タンパク質キナーゼＣ阻害剤としての置換ピロール−２，５−ジオン
式(Ｉ)
【化１】
〔式中、Ｒ、ＲａおよびＲｂは明細書で定義の通りである。〕
の化合物、それらの製造法、特に移植におけるそれらの使用、およびそれらを含む医薬組成物。
【化１】
〔式中、Ｒ、ＲａおよびＲｂは明細書で定義の通りである。〕
の化合物、それらの製造法、特に移植におけるそれらの使用、およびそれらを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インドリルマレイミド誘導体、その製造法およびそれらを含む医薬組成物に関する。
【０００２】
より特に、本発明は、式Ｉ
【化１】
〔式中、
ＲａはＨ；Ｃ１−４アルキル；またはＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣ１−４アルキルもしくはＮ(Ｃ１−４アルキル)２で置換されているＣ１−４アルキルであり；
ＲｂはＨ；ハロゲン；Ｃ１−６アルキル；またはＣ１−６アルコキシであり、そして
Ｒは式(ａ)
【化２】
(式中、Ｒ１およびＲ２の各々は、独立してＨまたはメチルであり；
Ｒ３はＦ、Ｃｌ、アセトアミド、ニトロまたはアミノであり；
Ｒ４はＨ、ＣＨ３、ＣＦ３、Ｆ、またはＣｌであり；
Ｒ３がＣｌであるとき、Ｒ４はＨ、ＣＨ３またはＣＦ３以外である)
のラジカルである。〕
の化合物を提供する。
【０００３】
式Ｉの化合物において、下記の意味が個々にまたは任意のサブコンビネーションで好ましい：
１. ＲａがＨまたはメチルである；
２. ＲｂがＨ、メチルまたはエチルである；
３. Ｒ１がメチルである；
４. Ｒ２がＨである；
５. Ｒ３がＦ、Ｃｌまたはニトロである；
６. Ｒ３が２位に結合している；
７. Ｒ４がＨまたはＦであり、ここでＲ３がＣｌであるとき、Ｒ４はＨ以外である；
８. Ｒ４が４位に結合している。
【０００４】
式Ｉの化合物は遊離形または塩形で、例えば有機または無機酸、例えば、塩酸、酢酸またはトリフルオロ酢酸との、例えば付加塩で存在できる。
【０００５】
式Ｉの化合物は光学異性体、ラセミ体またはジアステレオ異性体の形で存在できることは認識されよう。例えば、ピペラジニル残基の３位に置換基を担持する環炭素原子は不斉であり、Ｄ−またはＬ−立体配置を有し得る。本発明は全てのエナンチオマーおよびそれらの混合物を含むことは理解されるべきである。同様の解釈が、記載の通りの不斉炭素原子を示す出発物質に関しても当てはまる。
【０００６】
本発明はまた式Ｉの化合物の製造法であって、式II
【化３】
〔式中、ＲａおよびＲｂは上記で定義の通りである。〕
の化合物と、式III
Ｒ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２ (III)
〔式中、Ｒは上記で定義の通りである。〕
の化合物を反応させ；
そして、必要であれば、遊離形で得られた式Ｉの化合物を塩形に変換するか、またはその逆を適当に行うことを含む、方法を含む。
【０００７】
この方法は、簡便には強塩基、例えばｔ−ＢｕＯＫの存在下、例えばＷＯ０２／３８５６１に記載の通り行い得る。
【０００８】
式IIおよびIIIの化合物は、例えばＷＯ０２／３８５６１およびＷＯ０３／０８２８５９に記載の通りの、既知の方法に従い製造できる。
【０００９】
出発物質の製造法が特に記載されていない限り、該化合物は既知であるか、または当分野で既知の方法に準じてまたは後記の通りに製造できる。
【００１０】
下記実施例は本発明の説明である。
【表１】
【００１１】
実施例１：
３−(１Ｈ−インドル−３−イル)−４−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−ピロール−２,５−ジオン
【化４】
２−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−アセトアミド(２７８mg、１.００mmol)および(１Ｈ−インドル−３−イル)−オキソ−酢酸メチルエステル(３６６mg、１.８０mmol)の乾燥ＴＨＦ(８.０mL)溶液を、ＴＨＦ中のｔ−ＢｕＯＫの１.０Ｍ溶液(４.０mL、４.０mmol)に０℃でアルゴン下添加する。３０分、０℃および１時間、ＲＴで撹拌後、ＴＬＣは、アセトアミドの完全な消費を示す。紫色反応混合物をＥｔＯＡｃ(５０mL)および塩水(５０mL)に分配し、層を分け、水性層をＥｔＯＡｃ(５０mL)で抽出する。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ ７：１：１)で精製し、表題化合物をその水溶性酢酸塩として得る。オレンジ色固体。1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.84(s, 6H, CH3COO-), 1.97-2.15(m, 4 H), 2.03(s, 3H), 2.95-3.21(m, 4H), 6.51(d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.54(d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.73(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.01-7.07(m, 2H), 7.41(d, J = 8.1Hz, 1H), 8.00(s, 1H), 8.13(d, J = 9.4 Hz, 1H), 10.8-11.4(br, 1H), 11.95(bs, 1H)。ES+-MS: 431 [M + H]+。
【００１２】
２−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−アセトアミドの製造
[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−酢酸エチルエステル(１.５４ｇ、５.０１mmol)を３３％水性ＮＨ４ＯＨ溶液(４００mL)に懸濁し、３日間、ＲＴで撹拌する。容積を、表題化合物が黄色固体として残るまで注意深く真空下で減少させ、それをさらに高真空下で乾燥させる。ES+-MS: 279 [M + H]+。
【００１３】
[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−酢酸エチルエステルの製造
アルゴン下、(５−ブロモ−２−ニトロ−フェニル)−酢酸エチルエステル(２.０２ｇ、７.００mmol)および１−メチル−ピペラジン(１.４０ｇ、１４.０mmol)の混合物を６５℃で２４時間加熱する。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２(２５mL)およびＨ２Ｏ(２５mL)に分配し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２(２×２５mL)で抽出する。合わせた有機層を塩水(２５mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ９７.５：２.５)で精製し、表題化合物を黄色油状物として得る。ES+-MS: 308 [M + H]+。
【００１４】
５−ブロモ−２−ニトロ−フェニル)−酢酸エチルエステルの製造
ＴＨＦ中のｔ−ＢｕＯＫの１.０Ｍ溶液(６０mL、６０mmol)を、１５分にわたり、４−ブロモ−ニトロベンゼン(５.０５ｇ、２５.０mmol)およびクロロ−酢酸エチルエステル(３.６８ｇ、３０.０mmol)のＴＨＦ(３０mL)溶液に、−４０℃でアルゴン下ゆっくり添加する。深青色反応混合物を１時間、−４０℃で撹拌する。ＴＬＣ分析は、この時点で幾分か出発物質が存在することを示す。しかしながら、長い撹拌でも出発物質のさらなる変換は観察されない。反応混合物を２Ｍ 水性ＨＣｌ溶液(４０mL)で注意深くクエンチし、ＭＴＢＥ(２×１００mL)で抽出する。合わせた有機相をＨ２Ｏ(１００mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ ９７：３)で精製して、表題化合物を無色油状物として得る。ES+-MS: 289 [M + H]+。
【００１５】
実施例２：
３−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン
【化５】
２−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミド(１２４mg、０.５０mmol)および(１Ｈ−インドル−３−イル)−オキソ−酢酸メチルエステル(１８３mg、０.９０mmol)の乾燥ＴＨＦ(４.０mL)溶液に、ＴＨＦ中のｔ−ＢｕＯＫの１.０Ｍ溶液(２.０mL、２.０mmol)を０℃でアルゴン下添加する。３０分、０℃および３０分、ＲＴで撹拌後、ＴＬＣは、アセトアミドの完全な消費を示す。暗赤色反応混合物をＥｔＯＡｃ(２５mL)および塩水(２５mL)に分配し、層を分ける。水性層のｐＨを、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液で６に合わせる。水性層をＥｔＯＡｃ(２×２５mL)で抽出し、合わせた有機層を塩水(２５mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ ５.５：１：１)で精製し、表題化合物をその水溶性酢酸塩として得る。赤色固体。1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.70(s, 9H, CH3COO-), 2.25(s, 3H), 2.22-2.38(m, 4H), 2.78-2.84(m, 4H), 6.51(d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.63(d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.64-6.68(m, 2H), 6.77(dd, J = 8.7 Hz, J = 2.8 Hz, 1H), 6.97-7.02(m, 1H), 7.35(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90(s, 1H), 11.91(bs, 1H)。ES+-MS: 402 [M + H]+。
【００１６】
２−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミドの製造
２−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−アセトアミド(４６８mg、１.６８mmol)のＭｅＯＨ(８.０mL)溶液に、１０％Ｐｄ／炭(５９mg)を添加する。反応混合物を１８時間、水素雰囲気(１気圧)下撹拌し、マイクロフィルター(０.４５μM)を通して濾過し、濾液を減圧下濃縮する。残った褐色油状物をＭｅＯＨ(１mL)に溶解し、ＭＴＢＥ(５mL)を添加し、溶媒を減圧下注意深く除去し、表題化合物をベージュ色粉末として得る。ES+-MS: 249 [M + H]+。
