ＣＰＴ活性亢進剤及び飲食物
【課題】ＣＰＴ活性を亢進して、脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝を改善し、血中中性脂肪量を低減し、ひいては抗疲労作用、抗ストレス作用、身体疲労軽減作用及び消費熱量亢進作用を有する組成物を提供すること。
【解決手段】ウコン含有成分を有効成分とする組成物を提供することにより、ＣＰＴ活性を亢進させ、これにより副作用もなく脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝を改善し、血中中性脂肪量を低減する。該組成物は、抗疲労作用、抗ストレス作用及び身体疲労軽減作用も有する。また、ウコン含有成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数とを組み合わせることにより、これらの作用が増幅し、さらに消費熱量亢進作用も有する。
【解決手段】ウコン含有成分を有効成分とする組成物を提供することにより、ＣＰＴ活性を亢進させ、これにより副作用もなく脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝を改善し、血中中性脂肪量を低減する。該組成物は、抗疲労作用、抗ストレス作用及び身体疲労軽減作用も有する。また、ウコン含有成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数とを組み合わせることにより、これらの作用が増幅し、さらに消費熱量亢進作用も有する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＣＰＴ活性亢進用組成物、脂肪肝改善用組成物、血中中性脂肪量低減用組成物、抗疲労用組成物、抗ストレス用組成物、身体疲労軽減用組成物、消費熱量亢進用組成物及びそれらの組成物を含有する医薬品及び飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化社会に伴い、健康に対する人々の関心は次第に高まってきている。しかし、西洋化した現代の食事はトリグリセリドやコレステロールに代表される脂質類の血中及び臓器中での含有濃度を上昇させ、動脈硬化や脂肪肝等の生活習慣病を誘発させる原因となる。現在「メタボリックシンドローム」という言葉が注目されてきているように、代謝の低下は様々な病気の源になるという意識が広がってきている。脂質代謝のメカニズムに関しては、カルニチンが関与した系が知られている。
【０００３】
１．カルニチン
カルニチンはミトコンドリア内の基質、特に脂質代謝において重要な役割を担っている成分である。また、カルニチンは摂食による摂取の他、生体内でアミノ酸から生合成されるが、加齢により生成能が低下することが知られている。そのため、カルニチンに慢性疲労や皮質代謝改善効果を期待した薬品、食品が多く上市されている（特許文献１、非特許文献１）。
【０００４】
２．カルニチンが関与する脂質代謝経路について
カルニチンが関与する脂質代謝経路を詳述する。脂質代謝経路は大きく分けて２段階に分類される。第１段階は、脂肪酸をミトコンドリア内へ運び込む段階、第２段階はミトコンドリア内で脂肪酸を分解する段階である。第１段階は、次に説明するとおりである。まず細胞質に取り込まれた長鎖脂肪酸は、アシルＣｏＡシンターゼ（ＡＣＳ）によりコエンザイムＡ（ＣｏＡ）と結合し、アシル−ＣｏＡとなる。次いで、ミトコンドリア外膜に存在するカルニチンパルミトイル転移酵素１型（ＣＰＴ−Ｉ）の触媒によりアシル-ＣｏＡのアシル基がカルニチンに移行してアシルカルニチンが生成し、この形でミトコンドリア内膜を通過してミトコンドリアのマトリックスに移行する。そこでカルニチンパルミトイル転移酵素２型（ＣＰＴ−ＩＩ）が触媒することによりアシルカルニチンのアシル基が再度ＣｏＡに受け渡され、アシル−ＣｏＡとカルニチンに分離され、第１段階が完了する。第２段階は、脂肪酸を分解する段階である。これは、アシル−ＣｏＡがβ酸化酵素の触媒によりβ酸化を受けることにより脂肪酸がエネルギーとして用いられる（非特許文献２）。ウコン含有成分として知られるクルクミンが第２段階のβ酸化を促進することは知られている（特許文献２）。
【０００５】
３．カルニチンパルミトイル転移酵素
カルニチンパルミトイル転移酵素（ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−ＩＩ）は、第１段階で作用する酵素である。ＣＰＴ−Ｉは、脂肪酸から生成されたアシルＣｏ−Ａとカルニチンを結合させ、アシルカルニチンとする。脂肪酸はアシルカルニチンの形でミトコンドリアの内膜を通過し、ミトコンドリア内へ移動する。ＣＰＴ−ＩＩは、ミトコンドリア内膜を通過してきたアシルカルニチンを、カルニチンとアシルＣｏ−Ａに分離する。
ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−ＩＩは肝臓の他、筋肉、脂肪組織等にも分布していることが知られており、これらの機能亢進は、この酵素が分布する各器官の基質代謝を亢進させ、疲労の軽減や蓄積脂肪の消費の促進等につながる。ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−ＩＩが効率的に機能しなければ、脂肪酸はミトコンドリア内に取り込まれて、β酸化される前段階の状態にならないため、β酸化酵素がいくら活性化されたとしても脂肪酸の分解を促進できない。ヒトの場合、急激な運動の後にはＣＰＴ活性が低下することが報告されている（非特許文献３）。特にＣＰＴ−ＩＩの機能が欠損すると、筋緊張低下、呼吸障害、不整脈、心肥大、発作性ミオグロビン尿症等の疾病が引き起こされることが知られている。
【０００６】
以上の脂質代謝経路を亢進させるにあたっては、カルニチンを医薬品やサプリメントとして外部から補給したり、クルクミン等の有効成分を用いて第２段階のβ酸化を促進する方法は従来から行われているものの、生体内での第１段階のＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−ＩＩ活性を亢進させて、ミトコンドリアに取り込まれる脂肪酸を増加させることにより脂質代謝経路を亢進させる方法はこれまで行われていなかった。
【０００７】
【特許文献１】特開平７−１９６４８５号公報
【特許文献２】特開平１１−２４６３９９号公報
【非特許文献１】王堂哲、食品工業、４６（２２）、２６（２００３）
【非特許文献２】C.J.Rebouche, J.Appl.Nutr., ４０，９９（１９８８）
【非特許文献３】Lennon et al., J.Appl.Physiol., ５５，４８９（１９８３）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本発明は、ＣＰＴ活性、特にＣＰＴ−ＩＩ活性を亢進する組成物を提供することを目的とする。詳細には、ＣＰＴ活性を亢進させることにより、脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝、とりわけアルコール性脂肪肝を改善し、血中中性脂肪量を低減すること、また、抗疲労作用、抗ストレス作用、身体疲労軽減作用及び消費熱量亢進作用を有する組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは上記問題を解決すべく鋭意研究を行った結果、ウコン中の成分がＣＰＴ活性亢進作用、脂肪肝、とりわけアルコール性脂肪肝改善作用、血中中性脂肪低減作用、更に抗疲労作用、抗ストレス作用及び身体疲労軽減作用を有することを見出し、本発明を完成した。また、本発明者らは、ウコン中の成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数とを組み合わせることにより、これらの作用が増幅し、さらに消費熱量亢進作用を有することを見出した。
より具体的には、本発明は以下のとおりである。
【００１０】
１．ウコン含有成分を有効成分とするＣＰＴ活性亢進用組成物。
２．ウコン含有成分を有効成分とする脂肪肝改善用組成物。
３．前記脂肪肝がアルコール性脂肪肝である２に記載の脂肪肝改善用組成物。
４．ウコン含有成分を有効成分とする血中中性脂肪量低減用組成物。
５．ウコン含有成分を有効成分とする抗疲労用組成物。
６．ウコン含有成分を有効成分とする抗ストレス用組成物。
７．ウコン含有成分を有効成分とする身体疲労軽減用組成物。
８．前記ウコン含有成分が非アセトン溶媒抽出物である１〜７のいずれかに記載の組成物。
９．さらにカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数を含む１〜８のいずれかに記載の組成物。
１０．ウコン含有成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数とを含む消費熱量亢進用組成物。
１１．１〜１０のいずれかに記載の組成物を含む飲食物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の組成物は、ＣＰＴ活性、特にＣＰＴ−ＩＩを亢進させ、これにより副作用もなく脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝、とりわけアルコール性脂肪肝を改善し、血中中性脂肪量を低減することができる。体力維持用組成物、抗疲労用組成物、抗ストレス用組成物及び消費熱量亢進用組成物としても利用可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
１．原料
本発明の組成物の原料はショウガ科ウコン属の多年生植物で、特に通常ターメリックやアキウコンとも呼ばれるウコン（学名：Curcuma longa L.）が好ましい。使用可能な植物部位としては根茎、葉部、茎部、花部、実等がある。根茎を使用することが好ましい。本発明の組成物に用いるウコンの形態は、ＣＰＴ活性亢進作用、脂肪肝（とりわけアルコール性脂肪肝）改善作用、血中中性脂肪低減作用、更に抗疲労作用、抗ストレス作用及び身体疲労軽減作用を有するウコン含有成分を含有するものであれば、生のまま使用しても、乾燥したものであってもよく、これらを組み合わせて使用することも可能であり、抽出物の形態でもよいが、添加・加工の簡便性及び摂取等の観点から、乾燥したものを使用することが好ましい。乾燥方法は天日乾燥等の一般的な手法が用いられるが、食品素材用、あるいは医薬品・医薬部外品原料用等に流通されている乾燥状のウコン（塊、粉末等）をそのまま、あるいは適宜加工の上用いるのが最も簡便である。
【００１３】
２．ウコン含有成分
本発明の組成物に用いるウコン含有成分とは、１以上のＣＰＴ活性、特にＣＰＴ−ＩＩ活性を亢進する成分（クルクミンを除く）を意味するものである。このようなＣＰＴ活性を有するウコン含有成分の好ましい例は、非アセトン溶媒抽出物であるが、これは物性を意味し、当該活性を有する限りにおいて加工工程を限定するものではなく、また形態を限定するものでもない。非アセトン抽出物が好ましい理由については以下に説明する。これらの配分量は、特に飲食物に用いる場合においては、呈味性、嗜好性により適宜考慮されるべきものである。
【００１４】
