キナーゼ阻害剤
本発明は、式Ｉ：
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＺは本願明細書に記載のとおりである）
又はその薬理学的に許容できる塩で示されるキナーゼ阻害剤の提供に関する。
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ及びＺは本願明細書に記載のとおりである）
又はその薬理学的に許容できる塩で示されるキナーゼ阻害剤の提供に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はキナーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ｐ３８キナーゼは、セリン／トレオニンキナーゼスーパーファミリーに属するマイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼである。このキナーゼは、熱、紫外線及び浸透圧ストレスなどの細胞外からのストレス、並びに炎症性刺激（例えばリポ多糖類）によって活性化する。活性化したとき、ｐ３８キナーゼは細胞内のタンパク質基質をリン酸化し、それにより炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）及びインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の生合成が制御される。これらのサイトカインは、多くの慢性炎症性障害（非特許文献１及び２）、心血管及び中枢神経系障害（非特許文献３）及び自己免疫不全（非特許文献４）の病理に関与する。更に、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−プロテインキナーゼ２（又はｐＭＡＰＫＡＰＫ２）のリン酸化形態はまたｐ３８ＭＡＰＫ経路のキナーゼであり、ｐ３８ＭＡＰＫによって直接活性化されうる。ＭＡＰＫＡＰＫ２のノックアウトマウスを用いた研究においてサイトカイン産生の減少が示されており、すなわちＭＡＰＫＡＰＫ２が炎症反応における主要な調節物質であり、抗炎症治療における良好な標的物質となりうることを示唆するものである（特許文献１）。
【０００３】
ｐ３８キナーゼの阻害剤又はサイトカイン阻害剤として、多くの尿素化合物が同定されている（例えば特許文献２から１０）。ｐ３８キナーゼ阻害剤又はサイトカイン阻害剤は、通常生産コストが高く、また生物学的利用能及び吸収性に課題があるため、ｉｎ ｖｉｖｏ効果及び治療的な使用が制限されうる。以上より、新規な小分子のサイトカイン抑圧剤、すなわち、改良された効力及びより大きな生物学的利用能を有する、ｐ３８キナーゼ阻害化合物に対するニーズが存在する。
【特許文献１】国際公開第０５／１２０５０９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９９／２３０９１号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０１／０１２１８８号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０４／００４７２０号パンフレット
【特許文献５】国際公開第０４／０３７７８９号パンフレット
【特許文献６】国際公開第９９／３２１１１号パンフレット
【特許文献７】米国特許出願公開第２００４／００５８９６１号公報
【特許文献８】欧州特許第１６０９７８９号公報
【特許文献９】国際公開第０３／０７２５６９号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第００／４３３８４号パンフレット
【特許文献１１】Ｌｅｅら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，６９６，１４９−１７０（１９９３）
【特許文献１２】Ｍｕｌｌｅｒ−Ｌａｄｎｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，８，２１０−２２０（１９９６）
【特許文献１３】Ｓａｌｉｔｕｒｏら、ＣｕｒｒｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，６，８０７−８２３（１９９９）
【特許文献１４】Ｐａｒｇｅｌｌｉｓら、ＮａｔｕｒｅＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｙ，９（４），２６８−２７２（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療に有用な、新規なｐ３８キナーゼ阻害剤の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は式Ｉ：
【化１】
（式中、Ｚは以下からなる群から選択され、
【化２】
Ｘは以下からなる群から選択され、
【化３】
Ｒ１はハロ基及びＣ１−Ｃ４アルキルハロ基からなる群から選択される１〜６個の置換基で任意に置換されてもよいＣ１−Ｃ７アルキル基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される１又は２個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル基であるか、又はトリメチルシリル基であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいフェニル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいピリジニル基であり、Ｙは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、ハロ基又はＣ１−Ｃ４アルキルハロ基であり、
Ｒ３はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基で任意に置換されてもよいＣ１−Ｃ７アルキル基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される１〜４個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル基であるか、又は、ピリジル基、フェニル基若しくはチエニル基であって、それらの各々がハロ基、シアノ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換され、またＣ１−Ｃ４アルキル基及びハロ基からなる群から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよく、
Ｒ４は水素又はＣ１−Ｃ４アルキル基である）
で表される化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。
【０００６】
本発明はまた、哺乳類のｐ３８キナーゼを阻害する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００７】
本発明はまた、哺乳類の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の製造を抑制する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００８】
本発明はまた、哺乳類のインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生を抑制する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００９】
本発明は更に、哺乳類の過剰なサイトカイン産生から生じる症状を治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１０】
本発明はまた、哺乳類の感受性腫瘍の増殖を阻害する方法であって、ｐ３８の阻害に十分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１１】
本発明はまた、哺乳類の腫瘍転移を阻害する方法であって、ｐ３８の阻害に十分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１２】
本発明はまた、哺乳類の慢性関節リウマチの治療方法であって、ｐ３８の阻害に十分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１３】
本発明はまた、薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる医薬用製剤の提供に関する。
【００１４】
本発明はまた、ｐ３８キナーゼの阻害剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類のｐ３８キナーゼの阻害用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、ｐ３８キナーゼの阻害用の医薬組成物の提供に関する。
【００１５】
本発明はまた、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）産生の抑制剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）産生の抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）産生の抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００１６】
本発明はまた、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）産生の抑制剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類のインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）産生の抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）産生の抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００１７】
本発明はまた、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類の過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用の医薬組成物の提供に関する。
【００１８】
本発明はまた、感受性腫瘍の増殖阻害剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類の感受性腫瘍の増殖阻害用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、感受性腫瘍の増殖阻害用の医薬組成物の提供に関する。
【００１９】
本発明はまた、転移抑制剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類における転移抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、転移抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００２０】
本発明はまた、慢性関節リウマチの治療用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類の慢性関節リウマチの治療用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、慢性関節リウマチの治療用の医薬組成物の提供に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
用語「ｐ３８キナーゼ」とは、ｐ３８α及び／又はｐ３８βキナーゼアイソフォームを意味する。
【００２２】
用語「ＴＮＦα（ＩＬ−１β、サイトカイン）の産生の抑制」とは、哺乳類のＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの過剰なｉｎ ｖｉｖｏ濃度が、正常値若しくは正常値以下のレベルに減少することを意味する。この減少は、大食細胞などの全ての細胞からの、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインのｉｎ ｖｉｖｏでの放出を抑制すること、ゲノムレベルにおける、哺乳類のＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの過剰なｉｎ ｖｉｖｏでのレベルを、通常若しくは通常以下のレベルに下方制御すること、翻訳後において、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの合成を阻害すること、又は翻訳レベルにおいて、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインを下方制御することによって可能となる。
【００２３】
当業者であれば、式Ｉに係る具体的な化合物が少なくとも１つの対掌性中心を有することを認識する。本発明には、すべての個々の鏡像異性体又はジアステレオマー、並びにラセミ化合物などの、前記化合物の鏡像異性体若しくはジアステレオマーの混合物が包含される。少なくとも１つの対掌性中心を含んでなる式Ｉの化合物は、１つの鏡像異性体又はジアステレオマーの混合物として存在することが好ましい。１つの鏡像異性体又はジアステレオマーの混合物は、キラル試薬を開始原料とするか、又は立体選択的若しくは立体特異的な合成方法により調製してもよい。あるいは、標準的な方法（対掌性クロマトグラフィ又は結晶化法）により混合物から単一の鏡像異性体又はジアステレオマーを単離してもよい。
【００２４】
当業者であれば、本発明の化合物が酸付加塩を形成できることを理解するであろう。全ての場合において、全ての化合物の薬理学的に許容できる塩は、それらの名称の範疇に包含される。本発明の化合物はアミンであるため、多くの無機及び有機酸のうちのいずれかと反応して、薬理学的に許容できる酸付加塩を形成する。本発明の用語「薬理学的に許容できる塩」とは、生存する生物体に対する中毒性を実質的に有さない、式Ｉの化合物の塩のことを指す。典型的な薬理学的に許容できる塩としては、薬理学的に許容できる有機酸若しくは無機酸と、本発明の化合物との反応により調製される塩が挙げられる。かかる塩の例としては、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）に列記されている薬理学的に許容できる塩が挙げられ、それらは当業者に公知である。式Ｉの化合物のメシル酸塩が最も好ましい。
【００２５】
式Ｉの化合物はｐ３８キナーゼの阻害剤である。すなわち、本発明はまた、哺乳類のｐ３８キナーゼを阻害する方法であって、前記処置を必要とする哺乳類に対して、ｐ３８キナーゼを阻害するのに十分な量の式Ｉの化合物を投与することを含んでなる方法の提供に関する。式Ｉの化合物の投与により処置される哺乳類としては、ヒトが好ましい。
【００２６】
本発明の化合物は、ｐ３８キナーゼの阻害剤として、炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）及びインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生の抑制、すなわち過剰なサイトカイン産生から生じる障害の治療に有用である。現在の化合物はしたがって、炎症性障害（湿疹、アトピー性皮膚炎、慢性関節リウマチ、骨関節炎、炎症性腸疾患及び毒性ショック症候群など）の治療に有用であると考えられる。本発明の化合物はまた、心血管障害（例えば急性心筋梗塞、慢性心不全、アテローム性動脈硬化症、ウィルス性筋心臓炎、心臓同種移植拒否及び敗血症関連の心臓機能不全）の治療にも有用であると考えられる。更に本発明の化合物はまた、中枢神経系障害（例えば髄膜炎菌性髄膜炎、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患及び多発性硬化症）の治療にも有用であると考えられる（国際公開第０３／０７２５６９号、第０４／００４７２０号、第９９／２３０９１号、第９９／３２１１１号）。
【００２７】
大部分の固形腫瘍は悪性細胞及び間質細胞（内皮細胞を含む）の激増により質量が増加する。腫瘍が直径２〜３ｍｍより大きくなるには、脈管系を形成しなければならず、そのプロセスは血管新生として知られている。腫瘍により誘発された血管形成のアンジオスタチン及びエンドスタチンによる抑制は、抗腫瘍活性をもたらすことが報告されている（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら、Ｃｅｌｌ，８８，２７７−２８５（１９９７））。選択的なｐ３８キナーゼ阻害剤ＳＢ２２０２５が血管新生を阻害することが示されている（Ｊ．Ｒ．Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２８４，６８７（１９９８））。血管新生は、大部分の固形腫瘍が広範囲に拡大するための不可欠な要素であるため、このプロセスの抑制のための新規なｐ３８キナーゼ阻害剤の開発は、抗腫瘍治療における有望なアプローチである。抗腫瘍治療におけるこのアプローチは、中毒性の副作用又は従来の化学療法における薬剤耐性の誘導という問題を含まないと考えられる（Ｊｕｄａｈ Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｔｈｅ Ｈａｒｖｅｙ Ｌｅｃｔｕｒｅｓ， Ｓｅｒｉｅｓ９２，ｐａｇｅｓ ６５−８２，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ Ｉｎｃ．，（１９９８））。
【００２８】
したがって本発明の化合物はまた、感受性腫瘍の増殖を阻害する際の、ｐ３８キナーゼの阻害剤として有用である。（Ｓｃｈｕｌｔｚ，Ｒ．Ｍ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｐ３８ ＭＡＰ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ．（Ｅ．Ｊｕｃｋｅｒ（ｅｄ．），Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，５９−９２，（２００３））より）。感受性腫瘍は、その生存、増殖又は転移がｐ３８キナーゼに依存する腫瘍であるものとして定義される。感受性腫瘍の例としては、脳、尿生殖路、リンパ系、胃、喉頭及び肺における腫瘍が挙げられる（米国特許第５７１７１００号）。好ましくは、本発明の用語「感受性腫瘍」には、非小細胞肺癌（Ａ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．ＣｅｌｌＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６，５５８（２００２））、乳癌（Ｊ．Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６，４７９０１（２００１）、Ｂ．Ｓａｌｈら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９８，１４８（２００２）、及びＳ．Ｘｉｏｎｇら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，６１，１７２７（２００１））、胃癌（Ｙ．Ｄ．Ｊｕｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，４３，９（２００２）、結腸直腸癌（Ｓ．Ｘｉｏｎｇら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，６１，１７２７（２００１））及び悪性黒色腫（Ｃ．Ｄｅｎｋｅｒｔら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，１９，７９（２００２））などのヒト癌が挙げられる。
【００２９】
ＴＮＦαの抑制による血管新生の阻害は、転移の阻害若しくは防止にも有用であることが教示されている（米国特許第６４１４１５０号、米国特許第６３３５３３６号）。更に、ＴＮＦαの抑制は、悪液質（全てのがん患者の約半数が経験する消耗性症候群）の治療及び予防にもつながると考えられる（Ｔ．Ｙｏｎｅｄａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８７，９７７（１９９１））。
【００３０】
更に、ｐ３８キナーゼの抑制は、特定のウィルス性の症状、例えばインフルエンザ（Ｋ．Ｋｕｊｉｍｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．，１６４，３２２２−３２２８（２０００））、ライノウイルス（Ｓ．Ｇｒｉｅｇｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６５，５２１１−５２２０（２０００））及びＨＩＶ（Ｌ．Ｓｈａｐｉｒｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５，７４２２−７４２６，（１９９８））による症状の治療に効果的であると考えられる。
【００３１】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ７アルキル」とは、直鎖状又は分岐状の一価の、１〜７個の炭素原子数である飽和脂肪族鎖を指し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル及びヘプチル基などが例示されるがこれらに限定されない。用語「Ｃ１−Ｃ７アルキル」には、その定義中に用語「Ｃ１−Ｃ４アルキル」が包含されるものとする。
【００３２】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ４アルコキシ」とは、１〜４個の炭素原子数の、酸素原子と結合する直鎖若しくは分岐状アルキル鎖のことを指す。典型的なＣ１−Ｃ４アルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ基などが挙げられる。
【００３３】
本明細書中で特に明記しない限り、本発明の用語「ハロ」とは、塩素、臭素、ヨウ素又はフッ素原子のことを指す。
【００３４】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ」とは、最高５個のハロ原子で置換されてもよいＣ１−Ｃ４アルキルのことを指す。典型的なＣ１−Ｃ４アルキルハロ基としては、メチルハロ、トリフルオロメチル、エチルハロ、ビスフルオロメチルエチル、プロピルハロ、イソプロピルハロ、ブチルハロ、ｔｅｒｔ−ブチルハロなどが挙げられる。
【００３５】
本発明の用語「Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル」とは、炭素原子及び水素原子からなる完全に飽和した環状構造を意味し、シクロプロピル及びシクロブチル基などが包含される。
【００３６】
式Ｉの化合物において、特定の種類のものが好ましいｐ３８キナーゼ阻害剤として機能する。以下のパラグラフにおいてかかる好ましい種類のものを記載する。
ａ）Ｚは
【化４】
であり、
ｂ）Ｘは
【化５】
であり、
ｃ）Ｒ４は水素であり、
ｄ）Ｙはメチルであり、
ｅ）Ｒ１はＣ１−Ｃ７アルキル基であり、
ｆ）Ｒ１はｔｅｒｔ−ブチル基であり、
ｇ）Ｒ２はフェニル基又はピリジニル基であり、各々メチル基で任意に置換されてもよく、
ｈ）Ｒ２は４−トリル基であり、
ｉ）Ｒ３はフェニル基又はチエニル基であり、各々、ハロ、シアノ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換され、またＣ１−Ｃ４アルキル基及びハロ基から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよく、
ｊ）Ｒ３はフェニル基であり、ハロ基からなる群から選択される第１の置換基で置換され、Ｃ１−Ｃ４アルキル及びハロ基から選択される第２の置換基で更に置換されてもよく、
ｋ）式Ｉの化合物はフリーの塩基であり、
ｌ）式Ｉの化合物は塩であり、
ｍ）式Ｉの化合物はメシル酸塩である。
【００３７】
本発明の好ましい実施態様では、パラグラフａ）〜ｍ）のすべての組合せを含む。他の好ましい式Ｉの化合物は、
Ｘがパラグラフｂ）にて説明される化合物であり、
Ｒ１がパラグラフｅ）にて説明される化合物であり、
Ｒ２がパラグラフｇ）にて説明される化合物であり、
Ｒ４がパラグラフｃ）にて説明される化合物である。
【００３８】
また、好ましい実施態様では、
Ｘがパラグラフｂ）にて説明される化合物であり、
Ｒ１がパラグラフｆ）にて説明される化合物であり、
Ｒ２がパラグラフｈ）にて説明される化合物であり、
Ｒ３がパラグラフｉ）にて説明される化合物であり、
Ｒ４がパラグラフｃ）にて説明される化合物である。
【００３９】
また、好ましい実施態様では、
Ｘがパラグラフｂ）にて説明される化合物であり、
Ｒ２がＣ１−Ｃ４アルキル基で４位を置換されたフェニル基である。
【００４０】
Ｘがパラグラフｂ）にて説明される化合物であるのが最も好ましい。
【００４１】
特に以下の化合物が最も好ましい化合物である。
【化６】
【００４２】
本発明の化合物は様々な方法で調製することができ、その幾つかを下記の反応式において例示する。当業者であれば、式Ｉの化合物の調製において、以下の反応式中の個々の処理を適宜変化させてもよいことを認識するであろう。式Ｉの化合物の調製に必要となる処理の具体的な順序は、合成しようとする具体的な化合物、開始化合物及び置換された部分の相対的な不安定性などに依存する。説明の便宜上、若干の置換基を以下の反応式において省略することもあるが、それによりいかなる形であれ反応式の教示が限定されるものではない。
【００４３】
式Ｉの化合物及びその中間体は、以下の反応式にて図示するように調製してもよく、また式中のＲ１、Ｒ２及びＸは上記で定義したとおりである。
【００４４】
反応式１
【化７】
【００４５】
アミン（ａ）を、適当なイソシアネート又はカルバメート（例えばピラゾリル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート）と反応させ、式Ｉの化合物を得る。例えば、アミン（１当量）、トリクロロエチルカルバメート（１当量）及び適切な塩基溶液（ジイソプロピルエチルアミン（２当量）又は炭酸カリウムなど）を、適切な溶媒（アセトニトリル又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）など）中で加熱する。その後所望の化合物を単離してもよく、また必要に応じて、公知の精製法（例えばクロマトグラフィ）を使用して式Ｉの化合物を精製してもよい。
【００４６】
必要なアミンは以下の反応式２に示すように調製され、式中、Ｘは上記の通り定義される。
【００４７】
反応式２
【化８】
【００４８】
ニトロ部分（ｂ）をスタンダードの還元条件下で還元してもよく、例えば、適切な溶媒（低級アルカノール又は酢酸エチルなど）中で、パラジウム触媒の存在下で水素で還元するか、又は塩化ニッケル（ＩＩ）六水和物の存在下で水素化ホウ素ナトリウムで還元し、対応するアミン（ａ）を調製してもよい。かかる還元処理は当業者に公知である。Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．，“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，”４１２，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと。
【００４９】
必要となるニトロ化合物は下記の反応式３にて図示するように調製され、式中、ＨａｌはＣｌ又はＦであり、Ｘ’はＣ（Ｏ）Ｒ３であるか、又は適切な保護基ＰＧである。
【００５０】
反応式３
【化９】
【００５１】
適切な有機溶媒（ＴＨＦなど）中で、２−ハロ−４−ニトロ−ピリジン（ｅ）を、適当な４−ヒドロキシピペリジン及び水素化ナトリウム若しくはトリフェニルホスフィンと反応させ、対応する置換されたピペリジンｂ（ｉ）を得る。あるいは、２−ハロ−４−ニトロ−ピリジン（ｅ）を、極性溶媒（アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又はブタノール）中で、適当なピペラジン及び塩基（例えば炭酸カリウム、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド又はトリエチルアミン）と反応させ、対応する置換されたピペラジンｂ（ｉｉ）を得る。
【００５２】
式ｂ（ｉｉｉ）のアミンは、適切な塩基（例えば炭酸ナトリウム）の存在下で、適切な溶媒（例えばエタノール）中で、２−ハロ−４−ニトロ−ピリジン（ｅ）を適当なアミノピペリジンと反応させることにより調製される。
【００５３】
当業者であれば、上記の方法が本発明に包含されるピリジル異性体の形成に利用できることを認識するであろう。
【００５４】
必要となるピラゾリルカルバメートは、以下の反応式で説明するように調製でき、式中、Ｒ１及びＲ２は上記で定義したとおりである。
【００５５】
反応式４
【化１０】
【００５６】
３−アミノピラゾール（ｍ）を、公知の反応条件において形成する（Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．，”Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，”７９，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９）。例えば、α−シアノケトン（ｊ）及び適切なヒドラジン又はヒドラジン塩（ｋ）を、適切な有機溶媒（例えばエタノール）中で高温で反応させる。得られるピラゾール（ｍ）を、標準的な技術（例えばシリカゲルカラムにおけるクロマトグラフィ）を使用して精製してもよい。
【００５７】
２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（ｎ）を、適切に置換された３−アミノピラゾール（ｍ）及び塩基（例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム又はピリジン）と、適切な溶媒（例えばＴＨＦ又は水／酢酸エチル）中で反応させ、対応する２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ｏ）を得る。当業者であれば、３−アミノピラゾールを他の活性炭酸塩と反応させることにより、対応するカルバメートを調製できると認識するであろう。
【００５８】
式Ｉ（ｉ）の化合物は、以下の反応式５で示すように調製でき、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＰＧは上記で定義したとおりであり、ＺはＯ、Ｎ又は結合であり、Ｒ５はＣ又はＮである。
【００５９】
反応式５
【化１１】
【００６０】
式（ｆ）の化合物を、公知の反応条件下で脱保護する。例えば、保護基がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである場合、式（ｆ）の化合物は適切な有機溶媒若しくは溶媒混合物（例えばジクロロメタン）中に溶解させ、酸（例えばジオキサン又はトリフルオロ酢酸中の塩酸）で処理する。Ｎ保護されたピペリジン置換尿素（ｆ）の脱保護により、置換されたピペリジン（ｇ）が得られ、それを、有機酸及び有機アミンの標準的なカップリング条件下で、カップリング剤（Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸（ＥＤＣＩ）、又はジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の触媒量、又はＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）又はトリエチルアミンなど）の存在下で、適切な溶媒（例えばメチレンクロライド又はアセトニトリル）中で、置換されたカルボン酸と反応させ、式Ｉ（ｉ）の化合物を得る。当業者であれば、式Ｉ（ｉ）を、異なるＮ保護基（例えばホルミル基）を有する他の被保護ピペリジンを開始原料として調製できることを認識し、その場合、他の脱保護方法により中間体（ｇ）を形成させる必要があると考えられる。
【００６１】
適切なアミノ保護基「Ｐｇ」（例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）部分）を必要に応じて利用するか、又は必要となることもあり、これらの基を導入するための手法は当業者にとり周知である。当業者であれば、保護基が本発明の化合物の合成経路中のいかなる工程においても除去できることを認識するであろう。窒素及び酸素の保護基を導入及び除去する方法は公知技術である（Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９９９）参照）。
【００６２】
また当業者であれば、式Ｉの化合物の置換基の全てが、化合物の合成に採用される具体的な反応条件を許容できるわけではないことを認識するであろう。これらの部分は、合成経路上のいかなるタイミングで導入してもよく、又はそれらを必要に応じて保護し、更に脱保護してもよい。
【００６３】
実施例及びアッセイにおいて使用する以下の略記、記号及び用語は、以下の意味を有する。
ｎ−ＢｕＯＨ＝ｎブタノール、
ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド、
ＤＩＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド、
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、
ｈ＝時間、
ＨＯＢｔ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド、
ＥＤＣＩ＝１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸、
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、
ＥｔＯＨ＝エタノール、
Ｅｔ２Ｏ＝ジエチルエーテル、
ＭｅＯＨ＝メタノール、
ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３＝ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド、
ＴＢＡＦ＝フッ化テトラブチルアンモニウム、
Ｔｆ２Ｏ＝トリフルオロメタンスルホン酸無水物、
及びＴＨＦ＝テトラヒドロフラン。
【００６４】
調製
調製１：２−クロロ−４−メチル−５−ニトロ−ピリジン
【化１２】
【００６５】
０．５ｍＬの硫酸中に、４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルアミン（３．０ｍｍｏｌ、０．５ｇ）を溶解させた。７．６ｍＬの水を添加し、溶液を０℃に冷却した。亜硝酸ナトリウム（４．５ｍｍｏｌ、０．３ｇ）を添加し、２時間混合物を撹拌し、室温に加温した。水で希釈し、塩基性のｐＨとなるまで１０％水酸化ナトリウム水溶液を添加した。酢酸エチル抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で有機層を混合した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−オルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１５５［Ｍ＋Ｈ］
【００６６】
オキシ塩化リン（０．６ｍｍｏｌ、０．０５ｍＬ）及びペンタ塩化リン（０．６ｍｍｏｌ、０．１２ｇ）を４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−オル（１．９ｍｍｏｌ、０．３ｇ）に添加した。１２０℃で１．５時間撹拌した。冷却し、氷水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液で混合有機層を洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、２−クロロ−４−メチル−５−ニトロ−ピリジンを得た。
【００６７】
調製２：２，３−ジクロロ−５−ニトロ−ピリジン
濃ＨＣｌ（１００ｍＬ）中に５−ニトロ−ピリジン−２−オル（２０ｇ、１４３ｍｍｏｌ）を添加した。５０℃に加熱し、次に水（１００ｍＬ）に溶解させた塩素酸カリウム（６．１３ｇ、５０ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。５０℃で３０分間撹拌した。アイスバス中で反応液を冷却した。固体を濾過して除去し、水で洗浄した。完全に乾燥させ、３−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−オルを２１．１３ｇ（８５％）得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１７３［Ｍ＋Ｈ］
【００６８】
丸底フラスコ中に塩化リン（１１．２８ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を添加し、０℃に冷却した。キノリン（７．１５ｍＬ、６０．５ｍｍｏｌ）、更に３−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−オル（２１．１３ｇ、１２１ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。反応液を２時間の１２０℃に加熱した。氷上に反応液を注入し、水で粉末化した。固体を濾過して除去し、水で洗浄した。完全に乾燥させ、標題化合物の１９．９５ｇ（８６％）を得た：１ＨＮＭＲδＨ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）９．２０（ｓ，１Ｈ），８．９７（ｓ，１Ｈ）。
【００６９】
調製３：４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１３】
【００７０】
撹拌装置を用い、６−クロロ−２−メチル−３−ニトロ−ピリジン（Ａｓｙｍｃｈｅｍ、２５．００ｇ、１４４．９ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（２９．６８ｇ、１５９．４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２３．２ｍＬ、１６７ｍｍｏｌ）／ｎ−ＢｕＯＨ（２５０ｍＬ）を、窒素雰囲気下で５０℃で４時間、６５℃で２時間、更に室温で一晩混合物を撹拌した。更にｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（１．５ｇ）を添加し、６５℃で４時間反応液を加熱した。得られたスラリーを３０℃に冷却し、ヘキサン（７５ｍＬ）を添加した。スラリーを１時間にわたり室温に冷却し、水（１５０ｍＬ）を添加した。スラリーを４５分間静置し、濾過した。ケーキ状物を水（４×１００ｍＬ）、次にヘキサン（１００ｍＬ）で洗浄し、一晩空気乾燥し、明るい黄色の結晶（４６．３０ｇ、９９％の収率、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２６７［Ｍ＋Ｈ−Ｃ４Ｈ８］）として４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。
【００７１】
Ｐｄ／Ｃ（５％、Ａｌｄｒｉｃｈ社製、３．０４ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）と共に、室温で４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４６．００ｇ、１４２．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７５０ｍＬ）中のスラリーを混合し、水素雰囲気（Ｐａｒｒシェーカー、４０〜４５ｐｓｉ）下で６時間静置した。ＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）を添加し、スラリーを室温で４時間、水素雰囲気下に置いた。更に触媒（３．０４ｇ）を添加し、混合物を７時間水素下に静置した。セライト５２１（登録商標）のパッドで混合物を濾過し、次にＴＨＦ及びＭｅＯＨで洗浄し、減圧下で濃縮し、淡いピンク色の固体として標題化合物を得た（４１．５８ｇ、９９％の収率、ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２９３［Ｍ＋Ｈ］）。
【００７２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１】
【００７３】
調製６：４−（５−アミノ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ｎブタノール（２０ｍＬ）中に、２−クロロ−５−ニトロ−ピリジン（１．０ｇ、６．３１ｍｍｏｌ）、ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．７６ｇ、９．４５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．７６ｍＬ、１２．６ｍｍｏｌ）を添加した。１２０℃で１７時間加熱した。室温に冷却し、酢酸エチル及び水を添加した。有機層を分離し、水及び飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。有機層を回収し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル１．１４ｇ（５８％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３０９［Ｍ＋Ｈ］
【００７４】
４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．１４ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）＝１：１溶液に添加した。ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を使用して１０％のＰｄ／Ｃを添加した。反応をパージし、更に水素を添加した。パージ／充填サイクルを２回繰り返し、水素バルーン下に反応液を配置し、室温で２０時間撹拌した。セライト（登録商標）パッドで反応液を濾過し、ＥｔＯＡｃで瀘過物ケーキを洗浄した。濾過水を回収し、減圧下で濃縮し、標題化合物１．０１ｇ（９８％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２７９［Ｍ＋Ｈ］
【００７５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２】
【００７６】
調製８：４−（５−アミノ−３−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中に２，３−ジクロロ−５−ニトロ−ピリジン（２．０ｇ、１０．３６ｍｍｏｌ）、ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．１２ｇ、１１．４０ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．７２ｇ、１２．４３ｍｍｏｌ）を添加した。８０℃で２．５日間加熱した。室温に冷却し、酢酸エチル及び水を添加した。有機層を分離し、水及び飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。有機層を回収し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、４−（３−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル３．２９ｇ（９３％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３４１［Ｍ＋Ｈ］
【００７７】
メタノール（５０ｍＬ）中に、４−（３−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．０９ｇ、９．０１ｍｍｏｌ）を添加した。塩化ニッケル（ＩＩ）六水和物（１０．７ｇ、４５．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を０℃に冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（５．１１ｇ、１３５．１５ｍｍｏｌ）を徐々に添加し、０℃で２時間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、セライト（登録商標）パッドで濾過した。ＣＨ２Ｃｌ２で瀘過物ケーキを洗浄し、濾過液を回収した。濾過液に飽和重炭酸ナトリウム水溶液を添加し、有機層を分離した。ＣＨ２Ｃｌ２（２×３０ｍＬ）で水性層を抽出した。有機抽出液を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜７０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物１．７７ｇ（６３％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３１１．２［ＭＨ］
【００７８】
調製９：ｒａｃ−［（ｔｒａｎｓ）−４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−ピペラジン−１−イル］−シクロプロピル−メタノン
【化１４】
【００７９】
１５ｍＬの無水ジクロロメタン中にトランス−２，５−ジメチルピペラジン（５００ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ、１．０当量）を溶解させた。５ｍＬのジクロロメタンに溶解させたジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボン酸塩（９５３ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加した。室温で２０時間撹拌した。白色固体をフィルターで濾過し、４３０ｍｇのＮ−ＢＯＣ−トランス−２，５−ジメチルピペラジン（５０％の収率）を得た。１ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ４）ｄｐｐｍ ４．１１（ｍ，１Ｈ）、３．５５（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｍ，１Ｈ），３．００（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，２．９Ｈｚ，１Ｈ），２．４９（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝７．６，３Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【００８０】
５ｍＬの無水ＤＭＦ中に２−クロロ−３−メチル−５−ニトロピリジン（３１０ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＮ−ＢＯＣ−トランス−２，５−ジメチルピペラジン（３９７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、１．１当量）を溶解させ、炭酸カリウム（２５１ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、８０℃で２０時間混合物を撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃ：氷水＝１：１（ｖ／ｖ）の混合物に注入した。ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で水溶性相を抽出し、水（３×２０ｍＬ）及び飽和塩化ナトリウム水（３０ｍＬ）で混合有機層を洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機溶液を乾燥させ、減圧下で濃縮し、クルードなｒａｃ−（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た：ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２５１．２（Ｍ＋Ｈ）。
【００８１】
室温で、ジオキサン（４．２ｍＬ）中の４Ｍ ＨＣｌを、ｒａｃ−（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．１５ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）に添加し、撹拌した。１時間後、減圧下で濃縮し、白色固体としてｒａｃ−（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−１−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン 二塩化水素塩０．１３８ｇを得た。（定量分析）ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２５１．２［Ｍ＋Ｈ］
【００８２】
