コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤
本発明は、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃ−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ→ＧａｌＮＡｃ）β−１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（コア２β−１，６ Ｎ−アセチルアミノトランスフェラーゼ、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ：ＥＣ２．４．１．１０２）の阻害剤としての既知および新規化合物の使用に関する。このような阻害剤は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した疾患、特に、炎症性疾患、アテローム硬化症、糖尿病性心筋症、癌（転移の治療または予防が含まれる）または糖尿病性網膜症の療法に適用を有する。
【発明の詳細な説明】
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【０００１】
本発明は、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃ−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ→ＧａｌＮＡｃ）β−１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（コア２β−１，６ Ｎ−アセチルアミノトランスフェラーゼ、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ：ＥＣ２．４．１．１０２）の阻害剤としての既知および新規化合物の使用に関する。
【０００２】
このような阻害剤は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した疾患、特に、炎症性疾患、アテローム硬化症、糖尿病性心筋症、癌（転移の治療または予防が含まれる）または、糖尿病性網膜症の療法に適用を有する。
【０００３】
本発明者は、本明細書に記載する化合物が、本明細書に記載のアッセイにおいて測定されるように、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導性の活性と、培養ウシ網膜毛細管内皮細胞へのヒト白血球のグルコース誘導性の結合を阻害可能であることを確定した。以下にコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤と呼ぶこれらの化合物の患者への投与は、上記の疾患状態において、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性を阻害することによって、コア２Ｏ−グリカンおよびシアリルＬｅｗｉｓＸの異常な形成を予防または治療することができる。
【０００４】
グルコシル化されるタンパク質中のセリンまたはスレオニンのいずれかの残基へのＮ−アセチル−グルコサミン（ＧａｌＮＡｃ）の付加によるグリコシル化の開始に続き、プロセシングは、Ｏ−グリカンの伸長、分岐、そして次いで、末端修飾により進行する。
【０００５】
Ｏ−グリカン伸長および分岐における必須の工程は、相同のグリコシル−トランスフェラーゼのファミリーに由来する多数のグリコシルトランスフェラーゼアイソフォームにより触媒される。この第一のＧａｌＮＡｃ残基へどのサッカライド基がその後付くかに依存して、Ｏ−グリカンは、４つの主要サブタイプへ分類される（図１）。コア１構造は、ガラクトースの付加により形成されて、Ｇａｌβ１−３−ＧａｌＮＡｃ−αＳｅｒ／Ｔｈｒを形成する。コア２構造は、コア１構造を基質として要求して、ＧｌｃＮＡｃの付加により形成されて、Ｇａｌ１β１−３（ＧｌｃＮＡｃβ１−６）ＧａｌＮＡｃ−αＳｅｒ／Ｔｈｒを形成する。コア３構造は、ＧｌｃＮＡｃの付加により形成されて、ＧｌｃＮＡｃβ１−３ＧａｌＮＡｃ−αＳｅｒ／Ｔｈｒを形成する。コア４構造は、コア３構造を基質として要求してＧｌｃＮＡｃの付加により形成されて、ＧｌｃＮＡｃβ１−３（ＧｌｃＮＡｃβ１−６）ＧａｌＮＡｃ−αＳｅｒ／Ｔｈｒを形成する。コアＧａｌＮＡｃ構造への他の修飾も見出されているが、稀であるらしい。これらコア構造は、いずれも、ガラクトシル化、シアル化、フコシル化、硫酸化、または伸長によりさらに修飾されて、最終的にＯ−グリカンを形成する。
【０００６】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの３つの型が知られている。白血病細胞より同定されたコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ Ｉ、ムチン分泌組織において同定されたコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ ＩＩ、およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ ＩＩＩと呼ばれる第三の胸腺関連種である。
【０００７】
細胞表面Ｏ−グリカンは、発生とある種の疾患状態において、細胞−細胞相互作用を仲介するのに不可欠な役割を担うことが知られている。タンパク質グリコシル化のパターンは、ゴルジ体において発現されるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのようなグリコトランスフェラーゼ酵素の活性および特異性により主に決定される（１−２）。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔは、Ｏ−連結グリカンの生合成において不可欠な役割を担い（３−４）、ポリラクトサミン（即ち、反復性のＧａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３）のあるＯ−連結糖（悪性の形質転換と関連した構造）の伸長に重要な調節工程を表す（５−６）。
【０００８】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性の変化は、Ｔ細胞活性化、癌、転移、骨髄芽細胞性白血病、心筋機能不全、および炎症のような、様々な疾患状態と関連付けられてきた（７−１８）。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの調節が特に重要であると考えられるのは、この酵素により形成される基本のコアオリゴ糖へのラクトサミン構造の付加とその後のフコースおよびシアル酸での修飾が、細胞接着タンパク質であるセレクチンのリガンドを構成する、ＬｅｗｉｓＸ、シアリル−シアリルＬｅｗｉｓａ、およびＬｅｗｉｓＸ糖基の形成をもたらすからである。このセレクチン−リガンド相互作用は、多くのプロセスにおいて重要な役割を担う。
【０００９】
炎症は、感染や他の何らかの形の外傷に対して身体が全般的に応答する方法である。炎症の間の主要な事象の１つは、免疫系の細胞が血流から被感染または損傷領域へ移動することである。ひとたび損傷の部位にあると、これらの細胞は、攻撃する作用体の隔離、破壊、および除去の原因となる。
【００１０】
短い期間（数分〜数日）を特徴とする急性炎症は健康に必須であるが、時々、この炎症プロセスは、適切なときに終わらずに、そのことが諸問題を引き起こす。慢性炎症は、長期間（数日、数週、数ヶ月、および数年でさえ）、リンパ球およびマクロファージ、組織破壊および修復、並びに血管増殖および線維症を特徴とする。炎症は、身体の正常な構成要素により不適切に始動される場合もあり、喘息、慢性関節リウマチ、および炎症性腸疾患のような一般的な疾患においてある役割を担う。
【００１１】
多くの細胞接着分子は、炎症のプロセスに関与することが知られている。炎症の部位では、血液溢出プロセスに先立って、はじめに白血球が血管内皮細胞へ接着する。白血球の内皮細胞へのこの初期の接着において、セレクチンはきわめて重要な役割を担うと考えられている。セレクチンとその炭水化物リガンドにより仲介される細胞接着は、内皮内層上での白血球の係留とローリングをもたらす。次いで、これが二次性のしっかりとした接着をもたらす。初めの刺激の数時間以内に、好中球が組織に入り始めて、移行を数日間続ける場合もある。ある炎症状態では、血管の直接的な損傷により組織傷害が引き起こされて、その組織への好中球の後続の動員によって増幅される。
【００１２】
Ｏ−グリカンの発現は、これらの付加物の嵩（かさ）のために、細胞−細胞相互作用を抑える。コア２Ｏ−グリカンの発現は、上記の場合のすべてにおいて、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの転写レベルにより調節される。末梢ＴおよびＢ細胞の抗原仲介性の活性化は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔおよび分岐Ｏ−グリカンのＣＤ４３（ロイコシアリン）に対する増加した活性を特徴とする（１９−２０）。
【００１３】
白血球の血液溢出、リンパ球転送、および他のプロセスが、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔにより合成されるＯ−グリカンに関与する。具体的には、シアリルＬｅｗｉｓＸで終結する細胞表面のＯ−グリカン構造が炎症の部位への白血球の動員に関与する。コア２ＧｌｃＮＡｃ−ＴはＴ細胞発生に重要でないが、この酵素の過剰発現は、骨髄性系統の発生を完全に遮断することが示されている。コア２Ｏ−グリカンの過剰発現はまた、Ｔ細胞およびＢ細胞間の相互作用（ＴＢ相互作用）に影響を及ぼすことが報告されている。このＴ−Ｂ相互作用は体液性の免疫応答にきわめて重要であり、Ｂ細胞上のＣＤ４０とＴ細胞上のＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の結合（ＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０相互作用）を介して仲介される。この相互作用は、Ｂ細胞の増殖を誘導する。コア２Ｏ−グリカンの過剰発現は、ＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０相互作用の有意な低下を引き起こすことが示されている（２１）。
【００１４】
活性化白血球の細胞表面上でのシアリルＬｅｗｉｓＸの合成を遮断して、それによりセレクチンとそれらの相互作用を停止させることによって、白血球浸潤の最初の工程が起こることを効果的に妨害することが可能である。故に、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を抑えることができるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害剤は、炎症を変調させることに有用性がある。
【００１５】
アテローム硬化症は、機序不明の進行性の炎症性疾患である。循環白血球の動員と、特に動脈の分岐および分枝での内皮への接着は、じゅく腫形成時（ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）に起こることが知られている最も早期の事象の１つである。次いで、白血球上のインテグリンがこの細胞間のより強い付着を引き起こす。白血球は、内皮下の空間へ移行して、その内奥で蓄積し始める。単球は、酸化された低密度リポタンパク質（ＬＤＬ−ｏｘＬＤＬ）の存在により活性化マクロファージへ変換され、これらの活性化マクロファージは、そのスキャベンジャー受容体を介して、修飾されたリポタンパク質の種を取り込み、分化して、泡沫細胞になる。急性冠症候群で死亡した患者からのアテローム硬化性冠動脈の組織学的な分析は、泡沫細胞、マクロファージ、リンパ球、および肥満細胞が不安定な、または破裂したプラークに存在したことを証明する（４９）。
【００１６】
少なくとも３つの白血球接着分子、Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１、およびＶＣＡＭ−１がヒトのアテローム硬化症において同定されている（５０，５１）。さらに、正常な血管とは対照的に、アテローム硬化性の病巣では、上皮細胞によりＰ−セレクチンが過剰に発現されて、Ｅ−セレクチン（５２）およびＩＣＡＭ−１（５３）の動脈管腔での発現が、単核白血球の蓄積がある動脈部分で増加することがわかった。第三の接着分子、ＶＣＡＭ−１は、アテローム硬化症の動物モデルにおいて検出されて、ヒト冠動脈の非アテローム硬化部分においてよりも、アテローム硬化プラークの内奥においてより多く認められることも示されている。
【００１７】
Ｃｈｉｂｂｅｒら（５４）は、白血球−内皮細胞接着の増加におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの重要性を評価して、この酵素の活性の有意な増加を糖尿病患者の白血球に見出した。しかしながら、今日まで、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性がアテローム硬化症に罹患している患者の循環白血球で上昇しているという証拠はない。本出願人は、今回、酵素コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性が、アテローム性硬化症の患者からの循環白血球において実際に上昇していることを実証した。これは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を低下させることが可能な化合物は、アテローム硬化症の治療または予防に、またはアテローム硬化プラークの患者における再発を医療介入後に予防することに有用であることを示唆する。
【００１８】
糖尿病性心筋症の臨床症状が同定されてきたが、その病理発生は不明である。糖尿病性心筋症の定義は、糖尿病患者の筋細胞に心筋肥大および拡張性機能不全をもたらす線維症のような特定の欠陥があること、同時に、糖尿病の経過の間に発生した、心臓における関連した変化のあることを記載する。
【００１９】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性が、糖尿病の動物および患者の心臓組織において通常観察される、上昇した複合糖質の直接の原因であることを示唆する強い証拠が今日ある。この裏付けとして、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の増加が、糖尿病の実験動物モデルの心臓において、糖尿病患者の心臓においてこの状態の数年後に観察されるものに類似した病理を引き起こすことが最近示された。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの発現が心臓ミオシンプロモーターにより推進されるトランスジェニックマウスを使用して、種々の研究が行われた。４ヶ月目に、左心室の顕著な肥大と心臓の全般的な肥大が観察された（１６−１７）。
【００２０】
コア２分岐とコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性における顕著な変化は、悪性の形質転換、白血病、および癌腫と関連している（２１，３３−３６）。Ｔ２４Ｈ−ｒａｓでトランスフェクトしたラット線維芽細胞および乳癌細胞は、それらが転移性の腫瘍になるにつれて、コア２Ｏ−グリカンを発現する（３３）。
【００２１】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの癌および癌転移における関与を指摘する多数の証拠がある。例えば、高転移性の結腸癌細胞は、その低転移性対照物より多くのシアリルＬｅｗｉｓＸを発現すると同時に、ほとんど転移しない細胞より強くＥ−セレクチンへ接着する。腫瘍細胞におけるシアリルＬｅｗｉｓＸの発現と腫瘍進行の間には、強い相関性がある（３４）。さらに、コア２Ｏ−グリカンにおけるシアリルＬｅｗｉｓＸの発現とリンパおよび静脈への浸潤の間にもかなりの相関性が存在する。
【００２２】
最近の知見は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔがα１，３−Ｆｕｃ−Ｔとの組合せにおいて口腔癌におけるセレクチン仲介性の転移に貢献することを示唆する（３５）。さらに、ウェスタンブロット解析は、抗ｓＬＸモノクローナル抗体により認識されるａ−連結オリゴ糖を担う、主要なほぼ１５０ｋＤａの糖タンパク質がｓＬＸ陽性プレＢ白血病細胞系に存在することを明らかにした。ＣＤ１５発現とコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのこの相関性は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔが、ヒトプレＢリンパ様細胞におけるシアリルＬｅｗｉｓＸの細胞表面発現のレギュレーターであることを示唆する。これらの結果は、リンパ節転移が患者の予後に最も影響を及ぼす要因であるので、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより検出されるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ ｍＲＮＡが肺腺癌の悪性ポテンシャルを反映することを示す。
【００２３】
酵素１，３−フコシルトランスフェラーゼでのトランスフェクションによる、マウスメラノーマＢ１６−ＦＩにおけるシアリルＬｅｗｉｓＸの発現も、腫瘍転移におけるシアリルＬｅｗｉｓＸの重要性を確証した。このトランスフェクトされた細胞をマウスへ静脈内注射すると多数の肺腫瘍結節が形成されたが、元のＢ１６−ＦＩ細胞は、ほとんど腫瘍を形成しなかった。
【００２４】
シアリルＬｅｗｉｓａ、シアリルＬｅｗｉｓＸ（いずれもセレクチンリガンド炭水化物構造）の発現とコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性は、いずれも結直腸癌の悪性腫瘍度と密接に関連している（３６）。最近、Ｎｕｍａｈａｔａ（３７）は、原発性膀胱癌におけるシアリルＬｅｗｉｓＸ発現が浸潤性および転移性のアウトカムの予測因子となることを実証した。同等の予後価値を有する他の炭水化物エピトープはこれまで検証されていない。最近、ＵＳ２００４／００３３５２１は、コア２ｂＧｌｃＮＡｃ−Ｔが肝臓および胃の腫瘍と結腸癌および肝転移の試料において過剰発現されていることを開示した。さらに、ＷＯ０４／０９３６６２は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔが前立腺癌、精巣および膀胱癌において上昇していることを実証する。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのレベルは、疾患の転移または再発の機会の増加に伴って増加する。
【００２５】
故に、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害剤は、Ｏ−グリカン、例えば、シアリルＬｅｗｉｓＸを担うものの産生を抑えることが期待され、癌の浸潤性および転移を抑制して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ発現がその組織種の正常レベルより高く上昇している癌の治療に有用であろう。
【００２６】
糖尿病性網膜症は、毛細管の閉塞、微小血管病巣の形成、網膜の虚血域に隣接した網膜の新血管形成を特徴とする（３９−４０）、進行性の視覚の脅威となる糖尿病の合併症である（３８）。
【００２７】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性が糖尿病性網膜症において増加する白血球−内皮細胞接着および毛細管閉塞の直接的な原因であることが最近見出された（４１）。上昇グルコースと糖尿病の血清がコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性とヒト白血球の内皮細胞への接着を高めることも今日実証されている。このことは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−ＴのＰＫＣβ２依存性リン酸化を介して起こる（４２−４３）。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのリン酸化に関与するこの調節機序は、１型および２型糖尿病患者より単離した多形核白血球（ＰＭＮ）にも存在する。
【００２８】
特異的な阻害剤、ＬＹ３７９１９６によるＰＫＣβ２活性化の阻害は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのセリンリン酸化を弱め、活性の増加を予防して、それにより、白血球−内皮細胞接着の増加を予防する。そのような阻害剤は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の抑制が白血球−内皮細胞接着の増加を予防して、糖尿病または高血糖症と関連した網膜症における毛細管閉塞を予防する方法を提供するという確証を提供する。
【００２９】
コロハ（Ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ）は、数千年の間、糖尿病の治療に使用されてきた。この植物は、クマリン、サポニン、およびグリコシドのような多くの有効成分を含有する。多くの研究（４４）で、コロハの血糖低下特性が動物のヒトの両方で実証されてきた。この血糖低下特性は、強力なインスリン放出活性を有するアミノ酸、４−ヒドロキシイソロイシンによるとされてきた（４５−４６）。
【００３０】
本発明者は、今回、ある種の化合物がコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害剤であることを確定した。これら化合物のあるものは、コロハの種子より、そして他の植物供給源より入手可能である。
【００３１】
本発明の第一の側面において、式Ｉの化合物の有効量のその必要な患者への投与を含んでなる、酵素コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した状態の治療の方法を提供する。好ましくは、該疾患は、炎症性疾患、喘息、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、糖尿病性心筋症、心筋機能不全、癌、癌転移、または糖尿病性網膜症である。
【００３２】
癌には、白血病、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肺の腺癌のような肺癌、結直腸癌、膀胱癌、肝臓腫瘍、胃腫瘍、結腸腫瘍、前立腺癌、精巣腫瘍、乳癌、肺腫瘍、口腔癌、およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ発現がその組織種の正常レベルより高く上昇しているあらゆる癌が含まれる。
【００３３】
好ましくは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、糖由来置換基を含む。用語「糖由来置換基」は、サッカライドを意味し、ここでは随意に１以上の水素および／または１以上のヒドロキシル基が−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ（ここでＲは、メチル、エチルまたはプロピルである）により置き換えられて、誘導体を形成する。
【００３４】
サッカライドには、限定されないが、単糖類、二糖類、三糖類、四糖類、および多糖類が含まれる。
単糖類には、限定されないが、アラビノース、キシロース、リキソース、リボース、グルコース、マンノース、ガラクトース、アロース、アルトロース、グロース（ｇｕｌｏｓｅ）、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、フルクトース、ソルボース、タガトース、プシコース、セドヘプツロース、デオキシリボース、フコース、ラムノース、２−デオキシ−グルコース、キノボース、アベクオース、グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸、ムラミン酸、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−マンノサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−アセチルムラミン酸、Ｏ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、フルクツロン酸、タガツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ガラクツロン酸、イズロン酸、シアル酸、およびグルロン酸が含まれる。
【００３５】
好ましくは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、少なくとも１つの糖由来置換基を含み；より好ましくは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、少なくとも２つの糖由来置換基を含む。
【００３６】
好ましくは、それぞれの糖由来置換基は、独立して、単糖、二糖、三糖、または四糖であり；より好ましくは、それぞれの糖由来置換基は、独立して、単糖または三糖である。 好ましくは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、式Ｉ：
【００３７】
【化１】
【００３８】
［式中、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａ：
【００３９】
【化２】
【００４０】
の単糖であり；
好ましくは、Ｒ１は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａの単糖であり；より好ましくは、Ｒ１は、−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａの単糖であり；最も好ましくは、Ｒ１は、式ＩＩａの単糖である；
Ｒ２は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または式ＩＩｂ：
【００４１】
【化３】
【００４２】
の単糖であり；
好ましくは、Ｒ２は、−ＯＨ、または式ＩＩＩの単糖であり；より好ましくは、Ｒ２は、−ＯＨ、または式ＩＩＩの単糖であり；最も好ましくは、Ｒ２は、−ＯＨである；
Ｒ３は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または式ＩＩｃ：
【００４３】
【化４】
【００４４】
の単糖であり；
好ましくは、Ｒ３は、−ＯＨ、または式ＩＩｃの単糖であり；より好ましくは、Ｒ３は、式ＩＩｃの単糖であり；最も好ましくは、Ｒ３は、グルコースである；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ４は、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ４は、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ５は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｃ２Ｈ４ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３である；
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ６は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ６は、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ６は、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ７は、Ｃ２−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ７は、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ７は、−ＣＨ２ＯＨまたはＣ１−６アルコキシメチルであり；最も好ましくは、Ｒ７は、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；好ましくは、Ｒ８は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ８は、ＨまたはＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ８は、Ｈである；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；好ましくは、Ｒ９は、ＨまたはＣ１−６アシルであり；より好ましくは、Ｒ９は、Ｈまたは−ＣＯＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ９は、−ＣＯＣＨ３である；そして
Ｚは、ステロイド基である］の化合物またはその医薬的に許容される塩、エステル、または互変異性型、またはそれらの誘導体である。
【００４５】
好ましくは、式Ｉの化合物は、式ＩＩＩ：
【００４６】
【化５】
【００４７】
［式中：
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキル；より好ましくは、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３；最も好ましくは、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ５は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｃ２Ｈ４ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３である；そして
Ｒ７は、Ｃ２−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ７は、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ７は、−ＣＨ２ＯＨまたはＣ１−６アルコキシメチルであり；最も好ましくは、Ｒ７は、−ＣＨ２ＯＨである］の化合物である。
【００４８】
より好ましいのは、式ＩＩＩ［式中：
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルであり；そして
Ｒ７は、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルである］の化合物である。
【００４９】
より好ましいのは：
Ｒ４が、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ５が−ＣＨ３であり；そして
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨである、化合物である。
【００５０】
式ＩＩＩの最も好ましい化合物は、式Ｉ［式中、
Ｒ１は、ラムノースであり；
Ｒ２は、−ＯＨであり；
Ｒ３は、グルコースであり；そして
Ｒ４は、−ＣＨ２ＯＨである］の化合物である。
【００５１】
最も好ましいのは、式ＩＶ：
【００５２】
【化６】
【００５３】
である、式Ｉの化合物である。
また提供するのは、式Ｉの化合物が式Ｖ：
【００５４】
【化７】
【００５５】
［式中：
Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシまたは−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａ：
【００５６】
【化８】
【００５７】
の単糖であり；
好ましくは、Ｒ１は、−ＯＨまたは−ＮＲ８Ｒ９であり；より好ましくは、Ｒ１は、−ＮＲ８Ｒ９である；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルであり；最も好ましくは、−ＣＨ３である；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ５は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３である；そして
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ６は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ６は、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ６は、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；好ましくは、Ｒ８は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ８は、ＨまたはＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ８は、Ｈである；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；好ましくは、Ｒ９は、ＨまたはＣ１−６アシルであり；より好ましくは、Ｒ９は、Ｈまたは−ＣＯＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ９は、−ＣＯＣＨ３である；そして
Ｚは、ステロイド基である］の化合物である、化合物である。
【００５８】
式Ｖの好ましい化合物は：
Ｒ１が、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または−ＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ４が、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ６が、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；そして
Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルである化合物である。
【００５９】
式ＩＶのより好ましい化合物は：
Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ１−６アシルであり；
Ｒ４が、Ｃ１−６アルキルまたは−ＣＨ２ＯＨであり；そして
Ｒ６がＣ１−６ヒドロキシアルキルであるものである。
【００６０】
最も好ましいのは、式：Ｇａｌβ１→３（６−デオキシ）ＧａｌＮＡｃα−Ｚである、式ＩＶの化合物である。
式Ｉの化合物は、ステロイド基を含む。用語「ステロイド基」は、式ＶＩ：
【００６１】
【化９】
【００６２】
のように示される四環系の環系を含む。
好ましくは、ステロイド基は、ステロイド基の３位を介して分子の残りへ付く。例えば、上記の式Ｉの化合物は、好ましくは、式：
【００６３】
【化１０】
【００６４】
の化合物である。
ステロイド基は、コレスタン、５α−プレグナン、アンドロスタン、エストラン、コレステロール、コラン、プロゲスチン、グルココルチコイド、ミネラルコルチコイド、デヒドロエピアンドロステロンまたはその７−ケト類似体のようなアンドロゲン、胆汁酸、または他のステロイドであり得る。１つの好ましい態様において、ステロイドコアは、それ自身で有益であるかまたは中性であるステロイドである。「中性」は、ステロイドそのものがヒトまたは動物における使用に適すると承認されたことを意味する。「有益」とは、ステロイドが、別に投与されるならば、ヒトまたは動物に対して有益な効果を有することを意味する。
【００６５】
ステロイド基は、植物供給源より誘導可能なステロイド性サポゲニンでも、そのような植物ステロイド性サポゲニンより化学修飾によってそれ自身誘導可能であるステロイド性サポゲニンでもよい。
【００６６】
１つの態様において、ステロイド基は、式ＶＩＩ：
【００６７】
【化１１】
【００６８】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１２は、Ｈである；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１３は、Ｈである；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；最も好ましくは、Ｒ１５は、Ｈである；
Ｒ１６は、Ｈ、ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１６は、Ｈである；
Ｒ１７は、Ｈ、ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ１７は、Ｈである；
Ｒ１８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ１８は、ＨまたはＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１８は、Ｈである；
Ｒ１９は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであり；最も好ましくは、Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；そして特に、Ｒ１９は、−ＣＨ３である；
Ｒ２０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；最も好ましくは、Ｒ２０は、−ＯＨである；
Ｒ２１は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシであるか、または式ＶＩＩＩの基であり；好ましくは、Ｒ２１は、式ＶＩＩＩの基である：
【００６９】
【化１２】
【００７０】
｛式中、
Ｒ２２は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ２２は、Ｈ、ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ２２は、ＨまたはＯＨ、−ＯＣＨ３または−Ｏ−Ｃ２Ｈ５であり；最も好ましくは、Ｒ２２は、Ｈである；
Ｒ２３は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ２３は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ２３は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２であり；最も好ましくは、Ｒ２３は、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、または＝ＣＨ２であり；なおより好ましくは、Ｒ２３は、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２であり；そして特に、Ｒ２３は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である；そして
