少なくとも１種のアウロンを適用することによる美容的脱色素沈着ケア方法
【課題】 脱色作用及び／又はメラニン生成抑制作用を持つ調製物の提供
【解決手段】 少なくとも１種のアウロンあるいは、独立したフェニル環がピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、フラン又はチオフェンタイプの複素環により置換されていてもよいアウロンの天然又は合成の誘導体又はアウロンの類似体が、メラニン生成抑制作用又は脱色素沈着作用又は抗チロシナーゼ活性をもつ化粧品組成物又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物のいずれかの製造のための美容的物質として又は有効物質として開示される。
【解決手段】 少なくとも１種のアウロンあるいは、独立したフェニル環がピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、フラン又はチオフェンタイプの複素環により置換されていてもよいアウロンの天然又は合成の誘導体又はアウロンの類似体が、メラニン生成抑制作用又は脱色素沈着作用又は抗チロシナーゼ活性をもつ化粧品組成物又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物のいずれかの製造のための美容的物質として又は有効物質として開示される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は本質的に、脱色素沈着作用をもつ又はメラニン生成抑制効果をもつ化粧品中への又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物の製造のための少なくとも１種のアウロンの使用に関する。
【０００２】
本発明はまた、脱色素沈着作用又はメラニン生成抑制効果をもち、そしてそのために得られる化粧品組成物又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物を包含する。
【０００３】
本発明はまた、脱色素沈着に関して活性な物質としてアウロンを使用する脱色素沈着の美容的ケア方法又は治療的処置法を包含する。
【０００４】
太陽光線に対抗するために、皮膚はこの機能に特に適合された異なる細胞：メラノサイトを有する。複雑な過程のメラニン形成期間中に、これらの細胞はその効果が皮膚構造物を保護し、日焼けを被るのに要する時間を延長することである暗色の色素、メラニンを形成する。しかしすべてのメラニンが防御的ではなく、とりわけ極めて光毒性のフェオメラニンと呼ばれるメラニンの１形態が存在する。すべてのメラニンのように特定の形態のフリーラジカルと反応することができるこの分子は更に毒性ですらあり、そしてケラチン形成細胞の遺伝物質に不可逆的損傷を誘発することができるフリーラジカルの形成を誘発する。更に、メラニン形成単位の機能損傷に関連する特定の障害が時々特に見苦しい色素沈着亢進を誘発することができる。従って、メラニンの合成阻害剤の使用は強度に色素沈着した皮膚の淡色化又は例えば特定の見苦しい外見における色素沈着亢進の抑制の症例におけるような真の脱色素沈着が追求される場合の適用のためのみならずまた、皮膚に明色を、表面組織に光沢を与えために色彩を明るくすることを追求する場合の適用のための化粧品において特に興味深い。メラニン合成のこの抑制はまた、真の病理を処置するための治療的処置の範疇内においても特に興味深い可能性がある。
【背景技術】
【０００５】
アウロンはフラボノイド族に属し、そしてフラボンの構造異性体である天然の分子である（非特許文献１参照）。
【０００６】
アウロンは植物界、特にそれらが色合いに寄与する果実及び花中に広範に分布されている。以下の表は植物中に認められる天然アウロンの完全ではないリストを含む：
【０００７】
【表１】
【０００８】
フラボン、カルコン、フラボノール及びイソフラボンはそれらの治療的機能につき広範に研究されているが、アウロンの生物学的活性は研究を開始されたばかりである。アウロンは事実フラボンより自然界に少ないために、これらの天然の分子はこれまで余り興味を
もたれなかった。更に、植物の色素沈着のそれらの役割のために、アウロンは種々の感染症に対する防御剤としての植物により使用されるフィトアレキシンと説明されてきた。生物学的作用に関してはアウロンはそれらの種々の作用形態：
・アウロンは抗ガン剤の仲介を可能にする膜透過運搬体である糖タンパク質−Ｐに結合する能力をもち、
・アウロンはサイクリンキナーゼを阻害し、
・アウロンはアデノシン受容体と相互に作用し、そして
・アウロンはテロメラーゼを阻害する、
ために癌の分野に記載されている。
【０００９】
最後にアウロンはＤＮＡに関係するラジカルの損傷を最小にすることによりそれらの抗酸化特性（特にグリコシル化アウロン）のために使用される。
【００１０】
アウロンはまた、寄生虫及び微生物感染症を処置するために知られている。それらは抗ホルモン作用を有し、メイラード反応を阻害する能力のために糖尿病を罹患している特定の患者において使用されてきた。
【００１１】
アウロンは他のフラボノイドのように、カルコンであるピボット前駆体に起源をもつ。この場合、カルコンからのアウロンの生産は、これらのカルコン分子が２’位にヒドロキシルをもつことを条件にした酸化による環化を伴う（非特許文献２参照）。
【非特許文献１】Ｂｏｕｍｅｎｄｊｅｌ Ａ．，Ｃｕｒｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，１０，２６２１−２６３０
【非特許文献２】Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｊ．ｏｆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００２，９４（６），４８７−４９１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の主要な目的は良好な脱色素沈着作用及び／又は良好なメラニン生成抑制作用をもつ化粧品組成物及び／又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物の新規の調製物を提供することである。
【００１３】
本発明のもう１つの主要な目的は良好な抗チロシナーゼ活性をもつ化粧品組成物及び／又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物の新規の調製物を提供することである。
【００１４】
本発明のもう１つの主要な目的は美容的脱色素沈着手入れの方法又は脱色素沈着の治療的処置法を提供することである。
【００１５】
最後に本発明の主要な目的は工業的及び美容的、製薬学的、特に皮膚科学的規模において使用することができる簡単な、安全なそして信頼性のある方法でこれらの目的を達成することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
アウロンは良好な脱色素沈着作用及び／又は良好なメラニン生成抑制活性をもち、特にそれらが、メラニンの合成に関与する酵素であるヒトのチロシナーゼの強力な阻害剤であることが本発明により示されるので、本発明はアウロン及び誘導体の新規の生物学的活性の開示により以上に示された目的達成を可能にさせる。
【００１７】
特に予期されないこの活性はアウロンの使用に関連した文献及び特許には記載されていない。
【００１８】
第１のアスペクトに従うと、本発明はメラニン生成抑制作用又は脱色素沈着作用、あるいは抗チロシナーゼ活性をもつ、化粧品組成物又は製薬学的組成物、特には皮膚科学的組成物のいずれかの製造のための美容的物質又は有効物質としての、独立したフェニル環であってピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、フラン又はチオフェンタイプの複素環により置換されてもよい独立したフェニル環を含んでなる少なくとも１種のアウロン、アウロン誘導体又はアウロン類似体の使用に関する。
【００１９】
本発明の特別の態様に従うと、この使用はアウロンが以下に記載された一般化学式：
【００２０】
【化１】
【００２１】
［式中、
Ｘは酸素原子（Ｏ）、窒素原子（Ｎ）又は硫黄原子（Ｓ）を表わすことができ、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は相互に独立にＨ、ハロゲン、ヒドロキシル（ＯＨ）、エステル、塩形成型又は非塩形成型Ｃ１〜１２酸、アミド、スルホンアミド、ニトロ、塩基性又は塩形成型Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩアミン、シアノ、チオール、糖（Ｏ−ヘテロシド又はＣ−ヘテロシド）、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルケニル鎖（例えばプレニル）、Ｃ１〜１２アルケニルオキシ、チオアルキル鎖、アルキル又は芳香族タイプの環又は複素環、塩形成型又は非塩形成型スルフェート、塩形成型又は非塩形成型スルホネート、塩形成型又は非塩形成型ホスフェート、エステル化又は非エステル化ホスフェート、エステル化又は非エステル化ホスホネート、塩形成型又は非塩形成型ホスホネート、式：
【００２２】
【化２】
【００２３】
（ここでＲ１及びＲ２は相互に独立にヒドロキシル、メチル、エチル、フェニル、ｐ−メチルフェニル、ｐ−メトキシフェニル又はｔｅｒｔ−ブチルを表わす）
のシラノール基を表わすことができる］
を有することを特徴とする。
【００２４】
もう１つの態様に従うと、本発明はまた、一般式：
【００２５】
【化３】
【００２６】
［式中、Ｒ１〜Ｒ９は相互に独立に、前記に引用された基を表わすことができる。Ｒ１０は１〜１２個の炭素原子を有する線状又は分枝アルキル鎖又はアシル基であることができる］
のアウロノール、アザアウロン又はチオアウロンタイプのアウロンの誘導体の使用に関する。
【００２７】
もう１つの態様に従うと、本発明はまた、アウロンの二量体の使用に関する。例えば：ジスルフレチン、ビアウレウシジンで、それらの一般式は以下に示される。
【００２８】
【化４】
【００２９】
更にもう１つの態様に従うと、本発明はまた、フェニル環Ｂをピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、フラン又はチオフェンタイプの複素環により置換することができるアウロンの類似体の使用に関する。
【００３０】
【化５】
【００３１】
態様の種々の例に従うと、本発明はまた、２’，４’，６’−トリヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝ＯＨ）、２’，４’−ジヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝Ｈ）、４，６−ジヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝ＯＨ）、６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝Ｈ）、（Ｚ）−２−ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−エチル）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（２’−エチル）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシ）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−ベンジリデン−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−エチルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−メチルチオベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−シアノベンジリデン）−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−スルホネートベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（２’，４’−ジスルホネートベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−メチルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−プロピルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−イソプロピルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ブチルベンジリデン）−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−ベンジリデン−（４，６−ジヒドロキシ）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−エトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、４，６−ジ−Ｏ−ＭＥＭベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、２，６−ジアセトキシ−α−ブロモアセトフェノン、４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン又は（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）−４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンから選択されるアウロン、その誘導体又はその類似体の使用に関する。
【００３２】
本発明の態様の更に他の有利な例に従うと、アウロン、その誘導体又はその類似体は（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−エトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン及び（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（３−メトキシ−４−ヒドロキシ）ベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンから選択される。
【００３３】
本発明の更にもう１つの特別の態様に従うと、本発明に従うアウロン、それらの誘導体及び類似体を特にヒトのチロシナーゼを阻害する作用のために皮膚、毛髪又は外皮上に局所的に使用される。
【００３４】
本発明の更にもう１つの特別の態様に従うと、淡色、褐色及び暗色のフォトタイプ（ｐｈｏｔｏｔｙｐｅ）の供与者からの正常なヒトのメラニン細胞から起因するヒトのチロシナーゼを阻害する作用が本発明に従うアウロン、それらの誘導体及び類似体により実現される。
【００３５】
有利な態様の変法に従うと、アウロン、その誘導体又はその類似体は天然源ものであるか又は化学合成により得られるか又はこのアウロン、その誘導体又は類似体を天然に含有する植物抽出物中に存在する。
【００３６】