ＥＤＣＩ（０．１４７ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１０ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、ｒａｃ−（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−１−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン 二塩化水素塩（０．１６ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中溶液に、シクロプロピルカルボン酸（５６μＬ、０．７ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下、室温で添加し、更にＤＩＥＡ（０．２２ｍＬ、１．２８ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、濃縮し、残余物を得た。当該残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、５０〜７０％＝ヘキサン：ＡｃＯＥｔで溶出し、０．１１４ｇのｒａｃ−シクロプロピル−［（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（５６％は、降伏する）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３１９．１［Ｍ＋Ｈ］
【００８３】
Ｎ２雰囲気下、ｒａｃ−シクロプロピル−［（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（０．１１４ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及び１０％ Ｐｄ／Ｃ（０．０４３ｇ）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、ＮＨ４ＣＯＯＨ（０．２３ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で加熱した。２時間後、反応混合物を冷却し、セライト（登録商標）で濾過した。減圧下で濃縮し、０．１ｇの標題化合物を得た。（定量的分析）ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２８９．３［Ｍ＋Ｈ］
【００８４】
調製１０：１−［４−（５−アミノ−４−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン
８０℃で一晩、密封した試験管中で、２−クロロ−４−メチル−５−ニトロ−ピリジン（０．８５ｍｍｏｌ、０．１５ｇ）、２，２−ジメチル−１−ピペラジン−１−イル−プロパン−１−オン塩酸塩（０．９４ｍｍｏｌ、０．１６ｇ）及びトリエチルアミン（２．１２ｍｍｏｌ、０．３ｍＬ）の溶液を撹拌した。室温に混合物を冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、２，２−ジメチル−１−［４−（４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−プロパン−１−オンを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（３０％〜最高６０％）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３０７［Ｍ＋Ｈ］
【００８５】
２，２−ジメチル−１−［４−（４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−プロパン−１−オン（０．３１ｍｍｏｌ、０．０９ｇ）の２ｍＬのエタノール中溶液に、１０％（０．０３１ｍｍｏｌ）アンモニウムギ酸塩（１．５５ｍｍｏｌ、０．１ｇ）及びパラジウム（炭素）を添加した。９０℃で１時間溶液を撹拌した。冷却し、セライト（登録商標）パッドで濾過し、減圧下で濃縮した。残余物は更なる精製をせずに使用できるものであった。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２７７［Ｍ＋Ｈ］
【００８６】
上記の第２の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表３】
【００８７】
調製１２：１−［４−（５−アミノ−４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン
【化１５】
【００８８】
処理Ａ：２，４−ジクロロ−ピリジン（６．７ｍｍｏｌ、１ｇ）、Ｎ−Ｂｏｃピペラジン（８．１ｍｍｏｌ、１．５ｇ）、ナトリウムｔｅｒｔブトキシド（９．５ｍｍｏｌ、０．９ｇ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．７ｍｍｏｌ、０．１５ｇ）及び２−（ジ−ｔ−ブチルホスフィノ）ビフェニル（０．７ｍｍｏｌ、０．２ｇ）のトルエン中溶液を、１００℃で４時間、窒素雰囲気下で撹拌した。室温に冷却し、水を添加した。酢酸エチル中に抽出し、有機層を水及び飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物として４−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。当該残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（１０％〜５０％）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２９８［Ｍ＋Ｈ］
【００８９】
処理Ｂ：４−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．６ｇ、１．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２ＣＬ２（４ｍＬ）中溶液を室温においてＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ溶液、１．５ｍＬ、５．９ｍｍｏｌ）で処理した（わずかな発熱が生じた）。混合物を３時間撹拌し、更にＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ溶液、１．５ｍＬ、５．９ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。減圧下で濃縮し、塩酸１−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジンを得、Ｅｔ２Ｏ（０．４３ｇ）で粉末化した。ＬＣＭＳ ＥＳ＋（ｍ／ｚ）１９８［Ｍ＋Ｈ］。
【００９０】
処理Ｃ：１−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン塩酸（２．２ｍｍｏｌ、０．４ｇ）、トリエチルアミン（７．６ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）／（１３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２）及びピバロイルクロライド（２．２ｍｍｏｌ、０．３ｍＬ）を室温で一晩撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、飽和水塩化ナトリウム及び水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、１−［４−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オンを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２８２［Ｍ＋Ｈ］
【００９１】
処理Ｄ：硫酸（２．３ｍＬ）中に１−［４−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン（１．６ｍｍｏｌ、０．４ｇ）を溶解させ、溶液を０℃に冷却した。硝酸カリウム（１．６ｍｍｏｌ、０．２ｇ）を添加し、混合物を撹拌し、一晩かけて室温に戻した。混合物を水で希釈し、塩基性ｐＨとなるまで１０％水酸化ナトリウムを添加した。酢酸エチル中に抽出した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物として１−［４−（４−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オンを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル混合物（３０％〜最高６０％）で溶出させた。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３２７［Ｍ＋Ｈ］
【００９２】
処理Ｅ：テトラヒドロフラン：水＝１：１溶液２２ｍＬ中の１−［４−（４−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン（０．９ｍｍｏｌ、０．３ｇ）、及び４ｍＬのアンモニアの混合液中に、亜ジチオン酸ナトリウム（４．５ｍｍｏｌ、０．８ｇ）を添加した。室温で２時間溶液を撹拌した。減圧濃縮し、酢酸エチル中に残余物を抽出した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た（更に精製せずに用いた）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２９７［Ｍ＋Ｈ］
【００９３】
上記の処理Ｃ−Ｅの方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表４】
【００９４】
調製１４：［４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン
【化１６】
【００９５】
２２Ｌのフラスコに酢酸（５Ｌ）を添加した。氷水浴中に反応液を添加した。撹拌しながらピペラジン（３５５．００ｇ、２．０当量、４．０６ｍｏｌ）を徐々に添加し、温度を〜４０℃に上昇させた。更に酢酸を５Ｌ添加した。混合物が溶液状になるまで撹拌した。冷却バスを〜１３℃に調整した。塩化２，６−ジフルオロベンゾイル（３５５．００ｇ、１．００当量、２．０１ｍｏｌ、２５３．３９ｍＬ）を２時間にわたって滴下して添加し、約１３〜１５℃に反応温度を維持した。一晩撹拌した。減圧下で濃縮し、２Ｌの氷水中に残余物を溶解させた。氷水浴中のフラスコを冷却した。５Ｎ ＮａＯＨを添加し、ｐＨを７．５に調整し、３０℃以下に反応温度を維持した。〜１０℃において濾過した。ジクロロメタン（４×２Ｌ）を用いて濾過液から目的の化合物を抽出した。減圧下で溶媒を除去した。室温で１．５Ｌのメタノール中に固体を溶解させ、濾過した。メタノール溶液を濃縮し、２．０Ｌのトルエンで溶媒を交換し、純粋な生成物を得た。濾過し、（２，６−ジフルオロフェニル）−ピペラジン−１−イル−メタノンを得た。濾過液を濃縮し、再度濾過し、更なる生成物（合計４００ｇ）を得た。
【００９６】
オーバーヘッドスターラーを備える５Ｌのフラスコ中に、（２，６−ジフルオロ−フェニル）−ピペラジン−１−イル−メタノン（１．０７当量、１．５５ｍｏｌ、３５０．００ｇ）、メタノール（３７．０６ｍｏｌ、１．５０Ｌ，１．１９ｋｇ）、トリエチルアミン（１．７９ｍｏｌ、２５０．００ｍＬ、１８１．５０ｇ）、６−クロロ−２−メチル−３−ニトロ−ピリジン（１．００当量、１．４５ｍｏｌ、２５０．００ｇ）を添加した。室温で０．５時間反応混合物を撹拌した。徐々に６０℃に加熱し、６０℃で一晩撹拌を継続させた。温度を６０℃に維持しながら、水（７５０ｍＬ）を滴下して添加した。混合物を室温に冷却させた。濾過し、ケーキ状物を１５０ｍＬメタノール／水＝２：１、次いでＭＴＢＥで２回洗浄した。４５℃で減圧下で乾燥させ、黄色の固体（５３５ｇ）として（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノンを得た。
【００９７】
３ガロンオートクレーブに、（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（１．００当量、１．４４ｍｏｌ、５２０．００ｇ）、メタノール（１９７．６６ｍｏｌ、８．００Ｌ、６．３３ｋｇ）及びＴＨＦで湿らせた５％のパラジウム／炭素（７５．００ｇ）を添加した。３０℃以下に温度を維持しながら、室温で、５０ｐｓｉで反応液を水素化した。０．５時間後に２６℃に冷却し、２時間静置した。フィルターに通し、減圧下で濃縮した。濾過して固体を得、メタノール、更にヘプタンでリンスした。更に濾過を行い、［４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノンの第２バッチを得た。減圧下で４５℃で乾燥させた（４４５ｇ）。
【００９８】
調製１５：［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン
Ｋ２ＣＯ３（３４．５５ｇ、０．２５０ｍｏｌ）で、無水ＤＭＦ（２７０ｍＬ）中の２−クロロ−３−メチル−５−ニトロ−ピリジン（２７．００ｇ、０．１５６ｍｏｌ）及びピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３２．０３ｇ、０．１７２ｍｏｌ）のスラリーを処理し、Ｎ２の下で８０℃で一晩反応混合物を加熱した。得られる反応混合物を１／１＝ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏ（３，０００ｍＬ）に注入し、層を分離し、ＥｔＯＡｃ（１，０００ｍＬ）で水性層を抽出した。飽和塩化ナトリウム水（１，０００ｍＬ×３）で混合有機層を洗浄し、ＭｇＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、黄色の固体を得た。ヘキサン／ＥｔＯＡｃの黄色の固体をスラリー化し、減圧濾過し、得られた固体を回収した。ヘキサンで洗浄し、真空濾過し、黄色の固体として４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た（４２．８４ｇ）。減圧下で濾過物を濃縮し、黄色の固体を得た。ヘキサン中に黄色の固体をスラリー化し、次に減圧濾過して得られる固体を回収し、ヘキサンで洗浄し、減圧濾過して乾燥させ、更なる（５．３８ｇ）４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル化合物を、黄色の固体として（４８．２２ｇ、９５．９％の収率）得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．９６（ｄ，１Ｈ），８．１４（ｄ，１Ｈ），３．５７（ｍ，４Ｈ），３．４１（ｍ，４Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）、ＴＯＦ−ＭＳ［ＥＳ＋，Ｍ＋Ｈ］Ｏｂｓ．ｍ／ｚ３２３．１７２３，Ｃａｌｃ．ｍ／ｚ３２３．１７１９、Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ＦｏｒＣ１５Ｈ２２Ｎ４Ｏ４：Ｃ５５．８８、Ｈ６．８７、Ｎ１７．３７。Ｆｏｕｎｄ Ｃ５５．９４、Ｈ６．８７、Ｎ１７．１４．
【００９９】
ジオキサン（４当量）中の４Ｍ ＨＣｌ溶液を、ＤＣＭ（７３ｍＬ）中の４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７．７７ｇ、２４．１３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。室温で一晩混合物を撹拌した。更に２当量のＨＣｌのジオキサン中溶液を添加した。開始原料がＬＣＭＳにより検出されなくなった後、固体をフィルター濾過し、減圧下で乾燥させ、黄色がかった固体として塩酸６．９１ｇ（９７％収率）の１−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジンを得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：２５９［Ｍ＋１］
【０１００】
１−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジンの懸濁液にトリエチルアミン塩酸塩（ＤＣＭ（１２０ｍＬ）中、６．９１ｇ、２４．１３ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。２，６−ジフルオロベンゾイルクロライド（１当量）を添加し、室温で一晩混合物を撹拌した。更に２，６−ジフルオロベンゾイルクロライド（１．６ｍＬ）及びトリエチルアミン（１．５の同等）を添加し、反応を完了させた。反応液を一晩静置した。ＤＣＭで希釈し、水で数回抽出した。Ｎａ２Ｓ２Ｏ４の上で有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去した。ヘキサンで数回固体を洗浄し、（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノンを８．０８ｇ（９３％収率）得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：３６３［Ｍ＋１］
【０１０１】
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１６６ｍＬ、１：１）中の（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（３ｇ、８．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４（１０の同等）及びアンモニア水（３ｍＬ／ｍｍｏｌ、３２％）を添加した。３０分間撹拌し、次に層を分離した。ＤＣＭ、ＥｔＯＡｃ及びイソプロピルアルコール／ＥｔＯＡｃで水性層を抽出した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去した。Ｖａｒｉａｎ（商標）ＳＣＸカラムに粗生成物を添加し、ＭｅＯＨでカラムを洗浄し、次にＭｅＯＨ中の２Ｍ ＮＨ３で溶出し、［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン１．２ｇ（４４％収率）を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：３３３［Ｍ＋１］
【０１０２】
調製１６：４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１７】
【０１０３】
ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−オル（１．５４ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．０５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、及びトリフェニルホスフィン（４．０２ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）の冷却混合物に、０℃で滴下状してジイソプロピルアゾジカルボキシレート（３．０ｍＬ、１５．５ｍｍｏｌ）を添加した。添加完了後、冷却バスを除去し、２２℃で一晩反応混合物を撹拌した。減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出させ、無色の油状物（２．６９ｇ、８０％収率）として４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３３８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１０４】
水素雰囲気下、２２℃で２時間、４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．６９ｇ、８．０ｍｍｏｌ）及び１０％のパラジウム／炭素（１．０ｇ）のエタノール（６０ｍＬ）中混合物を撹拌した。パラジウム触媒を濾過して除去した。濾過液を濃縮し、無色の油状物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出させ、標題化合物を得た（２．１９ｇ、８９％収率）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３０８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１０５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表５】
【０１０６】
調製１８：４−（５−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．５ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の氷冷無水ＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、プレウォッシュしたＮａＨ（０．１ｇ、２．４８ｍｍｏｌ、鉱油中６０％の分散形態）のＴＨＦ（２ｍＬ）中懸濁液を添加した。混合物を２０分間撹拌させ、２−クロロ−５−ニトロ−ピリジン（０．３６ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加完了後、冷却バスを除去し、２２℃で一晩反応混合物を撹拌した。アイスバスで反応混合物を冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を添加した。酢酸エチル（２５ｍＬ）及び蒸留水（２５ｍＬ）により、反応混合物を分離させた。水性相を単離し、酢酸エチル（３×３５ｍＬ）で抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出させ、白色固体（０．５５ｇ、７５％収率）として４−（５−ナイトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３２４．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１０７】
水素雰囲気下、室温で４時間、４−（５−ナイトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．７ｇ、８．３５ｍｍｏｌ）及び１０％のパラジウム／炭素（０．５ｇ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合液を撹拌した。パラジウム触媒を濾過して除去した。濾過液を濃縮し、得られた無色の油状生成物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで抽出し、白色固体として標題化合物を得た（２．１１ｇ、８６％）（ＥＳ＋（ｍ／ｚ）１９４．２［Ｍ＋Ｈ−ＢＯＣ］）。
【０１０８】
調製１９：［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２−フルオロ−フェニル）−メタノン
【化１８】
【０１０９】
４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６．４１ｇ、３１．８７ｍｍｏｌ）の氷冷無水ＴＨＦ（８０ｍＬ）中溶液に、プレウォッシュしたＮａＨ（１．２７ｇ、３１．８７ｍｍｏｌ、鉱油中６０％の分散）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中懸濁液を添加した。混合物を２０分間撹拌させ、２−クロロ−３−メチル−５ニトロピリジン（５ｇ、２８．９７ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加完了後、冷却バスを除去し、２２℃で一晩反応混合物を撹拌した。アイスバスで反応混合物を冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を添加した。酢酸エチル（３５０ｍＬ）及び蒸留水（１５０ｍＬ）を用いて反応混合液を分離させた。水性相を単離し、酢酸エチル（１×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、白色固体（６．５ｇ、６７％収率）として４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３６０．３［Ｍ＋Ｎａ］
【０１１０】
４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０．１２ｇ、３０ｍｍｏｌ）の冷却ジクロロメタン（４５０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１５０ｍＬ）を添加した。２２℃で６０分間反応混合液を撹拌した。溶媒の除去後、残余物を１Ｎ水酸化ナトリウム（１５０ｍＬ）で処理し、ジクロロメタン及び酢酸エチルで抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させた。溶媒を除去し、黄色の固体（６．９ｇ、９７％収率）として、３−メチル−５−ニトロ−２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジンを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２３８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１１１】
３−メチル−５−ニトロ−２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジンのジクロロメタン（５０ｍＬ）中溶液に、２−フルオロ−ベンゾイル塩化物（１．７４ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．２１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、室温で２時間、Ｎ２雰囲気下で撹拌した。蒸留水（３×２０ｍＬ）、更に飽和塩化ナトリウム水溶液（１×２０ｍＬ）で反応混合物を洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機相を乾燥させ、濃縮し、黄色の固体として（２−フルオロ−フェニル）−［４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノンを得た。
【０１１２】
水素雰囲気下、２２℃で一晩、（２−フルオロ−フェニル）−［４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノン（３．５８ｇ、１０ｍｍｏｌ）及び１０％のパラジウム／炭素（３５８ｍｇ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合物を撹拌した。濾過して触媒を除去した。濾過液を濃縮し、無色油状物を得た。当該油状物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチル（１：１）、更に７０％酢酸エチル／ヘキサンで抽出し、黄色の固体（２．２７ｇ、５０％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３３０．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１１３】
調製２０：４−（４−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
窒素パージした、２−クロロ−４−ニトロ−ピリジン（４．３２ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル４−ヒドロキシピペリジンカルボキシレート（１１．０ｇ、５４．５ｍｍｏｌ）、セシウムカーボネート（１３．３ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）、パラジウムアセテート（１２２ｍｇ、０．５４４ｍｍｏｌ）及び２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（２７１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の混合物に、１００ｍＬのトルエンを添加した。室温で一晩混合物を撹拌し、水及び酢酸エチルにより分離させた。更に酢酸エチルで水性層を抽出し、硫酸ナトリウム上で混合有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜２０％の酢酸エチル／ヘキサン勾配で溶出し、白いワックス様の固体（５．３７ｇ、６１％、ＬＣＭＳＥＳ＋（ｍ／ｚ）２６８［Ｍ−ｔＢｕ］＋）として４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。
【０１１４】
４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．０ｇ、９．２８ｍｍｏｌ）及び５％のＰｄ／Ｃ（１５１ｍｇ）のＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中スラリーを、室温で一晩、６０ｐｓｉ（Ｐａｒｒ ｓｈａｋｅｒ）で水素雰囲気下に置いた。反応混合液をセライト（登録商標）パッドで濾過し、減圧下で濃縮し、白色固体（２．６ｇ、９５％収率）として標題化合物を得た。ＬＣＭＳ ＥＳ＋（ｍ／ｚ）２９４［Ｍ＋Ｈ］
【０１１５】
調製２１：［４−（４−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン
２−クロロ−４−ニトロピリジン３ｇ（１８．９ｍｍｏｌ）、４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７．６ｇ（３７．８ｍｍｏｌ）、［１，１’］ビナフタレニル−２−イル−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスファン１８８ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム８５ｍｇ（０，３８ｍｍｏｌ）、及び炭酸セシウム９．２ｇ（２８．４ｍｍｏｌ））を５００ｍＬのフラスコに添加し、Ｎ２で１０分間パージした。次に無水トルエン（５００ｍＬ）を添加し、Ｎ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。水及びＥｔＯＡｃ（それぞれ５００ｍＬ）で反応液を分離させた。有機層を分離した。ＭｇＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサンの混合液を用い、１０×カラム体積で５〜２０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出し、白色固体として標題化合物の４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１．２ｇ（３４％収率）を得た。（ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝３２４［Ｍ＋Ｈ］。
【０１１６】
１．２ｇの４−（４−ナイトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルに４Ｍ ＨＣｌのＥｔ２Ｏ中溶液８ｍＬを添加し、４時間懸濁液を撹拌した。溶媒を蒸発させ、Ｅｔ２Ｏで残留する固体を粉末化し、淡黄色の固体として１．１ｇ（１００％収率）の４−ニトロ−２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジンジヒドロクロライドを得た（ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝２２４［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１１７】
１．１ｇ（３．７ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジンジヒドロクロライドの無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中懸濁液にトリエチルアミン（２．５７ｍＬ、１８．５ｍｍｏｌ）を添加した。次に、２，６−ジフルオロベンゾイル塩化物（０．５１２ｍＬ、４．０７ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩混合物を撹拌した。水（５０ｍＬ）を添加し、有機層を分離した。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、黄色の固体として（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノン１．２２ｇ（９１％収率）を得た（ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝３６４［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１１８】
（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノンの１．１ｇ（３．０ｍｍｏｌ）の氷酢酸（１０ｍＬ）中溶液に鉄粉末（４１９ｍｇ、７．５ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で撹拌した。１５分後に混合物を室温に戻し、セライト（登録商標）で濾過した。Ｅｔ２Ｏ及びＥｔＯＡｃでセライト（登録商標）パッドを洗浄した。水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び飽和塩化ナトリウム水溶液で、得られた有機層を洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４を通じて乾燥させ、溶媒を蒸発させ、白色固体として標題化合物８３１ｍｇ（８３％収率）を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝３３４［Ｍ＋Ｈ］。
【０１１９】
調製２２：４−（５−アミノ−ピリジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１９】
【０１２０】
無水エタノール中にＮ−Ｂｏｃ−４−アミノピペリジン（０．９ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を溶解させ、０℃で固体の炭酸ナトリウム（０．８ｇ、７．９ｍｍｏｌ）、更に２−クロロ−５−ニトロ−ピリジン（０．６ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩溶液を撹拌し、９℃で６時間溶液を加熱した。室温で一晩撹拌した。減圧下で溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＨ及び水を用いて粗製混合物を分離させた。ＥｔＯＡｃで抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で有機層を洗浄した。有機層を混合し、ＭｇＳＯ４を通じて乾燥させた。溶媒を濾過し、蒸発させ、４−（５−ナイトロ−ピリジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。
【０１２１】
４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．４ｍｍｏｌ、０．８ｇ）の２０ｍＬの酢酸エチル中溶液に、ＳｎＣｌ２・Ｈ２Ｏ（１１．８ｍｍｏｌ、２，７ｇ）を添加した。室温で一晩溶液を撹拌した。溶液のｐＨが塩基性となるまでＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、酢酸エチルで抽出した。セライト（登録商標）パッドで懸濁液を濾過した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２９３［Ｍ＋Ｈ］
【０１２２】
調製２３：メチル１−メチルシクロヘキサンカルボキシレート
１−メチルシクロヘキサンカルボン酸（７．１１ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）及びＥｔ２Ｏ（４０ｍＬ）中溶液を、トリメチルシリルジアゾメタン（２．０Ｍ／ヘキサン、２６ｍＬ、５２ｍｍｏｌ）の滴下により処理した。室温で一晩反応混合物を撹拌し、減圧下で濃縮し、澄んだ淡黄色の油状物（７．８１１ｇ、５０ｍｍｏｌ、１００％）として標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１５６［Ｍ＋Ｈ］
【０１２３】
調製２４：３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピオン酸 ベンジルエステル
【化２０】
【０１２４】
２，３−ジヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（４２３．２ｍｍｏｌ、５０ｇ）のＤＭＦ ３００ｍＬ中溶液に、水酸化カリウム（４８６．７ｍｍｏｌ、３２．１ｇ）を添加した。１００℃で１時間溶液を撹拌し、臭化ベンジルを添加した。一晩溶液を撹拌した。混合物を冷却し、酢酸エチルで希釈した。水で有機層を洗浄した。酢酸エチルで水性層を数回洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ：７．３６−７．３２（ｍ，５Ｈ），５．１（ｓ，２Ｈ），３．５（ｓ，２Ｈ），１．２１（ｓ，６Ｈ）．
【０１２５】
調製２５：１−フルオロメチル−シクロプロパンカルボン酸 エチルエステル
【化２１】
【０１２６】
１−フルオロ−シクロブタンカルボン酸 エチルエステル（１．６ｇ、８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２２ｍＬ）及び水（２７４ｍＬ）中溶液に、ＡｇＦ（４．５当量、４．５６ｇ）を添加した。激しく撹拌しながら、８０℃で２０時間、密封した試験管内で混合物を加熱した。混合物を冷却し、セライト（登録商標）で濾過した。減圧下で溶媒を除去し、油状物（０．８１ｇ、６１％収率）として標題化合物を得た（更なる精製なしで使用した）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１４７．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１２７】
調製２６：１−トリフルオロメチル−シクロプロパンカルボン酸 メチルエステル
１−トリフルオロメチルシクロプロパンｅ−１−カルボン酸（３．６５ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）のメタノール−ヘキサン（２．５ｍＬ−２２．５ｍＬ）中溶液に、２Ｍのジアゾメタンのヘキサン（１４．２ｍＬ、２８．４５ｍｍｏｌ）中溶液を添加した。減圧下で濃縮し、残余物を蒸留し、黄色の油状物（２．９３ｇ、７３％収率）として標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１６９．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１２８】
調製２７：３−オキソ−３−（１−トリフルオロメチル−シクロプロピル）−プロピオニトリル
１−トリフルオロメチル−シクロプロパン−１−カルボン酸メチル・エステル（２．９３ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（１．４３ｇのｍＬ、３４．８ｍｍｏｌ）の無水アセトン（氷）で冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、２ＭのＬＤＡのＴＨＦ（１９．１５ｍＬ、３８．３ｍｍｏｌ）中溶液を添加した。−７０℃で１．５時間の反応混合物を撹拌し、更に２時間にわたり２２℃に加熱した。濃縮し、ヘキサンを添加し、濾過し、黄色の固体を得た。ヘキサンで洗浄し、ジエチルエーテル（２５０ｍＬ）及び２Ｎ ＨＣｌ（１５０ｍＬ）で処理した。ジエチルエーテル（４×１００ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、３−オキソ−３−（１−トリフルオロメチル−シクロプロピル）−プロピオニトリル（２．９９ｇ、９７％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｚ＝１７６．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１２９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表６】
【０１３０】
調製３０：５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−（６−メチル−ピリジン−３−イル）−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン
【化２２】
【０１３１】
３−オキソ−３−（１−トリフルオロメチル−シクロプロピル）−プロピオニトリル（２．６６ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−ベンズヒドリデン−Ｎ’−（６−メチル−ピリジン−３−イル）−ヒドラジン（ＴＬ、２００２、４３、２１７１−２１７３）（４．３１ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）及びｐ−トリルスルホン酸（１４．２９ｇ、７５．０ｍｍｏｌ）のエタノール（８５ｍＬ）中混合物を、密封した試験管内で９０℃で１８時間加熱した。溶媒の除去後、残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜５％のジクロロメタン／メタノールで溶出し、茶色の固体（２．２９ｇ、５４％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２８３．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１３２】
調製３１：５−ペンタフルオロエチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン
【化２３】
【０１３３】
４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−３−オキソ−ペンタンニトリル（４．０ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）及びｐ−トリル−ヒドラジン（１０ｇ、６４．１ｍｍｏｌ）のエタノール（２０ｍＬ）中混合物を、密封した試験管中で９５℃で１５時間加熱した。室温に冷却後、減圧下で溶媒を除去し、黄色の固体を得た。ジクロロメタン（２５０ｍＬ）、蒸留水（１５０ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を用いて固体を分散させた。水性相を単離し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）で抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮し、暗い金色の油状物を得た。当該油状物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、酢酸エチル及びヘキサンで抽出し、ライトブラウンの固体（３．２４ｇ、５２％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２９２．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１３４】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表７】
【０１３５】
調製３４：［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−（６−メチル−ピリジン−３−イル）−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
５−（１−トリフルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（２．２９ｇ、８．１ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．９ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）の氷塩冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、−１５℃で、２，２，２−トリクロロエチルクロロギ酸（１．８０ｇ、８．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を滴下して添加した。−１５℃で０．５時間撹拌し、更に２２℃で１時間撹拌し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び飽和水重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍＬ）を用いて反応混合物を分離させた。水性相を単離し、ジクロロメタンで２度（各２５ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、白色固体（２．４６ｇ、６６％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４５７．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１３６】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表８】
【０１３７】
調製３８：５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
【化２４】
【０１３８】
５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（４００ｇ、１．７４ｍｏｌ）のＴＨＦ（８Ｌ）中溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（２．４Ｌ）の飽和溶液を添加し、０℃に混合物を冷却した。次に２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（４０６．７７ｇ、１．９２ｍｏｌ）を滴下して添加し、更に０℃で２時間混合物を撹拌した。酢酸エチル（３×６．５Ｌ）で反応混合物を抽出し、無水硫酸マグネシウムを通じて乾燥し、濃縮した。最小量の酢酸エチルで固体を溶解させ、過剰量のヘキサンを添加して沈殿させた。濾過して固体を回収し、乾燥させ、オフホワイトの固体（５８６ｇ、８３％収率）として標題化合物を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３４（ｄ，２Ｈ），７．２９（ｄ，２Ｈ），６．７８（ｂｓ，１Ｈ），６．４１（ｂｓ，１Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，９Ｈ）．ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４０６．１［Ｍ＋Ｈ］．
【０１３９】
調製３９：［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロエチルエステル
【化２５】
【０１４０】
ＴＨＦ（１．５ｍＬ／ｍｍｏｌ、６０ｍＬ）とリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ、２．０Ｍ／ヘプタン、Ａｌｄｒｉｃｈ社製、２．２当量、８８ｍｍｏｌ、４４ｍＬ）を混合し、−７８℃に冷却した。メチル−１−メチルシクロプロパンカルボキシレート（ＴＣＩＵＳ、４．５６ｇ４０ｍｍｏｌ）及びＣＨ３ＣＮ（４．２０ｍＬ、８０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）中で混合し、撹拌しながら徐々に添加した。−６５〜−７８℃で１時間混合物を撹拌し、バスを除去し、室温に混合物を加温した。減圧下で反応混合物を濃縮し、スラリー状にした。ヘキサン（１５０ｍＬ）を添加し、スラリーから沈殿物を形成させた。減圧濾過して固体を回収し、ヘキサン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。キャッチフラスコを新しいものに置換し、５０ｍＬの２．５Ｍ ＨＣｌのフリット上で固体を溶解させ、フラスコ中で回収した。２０ｍＬの２．５Ｍ ＨＣｌ、更に２００ｍＬのＥｔ２Ｏでリンスした。濾過液を層分離させ、Ｅｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）で酸性相を抽出した。Ｅｔ２Ｏによる有機相を混合し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、澄んだ琥珀色の油状物（３．５８ｇ、２９．１ｍｍｏｌ、７３％の収率）として３−（１−メチル−シクロプロピル）−３−オキソ−プロピオニトリルを得た。精製せずに使用し、トリルヒドラジン塩酸（５．２３ｇ、３３．０ｍｍｏｌ）及びエタノール（２ｍＬ／ｍｍｏｌ）と、２０時間還流下で反応させた。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮させた。残余物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、水（２×６０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）水及び飽和塩化ナトリウム水（６０ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ４で有機相を乾燥させ、濾過し、遠心濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、酢酸エチル及びヘキサンの勾配で溶出し、５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（４．２２３８ｇ、１８．５ｍｍｏｌ、４６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２２８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１４１】
