リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤
【課題】血液中のリン脂質結合型ＤＨＡを特異的に増加させることができる、飲食品又は医薬組成物として使用可能な組成物を提供する。
【解決手段】エーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とするリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤によって解決することができる。特には、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とするリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤によって、血液中のリン脂質結合型ＤＨＡの濃度を上昇させることができる。
【解決手段】エーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とするリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤によって解決することができる。特には、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とするリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤によって、血液中のリン脂質結合型ＤＨＡの濃度を上昇させることができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体内のドコサヘキサエン酸（以下、ＤＨＡと称する）含有リン脂質を増加させることができるリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に関する。本発明によれば、経口摂取により、リン脂質結合型ＤＨＡを増加させることができる。
【背景技術】
【０００２】
ＤＨＡ（Ｃ２２：６）（炭素数２２、不飽和結合６個）は広義の必須脂肪酸であり、生体内では主に細胞膜を構成するリン脂質に結合した形態であらゆる組織に存在するが、特に脳、神経組織、網膜、及び精子などに多い。ＤＨＡはヒト体内でもリノレン酸を原料として合成が可能であるが、その生産量は少なく、食物から摂取することが大部分である。
ＤＨＡは多くの生理作用に関与しており、様々な病態との関係についても報告されている。学習能力及び記憶力など脳機能の向上について良く知られているが、認知症等の予防、並びにアルツハイマー症、及びうつ病などの疾病に対してもＤＨＡの摂取が有効であるといわれている。ＤＨＡが欠損した症例としては、視覚障害や言語障害のほか、自閉症や多動性障害などの認知能力と関与する障害の発生がある。
【０００３】
しかし、脳機能に対するＤＨＡの詳細な作用機構は未だ不明であり、細胞膜構造の変化、メッセンジャーとしてのシグナル作用など多くの可能性が報告されている。また、ＤＨＡは、インターロイキンを介するシグナル伝達系に作用して、その炎症の発現を阻害するといわれ、動脈硬化症、アトピー、アレルギー、又はリウマチ様関節炎など、様々な炎症性疾患の抑制効果が示唆されている。更に、血管内皮細胞のリポタンパク質リパーゼへの阻害作用により、血中のトリアシルグリセリド及びコレステロール量を低下させることが示されており、「中性脂肪が気になる方の食品」という表示で、ＤＨＡを関与成分とした特定保健用食品も許可されている。
【０００４】
なかでも脳においては、脂質構成脂肪酸組成におけるＤＨＡ含量が高く、特にリン脂質を構成する脂肪酸組成におけるＤＨＡ含量が哺乳類では３〜２０％、特にヒトにおいては約２０％と極めて高いこと、また認知症患者では、リン脂質含量、特にエタノールアミン型リン脂質が大きく減少することが知られている（非特許文献１）。また、血清中のリン脂質含量、特にＤＨＡが結合したリン脂質含量と認知症重症度とが相関することが知られている（非特許文献２及び特許文献２）。
【０００５】
このようにＤＨＡの中でも、その存在形態としてリン脂質結合型が特に重要であり、そのＤＨＡ結合型リン脂質は生体、特に脳において、神経伝達や細胞間物質移動に極めて重要な役割を担っていることが示されている。
【０００６】
ここで、生体内のＤＨＡを増加させる目的で、ＤＨＡを含むトリグリセリドやリン脂質を経口摂取させる方法が種々検討されている。例えば、ＤＨＡをトリグリセリドとして摂取させる方法では、微生物由来のＤＨＡ高含有油脂を植物油とエステル交換する方法（特許文献３）やＤＨＡを含有する油脂と卵黄、乳等から得られるＤＨＡを含有するリン脂質を摂取させる方法（特許文献４）、ＤＨＡ等の高度不飽和脂肪酸を含有する油脂をリン脂質と共に摂取させる方法（特許文献５）等が提案されている。また、ＤＨＡ等の長鎖高度不飽和脂肪酸は、トリグリセリドとして摂取するよりリン脂質として摂取した方が効果的な場合があることが知られている。このような観点から、動物の脳又は鶏卵から抽出されたＤＨＡを含むリン脂質を摂取させる方法（特許文献６及び特許文献７）、ＤＨＡの豊富な餌を与えて育てた鶏から得た卵黄リン脂質を利用した食事療法組成物（特許文献８）等が開示されている。
【０００７】
しかし、特許文献３、５に開示されているＤＨＡの由来として微生物由来のＤＨＡ含有油脂を用いる方法は、この微生物由来の油脂が極めて特殊な油脂であるため、広く食品に応用することはできなかった。また、特許文献４、６、８に記載されている魚油、卵黄リン脂質、及び乳リン脂質をＤＨＡの由来として用いる場合、ＤＨＡ含量は全脂肪酸組成中の数％程度に過ぎず、生体内のＤＨＡを増加させる効果は不十分であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第５７５９５８５号明細書
【特許文献２】特開２００４−２６８０３号公報
【特許文献３】特表２００７−５２８１９１号公報
【特許文献４】特表平１０−５０８１９３号公報
【特許文献５】国際公開第２００５／０５４４１５号パンフレット
【特許文献６】特表２０００−５１６２６１号公報
【特許文献７】特開平１０−１７４７５号公報
【特許文献８】特開１９９７−５０２３６０号公報
【特許文献９】特開２００３−０１２５２０号公報
【特許文献１０】特開２００３−００３１９０号公報
【特許文献１１】特開２００９−２６９８６４号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】「リピッド（Ｌｉｐｉｄｓ）」１９９１年、第２６巻、ｐ．４２１−５
【非特許文献２】「ジャーナル・オブ・リピッド・リサーチ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＬＩＰＩＤ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」２００７年、第４８巻、ｐ．２４８５−９８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、生体内のＤＨＡ含有リン脂質を増加させることができる、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を提供することである。
【００１１】
前記課題を解決することのできる本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、後述のように１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含む。
１−アルキルエーテル型リン脂質は、リン脂質の１つのサブクラスである。リン脂質は、ジアシル型リン脂質、アルケニルアシル型リン脂質（プラスマローゲン）、及び１−アルキルエーテル型リン脂質（アルキル型リン脂質）のサブクラスに分けることができ、アルケニルアシル型リン脂質（プラスマローゲン）及び１−アルキルエーテル型リン脂質は、エーテル結合を有していることから、まとめてエーテル型リン脂質と呼ばれることもある。
【００１２】
エーテル型リン脂質とはグリセロール骨格のｓｎ−１位にエーテル結合を持ち、ｓｎ−２位には脂肪酸又は水素が結合し、ｓｎ−３位に塩基又は水素の結合したリン酸を持っているグリセロリン脂質である。エーテル型リン脂質の１つである１−アルキルエーテル型リン脂質は、ｓｎ−１位にエーテル結合に加え、炭化水素基を有している。また、もう１つのアルケニルアシル型リン脂質（プラスマローゲン）は、ｓｎ−１位に、更にビニール結合を有しており、すなわちｓｎ−１位の側鎖は、ビニールエーテル結合を有している。
一方、天然に存在する大部分のグリセロリン脂質は、ｓｎ−１位及びｓｎ−２位にエステル結合を有するジアシル型リン脂質であり、一般的にはレシチンと言われ、その主成分はホスファチジルコリンである。
【００１３】
前記プラスマローゲンは抗酸化能を持ち、加齢や酸化ストレスが関与する疾病と関係しているといわれており、神経変性疾患やアルツハイマー病の予防などへの利用が検討されている（特許文献１及び特許文献２）。更に、プラスマローゲンが抗酸化能を持つことから、プラスマローゲンを生体組織の脂質の過酸化を抑制する抗酸化剤として利用する方法（特許文献９）や酸化安定性に優れた高度不飽和脂肪酸供給組成物として利用する方法（特許文献１０）が開示されている。また、プラスマローゲン、好ましくはコリン型プラスマローゲンを投与することにより、アラキドン酸結合型リン脂質が増加することが報告されている（特許文献１１）。
【００１４】
更に、特許文献６、７に記載の、動物の脳や内臓から得られるリン脂質はエーテル型リン脂質を含む可能性が考えられるが、特許文献６は得られたリン脂質が生体内のメラトニン分泌を調節する機能を開示したものであり、特許文献７はＤＨＡを含むリン脂質が血液中の総コレステロール、中性脂質を低下させ、高密度リポ蛋白質コレステロールを増大させる機能を示すことを開示したものであり、共に、エーテル型リン脂質が生体内のＤＨＡを増加させることを開示したものではなかった。
【００１５】
また、特許文献９、１０はプラスマローゲンの抗酸化能を利用した発明であり、生体内のＤＨＡを増加させることを開示したものではなかった。更に、特許文献１１はアラキドン酸を増加することを示した文献であって、血液中のＤＨＡを増加させることを開示したものではなかった。
【００１６】
このように、従来、血液中のＤＨＡ含量、特にリン脂質の形態で存在するＤＨＡ含量を増加させることのできる組成物は見出されていなかった。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、生体内でＤＨＡを増加させることのできる組成物について、鋭意研究した結果、驚くべきことに、１−アルキルエーテル型リン脂質の投与により、生体内のリン脂質結合型ＤＨＡを飛躍的に増加させることができることを見出した。前記特許文献１１には、プラスマローゲンの投与により、リン脂質結合型のアラキドン酸が増加することが開示されている。本発明者らは、１−アルキルエーテル型リン脂質を投与した場合、リン脂質結合型のアラキドン酸は生体内では減少するが、リン脂質結合型ＤＨＡは、飛躍的に増加することを見出した。プラスマローゲンの投与と、その前駆体である１−アルキルエーテル型リン脂質の投与により、生体内で増加する脂肪酸の種類が異なることのメカニズムは明らかではないが、当業者にとって驚くべきことである。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
従って、本発明は、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とする、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に関する。
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤の好ましい態様においては、更にＤＨＡを含み、特には、前記ＤＨＡの５０％以上がリン脂質に結合している。
また、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤の好ましい態様においては、オキアミ抽出物由来の、１−アルキルエーテル型リン脂質及び／又はＤＨＡを含む。
また、本発明は、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とする、リン脂質結合型ＤＨＡを上昇させる飲食品に関する。
本発明の飲食品の好ましい態様においては、更にＤＨＡを含み、特には、前記ＤＨＡの５０％以上がリン脂質に結合している。
また、本発明の飲食品の好ましい態様においては、オキアミ抽出物由来の、１−アルキルエーテル型リン脂質及び／又はＤＨＡを含む。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のＤＨＡ増加剤は、血液中のリン脂質中の、ＤＨＡ含量を増加させることが可能である。従って、前記のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、リン脂質結合型ＤＨＡの増加によって予防又は治療可能な疾患を、効果的に予防又は治療することができる。
更に本発明による飲食品は、毎日の飲食により、血液中のリン脂質中の、ＤＨＡ含量を増加させることが可能である。従って、飲食品の摂取のみで、リン脂質結合型ＤＨＡの低下又は消失に起因する疾患の予防又は治療に有用である。また、本発明の飲食品に使用されるエーテル型リン脂質は、広範な飲食品に使用することが可能であり、風味良好な飲食品を容易に得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
［１］リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤
（１−アルキルエーテル型リン脂質）
本発明の、経口投与剤は、一般式（Ｉ）
【化１】
［式中、Ｒ１は、炭素数１から２１の炭化水素基であり、Ｒ２は、炭素数１〜２６の脂肪酸残基、または水素原子であり、Ｒ３はコリン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）３）、エタノールアミン（−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、セリン（−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ）、グリセロール（−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨ）、イノシトール（−ＣＨ−Ｃ５Ｈ５（ＯＨ）５）、又は水素原子である］
で表される１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含む。
ここで、ｓｎ−１位がエステル結合であるリン脂質、例えば一般的なジアシル型リン脂質（すなわち「レシチン」）や、前記レシチンをホスホリパーゼ等で処理したリゾリン脂質を有効成分として用いた場合は本発明の効果は得られない。
前記Ｒ１の炭化水素基はアルキル基、又はアルケニル基でもよく、具体的にはペンタデシル基、ヘプタデシル基、又はヘプタデセル鎖基を挙げることができる。なお、本明細書において、「ｓｎ−１位の脂肪酸残基」とは、脂肪酸からカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）を除いたものを意味し、具体的には一般式（１）のＲ１とエーテル基の炭素を含む「−ＣＨ２−Ｒ１」を意味し、１６：０、１８：０、又は１８：１（炭素数：不飽和結合数）などと表記する。
また、前記Ｒ２の肪酸残基としては、具体的には、パルミトイル基、オレイル基、アラキドイル基、又はドコサヘキサエノイル基等を挙げることができる。なお、本明細書において、ｓｎ−２位の脂肪酸残基とは、脂肪酸から−ＯＨを除いたものを意味し、１６：０、１８：１、２０：４、又は２２：６（炭素数：不飽和結合数）などと表記する。また、本明細書において、「ｓｎ−２位のアシル基」とは、脂肪酸からカルボキシル基の水素原子（−Ｈ）を除いた基を意味する。
【００２０】
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤においては、１−アルキルエーテル型リン脂質のｓｎ−１位の脂肪酸残基及びｓｎ−２位の脂肪酸残基の由来となる脂肪酸が、どの脂肪酸であっても本発明の効果を有する。但し、後述のように本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤と同時にＤＨＡを投与すると本発明の高い効果が得られること、更には、同時投与のＤＨＡがリン脂質結合型であると更に本発明の高い効果が得られることから、前記１−アルキルエーテル型リン脂質についてもＤＨＡ含量が高いほど本発明の高い効果が得られることから、ＤＨＡ含量が５％以上、好ましくは１０％以上の１−アルキルエーテル型リン脂質を使用することが好ましい。
【００２１】
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に用いる１−アルキルエーテル型リン脂質は、従来、疾患の治療、又は食品に使用されていたプラスマローゲンと比較して、保存安定性が良好であり、この観点からも有用である。
【００２２】
（プラスマローゲンと１−アルキルエーテル型リン脂質との混合比）
１−アルキルエーテル型リン脂質は天然物にも少量含まれ、その場合はプラスマローゲンと１−アルキルエーテル型リン脂質は混合物として存在していることが多い。本発明で使用するエーテル型リン脂質としては、プラスマローゲンと１−アルキルエーテル型リン脂質の比が５０：５０〜０：１００とすることが好ましく、より好ましくは３０：７０〜０：１００、更に好ましくは１０：９０〜０：１００とする。プラスマローゲンの割合が５０％以上であると、常温で長期保存した場合に、エーテル型リン脂質は１−リゾアシルリン脂質と脂肪酸アルデヒドに分解され、過酸化リン脂質に変化してしまうため、本発明の効果が極端に減少してしまうおそれがある。