第２のアスペクトに従うと、本発明はまた、脱色素沈着作用又はメラニン生成抑制作用を有するこれらの物質の１つとして、それらが場合により美容的に、製薬学的に許容できる、特に皮膚科学的に許容できる賦形剤、ビヒクル又は支持体と混合されてもよい少なくとも１種のアウロン又は１種のその誘導体又は前記に定義のとおりの類似体を含んでなることを特徴とする脱色素沈着作用をもつ又はメラニン生成抑制効果をもつ化粧品組成物又は製薬学的組成物、特には皮膚科学的組成物を対象とする。
【００３７】
第３のアスペクトに従うと、本発明はまた、新規の生成物として以下の化学式：
【００３８】
【化６】
【００３９】
［式中Ｒ１〜Ｒ９基は前記に定義されたとおりであり、ただし、Ｒ５〜Ｒ９のうちの少なくとも１個の基は線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、Ｃ１〜１２チオアルキル基、スルホニル基及びシアノ基から選択される］
のアウロン又はアウロンの誘導体あるいは以下の化学式：
【００４０】
【化７】
【００４１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４基は前記に定義のとおりであり、そしてＺは未置換の又は前記に定義されたとおりのＲ５、Ｒ６、Ｒ７基及び場合によりＲ８基で置換されたピロール、ピリジン、フラン及びチオフェンタイプの複素環を含んでなる基を表わし、好ましくはＲ５〜Ｒ８の少なくとも１個の基は線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、Ｃ１〜１２チオアルキル基、スルホニル基及びシアノ基から選択される］のアウロンの類似体を対象とする。
【００４２】
第４のアスペクトに従うと、本発明は更に、場合により美容的に許容できる賦形剤、ビヒクル又は支持体と混合されてもよい、少なくとも１種のアウロン又は１種のその誘導体又は前記に定義のとおりの類似体の前記の脱色素沈着を実施するために有効な量を脱色素沈着に関与する皮膚、毛髪又は外皮の少なくとも１領域上に局所適用することを含んでなることを特徴とする美容的脱色素沈着の手入れ法を対象とする。
【００４３】
第５のアスペクトに従うと、本発明は更に、場合により、製薬学的に、特に皮膚科学的に許容できる賦形剤、ビヒクル又は支持体と混合されてもよい少なくとも１種のアウロン又は１種のその誘導体又は前記に定義のとおりの類似体の前記の領域の脱色素沈着を実施するために有効な量を色素沈着の病理が関与される皮膚、毛髪又は外皮の少なくとも１領域上に局所的に適用することを含んでなることを特徴とする脱色素沈着の治療的処置法を対象とする。
【００４４】
「色素沈着の病理」の用語は皮膚、毛髪又は外皮の前記領域の色素沈着が医学的に処置されるべき病理を構成するようなものであることを意味すると理解される。それは当業者に周知のような色素沈着亢進、角化症、等であることができる。
【００４５】
本発明の範疇内で、これらのアウロン、それらの誘導体及び類似体はマッシュルームからのチロシナーゼ及びヒトのメラニン細胞からのチロシナーゼを阻害しそして従って良好な脱色素沈着作用及び／又は良好なメラニン生成抑制作用及び／又は良好な抗チロシナーゼ活性を実施するための貴重な化粧品又は製薬学的物質、特に貴重な皮膚科学的物質を構成することができたことが全く予期されなかった方法で示された。
【００４６】
本発明のその他の目的、特徴物及び利点はアウロン、それらの誘導体及びそれらの類似体の合成の幾つかの実施例、並びにそれらの生物学的評価を参照し、並びに棒グラフの形態で結果を表わす付記の図面を参照された以下の説明に照らして明白になるであろう。
［実施例］
【００４７】
以下の合成の実施例において、別記されない限りすべての百分率は重量により与えられ、圧力は大気圧であり、温度は摂氏における。
【００４８】
アウロンの合成及び生物学的評価
【実施例１】
【００４９】
２’，４’，６’−トリヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝ＯＨ）及び２’，４’−ジヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝Ｈ）の合成：
【００５０】
【化８】
【００５１】
フロログルシノール（５ｇ、すなわち３９．６ミリモル）又はレゾルシノール（５ｇ、すなわち４５．４ミリモル）の溶液（１５０ｍＬのエーテル中）にクロロアセトニトリル（１当量）及び塩形成型亜鉛（０．１当量）を連続して添加する。全体を０℃に冷却し、気体の塩酸と１時間反応させる。形成される沈殿物を濾取し、エーテルで洗浄する。
【００５２】
沈殿物を１Ｎの塩酸に溶解し、得られる溶液を還流下で１時間維持する。溶媒を外気温にもたらし、形成される橙色の沈殿物を回収し、水で洗浄する。
【実施例２】
【００５３】
４，６−ジヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝ＯＨ）及び６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝Ｈ）の合成：
【００５４】
【化９】
【００５５】
実施例１で得られた化合物（Ｒ１＝ＯＨ又はＨ）をメタノール（１００ｍＬ）中に懸濁させる。次にナトリウムメトキシド（２．５当量）を添加する。得られる溶液を冷所で約１０分間撹拌し、次に還流下で１時間半維持する。外気温に復帰後、溶媒をＨＣｌ溶液で酸性化し、蒸発させる。得られる残渣を酢酸エチル中に取り込む。有機相を水、飽和塩形成型ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発乾燥すると、橙色の粉末として期待生成物を与える。
【実施例３】
【００５６】
（Ｚ）−２−ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００５７】
【化１０】
【００５８】
実施例２において得られそしてＲ１＝Ｈである化合物（１．０ミリモル）（メタノール中）に水酸化カリウム５０％溶液（１．５ｍＬ）及びベンズアルデヒド（１．５当量）を継続して添加する。得られる溶液を還流下で１時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを蒸発除去し、得られる残渣を水中に取り込む。得られる溶液を酸性化する。沈殿物が現れ、それを濾取し、水で洗浄する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー後、生成物を非晶質粉末として得る。
【００５９】
前記の方法をベンズアルデヒドを以下で置き換えることにより適用することができ：
ｐ−エチルベンズアルデヒドにより、この場合は、４’にエチル基をもつ実施例３の分子が得られ、そして実施例３ａになり、
２−エチルベンズアルデヒドにより、この場合は、２’にエチル基をもつ実施例３の分子が得られ、そして実施例３ｂになり、
４−ヒドロキシベンズアルデヒドにより、この場合は、４’にヒドロキシル基をもつ実施例３の分子が得られ、そして実施例３ｃになる。
【実施例４】
【００６０】
４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００６１】
【化１１】
【００６２】
ＤＭＦ中に溶解された実施例２で得られ、Ｒ１＝ＯＨの化合物に炭酸カリウム（３当量）及びヨウ化メチル（３当量）を添加する。得られる混合物を１時間加熱（１５０℃）する。外気温に復帰後、溶媒を水と混合し、酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによる精製後、生成物を黄色の粉末として単離する。
【実施例５】
【００６３】
（Ｚ）−２−ベンジリデン−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００６４】
【化１２】
【００６５】
メタノール中に溶解された本発明の実施例４で得られた化合物の溶液（０．７７ミリモル）に、水酸化カリウムの５０％溶液（１．５ｍＬ）及びベンズアルデヒド（１．５当量）を継続して添加する。得られる溶液を還流下で１時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを蒸発除去し、得られる残渣を水で取り込む。得られる溶液を酸性化し、次に酢酸エチルで３回抽出する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下蒸発させる。
【００６６】
シリカゲルカラムクロマトグラフィー後淡黄色の粉末として生成物を得る。
【００６７】
前記の方法をベンズアルデヒドを以下の物質と置き換えることにより適用することができる：
ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒドにより、この場合は４’にヒドロキシル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ａ）、
ｐ−エチルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にエチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｂ）、
ｐ−メチルチオベンズアルデヒドにより、この場合は４’にチオメチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｃ）、
ｐ−シアノベンズアルデヒドにより、この場合は４’にシアノ基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｄ）、
ｐ−スルホネートベンズアルデヒドにより、この場合は４’にスルホネート基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｅ）、
２，４−ジスルホネートベンズアルデヒドにより、この場合は２’及び４’に２個のスルホネート基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｆ）、
ｐ−トルアルデヒドにより、この場合は４’にメチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｇ）、
ｐ−プロピルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にプロピル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｈ）、
ｐ−イソプロピルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にイソプロピル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｉ）、
ｐ−ブチルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にブチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｊ）、
ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にｔｅｒｔ−ブチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｋ）、
２’−エチルベンズアルデヒドにより、この場合は２’にエチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｌ）、
２−フルアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換えるフラン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｍ）、
５−エチル−２−フルアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える５−エチルフラン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｎ）、
４，５−ジメチル−２−フルアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える４，５−ジメチルフラン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｏ）、
２−チオフェンカルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換えるチオフェン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｐ）、
５−メチル−２−チオフェンカルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える５−メチルチオフェン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｑ）、
５−エチル−２−チオフェンカルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える５−エチルチオフェン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｒ）、
ピロール−２−カルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換えるピロール環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｓ）、
３，５−ジメチルピロール−２−カルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える３，５−ジメチルピロール環をもつ実施例５の分子が得られる（実施例５ｔ）。
【実施例６】
【００６８】
（Ｚ）−２−ベンジリデン−４−ヒドロキシ−６−メトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００６９】
【化１３】
【００７０】
実施例５において得られた化合物（ジクロロメタン中）に三臭化ホウ素の１モル溶液（４当量）（ジクロロメタン中）を添加する。得られた混合物を外気温で２０時間撹拌する。次に混合物を氷水中に注入し、全体を酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後黄色の粉末として生成物を得る。
【００７１】
前記の方法を実施例５ｃ（６ｃになる）及び５ｄ（６ｄになる）で得られた分子に適用することができる。
【実施例７】
【００７２】
（Ｚ）−２−ベンジリデン−（４，６−ジヒドロキシ）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００７３】
【化１４】
【００７４】
本発明の実施例５で得られた化合物（ジクロロメタン中に溶解）に三臭化ホウ素（ＢＢｒ３、過剰）を添加し、次に混合物を外気温で２０時間撹拌する。次に氷水を溶媒中に滴下し、このように形成される懸濁液を酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させると非晶質沈殿物として期待生成物を与える。
【００７５】
前記の方法はそれぞれ実施例７ｂ、７ｅ、７ｇ、７ｈ、７ｉ、７ｊ、７ｋ、７ｌ、７ｍ、７ｎ、７ｏ、７ｐ、７ｑ、７ｒ、７ｓ及び７ｔになる実施例５ｂ、５ｅ、５ｇ、５ｈ、５ｉ、５ｊ、５ｋ、５ｌ、５ｍ、５ｎ、５ｏ、５ｐ、５ｑ、５ｒ、５ｓ及び５ｔで得られた分子に適用することができる。
【実施例８】
【００７６】
４，６−ジ−Ｏ−ＭＥＭベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００７７】
【化１５】
【００７８】
