膵臓癌の処置のためのゲムシタビンおよびチロシンキナーゼ阻害剤を含む組み合わせ
本発明は、膵臓癌を有する温血動物の処置方法に関し、特にそれは
膵臓癌を有する温血動物に、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性および血管内皮細胞増殖因子受容体(ＶＥＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性の二重阻害剤を投与することを含む方法、
(ａ)膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物にＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を含む組み合わせを投与することを含む、方法、
(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)血小板由来増殖因子受容体(ＰＤＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される、少なくとも１種の化合物を含む組み合わせ；
膵臓癌を有する温血動物を処置する方法であって、該温血動物に該組み合わせを投与することを含む、方法；
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、このような組み合わせの使用；および
このような組み合わせを膵臓癌の処置のための指示書と共に含む、商業用包装物または製品
に関する。
膵臓癌を有する温血動物に、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性および血管内皮細胞増殖因子受容体(ＶＥＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性の二重阻害剤を投与することを含む方法、
(ａ)膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物にＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を含む組み合わせを投与することを含む、方法、
(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)血小板由来増殖因子受容体(ＰＤＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される、少なくとも１種の化合物を含む組み合わせ；
膵臓癌を有する温血動物を処置する方法であって、該温血動物に該組み合わせを投与することを含む、方法；
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、このような組み合わせの使用；および
このような組み合わせを膵臓癌の処置のための指示書と共に含む、商業用包装物または製品
に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膵臓癌を有する温血動物の処置方法に関し、特にそれは
膵臓癌を有する温血動物に、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性および血管内皮細胞増殖因子受容体(ＶＥＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性の二重阻害剤を投与することを含む方法、
(ａ)膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物にＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を含む組み合わせを投与することを含む、方法、
(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)血小板由来増殖因子受容体(ＰＤＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される、少なくとも１種の化合物を含む組み合わせ；
膵臓癌を有する温血動物を処置する方法であって、該温血動物に該組み合わせを投与することを含む、方法；
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、このような組み合わせの使用；および
このような組み合わせを膵臓癌の処置のための指示書と共に含む、商業用包装物または製品
に関する。
【背景技術】
【０００２】
膵臓腺癌は最も攻撃的な悪性腫瘍の一つであり、ほとんどの患者が転移性疾患を発症する。ゲムシタビンが患者の生存を延長できるが、３％未満のみが最初の診断後５年生存し、中央生存期間は６ヶ月より短い。明らかに、膵臓癌の新規処置選択肢の開発の緊急の必要性がある。
【発明の開示】
【０００３】
驚くべきことに、本発明の最初の局面において、ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲの同時の阻害がヒト膵臓癌腫の増殖を阻害することが判明した。さらなる局面において、抗新生物代謝拮抗剤の投与と組み合わせたＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲおよび、所望により、ＰＤＧＦＲの同時の阻害が、ヒト膵臓癌腫の増殖を非常に強力に阻害し、そして、抗新生物代謝拮抗剤単独の投与と比較して、生存の延長の展望を示すことが判明した。
【０００４】
故に、本発明は膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤の使用、または代替的に(ａ)ＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を含む組み合わせの使用に関する。
【０００５】
さらに、本発明は、膵臓癌の処置における同時、別々または連続的使用のための(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的に(ａ)ＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される少なくとも１種の化合物(ここで、これらの活性成分はいずれの場合も遊離形でまたはそれらの薬学的に許容される塩もしくは何らかの水和物の形で存在する)、および所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組み合わせに関する。
【０００６】
他の局面において、本発明は膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物にＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤を膵臓癌に対する治療的有効量を投与することを含む方法(ここで、ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤はまた薬学的に許容される塩の形でも存在できる)、ならびに膵臓癌を有する温血動物を処置する方法であって、該温血動物に(ａ)ＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を膵臓癌に対する治療的有効量を含む組み合わせを投与することを含む方法(ここで、組み合わせの成分はまたそれらの薬学的に許容される塩の形でも存在できる)にも関する。
【０００７】
本発明に適当な“ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤”は、特にＷＯ０３／０１３５４１に記載されたものであり(この公報は引用により本明細書に包含させる)、式(Ｉ)
【化１】
〔式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して水素、非置換または置換アルキルまたはシクロアルキル、環炭素原子を介して結合したヘテロ環式ラジカル、または式Ｒ４−Ｙ−(Ｃ＝Ｚ)−のラジカルであり、ここで、Ｒ４は非置換、モノまたはジ置換アミノまたはヘテロ環式ラジカルであり、Ｙは存在しないかまたは低級アルキルであり、そしてＺは酸素、硫黄またはイミノである。ただし、Ｒ１およびＲ２は両方同時に水素ではない；または
Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している窒素原子と一体となってヘテロ環式ラジカルを形成し；
Ｒ３はヘテロ環式ラジカルまたは非置換または置換芳香族性ラジカルであり；
ＧはＣ１−Ｃ７−アルキレン、−Ｃ(＝Ｏ)−、またはＣ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ(＝Ｏ)−であり、ここで、該カルボニル基がＮＲ１Ｒ２部分に結合しており；
Ｑは−ＮＨ−または−Ｏ−である。ただし、Ｇが−Ｃ(＝Ｏ)−またはＣ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ(＝Ｏ)−であるとき、Ｑは−Ｏ−であり；そして
Ｘは、存在しないかまたはＣ１−Ｃ７−アルキレンのいずれかである。ただし、Ｘが存在しないならば、ヘテロ環式ラジカルＲ３は環炭素原子を介して結合していない。〕
７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン誘導体ならびにこのような化合物の塩であり、
ここで、ラジカルおよび記号はＷＯ０３／０１３５４１に定義の意味を有する。
【０００８】
一つの態様において、本発明における使用のために特に好ましい二重ＥＧＦおよびＶＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤は{６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−[フェニル−エチル)−アミンまたはその薬学的に許容される塩である。
【０００９】
ここに記載のＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体は、ＵＳ５,５２１,１８４およびＵＳ２００４−０１０２４５３に開示のものである。Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンはＵＳ５,５２１,１８４に記載の通り製造でき、その公報は引用により本明細書に包含させる。Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンのモノメシル酸塩は、例えば、ＷＯ９９／０３８５４の実施例４および６に記載の通り、またはＷＯ０３／０９０７２０に記載の通り製造および製剤でき、これらの公報は引用により本明細書に包含させる。Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンのメシル酸塩(メシル酸イマチニブ、ＳＴＩ５７１)は商品名Glivec(登録商標)(Gleevec(登録商標))の下に市販されている。Glivec(登録商標)は慢性骨髄性白血病およびＧＩＳＴ(胃腸間質性腫瘍)の処置に適するチロシンキナーゼ阻害剤である。
【００１０】
用語“抗新生物代謝拮抗剤”は、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、メトトレキサートおよびエダトレキサートを含むが、これらに限定されない。カペシタビンは、例えば、XELODAＴＭの商品名の下、例えば市販の形で投与できる。ゲムシタビンは、例えば、GEMZARＴＭの商品名の下、例えば市販の形で投与できる。
【００１１】
ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物は、とりわけＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性を阻害する化合物、ＶＥＧＦ受容体に結合する化合物およびＶＥＧＦに結合する化合物であり、特にＷＯ９８／３５９５８、ＷＯ００／０９４９５、ＷＯ００／２７８２０、ＷＯ００／５９５０９、ＷＯ９８／１１２２３、ＷＯ００／２７８１９およびＥＰ０７６９９４７に一般的におよび具体的に開示の化合物、タンパク質およびモノクローナル抗体；M. Prewett et al in Cancer Research 59(1999)5209-5218、F. Yuan et al in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 14765-14770, Dec. 1996, by Z. Zhu et al in Cancer Res. 58, 1998, 3209-3214およびJ. Mordenti et al in Toxicologic Pathology, Vol. 27, no. 1, pp 14-21, 1999により記載のもの；ＷＯ００／３７５０２およびＷＯ９４／１０２０２に記載のもの；M. S. O'Reilly et al, Cell 79, 1994, 315-328により記載のアンジオスタチンＴＭ；およびにより記載のEndostatinＴＭであり；
【００１２】
ＥＧＦの活性を低下させる化合物は、とりわけＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性を阻害する化合物、ＥＧＦ受容体に結合する化合物およびＥＧＦに結合する化合物であり、特にＷＯ９７／０２２６６、ＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、ＵＳ５,７４７,４９８、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３および、とりわけ、ＷＯ９６／３３９８０に記載の化合物であり；
【００１３】
特許出願または科学文献に関する引用がされている各場合、特に化合物請求項および作業実施例の最終製品、最終生成物の対象。このような特許公報の医薬製剤および特許請求の範囲は、これらの公報の引用により本明細書に包含させる。同様にそれらに開示の対応する立体異性体ならびに対応する結晶変態、例えば溶媒和物および多型も包含する。ここに開示の組み合わせにおいて活性成分として使用する化合物は、各々引用した文献に記載の通り製造し、投与できる。