【００２３】
（１−アルキルエーテル型リン脂質の化学合成）
本発明に用いることのできる１−アルキルエーテル型リン脂質は、グリセリンを１−アルキルエーテルグリセロールに変換し、エステル化やリン酸化を行うことにより、化学合成することも可能であり、化学合成の１−アルキルエーテル型リン脂質を用いることも可能である。しかし本発明では、入手の容易性や生産性から、天然物から抽出及び分離したものが好ましい。
【００２４】
（１−アルキルエーテル型リン脂質の製造原料）
なお、ここで、抽出源とする天然物としては、エーテル型リン脂質中の１−アルキルエーテル型リン脂質含量が５０％以上である天然物を使用することが好ましく、より好ましくは８０％以上、更に好ましくは９５％以上である天然物を使用することが好ましい。なお、前記天然物は、プラスマローゲンをなるべく含有しないことが好ましく、好ましくはエーテル型リン脂質中のプラスマローゲン比が５０％以下であることが好ましく、より好ましくは２０％以下、更に好ましくは５％以下である天然物を使用する。
なお、ここで、抽出源とする前記天然物として１−アルキルエーテル型リン脂質とプラスマローゲンを共に含有する天然物を使用する場合は、弱酸溶液処理等の方法により、あらかじめプラスマローゲンを除去するか、あるいは、下記の分画・濃縮・精製の操作に加え、前記プラスマローゲンを除去する操作を行うことが好ましい。
【００２５】
１−アルキルエーテル型リン脂質を抽出、分離する天然物としては、一般的に１−アルキルエーテル型リン脂質含量が高いことが知られている各種の動物、植物、微生物、例えば、マグロ、イワシなどの魚類、ホタテ、カキ、ムール貝などの貝類、タコ、イカなどの頭足類、エビ、フジツボ、オキアミ、カラヌスなどの甲殻類、ウシ、ブタ、ニワトリなどの家禽動物などの、その個体そのもの、その筋肉組織や、脂肪組織、あるいは脳などの神経組織、腸などの内臓組織、更にはその卵などを使用することができる。なかでも本発明では、エーテル型リン脂質中の１−アルキルエーテル型リン脂質含量が高くプラスマローゲン含量が極めて少ない、すなわち、エーテル型リン脂質中の１−アルキルエーテル型リン脂質含量比が高い天然物であること、更には、組織を分離することなく生体そのものを直接抽出源とすることができ、資源量が豊富であり、入手が容易であることに加え、更にはアスタキサンチンを含有することから保存安定性が良好であるリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を得ることが可能であることから、オキアミを用いることが特に好ましい。
【００２６】
（１−アルキルエーテル型リン脂質の抽出方法）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤では、これら各種動物、植物、微生物から、溶剤抽出などによって抽出された、エーテル型リン脂質含有脂質、更には、必要に応じて、前記脂質から液々抽出やカラムクロマトグラフィー、酵素処理などでリン脂質を分離した、リン脂質画分や、更にエーテル型リン脂質を濃縮した濃縮物、また、更に精製した、精製エーテル型リン脂質を使用することができる。
前記各種動物、植物、微生物等の組織からの抽出方法としては、Folch法（Folch et al.：J. Biol. Chem., 226, 497-505, 1957）、Bligh & Dyer法（Bligh et al.：Can. J. Biochem. Physiol., 37, 911-917, 1959）、あるいは安全性の高い有機溶媒であるヘキサンや低級アルコールを用いた混合溶媒を用いる方法（Hara et al.：Anal. Biochem., 90(1):420-6，1978、特開2005-179340）、また、安全性が高く、かつ液液抽出の界面分離性が優れるヘキサンとエタノールの混合溶媒を用いる方法（特開2009-227765）などがある。また、抽出効率を高めるために、前記動物組織を脱水処理したものを用いてもよい。
【００２７】
また、前記分離方法としては、アセトン沈殿法（山川民夫監修：生化学実験講座３，脂質の化学（日本生化学会編），p.19−20，1963，東京化学同人）、カラムクロマトグラフィー法（James et al.：Lipids, 23, 1146-1149, 1988）等によるトリグリセリドや部分グリセリドを除去し、エーテル型リン脂質を含むリン脂質画分のみを分離精製することができる。
【００２８】
更に、前記濃縮方法としては、弱アルカリ処理（Hanahan et al.：J. Biol. Chem. 236, 59-60, 1961）、あるいは哺乳動物膵臓由来リパーゼ又は微生物由来のホスホリパーゼＡ１処理によるジアシル型リン脂質の分解（Woelk et al.：Z Physiol. Chem. 354, 1265-70, 1973）の方法を用いて、エーテル型リン脂質以外のリン脂質を除去することでエーテル型リン脂質を濃縮することができる。
【００２９】
ホスホリパーゼＡ１を用いて濃縮する場合、具体的には、エーテル型リン脂質含有脂質に対し、ホスホリパーゼＡ１、好ましくはＡｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．由来のホスホリパーゼＡ１を添加し、好ましくは少量のジエチルエーテルと弱酸性緩衝液下で、分解反応させ、分解生成物を親水性溶媒と疎水性溶媒の混合溶媒、例えば、ヘキサン／エタノール混合溶媒により再抽出することで得ることができる。
【００３０】
更に詳しく述べると、エーテル型リン脂質含有脂質１ｇにホスホリパーゼＡ１を０．１〜２．０Ｕ、酢酸緩衝液ｐＨ５．０〜６．０を２〜２０％、好ましくは５〜１０％添加し、３０〜６０℃で、２〜１００時間、攪拌しながら分解反応させる。反応溶液にヘキサン／エタノール／水の混合溶媒、例えばヘキサン６５〜９０に対し、エタノール５〜２０、水４〜１０、好ましくはヘキサン７５〜８５、エタノール１０〜１８、水５〜８の比の混合溶媒を加えて再抽出することで、ホスホリパーゼＡ１反応で生じた１−リゾリン脂質は下層の水層に、エーテル型リン脂質は上層のヘキサン層に分離することができる。ここで、上層のヘキサン層を分取し、定法によりヘキサンを除去することで、エーテル型リン脂質以外のリン脂質を除去し、エーテル型リン脂質のみを濃縮することができる。
なお、前記エーテル型リン脂質の濃縮の前又は後、好ましくは後に、トリグリセリドに代表される中性脂質を分画除去し、エーテル型リン脂質含有リン脂質とすることが好ましい。この中性脂質の除去方法としては、アセトン沈殿法やカラムクロマトグラフィーなどの公知の方法を採ることができる。
【００３１】
更には、シリカゲルクロマトグラフィーによってｓｎ−３位の塩基の種類別に濃縮することも可能である。例えば、シリカゲルをヘキサン／エタノール混合溶媒、好ましくは９５：５〜６０：４０の混合溶媒で充填したカラムに、エーテル型リン脂質含有脂質やエーテル型リン脂質含有リン脂質を充填し、同溶媒をカラム体積の２〜８倍量通液させて中性脂質を溶出させた後、ヘキサン／エタノール混合溶媒、好ましくは５：９５〜０：１００、あるいはエタノール／水の混合溶媒、好ましくは１００：０〜９５：５をカラム体積の６〜１５倍量通液させることにより、エタノールアミン型やホスファチジン酸型を分画することができ、続いてエタノール／水の混合溶媒、好ましくは９０：１０〜７０：３０をカラム体積の８〜２０倍量通液させることにより、コリン型を分画することができる。
【００３２】
また、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤における１−アルキルエーテル型リン脂質含有量は、好ましくは２〜１００％、より好ましくは５〜１００％、更に好ましくは５０〜１００％である。また、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有する本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、１−アルキルエーテル型リン脂質以外のリン脂質、例えばプラスマローゲンを含むこともできるが、プラスマローゲンは１−アルキルエーテル型リン脂質よりも酸化されやすく保存安定性が極めて低いため、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に含むことのできるエーテル型リン脂質の全量に対する１−アルキルエーテル型リン脂質の比率は、１−アルキルエーテル型リン脂質が６０％以上であり、好ましくは８０％以上であり、最も好ましくは９０％以上である。
【００３３】
（その他の脂質）
なお、前記エーテル型リン脂質含有脂質や前記エーテル型リン脂質含有リン脂質の、エーテル型リン脂質以外のその他の脂質はジアシル型リン脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質、中性脂質などからなる。
【００３４】
（ＤＨＡ）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、本発明の効果を高めるためにＤＨＡを含有することが好ましい。なお、一般のジアシル型リン脂質（すなわち「レシチン」）の場合は、本発明の効果が得られないのは前記のとおりであるが、ジアシル型リン脂質とＤＨＡを併用のみでは本発明の効果は得られない。
【００３５】
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤におけるＤＨＡの好ましい含有量は、特に限定されるものではないが、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは４％以上、より好ましくは７％以上、更に好ましくは１０％以上である。上限は特に制限されないが、保存安定性の面から７０％以下であることが好ましく、より好ましくは５０％以下である。
【００３６】
なお、前記ＤＨＡは、エーテル型リン脂質に結合したものであっても、エーテル型リン脂質以外のその他の脂質、例えばジアシル型リン脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質、中性脂質に結合したものであってもよく、更には遊離脂肪酸の形態や、塩の形態であってもよいが、酸化に対する安定性が高く、保存性を高めることが可能である点で、エーテル型リン脂質（プラスマローゲン又は１−アルキルエーテル型リン脂質）、ジアシル型リン脂質、及びモノアシル型リン脂質などのリン脂質結合型であることが好ましい。この場合、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に含まれるＤＨＡの好ましくは５０〜１００％、より好ましくは７０〜１００％、最も好ましくは８０〜１００％がリン脂質結合型であることが好ましい。なお、安定性の面からは、遊離型ＤＨＡは含有しないことが好ましい。
【００３７】
（その他の成分）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤では、前記以外のその他の成分を含有することができる。前記その他の成分としては、例えば、食用油脂、水、グリセリン脂肪酸エステル、蔗糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン有機酸脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ステアロイル乳酸カルシウム、ステアロイル乳酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等の乳化剤、ローカストビーンガム、カラギーナン、アルギン酸類、ペクチン、キサンタンガム、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、寒天、グルコマンナン、ゼラチン、澱粉、又は化工澱粉等の増粘安定剤、食塩、又は塩化カリウム等の塩味剤、酢酸、乳酸、又はグルコン酸等の酸味料、糖類又は糖アルコール類、ステビア、又はアスパルテーム等の甘味料、ベータカロチン、カラメル、又は紅麹色素等の着色料、トコフェロール、又は茶抽出物等の酸化防止剤、着香料、ｐＨ調整剤、食品保存料、又は日持ち向上剤等の食品素材や食品添加物を挙げることができる。また、各種ビタミンやコエンザイムＱ、植物ステロール、又は乳脂坊球皮膜等の機能素材を含有させることも可能である。
これらのその他の成分の含有量は、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤中、合計で好ましくは８０質量％以下、より好ましくは４０質量％以下、更に好ましくは２０質量％以下とする。
【００３８】
（リン脂質結合型ＤＨＡ）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤によって、生体内で増加するリン脂質結合型ＤＨＡの種類は、ＤＨＡが結合している限り、特に限定されるものではない。
具体的には、リン脂質として、プラスマローゲン、又は１−アルキルエーテル型リン脂質、を挙げることができる。ＤＨＡの結合部位は特に限定されるものではないが、基本的には前記リン脂質のｓｎ−２位である。
更に、リン脂質結合型ＤＨＡは、生体内で増加する。本明細書において「生体内」とは、特に限定されるものではない。具体的には、体液、例えば、血液（血漿、血清を含む）、髄液、尿、唾液、若しくは組織液、又は組織、若しくは臓器を挙げることができるが、リン脂質結合型ＤＨＡが生体内のすべての組織に運ばれ、その効果が得られることから、血液中で増加することが好ましい。
【００３９】
（対象疾患）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、動脈硬化、アレルギー・炎症性疾患、乳児の発育、学習能力や記憶力の低下、発ガンなどを改善することが可能である。ＤＨＡが低下、消失する疾患としては、血栓症、多動性障害、認知症、視力の低下、胎児や乳児の正常な発育の阻害、うつ病などを挙げることができ、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、これらの疾患の治療及び予防に有用である。
【００４０】
また、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、広範な各種飲食品や医薬組成物に配合・添加することができ、その摂取量としては、成人の場合、エーテル型リン脂質として１日あたり、好ましくは１００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜２０ｇを摂取することが望ましい。
【００４１】
［２］飲食品
本発明の飲食品は、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有する。また、本発明の飲食品は、前記の１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有するリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を含有することもできる。
本発明の飲食品における、１−アルキルエーテル型リン脂質の含有量は、使用する飲食品により異なるが、成人の場合、１−アルキルエーテル型リン脂質として１日当たり１００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜２０ｇ摂取できる量のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を飲食物中に含有できればよい。具体的には、飲食品中０．１〜１００質量％であることが好ましい。
【００４２】
なお、本発明における飲食品としては、特に限定されるものではなく、例えば味噌、醤油、めんつゆ、たれ、だし、パスタソース、ドレッシング、マヨネーズ、トマトケチャップ、ウスターソース、とんかつソース、又はふりかけ等の調味料、お吸い物の素、カレールウ、ホワイトソース、お茶漬けの素、又はスープの素等の即席調理食品、味噌汁、お吸い物、コンソメスープ、又はポタージュスープ等のスープ類、焼肉、ハム、又はソーセージ等の畜産加工品、かまぼこ、干物、塩辛、佃煮、又は珍味等の水産加工品、漬物等の野菜加工品、ポテトチップス、又は煎餅等のスナック類、食パン、菓子パン、又はクッキー等のベーカリー食品類、煮物、揚げ物、焼き物、カレー、シチュー、グラタン、ごはん、おかゆ、又はおにぎり等の調理食品、パスタ、うどん、又はラーメン等の麺類食品、マーガリン、ショートニング、ファットスプレッド、又は風味ファットスプレッド等の油脂加工食品、フラワーペースト、又は餡等の製菓製パン用素材、パン用ミックス粉、ケーキ用ミックス粉、又はフライ食品用ミックス粉等のミックス粉、チョコレート、キャンディ、ゼリー、アイスクリーム、又はガム等の菓子類、饅頭、又はカステラ等の和菓子類、コーヒー、コーヒー牛乳、紅茶、ミルクティー、豆乳、栄養ドリンク、野菜飲料、食酢飲料、ジュース、コーラ、ミネラルウォーター、又はスポーツドリンク等の飲料、ビール、ワイン、カクテル、又はサワー等のアルコール飲料類、牛乳、ヨーグルト、又はチーズ等の乳や乳製品等が挙げられる。
【００４３】
本発明のエーテル型リン脂質を含有する飲食品は、１−アルキルエーテル型リン脂質を原料として含むこと以外は、公知の飲食品の製造方法を用いて製造することができる。
【００４４】
本発明の飲食品は、１−アルキルエーテル型リン脂質を含有することにより、血液中においてリン脂質結合型ＤＨＡ含量を増加させることが可能であり、機能性食品又は健康食品（飲料も含む）として用いることができる。また動物には、飼料として与えることができる。１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有する本発明の飲食品を、機能性食品又は健康食品として使用する場合、前記のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に記載のように、例えば、オキアミから分離した１−アルキルエーテル型リン脂質を含むことが好ましい。
