ポリペプチドコンジュゲートの精製方法
本発明は、ポリペプチドコンジュゲートを製造するための方法を提供する。特に本発明は、ポリ（アルキレンオキシド）部分などの少なくとも１つのポリマー修飾基を含むポリペプチドコンジュゲートを精製するための方法を提供する。例示的なポリ（アルキレンオキシド）部分としては、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）およびポリ（プロピレングリコール）が挙げられる。例示的な方法において、グリコＰＥＧ化ポリペプチドの種々のグリコフォームを分離するために、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）が用いられる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１のポリペプチドコンジュゲートを含む組成物を製造する方法であって、前記第１のポリペプチドコンジュゲートが、前記第１のポリペプチドに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記方法が、
（ａ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを含む混合物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｂ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させること
を含み、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを含む前記組成物を製造する方法。
【請求項２】
前記混合物が第２のポリペプチドコンジュゲートを含み、前記第２のポリペプチドコンジュゲートが、前記第２のポリペプチドに共有結合した第２の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記第１の数と前記第２の数が異なる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドが同一のアミノ酸配列を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１のポリペプチドコンジュゲートが第１のグリコシル化パターンを含み、前記第１のグリコシル化パターンが、前記第１のポリペプチドに共有結合した少なくとも１つのグリカン残基を含み、各グリカン残基が前記ポリ（アルキレンオキシド）部分のうちの少なくとも１つに場合によって結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、Ｏ−結合またはＮ−結合グリカン残基を介して前記第１のポリペプチドに共有結合している、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記混合物が、第３のポリペプチドに共有結合した第３の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む第３のポリペプチドコンジュゲートを含み、前記第３のポリペプチドコンジュゲートが、第２のグリコシル化パターンを含み、前記第２のグリコシル化パターンが、前記少なくとも１つのグリカン残基の少なくとも１つのグリコシル部分により前記第１のポリペプチドコンジュゲートの前記第１のグリコシル化パターンとは異なる、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記第１のポリペプチドコンジュゲートの前記グリコシル化パターンが、実質的に一定の昆虫特異的グリコシル化パターンである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記ＨＩＣ媒体が、ブチル樹脂およびフェニル樹脂から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、ポリ（エチレングリコール）部分およびポリ（プロピレングリコール）部分から独立して選択されるメンバーである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、約１ｋＤａから約２００ｋＤａの間の分子量を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１のポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１のポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害因子）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮａｓｅ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ―２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸マルターゼ）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、線維芽細胞成長因子７（ＦＧＦ−７）、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ−２３）、因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩ、Ｂ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩ、完全長因子ＶＩＩＩを有するｖＷＦ−因子ＶＩＩＩ融合タンパク質、Ｂ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩを有するｖＷＦ−因子ＶＩＩＩ融合タンパク質、因子ＩＸ、因子Ｘ、因子ＸＩＩＩ、プロキネチシン、エクステンジン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスに対するモノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスのタンパク質Ｆに対するモノクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体、ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ−Ａに対するモノクローナル抗体、ＰＳＧＬ−１に対するモノクローナル抗体、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体、ａ−ＣＤ３に対するモノクローナル抗体、ＥＧＦに対するモノクローナル抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するモノクローナル抗体およびＩＬ−２受容体に対するモノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１のポリペプチドがＥＰＯである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＥＰＯが、３つのポリ（エチレングリコール）部分に共有結合している、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記３つのポリ（エチレングリコール）部分のうちの少なくとも２つが、Ｎ−結合グリカンを介して前記ＥＰＯに共有結合している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＥＰＯが配列番号１によるアミノ酸配列を含み、前記配列が、Ａｒｇ１３９からＡｌａ１３９、Ａｒｇ１４３からＡｌａ１４３、およびＬｙｓ１５４からＡｌａ１５４からなる群から選択される少なくとも１つの変異を場合によって有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分のうちの少なくとも１つが、グリコシル結合基を介して前記第１のポリペプチドに共有結合しており、前記グリコシル結合基が、前記第１のポリペプチドのアミノ酸残基に共有結合しているか、または前記第１のポリペプチドのグリコシル部分に共有結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記グリコシル結合基が完全形のグリコシル結合基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記完全形のグリコシル結合基が、ＧｌｃＮＨ部分、ＧｌｃＮＡｃ部分、およびシアル酸部分から選択されるメンバーである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（ｃ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートをアニオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ステップ（ｃ）がステップ（ａ）の前に実施される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