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチルアミン（２当量）（無水ＤＭＦ中）を添加されたＲ１＝ＯＨの実施例２の化合物（３６ミリモル）を氷浴により冷却する。２−メトキシエトキシメチルクロリド（２当量）を滴下し、得られる溶液を外気温で３０分間撹拌する。次に溶媒を水１００ｍＬ中に注入し、酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後、白色の油として生成物を得る。
【実施例９】
【００７９】
（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００８０】
【化１６】
【００８１】
実施例８で得られた化合物の溶液（１．０２ミリモル）（メタノール中）に水酸化カリウムの５０％溶液（３．５ｍＬ）及びｐ−アニスアルデヒド（１．５当量）を連続して添加する。得られた溶液を還流下に１時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを蒸発除去し、得られた残渣を水中に取る。得られた溶液を酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。得られた生成物をメタノール中に取る。得られた溶液に１Ｍの塩酸溶液（エーテル中）を添加する。混合物を約６０℃で２時間撹拌する。外気温に復帰後、溶媒を水と混合し、ジクロロメタンで抽出する。有機相を水、飽和塩形成型ナトリウム溶液で連続して洗浄し、乾燥し、そして蒸発乾燥させる。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後黄色の粉末として生成物を得る。
【００８２】
前記の方法をｐ−アニスアルデヒドを以下で置き換えることにより適用することができる：
ｐ−エトキシベンズアルデヒド、この場合４’にエトキシ基が得られ（実施例９ａ）、
ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド、この場合、４’（９ｂ）又は２’（９ｃ）にヒドロキシル基が得られ、
ヴァニリン、この場合３’にメトキシ基及び４’にヒドロキシル基が得られる（９ｄ）。
【実施例１０】
【００８３】
２，６−ジアセトキシ−α−ブロモアセトフェノンの合成：
【００８４】
【化１７】
【００８５】
２，６−ジヒドロキシアセトフェノン（３．０８ミリモル）を無水酢酸中に分散し、全体を還流下に４時間維持する。溶媒を氷水中に注入し、酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させると油を与え、それを無水ＴＨＦ中に取る。得られた溶液にトリメチルフェニルアンモニウムブロミド（１．２当量）を緩徐に添加し、得られた混合物を外気温で６時間撹拌する。次に溶媒に水を添加し、得られた溶液を外気温で数分間撹拌し、次に酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。粗生成物を橙色の油として得て、精製せずに次の段階に使用する。
【実施例１１】
【００８６】
４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００８７】
【化１８】
【００８８】
実施例１０の化合物（３８０ｍｇ）（メタノール中）に水酸化カリウム５０％水溶液（０．５ｍＬ）を添加する。全体を還流下で約３時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを真空下蒸発除去し、得られた残渣を水中に取り、ＨＣｌ溶液の助けにより酸性化する。次に得られた懸濁液をジクロロメタンで抽出する。次に有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。
【００８９】
シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後オフホワイトの沈殿物として生成物を得る。
【実施例１２】
【００９０】
（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）−４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００９１】
【化１９】
【００９２】
実施例１１で得られた化合物（０，６６ミリモル）（メタノール中）に水酸化カリウム５０％溶液及び４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．５当量）を連続して添加する。得られた溶液を還流下に３時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを蒸発除去し、得られた残渣を水中に取る。得られた溶液を酸性化し、黄色の沈殿物が現れ、それを濾取し、最少の水で洗浄し、真空乾燥する。分取クロマトグラフィーにより精製後橙色の沈殿物として生成物を得る。
【００９３】
アウロンの生物学的評価
【実施例１３】
【００９４】
アウロンによる単離チロシナーゼの阻害のインビトロ試験：
チロシナーゼはＬ−ＤｏｐａからのＬ−ドパキノン、そして次にドパクロムの形成を触媒する。ドパクロムは４９０ｎｍにおける可視的分光測定法により定量可能な着色化合物である。酵素活性を修飾することができる活性物質の使用は４９０ｎｍにおける光学濃度の変化により明らかになる。
【００９５】
ドパクロムの形成速度の率は、試験される種々の分子で得られる活性化又は阻害作用を正確に測定させる。
【００９６】
試験される試料を撹拌下でマッシュルームからのチロシナーゼ（Ｓｉｇｍａ）の存在下で５分間インキュベートする。Ｌ−ＤＯＰＡ（Ｓｉｇｍａ）（チロシナーゼの基質）を試験される分子の存在下又は不在下で暗所で１０分間インキュベートする。阻害率の計算を分子を伴わない負の対照のＯＤに対して試験体のＯＤを比較することにより実施する。使用される正の対照は０．０１％におけるコージ酸（Ｓｉｇｍａ）（＝４５％±５％阻害）である。
【００９７】
このインビトロ試験に関する限り、アウロン誘導体は１０−４Ｍ及び１０−５Ｍの最終濃度で試験された。結果は表１に示される。
【００９８】
【表２】
【００９９】
以上の表１から、アウロンが低濃度においてもチロシナーゼを阻害することが明白である。環Ａが好ましくはヒドロキシル化される時は活性がより大きいので、測定された活性はアウロンの構造に左右される。
【実施例１４】
【０１００】
アウロンによるヒトのチロシナーゼの阻害のインビトロ試験：
健康な供与者から由来するメラノサイト抽出物から得られたヒトのチロシナーゼはＬ−ドパからのＬ−ドパキノンの形成を触媒する。Ｌ−ドパキノンはクロモゲン：３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン（ＭＢＴＨ）の力で４９０ｎｍにおける可視分光測定により定量することができる。
【０１０１】
この試薬はチロシナーゼにより合成されるｏ−キノンを捕捉して、安定で可溶性で、そして高いモル光学濃度を有するＭＢＴＨ−ｏ−キノン化合物を与える。
【０１０２】
従って酵素活性を修飾することができる活性物質の使用は負の対照で得られる値に比較した４９０ｎｍにおけるＯＤの変化により表わされる（１００％の活性）。
【０１０３】
メラノサイト抽出物を、溶解が熱ショックにより実施される正常なヒトのメラノサイトの細胞膜の溶解後に得る。上澄み液を回収し、次にＭＢＴＨ（Ｓｉｇｍａ）及びＬ−ドパ（Ｓｉｇｍａ）とともにインキュベートする。３０分後に測定される４９０ｎｍにおけるＯＤを対照に対して得られるものに対して試験される各活性物質につき比較し、阻害率を負の対照（分子を含まない）のＯＤに対する試験物（試験される分子）のＯＤを比較することにより計算する。使用される正の対照は０．１％のコージ酸（６０％±５％の阻害）である。
【０１０４】
得られた結果は表２に要約される。
【０１０５】
【表３】
【０１０６】
以上の表２から、アウロンの阻害作用は存在するが、単離されたヒトのチロシナーゼのこの特定のモデルについては軽度であると結論される。
【実施例１５】
【０１０７】
正常なヒトのメラノサイト上で試験される活性物質の適用後の単層において研究されたヒトのチロシナーゼの阻害作用の試験：
正常なヒトのメラノサイト（腹部形成術から採取）をウエル当り８０，０００個の細胞の率で２４−ウエルのプレートに播種する。それらを密集体まで培養し、培地中に活性物質を２４時間適用する。２４時間後、培地を除去し、メラノサイトを機械的活動（ａｃｔｉｏｎ）により採取する。熱ショックにより抽出し、次に上澄み液を回収し、ＭＢＴＨ（Ｓｉｇｍａ）及びＬ−ドパ（Ｓｉｇｍａ）とともにインキュベートする。３０分後に４９０ｎｍにおけるＯＤを測定し、チロシナーゼの阻害作用を、負の対照（未処理対照）の４９０ｎｍにおけるＯＤ／タンパク質の濃度の比率に対する、試験体のタンパク質レベル（各培養ウエル中で測定）に対する４９０ｎｍにおけるＯＤを比較することにより計算する。従って抗チロシナーゼ活性の率は未処理対照に対して計算される。
【０１０８】
実験の負の対照はメラノサイトに０．１％で適用されるコージ酸であり（２０％±５％の測定阻害に対して）、アウロンの誘導体は１０−４Ｍ及び１０−５Ｍの濃度で研究された。得られた結果は以下のとおりである：
【０１０９】
【表４】
【０１１０】
表３及び図１から、得られた結果が評価されたモデルに対するヒトのメラニン形成の阻害に対するヒドロキシル化アウロンの真の有効性を示すことを明らかにもたらす。認められる阻害率は生存生物からのモデル上で、すなわちマッシュルームからのチロシナーゼ及び正常なヒトのメラノサイトから抽出されたチロシナーゼとの直接的接触により得られるものより極めて明白に大きい。
【０１１１】
従ってヒドロキシル化アウロンは当業者には特に予期されず、そして非常に重要な活性を有する。好ましくは、環Ａ上でヒドロキシル化され、そして４’位にヒドロキシルを有するアウロン（実施例９ｂ）が特に活性である。
【０１１２】
【表５】
【０１１３】
表４及び図２から、メチル化アウロンは正常なヒトのメラノサイト上に適用される時に、ヒドロキシル化アウロンよりは少ない程度にヒトのチロシナーゼを阻害することを示す。
【０１１４】
【表６】
【０１１５】
更に、表５及び図３から、メチル化アウロンと同様に、ヒドロキシル化及びメチル化アウロンはより軽度にチロシナーゼを阻害することを明白に示す。
【０１１６】
【表７】
【０１１７】
【表８】
【０１１８】
更に表６から、大部分のアウロン類似体はヒトのチロシナーゼを有意に阻害し、そしてその結果、メラニンの形成及びその直接的結果である皮膚の色素沈着を予防することを明白に示す。
【実施例１６】
【０１１９】
種々の供与者から由来する正常なヒトのメラノサイトに対する実施例９ｂで得られた化合物の適用後のヒトのチロシナーゼの阻害作用の試験
実施例９ｂで得られた化合物を実施例１５に記載の方法に従って、淡色のフォトタイプの種々の供与者から由来するメラノサイトにつき試験した。試験された供与者は以下：
−供与者Ｓ（実施例１５で試験された供与者）：４６歳
−供与者１：４０歳
−供与者２：４７歳
−供与者３：３３歳
である。得られた結果は以下の表７及び図４に示される。
【０１２０】
【表９】
【０１２１】
得られた結果は４人の異なる供与者に対する化合物９ｂの高い効果を示す。
【実施例１７】
【０１２２】
褐色及び黒色のフォトタイプの種々の供与者から由来する正常なヒトのメラノサイトに対する実施例９ｂで得られた化合物の適用後のヒトのチロシナーゼの阻害作用の試験
実施例９ｂで得られた化合物を褐色のフォトタイプの２人の供与者及び黒色人種のフォトタイプの１人の供与者から由来するメラノサイト培養物について試験する。適用された方法は実施例１５に記載のものである。
【０１２３】
褐色のフォトタイプの２人の供与者から得られた結果は表８及び図５に示される。
【０１２４】
【表１０】
【０１２５】
褐色のフォトタイプに対して得られた結果は抗チロシナーゼ活性が用量依存性で、高いことを示す。黒色のフォトタイプ（３１歳）で得られた結果は表９に示す。
【０１２６】
【表１１】
【０１２７】
黒色のフォトタイプから由来するチロシナーゼ阻害活性は用量依存性で、第１に淡色のフォトタイプの供与者からそして第２に黒色のフォトタイプの供与者から得られた結果を立証する。
【実施例１８】
【０１２８】
アウロンの細胞毒性の研究
活性物質の細胞毒性を生存可能細胞の細胞内酸ホスファターゼによりｐ−ニトロフェノールに転化される物質のＰＮＰＰ（Ｐ−ニトロフェニルホスフェート）による決定により２４−ウエルのプレート中の正常なヒトメラノサイトにつき研究する。
【０１２９】
４０５ｎｍにおけるｐ−ニトロフェノールの吸収は生存可能細胞数に正比例する。
【０１３０】
活性物質を２種の異なる濃度（１０−４Ｍ及び１０−５Ｍ）で試験し、培養培地に添加し、３７℃で２４時間インキュベートする。ＰＮＰＰによる測定を細胞マット上で実施し、結果を負の対照（未処理ウエル）に対する生存率として表わす。
【０１３１】
得られた結果は以下の表１０に要約される。
【０１３２】
【表１２】
【０１３３】
試験された分子は、得られた生存率が７５％生存率（許容閾値）を超えるので、１０−４及び１０−５Ｍのモル濃度で試験された時に無細胞毒である。１０−４Ｍで試験された時に３分子、すなわち実施例６、５ｂ及び６ｃで得られた分子のみが７５％未満の閾値を有する。従って、評価するために、これらの分子を１０−４Ｍ未満（例えば、１０−５Ｍ）の濃度で単層で試験することが必要であろう。
【実施例１９】
【０１３４】
アウロンの特異性の研究：
それらの脱色素沈着作用について文献に知られている分子につき研究を実施する。これらの分子は前記のアウロンに対してそれらの効果を比較するために実施例１５に記載のモデルに適用される。
【０１３５】
われわれのモデルにおいてリン酸マグネシウムの群により安定化されたビタミンＣ又はＶｉｔＣ ＰＭｇ並びにコージ酸を評価することができた。
【０１３６】
得られた結果は表１１に示される。
【０１３７】
【表１３】
【０１３８】
試験された分子は実施例１５のモデルにおいて無効であることが示された。どの分子もアウロン、そして更に特に実施例９ｂで得られた分子の作用に匹敵する閾値でヒトのチロシナーゼを阻害することができなかった。
【０１３９】
３％及び０．３％で試験されたビタミンＣは、この分子がメラノサイト上に細胞毒性及び非特異的作用を有する範囲で有意なレベルの阻害作用を有する。
【０１４０】
結果として、この分子はわれわれのモデルにおいては活性物質であるとは考えることができない。
【０１４１】
アウロンは正常なヒトのチロシナーゼに対して非常に有効な分子であることが判明する。
【０１４２】
アウロンは構造的にフラボンに近似するので、好ましくは、実施例９ｂ及び７ａから得られたアウロンに比較されたフラボンを試験することからなる研究が実施された。アピゲニン（実施例９ｂで得られた誘導体に構造的に類似）を１０−４Ｍ及び１０−５Ｍで試験した。クリシン（実施例７で得られた誘導体に構造的に類似）を１０−５Ｍの濃度で試験した。得られた結果は以下の表１２に要約される
【０１４３】
【表１４】
【０１４４】
表１２からアウロン誘導体はヒトのチロシナーゼを特異的に阻害する、事実、同一分子濃度で試験されたアピゲニン及びクリシンはチロシナーゼを阻害せず、得られたＯＤ／タンパク質比率は未処理の対照のＯＤ／タンパク質比率より大きいことが示される。
【０１４５】
ヒトのチロシナーゼを阻害するためには、ヘキサン環（フラボンの場合）の代わりにＣにおけるペンタン環の存在が不可欠であるように思われる。これが追求される脱色素沈着作用に対するアウロンの特異性を示すことを可能にする。