先述の技術文献２には、ウコン粉末をアセトンで抽出したクルクミン含有精製物を１％添加した飼料をマウスに投与して肝臓中のトリグリセリド蓄積量を約４０％程度抑制したデータが記載されている。一方、本発明のウコン含有成分を有効成分とする組成物は、ウコン粉末を５％添加した飼料をマウスに投与したところ、クルクミンを０．２％未満にしか含有していないのにも関わらず、肝臓中のトリグリセリド蓄積量を約７４％も低減させている（実施例、表５参照）。また、同重量のウコン末とクルクミンを用い、身体疲労軽減効果を比較したところ、クルクミンとしての投与量が少ないにも拘わらず、ウコン末を用いた方が有効であることが示されている（実施例３参照）。したがって、ウコン粉末はＣＰＴ活性亢進作用、脂肪肝（とりわけアルコール性脂肪肝）改善作用、血中中性脂肪低減作用、更に抗疲労作用、抗ストレス作用及び身体疲労軽減作用を有する成分を含有しており、該成分はアセトンにより抽出されない、クルクミンとは別個の成分であることが示唆される。それ故、本発明におけるウコン含有成分は、非アセトン溶媒抽出物である。そのような成分を含有させることが可能な浸出媒体としては、水性又は親水性（水に可溶）の溶媒、つまり、水又は親水性溶剤を含んだ溶媒を用いることができる。これらを単独又は混合溶媒の形態で使用することができ、例えば、水と親水性溶剤との混合溶媒や複数種の親水性溶剤の混合物であってもよい。親水性溶剤としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール等のモノアルコール類；エチレングリコール、グリセリン等のジオール及びポリオール類；アセトニトリル等の低級脂肪族ニトリル；ＤＭＦ；ＤＭＳＯ等、各種極性有機溶剤が挙げられるが、摂食に用いる旨を考慮する場合は食品衛生法等、各用途に定められた範囲内での溶剤を用いる。本明細書においてこれらを併せて「水性溶媒」と表すこととする。水性溶媒は、好ましくは水である。水性溶媒の浸出温度を上げることによって浸出効率を上げることができ、例えば、水を用いる場合、約５０〜１００℃、好ましくは８０〜１００℃の熱水によって良好に浸出できる。浸出時間は浸出温度とウコンの形態を考慮しつつ適した時間を選択する。例えば９０℃〜１００℃の場合は１〜７２０分、好ましくは５〜１８０分である。浸出時間が短すぎると有効成分の抽出が不十分となり、長すぎると不純物の溶出が多くなり、また加工及び呈味に影響を与える。これらの抽出時間は目安であり、最適な時間は、目的成分の抽出効率と作業効率を考慮して適宜選択されるべきである。また、複数の異なる溶媒系、もしくは同じ溶媒系を用いて繰り返し浸出操作を行ってもよく、例えば、水又は熱水で浸出した後の残渣を更にアルコール等の親水性有機溶剤、あるいは水性溶媒で浸出し、両浸出物を併せて利用することができる。使用する浸出溶媒の割合がウコンの乾燥重量に対して５〜２００倍程度となるようにすることによって好適に抽出することができる。
【００１５】
３．カルニチンとの組み合わせ
本発明の組成物に、カルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数をさらに添加することが好ましい。カルニチンを添加することによりアシルＣｏＡとカルニチンとの反応をさらに亢進し、ＣＰＴ活性亢進作用、脂肪肝（とりわけアルコール性脂肪肝）改善作用、血中中性脂肪低減作用、更に抗疲労作用、抗ストレス作用、身体疲労軽減作用を増強することができる。また、ウコン含有成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数を組み合わせることにより、消費熱量亢進作用という新たな作用を得ることができる。カルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数の添加量は、ウコン及び／またはウコン抽出物の重量に基づいて、０．０１〜１００００重量％、好ましくはサプリメントとして摂取する場合に推奨されている量を鑑みて０．１〜１０００重量％、更に好ましくは１〜３００重量％、最も好ましくは３０〜５０重量％の割合で添加するとよい。
【００１６】
以上の本発明の組成物は、所望の作用の程度等の条件、投与方法ならびに嗜好性、呈味性に応じて適宜選択が可能である。また、これらの組成物を含有する抽出物及び画分、あるいはウコン粉末、ピューレ等、多方面にわたって様々な摂取形態で応用することが可能である。多くの場合、他の結合剤や、飲食可能な飲食用素材と組み合わせて所謂組成物として使用することができる。例えば、医薬品とする場合は、適当な賦形剤、崩壊剤、結合剤と組み合わせて経口固形剤として、あるいはイオン交換水又は生理的食塩水と組み合わせて経口液剤又は注射剤として使用できる。また、このような医薬品に限らず、緑茶、紅茶、烏龍茶、雑穀茶、野菜汁、果汁、乳等に配合して飲料として、あるいはビスケット、パン、飴等に配合して食品として日常的に摂取可能な形態で提供することも可能である。また、上記医薬品に準じて錠剤とすることにより所謂サプリメントとしても利用可能である。
【００１７】
以下に、これら摂取形態について具体的に説明する。
本発明を医薬品として用いる場合は、例えば散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、錠剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等の経口投与剤が挙げられる。この経口投与剤は、上記油脂組成物の他、経口投与剤の形態に応じて一般に用いられる賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、アルコール類、水、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料等を添加して製造することができる。
【００１８】
本発明を飲食物として用いる場合は、例えば特定の機能を発揮して健康増進を図る健康食品や飲料としての使用が挙げられる。具体的には、かかる化合物を含有したカプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤等からなる所謂サプリメント、パン、ケーキ、クッキー等のベーカリー食品類；ソース類、スープ類、ドレッシング類、マヨネーズ類等の調味料：牛乳、ヨーグルト、クリーム類等の乳製品；チョコレート、キャンデー等の菓子；あるいは緑茶、紅茶、烏龍茶、麦茶、雑穀茶、果汁、野菜、乳飲料、清涼飲料、及び炭酸飲料等の飲料等が挙げられる。なお、ここで、抽出物は抽出液であってもよい。
【００１９】
本発明の組成物を含有する浸出液、抽出物及び画分あるいはウコン粉末等は、果汁・果実飲料、コーヒー飲料、烏龍茶飲料、緑茶飲料、紅茶飲料、麦茶飲料、野菜飲料、雑穀茶飲料等の他の飲料と組み合わせることで、幅広い範囲の飲料を提供することが可能である。例えばソフトドリンクである炭酸飲料、果実エキス入り飲料、野菜エキス入りジュースや、ニアウオーター、スポーツ飲料、ダイエット飲料等に適宜添加することもできる。また消費者の嗜好にあわせて茶葉の微粉末のような不溶性化合物をあえて懸濁させた形態も使用できる。さらに、該成分の摂取について携帯性、保存性を考慮に入れた場合、該当成分を含有させた粉末飲料や、該当成分を利用者自らの操作による浸出により飲用が可能となるような食品とすることもできる。
【００２０】
添加時の安定性等を考慮すると、飲料において特にウコンをそのままの形態で利用する場合は、沈殿等の恐れがある。したがって、飲用時の外観が嗜好性等に与える影響を考慮すると、沈殿を防ぐためにある程度の粘稠性を有する組成のものを用いることが望ましい。粘稠性を有する組成のものとしては、果実、野菜等のピューレ等を用いる方法や増粘多糖類、糊料を添加する等の方法が挙げられる。
【００２１】
飲料には、処方上添加して良い成分として、酸化防止剤、香料、各種エステル類、有機酸類、有機酸塩類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の添加剤を単独、又は併用して配合しても良い。
【００２２】
飲料を容器詰飲料にする場合、使用される容器は、一般の飲料と同様にポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の形態で提供することができる。ここでいう容器詰飲料とは希釈せずに飲用できるものをいう。
【００２３】
また、容器詰飲料は、例えば、金属缶のように容器内を完全に液で満たすか、脱気、窒素置換又はその両方を行った後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で製造される。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器等で高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。更に、酸性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻す等の操作も可能である。
【００２４】
本発明の組成物を、医薬として使用する場合の投与量は、精製度、およびどの段階の抽出物及び／または画分を用いるか、または、年齢、体重、性別、症状、治療効果、投与方法、処理時間などの種々の要因によって異なるが、経口投与の場合は通常大人１人１日当たり植物原体重量（乾燥重量）として０．０５〜１５ｇ、特に０．１〜１０ｇの範囲を１日１回〜数回に分けて投与することが好ましい。
【００２５】
本発明の組成物を飲食物として摂取する場合の摂取量も医薬として使用する場合に準ずるが、飲食物の場合は医薬品とは異なり、保健機能の維持という目的、並びに、呈味性、嗜好性を考慮した場合においては、上記の範囲に限定されるものではない。
【００２６】
以下に、本発明の実施の態様について実施例をあげて説明するが、本発明は以下の例に限定されるものではない。
【実施例】
【００２７】
（実施例１）
ウコン（Ｃ． ｌｏｎｇａ）を約８０メッシュに粉砕した市販ウコン末（日本粉末薬品社製）を用いた。
クルクミノイド（クルクミン、およびその誘導体）量は、内部標準法により測定した。分析条件は以下のとおりである。なお、測定の結果、クルクミン１.８３重量％、デメトキシクルクミン０.６７重量％、ビスデメトキシクルクミン０.８１重量％であった。
【００２８】
＜分析条件＞
カラム：Nucleosil Ｃ１８ φ４．６×１５０ｍｍ
移動層：アセトニトリル：０．１％リン酸水溶液＝４５：５５
注入量：１０μＬ
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
カラム温度：４０℃
＜内部標準溶液＞
４−ヒドロキシ安息香酸ｎ−ヘキシル（東京化成社製）２０ｍｇをメタノール（和光純薬社製）に溶解し、５０ｍＬに定容した。
＜標準溶液＞
各分析対象のクルクミノイドの標準品（長良サイエンス社製）５ｍｇを秤量してメタノール（和光純薬社製）に溶解し、内部標準溶液５ｍＬを添加し、メタノールで全体量５０ｍＬに定容した。
＜検量線作成＞
標準溶液を高速液体クロマトグラフに１０μＬ注入し、得られた内部標準及び分析対象のピーク高さ比と濃度から、１点検量線を作成した。
＜試料の調整＞
