多発性骨髄腫の治療
化合物ＰＭ００１０４を使用することによって癌を治療するため、特に、多発性骨髄腫を治療するための方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌の治療、特に、化合物ＰＭ００１０４を使用することによる多発性骨髄腫の効果的な治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
多発性骨髄腫は、単独のクローンに由来する形質細胞の悪性増殖である。多発性骨髄腫と骨髄腫という用語は互換的に使用される。
【０００３】
形質細胞は、有害な物質を身体が取り除く助けをするために血流中を移動するタンパク質である抗体を生産する。各種の形質細胞は、大量の一種類の抗体を作製することによって１つの特定の物質のみに反応する。これらの抗体は、その１つの物質を発見し、それに対して作用する。身体は多数の種類の形質細胞を有するため、多数の物質に反応することができる。形質細胞が癌化すると、身体はますます多くのこれらの細胞を生産し続ける。全て異常であり、かつ、類似している不要な形質細胞は骨髄腫細胞と称される。骨髄腫細胞は骨髄及び骨の硬い外側の部分に集まる傾向がある。それらは１つの骨にのみ集まり、１つの塊又は腫瘍（形質細胞腫と称される）を形成する場合がある。しかしながら、大半の場合には、骨髄腫細胞は多数の骨に集まり、多数の腫瘍を形成し、他の問題を引き起こすことが多い。これが生じると、疾患は多発性骨髄腫（ＭＭ）と称される。
【０００４】
ＭＭを有するヒトは異常に大量の同一の形質細胞を有するため、多すぎる１つの種類の抗体も有する。腫瘍、その産物、及び腫瘍に対する宿主の反応は、多数の器官の機能不全、並びに骨痛又は骨折の症状、腎不全、感染に対する感受性、貧血、高カルシウム血症、並びに時折の凝固異常、神経症状、及び過粘稠の血管の兆候をもたらす。
【０００５】
ＭＭは、西欧諸国において、２番目に最も一般的に診断される血液悪性腫瘍であり、米国のみで一年に〜１５，０００人が新たに発症し、全ての癌を考慮に入れると癌による死の１４番目の原因である。残念なことに、ＭＭは、不治の病であると現在では解されており、当該疾患の細胞毒性化学療法に基づく治療方法の活性を改善するための過去〜３０年にもわたる多大な努力にもかかわらず、ＭＭ患者の全生存は、３から４年の中央値のまま、本質的には変化していない。重要なことに、ＭＭと診断される年齢の中央値は６５歳未満であり、ＭＭ患者の１／３超が診断時に５５歳未満である。比較的若いＭＭ患者のかなり大きな割合に関しては、ＭＭの診断が、他の併存疾患の非存在下であっても、年齢が同じの非ＭＭ患者の平均寿命予測よりも彼らの全生存が顕著に短いという高い確率を示す。
【０００６】
最近、ＭＭの治療管理における一連の重要な進展、すなわち、二種の新しい種類の抗癌剤であるサリドマイド（及びその免疫調節性誘導体、例えば、レナリドマイド（Dimopoulos M et al. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 2123-2132; Weber DM et al. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 2133-2142））及びプロテアソームインヒビター、例えば、ボルテゾミブ（Richardson PG et al. N. Engl. J. Med. 2005, 352, 2487-2498）の抗ＭＭ活性の報告があった。これらの種類の薬剤は、再発したＭＭ患者／従来の又は高用量の細胞毒性化学療法に基づく治療計画に反応しないＭＭ患者において活性を示したが、顕著な割合のＭＭ患者は、これらの新規薬剤に対する抵抗性を初めから持っており、最初応答した者（永続的な完全な回復を達成したものですら）は最終的に再発する。したがって、ＭＭ患者の予後をさらに改善し、かつ、願わくは現在不治である新生組織形成の高い治癒率を達成するために、新しい種類の抗ＭＭ剤の開発は緊急に必要とされている。
【０００７】
ＭＭについてのさらなる情報は、“Handbook Cancer. Principles & Practice of Oncology”, 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott Williams & Wilkins, 2005などの医学文献において見ることができる。
【０００８】
ＰＭ００１０４は、ジョルマイシン及びレニエラマイシンに関連するアルカロイドであり、サフラシン及びサフラマイシン化合物にも関連している。ジョルマイシンは、太平洋産ウミウシ類であるブチウミウシ（Jurunna funebris）の皮膚及び粘液から単離された天然化合物である（Fontana A., et al., Tetrahedron (2000), 56, 7305-8）。加えて、レニエラマイシンのファミリーは海綿動物及び被嚢類から単離されると開示されている（James M.F. et al. J. Am. Chem. Soc. (1982), 104, 265-269; Oku N., et al. Journal Natural Products (2003), 66, 1136-9）。サフラシン及びサフラマイシン化合物は、Manzanares I., et al. Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents (2001), 1, 257-276並びにWO 00/18233及びWO 01/87894に開示されている。
【０００９】
ＰＭ００１０４は、固形及び非固形腫瘍細胞株に対する顕著なインビトロ活性、並びに幾つかの異種移植したヒト細胞株、例えば、乳癌細胞株及び前立腺癌細胞株にマウス中でインビボ活性を示した。ＰＭ００１０４の作用のメカニズムの仮の予測は、細胞周期の変化、ＤＮＡ結合特性、及び転写阻害が示されている。ＰＭ００１０４のさらなる詳細については、WO 01/87894を参照のこと。当該化合物は、以下の化学構造を示す。
【００１０】
【化１】
【００１１】
加えて、ＰＭ００１０４の医薬組成物並びに投与用量及び計画について、具体的な参照によって本明細書に組み込まれるWO 2007/052076及びWO 2008/135792を参照する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】WO 00/18233
【特許文献２】WO 01/87894
【特許文献３】WO 2007/052076
【特許文献４】WO 2008/135792
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Dimopoulos M et al. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 2123-2132
【非特許文献２】Weber DM et al. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 2133-2142
【非特許文献３】Richardson PG et al. N. Engl. J. Med. 2005, 352, 2487-2498
【非特許文献４】“Handbook Cancer. Principles & Practice of Oncology”, 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott Williams & Wilkins, 2005
【非特許文献５】Fontana A., et al., Tetrahedron (2000), 56, 7305-8
【非特許文献６】James M.F. et al. J. Am. Chem. Soc. (1982), 104, 265-269
【非特許文献７】Oku N., et al. Journal Natural Products (2003), 66, 1136-9
【非特許文献８】Manzanares I., et al. Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents (2001), 1, 257-276
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の課題は、ＰＭ００１０４を使用することによるＭＭ治療の新規かつ改善された態様を提供することである。
【００１５】
本発明の他の課題は、ＰＭ００１０４の癌治療における新たな用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者は、ＰＭ００１０４が、多発性骨髄腫（ＭＭ）に対して抗癌活性を有し、そのため、当該疾患の治療において成功裡に使用できることを初めて確立した。
【００１７】
かくして、本発明は、医薬組成物、キット、ＰＭ００１０４を使用するＭＭの治療方法、及びＭＭの治療のための医薬の製造におけるＰＭ００１０４の使用に関する。
【００１８】
本発明の１つの態様にしたがって、本出願人は、ＭＭの治療のためのＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の治療上有効量を必要な患者の治療のために提供する。
【００１９】
関連する実施態様では、本発明は、ＭＭの治療のための医薬の製造における、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の使用も提供する。
【００２０】
さらなる態様では、本発明は、ＭＭの治療において使用するための、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩を提供する。
【００２１】
他の態様では、本発明は、製薬学的に許容される担体又は賦形剤とともに、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩を含む、ＭＭの治療において使用するための医薬組成物にも関する。
【００２２】
本発明は、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の治療上有効量を罹患した対象に投与する工程を含む、ＭＭに罹患している任意の哺乳動物、特にヒトの治療方法も提供する。
【００２３】
本発明のさらなる態様では、本明細書に開示する治療用途及び方法にしたがってＰＭ００１０４を投与するための印刷された説明書、並びにＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を含む、ＰＭ００１０４の投与用医療キットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１Ａ】ＰＭ００１０４は、多発性骨髄腫細胞の生存能力を阻害しながら、正常な造血系前駆細胞を保存する。９種のＭＭ細胞株を各種の異なる濃度のＰＭ００１０４と２４時間（図１Ａ）、４８時間（図１Ｂ）、及び７２時間（図１Ｃ）にわたってインキュベートして、細胞生存率をＭＴＴアッセイによって分析した。対照の未処理のサンプルの平均増殖値を１００％とした。データは、少なくとも２回繰返して実施した１つの実験の４回重複の平均±ＳＤである。
【図１Ｂ】ＰＭ００１０４は、多発性骨髄腫細胞の生存能力を阻害しながら、正常な造血系前駆細胞を保存する。９種のＭＭ細胞株を各種の異なる濃度のＰＭ００１０４と２４時間（図１Ａ）、４８時間（図１Ｂ）、及び７２時間（図１Ｃ）にわたってインキュベートして、細胞生存率をＭＴＴアッセイによって分析した。対照の未処理のサンプルの平均増殖値を１００％とした。データは、少なくとも２回繰返して実施した１つの実験の４回重複の平均±ＳＤである。
【図１Ｃ】ＰＭ００１０４は、多発性骨髄腫細胞の生存能力を阻害しながら、正常な造血系前駆細胞を保存する。９種のＭＭ細胞株を各種の異なる濃度のＰＭ００１０４と２４時間（図１Ａ）、４８時間（図１Ｂ）、及び７２時間（図１Ｃ）にわたってインキュベートして、細胞生存率をＭＴＴアッセイによって分析した。対照の未処理のサンプルの平均増殖値を１００％とした。データは、少なくとも２回繰返して実施した１つの実験の４回重複の平均±ＳＤである。
