調節物質
本発明は、式Ｉの化合物、又は薬学的に許容されるその塩に関し、式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれは独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ任意に、アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、ＣＦ３、及びニトロから選択される１つ又は複数の置換基によって置換されてもよく；Ｙは、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択される極性官能基であり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ任意に置換されてもよく；且つＢは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である；但し、
（ｉ）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺがＯＨである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＯＨ、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｍｅ、ｍｅｔａ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、及びｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ以外のものであること；及び（ii）Ａがフェニルであり、ｎは０であり、且つＺがＯＭｅである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）４ＯＨ以外のものであることを条件とする。本発明の別の態様は、筋疾患、胃腸障害の治療のための、或いは痙攣又は振戦の抑制のための医薬品の製造のための、そのような化合物の使用に関する。
（ｉ）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺがＯＨである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＯＨ、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｍｅ、ｍｅｔａ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、及びｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ以外のものであること；及び（ii）Ａがフェニルであり、ｎは０であり、且つＺがＯＭｅである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）４ＯＨ以外のものであることを条件とする。本発明の別の態様は、筋疾患、胃腸障害の治療のための、或いは痙攣又は振戦の抑制のための医薬品の製造のための、そのような化合物の使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カンナビノイド受容体を調節することが可能な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、医療用大麻、及び大麻の活性成分であるΔ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）［１］などの合成カンナビノイドの治療上の使用について、新たな関心が持たれている。
【０００３】
【化１】
【０００４】
ＴＨＣは、急性、特に慢性／神経障害性の疼痛、吐き気、摂食障害、ＡＩＤＳ、緑内障、喘息、及び多発性硬化症の抑制も含めた医療のいくつかの主な領域で、治療上有益と考えられる［Baker,D. et al, Nature 2000, 404, 84-87; Baker,D. et al, FASEB J. 2001, 15, 300-302; Schnelle,M. et al, Forsch. Komplementarmed. 1999, 6 suppl 3, 28-36］。
【０００５】
いくつかのカンナビノイドリガンドが、文献で報告されている。概してカンナビノイドリガンドは、（ｉ）（−）−Δ９−テトラヒドロカンナビノールやΔ９−ＴＨＣ［１］、CP55,940［９］などの古典的カンナビノイドと；（ii）アナンダミド［２］や２−アラキドニルグリセロール［３］などのエンドカンナビノイドと；（iii）WIN55,212［７］や選択的ＣＢ１アンタゴニストSR141716A［８］などの複素環に代表される非古典的複素環類似体とからなる、３つの主なグループに分けることができる［Pertwee,R.G., Pharmacology & Therapeutics 1997, 74, 129-180］。立体配置的に制約を受けるアナンダミド類似体についても、報告されている［Berglund,B.A. et al, Drug Design and Discovery 2000, 16, 281-294］。しかし今日まで、カンナビノイド薬の治療上の有用性は、その望ましくない精神活性により、限定されている。
【０００６】
【化２】
【０００７】
カンナビノイドは、急性、炎症性、及び神経障害性の疼痛モデルで、侵害受容処理を調節することが知られている［Pertwee,R.G., Prog. Neurobiol. 2001, 63, 569-611］。より具体的には、研究は、神経障害性痛覚過敏［Herzberg,U. et al, Neurosci. Lett. 1997, 221, 157-160］及び炎症性痛覚過敏［Richardson,J.D., Pain 1998, 75, 111-119; Jaggar,S.I. et al, Pain 1998, 76, 189-199; Calignano,A. et al, Nature 1998, 394, 277-281; Hanus, L. et al, Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.I 1999, 96, 14228-14233］のモデルにおけるカンナビノイドの役割に、重点が置かれてきた。また、カンナビノイド受容体の発現と、内因性カンナビノイドのレベルとは、炎症及び痛覚過敏の間に変化する可能性があることも提示されてきた［Pertwee,R.G., Prog. Neurobiol. 2001, 63, 569-611］。
【０００８】
カンナビノイドの信号伝達系は、２つのクローン化カンナビノイド受容体（ＣＢ１及びＣＢ２）と、アナンダミド［２］や２−アラキドノイルグリセロール［３］などのエンドカンナビノイドリガンドと、エンドカンナビノイド分解系とを含むと考えられる［Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202; Pertwee,R.G., Pharmacology of cannabinoid receptor ligands. Curr. Med. Chem. 1999, 6, 635-664］。
【０００９】
カンナビノイド系の、１つの重要な機能は、シナプス神経伝達物質放出のレギュレーターとして働くことである［Kreitzer,A.C. et al, Neuron 2001, 29, 717-727: Wilson,R.I. et al, Neuron 2001, 31, 453-462］。ＣＢ１は、ＣＮＳ中、とりわけ淡蒼球、黒質、小脳、及び海馬中に、高レベルで発現する［Howlett,A.C., Neurobiol. Dis. 1998, 5, 405-416］。これは、大麻が平静及び短期記憶処理に及ぼす既知の副作用と一致している［Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202］。ＣＢ２は白血球によって発現し、その調節は精神活性作用を誘発せず、さらにこれは、大部分の作用がＣＢ１によって媒介される症状管理の大きな目標ではない。
【００１０】
多くのカンナビノイド作用は、ＣＮＳ中の受容体によって主に媒介されるが［Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202］、末梢ＣＢ受容体も、特に疼痛及び胃腸管において重要な役割を演ずると理解される。例えばＣＢ１は、後根神経節や末梢神経、神経筋終末などの末梢組織でも発現し、それによって、ＣＮＳの外側で神経伝達を調節することが可能になる［Pertwee,R.G., Life Sci. 1999, 65, 597-605］。したがって、疼痛［Fox,A. et al, Pain 2001, 92, 91-100］、又は腸運動過剰を含むような状態での治療活性を、非ＣＮＳ部位に位置付けることができる。しかし今日まで、末梢カンナビノイド系に関する研究は、ＣＮＳ上の末梢受容体を選択的に標的とする薬物の不足により、妨げられてきた。
【００１１】
有害な精神活性作用を無くすため、ＣＮＳからカンナビノイドアゴニストを除外することが望ましい。小分子物質のＣＮＳ除外のための、２つの確立された方法がある。まず、１つの方法では、物質が血液脳関門（ＢＢＢ）を通過しないように、その物理化学的性質を慎重に制御することによって、ＣＮＳから物質を除外する。ＢＢＢは、緊密な細胞間結合及びごく僅かな開窓を有する、脳内皮細胞によって形成される［Tamai,I. et al, J.Pharm.Sci. 2000, 89, 1371-1388］。その結果、物質は、原形質膜を横断する受動拡散によって、又は能動輸送メカニズムによって、脳に進入しなければならない。したがってＢＢＢは、多くの末梢循環物質に対して効果的な障壁を形成する。
【００１２】
脳から化合物を除外する代替方法は、ＢＢＢを通過するように化合物を能動的に送出させる、構造的特徴を組み込むことである。そのような１つの例は、オピオイドアゴニストロペラミドであるが、親油性のロペラミドは、血液脳関門を通過するよう能動的に送出することが可能な、ｐ−糖タンパク質輸送体（MDR1）によって認識される、構造的特徴を含む［Wandel,C. et al, Anesthesiology 2002, 96, 913-920; Seeling,A. et al, Eur.J.Pharm.Sci. 2000, 12, 31-40］。
【非特許文献１】Baker,D. et al, Nature 2000, 404, 84-87
【非特許文献２】Baker,D. et al, FASEB J. 2001, 15, 300-302
【非特許文献３】Schnelle,M. et al, Forsch. Komplementarmed. 1999, 6 suppl 3, 28-36
【非特許文献４】Pertwee,R.G., Pharmacology & Therapeutics 1997, 74, 129-180
【非特許文献５】Berglund,B.A. et al, Drug Design and Discovery 2000, 16, 281-294
【非特許文献６】Pertwee,R.G., Prog. Neurobiol. 2001, 63, 569-611
【非特許文献７】Herzberg,U. et al, Neurosci. Lett. 1997, 221, 157-160
【非特許文献８】Richardson,J.D., Pain 1998, 75, 111-119
【非特許文献９】Jaggar,S.I. et al, Pain 1998, 76, 189-199
【非特許文献１０】Calignano,A. et al, Nature 1998, 394, 277-281
【非特許文献１１】Hanus,L. et al, Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A 1999, 96, 14228-14233
【非特許文献１２】Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202
【非特許文献１３】Pertwee,R.G., Pharmacology of cannabinoid receptor ligands. Curr. Med. Chem. 1999, 6, 635-664
【非特許文献１４】Kreitzer,A.C. et al, Neuron 2001, 29, 717-727
【非特許文献１５】Wilson,R.I. et al, Neuron 2001, 31, 453-462
【非特許文献１６】Howlett,A.C., Neurobiol. Dis. 1998, 5, 405-416
【非特許文献１７】Pertwee,R.G., Life Sci. 1999, 65, 597-605
【非特許文献１８】Fox,A. et al, Pain 2001, 92, 91-100
【非特許文献１９】Tamai,I. et al, J.Pharm.Sci. 2000, 89, 1371-1388
【非特許文献２０】Wandel,C. et al, Anesthesiology 2002, 96, 913-920
【非特許文献２１】Seeling,A. et al, Eur.J.Pharm.Sci. 2000, 12, 31-40
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、新しいカンナビノイド受容体調節物質を提供しようとするものである。より詳細には、本発明は、一般に従来技術の調節物質に関連する欠点のいくつか、例えば望ましくない精神活性作用を緩和し且つ／又は無くす、カンナビノイド受容体調節物質を提供しようとするものである。より具体的には、本発明は、末梢カンナビノイド受容体を選択的に標的とする調節物質を提供しようとするものであるが、これに限定するものではない。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の第１の態様は、式Ｉの化合物、又は薬学的に許容されるその塩に関する。
【００１５】
【化３】
【００１６】
（式中、
ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ任意に、アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、ＣＦ３、及びニトロから選択される１つ又は複数の置換基によって置換されていてもよく；
Ｙは、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択される極性官能基であり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である；
但し、
（ｉ）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺがＯＨである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、ｍｅｔａＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＯＨ、ｍｅｔａＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｍｅ、ｍｅｔａ（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、及びｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ以外のものであること；及び
（ii）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺはＯＭｅである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）４ＯＨ以外のものであることを条件とする。）
【００１７】
本発明の化合物は、好ましくは、従来技術のカンナビノイド受容体調節物質に比べて改善された水溶性及び／又は低下した親油性を示すことが有利である。
【００１８】
本発明の第２の態様は、筋疾患を治療するための医薬品の製造のための、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００１９】
【化４】
【００２０】
（式中、
ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていてもよく；
Ｙは、極性官能基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５であるものである。）
【００２１】
本発明の第３の態様は、痙攣及び振戦を抑制するための医薬品の製造のための、上記定義した式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００２２】
本発明の第４の態様は、胃腸障害を治療するための医薬品の製造のための、上記定義した式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００２３】
本発明の第５の態様は、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、又は担体と混合させた、上記定義した式Ｉａの化合物を含む、医薬品組成物に関する。
【００２４】
本発明の第６の態様は、カンナビノイド受容体活性を調節することが可能なその他の化合物を同定するためのアッセイにおける、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
カンナビノイド
カンナビノイドは、カンナビノイド受容体、特にＣＢ１及び／又はＣＢ２に結合することが可能な物体である。典型的なカンナビノイドは、インド大麻、アサに見られる、２−（２−イソプロピル−５−メチルフェニル）−５−ペンチルレゾルシノールの３０程度の誘導体を含み、その中には、植物及びその抽出物の麻薬作用を誘発させるものがある。カンナビノイドの例は、カンナビジオール、カンナビノール、トランス−Δ９−テトラヒドロカンナビノール、トランス−Δ８−テトラヒドロカンナビノール、及びΔ９−テトラヒドロ−カンナビノール酸である。カンナビノイドのその他の例には、アナンダミド、メタナンダミド、及びR(+)WIN55,212が含まれる。
【００２６】
エンドカンナビノイド
この用語は、外部から供給されたカンナビノイドとは対照的に、体内に天然に存在するカンナビノイドを意味する。エンドカンナビノイドは、Di Marzo (1998) Biochimica et Biophysica Acta vol 1392 pages 153-175に論じられている（その内容を、参照により本明細書に組み込む）。エンドカンナビノイドの例は、アナンダミドである。この物質及びアナンダミドアミダーゼに関する教示を、ＵＳ−Ａ−５８７４４５９に見出すことができる。この文献は、アナンダミドアミダーゼ阻害剤の、鎮痛薬としての使用について教示している。
【００２７】
カンナビノイド受容体
カンナビノイド受容体は、カンナビノール及び構造的に類似している化合物を結合し、且つそれらの細胞内作用を媒介する、いくつかの膜タンパク質のいずれか１つ又は複数である。
【００２８】
マリファナの精神活性成分Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）に対する２つの受容体、ＣＢ１及びＣＢ２カンナビノイド受容体が、わかっている（Pertwee 1997 Pharmacol Ther vol 74 129-180）。これら受容体のどちらも、７回膜貫通ドメインＧタンパク質結合型受容体である。ＣＢ１受容体は、脳及び精巣に見られる。ＣＢ２受容体は脾臓に見られ、脳には見られない。
【００２９】
どちらのタイプの受容体も、アラキドノイルエタノールアミド（アナンダミド）が推定上の内在リガンドであり、どちらのタイプもアデニレートシクラーゼにネガティブに結合し、細胞内環状ＡＭＰレベルが低下する。そのような受容体の配列の例は、Mus musculusから得られ、ＣＢ１、データベースコードCB1R_MOUSE、４７３アミノ酸（５２．９４ｋＤＡ）と、ＣＢ２、データベースコードCB2R_MOUSE、３４７アミノ酸（３８．２１ｋＤａ）が含まれる。ＣＢ１及びＣＢ２に関するさらなる詳細について、以下に述べる。
【００３０】
カンナビノイド受容体１（ＣＢ１又はＣＮＲ１）
ＣＢ１に関する背景の教示は、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim上に、Victor A. McKusick他によって示されている。ＣＢ１に関する以下の情報は、このソースから抽出した。
【００３１】
カンナビノイドはマリファナの精神活性成分であり、主としてΔ−９−テトラヒドロカンナビノール、並びに合成類似体であって、Matsuda他［Nature 346: 561-564, 1990］がラットの脳からカンナビノイド受容体をクローニングした。ヒト遺伝子の全コード配列のコスミドクローンを使用して、Modi及びBonner［Abstract, Cytogenet. Cell Genet. 58: 1915 only, 1991］は、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより6q14-q15にヒトＣＮＲ座をマップした。Gerard他［Biochem. J. 279: 129-134, 1991］は、ヒト脳幹ｃＤＮＡライブラリーから、カンナビノイド受容体をコード化するｃＤＮＡを単離した。推論されるアミノ酸配列は、Matsuda他［同書、1990］によってクローン化されたカンナビノイド受容体に対して９７．３％の同一部分を共有する、４７２残基のタンパク質をコード化した。これらは、ヒト精巣中に発現した同一カンナビノイド受容体が存在することの証拠を提供した。Hoehe他［New Biologist 3: 880-885, 1991］は、遺伝的連関マッピングと染色体ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションとを組み合わせることによって、ＣＮＲ遺伝子のゲノム局在化を決定した。密接な連関は、6q21.1-q23に位置付けられたＣＧＡ、θ＝０．０での最大ロッド＝２．７１により示した。さらにＣＮＲは、座D6Z1、全ての染色体のセントロメアだけに局在化し且つ染色体６上で豊富にされた配列を定めるマーカーに結合した。Ledent他［Science 283: 401-404, 1991］は、マウスの遺伝子を分裂させることによって、中枢カンナビノール受容体（ＣＢ１）の機能について調査した。突然変異マウスは、カンナビノイド薬物に応答せず、鎮痛、強化、低体温、低運動移動、及び低血圧を媒介する際の、ＣＢ１の唯一の役割が実証された。
【００３２】
カンナビノイド受容体２（ＣＢ２又はＣＮＲ２）
ＣＢ２に関する背景の教示は、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim上に、Victor A. McKusick他によって示されている。ＣＢ２に関する以下の情報は、このソースから抽出した。
【００３３】
そのよく知られた精神活性の他に、マリファナ、又はその主な活性カンナビノイド成分、Δ−９−テトラヒドロカンナビノールは、鎮痛性、抗炎症性、免疫抑制性、抗痙攣性、及び制吐作用を発揮し、同様に緑内障の眼内圧も軽減させる。精巣内で低レベルであることは別にして、脳内で発現するがその末梢では発現しない、Ｇタンパク質結合型カンナビノイド受容体−１（ＣＮＲ１; 114610）は、カンナビノイドの非精神活性作用を容易に説明するものではない。
【００３４】
前骨髄球性白血病細胞ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために、縮退プライマーを用いたＰＣＲを使用することにより［Munro, Nature 365: 61-65, 1993］、ｃＤＮＡコード化ＣＮＲ２が得られ、これを筆者は、ＣＸ５と呼んだ。配列分析では、推定される３６０アミノ酸７回膜貫通タンパク質が、ＣＮＲ１全体に対して４４％のアミノ酸同一部分を有し、且つリガンド特異性をもたらすよう提示された膜貫通残基に対して６８％の同一部分を有することが予測された。結合分析では、ＣＮＲ２が、カンナビノールのＣＮＲ１よりも高い親和性で、カンナビノイドの高親和性受容体をコードすると判定された。ノーザンブロット分析では、ＨＬ６０骨髄細胞系中の２．５−及び５．０−ｋｂの転写物の発現が、骨髄又は顆粒球分化で増加することが、明らかにされた。ラットＣＸ５同族体を使用することにより、Munro［1993,同書］は、２．５−ｋｂ転写物が脾臓で発現するが、脳、腎臓、肺、胸腺、肝臓、又は鼻上皮では発現しないことを見出した。ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション分析では、脾臓周辺帯での発現が実証された。ＰＣＲ分析では、精製された脾臓マクロファージでのＣＮＲ２発現が検出されたが、ＣＤ５＋ｔ細胞では検出されなかった。Munro［1993,同書］は、ＣＮＲ２の位置が、その内在リガンドが免疫調節の役割をすべきであることを示唆すると推測した。国際放射線ハイブリッドマッピング協会（International Radiation Hybrid Mapping Consortium）は、ＣＮＲ２遺伝子を染色体（stSG90）にマップした。
【００３５】
化合物
上述のように、本発明の化合物は、従来技術のカンナビノイド調節物質に比べ、改善された水溶性及び／又は低下した親油性を示すことが好ましい。本発明の化合物は、いかなる有意な程度にも、血液脳関門を通過しないことが好ましい。
【００３６】
本発明は、本明細書で定義された式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、及びＩｃの化合物に関する。
【００３７】
本明細書で使用する「ヒドロカルビル」という用語は、１つ又は複数のその他の適切な置換基を任意に含むことができる、少なくともＣ及びＨを含む基を指す。そのような置換基の例には、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、又は環式基を含めることができる。環式基である置換基が可能である他に、置換基の組合せで環式基を形成することができる。ヒドロカルビル基が複数のＣを含む場合、それらの炭素は、必ずしも互いに結合している必要はない。例えば、炭素の少なくとも２個が、適切な元素又は基を介して結合することができる。したがってヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有することができる。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかにされ、例えば、硫黄、窒素、酸素、リン、及びケイ素が含まれる。好ましくは、ヒドロカルビル基はアルキル基、アルケニル基、アリール基、又はシクロアルキル基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていてもよい。ヒドロカルビル基は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、又はフェニルであることが、より好ましい。
【００３８】
本明細書で使用する「アルキル」という用語は、置換（モノ−又はポリ−）又は非置換でよい、飽和直鎖及び分枝状アルキル基の両方を含む。好ましくは、アルキル基はＣ１−２０アルキル基であり、より好ましくはＣ１−１５であり、さらにより好ましくはＣ１−１０アルキル基であり、さらにより好ましくはＣ１−６アルキル基である。特に好ましいアルキル基には、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、及びヘキシルが含まれる。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。当業者なら、「アルキレン」という用語が相応に、即ち本発明の文脈において解釈されることが理解され、この「アルキレン」という用語は、末端Ｙ基を有する、直鎖又は分枝状の置換（モノ−又はポリ−）又は非置換の飽和炭素鎖を包含する。
【００３９】
本明細書で使用する「シクロアルキル」という用語は、置換（モノ−又はポリ−）又は非置換のものでよい環状アルキル基を指す。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。
【００４０】
本明細書で使用する「アルケニル」という用語は、１つ又は複数の二重結合を含有する基であって、分枝状又は非分枝状、及び置換（モノ−又はポリ−）又は非置換のものでよい基を指す。好ましくは、アルケニル基はＣ２−２０アルケニル基であり、より好ましくはＣ２−１５アルケニル基であり、さらにより好ましくはＣ２−１０アルケニル基であり、又は好ましくはＣ２−６アルケニル基である。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。当業者なら、「アルケニレン」という用語が相応に、即ち本発明の文脈において解釈されることが理解され、この「アルケニレン」という用語は、１つ又は複数二重結合を含有し且つ末端Ｙ基を有する、直鎖又は分枝状の置換（モノ−又はポリ−）又は非置換の不飽和炭素鎖を包含する。
【００４１】
本明細書で使用する「アルキニル」という用語は、分枝状又は非分枝状の置換（モノ−又はポリ−）又は非置換でよい、１つ又は複数の三重結合を含有する基を指す。好ましくは、アルキニル基はＣ２−２０アルキニル基であり、より好ましくはＣ２−１５アルキニル基であり、さらにより好ましくはＣ２−１０アルキニル基であり、又は好ましくはＣ２−６アルキニル基である。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。当業者なら、「アルキニレン」という用語が相応に、即ち本発明の文脈において解釈されることが理解され、この「アルキニレン」という用語は、１つ又は複数の三重結合を含有し且つ末端Ｙ基を有する、直鎖又は分枝状の置換（モノ−又はポリ−）非置換不飽和炭素鎖を包含する。
【００４２】
本明細書で使用する「アリール」という用語は、置換（モノ−又はポリ−）又は非置換のものでよいＣ６−１０芳香基を指す。典型的な例には、フェニル及びナフチルなどが含まれる。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。
【００４３】
「ヘテロアリール」という用語は、１個又は複数のヘテロ原子を含有する上記定義したアリール基を指す。適切なヘテロ原子は当業者に明らかにされ、例えば、硫黄、窒素、酸素、リン、及びケイ素が含まれる。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。
【００４４】
式Ｉａの化合物（本発明で使用される）は、飽和又は不飽和ヒドロカルビルリンカー基Ｘによってアリール基Ａに結合した極性官能基Ｙを含有する。適切な極性官能基は、当業者に馴染みのあるものになり、例えばＦやＯ、Ｎ、Ｃｌ、又はＢｒなど、１個又は複数の電気陰性原子を含んだ任意の官能基が含まれる。好ましい極性官能基には、ヒドロキシ、アルコキシ、アミン、イミン、ニトロ、シアノ、カルボニル含有基、及びスルホキシ含有基が含まれる。
【００４５】
式Ｉａの化合物の場合、特に好ましい極性基には、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＲ３、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３が含まれ、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である。
【００４６】
式Ｉａの化合物の場合、１つの特に好ましい実施形態では、Ｙが、ＯＲ３、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である。
【００４７】
式Ｉａの化合物の場合、本発明のさらに好ましい実施形態では、Ｙが、ＯＲ３、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ、又はヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、及び環式基から選択された１個又は複数の置換基により任意に置換されたアルキル基である。
【００４８】
式Ｉａの化合物の場合、さらにより好ましくは、Ｙが、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＭｅ、及びＣＯＮＭｅ２から選択される。
【００４９】
式Ｉの化合物の場合、極性基Ｙは、ＮＯ２、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である。
【００５０】
式Ｉの化合物の場合、好ましい極性基Ｙは、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である。
【００５１】
式Ｉの化合物の場合、本発明のさらにより好ましい実施形態で、Ｙは、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ、又はヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、及び環式基から選択された１個又は複数の置換基により任意に置換されたアルキル基である。
【００５２】
式Ｉの化合物の場合、さらにより好ましくは、Ｙが、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＭｅ、及びＣＯＮＭｅ２から選択される。
【００５３】
上記実施形態の全てにおいて、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のそれぞれが独立に、Ｈ、アルキル基、アリール基、又はシクロアルキル基であり、このそれぞれは、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、及び環式基から選択された１個又は複数の置換基により任意に置換されていてもよい。
【００５４】
本発明の、１つの特に好ましい実施形態では、ｎが０であり、即ちＢが存在せず、−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ部分がアリール基Ａに直接結合している。
【００５５】
式Ｉ及びＩａの化合物の場合、好ましくはＸ−Ｙが、
−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｐ−Ｙ；
−Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ；及び
−Ｃ（Ｒ５）（Ｒ６）Ｃ（Ｒ７）（Ｒ８）−（ＣＨ２）ｒ−Ｙ
から選択され、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のそれぞれが独立に、Ｈ又はアルキルであり、ｐ、ｑ、及びｒのそれぞれが独立に、１から６であり、より好ましくは２、３、又は４である。
【００５６】
式Ｉ及びＩａの化合物の場合、さらにより好ましくはＸ−Ｙが、
−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｐ−Ｙ；及び
−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ
から選択され、ｐ及びｑのそれぞれが独立に、１から６であり、より好ましくは２、３、又は４である。
【００５７】
１つの好ましい実施形態では、Ｒ５及びＲ６が共にＨである。
【００５８】
式Ｉ及びＩａの化合物の場合、１つの特に好ましい実施形態では、Ｘ−Ｙがｃｉｓ−Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｑ−Ｙである。
【００５９】
式Ｉ及びＩａの化合物の場合、別の好ましい実施形態では、Ｘ−Ｙが−Ｃ（Ｍｅ）２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｒ−Ｙであり、ｒが１から６であり、より好ましくは２、３、又は４である。
【００６０】
別の好ましい実施形態では、Ｘ−Ｙが（ＣＨ２）ｓ−Ｙであり、ｓは１から６であり、より好ましくは２、３、４、又は５である。
【００６１】
好ましくは、式Ｉ及びＩａの化合物の場合、Ａが、任意に置換されたフェニル又はピリジル基であり、より好ましくはフェニル基である。
【００６２】
別の好ましい実施形態では、Ａが、非置換のフェニル又はピリジル基であり、より好ましくは非置換のフェニル基である。
【００６３】
１つの特に好ましい実施形態では、前記化合物が、式Ｉｂのものである。
【００６４】
【化５】
【００６５】
（式中、Ａ、Ｂ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、上記にて定義した通りである。）
【００６６】
別の特に好ましい実施形態では、前記化合物は式Ｉｃのものである。
【００６７】
【化６】
【００６８】
（式中、Ａ、Ｂ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、上記にて定義した通りである。）
【００６９】
好ましくは、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル基、又はシクロアルキル基であり、このそれぞれは、１つ又は複数のＯＨ又はハロゲン基により任意に置換されていてもよい。
【００７０】
１つの好ましい実施形態では、ＺがＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、又はアルキル、又はシクロアルキル基であり、このそれぞれは、１つ又は複数のＯＨ又はハロゲン基により任意に置換されていてもよい。
【００７１】
１つの好ましい実施形態では、ＺがＯＲ１であり、Ｒ１は、アルキル又はシクロアルキル基であり、このそれぞれは、１つ又は複数のＯＨ又はハロゲン基により任意に置換されていてもよい。
【００７２】
１つの好ましい実施形態では、Ｚは、ＯＨ、ＯＥｔ、ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｆ、ＮＨ−シクロプロピル、ＮＨＣＨ（Ｍｅ）ＣＨ２ＯＨ、及びＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択される。
【００７３】
より好ましい実施形態では、Ｚは、ＯＥｔ、ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｆ、ＮＨ−シクロプロピル、ＮＨＣＨ（Ｍｅ）ＣＨ２ＯＨ、及びＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択される。
【００７４】
本発明の化合物を、マウスを使用して、生体外でのカンナビノイド受容体結合及び活性化に関して、且つ生体内での精神活性能力に関して調査した。化合物の脳内レベルの直接測定を使用して、ＣＮＳレベルを定量した（ＣＮＳ作用が不足している化合物に関して）。末梢カンナビノイド活性化を、腸運動アッセイを使用して評価した。結合研究のさらなる詳細は、添付の実施例のセクションに見ることができる。
【００７５】
本発明の特に好ましい化合物は、下記のものから選択する。
【００７６】
【化７】
【００７７】
さらにより好ましくは、式Ｉの化合物は下記の通りである。
【００７８】
【化８】
【００７９】
化合物（１６）が、相当なＣＮＳ作用をもたらすこと無く末梢カンナビノイド受容体を調節することを示したことは、有利である。さらに、ＣＲＥＡＥマウスで実施した実験は、化合物（１６）が、ＣＮＳ作用をもたらすこと無く痙攣の選択的阻害を実現できることを、示唆している。
【００８０】
さらにより好ましい実施形態では、化合物（１６）は、ラセミ混合物である。
【００８１】
合成
式Ｉ及びＩａの化合物は、以下のスキームに従って合成する。
【００８２】
【化９】
【００８３】
簡単に言えば、パラジウムで触媒されたSongashiraカップリング反応を使用して、様々なアルキル側鎖を３−ヨード安息香酸メチルに挿入した。標的化合物（Ｓ５）及び関連する類似体は、簡単な４段階経路によって合成した。まず、酸（Ｓ１）を、ジイミド（EDCI）の存在下でＤＬアラニノールと反応させることにより、アミド（Ｓ２）を良好な収率で得た。ＣｕＩＩ及びピロリジンの存在下での、アミドとアルキン酸とのパラジウム触媒カップリング［Hoye,R.C. et al, J.Org.Chem. 1999, 64, 2450-2453; Hopper,A.T. et al, J.Med.Chem. 1998, 41, 420-427］は、円滑に進行し、その結果、アルキンが得られた（Ｓ３）。酸（Ｓ３）を、エチルクロロホルメート及びジメチルアミンＨＣｌを使用して、（Ｓ４）に定量的に変換した。Lindlar触媒反応により、目標のアルケンが得られた（Ｓ５）。この方法の柔軟性により、Sonogashiraカップリング用の一連のアルキンを使用して、又は第１段階でのアミド形成用の別のアミンから開始することによって、多数の異なる化合物の合成が可能である。
【００８４】
療法に関する適用例
別の態様は、筋疾患を治療するための医薬品の製造のための、本発明による式Ｉａの化合物の使用に関する。好ましい実施形態は、一般式Ｉの化合物に関して既に述べたものと同一である。
【００８５】
筋疾患は、神経筋疾患であることが好ましい。
【００８６】
本明細書で使用する「薬物の調製」という文言は、薬物としての直接的な式Ｉの化合物の使用の他に、別の薬剤に関するスクリーニングプログラムでの使用、又はそのような薬物の製造の任意の段階での使用を含む。
【００８７】
「筋疾患」という用語は、あらゆる筋肉の障害又は疾患を網羅する広い意味で使用され、特に、神経障害又は疾患、より詳細には神経変性疾患、又は神経筋制御を伴う悪条件として使用される。したがって、この用語には、例えばＣＲＥＡＥ、ＭＳ、痙攣、パーキンソン病、ハンチントン病、脊髄損傷、癲癇、トゥーレット症候群、及び膀胱痙攣が含まれる。多発性硬化症及びＥＡＥで痙攣を抑制する際、末梢カンナビノイド受容体の明瞭な役割は無いが、血液：ＣＮＳ障壁が病変領域で損なわれ、治療薬を選択的に到達させることができる［Butter,C. et al, J.Neurol. Sci. 1991, 104, 9-12; Daniel,P.M. et al, J.Neurol. Sci. 1983, 60, 367-376; Juhler, M. et al, Brain Res. 1984, 302, 347-355］。
