ボスウェリア・セラータエキスを含む相乗作用性抗炎症組成物
本発明において、ボスウェリア・セラータ由来の３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の治療上有効な組合せを含む相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント抗炎症組成物を開示する。該組成物（１種類または複数種）は、炎症およびいくつかの炎症関連疾患、例えば、喘息、変形性関節症、関節リウマチ、内皮機能障害などを予防、防除および処置するために使用され得る。さらに、本発明において、その発現／生成が炎症性疾患時に改変される炎症促進バイオマーカータンパク質または分子の改善を開示する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ｂｏｓｗｅｌｌｉｃ ａｃｉｄ）（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータ（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ ｓｅｒｒａｔａ）エキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性の栄養補助用、医薬用およびダイエタリーサプリメント組成物を提供する。該組成物（１種類または複数種）は、炎症および炎症に関連する、または炎症が付随する疾患状態、例えば、喘息、関節炎、内皮機能障害などを予防、コントロールおよび治療するために使用され得る。
【０００２】
さらに、本発明は、その発現／生成が炎症性疾患時に改変される炎症促進バイオマーカータンパク質または分子の改善を包含する。
【背景技術】
【０００３】
ボスウェリア・セラータ（カンラン科）という植物のゴム樹脂は、以前から、インド系医術のアーユルヴェーダ医術の開業医によって、関節リウマチおよび痛風の処置のために使用されている。種々のゴム樹脂エキスで、実験動物において強力な抗炎症活性および抗動脈硬化活性が示されている［Ｃｕａｚ−Ｐｅｒｏｌｉｎら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ Ｆｅｂ ２００８］。単離されたボスウェリア化合物の１つである酢酸インセンスオールは、ＮＦκＢインヒビターであり、抗炎症化合物として有用であることが示された［Ｍｏｕｓｓａｉｅｆｆら，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ７２，１６５７−１６６４，２００７］。以前に、Ｂ．セラータのゴム樹脂のエタノール抽出物は、ラットの腹膜好中球においてロイコトリエンＢ４の形成を抑制することが観察された。ロイコトリエンＢ４は、炎症反応の重要なメディエータの１つである［Ａｍｍｏｎ，Ｈ．Ｐ．Ｔ．ら，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ，５７，２０３（１９９１）］。ボスウェリアエキスは、強力な抗関節炎因子であり［Ｋｉｍｍａｔｋａｒら；Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００３ Ｊａｎ；１０（１）：３−７］、免疫調節因子である［Ｐｕｎｇｌｅら；Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ．２００３ Ｄｅｃ；４１（１２）：１４６０−１４６２］ことが見い出された。また、ボスウェリア・セラータのコレステロール低下作用も示された［Ｚｕｔｓｈｉ Ｕら，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃ．１８，１８２−１８３，１９８６］。実際、ボスウェリアエキスを用いた、膝に変形性関節症を有する患者群に対する無作為化二重盲検プラセボ対照比較クロスオーバー臨床試験では、痛みの低減、腫脹の減少および膝の屈曲の増大に関して統計学的に有意な平均改善値が示された［Ｋｉｍｍａｔｋａｒ Ｎら，Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００３；１０：３−７］。非盲検非無作為化等価性試験では、慢性大腸炎を有する３０例の患者にボスウェリアゴム（３００ｍｇ １日３回）またはスルファサラジン（１ｇ １日３回）のいずれかを投与すると、ボスウェリアによって示された治療効果は、スルファサラジンで示されるものと同等であった［Ｇｕｐｔａ Ｉら，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ．２００１；６７：３９１−３９５］。別の等価性試験では、活動期クローン病を有する患者に対する無作為化二重盲検試験において、ボスウェリア標準化エキスにより、メサラジンと同等、またはより充分な治療による改善が示された［Ｇｅｒｈａｒｄｔ Ｈら，Ｚ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ２００１；３９：１１−１７］。また、６週間の二重盲検プラセボ対照比較試験において、ボスウェリアゴム樹脂により、気管支喘息を有する患者において統計学的に有意な改善が示された［Ｇｕｐｔａ Ｉら，Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ １９９８；３：５１１−５１］。
【０００４】
また、特許文献にも、ボスウェリアの種々の活性が記載されている。いくつかを以下に引用する。
【０００５】
ＰＣＴ特許公開公報第０３０７４０６３Ａ１号および付与されたインド特許第２０５２６９号は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸が１００％に富化された画分の作製方法に関する。ボスウェリア種のゴム樹脂の有機溶媒抽出物を、まず酸化に供し、次いでアセチル化に供する（またはその逆も同様）。これにより、画分中に存在する低効力のボスウェリア酸がＡＫＢＡに変換される。この処理済画分を、さらにクロマトグラフィー分離手法による精製および分離に供し、純度を上げ、夾雑物を除去する。このプロセスにより、ＡＫＢＡが１０〜１００％に富化された治療適用のための画分の取得がもたらされる。
【０００６】
欧州特許出願第１６３７１５３Ａ１号は、特に、炎症過程および線維症過程に対する医薬としてのボスウェリア・セラータエキスと植物性抗線維症剤との併用剤（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）に関する。かかる併用剤において、ボスウェリア・セラータは、乾燥エキスとして５〜５０％の量で、植物性抗線維症剤は、乾燥エキスとして５０〜９５％（重量基準）の量で存在する。
【０００７】
米国特許第５６２９３５１号は、ボスウェリア酸混合物を含み、抗炎症活性および抗潰瘍発生活性を示す新規な画分に関する。また、抗炎症活性、抗関節炎活性および抗潰瘍発生活性を示す新規なボスウェリア酸化合物が開示されている。また、ボスウェリア酸画分およびその個々のボスウェリア酸の単離方法開示されている。
【０００８】
米国特許５７２０９７５号は、アルツハイマー病の予防または処置のための医薬の製造のための、インセンス（乳香）、インセンス抽出物、インセンスに含有される物質、その生理学的に許容され得る塩、誘導体および生理学的塩、純粋なボスウェリア酸、その生理学的に許容され得る塩、誘導体、該誘導体の塩の使用に関する。
【０００９】
米国特許第５８８８５１４号は、骨または関節の炎症を特徴とする病状を有する哺乳動物を処置するための組成物であって、ボスウェリア・セラータエキスが一成分として使用されている組成物に言及している。
【００１０】
ＰＣＴ特許出願第ＷＯ０８０３６９３２Ａ２号は、特異に高値の揮発性油分、ボスウェリア酸および多糖化合物を有するボスウェリア種（フランキンセンスまたは乳香）由来の組成物（特に、ヒト経口送達製剤）および該組成物の作製方法、ならびに例えば、関節炎、炎症性障害、変形性関節症、リウマチ様疾患および腰痛の処置／予防に有用なかかる組成物の使用方法に関する。
【００１１】
しかしながら、本発明者らが知る限りにおいて、ボスウェリアエキス、特にＡＫＢＡ富化エキスをボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）とともに含む、炎症状態の予防、防除および処置のための組成物に関する先行技術はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＰＣＴ特許公開公報ＷＯ０３０７４０６３Ａ１号
【特許文献２】インド特許第２０５２６９号
【特許文献３】欧州特許出願第１６３７１５３Ａ１号
【特許文献４】米国特許第５６２９３５１号
【特許文献５】米国特許第５７２０９７５号
【特許文献６】米国特許第５８８８５１４号
【特許文献７】ＰＣＴ特許出願ＷＯ０８０３６９３２Ａ２号
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｃｕａｚ−Ｐｅｒｏｌｉｎら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ Ｆｅｂ ２００８
【非特許文献２】Ｍｏｕｓｓａｉｅｆｆら，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ７２，１６５７−１６６４，２００７
【非特許文献３】Ａｍｍｏｎ，Ｈ．Ｐ．Ｔ．ら，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ，５７，２０３（１９９１）
【非特許文献４】Ｋｉｍｍａｔｋａｒら；Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００３ Ｊａｎ；１０（１）：３−７
【非特許文献５】Ｐｕｎｇｌｅら；Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ．２００３ Ｄｅｃ；４１（１２）：１４６０−１４６２
【非特許文献６】Ｚｕｔｓｈｉ Ｕら，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃ．１８，１８２−１８３，１９８６
【非特許文献７】Ｋｉｍｍａｔｋａｒ Ｎら，Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００３；１０：３−７
【非特許文献８】Ｇｕｐｔａ Ｉら，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ．２００１；６７：３９１−３９５
【非特許文献９】Ｇｅｒｈａｒｄｔ Ｈら，Ｚ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ２００１；３９：１１−１７
【非特許文献１０】Ｇｕｐｔａ Ｉら，Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ １９９８；３：５１１−５１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の主目的は、炎症および／または炎症が付随する、もしくは炎症に関連する疾患状態、例えば、喘息、アテローム性動脈硬化、内皮機能障害、変形性関節症、関節リウマチなどの予防、コントロールまたは治療のための、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータのエキスまたは画分とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の治療上有効な組合せを含む相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物を提供することである。
【００１６】
また別の態様において、本発明は、哺乳動物の炎症および付随または関連疾患、例えばこれらに限定されないが、喘息、アテローム性動脈硬化、内皮機能障害、変形性関節症、関節リウマチ、アレルギー性鼻炎、皮膚炎、乾癬、嚢胞性線維症、炎症性腸疾患、多発性硬化症、糖尿病、認知、神経系の障害、コラーゲン合成、アンチエイジング、代謝異常、全身性エリテマトーデス、ブドウ膜炎、血管形成術後再狭窄、糸球体腎炎、消化管アレルギー、腎炎、結膜炎、慢性閉塞性肺疾患、職業性喘息、湿疹、気管支炎、花粉症、蕁麻疹、アレルギー性障害の１種類（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）以上の予防、コントロールおよび治療のため、ならびに喘鳴、呼吸困難、乾性咳、胸苦しさ、首の筋肉の緊張、頻脈、胸痛、関節痛などの病状、およびこれらが付随するいくつかの他の病状のための、ＡＫＢＡ富化エキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキスを含む相乗作用性組成物を提供する。
【００１７】
さらにまた別の態様において、本発明は、関節炎または関節リウマチなどの他の炎症性疾患の１種類以上の予防、コントロールおよび治療のための、ＡＫＢＡ富化ボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性組成物を提供する。関節炎の非限定的な例としては、リウマチ様（軟部組織リウマチおよび非関節リウマチ、線維筋痛症、結合組織炎、筋肉リウマチ、筋筋膜疼痛、上腕骨上顆炎、有痛性肩拘縮症、ティーツェ症候群、筋膜炎、腱炎、腱滑膜炎、滑液包炎など）、若年性慢性関節障害、脊椎関節障害（強直性脊椎炎）、変形性関節症、急性痛風、慢性痛風および全身性エリテマトーデスが付随する高尿酸血症および関節炎ならびに変形性関節炎が挙げられる。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、哺乳動物の炎症および／または炎症、変形性関節症、関節リウマチ、軟骨分解が付随する疾患状態と関連している生体分子またはバイオマーカー、例えば限定されないが、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）、マクロファージ／脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質−２（ａＰ２／ＦＡＢＰ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、細胞間細胞接着分子（ＩＣＡＭ）−１、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）−１、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）−３、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの発現および／または生成の改善のための相乗作用性組成物を提供することである。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の主要化合物を表す構造式１〜９を示す。
【図２】ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の植物化学的プロフィールを示すＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３】ヒト単球ＴＨＰ−１細胞における５−リポキシゲナーゼ（Ａ）およびＦＬＡＰ（Ｂ）の発現のＢＥ３０％誘導性阻害を示す代表的なイムノブロットを示す。それぞれの各パネルにおいて、棒グラフは、正規化したデンシトメトリーによる値（自由裁量単位）を示す。バーａ、ｂおよびｃは、それぞれ、対照細胞、ＬＰＳ処理細胞およびＬＰＳ＋ＢＥ３０％処理細胞を表す。
【図４】３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス［ＢＥ３０％］、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）および組成物−２の５−リポキシゲナーゼ阻害活性の比較を示す。バーは、２５μｇ／ｍＬ濃度のＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−２で示された５−リポキシゲナーゼ酵素阻害パーセントを表す。
【図５】３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス［ＢＥ３０％］、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）および組成物−２によるマトリックスメタロプロテアーゼ−３（ＭＭＰ−３）生成の阻害を示す。バーは、ＴＮＦα誘導型ＳＷ９８２ヒト滑膜細胞におけるＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−２での５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を表す。バー上部の値は、対応するＩＣ５０値を表す。
【図６】３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸を３０％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％、１００ｍｇ／ｋｇ）ならびにボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）（１００ｍｇ／ｋｇ）、ＢＥ３０％とＢＮＲＥをそれぞれ１：１および２：１の比率で含む組成物−１（１００ｍｇ／ｋｇ）および組成物−２（１００ｍｇ／ｋｇ）、ならびにプレドニゾロン（１０ｍｇ／ｋｇ）による、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける完全フロインドアジュバント誘導性足浮腫の体積の抑制パーセントの棒グラフ表示を示す。
【図７】異なる動物群における血清ＴＮＦα（Ａ）およびＩＬ−１β（Ｂ）の濃度の棒グラフ表示を示す。１４日間のＦＣＡ抗原刺激後、血清ＴＮＦαおよびＩＬ−１βを、酵素免疫測定キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）によって定量的に測定した。バーａ〜ｆは、それぞれ、対照、プレドニゾロン（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＥ３０％（１００ｍｇ／ｋｇ）、ＢＮＲＥ（１００ｍｇ／ｋｇ）、組成物−１（１００ｍｇ／ｋｇ）および組成物−２（１００ｍｇ／ｋｇ）を補給した群のサイトカインレベルを表す。各バーは平均±ＳＤを表す。Ｎ＝６，＊ Ｐ＜０．０５および＊＊ Ｐ＜０．００５（対照に対して）。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
炎症は、体内に侵入した病原体、損傷細胞またはアレルギー性因子などの刺激に対する脈管組織の応答である。これは、有害な病原体または因子を除去し、組織を保護するための生物体による防御機構である。炎症促進性のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦならびにＣＤ４＋、Ｔｈ２サブセット由来のＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３リンホカインなどは、炎症性疾患の免疫病因の重要な因子であると考えられている［Ｋｎｉｇｈｔ Ｄ Ａら，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１０８：７９７−８０３］。５−リポキシゲナーゼは、炎症プロセスの枢要な工程であるアラキドン酸からのロイコトリエンの合成に重要な酵素である。ロイコトリエンは、炎症性疾患の枢要なメディエータである。
【００２１】
５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）の活性化および遺伝子発現は、該疾患状態の原因である。５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）は、１８ｋＤａの内在性膜タンパク質であり、アラキドン酸に特異的に結合し、これを該酵素に転移させることにより、５−リポキシゲナーゼを活性化させる［Ｍａｎｃｉｎｉら，１９９３］。したがって、ＦＬＡＰはロイコトリエンの生成を担う。そのため、５−ＬＯＸおよびＦＬＡＰのブロックまたは下方調節は、炎症状態の治療およびコントロールのための新規な治療アプローチである。
【００２２】
また、アテローム性動脈硬化も、内皮細胞機能不全の部位に、数十年の期間にわたって動脈の病変が形成されることを特徴とする炎症性疾患である。炎症は、アテローム硬化斑の発生の多くの段階において重要な役割を果たしている［ＫＫ Ｂｅｒｇら，Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６９，３６−４２］。
【００２３】
マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）は、亜鉛依存性エンドペプチダーゼであり、あらゆる種類の細胞外マトリックスタンパク質（コラーゲンなど、通常、組織内の細胞間の隙間に見られる）を分解することができる。ＭＭＰは、主に３つの群、コラゲナーゼで形成された線維芽細胞コラゲナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ゼラチナーゼＡ（ＭＭＰ−２）とゼラチナーゼＢ（ＭＭＰ−９）を含むゼラチナーゼ、およびストロメリシン−１（ＭＭＰ−３）とマトリリシン（ＭＭＰ−７）を含むストロメリシンに大別される。過剰のメタロプロテアーゼは、コラーゲン、プロテオグリカンおよびゼラチンなどの生体分子の分解をもたらし、これにより、表皮に対して致命的影響が及ぼされることがあり得、また、軟骨の疾患、炎症などが発生することもあり得る。
【００２４】
ＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）：
