Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
【課題】Ｃ型肝炎の予防若しくは治療に有効なＨＣＶ阻害剤を提供する。
【解決手段】一般式（Ｉ）
（式中、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣであり、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アルールスルホニル基、ヘテロアリールスルホニル基、アラルキル基等及び脂肪族ヘテロ環からなる群から選択される任意の基である。）で示される化合物を含有するＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
【解決手段】一般式（Ｉ）
（式中、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣであり、Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アルールスルホニル基、ヘテロアリールスルホニル基、アラルキル基等及び脂肪族ヘテロ環からなる群から選択される任意の基である。）で示される化合物を含有するＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤に関する。より詳しくは、Ｃ型肝炎ウイルスの感染、複製又はＣ型肝炎ウイルスタンパク質の翻訳に影響を及ぼす各種物質を探索して検出された新規なＣ型肝炎ウイルス阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（以下「ＨＣＶ」と記載する。）は非Ａ非Ｂ型肝炎の原因ウイルスとして１９８９年に発見同定された。ＨＣＶは、エンベロープを有するＲＮＡウイルスである。ゲノムは一本鎖プラス鎖ＲＮＡで、フラビウイルス科のHepacivirus属に分類される（International Union of Microbiological Societies のThe International Committee on Taxonomy of Virusesより）。
【０００３】
同じ肝炎ウイルスであっても、ＤＮＡウイルスであるＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、免疫能の未熟な新生児、乳幼児期以外では、たとえ感染しても免疫機構により排除され急性感染で終わる。それと比較して、ＨＣＶは、未だ明らかではない原因により宿主の免疫機構を回避する。そのため免疫機構の発達した大人に感染した場合でも、持続性感染に移行することが多い。
【０００４】
ＨＣＶ感染により引き起こされる肝炎（Ｃ型肝炎）は、その後二十数年の経過のなかで肝硬変、そして最終的に肝癌に至る可能性がある。肝癌は、手術で癌を摘出しても、非癌部で引き続き起こる炎症のため肝癌が再発する患者も多いことが知られている。
また、ＨＣＶ感染が慢性蕁麻疹、偏平苔癬、クリオグロブリン血症性紫斑等の皮膚疾患に関与するとの報告も見られる（日皮会誌, 111(7), 1075-81, 2001）。
【０００５】
ＨＣＶ感染者は日本国内で約２００万人、世界で約２億人いると推定されている。また、ＨＣＶに感染していることを自覚していないいわゆる無症候性キャリアーも多数存在している。現在、日本国内では、肝細胞癌による犠牲者は年間約３．５万人となっており、その８割はＨＣＶ感染によるものである。
【０００６】
現在、ＨＣＶ感染症に対しては、インターフェロンとリバビリン（Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ：１−β−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド）の併用療法が一般的である。しかしながら、この併用療法は、患者全体の５０％にしか有効ではなく、また、血球減少症・溶血性貧血など重篤な副作用をおこすことが知られている。
【０００７】
係る事情の下、薬効の優れているＨＣＶ阻害剤を検出することが求められている。そのため、ＨＣＶがどのようにして複製増殖するのか、そして宿主細胞にどのような影響を与えるのかといったＨＣＶの生活環の詳細を明らかにすることが求められる。
【０００８】
１９９９年に、ＨＣＶを人工的に増殖させる実験システムとしてＨＣＶレプリコンシステムが登場した。このシステムでは、ＨＣＶゲノムの複製に必須のＮＳ３〜ＮＳ５Ｂ領域とゲノムの両末端からなるＨＣＶサブゲノムが細胞内で複製するようになっており、１細胞あたりのＨＣＶサブゲノムのコピー数は数千というレベルに達する。
【０００９】
また、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを用いて感染性クローンのＲＮＡを合成するＨＣＶレプリコンシステムについても報告されている（非特許文献１、２、特許文献１）。
しかし、このレプリコンシステムから検出されるＨＣＶ阻害剤は、ＨＣＶ感染後の後期過程に作用する阻害剤にすぎず、薬効としては不十分である。
【００１０】
【特許文献１】国際公開ＷＯ０５／０２８６５２
【非特許文献１】Nature Medicine 11, Number 7, July p.791-796(2005)
【非特許文献２】ウイルス第５５巻第２号 pp.287-296 (2005)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、このような課題に鑑みなされたものであり、増殖環の全過程の何れかの過程を標的とする、ＨＣＶ増殖に対する高い阻害活性を有するＨＣＶ阻害剤を提供することを目的とするものである。また、本発明は、Ｃ型肝炎の予防若しくは治療に有効な薬剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記目的を達成するため、本発明に係るＨＣＶ阻害剤は、
以下の一般式（Ｉ）乃至（ＶＩＩＩ）で示される化合物のうち少なくともいずれか一つを含有する、宿主細胞においてＣ型肝炎ウイルスの感染または産生を抑制しうるＣ型肝炎ウイルス阻害剤である。
【００１３】
一般式（Ｉ）
【化１】
【００１４】
一般式（ＩＩ）
【化２】
【００１５】
一般式（ＩＩＩ）
【化３】
【００１６】
一般式（ＩＶ）
【化４】
【００１７】
一般式（Ｖ）
【化５】
【００１８】
一般式（ＶＩ）
【化６】
【００１９】
一般式（ＶＩＩ）
【化７】
【００２０】
一般式（ＶＩＩＩ）
【化８】
【００２１】
一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）において、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣであり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アルールスルホニル基、ヘテロアリールスルホニル基、アラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、アラルキルオキシカルボニル基、アリルエーテル基、シクロエーテル基、及び脂肪族ヘテロ環からなる群から選択される任意の基である。
【００２２】
また、前記一般式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造式（ＩＸ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００２３】
構造式（ＩＸ）
【化９】
【００２４】
また、前記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＩ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００２５】
構造式（ＸＩＩ）
【化１０】
【００２６】
また、前記一般式（ＩＶ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＩＩ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００２７】
構造式（ＸＩＩＩ）
【化１１】
【００２８】
また、前記一般式（Ｖ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＶ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００２９】
構造式（ＸＩＶ）
【化１２】
【００３０】
また、前記一般式（ＶＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＸ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００３１】
構造式（ＸＩＸ）
【化１３】
【００３２】
また、前記一般式（ＶＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＸ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００３３】
構造式（ＸＸ）
【化１４】
【００３４】
前記一般式（ＶＩＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＸＩＩ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００３５】
構造式（ＸＸＩＩ）
【化１５】
【発明の効果】
【００３６】
本発明に係るＨＣＶ阻害剤は、Ｃ型肝炎の予防若しくは治療に有効な薬剤である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
〔ＨＣＶ阻害剤〕
本発明者らは、鋭意研究を日夜重ねた結果、植物及び微生物由来の純天然物を含む化合物ライブラリーから上述の一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）に示される化合物、その薬学上許容される塩及び溶媒和物のうち少なくとも何れか一つを含有するＨＣＶ阻害剤が、増殖環の全過程の何れかの過程を標的とするＨＣＶ阻害剤であることを見いだして本件発明に至った。
【００３８】
上述の一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）において、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アルールスルホニル基、ヘテロアリールスルホニル基、アラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、アラルキルオキシカルボニル基、アリルエーテル基、シクロエーテル基及び脂肪族ヘテロ環、における置換基には、低級アルキル基、低級アルキルカルボニル基、低級アルキルスルホニル基、低級アルコキシ基、水酸基、ハロゲン原子、ハロアルキル基、アミノ基、置換アミノ基、シアノ基、ニトロ基、カルボキシ基、カルバモイル基、硫酸基、亜硫酸基等が含まれる。
【００３９】
アリールは、フェニル、ナフチル又は多環芳香族炭化水素基（フェナンスリル等）等である。
【００４０】
ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、Ｓからなる群から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜６員の芳香環基（例えば、フラン、チオフェン、ピロール、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン）である。
【００４１】
アリールカルボニルは、カルボニル基に上記のアリールが置換して形成される基である。
【００４２】
ヘテロアリールカルボニルは、カルボニル基に上記のヘテロアリールが置換して形成される基である。
【００４３】
アリールスルホニルは、スルホニル基に上記のアリールが置換して形成される基である。
【００４４】
ヘテロアリールスルホニルは、スルホニル基に上記ヘテロアリールが置換して形成される基である。
【００４５】