（ｄ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートをカチオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ｄ）がステップ（ｂ）の後に実施される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第１のポリペプチドと、ポリ（アルキレンオキシド）部分に共有結合したグリコシル部分を有する修飾糖ヌクレオチドとを、グリコシルトランスフェラーゼの存在下、前記グリコシルトランスフェラーゼが前記グリコシル部分と前記第１のポリペプチドとの間に共有結合を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含み、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを形成する、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記グリコシル部分がシアル酸部分であり、前記グリコシルトランスフェラーゼがシアリルトランスフェラーゼである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
昆虫細胞中で前記第１のポリペプチドを組換え発現させることをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
第１のポリペプチドに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む前記第１のポリペプチドコンジュゲートを、第２のポリペプチドに共有結合した第２の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む前記第２のポリペプチドコンジュゲートから単離する方法であって、前記第１の数が１〜２０から選択され、前記第２の数が０〜２０から選択され、前記第１の数と前記第２の数とが異なり、前記方法が、
（ａ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートおよび前記第２のポリペプチドコンジュゲートを含む混合物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｂ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させること
を含み、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記第２のポリペプチドコンジュゲートから単離する方法。
【請求項２８】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、ポリ（エチレングリコール）部分およびポリ（プロピレングリコール）部分から独立して選択されるメンバーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、約１ｋＤａから約２００ｋＤａの間の独立して選択される分子量を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドが同一のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１のポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記第１のポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害因子）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮａｓｅ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ―２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸マルターゼ）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、線維芽細胞成長因子７（ＦＧＦ−７）、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ−２３）、因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩ、Ｂ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩ、完全長因子ＶＩＩＩを有するｖＷＦ−因子ＶＩＩＩ融合タンパク質、Ｂ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩを有するｖＷＦ−因子ＶＩＩＩ融合タンパク質、因子ＩＸ、因子Ｘ、因子ＸＩＩＩ、プロキネチシン、エクステンジン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスに対するモノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスのタンパク質Ｆに対するモノクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体、ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ−Ａに対するモノクローナル抗体、ＰＳＧＬ−１に対するモノクローナル抗体、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体、ａ−ＣＤ３に対するモノクローナル抗体、ＥＧＦに対するモノクローナル抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するモノクローナル抗体およびＩＬ−２受容体に対するモノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記第１のポリペプチドがＥＰＯである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＥＰＯが、３つのポリ（エチレングリコール）部分に共有結合している、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記３つのポリ（エチレングリコール）部分のうちの少なくとも２つが、Ｎ−結合グリカンを介して前記ＥＰＯに共有結合している、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＥＰＯが配列番号１によるアミノ酸配列を含み、前記配列が、Ａｒｇ１３９からＡｌａ１３９、Ａｒｇ１４３からＡｌａ１４３、およびＬｙｓ１５４からＡｌａ１５４からなる群から選択される少なくとも１つの変異を場合によって有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＨＩＣ媒体が、ブチル樹脂およびフェニル樹脂から選択されるメンバーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分のうちの少なくとも１つが、グリコシル結合基を介して前記第１のポリペプチドに接続しており、前記グリコシル結合基が、前記第１のポリペプチドのアミノ酸残基に共有結合しているか、または前記第１のポリペプチドのグリコシル部分に共有結合している、請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
前記グリコシル結合基が完全形のグリコシル結合基である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記完全形のグリコシル結合基が、ＧｌｃＮＨ部分、ＧｌｃＮＡｃ部分、およびシアル酸部分から選択されるメンバーである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
（ｃ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートをアニオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４２】
ステップ（ｃ）がステップ（ａ）の前に実施される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
（ｄ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記カチオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４４】
ステップ（ｄ）がステップ（ｂ）の後に実施される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記第１のポリペプチドコンジュゲートが、実質的に一定の昆虫特異的グリコシル化パターンを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４６】
前記第１のポリペプチドと、ポリ（アルキレンオキシド）部分に共有結合したグリコシル部分を有する修飾糖ヌクレオチドとを、グリコシルトランスフェラーゼの存在下、前記グリコシルトランスフェラーゼが前記グリコシル部分と前記第１のポリペプチドとの間に共有結合を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含み、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを形成する、請求項２７に記載の方法。
【請求項４７】
前記グリコシル部分がシアル酸部分であり、前記グリコシルトランスフェラーゼがシアリルトランスフェラーゼである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