ボスウェリア樹脂およびエキスは、以前から、炎症性疾患の処置に使用されている。ボスウェリア酸は、ボスウェリア・セラータに起因する有益な効果を担う活性化合物として同定された。副化合物である３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）は、全ボスウェリア酸のうちで最も強力な５−リポキシゲナーゼインヒビターとして同定された［Ｓａｉｌｅｒ ＥＲら，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．１９９６、１１７（４）：６１５−８］。そのため、ＡＫＢＡ含量が富化されたエキスまたは画分は、天然エキスと比べて、より充分な有効性を示すと推定された。本発明者らは、そのＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＩＮ０５／００００７４（２００５年３月７日付）およびＰＣＴ特許公開公報ＷＯ０３０７４０６３Ａ１および付与されたインド特許第２０５２６９号において、滴定解析法によるとほぼ８５％の全ボスウェリア酸とＨＰＬＣ解析法によるとほぼ３％のＡＫＢＡ（ＢＥ３％）を含む市販のボスウェリア・セラータエキスから、ＡＫＢＡを３０〜１００％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスの作製方法を示した。前記の富化ボスウェリアエキスは、通常のボスウェリア・セラータエキス中に一般的に存在している有意な量のトリテルペン成分（ＡＫＢＡを除く）は含まないが、通常のボスウェリアエキス中の微量成分（３％まで）であるＡＫＢＡが該富化エキスの主成分であることを特徴とする特異な組成物である。通常のボスウェリアエキス中に存在している成分は、１）β−ボスウェリア酸、２）３−Ｏ−アセチル−β−ボスウェリア酸、３）１１−ケト−β−ボスウェリア酸、４）３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸、５）９−エン−β−ボスウェリア酸、６）３α−ヒドロキシウルサ−９，１１−ジエン−２４−酸、７）２α，３α−ヒドロキシウルサ−１２−エン−２４−酸である。本発明の組成物に使用する特異なＡＫＢＡ富化ボスウェリア・セラータエキスの主成分は、１）３−Ｏ−アセチル−β−ボスウェリア酸、２）３−Ｏ−アセチル−９（１１）−デヒドロ−β−ボスウェリア酸、３）３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−アミリン、４）３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−α−ボスウェリア酸である。
【００２５】
３０％のＡＫＢＡを含有する前記のボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）を、いくつかのインビトロ アッセイにおいて試験すると、３％のＡＫＢＡを含有する市販のボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３％）よりも優れていることがわかった［Ｒｏｙ Ｓ．Ｋａｎｎａら，ＤＮＡ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，２４（４）：２４４−２５５］。また、直接比較実験では、前記の富化ボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）は、Ｗｉｓｔａｒアルビノラットにおいて、アジュバント誘導炎症応答に対し、３％のＡＫＢＡを含有する天然のボスウェリアエキスと比べて有意に高い阻害を示した［Ｒｏｙ Ｓら，Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ＆ Ｒｅｄｏｘ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，８，３ ＆ ４，２００６］。ＡＫＢＡを３０％まで選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）を用いて本発明を実証する。
【００２６】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）：
ボスウェリア・セラータ樹脂は、酸性化合物、非酸性化合物および糖類を含有する。商業規模での生産の実施の際には、通常のボスウェリア・セラータエキス（全ボスウェリア酸８５％、ＢＥ３％）、主にトリテルペン酸（ボスウェリア酸など）を含有する酸性画分を、樹脂の残余成分から分離する。また、糖類および他の高分子物質も、全ボスウェリア酸の富化の際に水相中に分離する。残りの水不混和性非酸性低極性化合物を、ボスウェリア油状物画分／エキスとして分離する。このような非酸性または中性の低極性化合物は、市販のボスウェリアエキスおよびＡＫＢＡ富化ボスウェリアエキスのどちらにおいても、存在しないか、または非常に低い濃度で存在するかのいずれかである。このような非酸性成分の存在は、ＡＫＢＡの富化の増大とともに、さらに少なくなる。
【００２７】
前記の非酸性ボスウェリア油状物は、ボスウェリア・セラータゴム樹脂の主要成分であった。しかしながら、その商業的有用性は非常に限定的であり、たいていは廃棄物として廃棄される。この画分の利用の可能性は、以前からの懸案であった。本発明者らは、相乗作用組成物の作製のためのボスウェリア・セラータ油状物の予期しない有用性を見い出した。ボスウェリア・セラータ油状物から揮発性化合物を除去した後に得られる画分であるボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を、本発明において使用した。ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）は、以下のようにして取得した。ａ）ボスウェリア・セラータゴム樹脂をメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）溶媒中に分散させ、不溶性のゴム状物質を濾過によって分離し、ｂ）ＭＩＢＫ溶液を２％ＫＯＨ溶液で繰り返し抽出して酸性化合物を除去し、ｃ）次いで、ＭＩＢＫ層を水とブラインで連続的に洗浄し、ｄ）ＭＩＢＫ層を減圧下、６０〜７０℃でエバポレートし、次いで、揮発性成分を油状残渣から真空下、７５〜８５℃で除去して粘性油状物を得、これを、本明細書において以下、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキスあるいはＢＮＲＥという。あるいはまた、ＢＮＲＥは、ａ）ボスウェリア・セラータ樹脂のアルコール抽出物を調製した後、ｂ）このアルコール抽出物をアルカリ水溶液と水不混和性有機溶媒間に分配し、ｃ）有機溶媒層を分離した後、溶媒のエバポレーションによって非酸性ボスウェリアエキス油状物を得、ｄ）高温高真空下で揮発性化合物を除去してボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を得ることによっても調製され得る。
【００２８】
上記のボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）は、予期しない特異な組成を有することがわかった。本発明者らは、カラムクロマトグラフィーと高速液体クロマトグラフィーの反復を使用し、ＢＮＲＥのさらなる分離を行ない、いくつかのジテルペノイドおよびトリテルペノイド化合物を単離した。これらの化合物の構造を、１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＨＳＱＣおよびＨＭＢＣ、質量スペクトルデータを用いて精密にキャラクタライズした。同定された化合物は、ギオール（１）、ネフテノール（２）、セラトール（３）、ジテルペンＸ（４）、ルペオール（５）、オレアナ−１２−エン−３β−オール（６）、オレアナ−１２−エン−３α−オール（７）、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール（８）およびウルサ−１２−エン−３α−オール（９）（図１に示す）。このようにして得た純粋な化合物を、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を標準化するための植物化学的マーカーとして使用した。植物化学的分析の結果を表１にまとめ、ＢＮＲＥの植物化学的プロフィールを示すクロマトグラムを図２に示す。
【００２９】
ボスウェリアエキスを含む相乗作用性組成物：
本発明者らは、いくつかの細胞系インビトロ抗炎症性試験を、広範なボスウェリアエキスおよびＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスにおいて実施した。このような試験により、予期せず、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を３０％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス［ＢＥ３０％］は、ＴＨＰ−１ヒト−単球−マクロファージ細胞において、インビトロで５−ＬＯＸとＦＬＡＰのＬＰＳ誘導型発現を強力に下方調節すること示された（図３）。
【００３０】
ＡＫＢＡを選択的に富化した前記のＢ．セラータエキスを、次いで、選択したいくつかの成分と合わせると、より充分な抗炎症活性を有する組成物が得られた。個々のエキスおよびその組成物を、５−リポキシゲナーゼ酵素（５−ＬＯＸ）を阻害する有効性について試験した。非常に驚くべくことに、ＡＫＢＡを３０％に選択的に富化したボスウェリア・セラータゴム樹脂エキス（ＢＥ３０％）とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む組成物は、５−ＬＯＸの相乗的阻害を示すことがわかった。ＢＥ３０％とＢＮＲＥを２：１の比率で含む該組成物−２は、２５μｇ／ｍＬで３７．７％阻害を示したのに対し、同じ濃度のＢＥ３０％およびＢＮＲＥでは、それぞれ、３１．８％および２０．６％阻害が示された。組成物−２およびその個々の成分によって示された５−リポキシゲナーゼ阻害の比較を図４に示す。
【００３１】
次いで、ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）および組成物−２を、マトリックスメタロプロテアーゼ−３（ＭＭＰ−３）生成の阻害における有効性について、ＴＮＦα誘導型ＳＷ９８２ヒト滑膜細胞で試験した。無細胞培養上清み中のＭＭＰ−３生成量を、ＥＬＩＳＡ開発キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）によって推定した。驚くべきことに、組成物−２は、この滑膜細胞において、個々のＢＥ３０％およびＢＮＲＥのいすれで示されるものよりも充分なＭＭＰ−３生成の阻害を示し、５−ＬＯＸに対して相乗作用効果を示すことが確認された。組成物−２、ＢＥ３０％およびＢＮＲＥは、それぞれ、４６．７８、５８．７５および１１９．３２μｇ／ｍＬの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を示した。組成物−２によって示された相乗作用性ＭＭＰ−３阻害と、その個々の成分ＢＮＲＥおよびＢＥ３０％によって示されたものとの比較を図５にまとめる。
【００３２】
次いで、組成物−２によってインビトロで示された相乗作用効果を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの完全フロインドアジュバント誘導関節炎モデルでのインビボ試験に供した。３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸を３０％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）をそれぞれ、１：１および２：１の比率で含む組成物−１および組成物−２の抗炎症有効性を、インビボ試験によって、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの完全フロインドアジュバント誘導関節炎モデルにおいて評価し、その有効性を、個々の成分ＢＥ３０％ およびＢＮＲＥで示される有効性と比較した。処置群ラットには、ＡＫＢＡを３０％まで選択的に富化したボスウェリアエキス（ＢＥ３０％）またはボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）、または組成物−１もしくは組成物−２を１４日間、１００ｍｇ／ｋｇ体重で補給した。陽性対照群には、プレドニゾロンを１０ｍｇ／ｋｇ体重で補給した。第１４日目、完全フロインドアジュバント（ＦＣＡ）を、各動物の左後足の足底下（ｓｕｂ−ｐｌａｎｔａｒ）領域に皮下注射した。実験は２８日目に終了した。血液試料を各動物から一定間隔で採取し、足体積をプレチスモグラフィ装置によって、ＦＣＡ注射の日とＦＣＡ接種の１３日後に測定した。足浮腫体積の差を炎症応答とみなす。ＢＥ３．０％、ＢＮＲＥ、組成物−１、組成物−２およびプレドニゾロンでのインビボ抗炎症応答を、ＣＭＣ補給対照と比較したときの足浮腫の抑制パーセントを計算することにより推定した。
【００３３】
ＡＫＢＡが３０％のボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を補給した処置群では、それぞれ、３７％および１０％の足浮腫の低減が示された。しかしながら、同じ用量レベルの組成物−１および組成物−２を補給した処置群では、より充分な足浮腫の低減が示され、それぞれ、４４％および５４％の足体積の縮小が得られた。プレドニゾロンを補給した陽性対照群では、１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで５３％阻害が示された。図６にまとめた結果により、本発明の組成物−１および−２で、相乗作用効果がインビトロで観察されたことが確認される。
【００３４】
さらに、バイオマーカーである腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）のレベルを、処置群および対照群の血清中にて評価した。組成物−１および組成物−２を補給した処置群では、図７（ＡおよびＢ）に示されるように、個々の成分ＢＥ３０％およびＢＮＲＥを補給した処置群によって示されたレベルと比べて有意に充分な血清バイオマーカーＴＮＦ−αとＩＬ−１の低減が示された。
【００３５】
したがって、前述のデータは、ＡＫＢＡ富化ボスウェリアエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む組成物が、同じ用量レベルの個々の成分で得られる有効性と比べて抗炎症剤としてより強力であり、これらのエキスの併用の予期しない相乗作用性を発揮することを示す。
【００３６】
３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）が３０％含まれるように選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを用いて本発明を実証する。しかしながら、ＡＫＢＡ含量を重量基準で１０％〜１００％に選択的に富化した任意の他のボスウェリア・セラータエキスもまた、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）と組合せて相乗作用性組成物（１種類または複数種）の作製に使用され得る。
【００３７】
ＡＫＢＡ含量を１０％〜１００％に富化したボスウェリア・セラータエキスは、以下のプロセス、例えば限定されないが、（１）市販のボスウェリア・セラータエキス中の他のβ−ボスウェリア酸をＡＫＢＡエキス３５〜４５％に、本発明者らが、ＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＩＮ０５／００００７４（２００５年３月７日付）およびＰＣＴ特許公開公報ＷＯ０３０７４０６３Ａ１および付与されたインド特許第２０５２６９号にて報告した既報のプロセスを用いて変換し、（２）その後、この変換生成物をＡＫＢＡエキス１０〜４５％に、薬学的または栄養学的に許容され得る担体または希釈剤を用いて希釈するか、あるいは（３）上記の変換生成物をＡＫＢＡ９０〜９９％に、例えば限定されないが、カラムクロマトグラフィー、分配、晶出などの工程の組合せを用いて精製し、次いで、純粋なＡＫＢＡを所望のＡＫＢＡ濃度（２０〜９９％）まで、薬学的もしくは栄養学的に許容され得る担体もしくは希釈剤または市販の低級ボスウェリア・セラータエキスを用いて希釈するか、（４）あるいはまた、ゴム樹脂中に天然に存在するＡＫＢＡを、ＡＫＢＡ１０〜９９％の範囲の所望の濃度まで、例えば限定されないが、抽出、カラムクロマトグラフィー、分配、晶出などの工程の組合せを用いて精製し、次いで、高率パーセント画分を所望の濃度に、薬学的もしくは栄養学的に許容され得る担体もしくは希釈剤または市販の低級ボスウェリア・セラータエキスを用いて希釈すること、の１つ以上を用いて得ることができる。
【００３８】
本発明の種々の実施形態の概要を以下に示す。
【００３９】
一態様において、本発明は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリアエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性抗炎症組成物を提供する。該組成物は、炎症および／炎症に関連する、もしくは炎症が付随するまたは１つ以上の疾患状態を予防または治癒または処置するために使用され得る。
【００４０】
本発明の別の態様において、ＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスの治療有効量とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を、ある特定の比率で合わせると相乗作用性の抗炎症効果がみられ、その効果は、該成分を個々に投与した場合に得られるものよりも充分であることがわかり、また、炎症促進性の生体分子／タンパク質マーカーの発現または生成の相乗作用性の改善がみられた。
【００４１】
さらなる態様において、本発明は、ＡＫＢＡエキスを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性組成物であって、炎症に関連する、または炎症が付随する生体分子／バイオマーカー／特定のレドックス感受性炎症促進遺伝子、例えば限定されないが、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）、マクロファージ／脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質（ａＰ２／ＦＡＢＰ）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）（ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１など）、ＮＦκＢ ＴＮＦ−αならびにＩＬ−１βの発現または生成の改善を、それを必要とする哺乳動物において行なうための組成物を提供する。
【００４２】
また別の態様において、本発明は、ＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性組成物であって、炎症と関連し、炎症が付随する１つ以上の哺乳動物の疾患状態、例えば限定されないが、喘息、アテローム性動脈硬化、内皮機能障害、アレルギー性鼻炎、皮膚炎、乾癬、嚢胞性線維症、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、片頭痛、アンギナ、慢性前立腺炎、日焼け、歯周病、多発性硬化症、ブドウ膜炎、血管形成術後再狭窄、糸球体腎炎、消化管アレルギー、腎炎、結膜炎、慢性閉塞性肺疾患、職業性喘息、湿疹、気管支炎、花粉症、蕁麻疹、アレルギー性障害の予防、コントロールおよび治療のため、ならびに喘鳴、呼吸困難、乾性咳、胸部絞扼感、首の筋肉の緊張、頻脈、胸痛、関節痛、ＵＶ照射によるコラーゲン分解、皮膚のしわ発生および皮膚の老化などの病状、ならびにこれらが付随するいくつかの他の病状のための組成物を提供する。
【００４３】
さらにまた別の態様において、本発明は、さらに、ＡＫＢＡエキスを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性組成物であって、炎症、関節炎、認知、神経系の障害、アルツハイマー病、コラーゲン分解、皮膚の老化、コレステロール低下、代謝異常および癌の１種類以上の予防、コントロールおよび治療のための組成物を提供する。関節炎の非限定的な例としては、リウマチ様（軟部組織リウマチおよび非関節リウマチ、線維筋痛症、結合組織炎、筋肉リウマチ、筋筋膜疼痛、上腕骨上顆炎、有痛性肩拘縮症、ティーツェ症候群、筋膜炎、腱炎、腱滑膜炎、滑液包炎など）、若年性慢性関節障害、脊椎関節障害（強直性脊椎炎）、変形性関節症、急性痛風、慢性痛風および全身性エリテマトーデスが付随する高尿酸血症および関節炎、ならびに変形性関節炎が挙げられる。
【００４４】
他の好ましい実施形態において、本発明は、さらに、ボスウェリア・セラータのゴム樹脂を水不混和性有機溶媒で抽出した後、該有機溶媒抽出物を水酸化カリウム水溶液などのアルカリ水溶液で、続いて水とブラインで洗浄し、次いで、最後に有機層を真空下でエバポレートした後、揮発性化合物を高温高真空下で除去し、ＢＮＲＥを得ることを含む、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の作製方法を提供する。水不混和性有機溶媒は、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、メチルイソブチルケトンもしくは任意の他の水不混和性溶媒、またはその混合物から選択され得る。
【００４５】
また、さらなる実施形態において、ボスウェリア・セラータそのままの油状物をＢＮＲＥの代わりに、相乗作用性組成物の作製に使用してもよい。
【００４６】
他の好ましい実施形態において、本発明は、さらに、
（ａ）ボスウェリア・セラータのゴム樹脂を水不混和性有機溶媒で抽出し、この抽出物を注意深く濾過して不溶解樹脂物質を除去し、次いで、該有機溶媒抽出物を水酸化カリウム水溶液などのアルカリ水溶液で、続いて水とブラインで繰り返し洗浄し、次いで、最後に有機層を真空下、高温でエバポレートして有機溶媒を除去した後、揮発性化合物を油状残渣から高温高真空下で除去し、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を得る工程、
（ｂ）ボスウェリア・セラータゴム樹脂の酸性エキスを選択的に富化し、ＡＫＢＡを１０〜１００％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ）を得る工程、
（ｃ）ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）とＡＫＢＡ富化ボスウェリア・セラータエキスを所望の比率（１種類または複数種）で合わせ、本発明の組成物（１種類または複数種）を得る工程、
（ｄ）任意選択で、該組成物を、生物学的または薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤および添加剤から選択される１種類以上の成分と混合する工程
