遺伝子工学操作されたＬＩＳＴＥＲＩＡおよびその使用方法
本発明は，異種抗原をコードする核酸を含むポリヌクレオチドを含有する細菌ならびに融合蛋白質パートナーを提供する。また，部位特異的組換えを媒介するベクターおよび除去可能な抗生物質耐性遺伝子を含むベクターを提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）プロモーター；および
（ｂ）プロモーターと動作可能なように連結されている核酸，
を含むポリヌクレオチドであって，ここで，核酸は，
（ｉ）ＡｃｔＡの最初の５９アミノ酸より長くＡｃｔＡの最初の３８０アミノ酸より短いアミノ酸配列を含む改変型ＡｃｔＡ；および
（ｉｉ）異種抗原
を含む融合蛋白質をコードする，ことを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項２】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
改変型ＡｃｔＡはＡｃｔＡの最初の２６５アミノ酸未満を含む，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
改変型ＡｃｔＡはＡｃｔＡの少なくとも最初の８５アミノ酸であってＡｃｔＡの最初の１２５アミノ酸未満を含む，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
改変型ＡｃｔＡはＡｃｔＡのアミノ酸１−１００から構成される，請求項４記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項５記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
異種抗原は非リステリアである，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子からのものであるかまたはこれに由来する，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
請求項１記載のポリヌクレオチドを含むプラスミド。
【請求項１０】
請求項１記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項１０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２】
細胞から細胞への拡散，および／または非食細胞中への侵入について減弱化されている，請求項１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１３】
ａｃｔＡ欠失変異体またはａｃｔＡ挿入変異体である，請求項１２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１４】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項１３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌はそのゲノム中にポリヌクレオチドを含む，請求項１０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１６】
ポリヌクレオチドは，ゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ここで，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする，請求項１５記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１７】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項１６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１８】
融合蛋白質をコードする核酸は，ゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ここで，核酸のインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする，請求項１５記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１９】
請求項１０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項２０】
哺乳動物において異種抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項１０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項２１】
ゲノムを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって，ゲノムは異種抗原をコードする核酸を含むポリヌクレオチドを含み，ここで，核酸はゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とするＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２２】
病原性遺伝子のすべてまたは一部が欠失している，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２３】
病原性遺伝子は欠失していない，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２４】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２６】
異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子からのものであるかまたはこれに由来する，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２７】
さらに，第２の病原性遺伝子中にインテグレートされた第２の異種抗原をコードする第２の核酸を含む，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２８】
核酸は改変型ＡｃｔＡおよび異種抗原を含む融合蛋白質をコードする，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２９】
請求項２０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項３０】
哺乳動物において異種抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項３１】
ワクチンにおいて用いるためのＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を製造する方法であって，Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌のゲノムの病原性遺伝子中にポリヌクレオチドをインテグレートさせ，ここで，ポリヌクレオチドは，異種抗原をコードする核酸を含み，ポリヌクレオチドのインテグレーションは
（ａ）病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ）病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする方法。
【請求項３２】
ポリヌクレオチドは，相同組換えにより病原性遺伝子中にインテグレートされている，請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
ポリヌクレオチドの病原性遺伝子中へのインテグレーションの間に病原性遺伝子のすべてまたは一部が欠失している，請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項３１記載の方法。
【請求項３５】
請求項３１記載の方法により製造されるＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３６】
異種抗原をコードする第２の核酸と動作可能なように連結されかつインフレームであるａｃｔＡ−Ｎ１００をコードする第１の核酸を含むポリヌクレオチド。
【請求項３７】
請求項３６記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３８】
ポリヌクレオチドはゲノム性である，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３９】