【図２】６人のＭＭ患者から得られた、新しく単離した骨髄細胞を、ＰＭ００１０４（１から５０ｎＭ）を用いてエクスビボで１８時間にわたって処理した。インキュベート期間の後に、アネキシンＶ−ＦＩＴＣと、骨髄腫集団におけるアポトーシスの誘導の分析を可能にする、形質細胞表面抗原（ＣＤ３８、ＣＤ５６、及びＣＤ４５）に対する３種のモノクローナル抗体との組み合わせで細胞を染色した。未処理のサンプル中の生存細胞の割合に関連させて、アネキシンＶ陽性細胞の割合を結果として示している。
【図３Ａ】ＰＭ００１０４は、ＩＬ−６、ＩＧＦ−Ｉ、及び患者のＢＭＳＣに対する接着の保護効果を克服する。４８時間にわたって所定の濃度のＰＭ００１０４とＩＬ−６（図３Ａ）、ＩＧＦ−Ｉ（図３Ｂ）、又はＭＭ患者由来のＢＭＳＣ（図３Ｃ）の存在下又は不在下で、ＭＭ１Ｓ細胞を処理した。４８時間培養の最後の８時間の間にＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、ＤＮＡ合成を測定した。加えて、各種の異なる用量のＰＭ００１０４とともに４８時間にわたってＢＭＳＣを培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を分析した（図３Ｄ）。データは、四回重複の平均±ＳＤとして表わしている。
【図３Ｂ】ＰＭ００１０４は、ＩＬ−６、ＩＧＦ−Ｉ、及び患者のＢＭＳＣに対する接着の保護効果を克服する。４８時間にわたって所定の濃度のＰＭ００１０４とＩＬ−６（図３Ａ）、ＩＧＦ−Ｉ（図３Ｂ）、又はＭＭ患者由来のＢＭＳＣ（図３Ｃ）の存在下又は不在下で、ＭＭ１Ｓ細胞を処理した。４８時間培養の最後の８時間の間にＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、ＤＮＡ合成を測定した。加えて、各種の異なる用量のＰＭ００１０４とともに４８時間にわたってＢＭＳＣを培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を分析した（図３Ｄ）。データは、四回重複の平均±ＳＤとして表わしている。
【図３Ｃ】ＰＭ００１０４は、ＩＬ−６、ＩＧＦ−Ｉ、及び患者のＢＭＳＣに対する接着の保護効果を克服する。４８時間にわたって所定の濃度のＰＭ００１０４とＩＬ−６（図３Ａ）、ＩＧＦ−Ｉ（図３Ｂ）、又はＭＭ患者由来のＢＭＳＣ（図３Ｃ）の存在下又は不在下で、ＭＭ１Ｓ細胞を処理した。４８時間培養の最後の８時間の間にＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、ＤＮＡ合成を測定した。加えて、各種の異なる用量のＰＭ００１０４とともに４８時間にわたってＢＭＳＣを培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を分析した（図３Ｄ）。データは、四回重複の平均±ＳＤとして表わしている。
【図３Ｄ】ＰＭ００１０４は、ＩＬ−６、ＩＧＦ−Ｉ、及び患者のＢＭＳＣに対する接着の保護効果を克服する。４８時間にわたって所定の濃度のＰＭ００１０４とＩＬ−６（図３Ａ）、ＩＧＦ−Ｉ（図３Ｂ）、又はＭＭ患者由来のＢＭＳＣ（図３Ｃ）の存在下又は不在下で、ＭＭ１Ｓ細胞を処理した。４８時間培養の最後の８時間の間にＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、ＤＮＡ合成を測定した。加えて、各種の異なる用量のＰＭ００１０４とともに４８時間にわたってＢＭＳＣを培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を分析した（図３Ｄ）。データは、四回重複の平均±ＳＤとして表わしている。
【図４Ａ】インビボ抗骨髄腫効果。ＭＭ１Ｓ（図４Ａ）及びＯＰＭ−１形質細胞腫（図４Ｃ）の所定の日にちに間の容量の漸進的変化、並びに処理したＭＭ１Ｓ（図４Ｂ）及びＯＰＭ−１（図４Ｄ）マウスの生存。
【図４Ｂ】インビボ抗骨髄腫効果。ＭＭ１Ｓ（図４Ａ）及びＯＰＭ−１形質細胞腫（図４Ｃ）の所定の日にちに間の容量の漸進的変化、並びに処理したＭＭ１Ｓ（図４Ｂ）及びＯＰＭ−１（図４Ｄ）マウスの生存。
【図４Ｃ】インビボ抗骨髄腫効果。ＭＭ１Ｓ（図４Ａ）及びＯＰＭ−１形質細胞腫（図４Ｃ）の所定の日にちに間の容量の漸進的変化、並びに処理したＭＭ１Ｓ（図４Ｂ）及びＯＰＭ−１（図４Ｄ）マウスの生存。
【図４Ｄ】インビボ抗骨髄腫効果。ＭＭ１Ｓ（図４Ａ）及びＯＰＭ−１形質細胞腫（図４Ｃ）の所定の日にちに間の容量の漸進的変化、並びに処理したＭＭ１Ｓ（図４Ｂ）及びＯＰＭ−１（図４Ｄ）マウスの生存。
【図５Ａ】ＰＭ００１０４は、従来及び新規の抗骨髄腫剤の抗骨髄腫作用を増強する。ＭＭ１Ｓを、ＰＭ００１０４（Ｚａｌｙｐｓｉｓ，Ｚ）並びに他の抗骨髄腫剤、例えば、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）、メルファラン（Ｍｅｌ）、ドキソルビシン（Ｄｏｘ）、ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔ）、及びレナリドマイド（Ｌｅｎ）の次善の濃度の２つ（図５Ａ）又は３つ（図５Ｂ）の組み合わせで処理した。ＭＴＴアッセイによって細胞生存率を分析した。
【図５Ｂ】ＰＭ００１０４は、従来及び新規の抗骨髄腫剤の抗骨髄腫作用を増強する。ＭＭ１Ｓを、ＰＭ００１０４（Ｚａｌｙｐｓｉｓ，Ｚ）並びに他の抗骨髄腫剤、例えば、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）、メルファラン（Ｍｅｌ）、ドキソルビシン（Ｄｏｘ）、ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔ）、及びレナリドマイド（Ｌｅｎ）の次善の濃度の２つ（図５Ａ）又は３つ（図５Ｂ）の組み合わせで処理した。ＭＴＴアッセイによって細胞生存率を分析した。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
ＭＭの治療管理の近年の進展にもかかわらず、特に再発患者又は従来及び／若しくは新規治療法に対して好ましく反応しない患者において、抗ＭＭ活性を有する新規治療剤の同定が依然として必要とされている。
【００２６】
本発明者は、ＰＭ００１０４が、インビトロ及びインビボアッセイの双方において、強力な抗ＭＭ活性を示すことを発見した。インビトロ試験では、ＰＭ００１０４は、ＭＭ細胞株及び患者細胞に強力に作用し、大半の細胞株に対するＩＣ５０値は、低いナノモル濃度又はピコモル濃度の範囲にあり、これは、ＭＭ治療に使用される全ての他の薬剤よりも優位であることを示す。さらに、ＰＭ００１０４は、これらの現在のＭＭ治療の幾つかと相乗作用を与え、このことは、他のよく確立された薬剤と組み合わせてＰＭ００１０４を使用できる可能性を支持する。興味深いことに、ＰＭ００１０４は、従来の抗ＭＭ治療に耐性があるため選ばれた、ＭＭ１Ｒ及びＲＰＭＩ−ＬＲ５などの細胞株にも同様に有効であり、このことは、ＰＭ００１０４が、治療されたＭＭ患者において認められる共通の状況である薬剤耐性を克服するために使用できることを示す。インビトロの結果に加えて、インビボの動物試験によってＰＭ００１０４の抗ＭＭ活性を確認した。ＰＭ００１０４は良好な耐久性があり、かつ、マウス中の異種移植された形質細胞腫であるＭＭ１Ｓ及びＯＰＭ−１の増殖に顕著に作用した。
【００２７】
本明細書で使用する用語「治療する」は、他に示していない限り、その様な用語を適用する疾患若しくは状態又はその様な疾患若しくは状態の１つ若しくは複数の症状の回復、緩和、進行の阻害、疾患の症状及び病原の緩和、又は予防をすることを意味する。本明細書で使用する用語「治療」は、他に示していない限り、直ぐ上に定義した「治療する」ことの行為を意味する。
【００２８】
上述のように、ＰＭ００１０４は、海洋生物由来の化合物ジョルマイシン及びレニエラマイシンに関連するアルカロイドであり、サフラシン及びサフラマイシン化合物にも関連し、以下の構造を有する。
【００２９】
【化２】
【００３０】
用語「ＰＭ００１０４」は、任意の製薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグ、又は患者に投与されて本明細書に記載の化合物を（直接的又は間接的に）提供することができる任意の他の化合物を含むことを本明細書では意図する。塩、溶媒和物、水和物、及びプロドラッグの調製は当該技術分野において既知の方法で実施することができる。
【００３１】
製薬学的に許容される塩は、従来の化学的な方法によって、塩基性又は酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般的には、その様な塩は、例えば、これらの化合物の遊離酸又は塩基の形態を化学両論量の適当な塩又は酸と水中若しくは有機溶媒中又はそれらの混合物中で反応させることによって調製される。一般的には、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。酸付加塩の例は、無機酸付加塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、及び有機酸付加塩、例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、及びｐ−トルエンスルホン酸塩を含む。アルカリ付加塩の例は、無機塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、及びアンモニウム塩、並びに有機アルカリ塩、例えば、エチレンジアミン塩、エタノールアミン塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキレンエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、及び塩規性アミノ酸塩を含む。
【００３２】
ＰＭ００１０４のプロドラッグである任意の化合物が、本発明の範囲及び精神の範囲内である。用語「プロドラッグ」は、その最も広範な意味で使用され、インビボでＰＭ００１０４に変換する誘導体を包含する。前記プロドラッグは、加水分解、酸化、又は他の生体条件下における反応をしてＰＭ００１０４を提供することができる。プロドラッグの例は、生態加水分解可能なアミド、生体加水分解可能なエステル、生体加水分解可能なカルバメート、生体加水分解可能なカーボネート、生体加水分解可能なウレイド、及び生体加水分解可能なホスフェート類似体などの、生体加水分解可能な部分を含むＰＭ００１０４の誘導体及び代謝産物を含むが、それらに限らない。プロドラッグは、典型的には、Burger “Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) 及び“Design and Applications of Prodrugs” (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers)に開示されているものなどの、よく知られた方法を使用して調製することができる。
【００３３】
加えて、本明細書に記載の任意の薬剤は、遊離化合物又は溶媒和物（例えば、水和物）のいずれかとしての結晶形にあってよく、双方の形態が本発明の範囲内にあることを意図する。溶媒和の方法は当該技術分野において一般的に知られている。
【００３４】
本発明に係る用途のためのＰＭ００１０４は、参照によって本明細書に組み込むWO 01/87894に開示されている合成方法に従って調製されてよい。
【００３５】