アラルキルは、後述する低級アルキル基に上記アリールが置換して形成される基であり、ベンジル、メチルベンジル、ナフチルメチル等である。
【００４６】
アラルキルオキシカルボニルは、カルボニル基に上述のアラルキルがＯ原子を介して結合して形成される基であり、例えばベンジルオキシカルボニル等である。
【００４７】
脂肪族ヘテロ環は、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜６員の脂肪族環であり、ピロリジニル、チアゾリジニル、オキサゾリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピロリル、チアゾリル等が例示される。
【００４８】
低級アルキルは、炭素数１〜８個の直鎖状又は分岐状のアルキル基である。具体的には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ぺンチル、イソぺンチル、ネオぺンチル、tert−ぺンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等が含まれる。
【００４９】
低級アルコキシは、炭素数１〜６個の直鎖状又は分岐状のアルコキシ基である。具体的にはメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ等が含まれる。
【００５０】
ハロゲンは、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素である。
【００５１】
低級アルキルカルボニルは、カルボニル基に上記の低級アルキルが置換して形成される基である。
【００５２】
低級アルキルスルホニルは、スルホニル基に上記の低級アルキルが置換して形成される基である。
【００５３】
薬学上許容される塩とは、以下に示すものがあげられる。塩基性付加塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩がある。また、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩がある。また、例えばアンモニウム塩がある。また、例えばトリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ブロカイン塩等の脂肪族アミン塩がある。また例えばＮ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン等のアラルキルアミン塩がある。また例えばピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソキノリン塩等の複素環芳香族アミン塩がある。また例えばテトラメチルアンモニウム塩、テトラエチルアモニウム塩、ベンジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルアンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メチルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩等の第４級アンモニウム塩がある。また、アルギニン塩、リジン塩等の塩基性アミノ酸塩等がある。
【００５４】
酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、過塩素酸塩等の無機酸塩がある。また例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマール酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩等の有機酸塩がある。また例えばメタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のスルホン酸塩がある。また例えば、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等の酸性アミノ酸等がある。
【００５５】
本実施形態において、宿主細胞とは、ＨＣＶが感染しうる細胞をいい、例えば、肝細胞が挙げられる。
【００５６】
本実施形態に係るＨＣＶ阻害剤は、上記に示す一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）のうち少なくともいずれかの化合物を薬学上有効量含み、さらに薬学的に許容し得る担体を含んでなる医薬組成物も含まれる。
【００５７】
一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物、その薬学上許容される塩及び溶媒和物は、常法に従って、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤等の医薬の製剤技術分野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて、経口投与、組織内投与、局所投与、経直腸的投与などに適した剤型に製剤化することができる。また、上記の補助剤のほか、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などの補助剤、および他の医薬品を含有させることもできる。
【００５８】
経口投与に適した剤型としては、例えば、錠剤、糖衣剤、丸剤、カプセル剤、ドロップ剤、舌下剤、末剤、散剤、飲用液剤、その他の剤型を挙げることができる。更に錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶錠、フィルムコーティング錠、二重錠、または多層錠とすることができる。錠剤の形態に調製するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。このような担体としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸などの賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖などの崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤；グリセリン、澱粉などの保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコールなどの潤沢剤などが例示できる。
【００５９】
丸剤の形態に調製するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。このような担体としては、例えば、グルコース、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤；ラミナラン寒天などの崩壊剤などが例示できる。これら経口投与用製剤は、固形、粉末または液剤の用量単位で投与することができる。
【００６０】
組織内投与に適した剤型としては、注射剤を挙げることができる。注射剤として調製する場合には、溶液、乳剤および懸濁剤などの形態とすることができる。これらは、殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ましい。これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に調製するに際しては、希釈剤としてこの分野で慣用されているものを使用することができる。このような希釈剤としては、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類などを用いることができる。また、等張性の溶液を調製するのに充分な量の食塩、グルコース、またはグリセリン、および通常の溶解補助剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、無痛化剤なども配合することができる。これら溶液、乳剤および懸濁剤は、一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物その薬学上許容される塩及び溶媒和物の一定量を、上述のような水性や油性の非毒性の希釈剤に溶解または懸濁し、更に必要に応じて等張化剤などを加え、滅菌することにより調製することができる。これら注射剤は、皮下、筋肉内または静脈内に投与することができる。
【００６１】
局所投与に適した剤型としては、例えば、局所用液剤、クリーム剤、粉剤、ペースト剤、ゲル剤、軟膏剤などの外用製剤を挙げることができる。これらは、一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物その薬学上許容される塩及び溶媒和物の一定量を、外用製剤の目的に適合する香料、着色料、充填剤、界面活性剤、保湿剤、皮膚軟化剤、ゲル化剤、担体、保存剤、安定剤などのうちの一種以上と組み合わせることにより調製することができる。
【００６２】
経直腸的投与に適した剤型としては、坐剤を挙げることができる。坐剤の形態に調製するに際しては、基材としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。このような基材としては、例えばパルミチン酸ミリスチルエステルなどの高級エステル類、高級アルコール類、ポリエチレングリコール、カカオ脂、ゼラチン、半合成グリセリド、これらの混合物などの低融点基材を挙げることができる。座剤は、一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物その薬学上許容される塩及び溶媒和物の一定量を上記のような基材に混入し、成型することにより調製することができる。
【００６３】
上記医薬組成物は、投与単位形態で投与することが好ましく、経口投与、組織内投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与など）、局所投与（経皮投与など）又は経直腸的に投与することができる。上記医薬組成物は、これらの投与方法に適した剤型で投与されることは当然である。
【００６４】
一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物その薬学上許容される塩及び溶媒和物を医薬として投与する場合、抗ウイルス剤としての用量は、年齢、体重などの患者の状態、投与経路、病気の性質と程度などを考慮した上で決定することができ、通常は、ヒト成人に対しては、有効成分量として、一日当たり、１〜２０００mgの範囲である。患者の状態などに応じて、上記範囲未満または上記範囲を超える用量を投与することもできる。多量に投与するときは、一日数回に分割して投与することが望ましい。
【００６５】
〔ＨＣＶ阻害剤の検出方法〕
本実施形態に係るＨＣＶ阻害剤は、まず、図１に示すように、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞、試験検体及び感染性ＨＣＶを接触させたのちにＨＣＶ濃度（即ち、ＨＣＶｃｏｒｅの数）を測定することで、ＨＣＶの複製又はＨＣＶタンパク質の翻訳などに影響を及ぼす物質を候補として選出する。
【００６６】
候補は、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞の生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（％））が一定値以上で、かつ、ＨＣＶｃｏｒｅの数（ｆｍｏｌ／ｍｌ）が一定値以下となる物質を選出する。
【００６７】
次に、選出された候補である化合物のうち、選択性（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ）が一定値以上の化合物を、新規であるＨＣＶ阻害剤として検出する。
ここで、選択性（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ）とは、ＣＣ５０／ＥＣ５０である。ＣＣ５０は、細胞が５０％傷害を受ける薬剤の濃度である。ＥＣ５０値は、ウイルスの増殖を５０％抑制する薬剤の濃度である。
【００６８】
以下、ＨＣＶ阻害剤の検出方法を詳述する。