【００１７】
実施例３：
Ｎ−[２−[４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−３−イル]−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)フェニル]−アセトアミド
【化６】
２−[２−アセチルアミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミド(１４５mg、０.５０mmol)および(１Ｈ−インドル−３−イル)−オキソ−酢酸メチルエステル(１８３mg、０.９０mmol)の乾燥ＴＨＦ(６.０mL)中の懸濁液に、ＴＨＦ中のｔ−ＢｕＯＫの１.０Ｍ溶液(２.０mL、２.０mmol)を０℃でアルゴン下添加する。得られる黄色懸濁液を１８時間、ＲＴで撹拌する。ここで、暗赤色反応混合物をＥｔＯＡｃ(２５mL)および塩水(２５mL)に分配し、層を分ける。水性層のｐＨを、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液で６に合わせる。水性層をＥｔＯＡｃ(２×２５mL)で抽出し、合わせた有機層を塩水(２５mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ ５.５：１：１)で精製して、表題化合物をその水溶性酢酸塩として得る。オレンジ色固体。1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.75(s, 12H, C3COO-), 2.16(s, 3H), 2.31-2.38(m, 4H), 2.92-2.99(m, 4H), 6.61(d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.66(t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.75(d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.92(dd, J = 9.0 Hz, J = 2.7 Hz, 1H), 6.99(t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.32(d, J = 8.1Hz, 1H), 7.47(d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 8.69(s, 1H), 11.86(bs, 1H)。ES+-MS: 444 [M + H]+。
【００１８】
２−[２−アセチルアミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミドの製造
[２−アセチルアミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−酢酸エチルエステル(４５０mg、１.４１mmol)を３３％水性ＮＨ４ＯＨ溶液(２００mL)に懸濁し、１６時間、ＲＴで撹拌する。容積を、表題化合物が褐色固体として残るまで注意深く真空下で減少させ、それをさらに高真空下で乾燥させる。ES+-MS: 291 [M + H]+。
【００１９】
[２−アセチルアミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−酢酸エチルエステルの製造
[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−酢酸エチルエステル(４３８mg、１.５８mmol)のＣＨＣｌ３(８.０mL)溶液に、酢酸無水物(３２２mg、３.１６mmol)およびトリエチルアミン(２４０mg、２.３７mmol)をアルゴン下添加する。得られる反応混合物を１時間、ＲＴおよび１時間、還流温度で撹拌する。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２(２５mL)および水(２０mL)に分配し、層を分ける。水性相をＣＨ２Ｃｌ２(２×２５mL)で抽出し、合わせた有機層を水(２×２５mL)、塩水(２５mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮し、淡赤色固体を得る。ES+-MS: 320 [M + H]+。
【００２０】
[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−酢酸エチルエステルの製造
[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−酢酸エチルエステル(１.１０ｇ、３.５８mmol)のＭｅＯＨ(２５.０mL)溶液に、１０％Ｐｄ／炭(１１４mg)を添加する。反応混合物を、４時間、水素雰囲気(１気圧)下撹拌し、マイクロフィルター(０.４５μM)を通して濾過し、濾液を減圧下濃縮し、表題化合物を赤色油状物として得る。ES+-MS: 278 [M + H]+。
【００２１】
適当な出発物質を使用する以外、実施例１、２、および３の方法に従うかまたはＷＯ０２／３８５６１に記載の通り、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ３およびＲ４が下記表１の通りである式Ａの化合物を得ることができる。
【化７】
【表２】
【００２２】
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、例えば、インビトロおよびインビボ試験で示される通り、価値ある薬理学的特性を示し、例えばタンパク質キナーゼＣ(ＰＫＣ)、例えばα、β、δ、ε、ηまたはθのようなＰＫＣイソ型活性を阻害し、例えばＴ細胞またはサイトカイン、例えばＩＬ−２の増殖性応答を阻害することによるＴ細胞またはサイトカイン、例えばＩＬ−２の産生を阻害することにより、Ｔ細胞活性化および増殖を阻害し、故に治療に適応される。
【００２３】
Ａ. インビトロ
１. タンパク質キナーゼＣアッセイ
本発明の化合物を、下記の方法に従い、異なるＰＫＣイソ型に対するそれらの活性を試験する。アッセイは、非結合性表面の、白色の透明底３８４ウェルマイクロタイタープレートで行う。反応混合物(２５μl)は、ＰＫＣαの模擬基質配列をＡｌａ→Ｓｅｒを伴い摸倣する１.５μMのトリデカペプチドアクセプター基質、１０μM ３３Ｐ−ＡＴＰ、１０mM Ｍｇ(ＮＯ３)２、０.２mM ＣａＣｌ２、２５から４００ng／mlで変化するタンパク質濃度のＰＫＣ(使用するイソ型に依存)、０.５mMの最終脂質濃度の脂質小胞(３０mol％ホスファチジルセリン、５mol％ＤＡＧおよび６５mol％ホスファチジルコリン含有)を、２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７.４＋０.１％ＢＳＡ中に含む。６０分、室温でインキュベートする。反応を５０μlの停止混合物(Ｃａ、Ｍｇなしのリン酸緩衝食塩水中に１００mM ＥＤＴＡ、２００μM ＡＴＰ、０.１％Triton X-100、０.３７５mg／ウェル ストレプトアビジン被覆ＳＰＡビーズを含む)の添加により停止させる。１０分、室温でインキュベート後、懸濁液を１０分、３００ｇで遠心分離する。取り込まれた放射活性を、Triluxカウンターで１分測定する。ＩＣ５０測定を、１−１０００μMの範囲の濃度で連続希釈した阻害剤をインキュベートすることを基本とする従来法で行う。ＩＣ５０値を、ＸＬ ｆｉｔ(登録商標)ソフトウェアで曲線適合させることによりグラフから計算する。
【００２４】
２. タンパク質キナーゼＣθアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣθを、上記の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物はＰＫＣθを、ＩＣ５０＜１μMで阻害する。例えば、実施例１の化合物は、ＰＫＣθを８.９nMのＩＣ５０で阻害し、実施例４の化合物はＰＫＣθを１０.２nMのＩＣ５０で阻害する。
【００２５】
３. タンパク質キナーゼＣαアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣαをOxford Biomedical Researchから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物は、ＰＫＣαをＩＣ５０＜１μMで阻害する。例えば、実施例１の化合物はＰＫＣαを２.６nMのＩＣ５０で阻害し、実施例４の化合物はＰＫＣαを２.９nMのＩＣ５０で阻害する。
【００２６】
４. タンパク質キナーゼＣβ１アッセイ
ヒト組み換えＰＫＣβ１をOxford Biomedical Researchから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物は、ＰＫＣβ１をＩＣ５０＜１μMで阻害する。
【００２７】
５. タンパク質キナーゼＣδアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣδをOxford Biomedical Researchから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物はＰＫＣδをＩＣ５０＜１μMで阻害する。
【００２８】
６. タンパク質キナーゼＣεアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣεをOxford Biomedical Researchから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物はＰＫＣεをＩＣ５０＜１μMで阻害する。
【００２９】
７. タンパク質キナーゼＣηアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣηをPanVeraから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物はＰＫＣηをＩＣ５０＜１μMで阻害する。
【００３０】
８. ＣＤ２８共刺激アッセイ
