１１−メチル−６Ｈ−ベンゾフロ［３ａ，３，２−ｅｆ］［２］ベンズアゼピン−６−オール臭化水素酸塩））は、ＣＮＳにおいてアセチルコリンを増加させるアセチルコリンエステラーゼ阻害剤として働くように見える。
【発明の概要】
【０００４】
驚いたことに、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドが、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、ドネペジル又はリバスチグミン）を用いて治療されているアルツハイマー病患者において認知機能を改善しうることが見出されている。この方法は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤の投与から生じる認知機能の１以上の側面における増進から既に利益を得ている患者の認知機能を改善しうる。従って、認知機能の１以上の側面においてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤から既に利益を得ている患者が、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びその製薬上許容しうる塩の投与から、認知機能の１以上の側面において、さらに利益を得ることができる。
【０００５】
驚いたことに、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドが無症候性投与量（即ち、記憶を改善しない投与量）でアセチルコリンエステラーゼ阻害剤（これも無症候性投与量で投与される）と組み合わせて投与される場合、記憶が改善されうることも見出されている。従って、患者は、非常に少なく、副作用を低減するか又は副作用を回避する投与量でそれぞれが投与される薬物の組み合わせから、利益（例えば、記憶の改善又は認知機能の改善）を体験することができる。更に、薬物の組み合わせは、より広い範囲の患者のために及び／又はより長い治療期間にわたり、利益を提供しうる。例えば、特定のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、数ヶ月間の治療の後に有効性の減少を示しうるのに対し、この組み合わせはより長期間の有効性を提供しうる。
【０００６】
患者は、以下の１以上において利益を得ることができる：処理速度、注意力／ビジランス、作業記憶、視覚学習、言語学習、視覚学習、推論／問題解決、実行機能、及び社会的認知。重要なことに、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びその製薬上許容しうる塩は、認知機能を改善するために、そのような既に治療された患者において少ない投与量で、例えば以下の１日経口投与量（又はそれ以下）で使用されうる：３ｍｇ、２．７０ｍｇ、２．５０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２ｍｇ、１．７５ｍｇ、１．５０ｍｇ、１．２５ｍｇ、１ｍｇ、０．７、０．５、０．３ｍｇ又はわずか０．１ｍｇ。従って、例えば、それは０．０５〜１．５ｍｇの１日投与量で、好ましくは１ｍｇ／日又は０．３ｍｇ／日で投与されうる。無症候性投与量を投与する場合において、認知機能の改善のための他の薬剤の非存在下で投与される場合、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びその製薬上許容しうる塩は、０．５ｍｇ未満、０．３ｍｇ未満、０．１ｍｇ未満、０．０５ｍｇ未満、０．０３ｍｇ未満又は０．０１ｍｇ未満の１日経口投与量で使用されうる。無症候性レベルでの使用のために、認知機能を改善するための他の薬剤の非存在下で投与される場合、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びその製薬上許容しうる塩は、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満又は０．１ｎＭ未満で使用されうる。
【０００７】
ドネペジル（donepizil）について、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩と共に使用される１日投与量は、１０ｍｇ、５ｍｇ、４．５ｍｇ、４ｍｇ、３．５ｍｇ、３ｍｇ、２．５ｍｇ、２ｍｇ、１ｍｇ又は０．５ｍｇでありうる。１日投与量は、５から０．５ｍｇの間（例えば、４．５〜１．０ｍｇ／日、４．５〜２．０ｍｇ／日、４．０〜２．０又は２．５ｍｇ／日）でありうる。リバスチグミン（rivistigmine）について、併用のための１日投与量は、１１、１０、９、８、７、６又は５ｍｇでありうる。ガランタミンについて、併用のための１日投与量は、２０、１５、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６又は５ｍｇでありうる。アセチルコリンエステラーゼ阻害剤について、記憶又は認知機能の改善における有効性のために、それらは少なくとも６５％の赤血球アセチルコリンエステラーゼ阻害を達成するように投与されなければならないことが理解される。本明細書中に記載される方法において、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、わずか５５％（５０、４５、４０、３５又は３０％阻害）を達成する、より少ない投与量で投与されうる。
【０００８】