【００４５】
本発明の飲食品は、前記のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤と同じように、本発明の効果を高めるためにＤＨＡを含有することが好ましい。本発明の飲食品におけるＤＨＡの好ましい含有量は、飲食品に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは１％以上、より好ましくは２％以上である。上限は特に制限されないが、保存安定性の面から７０％以下であることが好ましく、より好ましくは５０％である。
なお、前記ＤＨＡは、前記の本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤同様、酸化に対する安定性が高く、保存性を高めることが可能である点で、エーテル型リン脂質、ジアシル型リン脂質、又はモノアシル型リン脂質などのリン脂質結合型であることが好ましい。この場合、飲食品に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは５０〜１００％、より好ましくは７０〜１００％、最も好ましくは８０〜１００％がリン脂質結合型であることが好ましい。なお、安定性の面で、遊離型ＤＨＡは含有しないことが好ましい。
【００４６】
本発明の飲食品に用いる１−アルキルエーテル型リン脂質は、従来食品に使用されていたプラスマローゲンと比較して、保存安定性が良好であり、この観点からも有用である。
また、本発明の飲食品によれば、前記リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤と同じように、生体内のリン脂質結合型ＤＨＡを上昇させることができる。
【００４７】
［３］医薬組成物
医薬組成物は、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有するため、血液中のリン脂質結合型ＤＨＡを増加させることが可能である。前記のエーテル型リン脂質を有効成分として含有するリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を使用することもできる。
医薬組成物における、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤の含有量は、使用する医薬組成物により異なるが、成人の場合、エーテル型リン脂質として１日当たり１００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜２０ｇ摂取できる量のエーテル型リン脂質増加剤を医薬組成物中に含有できればよい。具体的には、１−アルキルエーテル型リン脂質は医薬組成物中、０．１〜１００質量％であることが好ましく、０．５〜９９質量％であることが好ましく、１〜８０質量％であることが最も好ましい。
医薬組成物は、１−アルキルエーテル型リン脂質を単独で、あるいは、好ましくは薬剤学的又は獣医学的に許容することができる通常の担体又は希釈剤とともに、ＤＨＡの低下又は消失に起因する疾患の治療及び／又は予防が必要な対象［例えば、動物、好ましくは哺乳動物（特にヒト）］に有効量で投与することができる。
医薬組成物は、リン脂質結合型ＤＨＡの濃度を上昇させることのできる物質を含むこともできる。
【００４８】
医薬組成物の投与剤型としては、特に限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼剤などの非経口剤を挙げることができるが、経口剤が好ましい。
【００４９】
経口剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ブドウ糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリビニルピロリデン、結晶セルロース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、常法に従って製造することができる。
【００５０】
医薬組成物を用いる場合の投与量は、例えば、使用する有効成分の種類、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、生上の程度、又は投与方法に応じて適宜決定することができ、経口的に又は非経口的に投与することが可能である。
更に、投与形態も医薬品に限定されるものではなく、種々の形態、例えば、機能性食品や健康食品（飲料も含む）、又は飼料として飲食物の形態で与えることも可能である。
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を含有する医薬組成物の製造方法は、前記にエーテル型リン脂質を有効成分として含むこと以外は、公知の医薬品の製造方法を用いて製造することができる。
【００５１】
前記医薬組成物は、１−アルキルエーテル型リン脂質を含有することにより、血液中においてリン脂質結合型ＤＨＡ含量を増加させることが可能である。なお、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として使用する場合、前記のように、例えば、オキアミから分離した１−アルキルエーテル型リン脂質を含むことが好ましい。
前記医薬組成物は、本発明の効果を高めるためにＤＨＡを含有することが好ましい。
前記医薬組成物におけるＤＨＡの好ましい含有量は、医薬組成物に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは１％以上、より好ましくは２％以上である。上限は特に制限されないが、保存安定性の面から７０％以下であることが好ましく、より好ましくは５０％である。
なお、前記ＤＨＡは、前記の本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤同様、酸化に対する安定性が高く、保存性を高めることが可能である点で、エーテル型リン脂質、ジアシル型リン脂質、又はモノアシル型リン脂質などのリン脂質結合型であることが好ましい。この場合、医薬組成物に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは５０〜１００％、より好ましくは７０〜１００％、最も好ましくは８０〜１００％がリン脂質結合型であることが好ましい。なお、安定性の面で、遊離型ＤＨＡは含有しないことが好ましい。
【００５２】
ＤＨＡを増加させることで、動脈硬化を含むなどの血栓性疾患、老人性認知症、視覚障害、うつ病などの精神性疾患を予防又は治療することが可能である。本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤、飲食品、又は医薬組成物を生体内に投与、特には経口投与することにより、血液中のリン脂質結合型ＤＨＡを増加させることが可能である。すなわち、エーテル型リン脂質を有効成分として含有する本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤、飲食品、又は医薬組成物を生体内に投与、特には経口投与することにより、生体内においてリン脂質結合型ＤＨＡを増加させる方法を提供することが可能である。
本発明の飲食品や医薬組成物を経口摂取する場合の摂取量は、前記のとおり、例えば成人の場合、エーテル型リン脂質として１日当たり１００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜２０ｇ摂取できる量の血液中のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を医薬組成物中に含有できる量である。
【実施例】
【００５３】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら制限されるものではない。
【００５４】
＜１＞エーテル型リン脂質含有試料の製造
〔製造例１〕
オキアミを利用してエーテル型リン脂質含有脂質を製造した。
冷凍ボイルオキアミの捏練品（オキアミＣＰＭ−ＭＤ、ＡＤＥＫＡファインフーズ）６０ｋｇ（水分含有量８７質量％）に、ヘキサン：エタノール＝６０：４０で混合した混合溶媒２１６Ｌを加え、１０分間攪拌した。その後、吸引濾過により得たろ液の上層であるヘキサン層を脂質抽出液として回収した。続いて、ろ液下層とろ過残渣を合わせ、それに新たにヘキサン１３０Ｌを加え、１０分間攪拌して脂質画分を抽出後、前記同様に抽出液を回収した。更に、ろ液下層とろ過残渣に同一の操作をもう１回繰り返し、回収した合計３回分の抽出液を併せ、エバポレーターを使用して混合溶媒を除去し、残渣としてエーテル型リン脂質含有脂質である２．２ｋｇのオキアミ油を得た。
得られたオキアミ油は、下記の分析方法に従い、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成を測定し、その結果を表１に記載した。
更に、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量についても、下記の分析方法に従って測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及び、リン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。なお、中性脂質（トリグリセリド）の脂肪酸組成については、基準油脂分析試験法に記載の方法に従い、メチルエステル化処理で得た脂肪酸メチルエステル量をガスクロマトグラフィーで検出することにより測定し、その結果を併せて表１に記載した。
【００５５】
〔製造例２〕
製造例１で得られたオキアミ油２００ｇにアセトン２．５Ｌを添加し、４℃で１時間静置した。上清を除去し、更にアセトン２．５Ｌを添加し、同様に処理した。残った沈殿物を乾固し、中性脂質を除去し、１−アルキルエーテル型リン脂質含有リン脂質画分である、８７ｇのオキアミ油リン脂質画分を得た。
得られたオキアミ油リン脂質画分は、製造例１同様、リン脂質含量、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量を測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及びリン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。
【００５６】
〔製造例３〕
実施例１で得られたオキアミ油２０００ｇにジエチルエーテル９６ｍＬ及び０．２Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ５．０ ２０５ｍＬに混濁させたＬｅｃｉｔａｓｅＵｌｔｒａ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）１００ｋＵを添加し、４０℃で７０時間攪拌した。反応溶液にヘキサン／エタノール／水（８０：１４：６）１８Ｌを添加し、１０分攪拌混合後、上層を採取した。続いて、下層に新たにヘキサン１４Ｌを加え、１０分間攪拌して、同様に脂質画分を回収した。更に、下層に同一の操作をもう１回繰り返し、回収した合計３回分の抽出液を併せ、エバポレーターを使用して混合溶媒を除去し、残渣分１９５０ｇを得た。
残渣分２００ｇについて、ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒３００ｍＬに溶解したものを、ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒でけん濁したシリカゲル（Wakosil２００）４００ｇを充填したガラスカラム（１００ｃｍ×３ｃｍ）に添加した。ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒を４Ｌ通液させて中性脂質を溶出した後、エタノール８Ｌを通液させてエタノールアミンリン脂質を溶出させた。更にエタノール／水＝８０：２０の混合溶媒１１Ｌを通液させてコリンリン脂質を溶出させた。
得られた溶出液をエバポレーターで濃縮し、残渣として、ｓｎ−３位の塩基がコリン型である１−アルキルエーテル型リン脂質が濃縮された、７．２ｇのオキアミ油コリンリン脂質画分を得た。
得られたオキアミ油コリンリン脂質画分は、製造例１同様、リン脂質含量、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量を測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及びリン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。
【００５７】
〔製造例４〕
製造例３で得られたエーテル型リン脂質含有リン脂質１４ｇにジエチルエーテル２８ｍＬ、１Ｍ塩化カルシウム溶液６ｍＬ、酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１４４ｍＬ、塩化エタノールアミン２０ｇ、Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．由来ホスホリパーゼＤ１．２ｇ（１２００Ｕ、名糖産業）を添加し、４５℃で４０時間攪拌した。ヘキサン／エタノール（６０：４０）６００ｍＬを添加し、１０分攪拌混合後、上層を採取した。続いて、下層に新たにヘキサン３６０ｍＬを加え、１０分間攪拌して、同様に脂質画分を回収した。更に、下層に同一の操作をもう１回繰り返し、回収した合計３回分の抽出液を併せ、エバポレーターを使用して混合溶媒を除去し、残渣分１１ｇを得た。
残渣をヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒３００ｍＬに溶解したものを、ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒でけん濁したシリカゲル（Wakosil２００）４００ｇを充填したガラスカラム（１００ｃｍ×３ｃｍ）に添加した。ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒を４Ｌ通液させて中性脂質を溶出した後、エタノール８Ｌを通液させてエタノールアミン型リン脂質を溶出させた。
得られた溶出液をエバポレーターで濃縮し、残渣として、ｓｎ−３位の塩基がエタノールアミン型である１−アルキルエーテル型リン脂質が濃縮された、１０ｇのオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分を得た。
得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分は、製造例１同様、リン脂質含量、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量を測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及びリン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。
【００５８】
〔製造例５〕
製造例３で得られたエーテル型リン脂質含有リン脂質１４ｇにジエチルエーテル２８ｍＬ、１Ｍ塩化カルシウム溶液６ｍＬ、酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１４４ｍＬ、Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．由来ホスホリパーゼＤ１．２ｇ（１２００Ｕ、名糖産業）を添加し、４５℃で４０時間攪拌した。ヘキサン／エタノール（６０：４０）６００ｍＬを添加し、１０分攪拌混合後、上層を採取した。続いて、下層に新たにヘキサン３６０ｍＬを加え、１０分間攪拌して、同様に脂質画分を回収した。更に、下層に同一の操作をもう１回繰り返し、回収した合計３回分の抽出液を併せ、エバポレーターを使用して混合溶媒を除去し、残渣分１３ｇを得た。
残渣をヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒３００ｍＬに溶解したものを、ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒でけん濁したシリカゲル（Wakosil２００）４００ｇを充填したガラスカラム（１００ｃｍ×３ｃｍ）に添加した。ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒を４Ｌ通液させて中性脂質を溶出した後、エタノール８Ｌを通液させてホスファチジン酸型リン脂質を溶出させた。
得られた溶出液をエバポレーターで濃縮し、残渣として、ｓｎ−３位の塩基がホスファチジン酸型である１−アルキルエーテル型リン脂質が濃縮された、１２ｇのオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分を得た。
得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分は、製造例１同様、リン脂質含量、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量を測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及びリン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。
【００５９】
【表１】
【００６０】
【表２】
【００６１】
＜２＞動物試験（摂食試験）
〔実施例１〜４、比較例１〕
５週齢の雄Wistar-ST系ラットを、６群（１群６匹）に分け、飼料及び水を自由に摂取させた。飼料はＡＩＮ９３Ｇに準じた精製飼料（基本飼料：大豆油７％を含む）を用いた。なお、基本飼料は毎日交換し、飲水の水道水は３日毎に交換した。前記条件で７日間飼育した後、基本飼料の大豆油７％の代わりに製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例３）、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）、基本餌料（比較例１）を与え、８日間飼育した。