使用可能なＰＭ００１０４の医薬組成物は、静脈投与のための適切な賦形剤と共に、溶液、懸濁物、エマルション、凍結乾燥した組成物などを含む。好ましくは、ＰＭ００１０４は、治療用途に適切な製剤にＰＭ００１０４及び賦形剤を含む、滅菌された凍結乾燥製品として適用及び保存されてよい。特に、適当なｐＨに緩衝化されたスクロース及びリン酸塩を含む製剤が好ましい。ＰＭ００１０４製剤化のさらなるガイダンスは、参照によってその全体を本明細書に組み込むWO 2007/052076に挙げられている。
【００３６】
ＰＭ００１０４又はその医薬組成物の投与は、好ましくは、静脈内注射によるものである。７２時間まで、より好ましくは１から２４時間の間、最も好ましくは約１、約３、又は約２４時間のいずれかの注射時間を使用することができる。病院に一晩宿泊せずに治療を実施することを可能にする短い注射時間が特に望ましい。しかしながら、注射は、約２４時間又は必要であればそれよりも長くなってよい。
【００３７】
好ましくは、ＰＭ００１０４の投与は周期的に実施されることが好ましい。好ましい投与方法では、ＰＭ００１０４の静脈内注射は、典型的には、各周期の初日に患者に提供され、次いで、その周期の残りの時間に患者を回復させる。各周期の好ましい期間は、典型的には３又は４週であり、必要であれば多数の周期を与えることができる。投与の遅延並びに／又は用量低減及び投与計画の調整が、個々の患者の状態及び治療に対する抵抗に依存して、必要であれば実施される。ＰＭ００１０４投与及び用量のさらなるガイダンスは、例えば、具体的な参照によって本明細書に取り込むWO 2008/135792を参照のこと。ＰＭ００１０４投与及び用量のさらなるガイダンスは、例えば、具体的な参照によって本明細書に取り込むJournal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol 25, No. 18S (June 20 Supplement), 2007: 2517 及びEur. J. Cancer, 2008, Vol 6 (supl 12), page 57 Abstract No. 179においても認められる。
【００３８】
用量についてのガイダンスは上述にあるが、ＰＭ００１０４の正確な用量は、特定の製剤、適用態様、ならびに治療する特定の場所、患者、及び腫瘍によって変化してよい。患者の年齢、体重、性別、食事、投与時間、排泄速度、状態、薬剤併用、反応感受性、及び疾患の重度などの他の因子が考慮に入れられるであろう。投与の遅延並びに／又は用量低減及び投与計画の調整が、個々の患者の状態及び治療の耐性に依存して、必要であれば実施される。
【００３９】
腫瘍のタイプ及び疾患の発達段階に依存して、本発明の治療方法の抗癌効果は、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖の遅延、腫瘍の退行、腫瘍の収縮、治療停止後の腫瘍の再発までの時間の増大、疾患進行の遅延、及び転移の予防を含むが、それらに限らない。本発明の治療方法がその様な治療を必要とする患者に適用される際には、前記治療方法は、例えば、抗癌効果の程度、反応速度、疾患進行時間、又は生存率によって測定されるような効果を生じることが予期される。特に、本発明の治療方法は、ヒト患者、特に再発しているか又は過去の化学療法に反応しないヒト患者に適している。一次治療も想定される。
【００４０】
１つの態様では、本発明は、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の治療上有効量を罹患した個体に投与する工程を含む、ＭＭに罹患している任意の哺乳動物、特にヒトを治療する方法を提供する。
【００４１】
他の態様では、本発明は、ＭＭの治療においてＰＭ００１０４を投与するための印刷された説明書、並びにＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を含む、ＰＭ００１０４を投与するための医療用キットに関する。
【００４２】
他の態様では、本発明は、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、ＭＭの治療において使用するための医薬組成物も提供する。
【００４３】
他の態様では、本発明は、ＭＭの治療のための医薬の製造における、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の使用も提供する。
【００４４】
さらなる態様では、本発明は、ＭＭの治療において使用するための、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩を提供する。
【００４５】
ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩は、他の薬剤と使用して、ＭＭの併用療法を提供してよい。他の薬剤は、同一の組成物の一部を形成するか、又は同時若しくは異なる時点における投与のための別々の組成物として提供されてよい。好ましくは他の薬剤は、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドマイド、プレドニソン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びサリドマイドを含むが、それらに限らない抗骨髄腫剤である。特に好ましいものは、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩とデキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドマイド、プレドニソン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びサリドマイドとの組み合わせであり、さらに好ましくは、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、及びレナリドマイドとの組み合わせである。ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩と２種の追加の薬剤との３種の薬剤の使用に基づく効果的な併用療法も本発明に包含される。特に好ましいものは、デキサメタゾン並びにメルファラン、ドキソルビシン、及びレナリドマイドから選択される第三の薬剤との３つの組み合わせである。
【００４６】
本明細書全体を通じて使用される用語「併用」は、同時又は別々の時点における、同一又は別々の医薬製剤にある参照される治療剤の、ＭＭに罹患している患者への投与を包含することを意図する。治療剤が別々の時点で投与される場合は、増強又は相乗効果の発生を提供するために十分に近接した時間で投与するべきである。
【００４７】
以下の実施例は、本発明をさらに説明するものである。実施例は、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００４８】
より簡潔な説明を提供するために、本明細書に記載した定量的な表現の幾つかは「約」なる用語で特定されていない。用語「約」が明示的に使用されていようと又はそうでなくとも、本明細書に記載した全ての量は、実際に記載した値を示し、さらに、その様な記載した値の実験及び／又は測定条件による同等値及び近似値を含む、技術常識に基づいて合理的に推定されるであろう、その様な記載した値の近似値をも意味すると解される。加えて、そうでないと記載していない限りにおいて、値が範囲として記載されている場合は、上限及び下限地は、特に好ましい値であると意図される。
【実施例】
【００４９】
（実施例１）
ＭＭ細胞に対するＰＭ００１０４の抗増殖／細胞毒性効果
ＭＭにおけるＰＭ００１０４の抗癌活性を、以下の９種のＭＭ細胞株：ＭＭ１Ｓ、ＭＭ１Ｒ、ＭＭ１４４、ＲＰＭＩ８２２６、ＲＰＭＩ−ＬＲ５、Ｕ２６６、Ｕ２６６−ＬＲ７、ＯＰＭ−１、及びＯＰＭ−２を含む一連の細胞株を使用して評価した。抗生物質（ペニシリン １００Ｕ／ｍＬ、ストレプトマイシン １００μｇ／ｍＬ）及び１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したＬ−グルタミン含有ＲＰＭＩ １６４０培地で３７℃において湿気のある雰囲気下で５％ ＣＯ２−９５％空気の存在下において、これらの細胞株を増殖させた。
【００５０】
２４、４８、及び７２時間にわたってＰＭ００１０４（０．１から５０ｎＭ）の濃度を増大させて細胞株を処理して、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）比色分析を使用して生存率を分析した。簡潔には、４８ウェルプレートの１つのウェル毎に５０，０００細胞／２００μｇ／ｍＬ培地の密度でＭＭ細胞株を播種して、所定の薬剤用量及び時間で処理した。処理が終了する２時間前に、ＭＴＴ溶液（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍＬ）を添加し、テトラゾリウム塩が生細胞によって色の付いたホルマザン結晶に代謝的に還元された。１０％ＳＤＳ−ＨＣｌ溶液を用いた一晩のインキュベートによってこれらの結晶を可溶化したあとに、６３０ｎｍで補正した５３０ｎｍにおける吸光を測定した。結果は、少なくとも２回反復して実施した１つの実験の四回重複の平均±ＳＤで表わした。
【００５１】
図１ＡからＣに示しているように、幾つかの細胞株（ＭＭ１Ｓ、ＭＭ１Ｒ、及びＭＭ１４４）におけるピコモル濃度から、それよりも感度が低い細胞株（ＲＰＭＩ８２２６、ＲＰＭＩ−ＬＲ５、Ｕ２６６、Ｕ２６６−ＬＲ７、ＯＰＭ−１、及びＯＰＭ−２）における低ナノモル濃度（１から２ｎＭ）の範囲の４８時間の時点におけるＩＣ５０で、全ての細胞株は薬剤に対して非常に感受性であった。ＰＭ００１０４に対する感受性は、デキサメタゾン（ＭＭ１Ｓ及びＭＭ１４４を除く全ての細胞がデキサメタゾンに耐性を有する）又はメルファラン（ＲＰＭＩ−ＬＲ５及びＵ２６６−ＬＲ７はメルファランに対して耐性を有する）などの従来の抗骨髄腫剤に対する前記細胞株の耐性パターンからは独立したものであった。
【００５２】
加えて、６人のＭＭ患者から得られた骨髄（ＢＭ）サンプルから単離された細胞においてエクスビボにおいてＰＭ００１０４の効果をさらに調べた。赤血球を除去するために、サンプルを塩化アンモニウムで可溶化し、抗生物質（ペニシリン １００Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌ）及び２０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０中で白血球を維持した。その後、３７℃で１８時間にわたって６ウェルプレートで各種の異なる濃度のＰＭ００１０４（１から５０ｎＭ）とともに、ＢＭ細胞をインキュベートした。骨髄腫形質細胞（ＰＣ）及び他のＢＭ細胞の間の区別をするために、１５分間にわたって室温で暗所において、骨髄腫関連抗原に対するモノクローナル抗体（抗ＣＤ５９−ＰＥ、抗ＣＤ４５−ＰＥ、及び抗ＣＤ３８−ｐｅｒＣＰ／Ｃｙ５（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））の組み合わせとともに５μｌのアネキシン−Ｖ−ＦＩＴＣ（Ｂｅｎｄｅｒ ＭｅｄＳｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）と細胞をインキュベートする、多様性技術を使用した。全部で５０，０００細胞をＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメトリー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で得て、「Ｐａｉｎｔ−ａ−Ｇａｔｅ」プログラムを使用して分析した。各種の異なる集団：腫瘍ＰＣ並びに正常な残部のリンパ球及び顆粒単球において、アネキシンＶ陽性に基づいてアポトーシスを分析した。ＰＭ００１０４処理後のアネキシンＶ陽性細胞の割合は、対照サンプル（未処理）中のアネキシンＶ陰性細胞（生細胞）に対して算出した。
【００５３】
