天然内因性タンパク質から派生するが、異型において、および／または、それらの正常な生理学的状況から患者の体内に蔓延している、疾病関連タンパク質のネオエピトープを認識する、新規の特異的結合分子、特に、ヒト抗体、ならびに、そのフラグメント、誘導体、および変異体を提供する。加えて、このような結合分子、その抗体および模倣体を含む医薬組成物、ならびに、アルツハイマー病等の神経疾患の治療における抗体および標的である場合も、またはそうでない場合もある、新規の結合分子に対するスクリーニングの方法を記載する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患関連タンパク質特異的結合分子を単離する方法であって、
（ａ） 症状はないが、疾患に罹患する、または疾患を発症する危険性がある患者、または異常に安定な疾病経過がある患者から得たサンプルを、所定の臨床特性の病理的に変化した細胞もしくは組織の標本に供するステップと、
（ｂ） 前記標本に結合するが、健康な対象の対応する細胞または組織に結合しない結合分子を同定し、任意に単離するステップと、を含む、方法。

【請求項２】
前記サンプルは、体液または細胞サンプルを含有する、請求項１に記載の方法。

【請求項３】
前記体液は、脳脊髄液、血漿、または尿である、請求項２に記載の方法。

【請求項４】
前記結合分子は、抗体である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。

【請求項５】
前記サンプルは、Ｂ細胞または記憶Ｂ細胞を含む、またはそれらから派生する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。

【請求項６】
前記患者および対象は、それぞれ、ヒトである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。

【請求項７】
前記患者は、代理マーカーの存否により、まだ明確でない疾患に罹患しているかまたは前記疾患を発症する危険性があると判定されている、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。

【請求項８】
前記代理マーカーは、老齢期、脳アミロイド負荷、アポＥ遺伝子型、ＡＰＰ遺伝子型、ＰＳ１遺伝子型、アミロイドβペプチド、イソプラスタン、タウ（Ｔａｕ）、およびホスホタウ（ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｔａｕ）の体液におけるレベルからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。

【請求項９】
前記疾患は、神経疾患、自己免疫疾患、および腫瘍からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。

【請求項１０】
前記疾患は、アルツハイマー病である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。

【請求項１１】
前記サンプルは、以下の基準：
（ｉ） ６５歳以上であること、
（ｉｉ） 十分な認知能力および良好な健康状態を有すること、
（ｉｉｉ） 認知症の臨床的兆候がないこと、または
（ｉｖ） アルツハイマー病であり得る確立された臨床診断の存在にもかかわらず、疾病の進行が異常に遅いこと、を満たす患者から採取される、請求項１０に記載の方法。


【請求項１２】
（ｉ） 結合分子、例えば、前記標本に結合するが、健康な対象の対応する細胞または組織に結合しない抗体を含むことが確認されているサンプルからＢ細胞またはＢ記憶細胞を精製するステップと、
（ｉｉ） 前記Ｂ細胞またはＢ記憶細胞から前記抗体に対する免疫グロブリン遺伝子レパートリーを取得するステップと、
（ｉｉｉ） 前記レパートリーを使用して、前記抗体を発現するステップと、
をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。

【請求項１３】
ステップ（ｉｉ）は、
（ｉｖ） 前記Ｂ細胞または記憶Ｂ細胞からｍＲＮＡを取得するステップと、
（ｖ） ステップ（ｉｖ）の前記ｍＲＮＡからｃＤＮＡを取得するステップと、
（ｖｉ） プライマー伸長反応を使用して、前記ｃＤＮＡから前記抗体の重鎖（ＨＣ）およびκ軽鎖（ＬＣ）に対応するフラグメントを増幅するステップと、
を含む、請求項１２に記載の方法。

【請求項１４】
疾患関連タンパク質ネオエピトープを選択的に認識することが可能である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法により取得可能な結合分子。

【請求項１５】
前記タンパク質をその非疾患関連型において実質的には認識しない、請求項１４に記載の結合分子。

【請求項１６】
抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項１４または１５に記載の結合分子。

【請求項１７】
ヒト抗体である、請求項１６に記載の抗体。

【請求項１８】
前記疾患は、神経疾患である、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載の結合分子。

【請求項１９】
前記疾患は、脳の疾患である、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の結合分子。

【請求項２０】
病理学的事象の部位で血液脳関門を横断することが可能である、請求項１４〜１９のいずれか１項に記載の結合分子。

【請求項２１】
ベータアミロイド斑、脳血管アミロイド、拡散性アミロイドβ沈着、神経原線維変化、過リン酸化タウ、アルファシヌクレイン陽性レヴィー小体またはジストロフィー性軸索に関連したタンパク質凝集体に結合することが可能である、請求項１４〜２０のいずれか１項に記載の結合分子。

