ＣＲＦ受容体アンタゴニストおよびその製法
発作などの哺乳類におけるＣＲＦの分泌過多を示す障害の治療を含む、様々な障害の治療に有用であり得るＣＲＦ受容体アンタゴニストを開示している。本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、下記の構造：
［式中：Ｒ１、Ｒ２、ｎ、Ｒ５、ＡｒおよびＨｅｔは、本明細書と同意義である］
およびその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物およびプロドラッグを有する。医薬上許容される担体と結合するＣＲＦ受容体アンタゴニストを含む組成物ならびにその使用方法も開示している。
［式中：Ｒ１、Ｒ２、ｎ、Ｒ５、ＡｒおよびＨｅｔは、本明細書と同意義である］
およびその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物およびプロドラッグを有する。医薬上許容される担体と結合するＣＲＦ受容体アンタゴニストを含む組成物ならびにその使用方法も開示している。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００４年１０月１９日に出願した米国仮出願番号６０／６２００１２の優先権を主張し、全体としてそれを本明細書の一部とする。
【０００２】
本発明は、一般に、ＣＲＦ受容体アンタゴニストおよびそれを必要とする哺乳類に対するかかるアンタゴニストの投与により障害を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
最初の副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）はヒツジの視床下部より単離され、４１個のアミノ酸ペプチドとして同定された（Ｖａｌｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１３：１３９４−１３９７，１９８１）。その後、ヒトおよびラットＣＲＦの配列が単離され、これらの配列は同一であるが、４１個のアミノ酸残基の７個がヒツジＣＲＦと異なることが決定された（Ｒｉｖｉｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：４８５１，１９８３；Ｓｈｉｂａｈａｒａら，ＥＭＢＯ Ｊ．２：７７５，１９８３）。
【０００４】
ＣＲＦは内分泌系、神経系および免疫系機能に著しい変化をもたらすことが見出された。ＣＲＦは、下垂体前葉からの副腎皮質刺激ホルモン（「ＡＣＴＨ」）、β−エンドルフィンおよび他のプロ−オピオメラノコルチン（「ＰＯＭＣ」）誘導ペプチドの基礎放出およびストレス応答放出の主要な生理学的調節物質であると考えられている（Ｖａｌｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１３：１３９４−１３９７，１９８１）。簡単に記載すると、ＣＲＦは、脳（ＤｅＳｏｕｚａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：１４４９−１４５１、１９８４）、下垂体（ＤｅＳｏｕｚａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２４：５６０、１９８６；Ｗｙｎｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１１０：６０２−６０８、１９８３）、副腎（Ｕｄｅｌｓｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３１９：１４７−１５０、１９８６）および脾臓（Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｅ．Ｌ．およびＥ．Ｂ．ＤｅＳｏｕｚａ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２２：６０９−６１７、１９８８）全体に分布していることが見出されている原形質膜受容体に結合することにより、その生物学的作用を開始すると考えられている。ＣＲＦ受容体は、ｃＡＭＰの細胞内産生におけるＣＲＦに刺激された増加を媒介する、ＧＴＰ結合蛋白質（Ｐｅｒｒｉｎら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１８：１１７１−１１７９、１９８６）にカップリングする（Ｂｉｌｅｚｉｋｊｉａｎ，Ｌ．Ｍ．，およびＷ．Ｗ．Ｖａｌｅ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１３：６５７−６６２，１９８３）。今や、ＣＲＦの受容体は、ラット（Ｐｅｒｒｉｎら，Ｅｎｄｏ １３３（６）：３０５８−３０６１，１９９３）およびヒトの脳（Ｃｈｅｎら，ＰＮＡＳ ９０（１９）：８９６７−８９７１，１９９３；Ｖｉｔａら，ＦＥＢＳ ３３５（１）：１−５，１９９３）からクローニングされている。かかる受容体は、７回膜貫通ドメインを含む、４１５個のアミノ酸からなるタンパク質である。ラットおよびヒトの配列間の同一性の比較により、アミノ酸レベルで高度の相同性（９７％）を示す。
【０００５】
ＡＴＣＨおよびＰＯＭＣの産生を刺激するという役割に加えて、ＣＲＦはまた、ストレスに対する内分泌、自律神経および行動応答の多くを協調すると考えられており、ＣＲＦは情動障害の病態生理学に関与しているかもしれない。さらに、ＣＲＦは、免疫系、中枢神経系、内分泌系および心血管系の間の連絡における主要な介在物質であると考えられている（Ｃｒｏｆｆｏｒｄら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：２５５５−２５６４，１９９２；Ｓａｐｏｌｓｋｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：５２２−５２４，１９８７；Ｔｉｌｄｅｒｓら，Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ５：７７−８４，１９８２）。概して、ＣＲＦは、極めて重要な中枢神経系伝達物質の一つであると考えられ、ストレスに対する体全体の応答を統合するという重要な役割を果たす。
ＣＲＦを脳に直接投与すると、ストレスの多い環境に曝された動物について観察される応答と同一の行動的、生理学的および内分泌応答が誘起される。例えば、ＣＲＦを脳室内に注入すると、行動活性化（Ｓｕｔｔｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：３３１，１９８２）、脳波図の持続的活性化（Ｅｈｌｅｒｓら，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２７８：３３２，１９８３）、交感神経副腎髄質経路の刺激（Ｂｒｏｗｎら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１０：９２８，１９８２）、心拍数および血圧の上昇（Ｆｉｓｈｅｒら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１０：２２２２，１９８２）、酸素消費の増加（Ｂｒｏｗｎら，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ３０：２０７，１９８２）、胃腸活性の変化（Ｗｉｌｌｉａｍｓら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５３：Ｇ５８２，１９８７）、食物消費の抑制（Ｌｅｖｉｎｅら，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２２：３３７，１９８３）、性行動の変化（Ｓｉｒｉｎａｔｈｓｉｎｇｈｊｉら，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：２３２，１９８３）および免疫機能減弱（Ｉｒｗｉｎら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５５：Ｒ７４４，１９８８）がもたらされる。さらに、臨床データは、ＣＲＦが、鬱、不安に関する障害および拒食症の脳において分泌過多であり得ることを示唆している（ＤｅＳｏｕｚａ，Ａｎｎ．Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２５：２１５−２２３，１９９０）。したがって、臨床データは、ＣＲＦ受容体アンタゴニストが、ＣＲＦの分泌過多を示す精神神経疾患の治療に有用であり得る新規の抗鬱薬および／または抗不安薬となり得ることを示唆している。
【０００６】
最初のＣＲＦ受容体アンタゴニストはペプチドであった（例えば、Ｒｉｖｉｅｒら，米国特許第４，６０５，６４２号；Ｒｉｖｉｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：８８９，１９８４を参照のこと）。これらのペプチドは、ＣＲＦ受容体アンタゴニストがＣＲＦに対する薬理学的応答を弱めうることを立証したが、ペプチド性ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、安定性が欠如していること、および経口活性が限られていることを含む、ペプチド治療薬の一般的な欠点を有する。
【０００７】
インテグリン受容体アンタゴニストのプロドラッグとして縮合またはスピロ６，５−二環式酸アンモニオアルキルエステル化合物について開示する、公開出願ＷＯ９８／４３９６２およびビトロネクチン受容体アンタゴニストとしてヘテロシクリル置換インダゾール誘導体について開示する、ＷＯ９７／２３４８０は、ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核を有する化合物について開示している。
【０００８】
ＣＲＦの生理学的有意性のために、有意なＣＲＦ受容体結合活性を有し、ＣＲＦ受容体を拮抗しうる生物学的に活性のある低分子の開発が、今なお、望ましい目標である。かかるＣＲＦ受容体アンタゴニストは、一般的にストレスに関する障害を含む、内分泌状態、精神状態および神経学的状態の治療において有用であってもよい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ＣＲＦ受容体アンタゴニストの投与により、ＣＲＦの調節の獲得に向けて有意な一歩がなされたが、当該分野には効果的な低分子ＣＲＦ受容体アンタゴニストが今なお必要とされている。かかるＣＲＦ受容体アンタゴニストを含有する医薬組成物、ならびに、例えば、ストレスに関する障害を治療するためのその使用に関する方法も必要とされている。本発明はこれらの必要性を満たすものであり、関連する他の利点も提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、一般に、ＣＲＦ受容体アンタゴニストを対象とし、さらに具体的に言えば、下記の一般的構造（Ｉ）：
【化１】
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３または−ＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
を有するＣＲＦ受容体アンタゴニストならびにその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体およびプロドラッグを対象とする。
【００１１】
本発明のかかる態様および他の態様は、以下の詳細な記載に出典明示として明らかであろう。このために、様々な出典が、より詳細な特定の製法、化合物および／または組成物について記載する本明細書に開示されており、全体としてそれを本明細書の一部とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明は、一般に、副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）受容体アンタゴニストとして有用な化合物を対象とする。最初の実施態様において、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、以下の構造（Ｉ）：
【化２】
(I)
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３またはＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
ならびにその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体およびプロドラッグを有する。
【００１３】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、治療の応用の広範囲にかけて利用してもよく、ストレスに関する障害を含む、様々な障害または疾患を治療するために用いてもよい。かかる方法は、それを必要とする動物に有効量の本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストを、好ましくは、医薬組成物の形態で投与することを含む。したがって、別の実施態様において、医薬組成物は、医薬上許容される担体および／または希釈剤と結合して本発明の１以上のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含むことを開示している。
【００１４】
本明細書において用いられる上記の用語は、以下の意味を有する：
「アルキル」は、１から１０個の炭素原子を含む、直鎖または分岐、非環状または環状、非飽和または飽和脂肪族炭化水素を意味し、一方、「低級アルキル」なる語は、アルキルと同様の意味を有するが、１から６個の炭素原子しか含まない。したがって、「低級アルキル」なる語は、「Ｃ１−Ｃ６アルキル」なる語の代用となる。典型的な飽和直鎖アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどを含む；一方、飽和分岐アルキルは、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルなどを含む。典型的な飽和環状アルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、−ＣＨ２−シクロプロピル、−ＣＨ２−シクロブチル、ＣＨ２−シクロペンチル、−ＣＨ２−シクロヘキシルなどを含む；一方、不飽和環状アルキルは、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどを含む。環状アルキルは、「同素環」とも呼ばれ、デカリンおよびアダマンチルなどのジ同素環およびポリ同素環を含む。不飽和アルキルは、隣接した炭素原子の間に少なくとも１個の二重結合または三重結合を含有する（それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と呼ばれる）。典型的な直鎖および分岐アルケニルは、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニルなどを含む；一方、典型的な直鎖および分岐アルキニルは、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニルなどを含む。
【００１５】
「アリール」は、フェニルまたはナフチルなどの芳香族炭素環部分を意味する。
【００１６】
「アリールアルキル」は、例えば、ベンジル（すなわち、−ＣＨ２−フェニル）、−ＣＨ２−（１−または２−ナフチル）、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、−ＣＨ（フェニル）２などのアリール部分で置換される少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキルを意味する。
【００１７】
「ヘテロアリール」は、５ないし１０員の芳香族複素環を意味し、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有し、少なくとも１個の炭素原子を含有し、単環系も二環系も含む。典型的なヘテロアリールは、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ピロリル、インドリル、イソインドリル、アザインドリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニルおよびオキサジアゾリルを含む（しかし、これに限定されるものではない）。
【００１８】
「ヘテロアリールアルキル」は、例えば、−ＣＨ２−ピリジニル、−ＣＨ２−ピリミジニルなどのヘテロアリール部分で置換される少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキルを意味する。
【００１９】
「複素環」（本明細書において「ヘテロ環」または「ヘテロシクリル」とも呼ばれる）は、飽和、不飽和または芳香族のいずれかであり、窒素、酸素および硫黄（ここで、窒素および硫黄ヘテロ原子は、所望により酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は、所望により四級化されていてもよい）から独立して選択される１から４個のヘテロ原子を含む、５ないし７員の単環式または７ないし１４員の多環式の複素環を意味し、上記の複素環が、ベンゼン環ならびに三環系（およびそれ以上の）複素環に縮合される二環式環を含む。複素環は、ヘテロ原子または炭素原子を介して結合してもよい。複素環は、上記のヘテロアリールを含む。したがって、上記の芳香族ヘテロアリールに加えて、複素環はまた、モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペリジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロプリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニルなどを含む（しかし、これに限定されるものではない）。
【００２０】
「複素環アルキル」は、例えば、−ＣＨ２−モルホリニル、−ＣＨ２−ピリジル、−ＣＨ２−ピリミジニルなどの複素環で置換される少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキルを意味する。
【００２１】
本明細書に用いられる「置換」なる語は、上記のいずれかの置換基（すなわち、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環または複素環アルキル）上の少なくとも１個の水素原子が置換基で置換されるということを意味する。ケト置換基（「−Ｃ（＝Ｏ）−」）の場合において、２個の水素原子が置換される。本発明の範囲内にある「置換基」は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシ、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、複素環、置換複素環、複素環アルキル、置換複素環アルキル、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ −ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ −Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＳＨ、−ＳＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒａ、−ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒａ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａ、ここで、ＲａおよびＲｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、複素環、置換複素環、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルである。
【００２２】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
【００２３】
「ハロアルキル」は、例えば、トリフルオロメチルなどのハロゲンで置換される少なくとも１個の水素原子を有するアルキルを意味する。ハロアルキルは置換アルキルの特定の実施態様であり、ここで、アルキルは１個または複数のハロゲン原子で置換される。
【００２４】
「アルコキシ」は、例えば、−Ｏ−メチル、−Ｏ−エチルなどの酸素架橋（すなわち、−Ｏ−アルキル）を介して結合されるアルキル部分を意味する。
【００２５】
「ハロアルコキシ」は、例えば、トリフルオロメトキシなどのハロゲンで置換される少なくとも１個の水素原子を有するアルコキシを意味する。
【００２６】
「アルコキシアルキル」は、例えば、メトキシメチルなどのアルコキシで置換される少なくとも１個の水素原子を有するアルキルを意味する。
【００２７】
「チオアルキル」は、−Ｓ−メチル、−Ｓ−エチルなどの硫黄架橋（すなわち、−Ｓ−アルキル）を介して結合されるアルキル部分を意味する。
【００２８】
「アルキルアミノ」および「ジアルキルアミノ」は、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノなどの窒素架橋（すなわち、−ＮＨアルキルまたは−Ｎ（アルキル）（アルキル））を介して結合される１または２個のアルキル部分を意味する。
【００２９】
「ヒドロキシアルキル」は、少なくとも１個のヒドロキシル基で置換されるアルキルを意味する。
【００３０】
本明細書に示される発明の実施態様は、例示を目的とするものあって、限定を目的とするものではない。本発明の一の実施態様において、（Ｒ１）ｎ−は、ｎが、０、１または２である、ｎ回得られるアルキル置換基Ｒ１を表す。したがって、本発明の典型的な化合物は、以下の構造（ＩＩａ）から（ＩＩｄ）：
【化３】
を含む。
【００３１】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ１はＣ１−Ｃ６アルキルであり、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルおよびイソブチルにより例示してもよい。
【００３２】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ２はＣ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールである。特定の実施態様において、Ｒ２は、例えば、メチルなどのＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００３３】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ２は、下記の構造（ＩＩＩ）：
【化４】
［式中：Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルである］
中の−ＯＲ３である。
【００３４】
Ｒ２が−ＯＲ３である、本発明のさらなる実施態様において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシアルキルまたはヘテロアリールアルキルである。
【００３５】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６置換アルキルである。
【００３６】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ２は、下記の構造（ＩＶ）：
【化５】
［式中：Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルである（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）］
中の−ＮＲ４ａＲ４ｂである。
【００３７】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルである。本発明のさらなる実施態様において、Ｒ５は、水素であるかまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。さらなる実施態様において、Ｒ５はメチルである。