診断時に得られた２つのサンプル（患者１及び６）、再発時の１つのサンプル（患者３）、及び再発したＭＭの二次的な形質細胞白血病の１つのサンプル（患者５）を含む、分析した６サンプルのうちの４つが、低濃度のＰＭ００１０４に対して非常に感受性であった。二次的な形質細胞白血病に相当する他のサンプル（患者４）は、中程度の感受性を有していた（図２）。
【００５４】
（実施例２）
ＰＭ００１０４は、ＢＭ微小環境によって誘導される延命効果及び薬剤耐性を無効化する
ＢＭ微小環境の存在は、それらの接着又はＩＬ−６又はＩＧＦ−Ｉなどの幾つかのサイトカインの生産によってＭＭに保護を与える。ＰＭ００１０４がＢＭ微小環境の当該保護効果を阻害することができるか否か試験するために、ＭＭ１Ｓ細胞を、ＩＬ−６（１ｎＭ）又はＩＧＦ−Ｉ（１０ｎＭ）とともにインキュベートするか、又はＢＭ間質細胞（ＢＭＳＣ）と４８時間にわたって共培養し、次いで、ＰＭ００１０４の濃度を増加させて処理した。ＢＭＳＣを９６ウェル培養皿に播種し（５０，０００細胞／ウェル）、４８時間の間でコンフルエントに達した。次いで、３０，０００骨髄腫細胞を、１０％血清を含有するＲＰＭＩ １６４０中に播種した。次いで、ＭＭの増殖をブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）取り込みによって評価した（Maiso P et al. Br. J. Haematol. 2008, 141, 470-482）。ＢｒｄＵを最後の８時間の間に添加して、ＢｒｄＵの取り込みを市販のキット（Ｒｏｃｈｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を使用し、製造業者の説明書にしたがって測定した。
【００５５】
これらのモデルの全てによって与えられたＭＭ細胞の増殖効果にもかかわらず、ＰＭ００１０４は、可溶性サイトカインであるＩＬ−６及びＩＧＦ−Ｉの効果を完全に無効化し（図３Ａ及び３Ｂ）、ＢＭＳＣ細胞に対する形質細胞の接着による保護効果を大きく阻害した（図３Ｃ）。対照的に、ＢＭＳＣは、ＰＭ００１０４の細胞毒性効果に対して非常に耐性であった（図３Ｄ）。
【００５６】
（実施例３）
ＰＭ００１０４のインビボ抗ＭＭ効果
ＰＭ００１０４のインビボ効果を、ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウス中に異種移植されたヒト形質細胞腫のモデルにおいて試験した。これらの実験は、非常に感受性である細胞株のＭＭ１Ｓ及びそれよりも感受性が低いＯＰＭ−１を使用して実施した。３０匹のマウスの２つの集団に各細胞株を皮下注射し、ビヒクルのみ、０．８ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４、又は１ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４を静脈内（ｉｖ）に一週間に一度、三回投与で与える３つの群にマウスを無作為にわけた。
【００５７】
ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ，ＵＳＡ）に、１００μＬのＲＰＭＩ−１６４０培地及び１００μＬのＭａｔｒｉｇｅｌ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）中の３×１０６のＭＭ１Ｓ又はＯＰＭ１細胞を右脇腹に皮下接種した。腫瘍が触診可能になった際に、ＰＭ００１０４又はビヒクルのみをマウスに与えた。ＰＭ００１０４を使用する処置を、０．８ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの用量で一週間に一度、三回投与で静脈内に与えた。対照群には、ビヒクル単独（注射用滅菌水及び生理食塩水）を与えた。
【００５８】
腫瘍直径のキャリパー測定を毎日実施し、以下の式：Ｖ＝４／３π×（ａ／２）×（ｂ／２）２（ａ及びｂは最長径及び最短径の各々を示す）を使用して楕円の容量として腫瘍容量を推定した。腫瘍が２ｃｍに達した際に動物を安楽死させた。処理群及び対照群の間の腫瘍容量における差異は、1-way analysis of variance及びBonferroni post hoc試験を使用して評価した。処置を開始した日から生存を推定し、統計学的な差異をLog Rank試験を用いてKaplan-Meier曲線によって評価した。SPSS-15.0ソフトウェア（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ．Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を用いて統計分析を実施し、統計学的な優位性をｐ＜０．０５と規定した。
【００５９】
図４Ａ及び４Ｃに示されているように、双方の容量のＰＭ００１０４は、統計的に有意な差異をもって形質細胞腫の増殖を低減させた。ＭＭ１Ｓ形質細胞腫については、処理の１５日後に、ビヒクル、０．８ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４、１ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４を与えた集団の各々について、腫瘍の容量が１２０７±６４５、４２０±２４２、及び１７６±７８ｍｍ３（平均±ＳＤ）であった（全体的な比較及び処理群ｖｓ対照の比較の各々についてｐ＜０．００１）。より低い感受性かつより速く増殖するＯＰＭ−１細胞株でも同様であり、同一のマウスの群について４０９１±９０３、１８７９±７３１、及び１０４２±５９６ｍｍ３（平均±ＳＤ）の処理の１４日後の腫瘍容量を有していた（全体的な比較についてｐ＜０，００１）。腫瘍増殖における当該遅延は、対照と比較した際の処理したマウスの生存が増大したことと相関している（図４Ｂ及び４Ｄ）。上記の意味で、ＭＭ１Ｓにおける中央値±ＳＥの生存は、ビヒクル対照、０．８ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４、１ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４の各々について、２９±３．９、５２±４．８、及び５９±５．５日であり（図４Ｂ）、ＯＰＭ−１形質細胞腫における同一の群の生存は、１４±０、２１±０．８、及び２３±１．１日であった（図４Ｄ）。Ｌｏｇ Ｒａｎｋ試験を使用して差異を評価し、双方の異種移植片における双方の用量でビヒクル対照と比較した際の統計的に有意な差異をもたらした。
【００６０】
興味深いことに、ＰＭ００１０４処置に関連する顕著な全身毒性は存在しなかった。僅かな体重減少（対照と比較して体重の約１０％）が最も高用量のＰＭ００１０４で認められた。
【００６１】
（実施例４）
ＰＭ００１０４は従来の抗ＭＭ剤の効果を増強する
ＭＭを含む大半の癌の治療は異なる作用メカニズムの薬剤の併用に基づくため、本発明者は、ＭＭの治療に通常使用されている薬剤と組み合わせてＰＭ００１０４の効果を試験した。
【００６２】
次善量のＰＭ００１０４とデキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、及びレナリドマイドなどの他の抗骨髄腫剤との２種及び３種の組み合わせを使用して、ＭＭ１Ｓ細胞を、実施例１に記載したように７２時間にわたって処理した。実施例１に記載のようにＭＴＴアッセイを使用して細胞生存率を分析した。前記組み合わせの有効性を、Ｃｈｏｕ Ｔａｌａｌａｙ法に基づくＣａｌｃｕｓｙｎソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を使用して定量化し、以下の解釈：ＣＩ＞１：アンタゴナイズ効果、ＣＩ＝１：相加効果、及びＣＩ＜１：相乗効果で併用指数（ＣＩ）を算出した。
【００６３】
ＰＭ００１０４は、デキサメタゾン、メルファラン、及びドキソルビシンなどの従来の抗骨髄腫剤の効果をＭＭ１Ｓ細胞において明らかに増強した（図５Ａ）。ＰＭ００１０４を、ＭＭ患者の治療道具に最近含められた２種の新規薬剤であるボルテゾミブ及びレナリドマイドとの組み合わせでも試験し、レナリドマイドとの併用で特に明らかな相加／相乗的な結果が見込まれた（図５Ａ）。Ｃｈｏｕ ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙ法を使用したこれらのデータの分析によって、ＰＭ００１０４は、デキサメタゾン（ＣＩ＝０．７８）、メルファラン（ＣＩ＝０．４８）、ドキソルビシン（ＣＩ＝０．６４）、及びレナリドマイド（ＣＩ＝０．５５）と相乗的であることが示された。
【００６４】
２種の組み合わせによるこれらの有望な結果は、ＭＭ１Ｓ細胞株で最も相乗的な化合物の３種の組み合わせを調査することを促進した。図５Ｂで認められるように、ＰＭ００１０４＋デキサメタゾン＋以下：メルファラン、ドキソルビシン、又はレナリドマイドのいずれかの３種の組み合わせは、各々の２種の組み合わせの効果を顕著に改善した。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌の治療、特に、化合物ＰＭ００１０４を使用することによる多発性骨髄腫の効果的な治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
多発性骨髄腫は、単独のクローンに由来する形質細胞の悪性増殖である。多発性骨髄腫と骨髄腫という用語は互換的に使用される。
【０００３】
形質細胞は、有害な物質を身体が取り除く助けをするために血流中を移動するタンパク質である抗体を生産する。各種の形質細胞は、大量の一種類の抗体を作製することによって１つの特定の物質のみに反応する。これらの抗体は、その１つの物質を発見し、それに対して作用する。身体は多数の種類の形質細胞を有するため、多数の物質に反応することができる。形質細胞が癌化すると、身体はますます多くのこれらの細胞を生産し続ける。全て異常であり、かつ、類似している不要な形質細胞は骨髄腫細胞と称される。骨髄腫細胞は骨髄及び骨の硬い外側の部分に集まる傾向がある。それらは１つの骨にのみ集まり、１つの塊又は腫瘍（形質細胞腫と称される）を形成する場合がある。しかしながら、大半の場合には、骨髄腫細胞は多数の骨に集まり、多数の腫瘍を形成し、他の問題を引き起こすことが多い。これが生じると、疾患は多発性骨髄腫（ＭＭ）と称される。
【０００４】
ＭＭを有するヒトは異常に大量の同一の形質細胞を有するため、多すぎる１つの種類の抗体も有する。腫瘍、その産物、及び腫瘍に対する宿主の反応は、多数の器官の機能不全、並びに骨痛又は骨折の症状、腎不全、感染に対する感受性、貧血、高カルシウム血症、並びに時折の凝固異常、神経症状、及び過粘稠の血管の兆候をもたらす。
【０００５】
ＭＭは、西欧諸国において、２番目に最も一般的に診断される血液悪性腫瘍であり、米国のみで一年に〜１５，０００人が新たに発症し、全ての癌を考慮に入れると癌による死の１４番目の原因である。残念なことに、ＭＭは、不治の病であると現在では解されており、当該疾患の細胞毒性化学療法に基づく治療方法の活性を改善するための過去〜３０年にもわたる多大な努力にもかかわらず、ＭＭ患者の全生存は、３から４年の中央値のまま、本質的には変化していない。重要なことに、ＭＭと診断される年齢の中央値は６５歳未満であり、ＭＭ患者の１／３超が診断時に５５歳未満である。比較的若いＭＭ患者のかなり大きな割合に関しては、ＭＭの診断が、他の併存疾患の非存在下であっても、年齢が同じの非ＭＭ患者の平均寿命予測よりも彼らの全生存が顕著に短いという高い確率を示す。
【０００６】
