ＯＮ０１９１０．Ｎａは薬剤耐性腫瘍において化学療法剤活性を増強する
本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性である癌を有している対象を同定すること；有糸分裂攪乱物質／ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）経路阻害剤を対象に投与すること；及び癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察すこと：を含有してなる、ヌクレオチド類縁体耐性腫瘍が進展している癌を包含している、ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌を治療する組成物及び方法を含有する。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
広範囲抗癌化学療法剤は高い頻度で、細胞分裂を妨害して或いは細胞を比較的早く分裂させるアポトーシスを阻害して、細胞増殖を阻害することによって作用する。細胞増殖を阻害する１つの戦略は、クラドリビン(cladribine）、クロフェラビン(cloferabine）、フルダラビン（fludarabine）、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン（capecitabine）、シタラビン（cytarabine）、デシタビン（decitabine）、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン（sapacitabine）、及びゲムシタビン（gemicitabine）のようなヌクレオチド類縁化学療法剤を使用することである。この化合物は構造的に類似していて一般に少なくともＤＮＡ複製を妨害する。ヌクレオチド類縁化学療法剤は、白血病及びリンパ腫のような血液悪性腫瘍、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群を含む多種の癌を治療するために用いられているか、或いは治療研究下にある。
【０００２】
化学療法剤による治療はしばしば、多くのメカニズムによって、１つ又はそれ以上の化学療法剤に対する耐性の発現をもたらす。例えば、癌におけるゲムシタビン耐性は深刻な問題である。ゲムシタビンが、肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌、及び卵巣癌で承認され、少なくとも肝臓癌及び食道癌の治療のために研究されていて、リンパ腫及びその他の癌の治療に実験的に使用されているので、大多数の癌患者は何れかの時点で結局はゲムシタビン治療を受けることになる。薬剤が承認されている症例の３分の１に効果があっても、大部分は応答せず、応答する患者でさえも最終的に耐性を生じる。
【０００３】
ゲムシタビン耐性は、膵臓癌において、これに対して他に実績のある化学療法が無いので、特に問題がある。多くのタイプの癌の治療における進歩にもかかわらず、膵臓癌は低い長期生存率を有して治療が難しいままである。２００４年には、米国におけるこの疾患の推定発症数は３１，６８０人であり、予定死亡数３１，２７０人である。新薬開発の１つの制約は、適当な前臨床モデルを欠くことである。
【０００４】
概して、膵臓外分泌腺の癌患者の約５％が癌発見後５年間生存すると考えられている。局所性(local)疾患の患者についてさえ、５年相対生存率は約２０％である。局所(regional)疾患を有する患者については、５年相対生存率が約８％である。転移があると、５年相対生存率は２％である。ゲムシタビンが膵臓癌患者の治療について承認されているとはいえ、約７５％〜９０％の患者はこの治療からごく僅かな恩恵にしかあずかっていない。第１選択肢のゲムシタビン治療に失敗した後に、進行膵臓癌患者に、証拠に基づく治療勧告を何も与えることができない。
【０００５】
ここ数年にわたって、かなりの数の臨床試験において、膵臓癌における新薬の効果を単独で又はゲムシタビンと併用して検討している。これらの検討の結果は殆どが否定的であった。第２相試験における活性データにもかかわらず、今まで行われてきた検討においては、薬剤単独又は併用戦略は何れもゲムシタビン単独より優れていなかった。このことは、従来の薬剤ばかりではなく、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）及びファルネシル基転換酵素阻害剤（ＦＴＩ）のような標的薬剤にもあてはまる。
【０００６】
ゲムシタビン治療に失敗した膵臓癌患者の適切な治療を確認するために検討が行われたが、結果は雑多になっている。ある検討では、治療は、ドセタキセル（docetaxel）６５ｍｇ／ｍ２及びイリノテカン（irinotecan)１６０ｍｇ／ｍ２で構成され、両者を２１日毎に投与した。過度の毒性によって、検討を終了する前に１４人の患者が登録された。最もよく見られたグレード３／４毒性は、好中球減少／白血球減少、悪心嘔吐、及び下痢を含んでいた。完全に半分の患者は１治療サイクルのみを受け、平均治療不履行期間は３６日であった。他覚的反応は観察されなかったが、３人の患者は少なくとも６治療サイクルの間症状が安定していた。全コホートに対する全体的生存日数は１３４日で、６ヶ月の生存率は３６％であった。別の検討において、ゲムシタビン耐性膵臓癌の患者をＳ−１とシスプラチン（ＣＤＤＰ）で治療して、応答率及び毒性が確認された。登録患者１７人のうち５人（２９．４％）が部分的応答に達し、２人（１１．８％）の病状が安定していた。治療による毒性は許容できるものであった。平均生存日数は１０ヶ月（幅、２０ヶ月）で、６ヶ月及び１２ヶ月の患者生存率は、それぞれ６３．７％及び３１．９％であった。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様では、本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌を有する対象の癌を治療する薬剤としての、有糸分裂攪乱物質／ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）経路阻害剤の使用方法を提供する。このような対象は、それらの癌が最初はヌクレオチド類縁化学療法剤での治療に感受性があったが、その後にヌクレオチド化学療法剤に対する耐性の発現（すなわち、耐性腫瘍を発生）によって化学療法に失敗した対象を含んでいる。
使用方法は、ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性があって、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤による治療に感受性がある癌種を有していると確認された対象へ投与するための薬剤として、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を製造することを含んでいる。
ある態様では、対象はヌクレオチド類縁化学療法剤に対する耐性を有しているか或いは耐性が発現している。
方法は更に、癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察することを含み、ここで薬剤は癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化をもたらす。
ある態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤をヌクレオチド類縁化学療法剤と併用投与する。
ある態様では、使用方法はヌクレオチド類縁化学療法剤耐性を逆転させることを含んでいる。
【０００８】
一態様では、本発明は、以前にヌクレオチド類縁化学療法剤を単独で投与されている癌を有する、患者の癌を治療するための薬剤を製造するための、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の使用方法を提供し、そこでは薬剤はヌクレオチド類縁化学療法剤との併用投与のために製造され、そして対象はヌクレオチド類縁化学療法剤と有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用治療に感受性がある。
方法は更に、少なくとも１つの癌の徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察することを含んでいる。
ある態様では、方法はヌクレオチド類縁化学療法剤耐性の発現を阻害することを含んでいる。
【０００９】
ある態様では、本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤を用いる癌の治療に感受性がある対象の癌を治療するための薬剤を製造するための、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の使用方法を提供する。
方法は、ヌクレオチド類縁化学療法剤を含有している薬剤を投与する前に、随意に有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の投与と連続して、投与するための有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している薬剤の製造、及び少なくとも１つの癌の徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察することを含んでいる。
ある態様では、薬剤の使用方法は、対象のヌクレオチド類縁化学療法剤耐性を阻害することを含んでいる。
【００１０】
ある態様では、本発明は、併用投与した化合物の効果が化合物を単独で投与したときの相加的効果よりも大きくなるような、化合物の相乗効果を引き起こすための、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与を含んでいる。
ある態様では、本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している、癌治療のための薬剤として用いるための相乗作用のある組成物の製造を含んでいる。
【００１１】
ある態様では、本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び／又は有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤での治療に感受性がある癌を有している対象への、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の投与計画を含んでいる。
ある実施態様では、投与計画は、ヌクレオチド類縁化学療法剤単独投与、それに続くヌクレオチド類縁化学療法剤との有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与を含んでいる。
ある実施態様では、投与計画は、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の投与、それに続くヌクレオチド類縁化学療法剤との有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与を含んでいる。
ある実施態様では、何れかの薬剤単独の前投与が無くてもよい、ヌクレオチド類縁化学療法剤とのＰｌｋ阻害剤の併用投与を含んでいる。
ある態様では、本発明は、更なる化学療法剤及び／又は薬剤の投与を更に含んでいてもよい。
ある態様では、本発明は、２つの薬剤の併用投与の後に化学療法剤又は有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤単独の投与を更に含んでいてもよい。
【００１２】
ある態様では、本発明は、薬剤による治療に感受性がある患者のヌクレオチド類縁化学療法剤耐性癌の治療のためのヌクレオチド類縁化学療法剤と併用投与する有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している薬剤の製造を含んでいる。
【００１３】
ある態様では、本発明は、薬剤による治療に感受性がある患者の癌におけるヌクレオチド類縁化学療法剤耐性の発現を阻止するための、ヌクレオチド類縁化学療法剤と併用投与する有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している薬剤の製造を含んでいる。
【００１４】
ある態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害薬剤による治療に以前から感受性である患者の癌におけるヌクレオチド類縁化学療法剤耐性を逆転させるために使用する、ヌクレオチド類縁化学療法剤と併用投与する有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している薬剤の製造を含んでいる。
【００１５】
ある実施態様では、本発明は、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤とヌクレオチド類縁化学療法剤を含有する混合剤である、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤とヌクレオチド類縁化学療法剤の併用投与のための薬剤を含んでいる。
ある実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤とヌクレオチド類縁化学療法剤との併用投与のための薬剤は、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤のそれぞれの、両薬剤の対象への投与を可能に或いは促進する剤形への製造を包含している。
本発明の実施態様では、癌はヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌である。
本発明の実施態様では、癌は、白血病及びリンパ腫のような血液性悪性腫瘍、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群である。
【００１６】
多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤はＰｌｋ１阻害剤である。多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤はＯＮ−０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体である。本発明の多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤はＯＮ−０１９１０−Ｎａである。多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤は核酸治療剤である。多くの実施態様では、核酸治療剤はＰｌｋ１、特にヒトＰｌｋ１を標的にしている。多くの実施態様では、核酸治療剤はｓｉＲＮＡ化合物である。
【００１７】
本発明の多くの実施態様では、ヌクレオチド類縁化学療法剤は、クラドリビン、クロフェラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンである。多くの実施態様では、ヌクレオチド類縁化学療法剤はゲムシタビンである。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１Ａ及びＢは、小分子Ｐｌｋ１阻害剤である、（Ａ）ｓｉＲＮＡ Ｐｌｋ１阻害剤及び（Ｂ）ＯＮ−０１９１０−Ｎａの存在下又は非存在下でゲムシタビンによる処置に応答する６種のゲムシタビン耐性細胞株の生育阻害を示すグラフである。
【図２】図２Ａ及びＢは、ゲムシタビン感受性及び耐性腫瘍を有するマウスでのインビボ実験の結果を示す。（Ａ）は３つのインビボ実験の腫瘍生育プロットを示す。腫瘍を有するマウスを、賦形剤、ゲムシタビン、ＯＮ−０１９１０−Ｎａ及び両薬剤の併用（総量で）で処置した４群に割り振った。（Ｂ）はＡの棒グラフである。エラーバーは標準偏差を示す。
【図３】図３Ａ及びＢは、（Ａ）ＯＮ０１９１０及び（Ｂ）ヌクレオチド類縁化学療法剤、クラドリビン、クロフェラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンの構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、少なくとも一部分が、ゲムシタビン感受性腫瘍がＰｌｋ１の発現を減少した、及びゲムシタビン耐性腫瘍はＯＮ−０１９１０−Ｎａ及びヒトＰｌｋ１を対象とするｓｉＲＮＡ化合物を包含する有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤による治療に感受性があるという知見に基づいている。
また、ゲムシタビン耐性腫瘍におけるＰｌｋ１の阻害は、以前から耐性である腫瘍に対するゲムシタビン耐性に効果がある。ゲムシタビン耐性腫瘍のＰｌｋ１阻害剤による破壊に対する感受性は、インビトロにおけるゲムシタビン耐性膵臓癌細胞株、エクソビボにおけるヒトゲムシタビン耐性膵臓癌、及びマウス異種移植モデル（すなわち、インビボ）を用いて確認された。
【００２０】
ＯＮ−０１９１０−Ｎａは、Ｇ２／Ｍ細胞周期移行を混乱させて、それらのアポトーシスをもたらす紡錘体異常を特徴とする腫瘍細胞の有糸分裂停止を誘導する小分子化合物である。この効果は少なくとも部分的に、Ｐｌｋ１阻害剤としての活性に関連している。本明細書で明らかにされているように、ＯＮ−０１９１０はゲムシタビン耐性膵臓癌のインビトロ及びインビボのモデルに対して活性を有していた。
【００２１】
用語「治療した」、「治療する」又は「治療」は、治療されている状態、疾患又は病気に関連している或いはこれが引き起こす少なくとも１つの症状の消失又は軽減を含んでいる。例えば、治療は疾患の１つ又は幾つかの症状の軽減、又は疾患の完全な撲滅であってよい。治療は、以下の表に示されているようなＣＲ、ＰＲ、又はＳＤの他覚的な応答を含んでいてもよい。
【００２２】
治療に対する固形癌の応答を、例えば世界保健機関（ＷＨＯ）の基準を用いて、或いは固形癌の効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）一次元測定ガイドラインを用いて、特性化することができる。
基準を以下の表に掲載する。
【００２３】
表１
ＷＨＯ ＲＥＣＩＳＴ
測定可能性 測定可能、二次元 測定可能、一次元
従来法 ≧ ２０ｍｍ；
スパイラルＣＴ ≧ １ｍｍ；
標的vs非標的病変
測定不能／評価可能 測定不能
他覚的応答
完全奏功（ＣＲ） 全ての公知病変の消失； 全ての公知病変の消失；
４週間後に確定 ４週間後に確定
部分奏功（ＰＲ） 少なくとも５０％減少； 少なくとも３０％減少；
４週間後に確定 ４週間後に確定
安定疾患（ＳＤ） ＰＲにもＰＤ基準にも ＰＲにもＰＤ基準にも
合致しない 合致しない
進行疾患（ＰＤ） ２５％増大； ２０％増大；
ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤではない ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤではない
病変増大前に記録 病変増大前に記録
又は新病変発現 又は新病変発現
【００２４】
参照により本明細書に組み込まれている、Park et al., Measuring respnse in solid tumors: Comparison of RECIST and WHO response criteria. Jpn. J. Clin. Oncolo. 33:533-537,2003 も参照されたい。ＲＥＣＩＳＴの一次元測定評価は、全ての標的病変の最大直径のみの測定を含んでいる。
【００２５】
用語「薬剤耐性腫瘍」及び「薬剤耐性癌」等は、薬剤の存在下で又は投与によって、進行疾患（ＰＤ）基準を満たす腫瘍又は癌であると理解される。培養において、耐性細胞は、薬剤の存在下で生育を続ける細胞であると理解される。生育比は、培養中の未処理コントロール細胞に対して、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％である。薬剤耐性は、単一の、特定薬剤に対する耐性、又は多剤耐性遺伝子（ＭＤＲ）を発現する腫瘍でよく見られるような多数の薬剤に対する耐性であってよい。
【００２６】
「薬剤による治療に感受性がある腫瘍」又は「薬剤による治療に感受性がある癌」等は、薬剤の存在下で又は投与によって、ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤの基準を満たす腫瘍又は癌であると理解される。細胞培養において、感受性のある細胞は、薬剤での処置に応答して、生育／分裂を止めるか或いは死滅する細胞である。治療に感受性がある癌は、治療感受性がある癌の一種、例えば、ヌクレオチド類縁化学療法剤での治療について承認されている癌の一種、或いは検討において癌の治療について利益がもたらされた癌の一種であるとも理解できる。例えば、ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌のタイプは、これに限定されないが、白血病及びリンパ腫のような血液性悪性腫瘍、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群を包含する。
薬剤による治療に感受性がある癌は、高い頻度で薬剤による治療に応答して、薬剤に耐性の癌になり得る。
【００２７】
用語「対象」は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、及びトランスジェニック非ヒト動物を包含するように意図されている。
ある実施態様では、対象はヒト、例えば癌に罹っている、罹る危険性がある、罹る潜在的可能性があるヒトである。ヒト対象を患者と称することができる。
【００２８】
用語「癌」は、無秩序又は無制御の細胞生育によって特徴付けられる悪性腫瘍、例えば、細胞腫、肉腫、白血病、及びリンパ腫を包含する。癌は固形癌及び非固形癌を包含する。癌は膵臓を含む、何れの臓器の癌も包含する。
用語「癌」は、原発性悪性腫瘍、例えば、その細胞が原発腫瘍の部位以外の対象の体内の部位へ移行していない癌、及び二次性悪性腫瘍、例えば、腫瘍細胞の原発腫瘍の部位とは異なる第二の部位への転移、移行によって生じる癌を包含する。
【００２９】
本明細書で用いられる化合物の「治療有効量」という用語は、本明細書に記載されているように対象に投与されたときに、ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤをもたらすのに必要な或いは十分な化合物の量である。当然のことながら、互いに併用して使用するためのヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤のそれぞれの治療有効量は、単独で用いた場合に有効にするのに十分でなくてよい。治療効果を有する化合物を薬剤又は医薬品と称することができる。
【００３０】
語句「相乗的な併用」は、薬剤の併用投与の治療効果が、単一薬剤（併用）に期待される相加効果より大きい治療薬の併用を包含する。例えば、ゲムシタビン耐性である（すなわち、ゲムシタビンによる治療がＣＲ、ＰＲ、又はＳＤを誘導できない、すなわち効果がない）細胞又は腫瘍において、ゲムシタビン及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与が、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の単独投与よりも大きな治療効果を有している。
【００３１】
用語「併用投与」は、２つの薬剤が対象内に同時に存在する、及び／又は活性を有するように、癌のような単一の病気又は疾患を治療するために、対象に２つ又はそれ以上の薬剤を投与することであると本明細書では理解される。併用投与は、同時に投与する薬剤の混合剤の製造、混合及び／又は連続投与を促進する特定の担体中又は特定の濃度での薬剤の製造又は製剤化の両方を包含する。薬剤を、同じバイアル又はボトルに一緒に；或いは単一の容器(例えば、１つのボックス）内にある異なったボトル又はバイアル中に包装することができる。一緒に投与するために薬剤を特別に製剤化する必要はない。当然のことながら、異なる薬剤は異なる薬物動態及び薬力学的特性を有しているので、投与スケジュールを実質的に変えることができる。従って同時投与が必須なわけではない。ヌクレオチド類縁化学療法剤と有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与は、その他の化学療法剤又はその他の薬剤の投与を排除しない。併用投与の投与計画の例は以下に提供されている。
【００３２】
語句「薬学的に許容される担体」は、当該技術分野で認識されているものであって、本明細書に記載されている方法で用いられる化合物を対象、例えば哺乳動物に投与するのに適している、薬学的に許容される物質、組成物、又は賦形剤を包含する。担体は、対象薬剤をある臓器又は体の部分から別の臓器又は体の別の部分へ運搬或いは移送するのに関与する、液体又は固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒又は封入剤を包含する。それぞれの担体は、製剤の別の成分と適合性があり、そして患者に有害ではないという意味で、「許容されて」いなければならない。薬学的に許容される担体の機能を果たす物質の幾つかの例は、乳糖、ブドウ糖及び蔗糖のような糖類；コーンスターチ及びジャガイモ澱粉のような澱粉類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースのようなセルロース及びその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバター及び坐薬用ワックスのような賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ごま油、オリーブ油、コーン油及び大豆油のような油類；プロピレングリコールのようなグリコール類；グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールのようなポリオール類；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルのようなエステル類；寒天；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；及び医薬製剤で用いられるその他の非毒性適合性物質を包含する。