【００１４】
一つの態様において、本発明において使用するための好ましいＶＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤はAvastinＴＭ(ベバシズマブ)である。さらなる態様において、本発明において使用するための好ましいＶＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤は１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンスクシネートである。一つの態様において、本発明において使用するための好ましいＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤はIressaＴＭ(ゲフィチニブ)である。さらなる態様において、本発明において使用するための好ましいＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤はErbituxＴＭ(セツキシマブ)である。
【００１５】
コード番号、一般名または商品名により同定した活性成分の構造は、標準概論“The Merck Index”の現行版からまたはデータベース、例えばPatents International(例えばIMS World Publications)から取り得る。それらの対応する内容は引用により本明細書に包含させる。
【００１６】
組み合わせパートナーに関する記載はまた薬学的に許容される塩も含むことは理解されよう。組み合わせパートナーが、例えば、少なくとも１種の塩基性中心を有するとき、それらは酸付加塩を形成できる。対応する酸付加塩もまた、さらに存在する塩基性中心を有して形成できる。酸基(例えばＣＯＯＨ)を有する組み合わせパートナー(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)はまた塩基と塩を形成できる。Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミン、すなわち組み合わせパートナー(ａ)は、好ましくは本発明においてそのモノメシル酸塩の形(ＳＴＩ５７１)で使用する。
【００１７】
本発明の組み合わせは、組み合わせ製剤または医薬組成物の形で使用できる。
【００１８】
ここで使用する用語“組み合わせ製剤”は、とりわけ上記で定義の組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)を独立して、または組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の異なった量で異なって固定された組み合わせの使用により、すなわち、同時にまたは異なる時点で投与できる点で、“複数パーツのキット”と定義する。次いで、複数パーツのキットのパーツを、例えば、同時にまたはずれた時間で、すなわち、異なる時点で、複数パーツのキットの何らかのパーツと等しいまたは異なる間隔で投与できる。非常に好ましくは、時間間隔は、組み合わせ使用で処置している疾患に対する効果が、組み合わせパートナーのいずれか一方のみにより得られる効果より大きいように選択する。組み合わせ製剤において投与する組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の総量のお互いの比率は、特定の疾患、患者の年齢、性別、体重などにより異なる必要性が起こり得る、例えば処置すべき患者亜集団の要求に合うため、または単独の患者の要求に合うために変換し得る。好ましくは、少なくとも１種の有益な効果、例えば、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の相互の増強、特に相乗作用、例えば相加効果以上、さらなる有利な効果、少ない副作用、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の一方または両方の非有効量での組み合わせ治療効果、および非常に好ましくは組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の強い相乗効果が存在する。
【００１９】
用語“処置”は、処置を必要とする患者における、固形腫瘍疾患の進行遅延をもたらす処置を含む。ここで使用する用語“進行遅延”は、処置すべき疾患の前段階または初期相にある患者への組み合わせの投与を意味し、ここで、該患者は、例えば、対応する疾患の前形態であることが診断されているか、または、該患者は、例えば医学的処置または事故に起因する状態にあって対応する疾患を発症しそうな状態にある。
【００２０】
同時、別々または連続的使用のための(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される少なくとも１種の化合物(ここで、これらの活性成分はいずれの場合も遊離形でまたはそれらの薬学的に許容される塩もしくは何らかの水和物の形で存在する)、および所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組み合わせを、以後本発明の組み合わせと呼ぶ。
【００２１】
確立された試験モデルおよび特にここに記載の試験モデルにおいて、本発明の組み合わせが膵臓癌腫の処置に適することを示すことができる。関連分野の当業者は、前記および後記の治療適用および有益な効果を確認するための適切な試験モデルを選択することが十分に可能である。本発明の組み合わせの薬理学的活性は、例えば、実質的に以下に記載の臨床試験または試験法により証明できる。実施例に記載の試験において、ヒト膵臓癌細胞であるＬ３.６ｐｌをヌードマウスの膵臓に移植する。このモデルの腫瘍関連内皮細胞は、リン酸化ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲを高度に発現する。ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲの二重チロシンキナーゼ阻害剤である{６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−[フェニル−エチル)−アミンの経口投与は、ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲのリン酸化を低下させる。ＰＤＧＦＲリン酸化はＳＴＩ５７１により阻害される。ゲムシタビンの腹腔内(ｉ.ｐ.)注射は腫瘍増殖を阻害しないが、その{６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−[フェニル−エチル)−アミンおよびＳＴＩ５７１との組み合わせは腫瘍増殖の＞８０％阻害をもたらし、腫瘍細胞および腫瘍関連内皮細胞アポトーシスの数の増加、減少した微小血管密度、低下した増殖速度、および延長した生存と平行して生存を延長する。ＳＴＩ５７１処置はまた腫瘍関連内皮細胞上の周皮細胞被覆も低下させる。故に、ゲムシタビンと組み合わせたＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲのリン酸化の阻害は、ゲムシタビンの効果を増強し、実験的ヒト膵臓癌増殖の阻止しおよび生存の著しい延長をもたらす。
【００２２】
ヒト患者での適当な試験は、例えば、膵臓癌患者でのオープンラベル非無作為化、用量漸増試験である。このような試験は、特に抗新生物代謝拮抗剤単独での処置を超える本発明の組み合わせの優位性ならびに本発明の組み合わせの治療的効果を証明する。膵臓癌に対する有益な効果は、これらの試験の結果を介して直接、またはそれ自体当業者に既知の試験設計の変化により決定できる。
【００２３】
本発明の組み合わせはまた外科的介入、穏やかな長時間全身高熱療法および／または照射療法と組み合わせても適用できる。
【００２４】
併用で固形腫瘍疾患に対して治療的有効量で本発明の組み合わせを含む、医薬組成物を提供することは本発明の目的の一つである。この組成物において、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)を一緒に、交互にまたは別々に、一つの組み合わせ単位投与形態でまたは別々の単位投与形態で投与できる。単位投与形態はまた固定された組み合わせでもよい。
【００２５】
本発明に従った組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)を別々に投与するための医薬組成物、および固定された組み合わせで投与するための医薬組成物、すなわち少なくとも２個の組み合わせパートナーを含む一つのガレヌス(galenical)組成物は、それ自体既知の方法で製造でき、治療的有効量の少なくとも１種の薬理学的に活性な組み合わせパートナーを単独でまたは、とりわけ経腸または非経腸投与に適する薬学的に許容される担体を含む、ヒトを含む哺乳動物(温血動物)への経口または直腸のような経腸および非経腸投与に適する組成物である。
【００２６】
新規医薬組成物は、例えば、約１０％から約１００％、好ましくは約２０％から約６０％の活性成分を含む。経腸または非経腸投与用の組み合わせ治療用の医薬製剤は、例えば、糖衣錠、錠剤、カプセル剤または坐薬、およびさらにアンプルのような単位投与形態のものである。他に指示がない限り、これらはそれ自体当業者に既知の方法で、例えば慣用の混合、造粒、糖コーティング、溶解または凍結乾燥工程の手段により製造する。各投与形態の個々の製剤に含まれる組み合わせパートナーの単位含量は、必要な用量が複数の投与単位の投与により達成できるため、それ自体有効量を構成する必要はない。
【００２７】
特に、治療的有効量の本発明の組み合わせの組み合わせパートナーの各々を、同時にまたは任意の順番で連続して投与でき、そしてこれらの成分を別々にまたは固定された組み合わせで投与できる。例えば、本発明の膵臓癌の処置方法は、併用で治療的有効量の、好ましくは相乗的有効量の、例えばここに記載の量に対応する１日量での、(ｉ)遊離または薬学的に許容される塩形態の組み合わせパートナー(ａ)の投与および(ii)遊離または薬学的に許容される塩形態の組み合わせパートナー(ｂ)の当時のまたは任意の順番で連続的な投与を含み得る。本発明の組み合わせの個々の組み合わせパートナーは、治療経過中の異なる時点で別々に、または分割されたまたは単一の組み合わせ形態で同時に投与してよい。さらに、用語投与は、インビボで組み合わせパートナーそれ自体に変換する組み合わせパートナーのプロドラッグの使用も含む。本発明は、故に、同時もしくは交互の処置の全てのこのようなレジメンを包含すると理解すべきであり、そして用語“投与する”はそれに応じて解釈すべきである。
【００２８】
本発明の組み合わせで用いる組み合わせパートナーの各々の有効量は、用いる特定の化合物または医薬組成物、投与形態、処置すべき状態、処置する状態の重症度に依存して変化し得る。故に、本発明の組み合わせの投与レジメンは、投与経路ならびに患者の腎臓および肝臓機能を含む種々の因子に従い選択する。通常の技術の医師、臨床医または獣医師は、本状態の予防、回復または進行の停止に必要な単独の活性成分の有効量を容易に決定し、処方できる。毒性を伴わない効果を発現する活性成分濃度の範囲を達成するための最適な詳細は、標的部位の活性成分の利用能の動態に基づく投与計画を必要とする。本発明の組み合わせにおいて使用する組み合わせパートナーを単一薬剤として市販されている形で適用するとき、それらの投与量および投与形態は、特記しない限り、ここに記載の有益な効果を得るために、各市販薬剤の添付文書に提供されている情報に従い得る。
【００２９】
Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンモノメシレートは、好ましくはヒトに、約２５から１０００mg／日、より好ましくは５０から８００mg／日および最も好ましくは１００から４００mg／日の範囲の投与量で投与する。ここで他に記載されていない限り、本化合物は、好ましくは１日１回から４回投与する。
【００３０】
５−フルオロウラシルは、ヒトに、約５０から１０００mg／ｍ２日で変化する投与範囲、例えば５００mg／ｍ２日で投与できる。
カペシタビンは、ヒトに、約１０から１０００mg／ｍ２日で変化する投与範囲で投与できる。
【００３１】
塩酸ゲムシタビンは、ヒトに約１０００mg／週を中心とする投与量範囲で投与できる。
メトトレキサートは、ヒトに約５から５００mg／ｍ２日で変化する投与範囲で投与できる。
【００３２】
ＷＯ９８／３５９５８の実施例６２に記載のコハク酸塩は、ヒトに、約５０から１５００、より好ましくは約１００から７５０、および最も好ましくは２５０から５００mg／日で変化する投与範囲で投与できる。
【００３３】
さらに、本発明は、膵臓癌の処置のための、および膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、本発明の組み合わせの使用に関する。
【００３４】
さらに、本発明は、活性成分として本発明の組み合わせを、膵臓癌の処置に置けるそれらの同時、別々または連続的使用のための指示書と共に含む商業用包装物を提供する。
【実施例】
【００３５】
以下の実施例は、上記の本発明を説明するが、如何なる方法でも本発明の範囲を限定することを意図しない。関連分野の当業者にそれ自体既知の他の試験モデルもまた本発明の組み合わせの有益な効果を決定できる。
【００３６】
膵臓癌細胞株および培養条件。ヒト膵臓癌細胞株Ｌ３.６ｐｌを、Hwang et al. in Clin Cancer Res 2003;9:6534-44に以前に記載の通り、１０％ウシ胎児血清(ＦＢＳ)、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、Ｌ−グルタミン、２倍ビタミン溶液(Life Technologies, Inc., Grand Island, NY)、およびペニシリン−ストレプトマイシン混合物(Flow Laboratories, Rockville, MD)を補った最小必須培地に維持する。
【００３７】