【実施例２０】
【０１４６】
アウロン又はアウロン誘導体を含有する調製物の実施例：
水中油型の化粧品又は製薬学的調製物中への本発明の生成物の使用
【０１４７】
調製物２０ａ：
Ａ 水 全１００
ブチレングリコール ２
グリセリン ３
ナトリウムジヒドロキシセチルホスフェート、 ２
イソプロピルヒドロキシセチルエーテル
Ｂ グリコールステアレートＳＥ １４
トリイソノアオイン ５
オクチルココエート ６
Ｃ ブチレングリコール ２
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
ｐＨ、５．５に調整
Ｄ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【０１４８】
調製物２０ｂ：
Ａ 水 全１００
ブチレングリコール ２
グリセリン ３
ポリアクリルアミド、イソパラフィン、 ２．８
ラウレス−７
Ｂ ブチレングリコール ２
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン；
２
フェノキシエタノール、
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン ０．５
ブチレングリコール
Ｄ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【０１４９】
調製物２０ｃ：
Ａ カーボマー ０．５０
プロピレングリコール ３
グリセロール ５
水 全１００
Ｂ オクチルココエート ５
ビスアボロール ０．３０
ジメチコン ０．３０
Ｃ 水酸化ナトリウム １．６０
Ｄ フェノキシエタノール、 ０．５０
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｅ 香料 ０．３０
Ｆ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【実施例２１】
【０１５０】
油中水型の調製物中の本発明の生成物の使用
Ａ ＰＥＧ ３０ −３
ジポリヒドロキシステアレート
カプリン酸トリグリセリド ３
セテアリルオクタノエート ４
ジブチルアジペート ３
ブドウの種油 １．５
ホホバ油 １．５
フェノキシエタノール、 ０．５
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｂ グリセリン ３
ブチレングリコール ３
硫酸マグネシウム ０．５
ＥＤＴＡ ０．０５
水 全１００
Ｃ シクロメチコン １
ジメチコン １
Ｄ 香料 ０．３
Ｅ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【実施例２２】
【０１５１】
シャンプー又はシャワーゲル型の調製物中の本発明の生成物の使用：
Ａ キサンタンガム ０．８
水 全１００
Ｂ ブチレングリコール、 ０．５
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
フェノキシエタノール、 ０．５
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｃ クエン酸 ０．８
Ｄ ナトリウムラウレススルフェート ４０．０
Ｅ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【実施例２３】
【０１５２】
水性ゲル調製物（アイライナー、スリマー、等）中への本発明の生成物の使用：
Ａ 水 全１００
カーボマー ０．５
ブチレングリコール １５
フェノキシエタノール、メチルパラベン、 ０．５
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｂ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【実施例２４】
【０１５３】
本発明の生成物の毒性学的研究：
【０１５４】
本発明の主題物質を含有する調製物の美容的許容性の評価
毒性学的試験をウサギにおける眼科評価により、ラットにおける単独経口投与による異常毒性の不在の研究により、そしてモルモットにおける感作力の研究により０．５％キサンタンガム中１０％で取り込まれた実施例９に従って得られた化合物に対して実施した。
【０１５５】
ウサギにおける皮膚の原発的刺激の評価
前記の調製物を「皮膚に対する急性刺激／腐蝕効果」の研究に関するＯＥＣＤ指針により推奨される方法に従って３匹のウサギの皮膚上で０．５ｍｌの用量で希釈せずに適用した。
【０１５６】
生成物は２１／０２／８２のフランス共和国の官報（“ＪＯＲＦ”）中に公開された１／２／１９８２の決議中に規定された評価に従い分類される。
【０１５７】
ウサギにおける眼科刺激の評価
前記の調製物は「眼に対する急性刺激／腐蝕効果」の研究に関して１９８７年２月２４日のＯＥＣＤ第４０５号の指針により推奨される方法に従って、３匹のウサギの眼に０．１ｍｌの割合で純粋で１バッチで滴下した。
【０１５８】
本試験の結果は，調製物が純粋で又は希釈せずに使用されて指針９１／３２６ ＥＥＣの意味で眼に対して非刺激性であると考えることができると結論させる。
【０１５９】
ラットにおける１回の経口投与による異常毒性の不在に対する試験
調製物を１９８７年２月２４日のＯＥＣＤの指針第４０１号から示唆され、化粧品に適用されたプロトコールに従って、５匹の雄ラット及び５匹の雌ラットに５ｇ／ｋｇ体重の用量で１バッチで経口投与した。
【０１６０】
ＬＤ０及びＬＤ５０は５，０００ｍｇ／ｋｇより大きいことが見いだされた。従って、試験された調製物は摂取により危険である調製物の仲間には分類されない。
【０１６１】
モルモットにおける皮膚感作能の評価
前記の調製物をＯＥＣＤ指針ライン第４０６号と一致するプロトコールのＭａｇｎｕｓｓｏｎ及びＫｌｉｇｍａｎｎにより記載された最大化試験にかける。
【０１６２】
調製物は皮膚との接触により非感作性であると分類される。
【図面の簡単な説明】
【０１６３】
【図１】横軸に沿って、異なる２種の濃度１０−５Ｍ及び１０−４Ｍそれぞれの表３に示される環Ａ上でヒドロキシル化されたアウロンを伴って実施される実施例１５の試験の被験体において試験された実施例を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【図２】横軸に沿って、異なる２種の濃度１０−５Ｍ及び１０−４Ｍそれぞれの表４に示される環Ａ上でメチル化されたアウロンを伴う実施例１５の試験の被験体において試験された実施例を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【図３】横軸に沿って、異なる２種の濃度１０−５Ｍ及び１０−４Ｍそれぞれの表５に示される環Ａ上でヒドロキシル化及びメチル化されたアウロンを伴う実施例１５の試験の被験体において試験された実施例を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【図４】横軸に沿って、異なる２種の濃度１０−５Ｍ及び１０−４Ｍそれぞれの実施例１６の試験の被験体において試験された実施例９ｂで得られた化合物に対して４人の異なる供与者について得られた結果（これらの結果はまた表６に示される）を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【図５】横軸に沿って、異なる３種の濃度１０−５Ｍ，１０−４Ｍ及び１０−３Ｍそれぞれの実施例１７の試験の被験体において試験された実施例９ｂで得られた化合物に対する褐色及び黒色のフォトタイプの２人の供与者について得られた結果（これらの結果はまた表７及び８に示される）を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【技術分野】
【０００１】
本発明は本質的に、脱色素沈着作用をもつ又はメラニン生成抑制効果をもつ化粧品中への又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物の製造のための少なくとも１種のアウロンの使用に関する。
【０００２】
本発明はまた、脱色素沈着作用又はメラニン生成抑制効果をもち、そしてそのために得られる化粧品組成物又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物を包含する。
【０００３】
本発明はまた、脱色素沈着に関して活性な物質としてアウロンを使用する脱色素沈着の美容的ケア方法又は治療的処置法を包含する。
【０００４】
太陽光線に対抗するために、皮膚はこの機能に特に適合された異なる細胞：メラノサイトを有する。複雑な過程のメラニン形成期間中に、これらの細胞はその効果が皮膚構造物を保護し、日焼けを被るのに要する時間を延長することである暗色の色素、メラニンを形成する。しかしすべてのメラニンが防御的ではなく、とりわけ極めて光毒性のフェオメラニンと呼ばれるメラニンの１形態が存在する。すべてのメラニンのように特定の形態のフリーラジカルと反応することができるこの分子は更に毒性ですらあり、そしてケラチン形成細胞の遺伝物質に不可逆的損傷を誘発することができるフリーラジカルの形成を誘発する。更に、メラニン形成単位の機能損傷に関連する特定の障害が時々特に見苦しい色素沈着亢進を誘発することができる。従って、メラニンの合成阻害剤の使用は強度に色素沈着した皮膚の淡色化又は例えば特定の見苦しい外見における色素沈着亢進の抑制の症例におけるような真の脱色素沈着が追求される場合の適用のためのみならずまた、皮膚に明色を、表面組織に光沢を与えために色彩を明るくすることを追求する場合の適用のための化粧品において特に興味深い。メラニン合成のこの抑制はまた、真の病理を処置するための治療的処置の範疇内においても特に興味深い可能性がある。
【背景技術】
【０００５】
アウロンはフラボノイド族に属し、そしてフラボンの構造異性体である天然の分子である（非特許文献１参照）。
【０００６】
アウロンは植物界、特にそれらが色合いに寄与する果実及び花中に広範に分布されている。以下の表は植物中に認められる天然アウロンの完全ではないリストを含む：
【０００７】
【表１】
【０００８】
フラボン、カルコン、フラボノール及びイソフラボンはそれらの治療的機能につき広範に研究されているが、アウロンの生物学的活性は研究を開始されたばかりである。アウロンは事実フラボンより自然界に少ないために、これらの天然の分子はこれまで余り興味を
もたれなかった。更に、植物の色素沈着のそれらの役割のために、アウロンは種々の感染症に対する防御剤としての植物により使用されるフィトアレキシンと説明されてきた。生物学的作用に関してはアウロンはそれらの種々の作用形態：
・アウロンは抗ガン剤の仲介を可能にする膜透過運搬体である糖タンパク質−Ｐに結合する能力をもち、
・アウロンはサイクリンキナーゼを阻害し、
・アウロンはアデノシン受容体と相互に作用し、そして
・アウロンはテロメラーゼを阻害する、
ために癌の分野に記載されている。
【０００９】
最後にアウロンはＤＮＡに関係するラジカルの損傷を最小にすることによりそれらの抗酸化特性（特にグリコシル化アウロン）のために使用される。
【００１０】
アウロンはまた、寄生虫及び微生物感染症を処置するために知られている。それらは抗ホルモン作用を有し、メイラード反応を阻害する能力のために糖尿病を罹患している特定の患者において使用されてきた。
【００１１】
アウロンは他のフラボノイドのように、カルコンであるピボット前駆体に起源をもつ。この場合、カルコンからのアウロンの生産は、これらのカルコン分子が２’位にヒドロキシルをもつことを条件にした酸化による環化を伴う（非特許文献２参照）。
【非特許文献１】Ｂｏｕｍｅｎｄｊｅｌ Ａ．，Ｃｕｒｒｒｅｎｔ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，１０，２６２１−２６３０
【非特許文献２】Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｊ．ｏｆ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００２，９４（６），４８７−４９１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の主要な目的は良好な脱色素沈着作用及び／又は良好なメラニン生成抑制作用をもつ化粧品組成物及び／又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物の新規の調製物を提供することである。
【００１３】
本発明のもう１つの主要な目的は良好な抗チロシナーゼ活性をもつ化粧品組成物及び／又は製薬学的組成物、特に皮膚科学的組成物の新規の調製物を提供することである。
【００１４】
本発明のもう１つの主要な目的は美容的脱色素沈着手入れの方法又は脱色素沈着の治療的処置法を提供することである。
【００１５】
最後に本発明の主要な目的は工業的及び美容的、製薬学的、特に皮膚科学的規模において使用することができる簡単な、安全なそして信頼性のある方法でこれらの目的を達成することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
アウロンは良好な脱色素沈着作用及び／又は良好なメラニン生成抑制活性をもち、特にそれらが、メラニンの合成に関与する酵素であるヒトのチロシナーゼの強力な阻害剤であることが本発明により示されるので、本発明はアウロン及び誘導体の新規の生物学的活性の開示により以上に示された目的達成を可能にさせる。
【００１７】
特に予期されないこの活性はアウロンの使用に関連した文献及び特許には記載されていない。
【００１８】
第１のアスペクトに従うと、本発明はメラニン生成抑制作用又は脱色素沈着作用、あるいは抗チロシナーゼ活性をもつ、化粧品組成物又は製薬学的組成物、特には皮膚科学的組成物のいずれかの製造のための美容的物質又は有効物質としての、独立したフェニル環であってピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、フラン又はチオフェンタイプの複素環により置換されてもよい独立したフェニル環を含んでなる少なくとも１種のアウロン、アウロン誘導体又はアウロン類似体の使用に関する。
【００１９】
本発明の特別の態様に従うと、この使用はアウロンが以下に記載された一般化学式：
【００２０】
【化１】
【００２１】
［式中、
Ｘは酸素原子（Ｏ）、窒素原子（Ｎ）又は硫黄原子（Ｓ）を表わすことができ、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は相互に独立にＨ、ハロゲン、ヒドロキシル（ＯＨ）、エステル、塩形成型又は非塩形成型Ｃ１〜１２酸、アミド、スルホンアミド、ニトロ、塩基性又は塩形成型Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩアミン、シアノ、チオール、糖（Ｏ−ヘテロシド又はＣ−ヘテロシド）、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルケニル鎖（例えばプレニル）、Ｃ１〜１２アルケニルオキシ、チオアルキル鎖、アルキル又は芳香族タイプの環又は複素環、塩形成型又は非塩形成型スルフェート、塩形成型又は非塩形成型スルホネート、塩形成型又は非塩形成型ホスフェート、エステル化又は非エステル化ホスフェート、エステル化又は非エステル化ホスホネート、塩形成型又は非塩形成型ホスホネート、式：
【００２２】
【化２】
【００２３】