【００３８】
本発明のさらなる実施態様において、Ａｒは、下記の構造（Ｖ）：
【化６】
［式中：ｍは１−４を含めた整数であり、それぞれのＲ６は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロゲンである］
中に示されるフェニルである。
【００３９】
特定の実施態様において、それぞれのＲ６は、独立して、メチル、メトキシまたはトリハロメチルである。
【００４０】
本発明のさらなる実施態様において、Ａｒは、下記の構造（ＶＩａ、ＶＩｂおよびＶＩｃ）：
【化７】
それぞれに示されるピリジルであり、置換基はピリジル環の炭素原子番号２、３または４を介してピラゾロピリジン核に結合する。
【００４１】
本発明のさらなる実施態様において、Ａｒはピリジルであり、ピリジン環の炭素原子番号２、３または４を介してピラゾロピリジン核に結合し、下記の構造（ＶＩＩａ、ＶＩＩｂおよびＶＩＩｃ）：
【化８】
それぞれに示され、ｍは１−３を含めた整数であり、それぞれのＲ６は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロゲンである。
【００４２】
本発明のさらなる実施態様において、Ｈｅｔは、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、フラザニル、ピリジル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルおよびテトラヒドロインドロンに限定することなく例示する、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである。
【００４３】
本発明の化合物は、一般に、遊離塩基として利用してもよい。一方、本発明の化合物は酸付加塩の形態で用いてもよい。本発明の遊離塩基アミノ酸化合物の酸付加塩は、当業者に周知の方法で調製してもよく、有機および無機酸から形成してもよい。適当な有機酸として、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、桂皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。適当な無機酸として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸が挙げられる。したがって、構造（Ｉ）の「医薬上許容される塩」なる語は、ありとあらゆる医薬上許容される塩の形態を含むと意図される。
【００４４】
一般に、構造（Ｉ）の化合物は、該分野の当業者に周知の有機合成法ならびに実施例に記載の典型的な方法にしたがって作製してもよい。例えば、構造（Ｉ）の合成は、一般に、以下の反応スキーム１から反応スキーム９にしたがって開始してもよく、スキームは、例示の目的のために示されるのであって、限定されるものではない。
【００４５】
反応スキーム１
【化９】
７−クロロピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位でのアルキル化は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）およびＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中鉄（ＩＩＩ）アセチルアセトネートなどの鉄（ＩＩＩ）塩存在下において、臭化アルキルマグネシウムを経て開始する（Ｆｕｒｓｔｎｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００２，１２４，１３８５６−１３８６３）。
【００４６】
反応スキーム２
【化１０】
上記の反応スキーム２のＲ２Ｂ（ＯＨ２）で示される、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールのボロン酸との反応による７−クロロピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位での塩素置換は、高温でテトラキス（トリフェニルホスホリン）パラジウム（０）などの適当なパラジウム触媒およびジオキサンなどの適当な溶媒中炭酸カリウムなどの適当な塩基の存在下にて起こる。
【００４７】
反応スキーム３
【化１１】
上記の反応スキーム３のＨＮＲ４ａＲ４ｂなどのアミンによる７−クロロピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位での塩素置換は、高温でアセトニトリル中ｐ−トルエンスルホン酸などの酸の存在下にて起こる。
【００４８】
反応スキーム４
【化１２】
適当な窒素複素環の窒素原子による臭化またはヨウ化アリールの置換は、ヨウ化銅（Ｉ）、ジアミン共触媒および塩基などの銅触媒の存在下にて起こる（Ｋｌａｐａｒｓら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００２，１２４，７２４１−７４２８）。適当なジアミンとして、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンおよびトランス−１，２−シクロヘキサンジアミンが挙げられる、適当な塩基は、炭酸カリウムおよびリン酸三カリウムである。
【００４９】
反応スキーム５
【化１３】
３−ブロモ−７−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位でのアミンによる塩素置換は、高温でｐ−トルエンスルホン酸の存在下にて起こる。
【００５０】
反応スキーム６
【化１４】
有機ホウ素誘導体と有機ハロゲン化物のパラジウム触媒によるクロスカップリングは、ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの３位での置換を達成するために用いることができる。
【００５１】
反応スキーム７
【化１５】
ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位の塩素についてのアミン置換は、高温でｐ−トルエンスルホン酸存在下にて起こり、スキーム３に記載の同様の過程でアミンを得る。中間体の第二級アミンは、ＴＨＦまたはＤＭＦなどの不活性溶媒中ＮａＨなどの塩基存在下において、上記の反応スキーム７のハロゲン化アルキルＲ４ｂＸとの反応により第三級アミンに変換することができる。
【００５２】
反応スキーム８
【化１６】
７−ヒドロキシピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核は、ＴＨＦまたはトルエンなどの不活性無水溶媒中トリフェニルホスフィンなどのホスフィンおよびジエチルアゾジカルボン酸塩などのアゾジカルボン酸塩を用いる光延条件下で、上記の反応スキームの（Ｒ３）ＯＨなどの第一級または第二級アルコールでアルキル化することができる。
【００５３】
反応スキーム９
【化１７】
７−ヒドロキシピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンは、上記の反応スキーム９のＲ３Ｂｒなどの第一級または第二級ハロゲン化アルキルでアルキル化でき、高温でＮａＨなどの適当な塩基およびＴＨＦまたはＤＭＦなどの適当な無水溶媒を用いて、アルコキシ化合物を得ることができる。
【００５４】
反応スキーム１０
【化１８】
フェニルリチウムは、ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位のアルデヒド官能基と反応し、フェニル−（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル）−メタノールを得る。
【００５５】
ＣＲＦ受容体アンタゴニストとしての化合物の有効性を、様々なアッセイ方法により決定してもよい。本発明の適当なＣＲＦアンタゴニストは、かかる受容体に対するＣＲＦの特定の結合を阻害することができる。構造（Ｉ）の化合物は、かかる目的のために１以上の一般的に許容されるアッセイによりＣＲＦアンタゴニストとして活性を評価してもよく、ＤｅＳｏｕｚａら（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ７：８８，１９８７）およびＢａｔｔａｇｌｉａら（Ｓｙｎａｐｓｅ １：５７２，１９８７）に記載のアッセイを含むが、これに限定されるものではない。上記のように、適当なＣＲＦアンタゴニストは、ＣＲＦ受容体のアフィニティーを示す化合物を含む。ＣＲＦ受容体のアフィニティーは、かかる受容体（例、ラット大脳皮質膜から調製した受容体）に対する放射性標識ＣＲＦ（例、［１２５Ｉ］チロシン−ＣＦＲ）の結合を阻害する化合物の能力を測定する結合試験により決定してもよい。ＤｅＳｏｕｚａら（ｓｕｐｒａ，１９８７）に記載の放射性リガンド結合アッセイは、ＣＲＦ受容体に対する化合物のアフィニティーを決定するアッセイを提供する。かかる活性は、典型的には、受容体から５０％の放射性標識リガンドを置換するために必要な化合物の濃度としてＩＣ５０から算出され、下記の等式：
【数１】
［式中：Ｌ＝放射性リガンドおよびＫＤ＝受容体に対する放射性リガンドのアフィニティーである］
により算出される「Ｋｉ」値として記録される（Ｃｈｅｎｇ ａｎｄ Ｐｒｕｓｏｆｆ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２：３０９９，１９７３）。
【００５６】
ＣＲＦ受容体の結合を阻害することに加えて、化合物のＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性は、ＣＲＦについての活性を拮抗する化合物の能力により定めてもよい。例えば、ＣＲＦは、アデニル酸シクラーゼ活性を含む様々な生化学過程を刺激することが知られている。そのため、化合物は、例えば、ｃＡＭＰ濃度を測定することによりＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性を拮抗する能力によるＣＲＦアンタゴニストとして評価してもよい。Ｂａｔｔａｇｌｉａら（ｓｕｐｒａ，１９８７）に記載のＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性アッセイは、ＣＲＦ活性を拮抗するための化合物の能力を測定するアッセイを提供する。したがって、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性は、一般に、初期の結合アッセイ（例えば、ＤｅＳｏｕｚａ（ｓｕｐｒａ，１９８７）に開示）およびｃＡＭＰスクリーニングプロトコル（例えば、Ｂａｔｔａｇｌｉａ（ｓｕｐｒａ，１９８７）に開示）を含むアッセイ技法により測定してもよい。
【００５７】
ＣＲＦ結合アフィニティーに関して、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、典型的には、１０μＭ未満のＫｉを有する。本発明の一の実施態様において、ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、１μＭ未満のＫｉを有する。別の実施態様において、本発明のＣＲＦアンタゴニストは、０．２５μＭ（すなわち、２５０ｎＭ）未満のＫｉを有する。以下により詳細に記載しているので、Ｋｉ値は、実施例２０に記載の方法により分析してもよい。
【００５８】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、ＣＲＦ受容体部位で活性を示してもよく、内分泌的、精神的、神経的障害または疾患を含む、広範囲の障害または疾患の治療における治療薬として用いてもよい。より具体的には、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、ＣＲＦの分泌過多から生じる生理的病態または障害を治療することに有用であってもよい。ＣＲＦは、ストレスに対する内分泌、習性的および自動反応を活性化し、調節する重要な神経伝達物質であると考えられているので、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、精神神経疾患を治療するために用いることができる。本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストで治療可能でありうる精神神経疾患は、鬱などの情動障害、全般性不安障害などの不安に関する障害、パニック障害、強迫性障害、異常攻撃、不安定狭心症および反応性高血圧などの心臓血管の異常；および拒食症、過食症および過敏性腸症候群などの摂食障害を含む。ＣＲＦアンタゴニストはまた、様々な疾患状態ならびに発作についてのストレス誘導性免疫抑制を治療することに有用でありうる。本発明のＣＲＦアンタゴニストの別の使用は、炎症状態（関節リウマチ、ブドウ膜炎、ぜんそく、炎症性大腸炎および胃腸運動など）、疼痛、クッシング病、乳児けいれん、てんかんおよび幼児と成人における別の発作ならびに薬物乱用および禁断症状（例、アルコール依存症）の治療を含んでいてもよい。
別の実施態様において、本発明は、本発明の１以上のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含む医薬組成物を提供する。本発明の化合物を動物（例、哺乳類）に対する投与の目的のために、医薬組成物として製剤化してもよい。本発明の医薬組成物は、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニスト（すなわち、構造（Ｉ）の化合物）および医薬上許容される担体および／または希釈剤を含む。ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、特定の障害を治療するための有効である量、すなわち、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性を達成するために十分な量、好ましくは、患者に対し許容される毒性を有する組成物中に含まれる。一の実施態様において、本発明の医薬組成物は、投与経路によるが投与量当たり０．１ｍｇから２５０ｍｇ、より具体的には、１ｍｇから６０ｍｇの量のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含む。別の実施態様において、投与量は、例えば、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇまたは２０ｍｇであってもよい。適当な濃度および投与量は、当業者が容易に決定することができる。
【００５９】
医薬上許容される担体および／または希釈剤は、当業者に周知である。液剤として製剤化される組成物における、許容される担体および／または希釈剤は、生理食塩水および滅菌水を含み、酸化防止剤、緩衝液、静菌薬および別の一般的添加物を所望により含んでいてもよい。組成物はまた、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに加えて、希釈剤、分散剤および界面活性剤などの一般的添加剤、結合剤および潤滑油を含む丸薬、カプセル、顆粒または錠剤として製剤化してもよい。当業者は、適当な手法、および例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １９９０に記載の慣例にしたがってＣＲＦ受容体アンタゴニストをさらに製剤化してもよい。
【００６０】
加えて、プロドラッグもまた、本発明の範囲内に含まれる。かかるプロドラッグが患者に投与されると、プロドラッグは、インビボで構造（Ｉ）の化合物を放出する共有結合した担体である。プロドラッグは、一般的に、通常の操作またはインビボで、親化合物を産生するために開裂する修飾方法で官能基を修飾することにより調製される。
【００６１】
構造（Ｉ）の化合物は、キラル中心を有していてもよく、ラセミ体、ラセミ混合物としておよび個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして生じてもよい。全てのかかる異性体は、その混合物を含む、本発明内に含まれる。さらに、構造（Ｉ）の化合物の結晶体は、多型として存在してもよく、本発明中に含まれる。加えて、構造（Ｉ）の化合物は、水または別の有機溶媒と溶媒和物を形成してもよい。かかる溶媒和物は、同様に、本発明の範囲内に含まれる。
【００６２】
別の実施態様において、本発明は、内分泌的、精神的および神経的障害または疾患を含む、様々な障害または疾患を治療する方法を提供する。かかる方法は、障害または疾患を治療するのに十分な量で哺乳類（例、ヒト）に対し本発明の化合物を投与することを含む。かかる方法は、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト、好ましくは、医薬組成物の形態での全身投与を含む。本明細書で用いられるように、全身投与は、経口および非経口の投与方法を含む。経口投与における、ＣＲＦ受容体アンタゴニストの適当な医薬組成物は、散剤、顆粒、丸薬、錠剤およびカプセルならびに液剤、シロップ、懸濁液および乳濁液を含む。これらの組成物はまた、香料、保存料、懸濁化剤、増粘剤および乳化剤ならびに他の医薬上許容される添加剤を含んでいてもよい。非経口投与における、本発明の化合物は、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに加えて、緩衝液、抗酸化剤、静菌薬およびかかる液剤に一般的に用いられる他の添加剤を含んでいてもよい、水性注射液で調製することができる。
【００６３】
別の実施態様において、本発明は、放射性または非放射性医薬品の使用により体内の特定部位の診断の可視化を可能とする。本発明の化合物の使用は、患者に関する生理学的、機能的または生物学的評価を提供し、疾患または病理学的検出および評価を提供する。放射性医薬品は、シンチグラフィー、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）および単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）で用いられる。かかる出願における、放射性同位体は、１２３Ｉ（ＰＥＴ）、１２５Ｉ（ＳＰＥＣＴ）および １３１Ｉを含むヨウ素（Ｉ）、９９Ｔｃ（ＰＥＴ）を含むテクネチウム（Ｔｃ）、３１Ｐおよび３２Ｐを含むリン（Ｐ）、５１Ｃｒを含むクロム（Ｃｒ）、１１Ｃを含む炭素（Ｃ）、１８Ｆを含むフッ素（Ｆ）、２０１Ｔｌを含むタリウム（Ｔｌ）としてかかる元素ならびに陽電子および電離放射線の放射体などが包含される。非放射性医薬品は、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）、透視法および超音波診断に用いられる。かかる出願における同位体は、１５３Ｇｄを含むガドリニウム（Ｇｄ）、鉄（Ｆｅ）、バリウム（Ｂａ）、マンガン（Ｍｎ）およびタリウム（Ｔｌ）としてかかる元素が包含される。かかる構成要素はまた、混合物の特定の標的部位の存在を特定し、混合物の分子を標識化することに有用である。上記のように、本発明の化合物の投与は、多種多様の障害または疾患を治療するために有用であってもよい。特に、本発明の化合物は、鬱、不安障害、パニック障害、強迫性障害、異常攻撃、不安定狭心症、反応性高血圧、拒食症、過食症、過敏性腸症候群、ストレス誘導性免疫抑制、発作、炎症、疼痛、クッシング症、乳児けいれん、てんかんおよび薬物乱用または禁断症状の治療において哺乳類に対し投与してもよい。
【００６４】
以下の実施例は、例示のために提供するものであり、限定するものではない。
【実施例】
【００６５】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、実施例に開示される方法により調製してもよい。実施例２０は、受容体結合アフィニティーを測定する方法を示し、実施例２１は、ＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性における本発明のスクリーニング化合物に対するアッセイを開示している。
略語：
ＬＡＨ：水素化アルミニウムリチウム
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＡＡ：アセト酢酸エチル
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分析
ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３：トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム
Ｐｄ−Ｃ：炭素担体パラジウム（１０％）
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ａｃａｃ：アセチルアセトネート
ＭＤＡ：マロンジアルデヒドビス−ジメチルアセタール
ＭＥＥＡ：（２−メトキシエチル）エチルアミン
調製用ＨＰＬＣ−ＭＳ
Ｇｉｌｓｏｎ製２１５オートサンプラー／フラクションコレクター、ＵＶ検出器およびＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ製ＡＱＡ Ｓｉｎｇｌｅ ＱＵＡＤ質量検出器（エレクトロスプレー）装着のＧｉｌｓｏｎ製ＨＰＬＣ−ＭＳ；
ＨＰＬＣカラム：ＢＨＫ ＯＤＳ−Ｏ／Ｂ、５μ、３０ｘ７５ｍｍ
ＨＰＬＣ勾配：３５ｍＬ／分、７分にわたり水中１０％アセトニトリルないし１００％アセトニトリル、１００％アセトニトリルで３分間維持
分析方法１−高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＭＳ）
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＳｙｎｅｒｇｉＭＡＸ−ＲＰ、４ミクロン、２ｘ５０ｍｍ；
移動相：Ａ＝水、０．０２５％のＴＦＡ；Ｂ＝アセトニトリル、０．０２５％のＴＦＡ；
勾配：１３分にわたり５％Ｂ／９５％Ａないし９５％のＢ／５％のＡ、次いで、２．５分保持；
流速：１．０ｍＬ／分；
ＵＶ波長：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ．
分析方法２−超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）
プラットフォーム：Ｂｅｒｇｅｒ製ＦＣＭ１２００ ＳＦＣポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔ製ダイオードアレイ検出器、Ａｇｉｌｅｎｔモデル２２０マイクロプレートオートサンプラー、Ａｇｉｌｅｎｔモデル１９４６ ＭＳＤ（ＡＰＣＩインターフェース）；
カラム：Ｂｅｒｇｅｒ製ピリジン６０Ａ、４ミクロン、３ｘ１５０ｍｍ；
溶媒：ＳＦＣグレードＣＯ２、１．５％の水および０．０２５％のエタンスルホン酸を有するＯｐｔｉｍａ−グレードメタノール；
流速：４．０ｍＬ／分、１２０Ｂａｒの背圧；
勾配：２．４分にわたり５−５５％メタノール／ＣＯ２
保持時間（ｔＲ）を、分析方法２で用いられる化合物１３−１以外の分析方法１で用いられる全ての化合物に対し記録した。
【００６６】
実施例１
３−ブロモ−７−クロロ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンおよび７−ベンジルオキシ−３−ブロモ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン試薬の合成
【化１９】
工程１Ａ：
ピラゾール（３０．０ｇ、４４１ｍｍｏｌ）を、氷浴中で硫酸（２２０ｍＬ、９７％）に滴下した。混合物を５５℃に加熱し、硝酸（３０ｍＬ、７０％、０．５ｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応混合物を、５５℃で３時間攪拌し、冷却し、氷水（６００ｍＬ）に注ぎ、６ＮのＮａＯＨ溶液で中和した（ｐＨ＝７）。反応混合物を酢酸エチルで抽出した（５ｘ１５０ｍＬ）。有機相を合わせ、水（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し減圧下で濃縮し、白色固体として化合物１ａを得た（３７．０ｇ、３２６ｍｍｏｌ、７４％）；ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１３（１００％）。