試薬。経口投与のために、{６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−[フェニル−エチル)−アミンをＤＭＳＯで希釈し、そしてＳＴＩ５７１を滅菌水で希釈する。ゲムシタビン(Gemzar, Eli Lilly Co, Indianapolis, IN)を室温に維持し、使用する日にリン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)に溶解する。それをｉ.ｐ.注射により投与する。
【００３８】
一次抗体を以下の製造業者から購入する：ウサギ抗ｐＶＥＧＦＲ２／３(Ｆｌｋ−１)(Oncogene, Boston, MA)；ウサギ抗ヒト、マウス、ラットＶＥＧＦ−Ｒ(Ｆｌｋ−１)(Ｃ１１５８)(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)；ウサギ抗ヒトｐＥＧＦＲ(Ｔｙｒ１１７３)(Biosource, Camarillo, CA)；パラフィンサンプルのためのウサギ抗ヒトＥＧＦおよびウサギ抗ヒトＥＧＦＲ(Santa Cruz Biotechnology)；凍結サンプルのためのウサギ抗ヒトＥＧＦＲ(Zymed, San Francisco, CA)；ウサギ抗ＶＥＧＦ(Ａ２０)(Santa Cruz Biotechnology)；ポリクローナルウサギ抗ＰＤＧＦＲ−β、ポリクローナルヤギ抗リン酸化ＰＤＧＦＲ−β、およびポリクローナルウサギ抗ＰＤＧＦ−β(全てSanta Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CAから得た)；ラット抗マウスＣＤ３１(BD PharMingen, San Diego, CA)；マウス抗増殖細胞核抗原(ＰＣＮＡ)クローンＰＣ１０(Dako A/S, Copenhagen, Denmark)；およびウサギ抗デスミン(Dako A/S)(周皮細胞マーカーとして)。以下の二次抗体を比色免疫組織化学のために使用する：ペルオキシダーゼ接合ヤギ抗ウサギＩｇＧ；Ｆ(ａｂ')２(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA)；ビオチニル化ヤギ抗ウサギ(Biocare Medical, Walnut Creek, CA)；ストレプトアビジンホースラディッシュペルオキシダーゼ(Dako A/S)；ラット抗マウスＩｇＧ２ａホースラディッシュペルオキシダーゼ(Serotec, Harlan Bioproducts for Science, Inc., Indianapolis, IN)；およびヤギ抗ｒａｔホースラディッシュペルオキシダーゼ(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.)。以下の蛍光二次抗体を使用する：Ａｌｅｘａ４８８接合ヤギ抗ウサギＩｇＧ(Ｍolecular Probes Inc., Eugene, OR)およびＡｌｅｘａ ５９４接合ヤギ抗ラットＩｇＧ(Molecular Probes Inc.)。末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ仲介ニック末端標識(ＴＵＮＥＬ)染色を市販のアポトーシス検出キット(Promeg, Madison, WI)を改変して使用して行う。
【００３９】
動物および腫瘍細胞の同所移植。雄無胸腺ヌードマウス(ＮＣＩ−ｎｕ)をAnimal Production Area of the National Cancer Institute Frederick Cancer Research and Development Center(Frederick, MD)から購入する。マウスを特異的無病原体条件下に飼育し、維持する。マウスを、８から１２週齢のときに使用する。膵臓腫瘍を産生するために、Ｌ３.６ｐｌ細胞を、０.２５％トリプシンおよび０.０２％ＥＤＴＡへの短い暴露によりサブコンプルエントな培養から回収する。トリプシン処理を、１０％ＦＢＳ含有培地で停止させ、細胞を１回無血清培地で洗浄し、ハンクス平衡塩溶液(ＨＢＳＳ)に再懸濁する。９０％製造能を超える単独細胞からなる懸濁液のみを先に記載の通り(Hwang et al. in Clin Cancer Res 2003;9:6534-44)、ヌードマウスの膵臓への注射に使用する。
【００４０】
無胸腺ヌードマウス膵臓で増殖する確立されたヒト膵臓癌腫瘍の処置。５０μl ＨＢＳＳ中の０.５×１０６生存Ｌ３.６ｐｌ細胞の膵臓内注射２１日間、膵臓腫瘍は５−６mmのサイズに達する。その時点で、マウスを以下の８処置に無作為化する(ｎ＝１０)：(１)コントロールマウス：１週間に３回ＤＭＳＯ−０.５％Ｔｗｅｅｎ ８０(希釈剤)で１：２０希釈された水の強制喫食による経口投与、滅菌水の毎日の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ＰＢＳのｉ.ｐ.注射；(２)１週間に３回希釈剤の強制喫食による経口投与、滅菌水の毎日の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ゲムシタビン(５０mg／kg)のｉ.ｐ.注射；(３)１週間に３回ＡＥＥ７８８(５０mg／kg)の強制喫食による経口投与、滅菌水の毎日の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ＰＢＳのｉ.ｐ.注射；(４)１週間に３回ＡＥＥ７８８(５０mg／kg)の強制喫食による経口投与、滅菌水の毎日の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ゲムシタビン(５０mg／kg)のｉ.ｐ.注射；(５)ＳＴＩ５７１(５０mg／kg)の毎日の強制喫食による経口投与、１週間に３回ＡＥＥ７８８の希釈剤の強制喫食による経口投与および１週間に２回ＰＢＳのｉ.ｐ.注射；(６)毎日のＳＴＩ５７１(５０mg／kg)の経口投与、１週間に３回ＡＥＥ７８８の希釈剤の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ゲムシタビン(５０mg／kg)のｉ.ｐ.注射；(７)１週間に３回経口ＡＥＥ７８８(５０mg／kg)、毎日のＳＴＩ５７１(５０mg／kg)、および１週間に２回ＰＢＳのｉ.ｐ.注射の組み合わせ；および(８)１週間に３回経口ＡＥＥ７８８(５０mg／kg)、１週間に７回ＳＴＩ５７１(５０mg／kg)、および１週間に２回ゲムシタビン(５０mg／kg)のｉ.ｐ.注射の組み合わせ。全マウスを４週間処置し、実験４９日目に殺す。
【００４１】
生存試験のために、５０μl ＨＢＳＳ中１.０×１０６腫瘍細胞の膵臓内注射２１日後(その時点で膵臓内の腫瘍は６から８mm直径を超える)、マウスを上記の８処置群の一つに無作為化する(ｎ＝１０)。マウスを、瀕死になったとき、殺し、検死する。生存をカプラン・マイヤー法で評価する。
【００４２】
剖検および組織学的試験。最初の処置試験において、マウスを腫瘍細胞注射４９日後に殺し、秤量し、および検死する。膵臓内で増殖した腫瘍を、摘出し、秤量する。免疫組織化学的染色法のために、腫瘍組織の一部をホルマリンで固定し、パラフィン包埋し、他をＯＣＴ化合物(Miles, Inc., Elkhart, IN)に包埋し、液体窒素で急速に凍結させ、−７０℃で貯蔵する。
【００４３】
膵臓腫瘍中のＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、ｐＰＤＧＦ−Ｒを検出するための免疫組織化学的(ＩＨＣ)分析。全処置群からのマウスのパラフィン包埋膵臓腫瘍を、ＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、リン酸化(ｐ)ＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、およびｐＰＤＧＦＲβの発現の評価のために免疫染色する。切片をキシレンで脱パラフィン処理し、アルコールで脱水し、ＰＢＳで再水和する。内因性ペルオキシダーゼを３％過酸化水素のＰＢＳ溶液で遮断する。サンプルをタンパク質ブロック(ＰＢＳ中５％正常ウマ血清、１％正常ヤギ血清)に曝し、一晩、４℃で適当な希釈の各一次抗体とインキュベートする。ペルオキシダーゼ接合二次抗体と１時間、室温でインキュベーション後、陽性反応を安定な３,３'−ジアミノベンジジン(ＤＡＢ)(Phoenix Biotechnologies, Huntsville, AL)に曝すことにより検出する。スライドをGill's ＃３ヘマトキシリンで対比染色する。切片を免疫ペルオキシダーゼまたはヘマトキシリンについて染色し、エオシンを３チップ電荷結合素子(ＣＣＤ)カラービデオカメラを備えた顕微鏡で試験する。デジタル画像をOptimas Image Analysis software(Media Cybernetics, MD)を使用して捕捉する。
【００４４】
増殖細胞核抗原(ＰＣＮＡ)、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１(内皮細胞)およびＴＵＮＥＬ(アポトーシス)のＩＨＣ決定。パラフィン包埋組を増殖細胞核抗原(ＰＣＮＡ)のＩＨＣ同定に使用する。ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１の同定に使用した凍結組織を切片にし(８−１０μm)、正に荷電したスライドに載せ、および３０分空気乾燥する。凍結切片を冷アセトン(５分)、アセトン／クロロホルム(ｖ／ｖ；５分)、および再びアセトン(５分)に固定し、ＰＢＳで洗浄する。ＩＨＣ法を先に記載の通り行う(Hwang et al. in Clin Cancer Res 2003;9:6534-44)。二次抗体のみに曝したコントロールサンプルは特異的染色がないことを示す。ＣＤ３１について染色した切片中の平均血管密度(ＭＶＤ)の定量のために、１０箇所の無作為の０.１５９mm２視野を、Ｘ１００倍率で各腫瘍について捕捉し、微小血管を定量する。ＰＣＮＡ発現の定量のために、正の細胞数を１０箇所の無作為の０.１５９mm２視野で、Ｘ１００倍率で計数する。
【００４５】
アポトーシス細胞の分析を、商業的に入手可能なＴＵＮＥＬキット(Promega)を以下の改変を加えて使用することにより行う：サンプルを平衡緩衝液、続いて反応緩衝液(ヌクレオチド混合物および末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ酵素を含む)で固定し、インキュベートする。免疫蛍光顕微鏡法をＨＢＯ １００水銀ランプ、緑色、赤色および青色蛍光を個々に選択するための狭帯域通過フィルター(Chroma Technology Corp., Brattleboro, VT)を備えたZeiss Axioplan顕微鏡(Carl Zeiss, Inc., Thornwood, NY)で行う。画像を冷却ＣＣＤ Hamamatsu Orcaカメラ(Hamamatsu Corp., Bridgewater, NJ)およびImage Pro Analysisソフトウェア(Media Cybernetics, Silver Spring, MD)を使用して捕捉する。フォトモンタージュを、Adobe Photoshopソフトウェア(Adobe Systems, Inc., San Jose, CA)を使用して製造する。１０箇所の無作為の０.１５９mm２視野の、Ｘ１００倍率でのＴＵＮＥＬ陽性細胞の数をアポトーシス定量として使用する。
【００４６】
ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１およびＥＧＦＲ、ｐＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＰＤＧＦＲβ周皮細胞(デスミン陽性細胞)、およびＴＵＮＥＬのための二重免疫蛍光染色。膵臓腫瘍の凍結切片をスライドにマウントし、固定する。ＣＤ３１のための免疫蛍光をＡｌｅｘａ５９４接合二次抗体を使用して行い、サンプルを上記の通り再び遮断溶液(ＰＢＳ中５％正常ウマ血清および１％正常ヤギ血清)で短く遮断し、ヒトＥＧＦＲ、ｐＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＰＤＧＦＲβまたはデスミンに対する抗体と４℃で一晩インキュベートする。洗浄および遮断溶液での遮断後、サンプルをＡｌｅｘａ４８８接合二次抗体とインキュベートする。内皮細胞を赤色蛍光で同定し、そしてＥＧＦ−Ｒ、ｐＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＰＤＧＦＲβおよびデスミン陽性細胞(周皮細胞)を緑色蛍光により同定する。内皮細胞上の増殖因子受容体およびリン酸化受容体の存在を、黄色に見える赤色および緑色蛍光の共局在化により検出する。
【００４７】
内皮細胞上の周皮細胞の被覆を、５箇所の無作為に選択した顕微鏡視野において、デスミン陽性細胞と直接接触するＣＤ３１陽性細胞およびデスミン陽性細胞と直接関係がないＣＤ３１陽性細胞の計数により決定する。
ＴＵＮＥＬ陽性アポトーシス細胞を細胞核内の局在化緑色蛍光により検出し、そして内皮細胞を赤色蛍光により同定する。アポトーシス内皮細胞を核内の黄色蛍光により同定する。アポトーシス内皮細胞の定量を、１０箇所の０.１５９mm２視野における、ｘ１００倍率での、内皮細胞の総数に対するアポトーシス内皮細胞の比率として示す。
【００４８】
統計学的分析。体重、腫瘍重量、ＰＣＮＡ陽性細胞、平均血管密度(ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１)、およびＴＵＮＥＬ陽性細胞を、マン・ホイットニーＵ検定を使用して比較する。生存分析をカプラン・マイヤー法により計算し、ログ・ランク検定により比較する。
【００４９】
結果