まず、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞としてＨｕｈ７．５．１細胞を用いる。そして、Ｈｕｈ７．５．１細胞を、該細胞培養用培地に懸濁し、スクリーニング用容器に播種する。なお、使用する細胞は、継代数が第４３回目までのものが好ましい。
【００６９】
次に、試験検体としてのスクリーニング候補化合物を、細胞を含むスクリーニング用容器に加える。
【００７０】
次に、感染性ＨＣＶを播種し、スクリーニング候補化合物と感染性ＨＣＶを含む複製細胞を培養し、得られる培養物中の感染性ＨＣＶを検出する。
感染性ＨＣＶは、ＪＦＨ１株のｃＤＮＡを用いて、図２に示すような感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクターを導入した宿主細胞から作製することができる。
【００７１】
感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクターは、少なくともコアタンパク質と２つのエンベロープタンパク質（Ｅ１、Ｅ２）とp7タンパク質、ならびに複製に必要な非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５）を含み、該ＨＣＶを構成するゲノム、すなわち感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクターは、コアタンパク質をコードする配列の上流に、プロモーター配列を配置させてなる。
【００７２】
プロモーター配列は、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞においてＨＣＶが自律複製能を発揮しうるように配置されていれば良く、特に限定されないが、好適にはＰｏｌＩプロモーター配列が用いられる。
【００７３】
感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクターには、上記配列のほか、例えばＮＳタンパク質をコードする配列の下流に、ターミネーター配列を配置させていても良く、好適にはＰｏｌＩターミネーター配列が挙げられる。さらには、コアタンパク質をコードする配列の上流に、１つのＩＲＥＳ配列を含んでも良く、これにさらに１つの選択マーカー遺伝子やリポーター遺伝子を含んでいてもよい。
【００７４】
次に、感染性ＨＣＶを細胞中で培養するために、３〜１０日間、好ましくは４〜７日間、より好ましくは５〜６日間、３７±１℃で加温する。
【００７５】
次に、上記培養後、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞の生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（％））とＨＣＶｃｏｒｅの数（ｆｍｏｌ／ｍｌ）との関係を求める。
化合物は、ＨＣＶｃｏｒｅが２００００ｆｍｏｌ／ｍｌ以下で、かつ、生存率が６５％以上となるものを選出する。
【００７６】
次に、培養上清を用いて、培養後、上清中のＨＣＶコアタンパク質量をオーソＨＣＶ抗原ＥＬＩＳＡテストにより定量し、各化合物のＨＣＶ増殖阻害効果を評価する。該ＨＣＶ増殖阻害効果から、ＥＣ５０値を求める。
【００７７】
次に、上述のスクリーニング方法に加えて、候補化合物のＨＣＶの複製の促進又は抑制に及ぼす影響をより確実に確認するために、非特異作用を排除するために並行して、図１に示すように、細胞毒性試験を行う。
各化合物について、テトラゾリウム塩ＷＳＴ−８の生成したホルマザンの吸光度を直接測定するＷＳＴ法により、Ｈｕｈ７．５．１細胞に対する細胞毒性試験を行う。該細胞毒性試験結果から、ＣＣ５０値を求める。
【００７８】
そして、候補として選出された化合物の選択性を測定する。選択性は、薬剤の有効濃度に対する細胞毒性の比を表し、高いほど薬剤として優れている、あるいは薬剤として安全に使える濃度範囲が高いことを示す。
選択性が１０．０以上である化合物を、Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤として検出する。
【００７９】
〔他の実施形態〕
ＨＣＶ阻害剤に含有される化合物は、（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）に示される化合物以外にも、光学異性体が存在するものについては、Ｌ体、Ｄ体又はラセミ体が含まれる。また、（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）に示される化合物をさらに化学修飾して、別の化合物に誘導化することも可能である。
【実施例】
【００８０】
ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞としてＨｕｈ７．５．１細胞を用いた。そして、Ｈｕｈ７．５．１細胞を、該細胞培養用培地に懸濁し、９６穴のマイクロプレートなどのスクリーニング用容器に播種した。
【００８１】
次に、試験検体としてのスクリーニング候補化合物を、細胞を含むスクリーニング用容器に加えた。スクリーニング候補化合物は、植物及び微生物由来の純天然物の化合物ライブラリー（Ｅｎａｍｉｎｅ社（ナミキ商事）のＡｎａｌｙｔｉＣｏｎ Ｌｉｂｒａｒｙ）を用い、その品目は３２１５を用いた。
【００８２】
次に、感染性ＨＣＶを播種し、スクリーニング候補化合物と感染性ＨＣＶを含む複製細胞を培養し、得られる培養物中の感染性ＨＣＶを検出した。
感染性ＨＣＶは、国際公開ＷＯ０７／０３７４２８に記載の方法に従い、ＲＮＡ ＰｏｌＩプロモーター／ターミネーター系を利用したＪＦＨ１株（ｇｅｎｏｔｙｐｅ ２ａ)のｃＤＮＡを含む、図２に示す感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクター（ｐＨＨ／ＺｅｏＪＦＨ１）を構築し、このプラスミドベクターをヒト肝癌由来のＨｕｈ７．５．１細胞に導入した細胞株（Ｈｕｈ７.５．１／ＪＦＨ１ ｚｅｏ Ｒ細胞）を用いて作製した。
【００８３】
次に、感染性ＨＣＶを細胞中で培養するために、６日間、３７±１℃で加温した。
【００８４】
次に、上記培養後、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞の生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（％））とＨＣＶcoreの数（ｆｍｏｌ／ｍｌ）との関係を求めた。
ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞の生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（％））とＨＣＶｃｏｒｅの数（ｆｍｏｌ／ｍｌ）との関係は、図３に示すものであった。
ＨＣＶｃｏｒｅが２００００ｆｍｏｌ／ｍｌ以下で、かつ、生存率が６５％以上となる化合物は、図３において実線で囲む領域に三角印で示す。ここでは、候補となる化合物は５３個検出された。
【００８５】
次に、各化合物のＨＣＶ増殖阻害効果を評価した。評価は、図１に示すスクリーニングによりＨＣＶの濃度を測定し、ＨＣＶ増殖阻害効果から、ＥＣ５０値を求めた。
また、図１に示すＷＳＴ法により、Ｈｕｈ７．５．１細胞に対する細胞毒性試験を行った。そして該細胞毒性試験結果から、ＣＣ５０値を求めた。
【００８６】
候補として選出された化合物の選択性（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ）を測定し、ＣＣ５０／ＥＣ５０が１０以上の化合物は、下記構造式（ＩＸ）〜（ＸＸＩＩ）に示すように、１４個選出された。なお、これら構造式１〜１４に係る化合物は、図４において丸印で示す。
【００８７】
構造式（ＩＸ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【００８８】
構造式（ＩＸ）
【化１６】
【００８９】
構造式（ＩＸ）で示される化合物は、一般式（Ｉ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ａ）で、Ｒ２を式（ｂ）で、ＸをＮで、表されるものであった。
【００９０】
式（ａ）
【化１７】
【００９１】
式（ｂ）
【化１８】
【００９２】
構造式（ＩＸ）で示される化合物は、ＣＣ５０が９．８８μＭで、ＥＣ５０が０．５０μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１９．０５であった。
【００９３】
次に、構造式（Ｘ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【００９４】
構造式（Ｘ）
【化１９】
【００９５】
構造式（Ｘ）で示される化合物は、一般式（ＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｃ）で表されるものであった。
【００９６】
式（ｃ）
【化２０】
【００９７】
構造式（Ｘ）で示される化合物は、ＣＣ５０が少なくとも６０μＭ以上で、ＥＣ５０が５．８８μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は少なくとも１０．２以上であった。
【００９８】
次に、構造式（ＸＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【００９９】
構造式（ＸＩ）
【化２１】
【０１００】
構造式（ＸＩ）で示される化合物は、一般式（ＩＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｄ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、ＸはＯで、表されるものであった。
【０１０１】
式（ｄ）
【化２２】
【０１０２】
式（ｅ）
【化２３】
【０１０３】
構造式（ＸＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が少なくとも５０μＭ以上で、ＥＣ５０が１．４４μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は少なくとも３４．７以上であった。
【０１０４】
次に、構造式（ＸＩＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１０５】
構造式（ＸＩＩ）
【化２４】
【０１０６】
構造式（ＸＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＩＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｆ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、ＸはＯで、表されるものであった。
【０１０７】
式（ｆ）
【化２５】
【０１０８】
構造式（ＸＩＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１０．３μＭで、ＥＣ５０が０．３０μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は３４．３であった。
【０１０９】
構造式（ＸＩＩＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１１０】
構造式（ＸＩＩＩ）
【化２６】
【０１１１】
構造式（ＸＩＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＩＶ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｇ）で、Ｒ２を式（ｈ）で、表されるものであった。
【０１１２】
式（ｇ）
【化２７】
【０１１３】
式（ｈ）
【化２８】
【０１１４】
構造式（ＸＩＩＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１１．２μＭで、ＥＣ５０が０．１９μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は５８．９であった。
【０１１５】