試料２００ｍｇを採取し、内部標準溶液５ｍＬを添加して、メタノールで５０ｍＬに定容し、３０分静置した。０．４５μｍメンブレンフィルターで濾過後、高速液体クロマトグラフに１０μＬ注入し、定量した。検量線を越えた値を示した場合は希釈倍率を上げ、範囲内に入るようにして再分析を行った。
【００２９】
７週齢のＣ５７ＢＫ／６Ｊ系統マウス（ｎ＝６）を１週間の予備飼育の後、対照群（高脂肪食群；脂肪分３０％）と発明群（ウコン粉末添加飼料群；ウコン粉末５．０％＋脂肪分３０％）の各群に分け、８週間個別飼育した。試験期間終了後に全採血により屠殺し、ＣＰＴ−ＩＩ活性、体重変化、食餌摂取量、脂肪酸吸収率、組織重量、血中及び肝臓の総コレステロール量、トリグリセリド量、ＧＯＴ活性、ＧＰＴ活性、リン脂質量を測定した。
【００３０】
ＣＰＴ（ＣＰＴ−ＩＩ）活性測定方法
肝臓のホモジネートを用いてＣＰＴ（ＣＰＴ−ＩＩ）活性を測定した。測定方法は、独立行政法人 食品総合研究所のウェブページ「食品機能性マニュアル」の「ＶＩ−３ 分光法による肝臓の代謝系酵素活性の測定」に記載された「カルニチンパルミトイル転移酵素活性の測定」に記された方法に従って行った(http://www.nfri.affrc.go.jp/yakudachi/manual/6-3ide.html参照)。
測定用のキュウベットに測定用緩衝液（０．５ｍＬ）、酵素源（０．００５〜０．０１ｍＬ）を入れ、水を加えて最終容量を０．９７ｍＬとし、混合後３０℃に保温した恒温セルホルダーに装着した。記録計のフルスケールをＯＤ０．１〜０．２として４１２ｎｍ波長でＯＤ変化をチェースした。ＯＤ上昇が認められなくなった時点でパルミトイル−ＣｏＡ溶液０．０２ｍＬを添加した。その後アシル−ＣｏＡ水解酵素反応により、再びＯＤが上昇する（ブランク反応）ので、このブランク反応の直線性を確認した後、カルニチン溶液０．０１ｍＬを添加して反応を開始させた。この反応の直線部分からブランク反応を差し引きＣＰＴ−ＩＩ活性とした。分子吸光係数は１３６００Ｍ−１ｃｍ−１である。
＜反応液の最終組成:１ｍＬ＞
５８ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）
１.２５ｍＭ ＥＤＴＡ
０.２５ｍＭ ジチオニトロ安息香酸（ＤＴＮＢ）
０.０４ｍＭ パルミトイル−ＣｏＡ
０.１％ トリトンＸ−１００
１.２５ｍＭ Ｌ−カルニチン
＜試薬＞
１．緩衝液：１１６ｍＭトリス−塩酸緩衝液、２．５ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．２％トリトンＸ−１００（ｐＨ８．０）
２．１．２５ｍＭ Ｌ−カルニチン
３．２ｍＭ パルミトイル−ＣｏＡ
４．測定用緩衝液：測定当日に５μｍｏｌのＤＴＮＢを緩衝液（１）１０ｍＬに溶解する。
【００３１】
食餌摂取量（ｋｃａｌ／ｗｅｅｋ）は、マウスが実際に１週間に摂取した餌の量と、餌のカロリーから算出した。また、肝重量及び脂肪組織重量は、マウス解剖時に切除した各組織の測定重量を、マウスの体重あたりに換算して算出した。
【００３２】
ＧＯＴ活性及びＧＰＴを、市販測定キット（トランスアミナーゼＣIIテストキット、和光純薬社製）を用いて測定した。血中総コレステロール量、トリグリセリド量及びリン脂質量もまた、それぞれ市販の測定キット（和光純薬社製）を用いて測定した（参考文献：Ikeda
et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 69, 1049(2005).参照）。また、脂肪酸吸収率を、摂取脂質量と、糞中の脂質重量の比により算出した。糞中の脂質重量に関しては、糞より有機溶媒にて抽出した後滴定法にて測定した（参考文献：鈴木他,
日本食品科学工学会誌、54, 167(2005).参照）。また、肝臓中の脂質等を、抽出後の比色法により測定した（参考文献：Folsh et al., J.
Biol. Chem., 226. 497 (1957). 及びIkeda et al., J. Nutr., 124, 1898 (1994). 参照）。
【００３３】
結果を表１に示す。また、飼育前後の体重変化・摂取カロリー、血中ＴＧ、血中コレステロール、肝重量、肝脂肪、脂肪組織重量も測定した。結果を表２〜５に示す。
なお、全ての結果数値は平均値±標準偏差（ｎ＝６）で表す。＊印は対照群と比較してＰ＜０．０５で有意差が得られたことを示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】
【表２】
【００３６】
【表３】
【００３７】
【表４】
【００３８】
【表５】
【００３９】
試験の結果、カルニチンパルミトイル転移酵素（ＣＰＴ）活性は、発明群が有意に高かった（表１）。摂食量及び脂肪酸吸収率は、対照群と発明群との間に差が見られなかったが、試験終了時の体重及び体重増加量は、対照群よりも発明群が有意に低かった（表２）。体重あたりの肝重量は、発明群において増加が見られたが、脂肪組織重量は対照群よりも発明群が有意に低かった（表３）。血中及び肝臓内トリグリセリド量は対照群よりも発明群が有意に低かった（表４及び表５）。特許文献２（特開平１１−２４６３９９）に記載される試験１によれば、試験系に多少の違いはあるものの、肝臓中のトリグリセリド量が、対照群では３９．９であるのに対し、クルクミン１％添加群では１８．１と約４０％の低下であったのに比べ、本発明は表５から明らかなとおり、飼料中のクルクミン量が０．１６５％であるのにも拘わらず約７４％も低下していた。なお、特許文献２において定義されている「クルクミン」は、「クルクミンならびにその誘導体」のことであり、本発明にて分析したクルクミノイドと同義であると判断される。試験の結果より、アセトンにより溶出せず、クルクミンではない、ＣＰＴ活性を亢進する能力が高いウコン含有成分の関与を示唆するものである。
総コレステロール及び肝臓内リン脂質に関しては、発明群において若干の低下が見られたものの有意な差は見られなかった（表４及び５）。
【００４０】
以上の結果より、発明群は摂取エネルギー及び吸収脂質量に関して対照群との間に有意な差が見られない一方で、血液及び肝臓での中性脂肪量の蓄積及び増加が抑制されていることが分かった。発明群はＣＰＴ活性を亢進することにより、カルニチンの利用効率が増進し、基質の代謝を促進したためと考えられる。また、ウコンの機能性成分としてはクルクミンおよびクルクミノイドが知られているが、ウコン粉末添加飼料群のクルクミノイド含量は０．１６５％と極少量であるから、クルクミン以外の機能性成分（ウコン含有成分）が関与している可能性が示唆される。
【００４１】
（実施例２）
ウコン末（日本粉末薬品製）を１６０℃で１５分間加熱して呈味改善ウコン末とした（特願２００５−３１１５２３）。ニンジン、リンゴ及びバナナを含む野菜果実混合飲料１２５ｍＬに、前記ウコン末を０．５８重量％（飲料１２５ｍＬあたり７５０ｍｇ）になるように混和させた飲料を調製した。前述の方法により本ウコン末１ｇに含まれるクルクミノイド量を測定した結果、クルクミン１０．７３ｍｇ、デメトキシクルクミン４．４４ｍｇ、ビスデメトキシクルクミン５．２１ｍｇであった。
【００４２】
前記飲料を２２歳〜６２歳成人ボランティア１６名（男性８名、女性８名）に１日２本、９０日間摂取させた。９０日後に、目覚め、だるさ、欠伸の数、頭痛及び疲れの残り感について自覚症状の改善が認められた項目をチェックする形でアンケートを実施した。被験者１６名中１２名の有効回答が得られた。この結果を表６に示す。
【００４３】
【表６】
【００４４】
だるさ、疲れ残り等の疲労や倦怠感に関する項目における改善回答は４割以上にのぼり、目覚めにおいても約３割の被験者で改善が見られ、本発明品は抗疲労、抗ストレス効果あることが分かった。また、ウコンの機能性成分としてはクルクミンが知られているが、本試験におけるクルクミン含量は飲料１回摂取分あたり１５．３ｍｇ（クルクミノイドとして）と少量であるから、クルクミン以外の機能性成分（ウコン含有成分）が関与している可能性が示唆される。
【００４５】
（実施例３）
ウコンの身体疲労軽減作用を、強制歩行による疲労負荷実験により検討した。
実験には７週齢のマウスＣＤＦ１系統（オス・ｎ＝１５）を用い、クロスオーバー試験とし、１週間のトレーニング後、本試験に用いた。
投与試料はウコン末（日本粉末薬品社製、実施例１にて用いたものと同等品）およびクルクミン（試薬、キシダ化学社製）を０．５％メチルセルロース溶液に混濁させ、８０ｍｇ／ｍｇ／ｋｇ
ｂ．ｗ．となるように強制経口投与（１０ｍＬ／ｋｇ）させた。投与後、直ちにラット・マウス用マルチファンクショナル回転ゲージＭＫ７７０（室町機械社製）を用いて、１分間に１５回転する速度(以下１５ｒｐｍと記す)で１８０分間強制歩行させた。その後、回転式運動量測定器ＳＮ４５０（マウス用）Ａ型カウンター付（シナノ製作所製）を用いて１８０分間の自発運動量を１時間おきに測定した。試験全体の流れを図１に示す。
【００４６】
結果を図２に示す。試験の結果、クルクミンを８０ｍｇ／ｋｇ
ｂ．ｗ．で投与した時よりも、同用量のウコン末を投与したときの方が、自発運動量が増加した（エラーバーは（平均±Ｓ．Ｄ．）を示す。１時間の時点では１０％の危険率で有意差が認められた（paired
t-test））。本ウコン末中にはクルクミノイドは約３．３％含まれることから、実投与量としては２．６ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．となる。ウコン末投与群におけるクルクミンの投与量は、クルクミン投与群と比して大変少ないにもかかわらず、ウコン末投与群はクルクミン投与群よりも運動量が増加する結果が得られた。従って、本試験における、ウコン末による疲労改善はクルクミン以外の機能性成分（ウコン含有成分）が関与している可能性が示唆される。
【００４７】
（実施例４）
９週齢の雄性ＳＤラットを１週間の予備飼育の後、対照群１（高脂肪食群；ラード２５％）、発明群１（高脂肪食＋ウコン２．５％）、対照群２（高脂肪食＋カルニチン１．０％）と発明群２（高脂肪食＋ウコン２．５％＋カルニチン１．０％）の各群に分け（ｎ＝８）２７日間、個別飼育した。なお餌の組成を表７に示す。餌の摂取は暗期のみに限定し、毎日の摂餌量および体重を測定した。試験期間終了日、すなわち２７日目の１８時より呼気ガス分析を行い、測定後２８日目の朝より３〜４時間絶食させた後に屠殺し解剖した。各ラットの肝臓を摘出し、総脂質重量ならびにトリグリセリド量の分析を行った（参考文献：日本栄養食糧学会誌、第５９巻、第２号、１０７〜１１３頁、２００６年）。
【００４８】
【表７】
【００４９】
餌に用いたビタミン並びにミネラル混合は、其々オリエンタル酵母製のものを用いた。またカルニチンは、ロンザ社製のＬ−カルニチンＬ−酒石酸塩６８．６％含有粉末を用いた。呼気ガス分析方法は、代謝計測システムＭＫ−５０００ＲＱ／０２（室町機械製）を用い、マニュアルに則り行った。
【００５０】
飼育期間のカロリーおよび被験物質の総摂取量を表８に示す。総摂取カロリーに有意な差は見られなかった。
【００５１】
【表８】
【００５２】
また、ラットに前述のノーマル食、高脂肪食、ウコン食、カルニチン食、カルニチン＋ウコン食を投与し飼育した期間中の体重変化を図３に示す。体重変化に有意な差は見られなかった。