を含む該組成物の作製方法を提供する。
【００４７】
上記の方法における水不混和性有機溶媒は、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、メチルイソブチルケトン、ｔｅｒｔ−ブタノールまたは任意の他の水不混和性溶媒から選択され得る。
【００４８】
ＡＫＢＡの富化に必要とされるボスウェリア・セラータゴム樹脂の酸性エキスは、そのゴム樹脂から既知の手順を用いて調製され得るか、またはボスウェリア酸を標準化した市販のボスウェリア・セラータエキス、好ましくは、全酸のほぼ８５％（滴定解析法による）まで標準化したエキスの一群から選択され得る。
【００４９】
他の実施形態において、本発明は、さらに、
ａ）ＢＮＲＥの主要化合物をマーカーとして同定し、該化合物を＞９８％純度で単離した後、スペクトルデータを用いて充分にキャラクタライズする工程、
ｂ）既知量の各マーカー化合物を個々に、ＰＤＡ検出器を有するＨＰＬＣシステムに載置されたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ分析用カラム（４．６×２５０ｍｍ，５μ）にインジェクトし、各マーカーの保持時間とピーク面積を、２１０ｎｍおよび２４８ｎｍでのＵＶ検出を用いて測定する工程、ここで、該カラムは３０℃に維持され、０．１％ｖ／ｖのオルトリン酸を含む水およびアセトニトリルをそれぞれ２７％および７３％で含む二成分溶媒混合物で、１．５ｍＬ／分の流速にて溶出する；次いで、
ｃ）既知量のＢＮＲＥ試料を同様の条件下で分析し、混合物中のマーカーを、該試料のピークの保持時間と標準のものとの比較に基づいて、任意選択で該試料を各マーカーと同時にインジェクトすることによって同定し、次いで、該試料中の各マーカーのパーセントを、そのピーク面積を既知濃度の標準に対応するピーク面積と比較することにより推定する工程、次いで、
ｄ）全マーカーの総量に対するパーセントで示すことによりＢＮＲＥの組成を得、次いで、前記組成を他のＢＮＲＥ試料との比較に使用する工程、該マーカーとしては、限定されないが、ネフテノール、セラトール、ジテルペンＸ、ルペオール、オレアナ−１２−エン−３β−オール、オレアナ−１２−エン−３α−オール、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール、ウルサ−１２−エン−３α−オールおよびギオールが挙げられる、
を含む、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の同定方法を提供する。
【００５０】
本発明のまた別の態様において、ＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性抗炎症組成物は、任意選択で、１種類以上の薬学的または栄養補強的または栄養学的に許容され得る賦形剤または希釈剤または塩または添加剤を含む。
【００５１】
さらに、本発明の他の実施形態は、そのまま、あるいは顆粒剤または粉剤またはペースト剤として粉砕形態および／または非改良形態での前記相乗作用性組成物の使用法を提供する。あるいはまた、活性成分は、慣用的な生物学的または薬学的に許容され得る塩（１種類もしくは複数種）または添加剤（１種類もしくは複数種）または賦形剤（１種類もしくは複数種）を添加することにより、固形、半固形または液状の投薬形態に製剤化される。
【００５２】
さらなる実施形態において、本発明は、治療有効量の本発明の新規な組成物が経口、経表面、経皮、非経口などの具体的な投薬形態で、またはキットの形態で、それを必要とする被検体または患者に投与できることを提供する。本発明の組成物の製剤のための具体的な投薬形態としては、限定されないが、経口薬剤、例えば、錠剤、軟カプセル剤、硬カプセル剤、丸剤、顆粒剤、粉剤、注入用液剤、注射用液剤、クリーム剤、ゲル剤、乳剤、軟膏、注腸剤、医薬パック、栄養補助食品、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤、吸入剤、マウススプレーなど；ならびに非経口薬剤、例えば、注射剤、滴剤、坐剤などが挙げられる。
【００５３】
本発明の別の実施形態は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリアエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の組成物（１種類または複数種）を含むキットを提供する。さらに、キットに、該組成物（１種類または複数種）を、炎症および炎症状態（例えば限定されないが、喘息、関節炎、アテローム性動脈硬化）のコントロール、予防および治療に使用するための使用説明書を含めてもよい。
【００５４】
本発明のさらなる実施形態において、上記の任意の方法を用いて投与される製剤（１種類または複数種）を形成するため、該組成物に、さらに、有効量の１種類以上の医薬用または栄養補助用または栄養学的に許容され得る薬剤、例えば限定されないが、酸化防止剤（１種類もしくは複数種）、アダプトゲン（１種類もしくは複数種）、抗炎症剤（１種類もしくは複数種）、抗糖尿病剤（１種類もしくは複数種）、抗肥満剤（１種類もしくは複数種）、抗アテローム性動脈硬化剤（１種類もしくは複数種）、バイオプロテクタントおよび／またはバイオアベイラビリティ向上剤（１種類もしくは複数種）ならびに微量金属あるいは賦形剤（１種類もしくは複数種）または薬学的に許容され得る塩（１種類もしくは複数種）または添加剤（１種類もしくは複数種）ならびにその組成物または混合物を含めてもよい。
【００５５】
本発明において使用される薬学的に許容され得る抗炎症剤の例としては、限定されないが、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、メトトレキサート、スルファサラジン、ナプロキセン、ジクロフェナクおよびイブプロフェンが挙げられる。
【００５６】
本発明において使用される生物学的または薬学的に許容され得る担体の例としては、限定されないが、界面活性剤、賦形剤、結合剤、希釈剤、崩壊剤、滑沢剤、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁化剤および薬物送達系が挙げられる。
【００５７】
固形の担体または希釈剤または賦形剤の好ましい例としては、限定されないが、グルコース、フルクトース、スクロース、マルトース、黄色デキストリン、白色デキストリン、エアロゾル、微晶質セルロース、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、ラクトース、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アカシア、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ群、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸、カルシウム塩、色素、フレーバーおよび保存料が挙げられる。
【００５８】
液状担体（希釈剤）の好ましい例としては、蒸留水、生理食塩水、グルコース水溶液、アルコール（例えば、エタノール）、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール；ならびに油性担体、例えば、種々の動物油および植物油、白軟パラフィン、パラフィンおよびワックスが挙げられる。
【００５９】
本発明の択一的な態様において、本発明における本発明の組成物は、制御放出ポリマー系コーティングを使用し、ナノテクノロジー、マイクロカプセル封入、コロイド状担体系などの手法、および当該技術分野で知られた他の薬物送達系によって徐放性錠剤の形態で送達される。前記製剤は、１日１回の投与または１日に複数回の投与のために設計され得る。
【００６０】
また、本発明によれば、本発明の組成物は、既存または新規な食品および飲料の形態（１種類または複数種）、例えば、固形食品（シリアル、ベビーフード（１種類もしくは複数種）、チョコレートまたは栄養バーなど）、半固形食品（クリームもしくはジャム、またはゲル、清涼飲料、コーヒー、お茶、乳飲料、乳製品、乳酸菌飲料、スープ、ドロップ、キャンディ、チューインガム、チョコレート、グミキャンディ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、水羊羹、ゼリー、クッキー、ベーカリー製品など）などに配合または添加され得る。このような種々の組成物または調製物または食品および飲料は、炎症および／または炎症が付随する、もしくは炎症に関連する１つ以上の疾患状態、例えば限定されないが、喘息、関節炎 炎症性腸疾患、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性の非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化、脈管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、成人性呼吸促迫症候群、糖尿病、代謝異常、皮膚障害における遅延型過敏症およびアルツハイマー病の治療および／または予防のための健康食品として有用である。
【００６１】
本発明の種々の例示的な実施形態において、ヒトまたは哺乳動物に投与または補給（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）される本発明の相乗作用性組成物の量は、均一でなくてもよく、製剤の性質によって異なることを提供するが、ヒトまたは動物に提案される該エキスまたは画分の投薬量は、好ましくは０．１〜７５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは約０．５〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【００６２】
また、本発明の別の実施形態は、上記の種々の製剤、食品および飲料組成物中の本発明の組成物の量が均一でなくてもよく、製剤の性質によって異なることを提供し、ヒトまたは動物に提案される該組成物の投薬量は、例えば約０．００１％〜９９％、より好ましくは約０．００１〜９０ｗｔ％である。
【００６３】
重要な実施形態の一例において、選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス中のＡＫＢＡの濃度は、重量基準で１０％〜１００％の範囲で異なる。
【００６４】
別の実施形態において、選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス中のＡＫＢＡの濃度は、好ましくは２５％〜９５％、より好ましくは２５％〜４５％の範囲で異なる。
【００６５】
また別の実施形態において、相乗作用性組成物は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを重量基準で１０％〜９０％、およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を重量基準で９０％〜１０％含むものであり得る。
【００６６】
さらに別の実施形態において、相乗作用性組成物は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを重量基準で３０％〜７０％、およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を重量基準で７０％〜３０％含むものであり得る。
【００６７】
本発明の別の実施形態は、上記の前記相乗作用性組成物の任意の成分を、組成物の総重量に対して重量基準で０．００１％〜８０％まで、好ましくは０．００１％〜５０％を含む保健食品または飲料である。
【００６８】
本発明のさらなる実施形態は、本発明の相乗作用性組成物（１種類または複数種）の量が、製剤の総重量の重量基準で１％〜１００％の範囲で異なることを提供する。
【００６９】
別の実施形態において、さらに、本発明は、炎症ならびに炎症が付随または関連するいくつかの疾患、例えば、喘息、アテローム性動脈硬化および関節炎などを治癒、予防または治療する目的で、本発明の組成物を、動物の餌に使用されている種々の成分と混合することを含む。
【００７０】
動物の餌に添加される組成物または製剤の形態は特に限定されず、そのまま、または組成物（１種類もしくは複数種）として種々の調理済食品製品および加工食品製品に添加され得る。その量は、食品製品の場合に使用される量と同じであり得る。また、同様に、その成分は動物の餌の調製中に添加してもよく、調製後に添加してもよい。
【００７１】
以下の実施例は、好ましい実施形態を含むものであり、本発明の実施を説明るために提供する。示した具体的詳細事項は、本発明の好ましい実施形態の一例であって、その例示的論考の目的のためのものであり、本発明の範囲を限定するものでないことは理解されよう。
【実施例１】
【００７２】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の調製：
ボスウェリア・セラータゴム樹脂（１００ｇ）を、６００ｍＬのメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）溶媒中に分散させ、室温で６０分間攪拌した。不溶性のゴム状物質を濾過によって分離した。ＭＩＢＫ溶液を２％ＫＯＨ溶液（３×２００ｍＬ）で繰り返し抽出し、酸性化合物を除去した。次いで、ＭＩＢＫ層を、水（４００ｍＬ）とブライン（２００ｍＬ）で連続的に洗浄した。ＭＩＢＫ層を減圧下、６０〜７０℃でエバポレートし、揮発性成分を油状残渣から、真空下、７５〜８５℃で除去し、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス、すなわちＢＮＲＥを粘性油状物（１２ｇ）として得た。
【００７３】
択一的に、ボスウェリア・セラータから収集したゴム樹脂（２５０ｇ）をメタノール（３００ｍＬ×３）で抽出し、合わせたメタノール抽出物を濃縮した。残渣（５０ｇ）を酢酸エチル（４００ｍＬ）に溶解させ、２Ｎ ＫＯＨ（３×１００ｍＬ）で３回抽出した。有機層を水（２×２００ｍＬ）とブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、エバポレートし、ボスウェリア油状物を得た。揮発性化合物をこの油状物から、真空下、７５〜８５℃でエバポレートし、２２ｇのボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を得た。
【００７４】
ＢＮＲＥを、通常のシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーに供した。ＴＬＣに基づいて同一の画分を合わせ、合わせた画分を、個々に、溶離剤としてヘキサン／酢酸エチルまたはヘキサン／アセトンの混合物を用いたシリカゲルでの反復カラムに供し、純粋な化合物を得た。一部の純粋でない画分を、さらに、逆相Ｃ１８シリカカラムを用いた分取用ＨＰＬＣに供し、純粋な化合物を得た。構造は、１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＨＳＱＣおよびＨＭＢＣまたは質量スペクトルデータを解析し、次いで、データを既知化合物のものと比較することにより確証した。主要化合物のうち９種類は、図１に示したように、ギオール（ｇｕｉｏｌ）（１）、ネフテノール（２）、セラトール（ｓｅｒｒａｔｏｌ）（３）、ジテルペンＸ（４）、ルペオール（５）、オレアナ−１２−エン−３β−オール（６）、オレアナ−１２−エン−３α−オール（７）、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール（８）およびウルサ−１２−エン−３α−オール（９）と同定されている。次いで、この純粋な化合物を使用し、ＨＰＬＣ法を用いて、ボスウェリア・セラータの非酸性エキス（ＢＮＲＥ）を標準化した。この新規なＢＮＲＥ組成物を、分析用ＨＰＬＣ法に基づいて評価し、保持時間（Ｒｔ）を表１にまとめる。ＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示した。
【００７５】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の解析のためのＨＰＬＣ法
【表１】
【実施例２】
【００７６】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の同定方法： ＢＮＲＥの同定方法は、以下のＨＰＬＣ法を用いた、ＢＮＲＥの主要化合物を含む組成の推定を伴う。溶媒の勾配を、表２にまとめる。既知量の各マーカー化合物を個々に分析した。各標準化合物の保持時間とピーク面積を記録する：次いで、既知量のＢＮＲＥ試料を同様の条件下で分析し、各マーカーを、該試料のピークの保持時間と標準のものとの比較に基づいて、およびさらに、該試料を各マーカーと同時にインジェクトすることにより同定した。試料中の各マーカーのパーセントを、以下に示すとおりに、そのピーク面積を既知濃度の標準化合物に対応するピーク面積と比較することにより推定した。ＢＮＲＥの組成物を表３にまとめる。
【００７７】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｒａｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ，（４．６×２５０ｍｍ）５μ
波長：２４８ ＆ ２１０ｎｍ
流速：１．５０ｍＬ／分
インジェクション容量：２０μｌ
温度：３０℃
系：勾配
移動相：ポンプＡ：０．１％ｖ／ｖのオルトリン酸を含む水
ポンプＢ：アセトニトリル
【００７８】
ここで、０．１％ｖ／ｖのオルトリン酸は、１ｍＬのオルトリン酸を水で１０００ｍｌに希釈することにより調製する。
【００７９】
標準：ＢＮＲＥの主要化合物をマーカーとして選択し、該化合物を、単離手法の組合せを用いて＞９８％純度で単離した。このようにして得たこれらの純粋な標準は、スペクトルデータの組合せを使用し、ギオール（１）、ネフテノール（２）、セラトール（３）、ジテルペンＸ（４）、ルペオール（５）、オレアナ−１２−エン−３β−オール（６）、オレアナ−１２−エン−３α−オール（７）、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール（８）およびウルサ−１２−エン−３α−オール（９）であることが充分にキャラクタライズされた。
【００８０】
【表２】
【００８１】
【表３】
【００８２】
標準の調製：
約１０．０ｍｇの研究所内参照試料を５０ｍｌ容の容量フラスコ内に精秤し、メタノールで溶解させ、規定の容積にする。
【００８３】
試料の調製：
約２５０．０ｍｇの試料を５０ｍｌ容の容量フラスコに精秤し、メタノールで溶解させ、規定の容積にする。
【００８４】
手順：
標準および試料溶液を、ともに０．４５μ膜フィルターに通して濾過し、インジェクションする。
【００８５】
計算：
＝（試料のピーク面積×標準の濃度×標準の純度）／（標準のピーク面積×試料の濃度）＝％
【実施例３】
【００８６】
ＡＫＢＡを１０〜１００％に富化したボスウェリア・セラータエキスの調製：
滴定法によって全ボスウェリア酸８５％に標準化し、３％の３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を含む市販のボスウェリア・セラータエキスを、１０〜１００％までのＡＫＢＡの選択的富化プロセスに使用した。この混合物は、ＨＰＬＣ分析法により、４５〜５０％の範囲の全β−ボスウェリア酸［３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸、β−ボスウェリア酸、３−Ｏ−アセチル−β−ボスウェリア酸、１１−ケト−β−ボスウェリア酸、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸］を含む。この混合物を、３５〜４５％のＡＫＢＡを含むように、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＩＮ０２／０００３４（２００２年３月５日出願）およびＰＣＴ／ＩＮ０５／００００７４（２００５年３月７日出願）に記載の手順の一方を用いて選択的に富化した。富化プロセスにクロマトグラフィー工程もしくは晶出または両方を追加することにより、ＡＫＢＡをさらに４５〜１００％に富化した。３５〜１００％の範囲のＡＫＢＡを有する富化エキスを賦形剤で、好ましくは白色デキストリンで希釈することにより、１０〜３５％の３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を含む富化エキスを調製した。ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）を、本発明において使用する。
【実施例４】
【００８７】
組成物−１：組成物−１は、単位用量の以下の成分：ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）１部（１ｇ）と、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）１部（１ｇ）を混合することにより調製した。
【実施例５】
【００８８】
組成物−２：組成物−２は、単位用量の以下の成分：ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）２部（２ｇ）と、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）１部（１ｇ）を混合することにより調製した。
【実施例６】
【００８９】
組成物−３：組成物−３は、単位用量の以下の成分：ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）１部（１ｇ）と、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）２部（２ｇ）を混合することにより調製した。
【実施例７】
【００９０】
組成物−４：組成物−４は、単位用量の以下の成分：ＡＫＢＡ ４０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ４０％）３部（３ｇ）と、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）２部（２ｇ）と、白色デキストリン１部（１ｇ）を混合することにより調製した。
【実施例８】
【００９１】
ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）による５−ＬＯＸおよびＦＬＡＰの阻害：重要な中間（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙ）タンパク質であるアラキドン酸媒介性の炎症経路に対するＢＥ３０％の効果を、ＬＰＳ誘導型ＴＨＰ−１ヒト−単球−マクロファージ細胞において、インビトロで評価した。簡単には、ＴＨＰ−１ヒト単球−マクロファージ細胞を１０μｇ／ｍｌのＢＥ３０％で１時間前処理した後、該細胞をＬＰＳで２時間初回刺激し、炎症応答を誘導した。細胞内タンパク質を細胞溶解バッファーによって抽出し、イムノウエスタンブロットに供し、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）およびＦＬＡＰの発現のモジュレーションを検出した。図３にまとめたように、ＬＰＳ誘導型ＴＨＰ−１ヒト−単球−マクロファージ細胞において、ＢＥ３０％により５−ＬＯＸとＦＬＡＰの発現が有意に阻害された。
【実施例９】
【００９２】
ＡＫＢＡが３０％のボスウェリアエキス（ＢＥ３０％）、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス ＣＢＮＲＥ）および組成物−２の５−リポキシゲナーゼ阻害活性：
５−リポキシゲナーゼ酵素阻害活性を、Ｓｃｈｅｗｅらの方法（Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｏｌ，Ｖｏｌ ５８，１９１−２７２，１９８６）にＲｅｄｄａｎｎａら（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ １８７，２６８−２７７，１９９０）による改良を加えて使用し、測定した。アッセイ混合物は、８０μＭのリノール酸と充分量のイモ５−リポキシゲナーゼ（５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．３）中）を含むものとした。混合酵素バッファーをリノール酸に添加することにより反応を開始し、酵素活性を、２３４ｎｍにおける吸光度の増大としてモニタリングした。反応を１２０秒間モニタリングし、試験物質ＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−２の阻害可能性を、種々の濃度の試験物質を２分間インキュベートした後、リノール酸を添加することにより測定した。アッセイはすべて、３回行なった。阻害パーセントは、試験物質で得られた曲線の傾きを、対照のものと比較することにより計算した。ＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−１の阻害パーセントを表４にまとめ、図４に示す。
【００９３】
【表４】
【実施例１０】
【００９４】
ＡＫＢＡが３０％のボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス ＴＢＮＲＥ）および組成物−２によるマトリックスメタロプロテアーゼ−３（ＭＭＰ−３）生成の阻害：
ＭＭＰ−３を、ＴＮＦα誘導型ＳＷ９８２ヒト滑膜細胞において評価した。簡単には、ＳＷ９８２細胞を、２ｍＭのグルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび１０％のウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を有するＤＭＥＭ中で培養した。ウェル１つあたり５０００個の細胞を、９６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＵＳＡ）に、実験の１日前に播種した。培養培地を、１％のウシ胎仔血清を含有する新鮮ＤＭＥＭと交換した。ＡＫＢＡが３０％のボスウェリアエキス（ＢＥ３０％）、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）および組成物−２を、培地中で５〜１００ｎｇ／ｍｌの範囲で連続希釈し、細胞とともに５％ＣＯ２で３７℃にて２時間プレインキュベートし、次いで、１０ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で２４時間刺激した。培養上清みを回収し、ＥＬＩＳＡ開発キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）によるＭＭＰ−３生成の測定に使用した。無細胞培養上清み中のＭＭＰ−３濃度は、既知濃度のＭＭＰ−３で作成した標準曲線に光学濃度を補間することにより定量的に推定した。濃度に対して阻害パーセントプロットすることにより作成したプロットから、ＭＭＰ−３の５０％阻害の阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。ＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−２では、それぞれ、５８．７５、１１９．３２および４６．７８μｇ／ｍＬのＩＣ５０値が示された。これらの阻害の比較を図５に示す。
【実施例１１】
【００９５】
３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）が３０％まで選択的に富化したボスウェリアエキス、すなわちＢＥ３０％とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）をそれぞれ１：１および２：１の比率で含む組成物−１および組成物−２のインビボでの相乗作用性抗炎症活性：
３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸が３０％まで選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（５−Ｌｏｘｉｎ）とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）をそれぞれ１：１および２：１の比率で含む組成物−１および組成物−２の抗炎症有効性を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの完全フロインドアジュバント誘導関節炎モデルでのインビボ試験によって評価した。いずれかの性のラットを無作為に選択し、各群に５匹の動物を含む５つの群に分けた。処置群ラットには、ＡＫＢＡを３０％まで選択的に富化したボスウェリアエキス（ＢＥ３０％）またはボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）、またはＢＥ３０％とＢＮＲＥをそれぞれ１：１および２：１で含む組成物−１もしくは組成物−２を１４日間、１００ｍｇ／ｋｇ体重で補給した。陽性対照群には、プレドニゾロンを１０ｍｇ／ｋｇ体重で補給した。供給物はすべて、投与用に１０ｍＬの１％ＣＭＣで希釈した。対照群の動物には、同じ容量の１％ＣＭＣを与えた。第１４日目、完全フロインドアジュバント（ＦＣＡ）を、各動物の左後足の足底下領域に皮下注射した。実験終了時、動物を致死させ、肝臓組織試料を切り取り、アリコートに分けて−８０℃で保存した。血液試料を各動物から一定間隔で採取し、足体積をプレチスモグラフィ装置によって、ＦＣＡ注射の日とＦＣＡ接種の１３日後に測定した。ＦＣＡ注射の日と誘導後１３日目での浮腫の体積の差を炎症応答とみなす。ＢＥ３．０％、ＢＮＲＥ、組成物−１、組成物−２およびプレドニゾロンでのインビボ抗炎症応答を、ＣＭＣ補給対照と比較したときの足浮腫の抑制パーセントを計算することにより推定した。
【００９６】
ＡＫＢＡを３０％まで選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を補給した処置群では、図６に示されるように、それぞれ、３７％および１０％の足浮腫の低減が得られたのに対し、プレドニゾロンを補給した処置群では５３％の抑制が示された。しかしながら、同じ用量レベルの組成物−１および組成物−２を補給した処置群では、図６に示されるように、それぞれ、４４％および５４％の足体積の縮小が示された。この相乗作用有効性は、バイオマーカーである腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の評価によって、さらに実証された。組成物−１および組成物−２を補給した処置群では、図７に示されるように、個々の成分ＢＥ３０％およびＢＮＲＥを補給した処置群によって示されたレベルと比べて有意に充分な血清バイオマーカーＴＮＦ−αとＩＬ−１の低減が示された。
【００９７】
当業者には、上記の実施形態に対して、その広い発明概念から逸脱することなく変更がなされ得ることが認識されよう。したがって、本発明は、開示した具体的な実施形態または実施例に限定されるのではなく、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の目的および範囲に含まれる変形例を包含することが意図されることは理解されよう。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ｂｏｓｗｅｌｌｉｃ ａｃｉｄ）（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータ（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ ｓｅｒｒａｔａ）エキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性の栄養補助用、医薬用およびダイエタリーサプリメント組成物を提供する。該組成物（１種類または複数種）は、炎症および炎症に関連する、または炎症が付随する疾患状態、例えば、喘息、関節炎、内皮機能障害などを予防、コントロールおよび治療するために使用され得る。
【０００２】
さらに、本発明は、その発現／生成が炎症性疾患時に改変される炎症促進バイオマーカータンパク質または分子の改善を包含する。
【背景技術】
【０００３】
ボスウェリア・セラータ（カンラン科）という植物のゴム樹脂は、以前から、インド系医術のアーユルヴェーダ医術の開業医によって、関節リウマチおよび痛風の処置のために使用されている。種々のゴム樹脂エキスで、実験動物において強力な抗炎症活性および抗動脈硬化活性が示されている［Ｃｕａｚ−Ｐｅｒｏｌｉｎら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ Ｆｅｂ ２００８］。単離されたボスウェリア化合物の１つである酢酸インセンスオールは、ＮＦκＢインヒビターであり、抗炎症化合物として有用であることが示された［Ｍｏｕｓｓａｉｅｆｆら，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ７２，１６５７−１６６４，２００７］。以前に、Ｂ．セラータのゴム樹脂のエタノール抽出物は、ラットの腹膜好中球においてロイコトリエンＢ４の形成を抑制することが観察された。ロイコトリエンＢ４は、炎症反応の重要なメディエータの１つである［Ａｍｍｏｎ，Ｈ．Ｐ．Ｔ．ら，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ，５７，２０３（１９９１）］。ボスウェリアエキスは、強力な抗関節炎因子であり［Ｋｉｍｍａｔｋａｒら；Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００３ Ｊａｎ；１０（１）：３−７］、免疫調節因子である［Ｐｕｎｇｌｅら；Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ．２００３ Ｄｅｃ；４１（１２）：１４６０−１４６２］ことが見い出された。また、ボスウェリア・セラータのコレステロール低下作用も示された［Ｚｕｔｓｈｉ Ｕら，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃ．１８，１８２−１８３，１９８６］。実際、ボスウェリアエキスを用いた、膝に変形性関節症を有する患者群に対する無作為化二重盲検プラセボ対照比較クロスオーバー臨床試験では、痛みの低減、腫脹の減少および膝の屈曲の増大に関して統計学的に有意な平均改善値が示された［Ｋｉｍｍａｔｋａｒ Ｎら，Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００３；１０：３−７］。非盲検非無作為化等価性試験では、慢性大腸炎を有する３０例の患者にボスウェリアゴム（３００ｍｇ １日３回）またはスルファサラジン（１ｇ １日３回）のいずれかを投与すると、ボスウェリアによって示された治療効果は、スルファサラジンで示されるものと同等であった［Ｇｕｐｔａ Ｉら，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ．２００１；６７：３９１−３９５］。別の等価性試験では、活動期クローン病を有する患者に対する無作為化二重盲検試験において、ボスウェリア標準化エキスにより、メサラジンと同等、またはより充分な治療による改善が示された［Ｇｅｒｈａｒｄｔ Ｈら，Ｚ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ２００１；３９：１１−１７］。また、６週間の二重盲検プラセボ対照比較試験において、ボスウェリアゴム樹脂により、気管支喘息を有する患者において統計学的に有意な改善が示された［Ｇｕｐｔａ Ｉら，Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ １９９８；３：５１１−５１］。
【０００４】
また、特許文献にも、ボスウェリアの種々の活性が記載されている。いくつかを以下に引用する。
【０００５】
ＰＣＴ特許公開公報第０３０７４０６３Ａ１号および付与されたインド特許第２０５２６９号は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸が１００％に富化された画分の作製方法に関する。ボスウェリア種のゴム樹脂の有機溶媒抽出物を、まず酸化に供し、次いでアセチル化に供する（またはその逆も同様）。これにより、画分中に存在する低効力のボスウェリア酸がＡＫＢＡに変換される。この処理済画分を、さらにクロマトグラフィー分離手法による精製および分離に供し、純度を上げ、夾雑物を除去する。このプロセスにより、ＡＫＢＡが１０〜１００％に富化された治療適用のための画分の取得がもたらされる。
【０００６】
欧州特許出願第１６３７１５３Ａ１号は、特に、炎症過程および線維症過程に対する医薬としてのボスウェリア・セラータエキスと植物性抗線維症剤との併用剤（ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）に関する。かかる併用剤において、ボスウェリア・セラータは、乾燥エキスとして５〜５０％の量で、植物性抗線維症剤は、乾燥エキスとして５０〜９５％（重量基準）の量で存在する。
【０００７】
米国特許第５６２９３５１号は、ボスウェリア酸混合物を含み、抗炎症活性および抗潰瘍発生活性を示す新規な画分に関する。また、抗炎症活性、抗関節炎活性および抗潰瘍発生活性を示す新規なボスウェリア酸化合物が開示されている。また、ボスウェリア酸画分およびその個々のボスウェリア酸の単離方法開示されている。
【０００８】
米国特許５７２０９７５号は、アルツハイマー病の予防または処置のための医薬の製造のための、インセンス（乳香）、インセンス抽出物、インセンスに含有される物質、その生理学的に許容され得る塩、誘導体および生理学的塩、純粋なボスウェリア酸、その生理学的に許容され得る塩、誘導体、該誘導体の塩の使用に関する。
【０００９】
米国特許第５８８８５１４号は、骨または関節の炎症を特徴とする病状を有する哺乳動物を処置するための組成物であって、ボスウェリア・セラータエキスが一成分として使用されている組成物に言及している。
【００１０】
ＰＣＴ特許出願第ＷＯ０８０３６９３２Ａ２号は、特異に高値の揮発性油分、ボスウェリア酸および多糖化合物を有するボスウェリア種（フランキンセンスまたは乳香）由来の組成物（特に、ヒト経口送達製剤）および該組成物の作製方法、ならびに例えば、関節炎、炎症性障害、変形性関節症、リウマチ様疾患および腰痛の処置／予防に有用なかかる組成物の使用方法に関する。
【００１１】
しかしながら、本発明者らが知る限りにおいて、ボスウェリアエキス、特にＡＫＢＡ富化エキスをボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）とともに含む、炎症状態の予防、防除および処置のための組成物に関する先行技術はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】ＰＣＴ特許公開公報ＷＯ０３０７４０６３Ａ１号
【特許文献２】インド特許第２０５２６９号
【特許文献３】欧州特許出願第１６３７１５３Ａ１号
【特許文献４】米国特許第５６２９３５１号
【特許文献５】米国特許第５７２０９７５号
【特許文献６】米国特許第５８８８５１４号
【特許文献７】ＰＣＴ特許出願ＷＯ０８０３６９３２Ａ２号
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Ｃｕａｚ−Ｐｅｒｏｌｉｎら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ Ｆｅｂ ２００８
【非特許文献２】Ｍｏｕｓｓａｉｅｆｆら，Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ７２，１６５７−１６６４，２００７
【非特許文献３】Ａｍｍｏｎ，Ｈ．Ｐ．Ｔ．ら，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄｉｃａ，５７，２０３（１９９１）
【非特許文献４】Ｋｉｍｍａｔｋａｒら；Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．２００３ Ｊａｎ；１０（１）：３−７
【非特許文献５】Ｐｕｎｇｌｅら；Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ．２００３ Ｄｅｃ；４１（１２）：１４６０−１４６２
【非特許文献６】Ｚｕｔｓｈｉ Ｕら，Ｉｎｄｉａｎ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃ．１８，１８２−１８３，１９８６
【非特許文献７】Ｋｉｍｍａｔｋａｒ Ｎら，Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００３；１０：３−７
【非特許文献８】Ｇｕｐｔａ Ｉら，Ｐｌａｎｔａ Ｍｅｄ．２００１；６７：３９１−３９５
【非特許文献９】Ｇｅｒｈａｒｄｔ Ｈら，Ｚ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ ２００１；３９：１１−１７
【非特許文献１０】Ｇｕｐｔａ Ｉら，Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ １９９８；３：５１１−５１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の主目的は、炎症および／または炎症が付随する、もしくは炎症に関連する疾患状態、例えば、喘息、アテローム性動脈硬化、内皮機能障害、変形性関節症、関節リウマチなどの予防、コントロールまたは治療のための、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータのエキスまたは画分とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の治療上有効な組合せを含む相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物を提供することである。
【００１６】
また別の態様において、本発明は、哺乳動物の炎症および付随または関連疾患、例えばこれらに限定されないが、喘息、アテローム性動脈硬化、内皮機能障害、変形性関節症、関節リウマチ、アレルギー性鼻炎、皮膚炎、乾癬、嚢胞性線維症、炎症性腸疾患、多発性硬化症、糖尿病、認知、神経系の障害、コラーゲン合成、アンチエイジング、代謝異常、全身性エリテマトーデス、ブドウ膜炎、血管形成術後再狭窄、糸球体腎炎、消化管アレルギー、腎炎、結膜炎、慢性閉塞性肺疾患、職業性喘息、湿疹、気管支炎、花粉症、蕁麻疹、アレルギー性障害の１種類（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）以上の予防、コントロールおよび治療のため、ならびに喘鳴、呼吸困難、乾性咳、胸苦しさ、首の筋肉の緊張、頻脈、胸痛、関節痛などの病状、およびこれらが付随するいくつかの他の病状のための、ＡＫＢＡ富化エキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキスを含む相乗作用性組成物を提供する。
【００１７】
さらにまた別の態様において、本発明は、関節炎または関節リウマチなどの他の炎症性疾患の１種類以上の予防、コントロールおよび治療のための、ＡＫＢＡ富化ボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性組成物を提供する。関節炎の非限定的な例としては、リウマチ様（軟部組織リウマチおよび非関節リウマチ、線維筋痛症、結合組織炎、筋肉リウマチ、筋筋膜疼痛、上腕骨上顆炎、有痛性肩拘縮症、ティーツェ症候群、筋膜炎、腱炎、腱滑膜炎、滑液包炎など）、若年性慢性関節障害、脊椎関節障害（強直性脊椎炎）、変形性関節症、急性痛風、慢性痛風および全身性エリテマトーデスが付随する高尿酸血症および関節炎ならびに変形性関節炎が挙げられる。
【００１８】
本発明のさらなる目的は、哺乳動物の炎症および／または炎症、変形性関節症、関節リウマチ、軟骨分解が付随する疾患状態と関連している生体分子またはバイオマーカー、例えば限定されないが、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）、マクロファージ／脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質−２（ａＰ２／ＦＡＢＰ）、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、細胞間細胞接着分子（ＩＣＡＭ）−１、血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ）−１、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）−３、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの発現および／または生成の改善のための相乗作用性組成物を提供することである。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の主要化合物を表す構造式１〜９を示す。