ポリヌクレオチドは，ａｃｔＡまたはｉｎｌＢ中にインテグレートされている，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４０】
ポリヌクレオチドはプラスミド系である，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４１】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４２】
異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子であるか，またはこれらに由来する，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４３】
異種抗原は，癌，腫瘍，または感染性因子と免疫学的に交差反応性であるか，またはこれらと少なくとも１つのエピトープを共有する，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４４】
ポリヌクレオチドはａｃｔＡプロモーターと動作可能なように連結されている，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４５】
請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項４６】
癌または感染性因子からのまたはこれらに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，癌または感染性因子を有する哺乳動物に請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を投与することを含み，ここで，異種抗原は，癌または感染性因子からのまたはこれらに由来する抗原と少なくとも１つのエピトープを共有するか，またはこれと免疫学的に交叉反応性である，ことを特徴とする方法。
【請求項４７】
癌は，腫瘍または前癌性細胞を含む，請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
感染性因子は，ウイルス，病原性細菌，または寄生虫生物を含む，請求項４６記載の方法。
【請求項４９】
改変型ａｃｔＡをコードする第１の核酸を含むポリヌクレオチドであって，ここで，改変型ａｃｔＡは，
ａ．ａｃｔＡのアミノ酸１−５９；および
ｂ．宿主細胞の細胞骨格のａｃｔＡ媒介性制御のための少なくとも１つのドメイン中の不活性化変異，ドメインの欠失またはドメインの前でのトランケーション
を含み，
ここで，第１の核酸は，異種抗原をコードする第２の核酸と動作可能なように連結されておりかつインフレームである，ことを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項５０】
ドメインはコフィリンホモロジー領域（ＫＫＲＲ）（配列番号２３）である，請求項４９記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
ドメインはリン脂質コア結合ドメイン（ＫＶＦＫＫＩＫＤＡＧＫＷＶＲＤＫＩ）（配列番号２０）である，請求項４９記載のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
少なくとも１つのドメインはＡｃｔＡの４つすべてのプロリンリッチドメイン（ＦＰＰＰＰ，ＦＰＰＰＰ，ＦＰＰＰＰ，ＦＰＰＩＰ）（配列番号２１，配列番号２２）を含む，請求項４９記載のポリヌクレオチド。
【請求項５３】
請求項４９記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５４】
ポリヌクレオチドはゲノム性である，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５５】
ポリヌクレオチドはゲノム性ではない，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５６】
ポリヌクレオチドは，
ａ．ａｃｔＡプロモーター；または
ｂ．ａｃｔＡプロモーターではない細菌プロモーター，
の１またはそれ以上と動作可能なように連結されている，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５７】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５８】
請求項５７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項５９】
癌または感染性因子からのまたはこれらに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を，癌または感染性因子を有する哺乳動物に投与することを含み，ここで，異種抗原は，癌または感染性因子からのまたはこれらに由来する抗原と少なくとも１つのエピトープを共有するかまたはこれと免疫学的に交叉反応性である，ことを特徴とする方法。
【請求項６０】
癌は，腫瘍または前癌性細胞を含む，請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
感染性因子は，ウイルス，病原性細菌，または寄生虫生物を含む，請求項５９記載の方法。
【請求項６２】
異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子であるかまたはこれらに由来する，請求項５９記載の方法。
【請求項６３】
ファージインテグラーゼをコードする第１の核酸，ファージ付着部位（ａｔｔＰＰ’部位）をコードする第２の核酸，および異種抗原または制御核酸をコードする第３の核酸を含むプラスミドであって，
ａ．それぞれの核酸はＬ．ｉｎｎｏｃｕａ ００７１に由来することができ；
ｂ．それぞれの核酸はＬ．ｉｎｎｏｃｕａ １７６５に由来することができ；
ｃ．それぞれの核酸はＬ．ｉｎｎｏｃｕａ ２６０１に由来することができ；
ｄ．それぞれの核酸はＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｆ６８５４＿２７０３に由来することができ；または
ｅ．第１の核酸はｐｈｉＣ３１インテグラーゼをコードしており，
ここで，プラスミドは，異種抗原をコードする核酸の，細菌のゲノム中のプラスミドのａｔｔＰＰ’部位と適合性の細菌付着部位（ａｔｔＢＢ’部位）における部位特異的インテグレーションを媒介するのに有用である，
ことを特徴とするプラスミド。
【請求項６４】
細菌のゲノムを改変する方法であって，細菌を請求項６３記載のプラスミドでトランスフェクションし，そしてインテグレーションに適した条件下で，第３の核酸をインテグラーゼの触媒により細菌のゲノム中にインテグレーションさせる，ことを含む方法。
【請求項６５】
ａ．細菌のゲノムと相同の第１の領域をコードする第１の核酸，
ｂ．細菌のゲノムと相同の第２の領域をコードする第２の核酸，および
ｃ．細菌付着部位（ａｔｔＢＢ’）を含む第３の核酸，
を含むプラスミドであって，
ここで，第３の核酸は，第１の核酸と第２の核酸に挟まれており，第１の核酸および第２の核酸は，互いに動作可能なように連結されており，かつ第３の核酸の細菌のゲノム中への相同インテグレーションを媒介することができる，
ことを特徴とするプラスミド。
【請求項６６】
請求項６５記載のプラスミドがインテグレーションすることにより改変されている細菌。
【請求項６７】
細菌のゲノムが第１の核酸を挟む２つの動作可能なように連結された異種リコンビナーゼ結合部位を含むポリヌクレオチドを含む細菌であって，
ここで，２つの部位は：
ａ．２つのｌｏｘ部位；または
ｂ．２つのＦｒｔ部位，
であり，２つのｌｏｘ部位に挟まれた核酸はＣｒｅリコンビナーゼにより切り出されることができ，および２つのＦｒｔ部位に挟まれた核酸はＦＬＰリコンビナーゼにより切り出されることができる，
ことを特徴とする細菌。
【請求項６８】
請求項６７記載の第１の核酸を細菌のゲノムから切り出す方法であって，ゲノムをＣｒｅリコンビナーゼまたはＦＬＰリコンビナーゼと接触させ，そして切り出しを許容するかまたは容易にする条件下でリコンビナーゼが第１の核酸の切り出しを触媒できるようにすることを含み，ここで，
ａ．第１の核酸は，ｌｏｘ部位により挟まれており，かつリコンビナーゼはＣｒｅリコンビナーゼであるか；または
ｂ．第１の核酸はＦｒｔ部位により挟まれており，かつリコンビナーゼはＦＬＰリコンビナーゼである，
ことを特徴とする方法。
【請求項６９】
病原性遺伝子はｐｒｆＡ依存性遺伝子である，請求項１８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７０】