昆虫細胞中で前記第１のポリペプチドを組換え発現させることをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記第１のポリペプチドとヌクレオチド糖とを、ヌクレオチド糖が基質である酵素の存在下、前記酵素が前記ヌクレオチド糖の前記糖と前記第１のポリペプチドとの間に共有結合を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含み、前記第１のポリペプチドが、グリコシル化および非グリコシル化から選択されるメンバーである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
第１のエリスロポエチン（ＥＰＯ）コンジュゲートを含む組成物を形成する方法であって、前記第１のＥＰＯコンジュゲートが、前記ＥＰＯに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記方法が、
（ａ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む混合物をアニオン交換媒体と接触させること；
（ｂ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを前記アニオン交換媒体から溶出させて、前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む第１の溶出液を形成すること；
（ｃ）前記第１の溶出液を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｄ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させること
を含み、それによって前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む組成物を形成する方法。
【請求項５１】
前記ステップ（ａ）の混合物が、前記ＥＰＯに共有結合した第２の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を有する第２のＥＰＯコンジュゲートを含み、前記第１の数と前記第２の数とが異なる、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記第１の数が３であり、前記第２の数が０、１、２および４から選択されるメンバーである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記第２のＥＰＯコンジュゲートが、前記組成物中に約１０％未満の濃度で存在する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＨＩＣ媒体が、ブチル樹脂およびフェニル樹脂から選択されるメンバーである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、ポリ（エチレングリコール）部分およびポリ（プロピレングリコール）部分から独立して選択されるメンバーである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５６】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、約１ｋＤａから約２００ｋＤａの間の独立して選択される分子量を有する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記第１のＥＰＯコンジュゲートが、３つのポリ（エチレングリコール）部分を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５８】
前記３つのポリ（エチレングリコール）部分のうちの少なくとも２つが、Ｎ−結合グリカンを介して前記ＥＰＯに共有結合している、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＥＰＯが配列番号１によるアミノ酸配列を含み、前記配列が、Ａｒｇ１３９からＡｌａ１３９、Ａｒｇ１４３からＡｌａ１４３、およびＬｙｓ１５４からＡｌａ１５４からなる群から選択される少なくとも１つの変異を場合によって有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＥＰＯコンジュゲートが、グリコシル結合基を介して前記ＥＰＯに共有結合している少なくとも１つのポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記グリコシル結合基が、前記ＥＰＯのアミノ酸残基に共有結合しているか、または前記ＥＰＯのグリコシル部分に共有結合している、請求項５０に記載の方法。
【請求項６１】
前記グリコシル結合基が完全形のグリコシル結合基である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記完全形のグリコシル結合基が、ＧｌｃＮＨ部分、ＧｌｃＮＡｃ部分、およびシアル酸部分から選択されるメンバーである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
（ｅ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートをカチオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６４】
ステップ（ｅ）がステップ（ｄ）の後に実施される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＥＰＯが、実質的に一定の昆虫特異的グリコシル化パターンを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＥＰＯと、ポリ（アルキレンオキシド）部分に共有結合したグリコシル部分を有する修飾糖ヌクレオチドとを、グリコシルトランスフェラーゼの存在下、前記グリコシルトランスフェラーゼが前記グリコシル部分と前記ＥＰＯとの間に共有結合を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含み、それによって前記第１のＥＰＯコンジュゲートを形成する、請求項５０に記載の方法。
【請求項６７】
前記グリコシル部分がシアル酸部分であり、前記グリコシルトランスフェラーゼがシアリルトランスフェラーゼである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
昆虫細胞中で前記ＥＰＯを組換え発現させることをさらに含み、それによって前記ＥＰＯを含む昆虫細胞培養液を形成する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＥＰＯを前記昆虫細胞培養液から単離することをさらに含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
単一の反応容器中で、前記ＥＰＯとヌクレオチド−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）分子とヌクレオチドガラクトース（Ｇａｌ）分子とを、ＧｎＴ１およびＧｎＴ２から選択されるＮ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、およびガラクトシルトランスフェラーゼの存在下、前記Ｎ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼおよび前記ガラクトシルトランスフェラーゼが前記ＥＰＯに共有結合した末端−ＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ部分を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
第１のポリペプチドコンジュゲートを含む組成物であって、前記第１のポリペプチドコンジュゲートが、第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、完全形のグリコシル結合基を介して前記第１のポリペプチドに共有結合しており、前記組成物が、
（ａ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを含む混合物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｂ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させ、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを含む前記組成物を製造すること
を含む方法により製造され、
前記第１のポリペプチドが、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害因子）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮａｓｅ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ―２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸マルターゼ）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、線維芽細胞成長因子７（ＦＧＦ−７）、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ−２３）、因子Ｘ、因子ＸＩＩＩ、プロキネチシン、エクステンジン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスに対するモノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスのタンパク質Ｆに対するモノクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体、ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ−Ａに対するモノクローナル抗体、ＰＳＧＬ−１に対するモノクローナル抗体、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体、ａ−ＣＤ３に対するモノクローナル抗体、ＥＧＦに対するモノクローナル抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するモノクローナル抗体およびＩＬ−２受容体に対するモノクローナル抗体から選択されるメンバーである組成物。