【図２】ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の植物化学的プロフィールを示すＨＰＬＣクロマトグラムを示す。
【図３】ヒト単球ＴＨＰ−１細胞における５−リポキシゲナーゼ（Ａ）およびＦＬＡＰ（Ｂ）の発現のＢＥ３０％誘導性阻害を示す代表的なイムノブロットを示す。それぞれの各パネルにおいて、棒グラフは、正規化したデンシトメトリーによる値（自由裁量単位）を示す。バーａ、ｂおよびｃは、それぞれ、対照細胞、ＬＰＳ処理細胞およびＬＰＳ＋ＢＥ３０％処理細胞を表す。
【図４】３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス［ＢＥ３０％］、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）および組成物−２の５−リポキシゲナーゼ阻害活性の比較を示す。バーは、２５μｇ／ｍＬ濃度のＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−２で示された５−リポキシゲナーゼ酵素阻害パーセントを表す。
【図５】３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス［ＢＥ３０％］、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）および組成物−２によるマトリックスメタロプロテアーゼ−３（ＭＭＰ−３）生成の阻害を示す。バーは、ＴＮＦα誘導型ＳＷ９８２ヒト滑膜細胞におけるＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−２での５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を表す。バー上部の値は、対応するＩＣ５０値を表す。
【図６】３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸を３０％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％、１００ｍｇ／ｋｇ）ならびにボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）（１００ｍｇ／ｋｇ）、ＢＥ３０％とＢＮＲＥをそれぞれ１：１および２：１の比率で含む組成物−１（１００ｍｇ／ｋｇ）および組成物−２（１００ｍｇ／ｋｇ）、ならびにプレドニゾロン（１０ｍｇ／ｋｇ）による、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットにおける完全フロインドアジュバント誘導性足浮腫の体積の抑制パーセントの棒グラフ表示を示す。
【図７】異なる動物群における血清ＴＮＦα（Ａ）およびＩＬ−１β（Ｂ）の濃度の棒グラフ表示を示す。１４日間のＦＣＡ抗原刺激後、血清ＴＮＦαおよびＩＬ−１βを、酵素免疫測定キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ＵＳＡ）によって定量的に測定した。バーａ〜ｆは、それぞれ、対照、プレドニゾロン（１０ｍｇ／ｋｇ）、ＢＥ３０％（１００ｍｇ／ｋｇ）、ＢＮＲＥ（１００ｍｇ／ｋｇ）、組成物−１（１００ｍｇ／ｋｇ）および組成物−２（１００ｍｇ／ｋｇ）を補給した群のサイトカインレベルを表す。各バーは平均±ＳＤを表す。Ｎ＝６，＊ Ｐ＜０．０５および＊＊ Ｐ＜０．００５（対照に対して）。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
炎症は、体内に侵入した病原体、損傷細胞またはアレルギー性因子などの刺激に対する脈管組織の応答である。これは、有害な病原体または因子を除去し、組織を保護するための生物体による防御機構である。炎症促進性のサイトカイン、例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦならびにＣＤ４＋、Ｔｈ２サブセット由来のＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３リンホカインなどは、炎症性疾患の免疫病因の重要な因子であると考えられている［Ｋｎｉｇｈｔ Ｄ Ａら，Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１；１０８：７９７−８０３］。５−リポキシゲナーゼは、炎症プロセスの枢要な工程であるアラキドン酸からのロイコトリエンの合成に重要な酵素である。ロイコトリエンは、炎症性疾患の枢要なメディエータである。
【００２１】
５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）の活性化および遺伝子発現は、該疾患状態の原因である。５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）は、１８ｋＤａの内在性膜タンパク質であり、アラキドン酸に特異的に結合し、これを該酵素に転移させることにより、５−リポキシゲナーゼを活性化させる［Ｍａｎｃｉｎｉら，１９９３］。したがって、ＦＬＡＰはロイコトリエンの生成を担う。そのため、５−ＬＯＸおよびＦＬＡＰのブロックまたは下方調節は、炎症状態の治療およびコントロールのための新規な治療アプローチである。
【００２２】
また、アテローム性動脈硬化も、内皮細胞機能不全の部位に、数十年の期間にわたって動脈の病変が形成されることを特徴とする炎症性疾患である。炎症は、アテローム硬化斑の発生の多くの段階において重要な役割を果たしている［ＫＫ Ｂｅｒｇら，Ｓｃａｎｄｉｎａｖｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６９，３６−４２］。
【００２３】
マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）は、亜鉛依存性エンドペプチダーゼであり、あらゆる種類の細胞外マトリックスタンパク質（コラーゲンなど、通常、組織内の細胞間の隙間に見られる）を分解することができる。ＭＭＰは、主に３つの群、コラゲナーゼで形成された線維芽細胞コラゲナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、ゼラチナーゼＡ（ＭＭＰ−２）とゼラチナーゼＢ（ＭＭＰ−９）を含むゼラチナーゼ、およびストロメリシン−１（ＭＭＰ−３）とマトリリシン（ＭＭＰ−７）を含むストロメリシンに大別される。過剰のメタロプロテアーゼは、コラーゲン、プロテオグリカンおよびゼラチンなどの生体分子の分解をもたらし、これにより、表皮に対して致命的影響が及ぼされることがあり得、また、軟骨の疾患、炎症などが発生することもあり得る。
【００２４】
ＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）：
ボスウェリア樹脂およびエキスは、以前から、炎症性疾患の処置に使用されている。ボスウェリア酸は、ボスウェリア・セラータに起因する有益な効果を担う活性化合物として同定された。副化合物である３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）は、全ボスウェリア酸のうちで最も強力な５−リポキシゲナーゼインヒビターとして同定された［Ｓａｉｌｅｒ ＥＲら，Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．１９９６、１１７（４）：６１５−８］。そのため、ＡＫＢＡ含量が富化されたエキスまたは画分は、天然エキスと比べて、より充分な有効性を示すと推定された。本発明者らは、そのＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＩＮ０５／００００７４（２００５年３月７日付）およびＰＣＴ特許公開公報ＷＯ０３０７４０６３Ａ１および付与されたインド特許第２０５２６９号において、滴定解析法によるとほぼ８５％の全ボスウェリア酸とＨＰＬＣ解析法によるとほぼ３％のＡＫＢＡ（ＢＥ３％）を含む市販のボスウェリア・セラータエキスから、ＡＫＢＡを３０〜１００％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスの作製方法を示した。前記の富化ボスウェリアエキスは、通常のボスウェリア・セラータエキス中に一般的に存在している有意な量のトリテルペン成分（ＡＫＢＡを除く）は含まないが、通常のボスウェリアエキス中の微量成分（３％まで）であるＡＫＢＡが該富化エキスの主成分であることを特徴とする特異な組成物である。通常のボスウェリアエキス中に存在している成分は、１）β−ボスウェリア酸、２）３−Ｏ−アセチル−β−ボスウェリア酸、３）１１−ケト−β−ボスウェリア酸、４）３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸、５）９−エン−β−ボスウェリア酸、６）３α−ヒドロキシウルサ−９，１１−ジエン−２４−酸、７）２α，３α−ヒドロキシウルサ−１２−エン−２４−酸である。本発明の組成物に使用する特異なＡＫＢＡ富化ボスウェリア・セラータエキスの主成分は、１）３−Ｏ−アセチル−β−ボスウェリア酸、２）３−Ｏ−アセチル−９（１１）−デヒドロ−β−ボスウェリア酸、３）３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−アミリン、４）３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−α−ボスウェリア酸である。
【００２５】
３０％のＡＫＢＡを含有する前記のボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）を、いくつかのインビトロ アッセイにおいて試験すると、３％のＡＫＢＡを含有する市販のボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３％）よりも優れていることがわかった［Ｒｏｙ Ｓ．Ｋａｎｎａら，ＤＮＡ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，２４（４）：２４４−２５５］。また、直接比較実験では、前記の富化ボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）は、Ｗｉｓｔａｒアルビノラットにおいて、アジュバント誘導炎症応答に対し、３％のＡＫＢＡを含有する天然のボスウェリアエキスと比べて有意に高い阻害を示した［Ｒｏｙ Ｓら，Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ＆ Ｒｅｄｏｘ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，８，３ ＆ ４，２００６］。ＡＫＢＡを３０％まで選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）を用いて本発明を実証する。
【００２６】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）：
ボスウェリア・セラータ樹脂は、酸性化合物、非酸性化合物および糖類を含有する。商業規模での生産の実施の際には、通常のボスウェリア・セラータエキス（全ボスウェリア酸８５％、ＢＥ３％）、主にトリテルペン酸（ボスウェリア酸など）を含有する酸性画分を、樹脂の残余成分から分離する。また、糖類および他の高分子物質も、全ボスウェリア酸の富化の際に水相中に分離する。残りの水不混和性非酸性低極性化合物を、ボスウェリア油状物画分／エキスとして分離する。このような非酸性または中性の低極性化合物は、市販のボスウェリアエキスおよびＡＫＢＡ富化ボスウェリアエキスのどちらにおいても、存在しないか、または非常に低い濃度で存在するかのいずれかである。このような非酸性成分の存在は、ＡＫＢＡの富化の増大とともに、さらに少なくなる。
【００２７】
前記の非酸性ボスウェリア油状物は、ボスウェリア・セラータゴム樹脂の主要成分であった。しかしながら、その商業的有用性は非常に限定的であり、たいていは廃棄物として廃棄される。この画分の利用の可能性は、以前からの懸案であった。本発明者らは、相乗作用組成物の作製のためのボスウェリア・セラータ油状物の予期しない有用性を見い出した。ボスウェリア・セラータ油状物から揮発性化合物を除去した後に得られる画分であるボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を、本発明において使用した。ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）は、以下のようにして取得した。ａ）ボスウェリア・セラータゴム樹脂をメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）溶媒中に分散させ、不溶性のゴム状物質を濾過によって分離し、ｂ）ＭＩＢＫ溶液を２％ＫＯＨ溶液で繰り返し抽出して酸性化合物を除去し、ｃ）次いで、ＭＩＢＫ層を水とブラインで連続的に洗浄し、ｄ）ＭＩＢＫ層を減圧下、６０〜７０℃でエバポレートし、次いで、揮発性成分を油状残渣から真空下、７５〜８５℃で除去して粘性油状物を得、これを、本明細書において以下、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキスあるいはＢＮＲＥという。あるいはまた、ＢＮＲＥは、ａ）ボスウェリア・セラータ樹脂のアルコール抽出物を調製した後、ｂ）このアルコール抽出物をアルカリ水溶液と水不混和性有機溶媒間に分配し、ｃ）有機溶媒層を分離した後、溶媒のエバポレーションによって非酸性ボスウェリアエキス油状物を得、ｄ）高温高真空下で揮発性化合物を除去してボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を得ることによっても調製され得る。
【００２８】
上記のボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）は、予期しない特異な組成を有することがわかった。本発明者らは、カラムクロマトグラフィーと高速液体クロマトグラフィーの反復を使用し、ＢＮＲＥのさらなる分離を行ない、いくつかのジテルペノイドおよびトリテルペノイド化合物を単離した。これらの化合物の構造を、１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＨＳＱＣおよびＨＭＢＣ、質量スペクトルデータを用いて精密にキャラクタライズした。同定された化合物は、ギオール（１）、ネフテノール（２）、セラトール（３）、ジテルペンＸ（４）、ルペオール（５）、オレアナ−１２−エン−３β−オール（６）、オレアナ−１２−エン−３α−オール（７）、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール（８）およびウルサ−１２−エン−３α−オール（９）（図１に示す）。このようにして得た純粋な化合物を、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を標準化するための植物化学的マーカーとして使用した。植物化学的分析の結果を表１にまとめ、ＢＮＲＥの植物化学的プロフィールを示すクロマトグラムを図２に示す。
【００２９】
ボスウェリアエキスを含む相乗作用性組成物：
本発明者らは、いくつかの細胞系インビトロ抗炎症性試験を、広範なボスウェリアエキスおよびＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスにおいて実施した。このような試験により、予期せず、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を３０％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス［ＢＥ３０％］は、ＴＨＰ−１ヒト−単球−マクロファージ細胞において、インビトロで５−ＬＯＸとＦＬＡＰのＬＰＳ誘導型発現を強力に下方調節すること示された（図３）。
【００３０】
ＡＫＢＡを選択的に富化した前記のＢ．セラータエキスを、次いで、選択したいくつかの成分と合わせると、より充分な抗炎症活性を有する組成物が得られた。個々のエキスおよびその組成物を、５−リポキシゲナーゼ酵素（５−ＬＯＸ）を阻害する有効性について試験した。非常に驚くべくことに、ＡＫＢＡを３０％に選択的に富化したボスウェリア・セラータゴム樹脂エキス（ＢＥ３０％）とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む組成物は、５−ＬＯＸの相乗的阻害を示すことがわかった。ＢＥ３０％とＢＮＲＥを２：１の比率で含む該組成物−２は、２５μｇ／ｍＬで３７．７％阻害を示したのに対し、同じ濃度のＢＥ３０％およびＢＮＲＥでは、それぞれ、３１．８％および２０．６％阻害が示された。組成物−２およびその個々の成分によって示された５−リポキシゲナーゼ阻害の比較を図４に示す。
【００３１】
次いで、ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）および組成物−２を、マトリックスメタロプロテアーゼ−３（ＭＭＰ−３）生成の阻害における有効性について、ＴＮＦα誘導型ＳＷ９８２ヒト滑膜細胞で試験した。無細胞培養上清み中のＭＭＰ−３生成量を、ＥＬＩＳＡ開発キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）によって推定した。驚くべきことに、組成物−２は、この滑膜細胞において、個々のＢＥ３０％およびＢＮＲＥのいすれで示されるものよりも充分なＭＭＰ−３生成の阻害を示し、５−ＬＯＸに対して相乗作用効果を示すことが確認された。組成物−２、ＢＥ３０％およびＢＮＲＥは、それぞれ、４６．７８、５８．７５および１１９．３２μｇ／ｍＬの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を示した。組成物−２によって示された相乗作用性ＭＭＰ−３阻害と、その個々の成分ＢＮＲＥおよびＢＥ３０％によって示されたものとの比較を図５にまとめる。
【００３２】
次いで、組成物−２によってインビトロで示された相乗作用効果を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの完全フロインドアジュバント誘導関節炎モデルでのインビボ試験に供した。３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸を３０％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）をそれぞれ、１：１および２：１の比率で含む組成物−１および組成物−２の抗炎症有効性を、インビボ試験によって、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの完全フロインドアジュバント誘導関節炎モデルにおいて評価し、その有効性を、個々の成分ＢＥ３０％ およびＢＮＲＥで示される有効性と比較した。処置群ラットには、ＡＫＢＡを３０％まで選択的に富化したボスウェリアエキス（ＢＥ３０％）またはボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）、または組成物−１もしくは組成物−２を１４日間、１００ｍｇ／ｋｇ体重で補給した。陽性対照群には、プレドニゾロンを１０ｍｇ／ｋｇ体重で補給した。第１４日目、完全フロインドアジュバント（ＦＣＡ）を、各動物の左後足の足底下（ｓｕｂ−ｐｌａｎｔａｒ）領域に皮下注射した。実験は２８日目に終了した。血液試料を各動物から一定間隔で採取し、足体積をプレチスモグラフィ装置によって、ＦＣＡ注射の日とＦＣＡ接種の１３日後に測定した。足浮腫体積の差を炎症応答とみなす。ＢＥ３．０％、ＢＮＲＥ、組成物−１、組成物−２およびプレドニゾロンでのインビボ抗炎症応答を、ＣＭＣ補給対照と比較したときの足浮腫の抑制パーセントを計算することにより推定した。
【００３３】
ＡＫＢＡが３０％のボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を補給した処置群では、それぞれ、３７％および１０％の足浮腫の低減が示された。しかしながら、同じ用量レベルの組成物−１および組成物−２を補給した処置群では、より充分な足浮腫の低減が示され、それぞれ、４４％および５４％の足体積の縮小が得られた。プレドニゾロンを補給した陽性対照群では、１０ｍｇ／ｋｇの用量レベルで５３％阻害が示された。図６にまとめた結果により、本発明の組成物−１および−２で、相乗作用効果がインビトロで観察されたことが確認される。
【００３４】
さらに、バイオマーカーである腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）のレベルを、処置群および対照群の血清中にて評価した。組成物−１および組成物−２を補給した処置群では、図７（ＡおよびＢ）に示されるように、個々の成分ＢＥ３０％およびＢＮＲＥを補給した処置群によって示されたレベルと比べて有意に充分な血清バイオマーカーＴＮＦ−αとＩＬ−１の低減が示された。
【００３５】
したがって、前述のデータは、ＡＫＢＡ富化ボスウェリアエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む組成物が、同じ用量レベルの個々の成分で得られる有効性と比べて抗炎症剤としてより強力であり、これらのエキスの併用の予期しない相乗作用性を発揮することを示す。
【００３６】
３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）が３０％含まれるように選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを用いて本発明を実証する。しかしながら、ＡＫＢＡ含量を重量基準で１０％〜１００％に選択的に富化した任意の他のボスウェリア・セラータエキスもまた、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）と組合せて相乗作用性組成物（１種類または複数種）の作製に使用され得る。