工程１Ｂ：
化合物１ａ（１５．０ｇ、１３３ｍｍｏｌ）を、エタノール（１００ｍＬ）中１０％炭素担体パラジウム（７．０ｇ、６．６５ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を、水素ガス圧下において（４０ｐｓｉ）、室温で３時間振盪した。触媒を、セライト（登録商標）の一部に通して濾過により除去し、溶媒を蒸発した。化合物１ｂを赤紫色油として得（１０．５ｇ、１２６ｍｍｏｌ、９５％）、精製することなく次の工程に用いた；ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝８３（１００％）。
工程１Ｃ：
１ｂ（１０．５ｇ、１２６ｍｍｏｌ）、アセト酢酸エチル（１８．０ｇ、１４０ｍｍｏｌ）および触媒量のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．３ｇ、６．６５ｍｍｏｌ、５％）のベンゼン（１００ｍＬ）中溶液を、ディーン−スターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）・トラップで１時間還流した。溶媒を減圧下で除去し、短いシリカクロマトグラフィーカラムで流すことによりイミンを精製し、溶媒の蒸発後黄褐色固体として化合物１ｃを得た（２２．４ｇ、１２５ｍｍｏｌ、９１％）；ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝１９５（１００％）。
工程１Ｄ：
化合物１ｃ（７．０３ｇ、３５．９ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（３０ｍＬ）およびジフェニルエーテル（３０ｍＬ）の沸騰溶液に添加した。混合物を、固体が形成するまで加熱した（５分）。反応混合物をさらに２分間加熱し続けた。室温に冷却後、ジエチルエーテル（３００ｍＬ）を添加し、反応混合物を１５分間攪拌した。固体をジエチルエーテルですすいだ。黄褐色結晶性固体として化合物１ｄを得た（５．０９ｇ、３４．１ｍｍｏｌ、９５％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝１５０．０。
工程１Ｅ：
オキシ塩化リン（３０ｍＬ）中化合物１ｄ（４．５８ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）を、１１０℃で３０分間加熱した。室温に冷却後、反応混合物を氷に注ぎ、ｐＨをＮａＯＨ溶液（６Ｎ）でｐＨ＝５に合わせた。固体を濾過で収集し、母水層を酢酸エチルで抽出した（３ｘ２５０ｍＬ）。上記の固体を合わせた有機相中で溶解し、ブライン溶液で洗浄し（１ｘ２５０ｍＬ）、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。短いシリカゲルクロマトグラフィーカラムで流すことにより濃縮物を精製し、淡黄色固体として化合物１ｅを得た（４．５０ｇ、２６．８ｍｍｏｌ、８７％）；ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝１６７（１００％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝１６８。
工程１Ｆ：
化合物１ｅ（６００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ）を、氷浴中で水／メタノール（１２ｍＬ／１２ｍＬ）の混合物で溶解した。臭素（６２９ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ／ＭｅＯＨ １ｍＬ／１ｍＬ）の溶液中溶液を冷却した混合物に滴下した。１０分後、溶液がより透明となり、ＬＣ／ＭＳはもはやクロロ化合物を示さなかった。反応混合物を、ＭｅＯＨを除去するために濃縮した。反応混合物を酢酸エチルで抽出した（３ｘ５０ｍＬ）。有機相を合わせ、ブライン溶液（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物１ｆを淡黄色固体として得た。ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝２４５、２４７（１００％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝２４６．２。
工程１Ｇ：
３０ｍＬ無水ジオキサン中化合物１ｆ（４．９ｇ、１９ｍｍｏｌ）に、１２時間還流しながら、ＮａＨ（６０％鉱物油中溶液の１．０ｇ）、次いで、ベンジルアルコール（２．３ｍＬ）を添加した。反応物をＨ２Ｏで急冷し、６ＮのＨＣｌで中和した。反応混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（１：１の酢酸エチル：ヘキサン）に付した後に化合物１ｇを得た（３．５ｇ、５６％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３３２．１。
【００６７】
実施例２
１−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピラゾールおよび２−メチル−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル試薬の合成
【化２０】
工程２Ａ：
４−ブロモ−３−メチルアニリン（１０．２ｇ）を６ＮのＨＣｌ（８５ｍＬ）中で懸濁し、０℃に冷却した。亜硝酸ナトリウム（４０ｍＬのＨ２Ｏ中４ｇ）の溶液を、１０分かけて添加した。反応物を０℃で１５分間攪拌し、次いで、塩化第一スズ二水和物（２５ｍＬの１２ＮのＨＣｌ中３６ｇ）を添加した。反応混合物を、０℃で２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキを冷Ｈ２Ｏで洗浄し、黄褐色固体として塩酸４−ブロモ−３−メチルフェニルヒドラジンを得た（化合物２ａ、２０ｇ）。
工程２Ｂ：
工程２Ａから得られる化合物（２０ｇ）を５０ｍＬのエタノール中で懸濁した。マロンジアルデヒドビス−ジメチルアセタール（１１．０ｍＬ、６７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２時間８５℃に加熱した。反応混合物を、重炭酸ナトリウムで中和し、ＤＣＭで洗浄することにより抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を酢酸エチル中で溶解し、混合物をセライト（登録商標）の一部に通して濾過した。濾液を蒸発させ、油性残渣をカラムクロマトグラフィー（１：１の酢酸エチル：ヘキサン）に付して精製し、琥珀油として１−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピラゾールを得た（化合物２ｂ、９．６ｇ、７３％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝２３８．８。
工程２Ｃ：
ｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍヘキサン中溶液の７．９ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を、−７８℃で化合物２ｂ（４．７ｇ、２０ｍｍｏｌ）の１００ｍＬのＴＨＦ中溶液に添加した。混合物を１時間かけて−２５℃に加温し、次いで、混合物を−７８℃に冷却した。トリメチルホウ酸塩（３．４ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温に加温した。続いて、塩酸（１Ｎ、１００ｍＬ）を添加し、混合物を１６時間攪拌した。水層のｐＨを、水酸化ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム溶液を用いて３−４に合わせ、次いで、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を濃縮し、次いで、残渣をエーテルと０．５Ｎの水酸化ナトリウム溶液の間に分配した。水層をさらに２回に分けてエーテルで抽出し、次いで、濃塩酸を用いてｐＨ３−４に酸性化した。混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた酢酸エチル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発し、琥珀色ゴムとして２−メチル−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸を得た（化合物２ｃ、３．５ｇ）。
工程２Ｄ：
化合物２ｂ（１５ｍＬジオキサン中２．０ｇ）の溶液に、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．４ｇ）、酢酸カリウム（２．４ｇ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（５００ｍｇ）を添加した。反応物を１２時間８５℃に加熱した。反応混合物をセライト（登録商標）の一部に通して濾過し、濾過ケーキを酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル：ヘキサン）に付して褐色液体を精製し、黄色油として２−メチル−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステルを得た（化合物２ｄ、１．８ｇ、７５％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝２８５．０。
以下の化合物：２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（化合物２ｅ）；２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（化合物２ｆ）；および４−（ピラゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（化合物２ｇ）もまた、化合物２ｄを得る上記の製法により調製した。
【００６８】
実施例３
７−ベンジルオキシ−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンおよび１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−オール試薬の合成
【化２１】
工程３Ａ：
化合物１ｇ（５ｍＬのトルエン中１．０ｇ）の溶液にエタノール（２ｍＬ）を添加した。かかる混合物に化合物２ｄ（１．３ｇ）、次いで、水性炭酸ナトリウム（３．５ｍＬの２．０Ｍ溶液）、飽和水性水酸化バリウム（１ｍＬ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を攪拌し、８５℃で１２時間加熱した。混合物を冷却し、有機相を分離した。水層を酢酸エチルで洗浄し（３ｘ５０ｍＬ）、合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、黄色固体に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（３０％酢酸エチル：ヘキサン）に付して精製し、灰白色固体として７−ベンジルオキシ−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンを得た（化合物３ａ、０．８２ｇ、６７％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝４１１．２。
以下の化合物：７−ベンジルオキシ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｂ）； ７−ベンジルオキシ−３−［２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｃ）；および７−ベンジルオキシ−３−［４−（ピラゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｄ）もまた、化合物３ａの調製に用いた製法により調製した。
工程３Ｂ：
化合物３ａ（３０ｍＬエタノール中２．０ｇ）の溶液に、１０％炭素担体パラジウム（０．３ｇ）を添加した。反応物を、４０ｐｓｉの水素圧下で２時間振盪した。反応混合物をセライト（登録商標）の一部を通して濾過し、濾過ケーキをエタノールで洗浄した。濾液を濃縮し、灰白色固体として１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−オールを得た（化合物３ｅ、１．２ｇ、７７％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３１９．０。
以下の化合物：７−ヒドロキシ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチル−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｆ）；Ｐｄ／Ｃの代わりに触媒として酸化白金を用いる７−ヒドロキシ−３−［２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｇ）；および７−ヒドロキシ−３−［４−（ピラゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｈ）もまた、実施例３に示される製法により調製した。
【００６９】
実施例４
７−クロロ−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン試薬の合成
【化２２】
工程４Ａ：
化合物３ｅ（１．０ｇ）の無水アセトニトリル（１０ｍＬ）中溶液にオキシ塩化リン（０．６０ｍＬ）を添加した。反応物を、窒素下で２時間還流した。反応混合物を冷却し、Ｈ２０で氷上にて急冷した。混合物を、重炭酸ナトリウムでｐＨ８に塩基性化した。生成物を酢酸エチルで抽出した（３ｘ５０ｍＬ）。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮し、黄色油として７−クロロ−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンを得た。混合物を、溶離液として３０％酢酸エチル／ヘキサンを用いて、シリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、白色固体として１．０ｇ（９９％）の化合物４ａを得た；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３３８．２。
下記の化合物：７−クロロ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｂ）；７−クロロ−３−［２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｃ）；７−クロロ−３−［４−（ピラゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｄ）；および７−クロロ−３−（４−ブロモ−２−メトキシフェニル）−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｅ）もまた、化合物４ａの調製に用いられる製法により調製した。
【００７０】
実施例５
７−ホルミル−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン試薬の合成
【化２３】
工程５Ａ：
カテコールボラン（３６ｍＬの１．０ＭＴＨＦ中溶液、３６ｍｍｏｌ）を、フェニルアセチレン（３．０６ｇ、３０ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を窒素下で２時間加熱還流した。２−フェニル−エテニルボロン酸カテコールエステル（化合物５ａ）の冷却溶液を、さらに精製することなく用いた。
工程５Ｂ：
化合物５ａ（０．７５ｍＬの名目上１．０Ｍ溶液、０．７５ｍｍｏｌ）を窒素下で、７−クロロ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｂ、２００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）にシリンジから添加し、混合物を蒸発乾固した。ジオキサン（２ｍＬ）および水（２ｍＬ）、次いで、炭酸カリウム（１５７ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（６６ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を攪拌し、６時間加熱還流し、次いで、冷却した。水（５ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、残渣を１：２のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、黄色油として７−（２−フェニル−１−エテニル）−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンを得た（化合物５ｂ、２０１ｍｇ）。
工程５Ｃ：
化合物５ｂ（２００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の４：１のＤＣＭ／メタノール（１０ｍＬ）中溶液に、−７８℃で酸素中オゾンを流し込んだ。出発物質を消費した後、溶液に窒素を散布し 次いで、硫化ジメチル（０．２００ｍＬ）を添加し、混合物を室温に加温した。１．５時間後、溶媒を蒸発させ、残渣を、溶離液として１：２のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、黄色固体として化合物５ｃを得た（１４９ｍｇ）。
【００７１】
実施例６
２−［２−（４−ブロモ−２−メトキシ−フェニル）−２−オキソ−エチル］−イソインドール−１，３−ジオン試薬の合成
【化２４】
工程６Ａ：
濃硫酸（０．３ｍＬ）を、３−ブロモフェノール（２６．２ｇ）および無水酢酸（１５ｍＬ）の攪拌した混合物に添加した。発熱反応が起こった後に、混合物を室温に冷却した。酢酸および過剰の無水酢酸を蒸発し、残渣を氷上に注いだ。混合物をエーテルで抽出し、合わせたエーテル抽出物をブラインで洗浄し、次いで、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮し、琥珀油として酢酸３−ブロモフェニルを得た（化合物６ａ、３１．６ｇ）。
工程６Ｂ：
化合物６ａ（３１．６ｇ）および塩化アルミニウム（３５ｇ）の混合物を、１６０−１７０℃で３時間加熱した。混合物を室温に冷却し、次いで、ＤＣＭと攪拌し、混合物を氷上に注いだ。混合物を、澄んだ液体二相を得るまで攪拌した（１２時間）。層を分離し、次いで、水層を一度ＤＣＭで抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過および蒸発し、琥珀油として１−（４−ブロモ−２−ヒドロキシフェニル）−１−エタノンを得た（化合物６ｂ、３２．６ｇ）。
工程６Ｃ：
ヨードメタン（１１．２ｍＬ）を、０℃で化合物６ｂ（３２．６ｇ）、ＤＭＦ（１００ｍＬ）および炭酸カリウム（６２．５ｇ）の混合物に添加した。混合物を攪拌し、２時間かけて室温に加温した。水（２００ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過および蒸発し、黄褐色固体として１−（４−ブロモ−２−メトキシフェニル）−１−エタノンを得た（化合物６ｃ、３３．１ｇ）。
工程６Ｄ：
臭化第二銅（６４．５ｇ、２２３ｍｍｏｌ）を、化合物６ｃの５００ｍＬの酢酸エチル中溶液に添加した。混合物を攪拌し、２時間加熱還流した。冷却した反応混合物を濾過し、氷上に注ぎ、混合物を固体重炭酸ナトリウムで中和した。層を分離し、水層を酢酸エチルで一回抽出した。合わせた有機層を、水性チオ硫酸ナトリウムで一回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過および濃縮し、黄褐色固体として２，４’−ジブロモ−２’−メトキシアセトフェノンを得た（化合物６ｄ、４３．５ｇ）。
工程６Ｅ：
化合物６ｄ（４３．５ｇ）の無水ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中溶液を、５℃に冷却した。かかる溶液に、フタルイミドカリウム（２６．１ｇ、１４１ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、冷却槽を除去し、反応物を室温で３時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発し、黄褐色固体を得た。固体を、４：１のＤＣＭ／メタノールで、次いで、水ですすいだ。濾過ケーキを、トルエン中でスラリー状にし、蒸発乾固し、黄褐色固体として４’−ブロモ−２’−メトキシ−２−（フタルイミド）アセトフェノンを得た（化合物６ｅ、３９ｇ）。
【００７２】
実施例７
７−ヒドロキシ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチル−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの別途合成
【化２５】
工程７Ａ：
化合物６ｅ（１８．４ｇ、４９ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（１．８７ｇ、９．８ｍｍｏｌ）、ピラゾール（６．７ｇ、９８ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２０．４ｇ、１４８ｍｍｏｌ）の無水ジオキサン（１５０ｍＬ）中溶液に、５分間窒素を散布した。Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１．０６ｍＬ、９．８ｍｍｏｌ）をシリンジから添加し、反応容器を密封し、次いで、２９時間攪拌しながら１０５℃に加熱した。冷却し、反応混合物をセライト（登録商標）を通して濾過し、濾過ケーキを５００ｍＬのＤＣＭですすいだ。合わせた濾液を蒸発し、２９ｇの緑色固体を得、ＤＣＭで粉末にし、黄褐色固体として１１ｇの２−［２−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２−オキソ−エチル］−イソインドール−１，３−ジオン（化合物７ａ）を得た。ＬＣ／ＭＳ分析によるとかかる生成物は約１５％の出発臭化物を含有しており、さらに精製することなく用いた。
工程７Ｂ：
工程７から得られる化合物（１１ｇ、３０ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＤＭＦジメチルアセタール（８．１ｍＬ、６１ｍｍｏｌ）の混合物を、穏やかな窒素パージを有する１２５℃の浴槽中で１．５時間加熱した。さらにＤＭＦジメチルアセタール（４．０ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、２時間加熱し続けた。混合物を冷却し、次いで、減圧下で蒸発乾固し、黄褐色固体を得た。かかる固体に、無水エタノール（１００ｍＬ）中メチルヒドラジン（４．１ｍＬ、７７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３時間還流した。溶媒を蒸発し、得られた固体を、３：１のエーテル／エタノールで洗浄した。合わせた濾液を蒸発し、褐色油としてアミノピラゾール混合物を得た（９．８ｇ）。２つのピラゾール異性体の比率が、ピラゾールのメチルシグナルの１Ｈ ＮＭＲ積分で３：２になるように判定された。
工程７Ｃ：