なお、基本飼料の配合を表３に記載する。
なお、試験期間中、各群のラットの体重増加量及び餌の摂取量への影響は認められなかった。
【００６２】
８日間の給餌後、採血し、下記の分析方法に従い、血清画分の脂質を抽出した。
抽出した血清脂質は、下記の分析方法に従い、血清中のプラスマローゲン量、リン脂質量（１−アルキルエーテル型リン脂質とプラスマローゲンの合計量）を、ｓｎ−１位及びｓｎ−２位の結合脂肪酸の種類及びｓｎ−３位の塩基の種類（分子種）ごとに測定した。
ｓｎ−２位の結合脂肪酸の種類ごとの測定値のうち、リン脂質とプラスマローゲンそれぞれの、ＤＨＡ結合型について、その含量（ｎｍｏｌ／Ｌ）と、その比率（ｍｏｌ％）を表４及び表５に記載した。更に、比較例１（大豆油のみ）を１００とした場合の前記含量と比率についても同様に表４及び表５に記載した。なお、参考のためにアラキドン酸結合型の含量についてもあわせて記載した。
また、ｓｎ−３位の塩基の種類ごとの測定値のうち、ＤＨＡ結合型プラスマローゲンについて、その含量（ｎｍｏｌ／Ｌ）と、コリン型とエタノールアミン型の比率を表６に記載した。
【００６３】
【表３】
【００６４】
【表４】
【００６５】
【表５】
【００６６】
【表６】
【００６７】
＜２＞分析方法
本実施例の動物試験における血清中のプラスマローゲン及び１−アルキルエーテル型リン脂質の定量は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて行った。
【００６８】
（被検試料からのプラスマローゲン及び１−アルキルエーテル型リン脂質の抽出）
血清からの総脂質の抽出は、以下のようにして行った。血液を遠心分離して得た血清０．３ｍＬに１％塩化カリウム水溶液を加えて混合し、メタノール２．４ｍＬ、クロロホルム１．２５ｍＬ及び内部標準物質として、ｓｎ−１位、ｓｎ−２位が共にミリスチン酸のジアシル型コリンリン脂質（以下、１４：０／１４：０−ＰＣと言う）７．３ｎｍｏｌ及びｓｎ−１位、ｓｎ−２位がミリスチン酸のジアシルエタノールアミン型リン脂質（以下、１４：０／１４：０−ＰＥと言う）１．７ｎｍｏｌ及びｓｎ−１位、ｓｎ−２位がミリスチン酸のホスファチジン酸型リン脂質（以下、１４：０／１４：０−ＰＡと言う）１．７ｎｍｏｌ含むクロロホルム：メタノール＝２：１の混液０．１ｍＬを加え、１０分間混合後、３０分間室温で放置した。更に、クロロホルム１．２５ｍＬを加えて混合し、１時間室温で放置後、１．２５ｍＬの１％塩化カリウム水溶液を加え、３０００ｒｐｍ、１５分間遠心分離後、クロロホルム層（下層）を採取した。残渣に更にクロロホルム２．０ｍＬ加え、混合・放置後、遠心分離を行い、下層を採取し、先の採取液と合わせ、窒素の吹きつけにより、溶媒を除去後、１．０ｍＬのメタノールに溶解し、フィルターを通したあと、適宜メタノールで希釈したのち、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて解析した。なお、その際のＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）と、ＭＳ／ＭＳ（タンデム質量分析）の条件はそれぞれ以下のとおりである。
【００６９】
（ＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）の条件）
ＬＣ システム：Ａｃｃｅｌａ ＵＨＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ
溶離液Ａ：５ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
溶離液Ｂ：アセトニトリル
カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ８（２．１×１００ｍｍ，１．７μｍ）
カラム温度：６０℃
流速：０．４５ｍＬ／ｍｉｎ
ＵＨＰＬＣの溶離液の条件を表７に示す。
【００７０】
【表７】
【００７１】
（ＭＳ／ＭＳ（タンデム質量分析）の条件）
ＭＳシステム：ＴＳＱ Ｑｕａｎｔｕｍ ｓｙｓｔｅｍ
イオン化モード：ＨｅａｔｅｄＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ
キャピラリー電圧：３．２ｋＶ
コーン電圧：３５Ｖ
Ｄｅｓｏｌｖａｔｉｏｎ温度：４００℃
Ｓｏｕｒｃｅ温度：８０℃
衝突エネルギー：３２ｅＶ（コリンプラスマローゲン）
２０ｅＶ（エタノールアミンプラスマローゲン）
１２ｅＶ（ホスファチジン酸プラスマローゲン）
３２ｅＶ（１−アルキルエーテル型コリンリン脂質）
１８ｅＶ（１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質）
１２ｅＶ（１−アルキルエーテル型ホスファチジン酸リン脂質）
【００７２】
（コリンプラスマローゲンの定量方法）
コリンプラスマローゲンの定量方法は、特願２００９−２９６７４４号明細書に従って行った。
被検試料中のコリンプラスマローゲンの定量を行うための検量線の作成は、以下のように行った。
ｓｎ−１位がステアリン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸のコリンプラスマローゲン（以下、１８：０／１８：１−ＣＰＬと言う）、及びｓｎ−１位がステアリン酸、ｓｎ−２位がアラキドン酸のコリンプラスマローゲン（以下、１８：０／２０：４−ＣＰＬと言う）を合成し、メタノールに溶解し、標準原液（１．２９μｍｏｌ／ｍＬ）を調製した。この標準原液をメタノールで希釈し、０．０５ｐｍｏｌ、０．１０ｐｍｏｌ、０．２０ｐｍｏｌ、及び０．５０ｐｍｏｌの４種類の濃度の標準溶液を調製した。なお、それぞれの標準溶液には、１４：０／１４：０−ＰＣを１００ｐｍｏｌ添加した。それぞれの標準溶液を、前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件に従って解析した。得られたそれぞれの標準溶液中の１８：０／１８：１−ＣＰＬあるいは１８：０／２０：４−ＣＰＬと、１４：０／１４：０−ＰＣとのコリンリン酸由来フラグメントの面積比を計算し、検量線を作成した。この検量線を用いて検体試料中のコリンプラスマローゲンの定量を行った。
主要なコリン型プラスマローゲンの分子種として、ｓｎ−１位が１６：０、１６：１、１８：０、又は１８：１の４種類、ｓｎ−２位が１６：０、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：４、２０：５、２２：４、２２：５、又は２２：６の１１種類、つまり、合計４４種類の分子種を測定した。
【００７３】
（エタノールアミンプラスマローゲンの定量方法）
エタノールアミンプラスマローゲンの定量方法は、Ｋａｒｉｎ Ａ．Ｚｅｍｓｋｉ Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．らの方法（Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．，１５，１４９９−５０８，２００４）を参照、一部改変して行った。
被検試料中のエタノールアミンプラスマローゲンの定量を行うための検量線の作成は、以下のように行った。
ｓｎ−１位がステアリン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸のエタノールアミンプラスマローゲン（以下、１８：０／１８：１−ＥＰＬと言う）、及び、ｓｎ−１位がステアリン酸、ｓｎ−２位がアラキドン酸のエタノールアミンプラスマローゲン（以下、１８：０／２０：４−ＥＰＬと言う）を合成し、これらを共にメタノールに溶解し、標準原液（１．２９μｍｏｌ／ｍＬ）を調製した。この標準原液をメタノールで希釈し、０．０５ｐｍｏｌ、０．１０ｐｍｏｌ、０．２０ｐｍｏｌ、及び０．５０ｐｍｏｌの４種類の濃度の標準溶液を調製した。なお、それぞれの標準溶液には、１４：０／１４：０−ＰＥを１００ｐｍｏｌ添加した。それぞれの標準溶液を、前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件に従って解析した。得られたそれぞれの標準溶液中の１８：０／１８：１−ＥＰＬあるいは１８：０／２０：４−ＥＰＬの分子内転移によって生じるフラグメントと、１４：０／１４：０−ＰＥとの面積比を計算し、検量線を作成した。この検量線を用いて検体試料中のエタノールアミンプラスマローゲンの定量を行った。
主要なエタノールアミンプラスマローゲンの分子種として、ｓｎ−１位が１６：０、１６：１、１８：０、又は１８：１の４種類、ｓｎ−２位が１６：０、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：４、２０：５、２２：４、２２：５、又は２２：６の１１種類、つまり、合計４４種類の分子種を測定した。
【００７４】
（１−アルキルエーテル型コリンリン脂質、及び１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質の定量方法）
被検試料中の１−アルキルエーテル型コリンリン脂質質、あるいは、１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質の定量を行うための検量線の作成は、以下のように行った。
ｓｎ−１位がパルミチン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸の１−アルキルエーテル型コリンリン脂質（以下、１６：０／１８：１−ＣＡと言う）、及び、ｓｎ−１位がパルミチン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸の１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質（以下、１６：０／１８：１−ＥＡと言う）を合成し、メタノールに溶解し、標準原液（１．２９μｍｏｌ／ｍＬ）を調製した。この標準原液をメタノールで希釈し、０．０５ｐｍｏｌ、０．１０ｐｍｏｌ、０．２０ｐｍｏｌ、及び０．５０ｐｍｏｌの４種類の濃度の標準溶液を調製した。なお、１６：０／１８：１−ＣＡの標準溶液には、１４：０／１４：０−ＰＣを、１６：０／１８：１−ＥＡの標準溶液には１４：０／１４：０−ＰＥをそれぞれ１００ｐｍｏｌ添加した。それぞれの標準溶液を、前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件に従って解析した。
１−アルキルエーテル型コリンリン脂質のそれぞれの標準溶液中の１６：０／１８：１−ＣＡと、１４：０／１４：０−ＰＣとのコリンリン酸由来フラグメントの面積比を計算し、１−アルキルエーテル型コリンリン脂質質の検量線を作成した。
【００７５】
一方、１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質のそれぞれの標準溶液中の１６：０／１８：１−ＥＡと、１４：０／１４：０−ＰＥとのエタノールアミンリン酸由来フラグメントの面積比を計算し、エタノールアミン型１−アルキルエーテル型リン脂質の検量線を作成した。
これらの検量線を用いて検体試料中の１−アルキルエーテル型リン脂質の定量を行った。
主要な１−アルキルエーテル型リン脂質の分子種として、ｓｎ−１位が１６：０、１６：１、１８：０、又は１８：１の４種類、ｓｎ−２位が１６：０、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：４、２０：５、２２：４、２２：５、又は２２：６の１１種類、つまり、合計４４種類の分子種を測定した。
【００７６】
（ホスファチジン酸プラスマローゲン及び１−アルキルエーテル型ホスファチジン酸リン脂質の定量）
なお、製造例１〜５の全ての被験試料、及び、実施例１〜４、比較例１，２の動物試験で得られた血清脂質サンプルについて、前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件に従って解析した場合、内部標準である１４：０／１４：０−ＰＡ以外のピークが検出されなかったため、ホスファチジン酸プラスマローゲン及び１−アルキルエーテル型ホスファチジン酸リン脂質は測定限界未満の含量であることが分かった。
【００７７】
表４からわかるように、血清中のリン脂質結合型ＤＨＡ含量（ＤＨＡ結合型プラスマローゲンとＤＨＡ結合型１−アルキルエーテル型リン脂質の合計量）は、基本飼料（比較例１）に対し、製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）は２．７１倍、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）は１４．６６倍、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（試験群３）は７．６２倍、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）は７．８４倍となった。
【００７８】
また、ＤＨＡ比についても、基本飼料（比較例１）に対し、製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）は１．７４倍、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）は２．４９倍、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（試験群３）は２．６８倍、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）は２．６４倍となった。
【００７９】
また、前記のようにリン脂質結合型ＤＨＡ含量、比は大きく増加しているが、リン脂質結合型アラキドン酸については、その比を見るとわかるように、実施例１〜４において、比較例１に比べ５０〜７４％と逆に減少していることがわかる。
【００８０】
表５からわかるように、血清中のＤＨＡ結合型プラスマローゲン量は、基本飼料（比較例１）に対し、製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）は２．２２倍、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）は４．５７倍、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（試験群３）は４．０２倍、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）は４．９５倍となった。
【００８１】
また、ＤＨＡ比についても、基本飼料（比較例１）に対し、製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）は１．７３倍、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）は２．４５倍、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（試験群３）は２．２５倍、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）は２．３８倍となった。
【００８２】
また、前記のようにリン脂質結合型ＤＨＡ含量、比は大きく増加しているが、リン脂質結合型アラキドン酸については、その比を見るとわかるように、実施例１〜４において、比較例１に比べ５８〜６４％と逆に減少していることがわかる。
この結果から、エーテル型リン脂質（１−アルキルエーテル型リン脂質）は、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤としての機能が高いことがわかる。
【００８３】
また、表６からわかるように、ＤＨＡ結合型プラスマローゲンの増加分のうち、認知症患者や高齢者で血液中の濃度が低下すると言われるエタノールアミン型の増加は、コリン型の増加に対して有意に大きく、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤としてエーテル型リン脂質（１−アルキルエーテル型リン脂質）は極めて有用であることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤、及びリン脂質結合型ＤＨＡを上昇させる飲食品は、学習能力及び記憶力など脳機能の向上に有用であり、また認知症等の予防、並びにアルツハイマー症、及びうつ病などの疾病の治療に有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体内のドコサヘキサエン酸（以下、ＤＨＡと称する）含有リン脂質を増加させることができるリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に関する。本発明によれば、経口摂取により、リン脂質結合型ＤＨＡを増加させることができる。
【背景技術】
【０００２】
ＤＨＡ（Ｃ２２：６）（炭素数２２、不飽和結合６個）は広義の必須脂肪酸であり、生体内では主に細胞膜を構成するリン脂質に結合した形態であらゆる組織に存在するが、特に脳、神経組織、網膜、及び精子などに多い。ＤＨＡはヒト体内でもリノレン酸を原料として合成が可能であるが、その生産量は少なく、食物から摂取することが大部分である。
ＤＨＡは多くの生理作用に関与しており、様々な病態との関係についても報告されている。学習能力及び記憶力など脳機能の向上について良く知られているが、認知症等の予防、並びにアルツハイマー症、及びうつ病などの疾病に対してもＤＨＡの摂取が有効であるといわれている。ＤＨＡが欠損した症例としては、視覚障害や言語障害のほか、自閉症や多動性障害などの認知能力と関与する障害の発生がある。