【００３７】
ＡＫＢＡ含量を１０％〜１００％に富化したボスウェリア・セラータエキスは、以下のプロセス、例えば限定されないが、（１）市販のボスウェリア・セラータエキス中の他のβ−ボスウェリア酸をＡＫＢＡエキス３５〜４５％に、本発明者らが、ＰＣＴ特許出願番号ＰＣＴ／ＩＮ０５／００００７４（２００５年３月７日付）およびＰＣＴ特許公開公報ＷＯ０３０７４０６３Ａ１および付与されたインド特許第２０５２６９号にて報告した既報のプロセスを用いて変換し、（２）その後、この変換生成物をＡＫＢＡエキス１０〜４５％に、薬学的または栄養学的に許容され得る担体または希釈剤を用いて希釈するか、あるいは（３）上記の変換生成物をＡＫＢＡ９０〜９９％に、例えば限定されないが、カラムクロマトグラフィー、分配、晶出などの工程の組合せを用いて精製し、次いで、純粋なＡＫＢＡを所望のＡＫＢＡ濃度（２０〜９９％）まで、薬学的もしくは栄養学的に許容され得る担体もしくは希釈剤または市販の低級ボスウェリア・セラータエキスを用いて希釈するか、（４）あるいはまた、ゴム樹脂中に天然に存在するＡＫＢＡを、ＡＫＢＡ１０〜９９％の範囲の所望の濃度まで、例えば限定されないが、抽出、カラムクロマトグラフィー、分配、晶出などの工程の組合せを用いて精製し、次いで、高率パーセント画分を所望の濃度に、薬学的もしくは栄養学的に許容され得る担体もしくは希釈剤または市販の低級ボスウェリア・セラータエキスを用いて希釈すること、の１つ以上を用いて得ることができる。
【００３８】
本発明の種々の実施形態の概要を以下に示す。
【００３９】
一態様において、本発明は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリアエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性抗炎症組成物を提供する。該組成物は、炎症および／炎症に関連する、もしくは炎症が付随するまたは１つ以上の疾患状態を予防または治癒または処置するために使用され得る。
【００４０】
本発明の別の態様において、ＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスの治療有効量とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を、ある特定の比率で合わせると相乗作用性の抗炎症効果がみられ、その効果は、該成分を個々に投与した場合に得られるものよりも充分であることがわかり、また、炎症促進性の生体分子／タンパク質マーカーの発現または生成の相乗作用性の改善がみられた。
【００４１】
さらなる態様において、本発明は、ＡＫＢＡエキスを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性組成物であって、炎症に関連する、または炎症が付随する生体分子／バイオマーカー／特定のレドックス感受性炎症促進遺伝子、例えば限定されないが、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）、マクロファージ／脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質（ａＰ２／ＦＡＢＰ）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）（ＭＭＰ−３およびＭＭＰ−１など）、ＮＦκＢ ＴＮＦ−αならびにＩＬ−１βの発現または生成の改善を、それを必要とする哺乳動物において行なうための組成物を提供する。
【００４２】
また別の態様において、本発明は、ＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性組成物であって、炎症と関連し、炎症が付随する１つ以上の哺乳動物の疾患状態、例えば限定されないが、喘息、アテローム性動脈硬化、内皮機能障害、アレルギー性鼻炎、皮膚炎、乾癬、嚢胞性線維症、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、片頭痛、アンギナ、慢性前立腺炎、日焼け、歯周病、多発性硬化症、ブドウ膜炎、血管形成術後再狭窄、糸球体腎炎、消化管アレルギー、腎炎、結膜炎、慢性閉塞性肺疾患、職業性喘息、湿疹、気管支炎、花粉症、蕁麻疹、アレルギー性障害の予防、コントロールおよび治療のため、ならびに喘鳴、呼吸困難、乾性咳、胸部絞扼感、首の筋肉の緊張、頻脈、胸痛、関節痛、ＵＶ照射によるコラーゲン分解、皮膚のしわ発生および皮膚の老化などの病状、ならびにこれらが付随するいくつかの他の病状のための組成物を提供する。
【００４３】
さらにまた別の態様において、本発明は、さらに、ＡＫＢＡエキスを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性組成物であって、炎症、関節炎、認知、神経系の障害、アルツハイマー病、コラーゲン分解、皮膚の老化、コレステロール低下、代謝異常および癌の１種類以上の予防、コントロールおよび治療のための組成物を提供する。関節炎の非限定的な例としては、リウマチ様（軟部組織リウマチおよび非関節リウマチ、線維筋痛症、結合組織炎、筋肉リウマチ、筋筋膜疼痛、上腕骨上顆炎、有痛性肩拘縮症、ティーツェ症候群、筋膜炎、腱炎、腱滑膜炎、滑液包炎など）、若年性慢性関節障害、脊椎関節障害（強直性脊椎炎）、変形性関節症、急性痛風、慢性痛風および全身性エリテマトーデスが付随する高尿酸血症および関節炎、ならびに変形性関節炎が挙げられる。
【００４４】
他の好ましい実施形態において、本発明は、さらに、ボスウェリア・セラータのゴム樹脂を水不混和性有機溶媒で抽出した後、該有機溶媒抽出物を水酸化カリウム水溶液などのアルカリ水溶液で、続いて水とブラインで洗浄し、次いで、最後に有機層を真空下でエバポレートした後、揮発性化合物を高温高真空下で除去し、ＢＮＲＥを得ることを含む、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の作製方法を提供する。水不混和性有機溶媒は、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、メチルイソブチルケトンもしくは任意の他の水不混和性溶媒、またはその混合物から選択され得る。
【００４５】
また、さらなる実施形態において、ボスウェリア・セラータそのままの油状物をＢＮＲＥの代わりに、相乗作用性組成物の作製に使用してもよい。
【００４６】
他の好ましい実施形態において、本発明は、さらに、
（ａ）ボスウェリア・セラータのゴム樹脂を水不混和性有機溶媒で抽出し、この抽出物を注意深く濾過して不溶解樹脂物質を除去し、次いで、該有機溶媒抽出物を水酸化カリウム水溶液などのアルカリ水溶液で、続いて水とブラインで繰り返し洗浄し、次いで、最後に有機層を真空下、高温でエバポレートして有機溶媒を除去した後、揮発性化合物を油状残渣から高温高真空下で除去し、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を得る工程、
（ｂ）ボスウェリア・セラータゴム樹脂の酸性エキスを選択的に富化し、ＡＫＢＡを１０〜１００％に選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ）を得る工程、
（ｃ）ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）とＡＫＢＡ富化ボスウェリア・セラータエキスを所望の比率（１種類または複数種）で合わせ、本発明の組成物（１種類または複数種）を得る工程、
（ｄ）任意選択で、該組成物を、生物学的または薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤および添加剤から選択される１種類以上の成分と混合する工程
を含む該組成物の作製方法を提供する。
【００４７】
上記の方法における水不混和性有機溶媒は、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、酢酸エチル、メチルイソブチルケトン、ｔｅｒｔ−ブタノールまたは任意の他の水不混和性溶媒から選択され得る。
【００４８】
ＡＫＢＡの富化に必要とされるボスウェリア・セラータゴム樹脂の酸性エキスは、そのゴム樹脂から既知の手順を用いて調製され得るか、またはボスウェリア酸を標準化した市販のボスウェリア・セラータエキス、好ましくは、全酸のほぼ８５％（滴定解析法による）まで標準化したエキスの一群から選択され得る。
【００４９】
他の実施形態において、本発明は、さらに、
ａ）ＢＮＲＥの主要化合物をマーカーとして同定し、該化合物を＞９８％純度で単離した後、スペクトルデータを用いて充分にキャラクタライズする工程、
ｂ）既知量の各マーカー化合物を個々に、ＰＤＡ検出器を有するＨＰＬＣシステムに載置されたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ分析用カラム（４．６×２５０ｍｍ，５μ）にインジェクトし、各マーカーの保持時間とピーク面積を、２１０ｎｍおよび２４８ｎｍでのＵＶ検出を用いて測定する工程、ここで、該カラムは３０℃に維持され、０．１％ｖ／ｖのオルトリン酸を含む水およびアセトニトリルをそれぞれ２７％および７３％で含む二成分溶媒混合物で、１．５ｍＬ／分の流速にて溶出する；次いで、
ｃ）既知量のＢＮＲＥ試料を同様の条件下で分析し、混合物中のマーカーを、該試料のピークの保持時間と標準のものとの比較に基づいて、任意選択で該試料を各マーカーと同時にインジェクトすることによって同定し、次いで、該試料中の各マーカーのパーセントを、そのピーク面積を既知濃度の標準に対応するピーク面積と比較することにより推定する工程、次いで、
ｄ）全マーカーの総量に対するパーセントで示すことによりＢＮＲＥの組成を得、次いで、前記組成を他のＢＮＲＥ試料との比較に使用する工程、該マーカーとしては、限定されないが、ネフテノール、セラトール、ジテルペンＸ、ルペオール、オレアナ−１２−エン−３β−オール、オレアナ−１２−エン−３α−オール、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール、ウルサ−１２−エン−３α−オールおよびギオールが挙げられる、
を含む、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の同定方法を提供する。
【００５０】
本発明のまた別の態様において、ＡＫＢＡを選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を含む相乗作用性抗炎症組成物は、任意選択で、１種類以上の薬学的または栄養補強的または栄養学的に許容され得る賦形剤または希釈剤または塩または添加剤を含む。
【００５１】
さらに、本発明の他の実施形態は、そのまま、あるいは顆粒剤または粉剤またはペースト剤として粉砕形態および／または非改良形態での前記相乗作用性組成物の使用法を提供する。あるいはまた、活性成分は、慣用的な生物学的または薬学的に許容され得る塩（１種類もしくは複数種）または添加剤（１種類もしくは複数種）または賦形剤（１種類もしくは複数種）を添加することにより、固形、半固形または液状の投薬形態に製剤化される。
【００５２】
さらなる実施形態において、本発明は、治療有効量の本発明の新規な組成物が経口、経表面、経皮、非経口などの具体的な投薬形態で、またはキットの形態で、それを必要とする被検体または患者に投与できることを提供する。本発明の組成物の製剤のための具体的な投薬形態としては、限定されないが、経口薬剤、例えば、錠剤、軟カプセル剤、硬カプセル剤、丸剤、顆粒剤、粉剤、注入用液剤、注射用液剤、クリーム剤、ゲル剤、乳剤、軟膏、注腸剤、医薬パック、栄養補助食品、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤、吸入剤、マウススプレーなど；ならびに非経口薬剤、例えば、注射剤、滴剤、坐剤などが挙げられる。
【００５３】
本発明の別の実施形態は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリアエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の組成物（１種類または複数種）を含むキットを提供する。さらに、キットに、該組成物（１種類または複数種）を、炎症および炎症状態（例えば限定されないが、喘息、関節炎、アテローム性動脈硬化）のコントロール、予防および治療に使用するための使用説明書を含めてもよい。
【００５４】
本発明のさらなる実施形態において、上記の任意の方法を用いて投与される製剤（１種類または複数種）を形成するため、該組成物に、さらに、有効量の１種類以上の医薬用または栄養補助用または栄養学的に許容され得る薬剤、例えば限定されないが、酸化防止剤（１種類もしくは複数種）、アダプトゲン（１種類もしくは複数種）、抗炎症剤（１種類もしくは複数種）、抗糖尿病剤（１種類もしくは複数種）、抗肥満剤（１種類もしくは複数種）、抗アテローム性動脈硬化剤（１種類もしくは複数種）、バイオプロテクタントおよび／またはバイオアベイラビリティ向上剤（１種類もしくは複数種）ならびに微量金属あるいは賦形剤（１種類もしくは複数種）または薬学的に許容され得る塩（１種類もしくは複数種）または添加剤（１種類もしくは複数種）ならびにその組成物または混合物を含めてもよい。
【００５５】
本発明において使用される薬学的に許容され得る抗炎症剤の例としては、限定されないが、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、メトトレキサート、スルファサラジン、ナプロキセン、ジクロフェナクおよびイブプロフェンが挙げられる。
【００５６】
本発明において使用される生物学的または薬学的に許容され得る担体の例としては、限定されないが、界面活性剤、賦形剤、結合剤、希釈剤、崩壊剤、滑沢剤、保存料、安定剤、緩衝剤、懸濁化剤および薬物送達系が挙げられる。
【００５７】
固形の担体または希釈剤または賦形剤の好ましい例としては、限定されないが、グルコース、フルクトース、スクロース、マルトース、黄色デキストリン、白色デキストリン、エアロゾル、微晶質セルロース、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、ラクトース、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アカシア、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ群、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸、カルシウム塩、色素、フレーバーおよび保存料が挙げられる。
【００５８】
液状担体（希釈剤）の好ましい例としては、蒸留水、生理食塩水、グルコース水溶液、アルコール（例えば、エタノール）、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール；ならびに油性担体、例えば、種々の動物油および植物油、白軟パラフィン、パラフィンおよびワックスが挙げられる。
【００５９】
本発明の択一的な態様において、本発明における本発明の組成物は、制御放出ポリマー系コーティングを使用し、ナノテクノロジー、マイクロカプセル封入、コロイド状担体系などの手法、および当該技術分野で知られた他の薬物送達系によって徐放性錠剤の形態で送達される。前記製剤は、１日１回の投与または１日に複数回の投与のために設計され得る。
【００６０】
また、本発明によれば、本発明の組成物は、既存または新規な食品および飲料の形態（１種類または複数種）、例えば、固形食品（シリアル、ベビーフード（１種類もしくは複数種）、チョコレートまたは栄養バーなど）、半固形食品（クリームもしくはジャム、またはゲル、清涼飲料、コーヒー、お茶、乳飲料、乳製品、乳酸菌飲料、スープ、ドロップ、キャンディ、チューインガム、チョコレート、グミキャンディ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、水羊羹、ゼリー、クッキー、ベーカリー製品など）などに配合または添加され得る。このような種々の組成物または調製物または食品および飲料は、炎症および／または炎症が付随する、もしくは炎症に関連する１つ以上の疾患状態、例えば限定されないが、喘息、関節炎 炎症性腸疾患、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性の非関節リウマチ、骨粗鬆症／骨吸収、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化、脈管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、成人性呼吸促迫症候群、糖尿病、代謝異常、皮膚障害における遅延型過敏症およびアルツハイマー病の治療および／または予防のための健康食品として有用である。
【００６１】
本発明の種々の例示的な実施形態において、ヒトまたは哺乳動物に投与または補給（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）される本発明の相乗作用性組成物の量は、均一でなくてもよく、製剤の性質によって異なることを提供するが、ヒトまたは動物に提案される該エキスまたは画分の投薬量は、好ましくは０．１〜７５０ｍｇ／ｋｇ体重／日、より好ましくは約０．５〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【００６２】
また、本発明の別の実施形態は、上記の種々の製剤、食品および飲料組成物中の本発明の組成物の量が均一でなくてもよく、製剤の性質によって異なることを提供し、ヒトまたは動物に提案される該組成物の投薬量は、例えば約０．００１％〜９９％、より好ましくは約０．００１〜９０ｗｔ％である。
【００６３】
重要な実施形態の一例において、選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス中のＡＫＢＡの濃度は、重量基準で１０％〜１００％の範囲で異なる。
【００６４】
別の実施形態において、選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス中のＡＫＢＡの濃度は、好ましくは２５％〜９５％、より好ましくは２５％〜４５％の範囲で異なる。
【００６５】
また別の実施形態において、相乗作用性組成物は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを重量基準で１０％〜９０％、およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を重量基準で９０％〜１０％含むものであり得る。
【００６６】
さらに別の実施形態において、相乗作用性組成物は、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを重量基準で３０％〜７０％、およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を重量基準で７０％〜３０％含むものであり得る。
【００６７】
本発明の別の実施形態は、上記の前記相乗作用性組成物の任意の成分を、組成物の総重量に対して重量基準で０．００１％〜８０％まで、好ましくは０．００１％〜５０％を含む保健食品または飲料である。
【００６８】
本発明のさらなる実施形態は、本発明の相乗作用性組成物（１種類または複数種）の量が、製剤の総重量の重量基準で１％〜１００％の範囲で異なることを提供する。
【００６９】
別の実施形態において、さらに、本発明は、炎症ならびに炎症が付随または関連するいくつかの疾患、例えば、喘息、アテローム性動脈硬化および関節炎などを治癒、予防または治療する目的で、本発明の組成物を、動物の餌に使用されている種々の成分と混合することを含む。
【００７０】
動物の餌に添加される組成物または製剤の形態は特に限定されず、そのまま、または組成物（１種類もしくは複数種）として種々の調理済食品製品および加工食品製品に添加され得る。その量は、食品製品の場合に使用される量と同じであり得る。また、同様に、その成分は動物の餌の調製中に添加してもよく、調製後に添加してもよい。
【００７１】
以下の実施例は、好ましい実施形態を含むものであり、本発明の実施を説明るために提供する。示した具体的詳細事項は、本発明の好ましい実施形態の一例であって、その例示的論考の目的のためのものであり、本発明の範囲を限定するものでないことは理解されよう。
【実施例１】
【００７２】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の調製：
ボスウェリア・セラータゴム樹脂（１００ｇ）を、６００ｍＬのメチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）溶媒中に分散させ、室温で６０分間攪拌した。不溶性のゴム状物質を濾過によって分離した。ＭＩＢＫ溶液を２％ＫＯＨ溶液（３×２００ｍＬ）で繰り返し抽出し、酸性化合物を除去した。次いで、ＭＩＢＫ層を、水（４００ｍＬ）とブライン（２００ｍＬ）で連続的に洗浄した。ＭＩＢＫ層を減圧下、６０〜７０℃でエバポレートし、揮発性成分を油状残渣から、真空下、７５〜８５℃で除去し、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス、すなわちＢＮＲＥを粘性油状物（１２ｇ）として得た。
【００７３】
択一的に、ボスウェリア・セラータから収集したゴム樹脂（２５０ｇ）をメタノール（３００ｍＬ×３）で抽出し、合わせたメタノール抽出物を濃縮した。残渣（５０ｇ）を酢酸エチル（４００ｍＬ）に溶解させ、２Ｎ ＫＯＨ（３×１００ｍＬ）で３回抽出した。有機層を水（２×２００ｍＬ）とブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、エバポレートし、ボスウェリア油状物を得た。揮発性化合物をこの油状物から、真空下、７５〜８５℃でエバポレートし、２２ｇのボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を得た。
【００７４】