本明細書中に、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を患者に投与することを含む、認知機能を改善する方法が記載される。種々の場合において：患者はアルツハイマー病又はプレアルツハイマー病と診断されており、患者は軽度から中等度のアルツハイマー病と診断されており、患者は中等度から重度のアルツハイマー病と診断されており、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はタクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択され、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択され、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル及びリバスチグミンから選択され、患者は（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を投与されるより先に一定期間アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与されており、先の投与は少なくとも１ヶ月間であり、先の投与は少なくとも３ヶ月間であり、そして先の投与は少なくとも６ヶ月間である。特定の場合において：該方法は以下の１以上を改善する：学習、遅延記憶（delayed memory）、注意力、作業記憶、視覚学習、処理速度、ビジランス、言語学習、視覚運動（visual motor）機能、社会的認知、長期記憶又は実行機能。
【０００９】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を無症候性投与量（アセチルコリンエステラーゼ（acetylcholinestesterase）阻害剤の非存在下で投与された場合、記憶を改善しない投与量）で、そしてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤も無症候性投与量（（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩の非存在下で投与された場合、記憶を改善しない投与量）で、患者に投与することを含む、認知機能を改善する方法も記載される。種々の場合において：（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩は、１．０ｍｇ／日；０．５ｍｇ／日；０．３ｍｇ／日；又は０．１ｍｇ／日で経口投与される。種々の場合において：アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジルであり、且つ５ｍｇ／日；４．５ｍｇ／日；４．０ｍｇ／日；２．５ｍｇ／日；１．５ｍｇ／日又はそれ以下；１．０ｍｇ／日で経口投与され；そしてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤は、定常状態で１０〜６５％の赤血球アセチルコリンエステラーゼ阻害を達成する投与量で投与される。
【００１０】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含有する医薬組成物も記載される。種々の場合において：アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はタクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジル及びリバスチグミンから選択される；そしてアセチルコリンエステラーゼ阻害剤はドネペジルである。
【００１１】
１．０ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤及び製薬上許容しうる担体を含有する１日単位投与量医薬組成物も記載される。種々の場合において、１日単位投与量医薬組成物は、０．５（０．３、又は０．１）ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する。種々の場合において、１日単位投与量医薬組成物は、５、４、３、２、１、又は０．５ｍｇ以下のドネペジルを含有する。
【００１２】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する第１の単位投与量医薬組成物、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含有する第２の単位投与量医薬組成物を含むパッケージを含む、包装された医薬品も記載される。
【００１３】
別の態様において、患者は、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて、式Ｉ:
【００１４】
【化１】
【００１５】
（式中、
Ｒ１は１−アザビシクロ［２．２．２］オクト−３−イルを表し、
Ｒ２は水素又はＣ１−Ｃ６−アルキルを表し、
Ｒ３は水素、ハロゲン又はＣ１−Ｃ６−アルキルを表し、
Ａは酸素又は硫黄を表し、そして
Ｚはハロゲン、ホルミル、カルバモイル、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、アミノ、ホルムアミド、アセトアミド、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ（alkyoxy）、Ｃ１−Ｃ６−アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノ、ヘテロアリール−カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルスルホニルアミノ、ジ（アリールスルホニル）アミノ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルメチル又はアミノ（ヒドロキシイミノ）メチルを表す）のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤、又はその塩、その溶媒和物若しくはその塩の溶媒和物を用いて治療されうる。