構造式（ＸＩＶ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１１６】
構造式（ＸＩＶ）
【化２９】
【０１１７】
構造式（ＸＩＶ）で示される化合物は、一般式（Ｖ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｅ）で、Ｒ２を式（ｉ）で、Ｒ３を式（ｊ）で、表されるものであった。
【０１１８】
式（ｉ）
【化３０】
【０１１９】
式（ｊ）
【化３１】
【０１２０】
構造式（ＸＩＶ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１５．２μＭで、ＥＣ５０が０．４３μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は３５．３であった。
【０１２１】
構造式（ＸＶ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１２２】
構造式（ＸＶ）
【化３２】
【０１２３】
構造式（ＸＶ）で示される化合物は、一般式（Ｖ）で示される化合物において、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ１）Ｒ２を式（ｋ）で、Ｒ３を式（ｌ）で、表されるものであった。
【０１２４】
式（ｋ）
【化３３】
【０１２５】
式（ｌ）
【化３４】
【０１２６】
構造式（ＸＶ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１３．０μＭで、ＥＣ５０が０．９１μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１４．２であった。
【０１２７】
構造式（ＸＶＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１２８】
構造式（ＸＶＩ）
【化３５】
【０１２９】
構造式（ＸＶＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｍ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、Ｒ３を式（ｎ）で、ＸはＮで、表されるものであった。
【０１３０】
式（ｍ）
【化３６】
【０１３１】
式（ｎ）
【化３７】
【０１３２】
構造式（ＸＶＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１３．７μＭで、ＥＣ５０が１．１５μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１１．９であった。
【０１３３】
構造式（ＸＶＩＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１３４】
構造式（ＸＶＩＩ）
【化３８】
【０１３５】
構造式（ＸＶＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（o）で、Ｒ２を式（ｅ）で、Ｒ３を式（ｐ）で、ＸはＮで、表されるものであった。
【０１３６】
式（o）
【化３９】
【０１３７】
式（ｐ）
【化４０】
【０１３８】
構造式（ＸＶＩI）で示される化合物は、ＣＣ５０が１３．８μＭで、ＥＣ５０が１．３５μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１０．２であった。
【０１３９】
構造式（ＸＶＩIＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１４０】
構造式（ＸＶＩIＩ）
【化４１】
【０１４１】
構造式（ＸＶIＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｍ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、Ｒ３を式（ｑ）で、ＸはＮで、表されるものであった。
【０１４２】
式（ｑ）
【化４２】
【０１４３】
構造式（ＸＶＩＩＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１２．７μＭで、ＥＣ５０が１．０７μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１１．８であった。
【０１４４】
構造式（ＸＩＸ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１４５】
構造式（ＸＩＸ）
【化４３】
【０１４６】
構造式（ＸＩＸ）で示される化合物は、一般式（ＶＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｒ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、Ｒ３を式（ｓ）で、ＸはＣで、表されるものであった。
【０１４７】
式（ｒ）
【化４４】
【０１４８】
式（ｓ）
【化４５】
【０１４９】
構造式（ＸＩＸ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１３．０μＭで、ＥＣ５０が０．１９μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は６８．４であった。
【０１５０】
構造式（ＸＸ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１５１】
構造式（ＸＸ）
【化４６】
【０１５２】
構造式（ＸＸ）で示される化合物は、一般式（ＶＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｅ）で、Ｒ２を式（ｔ）で、Ｒ３を式（ｕ）で、表されるものであった。
【０１５３】
式（ｔ）
【化４７】
【０１５４】
式（ｕ）
【化４８】
【０１５５】
構造式（ＸＸ）で示される化合物は、ＣＣ５０が少なくとも５０μＭ以上で、ＥＣ５０が０．６１μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は少なくとも８１．９以上であった。
【０１５６】
構造式（ＸＸＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１５７】
構造式（ＸＸＩ）
【化４９】
【０１５８】
構造式（ＸＸＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩＩ）で示される化合物において、−Ｎ−Ｒ１（−Ｒ２）を式（ｖ）で、Ｒ３を式（ｗ）で、表されるものであった。
【０１５９】
式（ｖ）
【化５０】
【０１６０】
式（ｗ）
【化５１】
【０１６１】
構造式（ＸＸＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１４．１で、ＥＣ５０が１．２７μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１１．１であった。
【０１６２】
構造式（ＸＸＩＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１６３】
構造式（ＸＸＩＩ）
【化５２】
【０１６４】
構造式（ＸＸＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｘ）で、Ｒ２をＨで、表されるものであった。
【０１６５】
式（ｘ）
【化５３】
【０１６６】
構造式（ＸＸＩＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１５．２で、ＥＣ５０が０．８８μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１７．２であった。
【０１６７】
以下に、構造式（ＩＸ）〜（ＸＸＩＩ）についてのＣＣ５０、ＥＣ５０、ＣＣ５０／ＥＣ５０を表１に示す。
【０１６８】
【表１】
【０１６９】
ＥＣ５０が１．０μＭ以下のものは、構造式（ＩＸ）、構造式（ＸＩＩ）、構造式（ＸＩＩＩ）、構造式（ＸＩＶ）、構造式（ＸＶ）、構造式（ＸＩＸ）、構造式（ＸＸ）及び構造式（ＸＸＩＩ）であった。これらの化合物は高いＨＣＶ阻害効果を有すると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【０１７０】
本発明は、Ｃ型肝炎の予防若しくは治療に有効な薬剤として利用できる。
【図面の簡単な説明】
【０１７１】
【図１】実施形態に係るアッセイ方法を示す図である。
【図２】実施形態に係るＨＣＶレプリコンゲノム及び発現プラスミドの構造を示す図である。
【図３】ＨＣＶコアの濃度と生存率との関係を示す図である。
【図４】ＨＣＶコアの濃度と生存率との関係において、選択性が高い化合物を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤に関する。より詳しくは、Ｃ型肝炎ウイルスの感染、複製又はＣ型肝炎ウイルスタンパク質の翻訳に影響を及ぼす各種物質を探索して検出された新規なＣ型肝炎ウイルス阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（以下「ＨＣＶ」と記載する。）は非Ａ非Ｂ型肝炎の原因ウイルスとして１９８９年に発見同定された。ＨＣＶは、エンベロープを有するＲＮＡウイルスである。ゲノムは一本鎖プラス鎖ＲＮＡで、フラビウイルス科のHepacivirus属に分類される（International Union of Microbiological Societies のThe International Committee on Taxonomy of Virusesより）。
【０００３】
同じ肝炎ウイルスであっても、ＤＮＡウイルスであるＢ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、免疫能の未熟な新生児、乳幼児期以外では、たとえ感染しても免疫機構により排除され急性感染で終わる。それと比較して、ＨＣＶは、未だ明らかではない原因により宿主の免疫機構を回避する。そのため免疫機構の発達した大人に感染した場合でも、持続性感染に移行することが多い。
【０００４】
ＨＣＶ感染により引き起こされる肝炎（Ｃ型肝炎）は、その後二十数年の経過のなかで肝硬変、そして最終的に肝癌に至る可能性がある。肝癌は、手術で癌を摘出しても、非癌部で引き続き起こる炎症のため肝癌が再発する患者も多いことが知られている。
また、ＨＣＶ感染が慢性蕁麻疹、偏平苔癬、クリオグロブリン血症性紫斑等の皮膚疾患に関与するとの報告も見られる（日皮会誌, 111(7), 1075-81, 2001）。
【０００５】
ＨＣＶ感染者は日本国内で約２００万人、世界で約２億人いると推定されている。また、ＨＣＶに感染していることを自覚していないいわゆる無症候性キャリアーも多数存在している。現在、日本国内では、肝細胞癌による犠牲者は年間約３．５万人となっており、その８割はＨＣＶ感染によるものである。
【０００６】
現在、ＨＣＶ感染症に対しては、インターフェロンとリバビリン（Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ：１−β−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド）の併用療法が一般的である。しかしながら、この併用療法は、患者全体の５０％にしか有効ではなく、また、血球減少症・溶血性貧血など重篤な副作用をおこすことが知られている。
【０００７】
係る事情の下、薬効の優れているＨＣＶ阻害剤を検出することが求められている。そのため、ＨＣＶがどのようにして複製増殖するのか、そして宿主細胞にどのような影響を与えるのかといったＨＣＶの生活環の詳細を明らかにすることが求められる。
【０００８】
１９９９年に、ＨＣＶを人工的に増殖させる実験システムとしてＨＣＶレプリコンシステムが登場した。このシステムでは、ＨＣＶゲノムの複製に必須のＮＳ３〜ＮＳ５Ｂ領域とゲノムの両末端からなるＨＣＶサブゲノムが細胞内で複製するようになっており、１細胞あたりのＨＣＶサブゲノムのコピー数は数千というレベルに達する。