【００３３】
本発明の化合物
本発明の好ましい組成物及び方法は、Ｐｌｋ１阻害剤ＯＮ−０１９１０−Ｎａ（（Ｅ）−２，４，６−トリメトキシスチリル−３−（カルボキシメチルアミノ）−４−メトキシベンジルスルホン（図３Ａ））、及びジェムザール（Gemzar（登録商標））としても知られている、ゲムシタビン（４−アミノ−１−［３，３，−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２−オン（図３Ｂ））の使用を包含している。
【００３４】
本明細書で用いられている用語「有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤」等は、Ｐｌｋ（例えば、Ｐｌｋ１、Ｐｌｋ２、Ｐｌｋ３、又はＰｌｋ４）のキナーゼ活性又は細胞中のＰｌｋの活性を、例えばＰｌｋの発現を減少させて阻害するか、又はＰｌｋの活性を直接、若しくはＰｌｋ（特にＰｌｋ１）シグナル伝達経路の成分を阻害することにより阻害し；そして有糸分裂攪乱物質としての活性を有する何れの組成物も包含する。
好ましい実施態様では、阻害剤は、非Ｐｌｋキナーゼの活性と比べてＰｌｋの活性を選択的に阻害する。Ｐｌｋ阻害剤が、非Ｐｌｋキナーゼの阻害と比較したＰｌｋキナーゼの阻害において、２倍、５倍、１０倍、又は２０倍大きい活性を有していることが好ましい。Ｐｌｋ阻害剤は、１つ又はそれ以上のＰｌｋアイソフォームに対して特異的であってよい。また、Ｐｌｋ阻害剤の活性は、阻害剤の存在下及び非存在下においてＰｌｋのキナーゼ活性を比較することによって測定することができる。Ｐｌｋ阻害剤は、Ｐｌｋキナーゼ活性を、非処理コントロールと比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％阻害する。
【００３５】
Ｐｌｋ阻害剤は、細胞中のＰｌｋ活性を、細胞におけるＰｌｋの発現を阻害することによって、例えば、Ｐｌｋ標的アンチセンス、又は適切な種のＰｌｋ（例えば、ヒトＰｌｋ１は、２００８年４月６日に更新した、第３版の、GenBank No NM_005030である；ヒトＰｌｋ２は、２００８年２月１０日に更新した、第２版の、GenBank No. NM_006622である；ヒトＰｌｋ３は、２００８年２月１１日に更新した、第２版の、GenBank No.NM_004073である；ヒトＰｌｋ４は、２００６年１０月１７日に更新した、第１版の、GenBank No.Y13115である;全てのGenBank number は参照により本明細書に組み込まれている）を標的とするｓｉＲＮＡ剤を用いて、阻害することができる。アンチセンスオリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡ化合物を設計、合成、試験及び投与する方法は当該技術分野において公知である。例えば、米国特許公開第２００５０１０７３２８号公報及び同第２００７０２６５４３８号公報を参照されたい。これらは両方、参照により本明細書に組み込まれている。
【００３６】
Ｐｌｋの発現を減少又は阻害する化合物で処理した規定量の細胞又は細胞抽出物中のＰｌｋ１の活性を、同じ規定量の非処理細胞又は細胞抽出物と比較する。阻害は、本明細書、又は例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０７２０６２号公報（参照により本明細書に組み込まれている）に開示されているような、何れかの標準的なキナーゼアッセイを用いて測定することができる。本発明の有糸分裂攪乱物質及びＰｌｋ阻害剤も、顕微鏡、蛍光活性化細胞分類、又はその他の方法で容易に観察できるように、有糸分裂を攪乱する。
【００３７】
有糸分裂攪乱物質は、例えば、中心体分布の攪乱、細胞質分裂の低下、異常な染色体数、及び細胞周期チェックポイントにおける不可逆的ブロックによって、正常な有糸分裂の達成を阻止する。本発明の方法で用いる有糸分裂攪乱物質は、非処理コントロールと比較して、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれ異常の細胞において、有糸分裂の達成を阻止する。
【００３８】
本発明の多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤は小分子である。本明細書で用いられる用語「小分子」は、比較的低分子量（例えば、約７５００未満、約５０００未満、約１０００未満の分子量、又は約５００未満の分子量）を有していて、タンパク質、ポリペプチド、又は核酸ではない、天然の或いは人工的に生成された（例えば、化学合成によって）、有機化合物を示す。一般に小分子は、約１５００ｇ／モル未満の分子量を有している。また、小分子は通常、複数の炭素−炭素結合を有している。ある実施態様では、小分子はペプチド（アミド）結合を含有することに限られない。別の実施態様では、小分子はオリゴマーではない。典型的な小分子化合物は、これに限定されないが、ペプチド類似物、有機小分子（例えば、Cane et al. 1998, Science 282:63; 参照により本明細書に組み込まれている）、及び天然物の抽出物ライブラリーを包含する。別の実施態様では、化合物は小分子の有機非ペプチド化合物である。更なる実施態様では、小分子は生合成のものではない。例えば、小分子はそれ自体が転写又は複製の産物ではないことが好ましい。
【００３９】
本発明の多数の実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤は核酸治療薬である。本明細書で用いられる用語「核酸治療薬」等は、ヌクレオチドを含有していて標的遺伝子に対して望ましい効果を有している、核酸からなる何れかの化合物を示す。核酸治療薬は、一本鎖、二本鎖又は複数鎖であってよく、改変若しくは非改変ヌクレオチド又は非ヌクレオチド又は多数の混合物、及びこれらの組み合わせであってよい。本開示の核酸治療薬の例は、これに限定されないが、アンチセンス核酸、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及び酵素核酸化合物を包含する。
【００４０】
Ｐｌｋ１阻害剤は、Ｐｌｋ１の活性を阻害する、好ましくはＰｌｋ１の活性を特異的に阻害する、ＯＮ−０１９１０−Ｎａの多数の誘導体の何れかを包含することができる。例えば、Ｐｌｋ１阻害剤は、式（Ｉ）の何れかの化合物であると理解される「ＯＮ−０１９１０−Ｎａ及びその誘導体」、又はそのような化合物の塩を包含する。
【００４１】
【化１】
【００４２】
式中のＸは、以下の（ｉ）及び（ｉｉ）よりなる群から選ばれる。
【００４３】
【化２】
【００４４】
Ｘ１は、以下の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）よりなる群から選ばれる。
【００４５】
【化３】
【００４６】
ここにおいて、Ｘ１は１個又はそれ以上の化学保護基で保護されていてもよい。
ｇは０であるか又は次の通りである。
それぞれのＭは、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキレン−、−（ＣＨ２）ａ−Ｖ−（ＣＨ２）ｂ−、−（ＣＨ２）ｄ−Ｗ−（ＣＨ２）ｅ−、及び−Ｚ−よりなる群から独立して選ばれる２価の連結基である。
それぞれのｙは、０及び１よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのＶは、アリーレン、ヘテロアリーレン、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキレン−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４−、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ４−及び−ＳＯ２ＮＲ４−よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのＷは、−ＮＲ４−、−Ｏ−及び−Ｓ−よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのａは、０、１、２及び３よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのｂは、０、１、２及び３よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのｄは、１、２及び３よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのｅは、０、１、２及び３よりなる群から独立して選ばれる。
−Ｚ−は、
【００４７】
【化４】
【００４８】
である。
ここにおいて、-Ｚ-の絶対立体化学はＤ又はＬ或いはＤとＬとの混合物である。
それぞれのＲａは、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）3−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）（＝ＮＨ）、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＳＨ、−（ＣＨ２）２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−（２-イミダゾリル）、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）４-ＮＨ２、−（ＣＨ2）２−Ｓ−ＣＨ３、フェニル、−ＣＨ２−フェニル、−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−（３−インドリル）、−ＣＨ２−（４−ヒドロキシフェニル）−ＣＨ（ＣＨ３）２及び−ＣＨ２−ＣＨ３よりなる群から独立して選ばれ、そしてＲａとＲ１が結合して５、６、又は７員の複素環を形成している化合物を包含する。
【００４９】
それぞれのＲ１は、−Ｈ、非置換アリール、置換アリール、置換複素環、非置換複素環、−ＣＯ２Ｒ５、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ４２、 −ＣＲ４Ｒ６Ｒ７、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＲ４２、−（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、ＣＦ２Ｃｌ、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ４）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ４）２、及び１０００未満の分子量を有する１価のペプチジル残基よりなる群から独立して選ばれる。但し、ｙが０及びＲ’がＣＯ２Ｒ5の場合は、Ｒ５は−Ｈではない。
【００５０】
それぞれのＲ２は、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、及びアリール（Ｃ１−Ｃ３）アルキルよりなる群から独立して選ばれる。ここで、−Ｒ２と−（Ｍ）ｙ−Ｒ１は、任意に共有結合して５、６、又は７員の置換又は非置換複素環を形成してもよい。
それぞれのＲ３は、独立して−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選ばれる。
それぞれのＲ４は、−Ｈ、及び−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルよりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのＲ５は、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル及び−（Ｃ１−Ｃ６）アシルよりなる群から独立して選ばれる。
【００５１】
それぞれのＲ６は、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯ２Ｒ５、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、ＯＲ５、−ＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｒ５、−ＳＲ４、グアニジン、−ＮＲ４２、−ＮＲ４３＋、−Ｎ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＲ５）３、フェニル、置換フェニル、複素環、置換複素環及びハロゲンよりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのＲ７は、−Ｒａ、ハロゲン、−ＮＲ４２、及び２個の窒素原子を含有する複素環よりなる群から独立して選ばれる。そして
Ｑは、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル及び−ＮＲ４２よりなる群から選ばれる。
【００５２】
ここにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒａ、Ｒ６及びＲ７を含有している或いはこれに含まれる置換アリール及び置換複素環基についての置換基は、ハロゲン、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＮＯ２、−Ｃ-＝Ｎ、−ＣＯ２Ｒ５，−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、-ＯＲ５、−（Ｃ２−Ｃ６）アルキレン−ＯＨ、ホスホナート、−ＮＲ４２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、スルファミル、−ＯＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、−Ｏ（Ｃ２−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２及び−ＣＦ３よりなる群から独立して選ばれる。
【００５３】
但し、
（１）Ｒ１が分子量１０００未満の１価ペプチジル残基であり、Ｖが−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−又は−ＳＯ２−であり、そしてｂが０である場合は、
当該ペプチジル残基は、ペプチジル残基のアミノ末端を介して、又は側鎖アミノ基を介してＭと結合して、それぞれアミド、チオアミド、スルフィンアミド又はスルホンアミドを形成する。
【００５４】
（２）Ｒ１が分子量１０００未満の１価ペプチジル残基であり、Ｖが−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４−又は−ＳＯ２ＮＲ４−であり、そしてｂが０である場合は、
当該ペプチジル残基は、ペプチジル残基のカルボキシ末端を介して、又は側鎖カルボキシル基を介してＭと結合して、それぞれイミド又はスルホンアミドを形成する。及び
【００５５】
（３）Ｒ１が分子量１０００未満の１価ペプチジル残基であり、Ｗが−ＮＲ４−、−Ｓ−又は−Ｏ−であり、そしてａが０である場合は、
当該ペプチジル残基は、ペプチジル残基のカルボキシ末端を介して、又は側鎖カルボキシル基を介してＭと結合して、それぞれカルボキサミド、カルボチオ酸エステル又はカルボン酸エステルを形成する。
その他のＯＮ０１９１０−Ｎａ誘導体、合成法、及び化合物の活性はＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０７２０６２号公報中で見出すことができる。
【００５６】
本明細書で用いられる「ヌクレオチド類縁化学療法剤」は、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、及びチオグアニンのようなプリン類縁体；又はカペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンのようなピリミジン類縁体である。このような化合物は、図３に示されているように構造的に類似し、通常糖基に結合している窒素を有していて、少なくともＤＮＡ合成を攪乱することによって作用する。このような化合物は当該技術分野において公知である。
【００５７】
用量及び製剤
本発明の化合物は、局所に、経腸的に、又は非経口的に投与することができる。局所投与は、例えば、これに限定されないが、皮膚上、浣腸、点耳、鼻腔内、及び膣内投与を包含する。経腸投与は、例えば、口による（経口で）、経胃栄養チューブ、経十二指腸栄養チューブ、又は胃瘻増設術的に、及び坐薬又は浣腸形態での経直腸投与である。非経口投与は、これに限定されないが、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、皮下、骨内点滴（骨髄内へ）、皮内、髄内、及び腹腔内を包含する。
【００５８】
好ましい実施態様では、本発明の化合物は静脈内に投与される。
【００５９】
本発明の方法で用いられる化合物は、このような投与のための、当該技術分野で知られている薬学的に許容される剤形の何れかを用いて経口投与することができる。化合物は、乾燥粉末、顆粒、錠剤或いはカプセルのような固体剤形、又はシロップ或いは水性懸濁液のような液体剤形で供給することができる。化合物は単独で投与することができるが、通常は医薬担体と共に投与される。剤形に関する有益な論文は Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing である。
【００６０】
本発明の方法で用いられる化合物は、錠剤、カプセル（これらは、それぞれ持続放出又は徐放型製剤を包含する）、丸剤、粉末、顆粒、エリキシル、チンキ剤、懸濁液、シロップ、及び乳剤のような経口用剤形で投与することができる。同様に、これらは、静脈内（注射又は点滴）、腹腔内、皮下、又は筋肉内用の形態でも投与することができ、用いられる全ての剤形は当業者に公知である。
【００６１】
本発明の方法で用いられる化合物は、ヒト又は哺乳動物のような宿主の体内に、化合物の作用部位で、化合物の接触を生じさせる、何れかの手段で投与することができる。これらは、単独で、或いは選択され投与経路及び標準的な製薬プラクティスに基づいて選択された医薬担体と共に投与することができる。
【００６２】
本発明で確認された化合物についての投与計画は、勿論、公知の因子、例えば、特定薬剤の薬力学的特性及びその投与の方法及び経路；受容者の種、年齢、性別、健康状態、医学的状態、及び体重；症状の特質及び程度；並行治療の種類；治療の頻度、投与経路；患者の腎臓及び膵臓の機能；及び望まれる効果によって変わるだろう。通常の知識を有する医師又は獣医師は、対象に投与する化合物の有効量を容易に決定することができる。
【００６３】
本発明の方法で用いられる化合物は、適切な鼻腔内賦形剤の局所使用によって鼻腔内形態で、又は当業者に周知の経皮吸収パッチのそれらの形態を用いて経皮経路で投与することができる。
【００６４】
本発明の方法では、本明細書に記載されている化合物は、意図する投与形態、すなわち、経口用錠剤、カプセル、エリキシル、シロップなどに関して、そして従来の製薬プラクティスに従って、適切に選択された適切な製薬用希釈剤、賦形剤、又は担体（本明細書では担体物質と総称する）と混合して投与することができる。
【００６５】
例えば、錠剤又はカプセルの形態で経口投与するために、活性薬物成分を、乳糖、澱粉、蔗糖、ブドウ糖、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、第２リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール等のような経口用の、非毒性の、薬学的に許容される、不活性担体と組合わせることができ；液体形態で経口投与するために、活性薬物成分を、エタノール、グリセロール、水等のような経口用の、非毒性の、薬学的に許容される、不活性な何れかの担体と組合わせることができる。さらに望ましい場合或いは必要な時に、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、及び着色剤も混合剤に組み入れることができる。適切な結合剤は、澱粉、ゼラチン、ブドウ糖又はβ−ラクトースのような天然の糖類、トウモロコシ甘味剤、アカシアゴム、トラガカント又はアルギン酸ナトリウムのような天然及び合成のゴム類、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス類等を包含する。これらの剤形で用いられる滑沢剤は、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等を包含する。崩壊剤は、これに限定されないが、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等を包含する。
【００６６】
本発明の方法で用いられる化合物は、小さい単層ベシクル、大きい単層ベシクル、及び多層ベシクルのような、リポソーム送達システムの形態で投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、又はホスファチジルコリンのような、多種のリン脂質から形成することができる。
【００６７】
本発明の方法で用いられる化合物は、標的化可能薬物担体としての可溶性ポリマーに結合させることもできる。このようなポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、又はパルミトイル残基で置換したポリエチレンオキシドポリリジンを包含できる。更に、本発明で確認された化合物を、薬物の制御放出を達成させるために有用な生物分解性ポリマーの類、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸の共重合体、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリジヒドロピラン類、ポリシアノアクリレート、及びヒドロゲルの架橋又は両親媒性ブロック共重合体、と結合させることができる。
【００６８】
ゼラチンカプセルは、活性成分と、乳糖、澱粉、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等のような、粉末化担体を含有することができる。同様の希釈剤を圧縮錠を製造するために用いることができる。錠剤とカプセルの両方を、数時間をかけて薬物の連続放出をもたらすように持続放出製剤として製造することができる。圧縮錠は、不快な味を隠して錠剤を大気から保護するために、糖衣又はフィルムを掛けるか、或いは腸管内で選択的に崩壊するように腸溶性コーティングすることができる。経口投与のための液体剤形は、患者の容認を増すために、着色剤及び着香剤を含有することができる。一般に、水、適切なオイル、食塩水、水性デキストロース（ブドウ糖）及び関連する糖溶液、及びプロピレングリコール又はポリエチレングリコールのようなグリコール類が、非経口溶液の適切な担体である。
【００６９】
非経口投与のための溶液は、活性成分の水溶性塩、適切な安定化剤、そして必要により、緩衝物質を含有することが好ましい。亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、又はアスコルビン酸のような抗酸化剤の単独又は組み合わせの何れかが適切な安定化剤である。クエン酸及びその塩、並びにＥＤＴＡナトリウムも用いられる。更に、非経口用溶液は、塩化ベンザルコニウム、メチル又はエチルパラベン、及びクロロブタノールのような、防腐剤を含有することができる。静脈内に投与される化合物は、多くの場合生理食塩水中で送達される。
【００７０】
適切な医薬担体は、この技術分野で標準的な参考文献である、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company に記載されている。適切な担体による製剤化は当業者の能力の範囲内である。
【００７１】
ヌクレオチド類縁化学療法剤の投与
ヌクレオチド類縁化学療法剤の投与計画は当該技術分野で公知であって、治療する癌の重症度及びタイプによって変化する。化学療法計画の幾つかの例を以下の表に挙げている。記載されている全ての参考文献は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００７２】
表２
化学療法剤 疾患 参考文献
投与計画
クラドリビン 無痛性非ホジキンリンパ腫 Blum et al., Cancer
107:2817-2825. 2006
0.14mg/kg/day×5日 4週毎×6
無痛性リンパ増殖性疾患及び Robak et al., Cancer
マントル細胞リンパ腫 107:1542-1550. 2006
１．リツキサマブ 375mg/m2 1日目、
クラドリビン 0.12mg/kg/day、
2-6日目 4週毎
２．リツキサマブ 375mg/m2 1日目、
クラドリビン 0.12mg/kg/day、
2-4日目 及び
シクロホスファミド 250mg/m2
2-4日目 4週毎
クロファラビン 慢性リンパ性白血病 Ghandi et al.,
Cancer Therapy
3-4mg/m2/day, 1-5日目 4週毎 12:4011-4017
15mg/m2/day, 1-5日目 4週毎
フルダラビン 慢性リンパ性白血病 Rai et al., NEJM
343:1750-1757, 2000.