【００１６】
別の態様において、患者は、式Ｉ（式中、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は水素であり、Ａは硫黄であり、そしてＺはハロゲン、ホルミル、カルバモイル、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、アミノ、ホルムアミド、アセトアミド、Ｃ１−Ｃ６−アルキル、Ｃ１−Ｃ６−アルコキシ（alkyoxy）、Ｃ１−Ｃ６−アルキルチオ、Ｃ１−Ｃ６−アルキルアミノ、ヘテロアリール−カルボニルアミノ、アリールカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ４−アルキルスルホニルアミノ、ジ（アリールスルホニル）アミノ、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルカルボニルメチル又はアミノ（ヒドロキシイミノ）メチル（具体的にはハロゲン、シアノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、メチル、エチル、メトキシ、及びエトキシ；より具体的にはハロゲン又はシアノ、なおより具体的にはクロロ又はシアノ）を表す）の化合物を用いて治療される。
【００１７】
本明細書中に、１以上のアセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わせて（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を（例えば、以下の１日投与量で：３ ｍｇ、２．７０ｍｇ、２．５０ｍｇ、２．２５ｍｇ、２ｍｇ、１．７５ｍｇ、１．５０ｍｇ、１．２５ｍｇ、１ｍｇ、０．７ｍｇ、０．５ｍｇ、０．３ｍｇ、０．１ｍｇ、０．０３ｍｇ又は０．０１ｍｇ）含有する医薬組成物を投与することにより患者を治療する方法が記載される。該治療は、認知機能の１以上の面（facets）（例えば、視覚運動スキル、学習、遅延記憶、注意力、作業記憶、視覚学習、処理速度、ビジランス、言語学習、視覚運動機能、社会的認知、長期記憶、実行機能等）を改善しうる。患者は、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドの投与より先に一定期間、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を用いて治療されていることができる。例えば、患者は、少なくとも１週間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも６ヶ月間又は少なくとも１年間、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を用いて治療されていることができる。２つの薬剤は、同じ組成物中か又は２つの異なる組成物中で同時に投与されうる。また、これらの薬剤は異なる時間に投与されうる。
【００１８】
本明細書中に、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤（例えば、タクリン、ドネペジル、リバスチグミン又はガランタミン）並びに製薬上許容しうる担体を含有する医薬組成物も記載される。
【００１９】
「投与量」は、患者に投与される原薬（active pharmaceutical ingredient）（ＡＰＩ）の量である。例えば、１ｍｇとは、各患者に１日あたり１ｍｇのＡＰＩが経口投与されたことを意味する。
【００２０】
「原薬」としては、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩一水和物及び（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩溶媒和物、並びに式Ｉの化合物が挙げられる。
【００２１】
溶媒和物は、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩又は（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドに対して化学量論比が０．１から１０分子の溶媒を表す。溶媒分子としては、水、メタノール、１，４−ジオキサン、エタノール、イソプロパノール又はアセトンが挙げられるがこれらに限定されない。場合によっては、水が好ましい溶媒和物である。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（p.o.）及びドネペジル（p.o.）の組み合わせの、患者における認知機能試験への影響を示す。
【図２】図２は、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（p.o.）及びドネペジル（p.o.）の、５月齢のオスのウィスターラットにおけるスコポラミン処置（i.p.）後の物体認識タスクにおける識別指数（d2）への影響を示す（平均＋標準誤差）。ビヒクル／スコポラミン条件と比較した場合、ＥＶＰ−６１２４及びドネペジルの併用は、スコポラミン誘発性記憶能力障害を改善した。スコポラミン条件からの差異は、アスタリスクを用いて示される（ボンフェローニｔ検定、＊：Ｐ＜０．０５）。ゼロからの差異は、＃を用いて示される（１サンプルｔ検定、＃＃＃：Ｐ＜０．００１）。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
ＡＤ患者に投与される（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジル又はリバスチグミン