最近、ＭＭの治療管理における一連の重要な進展、すなわち、二種の新しい種類の抗癌剤であるサリドマイド（及びその免疫調節性誘導体、例えば、レナリドマイド（Dimopoulos M et al. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 2123-2132; Weber DM et al. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 2133-2142））及びプロテアソームインヒビター、例えば、ボルテゾミブ（Richardson PG et al. N. Engl. J. Med. 2005, 352, 2487-2498）の抗ＭＭ活性の報告があった。これらの種類の薬剤は、再発したＭＭ患者／従来の又は高用量の細胞毒性化学療法に基づく治療計画に反応しないＭＭ患者において活性を示したが、顕著な割合のＭＭ患者は、これらの新規薬剤に対する抵抗性を初めから持っており、最初応答した者（永続的な完全な回復を達成したものですら）は最終的に再発する。したがって、ＭＭ患者の予後をさらに改善し、かつ、願わくは現在不治である新生組織形成の高い治癒率を達成するために、新しい種類の抗ＭＭ剤の開発は緊急に必要とされている。
【０００７】
ＭＭについてのさらなる情報は、“Handbook Cancer. Principles & Practice of Oncology”, 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott Williams & Wilkins, 2005などの医学文献において見ることができる。
【０００８】
ＰＭ００１０４は、ジョルマイシン及びレニエラマイシンに関連するアルカロイドであり、サフラシン及びサフラマイシン化合物にも関連している。ジョルマイシンは、太平洋産ウミウシ類であるブチウミウシ（Jurunna funebris）の皮膚及び粘液から単離された天然化合物である（Fontana A., et al., Tetrahedron (2000), 56, 7305-8）。加えて、レニエラマイシンのファミリーは海綿動物及び被嚢類から単離されると開示されている（James M.F. et al. J. Am. Chem. Soc. (1982), 104, 265-269; Oku N., et al. Journal Natural Products (2003), 66, 1136-9）。サフラシン及びサフラマイシン化合物は、Manzanares I., et al. Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents (2001), 1, 257-276並びにWO 00/18233及びWO 01/87894に開示されている。
【０００９】
ＰＭ００１０４は、固形及び非固形腫瘍細胞株に対する顕著なインビトロ活性、並びに幾つかの異種移植したヒト細胞株、例えば、乳癌細胞株及び前立腺癌細胞株にマウス中でインビボ活性を示した。ＰＭ００１０４の作用のメカニズムの仮の予測は、細胞周期の変化、ＤＮＡ結合特性、及び転写阻害が示されている。ＰＭ００１０４のさらなる詳細については、WO 01/87894を参照のこと。当該化合物は、以下の化学構造を示す。
【００１０】
【化１】
【００１１】
加えて、ＰＭ００１０４の医薬組成物並びに投与用量及び計画について、具体的な参照によって本明細書に組み込まれるWO 2007/052076及びWO 2008/135792を参照する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】WO 00/18233
【特許文献２】WO 01/87894
【特許文献３】WO 2007/052076
【特許文献４】WO 2008/135792
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Dimopoulos M et al. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 2123-2132
【非特許文献２】Weber DM et al. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 2133-2142
【非特許文献３】Richardson PG et al. N. Engl. J. Med. 2005, 352, 2487-2498
【非特許文献４】“Handbook Cancer. Principles & Practice of Oncology”, 7th ed. Philadelphia, Pa: Lippincott Williams & Wilkins, 2005
【非特許文献５】Fontana A., et al., Tetrahedron (2000), 56, 7305-8
【非特許文献６】James M.F. et al. J. Am. Chem. Soc. (1982), 104, 265-269
【非特許文献７】Oku N., et al. Journal Natural Products (2003), 66, 1136-9
【非特許文献８】Manzanares I., et al. Curr. Med. Chem. Anti-Cancer Agents (2001), 1, 257-276
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明の課題は、ＰＭ００１０４を使用することによるＭＭ治療の新規かつ改善された態様を提供することである。
【００１５】
本発明の他の課題は、ＰＭ００１０４の癌治療における新たな用途を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明者は、ＰＭ００１０４が、多発性骨髄腫（ＭＭ）に対して抗癌活性を有し、そのため、当該疾患の治療において成功裡に使用できることを初めて確立した。
【００１７】
かくして、本発明は、医薬組成物、キット、ＰＭ００１０４を使用するＭＭの治療方法、及びＭＭの治療のための医薬の製造におけるＰＭ００１０４の使用に関する。
【００１８】
本発明の１つの態様にしたがって、本出願人は、ＭＭの治療のためのＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の治療上有効量を必要な患者の治療のために提供する。
【００１９】
関連する実施態様では、本発明は、ＭＭの治療のための医薬の製造における、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の使用も提供する。
【００２０】
さらなる態様では、本発明は、ＭＭの治療において使用するための、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩を提供する。
【００２１】
他の態様では、本発明は、製薬学的に許容される担体又は賦形剤とともに、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩を含む、ＭＭの治療において使用するための医薬組成物にも関する。
【００２２】
本発明は、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の治療上有効量を罹患した対象に投与する工程を含む、ＭＭに罹患している任意の哺乳動物、特にヒトの治療方法も提供する。
【００２３】
本発明のさらなる態様では、本明細書に開示する治療用途及び方法にしたがってＰＭ００１０４を投与するための印刷された説明書、並びにＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を含む、ＰＭ００１０４の投与用医療キットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１Ａ】ＰＭ００１０４は、多発性骨髄腫細胞の生存能力を阻害しながら、正常な造血系前駆細胞を保存する。９種のＭＭ細胞株を各種の異なる濃度のＰＭ００１０４と２４時間（図１Ａ）、４８時間（図１Ｂ）、及び７２時間（図１Ｃ）にわたってインキュベートして、細胞生存率をＭＴＴアッセイによって分析した。対照の未処理のサンプルの平均増殖値を１００％とした。データは、少なくとも２回繰返して実施した１つの実験の４回重複の平均±ＳＤである。
【図１Ｂ】ＰＭ００１０４は、多発性骨髄腫細胞の生存能力を阻害しながら、正常な造血系前駆細胞を保存する。９種のＭＭ細胞株を各種の異なる濃度のＰＭ００１０４と２４時間（図１Ａ）、４８時間（図１Ｂ）、及び７２時間（図１Ｃ）にわたってインキュベートして、細胞生存率をＭＴＴアッセイによって分析した。対照の未処理のサンプルの平均増殖値を１００％とした。データは、少なくとも２回繰返して実施した１つの実験の４回重複の平均±ＳＤである。
【図１Ｃ】ＰＭ００１０４は、多発性骨髄腫細胞の生存能力を阻害しながら、正常な造血系前駆細胞を保存する。９種のＭＭ細胞株を各種の異なる濃度のＰＭ００１０４と２４時間（図１Ａ）、４８時間（図１Ｂ）、及び７２時間（図１Ｃ）にわたってインキュベートして、細胞生存率をＭＴＴアッセイによって分析した。対照の未処理のサンプルの平均増殖値を１００％とした。データは、少なくとも２回繰返して実施した１つの実験の４回重複の平均±ＳＤである。
【図２】６人のＭＭ患者から得られた、新しく単離した骨髄細胞を、ＰＭ００１０４（１から５０ｎＭ）を用いてエクスビボで１８時間にわたって処理した。インキュベート期間の後に、アネキシンＶ−ＦＩＴＣと、骨髄腫集団におけるアポトーシスの誘導の分析を可能にする、形質細胞表面抗原（ＣＤ３８、ＣＤ５６、及びＣＤ４５）に対する３種のモノクローナル抗体との組み合わせで細胞を染色した。未処理のサンプル中の生存細胞の割合に関連させて、アネキシンＶ陽性細胞の割合を結果として示している。
【図３Ａ】ＰＭ００１０４は、ＩＬ−６、ＩＧＦ−Ｉ、及び患者のＢＭＳＣに対する接着の保護効果を克服する。４８時間にわたって所定の濃度のＰＭ００１０４とＩＬ−６（図３Ａ）、ＩＧＦ−Ｉ（図３Ｂ）、又はＭＭ患者由来のＢＭＳＣ（図３Ｃ）の存在下又は不在下で、ＭＭ１Ｓ細胞を処理した。４８時間培養の最後の８時間の間にＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、ＤＮＡ合成を測定した。加えて、各種の異なる用量のＰＭ００１０４とともに４８時間にわたってＢＭＳＣを培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を分析した（図３Ｄ）。データは、四回重複の平均±ＳＤとして表わしている。
【図３Ｂ】ＰＭ００１０４は、ＩＬ−６、ＩＧＦ−Ｉ、及び患者のＢＭＳＣに対する接着の保護効果を克服する。４８時間にわたって所定の濃度のＰＭ００１０４とＩＬ−６（図３Ａ）、ＩＧＦ−Ｉ（図３Ｂ）、又はＭＭ患者由来のＢＭＳＣ（図３Ｃ）の存在下又は不在下で、ＭＭ１Ｓ細胞を処理した。４８時間培養の最後の８時間の間にＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、ＤＮＡ合成を測定した。加えて、各種の異なる用量のＰＭ００１０４とともに４８時間にわたってＢＭＳＣを培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を分析した（図３Ｄ）。データは、四回重複の平均±ＳＤとして表わしている。
【図３Ｃ】ＰＭ００１０４は、ＩＬ−６、ＩＧＦ−Ｉ、及び患者のＢＭＳＣに対する接着の保護効果を克服する。４８時間にわたって所定の濃度のＰＭ００１０４とＩＬ−６（図３Ａ）、ＩＧＦ−Ｉ（図３Ｂ）、又はＭＭ患者由来のＢＭＳＣ（図３Ｃ）の存在下又は不在下で、ＭＭ１Ｓ細胞を処理した。４８時間培養の最後の８時間の間にＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、ＤＮＡ合成を測定した。加えて、各種の異なる用量のＰＭ００１０４とともに４８時間にわたってＢＭＳＣを培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を分析した（図３Ｄ）。データは、四回重複の平均±ＳＤとして表わしている。