２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（３．７ｍＬ、２７．５ｍｍｏｌ）で、５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（５．６８ｇ、２５ｍｍｏｌ）及びピリジン（２．２ｍＬ、２７．５ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）ＴＨＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液を処理した。反応温度を０℃に維持し、２時間後、クロロホルメート（０．３ｍＬ）及びピリジン（０．２ｍＬ）を徐々に添加した。１時間後、反応液を水（１５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。水（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）水及び飽和塩化ナトリウム水（５０ｍＬ）で混合有機相を洗浄した。酢酸エチル／ヘキサンからシロップ状の粗生成物を再結晶させ、白色固体（８．１８ｇ、２０．３ｍｍｏｌ、８１％）として標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４０２．２／４０４．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１４２】
あるいは、５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（４．７５ｇ、２１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０５ｍＬ）及び飽和水溶性炭酸ナトリウム（３２ｍＬ）中溶液に、０℃で２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（３．０ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。この温度で２時間撹拌した。混合物を水に注入し、相を分離させた。酢酸エチルで水性相を抽出した。
【０１４３】
処理Ａ：
有機層を混合し、塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、黄色の固体を得た。最小量の酢酸エチルで固体を溶解させ、撹拌しながら、濁りが生じるまでヘキサンを添加した。標題化合物を結晶化させ、濾過し白色固体を得た。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：９．８９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），６．１２（ｓ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｑ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ），０．７１（ｑ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ）．
【０１４４】
処理Ｂ：
イソプロピルアルコール（９１．５６ｍｏｌ）で、酢酸エチル溶媒を置換した。＜０℃で２時間スラリーを撹拌し、濾過し、冷却イソプロピルアルコール（１３．０８ｍｏｌ）で洗浄し、減圧下、４０℃で一晩乾燥させ、白い結晶状の固体として標題化合物を得た。
【０１４５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表９】
【０１４６】
調製４１：［５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
Ｎ２雰囲気下、−７８℃で３０分間にわたり、ジイソプロピルアミン（１．７ｍＬ、２．２ｅｑ、１２．１ｍｍｏｌ）及びｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ、７．５ｍＬ、２．２当量、１２．１ｍｍｏｌ）の１２ｍＬ ＴＨＦ中溶液からＬＤＡ溶液を調製した。１−フルオロメチルシクロプロパンカルボン酸 エチルエステル（０．８１ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の７ｍＬ ＴＨＦ中溶液を添加した。混合物を撹拌し、−７８℃〜室温まで加温し、室温で５時間撹拌を継続させた。飽和ＮＨ４Ｃｌ水液を１０ｍＬ添加した。ＡｃＯＥｔを添加し、有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、溶媒を除去し、茶色の油状物（０．４２ｇ、５４％収率）を得た。１０ｍＬのＥｔＯＨ中に当該油状物を溶解させ、ｐ−トリルヒドラジン（０．４７ｇ、１ｅｑ、３ｍｍｏｌ）を添加した。９０℃で一晩、密封した試験管中で混合物を加熱した。混合物を冷却し、減圧下で溶媒を除去し、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、１５〜８０％＝ヘキサン／ＡｃＯＥｔで溶出し、油状物として０．３３６ｇの５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミンを得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２４６．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１４７】
窒素雰囲気下、０℃で５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（１７６ｍｇ、０．７１のｍｍｏｌ）及びピリジンの４ｍＬ ＴＨＦ中溶液に、ＣｌＣＯ２ＣＨ２ＣＣｌ３（１．００当量、７１７．４９μｍｏｌ、１５２．０１ｍｇ）を徐々に添加した。混合物を撹拌し、５時間にわたり０℃から室温まで加温した。不溶性物をろ過紙、減圧下で濾過液から溶媒を除去し、油状物を得た。当該油状物をクロマトグラフィに供し（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ、２０〜８０％）、黄色の油状物として１１０ｍｇの標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４２０．０［Ｍ＋Ｈ］
【０１４８】
調製４２：（２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中に、トリメチルシリル−ジアゾメタン（２Ｍ ＴＨＦ中）（２５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を添加した。−７８℃に反応液を冷却し、３０分にわたりリチウムジイソプロピルアミド（２Ｍ ＴＨＦ中）（２５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を添加した。メチルプロピオレート（４．４５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を添加し、−７８℃で２時間撹拌した。室温に加温し、１８時間撹拌した。酢酸エチル、水及び１Ｎ ＨＣｌを添加した。有機層を分離し、酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で水性相を抽出した。有機抽出液を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜６０％＝ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸 メチルエステル３．５９ｇ（３６％）を得た。
【０１４９】
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中に、５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸 メチルエステル（１．６０ｇ、８．０７ｍｍｏｌ）及び４−メチルフェニル−１−ホウ酸（１．６４ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）を添加した。４Å分子篩（１．５０ｇ）、更に酢酸銅（ＩＩ）（１．６１ｇ、８．８８ｍｍｏｌ）を添加した。次にトリエチルアミン（８ｍＬ）を添加し、室温で２．５日間撹拌した。反応液をセライト（登録商標）パッドで濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濾過液を回収し、飽和塩化アンモニウム水溶液を添加した。有機層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍＬ）で水性層を抽出した。有機抽出液を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜３０％＝ＥｔＯＡｃ：ヘキサンを溶出し、２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸 メチルエステル６５５ｍｇ（２９％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２８９．３［Ｍ＋Ｈ］。
【０１５０】
メタノール（２５ｍＬ）中に２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸 メチルエステル（６６５ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）を添加した。１Ｎ ＮａＯＨ（１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、５０℃で４時間加熱した。室温に冷却し、減圧下で濃縮した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びＣＨ２Ｃｌ２を添加した。有機層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）で水性層を抽出した。有機抽出液を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸の６２０ｍｇ（９８％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２７５．３［Ｍ＋Ｈ］
【０１５１】
２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（６２０ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブタノール（５ｍＬ）及びトルエン（５ｍＬ）に添加した。トリエチルアミン（０．３７８ｍＬ、２．７１ｍｍｏｌ）、更にジフェニルホスホリルアジ化物（０．５８６ｍＬ、２．７１ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で１時間加熱した。次に１００℃で１９時間加熱した。減圧下で反応液を濃縮させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜３０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、（２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル５０４ｍｇ（６５％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３４６．４［Ｍ＋Ｈ］
【０１５２】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に（２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５０４ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を添加した。４ＭのＨＣｌ／ジオキサン（４ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で３時間加熱した。反応液を室温に冷却し、Ｖａｒｉａｎ（商標）ＳＣＸカラムにロードした。ＭｅＯＨでカラムを洗浄し、生成物を２Ｍ ＮＨ３／ＭｅＯＨで溶出した。濾過水を回収し、減圧下で濃縮し、２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミンの１７５ｍｇ（４９％）を得た。
【０１５３】
酢酸エチル（１０ｍＬ）中に２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（１７０ｍｇ、０．６９３ｍｍｏｌ）を添加した。炭酸カリウム（１９１ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）及び水（２ｍＬ）を添加した。反応液を撹拌し、トリクロロエチルクロロホルメート（０．１１４ｍＬ、０．８３１ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１８時間撹拌した。水及び酢酸エチルを添加した。有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。有機層を回収し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜３０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物２８０ｍｇ（９６％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４２０．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１５４】
調製４３：［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチル・プロピオン酸（１００ｇ）のＭｅＯＨ（１Ｌ、ＨＰＬＣグレードの溶媒）中懸濁液に、Ｈ２ＳＯ４（４．５ｇ）を添加し、室温で週末（約７０時間）に撹拌した。溶媒を除去し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）及びＨ２Ｏ（１００ｍＬ）を用いて残余物を分離させた。ＥｔＯＡｃで水性層を再度抽出し、ＭｇＳＯ４上で混合有機層を乾燥させた。濾過し、減圧下で濃縮し、３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチルプロピオン酸 メチルエステルを得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ３．９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），２．８（ｂｓ，２Ｈ），１．１（ｓ，３Ｈ）．
【０１５５】
３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチル・プロピオン酸の酸性メチル・エステル（３２．５ｇ）の冷却（−７８℃）ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）及び２，６−ルチジン（８０ｍＬ）中溶液に、Ｔｆ２Ｏ（８０ｍＬ）を滴下して添加した。反応液を室温に戻し、生成物点のみがＴＬＣ分析によって検出されるようになるまで（約２時間）撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ（３％の水溶液）で洗浄した。ＭｇＳＯ４上で有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、５％ヘキサン／酢酸エチルで溶出し、無色の油状物として２−メチル−２，３−ビス−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−プロピオン酸 メチルエステルを得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ４．７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），４．５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），３．８（ｓ，３Ｈ），１．４（ｓ，３Ｈ）．
【０１５６】
２−メチル−２，３−ビス−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−プロピオン酸メチル・エステル（６５．９ｍｍｏｌ、２６．３ｇ）の無水ＴＨＦ ５００ｍＬ中溶液に、１Ｍ（１３２ｍｍｏｌ、１３２ｍＬ）ＴＢＡＦを添加し、０℃まで冷却した。一晩撹拌した。減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を添加した。飽和塩化ナトリウム水で有機層を洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウム上で及び乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチルプロピオン酸 メチルエステルを得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ：４．７−４．４（ｍ，４Ｈ），３．５（ｓ，３Ｈ），０．９８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）．
【０１５７】
３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチルプロピオン酸 メチルエステル（２８．２ｍｍｏｌ、４．３ｇ）の１００ｍＬの無水ＴＨＦ中溶液に、２．０Ｍ ＬＤＡ（６２．０ｍｍｏｌ、３１ｍＬ）、更に無水アセトニトリル（５６．４ｍｍｏｌ、２．９ｍＬ）を添加し、−７８℃に冷却した。−７８℃で２時間撹拌し、溶液を一晩静置し、室温に加温した。減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を添加した。飽和塩化ナトリウム水及び１０％ＨＣｌ水で有機層を洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。９０℃で一晩、３１ｍＬのエタノール中で、ｐ−トリルヒドラジン塩酸塩（１５．５ｍｍｏｌ、２．５ｇ）及び得られた残余物（１５．５ｍｍｏｌ、２．５ｇ）を撹拌した。濃縮し、残余物を水に溶解させた。１０％の水酸化ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチルで抽出した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミンを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル（１５％〜５０％まで）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２６６［Ｍ＋Ｈ］
【０１５８】
５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（７．３ｍｍｏｌ、１．９ｇ）の３７ｍＬのＴＨＦ中溶液に、２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（８．１ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）及び水炭酸ナトリウム溶液（４．８ｍＬ）を添加した。２４時間撹拌した。水に当該溶液を注入し、酢酸エチルで抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４４０［Ｍ＋Ｈ］
【０１５９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１０】
【０１６０】
調製４５：４−（５−｛３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２６】
【０１６１】
４−（５−アミノ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製４、１．０５当量、０．５８４５ｇ）、［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロエチルエステル（調製３９、１．０当量、０．８０５４ｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（２当量、０．７ｍＬ）のＤＭＳＯ（０．２５Ｍ、８ｍＬ）中溶液を、６０℃で６時間加熱した。得られた混合物を室温に冷却し、水（２０ｍＬ）を添加した。ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出し、水（１０ｍＬ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で混合有機相を洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタン勾配で溶出させた。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３２．３［Ｍ＋Ｈ］
【０１６２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１１】
【０１６３】
調製４９：４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製３、４１．２０ｇ、１４０．９ｍｍｏｌ）、（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、５７．０３ｇ、１４０．９ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（３６．８ｍＬ、２１１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５００ｍＬ）中溶液を、６０〜６５℃で２．５時間加熱した。最後の３０分の間に更にＤＭＳＯ（１００ｍＬ）を添加し、厚いスラリーを形成させた。室温にスラリーを冷却し、一晩静置した。ジエチルエーテル（６００ｍＬ）を添加し、室温で１時間スラリーを撹拌した。濾過し、ジエチルエーテル（５×３００ｍＬ）で洗浄し、次に空気乾燥し、白色固体を得た（６８．７０ｇ、ＤＭＳＯで校正しないとき８９％の収率：ＤＭＳＯを約８５ｍｏｌ％で含有）。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４８［Ｍ＋Ｈ］
【０１６４】
調製５０：１−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素
【化２７】
【０１６５】
４−（６−メチル−５−｛３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（約２．７４ｍｍｏｌ）の酢酸エチル：ジクロロメタン＝１：１溶液（２００ｍＬ）に３分間塩化水素ガスをバブリングし、確実に飽和させた。混合物を３０分間静置し、減圧下で濃縮し、白色固体を得た。固体をＭｅＯＨ中に溶解させ、２０ｇのＶａｒｉａｎ ＳＣＸカラム上へロードし、更にＭｅＯＨでリンスした。ＭｅＯＨ：ジクロロメタン＝１：１／２Ｍアンモニアでフリーの塩基を溶出させた。減圧下で溶液を濃縮し、白色固体（１．２１ｇ、２段階処理で９９％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４４６［Ｍ＋Ｈ］
【０１６６】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１２】
【０１６７】
調製５２：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素
４−（５−アミノ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．７１８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．１２５ｍＬ、０．７１８ｍｍｏｌ）及び（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、２９１ｍｇ、０．７１８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５ｍＬ）中に添加し、７５℃で１７時間加熱した。室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ及び水を添加した。有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を回収し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜７０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル３２８ｍｇ（８５％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３４．４［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１６８】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５６５ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を添加した。４ＭのＨＣｌ／ジオキサン（２．６５ｍＬ、１０．６ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で３時間加熱した。反応液を室温に冷却し、Ｖａｒｉａｎ（商標）ＳＣＸカラム上へロードした。ＭｅＯＨでカラムを洗浄し、更に生成物を２Ｍ ＮＨ３／ＭｅＯＨで洗浄した。濾過水を回収し、減圧下で濃縮し、標題化合物４１１ｍｇ（８９％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４３４．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１６９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１３】
【０１７０】
調製５６：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素
４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製４９、６３．２０ｇ、１１５．４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６００ｍＬ）中溶液を、２２℃でＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ溶液、３００ｍＬ、１２００ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を４時間撹拌し、次に減圧下で濃縮し（室温、約１０Ｔｏｒｒ、３日間）、オフホワイトの粉末（６２．２ｇ−ジオキサンを約４５ｍｏｌ％で含有）として１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素 ジヒドロクロリドを得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４４８［Ｍ＋Ｈ］
【０１７１】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素ジヒドロクロリド（１０ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ中溶液を、７０ｇのＶａｒｉａｎＳＣＸカラム上へロードし、ＭｅＯＨ（約３００ｍＬ）でリンスした。２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨ：ジクロロメタン＝１：１溶液（１５０ｍＬ）でフリーの塩基を溶出させた。減圧下で濃縮し、白色固体（６．２４ｇ）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４４８［Ｍ＋Ｈ］
【０１７２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１４】
【０１７３】
調製５９：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［２−メチル−６−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジン−３−イル］−尿素
【化２８】
【０１７４】
１−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、６０８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及び４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４５３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中溶液を、５分間窒素ガスでバブリングした。次にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５００μＬ、３．０ｍｍｏｌ）を添加した。６０℃で一晩撹拌し、酢酸エチル（２５ｍＬ）及び飽和水重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍＬ）を用いて反応混合物を分離させた。水性相を単離し、酢酸エチルで２度（各２５ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、茶色の固体（７４６ｍｇ、８８％収率）として４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５６３．３［Ｍ＋Ｈ］
【０１７５】
４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７４６ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）の冷却したジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を添加した。２２℃で２５分間反応混合物を撹拌した。溶媒の除去後、残余物を１Ｎ水酸化ナトリウム（２０ｍＬ）で処理し、ジクロロメタンで３回（各２０ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させた。溶媒を除去し、白色固体（６０５ｍｇ、９８％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４６３．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１７６】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１５−１】
【表１５−２】
【０１７７】
調製６８：１−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素 塩酸
４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．９ｍｍｏｌ、０．９ｇ）の４ｍＬのＤＭＳＯ中溶液に、［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（２．７ｍｍｏｌ、１．２ｇ）及びＤＩＥＡ（２．９ｍｍｏｌ、０．５ｍＬ）を添加し、８５℃で一晩撹拌した。冷却し、水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、４−（５−｛３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（１０〜５０％）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５８４［Ｍ＋Ｈ］。
【０１７８】
５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２及び４．０Ｍ 塩化水素／ジオキサン（７．３５ｍｍｏｌ、１．８ｍＬ）に溶解させた４−（５−｛３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．５ｍｍｏｌ、０．９ｇ）を室温で一晩撹拌した。濃縮し、ジエチルエーテルで白色固体を分散させた。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋Ｈ］
【０１７９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１６】
【０１８０】
調製７０：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［６−（ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリジン−３−イル］−尿素
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、２．０ｍｍｏｌ、０．８ｇ）を、４−（５−アミノ−ピリジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．０ｍｍｏｌ、０．６ｇ）及び炭酸カリウム（２．２０ｍｍｏｌ、０．３ｇ）のアセトニトリル（２５ｍＬ）中溶液に添加した。室温で１２時間、溶液を撹拌した。水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨの勾配（０．５〜２０％）で溶出し、４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イルアミノ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４８［Ｍ＋Ｈ］
【０１８１】
４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イルアミノ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．１ｍｍｏｌ、０．６ｇ）のＥｔ２Ｏ（５ｍＬ）中溶液を、２２℃でＨＣｌ（ジエチルエーテル中２．０Ｍ溶液、５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）で処理した。室温で一晩溶液を撹拌した。減圧濃縮して残余物を得、更に当該残余物をＳＣＸカートリッジに添加し、２．０Ｎアンモニア／メタノールで抽出した。フリーの塩基として標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝４８８［Ｍ＋Ｈ］
【０１８２】
調製７１：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジン−４−イル］−尿素
【化２９】
【０１８３】
４−（４−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製２０、１ｇ、３．４１ｍｍｏｌ）、（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、１．３８ｇ、３．４１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍＬ、６．８２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中溶液を６０℃で５日間加熱した。得られる混合物を室温に冷却し、相分離を補助するために飽和塩化ナトリウム水溶液を使用して、水及び酢酸エチルに層分離させた。酢酸エチルで水性層を抽出し、水で二回混合有機層を洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、酢酸エチル／ジクロロメタンの勾配で溶出し、４−｛４−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル８７７ｍｇ（４３％収率）を得た。ＬＣＭＳ ＥＳ＋（ｍ／ｚ）５４９［Ｍ＋Ｈ］
【０１８４】
４−｛４−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８７７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ：ＤＣＭ＝１：１（１００ｍＬ）中溶液を、３分間ＨＣｌ（ｇ）でバブリング処理した。得られた混合物を３０分間静置し、減圧下で濃縮した。ＭｅＯＨ中に残余物を溶解させ、２０ｇのＶａｒｉａｎ ＳＣＸカラム上へロードし、ＭｅＯＨで十分リンスした。フリーの塩基をＤＣＭ：２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨ＝１：１で溶出させた。減圧下で溶液を濃縮し、標題化合物を得た。（定量分析）ＬＣＭＳ ＥＳ＋（ｍ／ｚ）４４９［Ｍ＋Ｈ］。
【０１８５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１７】
【０１８６】
実施例１
１−｛６−［４−（２，２−ジメチル−ペンタノイル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
【化３０】
【０１８７】
１−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（調製５、１当量、０．１５１０ｇ）、２，２−ジメチルペンタン酸（１．１５当量、０．０５２１ｇ）及び触媒ＤＭＡＰ（約０．１当量、０．０４９ｇ）のジクロロメタン（約０．１Ｍ、５ｍＬ）中溶液若しくはスラリーを、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸（ＥＤＣ１．１５当量、０．０７６７ｇ）で処理した。室温で４８時間得られる混合物を激しく撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。精製Ａ：２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配（酢酸エチルのジクロロメタン又はヘキサン中の勾配）を使用して、シリカゲル上で精製した。精製Ｂ：１０ｍＭの重炭酸アンモニウム水溶液／アセトニトリルの勾配を用い、Ｘｔｅｒｒａ ３０×７５ｍｍの５ミクロンＭＳ Ｃ１８カラムで逆相クロマト精製し、微量の標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４４．［Ｍ＋Ｈ］
【０１８８】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１８】
【０１８９】
実施例４
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素 メタンスルホン酸
【化３１】
【０１９０】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（調製５６、１５７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、トリメチル酢酸（５４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及び触媒ＤＭＡＰ（４ｍｇ）のジクロロメタン（３．５ｍｌ）中混合液を、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸（ＥＤＣＩ、１０１ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）で処理した。得られる混合液を室温で一晩撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタンの勾配で溶出し、フリーの塩基として標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３２［Ｍ＋Ｈ］
【０１９１】
遊離アミンのジクロロメタン（５ｍＬ）中溶液若しくはスラリーを、２Ｍのメタンスルホン酸／ジクロロメタン（１当量、０．１５５ｍＬ）で処理した。得られる混合物を撹拌し、窒素雰囲気下で濃縮し、減圧下で乾燥させ、塩を調製した。
【０１９２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１９−１】
【表１９−２】
【表１９−３】
【表１９−４】
【表１９−５】
【表１９−６】
【表１９−７】
【表１９−８】
【表１９−９】
【表１９−１０】
【０１９３】
実施例４６
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素
【０１９４】
アセトニトリル（５ｍＬ）中に、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（４８ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）、２，６−ジフルオロ安息香酸（２１ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）及び４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（３ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加した。Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（５０ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で１９時間加熱した。室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２及び水を添加した。有機層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）で水性相を抽出した。有機層を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０−６０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝５７４．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１９５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２０】
【０１９６】
実施例５０
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素
【０１９７】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中に、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（２００ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０７１ｍＬ、０．５０７ｍｍｏｌ）及び４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を添加した。２，２−ジメチル−プロピオニル塩化物（０．０６２ｍＬ、０．５０７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１７時間撹拌した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０−１００％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物１７５ｍｇ（７３％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５１８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１９８】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２１】
【０１９９】
実施例５３
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（３−メチル−ペンタノイル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（０．２０ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を、３−メチル−ペンタン酸（０．０５９ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．０６ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及びポリマー被支持カルボジイミド（０．８３ｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ（１８／１、ｍＬ）混合懸濁液中で反応させた。室温で一晩混合液を撹拌し、次に樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濃縮し、ＳＣＸカートリッジで残余物を精製し、ＮＨ４ＯＨ／ＣＨ３ＯＨ ２Ｎで溶出し、薄いピンク色の固体として標題化合物１３５ｍｇ（５５％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３２［Ｍ＋Ｈ］
【０２００】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２２−１】
【表２２−２】
【０２０１】
実施例６１
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素
アセトニトリル（１０ｍＬ）中に、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（５−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（３００ｍｇ、０．６７０ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１５４ｍｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）、２，６−ジフルオロ安息香酸（１２７ｍｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）及び４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１５ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を６０℃で１８時間加熱した。反応液を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２及び水を添加した。有機層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍＬ）で水性層を抽出した。有機層を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、１０〜７０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５８８．３［Ｍ＋Ｈ］
【０２０２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２３−１】
【表２３−２】
【０２０３】
実施例６８
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素 モノメタンスルホネート
【化３２】
【０２０４】
オーバーヘッドスターラーを有する２５Ｌ容の３首フラスコに、［４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン（１．００当量、６０１．７７ｍｍｏｌ、２００．００ｇ）、５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（１．００当量、６０２．８８ｍｍｏｌ、２４４．００ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６０．４７ｍｍｏｌ、７．５０ｇ）、ジイソプロピルエチルアミン（２２９．３６ｍｍｏｌ、４０．００ｍＬ、２９．６４ｇ）、ＤＭＳＯ（１．００Ｌ）を添加した。徐々に加熱し、６０〜６５℃に維持した。ＤＭＳＯ（２５０ｍＬ）を添加し、〜６５℃で１時間撹拌を継続した。ＭＴＢＥを添加し、０．５時間〜６０℃に維持した。室温に冷却した。濾過して固体を回収し、混合した。ＭＴＢＥでケーキ状物をリンスし、一晩減圧下で乾燥させた。９Ｌのメタノール中に材料を溶解させ、還流しながら活性炭（６５ｇ）で１時間処理した。セライト（登録商標）で混合物を濾過した。濾過液を濃縮し、溶媒を酢酸エチルに交換した。濾過し、酢酸エチル、ヘプタンでリンスし、減圧下、４０℃で乾燥させ、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素（４９０ｇ）を得た。