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩の安全性及び有効性を、安定なドネペジル（５又は１０ｍｇ／日）又はリバスチグミン（１日２回投与量として６〜１２ｍｇ／日で投与される（即ち、投与量あたり３又は６ｍｇ））に関して、４８名の軽度から中等度のＡＤ患者（年齢６０〜８０歳）の第１ｂ相試験において評価した。
【００２４】
偽薬又は２つの異なる投与量の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（０．３又は１．０ｍｇ／ｄ）を２８日間、患者に投与した。安全性は、有害事象、ＥＣＧ、及び臨床検査測定値によって評価した。認知作用は、ＣｏｇＳｔａｔｅのコンピュータ化された認知機能試験及びＮＴＢスケールの一部（カテゴリー流暢性（category fluency）、トレイル（Trails）Ａ及びＢ）によって測定した。この分析の結果を図１に示す。
【００２５】
偽薬の患者に対して、治療した患者においてより高頻度で報告された顕著な有害事象は無く、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドは安全であり、良好な耐容性を示すように見えた；重篤な有害事象（ＳＡＥ）は報告されなかった。ドネペジル又はリバスチグミンに加えて（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドにさらされた対象は、認知機能（主に非言語学習、記憶、及び実行機能の領域）の増進を示した。
【００２６】
無症候性投与量での（Ｒ）−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジルは記憶を改善する
【００２７】
以下に記載する研究では、５月齢のオスのウィスターラットにおける物体認識タスクにおいて、ムスカリンアンタゴニストであるスコポラミンによって誘導される短期記憶障害への、α７ニコチン性受容体アゴニスト（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びＡＣｈＥ阻害剤ドネペジルの閾値下投与量の影響を調べた。物体認識タスクは、（物体）情報の記憶への固定の評価を可能にする（Ennaceur and Delacour, 1988; Prickaerts et al., 1997）。このタスクにおいては、ラットに２つの試験（trials）を与える。第一の試験においては、ラットを２つの同一の物体が置かれた活動領域（arena）に入れる。通常、ラット（rate）は２つの物体を一定時間点検するであろう。一定の遅延時間の後、ラットに第二の試験を与える。この試験においては、ラットを、同じ活動領域であるが一方の物体が新規の物体に置き換えられている活動領域に再び置く。第一の試験と同様に、ラットは２つの物体を再び探索する。ラットが２つの物体を探索するのに異なる時間をかけたか否かを決定するために、各物体を探索する時間を記録する。この採点法に基づき、記憶能力を決定することができる。
【００２８】
いくつかの研究は、１時間の遅延時間が第一の試験と第二の試験の間に挿入される場合、ウィスターラットが優れた物体記憶能力を示すことを示している。しかしながら、２４時間の遅延時間が使用される場合、ラットは第二の試験において新規の物体と見慣れた物体とを識別せず、このことはラットが見慣れた物体（即ち、第一の試験及び第二の試験の両方において提示された物体）を記憶しないことを示している。６時間の遅延時間を使用すると、識別能力は１時間の遅延時間の場合の能力と２４時間の遅延時間の場合の能力との間であり、このことはこのタスクにおける遅延時間依存性の忘却を示唆している。
【００２９】
以前の研究は、０．３ｍｇ／ｋｇの（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（p.o.）がムスカリンアンタゴニストであるスコポラミン（０．１ｍｇ／ｋｇ、i.p.）によって誘導される物体記憶障害を完全に減衰させるのに対して、０．０３ｍｇ／ｋｇの投与量は効果がないことを見出した。０．３ｍｇ／ｋｇの投与量のドネペジル（p.o.）がスコポラミン誘導性物体記憶障害を減衰させるのに対して、０．１ｍｇ／ｋｇのドネペジルは効果がないことも見出された。予備的研究においては、驚いたことに、この閾値下投与量のドネペジルと閾値下投与量の（Ｒ）−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドとの併用投与（これらはいずれも、単独で閾値下投与量で与えられた場合、能力に影響しない）が、スコポラミンによって誘導された物体記憶障害を有するラットにおいて記憶能力を増強することが見出された。このことは、認知機能障害に対する両化合物間の相加相乗効果を示唆する。
【００３０】
本研究において、学習試験の３０分前に、ムスカリン性受容体アンタゴニストであるスコポラミンをラットに注射した（０．１ｍｇ／ｋｇ、i.p.投与）。スコポラミンによる処置の後、ラットは学習試験の１時間後には物体の記憶を示さないであろう。閾値下投与量の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（０．０３ｍｇ／ｋｇ、p.o.投与）及びドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ、p.o.投与）の組み合わせがスコポラミン誘導性物体記憶障害を減衰しうるか否かを検討した。全ての薬物を第一の試験の３０分前に与えた。
【００３１】