25mg/m2/day, 1-5日目 4週毎
25mg/m2/day, 1-5日目 4週毎
＋20mg/m2 クロラムブシル 4週毎
メルカプトプリン 急性リンパ芽球性白血病 Bostrom et al.,
Blood 101:
経口−37mg/m2/day, 0-70日目* 3809-3817, 2003.
静注−1000mg/m2/day, 0, 7, 14, 21,
28, 35, 42, 49, 56, 63, 及び70日目*
ペントスタチン 慢性リンパ性白血病 Kay et al., Blood.
109:405-411, 2007.
2mg/m2 ペントスタチン
600mg/m2 シクロホスファミド
375mg/m2 リツキサマブ
21日毎 6サイクル
チオグアニン 悪性神経膠腫 Levin et al.,
Neuro-oncology,
30mg/m2 経口 チオグアニン 109:405-411, 2007.
12回投与の間、6時間毎(0-66時目);
50mg/m2 経口 プロカルバジン
4回投与の間、6時間毎(60-78時目);
400mg/m2 経口 ジブロモダルシトール
1回投与(60時目);
110mg/m2 経口 ロムスチン
1回投与(72時目);
1.4mg/m2 静注 ビンクリスチン
14及び28日目 6-7週毎×6
カペシタビン 直腸癌 Hospers et al.,
Ann. Surg. Oncol.
100mg/m2 経口 カペシタビン 14:2773-2779,
2回/日, 1-14及び25-38日目
＋ オキサリプラチンの用量を漸増して
シタラビン 骨髄性白血病 von Lilienfeld-Toal
et al., Hemtolog
100mg/m2 シタラビン持続注入 1-5日目 92:1719-1720
及び 5mg/m2 イダルビシン持続注入 1-5日目
デシタビン メラノーマ又は腎細胞癌 Gollob et al.,
Clin. Can. Res.
0.1-0.3mg/kg/dose 皮下注、 12:4619-4627
1-5及び8-12日目、
高用量のＩＬ−２と共に3-4及び6-8週目
任意に、１２週毎に更に２サイクル
フルオロウラシル 胃癌 Kim et al.,
Jpn. J. Clin. Oncol.
150mg/m2 イリノテカン 1日目 及び 37:744-749
20mg/m2 IdL V、次いで400mg/m2 (急速注入)、
及び 600mg/m2 (22時間連続注入）
５−ＦＵ 1及び2日目 14日毎
フロクスウリジン 転移性大腸癌 Xu et al.,
Ann. Surg.
胃十二指腸動脈注入 245:583-590
500mg ＦＵＤＲ
50mg オキサリプラチン
2.5mg デキサメタゾン
サパシタビン 前立腺癌、乳癌、肺癌を含む固形癌 Dalaunoit et al.,
Invest New Drugs,
1.5,12,20,25,30,50,67,90,120, 24:327-333, 2006.
160及び220mg/m2/day 経口、
最大耐性用量 160mg/m2/day
＊メルカプトプリンはビンクリスチン、メトトレキサート、及びプレドニゾン又はデキサメタゾンと併用投与した。
【００７３】
ゲムシタビン投与
ゲムシタビンを単一で用いて、又は他の薬剤と併用して、多種の癌を治療するための数多くのゲムシタビン投与計画が確立されている。例えば、単一薬剤として又は他の化学療法剤と併用して、１０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜１２００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量範囲が胆道癌の治療研究で用いられた。１サイクル当たり投与の頻度及び回数を変化させた（例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Pastorelli et al., Ann. Oncol. 17:V153-157, 2006 を参照されたい）。８００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜１０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量範囲がステージＩＩＩＢ若しくはＩＶの非小細胞肺癌の治療研究で用いられた（例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Rocha Lima et al., Ann. Oncol. 15:410-418, 2004 を参照されたい）。尿路上皮の進行性移行性細胞癌、再発性ホジキンリンパ腫、膵臓癌、及び腎臓癌の治療研究において、同様な用量が投与された。
【００７４】
公開されている投与計画の例を以下の表に示している。
【００７５】
表３
進行性胆道癌における単独薬剤投与（Pastorelli et al., 2006.から部分的に複写した）
著 者 ゲムシタビン投与スケジュール
Metzger et al. 1000mg/m2/wk×7 次に1×/wk×3, 4週毎
Valencak et al, 1200mg/m2 days 1, 8,及び15、4週毎
Dobrilla-Dintinjana et al. 1000mg/m2/wk×7
Kubika et al., 10mg/m2/wk×7 次に 1×/wk × 3, 4週毎
Arroyo et al., 1000mg/m2 days 1,8,及び15, 4週毎
Gebbia et al., 1000mg/m2 days 1,8,及び15, 4週毎
Penz et al., 2200mg/m2 days 1, 2週毎
【００７６】
表４
非小細胞肺癌におけるドキセタキセル（Ｄｏｘ）とゲムシタビン（ｇｅｍ）の併用療 法（Rocha Lima et al., 2004. から部分的に複写した）
研 究 計 画
Dox 8日目 - gem 1及び8日目
Rebattu et al. Dox 85mg/m2 8日目 + gem 1000mg/m2 1及び8日目, 3週毎
Amenedo et al. Dox 85mg/m2 8日目 + gem 1000mg/m2 1及び8日目, 3週毎
Lizon et al. Dox 75mg/m2 8日目 + gem 1000mg/m2 1及び8日目, 3週毎
Georgoulias et al. Dox 100mg/m2 8日目 + gem 900mg/m2 1及び8日目, 3週毎 + G-CSF 150μg/m2 9-15日目 3週毎
Dox 1日目 - gem 1及び10又は15日目
Hejma et al. Dox 80mg/m2 1日目 + gem 1000mg/m2 1及び10日目
+ G-CSF 5μg/m2 2-8日目 3週毎
Vewntriglia et al. Dox 75mg/m2 1日目 + gem 1000mg/m2 1及び15日目, 3週毎
毎週又は隔週投与計画
Popa et al. Dox 40mg/m2 1及び8日目 + gem 1000mg/m2 1及び8日目, 3週毎
Manendez ert al. Dox 36mg/m2 1，8及び15日目 + gem 1000mg/m2 1，8及び15日目,
4週毎
McKey et al. Dox 30mg/m2 1，8及び15日目 + gem 800mg/m2 1，8及び15日目,
4週毎
Syrigos et al. Dox 80mg/m2 1日目 + gem 1000mg/m2 1日目 15日毎
Neubauer et al. Dox 36mg/m2 1, 8, 15, 22, 29及び36日目
+ gem 900mg/m2 1, 8, 22 及び29日目, 8週毎
【００７７】
本発明の方法では、ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ、好ましくは約７００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１３００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ、好ましくは約８００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１２００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与することができる。より高い用量比及びより低い用量比も可能である。この用量を１週間当たりの単回用量として投与してもよく、或いは複数の用量に分割してもよい。投与の速度（用量が投与される時間）を変えることができる。投与の頻度はサイクル当たり１、２、３回、又はそれ以上であってよい。サイクルは、１、２、３、４、５、６、７、８週間又はそれ以上であってよい。サイクルの回数は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回又はそれ以上、或いは所望の治療結果に到達するまで、又は副作用によって投与が制限されるまででもよい。
【００７８】
ＯＮ０１９１０投与
ＯＮ０１９１０−Ｎａは、異なった用量及び投与スケジュールを用いて臨床試験において検討されている。ある検討では、用量範囲が１６０〜８７４０ｍｇ／ｗｅｅｋであって、１週間当たり２用量に分割して、４週間おきに、連続３週間投与された。（４週間毎に、連続３週間、週に２回、２時間点滴。検討された用量範囲は８０ｍｇ〜４３７０ｍｇであった。更に試験するために推奨されるこのスケジュール当たりの用量は、３１２０ｍｇである。）体表面積を約１．８ｍ２と仮定すると、この用量は約９０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約４８５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋである。
【００７９】
別の検討では、ＯＮ０１９１０−Ｎａが週１回の連続スケジュールに沿って２４時間点滴として投与された。用量範囲は２５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜２７５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋであった。
【００８０】
別の検討では、ＯＮ０１９１０−Ｎａが２週間おきに７２時間点滴として投与された。用量範囲は５０ｍｇ／ｍ２／ｄａｙ〜４００ｍｇ／ｍ２／ｄａｙ（すなわち、７５ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜６００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ）であった。
【００８１】
ＯＮ０１９１０−Ｎａの安全性プロフィールは、ラットとイヌを用いる２つの標準的な毒性動物試験で確認された。ラットでは、３００及び６００ｍｇ／ｍ２の単回投与では毒性を引き起こさず、１２００ｍｇ／ｍ２はほんの少しの毒性（肛門性器の汚れ）を有していた。用量を３０００ｍｇ／ｍ２に増量すると１１匹のうち９匹の動物が死亡した。７日の反復投与（１２００ｍｇ／ｍ２）において、投与期間中に１３匹のうち２匹のラットが死亡した。１２匹の雄性ラット及び１２匹の雌性ラットからなる群を用いる、２８日の反復投与では、１８０ｍｇ／ｍ２及び４５０ｍｇ／ｍ２の固定１日用量が耐性であった。４週間にわたって週２回投与する９００ｍｇ／ｍ２の用量にもよい耐性があった。
イヌでは、２０００及び４０００ｍｇ／ｍ２の急性投与は、投与中に別の不快な徴候（もがき、啼鳴）と共に、胃腸への影響（下痢、鼓腸）を生じた。７日の静脈内反復投与で、１日当たり１０００ｍｇ／ｍ２はイヌによく耐性であった。２８日の反復投与で、１日当たり２００及び５００ｍｇ／ｍ２の静脈投与に、３匹の雄性及び３匹の雌性ビーグル犬よりなる群で２８日にわたってよい耐性であった。１０００ｍｇ／ｍ２で始めた高用量群は、８日後に毒性の徴候を何も示さなかった。用量漸増式検討に基づき、この用量スケジュールに対して毒性をもたらさない最高用量が、２８日間で約１５００〜２０００ｍｇ／ｍ２であると試算された。４週間にわたって１週間当たり１０００ｍｇ／ｍ２で２回処置した、６匹のイヌからなる別の群は、臨床的な問題も無く、この化合物に耐性であった。これらの毒性の検討において、有意な骨髄毒性、神経障害、又は心臓毒性の徴候は無かった。結果を以下の表に要約してある。（参照により本明細書に組み込まれている、Gumlreddy et al., Cancer Cell, 7:275-286, 2005. から複写している。）
【００８２】
表５
種 投与スケジュール ＭＴＤmg/m2 ＳＴＤ/ＬＤ１０mg/m2 ＨＮＳＴＤmg/m2
急速静注
ラット 単回投与 ＞１２００ ＜３０００ −−
（死亡なし） （９／１１死亡）
ラット ７日反復投与 １２００ −−
（２／１３死亡）
ラット ２×／ｗｋ、 ＜２１００ −−
４ｗｋｓ （５／９死亡）
ラット ２８日反復投与 ４５０ ＜９００ｎ −−
（１／３６死亡） （１１／３６死亡）
ラット ２×／ｗｋ、 ９００ −−
４ｗｋｓ （１／２４死亡）
イヌ 単回投与 ＞４０００ ２０００
イヌ ７日反復投与 ＞１０００ ＞１０００
イヌ ２×／ｗｋ、 ＞１０００
４ｗｋｓ
イヌ ２８日反復投与 ＞１０００ ２５００ １５００−
２０００
ＭＴＤ、最大耐性用量； ＳＴＤ、高毒性用量；ＬＤ１０、動物１０％の致死用量；
ＨＮＳＴＤ、最高無毒性用量。
【００８３】
本発明の方法では、ＯＮ０１９１０−Ｎａ及びそれらの誘導体は、約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ、又は約９０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜４８５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与できる。より高い及びより低い用量比も可能である。この用量を、１週間当たりの単回用量で投与してもよく、或いは複数回投与に分割することができる。投与の速度（この用量を投与する時間）は変えることができる。投与の頻度を１サイクル当たり１、２、３回、又はそれ以上とすることができる。サイクルは１、２、３、４、５、６、７、８週間又はそれ以上とすることができる。サイクル数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０サイクル又はそれ以上、或いは所望の治療結果に到達するまで、又は副作用によって投与が制限されるまででもよい。
【００８４】
上記の Rocha Lima 由来の表に示されているように、単剤として或いは併用化学療法計画としてのゲムシタビンの投与に対するスケジュール及び投与量は類似している。上記の表に又はゲムシタビンの投与についての当該技術分野において提供されている投与計画の何れも、ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体について上で述べられている投与計画と組み合わせることができる。当然のことながら、医師又は腫瘍学の当業者は該当する特定個人に対して投与計画を変えることができ、そして別の投与計画が可能である。
【００８５】
当然のことながら、化学療法剤の投与によって一般に生じる望ましくない副作用（例えば、好中球減少、感染、悪心）に従って、投与の特定の用量及びタイミングを化学療法剤とともに修正することができる。
【００８６】
本明細書で示されている範囲は、範囲内の全ての値についての省略した表現であると理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０を含む群からの、何れかの数、数の組み合わせ、又は下位の範囲を包含していると理解される。
【００８７】
特段の記述があり又は文脈から明瞭である場合を除き、本明細書で用いらられている用語「又は」は包括的なものと理解される。
【００８８】
特段の記述があり又は文脈から明瞭である場合を除き、本明細書で用いられている用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は単数又は複数であると理解される。
【００８９】
本明細書における可変基の何れかの定義において化学基の列挙の記載は、単一基の何れか又は列挙された基の組み合わせの何れかとしての可変基の定義を含んでいる。本発明の可変基又は態様についての実施態様の記述は、単一の実施態様の何れか、又はその他の何れかの実施態様若しくはそれらの部分との組み合わせとしての実施態様を含んでいる。
【００９０】
本明細書に参照される全ての参考文献、特許、特許出願、及び優先権出願の出願日時点の受入番号は、参照により明確に組み込まれている。
【００９１】
本発明を以下の実施例によって更に説明する。これを限定しているものと解釈すべきではない。
【実施例】
【００９２】
材料及び方法
インビトロ増殖アッセイ
ゲムシタビン耐性ヒト膵臓癌細胞株８１３、１００５、ＭＰ２（ＡＴＣＣから市販されている）及びＥ３ＪＤ１３、ＸＰａ３、及びＸＰａ４（ＪＨＵ (Johns Hopkins University)で腫瘍の低継代から得られる）を、１０％のウシ胎仔血清及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ−１６４０中の標準培養条件下で生育させた。
【００９３】
Ｐｌｋ１ ｓｉＲＮＡ及びトランスフェクション試薬（Dharmacon RNA technologies, Lafayette, CO）は、５００μＬの生育培地中のそれぞれのウェルに３０，０００細胞を加えて３７℃で１晩培養した２４ウェルの細胞培養プレート中で最適化した。それぞれのプレートは、抗生物質なしの培地のみのウェル、毒性をチェックするための抗生物質なしの培地を含めた最終容量に対して０．２％、０．４％及び０．６％のトランスフェクション試薬（ＴＲ）となるウェル、及び変化するＴＲ量に抗生物質なしの培地中の濃度が１００ｎＭ及び２００ｎＭのｓｉＲＮＡを加えたウェルを含んでいた。２４時間及び４８時間にわたって条件を試験した。ＲＬＴ緩衝剤（Qiagen Valencia, CA）を用いて細胞を採取した。６個の細胞株全てにおけるＰｌｋ１阻害のためのｓｉＲＮＡ条件を最適化すると、ＴＲ、ｓｉＲＮＡの最適濃度及び時間は、それぞれぞれ０．４％、２００ｎＭ及び４８時間であった。
【００９４】
全てのＲＮＡを、細胞ペレット（及び腫瘍）から、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）ミニキット（Quiagen, Valencia, CA）を用いて抽出した。ｃＤＮＡを、ｉＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ合成キット（Bio-Rad, Hercules, CA）を用い、製造会社の使用説明書に従って合成した。Ｐｌｋ１及びユビキチンＣ（ＵＢＣ，ハウスキーピング遺伝子として用いた）ｍＲＮＡの相対定量を、ＡＢＩ Ｔａｑｍａｎプローブ（Foster City, CA）を用いるｉＣｙｃｌｅｒ ｉＱリアルタイムＰＣＲ検出システム（Bio-Rad）を用いて実施した。実験を２回繰り返して、サンプルを４通りに作成した。
【００９５】
ゲムシタビン、ＯＮ０１９１０−Ｎａ及び両者の組み合わせに対するインビトロ薬物感受性（全てを７２時間１μＭ濃度にて）を、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ；Sigma, St Lois, MO）によって評価した。ｓｉＲＮＡを追跡する、ＭＴＴに基づく有効性の検討のために、細胞を９６ウェルのプレートに播種し、上記の条件で４８時間トランスフェクトし、次いで賦形剤又はゲムシタビンの何れかに１μＭの濃度で７２時間曝露した。それぞれの実験を、それぞれの薬物濃度に対して６通り行い、少なくとも３回独立して実施した。
【００９６】
膵臓癌に直接由来する異種移植片