【００８８】
前述の障害の他、本発明には、失禁や喘息、気管支痙攣、しゃっくりなど、振戦又は筋痙攣が生じ又は顕著である別の分野での用途もある。
【００８９】
別の態様は、痙攣及び振戦を抑制するための医薬品の製造のための、本発明による式Ｉａの化合物の使用に関する。
【００９０】
また本発明の化合物には、様々な胃腸障害の治療での、療法としての用途もある。
【００９１】
末梢ＣＢ１受容体は、胃腸運動、腸分泌、及び胃保護を調節することが知られている。消化管は、内在カンナビノイド（アナンダミド及び２−アラキドノイルグリセロール）を含有し、カンナビノイドＣＢ１受容体は、腸管筋及び粘膜下神経上に見出すことができる。接合部前／シナプス前に位置付けられた腸内（腸管）ＣＢ１受容体の活性化は、ヒト回腸及び結腸を含めた様々な分離した腸管組織での、電気的に誘発された収縮（腸神経からのアセチルコリン放出の阻害に伴う作用）の阻害をもたらす。カンナビノイドアゴニストは、げっ歯類の生体内で腸運動を阻害し、この作用は、少なくとも部分的に、上部胃腸通過［Izzo,A.A. et al, Br.J.Pharmacol. 2000, 129, 1627-1632; Landi,M. et al, Eur.J.Pharmacol. 2002, 450, 77-83］と結腸［Pinto,L. et al, Gastroenterology 2002, 123, 227-234］の両方において、末梢（即ち腸管）ＣＢ１受容体の活性化によって媒介される。したがって、生体内での腸運動の測定は、末梢作用カンナビノイド薬物の活性を評価するための、有用なモデルである。
【００９２】
別の態様は、胃腸障害を治療するための医薬品の製造のための、本発明による式Ｉａの化合物の使用に関する。
【００９３】
好ましくは、胃腸障害は、下記のもの、即ち胃潰瘍、クローン病、分泌性下痢、及び麻痺性イレウスの、１つ又は複数から選択される。
【００９４】
本明細書で使用する「麻痺性イレウス」という用語は、腸内での物質の通過を妨げる、腸の麻痺又は不活性を指す。典型的な場合、これは、抗コリン作動薬、損傷、又は病気の結果と考えられる。麻痺性イレウスは、術後に一般的に生ずるものである。
【００９５】
好ましくは、上記療法上の適用例の全ての場合、調節物質は、末梢カンナビノイド受容体を選択的に調節する。
【００９６】
さらにより好ましくは、調節物質は、中枢カンナビノイド受容体よりも、末梢カンナビノイド受容体を選択的に調節する。
【００９７】
本明細書で使用する「選択的に」という用語は、末梢カンナビノイド受容体に選択的な調節物質を指す。これらは、中枢カンナビノイド受容体よりも選択的であることが好ましい。好ましくは、本発明の調節物質は、末梢カンナビノイド受容体に対する選択比が、中枢カンナビノイド受容体に対して１０：１よりも大きく、より好ましくは１００：１よりも大きく、より好ましくは３００：１よりも大きい。選択比は、当業者によって容易に決定することができる。
【００９８】
いくつかの適用例では、本発明の調節物質は、約１０００ｎＭ未満のＥＣ５０値を有することが好ましく、好ましくは１００ｎＭ未満、より好ましくは約７５ｎＭ未満、さらにより好ましくは約５０ｎＭ未満、好ましくは約２５ｎＭ未満、好ましくは約２０ｎＭ未満、好ましくは約１５ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満、好ましくは約５ｎＭ未満である。
【００９９】
より好ましくは、調節物質は、実質的に末梢カンナビノイド受容体のみに結合する。
【０１００】
ある特定の好ましい実施形態では、調節物質は、カンナビノイド受容体アゴニストである。本明細書で使用する「アゴニスト」という用語は、当技術分野でのその通常の意味で使用し、即ちこれが結合する受容体を機能的に活性化する化合物を意味する。
【０１０１】
ある特定の好ましい実施形態では、調節物質は、中枢カンナビノイド受容体に実質的にアゴニストとして作用しない。
【０１０２】
調節物質は、ＣＮＳから実質的に除外されることが、さらにより好ましい。したがって調節物質は、望ましくない精神活性作用などのＣＮＳ作用をもたらすこと無く、末梢カンナビノイド受容体を調節することが可能である。
【０１０３】
本発明の別の態様は、末梢カンナビノイド受容体の調節に関連した、障害を治療する方法に関し、前記方法は、投与を必要とする被験者に、上記定義した式Ｉの化合物を治療上有効な量投与することを含む。
【０１０４】
好ましくは、前記障害は、末梢カンナビノイド受容体の不活性化に関連する。
【０１０５】
医薬品組成物
本発明の他の態様は、上記定義された本発明の化合物又は薬学的に許容されるその塩を、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、又は担体と混合させた状態で含む、医薬品組成物に関する。
【０１０６】
本発明の化合物（薬学的に許容されるその塩、エステル、及び薬学的に許容される溶媒を含む）は、単独で投与することができるが、これらは一般に、特にヒトの治療のために、医薬品担体、賦形剤、又は希釈剤との混合物として投与される。医薬品組成物は、ヒト及び獣医学において、ヒト又は動物に使用することができる。
【０１０７】
本明細書に記述される、様々な種々の形の医薬品組成物のための、そのような適切な賦形剤の例は、"Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd Edition, (1994), Edited by A Wade and PJ Weller"に見出すことができる。
【０１０８】
治療の用途に許容される担体又は希釈剤は、医薬品の技術分野で周知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R.Gennaro edit. 1985)に記載されている。
【０１０９】
適切な担体の例には、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが含まれる。適切な希釈剤の例には、エタノール、グリセロール、及び水が含まれる。
【０１１０】
医薬品担体、賦形剤、又は希釈剤の選択は、意図される投与経路及び標準的な薬務に関して選択することができる。医薬品組成物は、担体、賦形剤、又は希釈剤として、或いはこれらに加えて、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤を含むことができる。
【０１１１】
適切な結合剤の例には、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えばグルコース、無水ラクトース、易流動性ラクトース、β−ラクトース、コーン甘味料、天然及び合成ガム、例えばアカシア、トラガカント、又はアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、及びポリエチレングリコールが含まれる。
【０１１２】
適切な潤滑剤の例には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。
【０１１３】
防腐剤、安定剤、染料、及び着香料も、医薬品組成物中に提供することができる。防腐剤に例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。酸化防止剤、及び懸濁化剤を使用してもよい。
【０１１４】
塩／エステル
本発明の化合物は、塩又はエステルとして、特に薬学的に許容される塩又はエステルとして存在することができる。
【０１１５】
本発明の化合物の、薬学的に許容される塩には、適切な酸付加塩又はその塩基性塩が含まれる。適切な医薬品としての塩の概説は、Berge et al, J Pharm Sci, 66, 1-19 (1977)に見出すことができる。塩は、例えば、硫酸やリン酸、ハロゲン化水素酸などの鉱酸のような強無機酸と；酢酸など、非置換又は置換（例えばハロゲンによって）の１から４個の炭素原子を有するアルカンカルボン酸などの強有機カルボン酸と；シュウ酸やマロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸、テトラフタル酸などの飽和又は不飽和ジカルボン酸と；アスコルビン酸やグリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸などのヒドロキシカルボン酸と；アスパラギン酸やグルタミン酸などのアミノ酸と；安息香酸と；或いは、メタン−又はｐ−トルエンスルホン酸など、非置換又は置換（例えばハロゲンによる）の（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−又はアリールスルホン酸などの有機スルホン酸と形成する。
【０１１６】
エステルは、エステル化される官能基に応じて、有機酸又はアルコール／水酸化物を使用して形成する。有機酸には、酢酸などの、非置換又は置換（例えばハロゲンによる）の１から１２個の炭素原子を有するアルカンカルボン酸などのカルボン酸；シュウ酸やマロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸、テトラフタル酸などの飽和又は不飽和ジカルボン酸と；アスコルビン酸やグリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸などのヒドロキシカルボン酸と；アスパラギン酸やグルタミン酸などのアミノ酸と；安息香酸と；或いは、メタン−又はｐ−トルエンスルホン酸などの、非置換又は置換（例えばハロゲンによる）の（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−又はアリール−スルホン酸などの有機スルホン酸が、含まれる。適切な水酸化物には、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウムなどの無機水酸化物が含まれる。アルコールには、非置換又は置換（例えばハロゲンによる）のものでよい、１〜１２個の炭素原子を有するアルカンアルコールが含まれる。
【０１１７】
鏡像異性体／互変異性体
既に論じた本発明の全ての態様では、本発明は、適切な場合、式Ｉ及びＩａの化合物の全ての鏡像異性体及び互変異性体を含む。当業者なら、光学的性質（１個又は複数の不斉炭素原子）又は互変異性の特性を有する化合物が、理解されよう。対応する鏡像異性体及び／又は互変異性体は、当技術分野で知られている方法によって、分離／調製することができる。したがって本発明は、鏡像異性体及び／又は互変異性体を、その分離された形のもの、又はこれらの混合物、例えば鏡像体のラセミ混合物などの形のものを包含する。
【０１１８】
立体及び幾何異性体
本発明の特定の薬剤のいくつかは、立体異性体及び／又は幾何異性体として存在することができ、例えばこれらは、１つ又は複数の不斉及び／又は幾何中心を有することができ、したがって２つ以上の立体異性及び／又は幾何形態で存在することができる。本発明は、これら阻害剤の、個々の立体異性体及び幾何異性体と、これらの混合物の全ての使用を企図するものである。特許請求の範囲で使用する用語は、前記形が適切な機能活性を維持するならば（必ずしも同じ程度とは限らないが）、それらの形を包含する。
【０１１９】
また本発明は、薬剤又は薬学的に許容されるその塩の、全ての適切な同位体の種類も含む。本発明の薬剤又は薬学的に許容されるその塩の、同位体の種類は、少なくとも１個の原子を、これと同じ原子番号を有するが自然な状態で通常見られる原子質量とは異なる原子質量を有する原子に置き換えたものと定義される。薬剤及び薬学的に許容されるその塩に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、及び塩素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３６Ｃｌなどが含まれる。薬剤及び薬学的に許容されるその塩の、ある同位体の種類、例えば３Ｈや１４Ｃなどの放射性同位元素を組み込んだものが、薬物及び／又は基質組織分布の研究では有用である。トリチウム化した、即ち３Ｈと、炭素−１４、即ち１４Ｃの同位体は、その調製及び検出が容易であるので特に好ましい。さらに重水素、即ち２Ｈなどの同位体による置換によって、より高い代謝安定性から得られるある治療上の利点がもたらされ、例えば、生体内半減期が長くなり、又は投薬要件が減少し、したがって、一部の環境では好ましいと考えられる。本発明の薬剤及び本発明の薬学的に許容されるその塩の、同位体の種類は、一般に、適切な試薬の適切な同位体の種類を使用して、従来の手順によって調製することができる。
【０１２０】
溶媒和化合物
本発明は、本発明の化合物の溶媒和形態も含む。特許請求の範囲で使用されるこの用語は、これらの形態を包含する。
【０１２１】
多形
本発明はさらに、本発明の化合物がその様々な結晶の形、多形、及び（無）水和の形にあるものに関する。化合物は、そのような化合物の合成方法で使用される溶媒からの精製及び／又は単離方法を僅かに変えることによって、そのような形のいずれかで単離できることは、製薬産業において十分確立されている。
【０１２２】
プロドラッグ
本発明はさらに、プロドラッグの形にある本発明の化合物を含む。そのようなプロドラッグは、一般に式I及びＩａの化合物であって、１つ又は複数の適切な基が、ヒト又は哺乳類の被験体に投与したときに変性を逆にすることができるように変性しているものである。そのような復帰変異は、通常、そのような被験体内で天然に存在する酵素によって行われるが、生体内での復帰変異を行うために、そのようなプロドラッグと共に第２の薬剤を投与することが可能である。そのような変性の例には、エステルが含まれ（例えば、上記にて記載したもののいずれか）、復帰変異をエステラーゼなどで実施することができる。その他のそのような系は、当業者に周知である。
【０１２３】
投与
本発明の医薬品組成物は、経口、直腸、膣、非経口、筋肉内、腹腔内、動脈内、クモ膜下内、気管支内、皮下、皮内、静脈内、鼻、頬、又は舌下からの投与経路に適応させることができる。
【０１２４】
経口投与の場合、圧縮錠、丸薬、錠剤、ゲル、ドロップ、及びカプセルが特に使用される。好ましくはこれらの組成物は、用量当たりの活性成分を１から２５０ｍｇ含有し、より好ましくは１０〜１００ｍｇ含有する。
【０１２５】
その他の投与形態には、静脈内、動脈内、クモ膜下、皮下、皮内、腹腔内、又は筋肉内から注入することができ、且つ滅菌又は滅菌可能な溶液から調製される、溶液又はエマルジョンが含まれる。本発明の医薬品組成物は、坐薬、ペッサリー、懸濁剤、エマルジョン、ローション、軟膏、クリーム、ゲル、スプレー、溶液、又は粉剤の形でもよい。
【０１２６】
経皮投与の代替の手段は、皮膚用パッチ剤の使用によるものである。例えば活性成分は、ポリエチレングリコール又は流動パラフィンの水性エマルジョンからなるクリームに組み入れることができる。活性成分は、必要と考えられる安定化剤及び防腐剤と一緒に、白蝋又は白色軟質パラフィンベースからなる軟膏に１から１０重量％の間の濃度で組み入れることもできる。
【０１２７】
注入可能な形では、用量当たりの活性成分が１０〜１０００ｍｇの間で含有され、好ましくは１０〜２５０ｍｇの間である。
【０１２８】
組成物は、単位剤形に配合することができ、即ち、１回分の用量を含有するよう個別に分けられた形、或いは、単位用量を複数回分又はサブユニット分含有する形に配合することができる。
【０１２９】
投薬量
当業者なら、必要以上の実験をすること無く、被験体に投与される即時組成物の１つの適切な用量を、容易に決定することができる。典型的な場合、医師は、個々の患者に最も適したものになる実際の用量を決定することになり、これは、用いられる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用時間、年齢、体重、全身の健康、性別、食生活、投与形態及び時間、排泄速度、複合薬、特定の状態の重症度、個々が受けている療法を含めた様々な要因に応じて変わることになる。本明細書に開示される投薬量は、平均的なケースの例示である。当然ながら、より高く又はより低い投薬量範囲に値し且つそのような範囲が本発明の範囲内にある、個々の場合が存在する可能性がある。
【０１３０】
必要性に応じて、薬剤は、０．０１から３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．１から１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１から１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、投与することができる。
【０１３１】
例示的な実施形態では、１０から１５０ｍｇ／日が、１回又は複数回に分けた用量で患者に投与される。
【０１３２】
組合せ
特に好ましい実施形態では、本発明の１種又は複数の化合物を、１種又は複数のその他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与する。そのような場合、本発明の化合物は、１種又は複数のその他の薬学的に活性な薬剤と共に、連続的に、同時に、又は順次投与することができる。
【０１３３】
アッセイ
本発明は、アッセイ、即ちカンナビノイド受容体、より好ましくは末梢カンナビノイド受容体を調節することができる薬剤の、スクリーニングに使用されるアッセイを使用し、且つ包含する。そのようなアッセイの詳細については、後で示す。
【０１３４】
したがって、本発明の別の態様は、カンナビノイド受容体の活性を調節することが可能な別の化合物を同定するためのアッセイにおける、式Ｉａの化合物又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。アッセイは、競合結合アッセイであることが好ましい。
【０１３５】
そのようなアッセイでは、アミノ酸配列及び／又はヌクレオチド配列などの適切な標的の１つ又は複数を使用して、末梢カンナビノイド受容体を調節することが可能な薬剤の同定を行う。そのような試験で用いられる標的は、溶液中で自由になり、固体支持体に固着され、細胞表面に担持され、又は細胞内に位置付けられる。標的活性の消滅、又は標的と試験される薬剤との間の結合複合体の形成を、測定することができる。
【０１３６】
本発明のアッセイはスクリーニングでよく、それによって、いくつかの薬剤が試験される。１つの態様では、本発明のアッセイ方法は、高速大量処理スクリーンである。
【０１３７】
薬物スクリーニングのための技法は、１９８４年９月１３日に公開されたGeysenの欧州特許出願第８４／０３５６４号に記載されている。要約すれば、多数の異なる小ペプチド試験化合物を、プラスチックピンや何らかのその他の表面などの、固体基板上で合成する。ペプチド試験化合物を、適切な標的又はその断片と反応させ、洗浄する。次いで、当技術分野で周知の方法を適切に適合させることなどによって、結合部分を検出する。精製した標的は、薬物スクリーニング技法で使用するために、プレート上に直接被覆することもできる。或いは、非中和抗体を使用して、ペプチドを捕獲し、それを固体支持体上に固定化することができる。
【０１３８】
また本発明は、競合薬物スクリーニングアッセイの使用も企図するものであり、この場合、標的に結合することが可能な中和抗体が、標的に結合させるための試験化合物と特異的に競合する。
【０１３９】
スクリーニングのための別の技法は、物質に対して適切な結合親和性を有する薬剤の、高速大量処理スクリーニング（ＨＴＳ）を行い、これはＷＯ−Ａ−８４／０３５６４に詳細に記載されている方法に基づくものである。
【０１４０】
本発明のアッセイ方法は、定量アッセイと同様に、試験化合物の小規模及び大規模スクリーニングの両方に適したものになることが予測される。
【０１４１】
好ましい態様では、本発明のアッセイは、表面にＣＢ１受容体を呈示する細胞を利用する。これらの細胞は、そのような細胞を有する被験体から分離することができる。しかし細胞は、トランスフェクションによってこれらの細胞がその表面にＣＢ１受容体を呈示するように、細胞をトランスフェクトすることによって調製することが好ましい。
【０１４２】
本発明の１つの態様は、
（ａ）上述のアッセイ方法を実施するステップと、
（ｂ）１種又は複数のカンナビノイド受容体を調節することが可能な、１種又は複数の候補化合物を同定するステップと、
（ｃ）ある量の前記１種又は複数の候補化合物を調製するステップと
を含むプロセスに関する。
【０１４３】
本発明の別の態様は、
（ａ）上述のアッセイ方法を実施するステップと、
（ｂ）１種又は複数のカンナビノイド受容体を調節することが可能な、１種又は複数の候補化合物を同定するステップと、
（ｃ）前記１種又は複数の候補化合物を含む医薬品組成物を調製するステップと
を含むプロセスを提供する。
【０１４４】
本発明の別の態様は、
（ａ）上述のアッセイ方法を実施するステップと、
（ｂ）１種又は複数のカンナビノイド受容体を調節することが可能な、１種又は複数の候補化合物を同定するステップと、
（ｃ）１種又は複数のカンナビノイド受容体を調節することが可能な、１種又は複数の候補化合物を変性させるステップと、
（ｄ）上述のアッセイ方法を実施するステップと、
（ｅ）任意に、前記１種又は複数の候補化合物を含む医薬品組成物を調製するステップと
を含むプロセスを提供する。
【０１４５】
また本発明は、上述の方法によって同定された候補化合物にも関する。
【０１４６】
本発明のさらに別の態様は、上述の方法によって同定された候補化合物を含む医薬品組成物に関する。
【０１４７】
本発明の別の態様は、筋疾患及び／又は胃腸障害の治療で使用される医薬品組成物の調製における、上述の方法によって同定された候補化合物の使用に関する。
【０１４８】
上記方法は、１種又は複数のカンナビノイド受容体、より好ましくは末梢カンナビノイド受容体の、調節物質として有用な候補化合物のスクリーニングに使用することができる。
【０１４９】
レポーター
広く様々なレポーターを、本発明のアッセイ方法（並びにスクリーニング）で使用することができ、好ましいレポーターは、都合良く検出可能なシグナルを供給するものである（例えば分光法によって）。例として、レポーター遺伝子は、光吸収特性を変化させる反応を触媒する酵素を、コード化することができる。
【０１５０】
その他のプロトコルは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）、ラジオイムノアッセイ（RIA）、及び蛍光発色セルソーター（FACS）を含む。２つの不干渉エピトープに対して反応性のあるモノクローナル抗体を利用する、２部位モノクローナルベースイムノアッセイも、使用することができる。これら及びその他のアッセイは、他の場所にも記載されているが、とりわけHampton R et al[1990, Serological Methods, A Laboratory Manual, APS Press, St Paul MN]及びMaddox DE et al[1983, J Exp Med 15 8: 121 l]に記載されている。
【０１５１】
レポーター分子の例には、（ガラクトシダーゼ、インベルターゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、（グルクロニダーゼ、エクソ−グルカナーゼ、及びグルコアミラーゼが含まれるが、これらに限定されない。或いは、放射標識し又は蛍光タグ標識したヌクレオチドを新生転写物に組み込むことができ、次いで、これがオリゴヌクレオチドプローブに結合したときに同定する。
【０１５２】
他の例として、Pharmacia Biotech（Piscataway, NJ）やPromega（Madison, WI）、US Biochemical Corp（Cleveland, OH）などのいくつかの会社は、商用キット及びアッセイ手順に関するプロトコルを供給している。適切なレポーター分子又は標識には、これらの放射性核種、酵素、蛍光、化学発光、又は色素生産性の薬剤、並びに基質、補助因子、阻害剤、磁性粒子などが含まれる。そのような標識の使用を教示する特許には、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９、及びＵＳ−Ａ−４３６６２４１が含まれる。
【０１５３】
ＣＢ１受容体及びＣＢ２受容体結合アッセイ
ＣＢ１受容体結合アッセイとＣＢ２受容体結合アッセイの詳細は、Petrocellis et al [2000 FEBS Letter 483 52-56]に見ることができる。この参考文献からのアッセイについて、関係ある情報を以下に述べる。他のアッセイを使用することができる。
【０１５４】
ＣＢ１受容体に関する置換アッセイを、高親和性リガンドとしての［３Ｈ］SR141716A（０．４ｎＭ、５５Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Amerscham社製）及び前述の濾過技法［１２〜１４］を使用して、凍結したオスＣＤラット脳（Charles River社製、イタリア）からの膜製剤（０．４ｍｇ／チューブ）上で、且つ１００μＭ PMSFの存在下で実施した。特異的結合を、１μＭ SR 14176A（Sanofi Recherch、フランスから寄贈）を用いて計算したが、これは８４．０％であった。ＣＤラットからの脾臓を使用して、膜（０．４ｍｇ／チューブ）を調製し、前述のように［１４］、［３Ｈ］WIN55,212-2（０．８ｎＭ、５０．８ＣＩ／ｍｍｏｌ、NEN-Dupont社製）を使用して、且つやはり１００μＭ PMSFの存在下で、ＣＢ２結合アッセイを実施した。特異的結合を、１μＭ HU-348（Prof.R.Mechoulam及びPharmosから寄贈）を用いて計算したが、これは７５．０％であった。全ての場合において、Cheng-prusoff式をＩＣ５０値（GraphPadによって得られた）に当てはめることによりＫ１値を計算したが、これは、試験化合物の濃度を増大させることによって、結合した放射性リガンドの置換を行うためのものである［特定の参考文献に関する詳細は、その文書自体の中に見ることができる］。
【０１５５】
宿主細胞
本発明で使用されるポリヌクレオチド、例えば調節物質として使用され、又は調節物質を発現させるものとして使用されるようなものを、宿主細胞に導入することができる。
【０１５６】
「宿主細胞」という用語は、本発明に関し、本発明の調節物質を含むことができる任意の細胞を含む。
【０１５７】
この場合、ポリヌクレオチドは、原核細胞又は真核細胞に、例えば酵母、昆虫、又は哺乳類の細胞に導入することができる。
【０１５８】
本発明のポリヌクレオチドは、トランスフェクションや形質転換、電気穿孔法などの、当技術分野で知られている様々な技法を使用して、適切な宿主細胞に導入することができる。例えば、レトロウイルスや単純ヘルペスウイルス、アデノウイルスなどの組換えウイルスベクターによる形質転換、核酸の直接注入、及び微粒子銃による形質転換を引き起こすことが可能である。
【０１５９】
したがって、本発明の他の実施形態は、本発明の標的であり又はその標的を発現するポリヌクレオチドを用いて形質転換され又はトランスフェクトされた、宿主細胞を提供する。前記ポリヌクレオチドは、標的になり又は標的を発現することになるポリヌクレオチドの複製及び発現用の、ベクターを有することが好ましい。細胞は、前記ベクターに適合するよう選択され、例えば、原核（例えば細菌）、真菌、酵母、又は植物細胞でよい。
【０１６０】
グラム陰性菌である大腸菌（E.coli）は、異種遺伝子発現用の宿主として広く使用される。しかし、大量の異種タンパク質は、細胞内に蓄積される傾向がある。その後に行われる、大腸菌細胞内タンパク質の大部分からの所望のタンパク質の精製は、時々難しくなる可能性がある。
【０１６１】
大腸菌とは対照的に、バチルス（Bacillus）属からの細菌は、培地にタンパク質を分泌することができるので、異種宿主として非常に適切である。宿主として適切なその他の細菌は、ストレプトマイセス（Streptomyces）属及びシュードモナス（Pseudomonas）属からのものである。
【０１６２】
本発明のポリペプチドをコード化するポリヌクレオチドの性質、及び／又は発現したタンパク質のさらなる処理に対する望ましさに応じて、酵母やその他の真菌などの真核宿主が好ましいと考えられる。一般に、酵母菌は、真菌細胞よりも取扱いが容易であるので好ましい。しかし、一部のタンパク質は、酵母菌からの分泌が不十分であり、又は場合によっては適正に処理されない（例えば、酵母中の過剰なグリコシル化）。このような場合、異なる真菌宿主生物を選択すべきである。
【０１６３】
本発明の範囲内で適切な発現宿主の例は、アスペルギルス（Aspergillus）種（ＥＰ−Ａ−０１８４４３８及びＥＰ−Ａ−０２８４６０３に記載されているものなど）やトリコデルマ（Trichoderma）種などの真菌；バチルス種（ＥＰ−Ａ−０１３４０４８及びＥＰ−Ａ−０２５３４５５に記載されているものなど）やストレプトマイセス種、シュードモナス種などの細菌；及びクルイベロマイセス（Kluyveromyces）種（ＥＰ−Ａ−００９６４３０及びＥＰ−Ａ−０３０１６７０に記載されているものなど）やサッカロマイセス（Saccharomyces）種などの酵母である。例として、典型的な発現宿主は、Aspergillus niger、Aspergillus niger var.tubigenis、Aspergillus niger var.awamori、Aspergillus aculeatis、Aspergillus nidulants、Aspergillus orvzae、Trichoderma reesei、Bacillus subtilis、Bacillus licheniformis、Bacillus amyloliquefaciens、Kluyveromyces lactis、及びSaccharomyces cerevisiaeから選択することができる。
【０１６４】
大規模に変性されたポリペプチドは、その機能を完全にするために、正しい処理を必要とする可能性がある。そのような場合、哺乳動物細胞発現系（ＨＥＫ−２９３やＣＨＯ、ＨｅＬＡなど）が必要とされ、ポリペプチドは細胞内で、又は細胞膜上で発現し、或いは適切なリーダー配列に先行される場合には、培地内に分泌される。
【０１６５】
適切な宿主細胞、例えば酵母や真菌、植物、哺乳類などの宿主細胞の使用は、本発明の組換え発現産物に最適な生物活性を与えることが必要と考えられるので、翻訳後修飾（例えば、ミリストイル化、グリコシル化、切断、脂質化、及びチロシン、セリン、又はトレオニンのリン酸化）をもたらす可能性がある。
【０１６６】
生物
本発明に関し、「生物」という用語は、本発明による標的及び／又はそこから得られる産物を含むことができる、任意の生物を含む。生物の例には、真菌、酵母、又は植物を含めることができる。
【０１６７】
本発明に関し、「トランスジェニック生物」という用語は、本発明による標的及び／又は得られた産物を含む任意の生物を含む。
【０１６８】
宿主細胞／宿主生物の形質転換
先に述べたように、宿主生物は、原核又は真核生物にすることができる。適切な原核宿主の例には、大腸菌及び枯草菌（Bacillus subtilis）が含まれる。原核宿主の形質転換に関する教示は、当技術分野で十分実証されており、例えば、Sambrook et al [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press]、及びAusubel et al, [Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons, Inc.]を参照されたい。
【０１６９】
原核宿主を使用する場合、ヌクレオチド配列は、イントロンの除去などによって、形質転換前に適切に修飾する必要がある。
【０１７０】
別の実施形態では、トランスジェニック生物が酵母でよい。この点に関し、酵母は、異種遺伝子発現用のビヒクルとしても、広く使用されている。サッカロミセスセレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）には、異種遺伝子発現のための使用も含め、工業的な用途としての長い歴史がある。サッカロミセスセレビジエでの異種遺伝子の発現は、Goodey et al [1987, Yeast Biotechnology, D R Berry et al, eds, pp 401-429, Allen and Unwin, London]及びKing et al [1989, Molecular and Cell Biology of Yeasts, E F Walton and G T Yarronton, eds, pp 107-133, Blackie, Glasgow]に概説されている。
【０１７１】
いくつかの理由で、サッカロミセスセレビジエは、異種遺伝子発現に十分適している。第１に、ヒトに対して病原性が無く、ある内毒素を産生することができない。第２に、様々な目的の何世紀にもわたる商業的開発の後の、安全な使用という長い歴史がある。この結果、広く公に受け入れられるようになった。第３に、大規模な商業的利用及び生物に傾注された研究の結果、サッカロミセスセレビジエの遺伝子及び生理学、並びに大規模な発酵特性に関する豊富な知識が得られた。
【０１７２】
サッカロミセスセレビジエでの異種遺伝子発現、及び遺伝子産物の分泌の原理の概説は、E Hinchcliffe E Kenny [1993, "Yeast as a vehicle for the expression of heterologous genes", Yeasts, Vol 5, Anthony H Rose and J Stuart Harrison, eds, 2nd edition, Academic Press Ltd.]に示されている。その維持のために宿主ゲノムとの組換えを必要とする組込みベクター、及び自己複製プラスミドベクターを含めた、いくつかのタイプの酵母ベクターが利用可能である。
【０１７３】
トランスジェニックサッカロマイセスを調製するために、酵母での発現を目的として設計された構成体に本発明のヌクレオチド配列を挿入することにより、発現構成体を調製する。異種発現に使用されるいくつかのタイプの構成体が、開発されている。この構成体は、本発明のヌクレオチド配列に融合した酵母中で活性なプロモーターを含有し、通常は、GAL1プロモーターなどの酵母由来のプロモーターが使用される。通常、SUC2シグナルペプチドをコード化する配列など、酵母由来のシグナル配列を使用する。酵母中で活性なターミネーターは、発現系を終了させる。
【０１７４】
酵母の形質転換では、いくつかの形質転換プロトコルが開発されている。例えば、本発明によるトランスジェニックサッカロマイセスは、Hinnen et al [1978, Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 75, 1929]; Beggs,J D [1978, Nature, London, 275, 104];及びIto,H et al [1983, J Bacteriology 153, 163-168]の教示に従って調製することができる。
【０１７５】
形質転換した酵母細胞は、様々な選択的マーカーを使用して選択する。形質転換で使用されるマーカーには、LEU2やHIS4、TRP1などのいくつかの栄養要求性マーカーと、アミノグリコシド抗生物質マーカー、例えばG418などの、主流を占める抗生物質抵抗性マーカーとがある。
【０１７６】
別の宿主生物は、植物である。遺伝子操作された植物の構成の基本原理は、遺伝情報を植物ゲノムに挿入して、この挿入された遺伝物質の安定な維持が行われるようにすることである。遺伝情報を挿入するためのいくつかの技法が存在し、２つの主な原理は、遺伝情報の直接的な導入と、ベクター系を用いた遺伝情報の導入である。一般的技法の概説は、Potrykus [Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol [1991]42:205-225]、及びChristou [Agro-Food-Industry Hi-Tech March/April 1994 17-27]の論文に見ることができる。植物の形質転換に関する他の教示は、ＥＰ−Ａ−０４４９３７５に見ることができる。
【０１７７】
本発明のヌクレオチド配列に適したその他の宿主には、高等真核細胞、例えば昆虫細胞や脊椎動物細胞などであって、特に、ヒト細胞も含めた哺乳類細胞、又はその他の多細胞生物からの有核細胞が含まれる。近年、培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖が、日常的な手順になっている。有用な哺乳類宿主細胞系の例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞やＮＩＨ ３Ｔ３細胞、ＨｅＬａ細胞、２９３Ｔ細胞などの、上皮又は線維芽細胞系である。
【０１７８】
本発明のヌクレオチド配列は、宿主細胞に安定に組み込むことができ、又は当技術分野で知られている方法を使用して、一時的に発現させることができる。例として、安定にトランスフェクトされた哺乳類細胞は、選択可能なマーカー遺伝子を有する発現ベクターを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクトされた細胞を、マーカー遺伝子を発現させる細胞に選択的な条件下で成長させることによって、調製することができる。一時的なトランスフェクタントを調製するには、哺乳類細胞に、レポーター遺伝子をトランスフェクトして、トランスフェクション効率をモニタする。
【０１７９】
そのように安定な又は一時的にトランスフェクトされた細胞を生成するには、細胞に、十分な量の本発明のヌクレオチド配列をトランスフェクトすべきである。本発明のヌクレオチド配列の正確な量は、経験的に決定することができ、特定の細胞及びアッセイに合わせて最適化することができる。
【０１８０】
したがって本発明は、標的になり又は標的を発現することになるヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する方法も提供する。ヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、コード化タンパク質の発現に適した条件下で培養することができる。組換え細胞によって生成されたタンパク質は、細胞の表面に呈示される。望みに応じて、且つ当業者に理解されるように、コード配列を含有する発現ベクターは、コード配列の分泌を特定の原核又は真核細胞膜内に向けるシグナル配列を用いて、設計することができる。その他の組換え構成体は、コード配列と、ポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列とを接合することができ、それによって、可溶性タンパク質の精製が促進される[Kroll DJ et al (1993) DNA Cell Biol 12:441-53]。
【０１８１】
本発明を、一例として且つ下記の図を参照しながら、さらに記述する。
【実施例】
【０１８２】
化合物を、分取Ｃ−１８カラム（Hypersil PEP １００×２１ｍｍ内径、５μｍ粒径、及び１００Å孔径）及び２０分にわたる定組成勾配を使用する逆相ＨＰＬＣ（Gilson）によって精製した。
【０１８３】
Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−ヨードベンズアミド（１）
【０１８４】
【化１０】
【０１８５】
窒素雰囲気中、室温で、３−ヨード安息香酸（１０．０２ｇ、４０．３０ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタンに溶かした溶液に（１８０ｍＬ）、EDCI（７．７２ｇ、４０．３０ｍｍｏｌ）を添加し、その後トリエチルアミン（８．０ｍＬ、６０．４５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、さらに５分間室温で撹拌した。次いでDL Alaninol（３．０２ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、飽和塩水及び飽和重炭酸ナトリウムの混合物で洗浄し（１：１；２×１５０ｍＬ）、その後、飽和塩水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機物を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を真空蒸発させた。残留物を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１％から８％ メタノール勾配）、化合物１が、白色固体として得られた（４．１４ｇ、１３．６ｍｍｏｌ、収率３４％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．４１（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、３．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．５，Ｊ２ １０．９Ｈｚ）、３．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ２．９，Ｊ２ １０．９Ｈｚ）、４．３８（１Ｈ，ｍ）、６．４６（１Ｈ，ｍ）、７．２７（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８８Ｈｚ）、８．２１（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．４９（ＣＨ３）、４８．５３（ＣＨ２）、６７．１９（ＣＨ２）、９４．５９（Ｃ）、１２６．７９（ＣＨ）、１２９．５８（ＣＨ）、１３０．６２（ＣＨ）、１３６，３７（ＣＨ）、１３６．８３（Ｃ）、１６６．７１（Ｃ）。