【図３Ｄ】ＰＭ００１０４は、ＩＬ−６、ＩＧＦ−Ｉ、及び患者のＢＭＳＣに対する接着の保護効果を克服する。４８時間にわたって所定の濃度のＰＭ００１０４とＩＬ−６（図３Ａ）、ＩＧＦ−Ｉ（図３Ｂ）、又はＭＭ患者由来のＢＭＳＣ（図３Ｃ）の存在下又は不在下で、ＭＭ１Ｓ細胞を処理した。４８時間培養の最後の８時間の間にＢｒｄＵ取り込みを測定することによって、ＤＮＡ合成を測定した。加えて、各種の異なる用量のＰＭ００１０４とともに４８時間にわたってＢＭＳＣを培養し、ＭＴＴアッセイによって細胞毒性を分析した（図３Ｄ）。データは、四回重複の平均±ＳＤとして表わしている。
【図４Ａ】インビボ抗骨髄腫効果。ＭＭ１Ｓ（図４Ａ）及びＯＰＭ−１形質細胞腫（図４Ｃ）の所定の日にちに間の容量の漸進的変化、並びに処理したＭＭ１Ｓ（図４Ｂ）及びＯＰＭ−１（図４Ｄ）マウスの生存。
【図４Ｂ】インビボ抗骨髄腫効果。ＭＭ１Ｓ（図４Ａ）及びＯＰＭ−１形質細胞腫（図４Ｃ）の所定の日にちに間の容量の漸進的変化、並びに処理したＭＭ１Ｓ（図４Ｂ）及びＯＰＭ−１（図４Ｄ）マウスの生存。
【図４Ｃ】インビボ抗骨髄腫効果。ＭＭ１Ｓ（図４Ａ）及びＯＰＭ−１形質細胞腫（図４Ｃ）の所定の日にちに間の容量の漸進的変化、並びに処理したＭＭ１Ｓ（図４Ｂ）及びＯＰＭ−１（図４Ｄ）マウスの生存。
【図４Ｄ】インビボ抗骨髄腫効果。ＭＭ１Ｓ（図４Ａ）及びＯＰＭ−１形質細胞腫（図４Ｃ）の所定の日にちに間の容量の漸進的変化、並びに処理したＭＭ１Ｓ（図４Ｂ）及びＯＰＭ−１（図４Ｄ）マウスの生存。
【図５Ａ】ＰＭ００１０４は、従来及び新規の抗骨髄腫剤の抗骨髄腫作用を増強する。ＭＭ１Ｓを、ＰＭ００１０４（Ｚａｌｙｐｓｉｓ，Ｚ）並びに他の抗骨髄腫剤、例えば、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）、メルファラン（Ｍｅｌ）、ドキソルビシン（Ｄｏｘ）、ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔ）、及びレナリドマイド（Ｌｅｎ）の次善の濃度の２つ（図５Ａ）又は３つ（図５Ｂ）の組み合わせで処理した。ＭＴＴアッセイによって細胞生存率を分析した。
【図５Ｂ】ＰＭ００１０４は、従来及び新規の抗骨髄腫剤の抗骨髄腫作用を増強する。ＭＭ１Ｓを、ＰＭ００１０４（Ｚａｌｙｐｓｉｓ，Ｚ）並びに他の抗骨髄腫剤、例えば、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）、メルファラン（Ｍｅｌ）、ドキソルビシン（Ｄｏｘ）、ボルテゾミブ（Ｂｏｒｔ）、及びレナリドマイド（Ｌｅｎ）の次善の濃度の２つ（図５Ａ）又は３つ（図５Ｂ）の組み合わせで処理した。ＭＴＴアッセイによって細胞生存率を分析した。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
ＭＭの治療管理の近年の進展にもかかわらず、特に再発患者又は従来及び／若しくは新規治療法に対して好ましく反応しない患者において、抗ＭＭ活性を有する新規治療剤の同定が依然として必要とされている。
【００２６】
本発明者は、ＰＭ００１０４が、インビトロ及びインビボアッセイの双方において、強力な抗ＭＭ活性を示すことを発見した。インビトロ試験では、ＰＭ００１０４は、ＭＭ細胞株及び患者細胞に強力に作用し、大半の細胞株に対するＩＣ５０値は、低いナノモル濃度又はピコモル濃度の範囲にあり、これは、ＭＭ治療に使用される全ての他の薬剤よりも優位であることを示す。さらに、ＰＭ００１０４は、これらの現在のＭＭ治療の幾つかと相乗作用を与え、このことは、他のよく確立された薬剤と組み合わせてＰＭ００１０４を使用できる可能性を支持する。興味深いことに、ＰＭ００１０４は、従来の抗ＭＭ治療に耐性があるため選ばれた、ＭＭ１Ｒ及びＲＰＭＩ−ＬＲ５などの細胞株にも同様に有効であり、このことは、ＰＭ００１０４が、治療されたＭＭ患者において認められる共通の状況である薬剤耐性を克服するために使用できることを示す。インビトロの結果に加えて、インビボの動物試験によってＰＭ００１０４の抗ＭＭ活性を確認した。ＰＭ００１０４は良好な耐久性があり、かつ、マウス中の異種移植された形質細胞腫であるＭＭ１Ｓ及びＯＰＭ−１の増殖に顕著に作用した。
【００２７】
本明細書で使用する用語「治療する」は、他に示していない限り、その様な用語を適用する疾患若しくは状態又はその様な疾患若しくは状態の１つ若しくは複数の症状の回復、緩和、進行の阻害、疾患の症状及び病原の緩和、又は予防をすることを意味する。本明細書で使用する用語「治療」は、他に示していない限り、直ぐ上に定義した「治療する」ことの行為を意味する。
【００２８】
上述のように、ＰＭ００１０４は、海洋生物由来の化合物ジョルマイシン及びレニエラマイシンに関連するアルカロイドであり、サフラシン及びサフラマイシン化合物にも関連し、以下の構造を有する。
【００２９】
【化２】
【００３０】
用語「ＰＭ００１０４」は、任意の製薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、プロドラッグ、又は患者に投与されて本明細書に記載の化合物を（直接的又は間接的に）提供することができる任意の他の化合物を含むことを本明細書では意図する。塩、溶媒和物、水和物、及びプロドラッグの調製は当該技術分野において既知の方法で実施することができる。
【００３１】
製薬学的に許容される塩は、従来の化学的な方法によって、塩基性又は酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般的には、その様な塩は、例えば、これらの化合物の遊離酸又は塩基の形態を化学両論量の適当な塩又は酸と水中若しくは有機溶媒中又はそれらの混合物中で反応させることによって調製される。一般的には、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、又はアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。酸付加塩の例は、無機酸付加塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、及び有機酸付加塩、例えば、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、及びｐ−トルエンスルホン酸塩を含む。アルカリ付加塩の例は、無機塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、及びアンモニウム塩、並びに有機アルカリ塩、例えば、エチレンジアミン塩、エタノールアミン塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキレンエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、及び塩規性アミノ酸塩を含む。
【００３２】
ＰＭ００１０４のプロドラッグである任意の化合物が、本発明の範囲及び精神の範囲内である。用語「プロドラッグ」は、その最も広範な意味で使用され、インビボでＰＭ００１０４に変換する誘導体を包含する。前記プロドラッグは、加水分解、酸化、又は他の生体条件下における反応をしてＰＭ００１０４を提供することができる。プロドラッグの例は、生態加水分解可能なアミド、生体加水分解可能なエステル、生体加水分解可能なカルバメート、生体加水分解可能なカーボネート、生体加水分解可能なウレイド、及び生体加水分解可能なホスフェート類似体などの、生体加水分解可能な部分を含むＰＭ００１０４の誘導体及び代謝産物を含むが、それらに限らない。プロドラッグは、典型的には、Burger “Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6th ed. (Donald J. Abraham ed., 2001, Wiley) 及び“Design and Applications of Prodrugs” (H. Bundgaard ed., 1985, Harwood Academic Publishers)に開示されているものなどの、よく知られた方法を使用して調製することができる。
【００３３】
加えて、本明細書に記載の任意の薬剤は、遊離化合物又は溶媒和物（例えば、水和物）のいずれかとしての結晶形にあってよく、双方の形態が本発明の範囲内にあることを意図する。溶媒和の方法は当該技術分野において一般的に知られている。
【００３４】
本発明に係る用途のためのＰＭ００１０４は、参照によって本明細書に組み込むWO 01/87894に開示されている合成方法に従って調製されてよい。
【００３５】
使用可能なＰＭ００１０４の医薬組成物は、静脈投与のための適切な賦形剤と共に、溶液、懸濁物、エマルション、凍結乾燥した組成物などを含む。好ましくは、ＰＭ００１０４は、治療用途に適切な製剤にＰＭ００１０４及び賦形剤を含む、滅菌された凍結乾燥製品として適用及び保存されてよい。特に、適当なｐＨに緩衝化されたスクロース及びリン酸塩を含む製剤が好ましい。ＰＭ００１０４製剤化のさらなるガイダンスは、参照によってその全体を本明細書に組み込むWO 2007/052076に挙げられている。
【００３６】
ＰＭ００１０４又はその医薬組成物の投与は、好ましくは、静脈内注射によるものである。７２時間まで、より好ましくは１から２４時間の間、最も好ましくは約１、約３、又は約２４時間のいずれかの注射時間を使用することができる。病院に一晩宿泊せずに治療を実施することを可能にする短い注射時間が特に望ましい。しかしながら、注射は、約２４時間又は必要であればそれよりも長くなってよい。
【００３７】
好ましくは、ＰＭ００１０４の投与は周期的に実施されることが好ましい。好ましい投与方法では、ＰＭ００１０４の静脈内注射は、典型的には、各周期の初日に患者に提供され、次いで、その周期の残りの時間に患者を回復させる。各周期の好ましい期間は、典型的には３又は４週であり、必要であれば多数の周期を与えることができる。投与の遅延並びに／又は用量低減及び投与計画の調整が、個々の患者の状態及び治療に対する抵抗に依存して、必要であれば実施される。ＰＭ００１０４投与及び用量のさらなるガイダンスは、例えば、具体的な参照によって本明細書に取り込むWO 2008/135792を参照のこと。ＰＭ００１０４投与及び用量のさらなるガイダンスは、例えば、具体的な参照によって本明細書に取り込むJournal of Clinical Oncology, 2007 ASCO Annual Meeting Proceedings Part I. Vol 25, No. 18S (June 20 Supplement), 2007: 2517 及びEur. J. Cancer, 2008, Vol 6 (supl 12), page 57 Abstract No. 179においても認められる。
【００３８】
用量についてのガイダンスは上述にあるが、ＰＭ００１０４の正確な用量は、特定の製剤、適用態様、ならびに治療する特定の場所、患者、及び腫瘍によって変化してよい。患者の年齢、体重、性別、食事、投与時間、排泄速度、状態、薬剤併用、反応感受性、及び疾患の重度などの他の因子が考慮に入れられるであろう。投与の遅延並びに／又は用量低減及び投与計画の調整が、個々の患者の状態及び治療の耐性に依存して、必要であれば実施される。
【００３９】
腫瘍のタイプ及び疾患の発達段階に依存して、本発明の治療方法の抗癌効果は、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖の遅延、腫瘍の退行、腫瘍の収縮、治療停止後の腫瘍の再発までの時間の増大、疾患進行の遅延、及び転移の予防を含むが、それらに限らない。本発明の治療方法がその様な治療を必要とする患者に適用される際には、前記治療方法は、例えば、抗癌効果の程度、反応速度、疾患進行時間、又は生存率によって測定されるような効果を生じることが予期される。特に、本発明の治療方法は、ヒト患者、特に再発しているか又は過去の化学療法に反応しないヒト患者に適している。一次治療も想定される。
【００４０】