（ここでＲ１及びＲ２は相互に独立にヒドロキシル、メチル、エチル、フェニル、ｐ−メチルフェニル、ｐ−メトキシフェニル又はｔｅｒｔ−ブチルを表わす）
のシラノール基を表わすことができる］
を有することを特徴とする。
【００２４】
もう１つの態様に従うと、本発明はまた、一般式：
【００２５】
【化３】
【００２６】
［式中、Ｒ１〜Ｒ９は相互に独立に、前記に引用された基を表わすことができる。Ｒ１０は１〜１２個の炭素原子を有する線状又は分枝アルキル鎖又はアシル基であることができる］
のアウロノール、アザアウロン又はチオアウロンタイプのアウロンの誘導体の使用に関する。
【００２７】
もう１つの態様に従うと、本発明はまた、アウロンの二量体の使用に関する。例えば：ジスルフレチン、ビアウレウシジンで、それらの一般式は以下に示される。
【００２８】
【化４】
【００２９】
更にもう１つの態様に従うと、本発明はまた、フェニル環Ｂをピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、フラン又はチオフェンタイプの複素環により置換することができるアウロンの類似体の使用に関する。
【００３０】
【化５】
【００３１】
態様の種々の例に従うと、本発明はまた、２’，４’，６’−トリヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝ＯＨ）、２’，４’−ジヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝Ｈ）、４，６−ジヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝ＯＨ）、６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝Ｈ）、（Ｚ）−２−ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−エチル）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（２’−エチル）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシ）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−ベンジリデン−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−エチルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−メチルチオベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−シアノベンジリデン）−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−スルホネートベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（２’，４’−ジスルホネートベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−メチルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−プロピルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−イソプロピルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ブチルベンジリデン）−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−ベンジリデン−（４，６−ジヒドロキシ）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−エトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、４，６−ジ−Ｏ−ＭＥＭベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、２，６−ジアセトキシ−α−ブロモアセトフェノン、４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン又は（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）−４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンから選択されるアウロン、その誘導体又はその類似体の使用に関する。
【００３２】
本発明の態様の更に他の有利な例に従うと、アウロン、その誘導体又はその類似体は（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−エトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン及び（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（３−メトキシ−４−ヒドロキシ）ベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンから選択される。
【００３３】
本発明の更にもう１つの特別の態様に従うと、本発明に従うアウロン、それらの誘導体及び類似体を特にヒトのチロシナーゼを阻害する作用のために皮膚、毛髪又は外皮上に局所的に使用される。
【００３４】
本発明の更にもう１つの特別の態様に従うと、淡色、褐色及び暗色のフォトタイプ（ｐｈｏｔｏｔｙｐｅ）の供与者からの正常なヒトのメラニン細胞から起因するヒトのチロシナーゼを阻害する作用が本発明に従うアウロン、それらの誘導体及び類似体により実現される。
【００３５】
有利な態様の変法に従うと、アウロン、その誘導体又はその類似体は天然源ものであるか又は化学合成により得られるか又はこのアウロン、その誘導体又は類似体を天然に含有する植物抽出物中に存在する。
【００３６】
第２のアスペクトに従うと、本発明はまた、脱色素沈着作用又はメラニン生成抑制作用を有するこれらの物質の１つとして、それらが場合により美容的に、製薬学的に許容できる、特に皮膚科学的に許容できる賦形剤、ビヒクル又は支持体と混合されてもよい少なくとも１種のアウロン又は１種のその誘導体又は前記に定義のとおりの類似体を含んでなることを特徴とする脱色素沈着作用をもつ又はメラニン生成抑制効果をもつ化粧品組成物又は製薬学的組成物、特には皮膚科学的組成物を対象とする。
【００３７】
第３のアスペクトに従うと、本発明はまた、新規の生成物として以下の化学式：
【００３８】
【化６】
【００３９】
［式中Ｒ１〜Ｒ９基は前記に定義されたとおりであり、ただし、Ｒ５〜Ｒ９のうちの少なくとも１個の基は線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、Ｃ１〜１２チオアルキル基、スルホニル基及びシアノ基から選択される］
のアウロン又はアウロンの誘導体あるいは以下の化学式：
【００４０】
【化７】
【００４１】
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４基は前記に定義のとおりであり、そしてＺは未置換の又は前記に定義されたとおりのＲ５、Ｒ６、Ｒ７基及び場合によりＲ８基で置換されたピロール、ピリジン、フラン及びチオフェンタイプの複素環を含んでなる基を表わし、好ましくはＲ５〜Ｒ８の少なくとも１個の基は線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、Ｃ１〜１２チオアルキル基、スルホニル基及びシアノ基から選択される］のアウロンの類似体を対象とする。
【００４２】
第４のアスペクトに従うと、本発明は更に、場合により美容的に許容できる賦形剤、ビヒクル又は支持体と混合されてもよい、少なくとも１種のアウロン又は１種のその誘導体又は前記に定義のとおりの類似体の前記の脱色素沈着を実施するために有効な量を脱色素沈着に関与する皮膚、毛髪又は外皮の少なくとも１領域上に局所適用することを含んでなることを特徴とする美容的脱色素沈着の手入れ法を対象とする。
【００４３】
第５のアスペクトに従うと、本発明は更に、場合により、製薬学的に、特に皮膚科学的に許容できる賦形剤、ビヒクル又は支持体と混合されてもよい少なくとも１種のアウロン又は１種のその誘導体又は前記に定義のとおりの類似体の前記の領域の脱色素沈着を実施するために有効な量を色素沈着の病理が関与される皮膚、毛髪又は外皮の少なくとも１領域上に局所的に適用することを含んでなることを特徴とする脱色素沈着の治療的処置法を対象とする。
【００４４】
「色素沈着の病理」の用語は皮膚、毛髪又は外皮の前記領域の色素沈着が医学的に処置されるべき病理を構成するようなものであることを意味すると理解される。それは当業者に周知のような色素沈着亢進、角化症、等であることができる。
【００４５】
本発明の範疇内で、これらのアウロン、それらの誘導体及び類似体はマッシュルームからのチロシナーゼ及びヒトのメラニン細胞からのチロシナーゼを阻害しそして従って良好な脱色素沈着作用及び／又は良好なメラニン生成抑制作用及び／又は良好な抗チロシナーゼ活性を実施するための貴重な化粧品又は製薬学的物質、特に貴重な皮膚科学的物質を構成することができたことが全く予期されなかった方法で示された。
【００４６】
本発明のその他の目的、特徴物及び利点はアウロン、それらの誘導体及びそれらの類似体の合成の幾つかの実施例、並びにそれらの生物学的評価を参照し、並びに棒グラフの形態で結果を表わす付記の図面を参照された以下の説明に照らして明白になるであろう。
［実施例］
【００４７】
以下の合成の実施例において、別記されない限りすべての百分率は重量により与えられ、圧力は大気圧であり、温度は摂氏における。
【００４８】
アウロンの合成及び生物学的評価
【実施例１】
【００４９】
２’，４’，６’−トリヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝ＯＨ）及び２’，４’−ジヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝Ｈ）の合成：
【００５０】
【化８】
【００５１】
フロログルシノール（５ｇ、すなわち３９．６ミリモル）又はレゾルシノール（５ｇ、すなわち４５．４ミリモル）の溶液（１５０ｍＬのエーテル中）にクロロアセトニトリル（１当量）及び塩形成型亜鉛（０．１当量）を連続して添加する。全体を０℃に冷却し、気体の塩酸と１時間反応させる。形成される沈殿物を濾取し、エーテルで洗浄する。
【００５２】
沈殿物を１Ｎの塩酸に溶解し、得られる溶液を還流下で１時間維持する。溶媒を外気温にもたらし、形成される橙色の沈殿物を回収し、水で洗浄する。
【実施例２】
【００５３】
４，６−ジヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝ＯＨ）及び６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝Ｈ）の合成：
【００５４】
【化９】
【００５５】
実施例１で得られた化合物（Ｒ１＝ＯＨ又はＨ）をメタノール（１００ｍＬ）中に懸濁させる。次にナトリウムメトキシド（２．５当量）を添加する。得られる溶液を冷所で約１０分間撹拌し、次に還流下で１時間半維持する。外気温に復帰後、溶媒をＨＣｌ溶液で酸性化し、蒸発させる。得られる残渣を酢酸エチル中に取り込む。有機相を水、飽和塩形成型ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、蒸発乾燥すると、橙色の粉末として期待生成物を与える。
【実施例３】
【００５６】
（Ｚ）−２−ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００５７】
【化１０】
【００５８】
実施例２において得られそしてＲ１＝Ｈである化合物（１．０ミリモル）（メタノール中）に水酸化カリウム５０％溶液（１．５ｍＬ）及びベンズアルデヒド（１．５当量）を継続して添加する。得られる溶液を還流下で１時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを蒸発除去し、得られる残渣を水中に取り込む。得られる溶液を酸性化する。沈殿物が現れ、それを濾取し、水で洗浄する。シリカゲルカラムクロマトグラフィー後、生成物を非晶質粉末として得る。
【００５９】
前記の方法をベンズアルデヒドを以下で置き換えることにより適用することができ：
ｐ−エチルベンズアルデヒドにより、この場合は、４’にエチル基をもつ実施例３の分子が得られ、そして実施例３ａになり、
２−エチルベンズアルデヒドにより、この場合は、２’にエチル基をもつ実施例３の分子が得られ、そして実施例３ｂになり、
４−ヒドロキシベンズアルデヒドにより、この場合は、４’にヒドロキシル基をもつ実施例３の分子が得られ、そして実施例３ｃになる。
【実施例４】
【００６０】
４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００６１】
【化１１】
【００６２】
ＤＭＦ中に溶解された実施例２で得られ、Ｒ１＝ＯＨの化合物に炭酸カリウム（３当量）及びヨウ化メチル（３当量）を添加する。得られる混合物を１時間加熱（１５０℃）する。外気温に復帰後、溶媒を水と混合し、酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。シリカゲルのカラムクロマトグラフィーによる精製後、生成物を黄色の粉末として単離する。
【実施例５】
【００６３】
（Ｚ）−２−ベンジリデン−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００６４】
【化１２】
【００６５】
メタノール中に溶解された本発明の実施例４で得られた化合物の溶液（０．７７ミリモル）に、水酸化カリウムの５０％溶液（１．５ｍＬ）及びベンズアルデヒド（１．５当量）を継続して添加する。得られる溶液を還流下で１時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを蒸発除去し、得られる残渣を水で取り込む。得られる溶液を酸性化し、次に酢酸エチルで３回抽出する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下蒸発させる。
【００６６】
シリカゲルカラムクロマトグラフィー後淡黄色の粉末として生成物を得る。
【００６７】
前記の方法をベンズアルデヒドを以下の物質と置き換えることにより適用することができる：
ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒドにより、この場合は４’にヒドロキシル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ａ）、
ｐ−エチルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にエチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｂ）、
ｐ−メチルチオベンズアルデヒドにより、この場合は４’にチオメチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｃ）、
ｐ−シアノベンズアルデヒドにより、この場合は４’にシアノ基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｄ）、