【請求項７２】
請求項７１に記載の組成物および薬学的に許容できる担体を含む医薬製剤。
【請求項７３】
第１のポリペプチドに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む前記第１のポリペプチドコンジュゲートを、前記第２のポリペプチドに共有結合した第２の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む第２のポリペプチドコンジュゲートから単離することを含む方法により製造された、単離された前記第１のポリペプチドコンジュゲートであって、前記第１の数が１〜２０から選択され、前記第２の数が０〜２０から選択され、前記第１の数と前記第２の数とが異なり、前記単離が、
（ａ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートおよび前記第２のポリペプチドコンジュゲートを含む混合物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｂ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させ、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記第２のポリペプチドコンジュゲートから分離すること
を含み、前記第１のポリペプチドが、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害因子）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮａｓｅ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ―２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸マルターゼ）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、線維芽細胞成長因子７（ＦＧＦ−７）、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ−２３）、因子Ｘ、因子ＸＩＩＩ、プロキネチシン、エクステンジン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスに対するモノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスのタンパク質Ｆに対するモノクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体、ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ−Ａに対するモノクローナル抗体、ＰＳＧＬ−１に対するモノクローナル抗体、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体、ａ−ＣＤ３に対するモノクローナル抗体、ＥＧＦに対するモノクローナル抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するモノクローナル抗体およびＩＬ−２受容体に対するモノクローナル抗体から選択されるメンバーである単離された第１のポリペプチドコンジュゲート。
【請求項７４】
請求項７３に記載された単離されたポリペプチドコンジュゲートおよび薬学的に許容できる担体を含む医薬製剤。
【請求項７５】
第１のエリスロポエチン（ＥＰＯ）コンジュゲートを含む組成物であって、前記第１のＥＰＯコンジュゲートが、完全形のグリコシル結合基を介して前記ＥＰＯに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記組成物が、
（ａ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む混合物をアニオン交換媒体と接触させること；
（ｂ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを前記アニオン交換媒体から溶出させて、前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む第１の溶出液を形成すること；
（ｃ）前記第１の溶出液を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｄ）前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から前記第１のＥＰＯコンジュゲートを溶出させること
を含む方法によって製造される組成物。
【請求項７６】
請求項７５に記載の組成物および薬学的に許容できる担体を含む医薬製剤。
【請求項７７】
状態の治療を必要とする対象において状態を治療する方法であって、前記状態が、前記対象における赤血球産生不全を特徴とし、前記対象における前記状態を寛解させるのに有効な量の請求項７１に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７８】
状態の治療を必要とする対象において状態を治療する方法であって、前記状態が、前記対象における赤血球産生不全を特徴とし、前記対象における前記状態を寛解させるのに有効な量の請求項７３に記載の単離されたポリペプチドコンジュゲートを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７９】
状態の治療を必要とする対象において状態を治療する方法であって、前記状態が、前記対象における赤血球産生不全を特徴とし、前記対象における前記状態を寛解させるのに有効な量の請求項７５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８０】
組織傷害の治療を必要とする対象において組織傷害を治療する方法であって、前記傷害が、虚血、外傷、炎症および毒性物質との接触から選択されるメンバーにより引き起こされ、前記組織傷害に関連する損傷を寛解させるのに有効な量の請求項７１に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８１】
組織傷害の治療を必要とする対象において組織傷害を治療する方法であって、前記傷害が、虚血、外傷、炎症および毒性物質との接触から選択されるメンバーにより引き起こされ、前記組織傷害に関連する損傷を寛解させるのに有効な量の請求項７３に記載の単離されたポリペプチドコンジュゲートを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８２】
組織傷害の治療を必要とする対象において組織傷害を治療する方法であって、前記傷害が、虚血、外傷、炎症および毒性物質との接触から選択されるメンバーにより引き起こされ、前記組織傷害に関連する損傷を寛解させるのに有効な量の請求項７５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８３】
哺乳動物において赤血球産生を増強する方法であって、請求項７１に記載の組成物を前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項８４】
哺乳動物において赤血球産生を増強する方法であって、請求項７３に記載の単離されたポリペプチドコンジュゲートを前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項８５】
哺乳動物において赤血球産生を増強する方法であって、請求項７５に記載の組成物を前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１】
第１のポリペプチドコンジュゲートを含む組成物を製造する方法であって、前記第１のポリペプチドコンジュゲートが、前記第１のポリペプチドに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記方法が、
（ａ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを含む混合物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｂ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させること
を含み、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを含む前記組成物を製造する方法。
【請求項２】