病原性遺伝子はｐｒｆＡ依存性遺伝子ではない，請求項１８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７１】
さらに，第１の核酸と動作可能なように連結されている第１のプロモーター，および第３の核酸と動作可能なように連結されている第２のプロモーターを含む，請求項６３記載のプラスミド。
【請求項７２】
インテグレーションは，成長または拡散を媒介するのに必要なゲノムの領域におけるものである，請求項６６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７３】
インテグレーションは，成長または拡散を媒介するのに必要ではないゲノムの領域におけるものである，請求項６６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７４】
各ｌｏｘ部位はｌｏｘＰ部位である，請求項６７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７５】
（ａ）プロモーター；および
（ｂ）プロモーターと動作可能なように連結されている核酸配列，
を含むポリヌクレオチドであって，
核酸は，
（ｉ）ＡｃｔＡの最初の５９アミノ酸より多く，およびＡｃｔＡの最初の３８０アミノ酸より少ないアミノ酸配列を含む改変型ＡｃｔＡ；および
（ｉｉ）メソセリンまたはメソセリンに由来する抗原
を含む融合蛋白質をコードすることを特徴とする，ポリヌクレオチド。
【請求項７６】
メソセリンはヒトメソセリンである，請求項７５記載のポリヌクレオチド。
【請求項７７】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項７５記載のポリヌクレオチド。
【請求項７８】
改変型ＡｃｔＡは，ＡｃｔＡの少なくとも最初の８５アミノ酸およびＡｃｔＡの最初の１２５アミノ酸より少ないアミノ酸配列を含む，請求項７５記載のポリヌクレオチド。
【請求項７９】
改変型ＡｃｔＡは，ＡｃｔＡのアミノ酸１−１００から構成される，請求項７５記載のポリヌクレオチド。
【請求項８０】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項７９記載のポリヌクレオチド。
【請求項８１】
請求項７５記載のポリヌクレオチドを含むプラスミド。
【請求項８２】
請求項７５記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８３】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８４】
ａｃｔＡ欠失変異体またはａｃｔＡ挿入変異体である，請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌は，そのゲノム中にポリヌクレオチドを含む，請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８６】
ポリヌクレオチドはゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ここで，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする，請求項８５記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８７】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項８６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８８】
融合蛋白質をコードする核酸はゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ここで，核酸のインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする，請求項８５記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８９】
請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項９０】
哺乳動物においてメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項９１】
ゲノムを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって，ここで，ゲノムはメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原をコードする核酸を含むポリヌクレオチドを含み，ここで，ポリヌクレオチドはゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とするＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９２】
病原性遺伝子のすべてまたは一部が欠失している，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９３】
病原性遺伝子のいずれも欠失していない，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９４】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９６】
メソセリンはヒトメソセリンである，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９７】
請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項９８】
哺乳動物においてメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項９９】
ワクチンにおいて用いるためのＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を製造する方法であって，Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌のゲノムの病原性遺伝子中にポリヌクレオチドをインテグレートさせ，ここで，ポリヌクレオチドは，メソセリンまたはメソセリンに由来する抗原をコードする核酸を含み，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ）病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ）病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする方法。
【請求項１００】
請求項９９記載の方法により製造されるＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０１】
メソセリンまたはメソセリンに由来する抗原をコードする第２の核酸と動作可能なように連結されかつインフレームである，ａｃｔＡ−Ｎ１００をコードする第１の核酸を含むポリヌクレオチド。
【請求項１０２】
メソセリンはヒトメソセリンである，請求項１０１記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０３】
請求項１０１記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０４】
ポリヌクレオチドはゲノム性である，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０５】
ポリヌクレオチドはａｃｔＡ遺伝子またはｉｎｌＢ遺伝子中にインテグレートされている，請求項１０４記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０６】
ポリヌクレオチドはプラスミド系である，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０７】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０８】
ポリヌクレオチドはａｃｔＡプロモーターと動作可能なように連結されている，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０９】
請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項１１０】
哺乳動物においてメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１１１】