全ての実験手順は、動物実験のためのマーストリヒト大学の地方倫理委員会よって承認され、政府のガイドラインを満たした。２４匹の５月齢のオスのウィスターラット（Harlan、The Netherlands）を使用した（平均体重：４６５ｇ）。これらの２４匹の動物のうち、２３匹の動物のみを最終的な分析に含めたが、これは１匹のラットが逃げ続けたことに起因した。これらの動物を、空調された部屋（約２０℃）の中で、標準の３型マクロロンケージ内、おが屑の床敷の上に個別に収容した。それらを１２／１２時間の明暗周期（１９時から７時まで点灯）下で維持し、飼料及び水を自由摂取させた。ラットは、該動物を試験するのと同じ部屋に収容した。ラジオ（静かにかけた）で室内に背景雑音を提供した。全ての試験を９時から最長１８時までの間に行なった。
【００３２】
以前のスコポラミンの用量反応試験に基づき、０．１ｍｇ／ｋｇの投与量が記憶障害を誘導するために最も効果的な投与量であると決定した。スコポラミン臭化水素酸塩は毎日調製し、生理食塩水に溶解させた。試験１の３０分前に、スコポラミンをi.p.投与した（注射量１ｍｌ／ｋｇ）。ＥＶＰ−６１２４はＨ２Ｏに溶解させた。溶液は毎日調製し、０．０３ｍｇ／ｋｇ p.o.の投与量で試験した（注射量２ｍｌ／ｋｇ）。投与は常に、スコポラミンの直後、試験１の３０分前に行なった。ドネペジルは生理食塩水に溶解させた。溶液は毎日調製し、０．１ｍｇ／ｋｇ p.o.の投与量で試験した（注射量２ｍｌ／ｋｇ）。投与は常に、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドの直後、試験１の３０分前に行なった。
【００３３】
ビヒクル及びスコポラミン条件を最初に試験した。続いてドネペジル、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及び両方の組み合わせを試験した（試験日あたり条件ごとにｎ＝８）。全てのラットを各投与量条件により１回処置した。しかしながら、装置から飛び出し続けたことに起因して１匹のラットを試験から除外したため、ｎ＝２３である。実験者は、試験される条件／薬物を知らなかった。
【００３４】
物体認識試験は、他の場所（Ennaceur and Delacour、1988）に記載されたように実施した。装置は、直径８３ｃｍの円形の活動領域から構成された。高さ４０ｃｍの壁の半分は灰色のポリ塩化ビニル製、残りの半分は透明のポリ塩化ビニル製であった。光の強さは装置の様々な部分において等しかった。２つの物体を、灰色の壁から約１０ｃｍ離れた対称の位置に置いた。各物体は三つ同じものが利用可能であった。これらの物体は以下であった：１）上に真ちゅう製のカラーを有する灰色のポリ塩化ビニルの底面（最大直径１８ｃｍ）から構成される円錐（全高１６ｃｍ）、２）水で満たした標準的な１ｌの褐色の透明ガラスボトル（直径１０ｃｍ、高さ２２ｃｍ）、３）２つの穴（直径１．９ｃｍ）を有する重い金属の立方体（１０．０ｘ５．０ｘ７．５ｃｍ）、及び４）先細りの上面を有する重いアルミニウムの立方体（１３．０ｘ８．０ｘ８．０ｃｍ）。ラットはこれらの物体を動かすことはできなかった。赤色の蛍光灯及び電球が、装置の床の上で約２０ルクスの一定の照明を提供した。
【００３５】
試験セッションは２つの試験から構成された。各試験の期間は３分であった。第一の試験（Ｔ１）の間、装置は２つの同一の物体（見本）を含んでいた。ラットは常に、前部の（透明な）区域の中央に、壁に向けて装置内に置いた。第１の探索期間の後、ラットをそのホームケージに戻した。続いて、所定の遅延間隔の後、ラットを第二の試験（Ｔ２）のために装置に戻したが、今度は２つの非類似の物体（見慣れたもの（見本）及び新しいもの）を用いた。Ｔ１及びＴ２の間に各物体を探索するのに費やした時間を、パーソナルコンピューターを用いて手作業で記録した。
【００３６】
探索は以下のように定義した：２ｃｍ以下の距離で物体に鼻を向けること及び／又は鼻で物体に触れること。物体の上に座ることは、探索行動とはみなさなかった。嗅覚的痕跡の存在を排除するために、物体を常に徹底的に洗浄した。物体の全ての組み合わせ及び位置をバランスの取れた様式で使用して、特定の位置又は物体に対する嗜好性に起因する潜在的なバイアスを低減させた。
【００３７】
いくつかの研究は、１時間の遅延時間が第一の試験と第二の試験との間に挿入される場合、ウィスターラットが優れた物体記憶能力を示すことを示している。しかしながら、２４時間の遅延時間が使用される場合、ラットは第二の試験において新規のものと見慣れたものとを識別せず、このことはラットが第一の試験において提示された物体を記憶しないことを示している。６時間の遅延時間を使用すると、識別能力は１時間の遅延時間の場合の能力と２４時間の遅延時間の場合の能力との間であり、このことはこのタスクにおける遅延時間依存性の忘却を示唆している。この研究においては、１時間の間隔を使用する。
【００３８】
２週間、動物に毎日手を触れ、２日間で手順に順応させた（即ち、動物に毎日２回３分間、装置（いかなる物体もない）を探索させた）。次いで、ラットが安定した識別能力（即ち１時間間隔ではよく識別し、２４時間間隔では識別しないこと）を示すまで、試験、並びに第一の試験の３０分前の生理食塩水注射によるi.p.注射及びp.o.注射（それぞれ１．０ｍｌ／ｋｇ及び２．０ｍｌ／ｋｇ）に順応させた。次に、コントロールセッション（ビヒクル及びスコポラミンを試験した）。続いて、薬物（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（０．０３ｍｇ／ｋｇ）及びドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ）の試験を開始した。化合物セッション間に十分なウォッシュアウト期間を置くために、化合物／ビヒクルは常に月曜日、水曜日及び金曜日（又は火曜日及び木曜日）に試験した。
【００３９】