本アッセイは、Baumann G et al. in Transplant. Proc. 1992; 24: 43-8に記載の通りのヒトインターロイキン−２プロモーター／レポーター遺伝子構築物でトランスフェクトしたJurkat細胞を使用して行い、β−ガラクトシダーゼレポーター遺伝子はルシフェラーゼ遺伝子に置き換える(de Wet J., et al., Mol. Cell Biol. 1987, 7(2), 725-737)。細胞を固相結合抗体または酢酸ミリスチン酸ホルボール(ＰＭＡ)およびＣａ＋＋イオノフォアイオノマイシンにより下記の通り刺激する。抗体介在刺激のために、Microlite TM1マイクロタイタープレート(Dynatech)を、ウェルあたり５５μl リン酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)中の３μg／ml ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体(Jackson)で３時間、ＲＴでコートする。プレートを、抗体を除去した後、ＰＢＳ(３００μl／ウェル)中の２％ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)と２時間、ＲＴでインキュベートすることによりブロックする。３００μl ＰＢＳ／ウェルで３回洗浄後、５０μl ２％ＢＳＡ／ＰＢＳ中の１０ng／ml 抗Ｔ細胞受容体抗体(ＷＴ３１、Becton & Dickinson)および３００ng／ml 抗ＣＤ２８抗体(１５Ｅ８)を、抗体の刺激のために添加し、一晩、４℃でインキュベートする。最後にプレートを３００μl ＰＢＳ／ウェルで３回洗浄する。試験化合物の７個のアッセイ培地(５０μM ２−メルカプトエタノール、１００単位／ml ペニシリンおよび１００μg／ml ストレプトマイシン含有ＲＰＭＩ １６４０／１０％ウシ胎児血清(ＦＣＳ))中の３倍希釈シリーズをデュプリケートで別々のプレートに調製し、トランスフェクトしたJurkat細胞(クローンK22290_H23)と混合し、３０分、３７℃で５％ＣＯ２中インキュベートする。１×１０５細胞を含む１００μlのこの混合物を、次いで抗体被覆アッセイプレートに移す。並行して、１００μlを４０ng／ml ＰＭＡおよび２μM イオノマイシンとインキュベートする。５.５時間、３７℃で５％ＣＯ２中インキュベートした後、ルシフェラーゼのレベルを、生物発光により決定する。プレートを１０分、５００ｇで遠心分離し、上清を軽打により除去する。２５mM Ｔｒｉｓ−ホスフェート、ｐＨ７.８、２mM ＤＴＴ、２mM １,２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ−テトラ酢酸、１０％(ｖ／ｖ)グリセロールおよび１％(ｖ／ｖ)Triton X-100を含む溶解緩衝液を添加する(２０μl／ウェル)。プレートをＲＴで１０分、一定に振盪させながらインキュベートする。
【００３１】
ルシフェラーゼ活性を、２０mM トリシン、１.０７mM (ＭｇＣＯ３)４Ｍｇ(ＯＨ)２×５Ｈ２Ｏ、２.６７mM ＭｇＳＯ４、０.１mM ＥＤＴＡ、３３.３mM ＤＴＴ、２７０μM コエンザイムＡ、４７０μM ルシフェリン(Chemie Brunschwig AG)、５３０μM ＡＴＰ含有５０μl／ウェル ルシフェラーゼ反応緩衝液、ｐＨ７.８の自動添加後、生物発光リーダー(Labsystem, Helsinki, Finland)で読み取る。遅延時間は０.５秒であり、合計測定時間は１または２秒である。低コントロール値は、抗Ｔ細胞受容体−またはＰＭＡ−刺激細胞からの、高コントロール値は、いかなる試験サンプルも存在しない抗Ｔ細胞受容体／抗ＣＤ２８−またはＰＭＡ／イオノマイシン−刺激細胞からの光単位である。低コントロール値を全値から引く。試験化合物存在下で得られた阻害を、高コントロールの阻害％として計算する。５０％阻害(ＩＣ５０)をもたらす試験化合物の濃度を用量応答曲線から計算する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物は抗Ｔ細胞受容体／抗ＣＤ２８およびＰＭＡ／イオノマイシン刺激Jurkat細胞をＩＣ５０＜１μMで阻害する。
例えば、実施例１の化合物は、２５.５nMのＩＣ５０を有し、実施例４の化合物は１７.０nMのＩＣ５０を有する。
【００３２】
９. 異種混合リンパ球反応(ＭＬＲ)
２方向ＭＬＲを標準法に従い行う(J. Immunol. Methods, 1973, 2, 279 and Meo T. et al., Immunological Methods, New York, Academic Press, 1979, 227-39)。簡単に言うと、ＣＢＡおよびＢＡＬＢ／ｃマウスからの脾臓細胞(各系統から、平底組織培養マイクロタイタープレートのウェルあたり、１.６×１０５細胞、合計３.２×１０５)を、１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ml ペニシリン、１００μg／ml ストレプトマイシン(Gibco BRL, Basel, Switzerland)、５０μM ２−メルカプトエタノール(Fluka, Buchs, Switzerland)および連続希釈した化合物を含むＲＰＭＩ培地中でインキュベートする。試験化合物あたり、７回の３倍希釈工程をデュプリケートで行う。４日間インキュベーション後、１μCi ３Ｈ−チミジンを添加する。細胞をさらに５時間のインキュベーション時間後に回収し、取り込まれた３Ｈ−チミジンを標準法に従い決定する。ＭＬＲの背景値(低コントロール)は、ＢＡＬＢ／ｃ細胞単独の増殖である。低コントロールを全ての値から引く。いかなるサンプルも存在しない高コントロールを１００％増殖と取る。サンプルによる阻害パーセントを計算し、５０％阻害に必要な濃度(ＩＣ５０値)を決定する。例えば、実施例１の化合物は１７.５nMのＩＣ５０を有し、実施例４の化合物は２４.０nMのＩＣ５０を有する。
【００３３】
Ｂ. インビボ
ラット心臓移植
系統の組合せを使用する：雄Lewis(ＲＴ１ハプロタイプ)およびＢＮ(ＲＴ１ハプロタイプ)。動物を吸入イソフランを使用して麻酔する。ドナーラットを大動脈を介して同時に放血しながら、腹部下大静脈を通してヘパリン処理し、その後開胸し、心臓を急速に冷凍する。大動脈をライゲートし、最初の分枝の遠位で分割し、腕頭動脈を最初の分岐点で分ける。左肺動脈をライゲートし、右側は分けるが、左は開放したままにする。全ての他の血管を自由に切断し、ライゲートし、分け、ドナー心臓を氷冷食塩水中に摘出する。
【００３４】
レシピエントを、腎臓下腹部大動脈および大静脈の切開およびクロス・クランピングにより準備する。移植片を、１０／０単一繊維縫合を使用した端−側吻合で、ドナー腕頭動脈とレシピエント大動脈およびドナー右肺動脈とレシピエント大静脈の間でインプラントする。クランプを外し、移植片を後腹部に繋ぎ、腹部内容部を温食塩水で洗浄し、動物を閉じ、加温ランプ下で回復させる。拒絶は、心拍が停止したときに完了したと見なす。移植片生存の増大は、式Ｉの化合物を１日量１から３０mg／kg ｂｉｄの経口投与で処置した動物において得られる。
【００３５】
移植片対宿主モデル
Wistar／Ｆラットからの脾臓細胞(２×１０７)を、(Wistar／Ｆ×Fischer 344)Ｆ１ハイブリッドラットの右後足蹠に注射する。左足蹠は未処置のままにする。動物を試験化合物で、連続４日間(０−３)処置する。膝窩リンパ節を７日目に除き、２個の対応するリンパ節の間の重量差を決定する。結果は、実験群のリンパ節の重量差と、試験化合物で未処置の動物の群由来の対応するリンパ節との重量差で比較したリンパ節肥大の阻害(パーセントで表す)として示す。
【００３６】
式Ｉの化合物は、故にＴリンパ球および／またはＰＫＣが介在する疾患または障害、例えば、臓器または組織同種または異種移植片の急性または慢性拒絶、移植片対宿主病、アテローム性動脈硬化症、血管形成術のような血管傷害が原因の血管閉塞、再狭窄、肥満、シンドロームＸ、耐糖能障害、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、心不全、慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症のようなＣＮＳ疾患、癌、ＡＩＤＳのような感染症、敗血症性ショックまたは成人呼吸窮迫症候群、虚血／再潅流傷害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血性ショック、または外傷性ショック、例えば外傷性脳傷害の処置および／または予防に有用である。式Ｉの化合物はまたＴ細胞介在急性または慢性炎症性疾患または障害、または自己免疫疾患、例えばリウマチ性関節炎、骨関節症、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型またはII型糖尿病およびその合併症、喘息または炎症性肺傷害のような呼吸器疾患、炎症性肝臓傷害、炎症性糸球体傷害、免疫介在疾患もしくは病気の皮膚顕在化、炎症性および過増殖性皮膚疾患(例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性接触性皮膚炎およびさらなる湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎)、炎症性眼疾患、例えばシェーグレン症候群、角結膜炎またはブドウ膜炎、炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎の処置および／または予防にも有用である。上記使用のために、必要な投与量は、もちろん投与の形態、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化する。一般に、満足な結果が、約０.１から約１００mg／体重kgの１日量で全身的に得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトにおける指示される１日投与量は、約０.５mgから約２０００mgであり、簡便には１日４回までに分けてまたは徐放性形態で投与する。
【００３７】
式Ｉの化合物は、任意の通常の経路で、特に経腸的に、例えば経口で、例えば錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば注射用溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形で、または鼻腔内にまたは坐薬形態で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤との混合による慣用法で製造できる。経口投与用単位投与形態は、例えば、約０.１mgから約５００mgの活性物質を含む。
【００３８】
局所投与は、例えば皮膚にである。投与形態のさらなる形態は、眼にである。
式Ｉの化合物は、遊離形または例えば上記の通りの薬学的に許容される塩形で投与できる。このような塩は常套法で製造でき、遊離化合物と同程度の活性を示す。
【００３９】
前記によって、本発明はさらに下記を提供する：
１.１ 処置を必要とする対象における、例えば上記のような、Ｔリンパ球および／またはＰＫＣまたはＧＳＫ−３βが介在する障害または疾患の予防または処置法であって、該対象に有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法；
【００４０】
１.２ 処置を必要とする対象における、例えば上記のような、急性または慢性移植片拒絶反応またはＴ細胞介在炎症性のもしくは自己免疫性の疾患の予防または処置法であって、該対象に有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法；