改変型ＡｃｔＡをコードする第１の核酸を含むポリヌクレオチドであって，ここで，改変型ＡｃｔＡは，
ａ．ＡｃｔＡのアミノ酸１−５９；および
ｂ．宿主細胞細胞骨格のａｃｔＡ媒介性制御のための少なくとも１つのドメイン中の不活性化変異，ドメインの欠失またはドメインの前でのトランケーション
を含み，
ここで，第１の核酸は，メソセリンまたはメソセリンに由来する抗原をコードする第２の核酸と動作可能なように連結されかつインフレームである，
ことを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項１１２】
請求項１１１記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１３】
ポリヌクレオチドは，
ａ．ａｃｔＡプロモーター；または
ｂ．ａｃｔＡプロモーターではない細菌プロモーター
の１またはそれ以上と動作可能なように連結されている，請求項１１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１４】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項１１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１５】
請求項１１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項１１６】
哺乳動物においてメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，請求項１１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１１７】
病原性遺伝子はｐｒｆＡ依存性遺伝子である，請求項８８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１８】
病原性遺伝子はｐｒｆＡ依存性遺伝子ではない，請求項８８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１９】
メソセリンに由来する抗原は，そのシグナルペプチド領域，そのＧＰＩアンカー領域，またはそのシグナルペプチドおよびＧＰＩアンカー領域の両方を欠失したメソセリンである，請求項７５，９１，または１１１に記載のポリヌクレオチドまたは細菌。
【請求項１２０】
異種抗原は，ＰＳＣＡまたはＰＳＣＡに由来する抗原である，請求項１−８，３６，または１４９−１５２のいずれかに記載のポリヌクレオチド，または請求項２１−２８のいずれかに記載の細菌。
【請求項１２１】
ＰＳＣＡに由来する抗原は，
（ａ） そのシグナルペプチド領域の一部または全部；
（ｂ） そのＧＰＩアンカー領域；または
（ｃ） そのＧＰＩアンカー領域およびそのシグナルペプチド領域の一部または全部，
を欠失しているＰＳＣＡである，請求項１２０記載のポリヌクレオチドまたは細菌。
【請求項１２２】
ＰＳＣＡはヒトＰＳＣＡである，請求項１２０記載のポリヌクレオチドまたは細菌。
【請求項１２３】
ゲノムを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって，該ゲノムは，
（ａ） 第１の異種抗原をコードする第１の核酸を含む第１のポリヌクレオチドであって，第１のポリヌクレオチドはゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，およびＬｉｓｔｅｒｉａ細菌は，
（ｉ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｉｉ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる；
ことにより減弱化されており，および
（ｂ） 第２の異種抗原をコードする第２の核酸を含む第２のポリヌクレオチドであって，ここで，第２のポリヌクレオチドはゲノム中にインテグレートされている，
を含むことを特徴とするＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２４】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２６】
第１の異種抗原および第２の異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子から得られたものであるかまたはこれらに由来する，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２７】
第１の異種抗原および／または第２の異種抗原は，メソセリン，メソセリンに由来する抗原，ＰＳＣＡ，またはＰＳＣＡに由来する抗原である，請求項１２６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２８】
第１の核酸および／または第２の核酸は，改変型ＡｃｔＡおよび第１の異種抗原または第２の異種抗原を含む融合蛋白質をコードする，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２９】
改変型ＡｃｔＡはＡｃｔＡ−Ｎ１００である，請求項１２８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１３０】
第１の核酸および／または第２の核酸は，シグナル配列および第１の異種抗原または第２の異種抗原を含む融合蛋白質をコードし，ここで，シグナル配列は，ＡｃｔＡシグナル配列，ｐ６０シグナル配列，ＬＬＯシグナル配列，ＢａＰａシグナル配列，Ｌｌｕｓｐ４５シグナル配列，またはＰｈｏＤシグナル配列である，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１３１】
請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項１３２】
哺乳動物において異種抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１３３】
ワクチンにおいて用いるためのＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を製造する方法であって，Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌のゲノムの病原性遺伝子中にポリヌクレオチドをインテグレートさせ，ここで，ポリヌクレオチドは，異種抗原をコードする核酸を含み，Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌は病原性遺伝子の変異により減弱化されるか減弱化されている，ことを特徴とする方法。
【請求項１３４】
請求項１３３記載の方法により製造されるＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１】
（ａ）プロモーター；および
（ｂ）プロモーターと動作可能なように連結されている核酸，
を含むポリヌクレオチドであって，ここで，核酸は，
（ｉ）ＡｃｔＡの最初の５９アミノ酸より長くＡｃｔＡの最初の３８０アミノ酸より短いアミノ酸配列を含む改変型ＡｃｔＡ；および
（ｉｉ）異種抗原
を含む融合蛋白質をコードする，ことを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項２】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】
改変型ＡｃｔＡはＡｃｔＡの最初の２６５アミノ酸未満を含む，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】
改変型ＡｃｔＡはＡｃｔＡの少なくとも最初の８５アミノ酸であってＡｃｔＡの最初の１２５アミノ酸未満を含む，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項５】
改変型ＡｃｔＡはＡｃｔＡのアミノ酸１−１００から構成される，請求項４記載のポリヌクレオチド。
【請求項６】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項５記載のポリヌクレオチド。
【請求項７】
異種抗原は非リステリアである，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項８】
異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子からのものであるかまたはこれに由来する，請求項１記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】