ＢＮＲＥを、通常のシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーに供した。ＴＬＣに基づいて同一の画分を合わせ、合わせた画分を、個々に、溶離剤としてヘキサン／酢酸エチルまたはヘキサン／アセトンの混合物を用いたシリカゲルでの反復カラムに供し、純粋な化合物を得た。一部の純粋でない画分を、さらに、逆相Ｃ１８シリカカラムを用いた分取用ＨＰＬＣに供し、純粋な化合物を得た。構造は、１Ｈ ＮＭＲ、１３Ｃ ＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＨＳＱＣおよびＨＭＢＣまたは質量スペクトルデータを解析し、次いで、データを既知化合物のものと比較することにより確証した。主要化合物のうち９種類は、図１に示したように、ギオール（ｇｕｉｏｌ）（１）、ネフテノール（２）、セラトール（ｓｅｒｒａｔｏｌ）（３）、ジテルペンＸ（４）、ルペオール（５）、オレアナ−１２−エン−３β−オール（６）、オレアナ−１２−エン−３α−オール（７）、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール（８）およびウルサ−１２−エン−３α−オール（９）と同定されている。次いで、この純粋な化合物を使用し、ＨＰＬＣ法を用いて、ボスウェリア・セラータの非酸性エキス（ＢＮＲＥ）を標準化した。この新規なＢＮＲＥ組成物を、分析用ＨＰＬＣ法に基づいて評価し、保持時間（Ｒｔ）を表１にまとめる。ＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示した。
【００７５】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の解析のためのＨＰＬＣ法
【表１】
【実施例２】
【００７６】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の同定方法： ＢＮＲＥの同定方法は、以下のＨＰＬＣ法を用いた、ＢＮＲＥの主要化合物を含む組成の推定を伴う。溶媒の勾配を、表２にまとめる。既知量の各マーカー化合物を個々に分析した。各標準化合物の保持時間とピーク面積を記録する：次いで、既知量のＢＮＲＥ試料を同様の条件下で分析し、各マーカーを、該試料のピークの保持時間と標準のものとの比較に基づいて、およびさらに、該試料を各マーカーと同時にインジェクトすることにより同定した。試料中の各マーカーのパーセントを、以下に示すとおりに、そのピーク面積を既知濃度の標準化合物に対応するピーク面積と比較することにより推定した。ＢＮＲＥの組成物を表３にまとめる。
【００７７】
ＨＰＬＣ条件：
カラム：Ｐｈｅｎｏｒａｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ，（４．６×２５０ｍｍ）５μ
波長：２４８ ＆ ２１０ｎｍ
流速：１．５０ｍＬ／分
インジェクション容量：２０μｌ
温度：３０℃
系：勾配
移動相：ポンプＡ：０．１％ｖ／ｖのオルトリン酸を含む水
ポンプＢ：アセトニトリル
【００７８】
ここで、０．１％ｖ／ｖのオルトリン酸は、１ｍＬのオルトリン酸を水で１０００ｍｌに希釈することにより調製する。
【００７９】
標準：ＢＮＲＥの主要化合物をマーカーとして選択し、該化合物を、単離手法の組合せを用いて＞９８％純度で単離した。このようにして得たこれらの純粋な標準は、スペクトルデータの組合せを使用し、ギオール（１）、ネフテノール（２）、セラトール（３）、ジテルペンＸ（４）、ルペオール（５）、オレアナ−１２−エン−３β−オール（６）、オレアナ−１２−エン−３α−オール（７）、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール（８）およびウルサ−１２−エン−３α−オール（９）であることが充分にキャラクタライズされた。
【００８０】
【表２】
【００８１】
【表３】
【００８２】
標準の調製：
約１０．０ｍｇの研究所内参照試料を５０ｍｌ容の容量フラスコ内に精秤し、メタノールで溶解させ、規定の容積にする。
【００８３】
試料の調製：
約２５０．０ｍｇの試料を５０ｍｌ容の容量フラスコに精秤し、メタノールで溶解させ、規定の容積にする。
【００８４】
手順：
標準および試料溶液を、ともに０．４５μ膜フィルターに通して濾過し、インジェクションする。
【００８５】
計算：
＝（試料のピーク面積×標準の濃度×標準の純度）／（標準のピーク面積×試料の濃度）＝％
【実施例３】
【００８６】
ＡＫＢＡを１０〜１００％に富化したボスウェリア・セラータエキスの調製：
滴定法によって全ボスウェリア酸８５％に標準化し、３％の３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を含む市販のボスウェリア・セラータエキスを、１０〜１００％までのＡＫＢＡの選択的富化プロセスに使用した。この混合物は、ＨＰＬＣ分析法により、４５〜５０％の範囲の全β−ボスウェリア酸［３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸、β−ボスウェリア酸、３−Ｏ−アセチル−β−ボスウェリア酸、１１−ケト−β−ボスウェリア酸、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸］を含む。この混合物を、３５〜４５％のＡＫＢＡを含むように、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＩＮ０２／０００３４（２００２年３月５日出願）およびＰＣＴ／ＩＮ０５／００００７４（２００５年３月７日出願）に記載の手順の一方を用いて選択的に富化した。富化プロセスにクロマトグラフィー工程もしくは晶出または両方を追加することにより、ＡＫＢＡをさらに４５〜１００％に富化した。３５〜１００％の範囲のＡＫＢＡを有する富化エキスを賦形剤で、好ましくは白色デキストリンで希釈することにより、１０〜３５％の３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を含む富化エキスを調製した。ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）を、本発明において使用する。
【実施例４】
【００８７】
組成物−１：組成物−１は、単位用量の以下の成分：ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）１部（１ｇ）と、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）１部（１ｇ）を混合することにより調製した。
【実施例５】
【００８８】
組成物−２：組成物−２は、単位用量の以下の成分：ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）２部（２ｇ）と、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）１部（１ｇ）を混合することにより調製した。
【実施例６】
【００８９】
組成物−３：組成物−３は、単位用量の以下の成分：ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）１部（１ｇ）と、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）２部（２ｇ）を混合することにより調製した。
【実施例７】
【００９０】
組成物−４：組成物−４は、単位用量の以下の成分：ＡＫＢＡ ４０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ４０％）３部（３ｇ）と、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）２部（２ｇ）と、白色デキストリン１部（１ｇ）を混合することにより調製した。
【実施例８】
【００９１】
ＡＫＢＡを３０％に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）による５−ＬＯＸおよびＦＬＡＰの阻害：重要な中間（ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙ）タンパク質であるアラキドン酸媒介性の炎症経路に対するＢＥ３０％の効果を、ＬＰＳ誘導型ＴＨＰ−１ヒト−単球−マクロファージ細胞において、インビトロで評価した。簡単には、ＴＨＰ−１ヒト単球−マクロファージ細胞を１０μｇ／ｍｌのＢＥ３０％で１時間前処理した後、該細胞をＬＰＳで２時間初回刺激し、炎症応答を誘導した。細胞内タンパク質を細胞溶解バッファーによって抽出し、イムノウエスタンブロットに供し、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）およびＦＬＡＰの発現のモジュレーションを検出した。図３にまとめたように、ＬＰＳ誘導型ＴＨＰ−１ヒト−単球−マクロファージ細胞において、ＢＥ３０％により５−ＬＯＸとＦＬＡＰの発現が有意に阻害された。
【実施例９】
【００９２】
ＡＫＢＡが３０％のボスウェリアエキス（ＢＥ３０％）、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス ＣＢＮＲＥ）および組成物−２の５−リポキシゲナーゼ阻害活性：
５−リポキシゲナーゼ酵素阻害活性を、Ｓｃｈｅｗｅらの方法（Ａｄｖ Ｅｎｚｙｍｏｌ，Ｖｏｌ ５８，１９１−２７２，１９８６）にＲｅｄｄａｎｎａら（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ １８７，２６８−２７７，１９９０）による改良を加えて使用し、測定した。アッセイ混合物は、８０μＭのリノール酸と充分量のイモ５−リポキシゲナーゼ（５０ｍＭのリン酸バッファー（ｐＨ６．３）中）を含むものとした。混合酵素バッファーをリノール酸に添加することにより反応を開始し、酵素活性を、２３４ｎｍにおける吸光度の増大としてモニタリングした。反応を１２０秒間モニタリングし、試験物質ＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−２の阻害可能性を、種々の濃度の試験物質を２分間インキュベートした後、リノール酸を添加することにより測定した。アッセイはすべて、３回行なった。阻害パーセントは、試験物質で得られた曲線の傾きを、対照のものと比較することにより計算した。ＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−１の阻害パーセントを表４にまとめ、図４に示す。
【００９３】
【表４】
【実施例１０】
【００９４】
ＡＫＢＡが３０％のボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス ＴＢＮＲＥ）および組成物−２によるマトリックスメタロプロテアーゼ−３（ＭＭＰ−３）生成の阻害：
ＭＭＰ−３を、ＴＮＦα誘導型ＳＷ９８２ヒト滑膜細胞において評価した。簡単には、ＳＷ９８２細胞を、２ｍＭのグルタミン、１００Ｕ／ｍＬのペニシリン、１００ｍｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび１０％のウシ胎仔血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）を有するＤＭＥＭ中で培養した。ウェル１つあたり５０００個の細胞を、９６ウェル細胞培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＵＳＡ）に、実験の１日前に播種した。培養培地を、１％のウシ胎仔血清を含有する新鮮ＤＭＥＭと交換した。ＡＫＢＡが３０％のボスウェリアエキス（ＢＥ３０％）、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）および組成物−２を、培地中で５〜１００ｎｇ／ｍｌの範囲で連続希釈し、細胞とともに５％ＣＯ２で３７℃にて２時間プレインキュベートし、次いで、１０ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＴＮＦα（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）で２４時間刺激した。培養上清みを回収し、ＥＬＩＳＡ開発キット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ，ＵＳＡ）によるＭＭＰ−３生成の測定に使用した。無細胞培養上清み中のＭＭＰ−３濃度は、既知濃度のＭＭＰ−３で作成した標準曲線に光学濃度を補間することにより定量的に推定した。濃度に対して阻害パーセントプロットすることにより作成したプロットから、ＭＭＰ−３の５０％阻害の阻害濃度（ＩＣ５０）を計算した。ＢＥ３０％、ＢＮＲＥおよび組成物−２では、それぞれ、５８．７５、１１９．３２および４６．７８μｇ／ｍＬのＩＣ５０値が示された。これらの阻害の比較を図５に示す。
【実施例１１】
【００９５】
３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）が３０％まで選択的に富化したボスウェリアエキス、すなわちＢＥ３０％とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）をそれぞれ１：１および２：１の比率で含む組成物−１および組成物−２のインビボでの相乗作用性抗炎症活性：
３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸が３０％まで選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（５−Ｌｏｘｉｎ）とボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）をそれぞれ１：１および２：１の比率で含む組成物−１および組成物−２の抗炎症有効性を、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの完全フロインドアジュバント誘導関節炎モデルでのインビボ試験によって評価した。いずれかの性のラットを無作為に選択し、各群に５匹の動物を含む５つの群に分けた。処置群ラットには、ＡＫＢＡを３０％まで選択的に富化したボスウェリアエキス（ＢＥ３０％）またはボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）、またはＢＥ３０％とＢＮＲＥをそれぞれ１：１および２：１で含む組成物−１もしくは組成物−２を１４日間、１００ｍｇ／ｋｇ体重で補給した。陽性対照群には、プレドニゾロンを１０ｍｇ／ｋｇ体重で補給した。供給物はすべて、投与用に１０ｍＬの１％ＣＭＣで希釈した。対照群の動物には、同じ容量の１％ＣＭＣを与えた。第１４日目、完全フロインドアジュバント（ＦＣＡ）を、各動物の左後足の足底下領域に皮下注射した。実験終了時、動物を致死させ、肝臓組織試料を切り取り、アリコートに分けて−８０℃で保存した。血液試料を各動物から一定間隔で採取し、足体積をプレチスモグラフィ装置によって、ＦＣＡ注射の日とＦＣＡ接種の１３日後に測定した。ＦＣＡ注射の日と誘導後１３日目での浮腫の体積の差を炎症応答とみなす。ＢＥ３．０％、ＢＮＲＥ、組成物−１、組成物−２およびプレドニゾロンでのインビボ抗炎症応答を、ＣＭＣ補給対照と比較したときの足浮腫の抑制パーセントを計算することにより推定した。
【００９６】
ＡＫＢＡを３０％まで選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ３０％）およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を補給した処置群では、図６に示されるように、それぞれ、３７％および１０％の足浮腫の低減が得られたのに対し、プレドニゾロンを補給した処置群では５３％の抑制が示された。しかしながら、同じ用量レベルの組成物−１および組成物−２を補給した処置群では、図６に示されるように、それぞれ、４４％および５４％の足体積の縮小が示された。この相乗作用有効性は、バイオマーカーである腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の評価によって、さらに実証された。組成物−１および組成物−２を補給した処置群では、図７に示されるように、個々の成分ＢＥ３０％およびＢＮＲＥを補給した処置群によって示されたレベルと比べて有意に充分な血清バイオマーカーＴＮＦ−αとＩＬ−１の低減が示された。
【００９７】
当業者には、上記の実施形態に対して、その広い発明概念から逸脱することなく変更がなされ得ることが認識されよう。したがって、本発明は、開示した具体的な実施形態または実施例に限定されるのではなく、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の目的および範囲に含まれる変形例を包含することが意図されることは理解されよう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症および／または炎症に関連する、もしくは炎症が付随する１つ以上の疾患状態（例えば限定されないが、喘息、変形性関節症、関節リウマチ、内皮機能障害）などのコントロール、予防および治療のための、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の治療上有効な組合せを含む、相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項２】
選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス中のＡＫＢＡの濃度が、重量基準で１０％〜１００％の範囲にある、請求項１に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項３】
選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス中のＡＫＢＡの濃度が、好ましくは２５％〜９５％、より好ましくは２５％〜４５％の範囲にある、請求項１に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項４】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）が、酸性化合物を選択的に除去した後に得られる低極性中性ボスウェリア・セラータゴム樹脂エキスである、請求項１に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項５】
作製方法が、
（ａ）ボスウェリア・セラータのゴム樹脂を水不混和性有機溶媒で抽出し、この抽出物を注意深く濾過して不溶解樹脂物質を除去し、次いで、該有機溶媒抽出物を水酸化カリウム水溶液などのアルカリ水溶液で繰り返し洗浄した後、有機層を水とブラインで洗浄し、次いで、最後に有機層を真空下、高温でエバポレートして有機溶媒を除去した後、揮発性化合物を油状残渣から高温高真空下で除去し、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を得ること、
（ｂ）ボスウェリア・セラータゴム樹脂の酸性エキスを、１０〜１００％のＡＫＢＡを含むボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ）に選択的に富化すること、
（ｃ）ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）とＡＫＢＡ富化ボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ）を所望の比率で合わせ、請求項１に記載の組成物を得ること、
（ｄ）任意選択で、該組成物を、賦形剤、希釈剤および添加剤から選択される１種類以上の成分と混合すること
を含む、請求項１に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項６】
３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを重量基準で１０％〜９０％、およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を重量基準で９０％〜１０％含む、請求項１に記載の相乗作用性組成物。
【請求項７】
好ましくは、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを重量基準で３０％〜７０％、およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を重量基準で７０％〜３０％含む、請求項１に記載の相乗作用性組成物。
【請求項８】
任意選択で、１種類以上の栄養補強的または薬学的または栄養学的に許容され得る賦形剤または希釈剤または添加剤を含むものであり得る、請求項１に記載の相乗作用性組成物。
【請求項９】
栄養補強的または薬学的または栄養学的に許容され得る賦形剤または希釈剤または添加剤として、限定されないが、蒸留水、生理食塩水、グルコース水溶液、アルコール（例えば、エタノール）、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール；ならびに種々の動物油および植物油などの油性担体、白軟パラフィン、パラフィン、ワックス、グルコース、フルクトース、スクロース、マルトース、黄色デキストリン、白色デキストリン、エアロゾル、微晶質セルロース、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、ラクトース、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アカシア、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ群、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸、カルシウム塩、色素、フレーバーおよび保存料が挙げられる、請求項８に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１０】
さらに、任意選択で、１種類以上の既知の薬理学的に許容され得る酸化防止剤、アダプトゲン、抗炎症剤、抗糖尿病剤、抗肥満剤または抗アテローム性動脈硬化剤と混合したものであり得る、請求項１および８に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１１】