Ｃ１０Ｈ１１ＮＯ２Ｉ・１／２Ｈ２Ｏ 計算値：Ｃ ３８．２３％、Ｈ ３．８５％、Ｎ ４．４６％；実測値：Ｃ ３８．９５％、Ｈ ３．８０％、Ｎ ４．０８％［Drug Design and Discovery 2000, 281-294］
【０１８６】
薗頭（Sonogashira）カップリング反応の一般的手順
方法Ａ
［Tetrahedron 2000, 56, 4777-4792］ 塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）（３．５モル％）、ヨウ化銅（Ｉ）（８モル％）、及びトリエチルアミン（４ｍｍｏｌ）を、Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−ヨードベンズアミド（１）（１ｍｍｏｌ）をDMF（５ｍＬ）に溶かした溶液に添加した。混合物を、窒素雰囲気中で１時間、室温で撹拌した。アルキン（１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物を、シリカゲル上でのショートフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１％から４％ メタノール勾配）、所望の化合物が得られた。
【０１８７】
Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−（５−ヒドロキシ−ペント−１−イニル）−ベンズアミド（２）
【０１８８】
【化１１】
【０１８９】
指定された化合物（２）が合成されるよう、方法Ａを使用し、（１）（０．５０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を４−ペンチル−１−オールに結合させた結果、Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−（５−ヒドロキシ−ペント−１−イニル）−ベンズアミド（２）（０．３１４ｇ、１．２０ｍｍｏｌ；７３％）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．１９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．６８〜１．８１（３Ｈ，ｍ）、２．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ ６．９Ｈｚ）、３．０４〜３．１７（１Ｈ，ｍ）、３．３９〜３．７４（５Ｈ，ｍ）、４．１２〜４．２３（１Ｈ，ｍ）、６．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、７．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ６．３，Ｊ２ １１．６７Ｈｚ）、７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．６８（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．３０（ＣＨ３）、１７．４４０（ＣＨ３）、３１．６６（ＣＨ２）、４８．４９（ＣＨ２）、６１．９２（ＣＨ２）、６７．００（ＣＨ２）、８０．６４（Ｃ）、９１．０３（Ｃ）、１２４．６６（Ｃ）、１２６．７９（ＣＨ）、１２８．９３（ＣＨ）、１３０．３２（ＣＨ）、１３４．７４（ＣＨ）、１３４．９０（Ｃ）、１６７．７９（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２６２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９０】
３−Ｈｅｐｔ−１−イニル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（３）
【０１９１】
【化１２】
【０１９２】
指定された化合物（３）が合成されるよう、方法Ａを使用し、（１）（０．２５ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を１−ヘプチンに結合させた結果、３（０．２３６ｇ、０．８０ｍｍｏｌ；９５％）が無色の油として得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．２２（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．２９〜１．４１（４Ｈ，ｍ）、１．５３〜１．６０（２Ｈ，ｍ）、２．３６（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、２．８１（２Ｈ，ｍ）、２．８９（１Ｈ，ｍ）、４．１５〜４．１９（１Ｈ，ｍ）、６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．３Ｈｚ）、７．２４（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７３（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１４．３１（ＣＨ３）、１７．４０（ＣＨ３）、１９．７１（ＣＨ２）、２２．５７（ＣＨ２）、２８．７３（ＣＨ２）、３１．４９（ＣＨ２）、４８．４４（ＣＨ）、６６．７９（ＣＨ２）、６７．００（ＣＨ２）、８０．１３（Ｃ）、９２．０４（Ｃ）、１２４．９７（Ｃ）、１２６．５３（ＣＨ）、１２８．９０（ＣＨ）、１３０．３３（ＣＨ）、１３２．４５（ＣＨ）、１３４．９５（Ｃ）、１６７，８０（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２７４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９３】
３−（５−シアノ−ペンチル−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（７）
【０１９４】
【化１３】
【０１９５】
指定された化合物（７）が合成されるよう、方法Ａを使用し、（１）（０．３００ｇ、０．９８３ｍｍｏｌ）をヘキス−５−インニトリル（１１９ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）に結合させた結果、３−（５−シアノ−ペンチル−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（７）が０．１２４ｇ得られ、精製後の収率は４６．６％であった。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．９７（２Ｈ，ｍ）、２．５５〜２．６４（４Ｈ，ｍ）、３．６７（１Ｈ，ｍ）、３．７８（１Ｈ，ｍ）、４．２８（１Ｈ，ｍ）、６．４１（１Ｈ，ｍ）、７．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．８０（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．６８（ＣＨ２）、１７．５０（ＣＨ３）、１８．９４（ＣＨ２）、２４．８７（ＣＨ２）、４８．５２（ＣＨ）、６７．２２（ＣＨ２）、８１．９５（Ｃ）、８８．５（Ｃ）、１１９．５５（Ｃ）、１２４．１３（Ｃ）、１２７．０７（ＣＨ）、１２９．０６（ＣＨ）、１３０．４５（ＣＨ）、１３４．８０（ＣＨ）、１３５．００（Ｃ）、１６７．６１（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２７１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９６】
方法Ｂ
［J.Org.Chem. 1999, 64, 4777-4792; J.Med.Chem. 1998, 41, 420-427］ テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２モル％）及びヨウ化銅（Ｉ）（７モル％）を、丸底フラスコに入れたピロリジン（１５ｍＬ）に添加し、窒素雰囲気中で５分間、室温で撹拌した。この溶液に、Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−ヨードベンズアミド（ｍｍｏｌ）を添加し、さらに１５分間室温で撹拌した。アルキン（１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を６０℃で３時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物を、DOWEX50 WX80（出発材料の１０×重量）で処理し、DOWEX50 WX80をアセトニトリルで洗浄し（３×２０ｍＬ）、次いでアセトニトリル／水（３／１）の混合物中に懸濁させた。上記残留物をアセトニトリル／水（１：１、２０ｍＬ）中に溶解し、樹脂懸濁液に添加し、２０分間振盪させた。樹脂を濾別し、アセトニトリル／水（３／１）で洗浄し、溶媒を、真空中で濾液から除去した。残留物を、シリカゲル上でのショートフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ、１％から８％ メタノール勾配、１％ ＡｃＯＨ）、所望の化合物が得られた。
【０１９７】
方法Ｂ１：DOWEX50 WX80による組成材料の処理を、アセトニトリル／水（３／１）の代わりにメタノールの存在下で行った。
【０１９８】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−５−イン酸（４）
【０１９９】
【化１４】
【０２００】
ヨードベンズアミド（１）（２．００ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を、方法Ｂを使用して５−ヘキシン酸と結合し、生成物（４）（１．８７ｇ、６．４２ｍｍｏｌ；収率９９％）を得た。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．４９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．１４（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、２．６７〜２．７６（４Ｈ，ｍ）、３．８３〜３．９０（２Ｈ，ｍ）４．３９〜４．４５（１Ｈ，ｍ）７．６４（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、８．１０（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤ３ＯＤ）；１７．４７（ＣＨ２）、１９．９９（ＣＨ３）、３６．２５（ＣＨ２）、６６．５４（ＣＨ２）、８１．８２（Ｃ）、９１．５３（Ｃ）、１２６．０３（Ｃ）、１２８．０５（ＣＨ）、１２９．９９（ＣＨ）、１３１．７５（ＣＨ）、１３５．６９（ＣＨ）、１３６．５８（Ｃ）、１６８．５３８（Ｃ）。
ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ ２９０（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０１】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）−フェニル］−ヘキス−５−イン酸メチルエステル（２０）
【０２０２】
【化１５】
【０２０３】
方法Ｂ１を後処理で使用した場合、６−［３−９（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）−フェニル］−ヘキス−５−イン酸メチルエステル（２０）は、酸４の代わりに得られた。１（０．１００ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を５−ヘキシン酸（０．０９１ｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）と結合した結果、２０が得られた（０．０９１ｇ、０．２７ｍｍｏｌ、収率８５％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３１（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、２．０３（３Ｈ，ｓ）、２．３９〜２．５９（４Ｈ，ｍ）、３．６１〜３．７２（２Ｈ，ｍ）、４．１９〜４．２７（１Ｈ，ｍ）、７．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、８．０５（１Ｈ，ｓ）。
【０２０４】
５−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−４−イン酸（５）
【０２０５】
【化１６】
【０２０６】
ヨードベンズアミド（１）（２．００ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を、方法Ｂを使用して５−ヘキシン酸と結合させ、（４）を得た（１．８７ｇ、６．４２ｍｍｏｌ；収率９９％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤ３ＯＤ）；１．４０（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．７０〜２．８２４（２Ｈ，ｍ）、２．８７〜２．８９（２Ｈ，ｍ）、３．７４〜３．７７（２Ｈ，ｍ）、４．３０〜４．３６（１Ｈ，ｍ）、７．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９９（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤ３ＯＤ）；１６．２１（ＣＨ２）、１７．０３（ＣＨ３）、３４．９４（ＣＨ２）、６６．０８（ＣＨ２）、８１．０５（Ｃ）、９０．５３（Ｃ）、１２５．４６（Ｃ）、１２７．７０（ＣＨ）、１２９．５６（ＣＨ）、１３１．３９（ＣＨ）、１３５．２７（ＣＨ）、１３６．１９（Ｃ）、１６９．２８（Ｃ）、１７５．８０（Ｃ）。
【０２０７】
７−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−６−イン酸（６）
【０２０８】
【化１７】
【０２０９】
ヨードベンズアミド（１）（０．５０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を、方法Ｂを使用して６−ヘプチン酸（０．２１２ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）と結合させた結果、７−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−６−イン酸（６）が得られた（０．４８７ｇ、１．６０ｍｍｏｌ；収率９８％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤ３ＯＤ）；１．２２（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．４４〜１．６８（２Ｈ，ｍ）、１．７３〜１．８０（２Ｈ，ｍ）、２．３０〜２．４６（２Ｈ，ｍ）、３．５４〜３．６３（２Ｈ，ｍ）、４．１２〜４．３９（１Ｈ，ｍ）７．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．８２（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤ３ＯＤ）；１７．０６（ＣＨ３）、１９．７０（ＣＨ２）、２５．３９（ＣＨ２）、２９．２３（ＣＨ２）、４９．１６（ＣＨ２）、６６．１４（ＣＨ２）、８１．１６（Ｃ）、９１．５５（Ｃ）、１２５．７５（Ｃ）、１２７．５３（ＣＨ）、１２９．５４（ＣＨ）、１３１．３２（ＣＨ）、１３５．２４（ＣＨ）、１３６．２０（Ｃ）、１６９．３４（Ｃ）。
【０２１０】
３−（５−カルボキシ−ペント−１−イニル）−安息香酸エチルエステル（１４）
【０２１１】
【化１８】
【０２１２】
ヨードベンズアミド（１）（１．５０ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を、方法Ｂを使用して５−ヘキシン酸と結合させた結果、３−（５−カルボキシ−ペント−１−イニル）−安息香酸エチルエステル（１４）が得られた（０．９０３ｇ、３．４ｍｍｏｌ；収率６４％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、１．８３〜１．９９（２Ｈ，ｍ）、２．４４〜２．５９（４Ｈ，ｍ）、４．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、７．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９２（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１４．２８（ＣＨ３）、１８．７９（ＣＨ２）、２３．５９（ＣＨ２）、６１．１３（ＣＨ２）、８０．７２（Ｃ）、８９．６７（Ｃ）、１２４．０７（Ｃ）、１２８．２８（ＣＨ）、１２８．７２（ＣＨ）、１３０．６９（Ｃ）、１３２．２２（ＣＨ）、１３５．６５（ＣＨ）、１６６．０３（Ｃ）。
【０２１３】
アミドの合成
方法Ｃ：
窒素雰囲気中で、アルキン酸（１ｍｍｏｌ）を乾燥THF（６ｍＬ）に溶かした溶液に、トリエチルアミン（２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで−１０℃に冷却した。反応混合物に、クロロ蟻酸エチロール（１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで−１０℃でさらに１５分間冷却した。その間に、塩酸アミン（３ｍｍｏｌ）、水（０．８８ｍＬ）、トリエチルアミン（０．６３ｍＬ、６ｍｍｏｌ）、及びTHF（１．７６ｍＬ）の溶液を調製し、反応混合物に１滴ずつ添加した。反応をそのままにして、１．５時間で５℃まで温め、次いで室温でさらに３０分撹拌した。混合物を、飽和塩水と飽和重炭酸ナトリウムの１：１混合物（５０ｍＬ）に注ぎ、次いでＤＣＭで抽出した（５×５０ｍＬ）。有機相を真空蒸発させ、残留物を、シリカゲル上でのショートカラムクロマトグラフィにより精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１％から１０％ メタノール勾配）、所望の化合物が得られた。
【０２１４】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（８）
【０２１５】
【化１９】
【０２１６】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）ペンチル］−ヘキス−５−イン酸（４）（０．１０９ｇ、０．３７７ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸ジメチルアミンと反応させた結果、８（０．１１５ｇ、０．３６３ｍｍｏｌ；収率９６％）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．８１〜１．９４（２Ｈ，ｍ）、２．３７〜２．４７（４Ｈ，ｍ）、２．９１（３Ｈ，ｓ）、３．００（３Ｈ，ｓ）、３．３８〜３．６４（２Ｈ，ｍ）４．１９〜４．４３（１Ｈ，ｍ）６．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、７．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７５（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．４２（ＣＨ３）、１９．３６（ＣＨ２）、２４．４５（ＣＨ２）、３２．３０（ＣＨ２）、３５．８３（ＣＨ３）、３７．６７（ＣＨ３）、４８．５１（ＣＨ）、６６．９０（ＣＨ２）、８０．９１（Ｃ）、９０．９２（Ｃ）、１２４．６０（Ｃ）、１２６．８５（ＣＨ）、１２８．８５（ＣＨ）、１３０．３９（ＣＨ）、１３４．５８（ＣＨ）、１３５．１３（Ｃ）、１６７．６３（Ｃ）、１７２．８７（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ３１７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１７】
３−（４−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（９）
【０２１８】
【化２０】
【０２１９】
５−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）ペンチル］−ヘキス−４−イン酸（５）（０．１００ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸ジメチルアミンと反応させた結果、９（０．０８４ｇ、０．２８ｍｍｏｌ；収率７７％）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２６（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．５８〜２．７５（４Ｈ，ｍ）、２．９１（３Ｈ，ｓ）、３．０１（３Ｈ，ｓ）、３．４０〜３．７７（２Ｈ，ｍ）、４．１９〜４．４３（１Ｈ，ｍ）、６．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、７．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９６（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１５．３９（ＣＨ２）、１６．９８（ＣＨ３）、３２．４３（ＣＨ２）、３５．４９（ＣＨ３）、３７．１５（ＣＨ３）、４８．１３（ＣＨ）、６６．６４（ＣＨ２）、８０．１４（Ｃ）、９０．１９（Ｃ）、１２３．９９（Ｃ）、１２６．６０（ＣＨ）、１２８．４３（ＣＨ）、１２９．９５（ＣＨ）、１３４．１９（ＣＨ）、１３４．７５（Ｃ）、１６７．２６（Ｃ）、１７１．１４（Ｃ）。
【０２２０】
３−（６−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（１０）
【０２２１】
【化２１】
【０２２２】
７−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−６−イン酸（６）（０．１００ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸ジメチルアミンと反応させた結果、１０（０．０９１ｇ、０．２７６ｍｍｏｌ；収率８５％）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２６（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．５９〜１．８０（４Ｈ，ｍ）、２．３１〜２．４３（４Ｈ，ｍ）、２．９１（３Ｈ，ｓ）、２．９８（３Ｈ，ｓ）、３．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ １１．１Ｈｚ，Ｊ２１ ５．３Ｈｚ）、３．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ １１．１Ｈｚ，Ｊ２１ ３．５Ｈｚ）、６．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、．７．２７（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７６（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．９９（ＣＨ３）、１９．１５（ＣＨ２）、２４．３０（ＣＨ２）、２８．１９（ＣＨ２）、３２．４５（ＣＨ２）、３５．４６（ＣＨ３）、３７．３３（ＣＨ３）、４８．１２（ＣＨ）、６６．５０（ＣＨ２）、８０．３７（Ｃ）、９０．８５（Ｃ）、１２４．２６（Ｃ）、１２６．５５（ＣＨ）、１２８．４４（ＣＨ）、１２９．９８（ＣＨ）、１３４．０６（ＣＨ）、１３４．７４（Ｃ）、１６７．２４（Ｃ）、１７２．９８（Ｃ）。
【０２２３】
３−（５−メチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（２２）
【０２２４】
【化２２】
【０２２５】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−５−イン酸（４）（０．４００ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸メチルアミン（０．６０９ｇ）と反応させた結果、３−（５−メチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（２２）が得られた（０．２２１ｇ、０．７２４ｍｍｏｌ；収率５３％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．８８〜１．９７（２Ｈ，ｍ）、２．３３〜２．４４（４Ｈ，ｍ）、２．７９（３Ｈ，ｓ）、２．８１（３Ｈ，ｓ）、３．６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．６，Ｊ２ １１．１Ｈｚ）、３．７９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ３．６，Ｊ２ １１．１Ｈｚ）、４．２３〜４．３１（１Ｈ，ｍ）、５．９３（１Ｈ，ｂｓ）、６．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．３Ｈｚ）、７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．７７（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．４４（ＣＨ３）、１９．２９（ＣＨ２）、２６．７０（ＣＨ３）、３５．５８（ＣＨ２）、４８．５７（ＣＨ）、６７．２０（ＣＨ２）、８０．９１（Ｃ）、９０．６９（Ｃ）、１２４．６０（Ｃ）、１２６．８１（ＣＨ）、１２８．９５（ＣＨ）、１３０．４１（ＣＨ）、１３４．６８（ＣＨ）、１３４．９８（Ｃ）、１６７．６３（Ｃ）、１７３．４７（Ｃ）。
【０２２６】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−イニル）安息香酸エチルエステル（２３）
【０２２７】
【化２３】
【０２２８】
３−（５−カルボキシ−ペント−１−イニル）−安息香酸エチルエステル（４）（０．９００ｇ、３．４ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸ジメチルアミンと反応させた結果、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−イニル）安息香酸エチルエステル（２３）が得られた（０．８７３ｇ、３．０４ｍｍｏｌ；収率８９％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、１．８７〜２．００（２Ｈ，ｍ）、２．４３〜２．５４（４Ｈ，ｍ）、２．９５（３Ｈ，ｓ）、３．０３（３Ｈ，ｓ）、４．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、７．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、８．０４（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１４．２８（ＣＨ３）、１８．９７（ＣＨ２）、２４．０１（ＣＨ２）、３１．８７（ＣＨ２）、３５．３９（ＣＨ３）、３７．２０（ＣＨ３）、６１．１０（ＣＨ２）、８０．３９（Ｃ）、９０．６０（Ｃ）、１２４．２６（Ｃ）、１２８．２７（ＣＨ）、１２８．６０（ＣＨ）、１３０．６９（Ｃ）、１３２．６２（ＣＨ）、１３５．５８（ＣＨ）、１６６．０（Ｃ）、１７２．２６（Ｃ）。
【０２２９】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−安息香酸（２４）
【０２３０】
【化２４】
【０２３１】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−イニル）安息香酸エチルエステル（０．８００ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）を、水酸化ナトリウム１Ｍ溶液（６ｍＬ）で一晩処理した。反応混合物に、ＨＣｌ １Ｍ溶液７ｍＬを添加し、溶媒を真空中で除去した。残留物を、酢酸エチルで粉砕した結果、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−安息香酸（２４）（０．５９０ｇ、２．０５ｍｍｏｌ；収率７４％）がオフホワイトの粉末として得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．８５〜２．００（２Ｈ，ｍ）、２．４８〜２．５８（４Ｈ，ｍ）、２．９３（３Ｈ，ｓ）、３．０８（３Ｈ，ｓ）、７．４０（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９７（１Ｈ，ｓ）。
【０２３２】
Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）ベンズアミド（２５）
【０２３３】
【化２５】
【０２３４】
窒素雰囲気中、室温で、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−安息香酸（０．１００ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶かした溶液に、EDCI（０．０７２８ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加し、その後トリエチルアミン（０．１６２ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温でさらに５分間撹拌した。次いでシクロプロピルアミン（０．０２７ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、飽和塩水及び飽和重炭酸ナトリウムの混合物で洗浄し（１：１；２×１５０ｍｌ）、その後、飽和塩水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、溶媒を真空蒸発させた。残留物を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５％から５％ メタノール勾配）、Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）ベンズアミド（２５）が得られた（０．１０ｇ、０．３４ｍｍｏｌ、収率９１％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．５９〜０．６４（２Ｈ，ｍ）、０．８３〜０．９０（２Ｈ，ｍ）、１．９０〜２．００（２Ｈ，ｍ）、２．４９〜２．５３（４Ｈ，ｍ）、２．８７〜２．９３（１Ｈ，ｍ）、２．９５（３Ｈ，ｓ）、３．０３（３Ｈ，ｓ）、６．２５（１Ｈ，ｂｓ）、７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．４４〜７．４９（１Ｈ，ｍ）、７．６３〜７．７２（１Ｈ，ｍ）、７．８４（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；６．７６（ＣＨ２）、１８．９８（ＣＨ２）、２３．１６（ＣＨ）、２４．０２（ＣＨ２）、３１．８７（ＣＨ２）、３５．３９（ＣＨ３）、３７．２２（ＣＨ３）、８０．３９（Ｃ）、９０．７５（Ｃ）、１２４．３８（Ｃ）、１２６．１３（ＣＨ）、１２８．４０（ＣＨ）、１２８．５３（Ｃ）、１２９．８４（ＣＨ）、１３４．２５（ＣＨ）。
【０２３５】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）ベンズアミド（２６）
【０２３６】
【化２６】
【０２３７】
窒素雰囲気中、室温で、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−安息香酸（０．１００ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶かした溶液に、EDCI（０．０７２８ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加し、その後トリエチルアミン（０．１６２ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温でさらに５分間撹拌した。次いで２−フルオロエチルアミン（０．１８９ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、飽和塩水及び飽和重炭酸ナトリウムの混合物で洗浄し（１：１；２×１５０ｍＬ）、その後、飽和塩水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を真空蒸発させた。残留物を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５％から５％ メタノール勾配）、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）ベンズアミド（２６）が得られた（０．１０３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ、収率９１％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．８３〜２．００（２Ｈ，ｍ）、２．４８〜２．５２（４Ｈ，ｍ）、２．９４（３Ｈ，ｓ）、３．０２（３Ｈ，ｓ）、３．６８〜３．７２（１Ｈ，ｍ）、３．７３〜３．８２（１Ｈ，ｍ）、４．５０（３Ｈ，ｔ，Ｊ ４．８Ｈｚ）、４．６６（３Ｈ，ｔ，Ｊ ４．８Ｈｚ）、６．６９（１Ｈ，ｂｓ）、７．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４４〜７．４６（１Ｈ，ｍ）、７．６２〜７．６８（１Ｈ，ｍ）、７．９３（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１８．９７（ＣＨ２）、２４．０１（ＣＨ２）、３１．８７（ＣＨ２）、３５．４０（ＣＨ３）、３７．２３（ＣＨ３）、４０．３５（ＣＨ２）、４０．６２（ＣＨ２）、８０．３７（Ｃ）、８１．５７（ＣＨ２）、８１．５７（ＣＨ２）、９０．７５（Ｃ）、１２４．４８（Ｃ）、１２６．２４（ＣＨ）、１２８．４０（ＣＨ）、１３０．０５（ＣＨ）、１３１．９４（ＣＨ２）、１３４．４５（Ｃ）、１６７．０４（Ｃ）、１７２．３０（Ｃ）。
【０２３８】
Lindlar水素化の一般的方法
方法Ｄ：
キノリン（１４３μＬ、１．３ｍｍｏｌ）、還元されたパラジウム担持硫酸バリウム（５％）（１４３ｍｇ）、及びアルキン（１ｍｍｏｌ）を、メタノール（１４ｍＬ）中で合わせ、粗製原料の１ＨＮＭＲにより還元の終了が示されるまで、大気圧の水素中で撹拌した。触媒は、セライトのパッドを通した濾過によって除去し、これをメタノールで数回洗浄した。濾液を真空蒸発させ、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０２３９】
方法Ｅ：
キノリン（２５μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）、還元されたパラジウム担持硫酸バリウム（５％）（３６０ｍｇ）、及びアルキン（１ｍｍｏｌ）を、メタノール（１５ｍＬ）中で合わせ、粗製原料の１ＨＮＭＲにより還元の終了が示されるまで、大気圧の水素中で撹拌した。触媒は、セライトのパッドを通した濾過によって除去し、これをメタノールで数回洗浄した。濾液を真空蒸発させ、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０２４０】
３−ヘプト−１−エニル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１１）
【０２４１】
【化２７】
【０２４２】
方法Ｄを使用したアルキン３（０．０５０ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の水素化によって、分取逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（５５％アセトニトリル／４５％水 ２０分 定組成プログラム）で分離される２種の生成物、即ち化合物１１（１２ｍｇ）及び完全に還元された３−ヘプチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル−１）−ベンズアミド（１２）（７ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．０Ｈｚ）、１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．３３〜１．５２（４Ｈ，ｍ）、２．２６〜２．３４（２Ｈ，ｍ）、３．６６〜３．８１（２Ｈ，ｍ）、４．２５〜４．３５（１Ｈ，ｍ）、５．６９〜５．７８（１Ｈ，ｍ）、６．２２（１Ｈ，ｂｓ）、６．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．７Ｈｚ）、７．２６（１Ｈ，ｓ）、７．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ）、７．５５〜７．６５（１Ｈ，ｍ）、７．７１（１Ｈ，ｓ）。
【０２４３】
３−ヘプチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル−１）−ベンズアミド（１２）
【０２４４】
【化２８】
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．８０８（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．６Ｈｚ）、１．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．２４（４Ｈ，ｍ）、１．５２〜１．５７（２Ｈ，ｍ）、２．５３〜２．５８（２Ｈ，ｍ）、３．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．７，Ｊ２ １０．９Ｈｚ）、３．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ３．６，Ｊ２ １０．９Ｈｚ）、４．１５〜４．２３（１Ｈ，ｍ）、６．２２（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ ５．６Ｈｚ）、７．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、．７．５０（１Ｈ，ｍ）、７．７０（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１４．２４（ＣＨ３）、１７．５２（ＣＨ３）、２３．０１（ＣＨ２）、２９．５０（ＣＨ２）、２９．６３（ＣＨ２）、３１．７７（ＣＨ２）、３２．１５（ＣＨ２）、３６．２３（ＣＨ２）、４８．５７（ＣＨ）、６７．４９（ＣＨ２）、１２４．４７（ＣＨ）、１２７．５２（ＣＨ）、１２８．７９（ＣＨ）、１３２．０９（ＣＨ）、１３４．７２（Ｃ）、１３４．７２（Ｃ）、１４３．９７（Ｃ）、１６８．７８（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２７７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２４５】
３−（５−シアノ−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１５）
【０２４６】
【化２９】
【０２４７】
アルキン７（０．０３０ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を、方法Ｅで述べたように水素化した結果、３−（５−シアノ−ペンチル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１５ｍｇ）が得られ、これを逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（２０％アセトニトリル／８０％水 ２０分 定組成プログラム）により精製した。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、１．８２（ｍ，２Ｈ）、２．３８（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．４８（ｍ，２Ｈ）、２．７８（ｍ，１Ｈ）、３．６５（ｍ，１Ｈ）、３．７９（ｍ，１Ｈ）、４．２９（ｍ，１Ｈ）、５．６５（ｍ，１Ｈ）、６．３８（ｍ，１Ｈ）、６．５６（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．３４〜７．４４（ｍ，２Ｈ）、７．６４〜７．６８（ｍ，２Ｈ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．００（ＣＨ２）、１７．４５（ＣＨ３）、２５．６７（ＣＨ２）、２７．５０（ＣＨ２）、４８．６０（ＣＨ）、６７．２０（ＣＨ２）、１２０．００（Ｃ）、１２５．９０（ＣＨ）、１２７．５０（ＣＨ）、１２９．００（ＣＨ）、１３０．７７（ＣＨ）、１３１．１０（ＣＨ）、１３２．２２（ＣＨ）、１３５．０４（ＣＨ）、１３７．８３（Ｃ）、１６８．４（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２７３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２４８】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（１６）
【０２４９】
【化３０】