Ｒ２４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アシル、または単糖ＭＳであり；好ましくは、Ｒ２４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アシル、または単糖ＭＳであり；より好ましくは、Ｒ２４は、Ｃ１−６アシルまたは単糖ＭＳであり；最も好ましくは、Ｒ２４は、単糖ＭＳである｝；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ２８はＨで、Ｒ２９は−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ２８とＲ２９は、ともにＨである；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ３２は、Ｈである；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
ＭＳは、アラビノース、キシロース、リキソース、リボース、グルコース、マンノース、ガラクトース、アロース、アルトロース、グロース、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、フルクトース、ソルボース、タガトース、プシコース、セドヘプツロース、デオキシリボース、フコース、ラムノース、２−デオキシ−グルコース、キノボース、アベクオース、グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸、ムラミン酸、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−マンノサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−アセチルムラミン酸、Ｏ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、フルクツロン酸、タガツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ガラクツロン酸、イズロン酸、シアル酸、およびグルロン酸からなる群より選択され；好ましくは、ＭＳは、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、およびシアル酸からなる群より選択され；最も好ましくは、ＭＳは、グルコースである；そして
Ｙは、ＮまたはＯであり、好ましくは、ＹはＯである］のステロイド性サポゲニンである。
【００７１】
式ＶＩＩの好ましいステロイド性サポゲニンは、Ｒ２１が式ＶＩＩＩであり、ＹがＯであるものである。
式ＶＩＩのより好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２が、Ｈ、−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２８は、Ｈであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表すものである。
【００７２】
最も好ましいのは、式ＶＩＩ：［式中：
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、およびＲ２８は、それぞれＨを表し；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１６は、Ｈ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１９は、Ｈ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２１は、式ＶＩＩＩのものであり；
Ｒ２２は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２４は、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アシル、またはグルコースであり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨである］のステロイド性サポゲニンである。
【００７３】
式ＶＩＩの最も好ましいステロイド性サポゲニンは、
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ２２、Ｒ２８がそれぞれＨを表し；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２１は、式ＶＩＩＩであり；
Ｒ２３は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２であり；
Ｒ２４は、Ｃ１−６アシルまたはグルコースであり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ３２は、Ｈであるものである。
【００７４】
式ＶＩＩの最も好ましいステロイド性サポゲニンは：
【００７５】
【化１３】
【００７６】
［式中：
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２０は、ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２４は、グルコースまたはＣ１−６アシルであり；そして
Ｒ２９は、ＨまたはＯＨである］からなる群より選択される。
【００７７】
ステロイド基が式ＶＩＩのものである式Ｉの特に好ましい化合物は、トリゴネオシドＩＶａ、グリコシドＦ、シャタバリンＩ（ｓｈａｔａｖａｒｉｎ Ｉ）、化合物３、パルダリノシドＣ（ｐａｒｄａｒｉｎｏｓｉｄｅ Ｃ）であり、その構造は、表１に要約する。
【００７８】
【表１】
【００７９】
いずれの場合も、ステロイド基へ３位で結合するサッカライド基は：
【００８０】
【化１４】
【００８１】
である。
あるいは、ステロイド基は、式ＩＸ：
【００８２】
【化１５】
【００８３】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１２は、Ｈである；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１３は、Ｈである；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１５は、Ｈである；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１６は、Ｈである；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ１７は、Ｈである；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１８は、Ｈである；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；そして特に、Ｒ１９は、−ＣＨ３である；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；最も好ましくは、Ｒ２０は、−ＯＨである；
Ｒ２７は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；好ましくは、Ｒ２７は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ２７は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；最も好ましくは、Ｒ２７は、メチル、エチル、またはプロピルである；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ２８とＲ２９は、ともにＨである；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ３２は、Ｈである；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す］のステロイド性サポゲニンであり得る。
【００８４】
式ＩＸの好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２が、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２７は、Ｃ１−６アルキルであり；そして
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、それぞれＨまたは−ＯＨを表し；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであるものである。
【００８５】
より好ましくは、式ＩＸのステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２が、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２７は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、それぞれＨまたは−ＯＨを表し；そして
Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであるものである。
【００８６】
より好ましくは、式ＩＸのステロイド性サポゲニンは、一般式ＩＸａ：
【００８７】
【化１６】
【００８８】
のものである。
ステロイド基が式ＩＸである、式Ｉの最も好ましい化合物は：
【００８９】
【化１７】
【００９０】
であり、Ｌｉｌｉｕｍ ｍａｃｋｌｉｎｅａｅより単離可能である（５９）。
ステロイド性サポゲニンのさらに好ましい群は、ステロイド性サポゲニンが、式ＸＩ：
【００９１】
【化１８】
【００９２】
［式中、
Ｒ１２は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１２は、Ｈである；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１３は、Ｈである；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１５は、Ｈである；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１６は、Ｈである；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ１７は、Ｈである；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１８は、Ｈである；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであり；最も好ましくは、Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；そして特に、Ｒ１９は、−ＣＨ３である；
Ｒ２５は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ２５は、Ｈまたは−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ２５は、Ｈである；
Ｒ２６は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ２６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ２６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２であり；最も好ましくは、Ｒ２６は、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、または＝ＣＨ２であり；なおより好ましくは、Ｒ２６は、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２であり；そして特に、Ｒ２６は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ２８とＲ２９は、ともにＨである；
Ｒ３１は、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ３１は、Ｈである；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ３２は、Ｈである；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す；
Ｒ３４は、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ３４は、Ｈである；そして
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり；好ましくは、Ｘは、ＯまたはＮＨであり；より好ましくは、Ｘは、Ｏである］であるものである。
【００９３】
式ＸＩの好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２が、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５、Ｒ１８、Ｒ２８、およびＲ２９は、同じであるかまたは異なり、それぞれＨまたは−ＯＨを表し；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１９は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２６は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３１は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；そして
Ｒ３４は、Ｈまたは−ＯＨであるものである。
【００９４】
式ＸＩのより好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、およびＲ２８がそれぞれＨを表し；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１９は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２であり；
Ｒ２８は、Ｈであり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表すものである。
【００９５】
式ＸＩの最も好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ２５、Ｒ２８、Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３４がそれぞれＨを表し；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２６は、Ｃ１−６アルキルまたは＝ＣＨ２であり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈであり；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表すものである。
【００９６】
式ＸＩの最も好ましいステロイド性サポゲニンは、以下の基：
【００９７】
【化１９】
【００９８】
より選択されるものである。
式ＸＩの特に好ましいステロイド性サポゲニンは、ジオスゲニン、ヤモゲニン、チゴゲニン、ネオチゴゲニン、サルササポゲニン、スミラゲニン、ヘコゲニン、ソラソジン、またはトマチジンである。
【００９９】
ステロイド基が式ＸＩのものである式Ｉの特に好ましい化合物は：
シャタバリンＩＶ、（２５Ｒ）シャタバリンＩＶ、デルトニン、バラニチンＶＩ、ＭｉｍａｋｉおよびＳａｈｉｄａ（５８）の化合物１２である。
【０１００】
シャタバリンＩＶは、サルササポゲニン ３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
【０１０１】
化合物１２は、ソラソジン ３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
デルトニンは、（３β，２５Ｒ）−スピロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
【０１０２】
バラニチンＶＩは、（３β，２５Ｓ）−スピロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
【０１０３】
式Ｉの特に好ましい化合物は、好ましいステロイド基を好ましいサッカライド基と組み合わせるものである。
本発明の第二の側面において、式Ｉの化合物の、酵素：コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した状態の治療用医薬品の製造における使用を提供する。そのような状態の例は、本発明の第一の側面において本明細書に記載されている。
【０１０４】
本発明の第三の側面において、式Ｉの化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。
本明細書に使用するように、用語：コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、酵素、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ、好ましくは、本明細書に記載するアッセイにおいて測定されるように、本明細書に記載のコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ酵素活性を含んでなる調製物の、ＵＤＰ−６［３Ｈ］−Ｎ−アセチルグルコサミンを産物へ取り込む能力の阻害剤を意味する。
【０１０５】
本明細書に使用するように、用語アグリコンは、サッカライド部分が存在しない式Ｉの化合物を意味する。この化合物は、サッカライド部分により占められる位置に、他の置換基を有してよい。特に、フロスタノールサポニンであるアグリコンは、グリコシル化される場合、同等のスピロスタノールサポニンと同じように、閉環状態であり得る。
【０１０６】
本明細書の構造において使用する簡略表記：
【０１０７】
【化２０】
【０１０８】
は、構造：
【０１０９】
【化２１】
【０１１０】
を示すために使用する。
本明細書の構造において使用する簡略表記：
【０１１１】
【化２２】
【０１１２】
は、構造：
【０１１３】
【化２３】
【０１１４】
を示す。
本明細書において使用するように、簡略表記：Ｇｌｃはグルコースであり、Ｒｈａはラムノースである。疑念の回避のために言えば、用語Ｃ１−６アシルは、−ＣＯ−Ｃ１−５アルキルである。
【０１１５】
これから本発明を以下の非限定的な参考実施例、図面、および表を参照に記載する。これに照らせば、当業者には、本特許請求項の範囲内に該当するさらなる態様が考案されよう。
【０１１６】
発明の詳細な説明
実験法
式Ｉの化合物は、多様な植物種より抽出可能である。この点で参考になるのは、例のみを挙げると、Ｙｏｓｈｉｋａｗａら（５５）、Ｓｈａｓｈｅｄａら（５９）、Ａｋｈｏｖら（６０）、ＪｏｓｈｉおよびＤｅｖ（６１）、Ｒａｖｉｋｕｍａｒら（５６）、Ｖａｓｉｌ’ｅｖａおよびＰａｓｅｓｈｎｉｃｈｅｎｋｏ（６２）、Ｓｈｉｍｏｍｕｒａら（５７）、ＳｈａｒｍａおよびＳｈａｒｍａ（６３）、Ｐｅｔｉｔら（６４）、ＭｉｋａｍｉおよびＳａｓｈｉｄａ（５８）、およびＨｏｓｔｅｔｔｍａｎ（６５）と、これらの中の参考文献である。これらの文献は、いずれも参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１７】
あるいは、それらは、慣用の有機化学の方法および技術によって合成可能である。この点で参考になるのは、Ｔｈｉｓｂｅ Ｋ．Ｌｉｎｄｈｏｒｓｔ著「炭水化物の化学および生化学要説（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（２０００）ウィリー、Ｂｅａｔ Ｅｒｎｓｔ、Ｇｅｒａｌｄ Ｗ．ＨａｒｔおよびＰｉｅｒｒｅ Ｓｉｎａｒｙ監修「化学および生物学における炭水化物（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」（２０００）ウィリー、Ｊｏｈｎ Ｆ．Ｒｏｂｙｔ著「炭水化物化学の要説（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（１９９８）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｈａｓｓａｎ Ｓ．Ｅｌ Ｋｈａｄｅｍ著「炭水化物化学（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（１９８８）、Ｍｉｋａｅｌ Ｂｏｌｓ著「炭水化物構築ブロック（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ Ｂｌｏｃｋｓ）」（１９９６）、Ｐ．Ｇ．ＷａｎｇおよびＣ．Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ監修「糖化学：原理、合成、および応用（Ｇｌｙｃｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」（２００１）マーセル・デッカー、ニューヨーク、および王立化学協会スタッフ著「炭水化物化学（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（１９８９）ＣＲＣプレスのような炭水化物およびステロイド化学の教科書である。
【０１１８】
本発明の化合物は、市販のアグリコンより、またはコロハ種子または別の植物供給源からのアグリコンや他の前駆体の単離とその前駆体の後続の化学修飾によって製造可能である。
【０１１９】
当業者は、例えば、ジオスゲニン、ヤモゲニン、チゴゲニン、ネオチゴゲニン、サルサポゲニン、スミラゲニン、ヘコゲニン、ソラソジン、またはトマチジンのような、スピロスタノールおよびフロスタノールアグリコンの多くの供給源に注目されよう（例えば、Ｈｏｓｔｅｔｔｍａｎとその参考文献（６５））。
【０１２０】
具体的に、２，４−分岐オリゴ糖部分を有するスピロスタノールサポニンのジオスゲニンからの合成の方法については、Ｄｕら，２００３（７３）を参照のこと。この参考文献はまた、他のグルコシル化ステロイド、例えばコレステロールからの合成のさらなる参考になる。開示される方法は、ステロイドが化学的にグリコシル化される化合物を合成して式Ｉの化合物を生成するのに使用可能である。
【０１２１】
三糖置換スピロスタノールサポニンの合成については、Ｌｉら（６６）、多様な三糖および四糖置換スピロスタノールサポニンの合成については、Ｄｅｎｇら（６７）、フロスタノールサポニンの合成の方法ついては、Ｌｉら（６８）、Ｙｕら（６９）、Ｙｕら（７０）、そしてスピロスタノールおよびフロスタノールサポニンの相互変換については、ＹｕおよびＴａｏ（７１）、Ｃｈｅｎｇら（７２）、およびＤｕら（７３）がさらに参照になる。これらの参考文献はまた、単糖ヒドロキシアルキル基の誘導化についての情報とさらなる参考文献を提供する。
【０１２２】
Ｇａｌ１β１−３（６−デオキシ）ＧａｌＮＡｃα−コンジュゲートを合成する方法は、Ｐａｕｌｓｅｎら（４８）に示される。これらの方法は、式Ｉの他の化合物を合成するために、本明細書において参照される他の方法との組合せにおいて当業者により適用可能である。
【０１２３】
細胞培養
ウシ網膜毛細管内皮細胞（ＢＲＥＣ）および周皮細胞（ＢＲＰ）は、既報（４８）のように、屠殺したばかりのウシの目より切除したウシ網膜より確立した。簡潔に言えば、単離した網膜を無血清最少必須培地（ＭＥＭ，ギブコ、ペーズリー、イギリス）においてホモジェナイズして、８５μｍナイロンメッシュに通して濾過した。捕捉した微小血管を３７℃で３０分（ＢＲＰ）および９０分（ＢＲＥＣ）の間コラゲナーゼ−ジスパーゼ（１ｍｇ／ｍｌ）で消化して、５３μｍナイロンメッシュに通して濾過した。内皮細胞（ＢＲＥＣ）の増殖については、消化した微小血管をゼラチンコートした組織培養フラスコにおいてプレート培養して、１０％プール化ヒト血清、２ｍＭグルタミン、１００ＩＵ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＭＥＭにおいて維持した。周皮細胞（ＢＲＰ）の増殖については、上記微小血管を組織培養フラスコにおいて、１０％胎仔ウシ血清を補充した増殖培地においてプレート培養した。この細胞を２〜３継代で使用した。形態学的な判定基準を使用して、第ＶＩＩＩ因子関連抗原に対する抗体と３Ｇ５−周皮細胞マーカーでの免疫染色によって、この細胞を特性決定した。
【０１２４】
ヒト白血球細胞系（Ｕ９３７）は、１０％胎仔ウシ血清、２ｍＭグルタミン、１００ＩＵ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩにおいて培養した。
【０１２５】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の細胞ベースアッセイ
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔを薬理学的に阻害するコロハのポテンシャルを検討するために、標準グルコース（５．８ｍＭ）および高グルコース（１５ｍＭ）へ３７℃で２４時間曝露した白血球において酵素活性を測定した。インキュベーション後、細胞を溶解して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの測定に使用するまで−２０℃で凍結させた。培養したウシ網膜毛細管周皮細胞（ＢＲＰ）および内皮細胞（ＢＲＥＣ）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性も測定した。
【０１２６】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の無細胞アッセイ
このアッセイには、セファロースビーズに固定したコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔを使用した。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ免疫沈降、並びにウェスタンブロットには、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔに対するポリクローナル抗体を使用した。細胞を氷上で以下の溶解緩衝液において溶解した：２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）／１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００，１５０ｍＭ ＮａＣｌ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，１ｍＭ ＥＧＴＡ，０．２ｍＭ バナジン酸ナトリウム，１ｍＭ ＰＭＳＦ，１μｇ／ｍｌ アプロチニン，１０μｇ／ｍｌ ロイペプチン。この溶解液を一定の撹拌とともに４℃で２０分間インキュベートして、不溶性の材料を遠心分離（１４，０００ｇ，４℃で５分間）により除去した。澄明にした溶解液をぶどう球菌タンパク質Ａ−セファロースＣＬ−４Ｂ共役一次抗体とともに、一定に撹拌しながら４℃で２時間インキュベートした。０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＴｒｉｓ緩衝化生理食塩水（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４），１５０ｍＭ ＮａＣｌ）で免疫沈降物を洗浄して、潜在的な阻害剤の存在および非存在下でのコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの測定に使用した。
【０１２７】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の測定
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を測定するために、白血球をＰＥＳに洗浄して、凍結させて、０．９％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００において０℃で溶解させた。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性は、既報（４１）のように測定した。簡潔に言えば、５０ｍＭ ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ，シグマ、ドーセット、イギリス）（ｐＨ７．０）、１ｍＭ ＵＤＰ−６［３Ｈ］−Ｎ−アセチルグルコサミン（１６，０００ｄｐｍ／ナノモル、ＮＥＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ハウンスロー、イギリス）、０．１Ｍ ＧｌｃＮＡｃ（シグマ、オクラホマ州ドーセット）、基質としての１ｍＭ Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ｐ−ニトロフェノール（シグマ、ドーセット、イギリス）、および１６μｌの細胞溶解液（１００〜２００μｇタンパク質）を含有する、最終量３２μｌの反応混合物において反応を実施した。この混合物を３７℃で１時間インキュベートした後で、１ｍｌの氷冷蒸留水で反応を止めて、Ｃ１８ Ｓｅｐ−Ｐａｋカラム（ウォーターズ−ミリポア、ワトフォード、イギリス）で処理した。このカラムを２０ｍｌの蒸留水で洗浄後、産物を５ｍｌのメタノールで溶出させた。試料の放射活性を液体シンチレーションβ−カウンター（ＬＫＢ−Ｗａｌｌａｃ，ロンドン、イギリス）で計数した。内因性のコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性は、添加するアクセプタの非存在下に測定した。比活性は、ピコモル／ｈ／細胞タンパク質のｍｇとして表した。どの場合も、タンパク濃度は、ＢｉｏＲａｄタンパク質アッセイ（ＢｉｏＲａｄ，ハートフォードシア、イギリス）で定量した。
【０１２８】
白血球−内皮接着アッセイ
白血球の内皮細胞への接着は、カルボキシフルオレセイン（モレキュラー・プローブ、イギリス）で標識することによって試験した。このアッセイは、十分確立されている（４１）。簡潔に言えば、内皮細胞を周密状態にまで増殖させて、カルボキシフルオレセイン標識化白血球（Ｕ９３７）の接着のために内皮細胞表面を提供した。処理後、この白血球を遠心分離（１４，０００ｇ，１分間）させて、無血清ＲＰＭＬで２回洗浄した。次いで、この細胞を、５０μｇ／ｍｌカルボキシフルオレセインを含有する１ｍｌの無血清ＲＰＭＩに再懸濁した。この細胞を血球計で計数して、既知数を内皮細胞へ加えた。３７℃で３０分のインキュベーション後、無血清ＲＰＭＩで洗浄することによって非付着性の白血球を除去して、ディッシュをＰＢＳ中３．７％ホルマリンに固定した。１０のランダム高出力場（ｘ１００）において蛍光顕微鏡によって付着白血球を計数した。この結果を付着白血球／場の百分率として表した。
【０１２９】
グルコース毒性
ＢＲＰとＢＲＥＣを３ｃｍの組織培養ディッシュにおいてプレート培養して、増殖培地において３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、この細胞を、標準グルコース（５．８ｍＭ）または上昇グルコース（２５ｍＭ）を含有する新鮮な増殖培地において、コロハサブ分画の非存在または存在下にインキュベートした。４日のインキュベーション後、血球計とトリパンブルーを使用して生存細胞の数を計数して、この結果を対照（５．８ｍＭグルコース）の百分率として表した。処理後、この細胞のいくらかをコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の測定用に保存した。
【０１３０】
粗製コロハ種子抽出物の生物学的活性
図２ａに示すように、上昇Ｄ−グルコースへの２４時間曝露は、ヒト白血球（Ｕ９３７）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を有意に高める。コロハ種子より調製した粗抽出物に、ヒト白血球におけるグルコース誘導コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性（図２ｂ）と白血球−内皮細胞接着（図２ｃ）を阻害するポテンシャルがあることを今回見出した。白血球−内皮細胞接着は、カルボキシフルオレセインで染色した既知数の白血球を網膜毛細管内皮細胞の単層へ加えることによって測定した。次いで、１０のランダム場を使用して、蛍光顕微鏡下に、付着した白血球の数を計数した。
【０１３１】
図３に例示する結果は、ヒト白血球（Ｕ９３７）を上昇グルコースへ２４時間曝露することによって得た。次いで、この細胞を溶解し、粗製のコロハ種子抽出物Ｆ１とともにインキュベートして、３０分のインキュベーション後にコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を測定した。
【０１３２】
コロハ種子抽出物の調製および精製：実施例１
コロハ種子抽出物は以下のように入手した（図４を参照のこと）。コロハ種子（ＦＵＤＣＯ，１８４ Ｅａｌｉｎｇ Ｒｏａｄ，ウェンブリー、ミドルセックス、イギリスよりＭｅｔｈｉ種子として入手したインドのコロハ種子）をハンマーミルで粉砕して、ナイロンメッシュに通して濾過した。入手した８２０ｇの濃黄色の粉末をソックスレー抽出器においてヘキサンで８時間連続洗浄することによって脱脂した。次いで、この植物材料を乾燥させて、エタノールで８時間連続的に抽出した。固形残渣を除去する濾過とエタノールの真空での濃縮により、半固体で茶褐色の粗抽出物（６５ｇ）を得て、Ｆ１とラベルした。これが残留オイルを含有するように見えたので、５０ｇの粗抽出物Ｆ１を冷ヘキサン（５００ｍｌ）とともに振り混ぜた。ヘキサン可溶性の材料を濾過して取り、不溶性の残渣を濾紙に採取し、乾燥させてＦ２（２７ｇ）を得る一方、溶媒は除去してＦ３（１５．４ｇ）を得た。
【０１３３】
次いで、市販キット（Ｂｉｏｔａｇｅ）を使用して、順相シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを利用した。Ｆ２（５ｇ）をシリカゲル（５ｇ）上へ吸着させて、試料バレルへ詰め込んで、シリカゲルＫＰ−Ｓｉｌを含有するメインクロマトグラフィーカラム（２０ｃｍｘ４ｃｍ）へ短い管により連結した。この試料を、軽油（４０／６０）、クロロホルム、メタノール、およびアセトンの多様な混合物からなり極性が高まる一連の溶媒でカラムの上からそれを通して溶出させた。溶出するサブ分画をＴＬＣにより試験して、類似のものをプールして、極性が高まる化合物を表す７つの主要な溶出サブ分画Ｆ８〜Ｆ１４を得た。シリカを取り出し、１００％メタノールとともに振り混ぜ、濾過し、乾燥させて残渣を得て、Ｆ１５とラベルした。各サブ分画の重量と近似の溶出溶媒を表２に示す。
【０１３４】
【表２】
【０１３５】
精製したコロハ種子抽出物の生物学的活性
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの白血球におけるグルコース誘導活性を阻害する、上記の精製サブ分画のポテンシャルについて試験した。初めに、サブ分画Ｆ２が白血球におけるグルコース誘導コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を阻害可能であることを実証した（図５）。さらなる実験は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害剤がサブ分画Ｆ１３およびＦ１４に存在することを示した（図６ａおよび６ｂ）。
【０１３６】
次いで、サブ分画Ｆ９およびＦ１３を分析した。両方のサブ分画Ｆ９およびＦ１３の水性アリコート（０.５ｍｌ）を１ｍｌのジクロロメタンで抽出し、水相を取り出し、０．２２μｍフィルターを通した濾過により濾過滅菌して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の細胞ベースのアッセイに使用した。サブ分画Ｆ９およびＦ１３の水相の存在および非存在下にヒト白血球を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ曝露した。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤がサブ分画Ｆ１３の水相に存在することを示す結果を図７に提示する。
【０１３７】
サブ分画Ｆ１３の水相を、そのＨＰＬＣ保持時間によりコードされるサブ分画Ｆ１８．７〜Ｆ４１．１へＨＰＬＣにより精製した。サブ分画Ｆ１３の水相を、逆相条件で操作するＨＰＬＣ（ヒューレット・パッカード、１０５０／１００シリーズ）上へ直接注入した。メタノール／水の移動相でのオクタデシル結合カラムで分離を達成した。２２ｎｍの一定波長で操作するＵＶ検出器により、カラムより溶出する成分を検出した。上記の成分は、クロマトグラフィートレース上のピークとして質量分析計の検出器より明らかにした。このように入手したサブ分画を真空で濃縮乾固させ、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）に再び溶かして、濾過滅菌した。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の細胞ベースのアッセイを行って、結果は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤がサブ分画Ｆ１９〜Ｆ２０．０３に存在することを示唆した（図８および９を参照のこと）。
【０１３８】
引き続き、サブ分画Ｆ１３の水相のより多くの量を、メタノール／水移動相でのフェニル結合カラムで逆相条件下に操作するＨＰＬＣによって、２０．０１、２０．２９、および２０．５５の保持時間のサブ分画へ同様に精製したが、これは、上記のサブ分画Ｆ１９．１３、Ｆ１９．３７、およびＦ１９．４４と同等である。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性についての細胞ベースのアッセイにより、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤がこれらのサブ分画、Ｆ２０．０１、Ｆ２０．２９、およびＦ２０．５５に存在することを確かめた（図１０ａ）。無細胞アッセイ系を使用して、ＨＰＬＣ精製したサブ分画Ｆ２０．５５によるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害を実証した（図１１）。ヒト白血球（Ｕ９３７）を１５ｍＭグルコースへ３７℃で２４時間曝露後、この細胞を溶解してから、加熱（Ｈ，１００℃）および非加熱（ＮＨ）サブ分画、Ｆ２０．５５（１：５００希釈）へ曝露した。３７℃で３０分の曝露後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定した。図１１に示すように、サブ分画Ｆ２０．５５は、無細胞アッセイにおいてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔを直接阻害することがわかった。サブ分画Ｆ２０．５５の加熱は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害のレベルをごくわずかに改変しただけであった。
【０１３９】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤の構造解析
サブ分画Ｆ２０．５５中のコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤を、ＣＤ３ＯＤに溶かした試料のＮＭＲ解析により同定した。以下のＮＭＲ実験を実施した：１Ｄ プロトン、２Ｄ ＤＱＦ−ＣＯＳＹ（１Ｈ−１Ｈ相関性）［８時間］、２Ｄ編集ＨＳＱＣ（１Ｈ−１３Ｃ多重度編集での１結合相関性）［２Ｄ ＴＯＣＳＹ］（１Ｈ−１Ｈ中継相関性）［２ｘ８時間］。