【０００３】
しかし、脳機能に対するＤＨＡの詳細な作用機構は未だ不明であり、細胞膜構造の変化、メッセンジャーとしてのシグナル作用など多くの可能性が報告されている。また、ＤＨＡは、インターロイキンを介するシグナル伝達系に作用して、その炎症の発現を阻害するといわれ、動脈硬化症、アトピー、アレルギー、又はリウマチ様関節炎など、様々な炎症性疾患の抑制効果が示唆されている。更に、血管内皮細胞のリポタンパク質リパーゼへの阻害作用により、血中のトリアシルグリセリド及びコレステロール量を低下させることが示されており、「中性脂肪が気になる方の食品」という表示で、ＤＨＡを関与成分とした特定保健用食品も許可されている。
【０００４】
なかでも脳においては、脂質構成脂肪酸組成におけるＤＨＡ含量が高く、特にリン脂質を構成する脂肪酸組成におけるＤＨＡ含量が哺乳類では３〜２０％、特にヒトにおいては約２０％と極めて高いこと、また認知症患者では、リン脂質含量、特にエタノールアミン型リン脂質が大きく減少することが知られている（非特許文献１）。また、血清中のリン脂質含量、特にＤＨＡが結合したリン脂質含量と認知症重症度とが相関することが知られている（非特許文献２及び特許文献２）。
【０００５】
このようにＤＨＡの中でも、その存在形態としてリン脂質結合型が特に重要であり、そのＤＨＡ結合型リン脂質は生体、特に脳において、神経伝達や細胞間物質移動に極めて重要な役割を担っていることが示されている。
【０００６】
ここで、生体内のＤＨＡを増加させる目的で、ＤＨＡを含むトリグリセリドやリン脂質を経口摂取させる方法が種々検討されている。例えば、ＤＨＡをトリグリセリドとして摂取させる方法では、微生物由来のＤＨＡ高含有油脂を植物油とエステル交換する方法（特許文献３）やＤＨＡを含有する油脂と卵黄、乳等から得られるＤＨＡを含有するリン脂質を摂取させる方法（特許文献４）、ＤＨＡ等の高度不飽和脂肪酸を含有する油脂をリン脂質と共に摂取させる方法（特許文献５）等が提案されている。また、ＤＨＡ等の長鎖高度不飽和脂肪酸は、トリグリセリドとして摂取するよりリン脂質として摂取した方が効果的な場合があることが知られている。このような観点から、動物の脳又は鶏卵から抽出されたＤＨＡを含むリン脂質を摂取させる方法（特許文献６及び特許文献７）、ＤＨＡの豊富な餌を与えて育てた鶏から得た卵黄リン脂質を利用した食事療法組成物（特許文献８）等が開示されている。
【０００７】
しかし、特許文献３、５に開示されているＤＨＡの由来として微生物由来のＤＨＡ含有油脂を用いる方法は、この微生物由来の油脂が極めて特殊な油脂であるため、広く食品に応用することはできなかった。また、特許文献４、６、８に記載されている魚油、卵黄リン脂質、及び乳リン脂質をＤＨＡの由来として用いる場合、ＤＨＡ含量は全脂肪酸組成中の数％程度に過ぎず、生体内のＤＨＡを増加させる効果は不十分であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許第５７５９５８５号明細書
【特許文献２】特開２００４−２６８０３号公報
【特許文献３】特表２００７−５２８１９１号公報
【特許文献４】特表平１０−５０８１９３号公報
【特許文献５】国際公開第２００５／０５４４１５号パンフレット
【特許文献６】特表２０００−５１６２６１号公報
【特許文献７】特開平１０−１７４７５号公報
【特許文献８】特開１９９７−５０２３６０号公報
【特許文献９】特開２００３−０１２５２０号公報
【特許文献１０】特開２００３−００３１９０号公報
【特許文献１１】特開２００９−２６９８６４号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】「リピッド（Ｌｉｐｉｄｓ）」１９９１年、第２６巻、ｐ．４２１−５
【非特許文献２】「ジャーナル・オブ・リピッド・リサーチ（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＬＩＰＩＤ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）」２００７年、第４８巻、ｐ．２４８５−９８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の目的は、生体内のＤＨＡ含有リン脂質を増加させることができる、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を提供することである。
【００１１】
前記課題を解決することのできる本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、後述のように１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含む。
１−アルキルエーテル型リン脂質は、リン脂質の１つのサブクラスである。リン脂質は、ジアシル型リン脂質、アルケニルアシル型リン脂質（プラスマローゲン）、及び１−アルキルエーテル型リン脂質（アルキル型リン脂質）のサブクラスに分けることができ、アルケニルアシル型リン脂質（プラスマローゲン）及び１−アルキルエーテル型リン脂質は、エーテル結合を有していることから、まとめてエーテル型リン脂質と呼ばれることもある。
【００１２】
エーテル型リン脂質とはグリセロール骨格のｓｎ−１位にエーテル結合を持ち、ｓｎ−２位には脂肪酸又は水素が結合し、ｓｎ−３位に塩基又は水素の結合したリン酸を持っているグリセロリン脂質である。エーテル型リン脂質の１つである１−アルキルエーテル型リン脂質は、ｓｎ−１位にエーテル結合に加え、炭化水素基を有している。また、もう１つのアルケニルアシル型リン脂質（プラスマローゲン）は、ｓｎ−１位に、更にビニール結合を有しており、すなわちｓｎ−１位の側鎖は、ビニールエーテル結合を有している。
一方、天然に存在する大部分のグリセロリン脂質は、ｓｎ−１位及びｓｎ−２位にエステル結合を有するジアシル型リン脂質であり、一般的にはレシチンと言われ、その主成分はホスファチジルコリンである。
【００１３】
前記プラスマローゲンは抗酸化能を持ち、加齢や酸化ストレスが関与する疾病と関係しているといわれており、神経変性疾患やアルツハイマー病の予防などへの利用が検討されている（特許文献１及び特許文献２）。更に、プラスマローゲンが抗酸化能を持つことから、プラスマローゲンを生体組織の脂質の過酸化を抑制する抗酸化剤として利用する方法（特許文献９）や酸化安定性に優れた高度不飽和脂肪酸供給組成物として利用する方法（特許文献１０）が開示されている。また、プラスマローゲン、好ましくはコリン型プラスマローゲンを投与することにより、アラキドン酸結合型リン脂質が増加することが報告されている（特許文献１１）。
【００１４】
更に、特許文献６、７に記載の、動物の脳や内臓から得られるリン脂質はエーテル型リン脂質を含む可能性が考えられるが、特許文献６は得られたリン脂質が生体内のメラトニン分泌を調節する機能を開示したものであり、特許文献７はＤＨＡを含むリン脂質が血液中の総コレステロール、中性脂質を低下させ、高密度リポ蛋白質コレステロールを増大させる機能を示すことを開示したものであり、共に、エーテル型リン脂質が生体内のＤＨＡを増加させることを開示したものではなかった。
【００１５】
また、特許文献９、１０はプラスマローゲンの抗酸化能を利用した発明であり、生体内のＤＨＡを増加させることを開示したものではなかった。更に、特許文献１１はアラキドン酸を増加することを示した文献であって、血液中のＤＨＡを増加させることを開示したものではなかった。
【００１６】
このように、従来、血液中のＤＨＡ含量、特にリン脂質の形態で存在するＤＨＡ含量を増加させることのできる組成物は見出されていなかった。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者らは、生体内でＤＨＡを増加させることのできる組成物について、鋭意研究した結果、驚くべきことに、１−アルキルエーテル型リン脂質の投与により、生体内のリン脂質結合型ＤＨＡを飛躍的に増加させることができることを見出した。前記特許文献１１には、プラスマローゲンの投与により、リン脂質結合型のアラキドン酸が増加することが開示されている。本発明者らは、１−アルキルエーテル型リン脂質を投与した場合、リン脂質結合型のアラキドン酸は生体内では減少するが、リン脂質結合型ＤＨＡは、飛躍的に増加することを見出した。プラスマローゲンの投与と、その前駆体である１−アルキルエーテル型リン脂質の投与により、生体内で増加する脂肪酸の種類が異なることのメカニズムは明らかではないが、当業者にとって驚くべきことである。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
従って、本発明は、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とする、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に関する。
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤の好ましい態様においては、更にＤＨＡを含み、特には、前記ＤＨＡの５０％以上がリン脂質に結合している。
また、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤の好ましい態様においては、オキアミ抽出物由来の、１−アルキルエーテル型リン脂質及び／又はＤＨＡを含む。
また、本発明は、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とする、リン脂質結合型ＤＨＡを上昇させる飲食品に関する。
本発明の飲食品の好ましい態様においては、更にＤＨＡを含み、特には、前記ＤＨＡの５０％以上がリン脂質に結合している。
また、本発明の飲食品の好ましい態様においては、オキアミ抽出物由来の、１−アルキルエーテル型リン脂質及び／又はＤＨＡを含む。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のＤＨＡ増加剤は、血液中のリン脂質中の、ＤＨＡ含量を増加させることが可能である。従って、前記のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、リン脂質結合型ＤＨＡの増加によって予防又は治療可能な疾患を、効果的に予防又は治療することができる。
更に本発明による飲食品は、毎日の飲食により、血液中のリン脂質中の、ＤＨＡ含量を増加させることが可能である。従って、飲食品の摂取のみで、リン脂質結合型ＤＨＡの低下又は消失に起因する疾患の予防又は治療に有用である。また、本発明の飲食品に使用されるエーテル型リン脂質は、広範な飲食品に使用することが可能であり、風味良好な飲食品を容易に得ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
［１］リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤
（１−アルキルエーテル型リン脂質）
本発明の、経口投与剤は、一般式（Ｉ）
【化１】
［式中、Ｒ１は、炭素数１から２１の炭化水素基であり、Ｒ２は、炭素数１〜２６の脂肪酸残基、または水素原子であり、Ｒ３はコリン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）３）、エタノールアミン（−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、セリン（−ＣＨ２−ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯＯＨ）、グリセロール（−ＣＨ２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ２ＯＨ）、イノシトール（−ＣＨ−Ｃ５Ｈ５（ＯＨ）５）、又は水素原子である］
で表される１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含む。
ここで、ｓｎ−１位がエステル結合であるリン脂質、例えば一般的なジアシル型リン脂質（すなわち「レシチン」）や、前記レシチンをホスホリパーゼ等で処理したリゾリン脂質を有効成分として用いた場合は本発明の効果は得られない。
前記Ｒ１の炭化水素基はアルキル基、又はアルケニル基でもよく、具体的にはペンタデシル基、ヘプタデシル基、又はヘプタデセル鎖基を挙げることができる。なお、本明細書において、「ｓｎ−１位の脂肪酸残基」とは、脂肪酸からカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）を除いたものを意味し、具体的には一般式（１）のＲ１とエーテル基の炭素を含む「−ＣＨ２−Ｒ１」を意味し、１６：０、１８：０、又は１８：１（炭素数：不飽和結合数）などと表記する。
また、前記Ｒ２の肪酸残基としては、具体的には、パルミトイル基、オレイル基、アラキドイル基、又はドコサヘキサエノイル基等を挙げることができる。なお、本明細書において、ｓｎ−２位の脂肪酸残基とは、脂肪酸から−ＯＨを除いたものを意味し、１６：０、１８：１、２０：４、又は２２：６（炭素数：不飽和結合数）などと表記する。また、本明細書において、「ｓｎ−２位のアシル基」とは、脂肪酸からカルボキシル基の水素原子（−Ｈ）を除いた基を意味する。
【００２０】
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤においては、１−アルキルエーテル型リン脂質のｓｎ−１位の脂肪酸残基及びｓｎ−２位の脂肪酸残基の由来となる脂肪酸が、どの脂肪酸であっても本発明の効果を有する。但し、後述のように本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤と同時にＤＨＡを投与すると本発明の高い効果が得られること、更には、同時投与のＤＨＡがリン脂質結合型であると更に本発明の高い効果が得られることから、前記１−アルキルエーテル型リン脂質についてもＤＨＡ含量が高いほど本発明の高い効果が得られることから、ＤＨＡ含量が５％以上、好ましくは１０％以上の１−アルキルエーテル型リン脂質を使用することが好ましい。
【００２１】
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に用いる１−アルキルエーテル型リン脂質は、従来、疾患の治療、又は食品に使用されていたプラスマローゲンと比較して、保存安定性が良好であり、この観点からも有用である。
【００２２】
（プラスマローゲンと１−アルキルエーテル型リン脂質との混合比）
１−アルキルエーテル型リン脂質は天然物にも少量含まれ、その場合はプラスマローゲンと１−アルキルエーテル型リン脂質は混合物として存在していることが多い。本発明で使用するエーテル型リン脂質としては、プラスマローゲンと１−アルキルエーテル型リン脂質の比が５０：５０〜０：１００とすることが好ましく、より好ましくは３０：７０〜０：１００、更に好ましくは１０：９０〜０：１００とする。プラスマローゲンの割合が５０％以上であると、常温で長期保存した場合に、エーテル型リン脂質は１−リゾアシルリン脂質と脂肪酸アルデヒドに分解され、過酸化リン脂質に変化してしまうため、本発明の効果が極端に減少してしまうおそれがある。
【００２３】
（１−アルキルエーテル型リン脂質の化学合成）
本発明に用いることのできる１−アルキルエーテル型リン脂質は、グリセリンを１−アルキルエーテルグリセロールに変換し、エステル化やリン酸化を行うことにより、化学合成することも可能であり、化学合成の１−アルキルエーテル型リン脂質を用いることも可能である。しかし本発明では、入手の容易性や生産性から、天然物から抽出及び分離したものが好ましい。
【００２４】
（１−アルキルエーテル型リン脂質の製造原料）
なお、ここで、抽出源とする天然物としては、エーテル型リン脂質中の１−アルキルエーテル型リン脂質含量が５０％以上である天然物を使用することが好ましく、より好ましくは８０％以上、更に好ましくは９５％以上である天然物を使用することが好ましい。なお、前記天然物は、プラスマローゲンをなるべく含有しないことが好ましく、好ましくはエーテル型リン脂質中のプラスマローゲン比が５０％以下であることが好ましく、より好ましくは２０％以下、更に好ましくは５％以下である天然物を使用する。
なお、ここで、抽出源とする前記天然物として１−アルキルエーテル型リン脂質とプラスマローゲンを共に含有する天然物を使用する場合は、弱酸溶液処理等の方法により、あらかじめプラスマローゲンを除去するか、あるいは、下記の分画・濃縮・精製の操作に加え、前記プラスマローゲンを除去する操作を行うことが好ましい。
【００２５】
１−アルキルエーテル型リン脂質を抽出、分離する天然物としては、一般的に１−アルキルエーテル型リン脂質含量が高いことが知られている各種の動物、植物、微生物、例えば、マグロ、イワシなどの魚類、ホタテ、カキ、ムール貝などの貝類、タコ、イカなどの頭足類、エビ、フジツボ、オキアミ、カラヌスなどの甲殻類、ウシ、ブタ、ニワトリなどの家禽動物などの、その個体そのもの、その筋肉組織や、脂肪組織、あるいは脳などの神経組織、腸などの内臓組織、更にはその卵などを使用することができる。なかでも本発明では、エーテル型リン脂質中の１−アルキルエーテル型リン脂質含量が高くプラスマローゲン含量が極めて少ない、すなわち、エーテル型リン脂質中の１−アルキルエーテル型リン脂質含量比が高い天然物であること、更には、組織を分離することなく生体そのものを直接抽出源とすることができ、資源量が豊富であり、入手が容易であることに加え、更にはアスタキサンチンを含有することから保存安定性が良好であるリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を得ることが可能であることから、オキアミを用いることが特に好ましい。
【００２６】