【０００９】
また、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼを用いて感染性クローンのＲＮＡを合成するＨＣＶレプリコンシステムについても報告されている（非特許文献１、２、特許文献１）。
しかし、このレプリコンシステムから検出されるＨＣＶ阻害剤は、ＨＣＶ感染後の後期過程に作用する阻害剤にすぎず、薬効としては不十分である。
【００１０】
【特許文献１】国際公開ＷＯ０５／０２８６５２
【非特許文献１】Nature Medicine 11, Number 7, July p.791-796(2005)
【非特許文献２】ウイルス第５５巻第２号 pp.287-296 (2005)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、このような課題に鑑みなされたものであり、増殖環の全過程の何れかの過程を標的とする、ＨＣＶ増殖に対する高い阻害活性を有するＨＣＶ阻害剤を提供することを目的とするものである。また、本発明は、Ｃ型肝炎の予防若しくは治療に有効な薬剤を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記目的を達成するため、本発明に係るＨＣＶ阻害剤は、
以下の一般式（Ｉ）乃至（ＶＩＩＩ）で示される化合物のうち少なくともいずれか一つを含有する、宿主細胞においてＣ型肝炎ウイルスの感染または産生を抑制しうるＣ型肝炎ウイルス阻害剤である。
【００１３】
一般式（Ｉ）
【化１】
【００１４】
一般式（ＩＩ）
【化２】
【００１５】
一般式（ＩＩＩ）
【化３】
【００１６】
一般式（ＩＶ）
【化４】
【００１７】
一般式（Ｖ）
【化５】
【００１８】
一般式（ＶＩ）
【化６】
【００１９】
一般式（ＶＩＩ）
【化７】
【００２０】
一般式（ＶＩＩＩ）
【化８】
【００２１】
一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）において、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣであり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アルールスルホニル基、ヘテロアリールスルホニル基、アラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、アラルキルオキシカルボニル基、アリルエーテル基、シクロエーテル基、及び脂肪族ヘテロ環からなる群から選択される任意の基である。
【００２２】
また、前記一般式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造式（ＩＸ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００２３】
構造式（ＩＸ）
【化９】
【００２４】
また、前記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＩ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００２５】
構造式（ＸＩＩ）
【化１０】
【００２６】
また、前記一般式（ＩＶ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＩＩ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００２７】
構造式（ＸＩＩＩ）
【化１１】
【００２８】
また、前記一般式（Ｖ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＶ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００２９】
構造式（ＸＩＶ）
【化１２】
【００３０】
また、前記一般式（ＶＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＸ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００３１】
構造式（ＸＩＸ）
【化１３】
【００３２】
また、前記一般式（ＶＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＸ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００３３】
構造式（ＸＸ）
【化１４】
【００３４】
前記一般式（ＶＩＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＸＩＩ）で示される化合物である、ことも可能である。
【００３５】
構造式（ＸＸＩＩ）
【化１５】
【発明の効果】
【００３６】
本発明に係るＨＣＶ阻害剤は、Ｃ型肝炎の予防若しくは治療に有効な薬剤である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
〔ＨＣＶ阻害剤〕
本発明者らは、鋭意研究を日夜重ねた結果、植物及び微生物由来の純天然物を含む化合物ライブラリーから上述の一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）に示される化合物、その薬学上許容される塩及び溶媒和物のうち少なくとも何れか一つを含有するＨＣＶ阻害剤が、増殖環の全過程の何れかの過程を標的とするＨＣＶ阻害剤であることを見いだして本件発明に至った。
【００３８】
上述の一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）において、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アルールスルホニル基、ヘテロアリールスルホニル基、アラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、アラルキルオキシカルボニル基、アリルエーテル基、シクロエーテル基及び脂肪族ヘテロ環、における置換基には、低級アルキル基、低級アルキルカルボニル基、低級アルキルスルホニル基、低級アルコキシ基、水酸基、ハロゲン原子、ハロアルキル基、アミノ基、置換アミノ基、シアノ基、ニトロ基、カルボキシ基、カルバモイル基、硫酸基、亜硫酸基等が含まれる。
【００３９】
アリールは、フェニル、ナフチル又は多環芳香族炭化水素基（フェナンスリル等）等である。
【００４０】
ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、Ｓからなる群から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜６員の芳香環基（例えば、フラン、チオフェン、ピロール、オキサゾール、チアゾール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、トリアジン）である。
【００４１】
アリールカルボニルは、カルボニル基に上記のアリールが置換して形成される基である。
【００４２】
ヘテロアリールカルボニルは、カルボニル基に上記のヘテロアリールが置換して形成される基である。
【００４３】
アリールスルホニルは、スルホニル基に上記のアリールが置換して形成される基である。
【００４４】
ヘテロアリールスルホニルは、スルホニル基に上記ヘテロアリールが置換して形成される基である。
【００４５】
アラルキルは、後述する低級アルキル基に上記アリールが置換して形成される基であり、ベンジル、メチルベンジル、ナフチルメチル等である。
【００４６】
アラルキルオキシカルボニルは、カルボニル基に上述のアラルキルがＯ原子を介して結合して形成される基であり、例えばベンジルオキシカルボニル等である。
【００４７】
脂肪族ヘテロ環は、Ｎ、Ｏ、及びＳからなる群から選択されるヘテロ原子を１〜４個含む５〜６員の脂肪族環であり、ピロリジニル、チアゾリジニル、オキサゾリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピロリル、チアゾリル等が例示される。
【００４８】
低級アルキルは、炭素数１〜８個の直鎖状又は分岐状のアルキル基である。具体的には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ぺンチル、イソぺンチル、ネオぺンチル、tert−ぺンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル等が含まれる。
【００４９】
低級アルコキシは、炭素数１〜６個の直鎖状又は分岐状のアルコキシ基である。具体的にはメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペンチルオキシ、イソペンチルオキシ、ｎ−ヘキシルオキシ、イソヘキシルオキシ等が含まれる。
【００５０】
ハロゲンは、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素である。
【００５１】
低級アルキルカルボニルは、カルボニル基に上記の低級アルキルが置換して形成される基である。
【００５２】
低級アルキルスルホニルは、スルホニル基に上記の低級アルキルが置換して形成される基である。
【００５３】
薬学上許容される塩とは、以下に示すものがあげられる。塩基性付加塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩がある。また、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩がある。また、例えばアンモニウム塩がある。また、例えばトリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、ブロカイン塩等の脂肪族アミン塩がある。また例えばＮ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン等のアラルキルアミン塩がある。また例えばピリジン塩、ピコリン塩、キノリン塩、イソキノリン塩等の複素環芳香族アミン塩がある。また例えばテトラメチルアンモニウム塩、テトラエチルアモニウム塩、ベンジルトリメチルアンモニウム塩、ベンジルトリエチルアンモニウム塩、ベンジルトリブチルアンモニウム塩、メチルトリオクチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩等の第４級アンモニウム塩がある。また、アルギニン塩、リジン塩等の塩基性アミノ酸塩等がある。
【００５４】
酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、炭酸塩、炭酸水素塩、過塩素酸塩等の無機酸塩がある。また例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、フマール酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩等の有機酸塩がある。また例えばメタンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩等のスルホン酸塩がある。また例えば、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩等の酸性アミノ酸等がある。
【００５５】
本実施形態において、宿主細胞とは、ＨＣＶが感染しうる細胞をいい、例えば、肝細胞が挙げられる。
【００５６】
本実施形態に係るＨＣＶ阻害剤は、上記に示す一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）のうち少なくともいずれかの化合物を薬学上有効量含み、さらに薬学的に許容し得る担体を含んでなる医薬組成物も含まれる。
【００５７】