【０１４０】
サブ分画Ｆ２０．５５中のコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤の１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲデータを表３および４に提示する。
【０１４１】
【表３】
【０１４２】
【表４】
【０１４３】
目的の化合物は、コロハ種子の既知の構成成分である（５５）、トリゴネオシドＩＶａと同定された。
【０１４４】
トリゴネオシドＩＶａ、プロトジオシン、化合物３、およびグリコシドＦのバルク調製
破砕した種子（３６０ｇ，Ｄｅｅｐ Ｆｏｏｄｓ社、ニュージャージー州ユニオン、０７０８３、アメリカの製品）をヘプタン（２ｘ７００ｍｌ）、アセトン（４ｘ６００ｍｌ）、およびＭｅＯＨ（４ｘ６００ｍｌ）で、それぞれ還流で２時間沸騰させることによって連続的に抽出した。この抽出物を濾過し、真空で蒸発乾固させて、この植物よりかつて報告されたフロスタノールサポニン類の存在をＬＣ／ＭＳによって分析した（５４，７４，７５）。メタノール抽出物（８２ｇ，種子の２２．７％（ｗ／ｗ））に標的化合物が含まれることを見出した。
【０１４５】
種子のヘプタンおよびアセトンでの最初の抽出は、ほとんどの低極性材料を除去して、後続のクロマトグラフィーを改善した。メタノール抽出物をブタノールと水の間に分画することによって、さらなる脱脂が達成可能である。しかしながら、メタノール抽出物は、極性の材料をさほど含有しなかったので、この抽出物をさらなる脱脂に処すことなく、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０（またはＳＰ２０７、ＨＰ２０ＳＳ、ＳＰ２０７ＳＳ、いずれもシグマ−アルドリッチより入手可能）樹脂のようなスチレン樹脂を使用する固相抽出によって、濃縮されたサポニン含有分画が入手可能である。
【０１４６】
ＭｅＯＨ抽出物（ＣＤＸＡ−１３−１３２−１，８１．２ｇ）を水−ＭｅＯＨ（６：４，４００ｍｌ）に溶かし、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０（Ｓｉｐｅｌｃｏ Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０，３５０ｇ，５．０ｘ３０ｃｍ）上へロードして、水−ＭｅＯＨ（４：６，６００ｍｌ）、ＭｅＯＨ（２Ｌ）、およびアセトン（２Ｌ）で溶出した。２５０ｍｌの分画を採取した。この分画をＨＰＬＣにより分析し、同様の組成の分画を合わせて、７種のプール（ＣＤＸＡ−１３−１３３ Ｆ１〜Ｆ７）を得た。所望されるサポニンの大部分がプール、ＣＤＸＡ−１３−１３３−Ｆ５（２２．５ｇ，抽出物の２７．７（ｗ／ｗ）％）に含まれることがわかった。
【０１４７】
このプール（２２．０ｇ）を順相シリカ（４４５ｇ，Ｍｅｒｃｋ シリカゲル６０，７０〜２３０メッシュ、０．０７６３〜０．２００ｍｍ，５．０ｘ３０ｃｍ）でクロマトグラフ処理して、以下の組成の各３Ｌのジクロロメタン−ＭｅＯＨ−水系で溶出した：ａ）８０：２０：３、ｂ）７５：２５：３、ｃ）７０：３０：３、およびｄ）６５：３５：３。２５０ｍｌの分画を採取し、ＨＰＬＣにより分析して、１１種のプール（ＣＤＸＡ−１３−１３７−Ｆ１〜Ｆ１１）へ合わせた。
【０１４８】
分画Ｆ６およびＦ７を合わせ、乾燥させ（１０．０ｇ，４５％）、Ｃ８シリカ（３５０ｇ，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２），５ミクロン、１００Ａ，５．０ｘ２８ｃｍ）でクロマトグラフ処理して、以下の組成のＭｅＯＨ−水系で溶出した：ａ）４：６（８００ｍｌ）、ｂ）５：５（２Ｌ）、ｃ）５５：４５（５Ｌ）６：４（１Ｌ）、ｄ）６５：３５（１Ｌ）、ｅ）７：３（１Ｌ）、ｆ）８：２（１Ｌ）およびＭｅＯＨ（１Ｌ）。この分画をＨＰＬＣにより分析して、２９種のプール（ＣＤＸＡ−１３−１３８−Ｆ１〜Ｆ２９）へ合わせた。２５０ｍｌの分画を採取した。
【０１４９】
分画Ｆ１３〜Ｆ１６を乾燥させ（１．１５５ｇ，１１．６％）、ＵＶ／Ｖｉｓ検出器モデル１５５、ポンプモデル３２１、および液体ハンドラーモデル２１５からなるＧｉｌｓｏｎ半分取用ＨＰＬＣシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。
【０１５０】
クロマトグラフィー条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２），５ミクロン、１５０ｘ２１．２ｍｍ
移動相：アセトニトリル−水（２８：７２）
試料サイズ：注入ごとに各分画の１５ｍｇ
検出：ＵＶ ２０５ｎｍ
５つのピーク、Ｐ１〜Ｐ５（図＊＊１〜５）を採取して、トリゴネオシドＩＶａ、その２５（Ｓ）異性体−グリコシドＦについて文献で報告された１Ｈ、１３Ｃ ＮＭＲ、および質量スペクトルのデータとの比較によって同定した。さらに類似の化合物、化合物３を検出した。この化合物についてはこれまで記載されていない。
【０１５１】
ＮＭＲスペクトルは、ｄ５ピリジンにおいて記録した。プロトンスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ ＶＸＲｓ−３００機器において３００ＭＨｚで記録して、炭素スペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ ４００機器において１００ＭＨｚで記録した。
【０１５２】
質量スペクトルは、Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱ Ｄｅｃａ機器においてＡＰＣＩ形式で記録した。
ピーク１、トリゴネオシドＩＶａ：白い固形物（９０ｍｇ，種子の０．０２５（ｗ／ｗ）％）。
【０１５３】
【化２４】
【０１５４】
ピーク２、化合物Ｃ／プロトジオシン：白い固形物（１２０ｍｇ，０．０３３％）。
【０１５５】
【化２５】
【０１５６】
ピーク３、化合物３：白い固形物（３０ｍｇ，０．００８％）。
【０１５７】
【化２６】
【０１５８】
ピーク４、グリコシドＦ：白い固形物（１２０ｍｇ，０．０３３％）。
【０１５９】
【化２７】
【０１６０】
【表５】
【０１６１】
【表６】
【０１６２】
【表７】
【０１６３】
上記５つの化合物の化学構造を図１５に示す。
【０１６４】
他の化合物
Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｒａｃｅｍｏｓｕｓ（５６）より単離したシャタバリンＩＶ（ｓｈａｔａｖａｒｉｎ Ｉ）（図１５）とＴｒｉｂｕｌｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ由来のプロトジオシン（コロハより（５５）の化合物Ｃとしても単離可能）は、いずれもＣｈｒｏｍａｄｅｘ社（２９５２ Ｓ．Ｄａｉｍｌｅｒ Ｓｔ．カリフォルニア州サンタアナ）より供給された。プロトジオシンはまた、コロハの上記調製物より、プロトジオシンの公表ＮＭＲデータに一致するピーク２として単離した。
【０１６５】
トリゴネオシドＩＶａ、グリコシドＦ、プロトジオシン、およびシャタバリンＩＶの生物学的活性
無細胞アッセイ
ＢＢラット由来の心臓溶解液を２０ｎｇ／ｍｌの各化合物の存在および非存在下にインキュベートした。３７℃で１時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定して、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として表した。結果は、３〜５回の別々の実験の平均である。この結果を図１５ａに示す。
【０１６６】
トリゴネオシドＩＶａ、その２５（Ｒ）異性体のグリコシドＦ、およびシャタバリンＩＶが無細胞アッセイにおいてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの高活性阻害剤であるのに対し、４位のグルコースがラムノースに置き換えられたプロトジオシンには活性がない。
【０１６７】
細胞ベースのアッセイ
２０ｎｇ／ｍｌの試験化合物の存在および非存在下に、ヒト白血球（Ｕ９３７細胞）を８ｐｇ／ｍｌのヒト組換えＴＮＦ−αへ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定して、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として表した。この結果を図１５ｂに示す。
【０１６８】
トリゴネオシドＩＶａとグリコシドＦが細胞ベースのアッセイにおいてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの高活性阻害剤であるのに対し、プロトジオシンには活性がない。
【０１６９】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤、トリゴネオシドＩＶａと糖尿病性網膜症
上昇グルコースレベルが培養ウシ網膜血管細胞、即ち毛細管周皮細胞（ＢＲＰ）および毛細管内皮細胞（ＢＲＥＣ）においてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を高めることを見出した（図１３）。ほぼ集密の培養物を標準グルコース（Ｎ，５．８ｍＭ）と高グルコース（Ｇ，１５ｍＭ）へ３７℃で２４時間曝露した。この細胞を溶解して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を細胞溶解液において測定した。
【０１７０】
さらに、コロハ種子抽出物には、培養ウシ網膜毛細管周皮細胞（ＢＲＰ）および内皮細胞（ＢＲＥＣ）においてグルコース誘導毒性を逆転させるポテンシャルがあることを実証した（図１４）。細胞をコロハ種子抽出物の存在（Ｎ−Ｆ，Ｇ−Ｆ）および非存在（Ｎ，Ｇ）下に標準（Ｎ，５．８ｍＭ）および高グルコース（Ｇ，２５ｍＭ）へ曝露した。４日のインキュベーション後、血球計とトリパンブルー排除を使用して、生存細胞の数を決定した。コロハ種子抽出物が培養ウシ網膜毛細管周皮細胞および内皮細胞においてグルコース誘導毒性を実際に逆転させることを見出した。しかしながら、コロハ種子抽出物がコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を正常化することによってグルコース誘導毒性を逆転させるのかどうかはまだ確かめられていない。
【０１７１】
網膜血管細胞への傷害が初期の糖尿病性網膜症の指標となるので、コロハ種子抽出物による網膜血管細胞の保護は重要である。ヒトの糖尿病性網膜症は、主に血管の疾患であり、主として毛細管に影響を及ぼす。報告されている最初の超構造的および微視的な変化は、網膜毛細管基底膜の肥厚化と周皮細胞の変性であり、そのいずれも毛細管壁の完全性を低下させる。周皮細胞の変性は、周皮細胞「ゴースト」と呼ばれる、かすかに染色されるコンパートメントを基底膜の鞘に残す。周皮細胞と内皮細胞の両方に対する傷害は、無細胞性の毛細管の形成をもたらす。
【０１７２】
治療
本明細書に記載の式Ｉの化合物を含んでなる医薬品は、経口または非経口の経路により投与可能であり、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、経皮、気道（エアゾール）、直腸、膣、および局所（頬内および舌下が含まれる）投与が含まれる。経口投与では、本発明の化合物は、一般に、錠剤またはカプセル剤の形態で、散剤または顆粒剤として、または水溶液剤若しくは懸濁液剤として提供される。
【０１７３】
経口使用のための錠剤には、有効成分を、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、芳香剤、着色剤、および保存剤のような医薬的に許容される賦形剤と混合して含めてよい。好適な不活性希釈剤には、炭酸ナトリウムおよびカルシウム、リン酸ナトリウムおよびカルシウム、および乳糖が含まれ、一方、とうもろこしデンプンとアルギン酸は、好適な崩壊剤である。結合剤には、デンプンおよびゼラチンを含めてよく、一方、滑沢剤は、存在するならば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクであり得る。所望されるならば、錠剤は、胃腸管における吸収を遅らせるために、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような材料でコートしてよい。経口使用のためのカプセル剤には、有効成分を固体の希釈剤と混合する硬ゼラチンカプセル剤と、有効成分を水または落花生油、流動パラフィン、またはオリーブ油のようなオイルと混合する軟ゼラチンカプセル剤が含まれる。
【０１７４】
直腸投与用の製剤は、例えば、ココア脂またはサリチル酸塩を含んでなる好適な基剤を含む坐剤として提示可能である。
膣投与に適した製剤は、有効成分に加えて、当該技術分野において適切であると知られているような担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、またはスプレーの製剤として提示可能である。
【０１７５】
筋肉内、腹腔内、皮下、および静脈内の使用では、一般に、適切なｐＨおよび等張性へ緩衝化した無菌の水溶液剤または懸濁液剤において本発明の化合物を提供する。好適な水性担体には、リンゲル溶液と等張塩化ナトリウムが含まれる。本発明による水性懸濁液剤には、セルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、およびトラガカントゴムのような懸濁剤と、レシチンのような湿潤剤を含めてよい。水性懸濁液剤に適した保存剤には、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピルが含まれる。
【０１７６】
本発明のコロハ種子抽出物およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、リポソーム製剤としても提示可能である。
一般に、好適な用量は、１日につきレシピエントの体重キログラムあたり０．０１〜１０ｍｇのコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤の範囲、好ましくは、１日につき体重キログラムあたり０．２〜１．０ｍｇの範囲にある。所望される用量は、好ましくは、１日１回で提示されるが、２、３、４、５、６またはより多いサブ用量を１日全体で適切な間隔で投薬可能である。これらのサブ用量は、例えば、単位剤形につき１０〜１５００ｍｇ、好ましくは２０〜１０００ｍｇ、そして最も好ましくは５０〜７００ｍｇの有効成分を含有する単位剤形で投与可能である。
【０１７７】
参考文献
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２９．Ｍａｊｕｒｉ Ｍ．Ｌ．ら，「組換えＥ−セレクチン−タンパク質は、シアリル−Ｌｅ（ａ）およびシアリル−Ｌｅ（ｘ）を介した腫瘍細胞接着に仲介する（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｖｉａ ｓｉａｌｙｌ−Ｌｅ（ａ） ａｎｄ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅ（ｘ））」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１８２（３），１３７６−８２（１９９２）
３０．Ｔａｋａｄａ Ａ．ら，「ヒト癌細胞の血管内皮への接着に対する炭水化物抗原、シアリルＬｅｗｉｓ ＡおよびシアリルＬｅｗｉｓ Ｘの貢献（Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ａ ａｎｄ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ｘ ｔｏ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３（２），３５４−３６１（１９９１）
３１．Ｙｏｕｓｅｆｉ Ｓ．ら，「転移性マウス腫瘍細胞系におけるアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ活性（Ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｍｅｔａｓｔｉｃ ｍｕｒｉｎｅ ｔｕｍｏｕｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，１７７２−１７８２（１９９１）
３２．Ｂｅａｕｍ Ｐ．Ｖ．ら，「ヒト膵臓癌細胞系におけるコア２β−１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼの発現は、ＭＵＣ１腫瘍関連エピトープの改変された発現をもたらす（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ−１，６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎ ａ ｈｕｍａｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ａｌｔｅｒｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＵＣ１ ｔｕｍｏｕｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｐｉｔｏｐｅｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，２４６４１−２４６４８（１９９９）
３３．Ｓａｉｔｏｈ Ｏ．ら，「分化欠損ＨＬ−６０細胞における、ロイコシアリンへ付着する異常なＯ−グリカンの発現（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｂｅｒｒａｎｔ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ａｔｔａｃｈｅｄ ｔｏ ｌｅｕｋｏｓｉａｌｉｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ＨＬ−６０ ｃｅｌｌｓ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１（１１），２８５４−２８６２（１９９１）
３４．Ｂｒｏｃｋｈａｕｓｅｎ Ｉ．ら，「正常ドナーおよび白血病患者からの白血球におけるＯ−グリカンの生合成：白血病細胞におけるＯ−グリカンコア２ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌ［β］３ＧａｌＮＡｃ［α］−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ→ＧａｌＮＡｃ）［β］（１，６）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼの増加（Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｉｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｍｏｒｍａｌ ｄｏｎｏｒｓ ａｎｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ Ｏ−ｇｌｙｃａｎ ｃｏｒｅ ２ ２ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌ［β］３ＧａｌＮＡｃ［α］−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ ｔｏ ＧａｌＮＡｃ）［β］（１，６）−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１，１２５７−１２６３（１９９１）
３５．Ｒｅｎｋｏｎｅｎ Ｊ．ら，「コア２β１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼとα１，３−フコシルトランスフェラーゼは、口腔癌細胞上のセレクチンリガンドでのＯ−グリカンの合成を調節する（Ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ１，６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ ａｎｄ ａｌｐｈａ１，３−ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｏｎ ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｌｉｇａｎｄｓ ｏｎ ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ）」，ＡＰＭＩＳ １０９，５００−５０６（２００１）
３６．Ｓｈｉｍｏｄａｉｒａ Ｋ．ら，「ヒト結直腸癌におけるコア２β−１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ遺伝子の癌腫関連発現：腫瘍進行におけるＯ−グリカンの役割（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ−１，６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ｒｏｌｅ ｏｆ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１；５７（２３），５２０１−５２１６（１９９７）
３７．Ｎｕｍａｈａｔａ Ｋ．ら，「新規のモノクローナル抗体により特定されるシアリルＬｅｗｉｓ Ｘ抗原の独自種は、ヘルパー記憶Ｔ細胞上で選択的に発現される（Ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｔｙｐｅ ｏｆ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ｘ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｓ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｈｅｌｐｅｒ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ）」Ｂｌｏｏｄ ８２（９），２７９７−８０５（２００２）
３８．Ｋｌｅｉｎ Ｒ．ら，「糖尿病性網膜症のウィスコンシン疫学研究 Ｘ．診断時の年齢が３０歳以上であるときの糖尿病性網膜症の４年発症率および進行（Ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｘ．Ｆｏｕｒ−ｙｅａｒ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ｗｈｅｎ ａｇｅ ａｔ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｉｓ ３０ ｏｒ ｍｏｒｅ ｙｅａｒｓ）」，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１０７，２４４−２５０（１９８９）
３９．Ｄａｖｉｓ Ｍ．Ｄ．，「糖尿病性網膜症−臨床概説（Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ−ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ １５，１８４４−１８７３（１９９３）
４０．Ｔｏｏｋｅ Ｊ．Ｅ．監修、「糖尿病性血管症（Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ）」，オックスフォード大学出版局（１９９９）中２３３−２４７頁、Ｋｏｈｎｅｒ Ｅ．Ｍ．ら，「糖尿病性網膜症（Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）」
４１．Ｃｈｉｂｂｅｒ Ｒ．ら，「コア２ＧｌｃＮＡｃ−（β１，６）トランスフェラーゼの活性は、年齢適合対照被検者に比較して、糖尿病患者由来の多形核白血球においてより高い（Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ＧｌｃＮＡｃ−（ｂｅｔａ１，６）ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ａｇｅ−ｍａｔｃｈｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４９，１７２４−１７３０（２０００）
４２．Ｋｏｙａ Ｄ．ら，「プロテインキナーゼＣ活性化と糖尿病性合併症の進展（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４７，８５９−８６６（１９９８）
４３．Ｍｅｉｅｒ Ｍ．ら，「血管系疾患におけるプロテインキナーゼＣ活性化とその薬理学的阻害（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）」，Ｖａｓｃ．Ｍｅｄ．５，１７３−１８５（２０００）
４４．Ｓｈａｒｍａ Ｒ．Ｄ．ら，「Ｉ型糖尿病における血糖および血清脂質に対するコロハ種子の効果（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ ｓｅｅｄｓ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｌｉｐｉｄｓ ｉｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｉａｂｅｔｅｓ）」，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．４４，３０１−３０６（１９９０）
４５．Ｂｒｏｃａ Ｃ．ら，「４−ヒドロキシイソロイシン：合成および天然類似体のインスリン分泌に対する効果（４−Ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ：ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｎ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ）」，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３９０（３），３３９−３４５（２０００）
４６．Ｓａｕｖａｉｒｅ Ｙ．ら，「４−ヒドロキシイソロイシン：インスリン分泌の新規アミノ酸増強剤（４−Ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ：ａ ｎｏｖｅｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４７（２），２０６−２１０（１９９８）
４７．Ｋｕｈｎｓ Ｗ．ら，（１９９３）「Ｏ−グリカンコア１，Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−Ｒのプロセシング。コア２ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ→ＧｌｃＮＡｃ）β６−Ｎ−アセチルアミノトランスフェラーゼおよびＣＭＰシアル酸：Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ−Ｒα３シアリルトランスフェラーゼの特異性（Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ Ｏ−ｇｌｙｃａｎ ｃｏｒｅ １，Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−Ｒ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ ｔｏ ＧｌｃＮＡｃ）β６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ａｎｄ ＣＭＰ ｓｉａｌｉｃ ａｃｉｄ：Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃ−Ｒα３ｓｉａｌｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）」，Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊｏｕｒｎａｌ １０ ３８１−３９４
４８．Ｐａｕｌｓｅｎ Ｈ．ら，Ｌｅｉｂｉｇｓ Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．７４７−７５８（１９９２）
４９．Ｍｕｌｖｉｈｉｌｌ Ｎ．Ｔ．ら，「急性冠症候群における炎症（Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）」，Ｈｅａｒｔ．８７（３）２０１−４（２００２）
５０．Ｇｕｒａｙ Ｕ．ら，「不良な冠副行循環は、単血管疾患患者中のより高濃度の可溶性接着分子と関連する（Ｐｏｏｒ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｃｏｌｌａｔｅｒａｌ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ−ｖｅｓｓｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ）」，Ｃｏｒｏｎ Ａｒｔｅｒｙ Ｄｉｓ．１５（７）：４１３−７（２００４）
５１．Ｇｕｒａｙ Ｕ．ら，「冠アテローム硬化症の様々な臨床症状における可溶性接着分子のレベル（Ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｓｏｌｕｂｌｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）」，Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ．２００４ ９６（２）：２３５−４０
５２．Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ＫＤ ら，「ヒトアテローム硬化症におけるＥ−セレクチン、細胞間接着分子−１、および血管細胞接着分子−１の新血管性の発現と、血管内膜白血球含量に対するそれらの関係（Ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ，ｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１，ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｉｎｔｉｍａｌ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｃｏｎｔｅｎｔ）」，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１５；９３（４）６７２−８２．（１９９６）
５３．Ｄａｖｉｅｓ ＭＪ ら，「ヒトアテローム硬化症における接着分子、ＩＣＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１、ＰＥＣＡＭ、およびＥ−セレクチンの発現（Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ＩＣＡＭ−１，ＶＣＡＭ−１，ＰＥＣＡＭ，ａｎｄ Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）」，Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．１７１（３）：２２３−９（１９９３）．
５４．Ｃｈｉｂｂｅｒ Ｒ．ら，「グリコシル化酵素、コア２ＧｌｃＮＡｃ（β１，６）トランスフェラーゼの活性は、年齢適合対照被検者に比較して、糖尿病患者由来の多形核白血球においてより高い：糖尿病性網膜症における毛細管閉塞との関連性（Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ，ｃｏｒｅ ２ ＧｌｃＮＡｃ（β１，６）ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ａｇｅ−ｍａｔｃｈｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ：ｒｅｌｅｖａｎｃｅ ｔｏ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｏｃｃｕｌｓｉｏｎ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４９（１０）：１７２４−３０（２０００）
５５．Ｙｏｓｈｉｋａｗａ Ｍ．ら，「薬用食物。ＶＩＩＩ．コロハ種子（２）：インドのＴｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ．の種子に由来する、６種の新規フロスタノールサポニン、トリゴネオシドＩｖａ、Ｖａ、Ｖｂ、ＶＩ、ＶＩＩｂ、およびＶＩＩＩｂの構造（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｆｏｏｄｓｔｕｆｆｓ．ＶＩＩＩ．Ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ ｓｅｅｄ．（２）：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｓｉｘ ｎｅｗ ｆｕｒｏｓｔａｎｏｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ，ｔｒｉｇｏｎｅｏｓｉｄｅｓ Ｉｖａ，Ｖａ，Ｖｂ，ＶＩ，ＶＩＩｂ，ａｎｄ ＶＩＩＩｂ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆ ｉｎｄｉａｎ Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ．）」，Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ ４７，３９７−４０５（１９９８）
５６．Ｒａｖｉｋｕｍａｒ Ｐ．Ｒ．ら，「アーユルヴェーダ生薬の化学：第ＶＩ部−（Ｓｈａｔａｖａｒｉ−１）：シャタバリン−ＩＶの構造（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｙｕｒｖｅｄｉｃ ｃｒｕｄｅ ｄｒｕｇｓ ｐａｒｔ ＶＩ−（Ｓｈａｔａｖａｒｉ−１）：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｓｈａｔａｖａｒｉｎ−ＩＶ）」，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ．Ｃｈｅｍ．２６Ｂ，１０１２−１０１７（１９８７）
５７．Ｓｈｉｍｏｍｕｒａ Ｈ．ら，「Ｌｉｌｉｕｍ ｐａｒｄａｒｉｕｍの球根由来のステロイド性サポニン、パルダリノシドＡ〜Ｇ（Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ，Ｐａｒｄａｒｉｎｏｓｉｄｅ Ａ−Ｇ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｂｕｌｂｓ ｏｆ Ｌｉｌｉｕｍ ｐａｒｄａｒｉｎｕｍ）」，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８，３１６３−３１７０（１９８９）
５８．Ｍｉｍａｋｉ Ｙ．ら，「Ｌｉｌｉｕｍ ｂｒｏｗｎｉｉ ｖａｒ．ｃｏｌｃｈｅｓｔｅｒｉの球根由来のステロイド性サポニンおよびアルカロイド（Ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ａｎｄ ａｌｋａｌｏｉｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｂｕｌｂｓ ｏｆ Ｌｉｌｉｕｍ ｂｒｏｗｎｉｉ ｖａｒ．ｃｏｌｃｈｅｓｔｅｒｉ）」，Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ３８（１１），３０５５−９（１９９０）
５９．Ｓａｓｈｉｄａ Ｙ．ら，「Ｌｉｌｉｕｍ ｍａｃｋｌｉｎｉａｅの球根の化学成分に関する研究（Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂｕｌｂｓ ｏｆ Ｌｉｌｉｕｍ ｍａｃｋｌｉｎｉａｅ）」，Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ３９（９），２３６２−８（１９９１）
６０．Ａｋｈｏｖ Ｌ．Ｓ．ら，「Ａｌｌｉｕｍ ｎｕｔａｎｔｓ Ｌ．の地下部分由来のステロイド性サポニンの構造（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｆｒｏｍ ｕｎｄｅｒｇｒｏｕｎｄ ｐａｒｔｓ ｏｆ Ａｌｌｉｕｍ ｎｕｔａｎｔｓ Ｌ．）」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４７（８），３１９３−３１９６（１９９９）
６１．Ｊｏｓｈｉ Ｊ．ら，「アーユルヴェーダ生薬の化学：第ＶＩＩＩ部−（Ｓｈａｔａｖａｒｉ−２）：生物活性のあるシャタバリンＩと他のグリコシドの構造解明（Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｙｕｒｖｅｄｉｃ ｃｒｕｄｅ ｄｒｕｇｓ ｐａｒｔ ＶＩＩＩ−（Ｓｈａｔａｖａｒｉ−２）：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏａｃｔｉｖｅ ｓｈａｔａｖａｒｉｎ Ｉ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ）」，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ．Ｃｈｅｍ．２７Ｂ，１２−１６（１９８８）
６２．Ｖａｓｉｌ’ｅｖａ Ｉ．Ｓ．ら，「ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｄｅｌｔｏｉｄｅａ壁の細胞懸濁液由来のステロイドグリコシドの組成および生物活性（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｔｅｒｏｉｄ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ｆｒｏｍ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ ｏｆ ｄｉｏｓｃｏｒｅａ ｄｅｌｔｏｉｄｅａ ｗａｌｌ）」，Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３１，２０６−２０９（１９９５）
６３．Ｓｈａｒｍａ ら，「Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｃｕｒｉｌｌｕｓ葉由来のオリゴフロスタノシド（Ｏｌｉｇｏｆｕｒｏｓｔａｎｏｓｉｄｅｓ ｆｒｏｍ Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｃｕｒｉｌｌｕｓ ｌｅａｖｅｓ）」，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．３３（３）：６８３−６（１９９３）