基本的な尺度は、ラットがＴ１及びＴ２の間に物体を探索するのに費やした時間であった。２つの同一の見本を探索するのに費やした時間は、「ａ１」及び「ａ２」によって表される。Ｔ２において見本及び新しい物体を探索するのに費やした時間は、それぞれ「ａ」及び「ｂ」によって表される。以下の変数を計算した：ｅ１＝ａ１＋ａ２、ｅ２＝ａ＋ｂ、及びｄ２＝（ｂ−ａ）／ｅ２（表１を参照のこと）。ｅ１及びｅ２は、それぞれＴ１及びＴ２中の両方の物体の総探索時間の尺度である。ｄ２は、探索活動（ｅ２）に対して補正した識別の相対的尺度である。従って、同様の間隔での同様の処置による実験間では、ｄ２指数に差異はないはずである。本実験においては５つの条件があり、各ラットを各条件に供した：
【００４０】
１）ビヒクル（スコポラミン）、ビヒクル（ドネペジル）＆ビヒクル（（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド）
２）スコポラミン、ビヒクル（ドネペジル）＆ビヒクル（（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド）
３）スコポラミン、ドネペジル＆ビヒクル（（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド）
４）スコポラミン、ビヒクル（ドネペジル）＆（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド
５）スコポラミン、ドネペジル ＆（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド
【００４１】
ｄ２がゼロとは異なるか否かを処置条件ごとに評価するために、１サンプルｔ統計（t-statistics）を行なった。しかしながら、分散なしでのｄ２の値と値ゼロとの比較は、認識を分析するための最も適切な方法ではないかもしれない（タイプＩエラーをおかす危険性の増加）。従って、効果を被験者内（反復測定）ＡＮＯＶＡによっても評価した。条件間で有意差がある場合に備えて、ボンフェローニの補正を伴う事後解析を行なった。
【００４２】
【表１】
【００４３】
Ｔ１の３０分前のＥＶＰ−６１２４及びドネペジル処置の結果を表２にまとめる。Ｔ１における探索のレベルにおいて、処置条件間で差異は見出されなかった（ｅ１：Ｆ（４、８８）＝１．１３８、n.s.）。Ｔ２においても、Ｔ２における探索のレベルにおいて、処置条件間で差異は無かった（ｅ２：Ｆ（４、８８）＝０．８８８、n.s.）。
【００４４】
【表２】
【００４５】
１サンプルｔ検定により、併用条件及びビヒクル条件のｄ２値がゼロとは異なることが示された（表２Ｂを参照のこと）。これは、スコポラミン、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジルを別々に投与した条件（差異を示さなかった）とは対照的である。（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジル処置の相対的識別指数ｄ２への影響を図１に図示する。群間で比較した場合、ｄ２指数について差異が見出された（Ｆ（４、８８）＝８．１８１、Ｐ＜０．００１）。ｄ２は、スコポラミン条件、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド条件及びドネペジル条件よりも、併用条件及びビヒクル条件において、より高かった（ボンフェローニｔ検定；図２を参照のこと）。
【００４６】
スコポラミン投与（i.p.）後の、併用された閾値下投与量の薬物（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド（p.o.で与えた）及びドネペジル（p.o.）の認知機能増進効果の評価のために、１ｈの遅延間隔を使用した。対照のビヒクル条件において、ラットがそのような間隔の後に見慣れた物体を記憶していることが見出された。これは、スコポラミン（０．１ｍｇ／ｋｇ）条件（見慣れた物体の記憶はもはや見出されなかった）とは対照的である。本研究において、薬物試験に使用するスコポラミンの投与量は、動物の探索活動に影響しなかった。
【００４７】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミドもドネペジルも、探索行動を変化させなかった。相対的識別指数ｄ２は、探索活動における変化（これらは本研究においては観察されなかったが）を補正する。更にこれは、ｗｉｔｈｉｎ分析（即ちゼロとの比較）で物体認識へのわずかな影響を検出できるため、信頼できる尺度である。ドネペジル条件のｄ２、並びに（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド条件のｄ２は、ゼロと異ならなかった。同様に、ｂｅｔｗｅｅｎ分析（即ちスコポラミン単独で処置した動物との比較）は、閾値下投与量のＥＶＰ−６１２４（０．０３ｍｇ／ｋｇ）及びドネペジル（０．１ｍｇ／ｋｇ）が、別々に与えられた場合には、動物の記憶を改善しないことを示した。これは、併用条件（一緒に与えた閾値下投与量の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド及びドネペジルがスコポラミンによって引き起こされる物体記憶障害を完全に改善した）とは対照的である。
【００４８】
参考文献
Boess, F.G., Hendrix, M., van der Staay, F.J., Erb, C., Schreiber, R., van Staveren, W., de Vente, J., Prickaerts, J., Blokland, A., Koenig, G., 2004. Inhibition of phosphodiesterase 2 increases neuronal cGMP, synaptic plasticity and memory performance. Neuropharmacology 47, 1081-1092.