【請求項２２】
正常な挙動に実質的に修復することができる、請求項１４〜２１のいずれか１項に記載の結合分子。

【請求項２３】
一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ）フラグメント、およびＦ（ａｂ’）_２フラグメントからなる群から選択される、請求項１４〜２２のいずれか１項に記載の結合分子。

【請求項２４】
表４に示される、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）をその可変領域に含む、抗体またはその結合フラグメントである、請求項１４〜２３のいずれか１項に記載の結合分子。

【請求項２５】
表２および３に示される、Ｖ_Ｈおよび／またはＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列を含む、請求項２４に記載の抗体または結合フラグメント。

【請求項２６】
請求項１４〜２５のいずれか１項に記載の結合分子により認識される抗原。

【請求項２７】
前述の請求項のいずれか１項に定義される、疾患関連タンパク質の少なくとも一部である、請求項２６に記載の抗原。

【請求項２８】
請求項１４〜２５のいずれか１項に記載の結合分子、または請求項２６もしくは２７に記載の抗原をコードするポリヌクレオチド。

【請求項２９】
請求項２４もしくは２５に記載の抗体または結合フラグメントの免疫グロブリン鎖の少なくとも可変領域をコードする請求項２８に記載のポリヌクレオチド。

【請求項３０】
任意に、前記抗体の他の免疫グロブリン鎖の可変領域をコードする請求項２９に記載のポリヌクレオチドと組み合わせて、請求項２８に記載のポリヌクレオチドもしくは請求項２９に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。

【請求項３１】
請求項２８もしくは２９に記載のポリヌクレオチド、または請求項３０に記載のベクターを含む、宿主細胞。

【請求項３２】
疾患関連タンパク質特異的結合分子、抗体、もしくはその結合フラグメント、または免疫グロブリン鎖を調製する方法であって、前記方法は、
（ａ） 請求項３１に記載の細胞を培養するステップと、
（ｂ） 前記培養物から、前記結合分子、その抗体、もしくは結合フラグメント、または免疫グロブリン鎖を単離するステップと、を含む、方法。

【請求項３３】
請求項２８もしくは２９に記載のポリヌクレオチドによりコードされる、または請求項３２に記載の方法により取得可能である、結合分子、その抗体、免疫グロブリン鎖、または結合フラグメント。

【請求項３４】
検出可能に標識化される、請求項１４〜２５、もしくは３３のいずれか１項に記載の結合分子、抗体、または結合フラグメント。

【請求項３５】
前記検出可能な標識は、酵素、放射性同位体、フルオロフォア、および重金属からなる群から選択される、請求項３４に記載の結合分子、抗体、または結合フラグメント。

【請求項３６】
薬剤に結合される、請求項１４〜２５、もしくは３３〜３５のいずれか１項に記載の結合分子、抗体、または結合フラグメント。

【請求項３７】
請求項１４〜２５、もしくは３３〜３６のいずれか１項に記載の結合分子、抗体、もしくは結合フラグメント、請求項２６もしくは２７に記載の抗原、請求項２８もしくは２９に記載のポリヌクレオチド、請求項３０に記載のベクター、または請求項３１に記載の細胞を含む、組成物。

【請求項３８】
医薬組成物であり、医薬的に許容可能な担体をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。

【請求項３９】
アルツハイマー病を治療するために有用な、有機小分子、抗アミロイドβ抗体、およびその組み合わせからなる群から選択される、追加剤をさらに含む、請求項３８に記載の医薬組成物。

【請求項４０】
診断組成物であり、免疫または核酸ベースの診断方法に通常使用される、試薬をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。

【請求項４１】
アルツハイマー病を治療する、またはその進行を予防するため、アルツハイマー病に関連する症状の改善のため、アルツハイマー病の存在について対象を診断またはスクリーニングするため、もしくは対象のアルツハイマー病に発症する危険性を決定するための医薬または診断組成物を調製するための、請求項１４〜２５もしくは３３〜３６のいずれか１項に記載の結合分子、抗体、もしくは結合フラグメント、またはそれらのいずれか１項に記載のものと実質的に同一の結合特異性を有する抗体、請求項２６もしくは２７に記載の抗原、請求項２８もしくは２９に記載のポリヌクレオチド、請求項３０に記載のベクター、もしくは請求項３１に記載の細胞の使用。