（１−アルキルエーテル型リン脂質の抽出方法）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤では、これら各種動物、植物、微生物から、溶剤抽出などによって抽出された、エーテル型リン脂質含有脂質、更には、必要に応じて、前記脂質から液々抽出やカラムクロマトグラフィー、酵素処理などでリン脂質を分離した、リン脂質画分や、更にエーテル型リン脂質を濃縮した濃縮物、また、更に精製した、精製エーテル型リン脂質を使用することができる。
前記各種動物、植物、微生物等の組織からの抽出方法としては、Folch法（Folch et al.：J. Biol. Chem., 226, 497-505, 1957）、Bligh & Dyer法（Bligh et al.：Can. J. Biochem. Physiol., 37, 911-917, 1959）、あるいは安全性の高い有機溶媒であるヘキサンや低級アルコールを用いた混合溶媒を用いる方法（Hara et al.：Anal. Biochem., 90(1):420-6，1978、特開2005-179340）、また、安全性が高く、かつ液液抽出の界面分離性が優れるヘキサンとエタノールの混合溶媒を用いる方法（特開2009-227765）などがある。また、抽出効率を高めるために、前記動物組織を脱水処理したものを用いてもよい。
【００２７】
また、前記分離方法としては、アセトン沈殿法（山川民夫監修：生化学実験講座３，脂質の化学（日本生化学会編），p.19−20，1963，東京化学同人）、カラムクロマトグラフィー法（James et al.：Lipids, 23, 1146-1149, 1988）等によるトリグリセリドや部分グリセリドを除去し、エーテル型リン脂質を含むリン脂質画分のみを分離精製することができる。
【００２８】
更に、前記濃縮方法としては、弱アルカリ処理（Hanahan et al.：J. Biol. Chem. 236, 59-60, 1961）、あるいは哺乳動物膵臓由来リパーゼ又は微生物由来のホスホリパーゼＡ１処理によるジアシル型リン脂質の分解（Woelk et al.：Z Physiol. Chem. 354, 1265-70, 1973）の方法を用いて、エーテル型リン脂質以外のリン脂質を除去することでエーテル型リン脂質を濃縮することができる。
【００２９】
ホスホリパーゼＡ１を用いて濃縮する場合、具体的には、エーテル型リン脂質含有脂質に対し、ホスホリパーゼＡ１、好ましくはＡｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．由来のホスホリパーゼＡ１を添加し、好ましくは少量のジエチルエーテルと弱酸性緩衝液下で、分解反応させ、分解生成物を親水性溶媒と疎水性溶媒の混合溶媒、例えば、ヘキサン／エタノール混合溶媒により再抽出することで得ることができる。
【００３０】
更に詳しく述べると、エーテル型リン脂質含有脂質１ｇにホスホリパーゼＡ１を０．１〜２．０Ｕ、酢酸緩衝液ｐＨ５．０〜６．０を２〜２０％、好ましくは５〜１０％添加し、３０〜６０℃で、２〜１００時間、攪拌しながら分解反応させる。反応溶液にヘキサン／エタノール／水の混合溶媒、例えばヘキサン６５〜９０に対し、エタノール５〜２０、水４〜１０、好ましくはヘキサン７５〜８５、エタノール１０〜１８、水５〜８の比の混合溶媒を加えて再抽出することで、ホスホリパーゼＡ１反応で生じた１−リゾリン脂質は下層の水層に、エーテル型リン脂質は上層のヘキサン層に分離することができる。ここで、上層のヘキサン層を分取し、定法によりヘキサンを除去することで、エーテル型リン脂質以外のリン脂質を除去し、エーテル型リン脂質のみを濃縮することができる。
なお、前記エーテル型リン脂質の濃縮の前又は後、好ましくは後に、トリグリセリドに代表される中性脂質を分画除去し、エーテル型リン脂質含有リン脂質とすることが好ましい。この中性脂質の除去方法としては、アセトン沈殿法やカラムクロマトグラフィーなどの公知の方法を採ることができる。
【００３１】
更には、シリカゲルクロマトグラフィーによってｓｎ−３位の塩基の種類別に濃縮することも可能である。例えば、シリカゲルをヘキサン／エタノール混合溶媒、好ましくは９５：５〜６０：４０の混合溶媒で充填したカラムに、エーテル型リン脂質含有脂質やエーテル型リン脂質含有リン脂質を充填し、同溶媒をカラム体積の２〜８倍量通液させて中性脂質を溶出させた後、ヘキサン／エタノール混合溶媒、好ましくは５：９５〜０：１００、あるいはエタノール／水の混合溶媒、好ましくは１００：０〜９５：５をカラム体積の６〜１５倍量通液させることにより、エタノールアミン型やホスファチジン酸型を分画することができ、続いてエタノール／水の混合溶媒、好ましくは９０：１０〜７０：３０をカラム体積の８〜２０倍量通液させることにより、コリン型を分画することができる。
【００３２】
また、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤における１−アルキルエーテル型リン脂質含有量は、好ましくは２〜１００％、より好ましくは５〜１００％、更に好ましくは５０〜１００％である。また、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有する本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、１−アルキルエーテル型リン脂質以外のリン脂質、例えばプラスマローゲンを含むこともできるが、プラスマローゲンは１−アルキルエーテル型リン脂質よりも酸化されやすく保存安定性が極めて低いため、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に含むことのできるエーテル型リン脂質の全量に対する１−アルキルエーテル型リン脂質の比率は、１−アルキルエーテル型リン脂質が６０％以上であり、好ましくは８０％以上であり、最も好ましくは９０％以上である。
【００３３】
（その他の脂質）
なお、前記エーテル型リン脂質含有脂質や前記エーテル型リン脂質含有リン脂質の、エーテル型リン脂質以外のその他の脂質はジアシル型リン脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質、中性脂質などからなる。
【００３４】
（ＤＨＡ）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、本発明の効果を高めるためにＤＨＡを含有することが好ましい。なお、一般のジアシル型リン脂質（すなわち「レシチン」）の場合は、本発明の効果が得られないのは前記のとおりであるが、ジアシル型リン脂質とＤＨＡを併用のみでは本発明の効果は得られない。
【００３５】
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤におけるＤＨＡの好ましい含有量は、特に限定されるものではないが、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは４％以上、より好ましくは７％以上、更に好ましくは１０％以上である。上限は特に制限されないが、保存安定性の面から７０％以下であることが好ましく、より好ましくは５０％以下である。
【００３６】
なお、前記ＤＨＡは、エーテル型リン脂質に結合したものであっても、エーテル型リン脂質以外のその他の脂質、例えばジアシル型リン脂質、糖脂質、スフィンゴ脂質、中性脂質に結合したものであってもよく、更には遊離脂肪酸の形態や、塩の形態であってもよいが、酸化に対する安定性が高く、保存性を高めることが可能である点で、エーテル型リン脂質（プラスマローゲン又は１−アルキルエーテル型リン脂質）、ジアシル型リン脂質、及びモノアシル型リン脂質などのリン脂質結合型であることが好ましい。この場合、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に含まれるＤＨＡの好ましくは５０〜１００％、より好ましくは７０〜１００％、最も好ましくは８０〜１００％がリン脂質結合型であることが好ましい。なお、安定性の面からは、遊離型ＤＨＡは含有しないことが好ましい。
【００３７】
（その他の成分）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤では、前記以外のその他の成分を含有することができる。前記その他の成分としては、例えば、食用油脂、水、グリセリン脂肪酸エステル、蔗糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン有機酸脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ステアロイル乳酸カルシウム、ステアロイル乳酸ナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等の乳化剤、ローカストビーンガム、カラギーナン、アルギン酸類、ペクチン、キサンタンガム、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、寒天、グルコマンナン、ゼラチン、澱粉、又は化工澱粉等の増粘安定剤、食塩、又は塩化カリウム等の塩味剤、酢酸、乳酸、又はグルコン酸等の酸味料、糖類又は糖アルコール類、ステビア、又はアスパルテーム等の甘味料、ベータカロチン、カラメル、又は紅麹色素等の着色料、トコフェロール、又は茶抽出物等の酸化防止剤、着香料、ｐＨ調整剤、食品保存料、又は日持ち向上剤等の食品素材や食品添加物を挙げることができる。また、各種ビタミンやコエンザイムＱ、植物ステロール、又は乳脂坊球皮膜等の機能素材を含有させることも可能である。
これらのその他の成分の含有量は、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤中、合計で好ましくは８０質量％以下、より好ましくは４０質量％以下、更に好ましくは２０質量％以下とする。
【００３８】
（リン脂質結合型ＤＨＡ）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤によって、生体内で増加するリン脂質結合型ＤＨＡの種類は、ＤＨＡが結合している限り、特に限定されるものではない。
具体的には、リン脂質として、プラスマローゲン、又は１−アルキルエーテル型リン脂質、を挙げることができる。ＤＨＡの結合部位は特に限定されるものではないが、基本的には前記リン脂質のｓｎ−２位である。
更に、リン脂質結合型ＤＨＡは、生体内で増加する。本明細書において「生体内」とは、特に限定されるものではない。具体的には、体液、例えば、血液（血漿、血清を含む）、髄液、尿、唾液、若しくは組織液、又は組織、若しくは臓器を挙げることができるが、リン脂質結合型ＤＨＡが生体内のすべての組織に運ばれ、その効果が得られることから、血液中で増加することが好ましい。
【００３９】
（対象疾患）
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、動脈硬化、アレルギー・炎症性疾患、乳児の発育、学習能力や記憶力の低下、発ガンなどを改善することが可能である。ＤＨＡが低下、消失する疾患としては、血栓症、多動性障害、認知症、視力の低下、胎児や乳児の正常な発育の阻害、うつ病などを挙げることができ、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、これらの疾患の治療及び予防に有用である。
【００４０】
また、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤は、広範な各種飲食品や医薬組成物に配合・添加することができ、その摂取量としては、成人の場合、エーテル型リン脂質として１日あたり、好ましくは１００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜２０ｇを摂取することが望ましい。
【００４１】
［２］飲食品
本発明の飲食品は、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有する。また、本発明の飲食品は、前記の１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有するリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を含有することもできる。
本発明の飲食品における、１−アルキルエーテル型リン脂質の含有量は、使用する飲食品により異なるが、成人の場合、１−アルキルエーテル型リン脂質として１日当たり１００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜２０ｇ摂取できる量のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を飲食物中に含有できればよい。具体的には、飲食品中０．１〜１００質量％であることが好ましい。
【００４２】
なお、本発明における飲食品としては、特に限定されるものではなく、例えば味噌、醤油、めんつゆ、たれ、だし、パスタソース、ドレッシング、マヨネーズ、トマトケチャップ、ウスターソース、とんかつソース、又はふりかけ等の調味料、お吸い物の素、カレールウ、ホワイトソース、お茶漬けの素、又はスープの素等の即席調理食品、味噌汁、お吸い物、コンソメスープ、又はポタージュスープ等のスープ類、焼肉、ハム、又はソーセージ等の畜産加工品、かまぼこ、干物、塩辛、佃煮、又は珍味等の水産加工品、漬物等の野菜加工品、ポテトチップス、又は煎餅等のスナック類、食パン、菓子パン、又はクッキー等のベーカリー食品類、煮物、揚げ物、焼き物、カレー、シチュー、グラタン、ごはん、おかゆ、又はおにぎり等の調理食品、パスタ、うどん、又はラーメン等の麺類食品、マーガリン、ショートニング、ファットスプレッド、又は風味ファットスプレッド等の油脂加工食品、フラワーペースト、又は餡等の製菓製パン用素材、パン用ミックス粉、ケーキ用ミックス粉、又はフライ食品用ミックス粉等のミックス粉、チョコレート、キャンディ、ゼリー、アイスクリーム、又はガム等の菓子類、饅頭、又はカステラ等の和菓子類、コーヒー、コーヒー牛乳、紅茶、ミルクティー、豆乳、栄養ドリンク、野菜飲料、食酢飲料、ジュース、コーラ、ミネラルウォーター、又はスポーツドリンク等の飲料、ビール、ワイン、カクテル、又はサワー等のアルコール飲料類、牛乳、ヨーグルト、又はチーズ等の乳や乳製品等が挙げられる。
【００４３】
本発明のエーテル型リン脂質を含有する飲食品は、１−アルキルエーテル型リン脂質を原料として含むこと以外は、公知の飲食品の製造方法を用いて製造することができる。
【００４４】
本発明の飲食品は、１−アルキルエーテル型リン脂質を含有することにより、血液中においてリン脂質結合型ＤＨＡ含量を増加させることが可能であり、機能性食品又は健康食品（飲料も含む）として用いることができる。また動物には、飼料として与えることができる。１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有する本発明の飲食品を、機能性食品又は健康食品として使用する場合、前記のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤に記載のように、例えば、オキアミから分離した１−アルキルエーテル型リン脂質を含むことが好ましい。
【００４５】
本発明の飲食品は、前記のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤と同じように、本発明の効果を高めるためにＤＨＡを含有することが好ましい。本発明の飲食品におけるＤＨＡの好ましい含有量は、飲食品に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは１％以上、より好ましくは２％以上である。上限は特に制限されないが、保存安定性の面から７０％以下であることが好ましく、より好ましくは５０％である。
なお、前記ＤＨＡは、前記の本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤同様、酸化に対する安定性が高く、保存性を高めることが可能である点で、エーテル型リン脂質、ジアシル型リン脂質、又はモノアシル型リン脂質などのリン脂質結合型であることが好ましい。この場合、飲食品に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは５０〜１００％、より好ましくは７０〜１００％、最も好ましくは８０〜１００％がリン脂質結合型であることが好ましい。なお、安定性の面で、遊離型ＤＨＡは含有しないことが好ましい。
【００４６】
本発明の飲食品に用いる１−アルキルエーテル型リン脂質は、従来食品に使用されていたプラスマローゲンと比較して、保存安定性が良好であり、この観点からも有用である。
また、本発明の飲食品によれば、前記リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤と同じように、生体内のリン脂質結合型ＤＨＡを上昇させることができる。
【００４７】
［３］医薬組成物
医薬組成物は、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含有するため、血液中のリン脂質結合型ＤＨＡを増加させることが可能である。前記のエーテル型リン脂質を有効成分として含有するリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を使用することもできる。
医薬組成物における、本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤の含有量は、使用する医薬組成物により異なるが、成人の場合、エーテル型リン脂質として１日当たり１００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜２０ｇ摂取できる量のエーテル型リン脂質増加剤を医薬組成物中に含有できればよい。具体的には、１−アルキルエーテル型リン脂質は医薬組成物中、０．１〜１００質量％であることが好ましく、０．５〜９９質量％であることが好ましく、１〜８０質量％であることが最も好ましい。