Blokland, A., Prickaerts, J., Honig, W., De Vente, J., 1998. State-dependent impairment in object recognition after hippocampal NOS inhibition. NeuroReport 9, 4205-4208.
Ennaceur, A., Delacour, J., 1988. A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data. Behav. Brain Res. 31, 47-59.
Ennaceur, A., Meliani, K., 1992. Effects of physostigmine and scopolamine on rats' performances in object-recognition and radial-maze tests. Psychopharmacology 109, 321-330.
Ennaceur, A., Cavoy, A., Costa, J. C., Delacour, J. 1989. A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. II: Effects of piracetam and pramiracetam. Behav. Brain Res. 33, 197-207.
De Bruin, N.M.W.J., Prickaerts, J., Akkerman, S., Lange, J.H.M., Andriambeloson, E., De Haan, M., Wijnen, J., Van Drimmelen, M., Hissink, E., Heijnk, L. Kruse, C.G. (In Press) SLV330, a cannabinoid CB1 receptor antagonist, ameliorates deficits in the T-maze, object recognition and social recognition tasks in rodents. Neurobiol. Learn. Mem.
Prickaerts, J., Steinbusch, H.W.M., Smits, J.F.M., De Vente, J., 1997. Possible role of nitric oxide-cyclic GMP pathway in object recognition memory: Effects of 7-nitroindazole and zaprinast. Eur. J. Pharmacol. 337, 125-136.
Prickaerts, J., Sik, A., van Staveren, W.C., Koopmans, G., Steinbusch, H.W., van der Staay, F.J., de Vente, J., Blokland, A., 2004. Phosphodiesterase type 5 inhibition improves early memory consolidation of object information. Neurochem Int. 45, 915-928.
Prickaerts, J., Sik, A., van der Staay, F.J., de Vente, J., Blokland, A., 2005. Dissociable effects of acetylcholinesterase inhibitors and phosphodiesterase type 5 inhibitors on object recognition memory: acquisition versus consolidation. Psychopharmacology 177, 381-390.