【０２０５】
５Ｌのフラスコに１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素（１．００当量、６００．６７ｍｍｏｌ、３５３．００ｇ）及びメタノール（３．５０Ｌ）を添加した。混合物を５０〜６０℃に加熱した。２５０ｍＬの酢酸エチル中に、メタン硫酸（１．００当量、６０３．４９ｍｍｏｌ、３９．５６ｍＬ、５８．００ｇ）を滴下して添加した。〜５０℃で０．５時間溶液を撹拌し、熱源を除去した。５時間撹拌し、濾過した。減圧下で濾過水を濃縮した。酢酸エチル（３００ｍＬ）を添加し、減圧下で濃縮した。酢酸エチルを更に３００ｍＬ添加し、減圧下で濃縮した。２Ｌのジエチルエーテルを添加し、１５分間撹拌した。一晩静置した。３時間撹拌し、濾過した。ジエチルエーテル及びヘプタンをリンスし、〜４０℃で減圧下で乾燥させ、標題化合物（３９１．４ｇ）を得た。
【０２０６】
実施例６９
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［６−（ｔｒａｎｓ）−４−シクロプロパンカルボニル−２，５−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−５−メチル−ピリジン−３−イル］−尿素
【化３３】
【０２０７】
ｒａｃ−［（ｔｒａｎｓ）−４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−ピペラジン−１−イル］−シクロプロピル−メタノン（調製９、０．１ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（０．２８３ｇ、０．７ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（３ｍＬ）及びＤＩＥＡ（０．１２ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）中に溶解させた。密封した試験管中で８０℃で１５時間加熱した。冷却し、氷水中に注いだ。ＡｃＯＥｔで数回抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、５０−９０％のＡｃＯＥｔ／ヘキサンで溶出し、固体として０．０９ｇ（４７％収率）のｒａｃ−１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［６−（ｔｒａｎｓ）−４−シクロプロパンカルボニル−２，５−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−５−メチル−ピリジン−３−イル］−尿素を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４４．５［Ｍ＋Ｈ］
【０２０８】
粗生成物をキラルクロマトグラフィに供し、Ｃｈｉｒａｐａｃｋ ＡＳカラムを使用して、ヘキサン−ＤＭＥＡ ０．２％：ＥｔＯＨ ２５％で溶出（３．７８分）した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４４．５［Ｍ＋Ｈ］
【０２０９】
実施例７０
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）ピペラジン−１−イル］−４−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、０．３２ｍｍｏｌ、０．１ｇ）を、（１−［４−（５−アミノ−４−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン（０．３ｍｍｏｌ、０．０８ｇ）及び炭酸カリウム（０．３ｍｍｏｌ、０．０５ｇ）のアセトニトリル（３ｍＬ）中溶液に添加し、８０℃で４時間溶液を撹拌した。水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチルの勾配（２０％〜８０％まで）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３２［Ｍ＋Ｈ］
【０２１０】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２４】
【０２１１】
実施例７４
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛５−クロロ−６−［４−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（５−クロロ−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素 塩酸（１．６ｍｍｏｌ、０．７ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中溶液に、１−メチルシクロプロパンカルボン酸（１．６ｍｍｏｌ、０．２ｇ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物（１．８ｍｍｏｌ、０．２ｇ）、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１．８ｍｍｏｌ、０．３ｇ）及びトリエチルアミン（４．８ｍｍｏｌ、０．７ｍＬ）を添加した。室温で２４時間溶液を撹拌した。水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。当該残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（２０％〜８０％）で溶出させた。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５５０［Ｍ＋Ｈ］
【０２１２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２５】
【０２１３】
実施例７６
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリジン−３−イル｝−尿素
【化３４】
【０２１４】
３ｍＬのアセトニトリル中で、１１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［６−（ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリジン−３−イル］−尿素（０．２２ｍｍｏｌ、０．１ｇ）、２，６−ジフルオロ−塩化ベンゾイル（０．２ｍｍｏｌ、０．０３ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．２ｍｍｏｌ、０．０３ｍＬ）を室温で一晩撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、飽和水塩化ナトリウム及び水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨの勾配（０．５〜１０％）で溶出させた。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５８８［Ｍ＋Ｈ］
【０２１５】
実施例７７
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛２−メチル−６−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−３−イル｝−尿素
【化３５】
【０２１６】
４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン（９３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、１−メチルシクロプロピル １−カルボン酸（４０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（８０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中反応混合物を、２２℃で１８時間撹拌した。濾過し、シリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、白色固体（１１１ｍｇ、１００％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４５．３［Ｍ＋Ｈ］
【０２１７】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２６−１】
【表２６−２】
【表２６−３】
【表２６−４】
【表２６−５】
【０２１８】
実施例９９
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛５−クロロ−６−［１−（２−フルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−３−イル｝−尿素メシラート
【化３６】
【０２１９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、フリーの塩基を調製した。ジクロロメタン（１ｍＬ）及びＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の当該フリーのアミンの溶液又はスラリーを、メタンスルホン酸（１当量、１７．６６ｍｇ０．１８３ｍＬ）で処理し、メシル酸塩に変換した。得られる混合物を激しく撹拌し、濃縮し、減圧下で乾燥させ、塩を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝６０５．０［Ｍ＋Ｈ］（フリーの塩基として）。
【０２２０】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２７−１】
【表２７−２】
【表２７−３】
【表２７−４】
【表２７−５】
【０２２１】
実施例１１７
１−｛６−［１−（２−フルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［２−ｐ−トリル−５−（２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−１−トリフルオロメチル−エチル）―２Ｈ―−ピラゾル−３−イル］−尿素
【化３７】
【０２２２】
［２−ｐ−トリル−５−（２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−１−トリフルオロメチル−エチル）―２Ｈ―−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３７、９５ｍｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）及び［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２−フルオロ−フェニル）−メタノン（調製１９、６１ｍｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中溶液を、５分間窒素ガスでバブリングした。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０８ｍＬ、０．４６３ｍｍｏｌ）を添加した。７０℃で一晩撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（７５ｍＬ）に添加し、１０ｇのＳＣＸ ＭｅｇａＢｏｎｄ溶出カラムで洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２（３×３５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２×５０ｍＬ）及び２Ｍ ＮＨ３／ＭｅＯＨ（３×５０ｍＬ）でカラムを洗浄した。所望のフラクションを混合し、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ＣＨ２Ｃｌ２及び１０％ ＭｅＯＨ／９０％ ＣＨ２Ｃｌ２溶液で溶出させ、白色固体（６９ｍｇ、５４％収率）として標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝６９３．５［Ｍ＋Ｈ］
【０２２３】
実施例１１８
１−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中で、１−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素塩酸塩（０．８５ｍｍｏｌ、０．５ｇ）、２，６−ジフルオロベンゾイル塩化物（０．８５ｍｍｏｌ、０．１ｍＬ）及びトリエチルアミン（２．６ｍｍｏｌ、０．４ｍＬ）を室温で一晩撹拌した。水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液で有機層を洗浄した。無水硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル（２０％〜７０％）を使用して溶出させた。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝６２４［Ｍ＋Ｈ］
【０２２４】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２８】
【０２２５】
実施例１２１
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２−シクロペンチル−アセチル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素 メタンスルホネート
【化３８】
【０２２６】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２−シクロペンチル−アセチル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素のＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５／５）（２ｍＬ）中溶液を撹拌し、０．１０ｍＬの１Ｎメタン硫酸のＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５／５）中溶液を添加した。室温で２０分間混合物を撹拌し、Ｎ２をフラッシュし、溶媒を蒸発させた。塩をＥｔ２Ｏで分散させ、濾過し、乾燥させ、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４４［Ｍ＋Ｈ］
【０２２７】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２９−１】
【表２９−２】
【表２９−３】
【表２９−４】
【０２２８】
実施例１３４
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛２−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−４−イル｝−尿素 メタンスルホネート
【化３９】
【０２２９】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジン−４−イル］−尿素（調製７１、１７９ｍｇ、４００ｍｍｏｌ）、２，６−ジフルオロ安息香酸（７６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及び触媒ＤＭＡＰ（５ｍｇ）のジクロロメタン（４ｍｌ）中溶液を、ＥＤＣＩ（９２ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）で処理した。室温で一晩得られた混合物を撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、窒素雰囲気下で濃縮した。数ｍＬのＤＣＭで残余物を分散させた。超音波破壊の後、白色固体をフィルターで濾過し、減圧下で乾燥させ、フリーの塩基（６９％収率）として標題化合物１６２ｍｇを得た。
【０２３０】
遊離アミンのＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３：２（５ｍＬ）中懸濁液を、２Ｍ メタンスルホン酸／ジクロロメタン（１当量、０．１３８ｍＬ）で処理した。溶液が清澄となるまで混合物を撹拌し、窒素雰囲気下で濃縮し、減圧下で乾燥させ、表題の塩を得た。（ＬＣＭＳＥＳ＋（ｍ／ｚ）５８９［Ｍ＋Ｈ］）。
【０２３１】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表３０】
【０２３２】
実施例１３６
１−｛２−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
［４−（４−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン（２６５ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（３５０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（７００ｍＬ）の４ｍＬのＤＭＳＯ中溶液を、６０℃で１６時間加熱した。得られた混合物を室温に冷却し、水を添加した。沈殿物を濾過し、水及びペンタンでリンスし、真空オーブンで６０℃で乾燥させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタン（０〜２％）の勾配で溶出し、８５ｍｇの生成物を得た。
【０２３３】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表３１】
【０２３４】
実施例１３９
１−｛２−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素 メシレート
７１ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）の１−｛２−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素の２ｍＬのＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）混合液中溶液に、調製直後の１Ｍ ＭｅＳＯ３ＨのＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）中溶液を０．１１４ｍＬ（０．１１４ｍｍｏｌ）添加した。室温で２０分間混合物を撹拌し、Ｎ２流中で溶媒を蒸発させた。残余物をＥｔ２Ｏで分散させ、標題化合物（７６ｍｇ、９３％収率）（１００％の純度）を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝６２５［Ｍ＋Ｈ］
【０２３５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表３２】
【０２３６】
実施例１４１
１−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素 メタンスルホネート
【化４０】
【０２３７】
［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン（４００ｍｇ、１．２０５ｍｍｏｌ）及び［５−（２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（１当量）のアセトニトリル（１２ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（２当量）を添加した。密封した試験管中で、８０℃で混合物を撹拌した。４日後に溶媒を除去した。ＤＣＭで粗生成物を溶解させ、水で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。濾過し、減圧下で溶媒を除去した。得られた固体をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／アセトン＝３：１で溶出させ、白色固体（４８％収率）として３５２ｍｇの１−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：６０６［Ｍ＋１］
【０２３８】
ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中に、フリーの塩基としての１−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素５０ｍｇ（０．０８３ｍｍｏｌ）を溶解させた。トリフルオロメタンスルホン酸／ＤＣＭ（１Ｎ）を１当量添加した。３０分後に溶媒を除去し、白色固体を得た。エーテル／ＤＣＭで数回洗浄した後、減圧下で固体を乾燥させ、標題化合物（９５％収率）５５ｍｇを得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：６０６［Ｍ＋１］
【０２３９】
ｐ３８キナーゼの阻害：
標準用液の調製
２．５ｍＬの１Ｍ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．１ｍＬの１Ｍ ジチオスレイトール、１．０ｍＬの１Ｍ 塩化マグネシウム及び３００μＬの１％ トリトンＸ−１００を混合し、水１００ｍＬで希釈し、キナーゼ緩衝液を調製した。このキナーゼ緩衝液８４ｍＬを１６ｍＬのＤＭＳＯと混合し、１６％のＤＭＳＯ溶液を調製した。
【０２４０】
１０２．６μＬの１０ｍＭ ＡＴＰ水溶液、２５μＬ３３Ｐ−ＡＴＰ、及び１６３．５μＬの４ｍＭ ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＰｅｐｔｉｄｅ６６１−６８１水溶液（Ｂｉｏｍｏｌ，Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｐ−１２１）を、５ｍＬのキナーゼ緩衝液に添加し、２００μＭのＡＴＰ溶液を調製した
【０２４１】
１５３６μＬのキナーゼ緩衝液に、９．５μＬの濃縮した酵素溶液（２５０ｎｇのｐ３８酵素／μＬキナーゼ緩衝液）を溶解し、ｐ３８キナーゼ酵素溶液を調製した。
【０２４２】
サンプル調製
Ｃｏｓｔａｒ社製９６穴マイクロタイタープレート内に、２４８μＬの１６％ ＤＭＳＯ溶液中に、各化合物のジメチルスルホキシド中の１０ｍＭストック液を２μＬ溶解させ、各試験化合物及びコントロール化合物の８０μＭ濃度の溶液を調製した。プレートを１：３で連続希釈し、Ｔｅｃａｎ Ｇｅｎｅｓｉｓ自動液体ハンドラー上に配置した。
【０２４３】
アッセイ
連続希釈された化合物の溶液１０μＬを、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｍｕｌｔｉｍｅｋ ９６ウェル自働液体ハンドラーに配置したアッセイプレートに添加した。２００μＭのＡＴＰ溶液２０μＬを、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ ８−チャネル液体ハンドラーを用いて添加した。ｐ３８キナーゼ酵素溶液１０μＬを、Ｍｕｌｔｉｍｅｋを使用してアッセイプレートへ添加した。混合物を３０℃で４０分間反応させ、次にＭｕｌｔｉｄｒｏｐで調製直後の５％の結晶ＡｃＯＨ ６０μＬを添加して反応を停止させた。この溶液８０μＬを、Ｍｕｌｔｉｍｅｋを使用して「ＭＡＰＨ」プレートへ移した。このプレートを、室温で３０分間静置し、次に調製直後の０．５％結晶ＡｃＯＨ（１×３００μＬ、２×２００μＬ）を用い、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ ＭＡＰ抽出機で洗浄／吸引した。プレートを吸引し、１００μＬ ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０シンチレーション液（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）をＭｕｌｔｉｄｒｏｐで添加した。プレートを３０分間静置し、３３Ｐ−同位元素を、ＰＥ／Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンターでカウントした。
【０２４４】
実施例５で例証した化合物を、最初に１０の濃度（２０μＭ〜１ｎＭとなるように、１：３連続希釈）で試験した。次に２５ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する化合物を、２μＭ〜０．１ｎＭ（１：３連続希釈）の濃度で再試験した。ＩＣ５０値は、各化合物ごとに非線形回帰を使用して算出した（ＩＤＢＳ ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅソフトウェアを使用）。基本的に上記に従い実施例５を試験し、２２ｎＭのＩＣ５０でｐ３８キナーゼ酵素を阻害することが明らかとなった。
【０２４５】
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるｐ−ＭＡＰＫＡＰＫ２の抑制
ＲＡＷ２６４．７細胞（マウス単球／大食細胞系 ＡＴＣＣ）を、ＲＰＭＩ−１６４０培地＋１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を用い９６ウェルプレート中に５０，０００の細胞／ウェルの密度で播種し、沈着させ、４８時間かけてウェルの底に付着させた。コンフルエンスとなった後、細胞を、各化合物の１０の連続希釈系列で２時間処理した。全ての試験においてコントロール化合物も含めた。２時間後にアニソマイシン（１００ｕｇ／ｍｌ）を添加し、細胞を５％のＣＯ２雰囲気下、３７℃で３０分間インキュベートした。次に細胞を固定し、過酸化水素で処理し、内在性ペルオキシダーゼを除去した。最後にプレートをＦＢＳでブロッキングし、洗浄し、抗リン酸化−ＭＡＰＫＡＰＫ２抗体（Ｔｈｒ３３４，Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，Ｃａｔ＃３０４１）及びａｈＰ−コンジュゲート二次抗体を用いてＥＬＩＳＡアッセイを実施した。この反応では、強化された化学発光基質ａｈＰであるＦＥＭＴＯ（Ｐｉｅｒｃｅ社製）を用いた検出を行い、それにより急速な動態における発光及び高いシグナル強度がもたらされた。
【０２４６】
基本的に上記に従い例証した化合物を試験した結果、３００ｎＭ以下のＩＣ５０値を有することが明らかとなった。実施例１１１、１１３、１１４、１１５、１１９で調製した化合物を、基本的に上記に従い、１００％の血清の存在下で試験し、５００ｎＭ以下のＩＣ５０値を有することが明らかとなった。以下の化合物を基本的に上記に従い試験し、以下の活性を有することが明らかとなった。
【表３３】
【０２４７】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＮＦαの抑制：
マウス腹腔マクロファージ：
１ｍＬのチオグリコール酸塩ブロス（１．０Ｌの蒸留水中に、５．０ｇのイーストエキス、１５．０ｇのカシトン又はトリプチカーゼ、５．０ｇのデキストロース、２．５ｇの塩化ナトリウム、０．７５ｇのＬ−シスチン、０．５ｇのチオグリコール酸ナトリウム、１．０ｍｇのレサズリン及び０．７５ｇのアガー）を、Ｂａｌｂ／Ｃ雌マウスの腹膜空腔に注入した。注入後４日目又は５日目にマウスをと殺し、ＲＰＭＩ−１６４０培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）４ｍＬでｉ．ｐ．注入し、腹膜マクロファージをシリンジで吸引した。
【０２４８】
サイトカイン産生：
マウス腹膜マクロファージを血球計測板で計測し、１０％のウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地で、９６ウェルプレート中に５×１０５細胞／ウェルとなるように調節した。２００μＬ／ウェルで９６ウェルプレートに沈着させ、少なくとも３時間、細胞をウェルの底部に付着させた。試験化合物又は標準物質のｐ３８キナーゼ阻害剤を、３７℃で１時間、８つの濃度系列を使用して前処理した（２０μＬ／ウェル）。３７℃で、１８時間、５０ｎｇ／ｍＬのリポ多糖（ＬＰＳ）及び１０Ｕ／ｍＬインターフェロン−γの混合物を用いて細胞を処理した（２０μＬ／ウェル）。処理に供された培地を回収し、Ｌｕｍｉｎｅｘ検出法を使用してＴＮＦα産生をアッセイした。
【０２４９】
ＴＮＦα／Ｌｕｍｉｎｅｘ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｋｉｔ−Ｃａｔａｌｏｇ＃１７１−Ｇ１２２２１）検出アッセイ：
ＴＮＦαスタンダードのプレミックス（１つのスタンダードチューブ／２つの９６ウェルプレート）の凍結乾燥品を、滅菌水５０μＬ（５００，０００ｐｇ／ｍＬ）に溶解させて再調製した。サンプルを５秒間ボルテックスし、３０分間氷上でインキュベートし、更に使用前に５秒間ボルテックスした。１２本の一組の１．５ｍＬチューブを＃１〜＃１２として適宜ラベルし、それらのチューブに以下に示す数値で培地を添加した。（スタンダード濃度は以下の通り：５０，０００、２５，０００、１２，５００、６，２５０、３，１２５、１，５６２．５、７８１．３、３９０．６、１９５．３、９７．７、４８．８及び２４．４ｐｇ／ｍＬ）。抗サイトカインをコンジュゲートしたビーズのプレミックスを３０秒間激しくボルテックスした（２５×）。抗サイトカインをコンジュゲートしたビーズを、１×Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒを使用している１×濃度に希釈した。全プレートについて、ビーズのプレミックス２４０μＬを、５，７６０μＬのＢｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒに添加した。ミリポア社製の９６ウェルフィルタープレートをブロッキングバッファでブロッキングした（１００μＬ／ウェル）。ブロッキングバッファをミリポア社製の濾過システムを使用して濾過し、更に乾燥させた。フィルタープレートを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒで、１００μＬ／ウェルで２回洗浄し、タオルドライした。１×抗サイトカイン共役ビーズを１５秒間ボルテックスし、各ウェルに５０μＬずつ添加した。これを濾過し、タオルで乾燥させた。プレートを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで、１００μＬ／ウェルで２回洗浄した。再度濾過し、タオルで乾燥させた。サンプル又はスタンダードを５０μＬずつ、各サンプルウェルに添加した。これを、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートし、更に一晩冷蔵庫で保存した。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。濾過し、タオルで乾燥させた。全てのプレートにおいてサイトカイン検出抗体を調製し（使用前〜１０分）、サイトカイン検出抗体プレミックスのストック溶液６０μＬを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ検出抗体希釈液５９４０μＬに添加した。
【０２５０】
サイトカイン検出抗体を５０μＬ添加し、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートした。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。これを濾過し、タオルで乾燥させた。全てのプレートにおいてＳｔｒｅｐｔ−ＰＥ（使用前〜１０分）を調製し、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ ５９４０μＬに６０μＬ添加した。５０μＬのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＰＥを各ウェルに添加し、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートした。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。これを濾過した。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ １００μＬ／ウェル中にビーズを再懸濁した。スタンダード及びサンプルをＬｕｍｉｎｅｘ装置で測定した。これらの強度値を、更に４パラメータの対数回帰法（Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｍａｎａｇｅｒ ２．０、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製）を用いて作成した１２地点に関する標準曲線（２回）に基づいてｐｇ／ｍｌ単位に変換し、ＩＣ５０を算出した。
【０２５１】
実施例５で例証した化合物を基本的に上記に従い試験し、１８ｎＭのＩＣ５０でｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＮＦαを抑制した。
【０２５２】
ｉｎ ｖｉｖｏでのＴＮＦαの抑制
雌のＢａｌｂ／ｃマウス（６マウス／投与群）に化合物を経口投与した（３０、１０、３及び１ｍｇ／ｋｇ）。４つの投与量（０．１ｍＬ／マウスのボリュームのＰ．Ｏ．、ビヒクル：水の１％のＮａＣＭＣ／０．２５％のＴｗｅｅｎ−８０）で当該化合物を投与してから１時間後において、マウスに４００μｇ／ｋｇでＬＰＳをＩＰ注入した。ＬＰＳ曝露の１．５時間後に、マウスをイソフルランで麻酔し、血液を心臓穴から採取した。血漿中のＴＮＦａ−濃度を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製のＥＬＩＳＡキットを使用して測定し、投与量に対する反応ＥＤ５０を測定した。
【０２５３】
実施例５で例証した化合物を基本的に上記の通り試験し、２．２４ｍｇ／ｋｇのＴＭＥＤ５０においてｉｎ ｖｉｖｏＴＮＦαを抑制した。最小有効量５０（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｄｏｓｅ（ＴＭＥＤ５０））とは、５０％以上の抑制がなされ、かつそれがコントロール／プラセボ群とは統計学的に異なるときの投与量を指す。
【０２５４】
経口曝露
雄のフィッシャー３４４マウスへの経口露光により、化合物をスクリーニングした。動物を一晩絶食させ、Ｔｗｅｅｎ８０（０．２５％ｖ／ｖ）及び消泡剤（０．１％ｗ／ｖ）を含有するカルボキシルメチルセルロースナトリウム（１％ｗ／ｖ）の懸濁液として調製した試験化合物を投与した。投与懸濁液を１ｍｇ／ｍＬで調製し、１ｍＬ／ｋｇで胃管を介して強制投与した。血液を投与後０．５〜７時間にサンプリングし、遠心分離により血漿を調製した。血漿サンプルを、オンライン固相抽出及びＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して分析した。
【０２５５】
実施例５で例証した化合物を、基本的に上記に従い試験し、Ｃｍａｘが９３９０ｎｇ／ｍＬ、ＡＵＣ（０−７ｈ）が３６８００ｎｇｈ／ｍＬであった。
【０２５６】
関節内ＬＰＳにより誘発されたＴＮＦαに対する効果
ネズミ足関節へのＬＰＳ関節内注入によりＴＮＦαの合成が誘導され、それを滑液洗浄液中で測定できる。２時間以内にＴＮＦαが高いレベルで検出できる。関節炎が進行する部位が関節であるため、経口投与の化合物が関節滑膜の炎症性反応に影響を及ぼすか否かを、このモデルで迅速に解析できる。
【０２５７】
６匹の雌のＬｅｗｉｓラット（１５０〜２００ｇ）を各治療群に含めた。動物に対し、担体（１％のカルボキシメチルセルロースＮａ−０．２５％ Ｔｗｅｅｎ８０中）又は試験化合物（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与した。１時間後、１０μＬのＬＰＳ（１０μｇ）を各ネズミの右の足関節に関節内投与し、一方左の足関節に生理食塩水１０μＬを投与した。２時間後、各足関節を生理食塩水１００μＬで洗浄した。洗浄液を回収し、−８０℃で保存した。
群１：担体（１％ ＮａＣＭＣ−０．２５％ Ｔｗｅｅｎ８０、１ｍＬ、ＰＯ）
群２：試験化合物（１ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群３：試験化合物（３ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群４：試験化合物（１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群５：試験化合物（３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
【０２５８】
市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ、ＲＴＡ００）でＴＮＦαを測定した。実施例５で例証した化合物による処理により、ＴＮＦα産生が用量反応的に阻害され、ＴＭＥＤ５０＝３．５７ｍｇ／ｋｇ（滑液洗浄液）として算出された。
【０２５９】
フローサイトメトリを用いた、アニソマイシン刺激マウスにおけるｅｘ ｖｉｖｏでのリン酸化ＭＡＰＫＡＰＫ２の阻害アッセイ
８〜１０週齢の雌のＢａｌｂ／ｃマウスをＴａｃｏｎｉｃ社から購入し、３０、１０、３、１ｍｇ／ｋｇの濃度で化合物を含有する溶液を０．２ｍＬ経口投与した。２時間又は他の所定時間の後、血液を心臓穴から採取し、ＥＤＴＡを含有する試験管に集めた。血液１００μＬを３７℃で１０分間インキュベートした。次に全血をＦＩＴＣコンジュゲートしたラット抗マウスＬｙ−６Ｇモノクローナル抗体（１：２５０）、及びＡＰＣコンジュゲートしたラット抗マウスＣＤ１１ｂｍＡｂ（１：１００）と混合し、１０μｇ／ｍｌのアニソマイシンで刺激した。両方の細胞表面抗原の染色、及びアニソマイシン刺激を３７℃で１５分間実施し、更にＬｙｓｅ／Ｆｉｘバッファ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｔ＃５５８０４９）を用いて室温で１０分間処理した。溶解させた血液サンプルを室温で８分間、６００×ｇでスピンダウンし、４ｍＬのＰＢＳで更に洗浄した。希釈（１：１００希釈）した抗−リン酸化−ＭＡＰＫＡＰＫ−２抗体（Ｔｈｒ３３４）（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製、Ｃａｔ＃３０４１）、及びマウスＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（１：１００希釈）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，５５３１４１）を、２００μＬの透過用の溶媒Ｂ（Ｃａｌｔａｇ，Ｃａｔ＃ＧＡＳ００２Ｓ−５）に溶解させ、血球に添加し、室温で３０分間インキュベートした。インキュベート後、３ｍＬの染色／洗浄バッファを添加し、細胞を上記の通りスピンダウンし、更に３ｍｌの染色／洗浄バッファで洗浄した。更に細胞をＢｅｃｋｍａｎ ＣｏｕｌｔｅｒＦ５００を使用してフローサイトメトリで解析した。ホスフィノ−ＭａｐＫａｐ−Ｋ２染色の平均の蛍光強度を、陽性染色されたＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−細胞に関して測定した。データの分析をＪＭＰプログラムにより実施した。実施例５で例証した化合物による処理により、ＴＭＥＤ５０＝２．２８ｍｇ／ｋｇとして表される、ｐ−ＭＡＰＫＡＰＫ２合成の用量反応の阻害が観察された。
【０２６０】
ネズミコラーゲン誘導による関節炎有効性モデル
雌のＬｅｗｉｓラット（≒１９０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ社製）を用い、ウシＩＩ型コラーゲン（２ｍｇ／ｍＬ）を等量のアジュバント（水酸化アルミニウム）と混合してエマルジョンを形成させ、免疫した。ラットの尾の付け根付近の背部に、約０．３ｍｇのエマルジョンを皮下注射した。すべての動物を、同じプロトコルに従って７日後に再度免疫した。ラット体内で、初回免疫後、１２〜１４日において関節炎（一方又は両方の足関節の膨張リング及び発赤を特徴とする）を開発し始める。関節炎の第１の徴候が見られたときに、ラットを５つの処理群に等しく分け、治療はラットに１日２回（Ｂｉｄ）、１４日間にわたり投薬することにより実施した。
処理群：
群１：担体１ｍＬ（１％ カルボキシメチルセルロースＮａ＋０．２５％ Ｔｗｅｅｎ８０）ＰＯ、Ｂｉｄ×１４日
群２：試験化合物５ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群３：試験化合物１５ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群４：試験化合物３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群５：プレドニソロン１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、ｑｄ（１日１回）×１４
【０２６１】
足関節の直径を週５日、カリパス副木で測定し記録した。データを複合炎症スコアから得た曲線下の領域（ＡＵＣ）として表し、統計分析を実施した。実施例５で例証した化合物では、組織学的な意味においてＴＭＥＤ５０＝５ｍｇ／ｋｇを呈した。
【０２６２】
本発明の化合物は経口投与で用いるのが好ましい。しかしながら、経口投与が唯一の投与経路、又は唯一の好ましい投与経路ではない。例えば、経皮投与は薬剤の経口摂取を忘れやすい、若しくは経口摂取を敬遠する患者にとって好ましく、また静脈内投与は簡便性において、又は経口投与に関連する合併症の危険性を回避するという意味において好ましい。式Ｉの化合物は、具体的な状況によっては経皮的、筋肉内、鼻腔内、直腸内経路で投与してもよい。投与経路はいかなる形で変化させてもよく、例えば薬の物理的性質、患者及び介護者の便宜、及び他の関連する状況に応じて変化させてもよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（１９９０））。
【０２６３】
医薬組成物は周知の製薬法で調製される。担体又は賦形剤は、固体、半固体、又は担体若しくは有効成分の媒体として機能しうる液体材料であってもよい。適切な担体又は賦形剤は公知である。医薬組成物は、経口投与、吸入、非経口投与又は局所投与に適する形態で調製でき、錠剤、カプセル、エアゾール、吸入器、坐薬、溶液、懸濁液等の形態で患者に投与できる。
【０２６４】
本発明の化合物は、例えば不活性希釈剤若しくはカプセルにより、又は錠剤に圧縮した形態で経口投与してもよい。治療目的で経口投与する場合、化合物を賦形剤と共に混合し、錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェーハ、チューインガムなどの形で用いてもよい。これらの調製物は本発明の化合物（活性成分）を少なくとも４％含有する必要があるが、具体的な形状によって、単位重量当り４％〜約７０％の間で適宜変化させることができる。かかる適切な投与量となるような量で、組成物中に当該化合物を添加する。本発明の好ましい組成及び調製法は、当業者に公知の方法を用いて決定できる。
【０２６５】
錠剤、ピル、カプセル、トローチなどの場合は、以下の補助剤のうちの１つ以上を含有させてもよい：結合剤（例えばポビドン、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース又はゼラチン）、添加剤又は希釈剤（例えば澱粉、ラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸ジカルシウム）、崩壊剤（例えばクロスカルメロース、クロスポビドン、澱粉グリコール酸ナトリウム、穀物澱粉など）、潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク又は水素化した植物油）、滑走剤（例えばコロイド状シリカ）、湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム及びポリソルベート８０）、及び甘味料（例えば蔗糖、アスパルテーム又はサッカリン）又は香料（例えばペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジフレーバー）。投与単位の形態がカプセルである場合、上記のタイプの材料に加えて、液体担体（例えばポリエチレングリコール又は脂肪油）を含有させてもよい。他の投与単位の形態としては、コーティングなどの、投与単位の物理的な形状を修飾する他の様々な材料を含むものが挙げられる。すなわち、錠剤又はピルを砂糖、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリメタクリレートなどのコーティング剤でコーティングしてもよい。シロップとしてもよく、本発明の化合物に加えて、甘味料としての蔗糖、適切な防腐剤、染料、着色料及び風味料を含有させてもよい。これらの様々な組成物を調製する際に使用する材料は、薬理学的に純粋で、またその使用量が毒性をもたらす量ではないことが必要である。好ましい製剤は、所望の投与量の式Ｉの化合物に対して、１％ カルボキシメチルセルロースＮａ−０．２５％ Ｔｗｅｅｎを添加することにより調製される。
【０２６６】
式Ｉの化合物は通常、広い投与量範囲において効果的である。例えば、１日当りの投与量を、約０．０００１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲とすることができる。場合によっては、上記の範囲の下限投与量以下のレベルでも十分過ぎることもあり、一方で上限投与量以上でもいかなる有害な副作用を生じさせないこともあるため、上記の投与量範囲はいかなる形であれ本発明の範囲を限定することはない。実際の化合物の投与量は、治療しようとする症状、化合物の投与経路、実際に投与する化合物、年齢、体重及び個々の患者の反応、並びに患者の症状の重症度などの関連する状況を考慮に入れて、医師により決定されることが理解されよう。
【技術分野】
【０００１】
本発明はキナーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ｐ３８キナーゼは、セリン／トレオニンキナーゼスーパーファミリーに属するマイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼである。このキナーゼは、熱、紫外線及び浸透圧ストレスなどの細胞外からのストレス、並びに炎症性刺激（例えばリポ多糖類）によって活性化する。活性化したとき、ｐ３８キナーゼは細胞内のタンパク質基質をリン酸化し、それにより炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）及びインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の生合成が制御される。これらのサイトカインは、多くの慢性炎症性障害（非特許文献１及び２）、心血管及び中枢神経系障害（非特許文献３）及び自己免疫不全（非特許文献４）の病理に関与する。更に、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−プロテインキナーゼ２（又はｐＭＡＰＫＡＰＫ２）のリン酸化形態はまたｐ３８ＭＡＰＫ経路のキナーゼであり、ｐ３８ＭＡＰＫによって直接活性化されうる。ＭＡＰＫＡＰＫ２のノックアウトマウスを用いた研究においてサイトカイン産生の減少が示されており、すなわちＭＡＰＫＡＰＫ２が炎症反応における主要な調節物質であり、抗炎症治療における良好な標的物質となりうることを示唆するものである（特許文献１）。
【０００３】
ｐ３８キナーゼの阻害剤又はサイトカイン阻害剤として、多くの尿素化合物が同定されている（例えば特許文献２から１０）。ｐ３８キナーゼ阻害剤又はサイトカイン阻害剤は、通常生産コストが高く、また生物学的利用能及び吸収性に課題があるため、ｉｎ ｖｉｖｏ効果及び治療的な使用が制限されうる。以上より、新規な小分子のサイトカイン抑圧剤、すなわち、改良された効力及びより大きな生物学的利用能を有する、ｐ３８キナーゼ阻害化合物に対するニーズが存在する。
【特許文献１】国際公開第０５／１２０５０９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９９／２３０９１号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０１／０１２１８８号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０４／００４７２０号パンフレット
【特許文献５】国際公開第０４／０３７７８９号パンフレット
【特許文献６】国際公開第９９／３２１１１号パンフレット
【特許文献７】米国特許出願公開第２００４／００５８９６１号公報
【特許文献８】欧州特許第１６０９７８９号公報
【特許文献９】国際公開第０３／０７２５６９号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第００／４３３８４号パンフレット
【特許文献１１】Ｌｅｅら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，６９６，１４９−１７０（１９９３）
【特許文献１２】Ｍｕｌｌｅｒ−Ｌａｄｎｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，８，２１０−２２０（１９９６）