前記混合物が第２のポリペプチドコンジュゲートを含み、前記第２のポリペプチドコンジュゲートが、前記第２のポリペプチドに共有結合した第２の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記第１の数と前記第２の数が異なる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドが同一のアミノ酸配列を有する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記第１のポリペプチドコンジュゲートが第１のグリコシル化パターンを含み、前記第１のグリコシル化パターンが、前記第１のポリペプチドに共有結合した少なくとも１つのグリカン残基を含み、各グリカン残基が前記ポリ（アルキレンオキシド）部分のうちの少なくとも１つに場合によって結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、Ｏ−結合またはＮ−結合グリカン残基を介して前記第１のポリペプチドに共有結合している、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記混合物が、第３のポリペプチドに共有結合した第３の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む第３のポリペプチドコンジュゲートを含み、前記第３のポリペプチドコンジュゲートが、第２のグリコシル化パターンを含み、前記第２のグリコシル化パターンが、前記少なくとも１つのグリカン残基の少なくとも１つのグリコシル部分により前記第１のポリペプチドコンジュゲートの前記第１のグリコシル化パターンとは異なる、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記第１のポリペプチドコンジュゲートの前記グリコシル化パターンが、実質的に一定の昆虫特異的グリコシル化パターンである、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
前記ＨＩＣ媒体が、ブチル樹脂およびフェニル樹脂から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、ポリ（エチレングリコール）部分およびポリ（プロピレングリコール）部分から独立して選択されるメンバーである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、約１ｋＤａから約２００ｋＤａの間の分子量を有する、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記第１のポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記第１のポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害因子）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮａｓｅ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ―２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸マルターゼ）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、線維芽細胞成長因子７（ＦＧＦ−７）、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ−２３）、因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩ、Ｂ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩ、完全長因子ＶＩＩＩを有するｖＷＦ−因子ＶＩＩＩ融合タンパク質、Ｂ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩを有するｖＷＦ−因子ＶＩＩＩ融合タンパク質、因子ＩＸ、因子Ｘ、因子ＸＩＩＩ、プロキネチシン、エクステンジン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスに対するモノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスのタンパク質Ｆに対するモノクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体、ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ−Ａに対するモノクローナル抗体、ＰＳＧＬ−１に対するモノクローナル抗体、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体、ａ−ＣＤ３に対するモノクローナル抗体、ＥＧＦに対するモノクローナル抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するモノクローナル抗体およびＩＬ−２受容体に対するモノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記第１のポリペプチドがＥＰＯである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＥＰＯが、３つのポリ（エチレングリコール）部分に共有結合している、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記３つのポリ（エチレングリコール）部分のうちの少なくとも２つが、Ｎ−結合グリカンを介して前記ＥＰＯに共有結合している、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＥＰＯが配列番号１によるアミノ酸配列を含み、前記配列が、Ａｒｇ１３９からＡｌａ１３９、Ａｒｇ１４３からＡｌａ１４３、およびＬｙｓ１５４からＡｌａ１５４からなる群から選択される少なくとも１つの変異を場合によって有する、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分のうちの少なくとも１つが、グリコシル結合基を介して前記第１のポリペプチドに共有結合しており、前記グリコシル結合基が、前記第１のポリペプチドのアミノ酸残基に共有結合しているか、または前記第１のポリペプチドのグリコシル部分に共有結合している、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
前記グリコシル結合基が完全形のグリコシル結合基である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記完全形のグリコシル結合基が、ＧｌｃＮＨ部分、ＧｌｃＮＡｃ部分、およびシアル酸部分から選択されるメンバーである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（ｃ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートをアニオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
ステップ（ｃ）がステップ（ａ）の前に実施される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
（ｄ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートをカチオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
ステップ（ｄ）がステップ（ｂ）の後に実施される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記第１のポリペプチドと、ポリ（アルキレンオキシド）部分に共有結合したグリコシル部分を有する修飾糖ヌクレオチドとを、グリコシルトランスフェラーゼの存在下、前記グリコシルトランスフェラーゼが前記グリコシル部分と前記第１のポリペプチドとの間に共有結合を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含み、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを形成する、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記グリコシル部分がシアル酸部分であり、前記グリコシルトランスフェラーゼがシアリルトランスフェラーゼである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
昆虫細胞中で前記第１のポリペプチドを組換え発現させることをさらに含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
第１のポリペプチドに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む前記第１のポリペプチドコンジュゲートを、第２のポリペプチドに共有結合した第２の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む前記第２のポリペプチドコンジュゲートから単離する方法であって、前記第１の数が１〜２０から選択され、前記第２の数が０〜２０から選択され、前記第１の数と前記第２の数とが異なり、前記方法が、