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を患者に投与することを含む、認知機能を改善する方法。
【請求項２】
患者がアルツハイマー病又はプレアルツハイマー病と診断されている、請求項１記載の方法。
【請求項３】
患者が軽度から中等度のアルツハイマー病と診断されている、請求項１記載の方法。
【請求項４】
患者が中等度から重度のアルツハイマー病と診断されている、請求項１記載の方法。
【請求項５】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がタクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、前述のいずれかの請求項に記載の方法。
【請求項６】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル及びリバスチグミンから選択される、請求項５記載の方法。
【請求項８】
患者が、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を投与されるより先に一定期間アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与されている、前述のいずれかの請求項に記載の方法。
【請求項９】
先の投与が少なくとも１ヶ月間である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
先の投与が少なくとも３ヶ月間である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
先の投与が少なくとも６ヶ月間である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
以下の１以上を改善する、前述のいずれかの請求項に記載の方法：学習、遅延記憶、注意力、作業記憶、視覚学習、処理速度、ビジランス、言語学習、視覚運動機能、社会的認知、長期記憶又は実行機能。
【請求項１３】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の一方又は両方が無症候性投与量で投与される、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩が１．０ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩が０．５ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩が０．３ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１７】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩が０．１ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１８】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ５ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１９】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ４．５ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２０】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ４．０ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２１】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ２．５ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２２】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ１．５ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２３】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ１．０ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２４】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤が、定常状態で１０〜６５％の赤血球アセチルコリンエステラーゼ阻害を達成する投与量で投与される、請求項１記載の方法。
【請求項２５】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含有する医薬組成物。
【請求項２６】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がタクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２８】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル及びリバスチグミンから選択される、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２９】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルである、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３０】
１．０ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤及び製薬上許容しうる担体を含有する、１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３１】
０．５ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する、請求項３０記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３２】
０．３ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３３】
０．１ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３４】
５ｍｇ以下のドネペジルを含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３５】
４ｍｇ以下のドネペジルを含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３６】
２．５ｍｇ以下のドネペジルを含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３７】
１ｍｇ以下のドネペジルを含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３８】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する第１の単位投与量医薬組成物、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含有する第２の単位投与量医薬組成物を含むパッケージを含む、包装された医薬品。
【請求項１】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を患者に投与することを含む、認知機能を改善する方法。
【請求項２】
患者がアルツハイマー病又はプレアルツハイマー病と診断されている、請求項１記載の方法。
【請求項３】
患者が軽度から中等度のアルツハイマー病と診断されている、請求項１記載の方法。
【請求項４】
患者が中等度から重度のアルツハイマー病と診断されている、請求項１記載の方法。
【請求項５】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がタクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、前述のいずれかの請求項に記載の方法。
【請求項６】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル及びリバスチグミンから選択される、請求項５記載の方法。
【請求項８】
患者が、（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を投与されるより先に一定期間アセチルコリンエステラーゼ阻害剤を投与されている、前述のいずれかの請求項に記載の方法。
【請求項９】
先の投与が少なくとも１ヶ月間である、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
先の投与が少なくとも３ヶ月間である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
先の投与が少なくとも６ヶ月間である、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
以下の１以上を改善する、前述のいずれかの請求項に記載の方法：学習、遅延記憶、注意力、作業記憶、視覚学習、処理速度、ビジランス、言語学習、視覚運動機能、社会的認知、長期記憶又は実行機能。
【請求項１３】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤の一方又は両方が無症候性投与量で投与される、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩が１．０ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩が０．５ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩が０．３ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１７】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩が０．１ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１８】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ５ｍｇ未満／日で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項１９】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ４．５ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２０】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ４．０ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２１】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ２．５ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２２】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ１．５ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２３】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルであり、且つ１．０ｍｇ／日又はそれ以下で経口投与される、請求項１３記載の方法。
【請求項２４】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤が、定常状態で１０〜６５％の赤血球アセチルコリンエステラーゼ阻害を達成する投与量で投与される、請求項１記載の方法。
【請求項２５】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含有する医薬組成物。
【請求項２６】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がタクリン、ドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２７】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル、リバスチグミン及びガランタミンから選択される、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２８】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジル及びリバスチグミンから選択される、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項２９】
アセチルコリンエステラーゼ阻害剤がドネペジルである、請求項２５記載の医薬組成物。
【請求項３０】
１．０ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤及び製薬上許容しうる担体を含有する、１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３１】
０．５ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する、請求項３０記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３２】
０．３ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３３】
０．１ｍｇ以下の（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３４】
５ｍｇ以下のドネペジルを含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３５】
４ｍｇ以下のドネペジルを含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３６】
２．５ｍｇ以下のドネペジルを含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３７】
１ｍｇ以下のドネペジルを含有する、請求項３１記載の１日単位投与量医薬組成物。
【請求項３８】
（Ｒ）−７−クロロ−Ｎ−（キヌクリジン−３−イル）ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボキサミド又はその製薬上許容しうる塩を含有する第１の単位投与量医薬組成物、及びアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含有する第２の単位投与量医薬組成物を含むパッケージを含む、包装された医薬品。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２０１２−５２６８２１（Ｐ２０１２−５２６８２１Ａ）
【公表日】平成２４年１１月１日（２０１２．１１．１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１０９２６（Ｐ２０１２−５１０９２６）
【出願日】平成２２年５月１１日（２０１０．５．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３４３５３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３２４２３
【国際公開日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【出願人】（５０７１８４０７４）エンビボ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド (11)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１１月１日（２０１２．１１．１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年５月１１日（２０１０．５．１１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３４３５３
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３２４２３
【国際公開日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【出願人】（５０７１８４０７４）エンビボ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド (11)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]