一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物、その薬学上許容される塩及び溶媒和物は、常法に従って、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤等の医薬の製剤技術分野において通常使用し得る既知の補助剤を用いて、経口投与、組織内投与、局所投与、経直腸的投与などに適した剤型に製剤化することができる。また、上記の補助剤のほか、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などの補助剤、および他の医薬品を含有させることもできる。
【００５８】
経口投与に適した剤型としては、例えば、錠剤、糖衣剤、丸剤、カプセル剤、ドロップ剤、舌下剤、末剤、散剤、飲用液剤、その他の剤型を挙げることができる。更に錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶錠、フィルムコーティング錠、二重錠、または多層錠とすることができる。錠剤の形態に調製するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。このような担体としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、グルコース、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸などの賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、グルコース液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、寒天末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖などの崩壊剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩類、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤；グリセリン、澱粉などの保湿剤；澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコールなどの潤沢剤などが例示できる。
【００５９】
丸剤の形態に調製するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。このような担体としては、例えば、グルコース、乳糖、カカオバター、澱粉、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤；ラミナラン寒天などの崩壊剤などが例示できる。これら経口投与用製剤は、固形、粉末または液剤の用量単位で投与することができる。
【００６０】
組織内投与に適した剤型としては、注射剤を挙げることができる。注射剤として調製する場合には、溶液、乳剤および懸濁剤などの形態とすることができる。これらは、殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ましい。これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に調製するに際しては、希釈剤としてこの分野で慣用されているものを使用することができる。このような希釈剤としては、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類などを用いることができる。また、等張性の溶液を調製するのに充分な量の食塩、グルコース、またはグリセリン、および通常の溶解補助剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、無痛化剤なども配合することができる。これら溶液、乳剤および懸濁剤は、一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物その薬学上許容される塩及び溶媒和物の一定量を、上述のような水性や油性の非毒性の希釈剤に溶解または懸濁し、更に必要に応じて等張化剤などを加え、滅菌することにより調製することができる。これら注射剤は、皮下、筋肉内または静脈内に投与することができる。
【００６１】
局所投与に適した剤型としては、例えば、局所用液剤、クリーム剤、粉剤、ペースト剤、ゲル剤、軟膏剤などの外用製剤を挙げることができる。これらは、一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物その薬学上許容される塩及び溶媒和物の一定量を、外用製剤の目的に適合する香料、着色料、充填剤、界面活性剤、保湿剤、皮膚軟化剤、ゲル化剤、担体、保存剤、安定剤などのうちの一種以上と組み合わせることにより調製することができる。
【００６２】
経直腸的投与に適した剤型としては、坐剤を挙げることができる。坐剤の形態に調製するに際しては、基材としてこの分野で従来公知のものを広く使用できる。このような基材としては、例えばパルミチン酸ミリスチルエステルなどの高級エステル類、高級アルコール類、ポリエチレングリコール、カカオ脂、ゼラチン、半合成グリセリド、これらの混合物などの低融点基材を挙げることができる。座剤は、一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物その薬学上許容される塩及び溶媒和物の一定量を上記のような基材に混入し、成型することにより調製することができる。
【００６３】
上記医薬組成物は、投与単位形態で投与することが好ましく、経口投与、組織内投与（皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与など）、局所投与（経皮投与など）又は経直腸的に投与することができる。上記医薬組成物は、これらの投与方法に適した剤型で投与されることは当然である。
【００６４】
一般式（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）の化合物その薬学上許容される塩及び溶媒和物を医薬として投与する場合、抗ウイルス剤としての用量は、年齢、体重などの患者の状態、投与経路、病気の性質と程度などを考慮した上で決定することができ、通常は、ヒト成人に対しては、有効成分量として、一日当たり、１〜２０００mgの範囲である。患者の状態などに応じて、上記範囲未満または上記範囲を超える用量を投与することもできる。多量に投与するときは、一日数回に分割して投与することが望ましい。
【００６５】
〔ＨＣＶ阻害剤の検出方法〕
本実施形態に係るＨＣＶ阻害剤は、まず、図１に示すように、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞、試験検体及び感染性ＨＣＶを接触させたのちにＨＣＶ濃度（即ち、ＨＣＶｃｏｒｅの数）を測定することで、ＨＣＶの複製又はＨＣＶタンパク質の翻訳などに影響を及ぼす物質を候補として選出する。
【００６６】
候補は、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞の生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（％））が一定値以上で、かつ、ＨＣＶｃｏｒｅの数（ｆｍｏｌ／ｍｌ）が一定値以下となる物質を選出する。
【００６７】
次に、選出された候補である化合物のうち、選択性（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ）が一定値以上の化合物を、新規であるＨＣＶ阻害剤として検出する。
ここで、選択性（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ）とは、ＣＣ５０／ＥＣ５０である。ＣＣ５０は、細胞が５０％傷害を受ける薬剤の濃度である。ＥＣ５０値は、ウイルスの増殖を５０％抑制する薬剤の濃度である。
【００６８】
以下、ＨＣＶ阻害剤の検出方法を詳述する。
まず、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞としてＨｕｈ７．５．１細胞を用いる。そして、Ｈｕｈ７．５．１細胞を、該細胞培養用培地に懸濁し、スクリーニング用容器に播種する。なお、使用する細胞は、継代数が第４３回目までのものが好ましい。
【００６９】
次に、試験検体としてのスクリーニング候補化合物を、細胞を含むスクリーニング用容器に加える。
【００７０】
次に、感染性ＨＣＶを播種し、スクリーニング候補化合物と感染性ＨＣＶを含む複製細胞を培養し、得られる培養物中の感染性ＨＣＶを検出する。
感染性ＨＣＶは、ＪＦＨ１株のｃＤＮＡを用いて、図２に示すような感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクターを導入した宿主細胞から作製することができる。
【００７１】
感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクターは、少なくともコアタンパク質と２つのエンベロープタンパク質（Ｅ１、Ｅ２）とp7タンパク質、ならびに複製に必要な非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５）を含み、該ＨＣＶを構成するゲノム、すなわち感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクターは、コアタンパク質をコードする配列の上流に、プロモーター配列を配置させてなる。
【００７２】
プロモーター配列は、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞においてＨＣＶが自律複製能を発揮しうるように配置されていれば良く、特に限定されないが、好適にはＰｏｌＩプロモーター配列が用いられる。
【００７３】
感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクターには、上記配列のほか、例えばＮＳタンパク質をコードする配列の下流に、ターミネーター配列を配置させていても良く、好適にはＰｏｌＩターミネーター配列が挙げられる。さらには、コアタンパク質をコードする配列の上流に、１つのＩＲＥＳ配列を含んでも良く、これにさらに１つの選択マーカー遺伝子やリポーター遺伝子を含んでいてもよい。
【００７４】
次に、感染性ＨＣＶを細胞中で培養するために、３〜１０日間、好ましくは４〜７日間、より好ましくは５〜６日間、３７±１℃で加温する。
【００７５】
次に、上記培養後、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞の生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（％））とＨＣＶｃｏｒｅの数（ｆｍｏｌ／ｍｌ）との関係を求める。
化合物は、ＨＣＶｃｏｒｅが２００００ｆｍｏｌ／ｍｌ以下で、かつ、生存率が６５％以上となるものを選出する。
【００７６】
次に、培養上清を用いて、培養後、上清中のＨＣＶコアタンパク質量をオーソＨＣＶ抗原ＥＬＩＳＡテストにより定量し、各化合物のＨＣＶ増殖阻害効果を評価する。該ＨＣＶ増殖阻害効果から、ＥＣ５０値を求める。
【００７７】
次に、上述のスクリーニング方法に加えて、候補化合物のＨＣＶの複製の促進又は抑制に及ぼす影響をより確実に確認するために、非特異作用を排除するために並行して、図１に示すように、細胞毒性試験を行う。
各化合物について、テトラゾリウム塩ＷＳＴ−８の生成したホルマザンの吸光度を直接測定するＷＳＴ法により、Ｈｕｈ７．５．１細胞に対する細胞毒性試験を行う。該細胞毒性試験結果から、ＣＣ５０値を求める。
【００７８】
そして、候補として選出された化合物の選択性を測定する。選択性は、薬剤の有効濃度に対する細胞毒性の比を表し、高いほど薬剤として優れている、あるいは薬剤として安全に使える濃度範囲が高いことを示す。
選択性が１０．０以上である化合物を、Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤として検出する。
【００７９】
〔他の実施形態〕
ＨＣＶ阻害剤に含有される化合物は、（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）に示される化合物以外にも、光学異性体が存在するものについては、Ｌ体、Ｄ体又はラセミ体が含まれる。また、（Ｉ）〜（ＶＩＩＩ）に示される化合物をさらに化学修飾して、別の化合物に誘導化することも可能である。