切除した膵臓腺癌は、ＩＲＢが承認しているプロトコルに従って残存膵臓癌腫瘍から多数の腫瘍細胞を得るための方法として、ジョンズ・ホプキンス・医学研究所において日常的にヌードマウスに移植されている。簡潔に言えば、ウィップル摘出試料から得た腫瘍試料を抗生物質含有培地中で、２〜３ｍｍ３のピースに分割した。非壊死組織のピースを選択して、Matrigelに浸漬した。イソフルオランで麻酔して、Harlan (Harlan Laboratories, Washington, DC) から購入した５〜６週齢の雌性無胸腺（ｎｕ／ｎｕ）マウスに腫瘍を移植した。
【００９７】
腫瘍担持マウスを４群（１群あたりｎ＝８〜１０腫瘍）に分けた。マウスを、ゲムシタビン１００ｍｇ／ｋｇ、２回／週、４週間；若しくはＯＮ−０１９１０Ｎａ２５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、４週間；又はこれらの組み合わせで処置した。実験の経過中、４日おきに、測径器を用いて腫瘍サイズ測定した。
【００９８】
２８日目に、動物を安楽死させて、標準的プロトコルを用いるＲＴ−ＰＣＲによるＰｌｋ１発現分析のために、腫瘍を取り出した。Ｐｌｋ１発現レベルを薬物非処理コントロールにおける発現と比較して表した。
【００９９】
薬物
ゲムシタビン（Eli Lilly, Indianapolis, IN）を生理食塩水に溶解した。薬物を新たに調製して、０．２ｍＬ／２０ｇ体重の注射容量で用いた。
【０１００】
ＯＮ−０１９１０−Ｎａを生理食塩水に溶解した。薬物を新たに調製して、０．２ｍＬ／２０ｇ体重の注射容量で用いた。
【０１０１】
相対腫瘍生育阻害
相対腫瘍生育阻害（ＴＧＩ）を、ＴＧＩ＝（Ｔｉ−Ｔ０／Ｃｉ−Ｃ０）として算出した。ここでＴｉ及びＣｉは、それぞれ、２８日目の処置群及びコントロール群の腫瘍サイズを示し；Ｔ０及びＣ０は１日目の処置群及びコントロール群の腫瘍サイズを示す。実験を２８日で終了した。異種移植片が、ＲＥＣＩＳＴ評価基準に従って、ＴＧＩ≦−３０％及びＴＧＩ＞−３０％である場合、それぞれに、ゲムシタビンに感受性がある及び耐性があると定義した。
【０１０２】
実施例１
膵臓癌細胞株におけるゲムシタビン耐性に打ち勝つＰｌｋ１の阻害
６種のゲムシタビン耐性細胞株を培養物中で生育して、ゲムシタビン単独、Ｐｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡ、又は両者の組合わせで２４時間処理した。細胞を培地中で更に３日間生育した。コントロールと比較した細胞生育のパーセントを測定した。
【０１０３】
同様に、同じ細胞株を、ゲムシタビン単独、Ｐｌｋ１単独、又はそれらの組み合わせの存在下で、３日間生育した。コントロールと比較した細胞生育のパーセントを測定した。
【０１０４】
非処理コントロールと比較すると、６種の細胞株のうち３種においてＰｌｋ１ ｓｉＲＮＡにより（図１Ａ）、６種の細胞株のうち２種においてＯＮ−０１９１０−Ｎａにより（図１Ｂ）、生育が阻害された。ゲムシタビンと組み合わせたＰｌｋ１阻害剤による処理が殆どの細胞株において生育を強く阻害した。ＯＮ−０１９１０−Ｎａ及びゲムシタビンの組み合わせが、少なくとも、３種の細胞株、１００５、ＸＰａ３、及びＸＰａ４における細胞生育阻害において有意な相加又は相乗効果を有していた。これらのデータは、Ｐｌｋ１阻害剤がゲムシタビン耐性細胞を殺すという点で有効であり得、そしてＰｌｋ１阻害剤がゲムシタビン耐性細胞をゲムシタビンにより破壊されることに対して感受性にすることを明らかにしている。
【０１０５】
実施例２
インビボでの膵臓癌におけるゲムシタビン耐性に打ち勝つＰｌｋ１の阻害
膵臓腫瘍を上に詳述したようにマウスに移植した。マウスを、ゲムシタビン単独、ＯＮ−０１９１０−Ｎａ単独、又はこれらの組み合わせで、示されるように処理した。腫瘍サイズを４日間隔で測定した。
【０１０６】
３種の膵臓腫瘍が、それぞれのゲムシタビン及びＯＮ−０１９１０−Ｎａに対して異なった感受性プロファイルを明らかにした（図２Ａ）。腫瘍４１は、処理内容を問わず、ゲムシタビンとＯＮ−０１９１０−Ｎａでの処理に対してともに、実質的に腫瘍の生育なしに、感受性があった。腫瘍ＪＨ０３は、ゲムシタビン単独に対して感受性があったが、ＯＮ−０１９１０−Ｎａに対してはなかった。しかしながら、ゲムシタビン及びＯＮ−０１９１０−Ｎａの組み合わせは、２８日目の実験の終わりまでにゲムシタビン単独よりもより有効であった。腫瘍２８は、ゲムシタビンに耐性でＯＮ−０１９１０−Ｎａに感受性であった。とりわけ、ゲムシタビン及びＯＮ−０１９１０−Ｎａの組み合わせは、何れの単独の化合物よりも有意に有効であった。
【０１０７】
２８日目に、腫瘍を採取して、Ｐｌｋ１発現について分析した（図２Ｂ（Ｃ））。示されるように、ゲムシタビンに曝露した後のＰｌｋ１の発現が最も低かったＪＨ０３腫瘍が、ゲムシタビンによる処理に対して最も感受性があった。
【０１０８】
これらのデータは、ＯＮ−０１９１０−Ｎａがゲムシタビン耐性膵臓腫瘍にゲムシタビン感受性を誘導できることを明らかにしている。
【０１０９】
実施例３
ヌクレオチド類縁化学療法剤での処理に感受性がある癌を有する対象の治療
対象は、ゲムシタビンによる治療に感受性がある進行性胆道癌であると診断されている。手術が行われて全身腫瘍組織量が減少している。転移癌及び原発部位に残っている癌を縮小及び治療するために化学療法を開始する。対象にゲムシタビンを４週間おきに、１、８、及び１５日目に、２サイクル、１０００ｍｇ／ｍ２にて投与する。第３サイクルに開始して、ＯＮ−０１９１０−Ｎａを１週間に１度の連続スケジュールで２４時間点滴として併用投与する（４週サイクルの１、８、１５、及び２３日目に）ＯＮ０１９１０の容量は１０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋである。薬剤を化学療法投与計画の残りのサイクルについて併用投与する。対象を病気の進行又は退行について観察する。
【０１１０】
実施例４
Ｐｌｋ１を標的にするｓｉＲＮＡの併用投与によるゲムシタビン耐性の発現の阻害
対象は膵臓癌であると診断されている。Ｐｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡ化合物を、ゲムシタビン化学療法のそれぞれのサイクルの間の第１回投与と同時（すなわち、各４週サイクルの第１日目）に対象に投与する。ｓｉＲＮＡ治療剤は、ゲムシタビンの投与と比較すると相対的に低頻度投与を可能にする長時間効果がある化合物である。ゲムシタビン化学療法をサイクルの所望回数まで続ける。対象を病気の進行又は退行について観察する。
【０１１１】
実施例５
ＯＮ０１９１０を用いる、ヌクレオチド類縁化学療法剤に対する耐性の発現の阻害
対象はリンパ性白血病であると診断されていて、癌は最大１２サイクルにわたる毎２８日の５日間の２５ｍｇ／ｍ２／ｄａｙの用量でのフルダラビン静脈内投与による治療に感受性がある。フルダラビンの第１回投与の１週間前に、ＯＮ０１９１０を１００ｍｇ／ｍ２／ｄａｙの用量にて７２時間点滴で（総用量３００ｍｇ／ｍ２）投与する。同じ用量のＯＮ０１９１０を、フルダラビン化学療法の期間を通して、１週間毎に連続投与する。対象を病気の進行又は退行について観察する。
【０１１２】
参照による組み込み
本願を通して引用されている、全ての引用文献、特許、係属中の特許出願及び公開された特許は、参照により本明細書に明確に組み込まれている。
【０１１３】
均等物
当業者は、本明細書に記載されている発明の具体的な実施態様に対する多くの均等物を認識できるか、或いは通常の実験により確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【背景技術】
【０００１】
広範囲抗癌化学療法剤は高い頻度で、細胞分裂を妨害して或いは細胞を比較的早く分裂させるアポトーシスを阻害して、細胞増殖を阻害することによって作用する。細胞増殖を阻害する１つの戦略は、クラドリビン(cladribine）、クロフェラビン(cloferabine）、フルダラビン（fludarabine）、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン（capecitabine）、シタラビン（cytarabine）、デシタビン（decitabine）、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン（sapacitabine）、及びゲムシタビン（gemicitabine）のようなヌクレオチド類縁化学療法剤を使用することである。この化合物は構造的に類似していて一般に少なくともＤＮＡ複製を妨害する。ヌクレオチド類縁化学療法剤は、白血病及びリンパ腫のような血液悪性腫瘍、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群を含む多種の癌を治療するために用いられているか、或いは治療研究下にある。
【０００２】
化学療法剤による治療はしばしば、多くのメカニズムによって、１つ又はそれ以上の化学療法剤に対する耐性の発現をもたらす。例えば、癌におけるゲムシタビン耐性は深刻な問題である。ゲムシタビンが、肺癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌、及び卵巣癌で承認され、少なくとも肝臓癌及び食道癌の治療のために研究されていて、リンパ腫及びその他の癌の治療に実験的に使用されているので、大多数の癌患者は何れかの時点で結局はゲムシタビン治療を受けることになる。薬剤が承認されている症例の３分の１に効果があっても、大部分は応答せず、応答する患者でさえも最終的に耐性を生じる。
【０００３】
ゲムシタビン耐性は、膵臓癌において、これに対して他に実績のある化学療法が無いので、特に問題がある。多くのタイプの癌の治療における進歩にもかかわらず、膵臓癌は低い長期生存率を有して治療が難しいままである。２００４年には、米国におけるこの疾患の推定発症数は３１，６８０人であり、予定死亡数３１，２７０人である。新薬開発の１つの制約は、適当な前臨床モデルを欠くことである。
【０００４】
概して、膵臓外分泌腺の癌患者の約５％が癌発見後５年間生存すると考えられている。局所性(local)疾患の患者についてさえ、５年相対生存率は約２０％である。局所(regional)疾患を有する患者については、５年相対生存率が約８％である。転移があると、５年相対生存率は２％である。ゲムシタビンが膵臓癌患者の治療について承認されているとはいえ、約７５％〜９０％の患者はこの治療からごく僅かな恩恵にしかあずかっていない。第１選択肢のゲムシタビン治療に失敗した後に、進行膵臓癌患者に、証拠に基づく治療勧告を何も与えることができない。
【０００５】
ここ数年にわたって、かなりの数の臨床試験において、膵臓癌における新薬の効果を単独で又はゲムシタビンと併用して検討している。これらの検討の結果は殆どが否定的であった。第２相試験における活性データにもかかわらず、今まで行われてきた検討においては、薬剤単独又は併用戦略は何れもゲムシタビン単独より優れていなかった。このことは、従来の薬剤ばかりではなく、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）及びファルネシル基転換酵素阻害剤（ＦＴＩ）のような標的薬剤にもあてはまる。
【０００６】
ゲムシタビン治療に失敗した膵臓癌患者の適切な治療を確認するために検討が行われたが、結果は雑多になっている。ある検討では、治療は、ドセタキセル（docetaxel）６５ｍｇ／ｍ２及びイリノテカン（irinotecan)１６０ｍｇ／ｍ２で構成され、両者を２１日毎に投与した。過度の毒性によって、検討を終了する前に１４人の患者が登録された。最もよく見られたグレード３／４毒性は、好中球減少／白血球減少、悪心嘔吐、及び下痢を含んでいた。完全に半分の患者は１治療サイクルのみを受け、平均治療不履行期間は３６日であった。他覚的反応は観察されなかったが、３人の患者は少なくとも６治療サイクルの間症状が安定していた。全コホートに対する全体的生存日数は１３４日で、６ヶ月の生存率は３６％であった。別の検討において、ゲムシタビン耐性膵臓癌の患者をＳ−１とシスプラチン（ＣＤＤＰ）で治療して、応答率及び毒性が確認された。登録患者１７人のうち５人（２９．４％）が部分的応答に達し、２人（１１．８％）の病状が安定していた。治療による毒性は許容できるものであった。平均生存日数は１０ヶ月（幅、２０ヶ月）で、６ヶ月及び１２ヶ月の患者生存率は、それぞれ６３．７％及び３１．９％であった。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
一態様では、本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌を有する対象の癌を治療する薬剤としての、有糸分裂攪乱物質／ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）経路阻害剤の使用方法を提供する。このような対象は、それらの癌が最初はヌクレオチド類縁化学療法剤での治療に感受性があったが、その後にヌクレオチド化学療法剤に対する耐性の発現（すなわち、耐性腫瘍を発生）によって化学療法に失敗した対象を含んでいる。
使用方法は、ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性があって、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤による治療に感受性がある癌種を有していると確認された対象へ投与するための薬剤として、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を製造することを含んでいる。
ある態様では、対象はヌクレオチド類縁化学療法剤に対する耐性を有しているか或いは耐性が発現している。
方法は更に、癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察することを含み、ここで薬剤は癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化をもたらす。
ある態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤をヌクレオチド類縁化学療法剤と併用投与する。
ある態様では、使用方法はヌクレオチド類縁化学療法剤耐性を逆転させることを含んでいる。
【０００８】
一態様では、本発明は、以前にヌクレオチド類縁化学療法剤を単独で投与されている癌を有する、患者の癌を治療するための薬剤を製造するための、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の使用方法を提供し、そこでは薬剤はヌクレオチド類縁化学療法剤との併用投与のために製造され、そして対象はヌクレオチド類縁化学療法剤と有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用治療に感受性がある。
方法は更に、少なくとも１つの癌の徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察することを含んでいる。
ある態様では、方法はヌクレオチド類縁化学療法剤耐性の発現を阻害することを含んでいる。
【０００９】
ある態様では、本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤を用いる癌の治療に感受性がある対象の癌を治療するための薬剤を製造するための、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の使用方法を提供する。
方法は、ヌクレオチド類縁化学療法剤を含有している薬剤を投与する前に、随意に有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の投与と連続して、投与するための有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している薬剤の製造、及び少なくとも１つの癌の徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察することを含んでいる。
ある態様では、薬剤の使用方法は、対象のヌクレオチド類縁化学療法剤耐性を阻害することを含んでいる。
【００１０】
ある態様では、本発明は、併用投与した化合物の効果が化合物を単独で投与したときの相加的効果よりも大きくなるような、化合物の相乗効果を引き起こすための、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与を含んでいる。
ある態様では、本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している、癌治療のための薬剤として用いるための相乗作用のある組成物の製造を含んでいる。
【００１１】
ある態様では、本発明は、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び／又は有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤での治療に感受性がある癌を有している対象への、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の投与計画を含んでいる。
ある実施態様では、投与計画は、ヌクレオチド類縁化学療法剤単独投与、それに続くヌクレオチド類縁化学療法剤との有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与を含んでいる。
ある実施態様では、投与計画は、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の投与、それに続くヌクレオチド類縁化学療法剤との有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与を含んでいる。
ある実施態様では、何れかの薬剤単独の前投与が無くてもよい、ヌクレオチド類縁化学療法剤とのＰｌｋ阻害剤の併用投与を含んでいる。
ある態様では、本発明は、更なる化学療法剤及び／又は薬剤の投与を更に含んでいてもよい。
ある態様では、本発明は、２つの薬剤の併用投与の後に化学療法剤又は有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤単独の投与を更に含んでいてもよい。
【００１２】
ある態様では、本発明は、薬剤による治療に感受性がある患者のヌクレオチド類縁化学療法剤耐性癌の治療のためのヌクレオチド類縁化学療法剤と併用投与する有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している薬剤の製造を含んでいる。
【００１３】
ある態様では、本発明は、薬剤による治療に感受性がある患者の癌におけるヌクレオチド類縁化学療法剤耐性の発現を阻止するための、ヌクレオチド類縁化学療法剤と併用投与する有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している薬剤の製造を含んでいる。
【００１４】
ある態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害薬剤による治療に以前から感受性である患者の癌におけるヌクレオチド類縁化学療法剤耐性を逆転させるために使用する、ヌクレオチド類縁化学療法剤と併用投与する有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有している薬剤の製造を含んでいる。
【００１５】
ある実施態様では、本発明は、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤とヌクレオチド類縁化学療法剤を含有する混合剤である、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤とヌクレオチド類縁化学療法剤の併用投与のための薬剤を含んでいる。