６４．Ｐｅｔｉｔ Ｇ．ら，「アフリカの薬用植物、Ｂａｌａｎｉｔｅｓ ａｅｇｙｐｔｉｃａ由来の細胞増殖抑制性ステロイドサポニンの単離および構造（Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｒｏｉｄａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｆｒｉｃａｎ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｌａｎｔ Ｂａｌａｎｉｔｅｓ ａｅｇｙｐｔｉｃａ）」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ５４，１４９１−１５０２
６５．Ｈｏｓｔｅｔｔｍａｎ Ｋ．「サポニン（Ｓａｐｏｎｉｎｓ）」，ケンブリッジ大学出版局、イギリス（１９９５）
６６．Ｌｉ Ｃ．ら，「ジオスゲニルα−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）］−β−Ｄ−グルコピラノシド（グラシリン）と関連サポニンの合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｄｉｏｓｇｅｎｙｌ ａｌｐｈａ−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→２）−［ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−（１→３）］−ｂｅｔａ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（ｇｒａｃｉｌｌｉｎ） ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｓａｐｏｎｉｎｓ）」，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ．；３０６（１−２）：１８９−９５（１９９８）
６７．Ｄｅｎｇ Ｓ．ら，「３種のジオスゲニルサポニン：ジオシン、ポリフィリンＤ、およびバラニチン７の合成（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｄｉｏｓｇｅｎｙｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ：ｄｉｏｓｃｉｎ，ｐｏｌｙｐｈｙｌｌｉｎ Ｄ，ａｎｄ ｂａｌａｎｉｔｉｎ ７）」，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ．；３０；３１７（１−４）：５３−６２（１９９９）
６８．Ｌｉ Ｂ．ら，「サポニン、ポリフィリンＤの改良合成（Ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓａｐｏｎｉｎ，ｐｏｌｙｐｈｙｌｌｉｎ Ｄ）」，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ Ｒｅｓ．；９；３３１（１）：１−７（２００１）
６９．Ｙｕ Ｂ．ら，「サポニンライブラリーの製造の「ダブルランダム」戦略（Ａ “ｄｏｕｂｌｅ ｒａｎｄｏｍ”ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓａｐｏｎｉｎ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ）」，Ｊ Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ．；３（５）：４０４−６（２００１）
７０．Ｙｕ Ｂ．ら，「フロスタンサポニンへの最初の合成経路（Ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｒｏｕｔｅ ｔｏ ｆｕｒｏｓｔａｎ ｓａｐｏｎｉｎｓ）」，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ｌｅｔｔｅｒｓ，４２，７７−７９（２００１）
７１．Ｙｕ Ｂ．ら，「グリコシルトリフルオロアセトイミデート。２．ジオシンおよびｘｉｅｂａｉサポニンＩの合成（Ｇｌｙｃｏｓｙｌ ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔｉｍｉｄａｔｅｓ．２．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｄｉｏｓｃｉｎ ａｎｄ ｘｉｅｂａｉ ｓａｐｏｎｉｎ Ｉ）」，Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ．；１３；６７（２５）：９０９９−１０２（２００２）
７２．Ｃｈｅｎｇ ＭＳ．ら，「メチルプロトジオシン：抗腫瘍活性のある強力な薬剤の全合成（Ｔｏｔａｌ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｍｅｔｈｙｌ ｐｒｏｔｏｄｉｏｓｃｉｎ：ａ ｐｏｔｅｎｔ ａｇｅｎｔ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ）」，Ｊ Ｏｒｇ Ｃｈｅｍ．；２；６８（９）：３６５８−６２（２００３）
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７５．Ｍｕｒａｋａｍｉ Ｔ．ら，「薬用食物。ＸＶＩＩ．コロハ種子（３）：エジプトのＴｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ．の種子に由来する、新規フロスタノール型ステロイドサポニン、トリゴネオシドＸａ、Ｘｂ、ＸＩｂ、ＸＩＩａ、ＸＩＩｂ、およびＸＩＩＩａの構造（Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｆｏｏｄｓｔｕｆｆｓ．ＸＶＩＩ．Ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ ｓｅｅｄ．（３）：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｎｅｗ ｆｕｒｏｓｔａｎｏｌ−ｔｙｐｅ ｓｔｅｒｏｉｄ ｓａｐｏｎｉｎｓ，ｔｒｉｇｏｎｅｏｓｉｄｅｓ Ｘａ，Ｘｂ，ＸＩｂ，ＸＩＩａ，ＸＩＩｂ，ａｎｄ ＸＩＩＩａ，ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｅｅｄｓ ｏｆ Ｅｇｙｐｔｉａｎ Ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ−ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ．）」，Ｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ（Ｔｏｋｙｏ）；４８（７）：９９４−１０００（２０００）
【図面の簡単な説明】
【０１７８】
【図１】図１は、Ｏ−グリカンコア構造の生合成を例示する概略フローチャートである。
【図２】図２ａは、酵素コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性が、グルコースにより誘導可能であることを例示するグラフである。ヒト白血球（Ｕ９３７）を標準（５．８ｍＭ）および高グルコース（１５ｍＭ）へ３７℃で２４時間曝露した。次いで、この細胞を溶解して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝２８）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。 図２ｂは、コロハ種子より調製した粗抽出物Ｆ１がグルコース誘導コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を阻害することを例示するグラフである。ヒト白血球（Ｕ９３７）をコロハ抽出物（１：１０００希釈；Ｎ−Ｆ，Ｇ−Ｆ）の存在下に標準（Ｎ，５．８ｍＭ；ｎ＝３）および高グルコース（Ｇ，１５ｍＭ；ｎ＝３）へ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を白血球細胞溶解液において定量した。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性は、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として提示する。 図２ｃは、コロハ種子より調製した粗抽出物Ｆ１がヒト白血球（Ｕ９３７）の培養網膜毛細管内皮細胞への付着を阻害することを例示するグラフである。上昇グルコース（１５ｍＭ）への曝露後、この白血球をカルボキシフルオレセインで標識することによって、白血球−内皮細胞接着のレベルを定量した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝３）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図３】図３は、コロハ種子より調製した粗抽出物Ｆ１がコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を阻害することを例示するグラフである。ヒト白血球（Ｕ９３７）を１５ｍＭグルコースへ３７℃で２４時間曝露して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を白血球細胞溶解液において粗製コロハ種子抽出物（Ｇ−Ｆ１；１：１０００希釈）の存在下に測定した。コア２オリゴ糖の形成（β１，６−連結ＧｌｃＮＡｃのＧａｌβ１，３ＧｌｃＮＡｃ−アクセプタへの付着）を定量することによって、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性のレベルを測定した。データは、３回の別々の実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．として提示する。
【図４】図４は、コロハ種子の抽出とコロハ種子抽出物の後続の精製を例示する概略フローチャートである。
【図５】図５は、粗製コロハ種子抽出物Ｆ１と粗抽出物Ｆ１より精製したサブ分画Ｆ２の、ヒト白血球（Ｕ９３７）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対する阻害効果を例示するグラフである。サブ分画Ｆ１およびＦ２の存在および非存在下に、細胞を上昇グルコース（１５ｍＭ）へ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を白血球細胞溶解液において定量した。データは、２回の別々の実験の平均を表す。
【図６】図６ａおよび６ｂは、粗抽出物Ｆ１よりシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ）によって精製したサブ分画Ｆ８〜Ｆ１５の、ヒト白血球（Ｕ９３７）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対する阻害効果を例示するグラフである。サブ分画の存在下に、細胞を上昇グルコース（Ｇ，１５ｍＭ）へ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を白血球細胞溶解液において定量した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝３）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図７】図７は、サブ分画Ｆ１３の水相がヒト白血球（Ｕ９３７）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性を阻害することを例示するグラフである。サブ分画Ｆ９およびＦ１３をジクロロメタンと徹底的に混合して、水相を濾過滅菌して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性用の細胞ベースのアッセイに使用した。サブ分画Ｆ９およびＦ１３の水相の存在および非存在下にヒト白血球を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ曝露した。この結果を、２回の別々の実験の平均として提示する。
【図８】図８は、サブ分画Ｆ１３の水相よりＨＰＬＣにより保持時間で精製したサブ分画、Ｆ１８．７〜Ｆ４１．１の、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対する阻害効果を例示するグラフである。種々の保持時間のＨＰＬＣサブ分画、Ｆ１８．７〜Ｆ４１．１の存在および非存在下にヒト白血球（Ｕ９３７）を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ曝露した。提示するデータは、１回の実験からのものである。サブ分画、Ｇ２０．２４、Ｇ２０．６９、Ｇ２２．２、Ｇ３９．９およびＧ４１．１（図８において、カラム無しで表される）については、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対するその阻害効果を試験しなかった。
【図９】図９は、種々の保持時間のＨＰＬＣサブ分画、Ｆ１９．１３およびＦ１９．３７の阻害効果を例示するグラフである。種々の保持時間のサブ分画、Ｆ１９．１３およびＦ１９．３７（１：１０００希釈）の存在および非存在下にヒト白血球（Ｕ９３７）を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ２４時間曝露した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝３）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図１０】図１０は、サブ分画Ｆ１３の水相よりＨＰＬＣにより保持時間で精製したサブ分画、Ｆ２０．０１、Ｆ２０．２９、およびＦ２０．５５の、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対する阻害効果を例示するグラフである。種々の保持時間のサブ分画、Ｆ２０．０１、Ｆ２０．２９、およびＦ２０．５５の存在および非存在下にヒト白血球（Ｕ９３７）を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ曝露して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を２４時間後に測定した。データは、２回の別々の実験の平均である。
【図１１】図１１は、サブ分画Ｆ２０．５５が無細胞アッセイにおいてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔを阻害することを例示するグラフである。ヒト白血球（Ｕ９３７）を１５ｍＭグルコースへ３７℃で２４時間曝露後、この細胞を溶解してから、加熱（Ｈ，１００℃）および非加熱（ＮＨ）サブ分画Ｆ２０．５５（１：５００希釈）へ曝露した。３７℃で３０分の曝露後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定した。コア２オリゴ糖の形成（β−１，６−連結ＧｌｃＮＡｃのＧａｌ−１，３−ＧｌｃＮＡｃ−アクセプタへの付着）を定量することによって、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性のレベルを測定した。データは、３回の別々の実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．として提示する。
【図１２】図１２ａおよび１２ｂは、上昇グルコースが培養ウシ網膜血管細胞、即ち毛細管周皮細胞（図１２ａ）および毛細管内皮細胞（図１２ｂ）においてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を高めることを例示するグラフである。ほとんど周密の培養物を標準グルコース（Ｎ，５．８ｍＭ）と高グルコース（Ｇ，１５ｍＭ）へ３７℃で２４時間曝露した。この細胞を溶解して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を細胞溶解液において測定した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝３〜４）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図１３】図１３ａおよび１３ｂは、コロハ種子の粗抽出物Ｆ１が培養ウシ網膜血管細胞、即ち毛細管周皮細胞（図１３ａ）および毛細管内皮細胞（図１３ｂ）においてグルコース誘導毒性を予防することを例示するグラフである。細胞をコロハ種子抽出物の存在（Ｎ−Ｆ，Ｇ−Ｆ）および非存在（Ｎ，Ｇ）下に標準（Ｎ，５．８ｍＭ）および高グルコース（Ｇ，２５ｍＭ）へ曝露した。４日のインキュベーション後、血球計とトリパンブルー排除を使用して、生存細胞の数を決定した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝１８、別々の実験）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図１４ａ】図１４は、コロハ種子より単離した５種の化合物の構造を例示する。
【図１４ｂ】図１４は、コロハ種子より単離した５種の化合物の構造を例示する。
【図１４ｃ】図１４は、コロハ種子より単離した５種の化合物の構造を例示する。
【図１５】図１５ａおよび図１５ｂは、精製したトリゴネオシドＩＶａ、グリコシドＦ、およびシャタバリンＩＶのコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性に対する効果を無細胞（図１５ａ）および細胞ベース（図１５ｂ）アッセイにおいて例示するグラフである。 無細胞アッセイでは、ＢＢラット由来の心臓溶解液を２０ｎｇ／ｍｌの各化合物の存在および非存在下にインキュベートした。３７℃で１時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定して、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として表した。結果は、３〜５回の別々の実験の平均である。 細胞ベースのアッセイでは、ヒト白血球（Ｕ９３７細胞）を２０ｎｇ／ｍｌの試験化合物の存在および非存在下に８ｐｇ／ｍｌのヒト組換えＴＮＦ−αへ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定して、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として表した。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌβ１，３ＧａｌＮＡｃ−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ→ＧａｌＮＡｃ）β−１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（コア２β−１，６ Ｎ−アセチルアミノトランスフェラーゼ、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ：ＥＣ２．４．１．１０２）の阻害剤としての既知および新規化合物の使用に関する。
【０００２】
このような阻害剤は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した疾患、特に、炎症性疾患、アテローム硬化症、糖尿病性心筋症、癌（転移の治療または予防が含まれる）または、糖尿病性網膜症の療法に適用を有する。
【０００３】
本発明者は、本明細書に記載する化合物が、本明細書に記載のアッセイにおいて測定されるように、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導性の活性と、培養ウシ網膜毛細管内皮細胞へのヒト白血球のグルコース誘導性の結合を阻害可能であることを確定した。以下にコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤と呼ぶこれらの化合物の患者への投与は、上記の疾患状態において、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性を阻害することによって、コア２Ｏ−グリカンおよびシアリルＬｅｗｉｓＸの異常な形成を予防または治療することができる。
【０００４】
グルコシル化されるタンパク質中のセリンまたはスレオニンのいずれかの残基へのＮ−アセチル−グルコサミン（ＧａｌＮＡｃ）の付加によるグリコシル化の開始に続き、プロセシングは、Ｏ−グリカンの伸長、分岐、そして次いで、末端修飾により進行する。
【０００５】
Ｏ−グリカン伸長および分岐における必須の工程は、相同のグリコシル−トランスフェラーゼのファミリーに由来する多数のグリコシルトランスフェラーゼアイソフォームにより触媒される。この第一のＧａｌＮＡｃ残基へどのサッカライド基がその後付くかに依存して、Ｏ−グリカンは、４つの主要サブタイプへ分類される（図１）。コア１構造は、ガラクトースの付加により形成されて、Ｇａｌβ１−３−ＧａｌＮＡｃ−αＳｅｒ／Ｔｈｒを形成する。コア２構造は、コア１構造を基質として要求して、ＧｌｃＮＡｃの付加により形成されて、Ｇａｌ１β１−３（ＧｌｃＮＡｃβ１−６）ＧａｌＮＡｃ−αＳｅｒ／Ｔｈｒを形成する。コア３構造は、ＧｌｃＮＡｃの付加により形成されて、ＧｌｃＮＡｃβ１−３ＧａｌＮＡｃ−αＳｅｒ／Ｔｈｒを形成する。コア４構造は、コア３構造を基質として要求してＧｌｃＮＡｃの付加により形成されて、ＧｌｃＮＡｃβ１−３（ＧｌｃＮＡｃβ１−６）ＧａｌＮＡｃ−αＳｅｒ／Ｔｈｒを形成する。コアＧａｌＮＡｃ構造への他の修飾も見出されているが、稀であるらしい。これらコア構造は、いずれも、ガラクトシル化、シアル化、フコシル化、硫酸化、または伸長によりさらに修飾されて、最終的にＯ−グリカンを形成する。
【０００６】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの３つの型が知られている。白血病細胞より同定されたコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ Ｉ、ムチン分泌組織において同定されたコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ ＩＩ、およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ ＩＩＩと呼ばれる第三の胸腺関連種である。
【０００７】
細胞表面Ｏ−グリカンは、発生とある種の疾患状態において、細胞−細胞相互作用を仲介するのに不可欠な役割を担うことが知られている。タンパク質グリコシル化のパターンは、ゴルジ体において発現されるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのようなグリコトランスフェラーゼ酵素の活性および特異性により主に決定される（１−２）。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔは、Ｏ−連結グリカンの生合成において不可欠な役割を担い（３−４）、ポリラクトサミン（即ち、反復性のＧａｌβ１−４ＧｌｃＮＡｃβ１−３）のあるＯ−連結糖（悪性の形質転換と関連した構造）の伸長に重要な調節工程を表す（５−６）。
【０００８】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性の変化は、Ｔ細胞活性化、癌、転移、骨髄芽細胞性白血病、心筋機能不全、および炎症のような、様々な疾患状態と関連付けられてきた（７−１８）。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの調節が特に重要であると考えられるのは、この酵素により形成される基本のコアオリゴ糖へのラクトサミン構造の付加とその後のフコースおよびシアル酸での修飾が、細胞接着タンパク質であるセレクチンのリガンドを構成する、ＬｅｗｉｓＸ、シアリル−シアリルＬｅｗｉｓａ、およびＬｅｗｉｓＸ糖基の形成をもたらすからである。このセレクチン−リガンド相互作用は、多くのプロセスにおいて重要な役割を担う。
【０００９】
炎症は、感染や他の何らかの形の外傷に対して身体が全般的に応答する方法である。炎症の間の主要な事象の１つは、免疫系の細胞が血流から被感染または損傷領域へ移動することである。ひとたび損傷の部位にあると、これらの細胞は、攻撃する作用体の隔離、破壊、および除去の原因となる。
【００１０】
短い期間（数分〜数日）を特徴とする急性炎症は健康に必須であるが、時々、この炎症プロセスは、適切なときに終わらずに、そのことが諸問題を引き起こす。慢性炎症は、長期間（数日、数週、数ヶ月、および数年でさえ）、リンパ球およびマクロファージ、組織破壊および修復、並びに血管増殖および線維症を特徴とする。炎症は、身体の正常な構成要素により不適切に始動される場合もあり、喘息、慢性関節リウマチ、および炎症性腸疾患のような一般的な疾患においてある役割を担う。
【００１１】
多くの細胞接着分子は、炎症のプロセスに関与することが知られている。炎症の部位では、血液溢出プロセスに先立って、はじめに白血球が血管内皮細胞へ接着する。白血球の内皮細胞へのこの初期の接着において、セレクチンはきわめて重要な役割を担うと考えられている。セレクチンとその炭水化物リガンドにより仲介される細胞接着は、内皮内層上での白血球の係留とローリングをもたらす。次いで、これが二次性のしっかりとした接着をもたらす。初めの刺激の数時間以内に、好中球が組織に入り始めて、移行を数日間続ける場合もある。ある炎症状態では、血管の直接的な損傷により組織傷害が引き起こされて、その組織への好中球の後続の動員によって増幅される。
【００１２】
Ｏ−グリカンの発現は、これらの付加物の嵩（かさ）のために、細胞−細胞相互作用を抑える。コア２Ｏ−グリカンの発現は、上記の場合のすべてにおいて、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの転写レベルにより調節される。末梢ＴおよびＢ細胞の抗原仲介性の活性化は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔおよび分岐Ｏ−グリカンのＣＤ４３（ロイコシアリン）に対する増加した活性を特徴とする（１９−２０）。
【００１３】
白血球の血液溢出、リンパ球転送、および他のプロセスが、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔにより合成されるＯ−グリカンに関与する。具体的には、シアリルＬｅｗｉｓＸで終結する細胞表面のＯ−グリカン構造が炎症の部位への白血球の動員に関与する。コア２ＧｌｃＮＡｃ−ＴはＴ細胞発生に重要でないが、この酵素の過剰発現は、骨髄性系統の発生を完全に遮断することが示されている。コア２Ｏ−グリカンの過剰発現はまた、Ｔ細胞およびＢ細胞間の相互作用（ＴＢ相互作用）に影響を及ぼすことが報告されている。このＴ−Ｂ相互作用は体液性の免疫応答にきわめて重要であり、Ｂ細胞上のＣＤ４０とＴ細胞上のＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の結合（ＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０相互作用）を介して仲介される。この相互作用は、Ｂ細胞の増殖を誘導する。コア２Ｏ−グリカンの過剰発現は、ＣＤ４０Ｌ−ＣＤ４０相互作用の有意な低下を引き起こすことが示されている（２１）。
【００１４】
活性化白血球の細胞表面上でのシアリルＬｅｗｉｓＸの合成を遮断して、それによりセレクチンとそれらの相互作用を停止させることによって、白血球浸潤の最初の工程が起こることを効果的に妨害することが可能である。故に、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を抑えることができるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害剤は、炎症を変調させることに有用性がある。
【００１５】
アテローム硬化症は、機序不明の進行性の炎症性疾患である。循環白血球の動員と、特に動脈の分岐および分枝での内皮への接着は、じゅく腫形成時（ａｔｈｅｒｏｇｅｎｅｓｉｓ）に起こることが知られている最も早期の事象の１つである。次いで、白血球上のインテグリンがこの細胞間のより強い付着を引き起こす。白血球は、内皮下の空間へ移行して、その内奥で蓄積し始める。単球は、酸化された低密度リポタンパク質（ＬＤＬ−ｏｘＬＤＬ）の存在により活性化マクロファージへ変換され、これらの活性化マクロファージは、そのスキャベンジャー受容体を介して、修飾されたリポタンパク質の種を取り込み、分化して、泡沫細胞になる。急性冠症候群で死亡した患者からのアテローム硬化性冠動脈の組織学的な分析は、泡沫細胞、マクロファージ、リンパ球、および肥満細胞が不安定な、または破裂したプラークに存在したことを証明する（４９）。
【００１６】
少なくとも３つの白血球接着分子、Ｅ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１、およびＶＣＡＭ−１がヒトのアテローム硬化症において同定されている（５０，５１）。さらに、正常な血管とは対照的に、アテローム硬化性の病巣では、上皮細胞によりＰ−セレクチンが過剰に発現されて、Ｅ−セレクチン（５２）およびＩＣＡＭ−１（５３）の動脈管腔での発現が、単核白血球の蓄積がある動脈部分で増加することがわかった。第三の接着分子、ＶＣＡＭ−１は、アテローム硬化症の動物モデルにおいて検出されて、ヒト冠動脈の非アテローム硬化部分においてよりも、アテローム硬化プラークの内奥においてより多く認められることも示されている。
【００１７】
Ｃｈｉｂｂｅｒら（５４）は、白血球−内皮細胞接着の増加におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの重要性を評価して、この酵素の活性の有意な増加を糖尿病患者の白血球に見出した。しかしながら、今日まで、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性がアテローム硬化症に罹患している患者の循環白血球で上昇しているという証拠はない。本出願人は、今回、酵素コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性が、アテローム性硬化症の患者からの循環白血球において実際に上昇していることを実証した。これは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を低下させることが可能な化合物は、アテローム硬化症の治療または予防に、またはアテローム硬化プラークの患者における再発を医療介入後に予防することに有用であることを示唆する。
【００１８】
糖尿病性心筋症の臨床症状が同定されてきたが、その病理発生は不明である。糖尿病性心筋症の定義は、糖尿病患者の筋細胞に心筋肥大および拡張性機能不全をもたらす線維症のような特定の欠陥があること、同時に、糖尿病の経過の間に発生した、心臓における関連した変化のあることを記載する。
【００１９】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性が、糖尿病の動物および患者の心臓組織において通常観察される、上昇した複合糖質の直接の原因であることを示唆する強い証拠が今日ある。この裏付けとして、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の増加が、糖尿病の実験動物モデルの心臓において、糖尿病患者の心臓においてこの状態の数年後に観察されるものに類似した病理を引き起こすことが最近示された。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの発現が心臓ミオシンプロモーターにより推進されるトランスジェニックマウスを使用して、種々の研究が行われた。４ヶ月目に、左心室の顕著な肥大と心臓の全般的な肥大が観察された（１６−１７）。
【００２０】
コア２分岐とコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性における顕著な変化は、悪性の形質転換、白血病、および癌腫と関連している（２１，３３−３６）。Ｔ２４Ｈ−ｒａｓでトランスフェクトしたラット線維芽細胞および乳癌細胞は、それらが転移性の腫瘍になるにつれて、コア２Ｏ−グリカンを発現する（３３）。
【００２１】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの癌および癌転移における関与を指摘する多数の証拠がある。例えば、高転移性の結腸癌細胞は、その低転移性対照物より多くのシアリルＬｅｗｉｓＸを発現すると同時に、ほとんど転移しない細胞より強くＥ−セレクチンへ接着する。腫瘍細胞におけるシアリルＬｅｗｉｓＸの発現と腫瘍進行の間には、強い相関性がある（３４）。さらに、コア２Ｏ−グリカンにおけるシアリルＬｅｗｉｓＸの発現とリンパおよび静脈への浸潤の間にもかなりの相関性が存在する。
【００２２】
最近の知見は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔがα１，３−Ｆｕｃ−Ｔとの組合せにおいて口腔癌におけるセレクチン仲介性の転移に貢献することを示唆する（３５）。さらに、ウェスタンブロット解析は、抗ｓＬＸモノクローナル抗体により認識されるａ−連結オリゴ糖を担う、主要なほぼ１５０ｋＤａの糖タンパク質がｓＬＸ陽性プレＢ白血病細胞系に存在することを明らかにした。ＣＤ１５発現とコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのこの相関性は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔが、ヒトプレＢリンパ様細胞におけるシアリルＬｅｗｉｓＸの細胞表面発現のレギュレーターであることを示唆する。これらの結果は、リンパ節転移が患者の予後に最も影響を及ぼす要因であるので、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより検出されるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ ｍＲＮＡが肺腺癌の悪性ポテンシャルを反映することを示す。
【００２３】
酵素１，３−フコシルトランスフェラーゼでのトランスフェクションによる、マウスメラノーマＢ１６−ＦＩにおけるシアリルＬｅｗｉｓＸの発現も、腫瘍転移におけるシアリルＬｅｗｉｓＸの重要性を確証した。このトランスフェクトされた細胞をマウスへ静脈内注射すると多数の肺腫瘍結節が形成されたが、元のＢ１６−ＦＩ細胞は、ほとんど腫瘍を形成しなかった。
【００２４】
シアリルＬｅｗｉｓａ、シアリルＬｅｗｉｓＸ（いずれもセレクチンリガンド炭水化物構造）の発現とコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性は、いずれも結直腸癌の悪性腫瘍度と密接に関連している（３６）。最近、Ｎｕｍａｈａｔａ（３７）は、原発性膀胱癌におけるシアリルＬｅｗｉｓＸ発現が浸潤性および転移性のアウトカムの予測因子となることを実証した。同等の予後価値を有する他の炭水化物エピトープはこれまで検証されていない。最近、ＵＳ２００４／００３３５２１は、コア２ｂＧｌｃＮＡｃ−Ｔが肝臓および胃の腫瘍と結腸癌および肝転移の試料において過剰発現されていることを開示した。さらに、ＷＯ０４／０９３６６２は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔが前立腺癌、精巣および膀胱癌において上昇していることを実証する。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのレベルは、疾患の転移または再発の機会の増加に伴って増加する。
【００２５】
故に、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害剤は、Ｏ−グリカン、例えば、シアリルＬｅｗｉｓＸを担うものの産生を抑えることが期待され、癌の浸潤性および転移を抑制して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ発現がその組織種の正常レベルより高く上昇している癌の治療に有用であろう。
【００２６】
糖尿病性網膜症は、毛細管の閉塞、微小血管病巣の形成、網膜の虚血域に隣接した網膜の新血管形成を特徴とする（３９−４０）、進行性の視覚の脅威となる糖尿病の合併症である（３８）。
【００２７】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性が糖尿病性網膜症において増加する白血球−内皮細胞接着および毛細管閉塞の直接的な原因であることが最近見出された（４１）。上昇グルコースと糖尿病の血清がコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性とヒト白血球の内皮細胞への接着を高めることも今日実証されている。このことは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−ＴのＰＫＣβ２依存性リン酸化を介して起こる（４２−４３）。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのリン酸化に関与するこの調節機序は、１型および２型糖尿病患者より単離した多形核白血球（ＰＭＮ）にも存在する。
【００２８】
特異的な阻害剤、ＬＹ３７９１９６によるＰＫＣβ２活性化の阻害は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのセリンリン酸化を弱め、活性の増加を予防して、それにより、白血球−内皮細胞接着の増加を予防する。そのような阻害剤は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の抑制が白血球−内皮細胞接着の増加を予防して、糖尿病または高血糖症と関連した網膜症における毛細管閉塞を予防する方法を提供するという確証を提供する。
【００２９】
コロハ（Ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ）は、数千年の間、糖尿病の治療に使用されてきた。この植物は、クマリン、サポニン、およびグリコシドのような多くの有効成分を含有する。多くの研究（４４）で、コロハの血糖低下特性が動物のヒトの両方で実証されてきた。この血糖低下特性は、強力なインスリン放出活性を有するアミノ酸、４−ヒドロキシイソロイシンによるとされてきた（４５−４６）。
【００３０】
本発明者は、今回、ある種の化合物がコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害剤であることを確定した。これら化合物のあるものは、コロハの種子より、そして他の植物供給源より入手可能である。
【００３１】
本発明の第一の側面において、式Ｉの化合物の有効量のその必要な患者への投与を含んでなる、酵素コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した状態の治療の方法を提供する。好ましくは、該疾患は、炎症性疾患、喘息、慢性関節リウマチ、炎症性腸疾患、糖尿病性心筋症、心筋機能不全、癌、癌転移、または糖尿病性網膜症である。
【００３２】
癌には、白血病、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肺の腺癌のような肺癌、結直腸癌、膀胱癌、肝臓腫瘍、胃腫瘍、結腸腫瘍、前立腺癌、精巣腫瘍、乳癌、肺腫瘍、口腔癌、およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ発現がその組織種の正常レベルより高く上昇しているあらゆる癌が含まれる。