【００５３】
飼育期間の１８時より午前６時までに得られた呼吸商の推移を図４に示す。なお、全ての結果数値は平均値±標準偏差で表す。有意差については、図中にアルファベットが記載されている場合は、異なるアルファベット間で認められていることを示す。＊印は対照群１と比較してＰ＜０．０５で有意差が得られたことを示す。呼吸商とは生体二酸化炭素排出量の酸素摂取量に対する比を言う。呼吸商は消費エネルギー源を反映することが知られており、消費エネルギー源が糖質の場合の値は１．００、タンパク質の場合は０．８０、脂質の場合が０．７０とされている。従って、消費エネルギー源に糖質以外の物質が使われると、総和として観測される呼吸商は低下する。また通常、エネルギー源として優先的に用いられるのは糖質ならびにグリコーゲンであるが、これらの消費の後に次いで脂質が使われることが知られている（参考文献：生理学テキスト、大地睦男著、文光堂、１９９２年）。
【００５４】
飼育期間の１８時より午前６時までの消費カロリー量を図５に示す。また、飼育期間の１８時より午前６時までに得られた呼吸商の平均値である暗期平均呼吸商と消費カロリー量を併記した表９を示す。
【００５５】
【表９】
【００５６】
呼吸商については、高脂肪食のみを与えた群（対照群１）と比して、ウコン食摂取群（発明群１）ならびにウコン＋カルニチン食摂取群（発明群２）の暗期平均呼吸商に有意な低下が認められた（表９）。摂取期間終了時の呼吸商もまた、発明群１および２で有意な低下が認められた（図４）。これらの現象はカルニチンのみの摂取群（対照群２）では認められなかった。以上より、本試験において、ウコンの摂取（発明群１および２）により呼吸商が低下したことは、ウコンが脂質の消費を促進することを示唆するものである。なおこの効果はカルニチンの単独摂取すなわち対照群２には認められなかったことから、カルニチン単独では脂質消費の亢進は認められない事が示された（図４）。
【００５７】
一方、消費カロリー量は、高脂肪食のみを与えた群（対照群１）と比較して、ウコン食摂取群（発明群１）では変化が無く、カルニチン投与群（対照群２）は増加傾向を示したが有意差は認められなかった。ところが、ウコン＋カルニチン食摂取群（発明群２）ではカロリー消費が亢進され、有意な増加が認められた（表９、図５）。この結果より、ウコンのみの投与（発明群１）では消費カロリー量は増加せず、カルニチンのみの投与（対照群２）でも、消費カロリー量は若干量増加するものの顕著に亢進するものではないことが示された。ところが、ウコンとカルニチンの併用投与（発明群２）では、驚くべきことに各々単独で与えた場合の相和以上にカロリーの消費が亢進されることが示された。
【００５８】
ＣＰＴは、カルニチンを用いてエネルギー代謝系へのエネルギー源運搬を行う酵素であることから、カルニチンを摂取することでカロリー消費量が若干量増加することは容易に想像される。しかし本試験の結果では、カルニチンのみの摂取では、その量を反映するほどにカロリー消費は増加しなかった。ところがカルニチンとウコンを同時摂取することにより、カロリー消費は劇的に促進され、その効果はウコン、カルニチン各々を単独で与えた効果の相和値以上のものであった。これは投与されてカルニチンが、ウコンのもつＣＰＴ活性亢進効果により効率的に利用された結果、単独で与えた場合よりもカロリー消費が亢進されたものと推測された（表９、図５）。以上の結果より、ウコンとカルニチンの同時摂取により、カロリー消費量を増大させ、エネルギー源としての脂肪利用促進に効果的であることが示された（図４）。
【００５９】
（実施例５）
４週齢の雄性ＳＤラットを１週間の予備飼育の後、対照群１（コントロール液体食）、対照群２（アルコール液体食）と発明群１（アルコール液体食＋ウコン）の各群に分け（ｎ＝５）、２８日間飼育した。餌の組成を表１０に示す。これらの液体食は、オリエンタル酵母製・Ｆ２ＬＣＷを用い、調製方法（オリエンタル酵母工業株式会社ＯＹＣ実験動物関連総合カタログ２００３、５２頁）に則り各々の液体餌ベースに懸濁させて用いた。またウコン投与群（発明群）では、餌粉体量に対し０．６％のウコン末を加えて同様に懸濁液を調製して試験に供した。摂餌量は飼育中最も少ない量の群に合わせてペアフィーディングを行った。
【００６０】
【表１０】
【００６１】
２９日目の朝に餌を１時間投与後、５〜７時間絶食させた後に屠殺し肝臓ならびに血清を採取し、肝臓中総脂質量、肝臓中トリグリセリド（ＴＧ）量、肝臓中コレステロール（ＴＧ）量、血清中の逸脱酵素グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）量（血清ＧＯＴ量；アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）とも呼ばれる場合がある）、血清中のグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）量（血清ＧＰＴ量；アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）とも呼ばれる場合がある）及び肝臓中の脂肪酸合成酵素比活性量（ＦＡＳ比活性）を測定した。各分析試験の方法は本明細書に記した他の同試験、ならびに常法に基づいて行った。肝臓中総脂質量、ＴＧ量及びＴＧ量は脂肪肝の判定指標である。血清ＧＯＴ量及び血清ＧＰＴ量は肝機能指標である。ＦＡＳ比活性は脂質合成機能の指標である。
【００６２】
各群の肝臓中総脂質量、ＴＧ量及びＴＧ量、血清ＧＯＴ量、血清ＧＰＴ量及びＦＡＳ比活性を、それぞれ図６、図７、図８、図９、図１０及び図１１に示す。
【００６３】
肝臓中の脂質分析を行った結果、コントロール液体餌群（対照群１）に比して、アルコール液体餌群（対照群２）では肝臓中総脂質量、トリグリセリド（ＴＧ）量、総コレステロール（ＴＣ）量のすべてが増加し、脂肪肝が形成された。一方、アルコール液体食＋ウコン群（発明群）では、肝臓中総脂質量、ＴＧ量及びＴＧ量の増加が抑制された。特に発明群はＴＧ量、ＴＣ量とも、アルコール非投与群（対照群１）と有意差を認めないほどに、ほぼ完全に増加が抑えられた。また同時に、発明群では脂質合成酵素（Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄ Ｓｙｎｔｈａｓｅ＝ＦＡＳ）の比活性が抑制されており、新たな脂質合成を抑制している。
【００６４】
また、ＧＯＴ量（ＡＳＴ量）及ＧＰＴ量（ＡＬＴ量）は、アルコール摂取群（対照群２）で有意に上昇し、肝障害の進行が確認された。一方、アルコール＋ウコン摂取群（発明群）ではその上昇が抑えられる傾向が示され、肝障害の進行が抑制された。
【００６５】
これらの結果から、ウコン末の摂取はアルコールの摂取に伴う肝臓内蓄積脂肪量の低減、すなわちアルコール性脂肪肝の形成の抑制効果を有することが確認された。これらもまた、ウコンの有するＣＰＴ活性亢進効果により、蓄積脂肪が効率的に消費に回された結果と推測される。
【００６６】
本発明の組成物は、ＣＰＴ活性を亢進することにより、カルニチンの利用効率を増進させ、これにより副作用もなく脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝（とりわけアルコール性脂肪肝）を改善し、血中中性脂肪量を低減することができる。抗疲労用組成物、抗ストレス用組成物、身体疲労軽減用組成物及び消費熱量亢進用組成物としても利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】強制歩行による疲労負荷実験（実施例３）の全体の流れを示す図である。
【図２】強制歩行による疲労負荷実験（実施例３）の結果を示す図である。
【図３】ラットに高脂肪食、さらにカルニチン、ウコンまたはカルニチンとウコン両者を投与し飼育した期間中の体重変化を示す図である。
【図４】ラットに被験食を摂取させ、摂取期間終了時の１８時より午前６時までの呼吸商の推移を示す図である。
【図５】ラットに高脂肪食、さらにカルニチン、ウコンまたはカルニチンとウコン両者を投与し飼育した期間中の消費カロリー量を示す図である。
【図６】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の肝臓蓄積総脂肪量を示す図である。
【図７】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の肝臓中の中性脂肪量を示す図である。
【図８】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の肝臓中の総コレステロール量を示す図である。
【図９】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の血清中のＧＯＴ量を示す図である。
【図１０】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の血清中のＧＰＴ量を示す図である。
【図１１】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際のＦＡＳの比活性強度を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明はＣＰＴ活性亢進用組成物、脂肪肝改善用組成物、血中中性脂肪量低減用組成物、抗疲労用組成物、抗ストレス用組成物、身体疲労軽減用組成物、消費熱量亢進用組成物及びそれらの組成物を含有する医薬品及び飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化社会に伴い、健康に対する人々の関心は次第に高まってきている。しかし、西洋化した現代の食事はトリグリセリドやコレステロールに代表される脂質類の血中及び臓器中での含有濃度を上昇させ、動脈硬化や脂肪肝等の生活習慣病を誘発させる原因となる。現在「メタボリックシンドローム」という言葉が注目されてきているように、代謝の低下は様々な病気の源になるという意識が広がってきている。脂質代謝のメカニズムに関しては、カルニチンが関与した系が知られている。
【０００３】
１．カルニチン
カルニチンはミトコンドリア内の基質、特に脂質代謝において重要な役割を担っている成分である。また、カルニチンは摂食による摂取の他、生体内でアミノ酸から生合成されるが、加齢により生成能が低下することが知られている。そのため、カルニチンに慢性疲労や皮質代謝改善効果を期待した薬品、食品が多く上市されている（特許文献１、非特許文献１）。
【０００４】
２．カルニチンが関与する脂質代謝経路について
カルニチンが関与する脂質代謝経路を詳述する。脂質代謝経路は大きく分けて２段階に分類される。第１段階は、脂肪酸をミトコンドリア内へ運び込む段階、第２段階はミトコンドリア内で脂肪酸を分解する段階である。第１段階は、次に説明するとおりである。まず細胞質に取り込まれた長鎖脂肪酸は、アシルＣｏＡシンターゼ（ＡＣＳ）によりコエンザイムＡ（ＣｏＡ）と結合し、アシル−ＣｏＡとなる。次いで、ミトコンドリア外膜に存在するカルニチンパルミトイル転移酵素１型（ＣＰＴ−Ｉ）の触媒によりアシル-ＣｏＡのアシル基がカルニチンに移行してアシルカルニチンが生成し、この形でミトコンドリア内膜を通過してミトコンドリアのマトリックスに移行する。そこでカルニチンパルミトイル転移酵素２型（ＣＰＴ−ＩＩ）が触媒することによりアシルカルニチンのアシル基が再度ＣｏＡに受け渡され、アシル−ＣｏＡとカルニチンに分離され、第１段階が完了する。第２段階は、脂肪酸を分解する段階である。これは、アシル−ＣｏＡがβ酸化酵素の触媒によりβ酸化を受けることにより脂肪酸がエネルギーとして用いられる（非特許文献２）。ウコン含有成分として知られるクルクミンが第２段階のβ酸化を促進することは知られている（特許文献２）。