【実施例】
【００８０】
ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞としてＨｕｈ７．５．１細胞を用いた。そして、Ｈｕｈ７．５．１細胞を、該細胞培養用培地に懸濁し、９６穴のマイクロプレートなどのスクリーニング用容器に播種した。
【００８１】
次に、試験検体としてのスクリーニング候補化合物を、細胞を含むスクリーニング用容器に加えた。スクリーニング候補化合物は、植物及び微生物由来の純天然物の化合物ライブラリー（Ｅｎａｍｉｎｅ社（ナミキ商事）のＡｎａｌｙｔｉＣｏｎ Ｌｉｂｒａｒｙ）を用い、その品目は３２１５を用いた。
【００８２】
次に、感染性ＨＣＶを播種し、スクリーニング候補化合物と感染性ＨＣＶを含む複製細胞を培養し、得られる培養物中の感染性ＨＣＶを検出した。
感染性ＨＣＶは、国際公開ＷＯ０７／０３７４２８に記載の方法に従い、ＲＮＡ ＰｏｌＩプロモーター／ターミネーター系を利用したＪＦＨ１株（ｇｅｎｏｔｙｐｅ ２ａ)のｃＤＮＡを含む、図２に示す感染性ＨＣＶレプリコンを含むプラスミドベクター（ｐＨＨ／ＺｅｏＪＦＨ１）を構築し、このプラスミドベクターをヒト肝癌由来のＨｕｈ７．５．１細胞に導入した細胞株（Ｈｕｈ７.５．１／ＪＦＨ１ ｚｅｏ Ｒ細胞）を用いて作製した。
【００８３】
次に、感染性ＨＣＶを細胞中で培養するために、６日間、３７±１℃で加温した。
【００８４】
次に、上記培養後、ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞の生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（％））とＨＣＶcoreの数（ｆｍｏｌ／ｍｌ）との関係を求めた。
ヒト肝癌由来Ｈｕｈ７細胞の生存率（ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ（％））とＨＣＶｃｏｒｅの数（ｆｍｏｌ／ｍｌ）との関係は、図３に示すものであった。
ＨＣＶｃｏｒｅが２００００ｆｍｏｌ／ｍｌ以下で、かつ、生存率が６５％以上となる化合物は、図３において実線で囲む領域に三角印で示す。ここでは、候補となる化合物は５３個検出された。
【００８５】
次に、各化合物のＨＣＶ増殖阻害効果を評価した。評価は、図１に示すスクリーニングによりＨＣＶの濃度を測定し、ＨＣＶ増殖阻害効果から、ＥＣ５０値を求めた。
また、図１に示すＷＳＴ法により、Ｈｕｈ７．５．１細胞に対する細胞毒性試験を行った。そして該細胞毒性試験結果から、ＣＣ５０値を求めた。
【００８６】
候補として選出された化合物の選択性（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｄｅｘ）を測定し、ＣＣ５０／ＥＣ５０が１０以上の化合物は、下記構造式（ＩＸ）〜（ＸＸＩＩ）に示すように、１４個選出された。なお、これら構造式１〜１４に係る化合物は、図４において丸印で示す。
【００８７】
構造式（ＩＸ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【００８８】
構造式（ＩＸ）
【化１６】
【００８９】
構造式（ＩＸ）で示される化合物は、一般式（Ｉ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ａ）で、Ｒ２を式（ｂ）で、ＸをＮで、表されるものであった。
【００９０】
式（ａ）
【化１７】
【００９１】
式（ｂ）
【化１８】
【００９２】
構造式（ＩＸ）で示される化合物は、ＣＣ５０が９．８８μＭで、ＥＣ５０が０．５０μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１９．０５であった。
【００９３】
次に、構造式（Ｘ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【００９４】
構造式（Ｘ）
【化１９】
【００９５】
構造式（Ｘ）で示される化合物は、一般式（ＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｃ）で表されるものであった。
【００９６】
式（ｃ）
【化２０】
【００９７】
構造式（Ｘ）で示される化合物は、ＣＣ５０が少なくとも６０μＭ以上で、ＥＣ５０が５．８８μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は少なくとも１０．２以上であった。
【００９８】
次に、構造式（ＸＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【００９９】
構造式（ＸＩ）
【化２１】
【０１００】
構造式（ＸＩ）で示される化合物は、一般式（ＩＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｄ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、ＸはＯで、表されるものであった。
【０１０１】
式（ｄ）
【化２２】
【０１０２】
式（ｅ）
【化２３】
【０１０３】
構造式（ＸＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が少なくとも５０μＭ以上で、ＥＣ５０が１．４４μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は少なくとも３４．７以上であった。
【０１０４】
次に、構造式（ＸＩＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１０５】
構造式（ＸＩＩ）
【化２４】
【０１０６】
構造式（ＸＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＩＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｆ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、ＸはＯで、表されるものであった。
【０１０７】
式（ｆ）
【化２５】
【０１０８】
構造式（ＸＩＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１０．３μＭで、ＥＣ５０が０．３０μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は３４．３であった。
【０１０９】
構造式（ＸＩＩＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１１０】
構造式（ＸＩＩＩ）
【化２６】
【０１１１】
構造式（ＸＩＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＩＶ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｇ）で、Ｒ２を式（ｈ）で、表されるものであった。
【０１１２】
式（ｇ）
【化２７】
【０１１３】
式（ｈ）
【化２８】
【０１１４】
構造式（ＸＩＩＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１１．２μＭで、ＥＣ５０が０．１９μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は５８．９であった。
【０１１５】
構造式（ＸＩＶ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１１６】
構造式（ＸＩＶ）
【化２９】
【０１１７】
構造式（ＸＩＶ）で示される化合物は、一般式（Ｖ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｅ）で、Ｒ２を式（ｉ）で、Ｒ３を式（ｊ）で、表されるものであった。
【０１１８】
式（ｉ）
【化３０】
【０１１９】
式（ｊ）
【化３１】
【０１２０】
構造式（ＸＩＶ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１５．２μＭで、ＥＣ５０が０．４３μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は３５．３であった。
【０１２１】
構造式（ＸＶ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１２２】
構造式（ＸＶ）
【化３２】
【０１２３】
構造式（ＸＶ）で示される化合物は、一般式（Ｖ）で示される化合物において、−ＣＨ２Ｎ（Ｒ１）Ｒ２を式（ｋ）で、Ｒ３を式（ｌ）で、表されるものであった。
【０１２４】
式（ｋ）
【化３３】
【０１２５】
式（ｌ）
【化３４】
【０１２６】
構造式（ＸＶ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１３．０μＭで、ＥＣ５０が０．９１μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１４．２であった。
【０１２７】
構造式（ＸＶＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１２８】
構造式（ＸＶＩ）
【化３５】
【０１２９】
構造式（ＸＶＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｍ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、Ｒ３を式（ｎ）で、ＸはＮで、表されるものであった。
【０１３０】
式（ｍ）
【化３６】
【０１３１】
式（ｎ）
【化３７】
【０１３２】
構造式（ＸＶＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１３．７μＭで、ＥＣ５０が１．１５μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１１．９であった。
【０１３３】
構造式（ＸＶＩＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１３４】
構造式（ＸＶＩＩ）
【化３８】
【０１３５】
構造式（ＸＶＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（o）で、Ｒ２を式（ｅ）で、Ｒ３を式（ｐ）で、ＸはＮで、表されるものであった。
【０１３６】
式（o）
【化３９】
【０１３７】
式（ｐ）
【化４０】
【０１３８】
構造式（ＸＶＩI）で示される化合物は、ＣＣ５０が１３．８μＭで、ＥＣ５０が１．３５μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１０．２であった。
【０１３９】
構造式（ＸＶＩIＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１４０】
構造式（ＸＶＩIＩ）
【化４１】
【０１４１】
構造式（ＸＶIＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｍ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、Ｒ３を式（ｑ）で、ＸはＮで、表されるものであった。
【０１４２】
式（ｑ）
【化４２】
【０１４３】
構造式（ＸＶＩＩＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１２．７μＭで、ＥＣ５０が１．０７μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１１．８であった。
【０１４４】
構造式（ＸＩＸ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１４５】
構造式（ＸＩＸ）
【化４３】
【０１４６】