【００３３】
好ましくは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、糖由来置換基を含む。用語「糖由来置換基」は、サッカライドを意味し、ここでは随意に１以上の水素および／または１以上のヒドロキシル基が−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ（ここでＲは、メチル、エチルまたはプロピルである）により置き換えられて、誘導体を形成する。
【００３４】
サッカライドには、限定されないが、単糖類、二糖類、三糖類、四糖類、および多糖類が含まれる。
単糖類には、限定されないが、アラビノース、キシロース、リキソース、リボース、グルコース、マンノース、ガラクトース、アロース、アルトロース、グロース（ｇｕｌｏｓｅ）、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、フルクトース、ソルボース、タガトース、プシコース、セドヘプツロース、デオキシリボース、フコース、ラムノース、２−デオキシ−グルコース、キノボース、アベクオース、グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸、ムラミン酸、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−マンノサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−アセチルムラミン酸、Ｏ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、フルクツロン酸、タガツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ガラクツロン酸、イズロン酸、シアル酸、およびグルロン酸が含まれる。
【００３５】
好ましくは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、少なくとも１つの糖由来置換基を含み；より好ましくは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、少なくとも２つの糖由来置換基を含む。
【００３６】
好ましくは、それぞれの糖由来置換基は、独立して、単糖、二糖、三糖、または四糖であり；より好ましくは、それぞれの糖由来置換基は、独立して、単糖または三糖である。 好ましくは、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、式Ｉ：
【００３７】
【化１】
【００３８】
［式中、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａ：
【００３９】
【化２】
【００４０】
の単糖であり；
好ましくは、Ｒ１は、−ＯＨ、−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａの単糖であり；より好ましくは、Ｒ１は、−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａの単糖であり；最も好ましくは、Ｒ１は、式ＩＩａの単糖である；
Ｒ２は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または式ＩＩｂ：
【００４１】
【化３】
【００４２】
の単糖であり；
好ましくは、Ｒ２は、−ＯＨ、または式ＩＩＩの単糖であり；より好ましくは、Ｒ２は、−ＯＨ、または式ＩＩＩの単糖であり；最も好ましくは、Ｒ２は、−ＯＨである；
Ｒ３は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または式ＩＩｃ：
【００４３】
【化４】
【００４４】
の単糖であり；
好ましくは、Ｒ３は、−ＯＨ、または式ＩＩｃの単糖であり；より好ましくは、Ｒ３は、式ＩＩｃの単糖であり；最も好ましくは、Ｒ３は、グルコースである；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ４は、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ４は、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ５は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｃ２Ｈ４ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３である；
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ６は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ６は、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ６は、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ７は、Ｃ２−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ７は、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ７は、−ＣＨ２ＯＨまたはＣ１−６アルコキシメチルであり；最も好ましくは、Ｒ７は、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；好ましくは、Ｒ８は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ８は、ＨまたはＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ８は、Ｈである；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；好ましくは、Ｒ９は、ＨまたはＣ１−６アシルであり；より好ましくは、Ｒ９は、Ｈまたは−ＣＯＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ９は、−ＣＯＣＨ３である；そして
Ｚは、ステロイド基である］の化合物またはその医薬的に許容される塩、エステル、または互変異性型、またはそれらの誘導体である。
【００４５】
好ましくは、式Ｉの化合物は、式ＩＩＩ：
【００４６】
【化５】
【００４７】
［式中：
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキル；より好ましくは、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３；最も好ましくは、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ５は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｃ２Ｈ４ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３である；そして
Ｒ７は、Ｃ２−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ７は、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ７は、−ＣＨ２ＯＨまたはＣ１−６アルコキシメチルであり；最も好ましくは、Ｒ７は、−ＣＨ２ＯＨである］の化合物である。
【００４８】
より好ましいのは、式ＩＩＩ［式中：
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルであり；そして
Ｒ７は、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルである］の化合物である。
【００４９】
より好ましいのは：
Ｒ４が、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３であり；
Ｒ５が−ＣＨ３であり；そして
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨである、化合物である。
【００５０】
式ＩＩＩの最も好ましい化合物は、式Ｉ［式中、
Ｒ１は、ラムノースであり；
Ｒ２は、−ＯＨであり；
Ｒ３は、グルコースであり；そして
Ｒ４は、−ＣＨ２ＯＨである］の化合物である。
【００５１】
最も好ましいのは、式ＩＶ：
【００５２】
【化６】
【００５３】
である、式Ｉの化合物である。
また提供するのは、式Ｉの化合物が式Ｖ：
【００５４】
【化７】
【００５５】
［式中：
Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシまたは−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａ：
【００５６】
【化８】
【００５７】
の単糖であり；
好ましくは、Ｒ１は、−ＯＨまたは−ＮＲ８Ｒ９であり；より好ましくは、Ｒ１は、−ＮＲ８Ｒ９である；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルであり；最も好ましくは、−ＣＨ３である；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ５は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ５は、−ＣＨ３である；そして
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ６は、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；より好ましくは、Ｒ６は、−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ６は、−ＣＨ２ＯＨである；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；好ましくは、Ｒ８は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ８は、ＨまたはＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ８は、Ｈである；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；好ましくは、Ｒ９は、ＨまたはＣ１−６アシルであり；より好ましくは、Ｒ９は、Ｈまたは−ＣＯＣＨ３であり；最も好ましくは、Ｒ９は、−ＣＯＣＨ３である；そして
Ｚは、ステロイド基である］の化合物である、化合物である。
【００５８】
式Ｖの好ましい化合物は：
Ｒ１が、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または−ＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ４が、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ６が、Ｃ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；そして
Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルである化合物である。
【００５９】
式ＩＶのより好ましい化合物は：
Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ１−６アシルであり；
Ｒ４が、Ｃ１−６アルキルまたは−ＣＨ２ＯＨであり；そして
Ｒ６がＣ１−６ヒドロキシアルキルであるものである。
【００６０】
最も好ましいのは、式：Ｇａｌβ１→３（６−デオキシ）ＧａｌＮＡｃα−Ｚである、式ＩＶの化合物である。
式Ｉの化合物は、ステロイド基を含む。用語「ステロイド基」は、式ＶＩ：
【００６１】
【化９】
【００６２】
のように示される四環系の環系を含む。
好ましくは、ステロイド基は、ステロイド基の３位を介して分子の残りへ付く。例えば、上記の式Ｉの化合物は、好ましくは、式：
【００６３】
【化１０】
【００６４】
の化合物である。
ステロイド基は、コレスタン、５α−プレグナン、アンドロスタン、エストラン、コレステロール、コラン、プロゲスチン、グルココルチコイド、ミネラルコルチコイド、デヒドロエピアンドロステロンまたはその７−ケト類似体のようなアンドロゲン、胆汁酸、または他のステロイドであり得る。１つの好ましい態様において、ステロイドコアは、それ自身で有益であるかまたは中性であるステロイドである。「中性」は、ステロイドそのものがヒトまたは動物における使用に適すると承認されたことを意味する。「有益」とは、ステロイドが、別に投与されるならば、ヒトまたは動物に対して有益な効果を有することを意味する。
【００６５】
ステロイド基は、植物供給源より誘導可能なステロイド性サポゲニンでも、そのような植物ステロイド性サポゲニンより化学修飾によってそれ自身誘導可能であるステロイド性サポゲニンでもよい。
【００６６】
１つの態様において、ステロイド基は、式ＶＩＩ：
【００６７】
【化１１】
【００６８】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１２は、Ｈである；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１３は、Ｈである；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；最も好ましくは、Ｒ１５は、Ｈである；
Ｒ１６は、Ｈ、ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１６は、Ｈである；
Ｒ１７は、Ｈ、ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ１７は、Ｈである；
Ｒ１８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ１８は、ＨまたはＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１８は、Ｈである；
Ｒ１９は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであり；最も好ましくは、Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；そして特に、Ｒ１９は、−ＣＨ３である；
Ｒ２０は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；最も好ましくは、Ｒ２０は、−ＯＨである；
Ｒ２１は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシであるか、または式ＶＩＩＩの基であり；好ましくは、Ｒ２１は、式ＶＩＩＩの基である：
【００６９】
【化１２】
【００７０】
｛式中、
Ｒ２２は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ２２は、Ｈ、ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ２２は、ＨまたはＯＨ、−ＯＣＨ３または−Ｏ−Ｃ２Ｈ５であり；最も好ましくは、Ｒ２２は、Ｈである；
Ｒ２３は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ２３は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ２３は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２であり；最も好ましくは、Ｒ２３は、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、または＝ＣＨ２であり；なおより好ましくは、Ｒ２３は、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２であり；そして特に、Ｒ２３は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である；そして
Ｒ２４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アシル、または単糖ＭＳであり；好ましくは、Ｒ２４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アシル、または単糖ＭＳであり；より好ましくは、Ｒ２４は、Ｃ１−６アシルまたは単糖ＭＳであり；最も好ましくは、Ｒ２４は、単糖ＭＳである｝；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ２８はＨで、Ｒ２９は−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ２８とＲ２９は、ともにＨである；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ３２は、Ｈである；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
ＭＳは、アラビノース、キシロース、リキソース、リボース、グルコース、マンノース、ガラクトース、アロース、アルトロース、グロース、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、フルクトース、ソルボース、タガトース、プシコース、セドヘプツロース、デオキシリボース、フコース、ラムノース、２−デオキシ−グルコース、キノボース、アベクオース、グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸、ムラミン酸、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−マンノサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−アセチルムラミン酸、Ｏ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、フルクツロン酸、タガツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ガラクツロン酸、イズロン酸、シアル酸、およびグルロン酸からなる群より選択され；好ましくは、ＭＳは、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、およびシアル酸からなる群より選択され；最も好ましくは、ＭＳは、グルコースである；そして
Ｙは、ＮまたはＯであり、好ましくは、ＹはＯである］のステロイド性サポゲニンである。
【００７１】
式ＶＩＩの好ましいステロイド性サポゲニンは、Ｒ２１が式ＶＩＩＩであり、ＹがＯであるものである。
式ＶＩＩのより好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２が、Ｈ、−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２８は、Ｈであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表すものである。
【００７２】
最も好ましいのは、式ＶＩＩ：［式中：
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、およびＲ２８は、それぞれＨを表し；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１６は、Ｈ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１９は、Ｈ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２１は、式ＶＩＩＩのものであり；
Ｒ２２は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２４は、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アシル、またはグルコースであり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨである］のステロイド性サポゲニンである。
【００７３】
式ＶＩＩの最も好ましいステロイド性サポゲニンは、
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ２２、Ｒ２８がそれぞれＨを表し；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２１は、式ＶＩＩＩであり；
Ｒ２３は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２であり；
Ｒ２４は、Ｃ１−６アシルまたはグルコースであり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ３２は、Ｈであるものである。
【００７４】
式ＶＩＩの最も好ましいステロイド性サポゲニンは：
【００７５】
【化１３】
【００７６】
［式中：
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２０は、ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２４は、グルコースまたはＣ１−６アシルであり；そして
Ｒ２９は、ＨまたはＯＨである］からなる群より選択される。
【００７７】
ステロイド基が式ＶＩＩのものである式Ｉの特に好ましい化合物は、トリゴネオシドＩＶａ、グリコシドＦ、シャタバリンＩ（ｓｈａｔａｖａｒｉｎ Ｉ）、化合物３、パルダリノシドＣ（ｐａｒｄａｒｉｎｏｓｉｄｅ Ｃ）であり、その構造は、表１に要約する。
【００７８】
【表１】
【００７９】
いずれの場合も、ステロイド基へ３位で結合するサッカライド基は：
【００８０】
【化１４】
【００８１】
である。
あるいは、ステロイド基は、式ＩＸ：
【００８２】
【化１５】
【００８３】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１２は、Ｈである；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１３は、Ｈである；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１５は、Ｈである；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１６は、Ｈである；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ１７は、Ｈである；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１８は、Ｈである；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；そして特に、Ｒ１９は、−ＣＨ３である；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；最も好ましくは、Ｒ２０は、−ＯＨである；
Ｒ２７は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；好ましくは、Ｒ２７は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ２７は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；最も好ましくは、Ｒ２７は、メチル、エチル、またはプロピルである；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ２８とＲ２９は、ともにＨである；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ３２は、Ｈである；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す］のステロイド性サポゲニンであり得る。
【００８４】
式ＩＸの好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２が、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２７は、Ｃ１−６アルキルであり；そして
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、それぞれＨまたは−ＯＨを表し；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであるものである。
【００８５】
より好ましくは、式ＩＸのステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２が、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２７は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、それぞれＨまたは−ＯＨを表し；そして
Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであるものである。
【００８６】
より好ましくは、式ＩＸのステロイド性サポゲニンは、一般式ＩＸａ：
【００８７】
【化１６】
【００８８】
のものである。
ステロイド基が式ＩＸである、式Ｉの最も好ましい化合物は：
【００８９】
【化１７】
【００９０】
であり、Ｌｉｌｉｕｍ ｍａｃｋｌｉｎｅａｅより単離可能である（５９）。
ステロイド性サポゲニンのさらに好ましい群は、ステロイド性サポゲニンが、式ＸＩ：
【００９１】
【化１８】
【００９２】
［式中、
Ｒ１２は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１２は、Ｈである；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１３は、Ｈである；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１５は、Ｈである；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；より好ましくは、Ｒ１６は、Ｈである；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ１７は、Ｈである；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ１８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシであり；より好ましくは、Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ１８は、Ｈである；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであり；最も好ましくは、Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；そして特に、Ｒ１９は、−ＣＨ３である；
Ｒ２５は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；好ましくは、Ｒ２５は、Ｈまたは−ＯＨであり；より好ましくは、Ｒ２５は、Ｈである；
Ｒ２６は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；好ましくは、Ｒ２６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；より好ましくは、Ｒ２６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２であり；最も好ましくは、Ｒ２６は、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、または＝ＣＨ２であり；なおより好ましくは、Ｒ２６は、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２であり；そして特に、Ｒ２６は、−ＣＨ３または＝ＣＨ２である；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ２８とＲ２９は、ともにＨである；
Ｒ３１は、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ３１は、Ｈである；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；好ましくは、Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；最も好ましくは、Ｒ３２は、Ｈである；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；好ましくは、Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す；
Ｒ３４は、Ｈまたは−ＯＨであり；好ましくは、Ｒ３４は、Ｈである；そして
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨであり；好ましくは、Ｘは、ＯまたはＮＨであり；より好ましくは、Ｘは、Ｏである］であるものである。
【００９３】
式ＸＩの好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２が、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５、Ｒ１８、Ｒ２８、およびＲ２９は、同じであるかまたは異なり、それぞれＨまたは−ＯＨを表し；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１９は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２６は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３１は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；そして
Ｒ３４は、Ｈまたは−ＯＨであるものである。
【００９４】
式ＸＩのより好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、およびＲ２８がそれぞれＨを表し；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１６は、Ｈまたは＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１９は、ＨまたはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２であり；
Ｒ２８は、Ｈであり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表すものである。
【００９５】
式ＸＩの最も好ましいステロイド性サポゲニンは：
Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ２５、Ｒ２８、Ｒ３１、Ｒ３２、およびＲ３４がそれぞれＨを表し；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２６は、Ｃ１−６アルキルまたは＝ＣＨ２であり；
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈであり；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表すものである。
【００９６】
式ＸＩの最も好ましいステロイド性サポゲニンは、以下の基：
【００９７】
【化１９】
【００９８】
より選択されるものである。
式ＸＩの特に好ましいステロイド性サポゲニンは、ジオスゲニン、ヤモゲニン、チゴゲニン、ネオチゴゲニン、サルササポゲニン、スミラゲニン、ヘコゲニン、ソラソジン、またはトマチジンである。
【００９９】
ステロイド基が式ＸＩのものである式Ｉの特に好ましい化合物は：
シャタバリンＩＶ、（２５Ｒ）シャタバリンＩＶ、デルトニン、バラニチンＶＩ、ＭｉｍａｋｉおよびＳａｈｉｄａ（５８）の化合物１２である。
【０１００】
シャタバリンＩＶは、サルササポゲニン ３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
【０１０１】
化合物１２は、ソラソジン ３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
デルトニンは、（３β，２５Ｒ）−スピロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
【０１０２】
バラニチンＶＩは、（３β，２５Ｓ）−スピロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−グルコピラノシドである。
【０１０３】
式Ｉの特に好ましい化合物は、好ましいステロイド基を好ましいサッカライド基と組み合わせるものである。
本発明の第二の側面において、式Ｉの化合物の、酵素：コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した状態の治療用医薬品の製造における使用を提供する。そのような状態の例は、本発明の第一の側面において本明細書に記載されている。
【０１０４】
本発明の第三の側面において、式Ｉの化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。
本明細書に使用するように、用語：コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、酵素、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ、好ましくは、本明細書に記載するアッセイにおいて測定されるように、本明細書に記載のコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ酵素活性を含んでなる調製物の、ＵＤＰ−６［３Ｈ］−Ｎ−アセチルグルコサミンを産物へ取り込む能力の阻害剤を意味する。
【０１０５】
本明細書に使用するように、用語アグリコンは、サッカライド部分が存在しない式Ｉの化合物を意味する。この化合物は、サッカライド部分により占められる位置に、他の置換基を有してよい。特に、フロスタノールサポニンであるアグリコンは、グリコシル化される場合、同等のスピロスタノールサポニンと同じように、閉環状態であり得る。
【０１０６】
本明細書の構造において使用する簡略表記：
【０１０７】
【化２０】
【０１０８】
は、構造：
【０１０９】
【化２１】
【０１１０】
を示すために使用する。
本明細書の構造において使用する簡略表記：
【０１１１】
【化２２】
【０１１２】
は、構造：
【０１１３】
【化２３】
【０１１４】
を示す。
本明細書において使用するように、簡略表記：Ｇｌｃはグルコースであり、Ｒｈａはラムノースである。疑念の回避のために言えば、用語Ｃ１−６アシルは、−ＣＯ−Ｃ１−５アルキルである。
【０１１５】
これから本発明を以下の非限定的な参考実施例、図面、および表を参照に記載する。これに照らせば、当業者には、本特許請求項の範囲内に該当するさらなる態様が考案されよう。
【０１１６】
発明の詳細な説明
実験法
式Ｉの化合物は、多様な植物種より抽出可能である。この点で参考になるのは、例のみを挙げると、Ｙｏｓｈｉｋａｗａら（５５）、Ｓｈａｓｈｅｄａら（５９）、Ａｋｈｏｖら（６０）、ＪｏｓｈｉおよびＤｅｖ（６１）、Ｒａｖｉｋｕｍａｒら（５６）、Ｖａｓｉｌ’ｅｖａおよびＰａｓｅｓｈｎｉｃｈｅｎｋｏ（６２）、Ｓｈｉｍｏｍｕｒａら（５７）、ＳｈａｒｍａおよびＳｈａｒｍａ（６３）、Ｐｅｔｉｔら（６４）、ＭｉｋａｍｉおよびＳａｓｈｉｄａ（５８）、およびＨｏｓｔｅｔｔｍａｎ（６５）と、これらの中の参考文献である。これらの文献は、いずれも参照により本明細書に組み込まれる。
【０１１７】
あるいは、それらは、慣用の有機化学の方法および技術によって合成可能である。この点で参考になるのは、Ｔｈｉｓｂｅ Ｋ．Ｌｉｎｄｈｏｒｓｔ著「炭水化物の化学および生化学要説（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（２０００）ウィリー、Ｂｅａｔ Ｅｒｎｓｔ、Ｇｅｒａｌｄ Ｗ．ＨａｒｔおよびＰｉｅｒｒｅ Ｓｉｎａｒｙ監修「化学および生物学における炭水化物（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ）」（２０００）ウィリー、Ｊｏｈｎ Ｆ．Ｒｏｂｙｔ著「炭水化物化学の要説（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ ｏｆ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（１９９８）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｈａｓｓａｎ Ｓ．Ｅｌ Ｋｈａｄｅｍ著「炭水化物化学（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（１９８８）、Ｍｉｋａｅｌ Ｂｏｌｓ著「炭水化物構築ブロック（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ Ｂｌｏｃｋｓ）」（１９９６）、Ｐ．Ｇ．ＷａｎｇおよびＣ．Ｒ．Ｂｅｒｔｏｚｚｉ監修「糖化学：原理、合成、および応用（Ｇｌｙｃｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」（２００１）マーセル・デッカー、ニューヨーク、および王立化学協会スタッフ著「炭水化物化学（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」（１９８９）ＣＲＣプレスのような炭水化物およびステロイド化学の教科書である。
【０１１８】
本発明の化合物は、市販のアグリコンより、またはコロハ種子または別の植物供給源からのアグリコンや他の前駆体の単離とその前駆体の後続の化学修飾によって製造可能である。
【０１１９】
当業者は、例えば、ジオスゲニン、ヤモゲニン、チゴゲニン、ネオチゴゲニン、サルサポゲニン、スミラゲニン、ヘコゲニン、ソラソジン、またはトマチジンのような、スピロスタノールおよびフロスタノールアグリコンの多くの供給源に注目されよう（例えば、Ｈｏｓｔｅｔｔｍａｎとその参考文献（６５））。
【０１２０】
具体的に、２，４−分岐オリゴ糖部分を有するスピロスタノールサポニンのジオスゲニンからの合成の方法については、Ｄｕら，２００３（７３）を参照のこと。この参考文献はまた、他のグルコシル化ステロイド、例えばコレステロールからの合成のさらなる参考になる。開示される方法は、ステロイドが化学的にグリコシル化される化合物を合成して式Ｉの化合物を生成するのに使用可能である。