医薬組成物は、１−アルキルエーテル型リン脂質を単独で、あるいは、好ましくは薬剤学的又は獣医学的に許容することができる通常の担体又は希釈剤とともに、ＤＨＡの低下又は消失に起因する疾患の治療及び／又は予防が必要な対象［例えば、動物、好ましくは哺乳動物（特にヒト）］に有効量で投与することができる。
医薬組成物は、リン脂質結合型ＤＨＡの濃度を上昇させることのできる物質を含むこともできる。
【００４８】
医薬組成物の投与剤型としては、特に限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼剤などの非経口剤を挙げることができるが、経口剤が好ましい。
【００４９】
経口剤は、例えば、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ブドウ糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリビニルピロリデン、結晶セルロース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、常法に従って製造することができる。
【００５０】
医薬組成物を用いる場合の投与量は、例えば、使用する有効成分の種類、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、生上の程度、又は投与方法に応じて適宜決定することができ、経口的に又は非経口的に投与することが可能である。
更に、投与形態も医薬品に限定されるものではなく、種々の形態、例えば、機能性食品や健康食品（飲料も含む）、又は飼料として飲食物の形態で与えることも可能である。
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を含有する医薬組成物の製造方法は、前記にエーテル型リン脂質を有効成分として含むこと以外は、公知の医薬品の製造方法を用いて製造することができる。
【００５１】
前記医薬組成物は、１−アルキルエーテル型リン脂質を含有することにより、血液中においてリン脂質結合型ＤＨＡ含量を増加させることが可能である。なお、１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として使用する場合、前記のように、例えば、オキアミから分離した１−アルキルエーテル型リン脂質を含むことが好ましい。
前記医薬組成物は、本発明の効果を高めるためにＤＨＡを含有することが好ましい。
前記医薬組成物におけるＤＨＡの好ましい含有量は、医薬組成物に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは１％以上、より好ましくは２％以上である。上限は特に制限されないが、保存安定性の面から７０％以下であることが好ましく、より好ましくは５０％である。
なお、前記ＤＨＡは、前記の本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤同様、酸化に対する安定性が高く、保存性を高めることが可能である点で、エーテル型リン脂質、ジアシル型リン脂質、又はモノアシル型リン脂質などのリン脂質結合型であることが好ましい。この場合、医薬組成物に含まれる全脂質の構成脂肪酸中の好ましくは５０〜１００％、より好ましくは７０〜１００％、最も好ましくは８０〜１００％がリン脂質結合型であることが好ましい。なお、安定性の面で、遊離型ＤＨＡは含有しないことが好ましい。
【００５２】
ＤＨＡを増加させることで、動脈硬化を含むなどの血栓性疾患、老人性認知症、視覚障害、うつ病などの精神性疾患を予防又は治療することが可能である。本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤、飲食品、又は医薬組成物を生体内に投与、特には経口投与することにより、血液中のリン脂質結合型ＤＨＡを増加させることが可能である。すなわち、エーテル型リン脂質を有効成分として含有する本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤、飲食品、又は医薬組成物を生体内に投与、特には経口投与することにより、生体内においてリン脂質結合型ＤＨＡを増加させる方法を提供することが可能である。
本発明の飲食品や医薬組成物を経口摂取する場合の摂取量は、前記のとおり、例えば成人の場合、エーテル型リン脂質として１日当たり１００ｍｇ〜４０ｇ、より好ましくは２００ｍｇ〜２０ｇ摂取できる量の血液中のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤を医薬組成物中に含有できる量である。
【実施例】
【００５３】
以下、本発明を実施例により更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により何ら制限されるものではない。
【００５４】
＜１＞エーテル型リン脂質含有試料の製造
〔製造例１〕
オキアミを利用してエーテル型リン脂質含有脂質を製造した。
冷凍ボイルオキアミの捏練品（オキアミＣＰＭ−ＭＤ、ＡＤＥＫＡファインフーズ）６０ｋｇ（水分含有量８７質量％）に、ヘキサン：エタノール＝６０：４０で混合した混合溶媒２１６Ｌを加え、１０分間攪拌した。その後、吸引濾過により得たろ液の上層であるヘキサン層を脂質抽出液として回収した。続いて、ろ液下層とろ過残渣を合わせ、それに新たにヘキサン１３０Ｌを加え、１０分間攪拌して脂質画分を抽出後、前記同様に抽出液を回収した。更に、ろ液下層とろ過残渣に同一の操作をもう１回繰り返し、回収した合計３回分の抽出液を併せ、エバポレーターを使用して混合溶媒を除去し、残渣としてエーテル型リン脂質含有脂質である２．２ｋｇのオキアミ油を得た。
得られたオキアミ油は、下記の分析方法に従い、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成を測定し、その結果を表１に記載した。
更に、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量についても、下記の分析方法に従って測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及び、リン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。なお、中性脂質（トリグリセリド）の脂肪酸組成については、基準油脂分析試験法に記載の方法に従い、メチルエステル化処理で得た脂肪酸メチルエステル量をガスクロマトグラフィーで検出することにより測定し、その結果を併せて表１に記載した。
【００５５】
〔製造例２〕
製造例１で得られたオキアミ油２００ｇにアセトン２．５Ｌを添加し、４℃で１時間静置した。上清を除去し、更にアセトン２．５Ｌを添加し、同様に処理した。残った沈殿物を乾固し、中性脂質を除去し、１−アルキルエーテル型リン脂質含有リン脂質画分である、８７ｇのオキアミ油リン脂質画分を得た。
得られたオキアミ油リン脂質画分は、製造例１同様、リン脂質含量、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量を測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及びリン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。
【００５６】
〔製造例３〕
実施例１で得られたオキアミ油２０００ｇにジエチルエーテル９６ｍＬ及び０．２Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ５．０ ２０５ｍＬに混濁させたＬｅｃｉｔａｓｅＵｌｔｒａ（Ｎｏｖｏｚｙｍｅｓ）１００ｋＵを添加し、４０℃で７０時間攪拌した。反応溶液にヘキサン／エタノール／水（８０：１４：６）１８Ｌを添加し、１０分攪拌混合後、上層を採取した。続いて、下層に新たにヘキサン１４Ｌを加え、１０分間攪拌して、同様に脂質画分を回収した。更に、下層に同一の操作をもう１回繰り返し、回収した合計３回分の抽出液を併せ、エバポレーターを使用して混合溶媒を除去し、残渣分１９５０ｇを得た。
残渣分２００ｇについて、ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒３００ｍＬに溶解したものを、ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒でけん濁したシリカゲル（Wakosil２００）４００ｇを充填したガラスカラム（１００ｃｍ×３ｃｍ）に添加した。ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒を４Ｌ通液させて中性脂質を溶出した後、エタノール８Ｌを通液させてエタノールアミンリン脂質を溶出させた。更にエタノール／水＝８０：２０の混合溶媒１１Ｌを通液させてコリンリン脂質を溶出させた。
得られた溶出液をエバポレーターで濃縮し、残渣として、ｓｎ−３位の塩基がコリン型である１−アルキルエーテル型リン脂質が濃縮された、７．２ｇのオキアミ油コリンリン脂質画分を得た。
得られたオキアミ油コリンリン脂質画分は、製造例１同様、リン脂質含量、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量を測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及びリン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。
【００５７】
〔製造例４〕
製造例３で得られたエーテル型リン脂質含有リン脂質１４ｇにジエチルエーテル２８ｍＬ、１Ｍ塩化カルシウム溶液６ｍＬ、酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１４４ｍＬ、塩化エタノールアミン２０ｇ、Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．由来ホスホリパーゼＤ１．２ｇ（１２００Ｕ、名糖産業）を添加し、４５℃で４０時間攪拌した。ヘキサン／エタノール（６０：４０）６００ｍＬを添加し、１０分攪拌混合後、上層を採取した。続いて、下層に新たにヘキサン３６０ｍＬを加え、１０分間攪拌して、同様に脂質画分を回収した。更に、下層に同一の操作をもう１回繰り返し、回収した合計３回分の抽出液を併せ、エバポレーターを使用して混合溶媒を除去し、残渣分１１ｇを得た。
残渣をヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒３００ｍＬに溶解したものを、ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒でけん濁したシリカゲル（Wakosil２００）４００ｇを充填したガラスカラム（１００ｃｍ×３ｃｍ）に添加した。ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒を４Ｌ通液させて中性脂質を溶出した後、エタノール８Ｌを通液させてエタノールアミン型リン脂質を溶出させた。
得られた溶出液をエバポレーターで濃縮し、残渣として、ｓｎ−３位の塩基がエタノールアミン型である１−アルキルエーテル型リン脂質が濃縮された、１０ｇのオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分を得た。
得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分は、製造例１同様、リン脂質含量、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量を測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及びリン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。
【００５８】
〔製造例５〕
製造例３で得られたエーテル型リン脂質含有リン脂質１４ｇにジエチルエーテル２８ｍＬ、１Ｍ塩化カルシウム溶液６ｍＬ、酢酸緩衝液（ｐＨ６．０）１４４ｍＬ、Ａｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ ｓｐ．由来ホスホリパーゼＤ１．２ｇ（１２００Ｕ、名糖産業）を添加し、４５℃で４０時間攪拌した。ヘキサン／エタノール（６０：４０）６００ｍＬを添加し、１０分攪拌混合後、上層を採取した。続いて、下層に新たにヘキサン３６０ｍＬを加え、１０分間攪拌して、同様に脂質画分を回収した。更に、下層に同一の操作をもう１回繰り返し、回収した合計３回分の抽出液を併せ、エバポレーターを使用して混合溶媒を除去し、残渣分１３ｇを得た。
残渣をヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒３００ｍＬに溶解したものを、ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒でけん濁したシリカゲル（Wakosil２００）４００ｇを充填したガラスカラム（１００ｃｍ×３ｃｍ）に添加した。ヘキサン／エタノール＝８０：２０の混合溶媒を４Ｌ通液させて中性脂質を溶出した後、エタノール８Ｌを通液させてホスファチジン酸型リン脂質を溶出させた。
得られた溶出液をエバポレーターで濃縮し、残渣として、ｓｎ−３位の塩基がホスファチジン酸型である１−アルキルエーテル型リン脂質が濃縮された、１２ｇのオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分を得た。
得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分は、製造例１同様、リン脂質含量、エーテル型リン脂質含量、プラスマローゲン含量、１−アルキルエーテル型リン脂質含量、リン脂質の脂肪酸組成、リン脂質中の塩基のタイプ（コリン型、エタノールアミン型、ホスファチジン酸型）の含量を測定し、その結果を併せて表１に記載した。
更に、ＤＨＡ／全脂質の構成脂肪酸、及びリン脂質結合型ＤＨＡ／全ＤＨＡについては表２に記載した。
【００５９】
【表１】
【００６０】
【表２】
【００６１】
＜２＞動物試験（摂食試験）
〔実施例１〜４、比較例１〕
５週齢の雄Wistar-ST系ラットを、６群（１群６匹）に分け、飼料及び水を自由に摂取させた。飼料はＡＩＮ９３Ｇに準じた精製飼料（基本飼料：大豆油７％を含む）を用いた。なお、基本飼料は毎日交換し、飲水の水道水は３日毎に交換した。前記条件で７日間飼育した後、基本飼料の大豆油７％の代わりに製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例３）、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）、基本餌料（比較例１）を与え、８日間飼育した。
なお、基本飼料の配合を表３に記載する。
なお、試験期間中、各群のラットの体重増加量及び餌の摂取量への影響は認められなかった。
【００６２】
８日間の給餌後、採血し、下記の分析方法に従い、血清画分の脂質を抽出した。
抽出した血清脂質は、下記の分析方法に従い、血清中のプラスマローゲン量、リン脂質量（１−アルキルエーテル型リン脂質とプラスマローゲンの合計量）を、ｓｎ−１位及びｓｎ−２位の結合脂肪酸の種類及びｓｎ−３位の塩基の種類（分子種）ごとに測定した。
ｓｎ−２位の結合脂肪酸の種類ごとの測定値のうち、リン脂質とプラスマローゲンそれぞれの、ＤＨＡ結合型について、その含量（ｎｍｏｌ／Ｌ）と、その比率（ｍｏｌ％）を表４及び表５に記載した。更に、比較例１（大豆油のみ）を１００とした場合の前記含量と比率についても同様に表４及び表５に記載した。なお、参考のためにアラキドン酸結合型の含量についてもあわせて記載した。
また、ｓｎ−３位の塩基の種類ごとの測定値のうち、ＤＨＡ結合型プラスマローゲンについて、その含量（ｎｍｏｌ／Ｌ）と、コリン型とエタノールアミン型の比率を表６に記載した。
【００６３】
【表３】
【００６４】
【表４】
【００６５】
【表５】
【００６６】
【表６】
【００６７】
＜２＞分析方法
本実施例の動物試験における血清中のプラスマローゲン及び１−アルキルエーテル型リン脂質の定量は、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて行った。
【００６８】
（被検試料からのプラスマローゲン及び１−アルキルエーテル型リン脂質の抽出）
血清からの総脂質の抽出は、以下のようにして行った。血液を遠心分離して得た血清０．３ｍＬに１％塩化カリウム水溶液を加えて混合し、メタノール２．４ｍＬ、クロロホルム１．２５ｍＬ及び内部標準物質として、ｓｎ−１位、ｓｎ−２位が共にミリスチン酸のジアシル型コリンリン脂質（以下、１４：０／１４：０−ＰＣと言う）７．３ｎｍｏｌ及びｓｎ−１位、ｓｎ−２位がミリスチン酸のジアシルエタノールアミン型リン脂質（以下、１４：０／１４：０−ＰＥと言う）１．７ｎｍｏｌ及びｓｎ−１位、ｓｎ−２位がミリスチン酸のホスファチジン酸型リン脂質（以下、１４：０／１４：０−ＰＡと言う）１．７ｎｍｏｌ含むクロロホルム：メタノール＝２：１の混液０．１ｍＬを加え、１０分間混合後、３０分間室温で放置した。更に、クロロホルム１．２５ｍＬを加えて混合し、１時間室温で放置後、１．２５ｍＬの１％塩化カリウム水溶液を加え、３０００ｒｐｍ、１５分間遠心分離後、クロロホルム層（下層）を採取した。残渣に更にクロロホルム２．０ｍＬ加え、混合・放置後、遠心分離を行い、下層を採取し、先の採取液と合わせ、窒素の吹きつけにより、溶媒を除去後、１．０ｍＬのメタノールに溶解し、フィルターを通したあと、適宜メタノールで希釈したのち、ＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて解析した。なお、その際のＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）と、ＭＳ／ＭＳ（タンデム質量分析）の条件はそれぞれ以下のとおりである。