工程７Ｂから得られる化合物（９．８ｇ、３６ｍｍｏｌ）、エチルアセト酢酸（５．１ｍＬ、４０．０ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸水和物（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）をトルエン（１５０ｍＬ）中で懸濁し、混合物をディーン−スターク・トラップを用いて水を共沸により除去しながら還流した。１．５時間後、混合物を冷却し、蒸発乾固した。残渣をジフェニルエーテル（４０ｍＬ）中で懸濁し、２２０℃より高温を保ちながら４５分かけて２０ｍＬのジフェニルエーテル（初期温度２５５℃）に添加した。添加を終了すると、混合物を室温に冷却し、次いで、２５０ｍＬのヘキサンに注ぎ込んだ。得られた析出物を収集し、ヘキサンで洗浄した。得られた化合物を、溶出液としてＤＣＭ中４％メタノールを用いてシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製した。部分的に精製した固体生成物を酢酸エチルで磨砕し、褐色固体として７−ヒドロキシ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチル−ピラゾロ［４，３ｂ］ピリジンを得た（化合物３ｆ、３．７５ｇ）。
７−ヒドロキシ−３−］４−ブロモ−２−メトキシフェニル］１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物７ｃ）もまた、化合物３ｆの調製における上記の製法により調製される（ただし、出発物質として化合物６ｅを用い、プロトコルから工程７Ａを除く）。
【００７３】
実施例８
７−イソブチル−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化２６】
工程８Ａ：
エーテル中臭化イソブチルマグネシウム（０．６ｍＬの２．０Ｍ溶液）を、０℃で０．６ｍＬのＴＨＦおよび０．１５ｍＬのＮＭＰ中化合物４ｂ（８５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）および鉄（ＩＩＩ）アセチルアセトネート（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を室温に加温し、３時間攪拌した。水性塩化アンモニウムを添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、残渣を、溶離液として２：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、黄褐色固体として化合物８−１を得た（６７ｍｇ）。塩酸塩（６８ｍｇ、黄褐色粉末）を２当量のエーテル性ＨＣｌを遊離塩基のＤＣＭ／エーテル中溶液に添加し、次いで、溶媒の蒸発により調製した。
工程８Ａにおいて臭化イソブチルマグネシウムの代わりに適当なハロゲン化アルキルマグネシウムを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表１】
【００７４】
実施例９
７−（２，４−ジメトキシ−フェニル）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化２７】
工程９Ａ：
ジオキサン（０．５ｍＬ）中化合物４ｂ（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）に、０．２５ｍＬのＨ２Ｏを添加した。混合物に、２，４−ジメトキシフェニルボロン酸（３１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、次いで、炭酸カリウム（３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１０ｍｇ、０．００１７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を攪拌し、一晩８５℃に加熱した。反応混合物を濾過し、ＨＰＬＣ ＭＳにより精製し、ＴＦＡ塩として化合物９−１を得た（３０．５ｍｇ）。
工程９Ａで用いられた２，４−ジメトキシフェニルボロン酸の代わりに適当なボロン酸またはボロン酸エステルを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表２】
【表３】
１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−７−（４−メチル−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン９−１３を化合物４ａおよび（４−メチル−３−ピリジニル）−ボロン酸を用いて同様の製法にしたがって合成した。ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３９４．８、ｔＲ＝４．６５。
【００７５】
実施例１０
エチル−（２−メトキシ−エチル）−｛３−［２−メトキシ−４−（３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イル）−フェニル］−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル｝−アミンの合成
【化２８】
工程１０Ａ：
化合物４ｅ（１．０７ｇ、２．９ｍｍｏｌ）、（２−メトキシエチル）エチルアミン （１．４３ｍＬ、１１．７ｍｍｏｌ）、ｐＴＳＡ水和物（５５０ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（２ｍＬ）の混合物を、電子レンジにて１８０℃で６０分間、次いで１９５℃で６０分間加熱した。溶媒を蒸発し、残渣を、溶離液として１：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、油として化合物１０ａ（［３−（４−ブロモ−２−メトキシ−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−エチル−（２−メトキシ−エチル）−アミン）を得た（１．１ｇ）。
工程１０Ｂ：
ヨウ化銅（Ｉ）（６ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（６２ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）および３−（トリフルオロメチル）ピラゾール（４１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、１ドラムのバイアルにて計量した。化合物１０ａ（６５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の無水ジオキサン（２ｍＬ）中溶液、次いで、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（３μｌ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルを、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）ラインキャップで密封し、１０５℃で４５分間攪拌しながら加熱した。さらに、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１０μｌ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０５℃で８時間加熱した。混合物を冷却し、濾過し（酢酸エチル洗浄）、次いで、濾液を蒸発した。残渣を、溶離液として１：２のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、油として化合物１０−１を得た（５５ｍｇ）。
工程１０Ｂで用いられた３−（トリフルオロメチル）ピラゾールの代わりに適当な複素環を用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表４】
【００７６】
実施例１１
７−（１−メトキシ−プロピル）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化２９】
工程１１Ａ：
臭化エチルマグネシウム（０．５ｍＬの３．０Ｍエーテル中溶液、１．５ｍｍｏｌ）を、−７８℃で化合物５ｃ（８０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に添加した。５分後、反応物を水性塩化アンモニウムで急冷し、混合物を室温に加温した。混合物を酢酸エチルで抽出した。抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し油を得た。１回量５０ｍｇの化合物５ｃを用いてかかる製法を繰り返し、合わせて得られた化合物を、１：３のヘキサン／酢酸エチルで溶出しながらシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、黄色固体として化合物１１ａを得た（２３ｍｇ）。
工程１１Ｂ：
水素化ナトリウム（油中２０ｍｇの６０％分散液、０．４８ｍｍｏｌ）を、室温で化合物１１ａ（２２ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．２ｍＬ）中溶液に添加した。５分後、ヨウ化メチル（１０μｌ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０分間攪拌した。水性リン酸二水素ナトリウム（１０％）を添加し、混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた抽出物を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し油を得、溶離液として１：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、黄色油として化合物１１−１を得た（２１ｍｇ）；ＭＷ＝３９１．４７；ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３９２．０；ｔＲ＝４．８８。
【００７７】
実施例１２
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−７−［フェニル−（２，２，２−トリフルオロ−エトキシ）−メチル］−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化３０】
工程１２Ａ：
フェニルリチウム（０．２５ ｍＬの１．９Ｍシクロヘキサン／エーテル中溶液、０．４８ｍｍｏｌ）を、室温で化合物５ｃ（４５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に添加した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１：３のヘキサン／酢酸エチル）に付して、黄色油として化合物１２ａを得た（３６ｍｇ）。
工程１２Ｂ：
化合物１２ａ（３５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（０．４ｍＬ）中溶液を、引き続き、２，２，２−トリフルオロエタノール（０．０５７ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）、ジエチルアゾジカルボン酸塩（０．０３ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で８時間攪拌し、次いで、密封したバイアルにて６９℃で１５時間加熱した。溶媒を蒸発し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー、次いで、イオン交換クロマトグラフィー（Ｖａｒｉａｎ製ＳＣＸカートリッジ、１：１のＤＣＭ／メタノール、次いで、メタノール中１．０Ｍアンモニアで溶出）、次いで、調製用薄層クロマトグラフィーにより精製し、黄色油として化合物１２−１を得た（５ｍｇ）；ＭＷ＝５０７．５１４；ｔＲ＝７．２７。
【００７８】
実施例１３
［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−ジエチル−アミンの合成
【化３１】
工程１３Ａ：
化合物１ｆ（５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、ｐＴＳＡ−Ｈ２Ｏ（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）およびジエチルアミン（２００ｍｇ、３．３１ｍｍｏｌ）の溶液を、密封したバイアルにて１８０℃で１７分間、電子レンジで加熱した。過剰の試薬を蒸発し、酢酸エチル（５ｍＬ）を添加した。有機層を飽和水性重炭酸ナトリウム（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）を洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶離液として１：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、油として（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル）−ジエチル−アミン（化合物１３ａ、４０ｍｇ）を得た。
工程１３Ｂ：
化合物１３ａ（４０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、化合物２ｃ（４１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１５ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）、水性炭酸ナトリウム（０．３ｍＬの２Ｍ溶液、０．６ｍｍｏｌ）、トルエン（２ｍＬ）およびエタノール（２ｍＬ）の混合物を、密封したバイアルにて１６時間攪拌しながら１００℃で加熱した。混合物を冷却し、濾過し、調製用ＨＰＬＣにより精製し、［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−ジエチル−アミンを得た（化合物１３−１、３．５ｍｇ）。
工程１３Ａで用いられるジエチルアミンの代わりに適当なアミンを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表５】
【００７９】
実施例１４
［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−ビス−（２−メトキシ−エチル）−アミンの合成
【化３２】
工程１４Ａ：
化合物４ａ（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に、水素化ｐＴＳＡ（４１ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ビス（２−メトキシエチル）アミン（０．０３２ｍＬ、０．２４ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（０．５ｍＬ）を添加した。反応物を、マイクロ波で２０分間２００℃に加熱した。反応混合物をＨＰＬＣ／ＭＳにより精製し、ＴＦＡ塩として［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−ビス−（２−メトキシ−エチル）−アミンを得た（化合物１４−１、１１．２ｍｇ）。
工程１４Ａで用いられるものの代わりに適当なクロロピラゾロピリジンおよびアミンを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表６】
【表７】
【表８】
【００８０】
実施例１５
ベンジル−［３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメチル）−アミンの合成
【化３３】
工程１５Ａ：
水素化ナトリウム（３ｍｇ、鉱油中６０％懸濁液、０．０８ｍｍｏｌ）を、窒素下、室温でアセトアミドオキシム（７ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）中懸濁液に添加した。シリンジを介して化合物１４−１３（３２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をＴＨＦに注入する前に、混合物を１０分間攪拌した。混合物を、密封管にて９０℃で２時間加熱した。冷却した反応混合物をメタノールで希釈し、調製用逆相ＨＰＬＣで精製し、ＴＦＡ塩として化合物１５−１を得た；ＭＷ＝５２０．５９；ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝５２１．１；ｔＲ＝５．３８５。
【００８１】
実施例１６
ベンジル−［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−アミンおよびベンジル−［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−プロピル−アミンの合成
【化３４】
工程１６Ａ：
化合物４ａ（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）に、ｐＴＳＡ（６２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、ベンジルアミン（０．０４０ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（０．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を、１５分間マイクロ波で１８０℃に加熱した。溶離液として１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いて調製用ＴＬＣにより精製し、黄色固体として化合物１６ａを得た（４３ｍｇ）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝４０９．２。
工程１６Ｂ：
化合物１６ａ（４３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）に、１−ヨードプロパン（０．０５３ｍＬ、０．３３ｍｍｏｌ）およびＮａＨ（１３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）、次いで、無水ＴＨＦ（０．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を４時間還流した。直ちに冷却し、反応物をメタノールで急冷し、ＨＰＬＣ／ＭＳにより精製し、固体として化合物１６−１を得た（２０．８ｍｇ）。
工程１６Ａおよび１６Ｂで用いられるものの代わりに適当なクロロピラゾロピリジン、アミンおよびハロゲン化アルキルを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表９】
【表１０】
【００８２】
実施例１７
７−（１−エチル−プロポキシ）−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化３５】
工程１７Ａ：
化合物３ｅ（３０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）に、３−ペンタノール（０．０１２ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（０．１４、１．５当量）および無水ＴＨＦ（０．５ｍＬ）を添加した。反応容器に窒素を流し込んだ後、それを密封し室温で５分間攪拌した。これに続いて、アゾジカルボン酸ジエチル（０．０２４ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、室温で一晩攪拌した。反応混合物を、メタノール（０．５ｍＬ）で希釈し、ＨＰＬＣ／ＭＳにより精製し、ＴＦＡ塩として化合物１７−１を得た（３．０ｍｇ）。
工程１７Ａで用いられるものの代わりに適当なヒドロキシピラゾロピリジンおよびアルコールを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表１１】
【表１２】
【００８３】
実施例１８
１−｛３−メトキシ−４−［７−（１−メトキシメチル−プロポキシ）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニル｝−１Ｈ−ピロール−２−カルボニトリルの合成
【化３６】
工程１８Ａ：
実施例１７の製法の後、１−メトキシ−ブタン−２−オールと化合物７ｃの光延反応により、３−（４−ブロモ−２−メトキシ−フェニル）−７−（１−メトキシメチル−プロポキシ）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物１８ａ）を得た。
工程１８Ｂ：
実施例１０の工程１０Ｂの製法の後、ヨウ化銅（Ｉ）は、シアノピロールと化合物１８ａのＢｕｃｈｗａｌｄ反応を触媒し、１−｛３−メトキシ−４−［７−（１−メトキシメチル−プロポキシ）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニル｝−１Ｈ−ピロール−２−カルボニトリル（化合物１８−１）を得た。
工程１８Ｂで用いられる２−シアノピロールの代わりに適当な複素環を用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表１３】
【００８４】
実施例１９
２−［３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ］−酪酸メチルエステルの合成
【化３７】
工程１９Ａ：
化合物３ｆ（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に、（＋／−）−メチル−２−ブロモプロピオン酸塩（３４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ＮａＨ（１０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）および無水ＴＨＦ（０．５ｍＬ）を添加した。室温で５分間攪拌した後、反応混合物を、密封管にて８５℃で１２時間加熱した。冷却後、反応物をメタノール（０．５ｍＬ）で急冷し、ＨＰＬＣ／ＭＳにより精製し、固体ＴＦＡ塩として化合物１９−１を得た（１１ｍｇ）。
工程１９Ａで用いられる臭化物により、以下の表における化合物を合成した。化合物１９−３を、実施例１５のプロトコルを用いて化合物１９−２から合成した：
【表１４】
【００８５】
実施例２０
ＣＲＦ受容体結合活性
本発明の化合物は、Ｇｒｉｇｏｒｉａｄｉｓら（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ｖｏｌ５０，ｐｐ６７９−６８６，１９９６）およびＨｏａｒｅら（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ｖｏｌ６３ ｐｐ７５１−７６５，２００３）により一般的に記載の標準的な放射性リガンド結合アッセイによりＣＲＦ受容体に対する結合活性を評価してもよい。放射性標識ＣＲＦリガンドを用いることにより、アッセイは、ＣＲＦ受容体サブタイプに関する本発明の化合物の結合活性を評価するために用いてもよい。
簡単に記載すると、結合アッセイは、ＣＲＦ受容体から放射性標識ＣＲＦリガンドの置換を含む。より具体的には、結合アッセイは、ヒトＣＲＦ受容体を安定にトランスフェクションした細胞に由来する１−１０μｇの細胞膜を用いて、９６ウェルアッセイプレートにて行われる。各ウェルに、目的の化合物または参照リガンド（例えば、ソーバジン、ウロコルチンＩまたはＣＲＦ）を含む約０．０５ｍＬのアッセイ緩衝液（例、Ｄｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝生理食塩水、１０ｍＭの塩化マグネシウム、２ｍＭのＥＧＴＡ）、０．０５ｍＬの［１２５Ｉ］チロシン−ソーバジン（最終濃度〜１５０ｐＭまたはＳｃａｔｃｈａｒｄ分析により決定するおよそのＫＤ）およびＣＲＦ受容体を含有する０．１ｍＬの細胞膜懸濁液を入れる。混合物を２２℃で２時間インキュベーションし、次いで、ガラスファイバーフィルターにかけて急速濾過させることにより結合および遊離放射性リガンドを分離する。３回洗浄した後、フィルターを乾燥させ、シンチレーションカウンターを用いて放射活性（１２５Ｉからのオージェ電子）をカウントする。全ての放射性リガンド結合データを、非線形最小二乗曲線適合プログラムＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ）またはＸＬｆｉｔ（ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｔｄ）を用いて分析してもよい。