【００４１】
２. 医薬として、例えば、上記１.１および１.２に示した通りの方法のいずれかにおいて、医薬として使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物。
【００４２】
３. 遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、例えば、上記１.１および１.２のいずれかの方法において使用するための、医薬組成物。
４. 上記１.１および１.２のいずれかの方法において使用するための医薬組成物の製造において使用するための、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩。
【００４３】
式Ｉの化合物の化合物は、唯一の活性成分として、または、免疫調節レジメンにおける他の薬剤と、または、他の抗炎症剤と一緒に、例えば、同種または異種移植片急性または慢性拒絶反応または炎症性または自己免疫性障害の処置または予防のために、投与できる。例えば、それらは、シクロスポリン、または、アスコマイシンまたはそれらの免疫抑制性類似体または誘導体、例えばシクロスポリンＡ、ＩＳＡ Ｔｘ２４７、ＦＫ−５０６、ＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、４０−０−(２ヒドロキシ)エチル−ラパマイシン、ＣＣ１７７９、ＡＢＴ５７８またはラパログ、例えばＡＰ２３５７３など；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メトトレキサート；Ｓ１Ｐ受容体アゴニスト、例えばＦＴＹ７２０またはその類似体；レフルノミドまたはその類似体；ミゾリビン；ミコフェノール酸またはその塩、例えばナトリウム塩；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンまたはその類似体；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば、白血球受容体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２７、Ｂ７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５０(ＳＬＡＭ)、ＯＸ４０、４−１ＢＢまたはそれらのリガンド、例えばＣＤ１５４に対するモノクローナル抗体；または他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４またはその変異体の少なくとも細胞外ドメインの一部を有する、例えば、非ＣＴＬＡ４タンパク質配列に結合したＣＴＬＡ４またはその変異体の少なくとも細胞外部分を有する、組み換え結合分子、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ(例えば、命名ＡＴＣＣ６８６２９)またはその変異体、例えばＬＥＡ２９Ｙ、または他の接着分子阻害剤、例えばｍＡｂｓまたはＬＦＡ−１アンタゴニスト、セレクチンアンタゴニストおよびＶＬＡ−４アンタゴニストを含む、低分子量阻害剤と組み合わせて使用できる。式Ｉの化合物はまた、例えば癌処置において、抗増殖剤、例えば化学療法剤と、または糖尿病治療において、抗糖尿病剤、インスリン分泌促進物質、インスリン分泌エンハンサーまたはインスリン増感剤と共に投与できる。
【００４４】
前記によって、本発明はなおさらに下記の局面を提供する：
５. 治療的有効量のＧＳＫ−３β、ＰＫＣまたはＴ細胞活性化および増殖の阻害剤、例えば遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物および、例えば、上記の通りの免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、抗増殖剤または抗糖尿病剤である第２医薬物質を、例えば、同時にまたは連続して併用投与することを含む、上記で定義の方法。
【００４５】
６. ａ)ＧＳＫ−３β、ＰＫＣまたはＴ細胞活性化および増殖の阻害剤、例えば遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物、およびｂ)免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、抗増殖剤および抗糖尿病剤から選択される少なくとも１種の第２剤を含む、治療的組合せ、例えばキット。成分ａ)および成分ｂ)は、同時にまたは連続して使用できる。本キットはその投与のための指示書を含み得る。
【００４６】
ＧＳＫ−３β、ＰＫＣまたはＴ細胞活性化および増殖の阻害剤、例えば式Ｉの化合物を、例えば、上記で明記した通りの急性または慢性移植片拒絶反応または炎症性または自己免疫性障害の予防または処置のために、他の免疫抑制剤／免疫調節剤、抗炎症剤、抗増殖剤または抗糖尿病剤と共に投与するとき、併用投与する免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、抗増殖剤または抗糖尿病化合物の量は、用いる併用剤のタイプ、例えばそれがステロイドかシクロスポリンか、用いる具体的薬剤、処置すべき状態などに依存してもちろん変化する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インドリルマレイミド誘導体、その製造法およびそれらを含む医薬組成物に関する。
【０００２】
より特に、本発明は、式Ｉ
【化１】
〔式中、
ＲａはＨ；Ｃ１−４アルキル；またはＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣ１−４アルキルもしくはＮ(Ｃ１−４アルキル)２で置換されているＣ１−４アルキルであり；
ＲｂはＨ；ハロゲン；Ｃ１−６アルキル；またはＣ１−６アルコキシであり、そして
Ｒは式(ａ)
【化２】
(式中、Ｒ１およびＲ２の各々は、独立してＨまたはメチルであり；
Ｒ３はＦ、Ｃｌ、アセトアミド、ニトロまたはアミノであり；
Ｒ４はＨ、ＣＨ３、ＣＦ３、Ｆ、またはＣｌであり；
Ｒ３がＣｌであるとき、Ｒ４はＨ、ＣＨ３またはＣＦ３以外である)
のラジカルである。〕
の化合物を提供する。
【０００３】
式Ｉの化合物において、下記の意味が個々にまたは任意のサブコンビネーションで好ましい：
１. ＲａがＨまたはメチルである；
２. ＲｂがＨ、メチルまたはエチルである；
３. Ｒ１がメチルである；
４. Ｒ２がＨである；
５. Ｒ３がＦ、Ｃｌまたはニトロである；
６. Ｒ３が２位に結合している；
７. Ｒ４がＨまたはＦであり、ここでＲ３がＣｌであるとき、Ｒ４はＨ以外である；
８. Ｒ４が４位に結合している。
【０００４】
式Ｉの化合物は遊離形または塩形で、例えば有機または無機酸、例えば、塩酸、酢酸またはトリフルオロ酢酸との、例えば付加塩で存在できる。
【０００５】
式Ｉの化合物は光学異性体、ラセミ体またはジアステレオ異性体の形で存在できることは認識されよう。例えば、ピペラジニル残基の３位に置換基を担持する環炭素原子は不斉であり、Ｄ−またはＬ−立体配置を有し得る。本発明は全てのエナンチオマーおよびそれらの混合物を含むことは理解されるべきである。同様の解釈が、記載の通りの不斉炭素原子を示す出発物質に関しても当てはまる。
【０００６】
本発明はまた式Ｉの化合物の製造法であって、式II
【化３】
〔式中、ＲａおよびＲｂは上記で定義の通りである。〕
の化合物と、式III
Ｒ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２ (III)
〔式中、Ｒは上記で定義の通りである。〕
の化合物を反応させ；
そして、必要であれば、遊離形で得られた式Ｉの化合物を塩形に変換するか、またはその逆を適当に行うことを含む、方法を含む。
【０００７】
この方法は、簡便には強塩基、例えばｔ−ＢｕＯＫの存在下、例えばＷＯ０２／３８５６１に記載の通り行い得る。
【０００８】
式IIおよびIIIの化合物は、例えばＷＯ０２／３８５６１およびＷＯ０３／０８２８５９に記載の通りの、既知の方法に従い製造できる。
【０００９】
出発物質の製造法が特に記載されていない限り、該化合物は既知であるか、または当分野で既知の方法に準じてまたは後記の通りに製造できる。
【００１０】
下記実施例は本発明の説明である。
【表１】
【００１１】
実施例１：
３−(１Ｈ−インドル−３−イル)−４−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−ピロール−２,５−ジオン
【化４】
２−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−アセトアミド(２７８mg、１.００mmol)および(１Ｈ−インドル−３−イル)−オキソ−酢酸メチルエステル(３６６mg、１.８０mmol)の乾燥ＴＨＦ(８.０mL)溶液を、ＴＨＦ中のｔ−ＢｕＯＫの１.０Ｍ溶液(４.０mL、４.０mmol)に０℃でアルゴン下添加する。３０分、０℃および１時間、ＲＴで撹拌後、ＴＬＣは、アセトアミドの完全な消費を示す。紫色反応混合物をＥｔＯＡｃ(５０mL)および塩水(５０mL)に分配し、層を分け、水性層をＥｔＯＡｃ(５０mL)で抽出する。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ ７：１：１)で精製し、表題化合物をその水溶性酢酸塩として得る。オレンジ色固体。1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.84(s, 6H, CH3COO-), 1.97-2.15(m, 4 H), 2.03(s, 3H), 2.95-3.21(m, 4H), 6.51(d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.54(d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.73(t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.01-7.07(m, 2H), 7.41(d, J = 8.1Hz, 1H), 8.00(s, 1H), 8.13(d, J = 9.4 Hz, 1H), 10.8-11.4(br, 1H), 11.95(bs, 1H)。ES+-MS: 431 [M + H]+。
【００１２】
２−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−アセトアミドの製造
[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−酢酸エチルエステル(１.５４ｇ、５.０１mmol)を３３％水性ＮＨ４ＯＨ溶液(４００mL)に懸濁し、３日間、ＲＴで撹拌する。容積を、表題化合物が黄色固体として残るまで注意深く真空下で減少させ、それをさらに高真空下で乾燥させる。ES+-MS: 279 [M + H]+。