【０２５０】
アルキン８（０．１００ｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、方法Ｅを使用して、Lindlar触媒還元により合成した結果、１６と３−（５−ジメチルカルバモイル−ペンチル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１３）との混合物が得られ、これを、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（２０％アセトニトリル／８０％水 ２０分 定組成プログラム）によって分離した（１６、３４ｍｇ）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３１（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．８１〜１．９１（２Ｈ，ｍ）、２．２６〜２．３９（４Ｈ，ｍ）、２．９０（３Ｈ，ｓ）；（３Ｈ，ｓ）；３．６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．５，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、３．８３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ３．２，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、４．２７〜４．３０（１Ｈ，ｍ）、５．６８〜５．７７（１Ｈ，ｍ）、６．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．６Ｈｚ）、７．２４〜７．３３（１Ｈ，ｍ）、７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．７４〜７．７９（２Ｈ，ｍ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．９３（ＣＨ３）、２４．８０（ＣＨ２）、２８．２２（ＣＨ２）、３２．５１（ＣＨ２）、３５．７３（ＣＨ）、３７．４５（ＣＨ）、４８．３２（ＣＨ２）、６６．７３（ＣＨ２）、１２６．２０（ＣＨ）、１２６．３５（ＣＨ）、１２８．５８（ＣＨ）、１２９．１２（ＣＨ）、１３１．８８（ＣＨ）、１３２．６３（ＣＨ）、１３４．７０（Ｃ）、１３７．５（Ｃ）、１６８．００（Ｃ）、１７３．１１（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ３１９（Ｍ＋Ｈ）。
【０２５１】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペントチル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１３）
【０２５２】
【化３１】
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２８〜１．３６（５Ｈ，ｍ）、１．６４（２Ｈ，ｍ）、２．２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．３Ｈｚ）、２．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．４Ｈｚ）、２．９１（３Ｈ，ｓ）、２．９８（３Ｈ，，）、３．６３（１Ｈ，ｍ）、３．７８（２Ｈ，ｍ）、４．１９〜４．３０（２Ｈ，ｍ）、６．９４（１Ｈ，ｍ）、７．２６〜７．３２（２Ｈ，ｍ）、７．４５〜７．６７（３Ｈ，ｍ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．４３（ＣＨ３）、２５．０９（ＣＨ２）、２８．８１（ＣＨ２）、３１．１４（ＣＨ２）、３３．５２（ＣＨ２）、３５．５４（ＣＨ）、３５．８９（ＣＨ）、３７．８０（ＣＨ）、４８．５５（ＣＨ）、６７．０８（ＣＨ２）、１２５．０５（ＣＨ）、１２７．５０（ＣＨ）、１２８．８１（ＣＨ）、１３２．００（ＣＨ）、１３４．９３（Ｃ）、１４３．１３（Ｃ）、１６８．７０（Ｃ）、１７３．７３（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ３２１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２５３】
３−（６−ジメチルカルバモイル−ヘキス−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１７）
【０２５４】
【化３２】
【０２５５】
３−（６−ジメチルカルバモイル−ヘキス−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（０．０３７ｇ、０．１１ｍｇ）１７を、方法Ｄを使用して、Lindlar触媒還元により合成した結果、１７と飽和化合物及び２０％のトランス異性体との混合物が得られ、これを分取ＨＰＬＣにより分離したが、残念ながら、シス異性体とトランス異性体との分離はそれほど首尾良く行われず、化合物１７は、いくらかのトランス異性体（１０％トランス）で汚染されていた。
【０２５６】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）−フェニル］−ヘキス−５−エン酸メチルエステル（２１）
【０２５７】
【化３３】
【０２５８】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）−フェニル］−ヘキス−５−エン酸メチルエステル（２１）（０．１００ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を、方法Ｄを使用して、アルキン２０からLindlar触媒還元により合成した結果、２１と、分離されなかった５％のトランス異性体との混合物が得られた。この混合物を、粗製原料として使用した。
δ（１Ｈ）（ＣＤ３ＯＤ）；１．１５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．７Ｈｚ）、１．５２〜１．７１（２Ｈ，ｍ）、２．１９〜２．２９（４Ｈ，ｍ）、３．４７〜３．５６（２Ｈ，ｍｚ）、４．０６〜４．１２（２Ｈ，ｍ）、５．５９〜５．６７（１Ｈ，ｍ）、５．４６（２Ｈ，ｂｓ）、５．６２〜５．６８（１Ｈ，ｍ）、６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．６Ｈｚ）、７．２５〜７．３３（１Ｈ，ｍ）、７．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ８．０Ｈｚ）、７．５２〜７．６１（２Ｈ，ｍ）。
【０２５９】
３−（５−カルバモイル−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１９）
【０２６０】
【化３４】
【０２６１】
２１（０．０３０ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を、アンモニアの３３％水溶液２ｍＬ中に溶解し、室温で８時間撹拌した。溶媒を除去し、生成物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（１８％アセトニトリル／８２％水 ２０分 定組成プログラム）によって精製した結果、１９（７ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２２（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．８．０Ｈｚ）、１．７５〜１．７９（２Ｈ，ｍ）、２．２０〜２．３２（４Ｈ，ｍ）、３．６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．８，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、３．８３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ２．９，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、４．２４〜４．３２（１Ｈ，ｍ）、５．４６（２Ｈ，ｂｓ）、５．６２〜５．６８（１Ｈ，ｍ）、６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．６Ｈｚ）、７．２０〜７．２２（１Ｈ，ｍ）、７．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．６８（１Ｈ，ｓ）、７．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）。
ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ ２９１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２６２】
ＢＥＲ／Ｎｉ水素化の一般的方法
ポリマーで支持されたホウ化水素（ホウ化水素担持アンバーライトIRA-400、２．５ｍｍｏｌ ＢＨ４−／１ｇ樹脂）、及び酢酸ニッケル四水和物（０．０４６ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を、メタノール７ｍＬ中に懸濁し、ニッケルの黒色被膜が樹脂表面に現れるまで、この懸濁液中に水素をバブリングし、次いでこの混合物に、水素中でアルキン（１ｍｍｏｌ）を添加し、メタノール７ｍＬに溶解した。混合物を９時間振盪させ、次いで濾過した。樹脂を、メタノールで数回洗浄し、次いで合わせた濾液を真空蒸発させた。樹脂を、適切な溶媒中に溶解し、セライトに通して濾過することにより、ニッケルを除去した。生成物を、分取逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィにより精製した。
【０２６３】
３−（４−ジメチルカルバモイル−ブト−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（２７）
【０２６４】
【化３５】
【０２６５】
ＢＥＲ／Ｎｉ触媒を使用したアルキン９（０．５５ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の水素化により、２７が４０％、飽和化合物が５％、及び出発材料が５５％得られた。混合物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（２０％アセトニトリル／８０％水 ２０分 定組成プログラム）により分離した結果、２７（１５ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．５３〜２．７０（４Ｈ，ｍ）、２．９９（３Ｈ，ｓ）、３．０７（３Ｈ，ｓ）、３．６５〜３．６９（１Ｈ，ｍ）３．８１〜３．９５（１Ｈ，ｍ）、３．９８〜３．４０（１Ｈ，ｍ）、４．３０〜４．３１（１Ｈ，ｍ）、５．６８〜５．７７（１Ｈ，ｍ）、６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．６Ｈｚ）、７．２９（１Ｈ，ｍ）、７．３７〜７．４６（１Ｈ，ｍ）、７．８５〜７．９５（１Ｈ，ｍ）、８．２２（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．８４（ＣＨ３）、２４．６８（ＣＨ２）、３２．５９（ＣＨ２）、３５．８９（ＣＨ３）、３７．９６（ＣＨ３）、４８．３３（ＣＨ）、６６．７６（ＣＨ２）、１２５．６７（ＣＨ）、１２６．９０（ＣＨ）、１２８．７１（ＣＨ）、１３０．０３（ＣＨ）、１３１．１５（ＣＨ）、１３１．８８（ＣＨ）、１３４．４６（Ｃ）、１３６．７０（Ｃ）、１６７．２３（Ｃ）、１７３．３０（Ｃ）。
【０２６６】
Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−（５−メチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−ベンズアミド（１８）
【０２６７】
【化３６】
【０２６８】
アルキン２２（０．０５５ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、ＢＥＲ／Ｎｉ触媒を使用して水素化した結果、１８が４５％、及び出発材料が５５％の混合物が得られた。混合物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（１８％アセトニトリル／８２％水 ２０分 定組成プログラム）により分離した結果、１８（１９ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．８．０Ｈｚ）、１．８８〜１．９７（２Ｈ，ｍ）、２．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ ７．４Ｈｚ）、２．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．８０（３Ｈ，ｄ，Ｊ ４．８Ｈｚ）；３．６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．５，Ｊ２ １１．０Ｈｚ）、３．７９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ３．５，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、４．２３〜４．３１（１Ｈ，ｍ）、５．７３（１Ｈ，ｂｓ）、６．５３（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ ６．２Ｈｚ）、７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７６（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．０７（ＣＨ３）、１８．９１（ＣＨ２）、２４．４４（ＣＨ２）、２６．３２（ＣＨ３）、３５．１９（ＣＨ２）、４８．１９（ＣＨ）、６６．８７（ＣＨ２）、１２２４．２３（Ｃ）、１２６．４１（ＣＨ）、１２８．５７（ＣＨ）、１２９．９９（ＣＨ）、１３４．３１（ＣＨ）、１３４．５９（Ｃ）、１６７．００（Ｃ）、１７８．００（Ｃ）。
【０２６９】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）−ベンズアミド（２８）
【０２７０】
【化３７】
【０２７１】
ＢＥＲ／Ｎｉ触媒を使用した、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）ベンズアミド（２６）（０．０４０ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の水素化によって、２８が４０％、及び出発材料が５５％得られた。混合物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（３０％アセトニトリル／７０％水 ２０分 定組成プログラム）により分離した結果、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）−ベンズアミド２８（５ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．８０〜１．８９（２Ｈ，ｍ）、２．３１〜２．４１（４Ｈ，ｍ）、２．８８（３Ｈ，ｓ）、２．９７（３Ｈ，ｓ）、３．６８〜３．７２（１Ｈ，ｍ）、３．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１５．４，Ｊ２１０．７Ｈｚ）、３．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１５．４，Ｊ２１０．７Ｈｚ）、５．７２〜５．７８（１Ｈ，ｍ）、６．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．７Ｈｚ）、７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４０（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．９Ｈｚ）、８．０２（１Ｈ，ｓ）。
【０２７２】
Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）ベンズアミド（２９）
【０２７３】
【化３８】
【０２７４】
ＢＥＲ／Ｎｉ触媒を一晩使用した、３−（Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）ベンズアミド（２５）（０．０４０ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の水素化によって、２８％が９０％、及び出発材料が１０％得られた。混合物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（３０％アセトニトリル／７０％水 ２０分 定組成プログラム）によって分離した結果、Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−ベンズアミド（１０ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．６４〜０．６９（２Ｈ，ｍ）、０．７８〜０．８４（２Ｈ，ｍ）、１．７８〜１．８３（２Ｈ，ｍ）、２．２８〜２．３６（４Ｈ，ｍ）、２．８８（３Ｈ，ｓ）、２．８９〜２．９３（１Ｈ，ｍ）、２．９７（３Ｈ，ｓ）、５．６５〜５．７５（１Ｈ，ｍ）、６．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．７Ｈｚ）、７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．４４〜７．４９（１Ｈ，ｍ）、７．６３〜７．７２（１Ｈ，ｍ）、７．８４（１Ｈ，ｓ）。
【０２７５】
末梢作用を有するＣＢ１アゴニストとしての検証
生体外放射リガンド結合の研究
放射リガンド結合アッセイ［Ross,R.A. et al, Br.J.Pharmacol. 1999, 128, 735-743］を、脳及び脾臓膜内のＣＢ１受容体アンタゴニスト［３Ｈ］SR141716A（０．５ｎＭ）又は［３Ｈ］CP55940（０．５ｎＭ）を用いて実施する。アッセイは、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡを含有するアッセイ緩衝剤中で行い、このときの全アッセイ体積は５００μＬである。結合は、膜の添加（１００μｇ）によって開始する。０．１％ ＤＭＳＯというビヒクル濃度を、全体を通して一定に保つ。アッセイは、３７℃で６０分間実施し、その後、氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭ トリス緩衝液、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）を添加し、１２ウェルサンプリングマニホールド（Brandel Cell Harvester）及び洗浄緩衝液中に４℃で２４時間浸漬させたWhatman GF/Bガラスファイバーフィルタを使用して真空濾過することにより、終了する。各反応チューブを、４ｍＬという一定分量の緩衝液で５回洗浄する。フィルタを、６０分間オーブン乾燥し、次いで５ｍＬのシンチレーション流体（Ultima Gold XR, Padkard）中に置き、液体シンチレーション分光分析によって放射能を定量する。特異的結合は、１μＭの非標識リガンドが存在し、また存在しない状態で生じた結合の差として定義され、脳内及び脾臓内で結合された全放射リガンドは、それぞれ７１％及び４０％である。特異的結合部位からの放射リガンドの５０％置換（ＩＣ５０）をもたらす競合リガンド（試験化合物）の濃度は、GraphPad Prism（GraphPad Software社製、San Diego）を使用して計算する。阻害定数（Ｋｉ）値は、Cheng & Prusoffの方程式を使用して計算する［Cheng, Y.及びPrusoff,W.H., Biochem, Pharmacol. 1973, 22, 3099-3108］。
【０２７６】
生体外カンナビノイド受容体調節活性
化合物を、マウス輸精管製剤［Ward S, Mastriani D, Casiano F及びArnold R (1990) J Pharmacol Exp Ther 255:1230-1239］を使用して、カンナビノイド調節能力に関して評価し、それによって、アゴニストの可能性を常に反映するとは限らない簡単な受容体結合ではなくて、ＣＢアゴニストの証拠が提供される。化合物（１６）は、この系（図１）において、既知の完全アゴニストR(+) WIN55,212（ＩＣ５０が約５ｎＭ）に比べ、ＩＣ５０が約１ｎＭという著しい効果を示した。これは、選択的ＣＢ１アンタゴニストSR141716Aによって阻害され、即ち観察された収縮が、末梢ＣＢ１受容体を介して媒介されることを示している。
【０２７７】
生体内末梢ＣＢ１受容体活性化
上部胃腸通過
胃腸通過は、チャコール法を使用して測定する。マウスに、０．１ｍＬ（１０ｇ／マウス）の黒色マーカー（５％アラビアガムに懸濁させた、１０％チャコール懸濁液）を経口的に与え、２０分後に、ＣＯ２でマウスを窒息死させ、小腸を取り出す。マーカーが移動した距離を測定し、幽門から盲腸までの小腸の全長に対するパーセンテージとして表す［Izzo,A.A. et al, Br.J.Pharmacol. 2000, 129, 1627-1632］。カンナビノイドアゴニストは、チャコールを投与する３０分前に与える。
【０２７８】
結腸推進試験
遠位結腸推進を、Pinto et al[Gastroenterology 2002, 123, 227-234]に従って測定する。カンナビノイド薬物を投与してから３０分後、１個の３ｍｍガラスビーズを、各マウスごとに、遠位結腸に２ｃｍ挿入する。ガラスビーズの排出に必要とされる時間を、各動物ごとに決定した。平均排出時間が長いほど、結腸推進をより強力に阻害することの指標になる。
【０２７９】
末梢活性カンナビノイドの向精神活性
多くのＣＢ１アゴニストは、ＣＢ１受容体への中枢結合により、向精神性に関連した「４組効果」を誘発することが知られている［Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology. XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202］。研究は、本発明の化合物も中枢ＣＢ１受容体に結合するか否かを調査するために着手した。これは、化合物が、静脈内、腹腔内、及び経口投与された後、正常なマウスにおいて鎮静、下垂症、低運動性、カタレプシー、及び低体温症を誘発する能力を測定することにより、評価する［Brooks,J.W. et al, Eur. J. Pharmacol. 2002, 439, 83-02］。
【０２８０】
化合物の脳内レベルの決定
脳及び脊髄への浸透性の定量
化合物の脳／脊髄への浸透は、以下のように直接測定することができる。麻酔をかけたラットの脳及び脊髄への摂取は、Ohne et al［Ohno,K. et al, Am. J. Physiol 1978, 235, H299-H307］に記載されている標準的な方法を使用して測定する。手短に言えば、化合物を、１回の大量瞬時投与として、又は段階的な注入として、静脈内（大腿）注射する。いくつかの血漿サンプル（大腿動脈）を採取して、経時的な血漿濃度を計算する（積分、曲線下の面積）。末端の脳及び脊髄サンプルを採取して、脳への浸透性を測定する（生理食塩水での洗い出しにより、又は［１４Ｃ］スクロースなどの不活性低浸透性マーカーの短い循環を使用して、含有される血液体積を測定することにより、残留血液中の化合物に合わせて補正する）。ＰＳ（ｃｍ．ｓ−１）は、Ｃ脳／積分Ｃ血漿に等しく、ＰＳ＝浸透性×表面積（ｃｍ２）であり脳摂取に関する積であり、Ｃは濃度である。或いは、定常状態の組織／血漿の比を、より近似された指標として測定し、この場合も血液洗い出し又は補正を行う。比較は、同一条件下で実験をした、ＢＢＢ全体を通して低浸透性を有することが知られている対照化合物、例えば放射標識されたスクロース又はインスリンに対して行う。
【０２８１】
ＣＢ１アゴニズムの生物学の予備的特徴付け
末梢活性カンナビノイドの侵害受容活性
末梢では、ＣＢ１で媒介された侵害受容の証拠がある［Fox,A. et al, Pain 2001, 92, 91-100］。したがって、部分坐骨神経結紮に関する研究を、ラット及びノックアウトマウスで着手した。
【０２８２】
痙攣の評価
さらなる研究は、ＣＢ１、ＣＢ２、ＶＲ−１、ＦＡＡＨ、及び条件的ＣＢ１ノックアウトマウスを含めたカンナビノイドノックアウトマウスを使用して着手した。痙攣は、ABH（３〜４回の疾患の発作１の後、８０日以内で、動物の５０〜６０％に著しい痙攣が生ずる）又はABH.CB1-/-（１〜２回の疾患の発作の後、３０〜４０日以内で、動物の８０〜１００％に著しい痙攣が生ずる）で誘発させることができる。化合物を、初めに静脈内（初回通過効果を制限するため）、腹腔内、又は経口的に注入する。痙攣は、歪みゲージを使用して、後肢屈曲に対する抵抗力により評価する（ｎ＝６〜７／グループ）［Baker,D. et al, Nature 2000, 404, 84-87］。動物を、それ自体の対照として役立て、２つ一組にして分析を行う。動物の数、労力、及び費用を減らすため、薬物を用いない期間の後（痙攣は２４時間以内に戻る）、これらの動物に、異なる用量及び／又はビヒクルを与える。低用量のＣＢ１アゴニスト及びＣＮＳ活性CP55,940を、対照として、痙攣性ＡＢＨマウスに局所（皮下、筋肉内）投与し、対側肢における活性の欠如を分析する［Fox,A. et al, Pain 2001, 92, 91-100］。ＣＢ媒介型侵害受容に対する非ＣＮＳ部位である、後根神経節も含めた末梢神経系におけるＣＢ１の発現は、ペリフェリン−Ｃｒｅトランスジェニックマウスを使用して除去することができる［Zhou,L. et al, FEBS Lett. 2002, 523, 68-72］。これらの条件的ＫＯマウスは、C57BL/6バックグラウンド上で維持される。これらのマウスは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質残基３５〜５５ペプチドの誘発後、ＥＡＥを発症する［Amor,S. et al, J. Immunol. 1994, 153, 4349-4356］。
【０２８３】
正常及びＣＲＥＡＥマウスでの生体内評価
ＣＮＳを除外した化合物は、カンナビノイド抗痙攣作用の成分が末梢ＣＢ受容体を介して媒介されるかどうか、試験をするためのツールを提供する。化合物（１６）は、図２及び３に示すように、正常なマウスにおけるＣＮＳ作用に関して試験した。１ｍｇ／ｋｇの用量では、低体温症も低運動性も観察されなかった。ＣＲＥＡＥマウスでは、痙攣に対する際立った効果が認められ（図４）、ＣＮＳ作用をもたらすことなく、痙攣の選択的阻害が実現可能であるという強力な証拠を示している。上述のように、痙攣の抑制において、末梢カンナビノイド受容体には確立された役割が無いが、痙攣は、少なくともＥＡＥでは脊髄の神経損傷の現れである可能性があり［Baker,D. et al, FASEB J. 2001, 15, 300-302; Baker,D. et al, J.Neuroimmunol. 1990, 28, 261-270］、筋系への、及び筋系からの異常なシグナルは、少なくとも部分的に、痙縮で生ずる筋肉痙攣に寄与する可能性がある。
【０２８４】
記述された本発明の方法の、様々な変更例及び変形例は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく当業者に明らかにされよう。本発明を、特定の好ましい実施形態に関して述べてきたが、化学又は関係する分野の当業者に明らかな、本発明を実施するために記述された形態の様々な変更例は、以下の特許請求の範囲内に含まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０２８５】
【図１】ラット輸精管の収縮阻害を示す図である。より詳細には、このアッセイでの化合物（１６）のＩＣ５０は、約０．１ｎｍである。同じアッセイで、R(+)WIN55,212は、ＣＢ１でのＩＣ５０が約５ｎｍであり、その既知の結合親和性と一致していることが実証された。このアッセイは、アゴニストのポテンシャルを示しており、化合物（１６）の作用は、ＣＢ１−アンタゴニストSR141716Aによって中和された。
【図２】野生型マウスの低運動性を示す図である。
【図３】野生型マウスの低体温を示す図である。ビヒクル（アルコール、Cremophor、PBS（１：１：１８））、化合物（１６）、又はＣＮＳ浸透剤ＣＢ１アゴニスト（R(+)Win 55,212）を、注入する前と注入した後（２０分）に、活性チャンバ内における、温度と２７ｃｍ２の開放領域での５分間の運動性とについて評価した［Brooks et al 2002］。この後者の化合物は、典型的なカンナビン様作用を誘発するのに対し、化合物（１６）は、１ｍｇ／ｋｇ（より多量）で不活性であり、２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．でも不活性であった。
【図４】ＣＲＥＡＥマウスの痙攣の評価を示す図である。痙攣は、第０日及び第７日目に、フロイント完全アジュバントに溶かしたマウス脊髄ホモジネートを注入することによって誘発された、慢性EAEの発症後に発生した。これは、野生型ＡＢＨ．Ｃｎｒｌ＋／＋マウスの場合、導入後６０〜８０日で生じ、ＣＢ１受容体遺伝子（Cnrl）−欠損ＡＢＨ．Ｃｎｒｌ−／−マウス）では、導入後３０〜４０日で生じた。痙攣は、腹腔内注射した完全ＣＢ１／ＣＢ２アゴニストCP55,940又は完全ＣＢ１／ＣＢ２／”ＣＢ３”アゴニストで、或いはビヒクル（アルコール：Cremophor：PBS（１：１：１８））に溶かして静脈内注射した化合物（１６）で、治療する前及び治療した後に、歪みゲージに対する後肢の完全屈曲への抵抗力によって評価した［Baker et al 2000］。結果は、投与から１０分後の、パーセンテージの変化±基準線からのSEM（グループ当たりｎ＜１０〜１２）を示している。生データに関して統計分析を行ったが、これは、基準線レベルから２つ一組にして分析した（＊＊＊Ｐ＜０．００１）。ＣＮＳ浸透アゴニストの抗痙攣作用は、ＣＢ１欠損マウスの場合に失われ、ＣＢ２／”ＣＢ３”が抗痙攣活性の標的ではないことを示していた。ビヒクル単独では、不活性であった［Baker et al 2000］。化合物（１６）は、野生型マウスで著しい抗痙攣活性を示し、PBSだけに投与したときに活性になった（図示せず）。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カンナビノイド受容体を調節することが可能な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、医療用大麻、及び大麻の活性成分であるΔ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）［１］などの合成カンナビノイドの治療上の使用について、新たな関心が持たれている。
【０００３】
【化１】
【０００４】
ＴＨＣは、急性、特に慢性／神経障害性の疼痛、吐き気、摂食障害、ＡＩＤＳ、緑内障、喘息、及び多発性硬化症の抑制も含めた医療のいくつかの主な領域で、治療上有益と考えられる［Baker,D. et al, Nature 2000, 404, 84-87; Baker,D. et al, FASEB J. 2001, 15, 300-302; Schnelle,M. et al, Forsch. Komplementarmed. 1999, 6 suppl 3, 28-36］。
【０００５】
いくつかのカンナビノイドリガンドが、文献で報告されている。概してカンナビノイドリガンドは、（ｉ）（−）−Δ９−テトラヒドロカンナビノールやΔ９−ＴＨＣ［１］、CP55,940［９］などの古典的カンナビノイドと；（ii）アナンダミド［２］や２−アラキドニルグリセロール［３］などのエンドカンナビノイドと；（iii）WIN55,212［７］や選択的ＣＢ１アンタゴニストSR141716A［８］などの複素環に代表される非古典的複素環類似体とからなる、３つの主なグループに分けることができる［Pertwee,R.G., Pharmacology & Therapeutics 1997, 74, 129-180］。立体配置的に制約を受けるアナンダミド類似体についても、報告されている［Berglund,B.A. et al, Drug Design and Discovery 2000, 16, 281-294］。しかし今日まで、カンナビノイド薬の治療上の有用性は、その望ましくない精神活性により、限定されている。
【０００６】
【化２】
【０００７】
カンナビノイドは、急性、炎症性、及び神経障害性の疼痛モデルで、侵害受容処理を調節することが知られている［Pertwee,R.G., Prog. Neurobiol. 2001, 63, 569-611］。より具体的には、研究は、神経障害性痛覚過敏［Herzberg,U. et al, Neurosci. Lett. 1997, 221, 157-160］及び炎症性痛覚過敏［Richardson,J.D., Pain 1998, 75, 111-119; Jaggar,S.I. et al, Pain 1998, 76, 189-199; Calignano,A. et al, Nature 1998, 394, 277-281; Hanus, L. et al, Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.I 1999, 96, 14228-14233］のモデルにおけるカンナビノイドの役割に、重点が置かれてきた。また、カンナビノイド受容体の発現と、内因性カンナビノイドのレベルとは、炎症及び痛覚過敏の間に変化する可能性があることも提示されてきた［Pertwee,R.G., Prog. Neurobiol. 2001, 63, 569-611］。
【０００８】
カンナビノイドの信号伝達系は、２つのクローン化カンナビノイド受容体（ＣＢ１及びＣＢ２）と、アナンダミド［２］や２−アラキドノイルグリセロール［３］などのエンドカンナビノイドリガンドと、エンドカンナビノイド分解系とを含むと考えられる［Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202; Pertwee,R.G., Pharmacology of cannabinoid receptor ligands. Curr. Med. Chem. 1999, 6, 635-664］。
【０００９】
カンナビノイド系の、１つの重要な機能は、シナプス神経伝達物質放出のレギュレーターとして働くことである［Kreitzer,A.C. et al, Neuron 2001, 29, 717-727: Wilson,R.I. et al, Neuron 2001, 31, 453-462］。ＣＢ１は、ＣＮＳ中、とりわけ淡蒼球、黒質、小脳、及び海馬中に、高レベルで発現する［Howlett,A.C., Neurobiol. Dis. 1998, 5, 405-416］。これは、大麻が平静及び短期記憶処理に及ぼす既知の副作用と一致している［Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202］。ＣＢ２は白血球によって発現し、その調節は精神活性作用を誘発せず、さらにこれは、大部分の作用がＣＢ１によって媒介される症状管理の大きな目標ではない。
【００１０】
多くのカンナビノイド作用は、ＣＮＳ中の受容体によって主に媒介されるが［Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202］、末梢ＣＢ受容体も、特に疼痛及び胃腸管において重要な役割を演ずると理解される。例えばＣＢ１は、後根神経節や末梢神経、神経筋終末などの末梢組織でも発現し、それによって、ＣＮＳの外側で神経伝達を調節することが可能になる［Pertwee,R.G., Life Sci. 1999, 65, 597-605］。したがって、疼痛［Fox,A. et al, Pain 2001, 92, 91-100］、又は腸運動過剰を含むような状態での治療活性を、非ＣＮＳ部位に位置付けることができる。しかし今日まで、末梢カンナビノイド系に関する研究は、ＣＮＳ上の末梢受容体を選択的に標的とする薬物の不足により、妨げられてきた。
【００１１】
有害な精神活性作用を無くすため、ＣＮＳからカンナビノイドアゴニストを除外することが望ましい。小分子物質のＣＮＳ除外のための、２つの確立された方法がある。まず、１つの方法では、物質が血液脳関門（ＢＢＢ）を通過しないように、その物理化学的性質を慎重に制御することによって、ＣＮＳから物質を除外する。ＢＢＢは、緊密な細胞間結合及びごく僅かな開窓を有する、脳内皮細胞によって形成される［Tamai,I. et al, J.Pharm.Sci. 2000, 89, 1371-1388］。その結果、物質は、原形質膜を横断する受動拡散によって、又は能動輸送メカニズムによって、脳に進入しなければならない。したがってＢＢＢは、多くの末梢循環物質に対して効果的な障壁を形成する。
【００１２】
脳から化合物を除外する代替方法は、ＢＢＢを通過するように化合物を能動的に送出させる、構造的特徴を組み込むことである。そのような１つの例は、オピオイドアゴニストロペラミドであるが、親油性のロペラミドは、血液脳関門を通過するよう能動的に送出することが可能な、ｐ−糖タンパク質輸送体（MDR1）によって認識される、構造的特徴を含む［Wandel,C. et al, Anesthesiology 2002, 96, 913-920; Seeling,A. et al, Eur.J.Pharm.Sci. 2000, 12, 31-40］。
【非特許文献１】Baker,D. et al, Nature 2000, 404, 84-87
【非特許文献２】Baker,D. et al, FASEB J. 2001, 15, 300-302
【非特許文献３】Schnelle,M. et al, Forsch. Komplementarmed. 1999, 6 suppl 3, 28-36
【非特許文献４】Pertwee,R.G., Pharmacology & Therapeutics 1997, 74, 129-180
【非特許文献５】Berglund,B.A. et al, Drug Design and Discovery 2000, 16, 281-294
【非特許文献６】Pertwee,R.G., Prog. Neurobiol. 2001, 63, 569-611
【非特許文献７】Herzberg,U. et al, Neurosci. Lett. 1997, 221, 157-160
【非特許文献８】Richardson,J.D., Pain 1998, 75, 111-119
【非特許文献９】Jaggar,S.I. et al, Pain 1998, 76, 189-199
【非特許文献１０】Calignano,A. et al, Nature 1998, 394, 277-281
【非特許文献１１】Hanus,L. et al, Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A 1999, 96, 14228-14233
【非特許文献１２】Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202
【非特許文献１３】Pertwee,R.G., Pharmacology of cannabinoid receptor ligands. Curr. Med. Chem. 1999, 6, 635-664
【非特許文献１４】Kreitzer,A.C. et al, Neuron 2001, 29, 717-727
【非特許文献１５】Wilson,R.I. et al, Neuron 2001, 31, 453-462
【非特許文献１６】Howlett,A.C., Neurobiol. Dis. 1998, 5, 405-416
【非特許文献１７】Pertwee,R.G., Life Sci. 1999, 65, 597-605
【非特許文献１８】Fox,A. et al, Pain 2001, 92, 91-100
【非特許文献１９】Tamai,I. et al, J.Pharm.Sci. 2000, 89, 1371-1388
【非特許文献２０】Wandel,C. et al, Anesthesiology 2002, 96, 913-920
【非特許文献２１】Seeling,A. et al, Eur.J.Pharm.Sci. 2000, 12, 31-40
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、新しいカンナビノイド受容体調節物質を提供しようとするものである。より詳細には、本発明は、一般に従来技術の調節物質に関連する欠点のいくつか、例えば望ましくない精神活性作用を緩和し且つ／又は無くす、カンナビノイド受容体調節物質を提供しようとするものである。より具体的には、本発明は、末梢カンナビノイド受容体を選択的に標的とする調節物質を提供しようとするものであるが、これに限定するものではない。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明の第１の態様は、式Ｉの化合物、又は薬学的に許容されるその塩に関する。
【００１５】
【化３】
【００１６】
（式中、
ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ任意に、アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、ＣＦ３、及びニトロから選択される１つ又は複数の置換基によって置換されていてもよく；