【００８６】
実施例２１
ＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性
本発明の化合物はまた、様々な機能的試験により評価してもよい。例えば、本発明の化合物は、ＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性についてスクリーニングしてもよい。ＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性を測定するためのアッセイは、全細胞調製物に対するアッセイに適合するように修飾を加えて、Ｂａｔｔａｇｌｉａら（Ｓｙｎａｐｓｅ １：５７２，１９８７）により一般的に記載されたものにしたがって実施してもよい。
より具体的には、標準的なアッセイ混合物は、０．１ｍＬの最終容量で、ＤＭＥＭ緩衝液中、以下：２ｍＭのＬ−グルタミン、２０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１ｍＭのＩＭＢＸを含んでいてもよい。刺激試験において、トランスフェクトしたＣＲＦ受容体を有する全細胞を、９６ウェルプレート中に播種し、様々な濃度のＣＲＦ関連および非関連ペプチドと共に３７℃で３０分間インキュベートし、特定の受容体サブタイプの薬理学的序列統計データを構築する。インキュベーション後、試料中のｃＡＭＰを、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製ｃＡＭＰ−ＳｃｒｅｅｎＴＭなどの標準的な市販キットを用いて測定する。化合物の機能的評価において、ｃＡＭＰ産生の５０％刺激を惹起する細胞および単一濃度のＣＲＦまたは関連ペプチドは、様々な濃度の競合化合物と共に３７℃で３０分間インキュベーションし、上記のようにｃＡＭＰを測定した。
【００８７】
本発明の特定の実施態様は、例示の目的のために本明細書に記載されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な修飾がされてもよいことが理解されるであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲により限定する場合を除き、限定するものではない。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００４年１０月１９日に出願した米国仮出願番号６０／６２００１２の優先権を主張し、全体としてそれを本明細書の一部とする。
【０００２】
本発明は、一般に、ＣＲＦ受容体アンタゴニストおよびそれを必要とする哺乳類に対するかかるアンタゴニストの投与により障害を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
最初の副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）はヒツジの視床下部より単離され、４１個のアミノ酸ペプチドとして同定された（Ｖａｌｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１３：１３９４−１３９７，１９８１）。その後、ヒトおよびラットＣＲＦの配列が単離され、これらの配列は同一であるが、４１個のアミノ酸残基の７個がヒツジＣＲＦと異なることが決定された（Ｒｉｖｉｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：４８５１，１９８３；Ｓｈｉｂａｈａｒａら，ＥＭＢＯ Ｊ．２：７７５，１９８３）。
【０００４】
ＣＲＦは内分泌系、神経系および免疫系機能に著しい変化をもたらすことが見出された。ＣＲＦは、下垂体前葉からの副腎皮質刺激ホルモン（「ＡＣＴＨ」）、β−エンドルフィンおよび他のプロ−オピオメラノコルチン（「ＰＯＭＣ」）誘導ペプチドの基礎放出およびストレス応答放出の主要な生理学的調節物質であると考えられている（Ｖａｌｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２１３：１３９４−１３９７，１９８１）。簡単に記載すると、ＣＲＦは、脳（ＤｅＳｏｕｚａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：１４４９−１４５１、１９８４）、下垂体（ＤｅＳｏｕｚａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２４：５６０、１９８６；Ｗｙｎｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１１０：６０２−６０８、１９８３）、副腎（Ｕｄｅｌｓｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３１９：１４７−１５０、１９８６）および脾臓（Ｗｅｂｓｔｅｒ，Ｅ．Ｌ．およびＥ．Ｂ．ＤｅＳｏｕｚａ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １２２：６０９−６１７、１９８８）全体に分布していることが見出されている原形質膜受容体に結合することにより、その生物学的作用を開始すると考えられている。ＣＲＦ受容体は、ｃＡＭＰの細胞内産生におけるＣＲＦに刺激された増加を媒介する、ＧＴＰ結合蛋白質（Ｐｅｒｒｉｎら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１８：１１７１−１１７９、１９８６）にカップリングする（Ｂｉｌｅｚｉｋｊｉａｎ，Ｌ．Ｍ．，およびＷ．Ｗ．Ｖａｌｅ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１３：６５７−６６２，１９８３）。今や、ＣＲＦの受容体は、ラット（Ｐｅｒｒｉｎら，Ｅｎｄｏ １３３（６）：３０５８−３０６１，１９９３）およびヒトの脳（Ｃｈｅｎら，ＰＮＡＳ ９０（１９）：８９６７−８９７１，１９９３；Ｖｉｔａら，ＦＥＢＳ ３３５（１）：１−５，１９９３）からクローニングされている。かかる受容体は、７回膜貫通ドメインを含む、４１５個のアミノ酸からなるタンパク質である。ラットおよびヒトの配列間の同一性の比較により、アミノ酸レベルで高度の相同性（９７％）を示す。
【０００５】
ＡＴＣＨおよびＰＯＭＣの産生を刺激するという役割に加えて、ＣＲＦはまた、ストレスに対する内分泌、自律神経および行動応答の多くを協調すると考えられており、ＣＲＦは情動障害の病態生理学に関与しているかもしれない。さらに、ＣＲＦは、免疫系、中枢神経系、内分泌系および心血管系の間の連絡における主要な介在物質であると考えられている（Ｃｒｏｆｆｏｒｄら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：２５５５−２５６４，１９９２；Ｓａｐｏｌｓｋｙら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：５２２−５２４，１９８７；Ｔｉｌｄｅｒｓら，Ｒｅｇｕｌ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ５：７７−８４，１９８２）。概して、ＣＲＦは、極めて重要な中枢神経系伝達物質の一つであると考えられ、ストレスに対する体全体の応答を統合するという重要な役割を果たす。
ＣＲＦを脳に直接投与すると、ストレスの多い環境に曝された動物について観察される応答と同一の行動的、生理学的および内分泌応答が誘起される。例えば、ＣＲＦを脳室内に注入すると、行動活性化（Ｓｕｔｔｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ２９７：３３１，１９８２）、脳波図の持続的活性化（Ｅｈｌｅｒｓら，Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．２７８：３３２，１９８３）、交感神経副腎髄質経路の刺激（Ｂｒｏｗｎら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１０：９２８，１９８２）、心拍数および血圧の上昇（Ｆｉｓｈｅｒら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １１０：２２２２，１９８２）、酸素消費の増加（Ｂｒｏｗｎら，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ３０：２０７，１９８２）、胃腸活性の変化（Ｗｉｌｌｉａｍｓら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５３：Ｇ５８２，１９８７）、食物消費の抑制（Ｌｅｖｉｎｅら，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２２：３３７，１９８３）、性行動の変化（Ｓｉｒｉｎａｔｈｓｉｎｇｈｊｉら，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：２３２，１９８３）および免疫機能減弱（Ｉｒｗｉｎら，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５５：Ｒ７４４，１９８８）がもたらされる。さらに、臨床データは、ＣＲＦが、鬱、不安に関する障害および拒食症の脳において分泌過多であり得ることを示唆している（ＤｅＳｏｕｚａ，Ａｎｎ．Ｒｅｐｏｒｔｓ ｉｎ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２５：２１５−２２３，１９９０）。したがって、臨床データは、ＣＲＦ受容体アンタゴニストが、ＣＲＦの分泌過多を示す精神神経疾患の治療に有用であり得る新規の抗鬱薬および／または抗不安薬となり得ることを示唆している。
【０００６】
最初のＣＲＦ受容体アンタゴニストはペプチドであった（例えば、Ｒｉｖｉｅｒら，米国特許第４，６０５，６４２号；Ｒｉｖｉｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２４：８８９，１９８４を参照のこと）。これらのペプチドは、ＣＲＦ受容体アンタゴニストがＣＲＦに対する薬理学的応答を弱めうることを立証したが、ペプチド性ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、安定性が欠如していること、および経口活性が限られていることを含む、ペプチド治療薬の一般的な欠点を有する。
【０００７】
インテグリン受容体アンタゴニストのプロドラッグとして縮合またはスピロ６，５−二環式酸アンモニオアルキルエステル化合物について開示する、公開出願ＷＯ９８／４３９６２およびビトロネクチン受容体アンタゴニストとしてヘテロシクリル置換インダゾール誘導体について開示する、ＷＯ９７／２３４８０は、ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核を有する化合物について開示している。
【０００８】
ＣＲＦの生理学的有意性のために、有意なＣＲＦ受容体結合活性を有し、ＣＲＦ受容体を拮抗しうる生物学的に活性のある低分子の開発が、今なお、望ましい目標である。かかるＣＲＦ受容体アンタゴニストは、一般的にストレスに関する障害を含む、内分泌状態、精神状態および神経学的状態の治療において有用であってもよい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ＣＲＦ受容体アンタゴニストの投与により、ＣＲＦの調節の獲得に向けて有意な一歩がなされたが、当該分野には効果的な低分子ＣＲＦ受容体アンタゴニストが今なお必要とされている。かかるＣＲＦ受容体アンタゴニストを含有する医薬組成物、ならびに、例えば、ストレスに関する障害を治療するためのその使用に関する方法も必要とされている。本発明はこれらの必要性を満たすものであり、関連する他の利点も提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、一般に、ＣＲＦ受容体アンタゴニストを対象とし、さらに具体的に言えば、下記の一般的構造（Ｉ）：
【化１】
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３または−ＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
を有するＣＲＦ受容体アンタゴニストならびにその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体およびプロドラッグを対象とする。
【００１１】
本発明のかかる態様および他の態様は、以下の詳細な記載に出典明示として明らかであろう。このために、様々な出典が、より詳細な特定の製法、化合物および／または組成物について記載する本明細書に開示されており、全体としてそれを本明細書の一部とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明は、一般に、副腎皮質刺激ホルモン放出因子（ＣＲＦ）受容体アンタゴニストとして有用な化合物を対象とする。最初の実施態様において、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、以下の構造（Ｉ）：
【化２】
(I)
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３またはＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
ならびにその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体およびプロドラッグを有する。
【００１３】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、治療の応用の広範囲にかけて利用してもよく、ストレスに関する障害を含む、様々な障害または疾患を治療するために用いてもよい。かかる方法は、それを必要とする動物に有効量の本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストを、好ましくは、医薬組成物の形態で投与することを含む。したがって、別の実施態様において、医薬組成物は、医薬上許容される担体および／または希釈剤と結合して本発明の１以上のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含むことを開示している。
【００１４】
本明細書において用いられる上記の用語は、以下の意味を有する：
「アルキル」は、１から１０個の炭素原子を含む、直鎖または分岐、非環状または環状、非飽和または飽和脂肪族炭化水素を意味し、一方、「低級アルキル」なる語は、アルキルと同様の意味を有するが、１から６個の炭素原子しか含まない。したがって、「低級アルキル」なる語は、「Ｃ１−Ｃ６アルキル」なる語の代用となる。典型的な飽和直鎖アルキルは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどを含む；一方、飽和分岐アルキルは、イソプロピル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチルなどを含む。典型的な飽和環状アルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、−ＣＨ２−シクロプロピル、−ＣＨ２−シクロブチル、ＣＨ２−シクロペンチル、−ＣＨ２−シクロヘキシルなどを含む；一方、不飽和環状アルキルは、シクロペンテニルおよびシクロヘキセニルなどを含む。環状アルキルは、「同素環」とも呼ばれ、デカリンおよびアダマンチルなどのジ同素環およびポリ同素環を含む。不飽和アルキルは、隣接した炭素原子の間に少なくとも１個の二重結合または三重結合を含有する（それぞれ「アルケニル」または「アルキニル」と呼ばれる）。典型的な直鎖および分岐アルケニルは、エチレニル、プロピレニル、１−ブテニル、２−ブテニル、イソブチレニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−メチル−１−ブテニル、２−メチル−２−ブテニル、２，３−ジメチル−２−ブテニルなどを含む；一方、典型的な直鎖および分岐アルキニルは、アセチレニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−メチル−１−ブチニルなどを含む。
【００１５】
「アリール」は、フェニルまたはナフチルなどの芳香族炭素環部分を意味する。
【００１６】
「アリールアルキル」は、例えば、ベンジル（すなわち、−ＣＨ２−フェニル）、−ＣＨ２−（１−または２−ナフチル）、−（ＣＨ２）２フェニル、−（ＣＨ２）３フェニル、−ＣＨ（フェニル）２などのアリール部分で置換される少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキルを意味する。
【００１７】
「ヘテロアリール」は、５ないし１０員の芳香族複素環を意味し、窒素、酸素および硫黄から選択される少なくとも１個のヘテロ原子を有し、少なくとも１個の炭素原子を含有し、単環系も二環系も含む。典型的なヘテロアリールは、フリル、ベンゾフラニル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、ピロリル、インドリル、イソインドリル、アザインドリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソチアゾリル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニルおよびオキサジアゾリルを含む（しかし、これに限定されるものではない）。
【００１８】
「ヘテロアリールアルキル」は、例えば、−ＣＨ２−ピリジニル、−ＣＨ２−ピリミジニルなどのヘテロアリール部分で置換される少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキルを意味する。
【００１９】
「複素環」（本明細書において「ヘテロ環」または「ヘテロシクリル」とも呼ばれる）は、飽和、不飽和または芳香族のいずれかであり、窒素、酸素および硫黄（ここで、窒素および硫黄ヘテロ原子は、所望により酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は、所望により四級化されていてもよい）から独立して選択される１から４個のヘテロ原子を含む、５ないし７員の単環式または７ないし１４員の多環式の複素環を意味し、上記の複素環が、ベンゼン環ならびに三環系（およびそれ以上の）複素環に縮合される二環式環を含む。複素環は、ヘテロ原子または炭素原子を介して結合してもよい。複素環は、上記のヘテロアリールを含む。したがって、上記の芳香族ヘテロアリールに加えて、複素環はまた、モルホリニル、ピロリジノニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペリジニル、ヒダントイニル、バレロラクタミル、オキシラニル、オキセタニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロピリジニル、テトラヒドロプリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロピリミジニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニルなどを含む（しかし、これに限定されるものではない）。
【００２０】
「複素環アルキル」は、例えば、−ＣＨ２−モルホリニル、−ＣＨ２−ピリジル、−ＣＨ２−ピリミジニルなどの複素環で置換される少なくとも１個のアルキル水素原子を有するアルキルを意味する。
【００２１】
本明細書に用いられる「置換」なる語は、上記のいずれかの置換基（すなわち、アルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、複素環または複素環アルキル）上の少なくとも１個の水素原子が置換基で置換されるということを意味する。ケト置換基（「−Ｃ（＝Ｏ）−」）の場合において、２個の水素原子が置換される。本発明の範囲内にある「置換基」は、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、チオアルキル、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、ハロアルコキシ、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、複素環、置換複素環、複素環アルキル、置換複素環アルキル、−ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）Ｒｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＮＲａＣ（＝Ｏ）ＯＲｂ −ＮＲａＳＯ２Ｒｂ、−ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒａ −Ｃ（＝Ｏ）ＯＲａ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲａＲｂ、−ＳＨ、−ＳＲａ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒａ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒａ、−ＯＳ（＝Ｏ）２Ｒａ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＯＲａ、ここで、ＲａおよびＲｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、アルキル、ハロアルキル、置換アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、複素環、置換複素環、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルである。
【００２２】
「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。
【００２３】
「ハロアルキル」は、例えば、トリフルオロメチルなどのハロゲンで置換される少なくとも１個の水素原子を有するアルキルを意味する。ハロアルキルは置換アルキルの特定の実施態様であり、ここで、アルキルは１個または複数のハロゲン原子で置換される。
【００２４】
「アルコキシ」は、例えば、−Ｏ−メチル、−Ｏ−エチルなどの酸素架橋（すなわち、−Ｏ−アルキル）を介して結合されるアルキル部分を意味する。
【００２５】
「ハロアルコキシ」は、例えば、トリフルオロメトキシなどのハロゲンで置換される少なくとも１個の水素原子を有するアルコキシを意味する。
【００２６】
「アルコキシアルキル」は、例えば、メトキシメチルなどのアルコキシで置換される少なくとも１個の水素原子を有するアルキルを意味する。
【００２７】
「チオアルキル」は、−Ｓ−メチル、−Ｓ−エチルなどの硫黄架橋（すなわち、−Ｓ−アルキル）を介して結合されるアルキル部分を意味する。
【００２８】
「アルキルアミノ」および「ジアルキルアミノ」は、例えば、メチルアミノ、エチルアミノ、ジメチルアミノ、ジエチルアミノなどの窒素架橋（すなわち、−ＮＨアルキルまたは−Ｎ（アルキル）（アルキル））を介して結合される１または２個のアルキル部分を意味する。
【００２９】
「ヒドロキシアルキル」は、少なくとも１個のヒドロキシル基で置換されるアルキルを意味する。
【００３０】
本明細書に示される発明の実施態様は、例示を目的とするものあって、限定を目的とするものではない。本発明の一の実施態様において、（Ｒ１）ｎ−は、ｎが、０、１または２である、ｎ回得られるアルキル置換基Ｒ１を表す。したがって、本発明の典型的な化合物は、以下の構造（ＩＩａ）から（ＩＩｄ）：
【化３】
を含む。
【００３１】
本発明の特定の実施態様において、Ｒ１はＣ１−Ｃ６アルキルであり、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチルおよびイソブチルにより例示してもよい。