（ａ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートおよび前記第２のポリペプチドコンジュゲートを含む混合物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｂ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させること
を含み、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記第２のポリペプチドコンジュゲートから単離する方法。
【請求項２８】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、ポリ（エチレングリコール）部分およびポリ（プロピレングリコール）部分から独立して選択されるメンバーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、約１ｋＤａから約２００ｋＤａの間の独立して選択される分子量を有する、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記第１のポリペプチドと前記第２のポリペプチドが同一のアミノ酸配列を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記第１のポリペプチドが治療用ポリペプチドである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３２】
前記第１のポリペプチドが、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害因子）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮａｓｅ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ―２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸マルターゼ）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、線維芽細胞成長因子７（ＦＧＦ−７）、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ−２３）、因子ＶＩＩ、因子ＶＩＩＩ、Ｂ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩ、完全長因子ＶＩＩＩを有するｖＷＦ−因子ＶＩＩＩ融合タンパク質、Ｂ−ドメイン欠失因子ＶＩＩＩを有するｖＷＦ−因子ＶＩＩＩ融合タンパク質、因子ＩＸ、因子Ｘ、因子ＸＩＩＩ、プロキネチシン、エクステンジン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスに対するモノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスのタンパク質Ｆに対するモノクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体、ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ−Ａに対するモノクローナル抗体、ＰＳＧＬ−１に対するモノクローナル抗体、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体、ａ−ＣＤ３に対するモノクローナル抗体、ＥＧＦに対するモノクローナル抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するモノクローナル抗体およびＩＬ−２受容体に対するモノクローナル抗体から選択されるメンバーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３３】
前記第１のポリペプチドがＥＰＯである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＥＰＯが、３つのポリ（エチレングリコール）部分に共有結合している、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記３つのポリ（エチレングリコール）部分のうちの少なくとも２つが、Ｎ−結合グリカンを介して前記ＥＰＯに共有結合している、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ＥＰＯが配列番号１によるアミノ酸配列を含み、前記配列が、Ａｒｇ１３９からＡｌａ１３９、Ａｒｇ１４３からＡｌａ１４３、およびＬｙｓ１５４からＡｌａ１５４からなる群から選択される少なくとも１つの変異を場合によって有する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記ＨＩＣ媒体が、ブチル樹脂およびフェニル樹脂から選択されるメンバーである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分のうちの少なくとも１つが、グリコシル結合基を介して前記第１のポリペプチドに接続しており、前記グリコシル結合基が、前記第１のポリペプチドのアミノ酸残基に共有結合しているか、または前記第１のポリペプチドのグリコシル部分に共有結合している、請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
前記グリコシル結合基が完全形のグリコシル結合基である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記完全形のグリコシル結合基が、ＧｌｃＮＨ部分、ＧｌｃＮＡｃ部分、およびシアル酸部分から選択されるメンバーである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
（ｃ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートをアニオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４２】
ステップ（ｃ）がステップ（ａ）の前に実施される、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
（ｄ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記カチオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４４】
ステップ（ｄ）がステップ（ｂ）の後に実施される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記第１のポリペプチドコンジュゲートが、実質的に一定の昆虫特異的グリコシル化パターンを含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項４６】
前記第１のポリペプチドと、ポリ（アルキレンオキシド）部分に共有結合したグリコシル部分を有する修飾糖ヌクレオチドとを、グリコシルトランスフェラーゼの存在下、前記グリコシルトランスフェラーゼが前記グリコシル部分と前記第１のポリペプチドとの間に共有結合を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含み、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを形成する、請求項２７に記載の方法。
【請求項４７】
前記グリコシル部分がシアル酸部分であり、前記グリコシルトランスフェラーゼがシアリルトランスフェラーゼである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
昆虫細胞中で前記第１のポリペプチドを組換え発現させることをさらに含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記第１のポリペプチドとヌクレオチド糖とを、ヌクレオチド糖が基質である酵素の存在下、前記酵素が前記ヌクレオチド糖の前記糖と前記第１のポリペプチドとの間に共有結合を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含み、前記第１のポリペプチドが、グリコシル化および非グリコシル化から選択されるメンバーである、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
第１のエリスロポエチン（ＥＰＯ）コンジュゲートを含む組成物を形成する方法であって、前記第１のＥＰＯコンジュゲートが、前記ＥＰＯに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記方法が、
（ａ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む混合物をアニオン交換媒体と接触させること；
（ｂ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを前記アニオン交換媒体から溶出させて、前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む第１の溶出液を形成すること；
（ｃ）前記第１の溶出液を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｄ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させること