ある実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤とヌクレオチド類縁化学療法剤との併用投与のための薬剤は、ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤のそれぞれの、両薬剤の対象への投与を可能に或いは促進する剤形への製造を包含している。
本発明の実施態様では、癌はヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌である。
本発明の実施態様では、癌は、白血病及びリンパ腫のような血液性悪性腫瘍、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群である。
【００１６】
多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤はＰｌｋ１阻害剤である。多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤はＯＮ−０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体である。本発明の多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤はＯＮ−０１９１０−Ｎａである。多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤は核酸治療剤である。多くの実施態様では、核酸治療剤はＰｌｋ１、特にヒトＰｌｋ１を標的にしている。多くの実施態様では、核酸治療剤はｓｉＲＮＡ化合物である。
【００１７】
本発明の多くの実施態様では、ヌクレオチド類縁化学療法剤は、クラドリビン、クロフェラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンである。多くの実施態様では、ヌクレオチド類縁化学療法剤はゲムシタビンである。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１Ａ及びＢは、小分子Ｐｌｋ１阻害剤である、（Ａ）ｓｉＲＮＡ Ｐｌｋ１阻害剤及び（Ｂ）ＯＮ−０１９１０−Ｎａの存在下又は非存在下でゲムシタビンによる処置に応答する６種のゲムシタビン耐性細胞株の生育阻害を示すグラフである。
【図２】図２Ａ及びＢは、ゲムシタビン感受性及び耐性腫瘍を有するマウスでのインビボ実験の結果を示す。（Ａ）は３つのインビボ実験の腫瘍生育プロットを示す。腫瘍を有するマウスを、賦形剤、ゲムシタビン、ＯＮ−０１９１０−Ｎａ及び両薬剤の併用（総量で）で処置した４群に割り振った。（Ｂ）はＡの棒グラフである。エラーバーは標準偏差を示す。
【図３】図３Ａ及びＢは、（Ａ）ＯＮ０１９１０及び（Ｂ）ヌクレオチド類縁化学療法剤、クラドリビン、クロフェラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンの構造を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、少なくとも一部分が、ゲムシタビン感受性腫瘍がＰｌｋ１の発現を減少した、及びゲムシタビン耐性腫瘍はＯＮ−０１９１０−Ｎａ及びヒトＰｌｋ１を対象とするｓｉＲＮＡ化合物を包含する有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤による治療に感受性があるという知見に基づいている。
また、ゲムシタビン耐性腫瘍におけるＰｌｋ１の阻害は、以前から耐性である腫瘍に対するゲムシタビン耐性に効果がある。ゲムシタビン耐性腫瘍のＰｌｋ１阻害剤による破壊に対する感受性は、インビトロにおけるゲムシタビン耐性膵臓癌細胞株、エクソビボにおけるヒトゲムシタビン耐性膵臓癌、及びマウス異種移植モデル（すなわち、インビボ）を用いて確認された。
【００２０】
ＯＮ−０１９１０−Ｎａは、Ｇ２／Ｍ細胞周期移行を混乱させて、それらのアポトーシスをもたらす紡錘体異常を特徴とする腫瘍細胞の有糸分裂停止を誘導する小分子化合物である。この効果は少なくとも部分的に、Ｐｌｋ１阻害剤としての活性に関連している。本明細書で明らかにされているように、ＯＮ−０１９１０はゲムシタビン耐性膵臓癌のインビトロ及びインビボのモデルに対して活性を有していた。
【００２１】
用語「治療した」、「治療する」又は「治療」は、治療されている状態、疾患又は病気に関連している或いはこれが引き起こす少なくとも１つの症状の消失又は軽減を含んでいる。例えば、治療は疾患の１つ又は幾つかの症状の軽減、又は疾患の完全な撲滅であってよい。治療は、以下の表に示されているようなＣＲ、ＰＲ、又はＳＤの他覚的な応答を含んでいてもよい。
【００２２】
治療に対する固形癌の応答を、例えば世界保健機関（ＷＨＯ）の基準を用いて、或いは固形癌の効果判定基準（ＲＥＣＩＳＴ）一次元測定ガイドラインを用いて、特性化することができる。
基準を以下の表に掲載する。
【００２３】
表１
ＷＨＯ ＲＥＣＩＳＴ
測定可能性 測定可能、二次元 測定可能、一次元
従来法 ≧ ２０ｍｍ；
スパイラルＣＴ ≧ １ｍｍ；
標的vs非標的病変
測定不能／評価可能 測定不能
他覚的応答
完全奏功（ＣＲ） 全ての公知病変の消失； 全ての公知病変の消失；
４週間後に確定 ４週間後に確定
部分奏功（ＰＲ） 少なくとも５０％減少； 少なくとも３０％減少；
４週間後に確定 ４週間後に確定
安定疾患（ＳＤ） ＰＲにもＰＤ基準にも ＰＲにもＰＤ基準にも
合致しない 合致しない
進行疾患（ＰＤ） ２５％増大； ２０％増大；
ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤではない ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤではない
病変増大前に記録 病変増大前に記録
又は新病変発現 又は新病変発現
【００２４】
参照により本明細書に組み込まれている、Park et al., Measuring respnse in solid tumors: Comparison of RECIST and WHO response criteria. Jpn. J. Clin. Oncolo. 33:533-537,2003 も参照されたい。ＲＥＣＩＳＴの一次元測定評価は、全ての標的病変の最大直径のみの測定を含んでいる。
【００２５】
用語「薬剤耐性腫瘍」及び「薬剤耐性癌」等は、薬剤の存在下で又は投与によって、進行疾患（ＰＤ）基準を満たす腫瘍又は癌であると理解される。培養において、耐性細胞は、薬剤の存在下で生育を続ける細胞であると理解される。生育比は、培養中の未処理コントロール細胞に対して、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％である。薬剤耐性は、単一の、特定薬剤に対する耐性、又は多剤耐性遺伝子（ＭＤＲ）を発現する腫瘍でよく見られるような多数の薬剤に対する耐性であってよい。
【００２６】
「薬剤による治療に感受性がある腫瘍」又は「薬剤による治療に感受性がある癌」等は、薬剤の存在下で又は投与によって、ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤの基準を満たす腫瘍又は癌であると理解される。細胞培養において、感受性のある細胞は、薬剤での処置に応答して、生育／分裂を止めるか或いは死滅する細胞である。治療に感受性がある癌は、治療感受性がある癌の一種、例えば、ヌクレオチド類縁化学療法剤での治療について承認されている癌の一種、或いは検討において癌の治療について利益がもたらされた癌の一種であるとも理解できる。例えば、ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌のタイプは、これに限定されないが、白血病及びリンパ腫のような血液性悪性腫瘍、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群を包含する。
薬剤による治療に感受性がある癌は、高い頻度で薬剤による治療に応答して、薬剤に耐性の癌になり得る。
【００２７】
用語「対象」は、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、及びトランスジェニック非ヒト動物を包含するように意図されている。
ある実施態様では、対象はヒト、例えば癌に罹っている、罹る危険性がある、罹る潜在的可能性があるヒトである。ヒト対象を患者と称することができる。
【００２８】
用語「癌」は、無秩序又は無制御の細胞生育によって特徴付けられる悪性腫瘍、例えば、細胞腫、肉腫、白血病、及びリンパ腫を包含する。癌は固形癌及び非固形癌を包含する。癌は膵臓を含む、何れの臓器の癌も包含する。
用語「癌」は、原発性悪性腫瘍、例えば、その細胞が原発腫瘍の部位以外の対象の体内の部位へ移行していない癌、及び二次性悪性腫瘍、例えば、腫瘍細胞の原発腫瘍の部位とは異なる第二の部位への転移、移行によって生じる癌を包含する。
【００２９】
本明細書で用いられる化合物の「治療有効量」という用語は、本明細書に記載されているように対象に投与されたときに、ＣＲ、ＰＲ、又はＳＤをもたらすのに必要な或いは十分な化合物の量である。当然のことながら、互いに併用して使用するためのヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤のそれぞれの治療有効量は、単独で用いた場合に有効にするのに十分でなくてよい。治療効果を有する化合物を薬剤又は医薬品と称することができる。
【００３０】
語句「相乗的な併用」は、薬剤の併用投与の治療効果が、単一薬剤（併用）に期待される相加効果より大きい治療薬の併用を包含する。例えば、ゲムシタビン耐性である（すなわち、ゲムシタビンによる治療がＣＲ、ＰＲ、又はＳＤを誘導できない、すなわち効果がない）細胞又は腫瘍において、ゲムシタビン及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与が、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の単独投与よりも大きな治療効果を有している。
【００３１】
用語「併用投与」は、２つの薬剤が対象内に同時に存在する、及び／又は活性を有するように、癌のような単一の病気又は疾患を治療するために、対象に２つ又はそれ以上の薬剤を投与することであると本明細書では理解される。併用投与は、同時に投与する薬剤の混合剤の製造、混合及び／又は連続投与を促進する特定の担体中又は特定の濃度での薬剤の製造又は製剤化の両方を包含する。薬剤を、同じバイアル又はボトルに一緒に；或いは単一の容器(例えば、１つのボックス）内にある異なったボトル又はバイアル中に包装することができる。一緒に投与するために薬剤を特別に製剤化する必要はない。当然のことながら、異なる薬剤は異なる薬物動態及び薬力学的特性を有しているので、投与スケジュールを実質的に変えることができる。従って同時投与が必須なわけではない。ヌクレオチド類縁化学療法剤と有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤の併用投与は、その他の化学療法剤又はその他の薬剤の投与を排除しない。併用投与の投与計画の例は以下に提供されている。
【００３２】
語句「薬学的に許容される担体」は、当該技術分野で認識されているものであって、本明細書に記載されている方法で用いられる化合物を対象、例えば哺乳動物に投与するのに適している、薬学的に許容される物質、組成物、又は賦形剤を包含する。担体は、対象薬剤をある臓器又は体の部分から別の臓器又は体の別の部分へ運搬或いは移送するのに関与する、液体又は固体の充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒又は封入剤を包含する。それぞれの担体は、製剤の別の成分と適合性があり、そして患者に有害ではないという意味で、「許容されて」いなければならない。薬学的に許容される担体の機能を果たす物質の幾つかの例は、乳糖、ブドウ糖及び蔗糖のような糖類；コーンスターチ及びジャガイモ澱粉のような澱粉類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロースのようなセルロース及びその誘導体；粉末トラガカント；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバター及び坐薬用ワックスのような賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ごま油、オリーブ油、コーン油及び大豆油のような油類；プロピレングリコールのようなグリコール類；グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールのようなポリオール類；オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルのようなエステル類；寒天；水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；パイロジェンフリー水；等張食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；リン酸緩衝溶液；及び医薬製剤で用いられるその他の非毒性適合性物質を包含する。
【００３３】
本発明の化合物
本発明の好ましい組成物及び方法は、Ｐｌｋ１阻害剤ＯＮ−０１９１０−Ｎａ（（Ｅ）−２，４，６−トリメトキシスチリル−３−（カルボキシメチルアミノ）−４−メトキシベンジルスルホン（図３Ａ））、及びジェムザール（Gemzar（登録商標））としても知られている、ゲムシタビン（４−アミノ−１−［３，３，−ジフルオロ−４−ヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）テトラヒドロフラン−２−イル］−１Ｈ−ピリミジン−２−オン（図３Ｂ））の使用を包含している。
【００３４】
本明細書で用いられている用語「有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤」等は、Ｐｌｋ（例えば、Ｐｌｋ１、Ｐｌｋ２、Ｐｌｋ３、又はＰｌｋ４）のキナーゼ活性又は細胞中のＰｌｋの活性を、例えばＰｌｋの発現を減少させて阻害するか、又はＰｌｋの活性を直接、若しくはＰｌｋ（特にＰｌｋ１）シグナル伝達経路の成分を阻害することにより阻害し；そして有糸分裂攪乱物質としての活性を有する何れの組成物も包含する。
好ましい実施態様では、阻害剤は、非Ｐｌｋキナーゼの活性と比べてＰｌｋの活性を選択的に阻害する。Ｐｌｋ阻害剤が、非Ｐｌｋキナーゼの阻害と比較したＰｌｋキナーゼの阻害において、２倍、５倍、１０倍、又は２０倍大きい活性を有していることが好ましい。Ｐｌｋ阻害剤は、１つ又はそれ以上のＰｌｋアイソフォームに対して特異的であってよい。また、Ｐｌｋ阻害剤の活性は、阻害剤の存在下及び非存在下においてＰｌｋのキナーゼ活性を比較することによって測定することができる。Ｐｌｋ阻害剤は、Ｐｌｋキナーゼ活性を、非処理コントロールと比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも９０％阻害する。
【００３５】
Ｐｌｋ阻害剤は、細胞中のＰｌｋ活性を、細胞におけるＰｌｋの発現を阻害することによって、例えば、Ｐｌｋ標的アンチセンス、又は適切な種のＰｌｋ（例えば、ヒトＰｌｋ１は、２００８年４月６日に更新した、第３版の、GenBank No NM_005030である；ヒトＰｌｋ２は、２００８年２月１０日に更新した、第２版の、GenBank No. NM_006622である；ヒトＰｌｋ３は、２００８年２月１１日に更新した、第２版の、GenBank No.NM_004073である；ヒトＰｌｋ４は、２００６年１０月１７日に更新した、第１版の、GenBank No.Y13115である;全てのGenBank number は参照により本明細書に組み込まれている）を標的とするｓｉＲＮＡ剤を用いて、阻害することができる。アンチセンスオリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡ化合物を設計、合成、試験及び投与する方法は当該技術分野において公知である。例えば、米国特許公開第２００５０１０７３２８号公報及び同第２００７０２６５４３８号公報を参照されたい。これらは両方、参照により本明細書に組み込まれている。
【００３６】
Ｐｌｋの発現を減少又は阻害する化合物で処理した規定量の細胞又は細胞抽出物中のＰｌｋ１の活性を、同じ規定量の非処理細胞又は細胞抽出物と比較する。阻害は、本明細書、又は例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０７２０６２号公報（参照により本明細書に組み込まれている）に開示されているような、何れかの標準的なキナーゼアッセイを用いて測定することができる。本発明の有糸分裂攪乱物質及びＰｌｋ阻害剤も、顕微鏡、蛍光活性化細胞分類、又はその他の方法で容易に観察できるように、有糸分裂を攪乱する。
【００３７】
有糸分裂攪乱物質は、例えば、中心体分布の攪乱、細胞質分裂の低下、異常な染色体数、及び細胞周期チェックポイントにおける不可逆的ブロックによって、正常な有糸分裂の達成を阻止する。本発明の方法で用いる有糸分裂攪乱物質は、非処理コントロールと比較して、少なくとも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又はそれ異常の細胞において、有糸分裂の達成を阻止する。
【００３８】
本発明の多くの実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤は小分子である。本明細書で用いられる用語「小分子」は、比較的低分子量（例えば、約７５００未満、約５０００未満、約１０００未満の分子量、又は約５００未満の分子量）を有していて、タンパク質、ポリペプチド、又は核酸ではない、天然の或いは人工的に生成された（例えば、化学合成によって）、有機化合物を示す。一般に小分子は、約１５００ｇ／モル未満の分子量を有している。また、小分子は通常、複数の炭素−炭素結合を有している。ある実施態様では、小分子はペプチド（アミド）結合を含有することに限られない。別の実施態様では、小分子はオリゴマーではない。典型的な小分子化合物は、これに限定されないが、ペプチド類似物、有機小分子（例えば、Cane et al. 1998, Science 282:63; 参照により本明細書に組み込まれている）、及び天然物の抽出物ライブラリーを包含する。別の実施態様では、化合物は小分子の有機非ペプチド化合物である。更なる実施態様では、小分子は生合成のものではない。例えば、小分子はそれ自体が転写又は複製の産物ではないことが好ましい。
【００３９】
本発明の多数の実施態様では、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤は核酸治療薬である。本明細書で用いられる用語「核酸治療薬」等は、ヌクレオチドを含有していて標的遺伝子に対して望ましい効果を有している、核酸からなる何れかの化合物を示す。核酸治療薬は、一本鎖、二本鎖又は複数鎖であってよく、改変若しくは非改変ヌクレオチド又は非ヌクレオチド又は多数の混合物、及びこれらの組み合わせであってよい。本開示の核酸治療薬の例は、これに限定されないが、アンチセンス核酸、ｄｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及び酵素核酸化合物を包含する。
【００４０】