構造式（ＸＩＸ）で示される化合物は、一般式（ＶＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｒ）で、Ｒ２を式（ｅ）で、Ｒ３を式（ｓ）で、ＸはＣで、表されるものであった。
【０１４７】
式（ｒ）
【化４４】
【０１４８】
式（ｓ）
【化４５】
【０１４９】
構造式（ＸＩＸ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１３．０μＭで、ＥＣ５０が０．１９μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は６８．４であった。
【０１５０】
構造式（ＸＸ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１５１】
構造式（ＸＸ）
【化４６】
【０１５２】
構造式（ＸＸ）で示される化合物は、一般式（ＶＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｅ）で、Ｒ２を式（ｔ）で、Ｒ３を式（ｕ）で、表されるものであった。
【０１５３】
式（ｔ）
【化４７】
【０１５４】
式（ｕ）
【化４８】
【０１５５】
構造式（ＸＸ）で示される化合物は、ＣＣ５０が少なくとも５０μＭ以上で、ＥＣ５０が０．６１μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は少なくとも８１．９以上であった。
【０１５６】
構造式（ＸＸＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１５７】
構造式（ＸＸＩ）
【化４９】
【０１５８】
構造式（ＸＸＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩＩ）で示される化合物において、−Ｎ−Ｒ１（−Ｒ２）を式（ｖ）で、Ｒ３を式（ｗ）で、表されるものであった。
【０１５９】
式（ｖ）
【化５０】
【０１６０】
式（ｗ）
【化５１】
【０１６１】
構造式（ＸＸＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１４．１で、ＥＣ５０が１．２７μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１１．１であった。
【０１６２】
構造式（ＸＸＩＩ）に係る化合物は、下記に示すものであった。
【０１６３】
構造式（ＸＸＩＩ）
【化５２】
【０１６４】
構造式（ＸＸＩＩ）で示される化合物は、一般式（ＶＩＩＩ）で示される化合物において、Ｒ１を式（ｘ）で、Ｒ２をＨで、表されるものであった。
【０１６５】
式（ｘ）
【化５３】
【０１６６】
構造式（ＸＸＩＩ）で示される化合物は、ＣＣ５０が１５．２で、ＥＣ５０が０．８８μＭであり、ＣＣ５０／ＥＣ５０は１７．２であった。
【０１６７】
以下に、構造式（ＩＸ）〜（ＸＸＩＩ）についてのＣＣ５０、ＥＣ５０、ＣＣ５０／ＥＣ５０を表１に示す。
【０１６８】
【表１】
【０１６９】
ＥＣ５０が１．０μＭ以下のものは、構造式（ＩＸ）、構造式（ＸＩＩ）、構造式（ＸＩＩＩ）、構造式（ＸＩＶ）、構造式（ＸＶ）、構造式（ＸＩＸ）、構造式（ＸＸ）及び構造式（ＸＸＩＩ）であった。これらの化合物は高いＨＣＶ阻害効果を有すると考えられる。
【産業上の利用可能性】
【０１７０】
本発明は、Ｃ型肝炎の予防若しくは治療に有効な薬剤として利用できる。
【図面の簡単な説明】
【０１７１】
【図１】実施形態に係るアッセイ方法を示す図である。
【図２】実施形態に係るＨＣＶレプリコンゲノム及び発現プラスミドの構造を示す図である。
【図３】ＨＣＶコアの濃度と生存率との関係を示す図である。
【図４】ＨＣＶコアの濃度と生存率との関係において、選択性が高い化合物を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）乃至（ＶＩＩＩ）で示される化合物のうち少なくともいずれか一つを含有する、宿主細胞においてＣ型肝炎ウイルスの感染または産生を抑制しうるＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
一般式（Ｉ）
【化１】
一般式（ＩＩ）
【化２】
一般式（ＩＩＩ）
【化３】
一般式（ＩＶ）
【化４】
一般式（Ｖ）
【化５】
一般式（ＶＩ）
【化６】
一般式（ＶＩＩ）
【化７】
一般式（ＶＩＩＩ）
【化８】
（式中、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣであり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アルールスルホニル基、ヘテロアリールスルホニル基、アラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、アラルキルオキシカルボニル基、アリルエーテル基、シクロエーテル基、及び脂肪族ヘテロ環からなる群から選択される任意の基である。）
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造式（ＩＸ）で示される化合物である、請求項１に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＩＸ）
【化９】
【請求項３】
前記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＩ）で示される化合物である、請求項１又は２に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＩＩ）
【化１０】
【請求項４】
前記一般式（ＩＶ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＩＩ）で示される化合物である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＩＩＩ）
【化１１】
【請求項５】
前記一般式（Ｖ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＶ）で示される化合物である、請求項１乃至４のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＩＶ）
【化１２】
【請求項６】
前記一般式（ＶＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＸ）で示される化合物である、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＩＸ）
【化１３】
【請求項７】
前記一般式（ＶＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＸ）で示される化合物である、請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＸ）
【化１４】
【請求項８】
前記一般式（ＶＩＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＸＩＩ）で示される化合物である、請求項１乃至７のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＸＩＩ）
【化１５】
【請求項１】
以下の一般式（Ｉ）乃至（ＶＩＩＩ）で示される化合物のうち少なくともいずれか一つを含有する、宿主細胞においてＣ型肝炎ウイルスの感染または産生を抑制しうるＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
一般式（Ｉ）
【化１】
一般式（ＩＩ）
【化２】
一般式（ＩＩＩ）
【化３】
一般式（ＩＶ）
【化４】
一般式（Ｖ）
【化５】
一般式（ＶＩ）
【化６】
一般式（ＶＩＩ）
【化７】
一般式（ＶＩＩＩ）
【化８】
（式中、Ｘは、Ｏ、Ｓ、Ｎ、又はＣであり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、直鎖状若しくは分岐状の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素基、置換基を有していてもよいシクロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アルールスルホニル基、ヘテロアリールスルホニル基、アラルキル基、アルキルオキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基、アラルキルオキシカルボニル基、アリルエーテル基、シクロエーテル基、及び脂肪族ヘテロ環からなる群から選択される任意の基である。）
【請求項２】
前記一般式（Ｉ）で示される化合物が、以下の構造式（ＩＸ）で示される化合物である、請求項１に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＩＸ）
【化９】
【請求項３】
前記一般式（ＩＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＩ）で示される化合物である、請求項１又は２に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＩＩ）
【化１０】
【請求項４】
前記一般式（ＩＶ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＩＩ）で示される化合物である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＩＩＩ）
【化１１】
【請求項５】
前記一般式（Ｖ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＶ）で示される化合物である、請求項１乃至４のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＩＶ）
【化１２】
【請求項６】
前記一般式（ＶＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＩＸ）で示される化合物である、請求項１乃至５のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＩＸ）
【化１３】
【請求項７】
前記一般式（ＶＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＸ）で示される化合物である、請求項１乃至６のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＸ）
【化１４】
【請求項８】
前記一般式（ＶＩＩＩ）で示される化合物が、以下の構造式（ＸＸＩＩ）で示される化合物である、請求項１乃至７のいずれか１項に記載のＣ型肝炎ウイルス阻害剤。
構造式（ＸＸＩＩ）
【化１５】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公開番号】特開２００９−２６３２８３（Ｐ２００９−２６３２８３Ａ）
【公開日】平成２１年１１月１２日（２００９．１１．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−１１５８７３（Ｐ２００８−１１５８７３）
【出願日】平成２０年４月２５日（２００８．４．２５）
【出願人】（０００００３１５９）東レ株式会社 (7,677)
【出願人】（５９１２２２２４５）国立感染症研究所長 (48)
【出願人】（５９１０６３３９４）財団法人 東京都医学研究機構 (69)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１１月１２日（２００９．１１．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月２５日（２００８．４．２５）
【出願人】（０００００３１５９）東レ株式会社 (7,677)
【出願人】（５９１２２２２４５）国立感染症研究所長 (48)
【出願人】（５９１０６３３９４）財団法人 東京都医学研究機構 (69)
【Ｆターム（参考）】
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