【０００５】
３．カルニチンパルミトイル転移酵素
カルニチンパルミトイル転移酵素（ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−ＩＩ）は、第１段階で作用する酵素である。ＣＰＴ−Ｉは、脂肪酸から生成されたアシルＣｏ−Ａとカルニチンを結合させ、アシルカルニチンとする。脂肪酸はアシルカルニチンの形でミトコンドリアの内膜を通過し、ミトコンドリア内へ移動する。ＣＰＴ−ＩＩは、ミトコンドリア内膜を通過してきたアシルカルニチンを、カルニチンとアシルＣｏ−Ａに分離する。
ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−ＩＩは肝臓の他、筋肉、脂肪組織等にも分布していることが知られており、これらの機能亢進は、この酵素が分布する各器官の基質代謝を亢進させ、疲労の軽減や蓄積脂肪の消費の促進等につながる。ＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−ＩＩが効率的に機能しなければ、脂肪酸はミトコンドリア内に取り込まれて、β酸化される前段階の状態にならないため、β酸化酵素がいくら活性化されたとしても脂肪酸の分解を促進できない。ヒトの場合、急激な運動の後にはＣＰＴ活性が低下することが報告されている（非特許文献３）。特にＣＰＴ−ＩＩの機能が欠損すると、筋緊張低下、呼吸障害、不整脈、心肥大、発作性ミオグロビン尿症等の疾病が引き起こされることが知られている。
【０００６】
以上の脂質代謝経路を亢進させるにあたっては、カルニチンを医薬品やサプリメントとして外部から補給したり、クルクミン等の有効成分を用いて第２段階のβ酸化を促進する方法は従来から行われているものの、生体内での第１段階のＣＰＴ−Ｉ及びＣＰＴ−ＩＩ活性を亢進させて、ミトコンドリアに取り込まれる脂肪酸を増加させることにより脂質代謝経路を亢進させる方法はこれまで行われていなかった。
【０００７】
【特許文献１】特開平７−１９６４８５号公報
【特許文献２】特開平１１−２４６３９９号公報
【非特許文献１】王堂哲、食品工業、４６（２２）、２６（２００３）
【非特許文献２】C.J.Rebouche, J.Appl.Nutr., ４０，９９（１９８８）
【非特許文献３】Lennon et al., J.Appl.Physiol., ５５，４８９（１９８３）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
したがって、本発明は、ＣＰＴ活性、特にＣＰＴ−ＩＩ活性を亢進する組成物を提供することを目的とする。詳細には、ＣＰＴ活性を亢進させることにより、脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝、とりわけアルコール性脂肪肝を改善し、血中中性脂肪量を低減すること、また、抗疲労作用、抗ストレス作用、身体疲労軽減作用及び消費熱量亢進作用を有する組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは上記問題を解決すべく鋭意研究を行った結果、ウコン中の成分がＣＰＴ活性亢進作用、脂肪肝、とりわけアルコール性脂肪肝改善作用、血中中性脂肪低減作用、更に抗疲労作用、抗ストレス作用及び身体疲労軽減作用を有することを見出し、本発明を完成した。また、本発明者らは、ウコン中の成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数とを組み合わせることにより、これらの作用が増幅し、さらに消費熱量亢進作用を有することを見出した。
より具体的には、本発明は以下のとおりである。
【００１０】
１．ウコン含有成分を有効成分とするＣＰＴ活性亢進用組成物。
２．ウコン含有成分を有効成分とする脂肪肝改善用組成物。
３．前記脂肪肝がアルコール性脂肪肝である２に記載の脂肪肝改善用組成物。
４．ウコン含有成分を有効成分とする血中中性脂肪量低減用組成物。
５．ウコン含有成分を有効成分とする抗疲労用組成物。
６．ウコン含有成分を有効成分とする抗ストレス用組成物。
７．ウコン含有成分を有効成分とする身体疲労軽減用組成物。
８．前記ウコン含有成分が非アセトン溶媒抽出物である１〜７のいずれかに記載の組成物。
９．さらにカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数を含む１〜８のいずれかに記載の組成物。
１０．ウコン含有成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数とを含む消費熱量亢進用組成物。
１１．１〜１０のいずれかに記載の組成物を含む飲食物。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の組成物は、ＣＰＴ活性、特にＣＰＴ−ＩＩを亢進させ、これにより副作用もなく脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝、とりわけアルコール性脂肪肝を改善し、血中中性脂肪量を低減することができる。体力維持用組成物、抗疲労用組成物、抗ストレス用組成物及び消費熱量亢進用組成物としても利用可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
１．原料
本発明の組成物の原料はショウガ科ウコン属の多年生植物で、特に通常ターメリックやアキウコンとも呼ばれるウコン（学名：Curcuma longa L.）が好ましい。使用可能な植物部位としては根茎、葉部、茎部、花部、実等がある。根茎を使用することが好ましい。本発明の組成物に用いるウコンの形態は、ＣＰＴ活性亢進作用、脂肪肝（とりわけアルコール性脂肪肝）改善作用、血中中性脂肪低減作用、更に抗疲労作用、抗ストレス作用及び身体疲労軽減作用を有するウコン含有成分を含有するものであれば、生のまま使用しても、乾燥したものであってもよく、これらを組み合わせて使用することも可能であり、抽出物の形態でもよいが、添加・加工の簡便性及び摂取等の観点から、乾燥したものを使用することが好ましい。乾燥方法は天日乾燥等の一般的な手法が用いられるが、食品素材用、あるいは医薬品・医薬部外品原料用等に流通されている乾燥状のウコン（塊、粉末等）をそのまま、あるいは適宜加工の上用いるのが最も簡便である。
【００１３】
２．ウコン含有成分
本発明の組成物に用いるウコン含有成分とは、１以上のＣＰＴ活性、特にＣＰＴ−ＩＩ活性を亢進する成分（クルクミンを除く）を意味するものである。このようなＣＰＴ活性を有するウコン含有成分の好ましい例は、非アセトン溶媒抽出物であるが、これは物性を意味し、当該活性を有する限りにおいて加工工程を限定するものではなく、また形態を限定するものでもない。非アセトン抽出物が好ましい理由については以下に説明する。これらの配分量は、特に飲食物に用いる場合においては、呈味性、嗜好性により適宜考慮されるべきものである。
【００１４】
先述の技術文献２には、ウコン粉末をアセトンで抽出したクルクミン含有精製物を１％添加した飼料をマウスに投与して肝臓中のトリグリセリド蓄積量を約４０％程度抑制したデータが記載されている。一方、本発明のウコン含有成分を有効成分とする組成物は、ウコン粉末を５％添加した飼料をマウスに投与したところ、クルクミンを０．２％未満にしか含有していないのにも関わらず、肝臓中のトリグリセリド蓄積量を約７４％も低減させている（実施例、表５参照）。また、同重量のウコン末とクルクミンを用い、身体疲労軽減効果を比較したところ、クルクミンとしての投与量が少ないにも拘わらず、ウコン末を用いた方が有効であることが示されている（実施例３参照）。したがって、ウコン粉末はＣＰＴ活性亢進作用、脂肪肝（とりわけアルコール性脂肪肝）改善作用、血中中性脂肪低減作用、更に抗疲労作用、抗ストレス作用及び身体疲労軽減作用を有する成分を含有しており、該成分はアセトンにより抽出されない、クルクミンとは別個の成分であることが示唆される。それ故、本発明におけるウコン含有成分は、非アセトン溶媒抽出物である。そのような成分を含有させることが可能な浸出媒体としては、水性又は親水性（水に可溶）の溶媒、つまり、水又は親水性溶剤を含んだ溶媒を用いることができる。これらを単独又は混合溶媒の形態で使用することができ、例えば、水と親水性溶剤との混合溶媒や複数種の親水性溶剤の混合物であってもよい。親水性溶剤としては、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール等のモノアルコール類；エチレングリコール、グリセリン等のジオール及びポリオール類；アセトニトリル等の低級脂肪族ニトリル；ＤＭＦ；ＤＭＳＯ等、各種極性有機溶剤が挙げられるが、摂食に用いる旨を考慮する場合は食品衛生法等、各用途に定められた範囲内での溶剤を用いる。本明細書においてこれらを併せて「水性溶媒」と表すこととする。水性溶媒は、好ましくは水である。水性溶媒の浸出温度を上げることによって浸出効率を上げることができ、例えば、水を用いる場合、約５０〜１００℃、好ましくは８０〜１００℃の熱水によって良好に浸出できる。浸出時間は浸出温度とウコンの形態を考慮しつつ適した時間を選択する。例えば９０℃〜１００℃の場合は１〜７２０分、好ましくは５〜１８０分である。浸出時間が短すぎると有効成分の抽出が不十分となり、長すぎると不純物の溶出が多くなり、また加工及び呈味に影響を与える。これらの抽出時間は目安であり、最適な時間は、目的成分の抽出効率と作業効率を考慮して適宜選択されるべきである。また、複数の異なる溶媒系、もしくは同じ溶媒系を用いて繰り返し浸出操作を行ってもよく、例えば、水又は熱水で浸出した後の残渣を更にアルコール等の親水性有機溶剤、あるいは水性溶媒で浸出し、両浸出物を併せて利用することができる。使用する浸出溶媒の割合がウコンの乾燥重量に対して５〜２００倍程度となるようにすることによって好適に抽出することができる。
【００１５】
３．カルニチンとの組み合わせ
本発明の組成物に、カルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数をさらに添加することが好ましい。カルニチンを添加することによりアシルＣｏＡとカルニチンとの反応をさらに亢進し、ＣＰＴ活性亢進作用、脂肪肝（とりわけアルコール性脂肪肝）改善作用、血中中性脂肪低減作用、更に抗疲労作用、抗ストレス作用、身体疲労軽減作用を増強することができる。また、ウコン含有成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数を組み合わせることにより、消費熱量亢進作用という新たな作用を得ることができる。カルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数の添加量は、ウコン及び／またはウコン抽出物の重量に基づいて、０．０１〜１００００重量％、好ましくはサプリメントとして摂取する場合に推奨されている量を鑑みて０．１〜１０００重量％、更に好ましくは１〜３００重量％、最も好ましくは３０〜５０重量％の割合で添加するとよい。