ｐ−スルホネートベンズアルデヒドにより、この場合は４’にスルホネート基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｅ）、
２，４−ジスルホネートベンズアルデヒドにより、この場合は２’及び４’に２個のスルホネート基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｆ）、
ｐ−トルアルデヒドにより、この場合は４’にメチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｇ）、
ｐ−プロピルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にプロピル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｈ）、
ｐ−イソプロピルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にイソプロピル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｉ）、
ｐ−ブチルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にブチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｊ）、
ｐ−ｔｅｒｔ−ブチルベンズアルデヒドにより、この場合は４’にｔｅｒｔ−ブチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｋ）、
２’−エチルベンズアルデヒドにより、この場合は２’にエチル基をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｌ）、
２−フルアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換えるフラン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｍ）、
５−エチル−２−フルアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える５−エチルフラン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｎ）、
４，５−ジメチル−２−フルアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える４，５−ジメチルフラン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｏ）、
２−チオフェンカルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換えるチオフェン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｐ）、
５−メチル−２−チオフェンカルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える５−メチルチオフェン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｑ）、
５−エチル−２−チオフェンカルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える５−エチルチオフェン環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｒ）、
ピロール−２−カルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換えるピロール環をもつ実施例５の分子が得られ（実施例５ｓ）、
３，５−ジメチルピロール−２−カルボキシアルデヒドにより、この場合は環Ｂを置き換える３，５−ジメチルピロール環をもつ実施例５の分子が得られる（実施例５ｔ）。
【実施例６】
【００６８】
（Ｚ）−２−ベンジリデン−４−ヒドロキシ−６−メトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００６９】
【化１３】
【００７０】
実施例５において得られた化合物（ジクロロメタン中）に三臭化ホウ素の１モル溶液（４当量）（ジクロロメタン中）を添加する。得られた混合物を外気温で２０時間撹拌する。次に混合物を氷水中に注入し、全体を酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後黄色の粉末として生成物を得る。
【００７１】
前記の方法を実施例５ｃ（６ｃになる）及び５ｄ（６ｄになる）で得られた分子に適用することができる。
【実施例７】
【００７２】
（Ｚ）−２−ベンジリデン−（４，６−ジヒドロキシ）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００７３】
【化１４】
【００７４】
本発明の実施例５で得られた化合物（ジクロロメタン中に溶解）に三臭化ホウ素（ＢＢｒ３、過剰）を添加し、次に混合物を外気温で２０時間撹拌する。次に氷水を溶媒中に滴下し、このように形成される懸濁液を酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させると非晶質沈殿物として期待生成物を与える。
【００７５】
前記の方法はそれぞれ実施例７ｂ、７ｅ、７ｇ、７ｈ、７ｉ、７ｊ、７ｋ、７ｌ、７ｍ、７ｎ、７ｏ、７ｐ、７ｑ、７ｒ、７ｓ及び７ｔになる実施例５ｂ、５ｅ、５ｇ、５ｈ、５ｉ、５ｊ、５ｋ、５ｌ、５ｍ、５ｎ、５ｏ、５ｐ、５ｑ、５ｒ、５ｓ及び５ｔで得られた分子に適用することができる。
【実施例８】
【００７６】
４，６−ジ−Ｏ−ＭＥＭベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００７７】
【化１５】
【００７８】
Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチルアミン（２当量）（無水ＤＭＦ中）を添加されたＲ１＝ＯＨの実施例２の化合物（３６ミリモル）を氷浴により冷却する。２−メトキシエトキシメチルクロリド（２当量）を滴下し、得られる溶液を外気温で３０分間撹拌する。次に溶媒を水１００ｍＬ中に注入し、酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後、白色の油として生成物を得る。
【実施例９】
【００７９】
（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００８０】
【化１６】
【００８１】
実施例８で得られた化合物の溶液（１．０２ミリモル）（メタノール中）に水酸化カリウムの５０％溶液（３．５ｍＬ）及びｐ−アニスアルデヒド（１．５当量）を連続して添加する。得られた溶液を還流下に１時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを蒸発除去し、得られた残渣を水中に取る。得られた溶液を酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。得られた生成物をメタノール中に取る。得られた溶液に１Ｍの塩酸溶液（エーテル中）を添加する。混合物を約６０℃で２時間撹拌する。外気温に復帰後、溶媒を水と混合し、ジクロロメタンで抽出する。有機相を水、飽和塩形成型ナトリウム溶液で連続して洗浄し、乾燥し、そして蒸発乾燥させる。シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後黄色の粉末として生成物を得る。
【００８２】
前記の方法をｐ−アニスアルデヒドを以下で置き換えることにより適用することができる：
ｐ−エトキシベンズアルデヒド、この場合４’にエトキシ基が得られ（実施例９ａ）、
ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒド、この場合、４’（９ｂ）又は２’（９ｃ）にヒドロキシル基が得られ、
ヴァニリン、この場合３’にメトキシ基及び４’にヒドロキシル基が得られる（９ｄ）。
【実施例１０】
【００８３】
２，６−ジアセトキシ−α−ブロモアセトフェノンの合成：
【００８４】
【化１７】
【００８５】
２，６−ジヒドロキシアセトフェノン（３．０８ミリモル）を無水酢酸中に分散し、全体を還流下に４時間維持する。溶媒を氷水中に注入し、酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させると油を与え、それを無水ＴＨＦ中に取る。得られた溶液にトリメチルフェニルアンモニウムブロミド（１．２当量）を緩徐に添加し、得られた混合物を外気温で６時間撹拌する。次に溶媒に水を添加し、得られた溶液を外気温で数分間撹拌し、次に酢酸エチルで抽出する。有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。粗生成物を橙色の油として得て、精製せずに次の段階に使用する。
【実施例１１】
【００８６】
４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００８７】
【化１８】
【００８８】
実施例１０の化合物（３８０ｍｇ）（メタノール中）に水酸化カリウム５０％水溶液（０．５ｍＬ）を添加する。全体を還流下で約３時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを真空下蒸発除去し、得られた残渣を水中に取り、ＨＣｌ溶液の助けにより酸性化する。次に得られた懸濁液をジクロロメタンで抽出する。次に有機相を乾燥し、蒸発乾燥させる。
【００８９】
シリカゲルカラムクロマトグラフィーによる精製後オフホワイトの沈殿物として生成物を得る。
【実施例１２】
【００９０】
（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）−４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンの合成：
【００９１】
【化１９】
【００９２】
実施例１１で得られた化合物（０，６６ミリモル）（メタノール中）に水酸化カリウム５０％溶液及び４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１．５当量）を連続して添加する。得られた溶液を還流下に３時間維持する。外気温に復帰後、メタノールを蒸発除去し、得られた残渣を水中に取る。得られた溶液を酸性化し、黄色の沈殿物が現れ、それを濾取し、最少の水で洗浄し、真空乾燥する。分取クロマトグラフィーにより精製後橙色の沈殿物として生成物を得る。
【００９３】
アウロンの生物学的評価
【実施例１３】
【００９４】
アウロンによる単離チロシナーゼの阻害のインビトロ試験：
チロシナーゼはＬ−ＤｏｐａからのＬ−ドパキノン、そして次にドパクロムの形成を触媒する。ドパクロムは４９０ｎｍにおける可視的分光測定法により定量可能な着色化合物である。酵素活性を修飾することができる活性物質の使用は４９０ｎｍにおける光学濃度の変化により明らかになる。
【００９５】
ドパクロムの形成速度の率は、試験される種々の分子で得られる活性化又は阻害作用を正確に測定させる。
【００９６】
試験される試料を撹拌下でマッシュルームからのチロシナーゼ（Ｓｉｇｍａ）の存在下で５分間インキュベートする。Ｌ−ＤＯＰＡ（Ｓｉｇｍａ）（チロシナーゼの基質）を試験される分子の存在下又は不在下で暗所で１０分間インキュベートする。阻害率の計算を分子を伴わない負の対照のＯＤに対して試験体のＯＤを比較することにより実施する。使用される正の対照は０．０１％におけるコージ酸（Ｓｉｇｍａ）（＝４５％±５％阻害）である。
【００９７】
このインビトロ試験に関する限り、アウロン誘導体は１０−４Ｍ及び１０−５Ｍの最終濃度で試験された。結果は表１に示される。
【００９８】
【表２】
【００９９】
以上の表１から、アウロンが低濃度においてもチロシナーゼを阻害することが明白である。環Ａが好ましくはヒドロキシル化される時は活性がより大きいので、測定された活性はアウロンの構造に左右される。
【実施例１４】
【０１００】
アウロンによるヒトのチロシナーゼの阻害のインビトロ試験：
健康な供与者から由来するメラノサイト抽出物から得られたヒトのチロシナーゼはＬ−ドパからのＬ−ドパキノンの形成を触媒する。Ｌ−ドパキノンはクロモゲン：３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン（ＭＢＴＨ）の力で４９０ｎｍにおける可視分光測定により定量することができる。
【０１０１】
この試薬はチロシナーゼにより合成されるｏ−キノンを捕捉して、安定で可溶性で、そして高いモル光学濃度を有するＭＢＴＨ−ｏ−キノン化合物を与える。
【０１０２】
従って酵素活性を修飾することができる活性物質の使用は負の対照で得られる値に比較した４９０ｎｍにおけるＯＤの変化により表わされる（１００％の活性）。
【０１０３】
メラノサイト抽出物を、溶解が熱ショックにより実施される正常なヒトのメラノサイトの細胞膜の溶解後に得る。上澄み液を回収し、次にＭＢＴＨ（Ｓｉｇｍａ）及びＬ−ドパ（Ｓｉｇｍａ）とともにインキュベートする。３０分後に測定される４９０ｎｍにおけるＯＤを対照に対して得られるものに対して試験される各活性物質につき比較し、阻害率を負の対照（分子を含まない）のＯＤに対する試験物（試験される分子）のＯＤを比較することにより計算する。使用される正の対照は０．１％のコージ酸（６０％±５％の阻害）である。
【０１０４】
得られた結果は表２に要約される。
【０１０５】
【表３】
【０１０６】
以上の表２から、アウロンの阻害作用は存在するが、単離されたヒトのチロシナーゼのこの特定のモデルについては軽度であると結論される。
【実施例１５】
【０１０７】
正常なヒトのメラノサイト上で試験される活性物質の適用後の単層において研究されたヒトのチロシナーゼの阻害作用の試験：
正常なヒトのメラノサイト（腹部形成術から採取）をウエル当り８０，０００個の細胞の率で２４−ウエルのプレートに播種する。それらを密集体まで培養し、培地中に活性物質を２４時間適用する。２４時間後、培地を除去し、メラノサイトを機械的活動（ａｃｔｉｏｎ）により採取する。熱ショックにより抽出し、次に上澄み液を回収し、ＭＢＴＨ（Ｓｉｇｍａ）及びＬ−ドパ（Ｓｉｇｍａ）とともにインキュベートする。３０分後に４９０ｎｍにおけるＯＤを測定し、チロシナーゼの阻害作用を、負の対照（未処理対照）の４９０ｎｍにおけるＯＤ／タンパク質の濃度の比率に対する、試験体のタンパク質レベル（各培養ウエル中で測定）に対する４９０ｎｍにおけるＯＤを比較することにより計算する。従って抗チロシナーゼ活性の率は未処理対照に対して計算される。
【０１０８】
実験の負の対照はメラノサイトに０．１％で適用されるコージ酸であり（２０％±５％の測定阻害に対して）、アウロンの誘導体は１０−４Ｍ及び１０−５Ｍの濃度で研究された。得られた結果は以下のとおりである：
【０１０９】
【表４】
【０１１０】
表３及び図１から、得られた結果が評価されたモデルに対するヒトのメラニン形成の阻害に対するヒドロキシル化アウロンの真の有効性を示すことを明らかにもたらす。認められる阻害率は生存生物からのモデル上で、すなわちマッシュルームからのチロシナーゼ及び正常なヒトのメラノサイトから抽出されたチロシナーゼとの直接的接触により得られるものより極めて明白に大きい。