ヌードマウスの膵臓におけるヒト膵臓癌増殖の治療。実験の第一セットにおいて、ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの単独および種々の組み合わせでの処置の効果を、十分に確立された(５−６mm)膵臓腫瘍に対して決定する。マウスを最初の試験の４９日目に殺し、剖検する(表１)。膵臓における腫瘍発生率は、全処置群で１００％である。処置はいずれも体重に顕著に影響しない。コントロールマウスは最大の腫瘍を有する(０.７７ｇ)。ＳＴＩ５７１またはゲムシタビン単独での処置は腫瘍増殖を阻害しないが、ＡＥＥ７８８で処置したマウスは有意に小さい腫瘍を有する(０.３３ｇ：ｐ＜０.００１)。ＡＥＥ７８８とゲムシタビンまたはＡＥＥ７８８とＳＴＩ５７１の組み合わせ(ＳＴＩ５７１とゲムシタビンではない)は、膵臓における腫瘍重量を有意に減少させる(各々０.１９ｇ、ｐ＜０.０００１、０.３３ｇ；ｐ＜０.００１対コントロール、および０.７１ｇ)。治療のためのＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの組み合わせは、腫瘍増殖の最も有意な阻害をもたらす(０.１４ｇ、ｐ＜０.０００１対コントロール)。
【００５０】
【表１】
ａＰ＜０.００１対コントロール。
ｂＰ＜０.０００１対コントロール。
ｃＰ＜０.０５対ＡＥＥ７８８またはＡＥＥ７８８およびＳＴＩ５７１。
【００５１】
次の生存試験において、処置を１.０×１０６ Ｌ３.６ｐｌ細胞の膵臓内注射２１日後に開始する。膵臓腫瘍は、直径６−８mmの大きさである。処置をマウスが瀕死となるまで続け、その時点で殺す。生存をカプラン・マイヤー法を使用して分析する。ＳＴＩ５７１単独またはゲムシタビン単独以外の全処置は、コントロール処置群と比較して有意に生存を延長する。ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの組み合わせで処置したマウスは生存が最大に延長する。
【００５２】
Ｌ３.６ｐｌ膵臓腫瘍の免疫組織化学的分析。腫瘍切片を、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、およびｐＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、およびｐＶＥＧＦＲおよびＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦＲβおよびｐＰＤＧＦＲβの発現について免疫組織化学的に分析する。ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、ゲムシタビンでの処置、または組み合わせ処置のいずれも腫瘍細胞による、または間質細胞におけるＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲの発現レベルを変えない。ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲ(ＰＤＧＦＲではない)のリン酸化は、ＡＥＥ７８８単独またはＡＥＥ７８８を含む組み合わせ全てで処置したマウス由来の腫瘍において有意に減少する。対照的に、ＰＤＧＦＲβ(ＥＧＦＲまたはＶＥＧＦＲではない)のリン酸化はＳＴＩ５７１単独またはＳＴＩ５７１を含む組み合わせ治療で処置されたマウス由来の腫瘍で阻害される。これらのデータは、マウスに投与した濃度で、ＰＴＫ阻害剤はそれらの標的受容体の特異的阻害をもたらすことを確認する。ＡＥＥ７８８とＳＴＩ５７１およびＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１とゲムシタビンの組み合わせ治療は、全３受容体のリン酸化を阻害する。
【００５３】
腫瘍関連内皮細胞上のＥＧＦ−Ｒ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｐＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲおよびｐＰＤＧＦＲ。腫瘍関連内皮細胞がＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、またはｐＰＤＧＦＲβを発現するか否かを決定するために、免疫蛍光染色法を使用する。全処置群からの腫瘍関連内皮細胞は類似のレベルのＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲβを発現する。ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲのリン酸化は、ＡＥＥ７８８またはＡＥＥ７８８を含む組み合わせ処置で処置したマウスの腫瘍由来の内皮細胞で減少する。
【００５４】
ＰＤＧＦＲβのリン酸化は、ＳＴＩ５７１またはＳＴＩ５７１を含む組み合わせ処置で処置したマウスの腫瘍由来の内皮細胞で減少する。ＡＥＥ７８８およびＳＴＩ５７１またはＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの投与は、腫瘍関連内皮細胞上のＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲβのリン酸化を阻害する。
【００５５】
細胞増殖(ＰＣＮＡ)、アポトーシス(ＴＵＮＥＬ)、および平均血管密度(ＭＶＤ)。細胞増殖をＰＣＮＡの染色により評価する。コントロールマウスからの腫瘍において、ＰＣＮＡ陽性細胞の中央数は３７１±８８である。表２に示す通り、ゲムシタビン単独またはＳＴＩ５７１単独での処理は、分裂しているＰＣＮＡ陽性細胞の数を減らす。ＰＣＮＡ陽性細胞の有意な減少が、他の全ての処置群由来の腫瘍で見られ、ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンで処置されたマウス由来の腫瘍において最大に阻害される(１５５±５４、Ｐ＜０.００１)。
【００５６】
【表２】
ａＰＣＮＡ、増殖している細胞核抗原；ｂＴＵＮＥＬ、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ仲介ニック末端標識；ｃ中央±Ｓ.Ｄ.；ｄＰ＜０.０５対コントロール；ｅＰ＜０.０１対コントロール；ｆＰ＜０.００１対コントロール；ｇＰ＜０.００１対コントロール；ｈＰ＜０.０５対ＡＥＥ７８８；ｉＰ＜０.０１対ＡＥＥ７８８；ｊＰ＜０.０５対ＡＥＥ７８８＋ＳＴＩ５７１；ｋＰ＜０.０５対ＡＥＥ７８８。
【００５７】
膵臓腫瘍におけるアポトーシスの誘導をＴＵＮＥＬ法により評価する(表２)。コントロール処置マウス由来の腫瘍において、アポトーシス腫瘍細胞の中央数は最小である(１±１)。他の全処置群(ＳＴＩ５７１単独での処置群を除く)のマウス由来の腫瘍におけるアポトーシス細胞数は増加し、ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの組み合わせでの治療が最大である(３０±１０)。
【００５８】
腫瘍におけるＭＶＤを、ＣＤ３１に対する抗体でのＩＨＣ染色により決定する(表２)。コントロールマウスからのＣＤ３１陽性腫瘍細胞の中央数は４６±１１である。ゲムシタビン単独またはＳＴＩ５７１単独の処置はＭＶＤを減少させない。ＣＤ３１陽性細胞の数は、他の全処置群由来の腫瘍で有意に減少しており、ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンで処置されたマウス由来の腫瘍においてＭＶＤの減少は最大である(１６±６)(Ｐ＜０.００１)。
【００５９】
ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１およびＴＵＮＥＬについての免疫蛍光二重染色。ＣＤ３１／ＴＵＮＥＬ蛍光二重標識法の使用により、治療が内皮細胞のアポトーシスと関連するか否かを決定する。コントロールマウス由来の腫瘍は、腫瘍関連内皮細胞においてアポトーシスがない。ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンでのマウスの処置は、腫瘍関連内皮細胞において中央値８±５％アポトーシスをもたらす(表２)。
【００６０】
本試験のさらなる詳細が、Kenji Yokoi, Takamitsu Sasaki, Corazon D. Bucana, Dominic Fan, Cheryl H. Baker, Yasuhiko Kitadai, Toshio Kuwai, James L. Abbruzzese, およびIsaiah J. Fidler in Cancer Research, 2005 Nov 15;65(22):10371-80に記載されており、この刊行物を引用により本明細書に包含する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膵臓癌を有する温血動物の処置方法に関し、特にそれは
膵臓癌を有する温血動物に、上皮細胞増殖因子受容体(ＥＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性および血管内皮細胞増殖因子受容体(ＶＥＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性の二重阻害剤を投与することを含む方法、
(ａ)膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物にＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を含む組み合わせを投与することを含む、方法、
(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)血小板由来増殖因子受容体(ＰＤＧＦ−Ｒ)チロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される、少なくとも１種の化合物を含む組み合わせ；
膵臓癌を有する温血動物を処置する方法であって、該温血動物に該組み合わせを投与することを含む、方法；
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、このような組み合わせの使用；および
このような組み合わせを膵臓癌の処置のための指示書と共に含む、商業用包装物または製品
に関する。
【背景技術】
【０００２】
膵臓腺癌は最も攻撃的な悪性腫瘍の一つであり、ほとんどの患者が転移性疾患を発症する。ゲムシタビンが患者の生存を延長できるが、３％未満のみが最初の診断後５年生存し、中央生存期間は６ヶ月より短い。明らかに、膵臓癌の新規処置選択肢の開発の緊急の必要性がある。
【発明の開示】
【０００３】
驚くべきことに、本発明の最初の局面において、ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲの同時の阻害がヒト膵臓癌腫の増殖を阻害することが判明した。さらなる局面において、抗新生物代謝拮抗剤の投与と組み合わせたＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲおよび、所望により、ＰＤＧＦＲの同時の阻害が、ヒト膵臓癌腫の増殖を非常に強力に阻害し、そして、抗新生物代謝拮抗剤単独の投与と比較して、生存の延長の展望を示すことが判明した。
【０００４】
故に、本発明は膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤の使用、または代替的に(ａ)ＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を含む組み合わせの使用に関する。
【０００５】
さらに、本発明は、膵臓癌の処置における同時、別々または連続的使用のための(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的に(ａ)ＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される少なくとも１種の化合物(ここで、これらの活性成分はいずれの場合も遊離形でまたはそれらの薬学的に許容される塩もしくは何らかの水和物の形で存在する)、および所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組み合わせに関する。
【０００６】
他の局面において、本発明は膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物にＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤を膵臓癌に対する治療的有効量を投与することを含む方法(ここで、ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤はまた薬学的に許容される塩の形でも存在できる)、ならびに膵臓癌を有する温血動物を処置する方法であって、該温血動物に(ａ)ＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を膵臓癌に対する治療的有効量を含む組み合わせを投与することを含む方法(ここで、組み合わせの成分はまたそれらの薬学的に許容される塩の形でも存在できる)にも関する。
【０００７】
本発明に適当な“ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤”は、特にＷＯ０３／０１３５４１に記載されたものであり(この公報は引用により本明細書に包含させる)、式(Ｉ)
【化１】
〔式中、Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して水素、非置換または置換アルキルまたはシクロアルキル、環炭素原子を介して結合したヘテロ環式ラジカル、または式Ｒ４−Ｙ−(Ｃ＝Ｚ)−のラジカルであり、ここで、Ｒ４は非置換、モノまたはジ置換アミノまたはヘテロ環式ラジカルであり、Ｙは存在しないかまたは低級アルキルであり、そしてＺは酸素、硫黄またはイミノである。ただし、Ｒ１およびＲ２は両方同時に水素ではない；または
Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している窒素原子と一体となってヘテロ環式ラジカルを形成し；
Ｒ３はヘテロ環式ラジカルまたは非置換または置換芳香族性ラジカルであり；
ＧはＣ１−Ｃ７−アルキレン、−Ｃ(＝Ｏ)−、またはＣ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ(＝Ｏ)−であり、ここで、該カルボニル基がＮＲ１Ｒ２部分に結合しており；