【００１６】
以上の本発明の組成物は、所望の作用の程度等の条件、投与方法ならびに嗜好性、呈味性に応じて適宜選択が可能である。また、これらの組成物を含有する抽出物及び画分、あるいはウコン粉末、ピューレ等、多方面にわたって様々な摂取形態で応用することが可能である。多くの場合、他の結合剤や、飲食可能な飲食用素材と組み合わせて所謂組成物として使用することができる。例えば、医薬品とする場合は、適当な賦形剤、崩壊剤、結合剤と組み合わせて経口固形剤として、あるいはイオン交換水又は生理的食塩水と組み合わせて経口液剤又は注射剤として使用できる。また、このような医薬品に限らず、緑茶、紅茶、烏龍茶、雑穀茶、野菜汁、果汁、乳等に配合して飲料として、あるいはビスケット、パン、飴等に配合して食品として日常的に摂取可能な形態で提供することも可能である。また、上記医薬品に準じて錠剤とすることにより所謂サプリメントとしても利用可能である。
【００１７】
以下に、これら摂取形態について具体的に説明する。
本発明を医薬品として用いる場合は、例えば散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、錠剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等の経口投与剤が挙げられる。この経口投与剤は、上記油脂組成物の他、経口投与剤の形態に応じて一般に用いられる賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、アルコール類、水、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料等を添加して製造することができる。
【００１８】
本発明を飲食物として用いる場合は、例えば特定の機能を発揮して健康増進を図る健康食品や飲料としての使用が挙げられる。具体的には、かかる化合物を含有したカプセル剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤等からなる所謂サプリメント、パン、ケーキ、クッキー等のベーカリー食品類；ソース類、スープ類、ドレッシング類、マヨネーズ類等の調味料：牛乳、ヨーグルト、クリーム類等の乳製品；チョコレート、キャンデー等の菓子；あるいは緑茶、紅茶、烏龍茶、麦茶、雑穀茶、果汁、野菜、乳飲料、清涼飲料、及び炭酸飲料等の飲料等が挙げられる。なお、ここで、抽出物は抽出液であってもよい。
【００１９】
本発明の組成物を含有する浸出液、抽出物及び画分あるいはウコン粉末等は、果汁・果実飲料、コーヒー飲料、烏龍茶飲料、緑茶飲料、紅茶飲料、麦茶飲料、野菜飲料、雑穀茶飲料等の他の飲料と組み合わせることで、幅広い範囲の飲料を提供することが可能である。例えばソフトドリンクである炭酸飲料、果実エキス入り飲料、野菜エキス入りジュースや、ニアウオーター、スポーツ飲料、ダイエット飲料等に適宜添加することもできる。また消費者の嗜好にあわせて茶葉の微粉末のような不溶性化合物をあえて懸濁させた形態も使用できる。さらに、該成分の摂取について携帯性、保存性を考慮に入れた場合、該当成分を含有させた粉末飲料や、該当成分を利用者自らの操作による浸出により飲用が可能となるような食品とすることもできる。
【００２０】
添加時の安定性等を考慮すると、飲料において特にウコンをそのままの形態で利用する場合は、沈殿等の恐れがある。したがって、飲用時の外観が嗜好性等に与える影響を考慮すると、沈殿を防ぐためにある程度の粘稠性を有する組成のものを用いることが望ましい。粘稠性を有する組成のものとしては、果実、野菜等のピューレ等を用いる方法や増粘多糖類、糊料を添加する等の方法が挙げられる。
【００２１】
飲料には、処方上添加して良い成分として、酸化防止剤、香料、各種エステル類、有機酸類、有機酸塩類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の添加剤を単独、又は併用して配合しても良い。
【００２２】
飲料を容器詰飲料にする場合、使用される容器は、一般の飲料と同様にポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶等の通常の形態で提供することができる。ここでいう容器詰飲料とは希釈せずに飲用できるものをいう。
【００２３】
また、容器詰飲料は、例えば、金属缶のように容器内を完全に液で満たすか、脱気、窒素置換又はその両方を行った後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で製造される。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器等で高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。更に、酸性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻す等の操作も可能である。
【００２４】
本発明の組成物を、医薬として使用する場合の投与量は、精製度、およびどの段階の抽出物及び／または画分を用いるか、または、年齢、体重、性別、症状、治療効果、投与方法、処理時間などの種々の要因によって異なるが、経口投与の場合は通常大人１人１日当たり植物原体重量（乾燥重量）として０．０５〜１５ｇ、特に０．１〜１０ｇの範囲を１日１回〜数回に分けて投与することが好ましい。
【００２５】
本発明の組成物を飲食物として摂取する場合の摂取量も医薬として使用する場合に準ずるが、飲食物の場合は医薬品とは異なり、保健機能の維持という目的、並びに、呈味性、嗜好性を考慮した場合においては、上記の範囲に限定されるものではない。
【００２６】
以下に、本発明の実施の態様について実施例をあげて説明するが、本発明は以下の例に限定されるものではない。
【実施例】
【００２７】
（実施例１）
ウコン（Ｃ． ｌｏｎｇａ）を約８０メッシュに粉砕した市販ウコン末（日本粉末薬品社製）を用いた。
クルクミノイド（クルクミン、およびその誘導体）量は、内部標準法により測定した。分析条件は以下のとおりである。なお、測定の結果、クルクミン１.８３重量％、デメトキシクルクミン０.６７重量％、ビスデメトキシクルクミン０.８１重量％であった。
【００２８】
＜分析条件＞
カラム：Nucleosil Ｃ１８ φ４．６×１５０ｍｍ
移動層：アセトニトリル：０．１％リン酸水溶液＝４５：５５
注入量：１０μＬ
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＵＶ２５４ｎｍ
カラム温度：４０℃
＜内部標準溶液＞
４−ヒドロキシ安息香酸ｎ−ヘキシル（東京化成社製）２０ｍｇをメタノール（和光純薬社製）に溶解し、５０ｍＬに定容した。
＜標準溶液＞
各分析対象のクルクミノイドの標準品（長良サイエンス社製）５ｍｇを秤量してメタノール（和光純薬社製）に溶解し、内部標準溶液５ｍＬを添加し、メタノールで全体量５０ｍＬに定容した。
＜検量線作成＞
標準溶液を高速液体クロマトグラフに１０μＬ注入し、得られた内部標準及び分析対象のピーク高さ比と濃度から、１点検量線を作成した。
＜試料の調整＞
試料２００ｍｇを採取し、内部標準溶液５ｍＬを添加して、メタノールで５０ｍＬに定容し、３０分静置した。０．４５μｍメンブレンフィルターで濾過後、高速液体クロマトグラフに１０μＬ注入し、定量した。検量線を越えた値を示した場合は希釈倍率を上げ、範囲内に入るようにして再分析を行った。
【００２９】
７週齢のＣ５７ＢＫ／６Ｊ系統マウス（ｎ＝６）を１週間の予備飼育の後、対照群（高脂肪食群；脂肪分３０％）と発明群（ウコン粉末添加飼料群；ウコン粉末５．０％＋脂肪分３０％）の各群に分け、８週間個別飼育した。試験期間終了後に全採血により屠殺し、ＣＰＴ−ＩＩ活性、体重変化、食餌摂取量、脂肪酸吸収率、組織重量、血中及び肝臓の総コレステロール量、トリグリセリド量、ＧＯＴ活性、ＧＰＴ活性、リン脂質量を測定した。
【００３０】
ＣＰＴ（ＣＰＴ−ＩＩ）活性測定方法
肝臓のホモジネートを用いてＣＰＴ（ＣＰＴ−ＩＩ）活性を測定した。測定方法は、独立行政法人 食品総合研究所のウェブページ「食品機能性マニュアル」の「ＶＩ−３ 分光法による肝臓の代謝系酵素活性の測定」に記載された「カルニチンパルミトイル転移酵素活性の測定」に記された方法に従って行った(http://www.nfri.affrc.go.jp/yakudachi/manual/6-3ide.html参照)。
測定用のキュウベットに測定用緩衝液（０．５ｍＬ）、酵素源（０．００５〜０．０１ｍＬ）を入れ、水を加えて最終容量を０．９７ｍＬとし、混合後３０℃に保温した恒温セルホルダーに装着した。記録計のフルスケールをＯＤ０．１〜０．２として４１２ｎｍ波長でＯＤ変化をチェースした。ＯＤ上昇が認められなくなった時点でパルミトイル−ＣｏＡ溶液０．０２ｍＬを添加した。その後アシル−ＣｏＡ水解酵素反応により、再びＯＤが上昇する（ブランク反応）ので、このブランク反応の直線性を確認した後、カルニチン溶液０．０１ｍＬを添加して反応を開始させた。この反応の直線部分からブランク反応を差し引きＣＰＴ−ＩＩ活性とした。分子吸光係数は１３６００Ｍ−１ｃｍ−１である。
＜反応液の最終組成:１ｍＬ＞
５８ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）
１.２５ｍＭ ＥＤＴＡ
０.２５ｍＭ ジチオニトロ安息香酸（ＤＴＮＢ）
０.０４ｍＭ パルミトイル−ＣｏＡ
０.１％ トリトンＸ−１００
１.２５ｍＭ Ｌ−カルニチン
＜試薬＞
１．緩衝液：１１６ｍＭトリス−塩酸緩衝液、２．５ｍＭ
ＥＤＴＡ、０．２％トリトンＸ−１００（ｐＨ８．０）
２．１．２５ｍＭ Ｌ−カルニチン
３．２ｍＭ パルミトイル−ＣｏＡ
４．測定用緩衝液：測定当日に５μｍｏｌのＤＴＮＢを緩衝液（１）１０ｍＬに溶解する。
【００３１】
食餌摂取量（ｋｃａｌ／ｗｅｅｋ）は、マウスが実際に１週間に摂取した餌の量と、餌のカロリーから算出した。また、肝重量及び脂肪組織重量は、マウス解剖時に切除した各組織の測定重量を、マウスの体重あたりに換算して算出した。
【００３２】
ＧＯＴ活性及びＧＰＴを、市販測定キット（トランスアミナーゼＣIIテストキット、和光純薬社製）を用いて測定した。血中総コレステロール量、トリグリセリド量及びリン脂質量もまた、それぞれ市販の測定キット（和光純薬社製）を用いて測定した（参考文献：Ikeda
et al., Biosci. Biotechnol. Biochem., 69, 1049(2005).参照）。また、脂肪酸吸収率を、摂取脂質量と、糞中の脂質重量の比により算出した。糞中の脂質重量に関しては、糞より有機溶媒にて抽出した後滴定法にて測定した（参考文献：鈴木他,
日本食品科学工学会誌、54, 167(2005).参照）。また、肝臓中の脂質等を、抽出後の比色法により測定した（参考文献：Folsh et al., J.