Ｐｌｋ１阻害剤は、Ｐｌｋ１の活性を阻害する、好ましくはＰｌｋ１の活性を特異的に阻害する、ＯＮ−０１９１０−Ｎａの多数の誘導体の何れかを包含することができる。例えば、Ｐｌｋ１阻害剤は、式（Ｉ）の何れかの化合物であると理解される「ＯＮ−０１９１０−Ｎａ及びその誘導体」、又はそのような化合物の塩を包含する。
【００４１】
【化１】
【００４２】
式中のＸは、以下の（ｉ）及び（ｉｉ）よりなる群から選ばれる。
【００４３】
【化２】
【００４４】
Ｘ１は、以下の（ｉ）、（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）よりなる群から選ばれる。
【００４５】
【化３】
【００４６】
ここにおいて、Ｘ１は１個又はそれ以上の化学保護基で保護されていてもよい。
ｇは０であるか又は次の通りである。
それぞれのＭは、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキレン−、−（ＣＨ２）ａ−Ｖ−（ＣＨ２）ｂ−、−（ＣＨ２）ｄ−Ｗ−（ＣＨ２）ｅ−、及び−Ｚ−よりなる群から独立して選ばれる２価の連結基である。
それぞれのｙは、０及び１よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのＶは、アリーレン、ヘテロアリーレン、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキレン−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４−、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ４−及び−ＳＯ２ＮＲ４−よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのＷは、−ＮＲ４−、−Ｏ−及び−Ｓ−よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのａは、０、１、２及び３よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのｂは、０、１、２及び３よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのｄは、１、２及び３よりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのｅは、０、１、２及び３よりなる群から独立して選ばれる。
−Ｚ−は、
【００４７】
【化４】
【００４８】
である。
ここにおいて、-Ｚ-の絶対立体化学はＤ又はＬ或いはＤとＬとの混合物である。
それぞれのＲａは、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−（ＣＨ２）3−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）（＝ＮＨ）、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＳＨ、−（ＣＨ２）２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２−（２-イミダゾリル）、−ＣＨ（ＣＨ３）−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）４-ＮＨ２、−（ＣＨ2）２−Ｓ−ＣＨ３、フェニル、−ＣＨ２−フェニル、−ＣＨ２−ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−（３−インドリル）、−ＣＨ２−（４−ヒドロキシフェニル）−ＣＨ（ＣＨ３）２及び−ＣＨ２−ＣＨ３よりなる群から独立して選ばれ、そしてＲａとＲ１が結合して５、６、又は７員の複素環を形成している化合物を包含する。
【００４９】
それぞれのＲ１は、−Ｈ、非置換アリール、置換アリール、置換複素環、非置換複素環、−ＣＯ２Ｒ５、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＲ４２、 −ＣＲ４Ｒ６Ｒ７、−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＲ４２、−（Ｃ１−Ｃ６）ペルフルオロアルキル、ＣＦ２Ｃｌ、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ４）２、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ４）２、及び１０００未満の分子量を有する１価のペプチジル残基よりなる群から独立して選ばれる。但し、ｙが０及びＲ’がＣＯ２Ｒ5の場合は、Ｒ５は−Ｈではない。
【００５０】
それぞれのＲ２は、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、及びアリール（Ｃ１−Ｃ３）アルキルよりなる群から独立して選ばれる。ここで、−Ｒ２と−（Ｍ）ｙ−Ｒ１は、任意に共有結合して５、６、又は７員の置換又は非置換複素環を形成してもよい。
それぞれのＲ３は、独立して−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルから選ばれる。
それぞれのＲ４は、−Ｈ、及び−（Ｃ１−Ｃ６）アルキルよりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのＲ５は、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル及び−（Ｃ１−Ｃ６）アシルよりなる群から独立して選ばれる。
【００５１】
それぞれのＲ６は、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＣＯ２Ｒ５、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、ＯＲ５、−ＯＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）２ＣＯ２Ｒ５、−ＳＲ４、グアニジン、−ＮＲ４２、−ＮＲ４３＋、−Ｎ＋（ＣＨ２ＣＨ２ＯＲ５）３、フェニル、置換フェニル、複素環、置換複素環及びハロゲンよりなる群から独立して選ばれる。
それぞれのＲ７は、−Ｒａ、ハロゲン、−ＮＲ４２、及び２個の窒素原子を含有する複素環よりなる群から独立して選ばれる。そして
Ｑは、−Ｈ、−（Ｃ１−Ｃ６）アルコキシ、ハロゲン、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル及び−ＮＲ４２よりなる群から選ばれる。
【００５２】
ここにおいて、Ｒ１、Ｒ２、Ｒａ、Ｒ６及びＲ７を含有している或いはこれに含まれる置換アリール及び置換複素環基についての置換基は、ハロゲン、−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、−ＮＯ２、−Ｃ-＝Ｎ、−ＣＯ２Ｒ５，−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、-ＯＲ５、−（Ｃ２−Ｃ６）アルキレン−ＯＨ、ホスホナート、−ＮＲ４２、−ＮＨＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、スルファミル、−ＯＣ（＝Ｏ）（Ｃ１−Ｃ３）アルキル、−Ｏ（Ｃ２−Ｃ６）アルキレン−Ｎ（（Ｃ１−Ｃ６）アルキル）２及び−ＣＦ３よりなる群から独立して選ばれる。
【００５３】
但し、
（１）Ｒ１が分子量１０００未満の１価ペプチジル残基であり、Ｖが−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｓ（＝Ｏ）−又は−ＳＯ２−であり、そしてｂが０である場合は、
当該ペプチジル残基は、ペプチジル残基のアミノ末端を介して、又は側鎖アミノ基を介してＭと結合して、それぞれアミド、チオアミド、スルフィンアミド又はスルホンアミドを形成する。
【００５４】
（２）Ｒ１が分子量１０００未満の１価ペプチジル残基であり、Ｖが−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ４−又は−ＳＯ２ＮＲ４−であり、そしてｂが０である場合は、
当該ペプチジル残基は、ペプチジル残基のカルボキシ末端を介して、又は側鎖カルボキシル基を介してＭと結合して、それぞれイミド又はスルホンアミドを形成する。及び
【００５５】
（３）Ｒ１が分子量１０００未満の１価ペプチジル残基であり、Ｗが−ＮＲ４−、−Ｓ−又は−Ｏ−であり、そしてａが０である場合は、
当該ペプチジル残基は、ペプチジル残基のカルボキシ末端を介して、又は側鎖カルボキシル基を介してＭと結合して、それぞれカルボキサミド、カルボチオ酸エステル又はカルボン酸エステルを形成する。
その他のＯＮ０１９１０−Ｎａ誘導体、合成法、及び化合物の活性はＰＣＴ公開第ＷＯ０３／０７２０６２号公報中で見出すことができる。
【００５６】
本明細書で用いられる「ヌクレオチド類縁化学療法剤」は、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、及びチオグアニンのようなプリン類縁体；又はカペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンのようなピリミジン類縁体である。このような化合物は、図３に示されているように構造的に類似し、通常糖基に結合している窒素を有していて、少なくともＤＮＡ合成を攪乱することによって作用する。このような化合物は当該技術分野において公知である。
【００５７】
用量及び製剤
本発明の化合物は、局所に、経腸的に、又は非経口的に投与することができる。局所投与は、例えば、これに限定されないが、皮膚上、浣腸、点耳、鼻腔内、及び膣内投与を包含する。経腸投与は、例えば、口による（経口で）、経胃栄養チューブ、経十二指腸栄養チューブ、又は胃瘻増設術的に、及び坐薬又は浣腸形態での経直腸投与である。非経口投与は、これに限定されないが、静脈内、動脈内、筋肉内、心臓内、皮下、骨内点滴（骨髄内へ）、皮内、髄内、及び腹腔内を包含する。
【００５８】
好ましい実施態様では、本発明の化合物は静脈内に投与される。
【００５９】
本発明の方法で用いられる化合物は、このような投与のための、当該技術分野で知られている薬学的に許容される剤形の何れかを用いて経口投与することができる。化合物は、乾燥粉末、顆粒、錠剤或いはカプセルのような固体剤形、又はシロップ或いは水性懸濁液のような液体剤形で供給することができる。化合物は単独で投与することができるが、通常は医薬担体と共に投与される。剤形に関する有益な論文は Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing である。
【００６０】
本発明の方法で用いられる化合物は、錠剤、カプセル（これらは、それぞれ持続放出又は徐放型製剤を包含する）、丸剤、粉末、顆粒、エリキシル、チンキ剤、懸濁液、シロップ、及び乳剤のような経口用剤形で投与することができる。同様に、これらは、静脈内（注射又は点滴）、腹腔内、皮下、又は筋肉内用の形態でも投与することができ、用いられる全ての剤形は当業者に公知である。
【００６１】
本発明の方法で用いられる化合物は、ヒト又は哺乳動物のような宿主の体内に、化合物の作用部位で、化合物の接触を生じさせる、何れかの手段で投与することができる。これらは、単独で、或いは選択され投与経路及び標準的な製薬プラクティスに基づいて選択された医薬担体と共に投与することができる。
【００６２】
本発明で確認された化合物についての投与計画は、勿論、公知の因子、例えば、特定薬剤の薬力学的特性及びその投与の方法及び経路；受容者の種、年齢、性別、健康状態、医学的状態、及び体重；症状の特質及び程度；並行治療の種類；治療の頻度、投与経路；患者の腎臓及び膵臓の機能；及び望まれる効果によって変わるだろう。通常の知識を有する医師又は獣医師は、対象に投与する化合物の有効量を容易に決定することができる。
【００６３】
本発明の方法で用いられる化合物は、適切な鼻腔内賦形剤の局所使用によって鼻腔内形態で、又は当業者に周知の経皮吸収パッチのそれらの形態を用いて経皮経路で投与することができる。
【００６４】
本発明の方法では、本明細書に記載されている化合物は、意図する投与形態、すなわち、経口用錠剤、カプセル、エリキシル、シロップなどに関して、そして従来の製薬プラクティスに従って、適切に選択された適切な製薬用希釈剤、賦形剤、又は担体（本明細書では担体物質と総称する）と混合して投与することができる。
【００６５】
例えば、錠剤又はカプセルの形態で経口投与するために、活性薬物成分を、乳糖、澱粉、蔗糖、ブドウ糖、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、第２リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール等のような経口用の、非毒性の、薬学的に許容される、不活性担体と組合わせることができ；液体形態で経口投与するために、活性薬物成分を、エタノール、グリセロール、水等のような経口用の、非毒性の、薬学的に許容される、不活性な何れかの担体と組合わせることができる。さらに望ましい場合或いは必要な時に、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、及び着色剤も混合剤に組み入れることができる。適切な結合剤は、澱粉、ゼラチン、ブドウ糖又はβ−ラクトースのような天然の糖類、トウモロコシ甘味剤、アカシアゴム、トラガカント又はアルギン酸ナトリウムのような天然及び合成のゴム類、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス類等を包含する。これらの剤形で用いられる滑沢剤は、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム等を包含する。崩壊剤は、これに限定されないが、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム等を包含する。
【００６６】
本発明の方法で用いられる化合物は、小さい単層ベシクル、大きい単層ベシクル、及び多層ベシクルのような、リポソーム送達システムの形態で投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、又はホスファチジルコリンのような、多種のリン脂質から形成することができる。
【００６７】
本発明の方法で用いられる化合物は、標的化可能薬物担体としての可溶性ポリマーに結合させることもできる。このようなポリマーは、ポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、又はパルミトイル残基で置換したポリエチレンオキシドポリリジンを包含できる。更に、本発明で確認された化合物を、薬物の制御放出を達成させるために有用な生物分解性ポリマーの類、例えばポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸の共重合体、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル類、ポリアセタール類、ポリジヒドロピラン類、ポリシアノアクリレート、及びヒドロゲルの架橋又は両親媒性ブロック共重合体、と結合させることができる。
【００６８】
ゼラチンカプセルは、活性成分と、乳糖、澱粉、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸等のような、粉末化担体を含有することができる。同様の希釈剤を圧縮錠を製造するために用いることができる。錠剤とカプセルの両方を、数時間をかけて薬物の連続放出をもたらすように持続放出製剤として製造することができる。圧縮錠は、不快な味を隠して錠剤を大気から保護するために、糖衣又はフィルムを掛けるか、或いは腸管内で選択的に崩壊するように腸溶性コーティングすることができる。経口投与のための液体剤形は、患者の容認を増すために、着色剤及び着香剤を含有することができる。一般に、水、適切なオイル、食塩水、水性デキストロース（ブドウ糖）及び関連する糖溶液、及びプロピレングリコール又はポリエチレングリコールのようなグリコール類が、非経口溶液の適切な担体である。
【００６９】
非経口投与のための溶液は、活性成分の水溶性塩、適切な安定化剤、そして必要により、緩衝物質を含有することが好ましい。亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、又はアスコルビン酸のような抗酸化剤の単独又は組み合わせの何れかが適切な安定化剤である。クエン酸及びその塩、並びにＥＤＴＡナトリウムも用いられる。更に、非経口用溶液は、塩化ベンザルコニウム、メチル又はエチルパラベン、及びクロロブタノールのような、防腐剤を含有することができる。静脈内に投与される化合物は、多くの場合生理食塩水中で送達される。
【００７０】
適切な医薬担体は、この技術分野で標準的な参考文献である、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company に記載されている。適切な担体による製剤化は当業者の能力の範囲内である。
【００７１】
ヌクレオチド類縁化学療法剤の投与
ヌクレオチド類縁化学療法剤の投与計画は当該技術分野で公知であって、治療する癌の重症度及びタイプによって変化する。化学療法計画の幾つかの例を以下の表に挙げている。記載されている全ての参考文献は、参照により本明細書に組み込まれている。
【００７２】
表２
化学療法剤 疾患 参考文献
投与計画
クラドリビン 無痛性非ホジキンリンパ腫 Blum et al., Cancer
107:2817-2825. 2006
0.14mg/kg/day×5日 4週毎×6
無痛性リンパ増殖性疾患及び Robak et al., Cancer
マントル細胞リンパ腫 107:1542-1550. 2006
１．リツキサマブ 375mg/m2 1日目、
クラドリビン 0.12mg/kg/day、
2-6日目 4週毎
２．リツキサマブ 375mg/m2 1日目、
クラドリビン 0.12mg/kg/day、
2-4日目 及び
シクロホスファミド 250mg/m2
2-4日目 4週毎
クロファラビン 慢性リンパ性白血病 Ghandi et al.,
Cancer Therapy
3-4mg/m2/day, 1-5日目 4週毎 12:4011-4017
15mg/m2/day, 1-5日目 4週毎
フルダラビン 慢性リンパ性白血病 Rai et al., NEJM
343:1750-1757, 2000.
25mg/m2/day, 1-5日目 4週毎
25mg/m2/day, 1-5日目 4週毎
＋20mg/m2 クロラムブシル 4週毎
メルカプトプリン 急性リンパ芽球性白血病 Bostrom et al.,
Blood 101:
経口−37mg/m2/day, 0-70日目* 3809-3817, 2003.
静注−1000mg/m2/day, 0, 7, 14, 21,
28, 35, 42, 49, 56, 63, 及び70日目*
ペントスタチン 慢性リンパ性白血病 Kay et al., Blood.
109:405-411, 2007.
2mg/m2 ペントスタチン
600mg/m2 シクロホスファミド
375mg/m2 リツキサマブ
21日毎 6サイクル
チオグアニン 悪性神経膠腫 Levin et al.,
Neuro-oncology,
30mg/m2 経口 チオグアニン 109:405-411, 2007.
12回投与の間、6時間毎(0-66時目);
50mg/m2 経口 プロカルバジン
4回投与の間、6時間毎(60-78時目);
400mg/m2 経口 ジブロモダルシトール
1回投与(60時目);
110mg/m2 経口 ロムスチン
1回投与(72時目);
1.4mg/m2 静注 ビンクリスチン
14及び28日目 6-7週毎×6
カペシタビン 直腸癌 Hospers et al.,
Ann. Surg. Oncol.