【請求項４２】
前記医薬組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、鼻腔内、非経口、またはエアロゾルとして投与される、請求項４１に記載の使用。

【請求項４３】
中枢神経系におけるタンパク質の異常蓄積および／または沈着を特徴とする神経疾患を治療するための方法であって、それを必要とする対象に、治療上有効な量の、請求項１４〜２５もしくは３３〜３６のいずれか１項に記載の結合分子、請求項２６または２７に記載の抗原、請求項２８もしくは２９に記載のポリヌクレオチド、請求項３０に記載のベクター、または請求項３１に記載の細胞を投与するステップを含む、方法。

【請求項４４】
前記疾患は、アルツハイマー病、ダウン症、軽度認識障害、脳アミロイド血管症、血管性認知症、多発脳梗塞性認知症、パーキンソン病、ハンチントン病、クロイツフェルト・ヤコブ病、嚢胞性線維症、またはゴーシェ病からなる群から選択される、請求項４３に記載の方法。

【請求項４５】
投与は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、鼻腔内、非経口、またはエアロゾルとして行われる、請求項４３または４４に記載の方法。

【請求項４６】
アルツハイマー病およびアミロイドβ沈着のそれぞれに関連する疾患を診断するおよび／または治療する方法であって、対象に、請求項２４もしくは２５に記載の抗体もしくは結合フラグメント、または対応する抗イディオタイプ抗体の少なくとも１つのＣＤＲを含む、治療上有効な量のリガンドアミロイドβ結合分子を投与するステップを含む、方法。

【請求項４７】
請求されるペプチドのいずれか１つに定義される疾患関連タンパク質の存在を伴う疾患の診断用のキットであって、前記キットは、請求項１４〜２５もしくは３３〜３６のいずれか１項に記載の結合分子、抗体もしくは結合フラグメント、請求項２６もしくは２７に記載の抗原、請求項２８もしくは２９に記載のポリヌクレオチド、請求項３０に記載のベクター、または請求項３１に記載の細胞を、任意に、試薬および／または使用説明書と共に含む、キット。

【請求項４８】
脳内の疾患関連タンパク質の生体内検出、もしくは疾患関連タンパク質への治療薬および／または診断用薬の標的化、対象における病理学タンパク質凝集体もしくは構造の検出、それらの形成の抑制、もしくはそれらの低減、または認知の改善、もしくは疾病に関連する認識衰退の緩徐化または回復、または病理的化合物または体液からのそれらの前駆物質の体外への抽出のための、請求項１４〜２５もしくは３３〜３６のいずれか１項に記載の、結合分子、その抗体、もしくは結合フラグメントの使用。

【請求項４９】
ＮＩ−１０１．１０、ＮＩ−１０１．１１、ＮＩ−１０１．１２、ＮＩ−１０１．１３、ＮＩ−１０１．１２Ｆ６Ａ、ＮＩ−１０１．１３Ａ、およびＮＩ−１０１．１３Ｂからなる群から選択される参照抗体と同一の、疾患関連タンパク質ネオエピトープに特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項５０】
前記抗体は、ＮＩ−１０１．１０、ＮＩ−１０１．１１、ＮＩ−１０１．１２、ＮＩ−１０１．１３、ＮＩ−１０１．１２Ｆ６Ａ、ＮＩ−１０１．１３Ａ、およびＮＩ−１０１．１３Ｂからなる群から選択される参照抗体が疾患関連ネオエピトープへ結合するのを競合的に阻害する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。

【請求項５１】
前記抗体は、ＮＩ−１０１．１０、ＮＩ−１０１．１１、ＮＩ−１０１．１２、ＮＩ−１０１．１３、ＮＩ−１０１．１２Ｆ６Ａ、ＮＩ−１０１．１３Ａ、およびＮＩ−１０１．１３Ｂからなる群から選択される抗体の抗原結合ドメインと同一の抗原結合ドメインを含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。

【図４】

【図５】

【図７】

【図６】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【公表番号】特表２０１０−５１４４５４（Ｐ２０１０−５１４４５４Ａ）
【公表日】平成２２年５月６日（２０１０．５．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４４３９９（Ｐ２００９−５４４３９９）
【出願日】平成２０年１月７日（２００８．１．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／００００５３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０８１００８
【国際公開日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【出願人】（５０７３２４６８１）ユニバーシティ・オブ・チューリッヒ (7)
【氏名又は名称原語表記】ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＺＵＲＩＣＨ
【Ｆターム（参考）】