１つの態様では、本発明は、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の治療上有効量を罹患した個体に投与する工程を含む、ＭＭに罹患している任意の哺乳動物、特にヒトを治療する方法を提供する。
【００４１】
他の態様では、本発明は、ＭＭの治療においてＰＭ００１０４を投与するための印刷された説明書、並びにＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を含む、ＰＭ００１０４を投与するための医療用キットに関する。
【００４２】
他の態様では、本発明は、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、ＭＭの治療において使用するための医薬組成物も提供する。
【００４３】
他の態様では、本発明は、ＭＭの治療のための医薬の製造における、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の使用も提供する。
【００４４】
さらなる態様では、本発明は、ＭＭの治療において使用するための、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩を提供する。
【００４５】
ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩は、他の薬剤と使用して、ＭＭの併用療法を提供してよい。他の薬剤は、同一の組成物の一部を形成するか、又は同時若しくは異なる時点における投与のための別々の組成物として提供されてよい。好ましくは他の薬剤は、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドマイド、プレドニソン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びサリドマイドを含むが、それらに限らない抗骨髄腫剤である。特に好ましいものは、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩とデキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドマイド、プレドニソン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びサリドマイドとの組み合わせであり、さらに好ましくは、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、及びレナリドマイドとの組み合わせである。ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩と２種の追加の薬剤との３種の薬剤の使用に基づく効果的な併用療法も本発明に包含される。特に好ましいものは、デキサメタゾン並びにメルファラン、ドキソルビシン、及びレナリドマイドから選択される第三の薬剤との３つの組み合わせである。
【００４６】
本明細書全体を通じて使用される用語「併用」は、同時又は別々の時点における、同一又は別々の医薬製剤にある参照される治療剤の、ＭＭに罹患している患者への投与を包含することを意図する。治療剤が別々の時点で投与される場合は、増強又は相乗効果の発生を提供するために十分に近接した時間で投与するべきである。
【００４７】
以下の実施例は、本発明をさらに説明するものである。実施例は、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。
【００４８】
より簡潔な説明を提供するために、本明細書に記載した定量的な表現の幾つかは「約」なる用語で特定されていない。用語「約」が明示的に使用されていようと又はそうでなくとも、本明細書に記載した全ての量は、実際に記載した値を示し、さらに、その様な記載した値の実験及び／又は測定条件による同等値及び近似値を含む、技術常識に基づいて合理的に推定されるであろう、その様な記載した値の近似値をも意味すると解される。加えて、そうでないと記載していない限りにおいて、値が範囲として記載されている場合は、上限及び下限地は、特に好ましい値であると意図される。
【実施例】
【００４９】
（実施例１）
ＭＭ細胞に対するＰＭ００１０４の抗増殖／細胞毒性効果
ＭＭにおけるＰＭ００１０４の抗癌活性を、以下の９種のＭＭ細胞株：ＭＭ１Ｓ、ＭＭ１Ｒ、ＭＭ１４４、ＲＰＭＩ８２２６、ＲＰＭＩ−ＬＲ５、Ｕ２６６、Ｕ２６６−ＬＲ７、ＯＰＭ−１、及びＯＰＭ−２を含む一連の細胞株を使用して評価した。抗生物質（ペニシリン １００Ｕ／ｍＬ、ストレプトマイシン １００μｇ／ｍＬ）及び１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を添加したＬ−グルタミン含有ＲＰＭＩ １６４０培地で３７℃において湿気のある雰囲気下で５％ ＣＯ２−９５％空気の存在下において、これらの細胞株を増殖させた。
【００５０】
２４、４８、及び７２時間にわたってＰＭ００１０４（０．１から５０ｎＭ）の濃度を増大させて細胞株を処理して、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）比色分析を使用して生存率を分析した。簡潔には、４８ウェルプレートの１つのウェル毎に５０，０００細胞／２００μｇ／ｍＬ培地の密度でＭＭ細胞株を播種して、所定の薬剤用量及び時間で処理した。処理が終了する２時間前に、ＭＴＴ溶液（ＰＢＳ中５ｍｇ／ｍＬ）を添加し、テトラゾリウム塩が生細胞によって色の付いたホルマザン結晶に代謝的に還元された。１０％ＳＤＳ−ＨＣｌ溶液を用いた一晩のインキュベートによってこれらの結晶を可溶化したあとに、６３０ｎｍで補正した５３０ｎｍにおける吸光を測定した。結果は、少なくとも２回反復して実施した１つの実験の四回重複の平均±ＳＤで表わした。
【００５１】
図１ＡからＣに示しているように、幾つかの細胞株（ＭＭ１Ｓ、ＭＭ１Ｒ、及びＭＭ１４４）におけるピコモル濃度から、それよりも感度が低い細胞株（ＲＰＭＩ８２２６、ＲＰＭＩ−ＬＲ５、Ｕ２６６、Ｕ２６６−ＬＲ７、ＯＰＭ−１、及びＯＰＭ−２）における低ナノモル濃度（１から２ｎＭ）の範囲の４８時間の時点におけるＩＣ５０で、全ての細胞株は薬剤に対して非常に感受性であった。ＰＭ００１０４に対する感受性は、デキサメタゾン（ＭＭ１Ｓ及びＭＭ１４４を除く全ての細胞がデキサメタゾンに耐性を有する）又はメルファラン（ＲＰＭＩ−ＬＲ５及びＵ２６６−ＬＲ７はメルファランに対して耐性を有する）などの従来の抗骨髄腫剤に対する前記細胞株の耐性パターンからは独立したものであった。
【００５２】
加えて、６人のＭＭ患者から得られた骨髄（ＢＭ）サンプルから単離された細胞においてエクスビボにおいてＰＭ００１０４の効果をさらに調べた。赤血球を除去するために、サンプルを塩化アンモニウムで可溶化し、抗生物質（ペニシリン １００Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン１００μｇ／ｍｌ）及び２０％ＦＢＳを含有するＲＰＭＩ−１６４０中で白血球を維持した。その後、３７℃で１８時間にわたって６ウェルプレートで各種の異なる濃度のＰＭ００１０４（１から５０ｎＭ）とともに、ＢＭ細胞をインキュベートした。骨髄腫形質細胞（ＰＣ）及び他のＢＭ細胞の間の区別をするために、１５分間にわたって室温で暗所において、骨髄腫関連抗原に対するモノクローナル抗体（抗ＣＤ５９−ＰＥ、抗ＣＤ４５−ＰＥ、及び抗ＣＤ３８−ｐｅｒＣＰ／Ｃｙ５（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ））の組み合わせとともに５μｌのアネキシン−Ｖ−ＦＩＴＣ（Ｂｅｎｄｅｒ ＭｅｄＳｙｓｔｅｍｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）と細胞をインキュベートする、多様性技術を使用した。全部で５０，０００細胞をＦＡＣＳｃａｌｉｂｕｒフローサイトメトリー（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で得て、「Ｐａｉｎｔ−ａ−Ｇａｔｅ」プログラムを使用して分析した。各種の異なる集団：腫瘍ＰＣ並びに正常な残部のリンパ球及び顆粒単球において、アネキシンＶ陽性に基づいてアポトーシスを分析した。ＰＭ００１０４処理後のアネキシンＶ陽性細胞の割合は、対照サンプル（未処理）中のアネキシンＶ陰性細胞（生細胞）に対して算出した。
【００５３】
診断時に得られた２つのサンプル（患者１及び６）、再発時の１つのサンプル（患者３）、及び再発したＭＭの二次的な形質細胞白血病の１つのサンプル（患者５）を含む、分析した６サンプルのうちの４つが、低濃度のＰＭ００１０４に対して非常に感受性であった。二次的な形質細胞白血病に相当する他のサンプル（患者４）は、中程度の感受性を有していた（図２）。
【００５４】
（実施例２）
ＰＭ００１０４は、ＢＭ微小環境によって誘導される延命効果及び薬剤耐性を無効化する
ＢＭ微小環境の存在は、それらの接着又はＩＬ−６又はＩＧＦ−Ｉなどの幾つかのサイトカインの生産によってＭＭに保護を与える。ＰＭ００１０４がＢＭ微小環境の当該保護効果を阻害することができるか否か試験するために、ＭＭ１Ｓ細胞を、ＩＬ−６（１ｎＭ）又はＩＧＦ−Ｉ（１０ｎＭ）とともにインキュベートするか、又はＢＭ間質細胞（ＢＭＳＣ）と４８時間にわたって共培養し、次いで、ＰＭ００１０４の濃度を増加させて処理した。ＢＭＳＣを９６ウェル培養皿に播種し（５０，０００細胞／ウェル）、４８時間の間でコンフルエントに達した。次いで、３０，０００骨髄腫細胞を、１０％血清を含有するＲＰＭＩ １６４０中に播種した。次いで、ＭＭの増殖をブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）取り込みによって評価した（Maiso P et al. Br. J. Haematol. 2008, 141, 470-482）。ＢｒｄＵを最後の８時間の間に添加して、ＢｒｄＵの取り込みを市販のキット（Ｒｏｃｈｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を使用し、製造業者の説明書にしたがって測定した。
【００５５】
これらのモデルの全てによって与えられたＭＭ細胞の増殖効果にもかかわらず、ＰＭ００１０４は、可溶性サイトカインであるＩＬ−６及びＩＧＦ−Ｉの効果を完全に無効化し（図３Ａ及び３Ｂ）、ＢＭＳＣ細胞に対する形質細胞の接着による保護効果を大きく阻害した（図３Ｃ）。対照的に、ＢＭＳＣは、ＰＭ００１０４の細胞毒性効果に対して非常に耐性であった（図３Ｄ）。
【００５６】
（実施例３）
ＰＭ００１０４のインビボ抗ＭＭ効果
ＰＭ００１０４のインビボ効果を、ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウス中に異種移植されたヒト形質細胞腫のモデルにおいて試験した。これらの実験は、非常に感受性である細胞株のＭＭ１Ｓ及びそれよりも感受性が低いＯＰＭ−１を使用して実施した。３０匹のマウスの２つの集団に各細胞株を皮下注射し、ビヒクルのみ、０．８ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４、又は１ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４を静脈内（ｉｖ）に一週間に一度、三回投与で与える３つの群にマウスを無作為にわけた。
【００５７】
ＣＢ１７−ＳＣＩＤマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ，ＵＳＡ）に、１００μＬのＲＰＭＩ−１６４０培地及び１００μＬのＭａｔｒｉｇｅｌ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）中の３×１０６のＭＭ１Ｓ又はＯＰＭ１細胞を右脇腹に皮下接種した。腫瘍が触診可能になった際に、ＰＭ００１０４又はビヒクルのみをマウスに与えた。ＰＭ００１０４を使用する処置を、０．８ｍｇ／ｋｇ及び１ｍｇ／ｋｇの用量で一週間に一度、三回投与で静脈内に与えた。対照群には、ビヒクル単独（注射用滅菌水及び生理食塩水）を与えた。