100mg/m2 経口 カペシタビン 14:2773-2779,
2回/日, 1-14及び25-38日目
＋ オキサリプラチンの用量を漸増して
シタラビン 骨髄性白血病 von Lilienfeld-Toal
et al., Hemtolog
100mg/m2 シタラビン持続注入 1-5日目 92:1719-1720
及び 5mg/m2 イダルビシン持続注入 1-5日目
デシタビン メラノーマ又は腎細胞癌 Gollob et al.,
Clin. Can. Res.
0.1-0.3mg/kg/dose 皮下注、 12:4619-4627
1-5及び8-12日目、
高用量のＩＬ−２と共に3-4及び6-8週目
任意に、１２週毎に更に２サイクル
フルオロウラシル 胃癌 Kim et al.,
Jpn. J. Clin. Oncol.
150mg/m2 イリノテカン 1日目 及び 37:744-749
20mg/m2 IdL V、次いで400mg/m2 (急速注入)、
及び 600mg/m2 (22時間連続注入）
５−ＦＵ 1及び2日目 14日毎
フロクスウリジン 転移性大腸癌 Xu et al.,
Ann. Surg.
胃十二指腸動脈注入 245:583-590
500mg ＦＵＤＲ
50mg オキサリプラチン
2.5mg デキサメタゾン
サパシタビン 前立腺癌、乳癌、肺癌を含む固形癌 Dalaunoit et al.,
Invest New Drugs,
1.5,12,20,25,30,50,67,90,120, 24:327-333, 2006.
160及び220mg/m2/day 経口、
最大耐性用量 160mg/m2/day
＊メルカプトプリンはビンクリスチン、メトトレキサート、及びプレドニゾン又はデキサメタゾンと併用投与した。
【００７３】
ゲムシタビン投与
ゲムシタビンを単一で用いて、又は他の薬剤と併用して、多種の癌を治療するための数多くのゲムシタビン投与計画が確立されている。例えば、単一薬剤として又は他の化学療法剤と併用して、１０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜１２００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量範囲が胆道癌の治療研究で用いられた。１サイクル当たり投与の頻度及び回数を変化させた（例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Pastorelli et al., Ann. Oncol. 17:V153-157, 2006 を参照されたい）。８００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜１０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量範囲がステージＩＩＩＢ若しくはＩＶの非小細胞肺癌の治療研究で用いられた（例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Rocha Lima et al., Ann. Oncol. 15:410-418, 2004 を参照されたい）。尿路上皮の進行性移行性細胞癌、再発性ホジキンリンパ腫、膵臓癌、及び腎臓癌の治療研究において、同様な用量が投与された。
【００７４】
公開されている投与計画の例を以下の表に示している。
【００７５】
表３
進行性胆道癌における単独薬剤投与（Pastorelli et al., 2006.から部分的に複写した）
著 者 ゲムシタビン投与スケジュール
Metzger et al. 1000mg/m2/wk×7 次に1×/wk×3, 4週毎
Valencak et al, 1200mg/m2 days 1, 8,及び15、4週毎
Dobrilla-Dintinjana et al. 1000mg/m2/wk×7
Kubika et al., 10mg/m2/wk×7 次に 1×/wk × 3, 4週毎
Arroyo et al., 1000mg/m2 days 1,8,及び15, 4週毎
Gebbia et al., 1000mg/m2 days 1,8,及び15, 4週毎
Penz et al., 2200mg/m2 days 1, 2週毎
【００７６】
表４
非小細胞肺癌におけるドキセタキセル（Ｄｏｘ）とゲムシタビン（ｇｅｍ）の併用療 法（Rocha Lima et al., 2004. から部分的に複写した）
研 究 計 画
Dox 8日目 - gem 1及び8日目
Rebattu et al. Dox 85mg/m2 8日目 + gem 1000mg/m2 1及び8日目, 3週毎
Amenedo et al. Dox 85mg/m2 8日目 + gem 1000mg/m2 1及び8日目, 3週毎
Lizon et al. Dox 75mg/m2 8日目 + gem 1000mg/m2 1及び8日目, 3週毎
Georgoulias et al. Dox 100mg/m2 8日目 + gem 900mg/m2 1及び8日目, 3週毎 + G-CSF 150μg/m2 9-15日目 3週毎
Dox 1日目 - gem 1及び10又は15日目
Hejma et al. Dox 80mg/m2 1日目 + gem 1000mg/m2 1及び10日目
+ G-CSF 5μg/m2 2-8日目 3週毎
Vewntriglia et al. Dox 75mg/m2 1日目 + gem 1000mg/m2 1及び15日目, 3週毎
毎週又は隔週投与計画
Popa et al. Dox 40mg/m2 1及び8日目 + gem 1000mg/m2 1及び8日目, 3週毎
Manendez ert al. Dox 36mg/m2 1，8及び15日目 + gem 1000mg/m2 1，8及び15日目,
4週毎
McKey et al. Dox 30mg/m2 1，8及び15日目 + gem 800mg/m2 1，8及び15日目,
4週毎
Syrigos et al. Dox 80mg/m2 1日目 + gem 1000mg/m2 1日目 15日毎
Neubauer et al. Dox 36mg/m2 1, 8, 15, 22, 29及び36日目
+ gem 900mg/m2 1, 8, 22 及び29日目, 8週毎
【００７７】
本発明の方法では、ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ、好ましくは約７００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１３００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ、好ましくは約８００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１２００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与することができる。より高い用量比及びより低い用量比も可能である。この用量を１週間当たりの単回用量として投与してもよく、或いは複数の用量に分割してもよい。投与の速度（用量が投与される時間）を変えることができる。投与の頻度はサイクル当たり１、２、３回、又はそれ以上であってよい。サイクルは、１、２、３、４、５、６、７、８週間又はそれ以上であってよい。サイクルの回数は１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０回又はそれ以上、或いは所望の治療結果に到達するまで、又は副作用によって投与が制限されるまででもよい。
【００７８】
ＯＮ０１９１０投与
ＯＮ０１９１０−Ｎａは、異なった用量及び投与スケジュールを用いて臨床試験において検討されている。ある検討では、用量範囲が１６０〜８７４０ｍｇ／ｗｅｅｋであって、１週間当たり２用量に分割して、４週間おきに、連続３週間投与された。（４週間毎に、連続３週間、週に２回、２時間点滴。検討された用量範囲は８０ｍｇ〜４３７０ｍｇであった。更に試験するために推奨されるこのスケジュール当たりの用量は、３１２０ｍｇである。）体表面積を約１．８ｍ２と仮定すると、この用量は約９０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約４８５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋである。
【００７９】
別の検討では、ＯＮ０１９１０−Ｎａが週１回の連続スケジュールに沿って２４時間点滴として投与された。用量範囲は２５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜２７５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋであった。
【００８０】
別の検討では、ＯＮ０１９１０−Ｎａが２週間おきに７２時間点滴として投与された。用量範囲は５０ｍｇ／ｍ２／ｄａｙ〜４００ｍｇ／ｍ２／ｄａｙ（すなわち、７５ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜６００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ）であった。
【００８１】
ＯＮ０１９１０−Ｎａの安全性プロフィールは、ラットとイヌを用いる２つの標準的な毒性動物試験で確認された。ラットでは、３００及び６００ｍｇ／ｍ２の単回投与では毒性を引き起こさず、１２００ｍｇ／ｍ２はほんの少しの毒性（肛門性器の汚れ）を有していた。用量を３０００ｍｇ／ｍ２に増量すると１１匹のうち９匹の動物が死亡した。７日の反復投与（１２００ｍｇ／ｍ２）において、投与期間中に１３匹のうち２匹のラットが死亡した。１２匹の雄性ラット及び１２匹の雌性ラットからなる群を用いる、２８日の反復投与では、１８０ｍｇ／ｍ２及び４５０ｍｇ／ｍ２の固定１日用量が耐性であった。４週間にわたって週２回投与する９００ｍｇ／ｍ２の用量にもよい耐性があった。
イヌでは、２０００及び４０００ｍｇ／ｍ２の急性投与は、投与中に別の不快な徴候（もがき、啼鳴）と共に、胃腸への影響（下痢、鼓腸）を生じた。７日の静脈内反復投与で、１日当たり１０００ｍｇ／ｍ２はイヌによく耐性であった。２８日の反復投与で、１日当たり２００及び５００ｍｇ／ｍ２の静脈投与に、３匹の雄性及び３匹の雌性ビーグル犬よりなる群で２８日にわたってよい耐性であった。１０００ｍｇ／ｍ２で始めた高用量群は、８日後に毒性の徴候を何も示さなかった。用量漸増式検討に基づき、この用量スケジュールに対して毒性をもたらさない最高用量が、２８日間で約１５００〜２０００ｍｇ／ｍ２であると試算された。４週間にわたって１週間当たり１０００ｍｇ／ｍ２で２回処置した、６匹のイヌからなる別の群は、臨床的な問題も無く、この化合物に耐性であった。これらの毒性の検討において、有意な骨髄毒性、神経障害、又は心臓毒性の徴候は無かった。結果を以下の表に要約してある。（参照により本明細書に組み込まれている、Gumlreddy et al., Cancer Cell, 7:275-286, 2005. から複写している。）
【００８２】
表５
種 投与スケジュール ＭＴＤmg/m2 ＳＴＤ/ＬＤ１０mg/m2 ＨＮＳＴＤmg/m2
急速静注
ラット 単回投与 ＞１２００ ＜３０００ −−
（死亡なし） （９／１１死亡）
ラット ７日反復投与 １２００ −−
（２／１３死亡）
ラット ２×／ｗｋ、 ＜２１００ −−
４ｗｋｓ （５／９死亡）
ラット ２８日反復投与 ４５０ ＜９００ｎ −−
（１／３６死亡） （１１／３６死亡）
ラット ２×／ｗｋ、 ９００ −−
４ｗｋｓ （１／２４死亡）
イヌ 単回投与 ＞４０００ ２０００
イヌ ７日反復投与 ＞１０００ ＞１０００
イヌ ２×／ｗｋ、 ＞１０００
４ｗｋｓ
イヌ ２８日反復投与 ＞１０００ ２５００ １５００−
２０００
ＭＴＤ、最大耐性用量； ＳＴＤ、高毒性用量；ＬＤ１０、動物１０％の致死用量；
ＨＮＳＴＤ、最高無毒性用量。
【００８３】
本発明の方法では、ＯＮ０１９１０−Ｎａ及びそれらの誘導体は、約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ、又は約９０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜４８５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与できる。より高い及びより低い用量比も可能である。この用量を、１週間当たりの単回用量で投与してもよく、或いは複数回投与に分割することができる。投与の速度（この用量を投与する時間）は変えることができる。投与の頻度を１サイクル当たり１、２、３回、又はそれ以上とすることができる。サイクルは１、２、３、４、５、６、７、８週間又はそれ以上とすることができる。サイクル数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０サイクル又はそれ以上、或いは所望の治療結果に到達するまで、又は副作用によって投与が制限されるまででもよい。
【００８４】
上記の Rocha Lima 由来の表に示されているように、単剤として或いは併用化学療法計画としてのゲムシタビンの投与に対するスケジュール及び投与量は類似している。上記の表に又はゲムシタビンの投与についての当該技術分野において提供されている投与計画の何れも、ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体について上で述べられている投与計画と組み合わせることができる。当然のことながら、医師又は腫瘍学の当業者は該当する特定個人に対して投与計画を変えることができ、そして別の投与計画が可能である。
【００８５】
当然のことながら、化学療法剤の投与によって一般に生じる望ましくない副作用（例えば、好中球減少、感染、悪心）に従って、投与の特定の用量及びタイミングを化学療法剤とともに修正することができる。
【００８６】
本明細書で示されている範囲は、範囲内の全ての値についての省略した表現であると理解される。例えば、１〜５０の範囲は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、又は５０を含む群からの、何れかの数、数の組み合わせ、又は下位の範囲を包含していると理解される。
【００８７】
特段の記述があり又は文脈から明瞭である場合を除き、本明細書で用いらられている用語「又は」は包括的なものと理解される。
【００８８】
特段の記述があり又は文脈から明瞭である場合を除き、本明細書で用いられている用語「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は単数又は複数であると理解される。
【００８９】
本明細書における可変基の何れかの定義において化学基の列挙の記載は、単一基の何れか又は列挙された基の組み合わせの何れかとしての可変基の定義を含んでいる。本発明の可変基又は態様についての実施態様の記述は、単一の実施態様の何れか、又はその他の何れかの実施態様若しくはそれらの部分との組み合わせとしての実施態様を含んでいる。
【００９０】
本明細書に参照される全ての参考文献、特許、特許出願、及び優先権出願の出願日時点の受入番号は、参照により明確に組み込まれている。
【００９１】
本発明を以下の実施例によって更に説明する。これを限定しているものと解釈すべきではない。
【実施例】
【００９２】
材料及び方法
インビトロ増殖アッセイ
ゲムシタビン耐性ヒト膵臓癌細胞株８１３、１００５、ＭＰ２（ＡＴＣＣから市販されている）及びＥ３ＪＤ１３、ＸＰａ３、及びＸＰａ４（ＪＨＵ (Johns Hopkins University)で腫瘍の低継代から得られる）を、１０％のウシ胎仔血清及び１％のペニシリン／ストレプトマイシンを加えたＲＰＭＩ−１６４０中の標準培養条件下で生育させた。
【００９３】
Ｐｌｋ１ ｓｉＲＮＡ及びトランスフェクション試薬（Dharmacon RNA technologies, Lafayette, CO）は、５００μＬの生育培地中のそれぞれのウェルに３０，０００細胞を加えて３７℃で１晩培養した２４ウェルの細胞培養プレート中で最適化した。それぞれのプレートは、抗生物質なしの培地のみのウェル、毒性をチェックするための抗生物質なしの培地を含めた最終容量に対して０．２％、０．４％及び０．６％のトランスフェクション試薬（ＴＲ）となるウェル、及び変化するＴＲ量に抗生物質なしの培地中の濃度が１００ｎＭ及び２００ｎＭのｓｉＲＮＡを加えたウェルを含んでいた。２４時間及び４８時間にわたって条件を試験した。ＲＬＴ緩衝剤（Qiagen Valencia, CA）を用いて細胞を採取した。６個の細胞株全てにおけるＰｌｋ１阻害のためのｓｉＲＮＡ条件を最適化すると、ＴＲ、ｓｉＲＮＡの最適濃度及び時間は、それぞれぞれ０．４％、２００ｎＭ及び４８時間であった。
【００９４】
全てのＲＮＡを、細胞ペレット（及び腫瘍）から、ＲＮｅａｓｙ（登録商標）ミニキット（Quiagen, Valencia, CA）を用いて抽出した。ｃＤＮＡを、ｉＳｃｒｉｐｔ ｃＤＮＡ合成キット（Bio-Rad, Hercules, CA）を用い、製造会社の使用説明書に従って合成した。Ｐｌｋ１及びユビキチンＣ（ＵＢＣ，ハウスキーピング遺伝子として用いた）ｍＲＮＡの相対定量を、ＡＢＩ Ｔａｑｍａｎプローブ（Foster City, CA）を用いるｉＣｙｃｌｅｒ ｉＱリアルタイムＰＣＲ検出システム（Bio-Rad）を用いて実施した。実験を２回繰り返して、サンプルを４通りに作成した。
【００９５】
ゲムシタビン、ＯＮ０１９１０−Ｎａ及び両者の組み合わせに対するインビトロ薬物感受性（全てを７２時間１μＭ濃度にて）を、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ；Sigma, St Lois, MO）によって評価した。ｓｉＲＮＡを追跡する、ＭＴＴに基づく有効性の検討のために、細胞を９６ウェルのプレートに播種し、上記の条件で４８時間トランスフェクトし、次いで賦形剤又はゲムシタビンの何れかに１μＭの濃度で７２時間曝露した。それぞれの実験を、それぞれの薬物濃度に対して６通り行い、少なくとも３回独立して実施した。
【００９６】
膵臓癌に直接由来する異種移植片
切除した膵臓腺癌は、ＩＲＢが承認しているプロトコルに従って残存膵臓癌腫瘍から多数の腫瘍細胞を得るための方法として、ジョンズ・ホプキンス・医学研究所において日常的にヌードマウスに移植されている。簡潔に言えば、ウィップル摘出試料から得た腫瘍試料を抗生物質含有培地中で、２〜３ｍｍ３のピースに分割した。非壊死組織のピースを選択して、Matrigelに浸漬した。イソフルオランで麻酔して、Harlan (Harlan Laboratories, Washington, DC) から購入した５〜６週齢の雌性無胸腺（ｎｕ／ｎｕ）マウスに腫瘍を移植した。
【００９７】
腫瘍担持マウスを４群（１群あたりｎ＝８〜１０腫瘍）に分けた。マウスを、ゲムシタビン１００ｍｇ／ｋｇ、２回／週、４週間；若しくはＯＮ−０１９１０Ｎａ２５０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、４週間；又はこれらの組み合わせで処置した。実験の経過中、４日おきに、測径器を用いて腫瘍サイズ測定した。
【００９８】
２８日目に、動物を安楽死させて、標準的プロトコルを用いるＲＴ−ＰＣＲによるＰｌｋ１発現分析のために、腫瘍を取り出した。Ｐｌｋ１発現レベルを薬物非処理コントロールにおける発現と比較して表した。
【００９９】
薬物
ゲムシタビン（Eli Lilly, Indianapolis, IN）を生理食塩水に溶解した。薬物を新たに調製して、０．２ｍＬ／２０ｇ体重の注射容量で用いた。
【０１００】
ＯＮ−０１９１０−Ｎａを生理食塩水に溶解した。薬物を新たに調製して、０．２ｍＬ／２０ｇ体重の注射容量で用いた。
【０１０１】
相対腫瘍生育阻害
相対腫瘍生育阻害（ＴＧＩ）を、ＴＧＩ＝（Ｔｉ−Ｔ０／Ｃｉ−Ｃ０）として算出した。ここでＴｉ及びＣｉは、それぞれ、２８日目の処置群及びコントロール群の腫瘍サイズを示し；Ｔ０及びＣ０は１日目の処置群及びコントロール群の腫瘍サイズを示す。実験を２８日で終了した。異種移植片が、ＲＥＣＩＳＴ評価基準に従って、ＴＧＩ≦−３０％及びＴＧＩ＞−３０％である場合、それぞれに、ゲムシタビンに感受性がある及び耐性があると定義した。
【０１０２】
実施例１
膵臓癌細胞株におけるゲムシタビン耐性に打ち勝つＰｌｋ１の阻害
６種のゲムシタビン耐性細胞株を培養物中で生育して、ゲムシタビン単独、Ｐｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡ、又は両者の組合わせで２４時間処理した。細胞を培地中で更に３日間生育した。コントロールと比較した細胞生育のパーセントを測定した。
【０１０３】
同様に、同じ細胞株を、ゲムシタビン単独、Ｐｌｋ１単独、又はそれらの組み合わせの存在下で、３日間生育した。コントロールと比較した細胞生育のパーセントを測定した。
【０１０４】
非処理コントロールと比較すると、６種の細胞株のうち３種においてＰｌｋ１ ｓｉＲＮＡにより（図１Ａ）、６種の細胞株のうち２種においてＯＮ−０１９１０−Ｎａにより（図１Ｂ）、生育が阻害された。ゲムシタビンと組み合わせたＰｌｋ１阻害剤による処理が殆どの細胞株において生育を強く阻害した。ＯＮ−０１９１０−Ｎａ及びゲムシタビンの組み合わせが、少なくとも、３種の細胞株、１００５、ＸＰａ３、及びＸＰａ４における細胞生育阻害において有意な相加又は相乗効果を有していた。これらのデータは、Ｐｌｋ１阻害剤がゲムシタビン耐性細胞を殺すという点で有効であり得、そしてＰｌｋ１阻害剤がゲムシタビン耐性細胞をゲムシタビンにより破壊されることに対して感受性にすることを明らかにしている。
【０１０５】
実施例２
インビボでの膵臓癌におけるゲムシタビン耐性に打ち勝つＰｌｋ１の阻害
膵臓腫瘍を上に詳述したようにマウスに移植した。マウスを、ゲムシタビン単独、ＯＮ−０１９１０−Ｎａ単独、又はこれらの組み合わせで、示されるように処理した。腫瘍サイズを４日間隔で測定した。
【０１０６】
３種の膵臓腫瘍が、それぞれのゲムシタビン及びＯＮ−０１９１０−Ｎａに対して異なった感受性プロファイルを明らかにした（図２Ａ）。腫瘍４１は、処理内容を問わず、ゲムシタビンとＯＮ−０１９１０−Ｎａでの処理に対してともに、実質的に腫瘍の生育なしに、感受性があった。腫瘍ＪＨ０３は、ゲムシタビン単独に対して感受性があったが、ＯＮ−０１９１０−Ｎａに対してはなかった。しかしながら、ゲムシタビン及びＯＮ−０１９１０−Ｎａの組み合わせは、２８日目の実験の終わりまでにゲムシタビン単独よりもより有効であった。腫瘍２８は、ゲムシタビンに耐性でＯＮ−０１９１０−Ｎａに感受性であった。とりわけ、ゲムシタビン及びＯＮ−０１９１０−Ｎａの組み合わせは、何れの単独の化合物よりも有意に有効であった。
【０１０７】
２８日目に、腫瘍を採取して、Ｐｌｋ１発現について分析した（図２Ｂ（Ｃ））。示されるように、ゲムシタビンに曝露した後のＰｌｋ１の発現が最も低かったＪＨ０３腫瘍が、ゲムシタビンによる処理に対して最も感受性があった。
【０１０８】
これらのデータは、ＯＮ−０１９１０−Ｎａがゲムシタビン耐性膵臓腫瘍にゲムシタビン感受性を誘導できることを明らかにしている。
【０１０９】
実施例３
ヌクレオチド類縁化学療法剤での処理に感受性がある癌を有する対象の治療
対象は、ゲムシタビンによる治療に感受性がある進行性胆道癌であると診断されている。手術が行われて全身腫瘍組織量が減少している。転移癌及び原発部位に残っている癌を縮小及び治療するために化学療法を開始する。対象にゲムシタビンを４週間おきに、１、８、及び１５日目に、２サイクル、１０００ｍｇ／ｍ２にて投与する。第３サイクルに開始して、ＯＮ−０１９１０−Ｎａを１週間に１度の連続スケジュールで２４時間点滴として併用投与する（４週サイクルの１、８、１５、及び２３日目に）ＯＮ０１９１０の容量は１０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋである。薬剤を化学療法投与計画の残りのサイクルについて併用投与する。対象を病気の進行又は退行について観察する。
【０１１０】
実施例４
Ｐｌｋ１を標的にするｓｉＲＮＡの併用投与によるゲムシタビン耐性の発現の阻害
対象は膵臓癌であると診断されている。Ｐｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡ化合物を、ゲムシタビン化学療法のそれぞれのサイクルの間の第１回投与と同時（すなわち、各４週サイクルの第１日目）に対象に投与する。ｓｉＲＮＡ治療剤は、ゲムシタビンの投与と比較すると相対的に低頻度投与を可能にする長時間効果がある化合物である。ゲムシタビン化学療法をサイクルの所望回数まで続ける。対象を病気の進行又は退行について観察する。
【０１１１】
実施例５
ＯＮ０１９１０を用いる、ヌクレオチド類縁化学療法剤に対する耐性の発現の阻害
対象はリンパ性白血病であると診断されていて、癌は最大１２サイクルにわたる毎２８日の５日間の２５ｍｇ／ｍ２／ｄａｙの用量でのフルダラビン静脈内投与による治療に感受性がある。フルダラビンの第１回投与の１週間前に、ＯＮ０１９１０を１００ｍｇ／ｍ２／ｄａｙの用量にて７２時間点滴で（総用量３００ｍｇ／ｍ２）投与する。同じ用量のＯＮ０１９１０を、フルダラビン化学療法の期間を通して、１週間毎に連続投与する。対象を病気の進行又は退行について観察する。
【０１１２】
参照による組み込み
本願を通して引用されている、全ての引用文献、特許、係属中の特許出願及び公開された特許は、参照により本明細書に明確に組み込まれている。
【０１１３】
均等物
当業者は、本明細書に記載されている発明の具体的な実施態様に対する多くの均等物を認識できるか、或いは通常の実験により確認することができる。このような均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図されている。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌を治療するための薬剤を製造するための、有糸分裂攪乱物質／ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）経路阻害剤の使用。
【請求項２】
対象がヌクレオチド類縁化学療法剤に耐性の腫瘍を有しているとして選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
対象がゲムシタビンに耐性の癌を有しているとして選択される、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
対象が、癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について観察される、請求項１〜３の何れか一項に記載の使用。
【請求項５】
薬剤が、ヌクレオチド類縁化学療法剤を更に含有してなる、請求項１〜４の何れか一項に記載の使用。
【請求項６】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が、Ｐｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項１〜５の何れか一項に記載の使用。