【００３２】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ２はＣ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールである。特定の実施態様において、Ｒ２は、例えば、メチルなどのＣ１−Ｃ６アルキルである。
【００３３】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ２は、下記の構造（ＩＩＩ）：
【化４】
［式中：Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルである］
中の−ＯＲ３である。
【００３４】
Ｒ２が−ＯＲ３である、本発明のさらなる実施態様において、Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシアルキルまたはヘテロアリールアルキルである。
【００３５】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ６アルキルまたはＣ１−Ｃ６置換アルキルである。
【００３６】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ２は、下記の構造（ＩＶ）：
【化５】
［式中：Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルである（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）］
中の−ＮＲ４ａＲ４ｂである。
【００３７】
本発明のさらなる実施態様において、Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルである。本発明のさらなる実施態様において、Ｒ５は、水素であるかまたはＣ１−Ｃ６アルキルである。さらなる実施態様において、Ｒ５はメチルである。
【００３８】
本発明のさらなる実施態様において、Ａｒは、下記の構造（Ｖ）：
【化６】
［式中：ｍは１−４を含めた整数であり、それぞれのＲ６は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロゲンである］
中に示されるフェニルである。
【００３９】
特定の実施態様において、それぞれのＲ６は、独立して、メチル、メトキシまたはトリハロメチルである。
【００４０】
本発明のさらなる実施態様において、Ａｒは、下記の構造（ＶＩａ、ＶＩｂおよびＶＩｃ）：
【化７】
それぞれに示されるピリジルであり、置換基はピリジル環の炭素原子番号２、３または４を介してピラゾロピリジン核に結合する。
【００４１】
本発明のさらなる実施態様において、Ａｒはピリジルであり、ピリジン環の炭素原子番号２、３または４を介してピラゾロピリジン核に結合し、下記の構造（ＶＩＩａ、ＶＩＩｂおよびＶＩＩｃ）：
【化８】
それぞれに示され、ｍは１−３を含めた整数であり、それぞれのＲ６は、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロゲンである。
【００４２】
本発明のさらなる実施態様において、Ｈｅｔは、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、フラザニル、ピリジル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニルおよびテトラヒドロインドロンに限定することなく例示する、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである。
【００４３】
本発明の化合物は、一般に、遊離塩基として利用してもよい。一方、本発明の化合物は酸付加塩の形態で用いてもよい。本発明の遊離塩基アミノ酸化合物の酸付加塩は、当業者に周知の方法で調製してもよく、有機および無機酸から形成してもよい。適当な有機酸として、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、コハク酸、メタンスルホン酸、酢酸、シュウ酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、乳酸、マンデル酸、桂皮酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、グリコール酸、グルタミン酸およびベンゼンスルホン酸が挙げられる。適当な無機酸として、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸が挙げられる。したがって、構造（Ｉ）の「医薬上許容される塩」なる語は、ありとあらゆる医薬上許容される塩の形態を含むと意図される。
【００４４】
一般に、構造（Ｉ）の化合物は、該分野の当業者に周知の有機合成法ならびに実施例に記載の典型的な方法にしたがって作製してもよい。例えば、構造（Ｉ）の合成は、一般に、以下の反応スキーム１から反応スキーム９にしたがって開始してもよく、スキームは、例示の目的のために示されるのであって、限定されるものではない。
【００４５】
反応スキーム１
【化９】
７−クロロピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位でのアルキル化は、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）およびＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）中鉄（ＩＩＩ）アセチルアセトネートなどの鉄（ＩＩＩ）塩存在下において、臭化アルキルマグネシウムを経て開始する（Ｆｕｒｓｔｎｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００２，１２４，１３８５６−１３８６３）。
【００４６】
反応スキーム２
【化１０】
上記の反応スキーム２のＲ２Ｂ（ＯＨ２）で示される、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールのボロン酸との反応による７−クロロピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位での塩素置換は、高温でテトラキス（トリフェニルホスホリン）パラジウム（０）などの適当なパラジウム触媒およびジオキサンなどの適当な溶媒中炭酸カリウムなどの適当な塩基の存在下にて起こる。
【００４７】
反応スキーム３
【化１１】
上記の反応スキーム３のＨＮＲ４ａＲ４ｂなどのアミンによる７−クロロピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位での塩素置換は、高温でアセトニトリル中ｐ−トルエンスルホン酸などの酸の存在下にて起こる。
【００４８】
反応スキーム４
【化１２】
適当な窒素複素環の窒素原子による臭化またはヨウ化アリールの置換は、ヨウ化銅（Ｉ）、ジアミン共触媒および塩基などの銅触媒の存在下にて起こる（Ｋｌａｐａｒｓら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００２，１２４，７２４１−７４２８）。適当なジアミンとして、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミンおよびトランス−１，２−シクロヘキサンジアミンが挙げられる、適当な塩基は、炭酸カリウムおよびリン酸三カリウムである。
【００４９】
反応スキーム５
【化１３】
３−ブロモ−７−クロロ−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位でのアミンによる塩素置換は、高温でｐ−トルエンスルホン酸の存在下にて起こる。
【００５０】
反応スキーム６
【化１４】
有機ホウ素誘導体と有機ハロゲン化物のパラジウム触媒によるクロスカップリングは、ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの３位での置換を達成するために用いることができる。
【００５１】
反応スキーム７
【化１５】
ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位の塩素についてのアミン置換は、高温でｐ−トルエンスルホン酸存在下にて起こり、スキーム３に記載の同様の過程でアミンを得る。中間体の第二級アミンは、ＴＨＦまたはＤＭＦなどの不活性溶媒中ＮａＨなどの塩基存在下において、上記の反応スキーム７のハロゲン化アルキルＲ４ｂＸとの反応により第三級アミンに変換することができる。
【００５２】
反応スキーム８
【化１６】
７−ヒドロキシピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核は、ＴＨＦまたはトルエンなどの不活性無水溶媒中トリフェニルホスフィンなどのホスフィンおよびジエチルアゾジカルボン酸塩などのアゾジカルボン酸塩を用いる光延条件下で、上記の反応スキームの（Ｒ３）ＯＨなどの第一級または第二級アルコールでアルキル化することができる。
【００５３】
反応スキーム９
【化１７】
７−ヒドロキシピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンは、上記の反応スキーム９のＲ３Ｂｒなどの第一級または第二級ハロゲン化アルキルでアルキル化でき、高温でＮａＨなどの適当な塩基およびＴＨＦまたはＤＭＦなどの適当な無水溶媒を用いて、アルコキシ化合物を得ることができる。
【００５４】
反応スキーム１０
【化１８】
フェニルリチウムは、ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン核の７位のアルデヒド官能基と反応し、フェニル−（１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル）−メタノールを得る。
【００５５】
ＣＲＦ受容体アンタゴニストとしての化合物の有効性を、様々なアッセイ方法により決定してもよい。本発明の適当なＣＲＦアンタゴニストは、かかる受容体に対するＣＲＦの特定の結合を阻害することができる。構造（Ｉ）の化合物は、かかる目的のために１以上の一般的に許容されるアッセイによりＣＲＦアンタゴニストとして活性を評価してもよく、ＤｅＳｏｕｚａら（Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ７：８８，１９８７）およびＢａｔｔａｇｌｉａら（Ｓｙｎａｐｓｅ １：５７２，１９８７）に記載のアッセイを含むが、これに限定されるものではない。上記のように、適当なＣＲＦアンタゴニストは、ＣＲＦ受容体のアフィニティーを示す化合物を含む。ＣＲＦ受容体のアフィニティーは、かかる受容体（例、ラット大脳皮質膜から調製した受容体）に対する放射性標識ＣＲＦ（例、［１２５Ｉ］チロシン−ＣＦＲ）の結合を阻害する化合物の能力を測定する結合試験により決定してもよい。ＤｅＳｏｕｚａら（ｓｕｐｒａ，１９８７）に記載の放射性リガンド結合アッセイは、ＣＲＦ受容体に対する化合物のアフィニティーを決定するアッセイを提供する。かかる活性は、典型的には、受容体から５０％の放射性標識リガンドを置換するために必要な化合物の濃度としてＩＣ５０から算出され、下記の等式：
【数１】
［式中：Ｌ＝放射性リガンドおよびＫＤ＝受容体に対する放射性リガンドのアフィニティーである］
により算出される「Ｋｉ」値として記録される（Ｃｈｅｎｇ ａｎｄ Ｐｒｕｓｏｆｆ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２２：３０９９，１９７３）。
【００５６】
ＣＲＦ受容体の結合を阻害することに加えて、化合物のＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性は、ＣＲＦについての活性を拮抗する化合物の能力により定めてもよい。例えば、ＣＲＦは、アデニル酸シクラーゼ活性を含む様々な生化学過程を刺激することが知られている。そのため、化合物は、例えば、ｃＡＭＰ濃度を測定することによりＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性を拮抗する能力によるＣＲＦアンタゴニストとして評価してもよい。Ｂａｔｔａｇｌｉａら（ｓｕｐｒａ，１９８７）に記載のＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性アッセイは、ＣＲＦ活性を拮抗するための化合物の能力を測定するアッセイを提供する。したがって、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性は、一般に、初期の結合アッセイ（例えば、ＤｅＳｏｕｚａ（ｓｕｐｒａ，１９８７）に開示）およびｃＡＭＰスクリーニングプロトコル（例えば、Ｂａｔｔａｇｌｉａ（ｓｕｐｒａ，１９８７）に開示）を含むアッセイ技法により測定してもよい。
【００５７】
ＣＲＦ結合アフィニティーに関して、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、典型的には、１０μＭ未満のＫｉを有する。本発明の一の実施態様において、ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、１μＭ未満のＫｉを有する。別の実施態様において、本発明のＣＲＦアンタゴニストは、０．２５μＭ（すなわち、２５０ｎＭ）未満のＫｉを有する。以下により詳細に記載しているので、Ｋｉ値は、実施例２０に記載の方法により分析してもよい。
【００５８】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、ＣＲＦ受容体部位で活性を示してもよく、内分泌的、精神的、神経的障害または疾患を含む、広範囲の障害または疾患の治療における治療薬として用いてもよい。より具体的には、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、ＣＲＦの分泌過多から生じる生理的病態または障害を治療することに有用であってもよい。ＣＲＦは、ストレスに対する内分泌、習性的および自動反応を活性化し、調節する重要な神経伝達物質であると考えられているので、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、精神神経疾患を治療するために用いることができる。本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストで治療可能でありうる精神神経疾患は、鬱などの情動障害、全般性不安障害などの不安に関する障害、パニック障害、強迫性障害、異常攻撃、不安定狭心症および反応性高血圧などの心臓血管の異常；および拒食症、過食症および過敏性腸症候群などの摂食障害を含む。ＣＲＦアンタゴニストはまた、様々な疾患状態ならびに発作についてのストレス誘導性免疫抑制を治療することに有用でありうる。本発明のＣＲＦアンタゴニストの別の使用は、炎症状態（関節リウマチ、ブドウ膜炎、ぜんそく、炎症性大腸炎および胃腸運動など）、疼痛、クッシング病、乳児けいれん、てんかんおよび幼児と成人における別の発作ならびに薬物乱用および禁断症状（例、アルコール依存症）の治療を含んでいてもよい。
別の実施態様において、本発明は、本発明の１以上のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含む医薬組成物を提供する。本発明の化合物を動物（例、哺乳類）に対する投与の目的のために、医薬組成物として製剤化してもよい。本発明の医薬組成物は、本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニスト（すなわち、構造（Ｉ）の化合物）および医薬上許容される担体および／または希釈剤を含む。ＣＲＦ受容体アンタゴニストは、特定の障害を治療するための有効である量、すなわち、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト活性を達成するために十分な量、好ましくは、患者に対し許容される毒性を有する組成物中に含まれる。一の実施態様において、本発明の医薬組成物は、投与経路によるが投与量当たり０．１ｍｇから２５０ｍｇ、より具体的には、１ｍｇから６０ｍｇの量のＣＲＦ受容体アンタゴニストを含む。別の実施態様において、投与量は、例えば、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇまたは２０ｍｇであってもよい。適当な濃度および投与量は、当業者が容易に決定することができる。
【００５９】
医薬上許容される担体および／または希釈剤は、当業者に周知である。液剤として製剤化される組成物における、許容される担体および／または希釈剤は、生理食塩水および滅菌水を含み、酸化防止剤、緩衝液、静菌薬および別の一般的添加物を所望により含んでいてもよい。組成物はまた、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに加えて、希釈剤、分散剤および界面活性剤などの一般的添加剤、結合剤および潤滑油を含む丸薬、カプセル、顆粒または錠剤として製剤化してもよい。当業者は、適当な手法、および例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １９９０に記載の慣例にしたがってＣＲＦ受容体アンタゴニストをさらに製剤化してもよい。
【００６０】
加えて、プロドラッグもまた、本発明の範囲内に含まれる。かかるプロドラッグが患者に投与されると、プロドラッグは、インビボで構造（Ｉ）の化合物を放出する共有結合した担体である。プロドラッグは、一般的に、通常の操作またはインビボで、親化合物を産生するために開裂する修飾方法で官能基を修飾することにより調製される。
【００６１】
構造（Ｉ）の化合物は、キラル中心を有していてもよく、ラセミ体、ラセミ混合物としておよび個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして生じてもよい。全てのかかる異性体は、その混合物を含む、本発明内に含まれる。さらに、構造（Ｉ）の化合物の結晶体は、多型として存在してもよく、本発明中に含まれる。加えて、構造（Ｉ）の化合物は、水または別の有機溶媒と溶媒和物を形成してもよい。かかる溶媒和物は、同様に、本発明の範囲内に含まれる。
【００６２】
別の実施態様において、本発明は、内分泌的、精神的および神経的障害または疾患を含む、様々な障害または疾患を治療する方法を提供する。かかる方法は、障害または疾患を治療するのに十分な量で哺乳類（例、ヒト）に対し本発明の化合物を投与することを含む。かかる方法は、ＣＲＦ受容体アンタゴニスト、好ましくは、医薬組成物の形態での全身投与を含む。本明細書で用いられるように、全身投与は、経口および非経口の投与方法を含む。経口投与における、ＣＲＦ受容体アンタゴニストの適当な医薬組成物は、散剤、顆粒、丸薬、錠剤およびカプセルならびに液剤、シロップ、懸濁液および乳濁液を含む。これらの組成物はまた、香料、保存料、懸濁化剤、増粘剤および乳化剤ならびに他の医薬上許容される添加剤を含んでいてもよい。非経口投与における、本発明の化合物は、ＣＲＦ受容体アンタゴニストに加えて、緩衝液、抗酸化剤、静菌薬およびかかる液剤に一般的に用いられる他の添加剤を含んでいてもよい、水性注射液で調製することができる。
【００６３】
別の実施態様において、本発明は、放射性または非放射性医薬品の使用により体内の特定部位の診断の可視化を可能とする。本発明の化合物の使用は、患者に関する生理学的、機能的または生物学的評価を提供し、疾患または病理学的検出および評価を提供する。放射性医薬品は、シンチグラフィー、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）および単光子放出コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）で用いられる。かかる出願における、放射性同位体は、１２３Ｉ（ＰＥＴ）、１２５Ｉ（ＳＰＥＣＴ）および １３１Ｉを含むヨウ素（Ｉ）、９９Ｔｃ（ＰＥＴ）を含むテクネチウム（Ｔｃ）、３１Ｐおよび３２Ｐを含むリン（Ｐ）、５１Ｃｒを含むクロム（Ｃｒ）、１１Ｃを含む炭素（Ｃ）、１８Ｆを含むフッ素（Ｆ）、２０１Ｔｌを含むタリウム（Ｔｌ）としてかかる元素ならびに陽電子および電離放射線の放射体などが包含される。非放射性医薬品は、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）、透視法および超音波診断に用いられる。かかる出願における同位体は、１５３Ｇｄを含むガドリニウム（Ｇｄ）、鉄（Ｆｅ）、バリウム（Ｂａ）、マンガン（Ｍｎ）およびタリウム（Ｔｌ）としてかかる元素が包含される。かかる構成要素はまた、混合物の特定の標的部位の存在を特定し、混合物の分子を標識化することに有用である。上記のように、本発明の化合物の投与は、多種多様の障害または疾患を治療するために有用であってもよい。特に、本発明の化合物は、鬱、不安障害、パニック障害、強迫性障害、異常攻撃、不安定狭心症、反応性高血圧、拒食症、過食症、過敏性腸症候群、ストレス誘導性免疫抑制、発作、炎症、疼痛、クッシング症、乳児けいれん、てんかんおよび薬物乱用または禁断症状の治療において哺乳類に対し投与してもよい。
【００６４】
以下の実施例は、例示のために提供するものであり、限定するものではない。
【実施例】
【００６５】
本発明のＣＲＦ受容体アンタゴニストは、実施例に開示される方法により調製してもよい。実施例２０は、受容体結合アフィニティーを測定する方法を示し、実施例２１は、ＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性における本発明のスクリーニング化合物に対するアッセイを開示している。
略語：
ＬＡＨ：水素化アルミニウムリチウム
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＡＡ：アセト酢酸エチル
ＬＣ−ＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分析
ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３：トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム
Ｐｄ−Ｃ：炭素担体パラジウム（１０％）
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ａｃａｃ：アセチルアセトネート
ＭＤＡ：マロンジアルデヒドビス−ジメチルアセタール
ＭＥＥＡ：（２−メトキシエチル）エチルアミン
調製用ＨＰＬＣ−ＭＳ
Ｇｉｌｓｏｎ製２１５オートサンプラー／フラクションコレクター、ＵＶ検出器およびＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎ製ＡＱＡ Ｓｉｎｇｌｅ ＱＵＡＤ質量検出器（エレクトロスプレー）装着のＧｉｌｓｏｎ製ＨＰＬＣ−ＭＳ；
ＨＰＬＣカラム：ＢＨＫ ＯＤＳ−Ｏ／Ｂ、５μ、３０ｘ７５ｍｍ
ＨＰＬＣ勾配：３５ｍＬ／分、７分にわたり水中１０％アセトニトリルないし１００％アセトニトリル、１００％アセトニトリルで３分間維持
分析方法１−高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＭＳ）
カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ＳｙｎｅｒｇｉＭＡＸ−ＲＰ、４ミクロン、２ｘ５０ｍｍ；
移動相：Ａ＝水、０．０２５％のＴＦＡ；Ｂ＝アセトニトリル、０．０２５％のＴＦＡ；
勾配：１３分にわたり５％Ｂ／９５％Ａないし９５％のＢ／５％のＡ、次いで、２．５分保持；
流速：１．０ｍＬ／分；
ＵＶ波長：２２０ｎｍおよび２５４ｎｍ．
分析方法２−超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）
プラットフォーム：Ｂｅｒｇｅｒ製ＦＣＭ１２００ ＳＦＣポンプ、Ａｇｉｌｅｎｔ製ダイオードアレイ検出器、Ａｇｉｌｅｎｔモデル２２０マイクロプレートオートサンプラー、Ａｇｉｌｅｎｔモデル１９４６ ＭＳＤ（ＡＰＣＩインターフェース）；