請求項１記載のポリヌクレオチドを含むプラスミド。
【請求項１０】
請求項１記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項１０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２】
細胞から細胞への拡散，および／または非食細胞中への侵入について減弱化されている，請求項１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１３】
ａｃｔＡ欠失変異体またはａｃｔＡ挿入変異体である，請求項１２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１４】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項１３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌はそのゲノム中にポリヌクレオチドを含む，請求項１０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１６】
ポリヌクレオチドは，ゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ここで，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする，請求項１５記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１７】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項１６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１８】
融合蛋白質をコードする核酸は，ゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ここで，核酸のインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする，請求項１５記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１９】
請求項１０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項２０】
哺乳動物において異種抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項１０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項２１】
ゲノムを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって，ゲノムは異種抗原をコードする核酸を含むポリヌクレオチドを含み，ここで，核酸はゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とするＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２２】
病原性遺伝子のすべてまたは一部が欠失している，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２３】
病原性遺伝子は欠失していない，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２４】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２６】
異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子からのものであるかまたはこれに由来する，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２７】
さらに，第２の病原性遺伝子中にインテグレートされた第２の異種抗原をコードする第２の核酸を含む，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２８】
核酸は改変型ＡｃｔＡおよび異種抗原を含む融合蛋白質をコードする，請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項２９】
請求項２０記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項３０】
哺乳動物において異種抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項２１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項３１】
ワクチンにおいて用いるためのＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を製造する方法であって，Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌のゲノムの病原性遺伝子中にポリヌクレオチドをインテグレートさせ，ここで，ポリヌクレオチドは，異種抗原をコードする核酸を含み，ポリヌクレオチドのインテグレーションは
（ａ）病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ）病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする方法。
【請求項３２】
ポリヌクレオチドは，相同組換えにより病原性遺伝子中にインテグレートされている，請求項３１記載の方法。
【請求項３３】
ポリヌクレオチドの病原性遺伝子中へのインテグレーションの間に病原性遺伝子のすべてまたは一部が欠失している，請求項３１記載の方法。
【請求項３４】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項３１記載の方法。
【請求項３５】
請求項３１記載の方法により製造されるＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３６】
異種抗原をコードする第２の核酸と動作可能なように連結されかつインフレームであるａｃｔＡ−Ｎ１００をコードする第１の核酸を含むポリヌクレオチド。
【請求項３７】
請求項３６記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３８】
ポリヌクレオチドはゲノム性である，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項３９】
ポリヌクレオチドは，ａｃｔＡまたはｉｎｌＢ中にインテグレートされている，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４０】
ポリヌクレオチドはプラスミド系である，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４１】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４２】
異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子であるか，またはこれらに由来する，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４３】
異種抗原は，癌，腫瘍，または感染性因子と免疫学的に交差反応性であるか，またはこれらと少なくとも１つのエピトープを共有する，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４４】
ポリヌクレオチドはａｃｔＡプロモーターと動作可能なように連結されている，請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項４５】
請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項４６】
癌または感染性因子からのまたはこれらに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，癌または感染性因子を有する哺乳動物に請求項３７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を投与することを含み，ここで，異種抗原は，癌または感染性因子からのまたはこれらに由来する抗原と少なくとも１つのエピトープを共有するか，またはこれと免疫学的に交叉反応性である，ことを特徴とする方法。