を含み、それによって前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む組成物を形成する方法。
【請求項５１】
前記ステップ（ａ）の混合物が、前記ＥＰＯに共有結合した第２の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を有する第２のＥＰＯコンジュゲートを含み、前記第１の数と前記第２の数とが異なる、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記第１の数が３であり、前記第２の数が０、１、２および４から選択されるメンバーである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記第２のＥＰＯコンジュゲートが、前記組成物中に約１０％未満の濃度で存在する、請求項５０に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＨＩＣ媒体が、ブチル樹脂およびフェニル樹脂から選択されるメンバーである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、ポリ（エチレングリコール）部分およびポリ（プロピレングリコール）部分から独立して選択されるメンバーである、請求項５０に記載の方法。
【請求項５６】
前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、約１ｋＤａから約２００ｋＤａの間の独立して選択される分子量を有する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記第１のＥＰＯコンジュゲートが、３つのポリ（エチレングリコール）部分を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５８】
前記３つのポリ（エチレングリコール）部分のうちの少なくとも２つが、Ｎ−結合グリカンを介して前記ＥＰＯに共有結合している、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
前記ＥＰＯが配列番号１によるアミノ酸配列を含み、前記配列が、Ａｒｇ１３９からＡｌａ１３９、Ａｒｇ１４３からＡｌａ１４３、およびＬｙｓ１５４からＡｌａ１５４からなる群から選択される少なくとも１つの変異を場合によって有する、請求項５０に記載の方法。
【請求項６０】
前記ＥＰＯコンジュゲートが、グリコシル結合基を介して前記ＥＰＯに共有結合している少なくとも１つのポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記グリコシル結合基が、前記ＥＰＯのアミノ酸残基に共有結合しているか、または前記ＥＰＯのグリコシル部分に共有結合している、請求項５０に記載の方法。
【請求項６１】
前記グリコシル結合基が完全形のグリコシル結合基である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記完全形のグリコシル結合基が、ＧｌｃＮＨ部分、ＧｌｃＮＡｃ部分、およびシアル酸部分から選択されるメンバーである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
（ｅ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートをカチオン交換クロマトグラフィー媒体から溶出させること
をさらに含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６４】
ステップ（ｅ）がステップ（ｄ）の後に実施される、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記ＥＰＯが、実質的に一定の昆虫特異的グリコシル化パターンを含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項６６】
前記ＥＰＯと、ポリ（アルキレンオキシド）部分に共有結合したグリコシル部分を有する修飾糖ヌクレオチドとを、グリコシルトランスフェラーゼの存在下、前記グリコシルトランスフェラーゼが前記グリコシル部分と前記ＥＰＯとの間に共有結合を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含み、それによって前記第１のＥＰＯコンジュゲートを形成する、請求項５０に記載の方法。
【請求項６７】
前記グリコシル部分がシアル酸部分であり、前記グリコシルトランスフェラーゼがシアリルトランスフェラーゼである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
昆虫細胞中で前記ＥＰＯを組換え発現させることをさらに含み、それによって前記ＥＰＯを含む昆虫細胞培養液を形成する、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記ＥＰＯを前記昆虫細胞培養液から単離することをさらに含む、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
単一の反応容器中で、前記ＥＰＯとヌクレオチド−Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）分子とヌクレオチドガラクトース（Ｇａｌ）分子とを、ＧｎＴ１およびＧｎＴ２から選択されるＮ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、およびガラクトシルトランスフェラーゼの存在下、前記Ｎ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼおよび前記ガラクトシルトランスフェラーゼが前記ＥＰＯに共有結合した末端−ＧｌｃＮＡｃ−Ｇａｌ部分を形成するのに十分な条件下で、接触させることをさらに含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
第１のポリペプチドコンジュゲートを含む組成物であって、前記第１のポリペプチドコンジュゲートが、第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記ポリ（アルキレンオキシド）部分の各々が、完全形のグリコシル結合基を介して前記第１のポリペプチドに共有結合しており、前記組成物が、
（ａ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを含む混合物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｂ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させ、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを含む前記組成物を製造すること
を含む方法により製造され、
前記第１のポリペプチドが、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害因子）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮａｓｅ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ―２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸マルターゼ）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、線維芽細胞成長因子７（ＦＧＦ−７）、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ−２３）、因子Ｘ、因子ＸＩＩＩ、プロキネチシン、エクステンジン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスに対するモノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスのタンパク質Ｆに対するモノクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体、ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ−Ａに対するモノクローナル抗体、ＰＳＧＬ−１に対するモノクローナル抗体、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体、ａ−ＣＤ３に対するモノクローナル抗体、ＥＧＦに対するモノクローナル抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するモノクローナル抗体およびＩＬ−２受容体に対するモノクローナル抗体から選択されるメンバーである組成物。
【請求項７２】
請求項７１に記載の組成物および薬学的に許容できる担体を含む医薬製剤。
【請求項７３】
第１のポリペプチドに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む前記第１のポリペプチドコンジュゲートを、前記第２のポリペプチドに共有結合した第２の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含む第２のポリペプチドコンジュゲートから単離することを含む方法により製造された、単離された前記第１のポリペプチドコンジュゲートであって、前記第１の数が１〜２０から選択され、前記第２の数が０〜２０から選択され、前記第１の数と前記第２の数とが異なり、前記単離が、