【請求項７】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が、ＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項１〜６の何れか一項に記載の使用。
【請求項８】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が、ＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項１〜７の何れか一項に記載の使用。
【請求項９】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が、核酸治療剤を含有してなる、請求項１〜６の何れか一項に記載の使用。
【請求項１０】
核酸治療剤が、Ｐｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項１〜１０の何れか一項に記載の使用。
【請求項１２】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンである、請求項１〜１１の何れか一項に記載の使用。
【請求項１３】
癌が、白血病、リンパ腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群よりなる群から選ばれる、請求項１〜１２の何れか一項に記載の使用。
【請求項１４】
癌が、膵臓癌を含有してなる、請求項１〜１３の何れか一項に記載の使用。
【請求項１５】
薬剤が、ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体を約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与するために製剤化されている、請求項１〜８又は１１〜１４の何れか一項に記載の使用。
【請求項１６】
薬剤が、ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与するために製剤化されている、請求項１〜１５の何れか一項に記載の使用。
【請求項１７】
ヌクレオチド類縁化学療法剤に耐性の癌を有している対象を同定すること；
有糸分裂攪乱物質／ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）経路阻害剤を対象に投与すること；及び
癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察すこと：
を含有してなる、ヌクレオチド類縁化学療法剤に耐性の癌を治療する方法。
【請求項１８】
対象にヌクレオチド類縁化学療法剤を投与することを更に含んでなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンを含有してなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＰｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項５に記載の方法。
【請求項２３】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が核酸治療剤を含有してなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
核酸治療剤がＰｌＫ１を標的にしている、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
核酸治療剤がＰｌＫ１を標的にしているｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
癌が、白血病及びリンパ腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群よりなる群から選ばれる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
癌が膵臓癌である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２９】
ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体を約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項１７に記載の方法。
【請求項３１】
癌を有する対象を同定すること；
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に投与すること；及び
癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察すること：
を含有してなる、癌を有する対象におけるヌクレオチド類縁化学療法剤耐性の発現を阻止する方法。
【請求項３２】
対象にヌクレオチド類縁化学療法剤を投与することを更に含んでなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンを含有してなる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＰｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が核酸治療剤を含有してなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的にしている、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
核酸治療剤が、Ｐｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
癌が、白血病及びリンパ腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群よりなる群から選ばれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項４２】
癌が膵臓癌である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４３】
ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体を約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項３４に記載の方法。
【請求項４４】
ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４５】
ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌を有する対象を同定すること；
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に併用投与すること；及び
癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察すること：
を含有してなる、癌を治療する方法。
【請求項４６】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンを含有してなる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＰｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が核酸治療剤を含有してなる、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的にしている、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
癌が、白血病及びリンパ腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群よりなる群から選ばれる、請求項４５に記載の方法。
【請求項５５】
癌が膵臓癌である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５６】
ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体を約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５７】
ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項４５に記載の方法。
【請求項５８】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を併用投与する前に、ヌクレオチド類縁化学療法剤を対象に単独投与することを更に含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項５９】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に併用投与する前に、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に単独投与するこを更に含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項６０】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に併用投与した後、ヌクレオチド類縁化学療法剤を単独投与することを更に含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項６１】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に併用投与する前に、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に単独投与するこを更に含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項６２】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有してなる、医薬組成物。
【請求項６３】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンを含有してなる、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＰｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６６】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６８】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が核酸治療剤を含有してなる、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６９】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的としている、請求項６７に記載の組成物。
【請求項７０】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項６９に記載の組成物。
【請求項１】
ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌を治療するための薬剤を製造するための、有糸分裂攪乱物質／ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）経路阻害剤の使用。
【請求項２】
対象がヌクレオチド類縁化学療法剤に耐性の腫瘍を有しているとして選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
対象がゲムシタビンに耐性の癌を有しているとして選択される、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
対象が、癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について観察される、請求項１〜３の何れか一項に記載の使用。
【請求項５】
薬剤が、ヌクレオチド類縁化学療法剤を更に含有してなる、請求項１〜４の何れか一項に記載の使用。
【請求項６】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が、Ｐｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項１〜５の何れか一項に記載の使用。
【請求項７】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が、ＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項１〜６の何れか一項に記載の使用。
【請求項８】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が、ＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項１〜７の何れか一項に記載の使用。
【請求項９】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が、核酸治療剤を含有してなる、請求項１〜６の何れか一項に記載の使用。
【請求項１０】
核酸治療剤が、Ｐｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項１〜１０の何れか一項に記載の使用。
【請求項１２】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンである、請求項１〜１１の何れか一項に記載の使用。
【請求項１３】
癌が、白血病、リンパ腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群よりなる群から選ばれる、請求項１〜１２の何れか一項に記載の使用。
【請求項１４】
癌が、膵臓癌を含有してなる、請求項１〜１３の何れか一項に記載の使用。
【請求項１５】
薬剤が、ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体を約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与するために製剤化されている、請求項１〜８又は１１〜１４の何れか一項に記載の使用。
【請求項１６】
薬剤が、ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与するために製剤化されている、請求項１〜１５の何れか一項に記載の使用。
【請求項１７】
ヌクレオチド類縁化学療法剤に耐性の癌を有している対象を同定すること；
有糸分裂攪乱物質／ポロ様キナーゼ（Ｐｌｋ）経路阻害剤を対象に投与すること；及び
癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察すこと：
を含有してなる、ヌクレオチド類縁化学療法剤に耐性の癌を治療する方法。
【請求項１８】
対象にヌクレオチド類縁化学療法剤を投与することを更に含んでなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンを含有してなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＰｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２２】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項５に記載の方法。
【請求項２３】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が核酸治療剤を含有してなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２５】
核酸治療剤がＰｌＫ１を標的にしている、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
核酸治療剤がＰｌＫ１を標的にしているｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
癌が、白血病及びリンパ腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群よりなる群から選ばれる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２８】
癌が膵臓癌である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２９】
ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体を約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項１７に記載の方法。
【請求項３１】
癌を有する対象を同定すること；
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に投与すること；及び
癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察すること：
を含有してなる、癌を有する対象におけるヌクレオチド類縁化学療法剤耐性の発現を阻止する方法。
【請求項３２】
対象にヌクレオチド類縁化学療法剤を投与することを更に含んでなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンを含有してなる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＰｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が核酸治療剤を含有してなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的にしている、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
核酸治療剤が、Ｐｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
癌が、白血病及びリンパ腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群よりなる群から選ばれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項４２】
癌が膵臓癌である、請求項３１に記載の方法。
【請求項４３】
ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体を約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項３４に記載の方法。
【請求項４４】
ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４５】
ヌクレオチド類縁化学療法剤による治療に感受性がある癌を有する対象を同定すること；
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に併用投与すること；及び
癌の少なくとも１つの徴候又は症状の減少又は安定化について対象を観察すること：
を含有してなる、癌を治療する方法。
【請求項４６】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンを含有してなる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＰｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項４８に記載の方法。
【請求項５１】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が核酸治療剤を含有してなる、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的にしている、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
癌が、白血病及びリンパ腫、結腸直腸癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、基底細胞癌、膀胱癌、肝臓癌、前立腺癌、胃癌、腎臓癌、メラノーマ、神経膠腫、食道癌、子宮頸癌、及び骨髄異形成症候群よりなる群から選ばれる、請求項４５に記載の方法。
【請求項５５】
癌が膵臓癌である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５６】
ＯＮ０１９１０−Ｎａ又はそれらの誘導体を約５０ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約５０００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項４９に記載の方法。
【請求項５７】
ゲムシタビンを約５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋ〜約１５００ｍｇ／ｍ２／ｗｅｅｋの用量で投与する、請求項４５に記載の方法。
【請求項５８】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を併用投与する前に、ヌクレオチド類縁化学療法剤を対象に単独投与することを更に含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項５９】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に併用投与する前に、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に単独投与するこを更に含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項６０】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に併用投与した後、ヌクレオチド類縁化学療法剤を単独投与することを更に含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項６１】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に併用投与する前に、有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を対象に単独投与するこを更に含有してなる、請求項４５に記載の方法。
【請求項６２】
ヌクレオチド類縁化学療法剤及び有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤を含有してなる、医薬組成物。
【請求項６３】
ヌクレオチド類縁化学療法剤が、クラドリビン、クロファラビン、フルダラビン、メルカプトプリン、ペントスタチン、チオグアニン、カペシタビン、シタラビン、デシタビン、フルオロウラシル、フロクスウリジン、サパシタビン、及びゲムシタビンよりなる群から選ばれる、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６４】
ヌクレオチド類縁化学療法剤がゲムシタビンを含有してなる、請求項６３に記載の組成物。
【請求項６５】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＰｌｋ１阻害剤を含有してなる、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６６】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０又はそれらの誘導体を含有してなる、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６７】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤がＯＮ０１９１０を含有してなる、請求項６５に記載の組成物。
【請求項６８】
有糸分裂攪乱物質／Ｐｌｋ経路阻害剤が核酸治療剤を含有してなる、請求項６２に記載の組成物。
【請求項６９】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的としている、請求項６７に記載の組成物。
【請求項７０】
核酸治療剤がＰｌｋ１を標的とするｓｉＲＮＡを含有してなる、請求項６９に記載の組成物。
【図１】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【公表番号】特表２０１１−５１８１５３（Ｐ２０１１−５１８１５３Ａ）
【公表日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０４９７４（Ｐ２０１１−５０４９７４）
【出願日】平成２０年４月１７日（２００８．４．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００５１０４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２８８０５
【国際公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り
【出願人】（５０５０４５９０８）ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ (21)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年６月２３日（２０１１．６．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年４月１７日（２００８．４．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／００５１０４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２８８０５
【国際公開日】平成２１年１０月２２日（２００９．１０．２２）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り
【出願人】（５０５０４５９０８）ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ (21)
【Ｆターム（参考）】
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