Ｙは、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択される極性官能基であり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である；
但し、
（ｉ）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺがＯＨである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、ｍｅｔａＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＯＨ、ｍｅｔａＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｍｅ、ｍｅｔａ（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、及びｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ以外のものであること；及び
（ii）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺはＯＭｅである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）４ＯＨ以外のものであることを条件とする。）
【００１７】
本発明の化合物は、好ましくは、従来技術のカンナビノイド受容体調節物質に比べて改善された水溶性及び／又は低下した親油性を示すことが有利である。
【００１８】
本発明の第２の態様は、筋疾患を治療するための医薬品の製造のための、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００１９】
【化４】
【００２０】
（式中、
ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていてもよく；
Ｙは、極性官能基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５であるものである。）
【００２１】
本発明の第３の態様は、痙攣及び振戦を抑制するための医薬品の製造のための、上記定義した式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００２２】
本発明の第４の態様は、胃腸障害を治療するための医薬品の製造のための、上記定義した式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【００２３】
本発明の第５の態様は、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、又は担体と混合させた、上記定義した式Ｉａの化合物を含む、医薬品組成物に関する。
【００２４】
本発明の第６の態様は、カンナビノイド受容体活性を調節することが可能なその他の化合物を同定するためのアッセイにおける、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
カンナビノイド
カンナビノイドは、カンナビノイド受容体、特にＣＢ１及び／又はＣＢ２に結合することが可能な物体である。典型的なカンナビノイドは、インド大麻、アサに見られる、２−（２−イソプロピル−５−メチルフェニル）−５−ペンチルレゾルシノールの３０程度の誘導体を含み、その中には、植物及びその抽出物の麻薬作用を誘発させるものがある。カンナビノイドの例は、カンナビジオール、カンナビノール、トランス−Δ９−テトラヒドロカンナビノール、トランス−Δ８−テトラヒドロカンナビノール、及びΔ９−テトラヒドロ−カンナビノール酸である。カンナビノイドのその他の例には、アナンダミド、メタナンダミド、及びR(+)WIN55,212が含まれる。
【００２６】
エンドカンナビノイド
この用語は、外部から供給されたカンナビノイドとは対照的に、体内に天然に存在するカンナビノイドを意味する。エンドカンナビノイドは、Di Marzo (1998) Biochimica et Biophysica Acta vol 1392 pages 153-175に論じられている（その内容を、参照により本明細書に組み込む）。エンドカンナビノイドの例は、アナンダミドである。この物質及びアナンダミドアミダーゼに関する教示を、ＵＳ−Ａ−５８７４４５９に見出すことができる。この文献は、アナンダミドアミダーゼ阻害剤の、鎮痛薬としての使用について教示している。
【００２７】
カンナビノイド受容体
カンナビノイド受容体は、カンナビノール及び構造的に類似している化合物を結合し、且つそれらの細胞内作用を媒介する、いくつかの膜タンパク質のいずれか１つ又は複数である。
【００２８】
マリファナの精神活性成分Δ９−テトラヒドロカンナビノール（ＴＨＣ）に対する２つの受容体、ＣＢ１及びＣＢ２カンナビノイド受容体が、わかっている（Pertwee 1997 Pharmacol Ther vol 74 129-180）。これら受容体のどちらも、７回膜貫通ドメインＧタンパク質結合型受容体である。ＣＢ１受容体は、脳及び精巣に見られる。ＣＢ２受容体は脾臓に見られ、脳には見られない。
【００２９】
どちらのタイプの受容体も、アラキドノイルエタノールアミド（アナンダミド）が推定上の内在リガンドであり、どちらのタイプもアデニレートシクラーゼにネガティブに結合し、細胞内環状ＡＭＰレベルが低下する。そのような受容体の配列の例は、Mus musculusから得られ、ＣＢ１、データベースコードCB1R_MOUSE、４７３アミノ酸（５２．９４ｋＤＡ）と、ＣＢ２、データベースコードCB2R_MOUSE、３４７アミノ酸（３８．２１ｋＤａ）が含まれる。ＣＢ１及びＣＢ２に関するさらなる詳細について、以下に述べる。
【００３０】
カンナビノイド受容体１（ＣＢ１又はＣＮＲ１）
ＣＢ１に関する背景の教示は、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim上に、Victor A. McKusick他によって示されている。ＣＢ１に関する以下の情報は、このソースから抽出した。
【００３１】
カンナビノイドはマリファナの精神活性成分であり、主としてΔ−９−テトラヒドロカンナビノール、並びに合成類似体であって、Matsuda他［Nature 346: 561-564, 1990］がラットの脳からカンナビノイド受容体をクローニングした。ヒト遺伝子の全コード配列のコスミドクローンを使用して、Modi及びBonner［Abstract, Cytogenet. Cell Genet. 58: 1915 only, 1991］は、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより6q14-q15にヒトＣＮＲ座をマップした。Gerard他［Biochem. J. 279: 129-134, 1991］は、ヒト脳幹ｃＤＮＡライブラリーから、カンナビノイド受容体をコード化するｃＤＮＡを単離した。推論されるアミノ酸配列は、Matsuda他［同書、1990］によってクローン化されたカンナビノイド受容体に対して９７．３％の同一部分を共有する、４７２残基のタンパク質をコード化した。これらは、ヒト精巣中に発現した同一カンナビノイド受容体が存在することの証拠を提供した。Hoehe他［New Biologist 3: 880-885, 1991］は、遺伝的連関マッピングと染色体ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションとを組み合わせることによって、ＣＮＲ遺伝子のゲノム局在化を決定した。密接な連関は、6q21.1-q23に位置付けられたＣＧＡ、θ＝０．０での最大ロッド＝２．７１により示した。さらにＣＮＲは、座D6Z1、全ての染色体のセントロメアだけに局在化し且つ染色体６上で豊富にされた配列を定めるマーカーに結合した。Ledent他［Science 283: 401-404, 1991］は、マウスの遺伝子を分裂させることによって、中枢カンナビノール受容体（ＣＢ１）の機能について調査した。突然変異マウスは、カンナビノイド薬物に応答せず、鎮痛、強化、低体温、低運動移動、及び低血圧を媒介する際の、ＣＢ１の唯一の役割が実証された。
【００３２】
カンナビノイド受容体２（ＣＢ２又はＣＮＲ２）
ＣＢ２に関する背景の教示は、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Omim上に、Victor A. McKusick他によって示されている。ＣＢ２に関する以下の情報は、このソースから抽出した。
【００３３】
そのよく知られた精神活性の他に、マリファナ、又はその主な活性カンナビノイド成分、Δ−９−テトラヒドロカンナビノールは、鎮痛性、抗炎症性、免疫抑制性、抗痙攣性、及び制吐作用を発揮し、同様に緑内障の眼内圧も軽減させる。精巣内で低レベルであることは別にして、脳内で発現するがその末梢では発現しない、Ｇタンパク質結合型カンナビノイド受容体−１（ＣＮＲ１; 114610）は、カンナビノイドの非精神活性作用を容易に説明するものではない。
【００３４】
前骨髄球性白血病細胞ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするために、縮退プライマーを用いたＰＣＲを使用することにより［Munro, Nature 365: 61-65, 1993］、ｃＤＮＡコード化ＣＮＲ２が得られ、これを筆者は、ＣＸ５と呼んだ。配列分析では、推定される３６０アミノ酸７回膜貫通タンパク質が、ＣＮＲ１全体に対して４４％のアミノ酸同一部分を有し、且つリガンド特異性をもたらすよう提示された膜貫通残基に対して６８％の同一部分を有することが予測された。結合分析では、ＣＮＲ２が、カンナビノールのＣＮＲ１よりも高い親和性で、カンナビノイドの高親和性受容体をコードすると判定された。ノーザンブロット分析では、ＨＬ６０骨髄細胞系中の２．５−及び５．０−ｋｂの転写物の発現が、骨髄又は顆粒球分化で増加することが、明らかにされた。ラットＣＸ５同族体を使用することにより、Munro［1993,同書］は、２．５−ｋｂ転写物が脾臓で発現するが、脳、腎臓、肺、胸腺、肝臓、又は鼻上皮では発現しないことを見出した。ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション分析では、脾臓周辺帯での発現が実証された。ＰＣＲ分析では、精製された脾臓マクロファージでのＣＮＲ２発現が検出されたが、ＣＤ５＋ｔ細胞では検出されなかった。Munro［1993,同書］は、ＣＮＲ２の位置が、その内在リガンドが免疫調節の役割をすべきであることを示唆すると推測した。国際放射線ハイブリッドマッピング協会（International Radiation Hybrid Mapping Consortium）は、ＣＮＲ２遺伝子を染色体（stSG90）にマップした。
【００３５】
化合物
上述のように、本発明の化合物は、従来技術のカンナビノイド調節物質に比べ、改善された水溶性及び／又は低下した親油性を示すことが好ましい。本発明の化合物は、いかなる有意な程度にも、血液脳関門を通過しないことが好ましい。
【００３６】
本発明は、本明細書で定義された式Ｉ、Ｉａ、Ｉｂ、及びＩｃの化合物に関する。
【００３７】
本明細書で使用する「ヒドロカルビル」という用語は、１つ又は複数のその他の適切な置換基を任意に含むことができる、少なくともＣ及びＨを含む基を指す。そのような置換基の例には、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、アルキル基、又は環式基を含めることができる。環式基である置換基が可能である他に、置換基の組合せで環式基を形成することができる。ヒドロカルビル基が複数のＣを含む場合、それらの炭素は、必ずしも互いに結合している必要はない。例えば、炭素の少なくとも２個が、適切な元素又は基を介して結合することができる。したがってヒドロカルビル基は、ヘテロ原子を含有することができる。適切なヘテロ原子は、当業者に明らかにされ、例えば、硫黄、窒素、酸素、リン、及びケイ素が含まれる。好ましくは、ヒドロカルビル基はアルキル基、アルケニル基、アリール基、又はシクロアルキル基であり、これらはそれぞれ任意に置換されていてもよい。ヒドロカルビル基は、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、又はフェニルであることが、より好ましい。
【００３８】
本明細書で使用する「アルキル」という用語は、置換（モノ−又はポリ−）又は非置換でよい、飽和直鎖及び分枝状アルキル基の両方を含む。好ましくは、アルキル基はＣ１−２０アルキル基であり、より好ましくはＣ１−１５であり、さらにより好ましくはＣ１−１０アルキル基であり、さらにより好ましくはＣ１−６アルキル基である。特に好ましいアルキル基には、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、及びヘキシルが含まれる。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。当業者なら、「アルキレン」という用語が相応に、即ち本発明の文脈において解釈されることが理解され、この「アルキレン」という用語は、末端Ｙ基を有する、直鎖又は分枝状の置換（モノ−又はポリ−）又は非置換の飽和炭素鎖を包含する。
【００３９】
本明細書で使用する「シクロアルキル」という用語は、置換（モノ−又はポリ−）又は非置換のものでよい環状アルキル基を指す。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。
【００４０】
本明細書で使用する「アルケニル」という用語は、１つ又は複数の二重結合を含有する基であって、分枝状又は非分枝状、及び置換（モノ−又はポリ−）又は非置換のものでよい基を指す。好ましくは、アルケニル基はＣ２−２０アルケニル基であり、より好ましくはＣ２−１５アルケニル基であり、さらにより好ましくはＣ２−１０アルケニル基であり、又は好ましくはＣ２−６アルケニル基である。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。当業者なら、「アルケニレン」という用語が相応に、即ち本発明の文脈において解釈されることが理解され、この「アルケニレン」という用語は、１つ又は複数二重結合を含有し且つ末端Ｙ基を有する、直鎖又は分枝状の置換（モノ−又はポリ−）又は非置換の不飽和炭素鎖を包含する。
【００４１】
本明細書で使用する「アルキニル」という用語は、分枝状又は非分枝状の置換（モノ−又はポリ−）又は非置換でよい、１つ又は複数の三重結合を含有する基を指す。好ましくは、アルキニル基はＣ２−２０アルキニル基であり、より好ましくはＣ２−１５アルキニル基であり、さらにより好ましくはＣ２−１０アルキニル基であり、又は好ましくはＣ２−６アルキニル基である。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。当業者なら、「アルキニレン」という用語が相応に、即ち本発明の文脈において解釈されることが理解され、この「アルキニレン」という用語は、１つ又は複数の三重結合を含有し且つ末端Ｙ基を有する、直鎖又は分枝状の置換（モノ−又はポリ−）非置換不飽和炭素鎖を包含する。
【００４２】
本明細書で使用する「アリール」という用語は、置換（モノ−又はポリ−）又は非置換のものでよいＣ６−１０芳香基を指す。典型的な例には、フェニル及びナフチルなどが含まれる。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。
【００４３】
「ヘテロアリール」という用語は、１個又は複数のヘテロ原子を含有する上記定義したアリール基を指す。適切なヘテロ原子は当業者に明らかにされ、例えば、硫黄、窒素、酸素、リン、及びケイ素が含まれる。適切な置換基には、例えば、アルキル、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ＣＦ３、又は環式基が含まれる。
【００４４】
式Ｉａの化合物（本発明で使用される）は、飽和又は不飽和ヒドロカルビルリンカー基Ｘによってアリール基Ａに結合した極性官能基Ｙを含有する。適切な極性官能基は、当業者に馴染みのあるものになり、例えばＦやＯ、Ｎ、Ｃｌ、又はＢｒなど、１個又は複数の電気陰性原子を含んだ任意の官能基が含まれる。好ましい極性官能基には、ヒドロキシ、アルコキシ、アミン、イミン、ニトロ、シアノ、カルボニル含有基、及びスルホキシ含有基が含まれる。
【００４５】
式Ｉａの化合物の場合、特に好ましい極性基には、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＲ３、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３が含まれ、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である。
【００４６】
式Ｉａの化合物の場合、１つの特に好ましい実施形態では、Ｙが、ＯＲ３、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である。
【００４７】
式Ｉａの化合物の場合、本発明のさらに好ましい実施形態では、Ｙが、ＯＲ３、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ、又はヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、及び環式基から選択された１個又は複数の置換基により任意に置換されたアルキル基である。
【００４８】
式Ｉａの化合物の場合、さらにより好ましくは、Ｙが、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＭｅ、及びＣＯＮＭｅ２から選択される。
【００４９】
式Ｉの化合物の場合、極性基Ｙは、ＮＯ２、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である。
【００５０】
式Ｉの化合物の場合、好ましい極性基Ｙは、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である。
【００５１】
式Ｉの化合物の場合、本発明のさらにより好ましい実施形態で、Ｙは、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ、又はヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、及び環式基から選択された１個又は複数の置換基により任意に置換されたアルキル基である。
【００５２】
式Ｉの化合物の場合、さらにより好ましくは、Ｙが、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＭｅ、及びＣＯＮＭｅ２から選択される。
【００５３】
上記実施形態の全てにおいて、好ましくは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４のそれぞれが独立に、Ｈ、アルキル基、アリール基、又はシクロアルキル基であり、このそれぞれは、ヒドロキシ、ハロ−、アルコキシ−、ニトロ−、及び環式基から選択された１個又は複数の置換基により任意に置換されていてもよい。
【００５４】
本発明の、１つの特に好ましい実施形態では、ｎが０であり、即ちＢが存在せず、−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ部分がアリール基Ａに直接結合している。
【００５５】
式Ｉ及びＩａの化合物の場合、好ましくはＸ−Ｙが、
−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｐ−Ｙ；
−Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ；及び
−Ｃ（Ｒ５）（Ｒ６）Ｃ（Ｒ７）（Ｒ８）−（ＣＨ２）ｒ−Ｙ
から選択され、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８のそれぞれが独立に、Ｈ又はアルキルであり、ｐ、ｑ、及びｒのそれぞれが独立に、１から６であり、より好ましくは２、３、又は４である。
【００５６】
式Ｉ及びＩａの化合物の場合、さらにより好ましくはＸ−Ｙが、
−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｐ−Ｙ；及び
−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ
から選択され、ｐ及びｑのそれぞれが独立に、１から６であり、より好ましくは２、３、又は４である。
【００５７】
１つの好ましい実施形態では、Ｒ５及びＲ６が共にＨである。
【００５８】
式Ｉ及びＩａの化合物の場合、１つの特に好ましい実施形態では、Ｘ−Ｙがｃｉｓ−Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｑ−Ｙである。
【００５９】
式Ｉ及びＩａの化合物の場合、別の好ましい実施形態では、Ｘ−Ｙが−Ｃ（Ｍｅ）２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｒ−Ｙであり、ｒが１から６であり、より好ましくは２、３、又は４である。
【００６０】
別の好ましい実施形態では、Ｘ−Ｙが（ＣＨ２）ｓ−Ｙであり、ｓは１から６であり、より好ましくは２、３、４、又は５である。
【００６１】
好ましくは、式Ｉ及びＩａの化合物の場合、Ａが、任意に置換されたフェニル又はピリジル基であり、より好ましくはフェニル基である。
【００６２】
別の好ましい実施形態では、Ａが、非置換のフェニル又はピリジル基であり、より好ましくは非置換のフェニル基である。
【００６３】
１つの特に好ましい実施形態では、前記化合物が、式Ｉｂのものである。
【００６４】
【化５】
【００６５】
（式中、Ａ、Ｂ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、上記にて定義した通りである。）
【００６６】
別の特に好ましい実施形態では、前記化合物は式Ｉｃのものである。
【００６７】
【化６】
【００６８】
（式中、Ａ、Ｂ、Ｘ、Ｙ、及びＺは、上記にて定義した通りである。）
【００６９】
好ましくは、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル基、又はシクロアルキル基であり、このそれぞれは、１つ又は複数のＯＨ又はハロゲン基により任意に置換されていてもよい。
【００７０】
１つの好ましい実施形態では、ＺがＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ、又はアルキル、又はシクロアルキル基であり、このそれぞれは、１つ又は複数のＯＨ又はハロゲン基により任意に置換されていてもよい。
【００７１】
１つの好ましい実施形態では、ＺがＯＲ１であり、Ｒ１は、アルキル又はシクロアルキル基であり、このそれぞれは、１つ又は複数のＯＨ又はハロゲン基により任意に置換されていてもよい。
【００７２】
１つの好ましい実施形態では、Ｚは、ＯＨ、ＯＥｔ、ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｆ、ＮＨ−シクロプロピル、ＮＨＣＨ（Ｍｅ）ＣＨ２ＯＨ、及びＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択される。
【００７３】
より好ましい実施形態では、Ｚは、ＯＥｔ、ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｆ、ＮＨ−シクロプロピル、ＮＨＣＨ（Ｍｅ）ＣＨ２ＯＨ、及びＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択される。
【００７４】
本発明の化合物を、マウスを使用して、生体外でのカンナビノイド受容体結合及び活性化に関して、且つ生体内での精神活性能力に関して調査した。化合物の脳内レベルの直接測定を使用して、ＣＮＳレベルを定量した（ＣＮＳ作用が不足している化合物に関して）。末梢カンナビノイド活性化を、腸運動アッセイを使用して評価した。結合研究のさらなる詳細は、添付の実施例のセクションに見ることができる。
【００７５】
本発明の特に好ましい化合物は、下記のものから選択する。
【００７６】
【化７】
【００７７】
さらにより好ましくは、式Ｉの化合物は下記の通りである。
【００７８】
【化８】
【００７９】
化合物（１６）が、相当なＣＮＳ作用をもたらすこと無く末梢カンナビノイド受容体を調節することを示したことは、有利である。さらに、ＣＲＥＡＥマウスで実施した実験は、化合物（１６）が、ＣＮＳ作用をもたらすこと無く痙攣の選択的阻害を実現できることを、示唆している。
【００８０】
さらにより好ましい実施形態では、化合物（１６）は、ラセミ混合物である。
【００８１】
合成
式Ｉ及びＩａの化合物は、以下のスキームに従って合成する。
【００８２】
【化９】
【００８３】
簡単に言えば、パラジウムで触媒されたSongashiraカップリング反応を使用して、様々なアルキル側鎖を３−ヨード安息香酸メチルに挿入した。標的化合物（Ｓ５）及び関連する類似体は、簡単な４段階経路によって合成した。まず、酸（Ｓ１）を、ジイミド（EDCI）の存在下でＤＬアラニノールと反応させることにより、アミド（Ｓ２）を良好な収率で得た。ＣｕＩＩ及びピロリジンの存在下での、アミドとアルキン酸とのパラジウム触媒カップリング［Hoye,R.C. et al, J.Org.Chem. 1999, 64, 2450-2453; Hopper,A.T. et al, J.Med.Chem. 1998, 41, 420-427］は、円滑に進行し、その結果、アルキンが得られた（Ｓ３）。酸（Ｓ３）を、エチルクロロホルメート及びジメチルアミンＨＣｌを使用して、（Ｓ４）に定量的に変換した。Lindlar触媒反応により、目標のアルケンが得られた（Ｓ５）。この方法の柔軟性により、Sonogashiraカップリング用の一連のアルキンを使用して、又は第１段階でのアミド形成用の別のアミンから開始することによって、多数の異なる化合物の合成が可能である。
【００８４】
療法に関する適用例
別の態様は、筋疾患を治療するための医薬品の製造のための、本発明による式Ｉａの化合物の使用に関する。好ましい実施形態は、一般式Ｉの化合物に関して既に述べたものと同一である。
【００８５】
筋疾患は、神経筋疾患であることが好ましい。
【００８６】
本明細書で使用する「薬物の調製」という文言は、薬物としての直接的な式Ｉの化合物の使用の他に、別の薬剤に関するスクリーニングプログラムでの使用、又はそのような薬物の製造の任意の段階での使用を含む。
【００８７】
「筋疾患」という用語は、あらゆる筋肉の障害又は疾患を網羅する広い意味で使用され、特に、神経障害又は疾患、より詳細には神経変性疾患、又は神経筋制御を伴う悪条件として使用される。したがって、この用語には、例えばＣＲＥＡＥ、ＭＳ、痙攣、パーキンソン病、ハンチントン病、脊髄損傷、癲癇、トゥーレット症候群、及び膀胱痙攣が含まれる。多発性硬化症及びＥＡＥで痙攣を抑制する際、末梢カンナビノイド受容体の明瞭な役割は無いが、血液：ＣＮＳ障壁が病変領域で損なわれ、治療薬を選択的に到達させることができる［Butter,C. et al, J.Neurol. Sci. 1991, 104, 9-12; Daniel,P.M. et al, J.Neurol. Sci. 1983, 60, 367-376; Juhler, M. et al, Brain Res. 1984, 302, 347-355］。
【００８８】
前述の障害の他、本発明には、失禁や喘息、気管支痙攣、しゃっくりなど、振戦又は筋痙攣が生じ又は顕著である別の分野での用途もある。
【００８９】
別の態様は、痙攣及び振戦を抑制するための医薬品の製造のための、本発明による式Ｉａの化合物の使用に関する。
【００９０】
また本発明の化合物には、様々な胃腸障害の治療での、療法としての用途もある。
【００９１】
末梢ＣＢ１受容体は、胃腸運動、腸分泌、及び胃保護を調節することが知られている。消化管は、内在カンナビノイド（アナンダミド及び２−アラキドノイルグリセロール）を含有し、カンナビノイドＣＢ１受容体は、腸管筋及び粘膜下神経上に見出すことができる。接合部前／シナプス前に位置付けられた腸内（腸管）ＣＢ１受容体の活性化は、ヒト回腸及び結腸を含めた様々な分離した腸管組織での、電気的に誘発された収縮（腸神経からのアセチルコリン放出の阻害に伴う作用）の阻害をもたらす。カンナビノイドアゴニストは、げっ歯類の生体内で腸運動を阻害し、この作用は、少なくとも部分的に、上部胃腸通過［Izzo,A.A. et al, Br.J.Pharmacol. 2000, 129, 1627-1632; Landi,M. et al, Eur.J.Pharmacol. 2002, 450, 77-83］と結腸［Pinto,L. et al, Gastroenterology 2002, 123, 227-234］の両方において、末梢（即ち腸管）ＣＢ１受容体の活性化によって媒介される。したがって、生体内での腸運動の測定は、末梢作用カンナビノイド薬物の活性を評価するための、有用なモデルである。
【００９２】
別の態様は、胃腸障害を治療するための医薬品の製造のための、本発明による式Ｉａの化合物の使用に関する。
【００９３】
好ましくは、胃腸障害は、下記のもの、即ち胃潰瘍、クローン病、分泌性下痢、及び麻痺性イレウスの、１つ又は複数から選択される。
【００９４】
本明細書で使用する「麻痺性イレウス」という用語は、腸内での物質の通過を妨げる、腸の麻痺又は不活性を指す。典型的な場合、これは、抗コリン作動薬、損傷、又は病気の結果と考えられる。麻痺性イレウスは、術後に一般的に生ずるものである。
【００９５】
好ましくは、上記療法上の適用例の全ての場合、調節物質は、末梢カンナビノイド受容体を選択的に調節する。
【００９６】
さらにより好ましくは、調節物質は、中枢カンナビノイド受容体よりも、末梢カンナビノイド受容体を選択的に調節する。
【００９７】
本明細書で使用する「選択的に」という用語は、末梢カンナビノイド受容体に選択的な調節物質を指す。これらは、中枢カンナビノイド受容体よりも選択的であることが好ましい。好ましくは、本発明の調節物質は、末梢カンナビノイド受容体に対する選択比が、中枢カンナビノイド受容体に対して１０：１よりも大きく、より好ましくは１００：１よりも大きく、より好ましくは３００：１よりも大きい。選択比は、当業者によって容易に決定することができる。
【００９８】
いくつかの適用例では、本発明の調節物質は、約１０００ｎＭ未満のＥＣ５０値を有することが好ましく、好ましくは１００ｎＭ未満、より好ましくは約７５ｎＭ未満、さらにより好ましくは約５０ｎＭ未満、好ましくは約２５ｎＭ未満、好ましくは約２０ｎＭ未満、好ましくは約１５ｎＭ未満、好ましくは約１０ｎＭ未満、好ましくは約５ｎＭ未満である。
【００９９】
より好ましくは、調節物質は、実質的に末梢カンナビノイド受容体のみに結合する。
【０１００】
ある特定の好ましい実施形態では、調節物質は、カンナビノイド受容体アゴニストである。本明細書で使用する「アゴニスト」という用語は、当技術分野でのその通常の意味で使用し、即ちこれが結合する受容体を機能的に活性化する化合物を意味する。
【０１０１】
ある特定の好ましい実施形態では、調節物質は、中枢カンナビノイド受容体に実質的にアゴニストとして作用しない。
【０１０２】
調節物質は、ＣＮＳから実質的に除外されることが、さらにより好ましい。したがって調節物質は、望ましくない精神活性作用などのＣＮＳ作用をもたらすこと無く、末梢カンナビノイド受容体を調節することが可能である。
【０１０３】
本発明の別の態様は、末梢カンナビノイド受容体の調節に関連した、障害を治療する方法に関し、前記方法は、投与を必要とする被験者に、上記定義した式Ｉの化合物を治療上有効な量投与することを含む。
【０１０４】
好ましくは、前記障害は、末梢カンナビノイド受容体の不活性化に関連する。
【０１０５】
医薬品組成物
本発明の他の態様は、上記定義された本発明の化合物又は薬学的に許容されるその塩を、薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、又は担体と混合させた状態で含む、医薬品組成物に関する。
【０１０６】
本発明の化合物（薬学的に許容されるその塩、エステル、及び薬学的に許容される溶媒を含む）は、単独で投与することができるが、これらは一般に、特にヒトの治療のために、医薬品担体、賦形剤、又は希釈剤との混合物として投与される。医薬品組成物は、ヒト及び獣医学において、ヒト又は動物に使用することができる。
【０１０７】
本明細書に記述される、様々な種々の形の医薬品組成物のための、そのような適切な賦形剤の例は、"Handbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd Edition, (1994), Edited by A Wade and PJ Weller"に見出すことができる。
【０１０８】
治療の用途に許容される担体又は希釈剤は、医薬品の技術分野で周知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A.R.Gennaro edit. 1985)に記載されている。
【０１０９】
適切な担体の例には、ラクトース、デンプン、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどが含まれる。適切な希釈剤の例には、エタノール、グリセロール、及び水が含まれる。
【０１１０】
医薬品担体、賦形剤、又は希釈剤の選択は、意図される投与経路及び標準的な薬務に関して選択することができる。医薬品組成物は、担体、賦形剤、又は希釈剤として、或いはこれらに加えて、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤を含むことができる。
【０１１１】
適切な結合剤の例には、デンプン、ゼラチン、天然糖、例えばグルコース、無水ラクトース、易流動性ラクトース、β−ラクトース、コーン甘味料、天然及び合成ガム、例えばアカシア、トラガカント、又はアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、及びポリエチレングリコールが含まれる。
【０１１２】
適切な潤滑剤の例には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。
【０１１３】
防腐剤、安定剤、染料、及び着香料も、医薬品組成物中に提供することができる。防腐剤に例には、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。酸化防止剤、及び懸濁化剤を使用してもよい。
【０１１４】
塩／エステル
本発明の化合物は、塩又はエステルとして、特に薬学的に許容される塩又はエステルとして存在することができる。
【０１１５】
本発明の化合物の、薬学的に許容される塩には、適切な酸付加塩又はその塩基性塩が含まれる。適切な医薬品としての塩の概説は、Berge et al, J Pharm Sci, 66, 1-19 (1977)に見出すことができる。塩は、例えば、硫酸やリン酸、ハロゲン化水素酸などの鉱酸のような強無機酸と；酢酸など、非置換又は置換（例えばハロゲンによって）の１から４個の炭素原子を有するアルカンカルボン酸などの強有機カルボン酸と；シュウ酸やマロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸、テトラフタル酸などの飽和又は不飽和ジカルボン酸と；アスコルビン酸やグリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸などのヒドロキシカルボン酸と；アスパラギン酸やグルタミン酸などのアミノ酸と；安息香酸と；或いは、メタン−又はｐ−トルエンスルホン酸など、非置換又は置換（例えばハロゲンによる）の（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−又はアリールスルホン酸などの有機スルホン酸と形成する。
【０１１６】
エステルは、エステル化される官能基に応じて、有機酸又はアルコール／水酸化物を使用して形成する。有機酸には、酢酸などの、非置換又は置換（例えばハロゲンによる）の１から１２個の炭素原子を有するアルカンカルボン酸などのカルボン酸；シュウ酸やマロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸、テトラフタル酸などの飽和又は不飽和ジカルボン酸と；アスコルビン酸やグリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸などのヒドロキシカルボン酸と；アスパラギン酸やグルタミン酸などのアミノ酸と；安息香酸と；或いは、メタン−又はｐ−トルエンスルホン酸などの、非置換又は置換（例えばハロゲンによる）の（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル−又はアリール−スルホン酸などの有機スルホン酸が、含まれる。適切な水酸化物には、水酸化ナトリウムや水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウムなどの無機水酸化物が含まれる。アルコールには、非置換又は置換（例えばハロゲンによる）のものでよい、１〜１２個の炭素原子を有するアルカンアルコールが含まれる。
【０１１７】
鏡像異性体／互変異性体
既に論じた本発明の全ての態様では、本発明は、適切な場合、式Ｉ及びＩａの化合物の全ての鏡像異性体及び互変異性体を含む。当業者なら、光学的性質（１個又は複数の不斉炭素原子）又は互変異性の特性を有する化合物が、理解されよう。対応する鏡像異性体及び／又は互変異性体は、当技術分野で知られている方法によって、分離／調製することができる。したがって本発明は、鏡像異性体及び／又は互変異性体を、その分離された形のもの、又はこれらの混合物、例えば鏡像体のラセミ混合物などの形のものを包含する。
【０１１８】
立体及び幾何異性体
本発明の特定の薬剤のいくつかは、立体異性体及び／又は幾何異性体として存在することができ、例えばこれらは、１つ又は複数の不斉及び／又は幾何中心を有することができ、したがって２つ以上の立体異性及び／又は幾何形態で存在することができる。本発明は、これら阻害剤の、個々の立体異性体及び幾何異性体と、これらの混合物の全ての使用を企図するものである。特許請求の範囲で使用する用語は、前記形が適切な機能活性を維持するならば（必ずしも同じ程度とは限らないが）、それらの形を包含する。
【０１１９】
また本発明は、薬剤又は薬学的に許容されるその塩の、全ての適切な同位体の種類も含む。本発明の薬剤又は薬学的に許容されるその塩の、同位体の種類は、少なくとも１個の原子を、これと同じ原子番号を有するが自然な状態で通常見られる原子質量とは異なる原子質量を有する原子に置き換えたものと定義される。薬剤及び薬学的に許容されるその塩に組み込むことができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、及び塩素の同位体、例えばそれぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３６Ｃｌなどが含まれる。薬剤及び薬学的に許容されるその塩の、ある同位体の種類、例えば３Ｈや１４Ｃなどの放射性同位元素を組み込んだものが、薬物及び／又は基質組織分布の研究では有用である。トリチウム化した、即ち３Ｈと、炭素−１４、即ち１４Ｃの同位体は、その調製及び検出が容易であるので特に好ましい。さらに重水素、即ち２Ｈなどの同位体による置換によって、より高い代謝安定性から得られるある治療上の利点がもたらされ、例えば、生体内半減期が長くなり、又は投薬要件が減少し、したがって、一部の環境では好ましいと考えられる。本発明の薬剤及び本発明の薬学的に許容されるその塩の、同位体の種類は、一般に、適切な試薬の適切な同位体の種類を使用して、従来の手順によって調製することができる。
【０１２０】
溶媒和化合物
本発明は、本発明の化合物の溶媒和形態も含む。特許請求の範囲で使用されるこの用語は、これらの形態を包含する。
【０１２１】
多形
本発明はさらに、本発明の化合物がその様々な結晶の形、多形、及び（無）水和の形にあるものに関する。化合物は、そのような化合物の合成方法で使用される溶媒からの精製及び／又は単離方法を僅かに変えることによって、そのような形のいずれかで単離できることは、製薬産業において十分確立されている。
【０１２２】
プロドラッグ
本発明はさらに、プロドラッグの形にある本発明の化合物を含む。そのようなプロドラッグは、一般に式I及びＩａの化合物であって、１つ又は複数の適切な基が、ヒト又は哺乳類の被験体に投与したときに変性を逆にすることができるように変性しているものである。そのような復帰変異は、通常、そのような被験体内で天然に存在する酵素によって行われるが、生体内での復帰変異を行うために、そのようなプロドラッグと共に第２の薬剤を投与することが可能である。そのような変性の例には、エステルが含まれ（例えば、上記にて記載したもののいずれか）、復帰変異をエステラーゼなどで実施することができる。その他のそのような系は、当業者に周知である。
【０１２３】
投与
本発明の医薬品組成物は、経口、直腸、膣、非経口、筋肉内、腹腔内、動脈内、クモ膜下内、気管支内、皮下、皮内、静脈内、鼻、頬、又は舌下からの投与経路に適応させることができる。
【０１２４】
経口投与の場合、圧縮錠、丸薬、錠剤、ゲル、ドロップ、及びカプセルが特に使用される。好ましくはこれらの組成物は、用量当たりの活性成分を１から２５０ｍｇ含有し、より好ましくは１０〜１００ｍｇ含有する。
【０１２５】
その他の投与形態には、静脈内、動脈内、クモ膜下、皮下、皮内、腹腔内、又は筋肉内から注入することができ、且つ滅菌又は滅菌可能な溶液から調製される、溶液又はエマルジョンが含まれる。本発明の医薬品組成物は、坐薬、ペッサリー、懸濁剤、エマルジョン、ローション、軟膏、クリーム、ゲル、スプレー、溶液、又は粉剤の形でもよい。
【０１２６】