【００５８】
腫瘍直径のキャリパー測定を毎日実施し、以下の式：Ｖ＝４／３π×（ａ／２）×（ｂ／２）２（ａ及びｂは最長径及び最短径の各々を示す）を使用して楕円の容量として腫瘍容量を推定した。腫瘍が２ｃｍに達した際に動物を安楽死させた。処理群及び対照群の間の腫瘍容量における差異は、1-way analysis of variance及びBonferroni post hoc試験を使用して評価した。処置を開始した日から生存を推定し、統計学的な差異をLog Rank試験を用いてKaplan-Meier曲線によって評価した。SPSS-15.0ソフトウェア（ＳＰＳＳ Ｉｎｃ．Ｃｈｉｃａｇｏ，ＩＬ，ＵＳＡ）を用いて統計分析を実施し、統計学的な優位性をｐ＜０．０５と規定した。
【００５９】
図４Ａ及び４Ｃに示されているように、双方の容量のＰＭ００１０４は、統計的に有意な差異をもって形質細胞腫の増殖を低減させた。ＭＭ１Ｓ形質細胞腫については、処理の１５日後に、ビヒクル、０．８ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４、１ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４を与えた集団の各々について、腫瘍の容量が１２０７±６４５、４２０±２４２、及び１７６±７８ｍｍ３（平均±ＳＤ）であった（全体的な比較及び処理群ｖｓ対照の比較の各々についてｐ＜０．００１）。より低い感受性かつより速く増殖するＯＰＭ−１細胞株でも同様であり、同一のマウスの群について４０９１±９０３、１８７９±７３１、及び１０４２±５９６ｍｍ３（平均±ＳＤ）の処理の１４日後の腫瘍容量を有していた（全体的な比較についてｐ＜０，００１）。腫瘍増殖における当該遅延は、対照と比較した際の処理したマウスの生存が増大したことと相関している（図４Ｂ及び４Ｄ）。上記の意味で、ＭＭ１Ｓにおける中央値±ＳＥの生存は、ビヒクル対照、０．８ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４、１ｍｇ／ｋｇのＰＭ００１０４の各々について、２９±３．９、５２±４．８、及び５９±５．５日であり（図４Ｂ）、ＯＰＭ−１形質細胞腫における同一の群の生存は、１４±０、２１±０．８、及び２３±１．１日であった（図４Ｄ）。Ｌｏｇ Ｒａｎｋ試験を使用して差異を評価し、双方の異種移植片における双方の用量でビヒクル対照と比較した際の統計的に有意な差異をもたらした。
【００６０】
興味深いことに、ＰＭ００１０４処置に関連する顕著な全身毒性は存在しなかった。僅かな体重減少（対照と比較して体重の約１０％）が最も高用量のＰＭ００１０４で認められた。
【００６１】
（実施例４）
ＰＭ００１０４は従来の抗ＭＭ剤の効果を増強する
ＭＭを含む大半の癌の治療は異なる作用メカニズムの薬剤の併用に基づくため、本発明者は、ＭＭの治療に通常使用されている薬剤と組み合わせてＰＭ００１０４の効果を試験した。
【００６２】
次善量のＰＭ００１０４とデキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、及びレナリドマイドなどの他の抗骨髄腫剤との２種及び３種の組み合わせを使用して、ＭＭ１Ｓ細胞を、実施例１に記載したように７２時間にわたって処理した。実施例１に記載のようにＭＴＴアッセイを使用して細胞生存率を分析した。前記組み合わせの有効性を、Ｃｈｏｕ Ｔａｌａｌａｙ法に基づくＣａｌｃｕｓｙｎソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ，Ｆｅｒｇｕｓｏｎ，ＭＯ）を使用して定量化し、以下の解釈：ＣＩ＞１：アンタゴナイズ効果、ＣＩ＝１：相加効果、及びＣＩ＜１：相乗効果で併用指数（ＣＩ）を算出した。
【００６３】
ＰＭ００１０４は、デキサメタゾン、メルファラン、及びドキソルビシンなどの従来の抗骨髄腫剤の効果をＭＭ１Ｓ細胞において明らかに増強した（図５Ａ）。ＰＭ００１０４を、ＭＭ患者の治療道具に最近含められた２種の新規薬剤であるボルテゾミブ及びレナリドマイドとの組み合わせでも試験し、レナリドマイドとの併用で特に明らかな相加／相乗的な結果が見込まれた（図５Ａ）。Ｃｈｏｕ ａｎｄ Ｔａｌａｌａｙ法を使用したこれらのデータの分析によって、ＰＭ００１０４は、デキサメタゾン（ＣＩ＝０．７８）、メルファラン（ＣＩ＝０．４８）、ドキソルビシン（ＣＩ＝０．６４）、及びレナリドマイド（ＣＩ＝０．５５）と相乗的であることが示された。
【００６４】
２種の組み合わせによるこれらの有望な結果は、ＭＭ１Ｓ細胞株で最も相乗的な化合物の３種の組み合わせを調査することを促進した。図５Ｂで認められるように、ＰＭ００１０４＋デキサメタゾン＋以下：メルファラン、ドキソルビシン、又はレナリドマイドのいずれかの３種の組み合わせは、各々の２種の組み合わせの効果を顕著に改善した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の治療上有効量を罹患した個体に投与する工程を含む、多発性骨髄腫に罹患した任意の哺乳動物、特にヒトの治療方法。
【請求項２】
前記患者がヒト患者である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が再発しているか又は過去の化学療法に反応しない、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩を、１つ又は複数の他の薬剤と併用して、併用療法を提供する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記１つ又は複数の他の薬剤が抗骨髄腫剤である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗骨髄腫剤が、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドマイド、プレドニソン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びサリドマイドから選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記抗骨髄腫剤が、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、及びレナリドマイドから選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の方法のための医薬の製造における、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の使用。
【請求項９】
ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法で使用するための医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１から７のいずれか一項に記載の方法で使用するための、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
請求項１から７のいずれか一項に記載の方法でＰＭ００１０４を投与するための印刷された説明書、並びにＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を含む、ＰＭ００１０４を投与するための医療キット。
【請求項１】
ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の治療上有効量を罹患した個体に投与する工程を含む、多発性骨髄腫に罹患した任意の哺乳動物、特にヒトの治療方法。
【請求項２】
前記患者がヒト患者である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者が再発しているか又は過去の化学療法に反応しない、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩を、１つ又は複数の他の薬剤と併用して、併用療法を提供する、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記１つ又は複数の他の薬剤が抗骨髄腫剤である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗骨髄腫剤が、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドマイド、プレドニソン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びサリドマイドから選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記抗骨髄腫剤が、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、及びレナリドマイドから選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載の方法のための医薬の製造における、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩の使用。
【請求項９】
ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法で使用するための医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１から７のいずれか一項に記載の方法で使用するための、ＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩。
【請求項１１】
請求項１から７のいずれか一項に記載の方法でＰＭ００１０４を投与するための印刷された説明書、並びにＰＭ００１０４又はその製薬学的に許容される塩及び製薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む医薬組成物を含む、ＰＭ００１０４を投与するための医療キット。
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図２】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【公表番号】特表２０１１−５２０８４６（Ｐ２０１１−５２０８４６Ａ）
【公表日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０８９４３（Ｐ２０１１−５０８９４３）
【出願日】平成２１年５月１８日（２００９．５．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５５９７８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３８５０９
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（５０１４４０８３５）ファルマ・マール・ソシエダード・アノニマ (30)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月１８日（２００９．５．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５５９７８
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３８５０９
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（５０１４４０８３５）ファルマ・マール・ソシエダード・アノニマ (30)
【Ｆターム（参考）】
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