Ｑは−ＮＨ−または−Ｏ−である。ただし、Ｇが−Ｃ(＝Ｏ)−またはＣ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ(＝Ｏ)−であるとき、Ｑは−Ｏ−であり；そして
Ｘは、存在しないかまたはＣ１−Ｃ７−アルキレンのいずれかである。ただし、Ｘが存在しないならば、ヘテロ環式ラジカルＲ３は環炭素原子を介して結合していない。〕
７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン誘導体ならびにこのような化合物の塩であり、
ここで、ラジカルおよび記号はＷＯ０３／０１３５４１に定義の意味を有する。
【０００８】
一つの態様において、本発明における使用のために特に好ましい二重ＥＧＦおよびＶＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤は{６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−[フェニル−エチル)−アミンまたはその薬学的に許容される塩である。
【０００９】
ここに記載のＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体は、ＵＳ５,５２１,１８４およびＵＳ２００４−０１０２４５３に開示のものである。Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンはＵＳ５,５２１,１８４に記載の通り製造でき、その公報は引用により本明細書に包含させる。Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンのモノメシル酸塩は、例えば、ＷＯ９９／０３８５４の実施例４および６に記載の通り、またはＷＯ０３／０９０７２０に記載の通り製造および製剤でき、これらの公報は引用により本明細書に包含させる。Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンのメシル酸塩(メシル酸イマチニブ、ＳＴＩ５７１)は商品名Glivec(登録商標)(Gleevec(登録商標))の下に市販されている。Glivec(登録商標)は慢性骨髄性白血病およびＧＩＳＴ(胃腸間質性腫瘍)の処置に適するチロシンキナーゼ阻害剤である。
【００１０】
用語“抗新生物代謝拮抗剤”は、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、メトトレキサートおよびエダトレキサートを含むが、これらに限定されない。カペシタビンは、例えば、XELODAＴＭの商品名の下、例えば市販の形で投与できる。ゲムシタビンは、例えば、GEMZARＴＭの商品名の下、例えば市販の形で投与できる。
【００１１】
ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物は、とりわけＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性を阻害する化合物、ＶＥＧＦ受容体に結合する化合物およびＶＥＧＦに結合する化合物であり、特にＷＯ９８／３５９５８、ＷＯ００／０９４９５、ＷＯ００／２７８２０、ＷＯ００／５９５０９、ＷＯ９８／１１２２３、ＷＯ００／２７８１９およびＥＰ０７６９９４７に一般的におよび具体的に開示の化合物、タンパク質およびモノクローナル抗体；M. Prewett et al in Cancer Research 59(1999)5209-5218、F. Yuan et al in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 14765-14770, Dec. 1996, by Z. Zhu et al in Cancer Res. 58, 1998, 3209-3214およびJ. Mordenti et al in Toxicologic Pathology, Vol. 27, no. 1, pp 14-21, 1999により記載のもの；ＷＯ００／３７５０２およびＷＯ９４／１０２０２に記載のもの；M. S. O'Reilly et al, Cell 79, 1994, 315-328により記載のアンジオスタチンＴＭ；およびにより記載のEndostatinＴＭであり；
【００１２】
ＥＧＦの活性を低下させる化合物は、とりわけＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性を阻害する化合物、ＥＧＦ受容体に結合する化合物およびＥＧＦに結合する化合物であり、特にＷＯ９７／０２２６６、ＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、ＵＳ５,７４７,４９８、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３および、とりわけ、ＷＯ９６／３３９８０に記載の化合物であり；
【００１３】
特許出願または科学文献に関する引用がされている各場合、特に化合物請求項および作業実施例の最終製品、最終生成物の対象。このような特許公報の医薬製剤および特許請求の範囲は、これらの公報の引用により本明細書に包含させる。同様にそれらに開示の対応する立体異性体ならびに対応する結晶変態、例えば溶媒和物および多型も包含する。ここに開示の組み合わせにおいて活性成分として使用する化合物は、各々引用した文献に記載の通り製造し、投与できる。
【００１４】
一つの態様において、本発明において使用するための好ましいＶＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤はAvastinＴＭ(ベバシズマブ)である。さらなる態様において、本発明において使用するための好ましいＶＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤は１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンスクシネートである。一つの態様において、本発明において使用するための好ましいＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤はIressaＴＭ(ゲフィチニブ)である。さらなる態様において、本発明において使用するための好ましいＥＧＦタンパク質チロシンキナーゼ阻害剤はErbituxＴＭ(セツキシマブ)である。
【００１５】
コード番号、一般名または商品名により同定した活性成分の構造は、標準概論“The Merck Index”の現行版からまたはデータベース、例えばPatents International(例えばIMS World Publications)から取り得る。それらの対応する内容は引用により本明細書に包含させる。
【００１６】
組み合わせパートナーに関する記載はまた薬学的に許容される塩も含むことは理解されよう。組み合わせパートナーが、例えば、少なくとも１種の塩基性中心を有するとき、それらは酸付加塩を形成できる。対応する酸付加塩もまた、さらに存在する塩基性中心を有して形成できる。酸基(例えばＣＯＯＨ)を有する組み合わせパートナー(ａ)、(ｂ)、(ｃ)または(ｄ)はまた塩基と塩を形成できる。Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミン、すなわち組み合わせパートナー(ａ)は、好ましくは本発明においてそのモノメシル酸塩の形(ＳＴＩ５７１)で使用する。
【００１７】
本発明の組み合わせは、組み合わせ製剤または医薬組成物の形で使用できる。
【００１８】
ここで使用する用語“組み合わせ製剤”は、とりわけ上記で定義の組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)を独立して、または組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の異なった量で異なって固定された組み合わせの使用により、すなわち、同時にまたは異なる時点で投与できる点で、“複数パーツのキット”と定義する。次いで、複数パーツのキットのパーツを、例えば、同時にまたはずれた時間で、すなわち、異なる時点で、複数パーツのキットの何らかのパーツと等しいまたは異なる間隔で投与できる。非常に好ましくは、時間間隔は、組み合わせ使用で処置している疾患に対する効果が、組み合わせパートナーのいずれか一方のみにより得られる効果より大きいように選択する。組み合わせ製剤において投与する組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の総量のお互いの比率は、特定の疾患、患者の年齢、性別、体重などにより異なる必要性が起こり得る、例えば処置すべき患者亜集団の要求に合うため、または単独の患者の要求に合うために変換し得る。好ましくは、少なくとも１種の有益な効果、例えば、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の相互の増強、特に相乗作用、例えば相加効果以上、さらなる有利な効果、少ない副作用、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の一方または両方の非有効量での組み合わせ治療効果、および非常に好ましくは組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)の強い相乗効果が存在する。
【００１９】
用語“処置”は、処置を必要とする患者における、固形腫瘍疾患の進行遅延をもたらす処置を含む。ここで使用する用語“進行遅延”は、処置すべき疾患の前段階または初期相にある患者への組み合わせの投与を意味し、ここで、該患者は、例えば、対応する疾患の前形態であることが診断されているか、または、該患者は、例えば医学的処置または事故に起因する状態にあって対応する疾患を発症しそうな状態にある。
【００２０】
同時、別々または連続的使用のための(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される少なくとも１種の化合物(ここで、これらの活性成分はいずれの場合も遊離形でまたはそれらの薬学的に許容される塩もしくは何らかの水和物の形で存在する)、および所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組み合わせを、以後本発明の組み合わせと呼ぶ。
【００２１】
確立された試験モデルおよび特にここに記載の試験モデルにおいて、本発明の組み合わせが膵臓癌腫の処置に適することを示すことができる。関連分野の当業者は、前記および後記の治療適用および有益な効果を確認するための適切な試験モデルを選択することが十分に可能である。本発明の組み合わせの薬理学的活性は、例えば、実質的に以下に記載の臨床試験または試験法により証明できる。実施例に記載の試験において、ヒト膵臓癌細胞であるＬ３.６ｐｌをヌードマウスの膵臓に移植する。このモデルの腫瘍関連内皮細胞は、リン酸化ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲを高度に発現する。ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲの二重チロシンキナーゼ阻害剤である{６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−[フェニル−エチル)−アミンの経口投与は、ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲのリン酸化を低下させる。ＰＤＧＦＲリン酸化はＳＴＩ５７１により阻害される。ゲムシタビンの腹腔内(ｉ.ｐ.)注射は腫瘍増殖を阻害しないが、その{６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−[フェニル−エチル)−アミンおよびＳＴＩ５７１との組み合わせは腫瘍増殖の＞８０％阻害をもたらし、腫瘍細胞および腫瘍関連内皮細胞アポトーシスの数の増加、減少した微小血管密度、低下した増殖速度、および延長した生存と平行して生存を延長する。ＳＴＩ５７１処置はまた腫瘍関連内皮細胞上の周皮細胞被覆も低下させる。故に、ゲムシタビンと組み合わせたＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲのリン酸化の阻害は、ゲムシタビンの効果を増強し、実験的ヒト膵臓癌増殖の阻止しおよび生存の著しい延長をもたらす。
【００２２】
ヒト患者での適当な試験は、例えば、膵臓癌患者でのオープンラベル非無作為化、用量漸増試験である。このような試験は、特に抗新生物代謝拮抗剤単独での処置を超える本発明の組み合わせの優位性ならびに本発明の組み合わせの治療的効果を証明する。膵臓癌に対する有益な効果は、これらの試験の結果を介して直接、またはそれ自体当業者に既知の試験設計の変化により決定できる。
【００２３】
本発明の組み合わせはまた外科的介入、穏やかな長時間全身高熱療法および／または照射療法と組み合わせても適用できる。
【００２４】
併用で固形腫瘍疾患に対して治療的有効量で本発明の組み合わせを含む、医薬組成物を提供することは本発明の目的の一つである。この組成物において、組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)を一緒に、交互にまたは別々に、一つの組み合わせ単位投与形態でまたは別々の単位投与形態で投与できる。単位投与形態はまた固定された組み合わせでもよい。
【００２５】
本発明に従った組み合わせパートナー(ａ)および(ｂ)を別々に投与するための医薬組成物、および固定された組み合わせで投与するための医薬組成物、すなわち少なくとも２個の組み合わせパートナーを含む一つのガレヌス(galenical)組成物は、それ自体既知の方法で製造でき、治療的有効量の少なくとも１種の薬理学的に活性な組み合わせパートナーを単独でまたは、とりわけ経腸または非経腸投与に適する薬学的に許容される担体を含む、ヒトを含む哺乳動物(温血動物)への経口または直腸のような経腸および非経腸投与に適する組成物である。