【０１２１】
三糖置換スピロスタノールサポニンの合成については、Ｌｉら（６６）、多様な三糖および四糖置換スピロスタノールサポニンの合成については、Ｄｅｎｇら（６７）、フロスタノールサポニンの合成の方法ついては、Ｌｉら（６８）、Ｙｕら（６９）、Ｙｕら（７０）、そしてスピロスタノールおよびフロスタノールサポニンの相互変換については、ＹｕおよびＴａｏ（７１）、Ｃｈｅｎｇら（７２）、およびＤｕら（７３）がさらに参照になる。これらの参考文献はまた、単糖ヒドロキシアルキル基の誘導化についての情報とさらなる参考文献を提供する。
【０１２２】
Ｇａｌ１β１−３（６−デオキシ）ＧａｌＮＡｃα−コンジュゲートを合成する方法は、Ｐａｕｌｓｅｎら（４８）に示される。これらの方法は、式Ｉの他の化合物を合成するために、本明細書において参照される他の方法との組合せにおいて当業者により適用可能である。
【０１２３】
細胞培養
ウシ網膜毛細管内皮細胞（ＢＲＥＣ）および周皮細胞（ＢＲＰ）は、既報（４８）のように、屠殺したばかりのウシの目より切除したウシ網膜より確立した。簡潔に言えば、単離した網膜を無血清最少必須培地（ＭＥＭ，ギブコ、ペーズリー、イギリス）においてホモジェナイズして、８５μｍナイロンメッシュに通して濾過した。捕捉した微小血管を３７℃で３０分（ＢＲＰ）および９０分（ＢＲＥＣ）の間コラゲナーゼ−ジスパーゼ（１ｍｇ／ｍｌ）で消化して、５３μｍナイロンメッシュに通して濾過した。内皮細胞（ＢＲＥＣ）の増殖については、消化した微小血管をゼラチンコートした組織培養フラスコにおいてプレート培養して、１０％プール化ヒト血清、２ｍＭグルタミン、１００ＩＵ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＭＥＭにおいて維持した。周皮細胞（ＢＲＰ）の増殖については、上記微小血管を組織培養フラスコにおいて、１０％胎仔ウシ血清を補充した増殖培地においてプレート培養した。この細胞を２〜３継代で使用した。形態学的な判定基準を使用して、第ＶＩＩＩ因子関連抗原に対する抗体と３Ｇ５−周皮細胞マーカーでの免疫染色によって、この細胞を特性決定した。
【０１２４】
ヒト白血球細胞系（Ｕ９３７）は、１０％胎仔ウシ血清、２ｍＭグルタミン、１００ＩＵ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩにおいて培養した。
【０１２５】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の細胞ベースアッセイ
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔを薬理学的に阻害するコロハのポテンシャルを検討するために、標準グルコース（５．８ｍＭ）および高グルコース（１５ｍＭ）へ３７℃で２４時間曝露した白血球において酵素活性を測定した。インキュベーション後、細胞を溶解して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの測定に使用するまで−２０℃で凍結させた。培養したウシ網膜毛細管周皮細胞（ＢＲＰ）および内皮細胞（ＢＲＥＣ）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性も測定した。
【０１２６】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の無細胞アッセイ
このアッセイには、セファロースビーズに固定したコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔを使用した。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ免疫沈降、並びにウェスタンブロットには、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔに対するポリクローナル抗体を使用した。細胞を氷上で以下の溶解緩衝液において溶解した：２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）／１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００，１５０ｍＭ ＮａＣｌ，１ｍＭ ＥＤＴＡ，１ｍＭ ＥＧＴＡ，０．２ｍＭ バナジン酸ナトリウム，１ｍＭ ＰＭＳＦ，１μｇ／ｍｌ アプロチニン，１０μｇ／ｍｌ ロイペプチン。この溶解液を一定の撹拌とともに４℃で２０分間インキュベートして、不溶性の材料を遠心分離（１４，０００ｇ，４℃で５分間）により除去した。澄明にした溶解液をぶどう球菌タンパク質Ａ−セファロースＣＬ−４Ｂ共役一次抗体とともに、一定に撹拌しながら４℃で２時間インキュベートした。０．５％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含有するＴｒｉｓ緩衝化生理食塩水（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４），１５０ｍＭ ＮａＣｌ）で免疫沈降物を洗浄して、潜在的な阻害剤の存在および非存在下でのコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの測定に使用した。
【０１２７】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の測定
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を測定するために、白血球をＰＥＳに洗浄して、凍結させて、０．９％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００において０℃で溶解させた。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性は、既報（４１）のように測定した。簡潔に言えば、５０ｍＭ ２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ，シグマ、ドーセット、イギリス）（ｐＨ７．０）、１ｍＭ ＵＤＰ−６［３Ｈ］−Ｎ−アセチルグルコサミン（１６，０００ｄｐｍ／ナノモル、ＮＥＮ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ハウンスロー、イギリス）、０．１Ｍ ＧｌｃＮＡｃ（シグマ、オクラホマ州ドーセット）、基質としての１ｍＭ Ｇａｌβ１−３ＧａｌＮＡｃα−ｐ−ニトロフェノール（シグマ、ドーセット、イギリス）、および１６μｌの細胞溶解液（１００〜２００μｇタンパク質）を含有する、最終量３２μｌの反応混合物において反応を実施した。この混合物を３７℃で１時間インキュベートした後で、１ｍｌの氷冷蒸留水で反応を止めて、Ｃ１８ Ｓｅｐ−Ｐａｋカラム（ウォーターズ−ミリポア、ワトフォード、イギリス）で処理した。このカラムを２０ｍｌの蒸留水で洗浄後、産物を５ｍｌのメタノールで溶出させた。試料の放射活性を液体シンチレーションβ−カウンター（ＬＫＢ−Ｗａｌｌａｃ，ロンドン、イギリス）で計数した。内因性のコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性は、添加するアクセプタの非存在下に測定した。比活性は、ピコモル／ｈ／細胞タンパク質のｍｇとして表した。どの場合も、タンパク濃度は、ＢｉｏＲａｄタンパク質アッセイ（ＢｉｏＲａｄ，ハートフォードシア、イギリス）で定量した。
【０１２８】
白血球−内皮接着アッセイ
白血球の内皮細胞への接着は、カルボキシフルオレセイン（モレキュラー・プローブ、イギリス）で標識することによって試験した。このアッセイは、十分確立されている（４１）。簡潔に言えば、内皮細胞を周密状態にまで増殖させて、カルボキシフルオレセイン標識化白血球（Ｕ９３７）の接着のために内皮細胞表面を提供した。処理後、この白血球を遠心分離（１４，０００ｇ，１分間）させて、無血清ＲＰＭＬで２回洗浄した。次いで、この細胞を、５０μｇ／ｍｌカルボキシフルオレセインを含有する１ｍｌの無血清ＲＰＭＩに再懸濁した。この細胞を血球計で計数して、既知数を内皮細胞へ加えた。３７℃で３０分のインキュベーション後、無血清ＲＰＭＩで洗浄することによって非付着性の白血球を除去して、ディッシュをＰＢＳ中３．７％ホルマリンに固定した。１０のランダム高出力場（ｘ１００）において蛍光顕微鏡によって付着白血球を計数した。この結果を付着白血球／場の百分率として表した。
【０１２９】
グルコース毒性
ＢＲＰとＢＲＥＣを３ｃｍの組織培養ディッシュにおいてプレート培養して、増殖培地において３７℃で２４時間インキュベートした。次いで、この細胞を、標準グルコース（５．８ｍＭ）または上昇グルコース（２５ｍＭ）を含有する新鮮な増殖培地において、コロハサブ分画の非存在または存在下にインキュベートした。４日のインキュベーション後、血球計とトリパンブルーを使用して生存細胞の数を計数して、この結果を対照（５．８ｍＭグルコース）の百分率として表した。処理後、この細胞のいくらかをコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の測定用に保存した。
【０１３０】
粗製コロハ種子抽出物の生物学的活性
図２ａに示すように、上昇Ｄ−グルコースへの２４時間曝露は、ヒト白血球（Ｕ９３７）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を有意に高める。コロハ種子より調製した粗抽出物に、ヒト白血球におけるグルコース誘導コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性（図２ｂ）と白血球−内皮細胞接着（図２ｃ）を阻害するポテンシャルがあることを今回見出した。白血球−内皮細胞接着は、カルボキシフルオレセインで染色した既知数の白血球を網膜毛細管内皮細胞の単層へ加えることによって測定した。次いで、１０のランダム場を使用して、蛍光顕微鏡下に、付着した白血球の数を計数した。
【０１３１】
図３に例示する結果は、ヒト白血球（Ｕ９３７）を上昇グルコースへ２４時間曝露することによって得た。次いで、この細胞を溶解し、粗製のコロハ種子抽出物Ｆ１とともにインキュベートして、３０分のインキュベーション後にコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を測定した。
【０１３２】
コロハ種子抽出物の調製および精製：実施例１
コロハ種子抽出物は以下のように入手した（図４を参照のこと）。コロハ種子（ＦＵＤＣＯ，１８４ Ｅａｌｉｎｇ Ｒｏａｄ，ウェンブリー、ミドルセックス、イギリスよりＭｅｔｈｉ種子として入手したインドのコロハ種子）をハンマーミルで粉砕して、ナイロンメッシュに通して濾過した。入手した８２０ｇの濃黄色の粉末をソックスレー抽出器においてヘキサンで８時間連続洗浄することによって脱脂した。次いで、この植物材料を乾燥させて、エタノールで８時間連続的に抽出した。固形残渣を除去する濾過とエタノールの真空での濃縮により、半固体で茶褐色の粗抽出物（６５ｇ）を得て、Ｆ１とラベルした。これが残留オイルを含有するように見えたので、５０ｇの粗抽出物Ｆ１を冷ヘキサン（５００ｍｌ）とともに振り混ぜた。ヘキサン可溶性の材料を濾過して取り、不溶性の残渣を濾紙に採取し、乾燥させてＦ２（２７ｇ）を得る一方、溶媒は除去してＦ３（１５．４ｇ）を得た。
【０１３３】
次いで、市販キット（Ｂｉｏｔａｇｅ）を使用して、順相シリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを利用した。Ｆ２（５ｇ）をシリカゲル（５ｇ）上へ吸着させて、試料バレルへ詰め込んで、シリカゲルＫＰ−Ｓｉｌを含有するメインクロマトグラフィーカラム（２０ｃｍｘ４ｃｍ）へ短い管により連結した。この試料を、軽油（４０／６０）、クロロホルム、メタノール、およびアセトンの多様な混合物からなり極性が高まる一連の溶媒でカラムの上からそれを通して溶出させた。溶出するサブ分画をＴＬＣにより試験して、類似のものをプールして、極性が高まる化合物を表す７つの主要な溶出サブ分画Ｆ８〜Ｆ１４を得た。シリカを取り出し、１００％メタノールとともに振り混ぜ、濾過し、乾燥させて残渣を得て、Ｆ１５とラベルした。各サブ分画の重量と近似の溶出溶媒を表２に示す。
【０１３４】
【表２】
【０１３５】
精製したコロハ種子抽出物の生物学的活性
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの白血球におけるグルコース誘導活性を阻害する、上記の精製サブ分画のポテンシャルについて試験した。初めに、サブ分画Ｆ２が白血球におけるグルコース誘導コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を阻害可能であることを実証した（図５）。さらなる実験は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害剤がサブ分画Ｆ１３およびＦ１４に存在することを示した（図６ａおよび６ｂ）。
【０１３６】
次いで、サブ分画Ｆ９およびＦ１３を分析した。両方のサブ分画Ｆ９およびＦ１３の水性アリコート（０.５ｍｌ）を１ｍｌのジクロロメタンで抽出し、水相を取り出し、０．２２μｍフィルターを通した濾過により濾過滅菌して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の細胞ベースのアッセイに使用した。サブ分画Ｆ９およびＦ１３の水相の存在および非存在下にヒト白血球を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ曝露した。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤がサブ分画Ｆ１３の水相に存在することを示す結果を図７に提示する。
【０１３７】
サブ分画Ｆ１３の水相を、そのＨＰＬＣ保持時間によりコードされるサブ分画Ｆ１８．７〜Ｆ４１．１へＨＰＬＣにより精製した。サブ分画Ｆ１３の水相を、逆相条件で操作するＨＰＬＣ（ヒューレット・パッカード、１０５０／１００シリーズ）上へ直接注入した。メタノール／水の移動相でのオクタデシル結合カラムで分離を達成した。２２ｎｍの一定波長で操作するＵＶ検出器により、カラムより溶出する成分を検出した。上記の成分は、クロマトグラフィートレース上のピークとして質量分析計の検出器より明らかにした。このように入手したサブ分画を真空で濃縮乾固させ、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）に再び溶かして、濾過滅菌した。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性の細胞ベースのアッセイを行って、結果は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤がサブ分画Ｆ１９〜Ｆ２０．０３に存在することを示唆した（図８および９を参照のこと）。
【０１３８】
引き続き、サブ分画Ｆ１３の水相のより多くの量を、メタノール／水移動相でのフェニル結合カラムで逆相条件下に操作するＨＰＬＣによって、２０．０１、２０．２９、および２０．５５の保持時間のサブ分画へ同様に精製したが、これは、上記のサブ分画Ｆ１９．１３、Ｆ１９．３７、およびＦ１９．４４と同等である。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性についての細胞ベースのアッセイにより、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤がこれらのサブ分画、Ｆ２０．０１、Ｆ２０．２９、およびＦ２０．５５に存在することを確かめた（図１０ａ）。無細胞アッセイ系を使用して、ＨＰＬＣ精製したサブ分画Ｆ２０．５５によるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの阻害を実証した（図１１）。ヒト白血球（Ｕ９３７）を１５ｍＭグルコースへ３７℃で２４時間曝露後、この細胞を溶解してから、加熱（Ｈ，１００℃）および非加熱（ＮＨ）サブ分画、Ｆ２０．５５（１：５００希釈）へ曝露した。３７℃で３０分の曝露後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定した。図１１に示すように、サブ分画Ｆ２０．５５は、無細胞アッセイにおいてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔを直接阻害することがわかった。サブ分画Ｆ２０．５５の加熱は、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害のレベルをごくわずかに改変しただけであった。
【０１３９】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤の構造解析
サブ分画Ｆ２０．５５中のコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤を、ＣＤ３ＯＤに溶かした試料のＮＭＲ解析により同定した。以下のＮＭＲ実験を実施した：１Ｄ プロトン、２Ｄ ＤＱＦ−ＣＯＳＹ（１Ｈ−１Ｈ相関性）［８時間］、２Ｄ編集ＨＳＱＣ（１Ｈ−１３Ｃ多重度編集での１結合相関性）［２Ｄ ＴＯＣＳＹ］（１Ｈ−１Ｈ中継相関性）［２ｘ８時間］。
【０１４０】
サブ分画Ｆ２０．５５中のコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤の１Ｈおよび１３Ｃ ＮＭＲデータを表３および４に提示する。
【０１４１】
【表３】
【０１４２】
【表４】
【０１４３】
目的の化合物は、コロハ種子の既知の構成成分である（５５）、トリゴネオシドＩＶａと同定された。
【０１４４】
トリゴネオシドＩＶａ、プロトジオシン、化合物３、およびグリコシドＦのバルク調製
破砕した種子（３６０ｇ，Ｄｅｅｐ Ｆｏｏｄｓ社、ニュージャージー州ユニオン、０７０８３、アメリカの製品）をヘプタン（２ｘ７００ｍｌ）、アセトン（４ｘ６００ｍｌ）、およびＭｅＯＨ（４ｘ６００ｍｌ）で、それぞれ還流で２時間沸騰させることによって連続的に抽出した。この抽出物を濾過し、真空で蒸発乾固させて、この植物よりかつて報告されたフロスタノールサポニン類の存在をＬＣ／ＭＳによって分析した（５４，７４，７５）。メタノール抽出物（８２ｇ，種子の２２．７％（ｗ／ｗ））に標的化合物が含まれることを見出した。
【０１４５】
種子のヘプタンおよびアセトンでの最初の抽出は、ほとんどの低極性材料を除去して、後続のクロマトグラフィーを改善した。メタノール抽出物をブタノールと水の間に分画することによって、さらなる脱脂が達成可能である。しかしながら、メタノール抽出物は、極性の材料をさほど含有しなかったので、この抽出物をさらなる脱脂に処すことなく、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０（またはＳＰ２０７、ＨＰ２０ＳＳ、ＳＰ２０７ＳＳ、いずれもシグマ−アルドリッチより入手可能）樹脂のようなスチレン樹脂を使用する固相抽出によって、濃縮されたサポニン含有分画が入手可能である。
【０１４６】
ＭｅＯＨ抽出物（ＣＤＸＡ−１３−１３２−１，８１．２ｇ）を水−ＭｅＯＨ（６：４，４００ｍｌ）に溶かし、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０（Ｓｉｐｅｌｃｏ Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ２０，３５０ｇ，５．０ｘ３０ｃｍ）上へロードして、水−ＭｅＯＨ（４：６，６００ｍｌ）、ＭｅＯＨ（２Ｌ）、およびアセトン（２Ｌ）で溶出した。２５０ｍｌの分画を採取した。この分画をＨＰＬＣにより分析し、同様の組成の分画を合わせて、７種のプール（ＣＤＸＡ−１３−１３３ Ｆ１〜Ｆ７）を得た。所望されるサポニンの大部分がプール、ＣＤＸＡ−１３−１３３−Ｆ５（２２．５ｇ，抽出物の２７．７（ｗ／ｗ）％）に含まれることがわかった。
【０１４７】
このプール（２２．０ｇ）を順相シリカ（４４５ｇ，Ｍｅｒｃｋ シリカゲル６０，７０〜２３０メッシュ、０．０７６３〜０．２００ｍｍ，５．０ｘ３０ｃｍ）でクロマトグラフ処理して、以下の組成の各３Ｌのジクロロメタン−ＭｅＯＨ−水系で溶出した：ａ）８０：２０：３、ｂ）７５：２５：３、ｃ）７０：３０：３、およびｄ）６５：３５：３。２５０ｍｌの分画を採取し、ＨＰＬＣにより分析して、１１種のプール（ＣＤＸＡ−１３−１３７−Ｆ１〜Ｆ１１）へ合わせた。
【０１４８】
分画Ｆ６およびＦ７を合わせ、乾燥させ（１０．０ｇ，４５％）、Ｃ８シリカ（３５０ｇ，Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ８（２），５ミクロン、１００Ａ，５．０ｘ２８ｃｍ）でクロマトグラフ処理して、以下の組成のＭｅＯＨ−水系で溶出した：ａ）４：６（８００ｍｌ）、ｂ）５：５（２Ｌ）、ｃ）５５：４５（５Ｌ）６：４（１Ｌ）、ｄ）６５：３５（１Ｌ）、ｅ）７：３（１Ｌ）、ｆ）８：２（１Ｌ）およびＭｅＯＨ（１Ｌ）。この分画をＨＰＬＣにより分析して、２９種のプール（ＣＤＸＡ−１３−１３８−Ｆ１〜Ｆ２９）へ合わせた。２５０ｍｌの分画を採取した。
【０１４９】
分画Ｆ１３〜Ｆ１６を乾燥させ（１．１５５ｇ，１１．６％）、ＵＶ／Ｖｉｓ検出器モデル１５５、ポンプモデル３２１、および液体ハンドラーモデル２１５からなるＧｉｌｓｏｎ半分取用ＨＰＬＣシステムを使用する逆相ＨＰＬＣにより精製した。
【０１５０】
クロマトグラフィー条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｃ１８（２），５ミクロン、１５０ｘ２１．２ｍｍ
移動相：アセトニトリル−水（２８：７２）
試料サイズ：注入ごとに各分画の１５ｍｇ
検出：ＵＶ ２０５ｎｍ
５つのピーク、Ｐ１〜Ｐ５（図＊＊１〜５）を採取して、トリゴネオシドＩＶａ、その２５（Ｓ）異性体−グリコシドＦについて文献で報告された１Ｈ、１３Ｃ ＮＭＲ、および質量スペクトルのデータとの比較によって同定した。さらに類似の化合物、化合物３を検出した。この化合物についてはこれまで記載されていない。
【０１５１】
ＮＭＲスペクトルは、ｄ５ピリジンにおいて記録した。プロトンスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ ＶＸＲｓ−３００機器において３００ＭＨｚで記録して、炭素スペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ ４００機器において１００ＭＨｚで記録した。
【０１５２】
質量スペクトルは、Ｆｉｎｎｉｇａｎ ＬＣＱ Ｄｅｃａ機器においてＡＰＣＩ形式で記録した。
ピーク１、トリゴネオシドＩＶａ：白い固形物（９０ｍｇ，種子の０．０２５（ｗ／ｗ）％）。
【０１５３】
【化２４】
【０１５４】
ピーク２、化合物Ｃ／プロトジオシン：白い固形物（１２０ｍｇ，０．０３３％）。
【０１５５】
【化２５】
【０１５６】
ピーク３、化合物３：白い固形物（３０ｍｇ，０．００８％）。
【０１５７】
【化２６】
【０１５８】
ピーク４、グリコシドＦ：白い固形物（１２０ｍｇ，０．０３３％）。
【０１５９】
【化２７】
【０１６０】
【表５】
【０１６１】
【表６】
【０１６２】
【表７】
【０１６３】
上記５つの化合物の化学構造を図１５に示す。
【０１６４】
他の化合物
Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｒａｃｅｍｏｓｕｓ（５６）より単離したシャタバリンＩＶ（ｓｈａｔａｖａｒｉｎ Ｉ）（図１５）とＴｒｉｂｕｌｕｓ ｔｅｒｒｅｓｔｒｉｓ由来のプロトジオシン（コロハより（５５）の化合物Ｃとしても単離可能）は、いずれもＣｈｒｏｍａｄｅｘ社（２９５２ Ｓ．Ｄａｉｍｌｅｒ Ｓｔ．カリフォルニア州サンタアナ）より供給された。プロトジオシンはまた、コロハの上記調製物より、プロトジオシンの公表ＮＭＲデータに一致するピーク２として単離した。
【０１６５】
トリゴネオシドＩＶａ、グリコシドＦ、プロトジオシン、およびシャタバリンＩＶの生物学的活性
無細胞アッセイ
ＢＢラット由来の心臓溶解液を２０ｎｇ／ｍｌの各化合物の存在および非存在下にインキュベートした。３７℃で１時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定して、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として表した。結果は、３〜５回の別々の実験の平均である。この結果を図１５ａに示す。
【０１６６】
トリゴネオシドＩＶａ、その２５（Ｒ）異性体のグリコシドＦ、およびシャタバリンＩＶが無細胞アッセイにおいてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの高活性阻害剤であるのに対し、４位のグルコースがラムノースに置き換えられたプロトジオシンには活性がない。
【０１６７】
細胞ベースのアッセイ
２０ｎｇ／ｍｌの試験化合物の存在および非存在下に、ヒト白血球（Ｕ９３７細胞）を８ｐｇ／ｍｌのヒト組換えＴＮＦ−αへ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定して、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として表した。この結果を図１５ｂに示す。
【０１６８】
トリゴネオシドＩＶａとグリコシドＦが細胞ベースのアッセイにおいてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの高活性阻害剤であるのに対し、プロトジオシンには活性がない。
【０１６９】
コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤、トリゴネオシドＩＶａと糖尿病性網膜症
上昇グルコースレベルが培養ウシ網膜血管細胞、即ち毛細管周皮細胞（ＢＲＰ）および毛細管内皮細胞（ＢＲＥＣ）においてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を高めることを見出した（図１３）。ほぼ集密の培養物を標準グルコース（Ｎ，５．８ｍＭ）と高グルコース（Ｇ，１５ｍＭ）へ３７℃で２４時間曝露した。この細胞を溶解して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を細胞溶解液において測定した。
【０１７０】
さらに、コロハ種子抽出物には、培養ウシ網膜毛細管周皮細胞（ＢＲＰ）および内皮細胞（ＢＲＥＣ）においてグルコース誘導毒性を逆転させるポテンシャルがあることを実証した（図１４）。細胞をコロハ種子抽出物の存在（Ｎ−Ｆ，Ｇ−Ｆ）および非存在（Ｎ，Ｇ）下に標準（Ｎ，５．８ｍＭ）および高グルコース（Ｇ，２５ｍＭ）へ曝露した。４日のインキュベーション後、血球計とトリパンブルー排除を使用して、生存細胞の数を決定した。コロハ種子抽出物が培養ウシ網膜毛細管周皮細胞および内皮細胞においてグルコース誘導毒性を実際に逆転させることを見出した。しかしながら、コロハ種子抽出物がコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を正常化することによってグルコース誘導毒性を逆転させるのかどうかはまだ確かめられていない。
【０１７１】
網膜血管細胞への傷害が初期の糖尿病性網膜症の指標となるので、コロハ種子抽出物による網膜血管細胞の保護は重要である。ヒトの糖尿病性網膜症は、主に血管の疾患であり、主として毛細管に影響を及ぼす。報告されている最初の超構造的および微視的な変化は、網膜毛細管基底膜の肥厚化と周皮細胞の変性であり、そのいずれも毛細管壁の完全性を低下させる。周皮細胞の変性は、周皮細胞「ゴースト」と呼ばれる、かすかに染色されるコンパートメントを基底膜の鞘に残す。周皮細胞と内皮細胞の両方に対する傷害は、無細胞性の毛細管の形成をもたらす。
【０１７２】
治療
本明細書に記載の式Ｉの化合物を含んでなる医薬品は、経口または非経口の経路により投与可能であり、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、経皮、気道（エアゾール）、直腸、膣、および局所（頬内および舌下が含まれる）投与が含まれる。経口投与では、本発明の化合物は、一般に、錠剤またはカプセル剤の形態で、散剤または顆粒剤として、または水溶液剤若しくは懸濁液剤として提供される。
【０１７３】
経口使用のための錠剤には、有効成分を、不活性希釈剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、甘味剤、芳香剤、着色剤、および保存剤のような医薬的に許容される賦形剤と混合して含めてよい。好適な不活性希釈剤には、炭酸ナトリウムおよびカルシウム、リン酸ナトリウムおよびカルシウム、および乳糖が含まれ、一方、とうもろこしデンプンとアルギン酸は、好適な崩壊剤である。結合剤には、デンプンおよびゼラチンを含めてよく、一方、滑沢剤は、存在するならば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクであり得る。所望されるならば、錠剤は、胃腸管における吸収を遅らせるために、グリセリルモノステアレートまたはグリセリルジステアレートのような材料でコートしてよい。経口使用のためのカプセル剤には、有効成分を固体の希釈剤と混合する硬ゼラチンカプセル剤と、有効成分を水または落花生油、流動パラフィン、またはオリーブ油のようなオイルと混合する軟ゼラチンカプセル剤が含まれる。
【０１７４】
直腸投与用の製剤は、例えば、ココア脂またはサリチル酸塩を含んでなる好適な基剤を含む坐剤として提示可能である。
膣投与に適した製剤は、有効成分に加えて、当該技術分野において適切であると知られているような担体を含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、またはスプレーの製剤として提示可能である。
【０１７５】
筋肉内、腹腔内、皮下、および静脈内の使用では、一般に、適切なｐＨおよび等張性へ緩衝化した無菌の水溶液剤または懸濁液剤において本発明の化合物を提供する。好適な水性担体には、リンゲル溶液と等張塩化ナトリウムが含まれる。本発明による水性懸濁液剤には、セルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、およびトラガカントゴムのような懸濁剤と、レシチンのような湿潤剤を含めてよい。水性懸濁液剤に適した保存剤には、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピルが含まれる。
【０１７６】
本発明のコロハ種子抽出物およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤は、リポソーム製剤としても提示可能である。
一般に、好適な用量は、１日につきレシピエントの体重キログラムあたり０．０１〜１０ｍｇのコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ阻害剤の範囲、好ましくは、１日につき体重キログラムあたり０．２〜１．０ｍｇの範囲にある。所望される用量は、好ましくは、１日１回で提示されるが、２、３、４、５、６またはより多いサブ用量を１日全体で適切な間隔で投薬可能である。これらのサブ用量は、例えば、単位剤形につき１０〜１５００ｍｇ、好ましくは２０〜１０００ｍｇ、そして最も好ましくは５０〜７００ｍｇの有効成分を含有する単位剤形で投与可能である。
【０１７７】
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７．Ｂｒｏｃｋｈａｕｓｅｎ Ｉ．ら，「正常ドナーおよび白血病患者からの白血球におけるＯ−グリカンの生合成：白血病細胞におけるＯ−グリカンコア２ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌ［β］３ＧａｌＮＡｃ［α］−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ→ＧａｌＮＡｃ）［β］（１，６）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼの増加（Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｉｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｎｏｒｍａｌ ｄｏｎｏｒｓ ａｎｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ Ｏ−ｇｌｙｃａｎ ｃｏｒｅ ２ ２ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌ［β］３ＧａｌＮＡｃ［α］−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ ｔｏ ＧａｌＮＡｃ）［β］（１，６）−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１，１２５７−１２６３（１９９１）
８．Ｒｅｎｋｏｎｅｎ Ｊ．ら，「コア２β１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼとα１，３−フコシルトランスフェラーゼは、口腔癌細胞上のセレクチンリガンドでのＯ−グリカンの合成を調節する（Ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ１，６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ ａｎｄ ａｌｐｈａ１，３−ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｏｎ ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｌｉｇａｎｄｓ ｏｎ ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ）」，ＡＰＭＩＳ １０９，５００−５０６（２００１）
９．Ｍａｃｈｉｄａ Ｅ．ら，「肺腺癌において発現されてｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションにより定量されるコア２β１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼメッセンジャーＲＮＡの臨床病理学上の意義（Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ１，６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ ＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１，２２２６−２２３１（２００１）
１０．Ｄａｌｚｉｅｌ Ｍ．ら，「Ｃ２ＧｎＴ１およびＳＴ３Ｇａｌ−Ｉグリコシルトランスフェラーゼの相対活性は、ＭＵＣ１上の腫瘍関連エピトープのＯ−グリカン構造および発現を決定する（Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｃ２ＧｎＴ１ ａｎｄ ＳＴＳＧａｌ−Ｉ ｇｌｙｃｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ Ｏ−ｇｌｙｃａｎ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎ ｏｆ ａ ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｎ ＭＵＣ１）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，１１００７−１１１０５（２００１）
１１．Ｐｅｒａｎｄｉｏ Ｍ．ら，「コア２グルコサミニルトランスフェラーゼ欠損マウスの細静脈における白血球ローリングの重篤な障害（Ｓｅｖｅｒｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｏｆ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ ｒｏｌｌｉｎｇ ｉｎ ｖｅｎｕｌｅｓ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ）」，Ｂｌｏｏｄ ９７，３８１２−３８１９（２００１）
１２．Ｙｏｕｓｅｆｉ Ｓ．ら，「転移性マウス腫瘍細胞系において増加したＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌ［β］１−３ＧａｌＮＡｃ−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ→ＧａｌＮＡｃ）［β］−１，６−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ活性（Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌ［ｂｅｔａ］１−３ＧａｌＮＡｃ−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ ｔｏ ＧａｌＮＡｃ）［ｂｅｔａ］−１，６−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｍａｔａｓｔｉｃ ｍｕｒｉｎｅ ｔｕｍｏｕｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，１７７２−１７８２（１９９１）
１３．Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｅ．Ａ．ら，「ウィスコット−アルドリッチ症候群患者由来の異常なＯ−連結オリゴ糖生合成と血小板（Ａｂｂｅｒａｎｔ Ｏ−ｌｉｎｋｅｄ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｗｉｔｈ Ｗｉｓｋｏｔｔ−Ａｌｄｒｉｃｈ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，６２８０−６２９０（１９９１）
１４．Ｐｉｌｌｅｒ Ｆ．ら，「ヒトＴ−リンパ球の活性化は、Ｏ−グリカン生合成における変化と関連する（Ｈｕｍａｎ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３，１５１４６−１５１５０（１９８８）
１５．Ｋｏｙａ Ｄ．ら，「コア２Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼの過剰発現は、トランスジェニックマウスにおいて、サイトカイン作用を高めて、心筋肥大を誘導する（Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｙｃｏｓａｍｉｎｙｌ−ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ）」，ＦＡＳＥＢ Ｊ．１３，２３２９−２３３７（１９９９）
１６．Ｎｉｓｈｉｏ Ｙ．ら，「特にラット心組織において糖尿病および高血糖症により誘導される酵素的グリコシル化を調節する遺伝子の同定および特性決定（Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｇｅｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｉｎ ｒａｔ ｃａｒｄｉａｃ ｔｉｓｓｕｅ）」，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９６，１７５９−１７６７（１９９５）