炎症に関連する、もしくは炎症が付随する炎症性疾患が、限定されないが、炎症性腸疾患、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性の非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症／骨吸収、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化、内皮機能不全、脈管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、成人性呼吸窮迫症候群、糖尿病、皮膚疾患における遅延型過敏症、喘息、内皮機能不全、ＵＶ照射によるコラーゲン分解、皮膚のしわ発生および皮膚の老化が挙げられる、請求項１に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１２】
組成物は、炎症性障害の治療を必要とする被検体に、経口、局所的もしくは非経口または吸入によって投与され、投与形態は、輸液、注射液、錠剤、カプセル剤、クリーム剤、ゲル剤、顆粒剤、軟膏、注腸剤、医薬パックまたは栄養補助食品である、請求項１、８および１０に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１３】
錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、硬カプセル剤、丸剤、顆粒剤、粉剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤などの経口薬剤；ならびに注射液、滴剤、坐剤などの非経口薬剤；ならびに貼付剤、経表面クリーム剤およびゲル剤などの経皮薬剤、ならびに食品成分または飲料として配合され得る、請求項１、８および１０に記載の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項１４】
ｉ．ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の主要化合物をマーカーとして同定し、該化合物を９８％より高い純度で単離した後、スペクトルデータを用いて充分にキャラクタライズし、
ｉｉ．既知量の各マーカー化合物を個々に、ＰＤＡ検出器を有するＨＰＬＣシステムに載置されたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ分析用カラム（４．６×２５０ｍｍ，５μ）に注入し（ここで、該カラムは３０℃に維持され、０．１％ｖ／ｖのオルトリン酸を含む水並びにアセトニトリルをそれぞれ２７％および７３％で含むバイナリー溶媒混合物で、１．５ｍＬ／分の流速にて溶出する）、各マーカーの保持時間とピーク面積を、２１０ｎｍおよび２４８ｎｍでのＵＶ検出を用いて測定し、；次いで、
ｉｉｉ．既知量のＢＮＲＥ試料を同様の条件下で分析し、混合物中のマーカーを、該試料のピークの保持時間と標準のものとの比較に基づいて、任意選択で該試料を各マーカーと同時にインジェクトすることによって同定し、次いで、該試料中の各マーカーのパーセントを、そのピーク面積を既知濃度の標準に対応するピーク面積と比較することにより推定し、次いで、
ｉｖ．全マーカーの総量に対するパーセントで示すことによりＢＮＲＥの組成を得（該マーカーとしては、限定されないが、ネフテノール、セラトール、ジテルペンＸ、ルペオール、オレアナ−１２−エン−３β−オール、オレアナ−１２−エン−３α−オール、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール、ウルサ−１２−エン−３α−オールおよびギオールが挙げられる）、次いで、前記組成を他のＢＮＲＥ試料との比較に使用する、
工程を含む、請求項１に記載の相乗作用性組成物の作製のために使用されるボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の同定方法。
【請求項１５】
治療を必要とする被検体に、治療有効量の請求項１、８および１０に記載の組成物を投与することを含む、炎症性障害の治療方法。
【請求項１６】
治療を必要とする被検体に、治療有効量の請求項１、８および１０に記載の組成物（１種類または複数種）を投与することを含む、炎症が付随する疾患、認知障害、神経障害、アルツハイマー病、コラーゲン合成低下、アンチエイジング低下、コレステロール低下および他の代謝異常の予防および処置のための方法。
【請求項１７】
処置を必要とする被検体に、治療有効量の請求項１、８および１０に記載の組成物（１種類または複数種）を投与することを含む、炎症ならびに炎症に関連する、または炎症が付随する１つ以上の症状の治療法であって、該症状としては、限定されないが、炎症性腸疾患、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性の非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症／骨吸収、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化、内皮機能障害、脈管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、成人性呼吸窮迫症候群、糖尿病、皮膚疾患における遅延型過敏症、喘息および内皮機能障害が挙げられる、方法。
【請求項１８】
炎症マーカーの改善のために使用される前記組成物が、限定されないが、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）、マクロファージ／脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質（ａＰ２）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ、ＭＭＰ、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βである、請求項１、８および１０に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、日投薬量において粉砕形態および／または非改良形態であり、例えば、粉剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、沈澱型薬剤、抽出液剤、乾燥エキス剤および／または浸出液剤などの任意の形態で投与され得る、請求項１、８および１０に記載の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物の使用方法。
【請求項２０】
被検体に有効量の請求項１、８および１０に記載の組成物を投与する工程を含む、活性化肥満細胞および脱顆粒肥満細胞からの生体分子の分泌に起因する炎症性疾患に苦しむ被検体の治療方法であって、前記炎症性疾患が、変形性関節症、癌、線維筋痛症、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、過敏性腸症候群、片頭痛、アンギナ、慢性前立腺炎、湿疹、関節炎、多発性硬化症、乾癬、日焼け、および歯周病からなる群より選択される、方法。
【請求項２１】
被検体に、有効量の請求項１、８および１０に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物を投与する工程を含む、被検体の炎症の特定の生体分子／バイオマーカー、特に、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）、マクロファージ／脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質（ａＰ２）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ、ＭＭＰ、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの活性の改善方法。
【請求項１】
炎症および／または炎症に関連する、もしくは炎症が付随する１つ以上の疾患状態（例えば限定されないが、喘息、変形性関節症、関節リウマチ、内皮機能障害）などのコントロール、予防および治療のための、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスとボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の治療上有効な組合せを含む、相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項２】
選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス中のＡＫＢＡの濃度が、重量基準で１０％〜１００％の範囲にある、請求項１に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項３】
選択的に富化したボスウェリア・セラータエキス中のＡＫＢＡの濃度が、好ましくは２５％〜９５％、より好ましくは２５％〜４５％の範囲にある、請求項１に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項４】
ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）が、酸性化合物を選択的に除去した後に得られる低極性中性ボスウェリア・セラータゴム樹脂エキスである、請求項１に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項５】
作製方法が、
（ａ）ボスウェリア・セラータのゴム樹脂を水不混和性有機溶媒で抽出し、この抽出物を注意深く濾過して不溶解樹脂物質を除去し、次いで、該有機溶媒抽出物を水酸化カリウム水溶液などのアルカリ水溶液で繰り返し洗浄した後、有機層を水とブラインで洗浄し、次いで、最後に有機層を真空下、高温でエバポレートして有機溶媒を除去した後、揮発性化合物を油状残渣から高温高真空下で除去し、ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を得ること、
（ｂ）ボスウェリア・セラータゴム樹脂の酸性エキスを、１０〜１００％のＡＫＢＡを含むボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ）に選択的に富化すること、
（ｃ）ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）とＡＫＢＡ富化ボスウェリア・セラータエキス（ＢＥ）を所望の比率で合わせ、請求項１に記載の組成物を得ること、
（ｄ）任意選択で、該組成物を、賦形剤、希釈剤および添加剤から選択される１種類以上の成分と混合すること
を含む、請求項１に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項６】
３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを重量基準で１０％〜９０％、およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を重量基準で９０％〜１０％含む、請求項１に記載の相乗作用性組成物。
【請求項７】
好ましくは、３−Ｏ−アセチル−１１−ケト−β−ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を選択的に富化したボスウェリア・セラータエキスを重量基準で３０％〜７０％、およびボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）を重量基準で７０％〜３０％含む、請求項１に記載の相乗作用性組成物。
【請求項８】
任意選択で、１種類以上の栄養補強的または薬学的または栄養学的に許容され得る賦形剤または希釈剤または添加剤を含むものであり得る、請求項１に記載の相乗作用性組成物。
【請求項９】
栄養補強的または薬学的または栄養学的に許容され得る賦形剤または希釈剤または添加剤として、限定されないが、蒸留水、生理食塩水、グルコース水溶液、アルコール（例えば、エタノール）、プロピレングリコールおよびポリエチレングリコール；ならびに種々の動物油および植物油などの油性担体、白軟パラフィン、パラフィン、ワックス、グルコース、フルクトース、スクロース、マルトース、黄色デキストリン、白色デキストリン、エアロゾル、微晶質セルロース、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、ラクトース、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アカシア、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ群、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸、カルシウム塩、色素、フレーバーおよび保存料が挙げられる、請求項８に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１０】
さらに、任意選択で、１種類以上の既知の薬理学的に許容され得る酸化防止剤、アダプトゲン、抗炎症剤、抗糖尿病剤、抗肥満剤または抗アテローム性動脈硬化剤と混合したものであり得る、請求項１および８に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１１】
炎症に関連する、もしくは炎症が付随する炎症性疾患が、限定されないが、炎症性腸疾患、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性の非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症／骨吸収、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化、内皮機能不全、脈管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、成人性呼吸窮迫症候群、糖尿病、皮膚疾患における遅延型過敏症、喘息、内皮機能不全、ＵＶ照射によるコラーゲン分解、皮膚のしわ発生および皮膚の老化が挙げられる、請求項１に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１２】
組成物は、炎症性障害の治療を必要とする被検体に、経口、局所的もしくは非経口または吸入によって投与され、投与形態は、輸液、注射液、錠剤、カプセル剤、クリーム剤、ゲル剤、顆粒剤、軟膏、注腸剤、医薬パックまたは栄養補助食品である、請求項１、８および１０に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１３】
錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、硬カプセル剤、丸剤、顆粒剤、粉剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、ペレット剤などの経口薬剤；ならびに注射液、滴剤、坐剤などの非経口薬剤；ならびに貼付剤、経表面クリーム剤およびゲル剤などの経皮薬剤、ならびに食品成分または飲料として配合され得る、請求項１、８および１０に記載の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物。
【請求項１４】
ｉ．ボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の主要化合物をマーカーとして同定し、該化合物を９８％より高い純度で単離した後、スペクトルデータを用いて充分にキャラクタライズし、
ｉｉ．既知量の各マーカー化合物を個々に、ＰＤＡ検出器を有するＨＰＬＣシステムに載置されたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ Ｐｈｅｎｙｌ−Ｈｅｘｙｌ分析用カラム（４．６×２５０ｍｍ，５μ）に注入し（ここで、該カラムは３０℃に維持され、０．１％ｖ／ｖのオルトリン酸を含む水並びにアセトニトリルをそれぞれ２７％および７３％で含むバイナリー溶媒混合物で、１．５ｍＬ／分の流速にて溶出する）、各マーカーの保持時間とピーク面積を、２１０ｎｍおよび２４８ｎｍでのＵＶ検出を用いて測定し、；次いで、
ｉｉｉ．既知量のＢＮＲＥ試料を同様の条件下で分析し、混合物中のマーカーを、該試料のピークの保持時間と標準のものとの比較に基づいて、任意選択で該試料を各マーカーと同時にインジェクトすることによって同定し、次いで、該試料中の各マーカーのパーセントを、そのピーク面積を既知濃度の標準に対応するピーク面積と比較することにより推定し、次いで、
ｉｖ．全マーカーの総量に対するパーセントで示すことによりＢＮＲＥの組成を得（該マーカーとしては、限定されないが、ネフテノール、セラトール、ジテルペンＸ、ルペオール、オレアナ−１２−エン−３β−オール、オレアナ−１２−エン−３α−オール、ラノスタ−８，２４−ジエン−３α−オール、ウルサ−１２−エン−３α−オールおよびギオールが挙げられる）、次いで、前記組成を他のＢＮＲＥ試料との比較に使用する、
工程を含む、請求項１に記載の相乗作用性組成物の作製のために使用されるボスウェリア・セラータの非酸性樹脂エキス（ＢＮＲＥ）の同定方法。
【請求項１５】
治療を必要とする被検体に、治療有効量の請求項１、８および１０に記載の組成物を投与することを含む、炎症性障害の治療方法。
【請求項１６】
治療を必要とする被検体に、治療有効量の請求項１、８および１０に記載の組成物（１種類または複数種）を投与することを含む、炎症が付随する疾患、認知障害、神経障害、アルツハイマー病、コラーゲン合成低下、アンチエイジング低下、コレステロール低下および他の代謝異常の予防および処置のための方法。
【請求項１７】
処置を必要とする被検体に、治療有効量の請求項１、８および１０に記載の組成物（１種類または複数種）を投与することを含む、炎症ならびに炎症に関連する、または炎症が付随する１つ以上の症状の治療法であって、該症状としては、限定されないが、炎症性腸疾患、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、乾癬性関節炎、変形性関節症、難治性関節リウマチ、慢性の非リウマチ性関節炎、骨粗鬆症／骨吸収、冠状動脈性心疾患、アテローム性動脈硬化、内皮機能障害、脈管炎、潰瘍性大腸炎、乾癬、成人性呼吸窮迫症候群、糖尿病、皮膚疾患における遅延型過敏症、喘息および内皮機能障害が挙げられる、方法。
【請求項１８】
炎症マーカーの改善のために使用される前記組成物が、限定されないが、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）、マクロファージ／脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質（ａＰ２）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ、ＭＭＰ、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βである、請求項１、８および１０に記載の相乗作用性組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、日投薬量において粉砕形態および／または非改良形態であり、例えば、粉剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、沈澱型薬剤、抽出液剤、乾燥エキス剤および／または浸出液剤などの任意の形態で投与され得る、請求項１、８および１０に記載の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物の使用方法。
【請求項２０】
被検体に有効量の請求項１、８および１０に記載の組成物を投与する工程を含む、活性化肥満細胞および脱顆粒肥満細胞からの生体分子の分泌に起因する炎症性疾患に苦しむ被検体の治療方法であって、前記炎症性疾患が、変形性関節症、癌、線維筋痛症、アテローム性動脈硬化、炎症性腸疾患、間質性膀胱炎、過敏性腸症候群、片頭痛、アンギナ、慢性前立腺炎、湿疹、関節炎、多発性硬化症、乾癬、日焼け、および歯周病からなる群より選択される、方法。
【請求項２１】
被検体に、有効量の請求項１、８および１０に記載の相乗作用性の栄養補助用または医薬用またはダイエタリーサプリメント組成物を投与する工程を含む、被検体の炎症の特定の生体分子／バイオマーカー、特に、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯＸ）、５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）、マクロファージ／脂肪細胞脂肪酸結合タンパク質（ａＰ２）、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＣＡＭ、ＶＣＡＭ、ＭＭＰ、ＴＮＦαおよびＩＬ−１βの活性の改善方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２０１２−５０２９０１（Ｐ２０１２−５０２９０１Ａ）
【公表日】平成２４年２月２日（２０１２．２．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５２６６３５（Ｐ２０１１−５２６６３５）
【出願日】平成２１年９月１４日（２００９．９．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＮ２００９／０００５０５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２９５７８
【国際公開日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【出願人】（５１００６７９８０）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年２月２日（２０１２．２．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年９月１４日（２００９．９．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＮ２００９／０００５０５
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０２９５７８
【国際公開日】平成２２年３月１８日（２０１０．３．１８）
【出願人】（５１００６７９８０）
【Ｆターム（参考）】
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