【００２６】
新規医薬組成物は、例えば、約１０％から約１００％、好ましくは約２０％から約６０％の活性成分を含む。経腸または非経腸投与用の組み合わせ治療用の医薬製剤は、例えば、糖衣錠、錠剤、カプセル剤または坐薬、およびさらにアンプルのような単位投与形態のものである。他に指示がない限り、これらはそれ自体当業者に既知の方法で、例えば慣用の混合、造粒、糖コーティング、溶解または凍結乾燥工程の手段により製造する。各投与形態の個々の製剤に含まれる組み合わせパートナーの単位含量は、必要な用量が複数の投与単位の投与により達成できるため、それ自体有効量を構成する必要はない。
【００２７】
特に、治療的有効量の本発明の組み合わせの組み合わせパートナーの各々を、同時にまたは任意の順番で連続して投与でき、そしてこれらの成分を別々にまたは固定された組み合わせで投与できる。例えば、本発明の膵臓癌の処置方法は、併用で治療的有効量の、好ましくは相乗的有効量の、例えばここに記載の量に対応する１日量での、(ｉ)遊離または薬学的に許容される塩形態の組み合わせパートナー(ａ)の投与および(ii)遊離または薬学的に許容される塩形態の組み合わせパートナー(ｂ)の当時のまたは任意の順番で連続的な投与を含み得る。本発明の組み合わせの個々の組み合わせパートナーは、治療経過中の異なる時点で別々に、または分割されたまたは単一の組み合わせ形態で同時に投与してよい。さらに、用語投与は、インビボで組み合わせパートナーそれ自体に変換する組み合わせパートナーのプロドラッグの使用も含む。本発明は、故に、同時もしくは交互の処置の全てのこのようなレジメンを包含すると理解すべきであり、そして用語“投与する”はそれに応じて解釈すべきである。
【００２８】
本発明の組み合わせで用いる組み合わせパートナーの各々の有効量は、用いる特定の化合物または医薬組成物、投与形態、処置すべき状態、処置する状態の重症度に依存して変化し得る。故に、本発明の組み合わせの投与レジメンは、投与経路ならびに患者の腎臓および肝臓機能を含む種々の因子に従い選択する。通常の技術の医師、臨床医または獣医師は、本状態の予防、回復または進行の停止に必要な単独の活性成分の有効量を容易に決定し、処方できる。毒性を伴わない効果を発現する活性成分濃度の範囲を達成するための最適な詳細は、標的部位の活性成分の利用能の動態に基づく投与計画を必要とする。本発明の組み合わせにおいて使用する組み合わせパートナーを単一薬剤として市販されている形で適用するとき、それらの投与量および投与形態は、特記しない限り、ここに記載の有益な効果を得るために、各市販薬剤の添付文書に提供されている情報に従い得る。
【００２９】
Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンモノメシレートは、好ましくはヒトに、約２５から１０００mg／日、より好ましくは５０から８００mg／日および最も好ましくは１００から４００mg／日の範囲の投与量で投与する。ここで他に記載されていない限り、本化合物は、好ましくは１日１回から４回投与する。
【００３０】
５−フルオロウラシルは、ヒトに、約５０から１０００mg／ｍ２日で変化する投与範囲、例えば５００mg／ｍ２日で投与できる。
カペシタビンは、ヒトに、約１０から１０００mg／ｍ２日で変化する投与範囲で投与できる。
【００３１】
塩酸ゲムシタビンは、ヒトに約１０００mg／週を中心とする投与量範囲で投与できる。
メトトレキサートは、ヒトに約５から５００mg／ｍ２日で変化する投与範囲で投与できる。
【００３２】
ＷＯ９８／３５９５８の実施例６２に記載のコハク酸塩は、ヒトに、約５０から１５００、より好ましくは約１００から７５０、および最も好ましくは２５０から５００mg／日で変化する投与範囲で投与できる。
【００３３】
さらに、本発明は、膵臓癌の処置のための、および膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、本発明の組み合わせの使用に関する。
【００３４】
さらに、本発明は、活性成分として本発明の組み合わせを、膵臓癌の処置に置けるそれらの同時、別々または連続的使用のための指示書と共に含む商業用包装物を提供する。
【実施例】
【００３５】
以下の実施例は、上記の本発明を説明するが、如何なる方法でも本発明の範囲を限定することを意図しない。関連分野の当業者にそれ自体既知の他の試験モデルもまた本発明の組み合わせの有益な効果を決定できる。
【００３６】
膵臓癌細胞株および培養条件。ヒト膵臓癌細胞株Ｌ３.６ｐｌを、Hwang et al. in Clin Cancer Res 2003;9:6534-44に以前に記載の通り、１０％ウシ胎児血清(ＦＢＳ)、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、Ｌ−グルタミン、２倍ビタミン溶液(Life Technologies, Inc., Grand Island, NY)、およびペニシリン−ストレプトマイシン混合物(Flow Laboratories, Rockville, MD)を補った最小必須培地に維持する。
【００３７】
試薬。経口投与のために、{６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−[フェニル−エチル)−アミンをＤＭＳＯで希釈し、そしてＳＴＩ５７１を滅菌水で希釈する。ゲムシタビン(Gemzar, Eli Lilly Co, Indianapolis, IN)を室温に維持し、使用する日にリン酸緩衝化食塩水(ＰＢＳ)に溶解する。それをｉ.ｐ.注射により投与する。
【００３８】
一次抗体を以下の製造業者から購入する：ウサギ抗ｐＶＥＧＦＲ２／３(Ｆｌｋ−１)(Oncogene, Boston, MA)；ウサギ抗ヒト、マウス、ラットＶＥＧＦ−Ｒ(Ｆｌｋ−１)(Ｃ１１５８)(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)；ウサギ抗ヒトｐＥＧＦＲ(Ｔｙｒ１１７３)(Biosource, Camarillo, CA)；パラフィンサンプルのためのウサギ抗ヒトＥＧＦおよびウサギ抗ヒトＥＧＦＲ(Santa Cruz Biotechnology)；凍結サンプルのためのウサギ抗ヒトＥＧＦＲ(Zymed, San Francisco, CA)；ウサギ抗ＶＥＧＦ(Ａ２０)(Santa Cruz Biotechnology)；ポリクローナルウサギ抗ＰＤＧＦＲ−β、ポリクローナルヤギ抗リン酸化ＰＤＧＦＲ−β、およびポリクローナルウサギ抗ＰＤＧＦ−β(全てSanta Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CAから得た)；ラット抗マウスＣＤ３１(BD PharMingen, San Diego, CA)；マウス抗増殖細胞核抗原(ＰＣＮＡ)クローンＰＣ１０(Dako A/S, Copenhagen, Denmark)；およびウサギ抗デスミン(Dako A/S)(周皮細胞マーカーとして)。以下の二次抗体を比色免疫組織化学のために使用する：ペルオキシダーゼ接合ヤギ抗ウサギＩｇＧ；Ｆ(ａｂ')２(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA)；ビオチニル化ヤギ抗ウサギ(Biocare Medical, Walnut Creek, CA)；ストレプトアビジンホースラディッシュペルオキシダーゼ(Dako A/S)；ラット抗マウスＩｇＧ２ａホースラディッシュペルオキシダーゼ(Serotec, Harlan Bioproducts for Science, Inc., Indianapolis, IN)；およびヤギ抗ｒａｔホースラディッシュペルオキシダーゼ(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.)。以下の蛍光二次抗体を使用する：Ａｌｅｘａ４８８接合ヤギ抗ウサギＩｇＧ(Ｍolecular Probes Inc., Eugene, OR)およびＡｌｅｘａ ５９４接合ヤギ抗ラットＩｇＧ(Molecular Probes Inc.)。末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ仲介ニック末端標識(ＴＵＮＥＬ)染色を市販のアポトーシス検出キット(Promeg, Madison, WI)を改変して使用して行う。
【００３９】
動物および腫瘍細胞の同所移植。雄無胸腺ヌードマウス(ＮＣＩ−ｎｕ)をAnimal Production Area of the National Cancer Institute Frederick Cancer Research and Development Center(Frederick, MD)から購入する。マウスを特異的無病原体条件下に飼育し、維持する。マウスを、８から１２週齢のときに使用する。膵臓腫瘍を産生するために、Ｌ３.６ｐｌ細胞を、０.２５％トリプシンおよび０.０２％ＥＤＴＡへの短い暴露によりサブコンプルエントな培養から回収する。トリプシン処理を、１０％ＦＢＳ含有培地で停止させ、細胞を１回無血清培地で洗浄し、ハンクス平衡塩溶液(ＨＢＳＳ)に再懸濁する。９０％製造能を超える単独細胞からなる懸濁液のみを先に記載の通り(Hwang et al. in Clin Cancer Res 2003;9:6534-44)、ヌードマウスの膵臓への注射に使用する。
【００４０】
無胸腺ヌードマウス膵臓で増殖する確立されたヒト膵臓癌腫瘍の処置。５０μl ＨＢＳＳ中の０.５×１０６生存Ｌ３.６ｐｌ細胞の膵臓内注射２１日間、膵臓腫瘍は５−６mmのサイズに達する。その時点で、マウスを以下の８処置に無作為化する(ｎ＝１０)：(１)コントロールマウス：１週間に３回ＤＭＳＯ−０.５％Ｔｗｅｅｎ ８０(希釈剤)で１：２０希釈された水の強制喫食による経口投与、滅菌水の毎日の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ＰＢＳのｉ.ｐ.注射；(２)１週間に３回希釈剤の強制喫食による経口投与、滅菌水の毎日の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ゲムシタビン(５０mg／kg)のｉ.ｐ.注射；(３)１週間に３回ＡＥＥ７８８(５０mg／kg)の強制喫食による経口投与、滅菌水の毎日の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ＰＢＳのｉ.ｐ.注射；(４)１週間に３回ＡＥＥ７８８(５０mg／kg)の強制喫食による経口投与、滅菌水の毎日の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ゲムシタビン(５０mg／kg)のｉ.ｐ.注射；(５)ＳＴＩ５７１(５０mg／kg)の毎日の強制喫食による経口投与、１週間に３回ＡＥＥ７８８の希釈剤の強制喫食による経口投与および１週間に２回ＰＢＳのｉ.ｐ.注射；(６)毎日のＳＴＩ５７１(５０mg／kg)の経口投与、１週間に３回ＡＥＥ７８８の希釈剤の強制喫食による経口投与、および１週間に２回ゲムシタビン(５０mg／kg)のｉ.ｐ.注射；(７)１週間に３回経口ＡＥＥ７８８(５０mg／kg)、毎日のＳＴＩ５７１(５０mg／kg)、および１週間に２回ＰＢＳのｉ.ｐ.注射の組み合わせ；および(８)１週間に３回経口ＡＥＥ７８８(５０mg／kg)、１週間に７回ＳＴＩ５７１(５０mg／kg)、および１週間に２回ゲムシタビン(５０mg／kg)のｉ.ｐ.注射の組み合わせ。全マウスを４週間処置し、実験４９日目に殺す。
【００４１】
生存試験のために、５０μl ＨＢＳＳ中１.０×１０６腫瘍細胞の膵臓内注射２１日後(その時点で膵臓内の腫瘍は６から８mm直径を超える)、マウスを上記の８処置群の一つに無作為化する(ｎ＝１０)。マウスを、瀕死になったとき、殺し、検死する。生存をカプラン・マイヤー法で評価する。
【００４２】
剖検および組織学的試験。最初の処置試験において、マウスを腫瘍細胞注射４９日後に殺し、秤量し、および検死する。膵臓内で増殖した腫瘍を、摘出し、秤量する。免疫組織化学的染色法のために、腫瘍組織の一部をホルマリンで固定し、パラフィン包埋し、他をＯＣＴ化合物(Miles, Inc., Elkhart, IN)に包埋し、液体窒素で急速に凍結させ、−７０℃で貯蔵する。
【００４３】
膵臓腫瘍中のＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、ｐＰＤＧＦ−Ｒを検出するための免疫組織化学的(ＩＨＣ)分析。全処置群からのマウスのパラフィン包埋膵臓腫瘍を、ＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、リン酸化(ｐ)ＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、およびｐＰＤＧＦＲβの発現の評価のために免疫染色する。切片をキシレンで脱パラフィン処理し、アルコールで脱水し、ＰＢＳで再水和する。内因性ペルオキシダーゼを３％過酸化水素のＰＢＳ溶液で遮断する。サンプルをタンパク質ブロック(ＰＢＳ中５％正常ウマ血清、１％正常ヤギ血清)に曝し、一晩、４℃で適当な希釈の各一次抗体とインキュベートする。ペルオキシダーゼ接合二次抗体と１時間、室温でインキュベーション後、陽性反応を安定な３,３'−ジアミノベンジジン(ＤＡＢ)(Phoenix Biotechnologies, Huntsville, AL)に曝すことにより検出する。スライドをGill's ＃３ヘマトキシリンで対比染色する。切片を免疫ペルオキシダーゼまたはヘマトキシリンについて染色し、エオシンを３チップ電荷結合素子(ＣＣＤ)カラービデオカメラを備えた顕微鏡で試験する。デジタル画像をOptimas Image Analysis software(Media Cybernetics, MD)を使用して捕捉する。
【００４４】