【請求項４７】
癌は，腫瘍または前癌性細胞を含む，請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
感染性因子は，ウイルス，病原性細菌，または寄生虫生物を含む，請求項４６記載の方法。
【請求項４９】
改変型ａｃｔＡをコードする第１の核酸を含むポリヌクレオチドであって，ここで，改変型ａｃｔＡは，
ａ．ａｃｔＡのアミノ酸１−５９；および
ｂ．宿主細胞の細胞骨格のａｃｔＡ媒介性制御のための少なくとも１つのドメイン中の不活性化変異，ドメインの欠失またはドメインの前でのトランケーション
を含み，
ここで，第１の核酸は，異種抗原をコードする第２の核酸と動作可能なように連結されておりかつインフレームである，ことを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項５０】
ドメインはコフィリンホモロジー領域（ＫＫＲＲ）（配列番号２３）である，請求項４９記載のポリヌクレオチド。
【請求項５１】
ドメインはリン脂質コア結合ドメイン（ＫＶＦＫＫＩＫＤＡＧＫＷＶＲＤＫＩ）（配列番号２０）である，請求項４９記載のポリヌクレオチド。
【請求項５２】
少なくとも１つのドメインはＡｃｔＡの４つすべてのプロリンリッチドメイン（ＦＰＰＰＰ，ＦＰＰＰＰ，ＦＰＰＰＰ，ＦＰＰＩＰ）（配列番号２１，配列番号２２）を含む，請求項４９記載のポリヌクレオチド。
【請求項５３】
請求項４９記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５４】
ポリヌクレオチドはゲノム性である，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５５】
ポリヌクレオチドはゲノム性ではない，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５６】
ポリヌクレオチドは，
ａ．ａｃｔＡプロモーター；または
ｂ．ａｃｔＡプロモーターではない細菌プロモーター，
の１またはそれ以上と動作可能なように連結されている，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５７】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項５８】
請求項５７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項５９】
癌または感染性因子からのまたはこれらに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，請求項５３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を，癌または感染性因子を有する哺乳動物に投与することを含み，ここで，異種抗原は，癌または感染性因子からのまたはこれらに由来する抗原と少なくとも１つのエピトープを共有するかまたはこれと免疫学的に交叉反応性である，ことを特徴とする方法。
【請求項６０】
癌は，腫瘍または前癌性細胞を含む，請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
感染性因子は，ウイルス，病原性細菌，または寄生虫生物を含む，請求項５９記載の方法。
【請求項６２】
異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子であるかまたはこれらに由来する，請求項５９記載の方法。
【請求項６３】
ファージインテグラーゼをコードする第１の核酸，ファージ付着部位（ａｔｔＰＰ’部位）をコードする第２の核酸，および異種抗原または制御核酸をコードする第３の核酸を含むプラスミドであって，
ａ．それぞれの核酸はＬ．ｉｎｎｏｃｕａ ００７１に由来することができ；
ｂ．それぞれの核酸はＬ．ｉｎｎｏｃｕａ １７６５に由来することができ；
ｃ．それぞれの核酸はＬ．ｉｎｎｏｃｕａ ２６０１に由来することができ；
ｄ．それぞれの核酸はＬ．ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ ｆ６８５４＿２７０３に由来することができ；または
ｅ．第１の核酸はｐｈｉＣ３１インテグラーゼをコードしており，
ここで，プラスミドは，異種抗原をコードする核酸の，細菌のゲノム中のプラスミドのａｔｔＰＰ’部位と適合性の細菌付着部位（ａｔｔＢＢ’部位）における部位特異的インテグレーションを媒介するのに有用である，
ことを特徴とするプラスミド。
【請求項６４】
細菌のゲノムを改変する方法であって，細菌を請求項６３記載のプラスミドでトランスフェクションし，そしてインテグレーションに適した条件下で，第３の核酸をインテグラーゼの触媒により細菌のゲノム中にインテグレーションさせる，ことを含む方法。
【請求項６５】
ａ．細菌のゲノムと相同の第１の領域をコードする第１の核酸，
ｂ．細菌のゲノムと相同の第２の領域をコードする第２の核酸，および
ｃ．細菌付着部位（ａｔｔＢＢ’）を含む第３の核酸，
を含むプラスミドであって，
ここで，第３の核酸は，第１の核酸と第２の核酸に挟まれており，第１の核酸および第２の核酸は，互いに動作可能なように連結されており，かつ第３の核酸の細菌のゲノム中への相同インテグレーションを媒介することができる，
ことを特徴とするプラスミド。
【請求項６６】
請求項６５記載のプラスミドがインテグレーションすることにより改変されている細菌。
【請求項６７】
細菌のゲノムが第１の核酸を挟む２つの動作可能なように連結された異種リコンビナーゼ結合部位を含むポリヌクレオチドを含む細菌であって，
ここで，２つの部位は：
ａ．２つのｌｏｘ部位；または
ｂ．２つのＦｒｔ部位，
であり，２つのｌｏｘ部位に挟まれた核酸はＣｒｅリコンビナーゼにより切り出されることができ，および２つのＦｒｔ部位に挟まれた核酸はＦＬＰリコンビナーゼにより切り出されることができる，
ことを特徴とする細菌。
【請求項６８】
請求項６７記載の第１の核酸を細菌のゲノムから切り出す方法であって，ゲノムをＣｒｅリコンビナーゼまたはＦＬＰリコンビナーゼと接触させ，そして切り出しを許容するかまたは容易にする条件下でリコンビナーゼが第１の核酸の切り出しを触媒できるようにすることを含み，ここで，
ａ．第１の核酸は，ｌｏｘ部位により挟まれており，かつリコンビナーゼはＣｒｅリコンビナーゼであるか；または
ｂ．第１の核酸はＦｒｔ部位により挟まれており，かつリコンビナーゼはＦＬＰリコンビナーゼである，
ことを特徴とする方法。
【請求項６９】
病原性遺伝子はｐｒｆＡ依存性遺伝子である，請求項１８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７０】
病原性遺伝子はｐｒｆＡ依存性遺伝子ではない，請求項１８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７１】
さらに，第１の核酸と動作可能なように連結されている第１のプロモーター，および第３の核酸と動作可能なように連結されている第２のプロモーターを含む，請求項６３記載のプラスミド。
【請求項７２】
インテグレーションは，成長または拡散を媒介するのに必要なゲノムの領域におけるものである，請求項６６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７３】
インテグレーションは，成長または拡散を媒介するのに必要ではないゲノムの領域におけるものである，請求項６６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７４】
各ｌｏｘ部位はｌｏｘＰ部位である，請求項６７記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項７５】
（ａ）プロモーター；および
（ｂ）プロモーターと動作可能なように連結されている核酸配列，
を含むポリヌクレオチドであって，
核酸は，
（ｉ）ＡｃｔＡの最初の５９アミノ酸より多く，およびＡｃｔＡの最初の３８０アミノ酸より少ないアミノ酸配列を含む改変型ＡｃｔＡ；および
（ｉｉ）メソセリンまたはメソセリンに由来する抗原
を含む融合蛋白質をコードすることを特徴とする，ポリヌクレオチド。
【請求項７６】
メソセリンはヒトメソセリンである，請求項７５記載のポリヌクレオチド。
【請求項７７】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項７５記載のポリヌクレオチド。
【請求項７８】
改変型ＡｃｔＡは，ＡｃｔＡの少なくとも最初の８５アミノ酸およびＡｃｔＡの最初の１２５アミノ酸より少ないアミノ酸配列を含む，請求項７５記載のポリヌクレオチド。
【請求項７９】