【００１３】
[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−酢酸エチルエステルの製造
アルゴン下、(５−ブロモ−２−ニトロ−フェニル)−酢酸エチルエステル(２.０２ｇ、７.００mmol)および１−メチル−ピペラジン(１.４０ｇ、１４.０mmol)の混合物を６５℃で２４時間加熱する。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２(２５mL)およびＨ２Ｏ(２５mL)に分配し、水性層をＣＨ２Ｃｌ２(２×２５mL)で抽出する。合わせた有機層を塩水(２５mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ９７.５：２.５)で精製し、表題化合物を黄色油状物として得る。ES+-MS: 308 [M + H]+。
【００１４】
５−ブロモ−２−ニトロ−フェニル)−酢酸エチルエステルの製造
ＴＨＦ中のｔ−ＢｕＯＫの１.０Ｍ溶液(６０mL、６０mmol)を、１５分にわたり、４−ブロモ−ニトロベンゼン(５.０５ｇ、２５.０mmol)およびクロロ−酢酸エチルエステル(３.６８ｇ、３０.０mmol)のＴＨＦ(３０mL)溶液に、−４０℃でアルゴン下ゆっくり添加する。深青色反応混合物を１時間、−４０℃で撹拌する。ＴＬＣ分析は、この時点で幾分か出発物質が存在することを示す。しかしながら、長い撹拌でも出発物質のさらなる変換は観察されない。反応混合物を２Ｍ 水性ＨＣｌ溶液(４０mL)で注意深くクエンチし、ＭＴＢＥ(２×１００mL)で抽出する。合わせた有機相をＨ２Ｏ(１００mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(シクロヘキサン／ＥｔＯＡｃ ９７：３)で精製して、表題化合物を無色油状物として得る。ES+-MS: 289 [M + H]+。
【００１５】
実施例２：
３−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン
【化５】
２−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミド(１２４mg、０.５０mmol)および(１Ｈ−インドル−３−イル)−オキソ−酢酸メチルエステル(１８３mg、０.９０mmol)の乾燥ＴＨＦ(４.０mL)溶液に、ＴＨＦ中のｔ−ＢｕＯＫの１.０Ｍ溶液(２.０mL、２.０mmol)を０℃でアルゴン下添加する。３０分、０℃および３０分、ＲＴで撹拌後、ＴＬＣは、アセトアミドの完全な消費を示す。暗赤色反応混合物をＥｔＯＡｃ(２５mL)および塩水(２５mL)に分配し、層を分ける。水性層のｐＨを、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液で６に合わせる。水性層をＥｔＯＡｃ(２×２５mL)で抽出し、合わせた有機層を塩水(２５mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ ５.５：１：１)で精製し、表題化合物をその水溶性酢酸塩として得る。赤色固体。1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.70(s, 9H, CH3COO-), 2.25(s, 3H), 2.22-2.38(m, 4H), 2.78-2.84(m, 4H), 6.51(d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.63(d, J = 2.8 Hz, 1H), 6.64-6.68(m, 2H), 6.77(dd, J = 8.7 Hz, J = 2.8 Hz, 1H), 6.97-7.02(m, 1H), 7.35(d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.90(s, 1H), 11.91(bs, 1H)。ES+-MS: 402 [M + H]+。
【００１６】
２−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミドの製造
２−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−アセトアミド(４６８mg、１.６８mmol)のＭｅＯＨ(８.０mL)溶液に、１０％Ｐｄ／炭(５９mg)を添加する。反応混合物を１８時間、水素雰囲気(１気圧)下撹拌し、マイクロフィルター(０.４５μM)を通して濾過し、濾液を減圧下濃縮する。残った褐色油状物をＭｅＯＨ(１mL)に溶解し、ＭＴＢＥ(５mL)を添加し、溶媒を減圧下注意深く除去し、表題化合物をベージュ色粉末として得る。ES+-MS: 249 [M + H]+。
【００１７】
実施例３：
Ｎ−[２−[４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−３−イル]−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)フェニル]−アセトアミド
【化６】
２−[２−アセチルアミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミド(１４５mg、０.５０mmol)および(１Ｈ−インドル−３−イル)−オキソ−酢酸メチルエステル(１８３mg、０.９０mmol)の乾燥ＴＨＦ(６.０mL)中の懸濁液に、ＴＨＦ中のｔ−ＢｕＯＫの１.０Ｍ溶液(２.０mL、２.０mmol)を０℃でアルゴン下添加する。得られる黄色懸濁液を１８時間、ＲＴで撹拌する。ここで、暗赤色反応混合物をＥｔＯＡｃ(２５mL)および塩水(２５mL)に分配し、層を分ける。水性層のｐＨを、飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液で６に合わせる。水性層をＥｔＯＡｃ(２×２５mL)で抽出し、合わせた有機層を塩水(２５mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮する。粗生成物をＦＣＣ(ＥｔＯＡｃ／ＡｃＯＨ／Ｈ２Ｏ ５.５：１：１)で精製して、表題化合物をその水溶性酢酸塩として得る。オレンジ色固体。1H NMR(DMSO-d6, 400 MHz): δ 1.75(s, 12H, C3COO-), 2.16(s, 3H), 2.31-2.38(m, 4H), 2.92-2.99(m, 4H), 6.61(d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.66(t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.75(d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.92(dd, J = 9.0 Hz, J = 2.7 Hz, 1H), 6.99(t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.32(d, J = 8.1Hz, 1H), 7.47(d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.75(s, 1H), 8.69(s, 1H), 11.86(bs, 1H)。ES+-MS: 444 [M + H]+。
【００１８】
２−[２−アセチルアミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミドの製造
[２−アセチルアミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−酢酸エチルエステル(４５０mg、１.４１mmol)を３３％水性ＮＨ４ＯＨ溶液(２００mL)に懸濁し、１６時間、ＲＴで撹拌する。容積を、表題化合物が褐色固体として残るまで注意深く真空下で減少させ、それをさらに高真空下で乾燥させる。ES+-MS: 291 [M + H]+。
【００１９】
[２−アセチルアミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−酢酸エチルエステルの製造
[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−酢酸エチルエステル(４３８mg、１.５８mmol)のＣＨＣｌ３(８.０mL)溶液に、酢酸無水物(３２２mg、３.１６mmol)およびトリエチルアミン(２４０mg、２.３７mmol)をアルゴン下添加する。得られる反応混合物を１時間、ＲＴおよび１時間、還流温度で撹拌する。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２(２５mL)および水(２０mL)に分配し、層を分ける。水性相をＣＨ２Ｃｌ２(２×２５mL)で抽出し、合わせた有機層を水(２×２５mL)、塩水(２５mL)で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮し、淡赤色固体を得る。ES+-MS: 320 [M + H]+。
【００２０】
[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−酢酸エチルエステルの製造
[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−酢酸エチルエステル(１.１０ｇ、３.５８mmol)のＭｅＯＨ(２５.０mL)溶液に、１０％Ｐｄ／炭(１１４mg)を添加する。反応混合物を、４時間、水素雰囲気(１気圧)下撹拌し、マイクロフィルター(０.４５μM)を通して濾過し、濾液を減圧下濃縮し、表題化合物を赤色油状物として得る。ES+-MS: 278 [M + H]+。
【００２１】
適当な出発物質を使用する以外、実施例１、２、および３の方法に従うかまたはＷＯ０２／３８５６１に記載の通り、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒ３およびＲ４が下記表１の通りである式Ａの化合物を得ることができる。
【化７】
【表２】
【００２２】
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、例えば、インビトロおよびインビボ試験で示される通り、価値ある薬理学的特性を示し、例えばタンパク質キナーゼＣ(ＰＫＣ)、例えばα、β、δ、ε、ηまたはθのようなＰＫＣイソ型活性を阻害し、例えばＴ細胞またはサイトカイン、例えばＩＬ−２の増殖性応答を阻害することによるＴ細胞またはサイトカイン、例えばＩＬ−２の産生を阻害することにより、Ｔ細胞活性化および増殖を阻害し、故に治療に適応される。
【００２３】
Ａ. インビトロ
１. タンパク質キナーゼＣアッセイ