１７．Ｔｓｕｂｏｉ Ｓ．ら，「Ｏ−連結オリゴ糖の免疫応答における役割（Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｏ−ｌｉｎｋｅｄ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）」，Ｂｉｏａｓｓａｙｓ ２３，４６−５３（２００１）
１８．Ｔｓｕｂｏｉ Ｓ．ら，「トランスジェニックマウスにおいて異所的に発現される分岐Ｏ−連結オリゴ糖は、一次Ｔ細胞免疫応答を抑制する（Ｂｒａｎｃｈｅｄ ｏ−ｌｉｎｋｅｄ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｅｃｔｏｐｉｃａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ ｒｅｄｕｃｅ ｐｒｉｍａｒｙ Ｔ−ｃｅｌｌ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）」，ＥＭＢＯ Ｊ．１６，６３６４−６３７３（１９９７）
１９．Ｔｓｕｂｏｉ Ｓ．ら，「Ｏ−連結オリゴ糖の免疫応答における役割（Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｏ−ｌｉｎｋｅｄ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ）」，Ｂｉｏａｓｓａｙｓ ２３，４６−５３（２００１）
２０．Ｐｉｌｌｅｒ Ｆ．ら，「ヒトＴ−リンパ球の活性化は、Ｏ−グリカン生合成における変化と関連する（Ｈｕｍａｎ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３，１５１４６−１５１５０（１９８８）
２１．Ｔｓｕｂｏｉ Ｓ．ら，「Ｔ細胞表面糖タンパク質上の分岐Ｏ−連結オリゴ糖の過剰発現は、トランスジェニックマウスにおける体液性免疫応答を妨げる（Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｂｒａｎｃｈｅｄ Ｏ−ｌｉｎｋｅｄ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｏｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｍｐａｉｒｓ ｈｕｍｏｒａｌ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３（４６），３０６８０−３０６８７（１９９８）
２２．Ｍａｅｍｕｒａ Ｋ．ら，「ロイコシアリンへ付着したポリ−Ｎ−アセチルラクトサミニルＯ−グリカン。Ｏ−グリカンにおけるシアリルＬｅ（ｘ）構造の存在（Ｐｏｌｙ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｌａｃｔｏｓａｍｉｎｙｌ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ａｔｔａｃｈｅｄ ｔｏ Ｌｅｕｋｏｓｉａｌｉｎ．Ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅ（ｘ）ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｉｎ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７（３４），２４３７９−２４３８６（１９９２）
２３．Ｎａｋａｍｕｒａ Ｍ．ら，「ヒト扁桃Ｂリンパ球の活性化の間の同時的なコア２β１→６Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼアップレギュレーションおよびシアリル−Ｌｅ（Ｘ）発現（Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ１→６Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｉａｌｙｌ−Ｌｅ（Ｘ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｏｎｓｉｌｌａｒ Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ）」，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４６３（１−２），１２５−１２８（１９９９）
２４．Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐ．Ｐ．ら，「ＨＬ−６０細胞由来Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド−１上のＯ−グリカンの構造（Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｏｎ Ｐ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｌｉｇａｎｄ−１ ｆｒｏｍ ＨＬ−６０ ｃｅｌｌｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（３１），１８７３２−１８７４２（１９９６）
２５．Ｏｈｍｏｒｉ Ｋ．ら，「新規のモノクローナル抗体により特定されるシアリルＬｅｗｉｓ Ｘ抗原の独自種は、ヘルパー記憶Ｔ細胞上で選択的に発現される（Ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｔｙｐｅ ｏｆ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ｘ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｓ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｈｅｌｐｅｒ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ）」，Ｂｌｏｏｄ ８２（９），２７９７−８０５（１９９３）
２６．Ｋｕｍａｍｏｔｏ Ｋ．ら，「ムチンＧｌｃＮＡｃβ１→６ＧａｌＮＡｃαコア構造上に腫瘍関連抗原として存在するシアリルＬｅｗｉｓＸ決定基の特異検出（Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ｘ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｍｕｃｉｎ ＧｌｃＮＡｃｂｅｔａ１→６ＧａｌＮＡｃａｌｐｈａ ｃｏｒｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｓ ａ ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ）」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２４７（２），５１４−５１７（１９９８）
２７．Ｖａｒｋｉ Ａ．，「オリゴ糖の生物学的役割：理論のすべてが正しい（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ：ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｉｅｓ ａｒｅ ｃｏｒｒｅｃｔ）」，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ ３，９７−１３０（１９９３）
２８．Ｗａｌｚ Ｇ．ら，「骨髄様細胞および腫瘍細胞上のシアリル−Ｌｅｘ決定基のＥＬＡＭ−１による認識（Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ ＥＬＡＭ−１ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉａｌｙｌ−Ｌｅｘ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ ｏｎ ｍｙｅｌｏｉｄ ａｎｄ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ）」，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５０（４９８４），１１３２−１１３５（１９９０）
２９．Ｍａｊｕｒｉ Ｍ．Ｌ．ら，「組換えＥ−セレクチン−タンパク質は、シアリル−Ｌｅ（ａ）およびシアリル−Ｌｅ（ｘ）を介した腫瘍細胞接着に仲介する（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｖｉａ ｓｉａｌｙｌ−Ｌｅ（ａ） ａｎｄ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅ（ｘ））」，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１８２（３），１３７６−８２（１９９２）
３０．Ｔａｋａｄａ Ａ．ら，「ヒト癌細胞の血管内皮への接着に対する炭水化物抗原、シアリルＬｅｗｉｓ ＡおよびシアリルＬｅｗｉｓ Ｘの貢献（Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ａ ａｎｄ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ｘ ｔｏ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３（２），３５４−３６１（１９９１）
３１．Ｙｏｕｓｅｆｉ Ｓ．ら，「転移性マウス腫瘍細胞系におけるアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ活性（Ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｍｅｔａｓｔｉｃ ｍｕｒｉｎｅ ｔｕｍｏｕｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，１７７２−１７８２（１９９１）
３２．Ｂｅａｕｍ Ｐ．Ｖ．ら，「ヒト膵臓癌細胞系におけるコア２β−１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼの発現は、ＭＵＣ１腫瘍関連エピトープの改変された発現をもたらす（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ−１，６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎ ａ ｈｕｍａｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ａｌｔｅｒｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＭＵＣ１ ｔｕｍｏｕｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｐｉｔｏｐｅｓ）」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，２４６４１−２４６４８（１９９９）
３３．Ｓａｉｔｏｈ Ｏ．ら，「分化欠損ＨＬ−６０細胞における、ロイコシアリンへ付着する異常なＯ−グリカンの発現（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｂｅｒｒａｎｔ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ａｔｔａｃｈｅｄ ｔｏ ｌｅｕｋｏｓｉａｌｉｎ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ＨＬ−６０ ｃｅｌｌｓ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１（１１），２８５４−２８６２（１９９１）
３４．Ｂｒｏｃｋｈａｕｓｅｎ Ｉ．ら，「正常ドナーおよび白血病患者からの白血球におけるＯ−グリカンの生合成：白血病細胞におけるＯ−グリカンコア２ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌ［β］３ＧａｌＮＡｃ［α］−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ→ＧａｌＮＡｃ）［β］（１，６）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼの増加（Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｉｎ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｍｏｒｍａｌ ｄｏｎｏｒｓ ａｎｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｌｅｕｋｅｍｉａ：ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ Ｏ−ｇｌｙｃａｎ ｃｏｒｅ ２ ２ＵＤＰ−ＧｌｃＮＡｃ：Ｇａｌ［β］３ＧａｌＮＡｃ［α］−Ｒ（ＧｌｃＮＡｃ ｔｏ ＧａｌＮＡｃ）［β］（１，６）−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎ ｌｅｕｋｅｍｉｃ ｃｅｌｌｓ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１，１２５７−１２６３（１９９１）
３５．Ｒｅｎｋｏｎｅｎ Ｊ．ら，「コア２β１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼとα１，３−フコシルトランスフェラーゼは、口腔癌細胞上のセレクチンリガンドでのＯ−グリカンの合成を調節する（Ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ１，６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ ａｎｄ ａｌｐｈａ１，３−ｆｕｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｏｎ ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｌｉｇａｎｄｓ ｏｎ ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ）」，ＡＰＭＩＳ １０９，５００−５０６（２００１）
３６．Ｓｈｉｍｏｄａｉｒａ Ｋ．ら，「ヒト結直腸癌におけるコア２β−１，６−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ遺伝子の癌腫関連発現：腫瘍進行におけるＯ−グリカンの役割（Ｃａｒｃｉｎｏｍａ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ｂｅｔａ−１，６−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｇｅｎｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ ｃａｎｃｅｒ：ｒｏｌｅ ｏｆ Ｏ−ｇｌｙｃａｎｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ）」，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１；５７（２３），５２０１−５２１６（１９９７）
３７．Ｎｕｍａｈａｔａ Ｋ．ら，「新規のモノクローナル抗体により特定されるシアリルＬｅｗｉｓ Ｘ抗原の独自種は、ヘルパー記憶Ｔ細胞上で選択的に発現される（Ａ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｔｙｐｅ ｏｆ ｓｉａｌｙｌ Ｌｅｗｉｓ Ｘ ａｎｔｉｇｅｎ ｄｅｆｉｎｅｄ ｂｙ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｓ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｏｎ ｈｅｌｐｅｒ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ）」Ｂｌｏｏｄ ８２（９），２７９７−８０５（２００２）
３８．Ｋｌｅｉｎ Ｒ．ら，「糖尿病性網膜症のウィスコンシン疫学研究 Ｘ．診断時の年齢が３０歳以上であるときの糖尿病性網膜症の４年発症率および進行（Ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ Ｘ．Ｆｏｕｒ−ｙｅａｒ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ａｎｄ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ｗｈｅｎ ａｇｅ ａｔ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｉｓ ３０ ｏｒ ｍｏｒｅ ｙｅａｒｓ）」，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１０７，２４４−２５０（１９８９）
３９．Ｄａｖｉｓ Ｍ．Ｄ．，「糖尿病性網膜症−臨床概説（Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ−ａ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ １５，１８４４−１８７３（１９９３）
４０．Ｔｏｏｋｅ Ｊ．Ｅ．監修、「糖尿病性血管症（Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ａｎｇｉｏｐａｔｈｙ）」，オックスフォード大学出版局（１９９９）中２３３−２４７頁、Ｋｏｈｎｅｒ Ｅ．Ｍ．ら，「糖尿病性網膜症（Ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ）」
４１．Ｃｈｉｂｂｅｒ Ｒ．ら，「コア２ＧｌｃＮＡｃ−（β１，６）トランスフェラーゼの活性は、年齢適合対照被検者に比較して、糖尿病患者由来の多形核白血球においてより高い（Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｏｒｅ ２ ＧｌｃＮＡｃ−（ｂｅｔａ１，６）ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ｉｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｏｎｕｃｌｅａｒ ｌｅｕｋｏｃｙｔｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ａｇｅ−ｍａｔｃｈｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｕｂｊｅｃｔｓ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４９，１７２４−１７３０（２０００）
４２．Ｋｏｙａ Ｄ．ら，「プロテインキナーゼＣ活性化と糖尿病性合併症の進展（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４７，８５９−８６６（１９９８）
４３．Ｍｅｉｅｒ Ｍ．ら，「血管系疾患におけるプロテインキナーゼＣ活性化とその薬理学的阻害（Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ）」，Ｖａｓｃ．Ｍｅｄ．５，１７３−１８５（２０００）
４４．Ｓｈａｒｍａ Ｒ．Ｄ．ら，「Ｉ型糖尿病における血糖および血清脂質に対するコロハ種子の効果（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ ｓｅｅｄｓ ｏｎ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｌｉｐｉｄｓ ｉｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｄｉａｂｅｔｅｓ）」，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．４４，３０１−３０６（１９９０）
４５．Ｂｒｏｃａ Ｃ．ら，「４−ヒドロキシイソロイシン：合成および天然類似体のインスリン分泌に対する効果（４−Ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ：ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｎ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ）」，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３９０（３），３３９−３４５（２０００）
４６．Ｓａｕｖａｉｒｅ Ｙ．ら，「４−ヒドロキシイソロイシン：インスリン分泌の新規アミノ酸増強剤（４−Ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ：ａ ｎｏｖｅｌ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ）」，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４７（２），２０６−２１０（１９９８）
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【図面の簡単な説明】
【０１７８】
【図１】図１は、Ｏ−グリカンコア構造の生合成を例示する概略フローチャートである。
【図２】図２ａは、酵素コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性が、グルコースにより誘導可能であることを例示するグラフである。ヒト白血球（Ｕ９３７）を標準（５．８ｍＭ）および高グルコース（１５ｍＭ）へ３７℃で２４時間曝露した。次いで、この細胞を溶解して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝２８）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。 図２ｂは、コロハ種子より調製した粗抽出物Ｆ１がグルコース誘導コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を阻害することを例示するグラフである。ヒト白血球（Ｕ９３７）をコロハ抽出物（１：１０００希釈；Ｎ−Ｆ，Ｇ−Ｆ）の存在下に標準（Ｎ，５．８ｍＭ；ｎ＝３）および高グルコース（Ｇ，１５ｍＭ；ｎ＝３）へ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を白血球細胞溶解液において定量した。コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性は、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として提示する。 図２ｃは、コロハ種子より調製した粗抽出物Ｆ１がヒト白血球（Ｕ９３７）の培養網膜毛細管内皮細胞への付着を阻害することを例示するグラフである。上昇グルコース（１５ｍＭ）への曝露後、この白血球をカルボキシフルオレセインで標識することによって、白血球−内皮細胞接着のレベルを定量した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝３）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図３】図３は、コロハ種子より調製した粗抽出物Ｆ１がコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を阻害することを例示するグラフである。ヒト白血球（Ｕ９３７）を１５ｍＭグルコースへ３７℃で２４時間曝露して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を白血球細胞溶解液において粗製コロハ種子抽出物（Ｇ−Ｆ１；１：１０００希釈）の存在下に測定した。コア２オリゴ糖の形成（β１，６−連結ＧｌｃＮＡｃのＧａｌβ１，３ＧｌｃＮＡｃ−アクセプタへの付着）を定量することによって、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性のレベルを測定した。データは、３回の別々の実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．として提示する。
【図４】図４は、コロハ種子の抽出とコロハ種子抽出物の後続の精製を例示する概略フローチャートである。
【図５】図５は、粗製コロハ種子抽出物Ｆ１と粗抽出物Ｆ１より精製したサブ分画Ｆ２の、ヒト白血球（Ｕ９３７）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対する阻害効果を例示するグラフである。サブ分画Ｆ１およびＦ２の存在および非存在下に、細胞を上昇グルコース（１５ｍＭ）へ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を白血球細胞溶解液において定量した。データは、２回の別々の実験の平均を表す。
【図６】図６ａおよび６ｂは、粗抽出物Ｆ１よりシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（Ｂｉｏｔａｇｅ）によって精製したサブ分画Ｆ８〜Ｆ１５の、ヒト白血球（Ｕ９３７）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対する阻害効果を例示するグラフである。サブ分画の存在下に、細胞を上昇グルコース（Ｇ，１５ｍＭ）へ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を白血球細胞溶解液において定量した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝３）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図７】図７は、サブ分画Ｆ１３の水相がヒト白血球（Ｕ９３７）におけるコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性を阻害することを例示するグラフである。サブ分画Ｆ９およびＦ１３をジクロロメタンと徹底的に混合して、水相を濾過滅菌して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性用の細胞ベースのアッセイに使用した。サブ分画Ｆ９およびＦ１３の水相の存在および非存在下にヒト白血球を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ曝露した。この結果を、２回の別々の実験の平均として提示する。
【図８】図８は、サブ分画Ｆ１３の水相よりＨＰＬＣにより保持時間で精製したサブ分画、Ｆ１８．７〜Ｆ４１．１の、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対する阻害効果を例示するグラフである。種々の保持時間のＨＰＬＣサブ分画、Ｆ１８．７〜Ｆ４１．１の存在および非存在下にヒト白血球（Ｕ９３７）を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ曝露した。提示するデータは、１回の実験からのものである。サブ分画、Ｇ２０．２４、Ｇ２０．６９、Ｇ２２．２、Ｇ３９．９およびＧ４１．１（図８において、カラム無しで表される）については、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対するその阻害効果を試験しなかった。
【図９】図９は、種々の保持時間のＨＰＬＣサブ分画、Ｆ１９．１３およびＦ１９．３７の阻害効果を例示するグラフである。種々の保持時間のサブ分画、Ｆ１９．１３およびＦ１９．３７（１：１０００希釈）の存在および非存在下にヒト白血球（Ｕ９３７）を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ２４時間曝露した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝３）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図１０】図１０は、サブ分画Ｆ１３の水相よりＨＰＬＣにより保持時間で精製したサブ分画、Ｆ２０．０１、Ｆ２０．２９、およびＦ２０．５５の、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔのグルコース誘導活性に対する阻害効果を例示するグラフである。種々の保持時間のサブ分画、Ｆ２０．０１、Ｆ２０．２９、およびＦ２０．５５の存在および非存在下にヒト白血球（Ｕ９３７）を上昇Ｄ−グルコース（１５ｍＭ）へ曝露して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を２４時間後に測定した。データは、２回の別々の実験の平均である。
【図１１】図１１は、サブ分画Ｆ２０．５５が無細胞アッセイにおいてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔを阻害することを例示するグラフである。ヒト白血球（Ｕ９３７）を１５ｍＭグルコースへ３７℃で２４時間曝露後、この細胞を溶解してから、加熱（Ｈ，１００℃）および非加熱（ＮＨ）サブ分画Ｆ２０．５５（１：５００希釈）へ曝露した。３７℃で３０分の曝露後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定した。コア２オリゴ糖の形成（β−１，６−連結ＧｌｃＮＡｃのＧａｌ−１，３−ＧｌｃＮＡｃ−アクセプタへの付着）を定量することによって、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性のレベルを測定した。データは、３回の別々の実験の平均±ｓ．ｅ．ｍ．として提示する。
【図１２】図１２ａおよび１２ｂは、上昇グルコースが培養ウシ網膜血管細胞、即ち毛細管周皮細胞（図１２ａ）および毛細管内皮細胞（図１２ｂ）においてコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性を高めることを例示するグラフである。ほとんど周密の培養物を標準グルコース（Ｎ，５．８ｍＭ）と高グルコース（Ｇ，１５ｍＭ）へ３７℃で２４時間曝露した。この細胞を溶解して、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を細胞溶解液において測定した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝３〜４）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図１３】図１３ａおよび１３ｂは、コロハ種子の粗抽出物Ｆ１が培養ウシ網膜血管細胞、即ち毛細管周皮細胞（図１３ａ）および毛細管内皮細胞（図１３ｂ）においてグルコース誘導毒性を予防することを例示するグラフである。細胞をコロハ種子抽出物の存在（Ｎ−Ｆ，Ｇ−Ｆ）および非存在（Ｎ，Ｇ）下に標準（Ｎ，５．８ｍＭ）および高グルコース（Ｇ，２５ｍＭ）へ曝露した。４日のインキュベーション後、血球計とトリパンブルー排除を使用して、生存細胞の数を決定した。データは、平均±ｓ．ｅ．ｍ．（ｎ＝１８、別々の実験）として提示して、星印は、有意差（Ｐ＜０．０５）を表す。
【図１４ａ】図１４は、コロハ種子より単離した５種の化合物の構造を例示する。
【図１４ｂ】図１４は、コロハ種子より単離した５種の化合物の構造を例示する。
【図１４ｃ】図１４は、コロハ種子より単離した５種の化合物の構造を例示する。
【図１５】図１５ａおよび図１５ｂは、精製したトリゴネオシドＩＶａ、グリコシドＦ、およびシャタバリンＩＶのコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ活性に対する効果を無細胞（図１５ａ）および細胞ベース（図１５ｂ）アッセイにおいて例示するグラフである。 無細胞アッセイでは、ＢＢラット由来の心臓溶解液を２０ｎｇ／ｍｌの各化合物の存在および非存在下にインキュベートした。３７℃で１時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定して、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として表した。結果は、３〜５回の別々の実験の平均である。 細胞ベースのアッセイでは、ヒト白血球（Ｕ９３７細胞）を２０ｎｇ／ｍｌの試験化合物の存在および非存在下に８ｐｇ／ｍｌのヒト組換えＴＮＦ−αへ曝露した。２４時間のインキュベーション後、コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの活性を測定して、ピコモル／ｈ／ｍｇタンパク質として表した。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵素コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した状態の治療の方法であって、式Ｉ：
【化１】
［式中、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａ：
【化２】
の単糖であり、
Ｒ２は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または式ＩＩｂ：
【化３】
の単糖であり、
Ｒ３は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または式ＩＩｃ：
【化４】
の単糖であり、
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ７は、Ｃ２−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；そして
Ｚは、ステロイド基である］の化合物またはその医薬的に許容される塩、エステル、または互変異性型、または誘導体の有効量の、その必要な患者への投与を含んでなる、前記方法。
【請求項２】
Ｒ１が式ＩＩａの単糖である、請求項１に記載の治療の方法。
【請求項３】
Ｒ５がＣ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルである、請求項２に記載の治療の方法。
【請求項４】
Ｒ５が、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｃ２Ｈ４ＯＨである、請求項２に記載の治療の方法。
【請求項５】
Ｒ３が式ＩＩｃの単糖である、請求項１に記載の治療の方法。
【請求項６】
Ｒ７がＣ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルである、請求項５に記載の治療の方法。
【請求項７】
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨまたはＣ１−６アルコキシメチルである、請求項５に記載の治療の方法。
【請求項８】
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨである、請求項５に記載の治療の方法。
【請求項９】
式Ｉの化合物が式ＩＩＩ：
【化５】
［式中：
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；そして
Ｒ７は、Ｃ２−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルである］の化合物である、請求項１に記載の治療の方法。
【請求項１０】
Ｒ４がＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１１】
Ｒ４が−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３である、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１２】
Ｒ５がＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１３】
Ｒ５が、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｃ２Ｈ４ＯＨである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１４】
Ｒ７がＣ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１５】
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨまたはＣ１−６アルコキシメチルである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１６】
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１７】
式ＩＩＩの化合物が式Ｉ：［式中：
Ｒ１は、ラムノースであり；
Ｒ２は、−ＯＨであり；
Ｒ３は、グルコースであり；そして
Ｒ４は、−ＣＨ２ＯＨである］の化合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１８】
式ＩＩＩの化合物が式ＩＶ：
【化６】
の化合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
式Ｉの化合物が式Ｖ：
【化７】
［式中：
Ｒ１は、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシまたはＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａの単糖であり；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；そして
Ｚは、ステロイド基である］の化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ１がＯＨまたはＮＲ８Ｒ９である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ１がＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；そして
Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ１がＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８がＨであり；そして
Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ１がＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８がＨであり；そして
Ｒ９がＣ１−６アシルである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ１がＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８がＨであり；そして