カラム：Ｂｅｒｇｅｒ製ピリジン６０Ａ、４ミクロン、３ｘ１５０ｍｍ；
溶媒：ＳＦＣグレードＣＯ２、１．５％の水および０．０２５％のエタンスルホン酸を有するＯｐｔｉｍａ−グレードメタノール；
流速：４．０ｍＬ／分、１２０Ｂａｒの背圧；
勾配：２．４分にわたり５−５５％メタノール／ＣＯ２
保持時間（ｔＲ）を、分析方法２で用いられる化合物１３−１以外の分析方法１で用いられる全ての化合物に対し記録した。
【００６６】
実施例１
３−ブロモ−７−クロロ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンおよび７−ベンジルオキシ−３−ブロモ−５−メチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン試薬の合成
【化１９】
工程１Ａ：
ピラゾール（３０．０ｇ、４４１ｍｍｏｌ）を、氷浴中で硫酸（２２０ｍＬ、９７％）に滴下した。混合物を５５℃に加熱し、硝酸（３０ｍＬ、７０％、０．５ｍｏｌ）をゆっくりと添加した。反応混合物を、５５℃で３時間攪拌し、冷却し、氷水（６００ｍＬ）に注ぎ、６ＮのＮａＯＨ溶液で中和した（ｐＨ＝７）。反応混合物を酢酸エチルで抽出した（５ｘ１５０ｍＬ）。有機相を合わせ、水（１００ｍＬ）およびブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し減圧下で濃縮し、白色固体として化合物１ａを得た（３７．０ｇ、３２６ｍｍｏｌ、７４％）；ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝１１３（１００％）。
工程１Ｂ：
化合物１ａ（１５．０ｇ、１３３ｍｍｏｌ）を、エタノール（１００ｍＬ）中１０％炭素担体パラジウム（７．０ｇ、６．６５ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を、水素ガス圧下において（４０ｐｓｉ）、室温で３時間振盪した。触媒を、セライト（登録商標）の一部に通して濾過により除去し、溶媒を蒸発した。化合物１ｂを赤紫色油として得（１０．５ｇ、１２６ｍｍｏｌ、９５％）、精製することなく次の工程に用いた；ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝８３（１００％）。
工程１Ｃ：
１ｂ（１０．５ｇ、１２６ｍｍｏｌ）、アセト酢酸エチル（１８．０ｇ、１４０ｍｍｏｌ）および触媒量のｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．３ｇ、６．６５ｍｍｏｌ、５％）のベンゼン（１００ｍＬ）中溶液を、ディーン−スターク（Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋ）・トラップで１時間還流した。溶媒を減圧下で除去し、短いシリカクロマトグラフィーカラムで流すことによりイミンを精製し、溶媒の蒸発後黄褐色固体として化合物１ｃを得た（２２．４ｇ、１２５ｍｍｏｌ、９１％）；ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝１９５（１００％）。
工程１Ｄ：
化合物１ｃ（７．０３ｇ、３５．９ｍｍｏｌ）を、ジオキサン（３０ｍＬ）およびジフェニルエーテル（３０ｍＬ）の沸騰溶液に添加した。混合物を、固体が形成するまで加熱した（５分）。反応混合物をさらに２分間加熱し続けた。室温に冷却後、ジエチルエーテル（３００ｍＬ）を添加し、反応混合物を１５分間攪拌した。固体をジエチルエーテルですすいだ。黄褐色結晶性固体として化合物１ｄを得た（５．０９ｇ、３４．１ｍｍｏｌ、９５％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝１５０．０。
工程１Ｅ：
オキシ塩化リン（３０ｍＬ）中化合物１ｄ（４．５８ｇ、３０．７ｍｍｏｌ）を、１１０℃で３０分間加熱した。室温に冷却後、反応混合物を氷に注ぎ、ｐＨをＮａＯＨ溶液（６Ｎ）でｐＨ＝５に合わせた。固体を濾過で収集し、母水層を酢酸エチルで抽出した（３ｘ２５０ｍＬ）。上記の固体を合わせた有機相中で溶解し、ブライン溶液で洗浄し（１ｘ２５０ｍＬ）、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。短いシリカゲルクロマトグラフィーカラムで流すことにより濃縮物を精製し、淡黄色固体として化合物１ｅを得た（４．５０ｇ、２６．８ｍｍｏｌ、８７％）；ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝１６７（１００％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝１６８。
工程１Ｆ：
化合物１ｅ（６００ｍｇ、３．５８ｍｍｏｌ）を、氷浴中で水／メタノール（１２ｍＬ／１２ｍＬ）の混合物で溶解した。臭素（６２９ｍｇ、３．９４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ／ＭｅＯＨ １ｍＬ／１ｍＬ）の溶液中溶液を冷却した混合物に滴下した。１０分後、溶液がより透明となり、ＬＣ／ＭＳはもはやクロロ化合物を示さなかった。反応混合物を、ＭｅＯＨを除去するために濃縮した。反応混合物を酢酸エチルで抽出した（３ｘ５０ｍＬ）。有機相を合わせ、ブライン溶液（１ｘ１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。化合物１ｆを淡黄色固体として得た。ＧＣ／ＭＳ：ｍ／ｚ＝２４５、２４７（１００％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝２４６．２。
工程１Ｇ：
３０ｍＬ無水ジオキサン中化合物１ｆ（４．９ｇ、１９ｍｍｏｌ）に、１２時間還流しながら、ＮａＨ（６０％鉱物油中溶液の１．０ｇ）、次いで、ベンジルアルコール（２．３ｍＬ）を添加した。反応物をＨ２Ｏで急冷し、６ＮのＨＣｌで中和した。反応混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（１：１の酢酸エチル：ヘキサン）に付した後に化合物１ｇを得た（３．５ｇ、５６％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３３２．１。
【００６７】
実施例２
１−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピラゾールおよび２−メチル−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル試薬の合成
【化２０】
工程２Ａ：
４−ブロモ−３−メチルアニリン（１０．２ｇ）を６ＮのＨＣｌ（８５ｍＬ）中で懸濁し、０℃に冷却した。亜硝酸ナトリウム（４０ｍＬのＨ２Ｏ中４ｇ）の溶液を、１０分かけて添加した。反応物を０℃で１５分間攪拌し、次いで、塩化第一スズ二水和物（２５ｍＬの１２ＮのＨＣｌ中３６ｇ）を添加した。反応混合物を、０℃で２時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾過ケーキを冷Ｈ２Ｏで洗浄し、黄褐色固体として塩酸４−ブロモ−３−メチルフェニルヒドラジンを得た（化合物２ａ、２０ｇ）。
工程２Ｂ：
工程２Ａから得られる化合物（２０ｇ）を５０ｍＬのエタノール中で懸濁した。マロンジアルデヒドビス−ジメチルアセタール（１１．０ｍＬ、６７ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を２時間８５℃に加熱した。反応混合物を、重炭酸ナトリウムで中和し、ＤＣＭで洗浄することにより抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮した。残渣を酢酸エチル中で溶解し、混合物をセライト（登録商標）の一部に通して濾過した。濾液を蒸発させ、油性残渣をカラムクロマトグラフィー（１：１の酢酸エチル：ヘキサン）に付して精製し、琥珀油として１−（４−ブロモ−３−メチルフェニル）ピラゾールを得た（化合物２ｂ、９．６ｇ、７３％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝２３８．８。
工程２Ｃ：
ｎ−ブチルリチウム（２．５Ｍヘキサン中溶液の７．９ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を、−７８℃で化合物２ｂ（４．７ｇ、２０ｍｍｏｌ）の１００ｍＬのＴＨＦ中溶液に添加した。混合物を１時間かけて−２５℃に加温し、次いで、混合物を−７８℃に冷却した。トリメチルホウ酸塩（３．４ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、反応物を室温に加温した。続いて、塩酸（１Ｎ、１００ｍＬ）を添加し、混合物を１６時間攪拌した。水層のｐＨを、水酸化ナトリウムおよびリン酸二水素ナトリウム溶液を用いて３−４に合わせ、次いで、混合物を酢酸エチルで抽出した。有機層を濃縮し、次いで、残渣をエーテルと０．５Ｎの水酸化ナトリウム溶液の間に分配した。水層をさらに２回に分けてエーテルで抽出し、次いで、濃塩酸を用いてｐＨ３−４に酸性化した。混合物を酢酸エチルで抽出し、合わせた酢酸エチル抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発し、琥珀色ゴムとして２−メチル−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸を得た（化合物２ｃ、３．５ｇ）。
工程２Ｄ：
化合物２ｂ（１５ｍＬジオキサン中２．０ｇ）の溶液に、ビス（ピナコラト）ジボロン（２．４ｇ）、酢酸カリウム（２．４ｇ）および１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンジクロロパラジウム（ＩＩ）（５００ｍｇ）を添加した。反応物を１２時間８５℃に加熱した。反応混合物をセライト（登録商標）の一部に通して濾過し、濾過ケーキを酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル：ヘキサン）に付して褐色液体を精製し、黄色油として２−メチル−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステルを得た（化合物２ｄ、１．８ｇ、７５％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝２８５．０。
以下の化合物：２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（化合物２ｅ）；２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（化合物２ｆ）；および４−（ピラゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニルボロン酸ピナコールエステル（化合物２ｇ）もまた、化合物２ｄを得る上記の製法により調製した。
【００６８】
実施例３
７−ベンジルオキシ−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンおよび１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−オール試薬の合成
【化２１】
工程３Ａ：
化合物１ｇ（５ｍＬのトルエン中１．０ｇ）の溶液にエタノール（２ｍＬ）を添加した。かかる混合物に化合物２ｄ（１．３ｇ）、次いで、水性炭酸ナトリウム（３．５ｍＬの２．０Ｍ溶液）、飽和水性水酸化バリウム（１ｍＬ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２００ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を攪拌し、８５℃で１２時間加熱した。混合物を冷却し、有機相を分離した。水層を酢酸エチルで洗浄し（３ｘ５０ｍＬ）、合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、黄色固体に濃縮し、カラムクロマトグラフィー（３０％酢酸エチル：ヘキサン）に付して精製し、灰白色固体として７−ベンジルオキシ−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンを得た（化合物３ａ、０．８２ｇ、６７％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝４１１．２。
以下の化合物：７−ベンジルオキシ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｂ）； ７−ベンジルオキシ−３−［２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｃ）；および７−ベンジルオキシ−３−［４−（ピラゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｄ）もまた、化合物３ａの調製に用いた製法により調製した。
工程３Ｂ：
化合物３ａ（３０ｍＬエタノール中２．０ｇ）の溶液に、１０％炭素担体パラジウム（０．３ｇ）を添加した。反応物を、４０ｐｓｉの水素圧下で２時間振盪した。反応混合物をセライト（登録商標）の一部を通して濾過し、濾過ケーキをエタノールで洗浄した。濾液を濃縮し、灰白色固体として１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−オールを得た（化合物３ｅ、１．２ｇ、７７％）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３１９．０。
以下の化合物：７−ヒドロキシ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチル−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｆ）；Ｐｄ／Ｃの代わりに触媒として酸化白金を用いる７−ヒドロキシ−３−［２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｇ）；および７−ヒドロキシ−３−［４−（ピラゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物３ｈ）もまた、実施例３に示される製法により調製した。
【００６９】
実施例４
７−クロロ−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン試薬の合成
【化２２】
工程４Ａ：
化合物３ｅ（１．０ｇ）の無水アセトニトリル（１０ｍＬ）中溶液にオキシ塩化リン（０．６０ｍＬ）を添加した。反応物を、窒素下で２時間還流した。反応混合物を冷却し、Ｈ２０で氷上にて急冷した。混合物を、重炭酸ナトリウムでｐＨ８に塩基性化した。生成物を酢酸エチルで抽出した（３ｘ５０ｍＬ）。有機層を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮し、黄色油として７−クロロ−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンを得た。混合物を、溶離液として３０％酢酸エチル／ヘキサンを用いて、シリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、白色固体として１．０ｇ（９９％）の化合物４ａを得た；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３３８．２。
下記の化合物：７−クロロ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｂ）；７−クロロ−３−［２−クロロ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｃ）；７−クロロ−３−［４−（ピラゾール−１−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｄ）；および７−クロロ−３−（４−ブロモ−２−メトキシフェニル）−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｅ）もまた、化合物４ａの調製に用いられる製法により調製した。
【００７０】
実施例５
７−ホルミル−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン試薬の合成
【化２３】
工程５Ａ：
カテコールボラン（３６ｍＬの１．０ＭＴＨＦ中溶液、３６ｍｍｏｌ）を、フェニルアセチレン（３．０６ｇ、３０ｍｍｏｌ）に添加し、混合物を窒素下で２時間加熱還流した。２−フェニル−エテニルボロン酸カテコールエステル（化合物５ａ）の冷却溶液を、さらに精製することなく用いた。
工程５Ｂ：
化合物５ａ（０．７５ｍＬの名目上１．０Ｍ溶液、０．７５ｍｍｏｌ）を窒素下で、７−クロロ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物４ｂ、２００ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）にシリンジから添加し、混合物を蒸発乾固した。ジオキサン（２ｍＬ）および水（２ｍＬ）、次いで、炭酸カリウム（１５７ｍｇ、１．１４ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（６６ｍｇ、０．０５７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を攪拌し、６時間加熱還流し、次いで、冷却した。水（５ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、残渣を１：２のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、黄色油として７−（２−フェニル−１−エテニル）−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンを得た（化合物５ｂ、２０１ｍｇ）。
工程５Ｃ：
化合物５ｂ（２００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）の４：１のＤＣＭ／メタノール（１０ｍＬ）中溶液に、−７８℃で酸素中オゾンを流し込んだ。出発物質を消費した後、溶液に窒素を散布し 次いで、硫化ジメチル（０．２００ｍＬ）を添加し、混合物を室温に加温した。１．５時間後、溶媒を蒸発させ、残渣を、溶離液として１：２のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、黄色固体として化合物５ｃを得た（１４９ｍｇ）。
【００７１】
実施例６
２−［２−（４−ブロモ−２−メトキシ−フェニル）−２−オキソ−エチル］−イソインドール−１，３−ジオン試薬の合成
【化２４】
工程６Ａ：
濃硫酸（０．３ｍＬ）を、３−ブロモフェノール（２６．２ｇ）および無水酢酸（１５ｍＬ）の攪拌した混合物に添加した。発熱反応が起こった後に、混合物を室温に冷却した。酢酸および過剰の無水酢酸を蒸発し、残渣を氷上に注いだ。混合物をエーテルで抽出し、合わせたエーテル抽出物をブラインで洗浄し、次いで、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濃縮し、琥珀油として酢酸３−ブロモフェニルを得た（化合物６ａ、３１．６ｇ）。
工程６Ｂ：
化合物６ａ（３１．６ｇ）および塩化アルミニウム（３５ｇ）の混合物を、１６０−１７０℃で３時間加熱した。混合物を室温に冷却し、次いで、ＤＣＭと攪拌し、混合物を氷上に注いだ。混合物を、澄んだ液体二相を得るまで攪拌した（１２時間）。層を分離し、次いで、水層を一度ＤＣＭで抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過および蒸発し、琥珀油として１−（４−ブロモ−２−ヒドロキシフェニル）−１−エタノンを得た（化合物６ｂ、３２．６ｇ）。
工程６Ｃ：
ヨードメタン（１１．２ｍＬ）を、０℃で化合物６ｂ（３２．６ｇ）、ＤＭＦ（１００ｍＬ）および炭酸カリウム（６２．５ｇ）の混合物に添加した。混合物を攪拌し、２時間かけて室温に加温した。水（２００ｍＬ）を添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過および蒸発し、黄褐色固体として１−（４−ブロモ−２−メトキシフェニル）−１−エタノンを得た（化合物６ｃ、３３．１ｇ）。
工程６Ｄ：
臭化第二銅（６４．５ｇ、２２３ｍｍｏｌ）を、化合物６ｃの５００ｍＬの酢酸エチル中溶液に添加した。混合物を攪拌し、２時間加熱還流した。冷却した反応混合物を濾過し、氷上に注ぎ、混合物を固体重炭酸ナトリウムで中和した。層を分離し、水層を酢酸エチルで一回抽出した。合わせた有機層を、水性チオ硫酸ナトリウムで一回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過および濃縮し、黄褐色固体として２，４’−ジブロモ−２’−メトキシアセトフェノンを得た（化合物６ｄ、４３．５ｇ）。
工程６Ｅ：
化合物６ｄ（４３．５ｇ）の無水ＤＭＦ（１５０ｍＬ）中溶液を、５℃に冷却した。かかる溶液に、フタルイミドカリウム（２６．１ｇ、１４１ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、冷却槽を除去し、反応物を室温で３時間攪拌した。溶媒を減圧下で蒸発し、黄褐色固体を得た。固体を、４：１のＤＣＭ／メタノールで、次いで、水ですすいだ。濾過ケーキを、トルエン中でスラリー状にし、蒸発乾固し、黄褐色固体として４’−ブロモ−２’−メトキシ−２−（フタルイミド）アセトフェノンを得た（化合物６ｅ、３９ｇ）。
【００７２】
実施例７
７−ヒドロキシ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチル−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの別途合成
【化２５】
工程７Ａ：
化合物６ｅ（１８．４ｇ、４９ｍｍｏｌ）、ヨウ化第一銅（１．８７ｇ、９．８ｍｍｏｌ）、ピラゾール（６．７ｇ、９８ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（２０．４ｇ、１４８ｍｍｏｌ）の無水ジオキサン（１５０ｍＬ）中溶液に、５分間窒素を散布した。Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１．０６ｍＬ、９．８ｍｍｏｌ）をシリンジから添加し、反応容器を密封し、次いで、２９時間攪拌しながら１０５℃に加熱した。冷却し、反応混合物をセライト（登録商標）を通して濾過し、濾過ケーキを５００ｍＬのＤＣＭですすいだ。合わせた濾液を蒸発し、２９ｇの緑色固体を得、ＤＣＭで粉末にし、黄褐色固体として１１ｇの２−［２−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−２−オキソ−エチル］−イソインドール−１，３−ジオン（化合物７ａ）を得た。ＬＣ／ＭＳ分析によるとかかる生成物は約１５％の出発臭化物を含有しており、さらに精製することなく用いた。
工程７Ｂ：
工程７から得られる化合物（１１ｇ、３０ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＤＭＦジメチルアセタール（８．１ｍＬ、６１ｍｍｏｌ）の混合物を、穏やかな窒素パージを有する１２５℃の浴槽中で１．５時間加熱した。さらにＤＭＦジメチルアセタール（４．０ｍＬ、３０ｍｍｏｌ）を添加し、２時間加熱し続けた。混合物を冷却し、次いで、減圧下で蒸発乾固し、黄褐色固体を得た。かかる固体に、無水エタノール（１００ｍＬ）中メチルヒドラジン（４．１ｍＬ、７７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３時間還流した。溶媒を蒸発し、得られた固体を、３：１のエーテル／エタノールで洗浄した。合わせた濾液を蒸発し、褐色油としてアミノピラゾール混合物を得た（９．８ｇ）。２つのピラゾール異性体の比率が、ピラゾールのメチルシグナルの１Ｈ ＮＭＲ積分で３：２になるように判定された。