Biol. Chem., 226. 497 (1957). 及びIkeda et al., J. Nutr., 124, 1898 (1994). 参照）。
【００３３】
結果を表１に示す。また、飼育前後の体重変化・摂取カロリー、血中ＴＧ、血中コレステロール、肝重量、肝脂肪、脂肪組織重量も測定した。結果を表２〜５に示す。
なお、全ての結果数値は平均値±標準偏差（ｎ＝６）で表す。＊印は対照群と比較してＰ＜０．０５で有意差が得られたことを示す。
【００３４】
【表１】
【００３５】
【表２】
【００３６】
【表３】
【００３７】
【表４】
【００３８】
【表５】
【００３９】
試験の結果、カルニチンパルミトイル転移酵素（ＣＰＴ）活性は、発明群が有意に高かった（表１）。摂食量及び脂肪酸吸収率は、対照群と発明群との間に差が見られなかったが、試験終了時の体重及び体重増加量は、対照群よりも発明群が有意に低かった（表２）。体重あたりの肝重量は、発明群において増加が見られたが、脂肪組織重量は対照群よりも発明群が有意に低かった（表３）。血中及び肝臓内トリグリセリド量は対照群よりも発明群が有意に低かった（表４及び表５）。特許文献２（特開平１１−２４６３９９）に記載される試験１によれば、試験系に多少の違いはあるものの、肝臓中のトリグリセリド量が、対照群では３９．９であるのに対し、クルクミン１％添加群では１８．１と約４０％の低下であったのに比べ、本発明は表５から明らかなとおり、飼料中のクルクミン量が０．１６５％であるのにも拘わらず約７４％も低下していた。なお、特許文献２において定義されている「クルクミン」は、「クルクミンならびにその誘導体」のことであり、本発明にて分析したクルクミノイドと同義であると判断される。試験の結果より、アセトンにより溶出せず、クルクミンではない、ＣＰＴ活性を亢進する能力が高いウコン含有成分の関与を示唆するものである。
総コレステロール及び肝臓内リン脂質に関しては、発明群において若干の低下が見られたものの有意な差は見られなかった（表４及び５）。
【００４０】
以上の結果より、発明群は摂取エネルギー及び吸収脂質量に関して対照群との間に有意な差が見られない一方で、血液及び肝臓での中性脂肪量の蓄積及び増加が抑制されていることが分かった。発明群はＣＰＴ活性を亢進することにより、カルニチンの利用効率が増進し、基質の代謝を促進したためと考えられる。また、ウコンの機能性成分としてはクルクミンおよびクルクミノイドが知られているが、ウコン粉末添加飼料群のクルクミノイド含量は０．１６５％と極少量であるから、クルクミン以外の機能性成分（ウコン含有成分）が関与している可能性が示唆される。
【００４１】
（実施例２）
ウコン末（日本粉末薬品製）を１６０℃で１５分間加熱して呈味改善ウコン末とした（特願２００５−３１１５２３）。ニンジン、リンゴ及びバナナを含む野菜果実混合飲料１２５ｍＬに、前記ウコン末を０．５８重量％（飲料１２５ｍＬあたり７５０ｍｇ）になるように混和させた飲料を調製した。前述の方法により本ウコン末１ｇに含まれるクルクミノイド量を測定した結果、クルクミン１０．７３ｍｇ、デメトキシクルクミン４．４４ｍｇ、ビスデメトキシクルクミン５．２１ｍｇであった。
【００４２】
前記飲料を２２歳〜６２歳成人ボランティア１６名（男性８名、女性８名）に１日２本、９０日間摂取させた。９０日後に、目覚め、だるさ、欠伸の数、頭痛及び疲れの残り感について自覚症状の改善が認められた項目をチェックする形でアンケートを実施した。被験者１６名中１２名の有効回答が得られた。この結果を表６に示す。
【００４３】
【表６】
【００４４】
だるさ、疲れ残り等の疲労や倦怠感に関する項目における改善回答は４割以上にのぼり、目覚めにおいても約３割の被験者で改善が見られ、本発明品は抗疲労、抗ストレス効果あることが分かった。また、ウコンの機能性成分としてはクルクミンが知られているが、本試験におけるクルクミン含量は飲料１回摂取分あたり１５．３ｍｇ（クルクミノイドとして）と少量であるから、クルクミン以外の機能性成分（ウコン含有成分）が関与している可能性が示唆される。
【００４５】
（実施例３）
ウコンの身体疲労軽減作用を、強制歩行による疲労負荷実験により検討した。
実験には７週齢のマウスＣＤＦ１系統（オス・ｎ＝１５）を用い、クロスオーバー試験とし、１週間のトレーニング後、本試験に用いた。
投与試料はウコン末（日本粉末薬品社製、実施例１にて用いたものと同等品）およびクルクミン（試薬、キシダ化学社製）を０．５％メチルセルロース溶液に混濁させ、８０ｍｇ／ｍｇ／ｋｇ
ｂ．ｗ．となるように強制経口投与（１０ｍＬ／ｋｇ）させた。投与後、直ちにラット・マウス用マルチファンクショナル回転ゲージＭＫ７７０（室町機械社製）を用いて、１分間に１５回転する速度(以下１５ｒｐｍと記す)で１８０分間強制歩行させた。その後、回転式運動量測定器ＳＮ４５０（マウス用）Ａ型カウンター付（シナノ製作所製）を用いて１８０分間の自発運動量を１時間おきに測定した。試験全体の流れを図１に示す。
【００４６】
結果を図２に示す。試験の結果、クルクミンを８０ｍｇ／ｋｇ
ｂ．ｗ．で投与した時よりも、同用量のウコン末を投与したときの方が、自発運動量が増加した（エラーバーは（平均±Ｓ．Ｄ．）を示す。１時間の時点では１０％の危険率で有意差が認められた（paired
t-test））。本ウコン末中にはクルクミノイドは約３．３％含まれることから、実投与量としては２．６ｍｇ／ｋｇ ｂ．ｗ．となる。ウコン末投与群におけるクルクミンの投与量は、クルクミン投与群と比して大変少ないにもかかわらず、ウコン末投与群はクルクミン投与群よりも運動量が増加する結果が得られた。従って、本試験における、ウコン末による疲労改善はクルクミン以外の機能性成分（ウコン含有成分）が関与している可能性が示唆される。
【００４７】
（実施例４）
９週齢の雄性ＳＤラットを１週間の予備飼育の後、対照群１（高脂肪食群；ラード２５％）、発明群１（高脂肪食＋ウコン２．５％）、対照群２（高脂肪食＋カルニチン１．０％）と発明群２（高脂肪食＋ウコン２．５％＋カルニチン１．０％）の各群に分け（ｎ＝８）２７日間、個別飼育した。なお餌の組成を表７に示す。餌の摂取は暗期のみに限定し、毎日の摂餌量および体重を測定した。試験期間終了日、すなわち２７日目の１８時より呼気ガス分析を行い、測定後２８日目の朝より３〜４時間絶食させた後に屠殺し解剖した。各ラットの肝臓を摘出し、総脂質重量ならびにトリグリセリド量の分析を行った（参考文献：日本栄養食糧学会誌、第５９巻、第２号、１０７〜１１３頁、２００６年）。
【００４８】
【表７】
【００４９】
餌に用いたビタミン並びにミネラル混合は、其々オリエンタル酵母製のものを用いた。またカルニチンは、ロンザ社製のＬ−カルニチンＬ−酒石酸塩６８．６％含有粉末を用いた。呼気ガス分析方法は、代謝計測システムＭＫ−５０００ＲＱ／０２（室町機械製）を用い、マニュアルに則り行った。
【００５０】
飼育期間のカロリーおよび被験物質の総摂取量を表８に示す。総摂取カロリーに有意な差は見られなかった。
【００５１】
【表８】
【００５２】
また、ラットに前述のノーマル食、高脂肪食、ウコン食、カルニチン食、カルニチン＋ウコン食を投与し飼育した期間中の体重変化を図３に示す。体重変化に有意な差は見られなかった。
【００５３】
飼育期間の１８時より午前６時までに得られた呼吸商の推移を図４に示す。なお、全ての結果数値は平均値±標準偏差で表す。有意差については、図中にアルファベットが記載されている場合は、異なるアルファベット間で認められていることを示す。＊印は対照群１と比較してＰ＜０．０５で有意差が得られたことを示す。呼吸商とは生体二酸化炭素排出量の酸素摂取量に対する比を言う。呼吸商は消費エネルギー源を反映することが知られており、消費エネルギー源が糖質の場合の値は１．００、タンパク質の場合は０．８０、脂質の場合が０．７０とされている。従って、消費エネルギー源に糖質以外の物質が使われると、総和として観測される呼吸商は低下する。また通常、エネルギー源として優先的に用いられるのは糖質ならびにグリコーゲンであるが、これらの消費の後に次いで脂質が使われることが知られている（参考文献：生理学テキスト、大地睦男著、文光堂、１９９２年）。
【００５４】
飼育期間の１８時より午前６時までの消費カロリー量を図５に示す。また、飼育期間の１８時より午前６時までに得られた呼吸商の平均値である暗期平均呼吸商と消費カロリー量を併記した表９を示す。
【００５５】
【表９】
【００５６】
呼吸商については、高脂肪食のみを与えた群（対照群１）と比して、ウコン食摂取群（発明群１）ならびにウコン＋カルニチン食摂取群（発明群２）の暗期平均呼吸商に有意な低下が認められた（表９）。摂取期間終了時の呼吸商もまた、発明群１および２で有意な低下が認められた（図４）。これらの現象はカルニチンのみの摂取群（対照群２）では認められなかった。以上より、本試験において、ウコンの摂取（発明群１および２）により呼吸商が低下したことは、ウコンが脂質の消費を促進することを示唆するものである。なおこの効果はカルニチンの単独摂取すなわち対照群２には認められなかったことから、カルニチン単独では脂質消費の亢進は認められない事が示された（図４）。
【００５７】
一方、消費カロリー量は、高脂肪食のみを与えた群（対照群１）と比較して、ウコン食摂取群（発明群１）では変化が無く、カルニチン投与群（対照群２）は増加傾向を示したが有意差は認められなかった。ところが、ウコン＋カルニチン食摂取群（発明群２）ではカロリー消費が亢進され、有意な増加が認められた（表９、図５）。この結果より、ウコンのみの投与（発明群１）では消費カロリー量は増加せず、カルニチンのみの投与（対照群２）でも、消費カロリー量は若干量増加するものの顕著に亢進するものではないことが示された。ところが、ウコンとカルニチンの併用投与（発明群２）では、驚くべきことに各々単独で与えた場合の相和以上にカロリーの消費が亢進されることが示された。