増殖細胞核抗原(ＰＣＮＡ)、ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１(内皮細胞)およびＴＵＮＥＬ(アポトーシス)のＩＨＣ決定。パラフィン包埋組を増殖細胞核抗原(ＰＣＮＡ)のＩＨＣ同定に使用する。ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１の同定に使用した凍結組織を切片にし(８−１０μm)、正に荷電したスライドに載せ、および３０分空気乾燥する。凍結切片を冷アセトン(５分)、アセトン／クロロホルム(ｖ／ｖ；５分)、および再びアセトン(５分)に固定し、ＰＢＳで洗浄する。ＩＨＣ法を先に記載の通り行う(Hwang et al. in Clin Cancer Res 2003;9:6534-44)。二次抗体のみに曝したコントロールサンプルは特異的染色がないことを示す。ＣＤ３１について染色した切片中の平均血管密度(ＭＶＤ)の定量のために、１０箇所の無作為の０.１５９mm２視野を、Ｘ１００倍率で各腫瘍について捕捉し、微小血管を定量する。ＰＣＮＡ発現の定量のために、正の細胞数を１０箇所の無作為の０.１５９mm２視野で、Ｘ１００倍率で計数する。
【００４５】
アポトーシス細胞の分析を、商業的に入手可能なＴＵＮＥＬキット(Promega)を以下の改変を加えて使用することにより行う：サンプルを平衡緩衝液、続いて反応緩衝液(ヌクレオチド混合物および末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ酵素を含む)で固定し、インキュベートする。免疫蛍光顕微鏡法をＨＢＯ １００水銀ランプ、緑色、赤色および青色蛍光を個々に選択するための狭帯域通過フィルター(Chroma Technology Corp., Brattleboro, VT)を備えたZeiss Axioplan顕微鏡(Carl Zeiss, Inc., Thornwood, NY)で行う。画像を冷却ＣＣＤ Hamamatsu Orcaカメラ(Hamamatsu Corp., Bridgewater, NJ)およびImage Pro Analysisソフトウェア(Media Cybernetics, Silver Spring, MD)を使用して捕捉する。フォトモンタージュを、Adobe Photoshopソフトウェア(Adobe Systems, Inc., San Jose, CA)を使用して製造する。１０箇所の無作為の０.１５９mm２視野の、Ｘ１００倍率でのＴＵＮＥＬ陽性細胞の数をアポトーシス定量として使用する。
【００４６】
ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１およびＥＧＦＲ、ｐＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＰＤＧＦＲβ周皮細胞(デスミン陽性細胞)、およびＴＵＮＥＬのための二重免疫蛍光染色。膵臓腫瘍の凍結切片をスライドにマウントし、固定する。ＣＤ３１のための免疫蛍光をＡｌｅｘａ５９４接合二次抗体を使用して行い、サンプルを上記の通り再び遮断溶液(ＰＢＳ中５％正常ウマ血清および１％正常ヤギ血清)で短く遮断し、ヒトＥＧＦＲ、ｐＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＰＤＧＦＲβまたはデスミンに対する抗体と４℃で一晩インキュベートする。洗浄および遮断溶液での遮断後、サンプルをＡｌｅｘａ４８８接合二次抗体とインキュベートする。内皮細胞を赤色蛍光で同定し、そしてＥＧＦ−Ｒ、ｐＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＰＤＧＦＲβおよびデスミン陽性細胞(周皮細胞)を緑色蛍光により同定する。内皮細胞上の増殖因子受容体およびリン酸化受容体の存在を、黄色に見える赤色および緑色蛍光の共局在化により検出する。
【００４７】
内皮細胞上の周皮細胞の被覆を、５箇所の無作為に選択した顕微鏡視野において、デスミン陽性細胞と直接接触するＣＤ３１陽性細胞およびデスミン陽性細胞と直接関係がないＣＤ３１陽性細胞の計数により決定する。
ＴＵＮＥＬ陽性アポトーシス細胞を細胞核内の局在化緑色蛍光により検出し、そして内皮細胞を赤色蛍光により同定する。アポトーシス内皮細胞を核内の黄色蛍光により同定する。アポトーシス内皮細胞の定量を、１０箇所の０.１５９mm２視野における、ｘ１００倍率での、内皮細胞の総数に対するアポトーシス内皮細胞の比率として示す。
【００４８】
統計学的分析。体重、腫瘍重量、ＰＣＮＡ陽性細胞、平均血管密度(ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１)、およびＴＵＮＥＬ陽性細胞を、マン・ホイットニーＵ検定を使用して比較する。生存分析をカプラン・マイヤー法により計算し、ログ・ランク検定により比較する。
【００４９】
結果
ヌードマウスの膵臓におけるヒト膵臓癌増殖の治療。実験の第一セットにおいて、ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの単独および種々の組み合わせでの処置の効果を、十分に確立された(５−６mm)膵臓腫瘍に対して決定する。マウスを最初の試験の４９日目に殺し、剖検する(表１)。膵臓における腫瘍発生率は、全処置群で１００％である。処置はいずれも体重に顕著に影響しない。コントロールマウスは最大の腫瘍を有する(０.７７ｇ)。ＳＴＩ５７１またはゲムシタビン単独での処置は腫瘍増殖を阻害しないが、ＡＥＥ７８８で処置したマウスは有意に小さい腫瘍を有する(０.３３ｇ：ｐ＜０.００１)。ＡＥＥ７８８とゲムシタビンまたはＡＥＥ７８８とＳＴＩ５７１の組み合わせ(ＳＴＩ５７１とゲムシタビンではない)は、膵臓における腫瘍重量を有意に減少させる(各々０.１９ｇ、ｐ＜０.０００１、０.３３ｇ；ｐ＜０.００１対コントロール、および０.７１ｇ)。治療のためのＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの組み合わせは、腫瘍増殖の最も有意な阻害をもたらす(０.１４ｇ、ｐ＜０.０００１対コントロール)。
【００５０】
【表１】
ａＰ＜０.００１対コントロール。
ｂＰ＜０.０００１対コントロール。
ｃＰ＜０.０５対ＡＥＥ７８８またはＡＥＥ７８８およびＳＴＩ５７１。
【００５１】
次の生存試験において、処置を１.０×１０６ Ｌ３.６ｐｌ細胞の膵臓内注射２１日後に開始する。膵臓腫瘍は、直径６−８mmの大きさである。処置をマウスが瀕死となるまで続け、その時点で殺す。生存をカプラン・マイヤー法を使用して分析する。ＳＴＩ５７１単独またはゲムシタビン単独以外の全処置は、コントロール処置群と比較して有意に生存を延長する。ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの組み合わせで処置したマウスは生存が最大に延長する。
【００５２】
Ｌ３.６ｐｌ膵臓腫瘍の免疫組織化学的分析。腫瘍切片を、ＥＧＦ、ＥＧＦＲ、およびｐＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、およびｐＶＥＧＦＲおよびＰＤＧＦ−ＢＢ、ＰＤＧＦＲβおよびｐＰＤＧＦＲβの発現について免疫組織化学的に分析する。ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、ゲムシタビンでの処置、または組み合わせ処置のいずれも腫瘍細胞による、または間質細胞におけるＥＧＦ、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ−ＢＢ、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲの発現レベルを変えない。ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲ(ＰＤＧＦＲではない)のリン酸化は、ＡＥＥ７８８単独またはＡＥＥ７８８を含む組み合わせ全てで処置したマウス由来の腫瘍において有意に減少する。対照的に、ＰＤＧＦＲβ(ＥＧＦＲまたはＶＥＧＦＲではない)のリン酸化はＳＴＩ５７１単独またはＳＴＩ５７１を含む組み合わせ治療で処置されたマウス由来の腫瘍で阻害される。これらのデータは、マウスに投与した濃度で、ＰＴＫ阻害剤はそれらの標的受容体の特異的阻害をもたらすことを確認する。ＡＥＥ７８８とＳＴＩ５７１およびＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１とゲムシタビンの組み合わせ治療は、全３受容体のリン酸化を阻害する。
【００５３】
腫瘍関連内皮細胞上のＥＧＦ−Ｒ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ｐＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲおよびｐＰＤＧＦＲ。腫瘍関連内皮細胞がＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲβ、ｐＥＧＦＲ、ｐＶＥＧＦＲ、またはｐＰＤＧＦＲβを発現するか否かを決定するために、免疫蛍光染色法を使用する。全処置群からの腫瘍関連内皮細胞は類似のレベルのＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲβを発現する。ＥＧＦＲおよびＶＥＧＦＲのリン酸化は、ＡＥＥ７８８またはＡＥＥ７８８を含む組み合わせ処置で処置したマウスの腫瘍由来の内皮細胞で減少する。
【００５４】
ＰＤＧＦＲβのリン酸化は、ＳＴＩ５７１またはＳＴＩ５７１を含む組み合わせ処置で処置したマウスの腫瘍由来の内皮細胞で減少する。ＡＥＥ７８８およびＳＴＩ５７１またはＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの投与は、腫瘍関連内皮細胞上のＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、およびＰＤＧＦＲβのリン酸化を阻害する。
【００５５】
細胞増殖(ＰＣＮＡ)、アポトーシス(ＴＵＮＥＬ)、および平均血管密度(ＭＶＤ)。細胞増殖をＰＣＮＡの染色により評価する。コントロールマウスからの腫瘍において、ＰＣＮＡ陽性細胞の中央数は３７１±８８である。表２に示す通り、ゲムシタビン単独またはＳＴＩ５７１単独での処理は、分裂しているＰＣＮＡ陽性細胞の数を減らす。ＰＣＮＡ陽性細胞の有意な減少が、他の全ての処置群由来の腫瘍で見られ、ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンで処置されたマウス由来の腫瘍において最大に阻害される(１５５±５４、Ｐ＜０.００１)。
【００５６】
【表２】
ａＰＣＮＡ、増殖している細胞核抗原；ｂＴＵＮＥＬ、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ仲介ニック末端標識；ｃ中央±Ｓ.Ｄ.；ｄＰ＜０.０５対コントロール；ｅＰ＜０.０１対コントロール；ｆＰ＜０.００１対コントロール；ｇＰ＜０.００１対コントロール；ｈＰ＜０.０５対ＡＥＥ７８８；ｉＰ＜０.０１対ＡＥＥ７８８；ｊＰ＜０.０５対ＡＥＥ７８８＋ＳＴＩ５７１；ｋＰ＜０.０５対ＡＥＥ７８８。
【００５７】
膵臓腫瘍におけるアポトーシスの誘導をＴＵＮＥＬ法により評価する(表２)。コントロール処置マウス由来の腫瘍において、アポトーシス腫瘍細胞の中央数は最小である(１±１)。他の全処置群(ＳＴＩ５７１単独での処置群を除く)のマウス由来の腫瘍におけるアポトーシス細胞数は増加し、ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンの組み合わせでの治療が最大である(３０±１０)。
【００５８】
腫瘍におけるＭＶＤを、ＣＤ３１に対する抗体でのＩＨＣ染色により決定する(表２)。コントロールマウスからのＣＤ３１陽性腫瘍細胞の中央数は４６±１１である。ゲムシタビン単独またはＳＴＩ５７１単独の処置はＭＶＤを減少させない。ＣＤ３１陽性細胞の数は、他の全処置群由来の腫瘍で有意に減少しており、ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンで処置されたマウス由来の腫瘍においてＭＶＤの減少は最大である(１６±６)(Ｐ＜０.００１)。
【００５９】
ＣＤ３１／ＰＥＣＡＭ−１およびＴＵＮＥＬについての免疫蛍光二重染色。ＣＤ３１／ＴＵＮＥＬ蛍光二重標識法の使用により、治療が内皮細胞のアポトーシスと関連するか否かを決定する。コントロールマウス由来の腫瘍は、腫瘍関連内皮細胞においてアポトーシスがない。ＡＥＥ７８８、ＳＴＩ５７１、およびゲムシタビンでのマウスの処置は、腫瘍関連内皮細胞において中央値８±５％アポトーシスをもたらす(表２)。
【００６０】
本試験のさらなる詳細が、Kenji Yokoi, Takamitsu Sasaki, Corazon D. Bucana, Dominic Fan, Cheryl H. Baker, Yasuhiko Kitadai, Toshio Kuwai, James L. Abbruzzese, およびIsaiah J. Fidler in Cancer Research, 2005 Nov 15;65(22):10371-80に記載されており、この刊行物を引用により本明細書に包含する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤の使用。
【請求項２】
膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物にＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤を膵臓癌に対する治療的有効量で投与することを含む方法(ここで、ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤は薬学的に許容される塩の形でも存在できるものとする)。
【請求項３】
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、(ａ)ＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を含む組み合わせの使用。
【請求項４】