【特許文献１３】Ｓａｌｉｔｕｒｏら、ＣｕｒｒｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，６，８０７−８２３（１９９９）
【特許文献１４】Ｐａｒｇｅｌｌｉｓら、ＮａｔｕｒｅＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｙ，９（４），２６８−２７２（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療に有用な、新規なｐ３８キナーゼ阻害剤の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は式Ｉ：
【化１】
（式中、Ｚは以下からなる群から選択され、
【化２】
Ｘは以下からなる群から選択され、
【化３】
Ｒ１はハロ基及びＣ１−Ｃ４アルキルハロ基からなる群から選択される１〜６個の置換基で任意に置換されてもよいＣ１−Ｃ７アルキル基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される１又は２個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル基であるか、又はトリメチルシリル基であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいフェニル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいピリジニル基であり、Ｙは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、ハロ基又はＣ１−Ｃ４アルキルハロ基であり、
Ｒ３はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基で任意に置換されてもよいＣ１−Ｃ７アルキル基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される１〜４個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル基であるか、又は、ピリジル基、フェニル基若しくはチエニル基であって、それらの各々がハロ基、シアノ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換され、またＣ１−Ｃ４アルキル基及びハロ基からなる群から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよく、
Ｒ４は水素又はＣ１−Ｃ４アルキル基である）
で表される化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。
【０００６】
本発明はまた、哺乳類のｐ３８キナーゼを阻害する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００７】
本発明はまた、哺乳類の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の製造を抑制する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００８】
本発明はまた、哺乳類のインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生を抑制する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００９】
本発明は更に、哺乳類の過剰なサイトカイン産生から生じる症状を治療する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１０】
本発明はまた、哺乳類の感受性腫瘍の増殖を阻害する方法であって、ｐ３８の阻害に十分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１１】
本発明はまた、哺乳類の腫瘍転移を阻害する方法であって、ｐ３８の阻害に十分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１２】
本発明はまた、哺乳類の慢性関節リウマチの治療方法であって、ｐ３８の阻害に十分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１３】
本発明はまた、薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる医薬用製剤の提供に関する。
【００１４】
本発明はまた、ｐ３８キナーゼの阻害剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類のｐ３８キナーゼの阻害用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、ｐ３８キナーゼの阻害用の医薬組成物の提供に関する。
【００１５】
本発明はまた、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）産生の抑制剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類の腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）産生の抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）産生の抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００１６】
本発明はまた、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）産生の抑制剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類のインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）産生の抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）産生の抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００１７】
本発明はまた、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類の過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用の医薬組成物の提供に関する。
【００１８】
本発明はまた、感受性腫瘍の増殖阻害剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類の感受性腫瘍の増殖阻害用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、感受性腫瘍の増殖阻害用の医薬組成物の提供に関する。
【００１９】
本発明はまた、転移抑制剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類における転移抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、転移抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００２０】
本発明はまた、慢性関節リウマチの治療用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。更に本発明は、哺乳類の慢性関節リウマチの治療用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。更に本発明は、１つ以上の薬理学的に許容できる添加剤、担体又は希釈剤との組合せで、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、慢性関節リウマチの治療用の医薬組成物の提供に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
用語「ｐ３８キナーゼ」とは、ｐ３８α及び／又はｐ３８βキナーゼアイソフォームを意味する。
【００２２】
用語「ＴＮＦα（ＩＬ−１β、サイトカイン）の産生の抑制」とは、哺乳類のＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの過剰なｉｎ ｖｉｖｏ濃度が、正常値若しくは正常値以下のレベルに減少することを意味する。この減少は、大食細胞などの全ての細胞からの、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインのｉｎ ｖｉｖｏでの放出を抑制すること、ゲノムレベルにおける、哺乳類のＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの過剰なｉｎ ｖｉｖｏでのレベルを、通常若しくは通常以下のレベルに下方制御すること、翻訳後において、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの合成を阻害すること、又は翻訳レベルにおいて、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインを下方制御することによって可能となる。
【００２３】
当業者であれば、式Ｉに係る具体的な化合物が少なくとも１つの対掌性中心を有することを認識する。本発明には、すべての個々の鏡像異性体又はジアステレオマー、並びにラセミ化合物などの、前記化合物の鏡像異性体若しくはジアステレオマーの混合物が包含される。少なくとも１つの対掌性中心を含んでなる式Ｉの化合物は、１つの鏡像異性体又はジアステレオマーの混合物として存在することが好ましい。１つの鏡像異性体又はジアステレオマーの混合物は、キラル試薬を開始原料とするか、又は立体選択的若しくは立体特異的な合成方法により調製してもよい。あるいは、標準的な方法（対掌性クロマトグラフィ又は結晶化法）により混合物から単一の鏡像異性体又はジアステレオマーを単離してもよい。
【００２４】
当業者であれば、本発明の化合物が酸付加塩を形成できることを理解するであろう。全ての場合において、全ての化合物の薬理学的に許容できる塩は、それらの名称の範疇に包含される。本発明の化合物はアミンであるため、多くの無機及び有機酸のうちのいずれかと反応して、薬理学的に許容できる酸付加塩を形成する。本発明の用語「薬理学的に許容できる塩」とは、生存する生物体に対する中毒性を実質的に有さない、式Ｉの化合物の塩のことを指す。典型的な薬理学的に許容できる塩としては、薬理学的に許容できる有機酸若しくは無機酸と、本発明の化合物との反応により調製される塩が挙げられる。かかる塩の例としては、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）に列記されている薬理学的に許容できる塩が挙げられ、それらは当業者に公知である。式Ｉの化合物のメシル酸塩が最も好ましい。
【００２５】
式Ｉの化合物はｐ３８キナーゼの阻害剤である。すなわち、本発明はまた、哺乳類のｐ３８キナーゼを阻害する方法であって、前記処置を必要とする哺乳類に対して、ｐ３８キナーゼを阻害するのに十分な量の式Ｉの化合物を投与することを含んでなる方法の提供に関する。式Ｉの化合物の投与により処置される哺乳類としては、ヒトが好ましい。
【００２６】
本発明の化合物は、ｐ３８キナーゼの阻害剤として、炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）及びインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生の抑制、すなわち過剰なサイトカイン産生から生じる障害の治療に有用である。現在の化合物はしたがって、炎症性障害（湿疹、アトピー性皮膚炎、慢性関節リウマチ、骨関節炎、炎症性腸疾患及び毒性ショック症候群など）の治療に有用であると考えられる。本発明の化合物はまた、心血管障害（例えば急性心筋梗塞、慢性心不全、アテローム性動脈硬化症、ウィルス性筋心臓炎、心臓同種移植拒否及び敗血症関連の心臓機能不全）の治療にも有用であると考えられる。更に本発明の化合物はまた、中枢神経系障害（例えば髄膜炎菌性髄膜炎、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患及び多発性硬化症）の治療にも有用であると考えられる（国際公開第０３／０７２５６９号、第０４／００４７２０号、第９９／２３０９１号、第９９／３２１１１号）。
【００２７】
大部分の固形腫瘍は悪性細胞及び間質細胞（内皮細胞を含む）の激増により質量が増加する。腫瘍が直径２〜３ｍｍより大きくなるには、脈管系を形成しなければならず、そのプロセスは血管新生として知られている。腫瘍により誘発された血管形成のアンジオスタチン及びエンドスタチンによる抑制は、抗腫瘍活性をもたらすことが報告されている（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙら、Ｃｅｌｌ，８８，２７７−２８５（１９９７））。選択的なｐ３８キナーゼ阻害剤ＳＢ２２０２５が血管新生を阻害することが示されている（Ｊ．Ｒ．Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２８４，６８７（１９９８））。血管新生は、大部分の固形腫瘍が広範囲に拡大するための不可欠な要素であるため、このプロセスの抑制のための新規なｐ３８キナーゼ阻害剤の開発は、抗腫瘍治療における有望なアプローチである。抗腫瘍治療におけるこのアプローチは、中毒性の副作用又は従来の化学療法における薬剤耐性の誘導という問題を含まないと考えられる（Ｊｕｄａｈ Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｔｈｅ Ｈａｒｖｅｙ Ｌｅｃｔｕｒｅｓ， Ｓｅｒｉｅｓ９２，ｐａｇｅｓ ６５−８２，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ Ｉｎｃ．，（１９９８））。
【００２８】
したがって本発明の化合物はまた、感受性腫瘍の増殖を阻害する際の、ｐ３８キナーゼの阻害剤として有用である。（Ｓｃｈｕｌｔｚ，Ｒ．Ｍ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｐ３８ ＭＡＰ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ．（Ｅ．Ｊｕｃｋｅｒ（ｅｄ．），Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，５９−９２，（２００３））より）。感受性腫瘍は、その生存、増殖又は転移がｐ３８キナーゼに依存する腫瘍であるものとして定義される。感受性腫瘍の例としては、脳、尿生殖路、リンパ系、胃、喉頭及び肺における腫瘍が挙げられる（米国特許第５７１７１００号）。好ましくは、本発明の用語「感受性腫瘍」には、非小細胞肺癌（Ａ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．ＣｅｌｌＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６，５５８（２００２））、乳癌（Ｊ．Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６，４７９０１（２００１）、Ｂ．Ｓａｌｈら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９８，１４８（２００２）、及びＳ．Ｘｉｏｎｇら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，６１，１７２７（２００１））、胃癌（Ｙ．Ｄ．Ｊｕｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，４３，９（２００２）、結腸直腸癌（Ｓ．Ｘｉｏｎｇら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，６１，１７２７（２００１））及び悪性黒色腫（Ｃ．Ｄｅｎｋｅｒｔら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，１９，７９（２００２））などのヒト癌が挙げられる。
【００２９】
ＴＮＦαの抑制による血管新生の阻害は、転移の阻害若しくは防止にも有用であることが教示されている（米国特許第６４１４１５０号、米国特許第６３３５３３６号）。更に、ＴＮＦαの抑制は、悪液質（全てのがん患者の約半数が経験する消耗性症候群）の治療及び予防にもつながると考えられる（Ｔ．Ｙｏｎｅｄａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８７，９７７（１９９１））。
【００３０】
更に、ｐ３８キナーゼの抑制は、特定のウィルス性の症状、例えばインフルエンザ（Ｋ．Ｋｕｊｉｍｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．，１６４，３２２２−３２２８（２０００））、ライノウイルス（Ｓ．Ｇｒｉｅｇｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６５，５２１１−５２２０（２０００））及びＨＩＶ（Ｌ．Ｓｈａｐｉｒｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５，７４２２−７４２６，（１９９８））による症状の治療に効果的であると考えられる。
【００３１】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ７アルキル」とは、直鎖状又は分岐状の一価の、１〜７個の炭素原子数である飽和脂肪族鎖を指し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル及びヘプチル基などが例示されるがこれらに限定されない。用語「Ｃ１−Ｃ７アルキル」には、その定義中に用語「Ｃ１−Ｃ４アルキル」が包含されるものとする。
【００３２】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ４アルコキシ」とは、１〜４個の炭素原子数の、酸素原子と結合する直鎖若しくは分岐状アルキル鎖のことを指す。典型的なＣ１−Ｃ４アルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ基などが挙げられる。
【００３３】
本明細書中で特に明記しない限り、本発明の用語「ハロ」とは、塩素、臭素、ヨウ素又はフッ素原子のことを指す。
【００３４】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ」とは、最高５個のハロ原子で置換されてもよいＣ１−Ｃ４アルキルのことを指す。典型的なＣ１−Ｃ４アルキルハロ基としては、メチルハロ、トリフルオロメチル、エチルハロ、ビスフルオロメチルエチル、プロピルハロ、イソプロピルハロ、ブチルハロ、ｔｅｒｔ−ブチルハロなどが挙げられる。
【００３５】
本発明の用語「Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル」とは、炭素原子及び水素原子からなる完全に飽和した環状構造を意味し、シクロプロピル及びシクロブチル基などが包含される。
【００３６】
式Ｉの化合物において、特定の種類のものが好ましいｐ３８キナーゼ阻害剤として機能する。以下のパラグラフにおいてかかる好ましい種類のものを記載する。
ａ）Ｚは
【化４】
であり、
ｂ）Ｘは
【化５】
であり、
ｃ）Ｒ４は水素であり、
ｄ）Ｙはメチルであり、
ｅ）Ｒ１はＣ１−Ｃ７アルキル基であり、
ｆ）Ｒ１はｔｅｒｔ−ブチル基であり、
ｇ）Ｒ２はフェニル基又はピリジニル基であり、各々メチル基で任意に置換されてもよく、
ｈ）Ｒ２は４−トリル基であり、
ｉ）Ｒ３はフェニル基又はチエニル基であり、各々、ハロ、シアノ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換され、またＣ１−Ｃ４アルキル基及びハロ基から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよく、
ｊ）Ｒ３はフェニル基であり、ハロ基からなる群から選択される第１の置換基で置換され、Ｃ１−Ｃ４アルキル及びハロ基から選択される第２の置換基で更に置換されてもよく、
ｋ）式Ｉの化合物はフリーの塩基であり、
ｌ）式Ｉの化合物は塩であり、
ｍ）式Ｉの化合物はメシル酸塩である。
【００３７】
本発明の好ましい実施態様では、パラグラフａ）〜ｍ）のすべての組合せを含む。他の好ましい式Ｉの化合物は、
Ｘがパラグラフｂ）にて説明される化合物であり、
Ｒ１がパラグラフｅ）にて説明される化合物であり、
Ｒ２がパラグラフｇ）にて説明される化合物であり、
Ｒ４がパラグラフｃ）にて説明される化合物である。
【００３８】
また、好ましい実施態様では、
Ｘがパラグラフｂ）にて説明される化合物であり、
Ｒ１がパラグラフｆ）にて説明される化合物であり、
Ｒ２がパラグラフｈ）にて説明される化合物であり、
Ｒ３がパラグラフｉ）にて説明される化合物であり、
Ｒ４がパラグラフｃ）にて説明される化合物である。
【００３９】
また、好ましい実施態様では、
Ｘがパラグラフｂ）にて説明される化合物であり、
Ｒ２がＣ１−Ｃ４アルキル基で４位を置換されたフェニル基である。
【００４０】
Ｘがパラグラフｂ）にて説明される化合物であるのが最も好ましい。
【００４１】
特に以下の化合物が最も好ましい化合物である。
【化６】
【００４２】
本発明の化合物は様々な方法で調製することができ、その幾つかを下記の反応式において例示する。当業者であれば、式Ｉの化合物の調製において、以下の反応式中の個々の処理を適宜変化させてもよいことを認識するであろう。式Ｉの化合物の調製に必要となる処理の具体的な順序は、合成しようとする具体的な化合物、開始化合物及び置換された部分の相対的な不安定性などに依存する。説明の便宜上、若干の置換基を以下の反応式において省略することもあるが、それによりいかなる形であれ反応式の教示が限定されるものではない。
【００４３】
式Ｉの化合物及びその中間体は、以下の反応式にて図示するように調製してもよく、また式中のＲ１、Ｒ２及びＸは上記で定義したとおりである。
【００４４】
反応式１
【化７】
【００４５】
アミン（ａ）を、適当なイソシアネート又はカルバメート（例えばピラゾリル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート）と反応させ、式Ｉの化合物を得る。例えば、アミン（１当量）、トリクロロエチルカルバメート（１当量）及び適切な塩基溶液（ジイソプロピルエチルアミン（２当量）又は炭酸カリウムなど）を、適切な溶媒（アセトニトリル又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）など）中で加熱する。その後所望の化合物を単離してもよく、また必要に応じて、公知の精製法（例えばクロマトグラフィ）を使用して式Ｉの化合物を精製してもよい。
【００４６】
必要なアミンは以下の反応式２に示すように調製され、式中、Ｘは上記の通り定義される。
【００４７】
反応式２
【化８】
【００４８】
ニトロ部分（ｂ）をスタンダードの還元条件下で還元してもよく、例えば、適切な溶媒（低級アルカノール又は酢酸エチルなど）中で、パラジウム触媒の存在下で水素で還元するか、又は塩化ニッケル（ＩＩ）六水和物の存在下で水素化ホウ素ナトリウムで還元し、対応するアミン（ａ）を調製してもよい。かかる還元処理は当業者に公知である。Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．，“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，”４１２，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと。
【００４９】
必要となるニトロ化合物は下記の反応式３にて図示するように調製され、式中、ＨａｌはＣｌ又はＦであり、Ｘ’はＣ（Ｏ）Ｒ３であるか、又は適切な保護基ＰＧである。
【００５０】
反応式３
【化９】
【００５１】
適切な有機溶媒（ＴＨＦなど）中で、２−ハロ−４−ニトロ−ピリジン（ｅ）を、適当な４−ヒドロキシピペリジン及び水素化ナトリウム若しくはトリフェニルホスフィンと反応させ、対応する置換されたピペリジンｂ（ｉ）を得る。あるいは、２−ハロ−４−ニトロ−ピリジン（ｅ）を、極性溶媒（アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又はブタノール）中で、適当なピペラジン及び塩基（例えば炭酸カリウム、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド又はトリエチルアミン）と反応させ、対応する置換されたピペラジンｂ（ｉｉ）を得る。
【００５２】
式ｂ（ｉｉｉ）のアミンは、適切な塩基（例えば炭酸ナトリウム）の存在下で、適切な溶媒（例えばエタノール）中で、２−ハロ−４−ニトロ−ピリジン（ｅ）を適当なアミノピペリジンと反応させることにより調製される。
【００５３】
当業者であれば、上記の方法が本発明に包含されるピリジル異性体の形成に利用できることを認識するであろう。
【００５４】
必要となるピラゾリルカルバメートは、以下の反応式で説明するように調製でき、式中、Ｒ１及びＲ２は上記で定義したとおりである。
【００５５】
反応式４
【化１０】
【００５６】
３−アミノピラゾール（ｍ）を、公知の反応条件において形成する（Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．，”Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，”７９，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９）。例えば、α−シアノケトン（ｊ）及び適切なヒドラジン又はヒドラジン塩（ｋ）を、適切な有機溶媒（例えばエタノール）中で高温で反応させる。得られるピラゾール（ｍ）を、標準的な技術（例えばシリカゲルカラムにおけるクロマトグラフィ）を使用して精製してもよい。
【００５７】
２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（ｎ）を、適切に置換された３−アミノピラゾール（ｍ）及び塩基（例えば炭酸ナトリウム、炭酸カリウム又はピリジン）と、適切な溶媒（例えばＴＨＦ又は水／酢酸エチル）中で反応させ、対応する２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ｏ）を得る。当業者であれば、３−アミノピラゾールを他の活性炭酸塩と反応させることにより、対応するカルバメートを調製できると認識するであろう。
【００５８】
式Ｉ（ｉ）の化合物は、以下の反応式５で示すように調製でき、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＰＧは上記で定義したとおりであり、ＺはＯ、Ｎ又は結合であり、Ｒ５はＣ又はＮである。
【００５９】
反応式５
【化１１】
【００６０】
式（ｆ）の化合物を、公知の反応条件下で脱保護する。例えば、保護基がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである場合、式（ｆ）の化合物は適切な有機溶媒若しくは溶媒混合物（例えばジクロロメタン）中に溶解させ、酸（例えばジオキサン又はトリフルオロ酢酸中の塩酸）で処理する。Ｎ保護されたピペリジン置換尿素（ｆ）の脱保護により、置換されたピペリジン（ｇ）が得られ、それを、有機酸及び有機アミンの標準的なカップリング条件下で、カップリング剤（Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸（ＥＤＣＩ）、又はジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の触媒量、又はＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）又はトリエチルアミンなど）の存在下で、適切な溶媒（例えばメチレンクロライド又はアセトニトリル）中で、置換されたカルボン酸と反応させ、式Ｉ（ｉ）の化合物を得る。当業者であれば、式Ｉ（ｉ）を、異なるＮ保護基（例えばホルミル基）を有する他の被保護ピペリジンを開始原料として調製できることを認識し、その場合、他の脱保護方法により中間体（ｇ）を形成させる必要があると考えられる。
【００６１】
適切なアミノ保護基「Ｐｇ」（例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）部分）を必要に応じて利用するか、又は必要となることもあり、これらの基を導入するための手法は当業者にとり周知である。当業者であれば、保護基が本発明の化合物の合成経路中のいかなる工程においても除去できることを認識するであろう。窒素及び酸素の保護基を導入及び除去する方法は公知技術である（Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９９９）参照）。
【００６２】
また当業者であれば、式Ｉの化合物の置換基の全てが、化合物の合成に採用される具体的な反応条件を許容できるわけではないことを認識するであろう。これらの部分は、合成経路上のいかなるタイミングで導入してもよく、又はそれらを必要に応じて保護し、更に脱保護してもよい。
【００６３】
実施例及びアッセイにおいて使用する以下の略記、記号及び用語は、以下の意味を有する。
ｎ−ＢｕＯＨ＝ｎブタノール、
ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド、
ＤＩＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド、
ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、
ｈ＝時間、
ＨＯＢｔ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド、
ＥＤＣＩ＝１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸、
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、
ＥｔＯＨ＝エタノール、
Ｅｔ２Ｏ＝ジエチルエーテル、
ＭｅＯＨ＝メタノール、
ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３＝ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド、
ＴＢＡＦ＝フッ化テトラブチルアンモニウム、
Ｔｆ２Ｏ＝トリフルオロメタンスルホン酸無水物、
及びＴＨＦ＝テトラヒドロフラン。
【００６４】
調製
調製１：２−クロロ−４−メチル−５−ニトロ−ピリジン
【化１２】
【００６５】
０．５ｍＬの硫酸中に、４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルアミン（３．０ｍｍｏｌ、０．５ｇ）を溶解させた。７．６ｍＬの水を添加し、溶液を０℃に冷却した。亜硝酸ナトリウム（４．５ｍｍｏｌ、０．３ｇ）を添加し、２時間混合物を撹拌し、室温に加温した。水で希釈し、塩基性のｐＨとなるまで１０％水酸化ナトリウム水溶液を添加した。酢酸エチル抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で有機層を混合した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−オルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１５５［Ｍ＋Ｈ］
【００６６】
オキシ塩化リン（０．６ｍｍｏｌ、０．０５ｍＬ）及びペンタ塩化リン（０．６ｍｍｏｌ、０．１２ｇ）を４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−オル（１．９ｍｍｏｌ、０．３ｇ）に添加した。１２０℃で１．５時間撹拌した。冷却し、氷水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液で混合有機層を洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、２−クロロ−４−メチル−５−ニトロ−ピリジンを得た。
【００６７】
調製２：２，３−ジクロロ−５−ニトロ−ピリジン
濃ＨＣｌ（１００ｍＬ）中に５−ニトロ−ピリジン−２−オル（２０ｇ、１４３ｍｍｏｌ）を添加した。５０℃に加熱し、次に水（１００ｍＬ）に溶解させた塩素酸カリウム（６．１３ｇ、５０ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。５０℃で３０分間撹拌した。アイスバス中で反応液を冷却した。固体を濾過して除去し、水で洗浄した。完全に乾燥させ、３−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−オルを２１．１３ｇ（８５％）得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１７３［Ｍ＋Ｈ］
【００６８】
丸底フラスコ中に塩化リン（１１．２８ｍＬ、１２１ｍｍｏｌ）を添加し、０℃に冷却した。キノリン（７．１５ｍＬ、６０．５ｍｍｏｌ）、更に３−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−オル（２１．１３ｇ、１２１ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。反応液を２時間の１２０℃に加熱した。氷上に反応液を注入し、水で粉末化した。固体を濾過して除去し、水で洗浄した。完全に乾燥させ、標題化合物の１９．９５ｇ（８６％）を得た：１ＨＮＭＲδＨ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）９．２０（ｓ，１Ｈ），８．９７（ｓ，１Ｈ）。
【００６９】
調製３：４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１３】
【００７０】
撹拌装置を用い、６−クロロ−２−メチル−３−ニトロ−ピリジン（Ａｓｙｍｃｈｅｍ、２５．００ｇ、１４４．９ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（２９．６８ｇ、１５９．４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２３．２ｍＬ、１６７ｍｍｏｌ）／ｎ−ＢｕＯＨ（２５０ｍＬ）を、窒素雰囲気下で５０℃で４時間、６５℃で２時間、更に室温で一晩混合物を撹拌した。更にｔｅｒｔ−ブチル１−ピペラジンカルボキシレート（１．５ｇ）を添加し、６５℃で４時間反応液を加熱した。得られたスラリーを３０℃に冷却し、ヘキサン（７５ｍＬ）を添加した。スラリーを１時間にわたり室温に冷却し、水（１５０ｍＬ）を添加した。スラリーを４５分間静置し、濾過した。ケーキ状物を水（４×１００ｍＬ）、次にヘキサン（１００ｍＬ）で洗浄し、一晩空気乾燥し、明るい黄色の結晶（４６．３０ｇ、９９％の収率、ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２６７［Ｍ＋Ｈ−Ｃ４Ｈ８］）として４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。
【００７１】
Ｐｄ／Ｃ（５％、Ａｌｄｒｉｃｈ社製、３．０４ｇ、１．４３ｍｍｏｌ）と共に、室温で４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４６．００ｇ、１４２．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７５０ｍＬ）中のスラリーを混合し、水素雰囲気（Ｐａｒｒシェーカー、４０〜４５ｐｓｉ）下で６時間静置した。ＭｅＯＨ（２５０ｍＬ）を添加し、スラリーを室温で４時間、水素雰囲気下に置いた。更に触媒（３．０４ｇ）を添加し、混合物を７時間水素下に静置した。セライト５２１（登録商標）のパッドで混合物を濾過し、次にＴＨＦ及びＭｅＯＨで洗浄し、減圧下で濃縮し、淡いピンク色の固体として標題化合物を得た（４１．５８ｇ、９９％の収率、ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２９３［Ｍ＋Ｈ］）。
【００７２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１】
【００７３】
調製６：４−（５−アミノ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ｎブタノール（２０ｍＬ）中に、２−クロロ−５−ニトロ−ピリジン（１．０ｇ、６．３１ｍｍｏｌ）、ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．７６ｇ、９．４５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．７６ｍＬ、１２．６ｍｍｏｌ）を添加した。１２０℃で１７時間加熱した。室温に冷却し、酢酸エチル及び水を添加した。有機層を分離し、水及び飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。有機層を回収し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル１．１４ｇ（５８％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３０９［Ｍ＋Ｈ］
【００７４】
４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．１４ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）をＥｔＯＡｃ：ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）＝１：１溶液に添加した。ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を使用して１０％のＰｄ／Ｃを添加した。反応をパージし、更に水素を添加した。パージ／充填サイクルを２回繰り返し、水素バルーン下に反応液を配置し、室温で２０時間撹拌した。セライト（登録商標）パッドで反応液を濾過し、ＥｔＯＡｃで瀘過物ケーキを洗浄した。濾過水を回収し、減圧下で濃縮し、標題化合物１．０１ｇ（９８％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２７９［Ｍ＋Ｈ］
【００７５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２】
【００７６】
調製８：４−（５−アミノ−３−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＤＭＦ（２０ｍＬ）中に２，３−ジクロロ−５−ニトロ−ピリジン（２．０ｇ、１０．３６ｍｍｏｌ）、ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．１２ｇ、１１．４０ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１．７２ｇ、１２．４３ｍｍｏｌ）を添加した。８０℃で２．５日間加熱した。室温に冷却し、酢酸エチル及び水を添加した。有機層を分離し、水及び飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。有機層を回収し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２０％ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、４−（３−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル３．２９ｇ（９３％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３４１［Ｍ＋Ｈ］
【００７７】
メタノール（５０ｍＬ）中に、４−（３−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．０９ｇ、９．０１ｍｍｏｌ）を添加した。塩化ニッケル（ＩＩ）六水和物（１０．７ｇ、４５．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を０℃に冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（５．１１ｇ、１３５．１５ｍｍｏｌ）を徐々に添加し、０℃で２時間撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、セライト（登録商標）パッドで濾過した。ＣＨ２Ｃｌ２で瀘過物ケーキを洗浄し、濾過液を回収した。濾過液に飽和重炭酸ナトリウム水溶液を添加し、有機層を分離した。ＣＨ２Ｃｌ２（２×３０ｍＬ）で水性層を抽出した。有機抽出液を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜７０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物１．７７ｇ（６３％）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３１１．２［ＭＨ］
【００７８】
調製９：ｒａｃ−［（ｔｒａｎｓ）−４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−ピペラジン−１−イル］−シクロプロピル−メタノン
【化１４】
【００７９】
１５ｍＬの無水ジクロロメタン中にトランス−２，５−ジメチルピペラジン（５００ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ、１．０当量）を溶解させた。５ｍＬのジクロロメタンに溶解させたジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボン酸塩（９５３ｍｇ、４．３７ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加した。室温で２０時間撹拌した。白色固体をフィルターで濾過し、４３０ｍｇのＮ−ＢＯＣ−トランス−２，５−ジメチルピペラジン（５０％の収率）を得た。１ＨＮＭＲ（メタノール−ｄ４）ｄｐｐｍ ４．１１（ｍ，１Ｈ）、３．５５（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．２３（ｄｄ，Ｊ＝１３．６，４．０Ｈｚ，１Ｈ），３．１２（ｍ，１Ｈ），３．００（ｄｄ，Ｊ＝１２．７，２．９Ｈｚ，１Ｈ），２．４９（ｍ，１Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝７．６，３Ｈ），１．１５（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【００８０】
５ｍＬの無水ＤＭＦ中に２−クロロ−３−メチル−５−ニトロピリジン（３１０ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．０当量）及びＮ−ＢＯＣ−トランス−２，５−ジメチルピペラジン（３９７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ、１．１当量）を溶解させ、炭酸カリウム（２５１ｍｇ、１．８２ｍｍｏｌ、１．０当量）を添加し、８０℃で２０時間混合物を撹拌した。溶液をＥｔＯＡｃ：氷水＝１：１（ｖ／ｖ）の混合物に注入した。ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で水溶性相を抽出し、水（３×２０ｍＬ）及び飽和塩化ナトリウム水（３０ｍＬ）で混合有機層を洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機溶液を乾燥させ、減圧下で濃縮し、クルードなｒａｃ−（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た：ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２５１．２（Ｍ＋Ｈ）。
【００８１】
室温で、ジオキサン（４．２ｍＬ）中の４Ｍ ＨＣｌを、ｒａｃ−（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．１５ｇ、０．４３ｍｍｏｌ）に添加し、撹拌した。１時間後、減圧下で濃縮し、白色固体としてｒａｃ−（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−１−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン 二塩化水素塩０．１３８ｇを得た。（定量分析）ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２５１．２［Ｍ＋Ｈ］
【００８２】
ＥＤＣＩ（０．１４７ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１０ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、ｒａｃ−（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−１−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン 二塩化水素塩（０．１６ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中溶液に、シクロプロピルカルボン酸（５６μＬ、０．７ｍｍｏｌ）をＮ２雰囲気下、室温で添加し、更にＤＩＥＡ（０．２２ｍＬ、１．２８ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、濃縮し、残余物を得た。当該残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、５０〜７０％＝ヘキサン：ＡｃＯＥｔで溶出し、０．１１４ｇのｒａｃ−シクロプロピル−［（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（５６％は、降伏する）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３１９．１［Ｍ＋Ｈ］
【００８３】
Ｎ２雰囲気下、ｒａｃ−シクロプロピル−［（ｔｒａｎｓ）−２，５−ジメチル−４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（０．１１４ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）及び１０％ Ｐｄ／Ｃ（０．０４３ｇ）のＥｔＯＨ（５ｍＬ）中溶液に、ＮＨ４ＣＯＯＨ（０．２３ｇ、３．５ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で加熱した。２時間後、反応混合物を冷却し、セライト（登録商標）で濾過した。減圧下で濃縮し、０．１ｇの標題化合物を得た。（定量的分析）ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２８９．３［Ｍ＋Ｈ］
【００８４】
調製１０：１−［４−（５−アミノ−４−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン
８０℃で一晩、密封した試験管中で、２−クロロ−４−メチル−５−ニトロ−ピリジン（０．８５ｍｍｏｌ、０．１５ｇ）、２，２−ジメチル−１−ピペラジン−１−イル−プロパン−１−オン塩酸塩（０．９４ｍｍｏｌ、０．１６ｇ）及びトリエチルアミン（２．１２ｍｍｏｌ、０．３ｍＬ）の溶液を撹拌した。室温に混合物を冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、２，２−ジメチル−１−［４−（４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−プロパン−１−オンを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（３０％〜最高６０％）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３０７［Ｍ＋Ｈ］
【００８５】
２，２−ジメチル−１−［４−（４−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−プロパン−１−オン（０．３１ｍｍｏｌ、０．０９ｇ）の２ｍＬのエタノール中溶液に、１０％（０．０３１ｍｍｏｌ）アンモニウムギ酸塩（１．５５ｍｍｏｌ、０．１ｇ）及びパラジウム（炭素）を添加した。９０℃で１時間溶液を撹拌した。冷却し、セライト（登録商標）パッドで濾過し、減圧下で濃縮した。残余物は更なる精製をせずに使用できるものであった。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２７７［Ｍ＋Ｈ］
【００８６】
上記の第２の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表３】
【００８７】
調製１２：１−［４−（５−アミノ−４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン
【化１５】
【００８８】
処理Ａ：２，４−ジクロロ−ピリジン（６．７ｍｍｏｌ、１ｇ）、Ｎ−Ｂｏｃピペラジン（８．１ｍｍｏｌ、１．５ｇ）、ナトリウムｔｅｒｔブトキシド（９．５ｍｍｏｌ、０．９ｇ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．７ｍｍｏｌ、０．１５ｇ）及び２−（ジ−ｔ−ブチルホスフィノ）ビフェニル（０．７ｍｍｏｌ、０．２ｇ）のトルエン中溶液を、１００℃で４時間、窒素雰囲気下で撹拌した。室温に冷却し、水を添加した。酢酸エチル中に抽出し、有機層を水及び飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物として４−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。当該残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（１０％〜５０％）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２９８［Ｍ＋Ｈ］
【００８９】
処理Ｂ：４−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．６ｇ、１．９ｍｍｏｌ）のＣＨ２ＣＬ２（４ｍＬ）中溶液を室温においてＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ溶液、１．５ｍＬ、５．９ｍｍｏｌ）で処理した（わずかな発熱が生じた）。混合物を３時間撹拌し、更にＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ溶液、１．５ｍＬ、５．９ｍｍｏｌ）を添加し、一晩撹拌した。減圧下で濃縮し、塩酸１−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジンを得、Ｅｔ２Ｏ（０．４３ｇ）で粉末化した。ＬＣＭＳ ＥＳ＋（ｍ／ｚ）１９８［Ｍ＋Ｈ］。
【００９０】
処理Ｃ：１−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン塩酸（２．２ｍｍｏｌ、０．４ｇ）、トリエチルアミン（７．６ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）／（１３ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２）及びピバロイルクロライド（２．２ｍｍｏｌ、０．３ｍＬ）を室温で一晩撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、飽和水塩化ナトリウム及び水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、１−［４−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オンを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２８２［Ｍ＋Ｈ］
【００９１】
処理Ｄ：硫酸（２．３ｍＬ）中に１−［４−（４−クロロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン（１．６ｍｍｏｌ、０．４ｇ）を溶解させ、溶液を０℃に冷却した。硝酸カリウム（１．６ｍｍｏｌ、０．２ｇ）を添加し、混合物を撹拌し、一晩かけて室温に戻した。混合物を水で希釈し、塩基性ｐＨとなるまで１０％水酸化ナトリウムを添加した。酢酸エチル中に抽出した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物として１−［４−（４−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オンを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル混合物（３０％〜最高６０％）で溶出させた。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３２７［Ｍ＋Ｈ］
【００９２】
処理Ｅ：テトラヒドロフラン：水＝１：１溶液２２ｍＬ中の１−［４−（４−クロロ−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン（０．９ｍｍｏｌ、０．３ｇ）、及び４ｍＬのアンモニアの混合液中に、亜ジチオン酸ナトリウム（４．５ｍｍｏｌ、０．８ｇ）を添加した。室温で２時間溶液を撹拌した。減圧濃縮し、酢酸エチル中に残余物を抽出した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た（更に精製せずに用いた）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２９７［Ｍ＋Ｈ］
【００９３】
上記の処理Ｃ−Ｅの方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表４】
【００９４】
調製１４：［４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン
【化１６】
【００９５】
２２Ｌのフラスコに酢酸（５Ｌ）を添加した。氷水浴中に反応液を添加した。撹拌しながらピペラジン（３５５．００ｇ、２．０当量、４．０６ｍｏｌ）を徐々に添加し、温度を〜４０℃に上昇させた。更に酢酸を５Ｌ添加した。混合物が溶液状になるまで撹拌した。冷却バスを〜１３℃に調整した。塩化２，６−ジフルオロベンゾイル（３５５．００ｇ、１．００当量、２．０１ｍｏｌ、２５３．３９ｍＬ）を２時間にわたって滴下して添加し、約１３〜１５℃に反応温度を維持した。一晩撹拌した。減圧下で濃縮し、２Ｌの氷水中に残余物を溶解させた。氷水浴中のフラスコを冷却した。５Ｎ ＮａＯＨを添加し、ｐＨを７．５に調整し、３０℃以下に反応温度を維持した。〜１０℃において濾過した。ジクロロメタン（４×２Ｌ）を用いて濾過液から目的の化合物を抽出した。減圧下で溶媒を除去した。室温で１．５Ｌのメタノール中に固体を溶解させ、濾過した。メタノール溶液を濃縮し、２．０Ｌのトルエンで溶媒を交換し、純粋な生成物を得た。濾過し、（２，６−ジフルオロフェニル）−ピペラジン−１−イル−メタノンを得た。濾過液を濃縮し、再度濾過し、更なる生成物（合計４００ｇ）を得た。
【００９６】
オーバーヘッドスターラーを備える５Ｌのフラスコ中に、（２，６−ジフルオロ−フェニル）−ピペラジン−１−イル−メタノン（１．０７当量、１．５５ｍｏｌ、３５０．００ｇ）、メタノール（３７．０６ｍｏｌ、１．５０Ｌ，１．１９ｋｇ）、トリエチルアミン（１．７９ｍｏｌ、２５０．００ｍＬ、１８１．５０ｇ）、６−クロロ−２−メチル−３−ニトロ−ピリジン（１．００当量、１．４５ｍｏｌ、２５０．００ｇ）を添加した。室温で０．５時間反応混合物を撹拌した。徐々に６０℃に加熱し、６０℃で一晩撹拌を継続させた。温度を６０℃に維持しながら、水（７５０ｍＬ）を滴下して添加した。混合物を室温に冷却させた。濾過し、ケーキ状物を１５０ｍＬメタノール／水＝２：１、次いでＭＴＢＥで２回洗浄した。４５℃で減圧下で乾燥させ、黄色の固体（５３５ｇ）として（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノンを得た。
【００９７】
３ガロンオートクレーブに、（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（１．００当量、１．４４ｍｏｌ、５２０．００ｇ）、メタノール（１９７．６６ｍｏｌ、８．００Ｌ、６．３３ｋｇ）及びＴＨＦで湿らせた５％のパラジウム／炭素（７５．００ｇ）を添加した。３０℃以下に温度を維持しながら、室温で、５０ｐｓｉで反応液を水素化した。０．５時間後に２６℃に冷却し、２時間静置した。フィルターに通し、減圧下で濃縮した。濾過して固体を得、メタノール、更にヘプタンでリンスした。更に濾過を行い、［４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノンの第２バッチを得た。減圧下で４５℃で乾燥させた（４４５ｇ）。
【００９８】
調製１５：［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン
Ｋ２ＣＯ３（３４．５５ｇ、０．２５０ｍｏｌ）で、無水ＤＭＦ（２７０ｍＬ）中の２−クロロ−３−メチル−５−ニトロ−ピリジン（２７．００ｇ、０．１５６ｍｏｌ）及びピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３２．０３ｇ、０．１７２ｍｏｌ）のスラリーを処理し、Ｎ２の下で８０℃で一晩反応混合物を加熱した。得られる反応混合物を１／１＝ＥｔＯＡｃ／Ｈ２Ｏ（３，０００ｍＬ）に注入し、層を分離し、ＥｔＯＡｃ（１，０００ｍＬ）で水性層を抽出した。飽和塩化ナトリウム水（１，０００ｍＬ×３）で混合有機層を洗浄し、ＭｇＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、黄色の固体を得た。ヘキサン／ＥｔＯＡｃの黄色の固体をスラリー化し、減圧濾過し、得られた固体を回収した。ヘキサンで洗浄し、真空濾過し、黄色の固体として４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た（４２．８４ｇ）。減圧下で濾過物を濃縮し、黄色の固体を得た。ヘキサン中に黄色の固体をスラリー化し、次に減圧濾過して得られる固体を回収し、ヘキサンで洗浄し、減圧濾過して乾燥させ、更なる（５．３８ｇ）４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル化合物を、黄色の固体として（４８．２２ｇ、９５．９％の収率）得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．９６（ｄ，１Ｈ），８．１４（ｄ，１Ｈ），３．５７（ｍ，４Ｈ），３．４１（ｍ，４Ｈ），２．３６（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ）、ＴＯＦ−ＭＳ［ＥＳ＋，Ｍ＋Ｈ］Ｏｂｓ．ｍ／ｚ３２３．１７２３，Ｃａｌｃ．ｍ／ｚ３２３．１７１９、Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．ＦｏｒＣ１５Ｈ２２Ｎ４Ｏ４：Ｃ５５．８８、Ｈ６．８７、Ｎ１７．３７。Ｆｏｕｎｄ Ｃ５５．９４、Ｈ６．８７、Ｎ１７．１４．
【００９９】
ジオキサン（４当量）中の４Ｍ ＨＣｌ溶液を、ＤＣＭ（７３ｍＬ）中の４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７．７７ｇ、２４．１３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。室温で一晩混合物を撹拌した。更に２当量のＨＣｌのジオキサン中溶液を添加した。開始原料がＬＣＭＳにより検出されなくなった後、固体をフィルター濾過し、減圧下で乾燥させ、黄色がかった固体として塩酸６．９１ｇ（９７％収率）の１−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジンを得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：２５９［Ｍ＋１］
【０１００】
１−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジンの懸濁液にトリエチルアミン塩酸塩（ＤＣＭ（１２０ｍＬ）中、６．９１ｇ、２４．１３ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。２，６−ジフルオロベンゾイルクロライド（１当量）を添加し、室温で一晩混合物を撹拌した。更に２，６−ジフルオロベンゾイルクロライド（１．６ｍＬ）及びトリエチルアミン（１．５の同等）を添加し、反応を完了させた。反応液を一晩静置した。ＤＣＭで希釈し、水で数回抽出した。Ｎａ２Ｓ２Ｏ４の上で有機層を乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去した。ヘキサンで数回固体を洗浄し、（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノンを８．０８ｇ（９３％収率）得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：３６３［Ｍ＋１］
【０１０１】
ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１６６ｍＬ、１：１）中の（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（３ｇ、８．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４（１０の同等）及びアンモニア水（３ｍＬ／ｍｍｏｌ、３２％）を添加した。３０分間撹拌し、次に層を分離した。ＤＣＭ、ＥｔＯＡｃ及びイソプロピルアルコール／ＥｔＯＡｃで水性層を抽出した。有機層を混合し、Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去した。Ｖａｒｉａｎ（商標）ＳＣＸカラムに粗生成物を添加し、ＭｅＯＨでカラムを洗浄し、次にＭｅＯＨ中の２Ｍ ＮＨ３で溶出し、［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン１．２ｇ（４４％収率）を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：３３３［Ｍ＋１］
【０１０２】
調製１６：４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１７】
【０１０３】
ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−オル（１．５４ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．０５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、及びトリフェニルホスフィン（４．０２ｇ、１５．３ｍｍｏｌ）の冷却混合物に、０℃で滴下状してジイソプロピルアゾジカルボキシレート（３．０ｍＬ、１５．５ｍｍｏｌ）を添加した。添加完了後、冷却バスを除去し、２２℃で一晩反応混合物を撹拌した。減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出させ、無色の油状物（２．６９ｇ、８０％収率）として４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３３８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１０４】
水素雰囲気下、２２℃で２時間、４−（６−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．６９ｇ、８．０ｍｍｏｌ）及び１０％のパラジウム／炭素（１．０ｇ）のエタノール（６０ｍＬ）中混合物を撹拌した。パラジウム触媒を濾過して除去した。濾過液を濃縮し、無色の油状物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出させ、標題化合物を得た（２．１９ｇ、８９％収率）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３０８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１０５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表５】
【０１０６】
調製１８：４−（５−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．５ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の氷冷無水ＴＨＦ（３ｍＬ）中溶液に、プレウォッシュしたＮａＨ（０．１ｇ、２．４８ｍｍｏｌ、鉱油中６０％の分散形態）のＴＨＦ（２ｍＬ）中懸濁液を添加した。混合物を２０分間撹拌させ、２−クロロ−５−ニトロ−ピリジン（０．３６ｇ、２．２６ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加完了後、冷却バスを除去し、２２℃で一晩反応混合物を撹拌した。アイスバスで反応混合物を冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５ｍＬ）を添加した。酢酸エチル（２５ｍＬ）及び蒸留水（２５ｍＬ）により、反応混合物を分離させた。水性相を単離し、酢酸エチル（３×３５ｍＬ）で抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出させ、白色固体（０．５５ｇ、７５％収率）として４−（５−ナイトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３２４．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１０７】
水素雰囲気下、室温で４時間、４−（５−ナイトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．７ｇ、８．３５ｍｍｏｌ）及び１０％のパラジウム／炭素（０．５ｇ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合液を撹拌した。パラジウム触媒を濾過して除去した。濾過液を濃縮し、得られた無色の油状生成物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで抽出し、白色固体として標題化合物を得た（２．１１ｇ、８６％）（ＥＳ＋（ｍ／ｚ）１９４．２［Ｍ＋Ｈ−ＢＯＣ］）。
【０１０８】
調製１９：［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２−フルオロ−フェニル）−メタノン
【化１８】
【０１０９】
４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（６．４１ｇ、３１．８７ｍｍｏｌ）の氷冷無水ＴＨＦ（８０ｍＬ）中溶液に、プレウォッシュしたＮａＨ（１．２７ｇ、３１．８７ｍｍｏｌ、鉱油中６０％の分散）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中懸濁液を添加した。混合物を２０分間撹拌させ、２−クロロ−３−メチル−５ニトロピリジン（５ｇ、２８．９７ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。添加完了後、冷却バスを除去し、２２℃で一晩反応混合物を撹拌した。アイスバスで反応混合物を冷却し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を添加した。酢酸エチル（３５０ｍＬ）及び蒸留水（１５０ｍＬ）を用いて反応混合液を分離させた。水性相を単離し、酢酸エチル（１×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×１５０ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、白色固体（６．５ｇ、６７％収率）として４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３６０．３［Ｍ＋Ｎａ］
【０１１０】
４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０．１２ｇ、３０ｍｍｏｌ）の冷却ジクロロメタン（４５０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１５０ｍＬ）を添加した。２２℃で６０分間反応混合液を撹拌した。溶媒の除去後、残余物を１Ｎ水酸化ナトリウム（１５０ｍＬ）で処理し、ジクロロメタン及び酢酸エチルで抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させた。溶媒を除去し、黄色の固体（６．９ｇ、９７％収率）として、３−メチル−５−ニトロ−２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジンを得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２３８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１１１】
３−メチル−５−ニトロ−２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジンのジクロロメタン（５０ｍＬ）中溶液に、２−フルオロ−ベンゾイル塩化物（１．７４ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１．２１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、室温で２時間、Ｎ２雰囲気下で撹拌した。蒸留水（３×２０ｍＬ）、更に飽和塩化ナトリウム水溶液（１×２０ｍＬ）で反応混合物を洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機相を乾燥させ、濃縮し、黄色の固体として（２−フルオロ−フェニル）−［４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノンを得た。
【０１１２】
水素雰囲気下、２２℃で一晩、（２−フルオロ−フェニル）−［４−（３−メチル−５−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノン（３．５８ｇ、１０ｍｍｏｌ）及び１０％のパラジウム／炭素（３５８ｍｇ）のエタノール（１００ｍＬ）中混合物を撹拌した。濾過して触媒を除去した。濾過液を濃縮し、無色油状物を得た。当該油状物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチル（１：１）、更に７０％酢酸エチル／ヘキサンで抽出し、黄色の固体（２．２７ｇ、５０％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝３３０．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１１３】
調製２０：４−（４−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
窒素パージした、２−クロロ−４−ニトロ−ピリジン（４．３２ｇ、２７．２ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル４−ヒドロキシピペリジンカルボキシレート（１１．０ｇ、５４．５ｍｍｏｌ）、セシウムカーボネート（１３．３ｇ、４０．８ｍｍｏｌ）、パラジウムアセテート（１２２ｍｇ、０．５４４ｍｍｏｌ）及び２−（ジ−ｔｅｒｔ−ブチルホスフィノ）−１，１’−ビナフチル（２７１ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の混合物に、１００ｍＬのトルエンを添加した。室温で一晩混合物を撹拌し、水及び酢酸エチルにより分離させた。更に酢酸エチルで水性層を抽出し、硫酸ナトリウム上で混合有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜２０％の酢酸エチル／ヘキサン勾配で溶出し、白いワックス様の固体（５．３７ｇ、６１％、ＬＣＭＳＥＳ＋（ｍ／ｚ）２６８［Ｍ−ｔＢｕ］＋）として４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。
【０１１４】
４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３．０ｇ、９．２８ｍｍｏｌ）及び５％のＰｄ／Ｃ（１５１ｍｇ）のＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）中スラリーを、室温で一晩、６０ｐｓｉ（Ｐａｒｒ ｓｈａｋｅｒ）で水素雰囲気下に置いた。反応混合液をセライト（登録商標）パッドで濾過し、減圧下で濃縮し、白色固体（２．６ｇ、９５％収率）として標題化合物を得た。ＬＣＭＳ ＥＳ＋（ｍ／ｚ）２９４［Ｍ＋Ｈ］
【０１１５】
調製２１：［４−（４−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン
２−クロロ−４−ニトロピリジン３ｇ（１８．９ｍｍｏｌ）、４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル７．６ｇ（３７．８ｍｍｏｌ）、［１，１’］ビナフタレニル−２−イル−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ホスファン１８８ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム８５ｍｇ（０，３８ｍｍｏｌ）、及び炭酸セシウム９．２ｇ（２８．４ｍｍｏｌ））を５００ｍＬのフラスコに添加し、Ｎ２で１０分間パージした。次に無水トルエン（５００ｍＬ）を添加し、Ｎ２雰囲気下、室温で一晩撹拌した。水及びＥｔＯＡｃ（それぞれ５００ｍＬ）で反応液を分離させた。有機層を分離した。ＭｇＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、溶媒を蒸発させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ＥｔＯＡｃ：ヘキサンの混合液を用い、１０×カラム体積で５〜２０％のＥｔＯＡｃの勾配で溶出し、白色固体として標題化合物の４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１．２ｇ（３４％収率）を得た。（ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝３２４［Ｍ＋Ｈ］。
【０１１６】
１．２ｇの４−（４−ナイトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルに４Ｍ ＨＣｌのＥｔ２Ｏ中溶液８ｍＬを添加し、４時間懸濁液を撹拌した。溶媒を蒸発させ、Ｅｔ２Ｏで残留する固体を粉末化し、淡黄色の固体として１．１ｇ（１００％収率）の４−ニトロ−２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジンジヒドロクロライドを得た（ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝２２４［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１１７】
１．１ｇ（３．７ｍｍｏｌ）の４−ニトロ−２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジンジヒドロクロライドの無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中懸濁液にトリエチルアミン（２．５７ｍＬ、１８．５ｍｍｏｌ）を添加した。次に、２，６−ジフルオロベンゾイル塩化物（０．５１２ｍＬ、４．０７ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩混合物を撹拌した。水（５０ｍＬ）を添加し、有機層を分離した。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過した。溶媒を蒸発させ、黄色の固体として（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノン１．２２ｇ（９１％収率）を得た（ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝３６４［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１１８】
（２，６−ジフルオロ−フェニル）−［４−（４−ニトロ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノンの１．１ｇ（３．０ｍｍｏｌ）の氷酢酸（１０ｍＬ）中溶液に鉄粉末（４１９ｍｇ、７．５ｍｍｏｌ）を添加し、８０℃で撹拌した。１５分後に混合物を室温に戻し、セライト（登録商標）で濾過した。Ｅｔ２Ｏ及びＥｔＯＡｃでセライト（登録商標）パッドを洗浄した。水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び飽和塩化ナトリウム水溶液で、得られた有機層を洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４を通じて乾燥させ、溶媒を蒸発させ、白色固体として標題化合物８３１ｍｇ（８３％収率）を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝３３４［Ｍ＋Ｈ］。
【０１１９】
調製２２：４−（５−アミノ−ピリジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化１９】
【０１２０】
無水エタノール中にＮ−Ｂｏｃ−４−アミノピペリジン（０．９ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を溶解させ、０℃で固体の炭酸ナトリウム（０．８ｇ、７．９ｍｍｏｌ）、更に２−クロロ−５−ニトロ−ピリジン（０．６ｇ、３．９ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩溶液を撹拌し、９℃で６時間溶液を加熱した。室温で一晩撹拌した。減圧下で溶媒を蒸発させ、ＥｔＯＨ及び水を用いて粗製混合物を分離させた。ＥｔＯＡｃで抽出し、飽和塩化ナトリウム水溶液で有機層を洗浄した。有機層を混合し、ＭｇＳＯ４を通じて乾燥させた。溶媒を濾過し、蒸発させ、４−（５−ナイトロ−ピリジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。
【０１２１】
４−（５−ニトロ−ピリジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．４ｍｍｏｌ、０．８ｇ）の２０ｍＬの酢酸エチル中溶液に、ＳｎＣｌ２・Ｈ２Ｏ（１１．８ｍｍｏｌ、２，７ｇ）を添加した。室温で一晩溶液を撹拌した。溶液のｐＨが塩基性となるまでＮａＨＣＯ３水溶液を添加し、酢酸エチルで抽出した。セライト（登録商標）パッドで懸濁液を濾過した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝２９３［Ｍ＋Ｈ］
【０１２２】
調製２３：メチル１−メチルシクロヘキサンカルボキシレート
１−メチルシクロヘキサンカルボン酸（７．１１ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）及びＥｔ２Ｏ（４０ｍＬ）中溶液を、トリメチルシリルジアゾメタン（２．０Ｍ／ヘキサン、２６ｍＬ、５２ｍｍｏｌ）の滴下により処理した。室温で一晩反応混合物を撹拌し、減圧下で濃縮し、澄んだ淡黄色の油状物（７．８１１ｇ、５０ｍｍｏｌ、１００％）として標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１５６［Ｍ＋Ｈ］
【０１２３】
調製２４：３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピオン酸 ベンジルエステル
【化２０】
【０１２４】
２，３−ジヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（４２３．２ｍｍｏｌ、５０ｇ）のＤＭＦ ３００ｍＬ中溶液に、水酸化カリウム（４８６．７ｍｍｏｌ、３２．１ｇ）を添加した。１００℃で１時間溶液を撹拌し、臭化ベンジルを添加した。一晩溶液を撹拌した。混合物を冷却し、酢酸エチルで希釈した。水で有機層を洗浄した。酢酸エチルで水性層を数回洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ：７．３６−７．３２（ｍ，５Ｈ），５．１（ｓ，２Ｈ），３．５（ｓ，２Ｈ），１．２１（ｓ，６Ｈ）．
【０１２５】
調製２５：１−フルオロメチル−シクロプロパンカルボン酸 エチルエステル
【化２１】
【０１２６】
１−フルオロ−シクロブタンカルボン酸 エチルエステル（１．６ｇ、８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２２ｍＬ）及び水（２７４ｍＬ）中溶液に、ＡｇＦ（４．５当量、４．５６ｇ）を添加した。激しく撹拌しながら、８０℃で２０時間、密封した試験管内で混合物を加熱した。混合物を冷却し、セライト（登録商標）で濾過した。減圧下で溶媒を除去し、油状物（０．８１ｇ、６１％収率）として標題化合物を得た（更なる精製なしで使用した）。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１４７．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１２７】
調製２６：１−トリフルオロメチル−シクロプロパンカルボン酸 メチルエステル
１−トリフルオロメチルシクロプロパンｅ−１−カルボン酸（３．６５ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）のメタノール−ヘキサン（２．５ｍＬ−２２．５ｍＬ）中溶液に、２Ｍのジアゾメタンのヘキサン（１４．２ｍＬ、２８．４５ｍｍｏｌ）中溶液を添加した。減圧下で濃縮し、残余物を蒸留し、黄色の油状物（２．９３ｇ、７３％収率）として標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝１６９．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１２８】
調製２７：３−オキソ−３−（１−トリフルオロメチル−シクロプロピル）−プロピオニトリル
１−トリフルオロメチル−シクロプロパン−１−カルボン酸メチル・エステル（２．９３ｇ、１７．４ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（１．４３ｇのｍＬ、３４．８ｍｍｏｌ）の無水アセトン（氷）で冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、２ＭのＬＤＡのＴＨＦ（１９．１５ｍＬ、３８．３ｍｍｏｌ）中溶液を添加した。−７０℃で１．５時間の反応混合物を撹拌し、更に２時間にわたり２２℃に加熱した。濃縮し、ヘキサンを添加し、濾過し、黄色の固体を得た。ヘキサンで洗浄し、ジエチルエーテル（２５０ｍＬ）及び２Ｎ ＨＣｌ（１５０ｍＬ）で処理した。ジエチルエーテル（４×１００ｍＬ）で水層を抽出した。混合有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させた。溶媒を除去し、３−オキソ−３−（１−トリフルオロメチル−シクロプロピル）−プロピオニトリル（２．９９ｇ、９７％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ−）：ｍ／ｚ＝１７６．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１２９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表６】
【０１３０】
調製３０：５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−（６−メチル−ピリジン−３−イル）−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン
【化２２】
【０１３１】
３−オキソ−３−（１−トリフルオロメチル−シクロプロピル）−プロピオニトリル（２．６６ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）、Ｎ−ベンズヒドリデン−Ｎ’−（６−メチル−ピリジン−３−イル）−ヒドラジン（ＴＬ、２００２、４３、２１７１−２１７３）（４．３１ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）及びｐ−トリルスルホン酸（１４．２９ｇ、７５．０ｍｍｏｌ）のエタノール（８５ｍＬ）中混合物を、密封した試験管内で９０℃で１８時間加熱した。溶媒の除去後、残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜５％のジクロロメタン／メタノールで溶出し、茶色の固体（２．２９ｇ、５４％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２８３．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１３２】
調製３１：５−ペンタフルオロエチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン
【化２３】
【０１３３】
４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−３−オキソ−ペンタンニトリル（４．０ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）及びｐ−トリル−ヒドラジン（１０ｇ、６４．１ｍｍｏｌ）のエタノール（２０ｍＬ）中混合物を、密封した試験管中で９５℃で１５時間加熱した。室温に冷却後、減圧下で溶媒を除去し、黄色の固体を得た。ジクロロメタン（２５０ｍＬ）、蒸留水（１５０ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）を用いて固体を分散させた。水性相を単離し、ジクロロメタン（１００ｍＬ）で抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮し、暗い金色の油状物を得た。当該油状物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、酢酸エチル及びヘキサンで抽出し、ライトブラウンの固体（３．２４ｇ、５２％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２９２．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１３４】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表７】
【０１３５】
調製３４：［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−（６−メチル−ピリジン−３−イル）−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
５−（１−トリフルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（２．２９ｇ、８．１ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．９ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）の氷塩冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中溶液に、−１５℃で、２，２，２−トリクロロエチルクロロギ酸（１．８０ｇ、８．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液を滴下して添加した。−１５℃で０．５時間撹拌し、更に２２℃で１時間撹拌し、ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び飽和水重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍＬ）を用いて反応混合物を分離させた。水性相を単離し、ジクロロメタンで２度（各２５ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、白色固体（２．４６ｇ、６６％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４５７．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１３６】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表８】
【０１３７】
調製３８：５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
【化２４】
【０１３８】
５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（４００ｇ、１．７４ｍｏｌ）のＴＨＦ（８Ｌ）中溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（２．４Ｌ）の飽和溶液を添加し、０℃に混合物を冷却した。次に２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（４０６．７７ｇ、１．９２ｍｏｌ）を滴下して添加し、更に０℃で２時間混合物を撹拌した。酢酸エチル（３×６．５Ｌ）で反応混合物を抽出し、無水硫酸マグネシウムを通じて乾燥し、濃縮した。最小量の酢酸エチルで固体を溶解させ、過剰量のヘキサンを添加して沈殿させた。濾過して固体を回収し、乾燥させ、オフホワイトの固体（５８６ｇ、８３％収率）として標題化合物を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３４（ｄ，２Ｈ），７．２９（ｄ，２Ｈ），６．７８（ｂｓ，１Ｈ），６．４１（ｂｓ，１Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），１．３４（ｓ，９Ｈ）．ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４０６．１［Ｍ＋Ｈ］．
【０１３９】
調製３９：［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロエチルエステル
【化２５】
【０１４０】
ＴＨＦ（１．５ｍＬ／ｍｍｏｌ、６０ｍＬ）とリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ、２．０Ｍ／ヘプタン、Ａｌｄｒｉｃｈ社製、２．２当量、８８ｍｍｏｌ、４４ｍＬ）を混合し、−７８℃に冷却した。メチル−１−メチルシクロプロパンカルボキシレート（ＴＣＩＵＳ、４．５６ｇ４０ｍｍｏｌ）及びＣＨ３ＣＮ（４．２０ｍＬ、８０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）中で混合し、撹拌しながら徐々に添加した。−６５〜−７８℃で１時間混合物を撹拌し、バスを除去し、室温に混合物を加温した。減圧下で反応混合物を濃縮し、スラリー状にした。ヘキサン（１５０ｍＬ）を添加し、スラリーから沈殿物を形成させた。減圧濾過して固体を回収し、ヘキサン（２×５０ｍＬ）で洗浄した。キャッチフラスコを新しいものに置換し、５０ｍＬの２．５Ｍ ＨＣｌのフリット上で固体を溶解させ、フラスコ中で回収した。２０ｍＬの２．５Ｍ ＨＣｌ、更に２００ｍＬのＥｔ２Ｏでリンスした。濾過液を層分離させ、Ｅｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）で酸性相を抽出した。Ｅｔ２Ｏによる有機相を混合し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧濃縮し、澄んだ琥珀色の油状物（３．５８ｇ、２９．１ｍｍｏｌ、７３％の収率）として３−（１−メチル−シクロプロピル）−３−オキソ−プロピオニトリルを得た。精製せずに使用し、トリルヒドラジン塩酸（５．２３ｇ、３３．０ｍｍｏｌ）及びエタノール（２ｍＬ／ｍｍｏｌ）と、２０時間還流下で反応させた。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で濃縮させた。残余物を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で希釈し、水（２×６０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（６０ｍＬ）水及び飽和塩化ナトリウム水（６０ｍＬ）で洗浄した。ＭｇＳＯ４で有機相を乾燥させ、濾過し、遠心濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、酢酸エチル及びヘキサンの勾配で溶出し、５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（４．２２３８ｇ、１８．５ｍｍｏｌ、４６％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２２８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１４１】
２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（３．７ｍＬ、２７．５ｍｍｏｌ）で、５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（５．６８ｇ、２５ｍｍｏｌ）及びピリジン（２．２ｍＬ、２７．５ｍｍｏｌ）の冷却（０℃）ＴＨＦ（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）中溶液を処理した。反応温度を０℃に維持し、２時間後、クロロホルメート（０．３ｍＬ）及びピリジン（０．２ｍＬ）を徐々に添加した。１時間後、反応液を水（１５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出した。水（１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）水及び飽和塩化ナトリウム水（５０ｍＬ）で混合有機相を洗浄した。酢酸エチル／ヘキサンからシロップ状の粗生成物を再結晶させ、白色固体（８．１８ｇ、２０．３ｍｍｏｌ、８１％）として標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４０２．２／４０４．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１４２】
あるいは、５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（４．７５ｇ、２１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０５ｍＬ）及び飽和水溶性炭酸ナトリウム（３２ｍＬ）中溶液に、０℃で２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（３．０ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。この温度で２時間撹拌した。混合物を水に注入し、相を分離させた。酢酸エチルで水性相を抽出した。
【０１４３】
処理Ａ：
有機層を混合し、塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、黄色の固体を得た。最小量の酢酸エチルで固体を溶解させ、撹拌しながら、濁りが生じるまでヘキサンを添加した。標題化合物を結晶化させ、濾過し白色固体を得た。１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：９．８９（ｂｒｓ，１Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），６．１２（ｓ，１Ｈ），４．８２（ｓ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｑ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ），０．７１（ｑ，Ｊ＝４Ｈｚ，２Ｈ）．
【０１４４】
処理Ｂ：
イソプロピルアルコール（９１．５６ｍｏｌ）で、酢酸エチル溶媒を置換した。＜０℃で２時間スラリーを撹拌し、濾過し、冷却イソプロピルアルコール（１３．０８ｍｏｌ）で洗浄し、減圧下、４０℃で一晩乾燥させ、白い結晶状の固体として標題化合物を得た。
【０１４５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表９】
【０１４６】
調製４１：［５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