本発明の化合物を、下記の方法に従い、異なるＰＫＣイソ型に対するそれらの活性を試験する。アッセイは、非結合性表面の、白色の透明底３８４ウェルマイクロタイタープレートで行う。反応混合物(２５μl)は、ＰＫＣαの模擬基質配列をＡｌａ→Ｓｅｒを伴い摸倣する１.５μMのトリデカペプチドアクセプター基質、１０μM ３３Ｐ−ＡＴＰ、１０mM Ｍｇ(ＮＯ３)２、０.２mM ＣａＣｌ２、２５から４００ng／mlで変化するタンパク質濃度のＰＫＣ(使用するイソ型に依存)、０.５mMの最終脂質濃度の脂質小胞(３０mol％ホスファチジルセリン、５mol％ＤＡＧおよび６５mol％ホスファチジルコリン含有)を、２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７.４＋０.１％ＢＳＡ中に含む。６０分、室温でインキュベートする。反応を５０μlの停止混合物(Ｃａ、Ｍｇなしのリン酸緩衝食塩水中に１００mM ＥＤＴＡ、２００μM ＡＴＰ、０.１％Triton X-100、０.３７５mg／ウェル ストレプトアビジン被覆ＳＰＡビーズを含む)の添加により停止させる。１０分、室温でインキュベート後、懸濁液を１０分、３００ｇで遠心分離する。取り込まれた放射活性を、Triluxカウンターで１分測定する。ＩＣ５０測定を、１−１０００μMの範囲の濃度で連続希釈した阻害剤をインキュベートすることを基本とする従来法で行う。ＩＣ５０値を、ＸＬ ｆｉｔ(登録商標)ソフトウェアで曲線適合させることによりグラフから計算する。
【００２４】
２. タンパク質キナーゼＣθアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣθを、上記の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物はＰＫＣθを、ＩＣ５０＜１μMで阻害する。例えば、実施例１の化合物は、ＰＫＣθを８.９nMのＩＣ５０で阻害し、実施例４の化合物はＰＫＣθを１０.２nMのＩＣ５０で阻害する。
【００２５】
３. タンパク質キナーゼＣαアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣαをOxford Biomedical Researchから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物は、ＰＫＣαをＩＣ５０＜１μMで阻害する。例えば、実施例１の化合物はＰＫＣαを２.６nMのＩＣ５０で阻害し、実施例４の化合物はＰＫＣαを２.９nMのＩＣ５０で阻害する。
【００２６】
４. タンパク質キナーゼＣβ１アッセイ
ヒト組み換えＰＫＣβ１をOxford Biomedical Researchから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物は、ＰＫＣβ１をＩＣ５０＜１μMで阻害する。
【００２７】
５. タンパク質キナーゼＣδアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣδをOxford Biomedical Researchから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物はＰＫＣδをＩＣ５０＜１μMで阻害する。
【００２８】
６. タンパク質キナーゼＣεアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣεをOxford Biomedical Researchから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物はＰＫＣεをＩＣ５０＜１μMで阻害する。
【００２９】
７. タンパク質キナーゼＣηアッセイ
ヒト組み換えＰＫＣηをPanVeraから得て、上記のセクションＡ.１に記載の通りのアッセイ条件下で使用する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物はＰＫＣηをＩＣ５０＜１μMで阻害する。
【００３０】
８. ＣＤ２８共刺激アッセイ
本アッセイは、Baumann G et al. in Transplant. Proc. 1992; 24: 43-8に記載の通りのヒトインターロイキン−２プロモーター／レポーター遺伝子構築物でトランスフェクトしたJurkat細胞を使用して行い、β−ガラクトシダーゼレポーター遺伝子はルシフェラーゼ遺伝子に置き換える(de Wet J., et al., Mol. Cell Biol. 1987, 7(2), 725-737)。細胞を固相結合抗体または酢酸ミリスチン酸ホルボール(ＰＭＡ)およびＣａ＋＋イオノフォアイオノマイシンにより下記の通り刺激する。抗体介在刺激のために、Microlite TM1マイクロタイタープレート(Dynatech)を、ウェルあたり５５μl リン酸緩衝食塩水(ＰＢＳ)中の３μg／ml ヤギ抗マウスＩｇＧ Ｆｃ抗体(Jackson)で３時間、ＲＴでコートする。プレートを、抗体を除去した後、ＰＢＳ(３００μl／ウェル)中の２％ウシ血清アルブミン(ＢＳＡ)と２時間、ＲＴでインキュベートすることによりブロックする。３００μl ＰＢＳ／ウェルで３回洗浄後、５０μl ２％ＢＳＡ／ＰＢＳ中の１０ng／ml 抗Ｔ細胞受容体抗体(ＷＴ３１、Becton & Dickinson)および３００ng／ml 抗ＣＤ２８抗体(１５Ｅ８)を、抗体の刺激のために添加し、一晩、４℃でインキュベートする。最後にプレートを３００μl ＰＢＳ／ウェルで３回洗浄する。試験化合物の７個のアッセイ培地(５０μM ２−メルカプトエタノール、１００単位／ml ペニシリンおよび１００μg／ml ストレプトマイシン含有ＲＰＭＩ １６４０／１０％ウシ胎児血清(ＦＣＳ))中の３倍希釈シリーズをデュプリケートで別々のプレートに調製し、トランスフェクトしたJurkat細胞(クローンK22290_H23)と混合し、３０分、３７℃で５％ＣＯ２中インキュベートする。１×１０５細胞を含む１００μlのこの混合物を、次いで抗体被覆アッセイプレートに移す。並行して、１００μlを４０ng／ml ＰＭＡおよび２μM イオノマイシンとインキュベートする。５.５時間、３７℃で５％ＣＯ２中インキュベートした後、ルシフェラーゼのレベルを、生物発光により決定する。プレートを１０分、５００ｇで遠心分離し、上清を軽打により除去する。２５mM Ｔｒｉｓ−ホスフェート、ｐＨ７.８、２mM ＤＴＴ、２mM １,２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ−テトラ酢酸、１０％(ｖ／ｖ)グリセロールおよび１％(ｖ／ｖ)Triton X-100を含む溶解緩衝液を添加する(２０μl／ウェル)。プレートをＲＴで１０分、一定に振盪させながらインキュベートする。
【００３１】
ルシフェラーゼ活性を、２０mM トリシン、１.０７mM (ＭｇＣＯ３)４Ｍｇ(ＯＨ)２×５Ｈ２Ｏ、２.６７mM ＭｇＳＯ４、０.１mM ＥＤＴＡ、３３.３mM ＤＴＴ、２７０μM コエンザイムＡ、４７０μM ルシフェリン(Chemie Brunschwig AG)、５３０μM ＡＴＰ含有５０μl／ウェル ルシフェラーゼ反応緩衝液、ｐＨ７.８の自動添加後、生物発光リーダー(Labsystem, Helsinki, Finland)で読み取る。遅延時間は０.５秒であり、合計測定時間は１または２秒である。低コントロール値は、抗Ｔ細胞受容体−またはＰＭＡ−刺激細胞からの、高コントロール値は、いかなる試験サンプルも存在しない抗Ｔ細胞受容体／抗ＣＤ２８−またはＰＭＡ／イオノマイシン−刺激細胞からの光単位である。低コントロール値を全値から引く。試験化合物存在下で得られた阻害を、高コントロールの阻害％として計算する。５０％阻害(ＩＣ５０)をもたらす試験化合物の濃度を用量応答曲線から計算する。このアッセイにおいて、式Ｉの化合物は抗Ｔ細胞受容体／抗ＣＤ２８およびＰＭＡ／イオノマイシン刺激Jurkat細胞をＩＣ５０＜１μMで阻害する。
例えば、実施例１の化合物は、２５.５nMのＩＣ５０を有し、実施例４の化合物は１７.０nMのＩＣ５０を有する。
【００３２】
９. 異種混合リンパ球反応(ＭＬＲ)
２方向ＭＬＲを標準法に従い行う(J. Immunol. Methods, 1973, 2, 279 and Meo T. et al., Immunological Methods, New York, Academic Press, 1979, 227-39)。簡単に言うと、ＣＢＡおよびＢＡＬＢ／ｃマウスからの脾臓細胞(各系統から、平底組織培養マイクロタイタープレートのウェルあたり、１.６×１０５細胞、合計３.２×１０５)を、１０％ＦＣＳ、１００Ｕ／ml ペニシリン、１００μg／ml ストレプトマイシン(Gibco BRL, Basel, Switzerland)、５０μM ２−メルカプトエタノール(Fluka, Buchs, Switzerland)および連続希釈した化合物を含むＲＰＭＩ培地中でインキュベートする。試験化合物あたり、７回の３倍希釈工程をデュプリケートで行う。４日間インキュベーション後、１μCi ３Ｈ−チミジンを添加する。細胞をさらに５時間のインキュベーション時間後に回収し、取り込まれた３Ｈ−チミジンを標準法に従い決定する。ＭＬＲの背景値(低コントロール)は、ＢＡＬＢ／ｃ細胞単独の増殖である。低コントロールを全ての値から引く。いかなるサンプルも存在しない高コントロールを１００％増殖と取る。サンプルによる阻害パーセントを計算し、５０％阻害に必要な濃度(ＩＣ５０値)を決定する。例えば、実施例１の化合物は１７.５nMのＩＣ５０を有し、実施例４の化合物は２４.０nMのＩＣ５０を有する。
【００３３】
Ｂ. インビボ
ラット心臓移植
系統の組合せを使用する：雄Lewis(ＲＴ１ハプロタイプ)およびＢＮ(ＲＴ１ハプロタイプ)。動物を吸入イソフランを使用して麻酔する。ドナーラットを大動脈を介して同時に放血しながら、腹部下大静脈を通してヘパリン処理し、その後開胸し、心臓を急速に冷凍する。大動脈をライゲートし、最初の分枝の遠位で分割し、腕頭動脈を最初の分岐点で分ける。左肺動脈をライゲートし、右側は分けるが、左は開放したままにする。全ての他の血管を自由に切断し、ライゲートし、分け、ドナー心臓を氷冷食塩水中に摘出する。
【００３４】
レシピエントを、腎臓下腹部大動脈および大静脈の切開およびクロス・クランピングにより準備する。移植片を、１０／０単一繊維縫合を使用した端−側吻合で、ドナー腕頭動脈とレシピエント大動脈およびドナー右肺動脈とレシピエント大静脈の間でインプラントする。クランプを外し、移植片を後腹部に繋ぎ、腹部内容部を温食塩水で洗浄し、動物を閉じ、加温ランプ下で回復させる。拒絶は、心拍が停止したときに完了したと見なす。移植片生存の増大は、式Ｉの化合物を１日量１から３０mg／kg ｂｉｄの経口投与で処置した動物において得られる。
【００３５】
移植片対宿主モデル
Wistar／Ｆラットからの脾臓細胞(２×１０７)を、(Wistar／Ｆ×Fischer 344)Ｆ１ハイブリッドラットの右後足蹠に注射する。左足蹠は未処置のままにする。動物を試験化合物で、連続４日間(０−３)処置する。膝窩リンパ節を７日目に除き、２個の対応するリンパ節の間の重量差を決定する。結果は、実験群のリンパ節の重量差と、試験化合物で未処置の動物の群由来の対応するリンパ節との重量差で比較したリンパ節肥大の阻害(パーセントで表す)として示す。