経皮投与の代替の手段は、皮膚用パッチ剤の使用によるものである。例えば活性成分は、ポリエチレングリコール又は流動パラフィンの水性エマルジョンからなるクリームに組み入れることができる。活性成分は、必要と考えられる安定化剤及び防腐剤と一緒に、白蝋又は白色軟質パラフィンベースからなる軟膏に１から１０重量％の間の濃度で組み入れることもできる。
【０１２７】
注入可能な形では、用量当たりの活性成分が１０〜１０００ｍｇの間で含有され、好ましくは１０〜２５０ｍｇの間である。
【０１２８】
組成物は、単位剤形に配合することができ、即ち、１回分の用量を含有するよう個別に分けられた形、或いは、単位用量を複数回分又はサブユニット分含有する形に配合することができる。
【０１２９】
投薬量
当業者なら、必要以上の実験をすること無く、被験体に投与される即時組成物の１つの適切な用量を、容易に決定することができる。典型的な場合、医師は、個々の患者に最も適したものになる実際の用量を決定することになり、これは、用いられる特定の化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用時間、年齢、体重、全身の健康、性別、食生活、投与形態及び時間、排泄速度、複合薬、特定の状態の重症度、個々が受けている療法を含めた様々な要因に応じて変わることになる。本明細書に開示される投薬量は、平均的なケースの例示である。当然ながら、より高く又はより低い投薬量範囲に値し且つそのような範囲が本発明の範囲内にある、個々の場合が存在する可能性がある。
【０１３０】
必要性に応じて、薬剤は、０．０１から３０ｍｇ／ｋｇ体重、例えば０．１から１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１から１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で、投与することができる。
【０１３１】
例示的な実施形態では、１０から１５０ｍｇ／日が、１回又は複数回に分けた用量で患者に投与される。
【０１３２】
組合せ
特に好ましい実施形態では、本発明の１種又は複数の化合物を、１種又は複数のその他の薬学的に活性な薬剤と組み合わせて投与する。そのような場合、本発明の化合物は、１種又は複数のその他の薬学的に活性な薬剤と共に、連続的に、同時に、又は順次投与することができる。
【０１３３】
アッセイ
本発明は、アッセイ、即ちカンナビノイド受容体、より好ましくは末梢カンナビノイド受容体を調節することができる薬剤の、スクリーニングに使用されるアッセイを使用し、且つ包含する。そのようなアッセイの詳細については、後で示す。
【０１３４】
したがって、本発明の別の態様は、カンナビノイド受容体の活性を調節することが可能な別の化合物を同定するためのアッセイにおける、式Ｉａの化合物又は薬学的に許容されるその塩の使用に関する。アッセイは、競合結合アッセイであることが好ましい。
【０１３５】
そのようなアッセイでは、アミノ酸配列及び／又はヌクレオチド配列などの適切な標的の１つ又は複数を使用して、末梢カンナビノイド受容体を調節することが可能な薬剤の同定を行う。そのような試験で用いられる標的は、溶液中で自由になり、固体支持体に固着され、細胞表面に担持され、又は細胞内に位置付けられる。標的活性の消滅、又は標的と試験される薬剤との間の結合複合体の形成を、測定することができる。
【０１３６】
本発明のアッセイはスクリーニングでよく、それによって、いくつかの薬剤が試験される。１つの態様では、本発明のアッセイ方法は、高速大量処理スクリーンである。
【０１３７】
薬物スクリーニングのための技法は、１９８４年９月１３日に公開されたGeysenの欧州特許出願第８４／０３５６４号に記載されている。要約すれば、多数の異なる小ペプチド試験化合物を、プラスチックピンや何らかのその他の表面などの、固体基板上で合成する。ペプチド試験化合物を、適切な標的又はその断片と反応させ、洗浄する。次いで、当技術分野で周知の方法を適切に適合させることなどによって、結合部分を検出する。精製した標的は、薬物スクリーニング技法で使用するために、プレート上に直接被覆することもできる。或いは、非中和抗体を使用して、ペプチドを捕獲し、それを固体支持体上に固定化することができる。
【０１３８】
また本発明は、競合薬物スクリーニングアッセイの使用も企図するものであり、この場合、標的に結合することが可能な中和抗体が、標的に結合させるための試験化合物と特異的に競合する。
【０１３９】
スクリーニングのための別の技法は、物質に対して適切な結合親和性を有する薬剤の、高速大量処理スクリーニング（ＨＴＳ）を行い、これはＷＯ−Ａ−８４／０３５６４に詳細に記載されている方法に基づくものである。
【０１４０】
本発明のアッセイ方法は、定量アッセイと同様に、試験化合物の小規模及び大規模スクリーニングの両方に適したものになることが予測される。
【０１４１】
好ましい態様では、本発明のアッセイは、表面にＣＢ１受容体を呈示する細胞を利用する。これらの細胞は、そのような細胞を有する被験体から分離することができる。しかし細胞は、トランスフェクションによってこれらの細胞がその表面にＣＢ１受容体を呈示するように、細胞をトランスフェクトすることによって調製することが好ましい。
【０１４２】
本発明の１つの態様は、
（ａ）上述のアッセイ方法を実施するステップと、
（ｂ）１種又は複数のカンナビノイド受容体を調節することが可能な、１種又は複数の候補化合物を同定するステップと、
（ｃ）ある量の前記１種又は複数の候補化合物を調製するステップと
を含むプロセスに関する。
【０１４３】
本発明の別の態様は、
（ａ）上述のアッセイ方法を実施するステップと、
（ｂ）１種又は複数のカンナビノイド受容体を調節することが可能な、１種又は複数の候補化合物を同定するステップと、
（ｃ）前記１種又は複数の候補化合物を含む医薬品組成物を調製するステップと
を含むプロセスを提供する。
【０１４４】
本発明の別の態様は、
（ａ）上述のアッセイ方法を実施するステップと、
（ｂ）１種又は複数のカンナビノイド受容体を調節することが可能な、１種又は複数の候補化合物を同定するステップと、
（ｃ）１種又は複数のカンナビノイド受容体を調節することが可能な、１種又は複数の候補化合物を変性させるステップと、
（ｄ）上述のアッセイ方法を実施するステップと、
（ｅ）任意に、前記１種又は複数の候補化合物を含む医薬品組成物を調製するステップと
を含むプロセスを提供する。
【０１４５】
また本発明は、上述の方法によって同定された候補化合物にも関する。
【０１４６】
本発明のさらに別の態様は、上述の方法によって同定された候補化合物を含む医薬品組成物に関する。
【０１４７】
本発明の別の態様は、筋疾患及び／又は胃腸障害の治療で使用される医薬品組成物の調製における、上述の方法によって同定された候補化合物の使用に関する。
【０１４８】
上記方法は、１種又は複数のカンナビノイド受容体、より好ましくは末梢カンナビノイド受容体の、調節物質として有用な候補化合物のスクリーニングに使用することができる。
【０１４９】
レポーター
広く様々なレポーターを、本発明のアッセイ方法（並びにスクリーニング）で使用することができ、好ましいレポーターは、都合良く検出可能なシグナルを供給するものである（例えば分光法によって）。例として、レポーター遺伝子は、光吸収特性を変化させる反応を触媒する酵素を、コード化することができる。
【０１５０】
その他のプロトコルは、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）、ラジオイムノアッセイ（RIA）、及び蛍光発色セルソーター（FACS）を含む。２つの不干渉エピトープに対して反応性のあるモノクローナル抗体を利用する、２部位モノクローナルベースイムノアッセイも、使用することができる。これら及びその他のアッセイは、他の場所にも記載されているが、とりわけHampton R et al[1990, Serological Methods, A Laboratory Manual, APS Press, St Paul MN]及びMaddox DE et al[1983, J Exp Med 15 8: 121 l]に記載されている。
【０１５１】
レポーター分子の例には、（ガラクトシダーゼ、インベルターゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ、クロラムフェニコール、アセチルトランスフェラーゼ、（グルクロニダーゼ、エクソ−グルカナーゼ、及びグルコアミラーゼが含まれるが、これらに限定されない。或いは、放射標識し又は蛍光タグ標識したヌクレオチドを新生転写物に組み込むことができ、次いで、これがオリゴヌクレオチドプローブに結合したときに同定する。
【０１５２】
他の例として、Pharmacia Biotech（Piscataway, NJ）やPromega（Madison, WI）、US Biochemical Corp（Cleveland, OH）などのいくつかの会社は、商用キット及びアッセイ手順に関するプロトコルを供給している。適切なレポーター分子又は標識には、これらの放射性核種、酵素、蛍光、化学発光、又は色素生産性の薬剤、並びに基質、補助因子、阻害剤、磁性粒子などが含まれる。そのような標識の使用を教示する特許には、ＵＳ−Ａ−３８１７８３７；ＵＳ−Ａ−３８５０７５２；ＵＳ−Ａ−３９３９３５０；ＵＳ−Ａ−３９９６３４５；ＵＳ−Ａ−４２７７４３７；ＵＳ−Ａ−４２７５１４９、及びＵＳ−Ａ−４３６６２４１が含まれる。
【０１５３】
ＣＢ１受容体及びＣＢ２受容体結合アッセイ
ＣＢ１受容体結合アッセイとＣＢ２受容体結合アッセイの詳細は、Petrocellis et al [2000 FEBS Letter 483 52-56]に見ることができる。この参考文献からのアッセイについて、関係ある情報を以下に述べる。他のアッセイを使用することができる。
【０１５４】
ＣＢ１受容体に関する置換アッセイを、高親和性リガンドとしての［３Ｈ］SR141716A（０．４ｎＭ、５５Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Amerscham社製）及び前述の濾過技法［１２〜１４］を使用して、凍結したオスＣＤラット脳（Charles River社製、イタリア）からの膜製剤（０．４ｍｇ／チューブ）上で、且つ１００μＭ PMSFの存在下で実施した。特異的結合を、１μＭ SR 14176A（Sanofi Recherch、フランスから寄贈）を用いて計算したが、これは８４．０％であった。ＣＤラットからの脾臓を使用して、膜（０．４ｍｇ／チューブ）を調製し、前述のように［１４］、［３Ｈ］WIN55,212-2（０．８ｎＭ、５０．８ＣＩ／ｍｍｏｌ、NEN-Dupont社製）を使用して、且つやはり１００μＭ PMSFの存在下で、ＣＢ２結合アッセイを実施した。特異的結合を、１μＭ HU-348（Prof.R.Mechoulam及びPharmosから寄贈）を用いて計算したが、これは７５．０％であった。全ての場合において、Cheng-prusoff式をＩＣ５０値（GraphPadによって得られた）に当てはめることによりＫ１値を計算したが、これは、試験化合物の濃度を増大させることによって、結合した放射性リガンドの置換を行うためのものである［特定の参考文献に関する詳細は、その文書自体の中に見ることができる］。
【０１５５】
宿主細胞
本発明で使用されるポリヌクレオチド、例えば調節物質として使用され、又は調節物質を発現させるものとして使用されるようなものを、宿主細胞に導入することができる。
【０１５６】
「宿主細胞」という用語は、本発明に関し、本発明の調節物質を含むことができる任意の細胞を含む。
【０１５７】
この場合、ポリヌクレオチドは、原核細胞又は真核細胞に、例えば酵母、昆虫、又は哺乳類の細胞に導入することができる。
【０１５８】
本発明のポリヌクレオチドは、トランスフェクションや形質転換、電気穿孔法などの、当技術分野で知られている様々な技法を使用して、適切な宿主細胞に導入することができる。例えば、レトロウイルスや単純ヘルペスウイルス、アデノウイルスなどの組換えウイルスベクターによる形質転換、核酸の直接注入、及び微粒子銃による形質転換を引き起こすことが可能である。
【０１５９】
したがって、本発明の他の実施形態は、本発明の標的であり又はその標的を発現するポリヌクレオチドを用いて形質転換され又はトランスフェクトされた、宿主細胞を提供する。前記ポリヌクレオチドは、標的になり又は標的を発現することになるポリヌクレオチドの複製及び発現用の、ベクターを有することが好ましい。細胞は、前記ベクターに適合するよう選択され、例えば、原核（例えば細菌）、真菌、酵母、又は植物細胞でよい。
【０１６０】
グラム陰性菌である大腸菌（E.coli）は、異種遺伝子発現用の宿主として広く使用される。しかし、大量の異種タンパク質は、細胞内に蓄積される傾向がある。その後に行われる、大腸菌細胞内タンパク質の大部分からの所望のタンパク質の精製は、時々難しくなる可能性がある。
【０１６１】
大腸菌とは対照的に、バチルス（Bacillus）属からの細菌は、培地にタンパク質を分泌することができるので、異種宿主として非常に適切である。宿主として適切なその他の細菌は、ストレプトマイセス（Streptomyces）属及びシュードモナス（Pseudomonas）属からのものである。
【０１６２】
本発明のポリペプチドをコード化するポリヌクレオチドの性質、及び／又は発現したタンパク質のさらなる処理に対する望ましさに応じて、酵母やその他の真菌などの真核宿主が好ましいと考えられる。一般に、酵母菌は、真菌細胞よりも取扱いが容易であるので好ましい。しかし、一部のタンパク質は、酵母菌からの分泌が不十分であり、又は場合によっては適正に処理されない（例えば、酵母中の過剰なグリコシル化）。このような場合、異なる真菌宿主生物を選択すべきである。
【０１６３】
本発明の範囲内で適切な発現宿主の例は、アスペルギルス（Aspergillus）種（ＥＰ−Ａ−０１８４４３８及びＥＰ−Ａ−０２８４６０３に記載されているものなど）やトリコデルマ（Trichoderma）種などの真菌；バチルス種（ＥＰ−Ａ−０１３４０４８及びＥＰ−Ａ−０２５３４５５に記載されているものなど）やストレプトマイセス種、シュードモナス種などの細菌；及びクルイベロマイセス（Kluyveromyces）種（ＥＰ−Ａ−００９６４３０及びＥＰ−Ａ−０３０１６７０に記載されているものなど）やサッカロマイセス（Saccharomyces）種などの酵母である。例として、典型的な発現宿主は、Aspergillus niger、Aspergillus niger var.tubigenis、Aspergillus niger var.awamori、Aspergillus aculeatis、Aspergillus nidulants、Aspergillus orvzae、Trichoderma reesei、Bacillus subtilis、Bacillus licheniformis、Bacillus amyloliquefaciens、Kluyveromyces lactis、及びSaccharomyces cerevisiaeから選択することができる。
【０１６４】
大規模に変性されたポリペプチドは、その機能を完全にするために、正しい処理を必要とする可能性がある。そのような場合、哺乳動物細胞発現系（ＨＥＫ−２９３やＣＨＯ、ＨｅＬＡなど）が必要とされ、ポリペプチドは細胞内で、又は細胞膜上で発現し、或いは適切なリーダー配列に先行される場合には、培地内に分泌される。
【０１６５】
適切な宿主細胞、例えば酵母や真菌、植物、哺乳類などの宿主細胞の使用は、本発明の組換え発現産物に最適な生物活性を与えることが必要と考えられるので、翻訳後修飾（例えば、ミリストイル化、グリコシル化、切断、脂質化、及びチロシン、セリン、又はトレオニンのリン酸化）をもたらす可能性がある。
【０１６６】
生物
本発明に関し、「生物」という用語は、本発明による標的及び／又はそこから得られる産物を含むことができる、任意の生物を含む。生物の例には、真菌、酵母、又は植物を含めることができる。
【０１６７】
本発明に関し、「トランスジェニック生物」という用語は、本発明による標的及び／又は得られた産物を含む任意の生物を含む。
【０１６８】
宿主細胞／宿主生物の形質転換
先に述べたように、宿主生物は、原核又は真核生物にすることができる。適切な原核宿主の例には、大腸菌及び枯草菌（Bacillus subtilis）が含まれる。原核宿主の形質転換に関する教示は、当技術分野で十分実証されており、例えば、Sambrook et al [Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd edition, 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press]、及びAusubel et al, [Current Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley & Sons, Inc.]を参照されたい。
【０１６９】
原核宿主を使用する場合、ヌクレオチド配列は、イントロンの除去などによって、形質転換前に適切に修飾する必要がある。
【０１７０】
別の実施形態では、トランスジェニック生物が酵母でよい。この点に関し、酵母は、異種遺伝子発現用のビヒクルとしても、広く使用されている。サッカロミセスセレビジエ（Saccharomyces cerevisiae）には、異種遺伝子発現のための使用も含め、工業的な用途としての長い歴史がある。サッカロミセスセレビジエでの異種遺伝子の発現は、Goodey et al [1987, Yeast Biotechnology, D R Berry et al, eds, pp 401-429, Allen and Unwin, London]及びKing et al [1989, Molecular and Cell Biology of Yeasts, E F Walton and G T Yarronton, eds, pp 107-133, Blackie, Glasgow]に概説されている。
【０１７１】
いくつかの理由で、サッカロミセスセレビジエは、異種遺伝子発現に十分適している。第１に、ヒトに対して病原性が無く、ある内毒素を産生することができない。第２に、様々な目的の何世紀にもわたる商業的開発の後の、安全な使用という長い歴史がある。この結果、広く公に受け入れられるようになった。第３に、大規模な商業的利用及び生物に傾注された研究の結果、サッカロミセスセレビジエの遺伝子及び生理学、並びに大規模な発酵特性に関する豊富な知識が得られた。
【０１７２】
サッカロミセスセレビジエでの異種遺伝子発現、及び遺伝子産物の分泌の原理の概説は、E Hinchcliffe E Kenny [1993, "Yeast as a vehicle for the expression of heterologous genes", Yeasts, Vol 5, Anthony H Rose and J Stuart Harrison, eds, 2nd edition, Academic Press Ltd.]に示されている。その維持のために宿主ゲノムとの組換えを必要とする組込みベクター、及び自己複製プラスミドベクターを含めた、いくつかのタイプの酵母ベクターが利用可能である。
【０１７３】
トランスジェニックサッカロマイセスを調製するために、酵母での発現を目的として設計された構成体に本発明のヌクレオチド配列を挿入することにより、発現構成体を調製する。異種発現に使用されるいくつかのタイプの構成体が、開発されている。この構成体は、本発明のヌクレオチド配列に融合した酵母中で活性なプロモーターを含有し、通常は、GAL1プロモーターなどの酵母由来のプロモーターが使用される。通常、SUC2シグナルペプチドをコード化する配列など、酵母由来のシグナル配列を使用する。酵母中で活性なターミネーターは、発現系を終了させる。
【０１７４】
酵母の形質転換では、いくつかの形質転換プロトコルが開発されている。例えば、本発明によるトランスジェニックサッカロマイセスは、Hinnen et al [1978, Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 75, 1929]; Beggs,J D [1978, Nature, London, 275, 104];及びIto,H et al [1983, J Bacteriology 153, 163-168]の教示に従って調製することができる。
【０１７５】
形質転換した酵母細胞は、様々な選択的マーカーを使用して選択する。形質転換で使用されるマーカーには、LEU2やHIS4、TRP1などのいくつかの栄養要求性マーカーと、アミノグリコシド抗生物質マーカー、例えばG418などの、主流を占める抗生物質抵抗性マーカーとがある。
【０１７６】
別の宿主生物は、植物である。遺伝子操作された植物の構成の基本原理は、遺伝情報を植物ゲノムに挿入して、この挿入された遺伝物質の安定な維持が行われるようにすることである。遺伝情報を挿入するためのいくつかの技法が存在し、２つの主な原理は、遺伝情報の直接的な導入と、ベクター系を用いた遺伝情報の導入である。一般的技法の概説は、Potrykus [Annu Rev Plant Physiol Plant Mol Biol [1991]42:205-225]、及びChristou [Agro-Food-Industry Hi-Tech March/April 1994 17-27]の論文に見ることができる。植物の形質転換に関する他の教示は、ＥＰ−Ａ−０４４９３７５に見ることができる。
【０１７７】
本発明のヌクレオチド配列に適したその他の宿主には、高等真核細胞、例えば昆虫細胞や脊椎動物細胞などであって、特に、ヒト細胞も含めた哺乳類細胞、又はその他の多細胞生物からの有核細胞が含まれる。近年、培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖が、日常的な手順になっている。有用な哺乳類宿主細胞系の例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞やＮＩＨ ３Ｔ３細胞、ＨｅＬａ細胞、２９３Ｔ細胞などの、上皮又は線維芽細胞系である。
【０１７８】
本発明のヌクレオチド配列は、宿主細胞に安定に組み込むことができ、又は当技術分野で知られている方法を使用して、一時的に発現させることができる。例として、安定にトランスフェクトされた哺乳類細胞は、選択可能なマーカー遺伝子を有する発現ベクターを細胞にトランスフェクトし、トランスフェクトされた細胞を、マーカー遺伝子を発現させる細胞に選択的な条件下で成長させることによって、調製することができる。一時的なトランスフェクタントを調製するには、哺乳類細胞に、レポーター遺伝子をトランスフェクトして、トランスフェクション効率をモニタする。
【０１７９】
そのように安定な又は一時的にトランスフェクトされた細胞を生成するには、細胞に、十分な量の本発明のヌクレオチド配列をトランスフェクトすべきである。本発明のヌクレオチド配列の正確な量は、経験的に決定することができ、特定の細胞及びアッセイに合わせて最適化することができる。
【０１８０】
したがって本発明は、標的になり又は標的を発現することになるヌクレオチド配列で宿主細胞を形質転換する方法も提供する。ヌクレオチド配列で形質転換された宿主細胞は、コード化タンパク質の発現に適した条件下で培養することができる。組換え細胞によって生成されたタンパク質は、細胞の表面に呈示される。望みに応じて、且つ当業者に理解されるように、コード配列を含有する発現ベクターは、コード配列の分泌を特定の原核又は真核細胞膜内に向けるシグナル配列を用いて、設計することができる。その他の組換え構成体は、コード配列と、ポリペプチドドメインをコードするヌクレオチド配列とを接合することができ、それによって、可溶性タンパク質の精製が促進される[Kroll DJ et al (1993) DNA Cell Biol 12:441-53]。
【０１８１】
本発明を、一例として且つ下記の図を参照しながら、さらに記述する。
【実施例】
【０１８２】
化合物を、分取Ｃ−１８カラム（Hypersil PEP １００×２１ｍｍ内径、５μｍ粒径、及び１００Å孔径）及び２０分にわたる定組成勾配を使用する逆相ＨＰＬＣ（Gilson）によって精製した。
【０１８３】
Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−ヨードベンズアミド（１）
【０１８４】
【化１０】
【０１８５】
窒素雰囲気中、室温で、３−ヨード安息香酸（１０．０２ｇ、４０．３０ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタンに溶かした溶液に（１８０ｍＬ）、EDCI（７．７２ｇ、４０．３０ｍｍｏｌ）を添加し、その後トリエチルアミン（８．０ｍＬ、６０．４５ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、さらに５分間室温で撹拌した。次いでDL Alaninol（３．０２ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、飽和塩水及び飽和重炭酸ナトリウムの混合物で洗浄し（１：１；２×１５０ｍＬ）、その後、飽和塩水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機物を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を真空蒸発させた。残留物を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１％から８％ メタノール勾配）、化合物１が、白色固体として得られた（４．１４ｇ、１３．６ｍｍｏｌ、収率３４％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．４１（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、３．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．５，Ｊ２ １０．９Ｈｚ）、３．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ２．９，Ｊ２ １０．９Ｈｚ）、４．３８（１Ｈ，ｍ）、６．４６（１Ｈ，ｍ）、７．２７（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８８Ｈｚ）、８．２１（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．４９（ＣＨ３）、４８．５３（ＣＨ２）、６７．１９（ＣＨ２）、９４．５９（Ｃ）、１２６．７９（ＣＨ）、１２９．５８（ＣＨ）、１３０．６２（ＣＨ）、１３６，３７（ＣＨ）、１３６．８３（Ｃ）、１６６．７１（Ｃ）。
Ｃ１０Ｈ１１ＮＯ２Ｉ・１／２Ｈ２Ｏ 計算値：Ｃ ３８．２３％、Ｈ ３．８５％、Ｎ ４．４６％；実測値：Ｃ ３８．９５％、Ｈ ３．８０％、Ｎ ４．０８％［Drug Design and Discovery 2000, 281-294］
【０１８６】
薗頭（Sonogashira）カップリング反応の一般的手順
方法Ａ
［Tetrahedron 2000, 56, 4777-4792］ 塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）（３．５モル％）、ヨウ化銅（Ｉ）（８モル％）、及びトリエチルアミン（４ｍｍｏｌ）を、Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−ヨードベンズアミド（１）（１ｍｍｏｌ）をDMF（５ｍＬ）に溶かした溶液に添加した。混合物を、窒素雰囲気中で１時間、室温で撹拌した。アルキン（１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を、６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物を、シリカゲル上でのショートフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１％から４％ メタノール勾配）、所望の化合物が得られた。
【０１８７】
Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−（５−ヒドロキシ−ペント−１−イニル）−ベンズアミド（２）
【０１８８】
【化１１】
【０１８９】
指定された化合物（２）が合成されるよう、方法Ａを使用し、（１）（０．５０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を４−ペンチル−１−オールに結合させた結果、Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−（５−ヒドロキシ−ペント−１−イニル）−ベンズアミド（２）（０．３１４ｇ、１．２０ｍｍｏｌ；７３％）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．１９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．６８〜１．８１（３Ｈ，ｍ）、２．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ ６．９Ｈｚ）、３．０４〜３．１７（１Ｈ，ｍ）、３．３９〜３．７４（５Ｈ，ｍ）、４．１２〜４．２３（１Ｈ，ｍ）、６．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、７．２２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ６．３，Ｊ２ １１．６７Ｈｚ）、７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．６８（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．３０（ＣＨ３）、１７．４４０（ＣＨ３）、３１．６６（ＣＨ２）、４８．４９（ＣＨ２）、６１．９２（ＣＨ２）、６７．００（ＣＨ２）、８０．６４（Ｃ）、９１．０３（Ｃ）、１２４．６６（Ｃ）、１２６．７９（ＣＨ）、１２８．９３（ＣＨ）、１３０．３２（ＣＨ）、１３４．７４（ＣＨ）、１３４．９０（Ｃ）、１６７．７９（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２６２（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９０】
３−Ｈｅｐｔ−１−イニル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（３）
【０１９１】
【化１２】
【０１９２】
指定された化合物（３）が合成されるよう、方法Ａを使用し、（１）（０．２５ｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を１−ヘプチンに結合させた結果、３（０．２３６ｇ、０．８０ｍｍｏｌ；９５％）が無色の油として得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．２２（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．２９〜１．４１（４Ｈ，ｍ）、１．５３〜１．６０（２Ｈ，ｍ）、２．３６（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、２．８１（２Ｈ，ｍ）、２．８９（１Ｈ，ｍ）、４．１５〜４．１９（１Ｈ，ｍ）、６．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．３Ｈｚ）、７．２４（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７３（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１４．３１（ＣＨ３）、１７．４０（ＣＨ３）、１９．７１（ＣＨ２）、２２．５７（ＣＨ２）、２８．７３（ＣＨ２）、３１．４９（ＣＨ２）、４８．４４（ＣＨ）、６６．７９（ＣＨ２）、６７．００（ＣＨ２）、８０．１３（Ｃ）、９２．０４（Ｃ）、１２４．９７（Ｃ）、１２６．５３（ＣＨ）、１２８．９０（ＣＨ）、１３０．３３（ＣＨ）、１３２．４５（ＣＨ）、１３４．９５（Ｃ）、１６７，８０（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２７４（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９３】
３−（５−シアノ−ペンチル−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（７）
【０１９４】
【化１３】
【０１９５】
指定された化合物（７）が合成されるよう、方法Ａを使用し、（１）（０．３００ｇ、０．９８３ｍｍｏｌ）をヘキス−５−インニトリル（１１９ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）に結合させた結果、３−（５−シアノ−ペンチル−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（７）が０．１２４ｇ得られ、精製後の収率は４６．６％であった。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．９７（２Ｈ，ｍ）、２．５５〜２．６４（４Ｈ，ｍ）、３．６７（１Ｈ，ｍ）、３．７８（１Ｈ，ｍ）、４．２８（１Ｈ，ｍ）、６．４１（１Ｈ，ｍ）、７．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．８０（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．６８（ＣＨ２）、１７．５０（ＣＨ３）、１８．９４（ＣＨ２）、２４．８７（ＣＨ２）、４８．５２（ＣＨ）、６７．２２（ＣＨ２）、８１．９５（Ｃ）、８８．５（Ｃ）、１１９．５５（Ｃ）、１２４．１３（Ｃ）、１２７．０７（ＣＨ）、１２９．０６（ＣＨ）、１３０．４５（ＣＨ）、１３４．８０（ＣＨ）、１３５．００（Ｃ）、１６７．６１（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２７１（Ｍ＋Ｈ）。
【０１９６】
方法Ｂ
［J.Org.Chem. 1999, 64, 4777-4792; J.Med.Chem. 1998, 41, 420-427］ テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２モル％）及びヨウ化銅（Ｉ）（７モル％）を、丸底フラスコに入れたピロリジン（１５ｍＬ）に添加し、窒素雰囲気中で５分間、室温で撹拌した。この溶液に、Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−ヨードベンズアミド（ｍｍｏｌ）を添加し、さらに１５分間室温で撹拌した。アルキン（１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を６０℃で３時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮し、残留物を、DOWEX50 WX80（出発材料の１０×重量）で処理し、DOWEX50 WX80をアセトニトリルで洗浄し（３×２０ｍＬ）、次いでアセトニトリル／水（３／１）の混合物中に懸濁させた。上記残留物をアセトニトリル／水（１：１、２０ｍＬ）中に溶解し、樹脂懸濁液に添加し、２０分間振盪させた。樹脂を濾別し、アセトニトリル／水（３／１）で洗浄し、溶媒を、真空中で濾液から除去した。残留物を、シリカゲル上でのショートフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ、１％から８％ メタノール勾配、１％ ＡｃＯＨ）、所望の化合物が得られた。
【０１９７】
方法Ｂ１：DOWEX50 WX80による組成材料の処理を、アセトニトリル／水（３／１）の代わりにメタノールの存在下で行った。
【０１９８】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−５−イン酸（４）
【０１９９】
【化１４】
【０２００】
ヨードベンズアミド（１）（２．００ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を、方法Ｂを使用して５−ヘキシン酸と結合し、生成物（４）（１．８７ｇ、６．４２ｍｍｏｌ；収率９９％）を得た。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．４９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．１４（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、２．６７〜２．７６（４Ｈ，ｍ）、３．８３〜３．９０（２Ｈ，ｍ）４．３９〜４．４５（１Ｈ，ｍ）７．６４（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．７６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．９９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、８．１０（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤ３ＯＤ）；１７．４７（ＣＨ２）、１９．９９（ＣＨ３）、３６．２５（ＣＨ２）、６６．５４（ＣＨ２）、８１．８２（Ｃ）、９１．５３（Ｃ）、１２６．０３（Ｃ）、１２８．０５（ＣＨ）、１２９．９９（ＣＨ）、１３１．７５（ＣＨ）、１３５．６９（ＣＨ）、１３６．５８（Ｃ）、１６８．５３８（Ｃ）。
ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ ２９０（Ｍ＋Ｈ）。
【０２０１】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）−フェニル］−ヘキス−５−イン酸メチルエステル（２０）
【０２０２】
【化１５】
【０２０３】
方法Ｂ１を後処理で使用した場合、６−［３−９（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）−フェニル］−ヘキス−５−イン酸メチルエステル（２０）は、酸４の代わりに得られた。１（０．１００ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を５−ヘキシン酸（０．０９１ｇ、０．２７６ｍｍｏｌ）と結合した結果、２０が得られた（０．０９１ｇ、０．２７ｍｍｏｌ、収率８５％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３１（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、２．０３（３Ｈ，ｓ）、２．３９〜２．５９（４Ｈ，ｍ）、３．６１〜３．７２（２Ｈ，ｍ）、４．１９〜４．２７（１Ｈ，ｍ）、７．４６（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、８．０５（１Ｈ，ｓ）。
【０２０４】
５−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−４−イン酸（５）
【０２０５】
【化１６】
【０２０６】
ヨードベンズアミド（１）（２．００ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を、方法Ｂを使用して５−ヘキシン酸と結合させ、（４）を得た（１．８７ｇ、６．４２ｍｍｏｌ；収率９９％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤ３ＯＤ）；１．４０（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．７０〜２．８２４（２Ｈ，ｍ）、２．８７〜２．８９（２Ｈ，ｍ）、３．７４〜３．７７（２Ｈ，ｍ）、４．３０〜４．３６（１Ｈ，ｍ）、７．５４（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９９（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤ３ＯＤ）；１６．２１（ＣＨ２）、１７．０３（ＣＨ３）、３４．９４（ＣＨ２）、６６．０８（ＣＨ２）、８１．０５（Ｃ）、９０．５３（Ｃ）、１２５．４６（Ｃ）、１２７．７０（ＣＨ）、１２９．５６（ＣＨ）、１３１．３９（ＣＨ）、１３５．２７（ＣＨ）、１３６．１９（Ｃ）、１６９．２８（Ｃ）、１７５．８０（Ｃ）。
【０２０７】
７−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−６−イン酸（６）
【０２０８】
【化１７】
【０２０９】
ヨードベンズアミド（１）（０．５０ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）を、方法Ｂを使用して６−ヘプチン酸（０．２１２ｇ、１．６４ｍｍｏｌ）と結合させた結果、７−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−６−イン酸（６）が得られた（０．４８７ｇ、１．６０ｍｍｏｌ；収率９８％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤ３ＯＤ）；１．２２（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．４４〜１．６８（２Ｈ，ｍ）、１．７３〜１．８０（２Ｈ，ｍ）、２．３０〜２．４６（２Ｈ，ｍ）、３．５４〜３．６３（２Ｈ，ｍ）、４．１２〜４．３９（１Ｈ，ｍ）７．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．８２（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤ３ＯＤ）；１７．０６（ＣＨ３）、１９．７０（ＣＨ２）、２５．３９（ＣＨ２）、２９．２３（ＣＨ２）、４９．１６（ＣＨ２）、６６．１４（ＣＨ２）、８１．１６（Ｃ）、９１．５５（Ｃ）、１２５．７５（Ｃ）、１２７．５３（ＣＨ）、１２９．５４（ＣＨ）、１３１．３２（ＣＨ）、１３５．２４（ＣＨ）、１３６．２０（Ｃ）、１６９．３４（Ｃ）。