【０１１１】
従ってヒドロキシル化アウロンは当業者には特に予期されず、そして非常に重要な活性を有する。好ましくは、環Ａ上でヒドロキシル化され、そして４’位にヒドロキシルを有するアウロン（実施例９ｂ）が特に活性である。
【０１１２】
【表５】
【０１１３】
表４及び図２から、メチル化アウロンは正常なヒトのメラノサイト上に適用される時に、ヒドロキシル化アウロンよりは少ない程度にヒトのチロシナーゼを阻害することを示す。
【０１１４】
【表６】
【０１１５】
更に、表５及び図３から、メチル化アウロンと同様に、ヒドロキシル化及びメチル化アウロンはより軽度にチロシナーゼを阻害することを明白に示す。
【０１１６】
【表７】
【０１１７】
【表８】
【０１１８】
更に表６から、大部分のアウロン類似体はヒトのチロシナーゼを有意に阻害し、そしてその結果、メラニンの形成及びその直接的結果である皮膚の色素沈着を予防することを明白に示す。
【実施例１６】
【０１１９】
種々の供与者から由来する正常なヒトのメラノサイトに対する実施例９ｂで得られた化合物の適用後のヒトのチロシナーゼの阻害作用の試験
実施例９ｂで得られた化合物を実施例１５に記載の方法に従って、淡色のフォトタイプの種々の供与者から由来するメラノサイトにつき試験した。試験された供与者は以下：
−供与者Ｓ（実施例１５で試験された供与者）：４６歳
−供与者１：４０歳
−供与者２：４７歳
−供与者３：３３歳
である。得られた結果は以下の表７及び図４に示される。
【０１２０】
【表９】
【０１２１】
得られた結果は４人の異なる供与者に対する化合物９ｂの高い効果を示す。
【実施例１７】
【０１２２】
褐色及び黒色のフォトタイプの種々の供与者から由来する正常なヒトのメラノサイトに対する実施例９ｂで得られた化合物の適用後のヒトのチロシナーゼの阻害作用の試験
実施例９ｂで得られた化合物を褐色のフォトタイプの２人の供与者及び黒色人種のフォトタイプの１人の供与者から由来するメラノサイト培養物について試験する。適用された方法は実施例１５に記載のものである。
【０１２３】
褐色のフォトタイプの２人の供与者から得られた結果は表８及び図５に示される。
【０１２４】
【表１０】
【０１２５】
褐色のフォトタイプに対して得られた結果は抗チロシナーゼ活性が用量依存性で、高いことを示す。黒色のフォトタイプ（３１歳）で得られた結果は表９に示す。
【０１２６】
【表１１】
【０１２７】
黒色のフォトタイプから由来するチロシナーゼ阻害活性は用量依存性で、第１に淡色のフォトタイプの供与者からそして第２に黒色のフォトタイプの供与者から得られた結果を立証する。
【実施例１８】
【０１２８】
アウロンの細胞毒性の研究
活性物質の細胞毒性を生存可能細胞の細胞内酸ホスファターゼによりｐ−ニトロフェノールに転化される物質のＰＮＰＰ（Ｐ−ニトロフェニルホスフェート）による決定により２４−ウエルのプレート中の正常なヒトメラノサイトにつき研究する。
【０１２９】
４０５ｎｍにおけるｐ−ニトロフェノールの吸収は生存可能細胞数に正比例する。
【０１３０】
活性物質を２種の異なる濃度（１０−４Ｍ及び１０−５Ｍ）で試験し、培養培地に添加し、３７℃で２４時間インキュベートする。ＰＮＰＰによる測定を細胞マット上で実施し、結果を負の対照（未処理ウエル）に対する生存率として表わす。
【０１３１】
得られた結果は以下の表１０に要約される。
【０１３２】
【表１２】
【０１３３】
試験された分子は、得られた生存率が７５％生存率（許容閾値）を超えるので、１０−４及び１０−５Ｍのモル濃度で試験された時に無細胞毒である。１０−４Ｍで試験された時に３分子、すなわち実施例６、５ｂ及び６ｃで得られた分子のみが７５％未満の閾値を有する。従って、評価するために、これらの分子を１０−４Ｍ未満（例えば、１０−５Ｍ）の濃度で単層で試験することが必要であろう。
【実施例１９】
【０１３４】
アウロンの特異性の研究：
それらの脱色素沈着作用について文献に知られている分子につき研究を実施する。これらの分子は前記のアウロンに対してそれらの効果を比較するために実施例１５に記載のモデルに適用される。
【０１３５】
われわれのモデルにおいてリン酸マグネシウムの群により安定化されたビタミンＣ又はＶｉｔＣ ＰＭｇ並びにコージ酸を評価することができた。
【０１３６】
得られた結果は表１１に示される。
【０１３７】
【表１３】
【０１３８】
試験された分子は実施例１５のモデルにおいて無効であることが示された。どの分子もアウロン、そして更に特に実施例９ｂで得られた分子の作用に匹敵する閾値でヒトのチロシナーゼを阻害することができなかった。
【０１３９】
３％及び０．３％で試験されたビタミンＣは、この分子がメラノサイト上に細胞毒性及び非特異的作用を有する範囲で有意なレベルの阻害作用を有する。
【０１４０】
結果として、この分子はわれわれのモデルにおいては活性物質であるとは考えることができない。
【０１４１】
アウロンは正常なヒトのチロシナーゼに対して非常に有効な分子であることが判明する。
【０１４２】
アウロンは構造的にフラボンに近似するので、好ましくは、実施例９ｂ及び７ａから得られたアウロンに比較されたフラボンを試験することからなる研究が実施された。アピゲニン（実施例９ｂで得られた誘導体に構造的に類似）を１０−４Ｍ及び１０−５Ｍで試験した。クリシン（実施例７で得られた誘導体に構造的に類似）を１０−５Ｍの濃度で試験した。得られた結果は以下の表１２に要約される
【０１４３】
【表１４】
【０１４４】
表１２からアウロン誘導体はヒトのチロシナーゼを特異的に阻害する、事実、同一分子濃度で試験されたアピゲニン及びクリシンはチロシナーゼを阻害せず、得られたＯＤ／タンパク質比率は未処理の対照のＯＤ／タンパク質比率より大きいことが示される。
【０１４５】
ヒトのチロシナーゼを阻害するためには、ヘキサン環（フラボンの場合）の代わりにＣにおけるペンタン環の存在が不可欠であるように思われる。これが追求される脱色素沈着作用に対するアウロンの特異性を示すことを可能にする。
【実施例２０】
【０１４６】
アウロン又はアウロン誘導体を含有する調製物の実施例：
水中油型の化粧品又は製薬学的調製物中への本発明の生成物の使用
【０１４７】
調製物２０ａ：
Ａ 水 全１００
ブチレングリコール ２
グリセリン ３
ナトリウムジヒドロキシセチルホスフェート、 ２
イソプロピルヒドロキシセチルエーテル
Ｂ グリコールステアレートＳＥ １４
トリイソノアオイン ５
オクチルココエート ６
Ｃ ブチレングリコール ２
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
ｐＨ、５．５に調整
Ｄ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【０１４８】
調製物２０ｂ：
Ａ 水 全１００
ブチレングリコール ２
グリセリン ３
ポリアクリルアミド、イソパラフィン、 ２．８
ラウレス−７
Ｂ ブチレングリコール ２
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン；
２
フェノキシエタノール、
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン ０．５
ブチレングリコール
Ｄ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【０１４９】
調製物２０ｃ：
Ａ カーボマー ０．５０
プロピレングリコール ３
グリセロール ５
水 全１００
Ｂ オクチルココエート ５
ビスアボロール ０．３０
ジメチコン ０．３０
Ｃ 水酸化ナトリウム １．６０
Ｄ フェノキシエタノール、 ０．５０
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｅ 香料 ０．３０
Ｆ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【実施例２１】
【０１５０】
油中水型の調製物中の本発明の生成物の使用
Ａ ＰＥＧ ３０ −３
ジポリヒドロキシステアレート
カプリン酸トリグリセリド ３
セテアリルオクタノエート ４
ジブチルアジペート ３
ブドウの種油 １．５
ホホバ油 １．５
フェノキシエタノール、 ０．５
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｂ グリセリン ３
ブチレングリコール ３
硫酸マグネシウム ０．５
ＥＤＴＡ ０．０５
水 全１００
Ｃ シクロメチコン １
ジメチコン １
Ｄ 香料 ０．３
Ｅ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【実施例２２】
【０１５１】
シャンプー又はシャワーゲル型の調製物中の本発明の生成物の使用：
Ａ キサンタンガム ０．８
水 全１００
Ｂ ブチレングリコール、 ０．５
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
フェノキシエタノール、 ０．５
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｃ クエン酸 ０．８
Ｄ ナトリウムラウレススルフェート ４０．０
Ｅ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【実施例２３】
【０１５２】
水性ゲル調製物（アイライナー、スリマー、等）中への本発明の生成物の使用：
Ａ 水 全１００
カーボマー ０．５
ブチレングリコール １５
フェノキシエタノール、メチルパラベン、 ０．５
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
Ｂ 本発明の生成物 ０．０１〜１０％
【実施例２４】
【０１５３】
本発明の生成物の毒性学的研究：
【０１５４】
本発明の主題物質を含有する調製物の美容的許容性の評価
毒性学的試験をウサギにおける眼科評価により、ラットにおける単独経口投与による異常毒性の不在の研究により、そしてモルモットにおける感作力の研究により０．５％キサンタンガム中１０％で取り込まれた実施例９に従って得られた化合物に対して実施した。
【０１５５】
ウサギにおける皮膚の原発的刺激の評価
前記の調製物を「皮膚に対する急性刺激／腐蝕効果」の研究に関するＯＥＣＤ指針により推奨される方法に従って３匹のウサギの皮膚上で０．５ｍｌの用量で希釈せずに適用した。
【０１５６】
生成物は２１／０２／８２のフランス共和国の官報（“ＪＯＲＦ”）中に公開された１／２／１９８２の決議中に規定された評価に従い分類される。
【０１５７】
ウサギにおける眼科刺激の評価
前記の調製物は「眼に対する急性刺激／腐蝕効果」の研究に関して１９８７年２月２４日のＯＥＣＤ第４０５号の指針により推奨される方法に従って、３匹のウサギの眼に０．１ｍｌの割合で純粋で１バッチで滴下した。
【０１５８】
本試験の結果は，調製物が純粋で又は希釈せずに使用されて指針９１／３２６ ＥＥＣの意味で眼に対して非刺激性であると考えることができると結論させる。
【０１５９】
ラットにおける１回の経口投与による異常毒性の不在に対する試験
調製物を１９８７年２月２４日のＯＥＣＤの指針第４０１号から示唆され、化粧品に適用されたプロトコールに従って、５匹の雄ラット及び５匹の雌ラットに５ｇ／ｋｇ体重の用量で１バッチで経口投与した。
【０１６０】
ＬＤ０及びＬＤ５０は５，０００ｍｇ／ｋｇより大きいことが見いだされた。従って、試験された調製物は摂取により危険である調製物の仲間には分類されない。
【０１６１】
モルモットにおける皮膚感作能の評価
前記の調製物をＯＥＣＤ指針ライン第４０６号と一致するプロトコールのＭａｇｎｕｓｓｏｎ及びＫｌｉｇｍａｎｎにより記載された最大化試験にかける。
【０１６２】
調製物は皮膚との接触により非感作性であると分類される。
【図面の簡単な説明】
【０１６３】
【図１】横軸に沿って、異なる２種の濃度１０−５Ｍ及び１０−４Ｍそれぞれの表３に示される環Ａ上でヒドロキシル化されたアウロンを伴って実施される実施例１５の試験の被験体において試験された実施例を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【図２】横軸に沿って、異なる２種の濃度１０−５Ｍ及び１０−４Ｍそれぞれの表４に示される環Ａ上でメチル化されたアウロンを伴う実施例１５の試験の被験体において試験された実施例を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【図３】横軸に沿って、異なる２種の濃度１０−５Ｍ及び１０−４Ｍそれぞれの表５に示される環Ａ上でヒドロキシル化及びメチル化されたアウロンを伴う実施例１５の試験の被験体において試験された実施例を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【図４】横軸に沿って、異なる２種の濃度１０−５Ｍ及び１０−４Ｍそれぞれの実施例１６の試験の被験体において試験された実施例９ｂで得られた化合物に対して４人の異なる供与者について得られた結果（これらの結果はまた表６に示される）を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【図５】横軸に沿って、異なる３種の濃度１０−５Ｍ，１０−４Ｍ及び１０−３Ｍそれぞれの実施例１７の試験の被験体において試験された実施例９ｂで得られた化合物に対する褐色及び黒色のフォトタイプの２人の供与者について得られた結果（これらの結果はまた表７及び８に示される）を伴う、縦軸のヒトのチロシナーゼ活性の抑制率のグラフを表わす。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
場合により美容的に許容され得る賦形剤、ビヒクルまたはキャリヤーと混合されてもよい、
ａ）一般化学式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
Ｘは酸素原子（Ｏ）、窒素原子（Ｎ）又は硫黄原子（Ｓ）を表わすことができ、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は相互に独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル（ＯＨ）、エステル、塩形成型又は非塩形成型Ｃ１〜１２酸、アミド、スルホンアミド、ニトロ、塩基性又は塩形成型Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩアミン、シアノ、チオール、糖（Ｏ−ヘテロシド又はＣ−ヘテロシド）、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルケニル鎖（例えばプレニル）、Ｃ１〜１２アルケニルオキシ、チオアルキル鎖、アルキル又は芳香族タイプの環又は複素環、塩形成型又は非塩形成型スルフェート、塩形成型又は非塩形成型スルホネート、塩形成型又は非塩形成型ホスフェート、エステル化又は非エステル化ホスフェート、エステル化又は非エステル化ホスホネート、塩形成型又は非塩形成型ホスホネート、式：
【化２】
（ここでＲ１及びＲ２は相互に独立して、ヒドロキシル、メチル、エチル、フェニル、ｐ−メチルフェニル、ｐ−メトキシフェニル又はｔｅｒｔ−ブチル基を表わすことができる）
のシラノール基を表わすことができる］のアウロン、
ｂ）以下の化学式：
【化３】
［式中、Ｒ１〜Ｒ９は相互に独立して、前記のａ）でアウロンに対して定義されたものと同様な基を表わし、そしてＲ１０は１〜１２個の炭素原子を有する線状又は分枝アシル基又はアルキル基から選択される］