【００６９】
（ＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）の条件）
ＬＣ システム：Ａｃｃｅｌａ ＵＨＰＬＣ Ｓｙｓｔｅｍ
溶離液Ａ：５ｍＭギ酸アンモニウム水溶液
溶離液Ｂ：アセトニトリル
カラム：Ｗａｔｅｒｓ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨ Ｃ８（２．１×１００ｍｍ，１．７μｍ）
カラム温度：６０℃
流速：０．４５ｍＬ／ｍｉｎ
ＵＨＰＬＣの溶離液の条件を表７に示す。
【００７０】
【表７】
【００７１】
（ＭＳ／ＭＳ（タンデム質量分析）の条件）
ＭＳシステム：ＴＳＱ Ｑｕａｎｔｕｍ ｓｙｓｔｅｍ
イオン化モード：ＨｅａｔｅｄＥＳＩ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ
キャピラリー電圧：３．２ｋＶ
コーン電圧：３５Ｖ
Ｄｅｓｏｌｖａｔｉｏｎ温度：４００℃
Ｓｏｕｒｃｅ温度：８０℃
衝突エネルギー：３２ｅＶ（コリンプラスマローゲン）
２０ｅＶ（エタノールアミンプラスマローゲン）
１２ｅＶ（ホスファチジン酸プラスマローゲン）
３２ｅＶ（１−アルキルエーテル型コリンリン脂質）
１８ｅＶ（１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質）
１２ｅＶ（１−アルキルエーテル型ホスファチジン酸リン脂質）
【００７２】
（コリンプラスマローゲンの定量方法）
コリンプラスマローゲンの定量方法は、特願２００９−２９６７４４号明細書に従って行った。
被検試料中のコリンプラスマローゲンの定量を行うための検量線の作成は、以下のように行った。
ｓｎ−１位がステアリン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸のコリンプラスマローゲン（以下、１８：０／１８：１−ＣＰＬと言う）、及びｓｎ−１位がステアリン酸、ｓｎ−２位がアラキドン酸のコリンプラスマローゲン（以下、１８：０／２０：４−ＣＰＬと言う）を合成し、メタノールに溶解し、標準原液（１．２９μｍｏｌ／ｍＬ）を調製した。この標準原液をメタノールで希釈し、０．０５ｐｍｏｌ、０．１０ｐｍｏｌ、０．２０ｐｍｏｌ、及び０．５０ｐｍｏｌの４種類の濃度の標準溶液を調製した。なお、それぞれの標準溶液には、１４：０／１４：０−ＰＣを１００ｐｍｏｌ添加した。それぞれの標準溶液を、前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件に従って解析した。得られたそれぞれの標準溶液中の１８：０／１８：１−ＣＰＬあるいは１８：０／２０：４−ＣＰＬと、１４：０／１４：０−ＰＣとのコリンリン酸由来フラグメントの面積比を計算し、検量線を作成した。この検量線を用いて検体試料中のコリンプラスマローゲンの定量を行った。
主要なコリン型プラスマローゲンの分子種として、ｓｎ−１位が１６：０、１６：１、１８：０、又は１８：１の４種類、ｓｎ−２位が１６：０、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：４、２０：５、２２：４、２２：５、又は２２：６の１１種類、つまり、合計４４種類の分子種を測定した。
【００７３】
（エタノールアミンプラスマローゲンの定量方法）
エタノールアミンプラスマローゲンの定量方法は、Ｋａｒｉｎ Ａ．Ｚｅｍｓｋｉ Ｂｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．らの方法（Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍ．，１５，１４９９−５０８，２００４）を参照、一部改変して行った。
被検試料中のエタノールアミンプラスマローゲンの定量を行うための検量線の作成は、以下のように行った。
ｓｎ−１位がステアリン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸のエタノールアミンプラスマローゲン（以下、１８：０／１８：１−ＥＰＬと言う）、及び、ｓｎ−１位がステアリン酸、ｓｎ−２位がアラキドン酸のエタノールアミンプラスマローゲン（以下、１８：０／２０：４−ＥＰＬと言う）を合成し、これらを共にメタノールに溶解し、標準原液（１．２９μｍｏｌ／ｍＬ）を調製した。この標準原液をメタノールで希釈し、０．０５ｐｍｏｌ、０．１０ｐｍｏｌ、０．２０ｐｍｏｌ、及び０．５０ｐｍｏｌの４種類の濃度の標準溶液を調製した。なお、それぞれの標準溶液には、１４：０／１４：０−ＰＥを１００ｐｍｏｌ添加した。それぞれの標準溶液を、前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件に従って解析した。得られたそれぞれの標準溶液中の１８：０／１８：１−ＥＰＬあるいは１８：０／２０：４−ＥＰＬの分子内転移によって生じるフラグメントと、１４：０／１４：０−ＰＥとの面積比を計算し、検量線を作成した。この検量線を用いて検体試料中のエタノールアミンプラスマローゲンの定量を行った。
主要なエタノールアミンプラスマローゲンの分子種として、ｓｎ−１位が１６：０、１６：１、１８：０、又は１８：１の４種類、ｓｎ−２位が１６：０、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：４、２０：５、２２：４、２２：５、又は２２：６の１１種類、つまり、合計４４種類の分子種を測定した。
【００７４】
（１−アルキルエーテル型コリンリン脂質、及び１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質の定量方法）
被検試料中の１−アルキルエーテル型コリンリン脂質質、あるいは、１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質の定量を行うための検量線の作成は、以下のように行った。
ｓｎ−１位がパルミチン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸の１−アルキルエーテル型コリンリン脂質（以下、１６：０／１８：１−ＣＡと言う）、及び、ｓｎ−１位がパルミチン酸、ｓｎ−２位がオレイン酸の１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質（以下、１６：０／１８：１−ＥＡと言う）を合成し、メタノールに溶解し、標準原液（１．２９μｍｏｌ／ｍＬ）を調製した。この標準原液をメタノールで希釈し、０．０５ｐｍｏｌ、０．１０ｐｍｏｌ、０．２０ｐｍｏｌ、及び０．５０ｐｍｏｌの４種類の濃度の標準溶液を調製した。なお、１６：０／１８：１−ＣＡの標準溶液には、１４：０／１４：０−ＰＣを、１６：０／１８：１−ＥＡの標準溶液には１４：０／１４：０−ＰＥをそれぞれ１００ｐｍｏｌ添加した。それぞれの標準溶液を、前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件に従って解析した。
１−アルキルエーテル型コリンリン脂質のそれぞれの標準溶液中の１６：０／１８：１−ＣＡと、１４：０／１４：０−ＰＣとのコリンリン酸由来フラグメントの面積比を計算し、１−アルキルエーテル型コリンリン脂質質の検量線を作成した。
【００７５】
一方、１−アルキルエーテル型エタノールアミンリン脂質のそれぞれの標準溶液中の１６：０／１８：１−ＥＡと、１４：０／１４：０−ＰＥとのエタノールアミンリン酸由来フラグメントの面積比を計算し、エタノールアミン型１−アルキルエーテル型リン脂質の検量線を作成した。
これらの検量線を用いて検体試料中の１−アルキルエーテル型リン脂質の定量を行った。
主要な１−アルキルエーテル型リン脂質の分子種として、ｓｎ−１位が１６：０、１６：１、１８：０、又は１８：１の４種類、ｓｎ−２位が１６：０、１８：０、１８：１、１８：２、１８：３、２０：１、２０：４、２０：５、２２：４、２２：５、又は２２：６の１１種類、つまり、合計４４種類の分子種を測定した。
【００７６】
（ホスファチジン酸プラスマローゲン及び１−アルキルエーテル型ホスファチジン酸リン脂質の定量）
なお、製造例１〜５の全ての被験試料、及び、実施例１〜４、比較例１，２の動物試験で得られた血清脂質サンプルについて、前記ＬＣ−ＭＳ／ＭＳの測定条件に従って解析した場合、内部標準である１４：０／１４：０−ＰＡ以外のピークが検出されなかったため、ホスファチジン酸プラスマローゲン及び１−アルキルエーテル型ホスファチジン酸リン脂質は測定限界未満の含量であることが分かった。
【００７７】
表４からわかるように、血清中のリン脂質結合型ＤＨＡ含量（ＤＨＡ結合型プラスマローゲンとＤＨＡ結合型１−アルキルエーテル型リン脂質の合計量）は、基本飼料（比較例１）に対し、製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）は２．７１倍、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）は１４．６６倍、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（試験群３）は７．６２倍、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）は７．８４倍となった。
【００７８】
また、ＤＨＡ比についても、基本飼料（比較例１）に対し、製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）は１．７４倍、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）は２．４９倍、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（試験群３）は２．６８倍、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）は２．６４倍となった。
【００７９】
また、前記のようにリン脂質結合型ＤＨＡ含量、比は大きく増加しているが、リン脂質結合型アラキドン酸については、その比を見るとわかるように、実施例１〜４において、比較例１に比べ５０〜７４％と逆に減少していることがわかる。
【００８０】
表５からわかるように、血清中のＤＨＡ結合型プラスマローゲン量は、基本飼料（比較例１）に対し、製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）は２．２２倍、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）は４．５７倍、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（試験群３）は４．０２倍、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）は４．９５倍となった。
【００８１】
また、ＤＨＡ比についても、基本飼料（比較例１）に対し、製造例２で得られたオキアミ油リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例１）は１．７３倍、製造例３で得られたオキアミ油コリンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例２）は２．４５倍、製造例４で得られたオキアミ油エタノールアミンリン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（試験群３）は２．２５倍、製造例５で得られたオキアミ油ホスファチジン酸リン脂質画分１％と大豆油６％の混合脂質を使用した飼料（実施例４）は２．３８倍となった。
【００８２】
また、前記のようにリン脂質結合型ＤＨＡ含量、比は大きく増加しているが、リン脂質結合型アラキドン酸については、その比を見るとわかるように、実施例１〜４において、比較例１に比べ５８〜６４％と逆に減少していることがわかる。
この結果から、エーテル型リン脂質（１−アルキルエーテル型リン脂質）は、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤としての機能が高いことがわかる。
【００８３】
また、表６からわかるように、ＤＨＡ結合型プラスマローゲンの増加分のうち、認知症患者や高齢者で血液中の濃度が低下すると言われるエタノールアミン型の増加は、コリン型の増加に対して有意に大きく、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤としてエーテル型リン脂質（１−アルキルエーテル型リン脂質）は極めて有用であることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００８４】
本発明のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤、及びリン脂質結合型ＤＨＡを上昇させる飲食品は、学習能力及び記憶力など脳機能の向上に有用であり、また認知症等の予防、並びにアルツハイマー症、及びうつ病などの疾病の治療に有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とする、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤。
【請求項２】
更にＤＨＡを含む、請求項１に記載のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤。
【請求項３】
前記ＤＨＡの５０％以上がリン脂質に結合している、請求項２に記載のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤。
【請求項４】
オキアミ抽出物由来の、１−アルキルエーテル型リン脂質及び／又はＤＨＡを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤。
【請求項５】
１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とする、リン脂質結合型ＤＨＡを上昇させる飲食品。
【請求項６】
更にＤＨＡを含有する、請求項５に記載の飲食品。
【請求項７】
前記ＤＨＡの５０％以上がリン脂質に結合している、請求項６に記載の飲食品。
【請求項８】
オキアミ抽出物由来の、１−アルキルエーテル型リン脂質及び／又はＤＨＡを含む、請求項５〜７のいずれか１項に記載の飲食品。
【請求項１】
１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とする、リン脂質結合型ＤＨＡ増加剤。
【請求項２】
更にＤＨＡを含む、請求項１に記載のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤。
【請求項３】
前記ＤＨＡの５０％以上がリン脂質に結合している、請求項２に記載のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤。
【請求項４】
オキアミ抽出物由来の、１−アルキルエーテル型リン脂質及び／又はＤＨＡを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載のリン脂質結合型ＤＨＡ増加剤。
【請求項５】
１−アルキルエーテル型リン脂質を有効成分として含むことを特徴とする、リン脂質結合型ＤＨＡを上昇させる飲食品。
【請求項６】
更にＤＨＡを含有する、請求項５に記載の飲食品。
【請求項７】
前記ＤＨＡの５０％以上がリン脂質に結合している、請求項６に記載の飲食品。
【請求項８】
オキアミ抽出物由来の、１−アルキルエーテル型リン脂質及び／又はＤＨＡを含む、請求項５〜７のいずれか１項に記載の飲食品。
【公開番号】特開２０１３−５３１０９（Ｐ２０１３−５３１０９Ａ）
【公開日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−１９３２６６（Ｐ２０１１−１９３２６６）
【出願日】平成２３年９月５日（２０１１．９．５）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 日本農芸化学会２０１１年度（平成２３年度）大会、社団法人日本農芸化学会主催、平成２３年３月５日発行 第６５回日本栄養・食糧学会大会、社団法人日本栄養・食糧学会主催、平成２３年４月２５日発行
【出願人】（３９９０８６２６３）学校法人帝京大学 (21)
【出願人】（５０４１７３４７１）国立大学法人北海道大学 (971)
【出願人】（００００００３８７）株式会社ＡＤＥＫＡ (987)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年３月２１日（２０１３．３．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年９月５日（２０１１．９．５）
【新規性喪失の例外の表示】特許法第３０条第１項適用申請有り 日本農芸化学会２０１１年度（平成２３年度）大会、社団法人日本農芸化学会主催、平成２３年３月５日発行 第６５回日本栄養・食糧学会大会、社団法人日本栄養・食糧学会主催、平成２３年４月２５日発行
【出願人】（３９９０８６２６３）学校法人帝京大学 (21)
【出願人】（５０４１７３４７１）国立大学法人北海道大学 (971)
【出願人】（００００００３８７）株式会社ＡＤＥＫＡ (987)
【Ｆターム（参考）】
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