改変型ＡｃｔＡは，ＡｃｔＡのアミノ酸１−１００から構成される，請求項７５記載のポリヌクレオチド。
【請求項８０】
プロモーターはａｃｔＡプロモーターである，請求項７９記載のポリヌクレオチド。
【請求項８１】
請求項７５記載のポリヌクレオチドを含むプラスミド。
【請求項８２】
請求項７５記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８３】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８４】
ａｃｔＡ欠失変異体またはａｃｔＡ挿入変異体である，請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌は，そのゲノム中にポリヌクレオチドを含む，請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８６】
ポリヌクレオチドはゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ここで，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする，請求項８５記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８７】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項８６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８８】
融合蛋白質をコードする核酸はゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ここで，核酸のインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする，請求項８５記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項８９】
請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項９０】
哺乳動物においてメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項８２記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項９１】
ゲノムを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって，ここで，ゲノムはメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原をコードする核酸を含むポリヌクレオチドを含み，ここで，ポリヌクレオチドはゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とするＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９２】
病原性遺伝子のすべてまたは一部が欠失している，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９３】
病原性遺伝子のいずれも欠失していない，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９４】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９６】
メソセリンはヒトメソセリンである，請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項９７】
請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項９８】
哺乳動物においてメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項９１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項９９】
ワクチンにおいて用いるためのＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を製造する方法であって，Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌のゲノムの病原性遺伝子中にポリヌクレオチドをインテグレートさせ，ここで，ポリヌクレオチドは，メソセリンまたはメソセリンに由来する抗原をコードする核酸を含み，ポリヌクレオチドのインテグレーションは，
（ａ）病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｂ）病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる，
ことを特徴とする方法。
【請求項１００】
請求項９９記載の方法により製造されるＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０１】
メソセリンまたはメソセリンに由来する抗原をコードする第２の核酸と動作可能なように連結されかつインフレームである，ａｃｔＡ−Ｎ１００をコードする第１の核酸を含むポリヌクレオチド。
【請求項１０２】
メソセリンはヒトメソセリンである，請求項１０１記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０３】
請求項１０１記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０４】
ポリヌクレオチドはゲノム性である，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０５】
ポリヌクレオチドはａｃｔＡ遺伝子またはｉｎｌＢ遺伝子中にインテグレートされている，請求項１０４記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０６】
ポリヌクレオチドはプラスミド系である，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０７】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０８】
ポリヌクレオチドはａｃｔＡプロモーターと動作可能なように連結されている，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１０９】
請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項１１０】
哺乳動物においてメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，請求項１０３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１１１】
改変型ＡｃｔＡをコードする第１の核酸を含むポリヌクレオチドであって，ここで，改変型ＡｃｔＡは，
ａ．ＡｃｔＡのアミノ酸１−５９；および
ｂ．宿主細胞細胞骨格のａｃｔＡ媒介性制御のための少なくとも１つのドメイン中の不活性化変異，ドメインの欠失またはドメインの前でのトランケーション
を含み，
ここで，第１の核酸は，メソセリンまたはメソセリンに由来する抗原をコードする第２の核酸と動作可能なように連結されかつインフレームである，
ことを特徴とするポリヌクレオチド。
【請求項１１２】
請求項１１１記載のポリヌクレオチドを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１３】
ポリヌクレオチドは，
ａ．ａｃｔＡプロモーター；または
ｂ．ａｃｔＡプロモーターではない細菌プロモーター
の１またはそれ以上と動作可能なように連結されている，請求項１１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１４】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項１１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１５】
請求項１１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項１１６】
哺乳動物においてメソセリンまたはメソセリンに由来する抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，請求項１１１記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１１７】