（ａ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートおよび前記第２のポリペプチドコンジュゲートを含む混合物を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｂ）前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から溶出させ、それによって前記第１のポリペプチドコンジュゲートを前記第２のポリペプチドコンジュゲートから分離すること
を含み、前記第１のポリペプチドが、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、骨形成タンパク質２（ＢＭＰ−２）、骨形成タンパク質７（ＢＭＰ−７）、骨形成タンパク質１５（ＢＭＰ−１５）、ニューロトロフィン−３（ＮＴ−３）、フォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）プロテアーゼ、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターフェロンアルファ、インターフェロンベータ、インターフェロンガンマ、α１−アンチトリプシン（α−１プロテアーゼ阻害因子）、グルコセレブロシダーゼ、組織型プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、レプチン、ヒルジン、ウロキナーゼ、ヒトＤＮａｓｅ、インスリン、Ｂ型肝炎表面タンパク質（ＨｂｓＡｇ）、キメラジフテリア毒素−ＩＬ―２、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、甲状腺ペルオキシダーゼ（ＴＰＯ）、アルファ−ガラクトシダーゼ、アルファ−Ｌ−イズロニダーゼ、ベータ−グルコシダーゼ、アルファ−ガラクトシダーゼＡ、酸α−グルコシダーゼ（酸マルターゼ）、抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、グルカゴン様ペプチド−２（ＧＬＰ−２）、線維芽細胞成長因子７（ＦＧＦ−７）、線維芽細胞成長因子２１（ＦＧＦ−２１）、線維芽細胞成長因子２３（ＦＧＦ−２３）、因子Ｘ、因子ＸＩＩＩ、プロキネチシン、エクステンジン−４、ＣＤ４、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）、α−ＣＤ２０、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１（ＰＳＧＬ−１）、補体、トランスフェリン、グリコシル化依存細胞接着分子（ＧｌｙＣＡＭ）、神経細胞接着分子（Ｎ−ＣＡＭ）、ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ Ｆｃ領域融合タンパク質、抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスに対するモノクローナル抗体、呼吸器合胞体ウイルスのタンパク質Ｆに対するモノクローナル抗体、ＴＮＦ−αに対するモノクローナル抗体、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａに対するモノクローナル抗体、ＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ−Ａに対するモノクローナル抗体、ＰＳＧＬ−１に対するモノクローナル抗体、ＣＤ４に対するモノクローナル抗体、ａ−ＣＤ３に対するモノクローナル抗体、ＥＧＦに対するモノクローナル抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）に対するモノクローナル抗体およびＩＬ−２受容体に対するモノクローナル抗体から選択されるメンバーである単離された第１のポリペプチドコンジュゲート。
【請求項７４】
請求項７３に記載された単離されたポリペプチドコンジュゲートおよび薬学的に許容できる担体を含む医薬製剤。
【請求項７５】
第１のエリスロポエチン（ＥＰＯ）コンジュゲートを含む組成物であって、前記第１のＥＰＯコンジュゲートが、完全形のグリコシル結合基を介して前記ＥＰＯに共有結合した第１の数のポリ（アルキレンオキシド）部分を含み、前記組成物が、
（ａ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む混合物をアニオン交換媒体と接触させること；
（ｂ）前記第１のＥＰＯコンジュゲートを前記アニオン交換媒体から溶出させて、前記第１のＥＰＯコンジュゲートを含む第１の溶出液を形成すること；
（ｃ）前記第１の溶出液を疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）媒体と接触させること；および
（ｄ）前記疎水性相互作用クロマトグラフィー媒体から前記第１のＥＰＯコンジュゲートを溶出させること
を含む方法によって製造される組成物。
【請求項７６】
請求項７５に記載の組成物および薬学的に許容できる担体を含む医薬製剤。
【請求項７７】
状態の治療を必要とする対象において状態を治療する方法であって、前記状態が、前記対象における赤血球産生不全を特徴とし、前記対象における前記状態を寛解させるのに有効な量の請求項７１に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７８】
状態の治療を必要とする対象において状態を治療する方法であって、前記状態が、前記対象における赤血球産生不全を特徴とし、前記対象における前記状態を寛解させるのに有効な量の請求項７３に記載の単離されたポリペプチドコンジュゲートを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項７９】
状態の治療を必要とする対象において状態を治療する方法であって、前記状態が、前記対象における赤血球産生不全を特徴とし、前記対象における前記状態を寛解させるのに有効な量の請求項７５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８０】
組織傷害の治療を必要とする対象において組織傷害を治療する方法であって、前記傷害が、虚血、外傷、炎症および毒性物質との接触から選択されるメンバーにより引き起こされ、前記組織傷害に関連する損傷を寛解させるのに有効な量の請求項７１に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８１】
組織傷害の治療を必要とする対象において組織傷害を治療する方法であって、前記傷害が、虚血、外傷、炎症および毒性物質との接触から選択されるメンバーにより引き起こされ、前記組織傷害に関連する損傷を寛解させるのに有効な量の請求項７３に記載の単離されたポリペプチドコンジュゲートを前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８２】
組織傷害の治療を必要とする対象において組織傷害を治療する方法であって、前記傷害が、虚血、外傷、炎症および毒性物質との接触から選択されるメンバーにより引き起こされ、前記組織傷害に関連する損傷を寛解させるのに有効な量の請求項７５に記載の組成物を前記対象に投与することを含む方法。
【請求項８３】
哺乳動物において赤血球産生を増強する方法であって、請求項７１に記載の組成物を前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項８４】
哺乳動物において赤血球産生を増強する方法であって、請求項７３に記載の単離されたポリペプチドコンジュゲートを前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項８５】
哺乳動物において赤血球産生を増強する方法であって、請求項７５に記載の組成物を前記哺乳動物に投与することを含む方法。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【公表番号】特表２０１０−５０５８７４（Ｐ２０１０−５０５８７４Ａ）
【公表日】平成２２年２月２５日（２０１０．２．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３１５９３（Ｐ２００９−５３１５９３）
【出願日】平成１９年１０月３日（２００７．１０．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８０３５３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５７６８３
【国際公開日】平成２０年５月１５日（２００８．５．１５）
【出願人】（５０９０９１８４８）ノヴォ ノルディスク アー／エス (42)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年２月２５日（２０１０．２．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月３日（２００７．１０．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８０３５３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０５７６８３
【国際公開日】平成２０年５月１５日（２００８．５．１５）
【出願人】（５０９０９１８４８）ノヴォ ノルディスク アー／エス (42)
【Ｆターム（参考）】
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