【０２１０】
３−（５−カルボキシ−ペント−１−イニル）−安息香酸エチルエステル（１４）
【０２１１】
【化１８】
【０２１２】
ヨードベンズアミド（１）（１．５０ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を、方法Ｂを使用して５−ヘキシン酸と結合させた結果、３−（５−カルボキシ−ペント−１−イニル）−安息香酸エチルエステル（１４）が得られた（０．９０３ｇ、３．４ｍｍｏｌ；収率６４％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、１．８３〜１．９９（２Ｈ，ｍ）、２．４４〜２．５９（４Ｈ，ｍ）、４．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、７．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９２（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１４．２８（ＣＨ３）、１８．７９（ＣＨ２）、２３．５９（ＣＨ２）、６１．１３（ＣＨ２）、８０．７２（Ｃ）、８９．６７（Ｃ）、１２４．０７（Ｃ）、１２８．２８（ＣＨ）、１２８．７２（ＣＨ）、１３０．６９（Ｃ）、１３２．２２（ＣＨ）、１３５．６５（ＣＨ）、１６６．０３（Ｃ）。
【０２１３】
アミドの合成
方法Ｃ：
窒素雰囲気中で、アルキン酸（１ｍｍｏｌ）を乾燥THF（６ｍＬ）に溶かした溶液に、トリエチルアミン（２ｍｍｏｌ）を添加し、次いで−１０℃に冷却した。反応混合物に、クロロ蟻酸エチロール（１ｍｍｏｌ）を添加し、次いで−１０℃でさらに１５分間冷却した。その間に、塩酸アミン（３ｍｍｏｌ）、水（０．８８ｍＬ）、トリエチルアミン（０．６３ｍＬ、６ｍｍｏｌ）、及びTHF（１．７６ｍＬ）の溶液を調製し、反応混合物に１滴ずつ添加した。反応をそのままにして、１．５時間で５℃まで温め、次いで室温でさらに３０分撹拌した。混合物を、飽和塩水と飽和重炭酸ナトリウムの１：１混合物（５０ｍＬ）に注ぎ、次いでＤＣＭで抽出した（５×５０ｍＬ）。有機相を真空蒸発させ、残留物を、シリカゲル上でのショートカラムクロマトグラフィにより精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、１％から１０％ メタノール勾配）、所望の化合物が得られた。
【０２１４】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（８）
【０２１５】
【化１９】
【０２１６】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）ペンチル］−ヘキス−５−イン酸（４）（０．１０９ｇ、０．３７７ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸ジメチルアミンと反応させた結果、８（０．１１５ｇ、０．３６３ｍｍｏｌ；収率９６％）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．８１〜１．９４（２Ｈ，ｍ）、２．３７〜２．４７（４Ｈ，ｍ）、２．９１（３Ｈ，ｓ）、３．００（３Ｈ，ｓ）、３．３８〜３．６４（２Ｈ，ｍ）４．１９〜４．４３（１Ｈ，ｍ）６．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、７．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７５（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．４２（ＣＨ３）、１９．３６（ＣＨ２）、２４．４５（ＣＨ２）、３２．３０（ＣＨ２）、３５．８３（ＣＨ３）、３７．６７（ＣＨ３）、４８．５１（ＣＨ）、６６．９０（ＣＨ２）、８０．９１（Ｃ）、９０．９２（Ｃ）、１２４．６０（Ｃ）、１２６．８５（ＣＨ）、１２８．８５（ＣＨ）、１３０．３９（ＣＨ）、１３４．５８（ＣＨ）、１３５．１３（Ｃ）、１６７．６３（Ｃ）、１７２．８７（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ３１７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２１７】
３−（４−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（９）
【０２１８】
【化２０】
【０２１９】
５−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）ペンチル］−ヘキス−４−イン酸（５）（０．１００ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸ジメチルアミンと反応させた結果、９（０．０８４ｇ、０．２８ｍｍｏｌ；収率７７％）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２６（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．５８〜２．７５（４Ｈ，ｍ）、２．９１（３Ｈ，ｓ）、３．０１（３Ｈ，ｓ）、３．４０〜３．７７（２Ｈ，ｍ）、４．１９〜４．４３（１Ｈ，ｍ）、６．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、７．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９６（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１５．３９（ＣＨ２）、１６．９８（ＣＨ３）、３２．４３（ＣＨ２）、３５．４９（ＣＨ３）、３７．１５（ＣＨ３）、４８．１３（ＣＨ）、６６．６４（ＣＨ２）、８０．１４（Ｃ）、９０．１９（Ｃ）、１２３．９９（Ｃ）、１２６．６０（ＣＨ）、１２８．４３（ＣＨ）、１２９．９５（ＣＨ）、１３４．１９（ＣＨ）、１３４．７５（Ｃ）、１６７．２６（Ｃ）、１７１．１４（Ｃ）。
【０２２０】
３−（６−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（１０）
【０２２１】
【化２１】
【０２２２】
７−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−６−イン酸（６）（０．１００ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸ジメチルアミンと反応させた結果、１０（０．０９１ｇ、０．２７６ｍｍｏｌ；収率８５％）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２６（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．５９〜１．８０（４Ｈ，ｍ）、２．３１〜２．４３（４Ｈ，ｍ）、２．９１（３Ｈ，ｓ）、２．９８（３Ｈ，ｓ）、３．６０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ １１．１Ｈｚ，Ｊ２１ ５．３Ｈｚ）、３．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ １１．１Ｈｚ，Ｊ２１ ３．５Ｈｚ）、６．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．２Ｈｚ）、．７．２７（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７６（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．９９（ＣＨ３）、１９．１５（ＣＨ２）、２４．３０（ＣＨ２）、２８．１９（ＣＨ２）、３２．４５（ＣＨ２）、３５．４６（ＣＨ３）、３７．３３（ＣＨ３）、４８．１２（ＣＨ）、６６．５０（ＣＨ２）、８０．３７（Ｃ）、９０．８５（Ｃ）、１２４．２６（Ｃ）、１２６．５５（ＣＨ）、１２８．４４（ＣＨ）、１２９．９８（ＣＨ）、１３４．０６（ＣＨ）、１３４．７４（Ｃ）、１６７．２４（Ｃ）、１７２．９８（Ｃ）。
【０２２３】
３−（５−メチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（２２）
【０２２４】
【化２２】
【０２２５】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）フェニル］−ヘキス−５−イン酸（４）（０．４００ｇ、１．３７ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸メチルアミン（０．６０９ｇ）と反応させた結果、３−（５−メチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（２２）が得られた（０．２２１ｇ、０．７２４ｍｍｏｌ；収率５３％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．８８〜１．９７（２Ｈ，ｍ）、２．３３〜２．４４（４Ｈ，ｍ）、２．７９（３Ｈ，ｓ）、２．８１（３Ｈ，ｓ）、３．６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．６，Ｊ２ １１．１Ｈｚ）、３．７９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ３．６，Ｊ２ １１．１Ｈｚ）、４．２３〜４．３１（１Ｈ，ｍ）、５．９３（１Ｈ，ｂｓ）、６．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．３Ｈｚ）、７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．７７（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．４４（ＣＨ３）、１９．２９（ＣＨ２）、２６．７０（ＣＨ３）、３５．５８（ＣＨ２）、４８．５７（ＣＨ）、６７．２０（ＣＨ２）、８０．９１（Ｃ）、９０．６９（Ｃ）、１２４．６０（Ｃ）、１２６．８１（ＣＨ）、１２８．９５（ＣＨ）、１３０．４１（ＣＨ）、１３４．６８（ＣＨ）、１３４．９８（Ｃ）、１６７．６３（Ｃ）、１７３．４７（Ｃ）。
【０２２６】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−イニル）安息香酸エチルエステル（２３）
【０２２７】
【化２３】
【０２２８】
３−（５−カルボキシ−ペント−１−イニル）−安息香酸エチルエステル（４）（０．９００ｇ、３．４ｍｍｏｌ）を、方法Ｃを使用して塩酸ジメチルアミンと反応させた結果、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−イニル）安息香酸エチルエステル（２３）が得られた（０．８７３ｇ、３．０４ｍｍｏｌ；収率８９％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３９（３Ｈ，ｄ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、１．８７〜２．００（２Ｈ，ｍ）、２．４３〜２．５４（４Ｈ，ｍ）、２．９５（３Ｈ，ｓ）、３．０３（３Ｈ，ｓ）、４．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ ７．１Ｈｚ）、７．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、８．０４（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１４．２８（ＣＨ３）、１８．９７（ＣＨ２）、２４．０１（ＣＨ２）、３１．８７（ＣＨ２）、３５．３９（ＣＨ３）、３７．２０（ＣＨ３）、６１．１０（ＣＨ２）、８０．３９（Ｃ）、９０．６０（Ｃ）、１２４．２６（Ｃ）、１２８．２７（ＣＨ）、１２８．６０（ＣＨ）、１３０．６９（Ｃ）、１３２．６２（ＣＨ）、１３５．５８（ＣＨ）、１６６．０（Ｃ）、１７２．２６（Ｃ）。
【０２２９】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−安息香酸（２４）
【０２３０】
【化２４】
【０２３１】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−イニル）安息香酸エチルエステル（０．８００ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）を、水酸化ナトリウム１Ｍ溶液（６ｍＬ）で一晩処理した。反応混合物に、ＨＣｌ １Ｍ溶液７ｍＬを添加し、溶媒を真空中で除去した。残留物を、酢酸エチルで粉砕した結果、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−安息香酸（２４）（０．５９０ｇ、２．０５ｍｍｏｌ；収率７４％）がオフホワイトの粉末として得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．８５〜２．００（２Ｈ，ｍ）、２．４８〜２．５８（４Ｈ，ｍ）、２．９３（３Ｈ，ｓ）、３．０８（３Ｈ，ｓ）、７．４０（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．９７（１Ｈ，ｓ）。
【０２３２】
Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）ベンズアミド（２５）
【０２３３】
【化２５】
【０２３４】
窒素雰囲気中、室温で、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−安息香酸（０．１００ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶かした溶液に、EDCI（０．０７２８ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加し、その後トリエチルアミン（０．１６２ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温でさらに５分間撹拌した。次いでシクロプロピルアミン（０．０２７ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を、室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、飽和塩水及び飽和重炭酸ナトリウムの混合物で洗浄し（１：１；２×１５０ｍｌ）、その後、飽和塩水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥させ、溶媒を真空蒸発させた。残留物を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５％から５％ メタノール勾配）、Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）ベンズアミド（２５）が得られた（０．１０ｇ、０．３４ｍｍｏｌ、収率９１％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．５９〜０．６４（２Ｈ，ｍ）、０．８３〜０．９０（２Ｈ，ｍ）、１．９０〜２．００（２Ｈ，ｍ）、２．４９〜２．５３（４Ｈ，ｍ）、２．８７〜２．９３（１Ｈ，ｍ）、２．９５（３Ｈ，ｓ）、３．０３（３Ｈ，ｓ）、６．２５（１Ｈ，ｂｓ）、７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．４４〜７．４９（１Ｈ，ｍ）、７．６３〜７．７２（１Ｈ，ｍ）、７．８４（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；６．７６（ＣＨ２）、１８．９８（ＣＨ２）、２３．１６（ＣＨ）、２４．０２（ＣＨ２）、３１．８７（ＣＨ２）、３５．３９（ＣＨ３）、３７．２２（ＣＨ３）、８０．３９（Ｃ）、９０．７５（Ｃ）、１２４．３８（Ｃ）、１２６．１３（ＣＨ）、１２８．４０（ＣＨ）、１２８．５３（Ｃ）、１２９．８４（ＣＨ）、１３４．２５（ＣＨ）。
【０２３５】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）ベンズアミド（２６）
【０２３６】
【化２６】
【０２３７】
窒素雰囲気中、室温で、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−安息香酸（０．１００ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン（１．５ｍＬ）に溶かした溶液に、EDCI（０．０７２８ｇ、０．３８ｍｍｏｌ）を添加し、その後トリエチルアミン（０．１６２ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を室温でさらに５分間撹拌した。次いで２−フルオロエチルアミン（０．１８９ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１６時間撹拌した。反応混合物を、飽和塩水及び飽和重炭酸ナトリウムの混合物で洗浄し（１：１；２×１５０ｍＬ）、その後、飽和塩水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を真空蒸発させた。残留物を、シリカゲル上でのフラッシュカラムクロマトグラフィにより精製した結果（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ、９５％から５％ メタノール勾配）、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）ベンズアミド（２６）が得られた（０．１０３ｇ、０．３４ｍｍｏｌ、収率９１％）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．８３〜２．００（２Ｈ，ｍ）、２．４８〜２．５２（４Ｈ，ｍ）、２．９４（３Ｈ，ｓ）、３．０２（３Ｈ，ｓ）、３．６８〜３．７２（１Ｈ，ｍ）、３．７３〜３．８２（１Ｈ，ｍ）、４．５０（３Ｈ，ｔ，Ｊ ４．８Ｈｚ）、４．６６（３Ｈ，ｔ，Ｊ ４．８Ｈｚ）、６．６９（１Ｈ，ｂｓ）、７．３４（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４４〜７．４６（１Ｈ，ｍ）、７．６２〜７．６８（１Ｈ，ｍ）、７．９３（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１８．９７（ＣＨ２）、２４．０１（ＣＨ２）、３１．８７（ＣＨ２）、３５．４０（ＣＨ３）、３７．２３（ＣＨ３）、４０．３５（ＣＨ２）、４０．６２（ＣＨ２）、８０．３７（Ｃ）、８１．５７（ＣＨ２）、８１．５７（ＣＨ２）、９０．７５（Ｃ）、１２４．４８（Ｃ）、１２６．２４（ＣＨ）、１２８．４０（ＣＨ）、１３０．０５（ＣＨ）、１３１．９４（ＣＨ２）、１３４．４５（Ｃ）、１６７．０４（Ｃ）、１７２．３０（Ｃ）。
【０２３８】
Lindlar水素化の一般的方法
方法Ｄ：
キノリン（１４３μＬ、１．３ｍｍｏｌ）、還元されたパラジウム担持硫酸バリウム（５％）（１４３ｍｇ）、及びアルキン（１ｍｍｏｌ）を、メタノール（１４ｍＬ）中で合わせ、粗製原料の１ＨＮＭＲにより還元の終了が示されるまで、大気圧の水素中で撹拌した。触媒は、セライトのパッドを通した濾過によって除去し、これをメタノールで数回洗浄した。濾液を真空蒸発させ、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０２３９】
方法Ｅ：
キノリン（２５μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）、還元されたパラジウム担持硫酸バリウム（５％）（３６０ｍｇ）、及びアルキン（１ｍｍｏｌ）を、メタノール（１５ｍＬ）中で合わせ、粗製原料の１ＨＮＭＲにより還元の終了が示されるまで、大気圧の水素中で撹拌した。触媒は、セライトのパッドを通した濾過によって除去し、これをメタノールで数回洗浄した。濾液を真空蒸発させ、生成物を、分取ＨＰＬＣによって精製した。
【０２４０】
３−ヘプト−１−エニル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１１）
【０２４１】
【化２７】
【０２４２】
方法Ｄを使用したアルキン３（０．０５０ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の水素化によって、分取逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（５５％アセトニトリル／４５％水 ２０分 定組成プログラム）で分離される２種の生成物、即ち化合物１１（１２ｍｇ）及び完全に還元された３−ヘプチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル−１）−ベンズアミド（１２）（７ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ ７．０Ｈｚ）、１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．３３〜１．５２（４Ｈ，ｍ）、２．２６〜２．３４（２Ｈ，ｍ）、３．６６〜３．８１（２Ｈ，ｍ）、４．２５〜４．３５（１Ｈ，ｍ）、５．６９〜５．７８（１Ｈ，ｍ）、６．２２（１Ｈ，ｂｓ）、６．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．７Ｈｚ）、７．２６（１Ｈ，ｓ）、７．３６（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．５Ｈｚ）、７．５５〜７．６５（１Ｈ，ｍ）、７．７１（１Ｈ，ｓ）。
【０２４３】
３−ヘプチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル−１）−ベンズアミド（１２）
【０２４４】
【化２８】
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．８０８（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．６Ｈｚ）、１．２１（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．２４（４Ｈ，ｍ）、１．５２〜１．５７（２Ｈ，ｍ）、２．５３〜２．５８（２Ｈ，ｍ）、３．５６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．７，Ｊ２ １０．９Ｈｚ）、３．６９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ３．６，Ｊ２ １０．９Ｈｚ）、４．１５〜４．２３（１Ｈ，ｍ）、６．２２（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ ５．６Ｈｚ）、７．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、．７．５０（１Ｈ，ｍ）、７．７０（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１４．２４（ＣＨ３）、１７．５２（ＣＨ３）、２３．０１（ＣＨ２）、２９．５０（ＣＨ２）、２９．６３（ＣＨ２）、３１．７７（ＣＨ２）、３２．１５（ＣＨ２）、３６．２３（ＣＨ２）、４８．５７（ＣＨ）、６７．４９（ＣＨ２）、１２４．４７（ＣＨ）、１２７．５２（ＣＨ）、１２８．７９（ＣＨ）、１３２．０９（ＣＨ）、１３４．７２（Ｃ）、１３４．７２（Ｃ）、１４３．９７（Ｃ）、１６８．７８（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２７７（Ｍ＋Ｈ）。
【０２４５】
３−（５−シアノ−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１５）
【０２４６】
【化２９】
【０２４７】
アルキン７（０．０３０ｇ、０．１ｍｍｏｌ）を、方法Ｅで述べたように水素化した結果、３−（５−シアノ−ペンチル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１５ｍｇ）が得られ、これを逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（２０％アセトニトリル／８０％水 ２０分 定組成プログラム）により精製した。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）、１．８２（ｍ，２Ｈ）、２．３８（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）、２．４８（ｍ，２Ｈ）、２．７８（ｍ，１Ｈ）、３．６５（ｍ，１Ｈ）、３．７９（ｍ，１Ｈ）、４．２９（ｍ，１Ｈ）、５．６５（ｍ，１Ｈ）、６．３８（ｍ，１Ｈ）、６．５６（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ）、７．３４〜７．４４（ｍ，２Ｈ）、７．６４〜７．６８（ｍ，２Ｈ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．００（ＣＨ２）、１７．４５（ＣＨ３）、２５．６７（ＣＨ２）、２７．５０（ＣＨ２）、４８．６０（ＣＨ）、６７．２０（ＣＨ２）、１２０．００（Ｃ）、１２５．９０（ＣＨ）、１２７．５０（ＣＨ）、１２９．００（ＣＨ）、１３０．７７（ＣＨ）、１３１．１０（ＣＨ）、１３２．２２（ＣＨ）、１３５．０４（ＣＨ）、１３７．８３（Ｃ）、１６８．４（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ２７３（Ｍ＋Ｈ）。
【０２４８】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）ベンズアミド（１６）
【０２４９】
【化３０】
【０２５０】
アルキン８（０．１００ｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、方法Ｅを使用して、Lindlar触媒還元により合成した結果、１６と３−（５−ジメチルカルバモイル−ペンチル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１３）との混合物が得られ、これを、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（２０％アセトニトリル／８０％水 ２０分 定組成プログラム）によって分離した（１６、３４ｍｇ）。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３１（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、１．８１〜１．９１（２Ｈ，ｍ）、２．２６〜２．３９（４Ｈ，ｍ）、２．９０（３Ｈ，ｓ）；（３Ｈ，ｓ）；３．６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．５，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、３．８３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ３．２，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、４．２７〜４．３０（１Ｈ，ｍ）、５．６８〜５．７７（１Ｈ，ｍ）、６．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．６Ｈｚ）、７．２４〜７．３３（１Ｈ，ｍ）、７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．７４〜７．７９（２Ｈ，ｍ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．９３（ＣＨ３）、２４．８０（ＣＨ２）、２８．２２（ＣＨ２）、３２．５１（ＣＨ２）、３５．７３（ＣＨ）、３７．４５（ＣＨ）、４８．３２（ＣＨ２）、６６．７３（ＣＨ２）、１２６．２０（ＣＨ）、１２６．３５（ＣＨ）、１２８．５８（ＣＨ）、１２９．１２（ＣＨ）、１３１．８８（ＣＨ）、１３２．６３（ＣＨ）、１３４．７０（Ｃ）、１３７．５（Ｃ）、１６８．００（Ｃ）、１７３．１１（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ３１９（Ｍ＋Ｈ）。
【０２５１】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペントチル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１３）
【０２５２】
【化３１】
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２８〜１．３６（５Ｈ，ｍ）、１．６４（２Ｈ，ｍ）、２．２９（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．３Ｈｚ）、２．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ ７．４Ｈｚ）、２．９１（３Ｈ，ｓ）、２．９８（３Ｈ，，）、３．６３（１Ｈ，ｍ）、３．７８（２Ｈ，ｍ）、４．１９〜４．３０（２Ｈ，ｍ）、６．９４（１Ｈ，ｍ）、７．２６〜７．３２（２Ｈ，ｍ）、７．４５〜７．６７（３Ｈ，ｍ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．４３（ＣＨ３）、２５．０９（ＣＨ２）、２８．８１（ＣＨ２）、３１．１４（ＣＨ２）、３３．５２（ＣＨ２）、３５．５４（ＣＨ）、３５．８９（ＣＨ）、３７．８０（ＣＨ）、４８．５５（ＣＨ）、６７．０８（ＣＨ２）、１２５．０５（ＣＨ）、１２７．５０（ＣＨ）、１２８．８１（ＣＨ）、１３２．００（ＣＨ）、１３４．９３（Ｃ）、１４３．１３（Ｃ）、１６８．７０（Ｃ）、１７３．７３（Ｃ）。
ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ ３２１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２５３】
３−（６−ジメチルカルバモイル−ヘキス−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１７）
【０２５４】
【化３２】
【０２５５】
３−（６−ジメチルカルバモイル−ヘキス−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（０．０３７ｇ、０．１１ｍｇ）１７を、方法Ｄを使用して、Lindlar触媒還元により合成した結果、１７と飽和化合物及び２０％のトランス異性体との混合物が得られ、これを分取ＨＰＬＣにより分離したが、残念ながら、シス異性体とトランス異性体との分離はそれほど首尾良く行われず、化合物１７は、いくらかのトランス異性体（１０％トランス）で汚染されていた。
【０２５６】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）−フェニル］−ヘキス−５−エン酸メチルエステル（２１）
【０２５７】
【化３３】
【０２５８】
６−［３−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチルカルバモイル）−フェニル］−ヘキス−５−エン酸メチルエステル（２１）（０．１００ｇ、１．７ｍｍｏｌ）を、方法Ｄを使用して、アルキン２０からLindlar触媒還元により合成した結果、２１と、分離されなかった５％のトランス異性体との混合物が得られた。この混合物を、粗製原料として使用した。
δ（１Ｈ）（ＣＤ３ＯＤ）；１．１５（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．７Ｈｚ）、１．５２〜１．７１（２Ｈ，ｍ）、２．１９〜２．２９（４Ｈ，ｍ）、３．４７〜３．５６（２Ｈ，ｍｚ）、４．０６〜４．１２（２Ｈ，ｍ）、５．５９〜５．６７（１Ｈ，ｍ）、５．４６（２Ｈ，ｂｓ）、５．６２〜５．６８（１Ｈ，ｍ）、６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．６Ｈｚ）、７．２５〜７．３３（１Ｈ，ｍ）、７．４１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ８．０Ｈｚ）、７．５２〜７．６１（２Ｈ，ｍ）。
【０２５９】
３−（５−カルバモイル−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（１９）
【０２６０】
【化３４】
【０２６１】
２１（０．０３０ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を、アンモニアの３３％水溶液２ｍＬ中に溶解し、室温で８時間撹拌した。溶媒を除去し、生成物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（１８％アセトニトリル／８２％水 ２０分 定組成プログラム）によって精製した結果、１９（７ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２２（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．８．０Ｈｚ）、１．７５〜１．７９（２Ｈ，ｍ）、２．２０〜２．３２（４Ｈ，ｍ）、３．６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．８，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、３．８３（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ２．９，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、４．２４〜４．３２（１Ｈ，ｍ）、５．４６（２Ｈ，ｂｓ）、５．６２〜５．６８（１Ｈ，ｍ）、６．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．６Ｈｚ）、７．２０〜７．２２（１Ｈ，ｍ）、７．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．６Ｈｚ）、７．６８（１Ｈ，ｓ）、７．７４（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）。
ＭＳ（ＣＩ）ｍ／ｚ ２９１（Ｍ＋Ｈ）。
【０２６２】
ＢＥＲ／Ｎｉ水素化の一般的方法
ポリマーで支持されたホウ化水素（ホウ化水素担持アンバーライトIRA-400、２．５ｍｍｏｌ ＢＨ４−／１ｇ樹脂）、及び酢酸ニッケル四水和物（０．０４６ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を、メタノール７ｍＬ中に懸濁し、ニッケルの黒色被膜が樹脂表面に現れるまで、この懸濁液中に水素をバブリングし、次いでこの混合物に、水素中でアルキン（１ｍｍｏｌ）を添加し、メタノール７ｍＬに溶解した。混合物を９時間振盪させ、次いで濾過した。樹脂を、メタノールで数回洗浄し、次いで合わせた濾液を真空蒸発させた。樹脂を、適切な溶媒中に溶解し、セライトに通して濾過することにより、ニッケルを除去した。生成物を、分取逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィにより精製した。
【０２６３】
３−（４−ジメチルカルバモイル−ブト−１−エニル）−Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−ベンズアミド（２７）
【０２６４】
【化３５】
【０２６５】
ＢＥＲ／Ｎｉ触媒を使用したアルキン９（０．５５ｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の水素化により、２７が４０％、飽和化合物が５％、及び出発材料が５５％得られた。混合物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（２０％アセトニトリル／８０％水 ２０分 定組成プログラム）により分離した結果、２７（１５ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．３０（３Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．５３〜２．７０（４Ｈ，ｍ）、２．９９（３Ｈ，ｓ）、３．０７（３Ｈ，ｓ）、３．６５〜３．６９（１Ｈ，ｍ）３．８１〜３．９５（１Ｈ，ｍ）、３．９８〜３．４０（１Ｈ，ｍ）、４．３０〜４．３１（１Ｈ，ｍ）、５．６８〜５．７７（１Ｈ，ｍ）、６．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．６Ｈｚ）、７．２９（１Ｈ，ｍ）、７．３７〜７．４６（１Ｈ，ｍ）、７．８５〜７．９５（１Ｈ，ｍ）、８．２２（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１６．８４（ＣＨ３）、２４．６８（ＣＨ２）、３２．５９（ＣＨ２）、３５．８９（ＣＨ３）、３７．９６（ＣＨ３）、４８．３３（ＣＨ）、６６．７６（ＣＨ２）、１２５．６７（ＣＨ）、１２６．９０（ＣＨ）、１２８．７１（ＣＨ）、１３０．０３（ＣＨ）、１３１．１５（ＣＨ）、１３１．８８（ＣＨ）、１３４．４６（Ｃ）、１３６．７０（Ｃ）、１６７．２３（Ｃ）、１７３．３０（Ｃ）。
【０２６６】
Ｎ−（２−ヒドロキシ−１−メチル−エチル）−３−（５−メチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−ベンズアミド（１８）
【０２６７】
【化３６】
【０２６８】
アルキン２２（０．０５５ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を、ＢＥＲ／Ｎｉ触媒を使用して水素化した結果、１８が４５％、及び出発材料が５５％の混合物が得られた。混合物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（１８％アセトニトリル／８２％水 ２０分 定組成プログラム）により分離した結果、１８（１９ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．２９（３Ｈ，ｔ，Ｊ ６．８．０Ｈｚ）、１．８８〜１．９７（２Ｈ，ｍ）、２．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ ７．４Ｈｚ）、２．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ ６．８Ｈｚ）、２．８０（３Ｈ，ｄ，Ｊ ４．８Ｈｚ）；３．６５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ５．５，Ｊ２ １１．０Ｈｚ）、３．７９（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ１ ３．５，Ｊ２ １１．２Ｈｚ）、４．２３〜４．３１（１Ｈ，ｍ）、５．７３（１Ｈ，ｂｓ）、６．５３（１Ｈ，ｂｄ，Ｊ ６．２Ｈｚ）、７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．７６（１Ｈ，ｓ）。
δ（１３Ｃ）（ＣＤＣｌ３）；１７．０７（ＣＨ３）、１８．９１（ＣＨ２）、２４．４４（ＣＨ２）、２６．３２（ＣＨ３）、３５．１９（ＣＨ２）、４８．１９（ＣＨ）、６６．８７（ＣＨ２）、１２２４．２３（Ｃ）、１２６．４１（ＣＨ）、１２８．５７（ＣＨ）、１２９．９９（ＣＨ）、１３４．３１（ＣＨ）、１３４．５９（Ｃ）、１６７．００（Ｃ）、１７８．００（Ｃ）。
【０２６９】
３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）−ベンズアミド（２８）
【０２７０】
【化３７】
【０２７１】
ＢＥＲ／Ｎｉ触媒を使用した、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）ベンズアミド（２６）（０．０４０ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の水素化によって、２８が４０％、及び出発材料が５５％得られた。混合物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（３０％アセトニトリル／７０％水 ２０分 定組成プログラム）により分離した結果、３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−Ｎ−（２−フルオロ−エチル）−ベンズアミド２８（５ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；１．８０〜１．８９（２Ｈ，ｍ）、２．３１〜２．４１（４Ｈ，ｍ）、２．８８（３Ｈ，ｓ）、２．９７（３Ｈ，ｓ）、３．６８〜３．７２（１Ｈ，ｍ）、３．７４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１５．４，Ｊ２１０．７Ｈｚ）、３．８２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ１５．４，Ｊ２１０．７Ｈｚ）、５．７２〜５．７８（１Ｈ，ｍ）、６．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．７Ｈｚ）、７．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．４０（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．７Ｈｚ）、７．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ７．９Ｈｚ）、８．０２（１Ｈ，ｓ）。