【００５８】
ＣＰＴは、カルニチンを用いてエネルギー代謝系へのエネルギー源運搬を行う酵素であることから、カルニチンを摂取することでカロリー消費量が若干量増加することは容易に想像される。しかし本試験の結果では、カルニチンのみの摂取では、その量を反映するほどにカロリー消費は増加しなかった。ところがカルニチンとウコンを同時摂取することにより、カロリー消費は劇的に促進され、その効果はウコン、カルニチン各々を単独で与えた効果の相和値以上のものであった。これは投与されてカルニチンが、ウコンのもつＣＰＴ活性亢進効果により効率的に利用された結果、単独で与えた場合よりもカロリー消費が亢進されたものと推測された（表９、図５）。以上の結果より、ウコンとカルニチンの同時摂取により、カロリー消費量を増大させ、エネルギー源としての脂肪利用促進に効果的であることが示された（図４）。
【００５９】
（実施例５）
４週齢の雄性ＳＤラットを１週間の予備飼育の後、対照群１（コントロール液体食）、対照群２（アルコール液体食）と発明群１（アルコール液体食＋ウコン）の各群に分け（ｎ＝５）、２８日間飼育した。餌の組成を表１０に示す。これらの液体食は、オリエンタル酵母製・Ｆ２ＬＣＷを用い、調製方法（オリエンタル酵母工業株式会社ＯＹＣ実験動物関連総合カタログ２００３、５２頁）に則り各々の液体餌ベースに懸濁させて用いた。またウコン投与群（発明群）では、餌粉体量に対し０．６％のウコン末を加えて同様に懸濁液を調製して試験に供した。摂餌量は飼育中最も少ない量の群に合わせてペアフィーディングを行った。
【００６０】
【表１０】
【００６１】
２９日目の朝に餌を１時間投与後、５〜７時間絶食させた後に屠殺し肝臓ならびに血清を採取し、肝臓中総脂質量、肝臓中トリグリセリド（ＴＧ）量、肝臓中コレステロール（ＴＧ）量、血清中の逸脱酵素グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）量（血清ＧＯＴ量；アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）とも呼ばれる場合がある）、血清中のグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）量（血清ＧＰＴ量；アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）とも呼ばれる場合がある）及び肝臓中の脂肪酸合成酵素比活性量（ＦＡＳ比活性）を測定した。各分析試験の方法は本明細書に記した他の同試験、ならびに常法に基づいて行った。肝臓中総脂質量、ＴＧ量及びＴＧ量は脂肪肝の判定指標である。血清ＧＯＴ量及び血清ＧＰＴ量は肝機能指標である。ＦＡＳ比活性は脂質合成機能の指標である。
【００６２】
各群の肝臓中総脂質量、ＴＧ量及びＴＧ量、血清ＧＯＴ量、血清ＧＰＴ量及びＦＡＳ比活性を、それぞれ図６、図７、図８、図９、図１０及び図１１に示す。
【００６３】
肝臓中の脂質分析を行った結果、コントロール液体餌群（対照群１）に比して、アルコール液体餌群（対照群２）では肝臓中総脂質量、トリグリセリド（ＴＧ）量、総コレステロール（ＴＣ）量のすべてが増加し、脂肪肝が形成された。一方、アルコール液体食＋ウコン群（発明群）では、肝臓中総脂質量、ＴＧ量及びＴＧ量の増加が抑制された。特に発明群はＴＧ量、ＴＣ量とも、アルコール非投与群（対照群１）と有意差を認めないほどに、ほぼ完全に増加が抑えられた。また同時に、発明群では脂質合成酵素（Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄ Ｓｙｎｔｈａｓｅ＝ＦＡＳ）の比活性が抑制されており、新たな脂質合成を抑制している。
【００６４】
また、ＧＯＴ量（ＡＳＴ量）及ＧＰＴ量（ＡＬＴ量）は、アルコール摂取群（対照群２）で有意に上昇し、肝障害の進行が確認された。一方、アルコール＋ウコン摂取群（発明群）ではその上昇が抑えられる傾向が示され、肝障害の進行が抑制された。
【００６５】
これらの結果から、ウコン末の摂取はアルコールの摂取に伴う肝臓内蓄積脂肪量の低減、すなわちアルコール性脂肪肝の形成の抑制効果を有することが確認された。これらもまた、ウコンの有するＣＰＴ活性亢進効果により、蓄積脂肪が効率的に消費に回された結果と推測される。
【００６６】
本発明の組成物は、ＣＰＴ活性を亢進することにより、カルニチンの利用効率を増進させ、これにより副作用もなく脂質代謝経路を亢進させ、脂肪肝（とりわけアルコール性脂肪肝）を改善し、血中中性脂肪量を低減することができる。抗疲労用組成物、抗ストレス用組成物、身体疲労軽減用組成物及び消費熱量亢進用組成物としても利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】強制歩行による疲労負荷実験（実施例３）の全体の流れを示す図である。
【図２】強制歩行による疲労負荷実験（実施例３）の結果を示す図である。
【図３】ラットに高脂肪食、さらにカルニチン、ウコンまたはカルニチンとウコン両者を投与し飼育した期間中の体重変化を示す図である。
【図４】ラットに被験食を摂取させ、摂取期間終了時の１８時より午前６時までの呼吸商の推移を示す図である。
【図５】ラットに高脂肪食、さらにカルニチン、ウコンまたはカルニチンとウコン両者を投与し飼育した期間中の消費カロリー量を示す図である。
【図６】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の肝臓蓄積総脂肪量を示す図である。
【図７】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の肝臓中の中性脂肪量を示す図である。
【図８】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の肝臓中の総コレステロール量を示す図である。
【図９】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の血清中のＧＯＴ量を示す図である。
【図１０】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際の血清中のＧＰＴ量を示す図である。
【図１１】ラットにコントロールまたはアルコール液体食を与え、さらにウコンを与えて飼育した際のＦＡＳの比活性強度を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウコン含有成分を有効成分とするＣＰＴ活性亢進用組成物。
【請求項２】
ウコン含有成分を有効成分とする脂肪肝改善用組成物。
【請求項３】
前記脂肪肝がアルコール性脂肪肝である請求項２に記載の脂肪肝改善用組成物。
【請求項４】
ウコン含有成分を有効成分とする血中中性脂肪量低減用組成物。
【請求項５】
ウコン含有成分を有効成分とする抗疲労用組成物。
【請求項６】
ウコン含有成分を有効成分とする抗ストレス用組成物。
【請求項７】
ウコン含有成分を有効成分とする身体疲労軽減用組成物。
【請求項８】
前記ウコン含有成分が非アセトン溶媒抽出物である請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
さらにカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数を含む請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
ウコン含有成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数とを含む消費熱量亢進用組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物を含む飲食物。
【請求項１】
ウコン含有成分を有効成分とするＣＰＴ活性亢進用組成物。
【請求項２】
ウコン含有成分を有効成分とする脂肪肝改善用組成物。
【請求項３】
前記脂肪肝がアルコール性脂肪肝である請求項２に記載の脂肪肝改善用組成物。
【請求項４】
ウコン含有成分を有効成分とする血中中性脂肪量低減用組成物。
【請求項５】
ウコン含有成分を有効成分とする抗疲労用組成物。
【請求項６】
ウコン含有成分を有効成分とする抗ストレス用組成物。
【請求項７】
ウコン含有成分を有効成分とする身体疲労軽減用組成物。
【請求項８】
前記ウコン含有成分が非アセトン溶媒抽出物である請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
【請求項９】
さらにカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数を含む請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
ウコン含有成分とカルニチン及びカルニチン誘導体のうち１または複数とを含む消費熱量亢進用組成物。
【請求項１１】
請求項１〜１０のいずれかに記載の組成物を含む飲食物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公開番号】特開２００８−１３３２７２（Ｐ２００８−１３３２７２Ａ）
【公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２８３７４５（Ｐ２００７−２８３７４５）
【出願日】平成１９年１０月３１日（２００７．１０．３１）
【出願人】（５９１０１４９７２）株式会社 伊藤園 (213)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１０月３１日（２００７．１０．３１）
【出願人】（５９１０１４９７２）株式会社 伊藤園 (213)
【Ｆターム（参考）】
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