化合物(ｂ)がベバシズマブおよび１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンスクシネートから選択される、請求項３記載の使用。
【請求項５】
化合物(ａ)がゲフィチニブおよびセツキシマブから選択される、請求項３または４記載の使用。
【請求項６】
膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物に(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の阻害剤および(ｂ)ＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の阻害剤を含む組み合わせを膵臓癌に対する治療的有効量で投与することを含む方法(ここで、組み合わせの成分はそれらの薬学的に許容される塩の形でも存在できるものとする)。
【請求項７】
同時、別々または連続的使用のための(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物ならびに(ｂ)ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される少なくとも１種の化合物(ここで、これらの活性成分はいずれの場合も遊離形でまたはそれらの薬学的に許容される塩もしくは何らかの水和物の形で存在するものとする)、および所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組み合わせ。
【請求項８】
化合物(ｂ)がベバシズマブおよび１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンスクシネートから選択される、請求項７記載の組み合わせ。
【請求項９】
化合物(ａ)がゲフィチニブおよびセツキシマブから選択される、請求項７または８記載の組み合わせ。
【請求項１０】
式Ｉ
【化１】
〔式中、
Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して水素、非置換または置換アルキルまたはシクロアルキル、環炭素原子を介して結合したヘテロ環式ラジカル、または式Ｒ４−Ｙ−(Ｃ＝Ｚ)−のラジカルであって、ここで、Ｒ４は非置換、モノまたはジ置換アミノまたはヘテロ環式ラジカルであり、Ｙは存在しないかまたは低級アルキルであり、そしてＺは酸素、硫黄またはイミノである。ただし、Ｒ１およびＲ２は両方同時に水素ではない；または
Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している窒素原子と一体となってヘテロ環式ラジカルを形成し；
Ｒ３はヘテロ環式ラジカルまたは非置換または置換芳香族性ラジカルであり；
ＧはＣ１−Ｃ７−アルキレン、−Ｃ(＝Ｏ)−、またはＣ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ(＝Ｏ)−であり、ここで、該カルボニル基がＮＲ１Ｒ２部分に結合しており；
Ｑは−ＮＨ−または−Ｏ−である。ただし、Ｇが−Ｃ(＝Ｏ)−またはＣ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ(＝Ｏ)−であるとき、Ｑは−Ｏ−であり；そして
Ｘは、存在しないかまたはＣ１−Ｃ７−アルキレンのいずれかである。ただし、Ｘが存在しないならば、ヘテロ環式ラジカルＲ３は環炭素原子を介して結合していない。〕
の７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン誘導体または該化合物の塩である化合物(ａ)ならびにＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、メトトレキサートおよびエダトレキサートから選択される少なくとも１種の化合物である(ｂ)を含む、請求項７記載の組み合わせ。
【請求項１１】
(ａ){６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−フェニル−エチル)−アミンならびに(ｂ)Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンおよびゲムシタビンから選択される少なくとも１種の化合物を含む、請求項７記載の組み合わせ。
【請求項１２】
Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンをそのモノメタンスルホン酸塩の形で使用する、請求項１１記載の組み合わせ。
【請求項１３】
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、請求項７から１２のいずれかに記載の組み合わせの使用。
【請求項１４】
膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物に請求項７から１２のいずれかに記載を膵臓癌に対する治療的有効量で投与することを含む、方法(ここで、組み合わせの成分はまたそれらの薬学的に許容される塩の形でも存在できる)。
【請求項１５】
(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物、(ｂ)ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される少なくとも１種の化合物(ここで、これらの活性成分はいずれの場合も遊離形でまたはそれらの薬学的に許容される塩もしくは何れかの水和物の形で存在するものとする)ならびに所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含み；膵臓癌の処置におけるそれらの同時、別々または連続的使用に関する指示書を含む、商業用包装物。
【請求項１】
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤の使用。
【請求項２】
膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物にＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤を膵臓癌に対する治療的有効量で投与することを含む方法(ここで、ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤は薬学的に許容される塩の形でも存在できるものとする)。
【請求項３】
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、(ａ)ＥＧＦの活性を低下させる化合物および(ｂ)ＶＥＧＦの活性を低下させる化合物を含む組み合わせの使用。
【請求項４】
化合物(ｂ)がベバシズマブおよび１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンスクシネートから選択される、請求項３記載の使用。
【請求項５】
化合物(ａ)がゲフィチニブおよびセツキシマブから選択される、請求項３または４記載の使用。
【請求項６】
膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物に(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の阻害剤および(ｂ)ＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の阻害剤を含む組み合わせを膵臓癌に対する治療的有効量で投与することを含む方法(ここで、組み合わせの成分はそれらの薬学的に許容される塩の形でも存在できるものとする)。
【請求項７】
同時、別々または連続的使用のための(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物ならびに(ｂ)ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される少なくとも１種の化合物(ここで、これらの活性成分はいずれの場合も遊離形でまたはそれらの薬学的に許容される塩もしくは何らかの水和物の形で存在するものとする)、および所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む組み合わせ。
【請求項８】
化合物(ｂ)がベバシズマブおよび１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンスクシネートから選択される、請求項７記載の組み合わせ。
【請求項９】
化合物(ａ)がゲフィチニブおよびセツキシマブから選択される、請求項７または８記載の組み合わせ。
【請求項１０】
式Ｉ
【化１】
〔式中、
Ｒ１およびＲ２は、互いに独立して水素、非置換または置換アルキルまたはシクロアルキル、環炭素原子を介して結合したヘテロ環式ラジカル、または式Ｒ４−Ｙ−(Ｃ＝Ｚ)−のラジカルであって、ここで、Ｒ４は非置換、モノまたはジ置換アミノまたはヘテロ環式ラジカルであり、Ｙは存在しないかまたは低級アルキルであり、そしてＺは酸素、硫黄またはイミノである。ただし、Ｒ１およびＲ２は両方同時に水素ではない；または
Ｒ１およびＲ２はそれらが結合している窒素原子と一体となってヘテロ環式ラジカルを形成し；
Ｒ３はヘテロ環式ラジカルまたは非置換または置換芳香族性ラジカルであり；
ＧはＣ１−Ｃ７−アルキレン、−Ｃ(＝Ｏ)−、またはＣ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ(＝Ｏ)−であり、ここで、該カルボニル基がＮＲ１Ｒ２部分に結合しており；
Ｑは−ＮＨ−または−Ｏ−である。ただし、Ｇが−Ｃ(＝Ｏ)−またはＣ１−Ｃ６−アルキレン−Ｃ(＝Ｏ)−であるとき、Ｑは−Ｏ−であり；そして
Ｘは、存在しないかまたはＣ１−Ｃ７−アルキレンのいずれかである。ただし、Ｘが存在しないならば、ヘテロ環式ラジカルＲ３は環炭素原子を介して結合していない。〕
の７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン誘導体または該化合物の塩である化合物(ａ)ならびにＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、メトトレキサートおよびエダトレキサートから選択される少なくとも１種の化合物である(ｂ)を含む、請求項７記載の組み合わせ。
【請求項１１】
(ａ){６−[４−(４−エチル−ピペラジン−１−イルメチル)−フェニル]−７Ｈ−ピロロ[２,３−ｄ]ピリミジン−４−イル}−(１−フェニル−エチル)−アミンならびに(ｂ)Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンおよびゲムシタビンから選択される少なくとも１種の化合物を含む、請求項７記載の組み合わせ。
【請求項１２】
Ｎ−{５−[４−(４−メチル−ピペラジノ−メチル)−ベンゾイルアミド]−２−メチルフェニル}−４−(３−ピリジル)−２−ピリミジン−アミンをそのモノメタンスルホン酸塩の形で使用する、請求項１１記載の組み合わせ。
【請求項１３】
膵臓癌の処置用薬剤の製造のための、請求項７から１２のいずれかに記載の組み合わせの使用。
【請求項１４】
膵臓癌を有する温血動物の処置方法であって、該温血動物に請求項７から１２のいずれかに記載を膵臓癌に対する治療的有効量で投与することを含む、方法(ここで、組み合わせの成分はまたそれらの薬学的に許容される塩の形でも存在できる)。
【請求項１５】
(ａ)ＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性およびＶＥＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性の二重阻害剤、または代替的にＥＧＦの活性を低下させる化合物およびＶＥＧＦの活性を低下させる化合物、(ｂ)ＰＤＧＦ−Ｒチロシンキナーゼ活性阻害剤および抗新生物代謝拮抗剤から選択される少なくとも１種の化合物(ここで、これらの活性成分はいずれの場合も遊離形でまたはそれらの薬学的に許容される塩もしくは何れかの水和物の形で存在するものとする)ならびに所望により少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含み；膵臓癌の処置におけるそれらの同時、別々または連続的使用に関する指示書を含む、商業用包装物。
【公表番号】特表２００９−５０２９６０（Ｐ２００９−５０２９６０Ａ）
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５２４２０１（Ｐ２００８−５２４２０１）
【出願日】平成１８年７月２７日（２００６．７．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２９４３９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０１４３３５
【国際公開日】平成１９年２月１日（２００７．２．１）
【出願人】（５０１４４９５４０）ザ・ボード・オブ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・テキサス・システム (4)
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年７月２７日（２００６．７．２７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０２９４３９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０１４３３５
【国際公開日】平成１９年２月１日（２００７．２．１）
【出願人】（５０１４４９５４０）ザ・ボード・オブ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・テキサス・システム (4)
【氏名又は名称原語表記】ＴＨＥ ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ
【Ｆターム（参考）】
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