病原性遺伝子はｐｒｆＡ依存性遺伝子である，請求項８８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１８】
病原性遺伝子はｐｒｆＡ依存性遺伝子ではない，請求項８８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１１９】
メソセリンに由来する抗原は，そのシグナルペプチド領域，そのＧＰＩアンカー領域，またはそのシグナルペプチドおよびＧＰＩアンカー領域の両方を欠失したメソセリンである，請求項７５，９１，または１１１に記載のポリヌクレオチドまたは細菌。
【請求項１２０】
異種抗原は，ＰＳＣＡまたはＰＳＣＡに由来する抗原である，請求項１−８，３６，または１４９−１５２のいずれかに記載のポリヌクレオチド，または請求項２１−２８のいずれかに記載の細菌。
【請求項１２１】
ＰＳＣＡに由来する抗原は，
（ａ） そのシグナルペプチド領域の一部または全部；
（ｂ） そのＧＰＩアンカー領域；または
（ｃ） そのＧＰＩアンカー領域およびそのシグナルペプチド領域の一部または全部，
を欠失しているＰＳＣＡである，請求項１２０記載のポリヌクレオチドまたは細菌。
【請求項１２２】
ＰＳＣＡはヒトＰＳＣＡである，請求項１２０記載のポリヌクレオチドまたは細菌。
【請求項１２３】
ゲノムを含むＬｉｓｔｅｒｉａ細菌であって，該ゲノムは，
（ａ） 第１の異種抗原をコードする第１の核酸を含む第１のポリヌクレオチドであって，第１のポリヌクレオチドはゲノムの病原性遺伝子中にインテグレートされており，およびＬｉｓｔｅｒｉａ細菌は，
（ｉ） 病原性遺伝子の発現を混乱させるか；または
（ｉｉ） 病原性遺伝子のコーディング配列を混乱させる；
ことにより減弱化されており，および
（ｂ） 第２の異種抗原をコードする第２の核酸を含む第２のポリヌクレオチドであって，ここで，第２のポリヌクレオチドはゲノム中にインテグレートされている，
を含むことを特徴とするＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２４】
病原性遺伝子はａｃｔＡまたはｉｎｌＢである，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２５】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓである，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２６】
第１の異種抗原および第２の異種抗原は，癌細胞，腫瘍，または感染性因子から得られたものであるかまたはこれらに由来する，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２７】
第１の異種抗原および／または第２の異種抗原は，メソセリン，メソセリンに由来する抗原，ＰＳＣＡ，またはＰＳＣＡに由来する抗原である，請求項１２６記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２８】
第１の核酸および／または第２の核酸は，改変型ＡｃｔＡおよび第１の異種抗原または第２の異種抗原を含む融合蛋白質をコードする，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１２９】
改変型ＡｃｔＡはＡｃｔＡ−Ｎ１００である，請求項１２８記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１３０】
第１の核酸および／または第２の核酸は，シグナル配列および第１の異種抗原または第２の異種抗原を含む融合蛋白質をコードし，ここで，シグナル配列は，ＡｃｔＡシグナル配列，ｐ６０シグナル配列，ＬＬＯシグナル配列，ＢａＰａシグナル配列，Ｌｌｕｓｐ４５シグナル配列，またはＰｈｏＤシグナル配列である，請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【請求項１３１】
請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を含むワクチン。
【請求項１３２】
哺乳動物において異種抗原に対する免疫応答を刺激する方法であって，有効量の請求項１２３記載のＬｉｓｔｅｒｉａ細菌，または該Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌を含む有効量の組成物を哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１３３】
ワクチンにおいて用いるためのＬｉｓｔｅｒｉａ細菌を製造する方法であって，Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌のゲノムの病原性遺伝子中にポリヌクレオチドをインテグレートさせ，ここで，ポリヌクレオチドは，異種抗原をコードする核酸を含み，Ｌｉｓｔｅｒｉａ細菌は病原性遺伝子の変異により減弱化されるか減弱化されている，ことを特徴とする方法。
【請求項１３４】
請求項１３３記載の方法により製造されるＬｉｓｔｅｒｉａ細菌。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５Ａ】
【図３５Ｂ】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５Ａ】
【図４５Ｂ】
【図４６】
【図４７Ａ】
【図４７Ｂ】
【図４８】
【図４９Ａ】
【図４９Ｂ】
【図５０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
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【図１６】
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【図１８】
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【図２９】
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【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５Ａ】
【図３５Ｂ】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
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【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５Ａ】
【図４５Ｂ】
【図４６】
【図４７Ａ】
【図４７Ｂ】
【図４８】
【図４９Ａ】
【図４９Ｂ】
【図５０】
【公表番号】特表２００９−５２８０６５（Ｐ２００９−５２８０６５Ａ）
【公表日】平成２１年８月６日（２００９．８．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５７４１９（Ｐ２００８−５５７４１９）
【出願日】平成１９年３月１日（２００７．３．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００５４５７
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０３２２５
【国際公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【出願人】（５０８２６４０２５）アンザ セラピューティクス，インコーポレイテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年８月６日（２００９．８．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月１日（２００７．３．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００５４５７
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１０３２２５
【国際公開日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【出願人】（５０８２６４０２５）アンザ セラピューティクス，インコーポレイテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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