【００３６】
式Ｉの化合物は、故にＴリンパ球および／またはＰＫＣが介在する疾患または障害、例えば、臓器または組織同種または異種移植片の急性または慢性拒絶、移植片対宿主病、アテローム性動脈硬化症、血管形成術のような血管傷害が原因の血管閉塞、再狭窄、肥満、シンドロームＸ、耐糖能障害、多嚢胞性卵巣症候群、高血圧、心不全、慢性閉塞性肺疾患、アルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症のようなＣＮＳ疾患、癌、ＡＩＤＳのような感染症、敗血症性ショックまたは成人呼吸窮迫症候群、虚血／再潅流傷害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血性ショック、または外傷性ショック、例えば外傷性脳傷害の処置および／または予防に有用である。式Ｉの化合物はまたＴ細胞介在急性または慢性炎症性疾患または障害、または自己免疫疾患、例えばリウマチ性関節炎、骨関節症、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型またはII型糖尿病およびその合併症、喘息または炎症性肺傷害のような呼吸器疾患、炎症性肝臓傷害、炎症性糸球体傷害、免疫介在疾患もしくは病気の皮膚顕在化、炎症性および過増殖性皮膚疾患(例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性接触性皮膚炎およびさらなる湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎)、炎症性眼疾患、例えばシェーグレン症候群、角結膜炎またはブドウ膜炎、炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎の処置および／または予防にも有用である。上記使用のために、必要な投与量は、もちろん投与の形態、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化する。一般に、満足な結果が、約０.１から約１００mg／体重kgの１日量で全身的に得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトにおける指示される１日投与量は、約０.５mgから約２０００mgであり、簡便には１日４回までに分けてまたは徐放性形態で投与する。
【００３７】
式Ｉの化合物は、任意の通常の経路で、特に経腸的に、例えば経口で、例えば錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば注射用溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形で、または鼻腔内にまたは坐薬形態で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤との混合による慣用法で製造できる。経口投与用単位投与形態は、例えば、約０.１mgから約５００mgの活性物質を含む。
【００３８】
局所投与は、例えば皮膚にである。投与形態のさらなる形態は、眼にである。
式Ｉの化合物は、遊離形または例えば上記の通りの薬学的に許容される塩形で投与できる。このような塩は常套法で製造でき、遊離化合物と同程度の活性を示す。
【００３９】
前記によって、本発明はさらに下記を提供する：
１.１ 処置を必要とする対象における、例えば上記のような、Ｔリンパ球および／またはＰＫＣまたはＧＳＫ−３βが介在する障害または疾患の予防または処置法であって、該対象に有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法；
【００４０】
１.２ 処置を必要とする対象における、例えば上記のような、急性または慢性移植片拒絶反応またはＴ細胞介在炎症性のもしくは自己免疫性の疾患の予防または処置法であって、該対象に有効量の式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法；
【００４１】
２. 医薬として、例えば、上記１.１および１.２に示した通りの方法のいずれかにおいて、医薬として使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物。
【００４２】
３. 遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、例えば、上記１.１および１.２のいずれかの方法において使用するための、医薬組成物。
４. 上記１.１および１.２のいずれかの方法において使用するための医薬組成物の製造において使用するための、式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその塩。
【００４３】
式Ｉの化合物の化合物は、唯一の活性成分として、または、免疫調節レジメンにおける他の薬剤と、または、他の抗炎症剤と一緒に、例えば、同種または異種移植片急性または慢性拒絶反応または炎症性または自己免疫性障害の処置または予防のために、投与できる。例えば、それらは、シクロスポリン、または、アスコマイシンまたはそれらの免疫抑制性類似体または誘導体、例えばシクロスポリンＡ、ＩＳＡ Ｔｘ２４７、ＦＫ−５０６、ＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、４０−０−(２ヒドロキシ)エチル−ラパマイシン、ＣＣ１７７９、ＡＢＴ５７８またはラパログ、例えばＡＰ２３５７３など；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メトトレキサート；Ｓ１Ｐ受容体アゴニスト、例えばＦＴＹ７２０またはその類似体；レフルノミドまたはその類似体；ミゾリビン；ミコフェノール酸またはその塩、例えばナトリウム塩；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンまたはその類似体；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば、白血球受容体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２７、Ｂ７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５０(ＳＬＡＭ)、ＯＸ４０、４−１ＢＢまたはそれらのリガンド、例えばＣＤ１５４に対するモノクローナル抗体；または他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４またはその変異体の少なくとも細胞外ドメインの一部を有する、例えば、非ＣＴＬＡ４タンパク質配列に結合したＣＴＬＡ４またはその変異体の少なくとも細胞外部分を有する、組み換え結合分子、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ(例えば、命名ＡＴＣＣ６８６２９)またはその変異体、例えばＬＥＡ２９Ｙ、または他の接着分子阻害剤、例えばｍＡｂｓまたはＬＦＡ−１アンタゴニスト、セレクチンアンタゴニストおよびＶＬＡ−４アンタゴニストを含む、低分子量阻害剤と組み合わせて使用できる。式Ｉの化合物はまた、例えば癌処置において、抗増殖剤、例えば化学療法剤と、または糖尿病治療において、抗糖尿病剤、インスリン分泌促進物質、インスリン分泌エンハンサーまたはインスリン増感剤と共に投与できる。
【００４４】
前記によって、本発明はなおさらに下記の局面を提供する：
５. 治療的有効量のＧＳＫ−３β、ＰＫＣまたはＴ細胞活性化および増殖の阻害剤、例えば遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物および、例えば、上記の通りの免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、抗増殖剤または抗糖尿病剤である第２医薬物質を、例えば、同時にまたは連続して併用投与することを含む、上記で定義の方法。
【００４５】
６. ａ)ＧＳＫ−３β、ＰＫＣまたはＴ細胞活性化および増殖の阻害剤、例えば遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物、およびｂ)免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、抗増殖剤および抗糖尿病剤から選択される少なくとも１種の第２剤を含む、治療的組合せ、例えばキット。成分ａ)および成分ｂ)は、同時にまたは連続して使用できる。本キットはその投与のための指示書を含み得る。
【００４６】
ＧＳＫ−３β、ＰＫＣまたはＴ細胞活性化および増殖の阻害剤、例えば式Ｉの化合物を、例えば、上記で明記した通りの急性または慢性移植片拒絶反応または炎症性または自己免疫性障害の予防または処置のために、他の免疫抑制剤／免疫調節剤、抗炎症剤、抗増殖剤または抗糖尿病剤と共に投与するとき、併用投与する免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、抗増殖剤または抗糖尿病化合物の量は、用いる併用剤のタイプ、例えばそれがステロイドかシクロスポリンか、用いる具体的薬剤、処置すべき状態などに依存してもちろん変化する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
〔式中、
ＲａはＨ；Ｃ１−４アルキル；またはＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣ１−４アルキルまたはＮ(Ｃ１−４アルキル)２で置換されているＣ１−４アルキルであり；
ＲｂはＨ；ハロゲン；Ｃ１−６アルキル；またはＣ１−６アルコキシであり、そして
Ｒは式(ａ)
【化２】
(式中、Ｒ１およびＲ２の各々は、独立してＨまたはメチルであり；
Ｒ３はＦ、Ｃｌ、アセトアミド、ニトロまたはアミノであり；
Ｒ４はＨ、ＣＨ３、ＣＦ３、Ｆ、またはＣｌであり；
Ｒ３がＣｌであるとき、Ｒ４はＨ、ＣＨ３またはＣＦ３以外である)
のラジカルである。〕
の化合物またはその塩。
【請求項２】
ＲａがＨまたはメチルであり；ＲｂがＨ、エチルまたはメチルであり；Ｒ１がメチルであり；Ｒ２がＨであり；Ｒ３がＦ、Ｃｌまたはニトロであり；Ｒ３が２位で結合しており；Ｒ４がＨまたはＦであり、ここで、Ｒ３がＣｌであり、かつＲ４が４位に結合しているとき、Ｒ４はＨ以外である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
３−(１Ｈ−インドル−３−イル)−４−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