のアウロノール又はアザアウロン又はチオアウロン、
ｃ）ジスルフレチン及びビアウレウシジン（ｂｉａｕｒｅｕｓｉｄｉｎ）から選択されるアウロンの二量体、
ｄ）前記のａ）で定義されたようなアウロンの《Ｂ》環と呼ばれる独立したフェニル環を以下の化学式：
【化４】
［ここでＲ１〜Ｒ８は前記定義のとおりである］
中のピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、フラン及びチオフェンからなる群から選択される複素環により置換することにより得られるアウロン類似体、
から選択される少なくとも１種のアウロン成分の有効に脱色素沈着する量を皮膚、毛髪又は外皮の領域から選択される脱色素沈着されるべき少なくとも１カ所の身体領域上に局所的に適用することを含んでなる美容的脱色素沈着ケア方法。
【請求項２】
アウロン成分が２’，４’，６’−トリヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝ＯＨ）、２’，４’−ジヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝Ｈ）、４，６−ジヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝ＯＨ）、６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝Ｈ）、（Ｚ）−２−ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−エチル）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（２’−エチル）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシ）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−ベンジリデン−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシ）ベンジリデン−４，６−ジ
メトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−エチル−ベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−メチルチオ−ベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−シアノベンジリデン）−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−スルホネートベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（２，４−ジスルホネートベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−ベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−プロピルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−イソプロピルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ブチルベンジリデン）−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−ベンジリデン−（４，６−ジヒドロキシ）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−エトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、４，６−ジ−ＯＭＥＭベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、２，６−ジアセトキシ−α−ブロモアセトフェノン、４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン及び（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）−４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンからなる群から選択される請求項１の方法。
【請求項３】
アウロン成分が（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−エトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン又は（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンからなる群から選択される請求項１の方法。
【請求項４】
アウロン成分が植物からの抽出物の形態のアウロン成分及び化学合成により得られるアウロン成分からなる群から選択される請求項１の方法。
【請求項５】
ａ）以下の化学式（Ｉ）：
【化５】
［式中Ｒ１〜Ｒ９基は請求項１に定義されたとおりであり、ただし、Ｒ５〜Ｒ９からの少なくとも１個の基は線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、Ｃ１〜１２チオアルキル基、スルホニル基及びシアノ基から選択される］
のアウロン、
ｂ）以下の化学式（ＩＩ）：
【化６】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４基は前記に定義のとおりであり、そして
Ｚは未置換の又は前記に定義されたとおりのＲ５、Ｒ６、Ｒ７基及び場合によりＲ８基で置換されたピロール、ピリジン、フラン及びチオフェンからなる群から選択される複素環を表わす］
のアウロン類似体：から選択されるアウロン成分。
【請求項６】
Ｒ５〜Ｒ８の少なくとも１個の基が線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、Ｃ１〜１２チオアルキル基、スルホニル基及びシアノ基から選択される請求項５のアウロン成分。
【請求項１】
場合により美容的に許容され得る賦形剤、ビヒクルまたはキャリヤーと混合されてもよい、
ａ）一般化学式（Ｉ）：
【化１】
［式中、
Ｘは酸素原子（Ｏ）、窒素原子（Ｎ）又は硫黄原子（Ｓ）を表わすことができ、
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９は相互に独立して、Ｈ、ハロゲン、ヒドロキシル（ＯＨ）、エステル、塩形成型又は非塩形成型Ｃ１〜１２酸、アミド、スルホンアミド、ニトロ、塩基性又は塩形成型Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩアミン、シアノ、チオール、糖（Ｏ−ヘテロシド又はＣ−ヘテロシド）、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルケニル鎖（例えばプレニル）、Ｃ１〜１２アルケニルオキシ、チオアルキル鎖、アルキル又は芳香族タイプの環又は複素環、塩形成型又は非塩形成型スルフェート、塩形成型又は非塩形成型スルホネート、塩形成型又は非塩形成型ホスフェート、エステル化又は非エステル化ホスフェート、エステル化又は非エステル化ホスホネート、塩形成型又は非塩形成型ホスホネート、式：
【化２】
（ここでＲ１及びＲ２は相互に独立して、ヒドロキシル、メチル、エチル、フェニル、ｐ−メチルフェニル、ｐ−メトキシフェニル又はｔｅｒｔ−ブチル基を表わすことができる）
のシラノール基を表わすことができる］のアウロン、
ｂ）以下の化学式：
【化３】
［式中、Ｒ１〜Ｒ９は相互に独立して、前記のａ）でアウロンに対して定義されたものと同様な基を表わし、そしてＲ１０は１〜１２個の炭素原子を有する線状又は分枝アシル基又はアルキル基から選択される］
のアウロノール又はアザアウロン又はチオアウロン、
ｃ）ジスルフレチン及びビアウレウシジン（ｂｉａｕｒｅｕｓｉｄｉｎ）から選択されるアウロンの二量体、
ｄ）前記のａ）で定義されたようなアウロンの《Ｂ》環と呼ばれる独立したフェニル環を以下の化学式：
【化４】
［ここでＲ１〜Ｒ８は前記定義のとおりである］
中のピロール、イミダゾール、トリアゾール、ピリジン、フラン及びチオフェンからなる群から選択される複素環により置換することにより得られるアウロン類似体、
から選択される少なくとも１種のアウロン成分の有効に脱色素沈着する量を皮膚、毛髪又は外皮の領域から選択される脱色素沈着されるべき少なくとも１カ所の身体領域上に局所的に適用することを含んでなる美容的脱色素沈着ケア方法。
【請求項２】
アウロン成分が２’，４’，６’−トリヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝ＯＨ）、２’，４’−ジヒドロキシ−２−クロロアセトフェノン（Ｒ１＝Ｈ）、４，６−ジヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝ＯＨ）、６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン（Ｒ１＝Ｈ）、（Ｚ）−２−ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−エチル）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（２’−エチル）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシ）ベンジリデン−６−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−ベンジリデン−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシ）ベンジリデン−４，６−ジ
メトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−エチル−ベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−メチルチオ−ベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−シアノベンジリデン）−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−スルホネートベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（２，４−ジスルホネートベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−ベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−プロピルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジメトキシ−２−（４’−イソプロピルベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−（４’−ブチルベンジリデン）−４，６−ジメトキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−２−ベンジリデン−（４，６−ジヒドロキシ）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−エトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、４，６−ジ−ＯＭＥＭベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、２，６−ジアセトキシ−α−ブロモアセトフェノン、４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン及び（Ｚ）−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）−４−ヒドロキシベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンからなる群から選択される請求項１の方法。
【請求項３】
アウロン成分が（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４−メトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−エトキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン、（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（４’−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オン又は（Ｚ）−４，６−ジヒドロキシ−２−（３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジリデン）ベンゾフラン−３（２Ｈ）−オンからなる群から選択される請求項１の方法。
【請求項４】
アウロン成分が植物からの抽出物の形態のアウロン成分及び化学合成により得られるアウロン成分からなる群から選択される請求項１の方法。
【請求項５】
ａ）以下の化学式（Ｉ）：
【化５】
［式中Ｒ１〜Ｒ９基は請求項１に定義されたとおりであり、ただし、Ｒ５〜Ｒ９からの少なくとも１個の基は線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、Ｃ１〜１２チオアルキル基、スルホニル基及びシアノ基から選択される］
のアウロン、
ｂ）以下の化学式（ＩＩ）：
【化６】
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４基は前記に定義のとおりであり、そして
Ｚは未置換の又は前記に定義されたとおりのＲ５、Ｒ６、Ｒ７基及び場合によりＲ８基で置換されたピロール、ピリジン、フラン及びチオフェンからなる群から選択される複素環を表わす］
のアウロン類似体：から選択されるアウロン成分。
【請求項６】
Ｒ５〜Ｒ８の少なくとも１個の基が線状又は分枝Ｃ１〜１２アルキル鎖、線状又は分枝Ｃ１〜１２アルコキシ鎖、Ｃ１〜１２チオアルキル基、スルホニル基及びシアノ基から選択される請求項５のアウロン成分。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００６−２９０８８６（Ｐ２００６−２９０８８６Ａ）
【公開日】平成１８年１０月２６日（２００６．１０．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−９４６２５（Ｐ２００６−９４６２５）
【出願日】平成１８年３月３０日（２００６．３．３０）
【出願人】（５０６０５７２１４）エンゲルハード・リヨン・ソシエテ・アノニム (4)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年１０月２６日（２００６．１０．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年３月３０日（２００６．３．３０）
【出願人】（５０６０５７２１４）エンゲルハード・リヨン・ソシエテ・アノニム (4)
【Ｆターム（参考）】
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