【０２７２】
Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）ベンズアミド（２９）
【０２７３】
【化３８】
【０２７４】
ＢＥＲ／Ｎｉ触媒を一晩使用した、３−（Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−イニル）ベンズアミド（２５）（０．０４０ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の水素化によって、２８％が９０％、及び出発材料が１０％得られた。混合物を、逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィ（３０％アセトニトリル／７０％水 ２０分 定組成プログラム）によって分離した結果、Ｎ−シクロプロピル−３−（５−ジメチルカルバモイル−ペント−１−エニル）−ベンズアミド（１０ｍｇ）が得られた。
δ（１Ｈ）（ＣＤＣｌ３）；０．６４〜０．６９（２Ｈ，ｍ）、０．７８〜０．８４（２Ｈ，ｍ）、１．７８〜１．８３（２Ｈ，ｍ）、２．２８〜２．３６（４Ｈ，ｍ）、２．８８（３Ｈ，ｓ）、２．８９〜２．９３（１Ｈ，ｍ）、２．９７（３Ｈ，ｓ）、５．６５〜５．７５（１Ｈ，ｍ）、６．４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ １１．７Ｈｚ）、７．３３（１Ｈ，ｔ，Ｊ ７．８Ｈｚ）、７．４４〜７．４９（１Ｈ，ｍ）、７．６３〜７．７２（１Ｈ，ｍ）、７．８４（１Ｈ，ｓ）。
【０２７５】
末梢作用を有するＣＢ１アゴニストとしての検証
生体外放射リガンド結合の研究
放射リガンド結合アッセイ［Ross,R.A. et al, Br.J.Pharmacol. 1999, 128, 735-743］を、脳及び脾臓膜内のＣＢ１受容体アンタゴニスト［３Ｈ］SR141716A（０．５ｎＭ）又は［３Ｈ］CP55940（０．５ｎＭ）を用いて実施する。アッセイは、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡを含有するアッセイ緩衝剤中で行い、このときの全アッセイ体積は５００μＬである。結合は、膜の添加（１００μｇ）によって開始する。０．１％ ＤＭＳＯというビヒクル濃度を、全体を通して一定に保つ。アッセイは、３７℃で６０分間実施し、その後、氷冷洗浄緩衝液（５０ｍＭ トリス緩衝液、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）を添加し、１２ウェルサンプリングマニホールド（Brandel Cell Harvester）及び洗浄緩衝液中に４℃で２４時間浸漬させたWhatman GF/Bガラスファイバーフィルタを使用して真空濾過することにより、終了する。各反応チューブを、４ｍＬという一定分量の緩衝液で５回洗浄する。フィルタを、６０分間オーブン乾燥し、次いで５ｍＬのシンチレーション流体（Ultima Gold XR, Padkard）中に置き、液体シンチレーション分光分析によって放射能を定量する。特異的結合は、１μＭの非標識リガンドが存在し、また存在しない状態で生じた結合の差として定義され、脳内及び脾臓内で結合された全放射リガンドは、それぞれ７１％及び４０％である。特異的結合部位からの放射リガンドの５０％置換（ＩＣ５０）をもたらす競合リガンド（試験化合物）の濃度は、GraphPad Prism（GraphPad Software社製、San Diego）を使用して計算する。阻害定数（Ｋｉ）値は、Cheng & Prusoffの方程式を使用して計算する［Cheng, Y.及びPrusoff,W.H., Biochem, Pharmacol. 1973, 22, 3099-3108］。
【０２７６】
生体外カンナビノイド受容体調節活性
化合物を、マウス輸精管製剤［Ward S, Mastriani D, Casiano F及びArnold R (1990) J Pharmacol Exp Ther 255:1230-1239］を使用して、カンナビノイド調節能力に関して評価し、それによって、アゴニストの可能性を常に反映するとは限らない簡単な受容体結合ではなくて、ＣＢアゴニストの証拠が提供される。化合物（１６）は、この系（図１）において、既知の完全アゴニストR(+) WIN55,212（ＩＣ５０が約５ｎＭ）に比べ、ＩＣ５０が約１ｎＭという著しい効果を示した。これは、選択的ＣＢ１アンタゴニストSR141716Aによって阻害され、即ち観察された収縮が、末梢ＣＢ１受容体を介して媒介されることを示している。
【０２７７】
生体内末梢ＣＢ１受容体活性化
上部胃腸通過
胃腸通過は、チャコール法を使用して測定する。マウスに、０．１ｍＬ（１０ｇ／マウス）の黒色マーカー（５％アラビアガムに懸濁させた、１０％チャコール懸濁液）を経口的に与え、２０分後に、ＣＯ２でマウスを窒息死させ、小腸を取り出す。マーカーが移動した距離を測定し、幽門から盲腸までの小腸の全長に対するパーセンテージとして表す［Izzo,A.A. et al, Br.J.Pharmacol. 2000, 129, 1627-1632］。カンナビノイドアゴニストは、チャコールを投与する３０分前に与える。
【０２７８】
結腸推進試験
遠位結腸推進を、Pinto et al[Gastroenterology 2002, 123, 227-234]に従って測定する。カンナビノイド薬物を投与してから３０分後、１個の３ｍｍガラスビーズを、各マウスごとに、遠位結腸に２ｃｍ挿入する。ガラスビーズの排出に必要とされる時間を、各動物ごとに決定した。平均排出時間が長いほど、結腸推進をより強力に阻害することの指標になる。
【０２７９】
末梢活性カンナビノイドの向精神活性
多くのＣＢ１アゴニストは、ＣＢ１受容体への中枢結合により、向精神性に関連した「４組効果」を誘発することが知られている［Howlett,A.C. et al, International Union of Pharmacology. XXVII, Pharmacol. Rev. 2002, 54, 161-202］。研究は、本発明の化合物も中枢ＣＢ１受容体に結合するか否かを調査するために着手した。これは、化合物が、静脈内、腹腔内、及び経口投与された後、正常なマウスにおいて鎮静、下垂症、低運動性、カタレプシー、及び低体温症を誘発する能力を測定することにより、評価する［Brooks,J.W. et al, Eur. J. Pharmacol. 2002, 439, 83-02］。
【０２８０】
化合物の脳内レベルの決定
脳及び脊髄への浸透性の定量
化合物の脳／脊髄への浸透は、以下のように直接測定することができる。麻酔をかけたラットの脳及び脊髄への摂取は、Ohne et al［Ohno,K. et al, Am. J. Physiol 1978, 235, H299-H307］に記載されている標準的な方法を使用して測定する。手短に言えば、化合物を、１回の大量瞬時投与として、又は段階的な注入として、静脈内（大腿）注射する。いくつかの血漿サンプル（大腿動脈）を採取して、経時的な血漿濃度を計算する（積分、曲線下の面積）。末端の脳及び脊髄サンプルを採取して、脳への浸透性を測定する（生理食塩水での洗い出しにより、又は［１４Ｃ］スクロースなどの不活性低浸透性マーカーの短い循環を使用して、含有される血液体積を測定することにより、残留血液中の化合物に合わせて補正する）。ＰＳ（ｃｍ．ｓ−１）は、Ｃ脳／積分Ｃ血漿に等しく、ＰＳ＝浸透性×表面積（ｃｍ２）であり脳摂取に関する積であり、Ｃは濃度である。或いは、定常状態の組織／血漿の比を、より近似された指標として測定し、この場合も血液洗い出し又は補正を行う。比較は、同一条件下で実験をした、ＢＢＢ全体を通して低浸透性を有することが知られている対照化合物、例えば放射標識されたスクロース又はインスリンに対して行う。
【０２８１】
ＣＢ１アゴニズムの生物学の予備的特徴付け
末梢活性カンナビノイドの侵害受容活性
末梢では、ＣＢ１で媒介された侵害受容の証拠がある［Fox,A. et al, Pain 2001, 92, 91-100］。したがって、部分坐骨神経結紮に関する研究を、ラット及びノックアウトマウスで着手した。
【０２８２】
痙攣の評価
さらなる研究は、ＣＢ１、ＣＢ２、ＶＲ−１、ＦＡＡＨ、及び条件的ＣＢ１ノックアウトマウスを含めたカンナビノイドノックアウトマウスを使用して着手した。痙攣は、ABH（３〜４回の疾患の発作１の後、８０日以内で、動物の５０〜６０％に著しい痙攣が生ずる）又はABH.CB1-/-（１〜２回の疾患の発作の後、３０〜４０日以内で、動物の８０〜１００％に著しい痙攣が生ずる）で誘発させることができる。化合物を、初めに静脈内（初回通過効果を制限するため）、腹腔内、又は経口的に注入する。痙攣は、歪みゲージを使用して、後肢屈曲に対する抵抗力により評価する（ｎ＝６〜７／グループ）［Baker,D. et al, Nature 2000, 404, 84-87］。動物を、それ自体の対照として役立て、２つ一組にして分析を行う。動物の数、労力、及び費用を減らすため、薬物を用いない期間の後（痙攣は２４時間以内に戻る）、これらの動物に、異なる用量及び／又はビヒクルを与える。低用量のＣＢ１アゴニスト及びＣＮＳ活性CP55,940を、対照として、痙攣性ＡＢＨマウスに局所（皮下、筋肉内）投与し、対側肢における活性の欠如を分析する［Fox,A. et al, Pain 2001, 92, 91-100］。ＣＢ媒介型侵害受容に対する非ＣＮＳ部位である、後根神経節も含めた末梢神経系におけるＣＢ１の発現は、ペリフェリン−Ｃｒｅトランスジェニックマウスを使用して除去することができる［Zhou,L. et al, FEBS Lett. 2002, 523, 68-72］。これらの条件的ＫＯマウスは、C57BL/6バックグラウンド上で維持される。これらのマウスは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質残基３５〜５５ペプチドの誘発後、ＥＡＥを発症する［Amor,S. et al, J. Immunol. 1994, 153, 4349-4356］。
【０２８３】
正常及びＣＲＥＡＥマウスでの生体内評価
ＣＮＳを除外した化合物は、カンナビノイド抗痙攣作用の成分が末梢ＣＢ受容体を介して媒介されるかどうか、試験をするためのツールを提供する。化合物（１６）は、図２及び３に示すように、正常なマウスにおけるＣＮＳ作用に関して試験した。１ｍｇ／ｋｇの用量では、低体温症も低運動性も観察されなかった。ＣＲＥＡＥマウスでは、痙攣に対する際立った効果が認められ（図４）、ＣＮＳ作用をもたらすことなく、痙攣の選択的阻害が実現可能であるという強力な証拠を示している。上述のように、痙攣の抑制において、末梢カンナビノイド受容体には確立された役割が無いが、痙攣は、少なくともＥＡＥでは脊髄の神経損傷の現れである可能性があり［Baker,D. et al, FASEB J. 2001, 15, 300-302; Baker,D. et al, J.Neuroimmunol. 1990, 28, 261-270］、筋系への、及び筋系からの異常なシグナルは、少なくとも部分的に、痙縮で生ずる筋肉痙攣に寄与する可能性がある。
【０２８４】
記述された本発明の方法の、様々な変更例及び変形例は、本発明の範囲及び精神から逸脱することなく当業者に明らかにされよう。本発明を、特定の好ましい実施形態に関して述べてきたが、化学又は関係する分野の当業者に明らかな、本発明を実施するために記述された形態の様々な変更例は、以下の特許請求の範囲内に含まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０２８５】
【図１】ラット輸精管の収縮阻害を示す図である。より詳細には、このアッセイでの化合物（１６）のＩＣ５０は、約０．１ｎｍである。同じアッセイで、R(+)WIN55,212は、ＣＢ１でのＩＣ５０が約５ｎｍであり、その既知の結合親和性と一致していることが実証された。このアッセイは、アゴニストのポテンシャルを示しており、化合物（１６）の作用は、ＣＢ１−アンタゴニストSR141716Aによって中和された。
【図２】野生型マウスの低運動性を示す図である。
【図３】野生型マウスの低体温を示す図である。ビヒクル（アルコール、Cremophor、PBS（１：１：１８））、化合物（１６）、又はＣＮＳ浸透剤ＣＢ１アゴニスト（R(+)Win 55,212）を、注入する前と注入した後（２０分）に、活性チャンバ内における、温度と２７ｃｍ２の開放領域での５分間の運動性とについて評価した［Brooks et al 2002］。この後者の化合物は、典型的なカンナビン様作用を誘発するのに対し、化合物（１６）は、１ｍｇ／ｋｇ（より多量）で不活性であり、２０ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．でも不活性であった。
【図４】ＣＲＥＡＥマウスの痙攣の評価を示す図である。痙攣は、第０日及び第７日目に、フロイント完全アジュバントに溶かしたマウス脊髄ホモジネートを注入することによって誘発された、慢性EAEの発症後に発生した。これは、野生型ＡＢＨ．Ｃｎｒｌ＋／＋マウスの場合、導入後６０〜８０日で生じ、ＣＢ１受容体遺伝子（Cnrl）−欠損ＡＢＨ．Ｃｎｒｌ−／−マウス）では、導入後３０〜４０日で生じた。痙攣は、腹腔内注射した完全ＣＢ１／ＣＢ２アゴニストCP55,940又は完全ＣＢ１／ＣＢ２／”ＣＢ３”アゴニストで、或いはビヒクル（アルコール：Cremophor：PBS（１：１：１８））に溶かして静脈内注射した化合物（１６）で、治療する前及び治療した後に、歪みゲージに対する後肢の完全屈曲への抵抗力によって評価した［Baker et al 2000］。結果は、投与から１０分後の、パーセンテージの変化±基準線からのSEM（グループ当たりｎ＜１０〜１２）を示している。生データに関して統計分析を行ったが、これは、基準線レベルから２つ一組にして分析した（＊＊＊Ｐ＜０．００１）。ＣＮＳ浸透アゴニストの抗痙攣作用は、ＣＢ１欠損マウスの場合に失われ、ＣＢ２／”ＣＢ３”が抗痙攣活性の標的ではないことを示していた。ビヒクル単独では、不活性であった［Baker et al 2000］。化合物（１６）は、野生型マウスで著しい抗痙攣活性を示し、PBSだけに投与したときに活性になった（図示せず）。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物、又は薬学的に許容されるその塩
【化１】
（式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ任意に、アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、ＣＦ３、及びニトロから選択される１つ又は複数の置換基によって置換されてもよく；
Ｙは、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択される極性官能基であり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ任意に置換されてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である；
但し、
（ｉ）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺがＯＨである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＯＨ、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｍｅ、ｍｅｔａ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、及びｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ以外のものであること；及び
（ii）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺがＯＭｅである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）４ＯＨ以外のものであることを条件とする）。
【請求項２】
Ｙが、ＣＮ、ＯＨ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４がそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４がそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル基、アリール基、又はシクロアルキル基であり、これらがそれぞれ任意に置換されてもよい、請求項１又は２のいずれかに記載の化合物。
【請求項４】
Ｙが、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４がそれぞれ独立に、Ｈ又は任意に置換されたアルキル基である、請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｙが、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＭｅ、及びＣＯＮＭｅ２から選択される、請求項１から４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
ｎが０である、請求項１から５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ−Ｙが、
−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｐ−Ｙ；
−Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ；及び
−Ｃ（Ｒ５）（Ｒ６）Ｃ（Ｒ７）（Ｒ８）−（ＣＨ２）ｒ−Ｙ
から選択され、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８がそれぞれ独立に、Ｈ又はアルキルであり、ｐ、ｑ、及びｒがそれぞれ独立に、２、３、又は４である、請求項１から６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
Ｘ−Ｙが、
−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｐ−Ｙ；及び
−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ
から選択され、ｐ及びｑがそれぞれ独立に、２、３、又は４である、請求項１から７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
Ｘ−Ｙが、ｃｉｓ−Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｑ−Ｙであり、ｑが２、３、又は４である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘ−Ｙが、−Ｃ（Ｍｅ）２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｒ−Ｙであり、ｒが２、３、又は４である、請求項１から７又は９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ａがフェニル又はピリジルである、請求項１から１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
式Ｉａである、請求項１から１１のいずれかに記載の化合物。
【化２】
【請求項１３】
式Ｉｂである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【化３】
【請求項１４】
Ａがフェニルである、請求項１２又は請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
ＺがＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル、又はシクロアルキル基であり、これらがそれぞれ、１つ又は複数のＯＨ又はハロゲン基に任意に置換されてもよい、請求項１から１４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】
Ｚが、ＯＨ、ＯＥｔ、ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｆ、ＮＨ−シクロプロピル、ＮＨＣＨ（Ｍｅ）ＣＨ２ＯＨ、及びＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択される、請求項１から１５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７】
下記の式から選択される、請求項１から１６のいずれかに記載の化合物。
【化４】
【請求項１８】
下記の式である、請求項１７に記載の化合物。
【化５】
【請求項１９】
ラセミ混合物である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
筋疾患を治療するための医薬品の製造のための、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用
【化６】
（式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、このそれぞれは、任意に置換されてもよく；
Ｙは、極性官能基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である）。
【請求項２１】
筋疾患が神経筋疾患である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
痙攣及び振戦を治療するための医薬品の製造のための、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用
【化７】
（式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；
Ｙは、極性官能基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である）。
【請求項２３】
胃腸障害を治療するための医薬品の製造のための、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用
【化８】
（式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；
Ｙは、極性官能基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である）。
【請求項２４】
胃腸障害が胃潰瘍である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
胃腸障害がクローン病である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２６】
胃腸障害が分泌性下痢である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２７】
胃腸障害が麻痺性イレウスである、請求項２３に記載の使用。
【請求項２８】
調節物質が末梢カンナビノイド受容体を選択的に調節する、請求項２０から２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
化合物が、中枢カンナビノイド受容体よりも末梢カンナビノイド受容体を選択的に調節する、請求項２０から２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０】
化合物が、実質的に末梢カンナビノイド受容体にのみ結合する、請求項２０から２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
化合物がカンナビノイド受容体アゴニストである、請求項２０から３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
化合物が、実質的に中枢カンナビノイド受容体のアゴニストとして作用しない、請求項２０から３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
化合物が、ＣＮＳから実質的に排除される、請求項２０から３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４】
Ｙが、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＲ３、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である、請求項２０から３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
Ｙが、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である、請求項２０から３４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３６】
化合物が、請求項１から１９のいずれか一項で定義された通りである、請求項２０から３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
治療を必要とする被験体に、請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物を治療上有効な量投与することからなる、末梢カンナビノイド受容体の調節に関連した障害を治療する方法。
【請求項３８】
障害が、末梢カンナビノイド受容体の不活性化に関連する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
化合物が、実質的に中枢カンナビノイド受容体のアゴニストとして作用しない、請求項３７又は請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
化合物が、実質的に末梢カンナビノイド受容体にのみ結合する、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
化合物が、ＣＮＳから実質的に排除される、請求項３７から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、又は担体と混合した、請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩を含む、医薬品組成物。
【請求項４３】
カンナビノイド受容体活性を調節することが可能なその他の化合物を同定するためのアッセイにおける、請求項２０で定義された式Ｉａの化合物又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項４４】
アッセイが競合結合アッセイである、請求項４３に記載の使用。
【請求項１】
式Ｉの化合物、又は薬学的に許容されるその塩
【化１】
（式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ任意に、アルキル、ＣＯＯＨ、ＣＯ２−アルキル、アルケニル、ＣＮ、ＮＨ２、ヒドロキシ、ハロ、アルコキシ、ＣＦ３、及びニトロから選択される１つ又は複数の置換基によって置換されてもよく；
Ｙは、ＯＨ、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択される極性官能基であり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ任意に置換されてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である；
但し、
（ｉ）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺがＯＨである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＯＨ、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｍｅ、ｍｅｔａ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−ＣＨ２ＣＯ２Ｈ、ｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｈ、及びｏｒｔｈｏ−（ＣＨ２）４ＣＯ２Ｈ以外のものであること；及び
（ii）Ａがフェニルであり、ｎが０であり、且つＺがＯＭｅである場合、Ｘ−Ｙは、ｍｅｔａ−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）４ＯＨ以外のものであることを条件とする）。
【請求項２】
Ｙが、ＣＮ、ＯＨ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４がそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４がそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル基、アリール基、又はシクロアルキル基であり、これらがそれぞれ任意に置換されてもよい、請求項１又は２のいずれかに記載の化合物。
【請求項４】
Ｙが、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４がそれぞれ独立に、Ｈ又は任意に置換されたアルキル基である、請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
Ｙが、ＯＨ、ＣＮ、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮＨＭｅ、及びＣＯＮＭｅ２から選択される、請求項１から４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
ｎが０である、請求項１から５のいずれかに記載の化合物。
【請求項７】
Ｘ−Ｙが、
−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｐ−Ｙ；
−Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ；及び
−Ｃ（Ｒ５）（Ｒ６）Ｃ（Ｒ７）（Ｒ８）−（ＣＨ２）ｒ−Ｙ
から選択され、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、及びＲ８がそれぞれ独立に、Ｈ又はアルキルであり、ｐ、ｑ、及びｒがそれぞれ独立に、２、３、又は４である、請求項１から６のいずれかに記載の化合物。
【請求項８】
Ｘ−Ｙが、
−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ２）ｐ−Ｙ；及び
−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）ｑ−Ｙ
から選択され、ｐ及びｑがそれぞれ独立に、２、３、又は４である、請求項１から７のいずれかに記載の化合物。
【請求項９】
Ｘ−Ｙが、ｃｉｓ−Ｃ（Ｒ５）＝Ｃ（Ｒ６）−（ＣＨ２）ｑ−Ｙであり、ｑが２、３、又は４である、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｘ−Ｙが、−Ｃ（Ｍｅ）２−ＣＨ２−（ＣＨ２）ｒ−Ｙであり、ｒが２、３、又は４である、請求項１から７又は９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ａがフェニル又はピリジルである、請求項１から１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
式Ｉａである、請求項１から１１のいずれかに記載の化合物。
【化２】
【請求項１３】
式Ｉｂである、請求項１から１１のいずれか一項に記載の化合物。
【化３】
【請求項１４】
Ａがフェニルである、請求項１２又は請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
ＺがＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２がそれぞれ独立に、Ｈ、アルキル、又はシクロアルキル基であり、これらがそれぞれ、１つ又は複数のＯＨ又はハロゲン基に任意に置換されてもよい、請求項１から１４のいずれかに記載の化合物。
【請求項１６】
Ｚが、ＯＨ、ＯＥｔ、ＮＨＣＨ２ＣＨ２Ｆ、ＮＨ−シクロプロピル、ＮＨＣＨ（Ｍｅ）ＣＨ２ＯＨ、及びＮＨＣＨ２ＣＨ２ＯＨから選択される、請求項１から１５のいずれかに記載の化合物。
【請求項１７】
下記の式から選択される、請求項１から１６のいずれかに記載の化合物。
【化４】
【請求項１８】
下記の式である、請求項１７に記載の化合物。
【化５】
【請求項１９】
ラセミ混合物である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
筋疾患を治療するための医薬品の製造のための、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用
【化６】
（式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、このそれぞれは、任意に置換されてもよく；
Ｙは、極性官能基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である）。
【請求項２１】
筋疾患が神経筋疾患である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
痙攣及び振戦を治療するための医薬品の製造のための、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用
【化７】
（式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；
Ｙは、極性官能基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である）。
【請求項２３】
胃腸障害を治療するための医薬品の製造のための、式Ｉａの化合物、又は薬学的に許容されるその塩の使用
【化８】
（式中、ＺはＯＲ１又はＮＲ１Ｒ２であり、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基であり；
Ｘは、アルキレン基、アルケニレン基、又はアルキニレン基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；
Ｙは、極性官能基であり；
Ａは、アリール基又はヘテロアリール基であり、これらはそれぞれ、任意に置換されてもよく；且つ
Ｂは（ＣＨ２）ｎであり、ｎは０、１、２、３、４、又は５である）。
【請求項２４】
胃腸障害が胃潰瘍である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
胃腸障害がクローン病である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２６】
胃腸障害が分泌性下痢である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２７】
胃腸障害が麻痺性イレウスである、請求項２３に記載の使用。
【請求項２８】
調節物質が末梢カンナビノイド受容体を選択的に調節する、請求項２０から２７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２９】
化合物が、中枢カンナビノイド受容体よりも末梢カンナビノイド受容体を選択的に調節する、請求項２０から２８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３０】
化合物が、実質的に末梢カンナビノイド受容体にのみ結合する、請求項２０から２９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３１】
化合物がカンナビノイド受容体アゴニストである、請求項２０から３０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３２】
化合物が、実質的に中枢カンナビノイド受容体のアゴニストとして作用しない、請求項２０から３１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３３】
化合物が、ＣＮＳから実質的に排除される、請求項２０から３２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３４】
Ｙが、ＮＯ２、ＣＮ、ＯＲ３、ＣＯＲ３、ＣＯＯＲ３、ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４、ＳＯ３Ｈ、ＳＯ２−Ｒ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、及びＣＦ３から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である、請求項２０から３３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３５】
Ｙが、ＣＮ、ＣＯＯＲ３、ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４、ＣＯＮＲ３Ｒ４から選択され、Ｒ３及びＲ４はそれぞれ独立に、Ｈ又はヒドロカルビル基である、請求項２０から３４のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項３６】
化合物が、請求項１から１９のいずれか一項で定義された通りである、請求項２０から３５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３７】
治療を必要とする被験体に、請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物を治療上有効な量投与することからなる、末梢カンナビノイド受容体の調節に関連した障害を治療する方法。
【請求項３８】
障害が、末梢カンナビノイド受容体の不活性化に関連する、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
化合物が、実質的に中枢カンナビノイド受容体のアゴニストとして作用しない、請求項３７又は請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
化合物が、実質的に末梢カンナビノイド受容体にのみ結合する、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
化合物が、ＣＮＳから実質的に排除される、請求項３７から４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
薬学的に許容される希釈剤、賦形剤、又は担体と混合した、請求項１から１９のいずれか一項に記載の化合物又は薬学的に許容されるその塩を含む、医薬品組成物。
【請求項４３】
カンナビノイド受容体活性を調節することが可能なその他の化合物を同定するためのアッセイにおける、請求項２０で定義された式Ｉａの化合物又は薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項４４】
アッセイが競合結合アッセイである、請求項４３に記載の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２００７−５２３１５０（Ｐ２００７−５２３１５０Ａ）
【公表日】平成１９年８月１６日（２００７．８．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５５３６７３（Ｐ２００６−５５３６７３）
【出願日】平成１７年２月２１日（２００５．２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０００６０５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０８０３１６
【国際公開日】平成１７年９月１日（２００５．９．１）
【出願人】（５０５３６７４６４）ユーシーエル・バイオメディカ・ピーエルシー (20)
【氏名又は名称原語表記】ＵＣＬ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡ ＰＬＣ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年８月１６日（２００７．８．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年２月２１日（２００５．２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／０００６０５
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０８０３１６
【国際公開日】平成１７年９月１日（２００５．９．１）
【出願人】（５０５３６７４６４）ユーシーエル・バイオメディカ・ピーエルシー (20)
【氏名又は名称原語表記】ＵＣＬ ＢＩＯＭＥＤＩＣＡ ＰＬＣ
【Ｆターム（参考）】
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