Ｎ２雰囲気下、−７８℃で３０分間にわたり、ジイソプロピルアミン（１．７ｍＬ、２．２ｅｑ、１２．１ｍｍｏｌ）及びｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ、７．５ｍＬ、２．２当量、１２．１ｍｍｏｌ）の１２ｍＬ ＴＨＦ中溶液からＬＤＡ溶液を調製した。１−フルオロメチルシクロプロパンカルボン酸 エチルエステル（０．８１ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の７ｍＬ ＴＨＦ中溶液を添加した。混合物を撹拌し、−７８℃〜室温まで加温し、室温で５時間撹拌を継続させた。飽和ＮＨ４Ｃｌ水液を１０ｍＬ添加した。ＡｃＯＥｔを添加し、有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、溶媒を除去し、茶色の油状物（０．４２ｇ、５４％収率）を得た。１０ｍＬのＥｔＯＨ中に当該油状物を溶解させ、ｐ−トリルヒドラジン（０．４７ｇ、１ｅｑ、３ｍｍｏｌ）を添加した。９０℃で一晩、密封した試験管中で混合物を加熱した。混合物を冷却し、減圧下で溶媒を除去し、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、１５〜８０％＝ヘキサン／ＡｃＯＥｔで溶出し、油状物として０．３３６ｇの５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミンを得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２４６．１［Ｍ＋Ｈ］
【０１４７】
窒素雰囲気下、０℃で５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（１７６ｍｇ、０．７１のｍｍｏｌ）及びピリジンの４ｍＬ ＴＨＦ中溶液に、ＣｌＣＯ２ＣＨ２ＣＣｌ３（１．００当量、７１７．４９μｍｏｌ、１５２．０１ｍｇ）を徐々に添加した。混合物を撹拌し、５時間にわたり０℃から室温まで加温した。不溶性物をろ過紙、減圧下で濾過液から溶媒を除去し、油状物を得た。当該油状物をクロマトグラフィに供し（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ、２０〜８０％）、黄色の油状物として１１０ｍｇの標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４２０．０［Ｍ＋Ｈ］
【０１４８】
調製４２：（２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
ＴＨＦ（５０ｍＬ）中に、トリメチルシリル−ジアゾメタン（２Ｍ ＴＨＦ中）（２５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を添加した。−７８℃に反応液を冷却し、３０分にわたりリチウムジイソプロピルアミド（２Ｍ ＴＨＦ中）（２５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を添加した。メチルプロピオレート（４．４５ｍＬ、５０ｍｍｏｌ）を添加し、−７８℃で２時間撹拌した。室温に加温し、１８時間撹拌した。酢酸エチル、水及び１Ｎ ＨＣｌを添加した。有機層を分離し、酢酸エチル（２×２５ｍＬ）で水性相を抽出した。有機抽出液を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜６０％＝ＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸 メチルエステル３．５９ｇ（３６％）を得た。
【０１４９】
ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中に、５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸 メチルエステル（１．６０ｇ、８．０７ｍｍｏｌ）及び４−メチルフェニル−１−ホウ酸（１．６４ｇ、１２．１ｍｍｏｌ）を添加した。４Å分子篩（１．５０ｇ）、更に酢酸銅（ＩＩ）（１．６１ｇ、８．８８ｍｍｏｌ）を添加した。次にトリエチルアミン（８ｍＬ）を添加し、室温で２．５日間撹拌した。反応液をセライト（登録商標）パッドで濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濾過液を回収し、飽和塩化アンモニウム水溶液を添加した。有機層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍＬ）で水性層を抽出した。有機抽出液を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜３０％＝ＥｔＯＡｃ：ヘキサンを溶出し、２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸 メチルエステル６５５ｍｇ（２９％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２８９．３［Ｍ＋Ｈ］。
【０１５０】
メタノール（２５ｍＬ）中に２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸 メチルエステル（６６５ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）を添加した。１Ｎ ＮａＯＨ（１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、５０℃で４時間加熱した。室温に冷却し、減圧下で濃縮した。飽和重炭酸ナトリウム水溶液及びＣＨ２Ｃｌ２を添加した。有機層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）で水性層を抽出した。有機抽出液を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸の６２０ｍｇ（９８％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２７５．３［Ｍ＋Ｈ］
【０１５１】
２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾール−３−カルボン酸（６２０ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ）をｔｅｒｔ−ブタノール（５ｍＬ）及びトルエン（５ｍＬ）に添加した。トリエチルアミン（０．３７８ｍＬ、２．７１ｍｍｏｌ）、更にジフェニルホスホリルアジ化物（０．５８６ｍＬ、２．７１ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で１時間加熱した。次に１００℃で１９時間加熱した。減圧下で反応液を濃縮させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜３０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、（２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル５０４ｍｇ（６５％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝３４６．４［Ｍ＋Ｈ］
【０１５２】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に（２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５０４ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を添加した。４ＭのＨＣｌ／ジオキサン（４ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で３時間加熱した。反応液を室温に冷却し、Ｖａｒｉａｎ（商標）ＳＣＸカラムにロードした。ＭｅＯＨでカラムを洗浄し、生成物を２Ｍ ＮＨ３／ＭｅＯＨで溶出した。濾過水を回収し、減圧下で濃縮し、２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミンの１７５ｍｇ（４９％）を得た。
【０１５３】
酢酸エチル（１０ｍＬ）中に２−ｐ−トリル−５−トリメチルシラニル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（１７０ｍｇ、０．６９３ｍｍｏｌ）を添加した。炭酸カリウム（１９１ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）及び水（２ｍＬ）を添加した。反応液を撹拌し、トリクロロエチルクロロホルメート（０．１１４ｍＬ、０．８３１ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１８時間撹拌した。水及び酢酸エチルを添加した。有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。有機層を回収し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜３０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物２８０ｍｇ（９６％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４２０．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１５４】
調製４３：［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチル・プロピオン酸（１００ｇ）のＭｅＯＨ（１Ｌ、ＨＰＬＣグレードの溶媒）中懸濁液に、Ｈ２ＳＯ４（４．５ｇ）を添加し、室温で週末（約７０時間）に撹拌した。溶媒を除去し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）及びＨ２Ｏ（１００ｍＬ）を用いて残余物を分離させた。ＥｔＯＡｃで水性層を再度抽出し、ＭｇＳＯ４上で混合有機層を乾燥させた。濾過し、減圧下で濃縮し、３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチルプロピオン酸 メチルエステルを得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ３．９（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．７１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１１．１Ｈｚ），２．８（ｂｓ，２Ｈ），１．１（ｓ，３Ｈ）．
【０１５５】
３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチル・プロピオン酸の酸性メチル・エステル（３２．５ｇ）の冷却（−７８℃）ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）及び２，６−ルチジン（８０ｍＬ）中溶液に、Ｔｆ２Ｏ（８０ｍＬ）を滴下して添加した。反応液を室温に戻し、生成物点のみがＴＬＣ分析によって検出されるようになるまで（約２時間）撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ（３％の水溶液）で洗浄した。ＭｇＳＯ４上で有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、５％ヘキサン／酢酸エチルで溶出し、無色の油状物として２−メチル−２，３−ビス−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−プロピオン酸 メチルエステルを得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ４．７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），４．５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ），３．８（ｓ，３Ｈ），１．４（ｓ，３Ｈ）．
【０１５６】
２−メチル−２，３−ビス−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−プロピオン酸メチル・エステル（６５．９ｍｍｏｌ、２６．３ｇ）の無水ＴＨＦ ５００ｍＬ中溶液に、１Ｍ（１３２ｍｍｏｌ、１３２ｍＬ）ＴＢＡＦを添加し、０℃まで冷却した。一晩撹拌した。減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を添加した。飽和塩化ナトリウム水で有機層を洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウム上で及び乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチルプロピオン酸 メチルエステルを得た。１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ：４．７−４．４（ｍ，４Ｈ），３．５（ｓ，３Ｈ），０．９８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）．
【０１５７】
３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチルプロピオン酸 メチルエステル（２８．２ｍｍｏｌ、４．３ｇ）の１００ｍＬの無水ＴＨＦ中溶液に、２．０Ｍ ＬＤＡ（６２．０ｍｍｏｌ、３１ｍＬ）、更に無水アセトニトリル（５６．４ｍｍｏｌ、２．９ｍＬ）を添加し、−７８℃に冷却した。−７８℃で２時間撹拌し、溶液を一晩静置し、室温に加温した。減圧下で濃縮し、ＣＨ２Ｃｌ２を添加した。飽和塩化ナトリウム水及び１０％ＨＣｌ水で有機層を洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。９０℃で一晩、３１ｍＬのエタノール中で、ｐ−トリルヒドラジン塩酸塩（１５．５ｍｍｏｌ、２．５ｇ）及び得られた残余物（１５．５ｍｍｏｌ、２．５ｇ）を撹拌した。濃縮し、残余物を水に溶解させた。１０％の水酸化ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチルで抽出した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミンを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル（１５％〜５０％まで）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝２６６［Ｍ＋Ｈ］
【０１５８】
５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（７．３ｍｍｏｌ、１．９ｇ）の３７ｍＬのＴＨＦ中溶液に、２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（８．１ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）及び水炭酸ナトリウム溶液（４．８ｍＬ）を添加した。２４時間撹拌した。水に当該溶液を注入し、酢酸エチルで抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４４０［Ｍ＋Ｈ］
【０１５９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１０】
【０１６０】
調製４５：４−（５−｛３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２６】
【０１６１】
４−（５−アミノ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製４、１．０５当量、０．５８４５ｇ）、［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロエチルエステル（調製３９、１．０当量、０．８０５４ｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（２当量、０．７ｍＬ）のＤＭＳＯ（０．２５Ｍ、８ｍＬ）中溶液を、６０℃で６時間加熱した。得られた混合物を室温に冷却し、水（２０ｍＬ）を添加した。ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）で抽出し、水（１０ｍＬ）及び飽和塩化ナトリウム水溶液（１０ｍＬ）で混合有機相を洗浄した。ＭｇＳＯ４で乾燥させ、残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタン勾配で溶出させた。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３２．３［Ｍ＋Ｈ］
【０１６２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１１】
【０１６３】
調製４９：４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル
４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製３、４１．２０ｇ、１４０．９ｍｍｏｌ）、（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、５７．０３ｇ、１４０．９ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（３６．８ｍＬ、２１１．４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５００ｍＬ）中溶液を、６０〜６５℃で２．５時間加熱した。最後の３０分の間に更にＤＭＳＯ（１００ｍＬ）を添加し、厚いスラリーを形成させた。室温にスラリーを冷却し、一晩静置した。ジエチルエーテル（６００ｍＬ）を添加し、室温で１時間スラリーを撹拌した。濾過し、ジエチルエーテル（５×３００ｍＬ）で洗浄し、次に空気乾燥し、白色固体を得た（６８．７０ｇ、ＤＭＳＯで校正しないとき８９％の収率：ＤＭＳＯを約８５ｍｏｌ％で含有）。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４８［Ｍ＋Ｈ］
【０１６４】
調製５０：１−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素
【化２７】
【０１６５】
４−（６−メチル−５−｛３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（約２．７４ｍｍｏｌ）の酢酸エチル：ジクロロメタン＝１：１溶液（２００ｍＬ）に３分間塩化水素ガスをバブリングし、確実に飽和させた。混合物を３０分間静置し、減圧下で濃縮し、白色固体を得た。固体をＭｅＯＨ中に溶解させ、２０ｇのＶａｒｉａｎ ＳＣＸカラム上へロードし、更にＭｅＯＨでリンスした。ＭｅＯＨ：ジクロロメタン＝１：１／２Ｍアンモニアでフリーの塩基を溶出させた。減圧下で溶液を濃縮し、白色固体（１．２１ｇ、２段階処理で９９％）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４４６［Ｍ＋Ｈ］
【０１６６】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１２】
【０１６７】
調製５２：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素
４−（５−アミノ−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２００ｍｇ、０．７１８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（０．１２５ｍＬ、０．７１８ｍｍｏｌ）及び（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、２９１ｍｇ、０．７１８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（５ｍＬ）中に添加し、７５℃で１７時間加熱した。室温に冷却し、ＥｔＯＡｃ及び水を添加した。有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水（２×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を回収し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜７０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル３２８ｍｇ（８５％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３４．４［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１６８】
ＴＨＦ（１０ｍＬ）中に４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５６５ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を添加した。４ＭのＨＣｌ／ジオキサン（２．６５ｍＬ、１０．６ｍｍｏｌ）を添加し、６０℃で３時間加熱した。反応液を室温に冷却し、Ｖａｒｉａｎ（商標）ＳＣＸカラム上へロードした。ＭｅＯＨでカラムを洗浄し、更に生成物を２Ｍ ＮＨ３／ＭｅＯＨで洗浄した。濾過水を回収し、減圧下で濃縮し、標題化合物４１１ｍｇ（８９％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４３４．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１６９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１３】
【０１７０】
調製５６：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素
４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製４９、６３．２０ｇ、１１５．４ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（６００ｍＬ）中溶液を、２２℃でＨＣｌ（ジオキサン中４Ｎ溶液、３００ｍＬ、１２００ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を４時間撹拌し、次に減圧下で濃縮し（室温、約１０Ｔｏｒｒ、３日間）、オフホワイトの粉末（６２．２ｇ−ジオキサンを約４５ｍｏｌ％で含有）として１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素 ジヒドロクロリドを得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４４８［Ｍ＋Ｈ］
【０１７１】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素ジヒドロクロリド（１０ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ中溶液を、７０ｇのＶａｒｉａｎＳＣＸカラム上へロードし、ＭｅＯＨ（約３００ｍＬ）でリンスした。２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨ：ジクロロメタン＝１：１溶液（１５０ｍＬ）でフリーの塩基を溶出させた。減圧下で濃縮し、白色固体（６．２４ｇ）を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４４８［Ｍ＋Ｈ］
【０１７２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１４】
【０１７３】
調製５９：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［２−メチル−６−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジン−３−イル］−尿素
【化２８】
【０１７４】
１−５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、６０８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）及び４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４５３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中溶液を、５分間窒素ガスでバブリングした。次にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５００μＬ、３．０ｍｍｏｌ）を添加した。６０℃で一晩撹拌し、酢酸エチル（２５ｍＬ）及び飽和水重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍＬ）を用いて反応混合物を分離させた。水性相を単離し、酢酸エチルで２度（各２５ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、茶色の固体（７４６ｍｇ、８８％収率）として４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５６３．３［Ｍ＋Ｈ］
【０１７５】
４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７４６ｍｇ、１．３３ｍｍｏｌ）の冷却したジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（１０ｍＬ）を添加した。２２℃で２５分間反応混合物を撹拌した。溶媒の除去後、残余物を１Ｎ水酸化ナトリウム（２０ｍＬ）で処理し、ジクロロメタンで３回（各２０ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させた。溶媒を除去し、白色固体（６０５ｍｇ、９８％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４６３．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１７６】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１５−１】
【表１５−２】
【０１７７】
調製６８：１−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素 塩酸
４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．９ｍｍｏｌ、０．９ｇ）の４ｍＬのＤＭＳＯ中溶液に、［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（２．７ｍｍｏｌ、１．２ｇ）及びＤＩＥＡ（２．９ｍｍｏｌ、０．５ｍＬ）を添加し、８５℃で一晩撹拌した。冷却し、水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、４−（５−｛３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（１０〜５０％）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５８４［Ｍ＋Ｈ］。
【０１７８】
５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２及び４．０Ｍ 塩化水素／ジオキサン（７．３５ｍｍｏｌ、１．８ｍＬ）に溶解させた４−（５−｛３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．５ｍｍｏｌ、０．９ｇ）を室温で一晩撹拌した。濃縮し、ジエチルエーテルで白色固体を分散させた。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝４８４［Ｍ＋Ｈ］
【０１７９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１６】
【０１８０】
調製７０：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［６−（ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリジン−３−イル］−尿素
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、２．０ｍｍｏｌ、０．８ｇ）を、４−（５−アミノ−ピリジン−２−イルアミノ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．０ｍｍｏｌ、０．６ｇ）及び炭酸カリウム（２．２０ｍｍｏｌ、０．３ｇ）のアセトニトリル（２５ｍＬ）中溶液に添加した。室温で１２時間、溶液を撹拌した。水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨの勾配（０．５〜２０％）で溶出し、４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イルアミノ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４８［Ｍ＋Ｈ］
【０１８１】
４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イルアミノ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．１ｍｍｏｌ、０．６ｇ）のＥｔ２Ｏ（５ｍＬ）中溶液を、２２℃でＨＣｌ（ジエチルエーテル中２．０Ｍ溶液、５ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）で処理した。室温で一晩溶液を撹拌した。減圧濃縮して残余物を得、更に当該残余物をＳＣＸカートリッジに添加し、２．０Ｎアンモニア／メタノールで抽出した。フリーの塩基として標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝４８８［Ｍ＋Ｈ］
【０１８２】
調製７１：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジン−４−イル］−尿素
【化２９】
【０１８３】
４−（４−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製２０、１ｇ、３．４１ｍｍｏｌ）、（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、１．３８ｇ、３．４１ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（１．２ｍＬ、６．８２ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中溶液を６０℃で５日間加熱した。得られる混合物を室温に冷却し、相分離を補助するために飽和塩化ナトリウム水溶液を使用して、水及び酢酸エチルに層分離させた。酢酸エチルで水性層を抽出し、水で二回混合有機層を洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、酢酸エチル／ジクロロメタンの勾配で溶出し、４−｛４−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル８７７ｍｇ（４３％収率）を得た。ＬＣＭＳ ＥＳ＋（ｍ／ｚ）５４９［Ｍ＋Ｈ］
【０１８４】
４−｛４−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸 ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８７７ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ：ＤＣＭ＝１：１（１００ｍＬ）中溶液を、３分間ＨＣｌ（ｇ）でバブリング処理した。得られた混合物を３０分間静置し、減圧下で濃縮した。ＭｅＯＨ中に残余物を溶解させ、２０ｇのＶａｒｉａｎ ＳＣＸカラム上へロードし、ＭｅＯＨで十分リンスした。フリーの塩基をＤＣＭ：２Ｍアンモニア／ＭｅＯＨ＝１：１で溶出させた。減圧下で溶液を濃縮し、標題化合物を得た。（定量分析）ＬＣＭＳ ＥＳ＋（ｍ／ｚ）４４９［Ｍ＋Ｈ］。
【０１８５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１７】
【０１８６】
実施例１
１−｛６−［４−（２，２−ジメチル−ペンタノイル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
【化３０】
【０１８７】
１−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（調製５、１当量、０．１５１０ｇ）、２，２−ジメチルペンタン酸（１．１５当量、０．０５２１ｇ）及び触媒ＤＭＡＰ（約０．１当量、０．０４９ｇ）のジクロロメタン（約０．１Ｍ、５ｍＬ）中溶液若しくはスラリーを、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸（ＥＤＣ１．１５当量、０．０７６７ｇ）で処理した。室温で４８時間得られる混合物を激しく撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。精製Ａ：２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタンの濃度勾配（酢酸エチルのジクロロメタン又はヘキサン中の勾配）を使用して、シリカゲル上で精製した。精製Ｂ：１０ｍＭの重炭酸アンモニウム水溶液／アセトニトリルの勾配を用い、Ｘｔｅｒｒａ ３０×７５ｍｍの５ミクロンＭＳ Ｃ１８カラムで逆相クロマト精製し、微量の標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４４．［Ｍ＋Ｈ］
【０１８８】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１８】
【０１８９】
実施例４
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素 メタンスルホン酸
【化３１】
【０１９０】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（調製５６、１５７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、トリメチル酢酸（５４ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及び触媒ＤＭＡＰ（４ｍｇ）のジクロロメタン（３．５ｍｌ）中混合液を、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸（ＥＤＣＩ、１０１ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）で処理した。得られる混合液を室温で一晩撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタンの勾配で溶出し、フリーの塩基として標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３２［Ｍ＋Ｈ］
【０１９１】
遊離アミンのジクロロメタン（５ｍＬ）中溶液若しくはスラリーを、２Ｍのメタンスルホン酸／ジクロロメタン（１当量、０．１５５ｍＬ）で処理した。得られる混合物を撹拌し、窒素雰囲気下で濃縮し、減圧下で乾燥させ、塩を調製した。
【０１９２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表１９−１】
【表１９−２】
【表１９−３】
【表１９−４】
【表１９−５】
【表１９−６】
【表１９−７】
【表１９−８】
【表１９−９】
【表１９−１０】
【０１９３】
実施例４６
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素
【０１９４】
アセトニトリル（５ｍＬ）中に、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（４８ｍｇ、０．１１１ｍｍｏｌ）、２，６−ジフルオロ安息香酸（２１ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）及び４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（３ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加した。Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（５０ｍｇ、０．１３３ｍｍｏｌ）を添加し、７０℃で１９時間加熱した。室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２及び水を添加した。有機層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）で水性相を抽出した。有機層を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０−６０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物を得た。ＬＣＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝５７４．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１９５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２０】
【０１９６】
実施例５０
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素
【０１９７】
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中に、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（２００ｍｇ、０．４６１ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．０７１ｍＬ、０．５０７ｍｍｏｌ）及び４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）を添加した。２，２−ジメチル−プロピオニル塩化物（０．０６２ｍＬ、０．５０７ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１７時間撹拌した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０−１００％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物１７５ｍｇ（７３％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５１８．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１９８】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２１】
【０１９９】
実施例５３
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（３−メチル−ペンタノイル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（０．２０ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）を、３−メチル−ペンタン酸（０．０５９ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０．０６ｇ、０．４６ｍｍｏｌ）及びポリマー被支持カルボジイミド（０．８３ｇ、１．０ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２／ＤＭＦ（１８／１、ｍＬ）混合懸濁液中で反応させた。室温で一晩混合液を撹拌し、次に樹脂を濾過し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄した。濃縮し、ＳＣＸカートリッジで残余物を精製し、ＮＨ４ＯＨ／ＣＨ３ＯＨ ２Ｎで溶出し、薄いピンク色の固体として標題化合物１３５ｍｇ（５５％）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３２［Ｍ＋Ｈ］
【０２００】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２２−１】
【表２２−２】
【０２０１】
実施例６１
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素
アセトニトリル（１０ｍＬ）中に、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（５−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素（３００ｍｇ、０．６７０ｍｍｏｌ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（１５４ｍｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）、２，６−ジフルオロ安息香酸（１２７ｍｇ、０．８０４ｍｍｏｌ）及び４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１５ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を６０℃で１８時間加熱した。反応液を室温に冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２及び水を添加した。有機層を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２０ｍＬ）で水性層を抽出した。有機層を混合し、Ｍｇ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、１０〜７０％のＥｔＯＡｃ：ヘキサンで溶出し、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５８８．３［Ｍ＋Ｈ］
【０２０２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２３−１】
【表２３−２】
【０２０３】
実施例６８
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素 モノメタンスルホネート
【化３２】
【０２０４】
オーバーヘッドスターラーを有する２５Ｌ容の３首フラスコに、［４−（５−アミノ−６−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン（１．００当量、６０１．７７ｍｍｏｌ、２００．００ｇ）、５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（１．００当量、６０２．８８ｍｍｏｌ、２４４．００ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（６０．４７ｍｍｏｌ、７．５０ｇ）、ジイソプロピルエチルアミン（２２９．３６ｍｍｏｌ、４０．００ｍＬ、２９．６４ｇ）、ＤＭＳＯ（１．００Ｌ）を添加した。徐々に加熱し、６０〜６５℃に維持した。ＤＭＳＯ（２５０ｍＬ）を添加し、〜６５℃で１時間撹拌を継続した。ＭＴＢＥを添加し、０．５時間〜６０℃に維持した。室温に冷却した。濾過して固体を回収し、混合した。ＭＴＢＥでケーキ状物をリンスし、一晩減圧下で乾燥させた。９Ｌのメタノール中に材料を溶解させ、還流しながら活性炭（６５ｇ）で１時間処理した。セライト（登録商標）で混合物を濾過した。濾過液を濃縮し、溶媒を酢酸エチルに交換した。濾過し、酢酸エチル、ヘプタンでリンスし、減圧下、４０℃で乾燥させ、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素（４９０ｇ）を得た。
【０２０５】
５Ｌのフラスコに１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素（１．００当量、６００．６７ｍｍｏｌ、３５３．００ｇ）及びメタノール（３．５０Ｌ）を添加した。混合物を５０〜６０℃に加熱した。２５０ｍＬの酢酸エチル中に、メタン硫酸（１．００当量、６０３．４９ｍｍｏｌ、３９．５６ｍＬ、５８．００ｇ）を滴下して添加した。〜５０℃で０．５時間溶液を撹拌し、熱源を除去した。５時間撹拌し、濾過した。減圧下で濾過水を濃縮した。酢酸エチル（３００ｍＬ）を添加し、減圧下で濃縮した。酢酸エチルを更に３００ｍＬ添加し、減圧下で濃縮した。２Ｌのジエチルエーテルを添加し、１５分間撹拌した。一晩静置した。３時間撹拌し、濾過した。ジエチルエーテル及びヘプタンをリンスし、〜４０℃で減圧下で乾燥させ、標題化合物（３９１．４ｇ）を得た。
【０２０６】
実施例６９
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［６−（ｔｒａｎｓ）−４−シクロプロパンカルボニル−２，５−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−５−メチル−ピリジン−３−イル］−尿素
【化３３】
【０２０７】
ｒａｃ−［（ｔｒａｎｓ）−４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−２，５−ジメチル−ピペラジン−１−イル］−シクロプロピル−メタノン（調製９、０．１ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（０．２８３ｇ、０．７ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（３ｍＬ）及びＤＩＥＡ（０．１２ｍＬ、０．７ｍｍｏｌ）中に溶解させた。密封した試験管中で８０℃で１５時間加熱した。冷却し、氷水中に注いだ。ＡｃＯＥｔで数回抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、５０−９０％のＡｃＯＥｔ／ヘキサンで溶出し、固体として０．０９ｇ（４７％収率）のｒａｃ−１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［６−（ｔｒａｎｓ）−４−シクロプロパンカルボニル−２，５−ジメチル−ピペラジン−１−イル）−５−メチル−ピリジン−３−イル］−尿素を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４４．５［Ｍ＋Ｈ］
【０２０８】
粗生成物をキラルクロマトグラフィに供し、Ｃｈｉｒａｐａｃｋ ＡＳカラムを使用して、ヘキサン−ＤＭＥＡ ０．２％：ＥｔＯＨ ２５％で溶出（３．７８分）した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４４．５［Ｍ＋Ｈ］
【０２０９】
実施例７０
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）ピペラジン−１−イル］−４−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３８、０．３２ｍｍｏｌ、０．１ｇ）を、（１−［４−（５−アミノ−４−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン（０．３ｍｍｏｌ、０．０８ｇ）及び炭酸カリウム（０．３ｍｍｏｌ、０．０５ｇ）のアセトニトリル（３ｍＬ）中溶液に添加し、８０℃で４時間溶液を撹拌した。水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチルの勾配（２０％〜８０％まで）で溶出した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５３２［Ｍ＋Ｈ］
【０２１０】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２４】
【０２１１】
実施例７４
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛５−クロロ−６−［４−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−（５−クロロ−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素 塩酸（１．６ｍｍｏｌ、０．７ｇ）のＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中溶液に、１−メチルシクロプロパンカルボン酸（１．６ｍｍｏｌ、０．２ｇ）、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール水和物（１．８ｍｍｏｌ、０．２ｇ）、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（１．８ｍｍｏｌ、０．３ｇ）及びトリエチルアミン（４．８ｍｍｏｌ、０．７ｍＬ）を添加した。室温で２４時間溶液を撹拌した。水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。当該残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（２０％〜８０％）で溶出させた。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５５０［Ｍ＋Ｈ］