Ｒ９が−ＣＯＣＨ３である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
式ＩＶの化合物がＧａｌβ１→３（６−デオキシ）ＧａｌＮＡｃα−Ｚである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
ステロイド基が、式ＶＩＩ：
【化８】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨまたはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２１は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシであるか、または式ＶＩＩＩ：
【化９】
｛Ｒ２２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２３は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アシル、または単糖ＭＳである｝の基であり；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；ＭＳは、アラビノース、キシロース、リキソース、リボース、グルコース、マンノース、ガラクトース、アロース、アルトロース、グロース（ｇｕｌｏｓｅ）、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、フルクトース、ソルボース、タガトース、プシコース（ｐｓｉｃｏｓｅ）、セドヘプツロース、デオキシリボース、フコース、ラムノース、２−デオキシ−グルコース、キノボース、アベクオース、グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸、ムラミン酸、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−マンノサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−アセチルムラミン酸、Ｏ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、フルクツロン酸、タガツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ガラクツロン酸、イズロン酸、シアル酸、およびグルロン酸からなる群より選択され；そして
Ｙは、ＮまたはＯである］の基である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
ＹがＯである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ２１が式ＶＩＩＩの基である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ２４が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アシル、または単糖ＭＳである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
Ｒ２４がＣ１−６アシルまたは単糖ＭＳである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
Ｒ２４が単糖ＭＳである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
ＭＳが、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、およびシアル酸からなる群より選択される、請求項２８、２９、または３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＭＳがグルコースである、請求項２８、２９、または３０に記載の方法。
【請求項３３】
Ｒ２３が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
Ｒ２３が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
Ｒ２３が、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、または＝ＣＨ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
Ｒ２３が、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３７】
Ｒ２３が−ＣＨ３である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
Ｒ２３が＝ＣＨ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
Ｒ２２が、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシである、請求項２７の方法。
【請求項４０】
Ｒ２２がＨである、請求項２７の方法。
【請求項４１】
Ｒ１９が、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルである、請求項２５の方法。
【請求項４２】
Ｒ１２が、Ｈ、−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す、請求項２５の方法。
【請求項４３】
Ｒ１６がＨまたは−ＯＨであり；
Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシである、請求項２５の方法。
【請求項４４】
ステロイド基が：
【化１０】
［式中：
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２４は、グルコースまたはＣ１−６アシルであり；そして
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨである］からなる群より選択される、請求項２５の方法。
【請求項４５】
式Ｉの化合物が：
（３β，２５Ｓ）−２６−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−２２−ヒドロキシフロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるトリゴネオシドＩＶａ、（３β）−２６−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−２２−ヒドロキシフロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるグリコシドＦ、シャタバリンＩ、化合物３、パルダリノシドＣからなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項４６】
ステロイド基が、式ＶＩＩＩ：
【化１１】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨまたはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２７は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す］の基である、請求項１に記載の方法。
【請求項４７】
Ｒ２７が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシである、請求項４６の方法。
【請求項４８】
Ｒ２７がＨまたはＣ１−６アルキルである、請求項４６の方法。
【請求項４９】
Ｒ１９が、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルである、請求項４６の方法。
【請求項５０】
Ｒ２０が−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシである、請求項４６の方法。
【請求項５１】
Ｒ１２がＨまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す、請求項４６の方法。
【請求項５２】
ステロイド基の化合物が式ＩＸａ：
【化１２】
の化合物である、請求項４６の方法。
【請求項５３】
式Ｉの化合物が式：
【化１３】
の化合物である、請求項４６の方法。
【請求項５４】
ステロイド基が、式ＸＩ：
【化１４】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２５は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２６は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３１は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ３４は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨである］の基である、請求項１の方法。
【請求項５５】
ＸがＯまたはＮＨである、請求項５４の方法。
【請求項５６】
ＸがＯである、請求項５４の方法。
【請求項５７】
Ｒ２６が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルである、請求項５４の方法。
【請求項５８】
Ｒ２６が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２である、請求項５４の方法。
【請求項５９】
Ｒ２６が、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、または＝ＣＨ２である、請求項５４の方法。
【請求項６０】
Ｒ２６が、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２である、請求項５４の方法。
【請求項６１】
Ｒ２６が−ＣＨ３または＝ＣＨ２である、請求項５４の方法。
【請求項６２】
Ｒ１９が、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキルである、請求項５４の方法。
【請求項６３】
Ｒ１９がＣ１−６アルキルである、請求項５４の方法。
【請求項６４】
Ｒ１２がＨまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２５は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２８とＲ２９は、Ｈであり；
Ｒ３１は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；そして
Ｒ３４は、Ｈまたは−ＯＨである、請求項５４の方法。
【請求項６５】
Ｒ１５がＨであり；
Ｒ１６は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す、請求項５４の方法。
【請求項６６】
式ＸＩのステロイド基が：
【化１５】
からなる群より選択される、請求項５４の方法。
【請求項６７】
式ＸＩのステロイド基が、ジオスゲニン、ヤモゲニン、チゴゲニン、ネオチゴゲニン、サルササポゲニン、スミラゲニン、ヘコゲニン、ソラソジン、またはトマチジンからなる群より選択される、請求項５４の方法。
【請求項６８】
式Ｉの化合物が：
サルササポゲニン ３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるシャタバリンＩＶ、 ソラソジン ３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである化合物１２、
（３β，２５Ｒ）−スピロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるデルトニン、および
（３β，２５Ｓ）−スピロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるバラニチンＶＩからなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項６９】
状態が、炎症性疾患、喘息、慢性関節リウマチ、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、糖尿病性心筋症、心筋機能不全、癌、癌転移、または糖尿病性網膜症である、請求項１の方法。
【請求項７０】
状態が、白血病、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肺の腺癌のような肺癌、結直腸癌、膀胱癌、肝臓腫瘍、胃腫瘍、結腸腫瘍、前立腺癌、精巣腫瘍、乳癌、肺腫瘍、口腔癌、およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ発現がその組織型の正常レベルより高く上昇しているあらゆる癌である、請求項１の方法。
【請求項７１】
請求項１〜６９の方法に開示される化合物の、酵素：コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した状態の治療用医薬品の製造における使用。
【請求項７２】
状態が、炎症性疾患、喘息、慢性関節リウマチ、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、糖尿病性心筋症、心筋機能不全、癌、癌転移、または糖尿病性網膜症である、請求項７１に記載の使用。
【請求項７３】
状態が、白血病、口腔癌、肺の腺癌のような肺癌、結直腸癌、膀胱癌、肝臓腫瘍、胃腫瘍、結腸腫瘍、前立腺癌、精巣腫瘍、乳癌、肺腫瘍、口腔癌、およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ発現がその組織型の正常レベルより高く上昇しているあらゆる癌である、請求項６８に記載の使用。
【請求項７４】
請求項１〜６９の方法に開示される化合物を含んでなる医薬組成物。
【請求項７５】
式：
【化１６】
の化合物。
【請求項７６】
請求項７５に記載の式ＸＩＩの化合物の、療法における使用。
【請求項１】
酵素コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した状態の治療の方法であって、式Ｉ：
【化１】
［式中、Ｒ１は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａ：
【化２】
の単糖であり、
Ｒ２は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または式ＩＩｂ：
【化３】
の単糖であり、
Ｒ３は、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、または式ＩＩｃ：
【化４】
の単糖であり、
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ７は、Ｃ２−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；そして
Ｚは、ステロイド基である］の化合物またはその医薬的に許容される塩、エステル、または互変異性型、または誘導体の有効量の、その必要な患者への投与を含んでなる、前記方法。
【請求項２】
Ｒ１が式ＩＩａの単糖である、請求項１に記載の治療の方法。
【請求項３】
Ｒ５がＣ１−６アルキルまたはＣ１−６ヒドロキシアルキルである、請求項２に記載の治療の方法。
【請求項４】
Ｒ５が、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｃ２Ｈ４ＯＨである、請求項２に記載の治療の方法。
【請求項５】
Ｒ３が式ＩＩｃの単糖である、請求項１に記載の治療の方法。
【請求項６】
Ｒ７がＣ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルである、請求項５に記載の治療の方法。
【請求項７】
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨまたはＣ１−６アルコキシメチルである、請求項５に記載の治療の方法。
【請求項８】
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨである、請求項５に記載の治療の方法。
【請求項９】
式Ｉの化合物が式ＩＩＩ：
【化５】
［式中：
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；そして
Ｒ７は、Ｃ２−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルである］の化合物である、請求項１に記載の治療の方法。
【請求項１０】
Ｒ４がＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１１】
Ｒ４が−ＣＨ２ＯＨまたは−ＣＨ３である、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１２】
Ｒ５がＣ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキルである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１３】
Ｒ５が、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２ＯＨ、または−Ｃ２Ｈ４ＯＨである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１４】
Ｒ７がＣ１−６ヒドロキシアルキルまたはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１５】
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨまたはＣ１−６アルコキシメチルである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１６】
Ｒ７が−ＣＨ２ＯＨである、請求項９に記載の治療の方法。
【請求項１７】
式ＩＩＩの化合物が式Ｉ：［式中：
Ｒ１は、ラムノースであり；
Ｒ２は、−ＯＨであり；
Ｒ３は、グルコースであり；そして
Ｒ４は、−ＣＨ２ＯＨである］の化合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１８】
式ＩＩＩの化合物が式ＩＶ：
【化６】
の化合物である、請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
式Ｉの化合物が式Ｖ：
【化７】
［式中：
Ｒ１は、ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシまたはＮＲ８Ｒ９、または式ＩＩａの単糖であり；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ５は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ６は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、またはＣ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；そして
Ｚは、ステロイド基である］の化合物である、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
Ｒ１がＯＨまたはＮＲ８Ｒ９である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
Ｒ１がＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルであり；そして
Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
Ｒ１がＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８がＨであり；そして
Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アシルである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ１がＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８がＨであり；そして
Ｒ９がＣ１−６アシルである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
Ｒ１がＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８がＨであり；そして
Ｒ９が−ＣＯＣＨ３である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
式ＩＶの化合物がＧａｌβ１→３（６−デオキシ）ＧａｌＮＡｃα−Ｚである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
ステロイド基が、式ＶＩＩ：
【化８】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨまたはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２１は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシであるか、または式ＶＩＩＩ：
【化９】
｛Ｒ２２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２３は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２４は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アシル、または単糖ＭＳである｝の基であり；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；ＭＳは、アラビノース、キシロース、リキソース、リボース、グルコース、マンノース、ガラクトース、アロース、アルトロース、グロース（ｇｕｌｏｓｅ）、イドース、タロース、リブロース、キシルロース、フルクトース、ソルボース、タガトース、プシコース（ｐｓｉｃｏｓｅ）、セドヘプツロース、デオキシリボース、フコース、ラムノース、２−デオキシ−グルコース、キノボース、アベクオース、グルコサミン、マンノサミン、ガラクトサミン、ノイラミン酸、ムラミン酸、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−マンノサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−アセチルムラミン酸、Ｏ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコリルノイラミン酸、フルクツロン酸、タガツロン酸、グルクロン酸、マンヌロン酸、ガラクツロン酸、イズロン酸、シアル酸、およびグルロン酸からなる群より選択され；そして
Ｙは、ＮまたはＯである］の基である、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
ＹがＯである、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
Ｒ２１が式ＶＩＩＩの基である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
Ｒ２４が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アシル、または単糖ＭＳである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
Ｒ２４がＣ１−６アシルまたは単糖ＭＳである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
Ｒ２４が単糖ＭＳである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
ＭＳが、グルコース、ガラクトース、マンノース、フコース、Ｎ−アセチル−グルコサミン、Ｎ−アセチル−ガラクトサミン、およびシアル酸からなる群より選択される、請求項２８、２９、または３０に記載の方法。
【請求項３２】
ＭＳがグルコースである、請求項２８、２９、または３０に記載の方法。
【請求項３３】
Ｒ２３が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルである、請求項２７に記載の方法。
【請求項３４】
Ｒ２３が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３５】
Ｒ２３が、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、または＝ＣＨ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３６】
Ｒ２３が、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３７】
Ｒ２３が−ＣＨ３である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３８】
Ｒ２３が＝ＣＨ２である、請求項２７に記載の方法。
【請求項３９】
Ｒ２２が、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシである、請求項２７の方法。
【請求項４０】
Ｒ２２がＨである、請求項２７の方法。
【請求項４１】
Ｒ１９が、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルである、請求項２５の方法。
【請求項４２】
Ｒ１２が、Ｈ、−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す、請求項２５の方法。
【請求項４３】
Ｒ１６がＨまたは−ＯＨであり；
Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシである、請求項２５の方法。
【請求項４４】
ステロイド基が：
【化１０】
［式中：
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２０は、−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２４は、グルコースまたはＣ１−６アシルであり；そして
Ｒ２９は、Ｈまたは−ＯＨである］からなる群より選択される、請求項２５の方法。
【請求項４５】
式Ｉの化合物が：
（３β，２５Ｓ）−２６−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−２２−ヒドロキシフロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるトリゴネオシドＩＶａ、（３β）−２６−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−２２−ヒドロキシフロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるグリコシドＦ、シャタバリンＩ、化合物３、パルダリノシドＣからなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項４６】
ステロイド基が、式ＶＩＩＩ：
【化１１】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨまたはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２０は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ２７は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６ヒドロキシアルキルであり；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す］の基である、請求項１に記載の方法。
【請求項４７】
Ｒ２７が、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシである、請求項４６の方法。
【請求項４８】
Ｒ２７がＨまたはＣ１−６アルキルである、請求項４６の方法。
【請求項４９】
Ｒ１９が、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルである、請求項４６の方法。
【請求項５０】
Ｒ２０が−ＯＨまたはＣ１−６アルコキシである、請求項４６の方法。
【請求項５１】
Ｒ１２がＨまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１９は、Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す、請求項４６の方法。
【請求項５２】
ステロイド基の化合物が式ＩＸａ：
【化１２】
の化合物である、請求項４６の方法。
【請求項５３】
式Ｉの化合物が式：
【化１３】
の化合物である、請求項４６の方法。
【請求項５４】
ステロイド基が、式ＸＩ：
【化１４】
［式中：
Ｒ１２は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ１３は、Ｈ、−ＯＨ、＝Ｏ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１４は、Ｈ、−ＯＨ、またはＣ１−６アルキルであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈまたは−ＯＨであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１６は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１７は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、またはＣ１−６アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２５は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、またはＣ１−６アルコキシであり；
Ｒ２６は、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ２８とＲ２９は、同じであるかまたは異なり、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３１は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈ、−ＯＨ、または＝Ｏであり；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ３４は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｘは、Ｏ、Ｓ、またはＮＨである］の基である、請求項１の方法。
【請求項５５】
ＸがＯまたはＮＨである、請求項５４の方法。
【請求項５６】
ＸがＯである、請求項５４の方法。
【請求項５７】
Ｒ２６が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、Ｃ１−６アルコキシ−Ｃ１−６アルキル、＝ＣＨ２、または＝ＣＨ−Ｃ１−６アルキルである、請求項５４の方法。
【請求項５８】
Ｒ２６が、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６ヒドロキシアルキル、または＝ＣＨ２である、請求項５４の方法。
【請求項５９】
Ｒ２６が、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、または＝ＣＨ２である、請求項５４の方法。
【請求項６０】
Ｒ２６が、−Ｃ２Ｈ４ＯＨ、−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ３、または＝ＣＨ２である、請求項５４の方法。
【請求項６１】
Ｒ２６が−ＣＨ３または＝ＣＨ２である、請求項５４の方法。
【請求項６２】
Ｒ１９が、Ｈ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキルである、請求項５４の方法。
【請求項６３】
Ｒ１９がＣ１−６アルキルである、請求項５４の方法。
【請求項６４】
Ｒ１２がＨまたは−ＯＨであり；
Ｒ１３は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１４は、Ｈであるか、またはＲ１４とＲ３３は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；
Ｒ１５は、Ｈであるか、またはＲ１５とＲ３３は、一緒になって、＝Ｏであり；
Ｒ１８は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２５は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ２８とＲ２９は、Ｈであり；
Ｒ３１は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１５は、一緒になって、＝Ｏであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表し；そして
Ｒ３４は、Ｈまたは−ＯＨである、請求項５４の方法。
【請求項６５】
Ｒ１５がＨであり；
Ｒ１６は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ１７は、Ｈまたは−ＯＨであり；
Ｒ３２は、Ｈまたは−ＯＨであり；そして
Ｒ３３は、Ｈであるか、またはＲ３３とＲ１４は、一緒になって、隣接炭素原子を連結する二重結合の第二の結合を表す、請求項５４の方法。
【請求項６６】
式ＸＩのステロイド基が：
【化１５】
からなる群より選択される、請求項５４の方法。
【請求項６７】
式ＸＩのステロイド基が、ジオスゲニン、ヤモゲニン、チゴゲニン、ネオチゴゲニン、サルササポゲニン、スミラゲニン、ヘコゲニン、ソラソジン、またはトマチジンからなる群より選択される、請求項５４の方法。
【請求項６８】
式Ｉの化合物が：
サルササポゲニン ３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるシャタバリンＩＶ、 ソラソジン ３−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドである化合物１２、
（３β，２５Ｒ）−スピロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるデルトニン、および
（３β，２５Ｓ）−スピロスト−５−エン−３−イル−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシル−（１→２）−Ｏ−［β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］−β−Ｄ−グルコピラノシドであるバラニチンＶＩからなる群より選択される、請求項１の方法。
【請求項６９】
状態が、炎症性疾患、喘息、慢性関節リウマチ、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、糖尿病性心筋症、心筋機能不全、癌、癌転移、または糖尿病性網膜症である、請求項１の方法。
【請求項７０】
状態が、白血病、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肺の腺癌のような肺癌、結直腸癌、膀胱癌、肝臓腫瘍、胃腫瘍、結腸腫瘍、前立腺癌、精巣腫瘍、乳癌、肺腫瘍、口腔癌、およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ発現がその組織型の正常レベルより高く上昇しているあらゆる癌である、請求項１の方法。
【請求項７１】
請求項１〜６９の方法に開示される化合物の、酵素：コア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔの上昇活性と関連した状態の治療用医薬品の製造における使用。
【請求項７２】
状態が、炎症性疾患、喘息、慢性関節リウマチ、アテローム硬化症、炎症性腸疾患、糖尿病性心筋症、心筋機能不全、癌、癌転移、または糖尿病性網膜症である、請求項７１に記載の使用。
【請求項７３】
状態が、白血病、口腔癌、肺の腺癌のような肺癌、結直腸癌、膀胱癌、肝臓腫瘍、胃腫瘍、結腸腫瘍、前立腺癌、精巣腫瘍、乳癌、肺腫瘍、口腔癌、およびコア２ＧｌｃＮＡｃ−Ｔ発現がその組織型の正常レベルより高く上昇しているあらゆる癌である、請求項６８に記載の使用。
【請求項７４】
請求項１〜６９の方法に開示される化合物を含んでなる医薬組成物。
【請求項７５】
式：
【化１６】
の化合物。
【請求項７６】
請求項７５に記載の式ＸＩＩの化合物の、療法における使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４ａ】
【図１４ｂ】
【図１４ｃ】
【図１５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４ａ】
【図１４ｂ】
【図１４ｃ】
【図１５】
【公表番号】特表２００７−５１５４６６（Ｐ２００７−５１５４６６Ａ）
【公表日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４６３１５（Ｐ２００６−５４６３１５）
【出願日】平成１６年１２月２２日（２００４．１２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５３９８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６０９７７
【国際公開日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【出願人】（５００４３１５０８）ビーティージー・インターナショナル・リミテッド (41)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年６月１４日（２００７．６．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１２月２２日（２００４．１２．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５３９８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６０９７７
【国際公開日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【出願人】（５００４３１５０８）ビーティージー・インターナショナル・リミテッド (41)
【Ｆターム（参考）】
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