Ｎ−[２−[４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−３−イル]−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)フェニル]−アセトアミド；
３−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−４−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
Ｎ−[２−[４−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−３−イル]−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミド；
３−[２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２,４−ジフルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２,４−ジフルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２,４−ジフルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１,７−ジメチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[４−クロロ−２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[４−クロロ−２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン
から選択される、請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
医薬として使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項６】
Ｔリンパ球および／またはＰＫＣが介在する疾患または障害の処置または予防用医薬の製造における、遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物、または請求項５記載の医薬組成物の使用。
【請求項７】
Ｔ細胞介在急性または慢性炎症性疾患または障害、自己免疫疾患、移植片拒絶反応、癌または感染症の処置および／または予防用医薬の製造における、遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物、または請求項５記載の医薬組成物の使用。
【請求項８】
遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物ならびに免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、化学療法剤、抗増殖剤および抗糖尿病剤から選択されるさらなる薬剤を含む、医薬組合せ剤。
【請求項９】
請求項１記載の式Ｉの化合物の製造法であって、式II
【化３】
〔式中、ＲａおよびＲｂは請求項１および２で定義の通りである。〕
の化合物と、式III
Ｒ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２ (III)
〔式中、Ｒは請求項１および２で定義の通りである。〕
の化合物を反応させ；
そして、必要であれば、遊離形で得られた式Ｉの化合物を塩形に変換するか、またはその逆を適当に行うことを含む、方法。
【請求項１０】
処置を必要とする対象においてリンパ球および／またはＰＫＣが介在する障害または疾患の処置または予防法であって、該対象に有効量の請求項１から３のいずれかに記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
〔式中、
ＲａはＨ；Ｃ１−４アルキル；またはＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣ１−４アルキルまたはＮ(Ｃ１−４アルキル)２で置換されているＣ１−４アルキルであり；
ＲｂはＨ；ハロゲン；Ｃ１−６アルキル；またはＣ１−６アルコキシであり、そして
Ｒは式(ａ)
【化２】
(式中、Ｒ１およびＲ２の各々は、独立してＨまたはメチルであり；
Ｒ３はＦ、Ｃｌ、アセトアミド、ニトロまたはアミノであり；
Ｒ４はＨ、ＣＨ３、ＣＦ３、Ｆ、またはＣｌであり；
Ｒ３がＣｌであるとき、Ｒ４はＨ、ＣＨ３またはＣＦ３以外である)
のラジカルである。〕
の化合物またはその塩。
【請求項２】
ＲａがＨまたはメチルであり；ＲｂがＨ、エチルまたはメチルであり；Ｒ１がメチルであり；Ｒ２がＨであり；Ｒ３がＦ、Ｃｌまたはニトロであり；Ｒ３が２位で結合しており；Ｒ４がＨまたはＦであり、ここで、Ｒ３がＣｌであり、かつＲ４が４位に結合しているとき、Ｒ４はＨ以外である、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
３−(１Ｈ−インドル−３−イル)−４−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
Ｎ−[２−[４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−３−イル]−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)フェニル]−アセトアミド；
３−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−４−[５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２−ニトロ−フェニル]−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２−アミノ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
Ｎ−[２−[４−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−２,５−ジオキソ−２,５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロル−３−イル]−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−アセトアミド；
３−[２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２,４−ジフルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２,４−ジフルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[２,４−ジフルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１,７−ジメチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[４−クロロ−２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン；
３−[４−クロロ−２−フルオロ−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル]−４−(７−メチル−１Ｈ−インドル−３−イル)−ピロール−２,５−ジオン
から選択される、請求項１または２記載の化合物。
【請求項４】
医薬として使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物。
【請求項５】
遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項６】
Ｔリンパ球および／またはＰＫＣが介在する疾患または障害の処置または予防用医薬の製造における、遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物、または請求項５記載の医薬組成物の使用。
【請求項７】
Ｔ細胞介在急性または慢性炎症性疾患または障害、自己免疫疾患、移植片拒絶反応、癌または感染症の処置および／または予防用医薬の製造における、遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物、または請求項５記載の医薬組成物の使用。
【請求項８】
遊離形または薬学的に許容される塩形の、請求項１から３のいずれかに記載の化合物ならびに免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤、化学療法剤、抗増殖剤および抗糖尿病剤から選択されるさらなる薬剤を含む、医薬組合せ剤。
【請求項９】
請求項１記載の式Ｉの化合物の製造法であって、式II
【化３】
〔式中、ＲａおよびＲｂは請求項１および２で定義の通りである。〕
の化合物と、式III
Ｒ−ＣＨ２−ＣＯ−ＮＨ２ (III)
〔式中、Ｒは請求項１および２で定義の通りである。〕
の化合物を反応させ；
そして、必要であれば、遊離形で得られた式Ｉの化合物を塩形に変換するか、またはその逆を適当に行うことを含む、方法。
【請求項１０】
処置を必要とする対象においてリンパ球および／またはＰＫＣが介在する障害または疾患の処置または予防法であって、該対象に有効量の請求項１から３のいずれかに記載の化合物、または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、方法。
【公表番号】特表２００７−５３６３３０（Ｐ２００７−５３６３３０Ａ）
【公表日】平成１９年１２月１３日（２００７．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１２１０７（Ｐ２００７−５１２１０７）
【出願日】平成１７年５月１２日（２００５．５．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００５１８３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１３５４５
【国際公開日】平成１７年１２月１日（２００５．１２．１）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１２月１３日（２００７．１２．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年５月１２日（２００５．５．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００５１８３
【国際公開番号】ＷＯ２００５／１１３５４５
【国際公開日】平成１７年１２月１日（２００５．１２．１）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
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