【０２１２】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２５】
【０２１３】
実施例７６
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリジン−３−イル｝−尿素
【化３４】
【０２１４】
３ｍＬのアセトニトリル中で、１１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［６−（ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリジン−３−イル］−尿素（０．２２ｍｍｏｌ、０．１ｇ）、２，６−ジフルオロ−塩化ベンゾイル（０．２ｍｍｏｌ、０．０３ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．２ｍｍｏｌ、０．０３ｍＬ）を室温で一晩撹拌した。ＣＨ２Ｃｌ２を添加し、飽和水塩化ナトリウム及び水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨの勾配（０．５〜１０％）で溶出させた。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５８８［Ｍ＋Ｈ］
【０２１５】
実施例７７
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛２−メチル−６−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−３−イル｝−尿素
【化３５】
【０２１６】
４−｛５−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−６−メチル−ピリジン−２−イルオキシ｝−ピペリジン（９３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、１−メチルシクロプロピル １−カルボン酸（４０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（８０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中反応混合物を、２２℃で１８時間撹拌した。濾過し、シリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、白色固体（１１１ｍｇ、１００％収率）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４５．３［Ｍ＋Ｈ］
【０２１７】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２６−１】
【表２６−２】
【表２６−３】
【表２６−４】
【表２６−５】
【０２１８】
実施例９９
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛５−クロロ−６−［１−（２−フルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−３−イル｝−尿素メシラート
【化３６】
【０２１９】
上記の方法と実質的に同様の方法で、フリーの塩基を調製した。ジクロロメタン（１ｍＬ）及びＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の当該フリーのアミンの溶液又はスラリーを、メタンスルホン酸（１当量、１７．６６ｍｇ０．１８３ｍＬ）で処理し、メシル酸塩に変換した。得られる混合物を激しく撹拌し、濃縮し、減圧下で乾燥させ、塩を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝６０５．０［Ｍ＋Ｈ］（フリーの塩基として）。
【０２２０】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２７−１】
【表２７−２】
【表２７−３】
【表２７−４】
【表２７−５】
【０２２１】
実施例１１７
１−｛６−［１−（２−フルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［２−ｐ−トリル−５−（２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−１−トリフルオロメチル−エチル）―２Ｈ―−ピラゾル−３−イル］−尿素
【化３７】
【０２２２】
［２−ｐ−トリル−５−（２，２，２−トリフルオロ−１−メチル−１−トリフルオロメチル−エチル）―２Ｈ―−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸 ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製３７、９５ｍｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）及び［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２−フルオロ−フェニル）−メタノン（調製１９、６１ｍｇ、０．１８５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（３ｍＬ）中溶液を、５分間窒素ガスでバブリングした。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０８ｍＬ、０．４６３ｍｍｏｌ）を添加した。７０℃で一晩撹拌し、ＣＨ２Ｃｌ２（７５ｍＬ）に添加し、１０ｇのＳＣＸ ＭｅｇａＢｏｎｄ溶出カラムで洗浄した。ＣＨ２Ｃｌ２（３×３５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（２×５０ｍＬ）及び２Ｍ ＮＨ３／ＭｅＯＨ（３×５０ｍＬ）でカラムを洗浄した。所望のフラクションを混合し、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ＣＨ２Ｃｌ２及び１０％ ＭｅＯＨ／９０％ ＣＨ２Ｃｌ２溶液で溶出させ、白色固体（６９ｍｇ、５４％収率）として標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝６９３．５［Ｍ＋Ｈ］
【０２２３】
実施例１１８
１−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
５ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２中で、１−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−（２−メチル−６−ピペラジン−１−イル−ピリジン−３−イル）−尿素塩酸塩（０．８５ｍｍｏｌ、０．５ｇ）、２，６−ジフルオロベンゾイル塩化物（０．８５ｍｍｏｌ、０．１ｍＬ）及びトリエチルアミン（２．６ｍｍｏｌ、０．４ｍＬ）を室温で一晩撹拌した。水を添加し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。飽和塩化ナトリウム水溶液で有機層を洗浄した。無水硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル（２０％〜７０％）を使用して溶出させた。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ＝６２４［Ｍ＋Ｈ］
【０２２４】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２８】
【０２２５】
実施例１２１
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２−シクロペンチル−アセチル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素 メタンスルホネート
【化３８】
【０２２６】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛６−［４−（２−シクロペンチル−アセチル）−ピペラジン−１−イル］−ピリジン−３−イル｝−尿素のＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５／５）（２ｍＬ）中溶液を撹拌し、０．１０ｍＬの１Ｎメタン硫酸のＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（９５／５）中溶液を添加した。室温で２０分間混合物を撹拌し、Ｎ２をフラッシュし、溶媒を蒸発させた。塩をＥｔ２Ｏで分散させ、濾過し、乾燥させ、標題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ＝５４４［Ｍ＋Ｈ］
【０２２７】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表２９−１】
【表２９−２】
【表２９−３】
【表２９−４】
【０２２８】
実施例１３４
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛２−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−４−イル｝−尿素 メタンスルホネート
【化３９】
【０２２９】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［２−（ピペリジン−４−イルオキシ）−ピリジン−４−イル］−尿素（調製７１、１７９ｍｇ、４００ｍｍｏｌ）、２，６−ジフルオロ安息香酸（７６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）及び触媒ＤＭＡＰ（５ｍｇ）のジクロロメタン（４ｍｌ）中溶液を、ＥＤＣＩ（９２ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）で処理した。室温で一晩得られた混合物を撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、窒素雰囲気下で濃縮した。数ｍＬのＤＣＭで残余物を分散させた。超音波破壊の後、白色固体をフィルターで濾過し、減圧下で乾燥させ、フリーの塩基（６９％収率）として標題化合物１６２ｍｇを得た。
【０２３０】
遊離アミンのＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝３：２（５ｍＬ）中懸濁液を、２Ｍ メタンスルホン酸／ジクロロメタン（１当量、０．１３８ｍＬ）で処理した。溶液が清澄となるまで混合物を撹拌し、窒素雰囲気下で濃縮し、減圧下で乾燥させ、表題の塩を得た。（ＬＣＭＳＥＳ＋（ｍ／ｚ）５８９［Ｍ＋Ｈ］）。
【０２３１】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表３０】
【０２３２】
実施例１３６
１−｛２−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
［４−（４−アミノ−ピリジン−２−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン（２６５ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）、５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（３５０ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（７００ｍＬ）の４ｍＬのＤＭＳＯ中溶液を、６０℃で１６時間加熱した。得られた混合物を室温に冷却し、水を添加した。沈殿物を濾過し、水及びペンタンでリンスし、真空オーブンで６０℃で乾燥させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタン（０〜２％）の勾配で溶出し、８５ｍｇの生成物を得た。
【０２３３】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表３１】
【０２３４】
実施例１３９
１−｛２−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素 メシレート
７１ｍｇ（０．１１４ｍｍｏｌ）の１−｛２−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−ピリジン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素の２ｍＬのＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）混合液中溶液に、調製直後の１Ｍ ＭｅＳＯ３ＨのＤＣＭ／ＭｅＯＨ（９５：５）中溶液を０．１１４ｍＬ（０．１１４ｍｍｏｌ）添加した。室温で２０分間混合物を撹拌し、Ｎ２流中で溶媒を蒸発させた。残余物をＥｔ２Ｏで分散させ、標題化合物（７６ｍｇ、９３％収率）（１００％の純度）を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）＝６２５［Ｍ＋Ｈ］
【０２３５】
上記の方法と実質的に同様の方法で、以下の化合物を調製した。
表
【表３２】
【０２３６】
実施例１４１
１−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素 メタンスルホネート
【化４０】
【０２３７】
［４−（５−アミノ−３−メチル−ピリジン−２−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン（４００ｍｇ、１．２０５ｍｍｏｌ）及び［５−（２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（１当量）のアセトニトリル（１２ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（２当量）を添加した。密封した試験管中で、８０℃で混合物を撹拌した。４日後に溶媒を除去した。ＤＣＭで粗生成物を溶解させ、水で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させた。濾過し、減圧下で溶媒を除去した。得られた固体をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／アセトン＝３：１で溶出させ、白色固体（４８％収率）として３５２ｍｇの１−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：６０６［Ｍ＋１］
【０２３８】
ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中に、フリーの塩基としての１−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−５−メチル−ピリジン−３−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素５０ｍｇ（０．０８３ｍｍｏｌ）を溶解させた。トリフルオロメタンスルホン酸／ＤＣＭ（１Ｎ）を１当量添加した。３０分後に溶媒を除去し、白色固体を得た。エーテル／ＤＣＭで数回洗浄した後、減圧下で固体を乾燥させ、標題化合物（９５％収率）５５ｍｇを得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：６０６［Ｍ＋１］
【０２３９】
ｐ３８キナーゼの阻害：
標準用液の調製
２．５ｍＬの１Ｍ トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．１ｍＬの１Ｍ ジチオスレイトール、１．０ｍＬの１Ｍ 塩化マグネシウム及び３００μＬの１％ トリトンＸ−１００を混合し、水１００ｍＬで希釈し、キナーゼ緩衝液を調製した。このキナーゼ緩衝液８４ｍＬを１６ｍＬのＤＭＳＯと混合し、１６％のＤＭＳＯ溶液を調製した。
【０２４０】
１０２．６μＬの１０ｍＭ ＡＴＰ水溶液、２５μＬ３３Ｐ−ＡＴＰ、及び１６３．５μＬの４ｍＭ ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＰｅｐｔｉｄｅ６６１−６８１水溶液（Ｂｉｏｍｏｌ，Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｐ−１２１）を、５ｍＬのキナーゼ緩衝液に添加し、２００μＭのＡＴＰ溶液を調製した
【０２４１】
１５３６μＬのキナーゼ緩衝液に、９．５μＬの濃縮した酵素溶液（２５０ｎｇのｐ３８酵素／μＬキナーゼ緩衝液）を溶解し、ｐ３８キナーゼ酵素溶液を調製した。
【０２４２】
サンプル調製
Ｃｏｓｔａｒ社製９６穴マイクロタイタープレート内に、２４８μＬの１６％ ＤＭＳＯ溶液中に、各化合物のジメチルスルホキシド中の１０ｍＭストック液を２μＬ溶解させ、各試験化合物及びコントロール化合物の８０μＭ濃度の溶液を調製した。プレートを１：３で連続希釈し、Ｔｅｃａｎ Ｇｅｎｅｓｉｓ自動液体ハンドラー上に配置した。
【０２４３】
アッセイ
連続希釈された化合物の溶液１０μＬを、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｍｕｌｔｉｍｅｋ ９６ウェル自働液体ハンドラーに配置したアッセイプレートに添加した。２００μＭのＡＴＰ溶液２０μＬを、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ ８−チャネル液体ハンドラーを用いて添加した。ｐ３８キナーゼ酵素溶液１０μＬを、Ｍｕｌｔｉｍｅｋを使用してアッセイプレートへ添加した。混合物を３０℃で４０分間反応させ、次にＭｕｌｔｉｄｒｏｐで調製直後の５％の結晶ＡｃＯＨ ６０μＬを添加して反応を停止させた。この溶液８０μＬを、Ｍｕｌｔｉｍｅｋを使用して「ＭＡＰＨ」プレートへ移した。このプレートを、室温で３０分間静置し、次に調製直後の０．５％結晶ＡｃＯＨ（１×３００μＬ、２×２００μＬ）を用い、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ ＭＡＰ抽出機で洗浄／吸引した。プレートを吸引し、１００μＬ ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０シンチレーション液（Ｐａｃｋａｒｄ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）をＭｕｌｔｉｄｒｏｐで添加した。プレートを３０分間静置し、３３Ｐ−同位元素を、ＰＥ／Ｗａｌｌａｃ Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンターでカウントした。
【０２４４】
実施例５で例証した化合物を、最初に１０の濃度（２０μＭ〜１ｎＭとなるように、１：３連続希釈）で試験した。次に２５ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する化合物を、２μＭ〜０．１ｎＭ（１：３連続希釈）の濃度で再試験した。ＩＣ５０値は、各化合物ごとに非線形回帰を使用して算出した（ＩＤＢＳ ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅソフトウェアを使用）。基本的に上記に従い実施例５を試験し、２２ｎＭのＩＣ５０でｐ３８キナーゼ酵素を阻害することが明らかとなった。
【０２４５】
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるｐ−ＭＡＰＫＡＰＫ２の抑制
ＲＡＷ２６４．７細胞（マウス単球／大食細胞系 ＡＴＣＣ）を、ＲＰＭＩ−１６４０培地＋１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を用い９６ウェルプレート中に５０，０００の細胞／ウェルの密度で播種し、沈着させ、４８時間かけてウェルの底に付着させた。コンフルエンスとなった後、細胞を、各化合物の１０の連続希釈系列で２時間処理した。全ての試験においてコントロール化合物も含めた。２時間後にアニソマイシン（１００ｕｇ／ｍｌ）を添加し、細胞を５％のＣＯ２雰囲気下、３７℃で３０分間インキュベートした。次に細胞を固定し、過酸化水素で処理し、内在性ペルオキシダーゼを除去した。最後にプレートをＦＢＳでブロッキングし、洗浄し、抗リン酸化−ＭＡＰＫＡＰＫ２抗体（Ｔｈｒ３３４，Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，Ｃａｔ＃３０４１）及びａｈＰ−コンジュゲート二次抗体を用いてＥＬＩＳＡアッセイを実施した。この反応では、強化された化学発光基質ａｈＰであるＦＥＭＴＯ（Ｐｉｅｒｃｅ社製）を用いた検出を行い、それにより急速な動態における発光及び高いシグナル強度がもたらされた。
【０２４６】
基本的に上記に従い例証した化合物を試験した結果、３００ｎＭ以下のＩＣ５０値を有することが明らかとなった。実施例１１１、１１３、１１４、１１５、１１９で調製した化合物を、基本的に上記に従い、１００％の血清の存在下で試験し、５００ｎＭ以下のＩＣ５０値を有することが明らかとなった。以下の化合物を基本的に上記に従い試験し、以下の活性を有することが明らかとなった。
【表３３】
【０２４７】
ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＮＦαの抑制：
マウス腹腔マクロファージ：
１ｍＬのチオグリコール酸塩ブロス（１．０Ｌの蒸留水中に、５．０ｇのイーストエキス、１５．０ｇのカシトン又はトリプチカーゼ、５．０ｇのデキストロース、２．５ｇの塩化ナトリウム、０．７５ｇのＬ−シスチン、０．５ｇのチオグリコール酸ナトリウム、１．０ｍｇのレサズリン及び０．７５ｇのアガー）を、Ｂａｌｂ／Ｃ雌マウスの腹膜空腔に注入した。注入後４日目又は５日目にマウスをと殺し、ＲＰＭＩ−１６４０培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）４ｍＬでｉ．ｐ．注入し、腹膜マクロファージをシリンジで吸引した。
【０２４８】
サイトカイン産生：
マウス腹膜マクロファージを血球計測板で計測し、１０％のウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地で、９６ウェルプレート中に５×１０５細胞／ウェルとなるように調節した。２００μＬ／ウェルで９６ウェルプレートに沈着させ、少なくとも３時間、細胞をウェルの底部に付着させた。試験化合物又は標準物質のｐ３８キナーゼ阻害剤を、３７℃で１時間、８つの濃度系列を使用して前処理した（２０μＬ／ウェル）。３７℃で、１８時間、５０ｎｇ／ｍＬのリポ多糖（ＬＰＳ）及び１０Ｕ／ｍＬインターフェロン−γの混合物を用いて細胞を処理した（２０μＬ／ウェル）。処理に供された培地を回収し、Ｌｕｍｉｎｅｘ検出法を使用してＴＮＦα産生をアッセイした。
【０２４９】
ＴＮＦα／Ｌｕｍｉｎｅｘ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｋｉｔ−Ｃａｔａｌｏｇ＃１７１−Ｇ１２２２１）検出アッセイ：
ＴＮＦαスタンダードのプレミックス（１つのスタンダードチューブ／２つの９６ウェルプレート）の凍結乾燥品を、滅菌水５０μＬ（５００，０００ｐｇ／ｍＬ）に溶解させて再調製した。サンプルを５秒間ボルテックスし、３０分間氷上でインキュベートし、更に使用前に５秒間ボルテックスした。１２本の一組の１．５ｍＬチューブを＃１〜＃１２として適宜ラベルし、それらのチューブに以下に示す数値で培地を添加した。（スタンダード濃度は以下の通り：５０，０００、２５，０００、１２，５００、６，２５０、３，１２５、１，５６２．５、７８１．３、３９０．６、１９５．３、９７．７、４８．８及び２４．４ｐｇ／ｍＬ）。抗サイトカインをコンジュゲートしたビーズのプレミックスを３０秒間激しくボルテックスした（２５×）。抗サイトカインをコンジュゲートしたビーズを、１×Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒを使用している１×濃度に希釈した。全プレートについて、ビーズのプレミックス２４０μＬを、５，７６０μＬのＢｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒに添加した。ミリポア社製の９６ウェルフィルタープレートをブロッキングバッファでブロッキングした（１００μＬ／ウェル）。ブロッキングバッファをミリポア社製の濾過システムを使用して濾過し、更に乾燥させた。フィルタープレートを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒで、１００μＬ／ウェルで２回洗浄し、タオルドライした。１×抗サイトカイン共役ビーズを１５秒間ボルテックスし、各ウェルに５０μＬずつ添加した。これを濾過し、タオルで乾燥させた。プレートを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで、１００μＬ／ウェルで２回洗浄した。再度濾過し、タオルで乾燥させた。サンプル又はスタンダードを５０μＬずつ、各サンプルウェルに添加した。これを、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートし、更に一晩冷蔵庫で保存した。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。濾過し、タオルで乾燥させた。全てのプレートにおいてサイトカイン検出抗体を調製し（使用前〜１０分）、サイトカイン検出抗体プレミックスのストック溶液６０μＬを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ検出抗体希釈液５９４０μＬに添加した。
【０２５０】
サイトカイン検出抗体を５０μＬ添加し、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートした。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。これを濾過し、タオルで乾燥させた。全てのプレートにおいてＳｔｒｅｐｔ−ＰＥ（使用前〜１０分）を調製し、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ ５９４０μＬに６０μＬ添加した。５０μＬのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＰＥを各ウェルに添加し、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートした。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。これを濾過した。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ａｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ １００μＬ／ウェル中にビーズを再懸濁した。スタンダード及びサンプルをＬｕｍｉｎｅｘ装置で測定した。これらの強度値を、更に４パラメータの対数回帰法（Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ Ｍａｎａｇｅｒ ２．０、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製）を用いて作成した１２地点に関する標準曲線（２回）に基づいてｐｇ／ｍｌ単位に変換し、ＩＣ５０を算出した。
【０２５１】
実施例５で例証した化合物を基本的に上記に従い試験し、１８ｎＭのＩＣ５０でｉｎ ｖｉｔｒｏでＴＮＦαを抑制した。
【０２５２】
ｉｎ ｖｉｖｏでのＴＮＦαの抑制
雌のＢａｌｂ／ｃマウス（６マウス／投与群）に化合物を経口投与した（３０、１０、３及び１ｍｇ／ｋｇ）。４つの投与量（０．１ｍＬ／マウスのボリュームのＰ．Ｏ．、ビヒクル：水の１％のＮａＣＭＣ／０．２５％のＴｗｅｅｎ−８０）で当該化合物を投与してから１時間後において、マウスに４００μｇ／ｋｇでＬＰＳをＩＰ注入した。ＬＰＳ曝露の１．５時間後に、マウスをイソフルランで麻酔し、血液を心臓穴から採取した。血漿中のＴＮＦａ−濃度を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社製のＥＬＩＳＡキットを使用して測定し、投与量に対する反応ＥＤ５０を測定した。
【０２５３】
実施例５で例証した化合物を基本的に上記の通り試験し、２．２４ｍｇ／ｋｇのＴＭＥＤ５０においてｉｎ ｖｉｖｏＴＮＦαを抑制した。最小有効量５０（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ Ｄｏｓｅ（ＴＭＥＤ５０））とは、５０％以上の抑制がなされ、かつそれがコントロール／プラセボ群とは統計学的に異なるときの投与量を指す。
【０２５４】
経口曝露
雄のフィッシャー３４４マウスへの経口露光により、化合物をスクリーニングした。動物を一晩絶食させ、Ｔｗｅｅｎ８０（０．２５％ｖ／ｖ）及び消泡剤（０．１％ｗ／ｖ）を含有するカルボキシルメチルセルロースナトリウム（１％ｗ／ｖ）の懸濁液として調製した試験化合物を投与した。投与懸濁液を１ｍｇ／ｍＬで調製し、１ｍＬ／ｋｇで胃管を介して強制投与した。血液を投与後０．５〜７時間にサンプリングし、遠心分離により血漿を調製した。血漿サンプルを、オンライン固相抽出及びＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して分析した。
【０２５５】
実施例５で例証した化合物を、基本的に上記に従い試験し、Ｃｍａｘが９３９０ｎｇ／ｍＬ、ＡＵＣ（０−７ｈ）が３６８００ｎｇｈ／ｍＬであった。
【０２５６】
関節内ＬＰＳにより誘発されたＴＮＦαに対する効果
ネズミ足関節へのＬＰＳ関節内注入によりＴＮＦαの合成が誘導され、それを滑液洗浄液中で測定できる。２時間以内にＴＮＦαが高いレベルで検出できる。関節炎が進行する部位が関節であるため、経口投与の化合物が関節滑膜の炎症性反応に影響を及ぼすか否かを、このモデルで迅速に解析できる。
【０２５７】
６匹の雌のＬｅｗｉｓラット（１５０〜２００ｇ）を各治療群に含めた。動物に対し、担体（１％のカルボキシメチルセルロースＮａ−０．２５％ Ｔｗｅｅｎ８０中）又は試験化合物（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与した。１時間後、１０μＬのＬＰＳ（１０μｇ）を各ネズミの右の足関節に関節内投与し、一方左の足関節に生理食塩水１０μＬを投与した。２時間後、各足関節を生理食塩水１００μＬで洗浄した。洗浄液を回収し、−８０℃で保存した。
群１：担体（１％ ＮａＣＭＣ−０．２５％ Ｔｗｅｅｎ８０、１ｍＬ、ＰＯ）
群２：試験化合物（１ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群３：試験化合物（３ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群４：試験化合物（１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群５：試験化合物（３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
【０２５８】
市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ、ＲＴＡ００）でＴＮＦαを測定した。実施例５で例証した化合物による処理により、ＴＮＦα産生が用量反応的に阻害され、ＴＭＥＤ５０＝３．５７ｍｇ／ｋｇ（滑液洗浄液）として算出された。
【０２５９】
フローサイトメトリを用いた、アニソマイシン刺激マウスにおけるｅｘ ｖｉｖｏでのリン酸化ＭＡＰＫＡＰＫ２の阻害アッセイ
８〜１０週齢の雌のＢａｌｂ／ｃマウスをＴａｃｏｎｉｃ社から購入し、３０、１０、３、１ｍｇ／ｋｇの濃度で化合物を含有する溶液を０．２ｍＬ経口投与した。２時間又は他の所定時間の後、血液を心臓穴から採取し、ＥＤＴＡを含有する試験管に集めた。血液１００μＬを３７℃で１０分間インキュベートした。次に全血をＦＩＴＣコンジュゲートしたラット抗マウスＬｙ−６Ｇモノクローナル抗体（１：２５０）、及びＡＰＣコンジュゲートしたラット抗マウスＣＤ１１ｂｍＡｂ（１：１００）と混合し、１０μｇ／ｍｌのアニソマイシンで刺激した。両方の細胞表面抗原の染色、及びアニソマイシン刺激を３７℃で１５分間実施し、更にＬｙｓｅ／Ｆｉｘバッファ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｔ＃５５８０４９）を用いて室温で１０分間処理した。溶解させた血液サンプルを室温で８分間、６００×ｇでスピンダウンし、４ｍＬのＰＢＳで更に洗浄した。希釈（１：１００希釈）した抗−リン酸化−ＭＡＰＫＡＰＫ−２抗体（Ｔｈｒ３３４）（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製、Ｃａｔ＃３０４１）、及びマウスＢＤ Ｆｃ Ｂｌｏｃｋ（１：１００希釈）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，５５３１４１）を、２００μＬの透過用の溶媒Ｂ（Ｃａｌｔａｇ，Ｃａｔ＃ＧＡＳ００２Ｓ−５）に溶解させ、血球に添加し、室温で３０分間インキュベートした。インキュベート後、３ｍＬの染色／洗浄バッファを添加し、細胞を上記の通りスピンダウンし、更に３ｍｌの染色／洗浄バッファで洗浄した。更に細胞をＢｅｃｋｍａｎ ＣｏｕｌｔｅｒＦ５００を使用してフローサイトメトリで解析した。ホスフィノ−ＭａｐＫａｐ−Ｋ２染色の平均の蛍光強度を、陽性染色されたＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−細胞に関して測定した。データの分析をＪＭＰプログラムにより実施した。実施例５で例証した化合物による処理により、ＴＭＥＤ５０＝２．２８ｍｇ／ｋｇとして表される、ｐ−ＭＡＰＫＡＰＫ２合成の用量反応の阻害が観察された。
【０２６０】
ネズミコラーゲン誘導による関節炎有効性モデル
雌のＬｅｗｉｓラット（≒１９０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｓ社製）を用い、ウシＩＩ型コラーゲン（２ｍｇ／ｍＬ）を等量のアジュバント（水酸化アルミニウム）と混合してエマルジョンを形成させ、免疫した。ラットの尾の付け根付近の背部に、約０．３ｍｇのエマルジョンを皮下注射した。すべての動物を、同じプロトコルに従って７日後に再度免疫した。ラット体内で、初回免疫後、１２〜１４日において関節炎（一方又は両方の足関節の膨張リング及び発赤を特徴とする）を開発し始める。関節炎の第１の徴候が見られたときに、ラットを５つの処理群に等しく分け、治療はラットに１日２回（Ｂｉｄ）、１４日間にわたり投薬することにより実施した。
処理群：
群１：担体１ｍＬ（１％ カルボキシメチルセルロースＮａ＋０．２５％ Ｔｗｅｅｎ８０）ＰＯ、Ｂｉｄ×１４日
群２：試験化合物５ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群３：試験化合物１５ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群４：試験化合物３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群５：プレドニソロン１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、ｑｄ（１日１回）×１４
【０２６１】
足関節の直径を週５日、カリパス副木で測定し記録した。データを複合炎症スコアから得た曲線下の領域（ＡＵＣ）として表し、統計分析を実施した。実施例５で例証した化合物では、組織学的な意味においてＴＭＥＤ５０＝５ｍｇ／ｋｇを呈した。
【０２６２】
本発明の化合物は経口投与で用いるのが好ましい。しかしながら、経口投与が唯一の投与経路、又は唯一の好ましい投与経路ではない。例えば、経皮投与は薬剤の経口摂取を忘れやすい、若しくは経口摂取を敬遠する患者にとって好ましく、また静脈内投与は簡便性において、又は経口投与に関連する合併症の危険性を回避するという意味において好ましい。式Ｉの化合物は、具体的な状況によっては経皮的、筋肉内、鼻腔内、直腸内経路で投与してもよい。投与経路はいかなる形で変化させてもよく、例えば薬の物理的性質、患者及び介護者の便宜、及び他の関連する状況に応じて変化させてもよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．（１９９０））。
【０２６３】
医薬組成物は周知の製薬法で調製される。担体又は賦形剤は、固体、半固体、又は担体若しくは有効成分の媒体として機能しうる液体材料であってもよい。適切な担体又は賦形剤は公知である。医薬組成物は、経口投与、吸入、非経口投与又は局所投与に適する形態で調製でき、錠剤、カプセル、エアゾール、吸入器、坐薬、溶液、懸濁液等の形態で患者に投与できる。
【０２６４】
本発明の化合物は、例えば不活性希釈剤若しくはカプセルにより、又は錠剤に圧縮した形態で経口投与してもよい。治療目的で経口投与する場合、化合物を賦形剤と共に混合し、錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェーハ、チューインガムなどの形で用いてもよい。これらの調製物は本発明の化合物（活性成分）を少なくとも４％含有する必要があるが、具体的な形状によって、単位重量当り４％〜約７０％の間で適宜変化させることができる。かかる適切な投与量となるような量で、組成物中に当該化合物を添加する。本発明の好ましい組成及び調製法は、当業者に公知の方法を用いて決定できる。
【０２６５】
錠剤、ピル、カプセル、トローチなどの場合は、以下の補助剤のうちの１つ以上を含有させてもよい：結合剤（例えばポビドン、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース又はゼラチン）、添加剤又は希釈剤（例えば澱粉、ラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸ジカルシウム）、崩壊剤（例えばクロスカルメロース、クロスポビドン、澱粉グリコール酸ナトリウム、穀物澱粉など）、潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク又は水素化した植物油）、滑走剤（例えばコロイド状シリカ）、湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム及びポリソルベート８０）、及び甘味料（例えば蔗糖、アスパルテーム又はサッカリン）又は香料（例えばペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジフレーバー）。投与単位の形態がカプセルである場合、上記のタイプの材料に加えて、液体担体（例えばポリエチレングリコール又は脂肪油）を含有させてもよい。他の投与単位の形態としては、コーティングなどの、投与単位の物理的な形状を修飾する他の様々な材料を含むものが挙げられる。すなわち、錠剤又はピルを砂糖、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリメタクリレートなどのコーティング剤でコーティングしてもよい。シロップとしてもよく、本発明の化合物に加えて、甘味料としての蔗糖、適切な防腐剤、染料、着色料及び風味料を含有させてもよい。これらの様々な組成物を調製する際に使用する材料は、薬理学的に純粋で、またその使用量が毒性をもたらす量ではないことが必要である。好ましい製剤は、所望の投与量の式Ｉの化合物に対して、１％ カルボキシメチルセルロースＮａ−０．２５％ Ｔｗｅｅｎを添加することにより調製される。
【０２６６】
式Ｉの化合物は通常、広い投与量範囲において効果的である。例えば、１日当りの投与量を、約０．０００１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲とすることができる。場合によっては、上記の範囲の下限投与量以下のレベルでも十分過ぎることもあり、一方で上限投与量以上でもいかなる有害な副作用を生じさせないこともあるため、上記の投与量範囲はいかなる形であれ本発明の範囲を限定することはない。実際の化合物の投与量は、治療しようとする症状、化合物の投与経路、実際に投与する化合物、年齢、体重及び個々の患者の反応、並びに患者の症状の重症度などの関連する状況を考慮に入れて、医師により決定されることが理解されよう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
（式中、Ｚは以下からなる群から選択され、
【化２】
Ｘは以下からなる群から選択され、
【化３】
Ｒ１はハロ基及びＣ１−Ｃ４アルキルハロ基からなる群から選択される１〜６個の置換基で任意に置換されてもよいＣ１−Ｃ７アルキル基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される１又は２個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル基であるか、又はトリメチルシリル基であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいフェニル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいピリジニル基であり、Ｙは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、ハロ基又はＣ１−Ｃ４アルキルハロ基であり、
Ｒ３はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基で任意に置換されてもよいＣ１−Ｃ７アルキル基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される１〜４個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル基であるか、又は、ピリジル基、フェニル基若しくはチエニル基であって、それらの各々が、ハロ基、シアノ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換され、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びハロ基からなる群から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよく、
Ｒ４は水素又はＣ１−Ｃ４アルキル基である）
で表される化合物又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項２】
Ｘが
【化４】
である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ４が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が４−トリル基である、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がＣ１−Ｃ７アルキル基である、請求項１から３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がｔｅｒｔ−ブチル基である、請求項１から３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が２，６−ジフルオロベンジル基である、請求項１から４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
式Ｉの化合物：
【化５】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素
又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項９】
薬理学的に許容できる賦形剤、担体又は希釈剤との組合せで請求項１から８のいずれか１項記載の化合物を含んでなる医薬用製剤。
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
（式中、Ｚは以下からなる群から選択され、
【化２】
Ｘは以下からなる群から選択され、
【化３】
Ｒ１はハロ基及びＣ１−Ｃ４アルキルハロ基からなる群から選択される１〜６個の置換基で任意に置換されてもよいＣ１−Ｃ７アルキル基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される１又は２個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル基であるか、又はトリメチルシリル基であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいフェニル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいピリジニル基であり、Ｙは水素、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、ハロ基又はＣ１−Ｃ４アルキルハロ基であり、
Ｒ３はＣ３−Ｃ６シクロアルキル基で任意に置換されてもよいＣ１−Ｃ７アルキル基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基であるか、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びトリフルオロメチル基からなる群から選択される１〜４個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ６シクロアルキル基であるか、又は、ピリジル基、フェニル基若しくはチエニル基であって、それらの各々が、ハロ基、シアノ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換され、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びハロ基からなる群から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよく、
Ｒ４は水素又はＣ１−Ｃ４アルキル基である）
で表される化合物又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項２】
Ｘが
【化４】
である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ４が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が４−トリル基である、請求項１又は２記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１がＣ１−Ｃ７アルキル基である、請求項１から３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１がｔｅｒｔ−ブチル基である、請求項１から３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ３が２，６−ジフルオロベンジル基である、請求項１から４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
式Ｉの化合物：
【化５】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−３−｛６−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−２−メチル−ピリジン−３−イル｝−尿素
又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項９】
薬理学的に許容できる賦形剤、担体又は希釈剤との組合せで請求項１から８のいずれか１項記載の化合物を含んでなる医薬用製剤。
【公表番号】特表２００９−５１３６４９（Ｐ２００９−５１３６４９Ａ）
【公表日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５３７９１４（Ｐ２００８−５３７９１４）
【出願日】平成１８年１０月２５日（２００６．１０．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４１６４４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０５３３９４
【国際公開日】平成１９年５月１０日（２００７．５．１０）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１０月２５日（２００６．１０．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０４１６４４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０５３３９４
【国際公開日】平成１９年５月１０日（２００７．５．１０）
【出願人】（５９４１９７８７２）イーライ リリー アンド カンパニー (301)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]