工程７Ｃ：
工程７Ｂから得られる化合物（９．８ｇ、３６ｍｍｏｌ）、エチルアセト酢酸（５．１ｍＬ、４０．０ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸水和物（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ）をトルエン（１５０ｍＬ）中で懸濁し、混合物をディーン−スターク・トラップを用いて水を共沸により除去しながら還流した。１．５時間後、混合物を冷却し、蒸発乾固した。残渣をジフェニルエーテル（４０ｍＬ）中で懸濁し、２２０℃より高温を保ちながら４５分かけて２０ｍＬのジフェニルエーテル（初期温度２５５℃）に添加した。添加を終了すると、混合物を室温に冷却し、次いで、２５０ｍＬのヘキサンに注ぎ込んだ。得られた析出物を収集し、ヘキサンで洗浄した。得られた化合物を、溶出液としてＤＣＭ中４％メタノールを用いてシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製した。部分的に精製した固体生成物を酢酸エチルで磨砕し、褐色固体として７−ヒドロキシ−３−［２−メトキシ−４−（ピラゾール−１−イル）フェニル］−１，５−ジメチル−ピラゾロ［４，３ｂ］ピリジンを得た（化合物３ｆ、３．７５ｇ）。
７−ヒドロキシ−３−］４−ブロモ−２−メトキシフェニル］１，５−ジメチルピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物７ｃ）もまた、化合物３ｆの調製における上記の製法により調製される（ただし、出発物質として化合物６ｅを用い、プロトコルから工程７Ａを除く）。
【００７３】
実施例８
７−イソブチル−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化２６】
工程８Ａ：
エーテル中臭化イソブチルマグネシウム（０．６ｍＬの２．０Ｍ溶液）を、０℃で０．６ｍＬのＴＨＦおよび０．１５ｍＬのＮＭＰ中化合物４ｂ（８５ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）および鉄（ＩＩＩ）アセチルアセトネート（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加した。混合物を室温に加温し、３時間攪拌した。水性塩化アンモニウムを添加し、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、残渣を、溶離液として２：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、黄褐色固体として化合物８−１を得た（６７ｍｇ）。塩酸塩（６８ｍｇ、黄褐色粉末）を２当量のエーテル性ＨＣｌを遊離塩基のＤＣＭ／エーテル中溶液に添加し、次いで、溶媒の蒸発により調製した。
工程８Ａにおいて臭化イソブチルマグネシウムの代わりに適当なハロゲン化アルキルマグネシウムを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表１】
【００７４】
実施例９
７−（２，４−ジメトキシ−フェニル）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化２７】
工程９Ａ：
ジオキサン（０．５ｍＬ）中化合物４ｂ（５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）に、０．２５ｍＬのＨ２Ｏを添加した。混合物に、２，４−ジメトキシフェニルボロン酸（３１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、次いで、炭酸カリウム（３０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１０ｍｇ、０．００１７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を攪拌し、一晩８５℃に加熱した。反応混合物を濾過し、ＨＰＬＣ ＭＳにより精製し、ＴＦＡ塩として化合物９−１を得た（３０．５ｍｇ）。
工程９Ａで用いられた２，４−ジメトキシフェニルボロン酸の代わりに適当なボロン酸またはボロン酸エステルを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表２】
【表３】
１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−７−（４−メチル−ピリジン−３−イル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン９−１３を化合物４ａおよび（４−メチル−３−ピリジニル）−ボロン酸を用いて同様の製法にしたがって合成した。ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３９４．８、ｔＲ＝４．６５。
【００７５】
実施例１０
エチル−（２−メトキシ−エチル）−｛３−［２−メトキシ−４−（３−トリフルオロメチル−ピラゾール−１−イル）−フェニル］−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル｝−アミンの合成
【化２８】
工程１０Ａ：
化合物４ｅ（１．０７ｇ、２．９ｍｍｏｌ）、（２−メトキシエチル）エチルアミン （１．４３ｍＬ、１１．７ｍｍｏｌ）、ｐＴＳＡ水和物（５５０ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（２ｍＬ）の混合物を、電子レンジにて１８０℃で６０分間、次いで１９５℃で６０分間加熱した。溶媒を蒸発し、残渣を、溶離液として１：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、油として化合物１０ａ（［３−（４−ブロモ−２−メトキシ−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−エチル−（２−メトキシ−エチル）−アミン）を得た（１．１ｇ）。
工程１０Ｂ：
ヨウ化銅（Ｉ）（６ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（６２ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）および３−（トリフルオロメチル）ピラゾール（４１ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を、１ドラムのバイアルにて計量した。化合物１０ａ（６５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の無水ジオキサン（２ｍＬ）中溶液、次いで、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（３μｌ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加した。バイアルを、Ｔｅｆｌｏｎ（登録商標）ラインキャップで密封し、１０５℃で４５分間攪拌しながら加熱した。さらに、Ｎ，Ｎ’−ジメチルエチレンジアミン（１０μｌ、０．１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０５℃で８時間加熱した。混合物を冷却し、濾過し（酢酸エチル洗浄）、次いで、濾液を蒸発した。残渣を、溶離液として１：２のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲル上でクロマトグラフィーに付し、油として化合物１０−１を得た（５５ｍｇ）。
工程１０Ｂで用いられた３−（トリフルオロメチル）ピラゾールの代わりに適当な複素環を用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表４】
【００７６】
実施例１１
７−（１−メトキシ−プロピル）−３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化２９】
工程１１Ａ：
臭化エチルマグネシウム（０．５ｍＬの３．０Ｍエーテル中溶液、１．５ｍｍｏｌ）を、−７８℃で化合物５ｃ（８０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に添加した。５分後、反応物を水性塩化アンモニウムで急冷し、混合物を室温に加温した。混合物を酢酸エチルで抽出した。抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し油を得た。１回量５０ｍｇの化合物５ｃを用いてかかる製法を繰り返し、合わせて得られた化合物を、１：３のヘキサン／酢酸エチルで溶出しながらシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、黄色固体として化合物１１ａを得た（２３ｍｇ）。
工程１１Ｂ：
水素化ナトリウム（油中２０ｍｇの６０％分散液、０．４８ｍｍｏｌ）を、室温で化合物１１ａ（２２ｍｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（０．２ｍＬ）中溶液に添加した。５分後、ヨウ化メチル（１０μｌ、０．１６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を１０分間攪拌した。水性リン酸二水素ナトリウム（１０％）を添加し、混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた抽出物を、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し油を得、溶離液として１：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、黄色油として化合物１１−１を得た（２１ｍｇ）；ＭＷ＝３９１．４７；ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝３９２．０；ｔＲ＝４．８８。
【００７７】
実施例１２
３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−７−［フェニル−（２，２，２−トリフルオロ−エトキシ）−メチル］−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化３０】
工程１２Ａ：
フェニルリチウム（０．２５ ｍＬの１．９Ｍシクロヘキサン／エーテル中溶液、０．４８ｍｍｏｌ）を、室温で化合物５ｃ（４５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に添加した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（１：３のヘキサン／酢酸エチル）に付して、黄色油として化合物１２ａを得た（３６ｍｇ）。
工程１２Ｂ：
化合物１２ａ（３５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（０．４ｍＬ）中溶液を、引き続き、２，２，２−トリフルオロエタノール（０．０５７ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）、ジエチルアゾジカルボン酸塩（０．０３ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を室温で８時間攪拌し、次いで、密封したバイアルにて６９℃で１５時間加熱した。溶媒を蒸発し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー、次いで、イオン交換クロマトグラフィー（Ｖａｒｉａｎ製ＳＣＸカートリッジ、１：１のＤＣＭ／メタノール、次いで、メタノール中１．０Ｍアンモニアで溶出）、次いで、調製用薄層クロマトグラフィーにより精製し、黄色油として化合物１２−１を得た（５ｍｇ）；ＭＷ＝５０７．５１４；ｔＲ＝７．２７。
【００７８】
実施例１３
［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−ジエチル−アミンの合成
【化３１】
工程１３Ａ：
化合物１ｆ（５０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）、ｐＴＳＡ−Ｈ２Ｏ（５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）およびジエチルアミン（２００ｍｇ、３．３１ｍｍｏｌ）の溶液を、密封したバイアルにて１８０℃で１７分間、電子レンジで加熱した。過剰の試薬を蒸発し、酢酸エチル（５ｍＬ）を添加した。有機層を飽和水性重炭酸ナトリウム（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）を洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶離液として１：１のヘキサン／酢酸エチルを用いてシリカゲルクロマトグラフィーに付して精製し、油として（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル）−ジエチル−アミン（化合物１３ａ、４０ｍｇ）を得た。
工程１３Ｂ：
化合物１３ａ（４０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、化合物２ｃ（４１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１５ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）、水性炭酸ナトリウム（０．３ｍＬの２Ｍ溶液、０．６ｍｍｏｌ）、トルエン（２ｍＬ）およびエタノール（２ｍＬ）の混合物を、密封したバイアルにて１６時間攪拌しながら１００℃で加熱した。混合物を冷却し、濾過し、調製用ＨＰＬＣにより精製し、［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−ジエチル−アミンを得た（化合物１３−１、３．５ｍｇ）。
工程１３Ａで用いられるジエチルアミンの代わりに適当なアミンを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表５】
【００７９】
実施例１４
［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−ビス−（２−メトキシ−エチル）−アミンの合成
【化３２】
工程１４Ａ：
化合物４ａ（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に、水素化ｐＴＳＡ（４１ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）、ビス（２−メトキシエチル）アミン（０．０３２ｍＬ、０．２４ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（０．５ｍＬ）を添加した。反応物を、マイクロ波で２０分間２００℃に加熱した。反応混合物をＨＰＬＣ／ＭＳにより精製し、ＴＦＡ塩として［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−ビス−（２−メトキシ−エチル）−アミンを得た（化合物１４−１、１１．２ｍｇ）。
工程１４Ａで用いられるものの代わりに適当なクロロピラゾロピリジンおよびアミンを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表６】
【表７】
【表８】
【００８０】
実施例１５
ベンジル−［３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イルメチル）−アミンの合成
【化３３】
工程１５Ａ：
水素化ナトリウム（３ｍｇ、鉱油中６０％懸濁液、０．０８ｍｍｏｌ）を、窒素下、室温でアセトアミドオキシム（７ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）中懸濁液に添加した。シリンジを介して化合物１４−１３（３２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をＴＨＦに注入する前に、混合物を１０分間攪拌した。混合物を、密封管にて９０℃で２時間加熱した。冷却した反応混合物をメタノールで希釈し、調製用逆相ＨＰＬＣで精製し、ＴＦＡ塩として化合物１５−１を得た；ＭＷ＝５２０．５９；ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝５２１．１；ｔＲ＝５．３８５。
【００８１】
実施例１６
ベンジル−［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−アミンおよびベンジル−［１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イル］−プロピル−アミンの合成
【化３４】
工程１６Ａ：
化合物４ａ（６０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）に、ｐＴＳＡ（６２ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、ベンジルアミン（０．０４０ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）およびアセトニトリル（０．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を、１５分間マイクロ波で１８０℃に加熱した。溶離液として１０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭを用いて調製用ＴＬＣにより精製し、黄色固体として化合物１６ａを得た（４３ｍｇ）；ＬＣ／ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＝４０９．２。
工程１６Ｂ：
化合物１６ａ（４３ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）に、１−ヨードプロパン（０．０５３ｍＬ、０．３３ｍｍｏｌ）およびＮａＨ（１３ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）、次いで、無水ＴＨＦ（０．５ｍＬ）を添加した。反応混合物を４時間還流した。直ちに冷却し、反応物をメタノールで急冷し、ＨＰＬＣ／ＭＳにより精製し、固体として化合物１６−１を得た（２０．８ｍｇ）。
工程１６Ａおよび１６Ｂで用いられるものの代わりに適当なクロロピラゾロピリジン、アミンおよびハロゲン化アルキルを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表９】
【表１０】
【００８２】
実施例１７
７−（１−エチル−プロポキシ）−１，５−ジメチル−３−（２−メチル−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジンの合成
【化３５】
工程１７Ａ：
化合物３ｅ（３０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）に、３−ペンタノール（０．０１２ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（０．１４、１．５当量）および無水ＴＨＦ（０．５ｍＬ）を添加した。反応容器に窒素を流し込んだ後、それを密封し室温で５分間攪拌した。これに続いて、アゾジカルボン酸ジエチル（０．０２４ｍＬ、０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を、室温で一晩攪拌した。反応混合物を、メタノール（０．５ｍＬ）で希釈し、ＨＰＬＣ／ＭＳにより精製し、ＴＦＡ塩として化合物１７−１を得た（３．０ｍｇ）。
工程１７Ａで用いられるものの代わりに適当なヒドロキシピラゾロピリジンおよびアルコールを用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表１１】
【表１２】
【００８３】
実施例１８
１−｛３−メトキシ−４−［７−（１−メトキシメチル−プロポキシ）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニル｝−１Ｈ−ピロール−２−カルボニトリルの合成
【化３６】
工程１８Ａ：
実施例１７の製法の後、１−メトキシ−ブタン−２−オールと化合物７ｃの光延反応により、３−（４−ブロモ−２−メトキシ−フェニル）−７−（１−メトキシメチル−プロポキシ）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン（化合物１８ａ）を得た。
工程１８Ｂ：
実施例１０の工程１０Ｂの製法の後、ヨウ化銅（Ｉ）は、シアノピロールと化合物１８ａのＢｕｃｈｗａｌｄ反応を触媒し、１−｛３−メトキシ−４−［７−（１−メトキシメチル−プロポキシ）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−３−イル］−フェニル｝−１Ｈ−ピロール−２−カルボニトリル（化合物１８−１）を得た。
工程１８Ｂで用いられる２−シアノピロールの代わりに適当な複素環を用いて、以下の表における化合物を合成した：
【表１３】
【００８４】
実施例１９
２−［３−（２−メトキシ−４−ピラゾール−１−イル−フェニル）−１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾロ［４，３−ｂ］ピリジン−７−イルオキシ］−酪酸メチルエステルの合成
【化３７】
工程１９Ａ：
化合物３ｆ（４０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に、（＋／−）−メチル−２−ブロモプロピオン酸塩（３４ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、ＮａＨ（１０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、鉱油中６０％）および無水ＴＨＦ（０．５ｍＬ）を添加した。室温で５分間攪拌した後、反応混合物を、密封管にて８５℃で１２時間加熱した。冷却後、反応物をメタノール（０．５ｍＬ）で急冷し、ＨＰＬＣ／ＭＳにより精製し、固体ＴＦＡ塩として化合物１９−１を得た（１１ｍｇ）。
工程１９Ａで用いられる臭化物により、以下の表における化合物を合成した。化合物１９−３を、実施例１５のプロトコルを用いて化合物１９−２から合成した：
【表１４】
【００８５】
実施例２０
ＣＲＦ受容体結合活性
本発明の化合物は、Ｇｒｉｇｏｒｉａｄｉｓら（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ｖｏｌ５０，ｐｐ６７９−６８６，１９９６）およびＨｏａｒｅら（Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ｖｏｌ６３ ｐｐ７５１−７６５，２００３）により一般的に記載の標準的な放射性リガンド結合アッセイによりＣＲＦ受容体に対する結合活性を評価してもよい。放射性標識ＣＲＦリガンドを用いることにより、アッセイは、ＣＲＦ受容体サブタイプに関する本発明の化合物の結合活性を評価するために用いてもよい。
簡単に記載すると、結合アッセイは、ＣＲＦ受容体から放射性標識ＣＲＦリガンドの置換を含む。より具体的には、結合アッセイは、ヒトＣＲＦ受容体を安定にトランスフェクションした細胞に由来する１−１０μｇの細胞膜を用いて、９６ウェルアッセイプレートにて行われる。各ウェルに、目的の化合物または参照リガンド（例えば、ソーバジン、ウロコルチンＩまたはＣＲＦ）を含む約０．０５ｍＬのアッセイ緩衝液（例、Ｄｕｌｂｅｃｃｏリン酸緩衝生理食塩水、１０ｍＭの塩化マグネシウム、２ｍＭのＥＧＴＡ）、０．０５ｍＬの［１２５Ｉ］チロシン−ソーバジン（最終濃度〜１５０ｐＭまたはＳｃａｔｃｈａｒｄ分析により決定するおよそのＫＤ）およびＣＲＦ受容体を含有する０．１ｍＬの細胞膜懸濁液を入れる。混合物を２２℃で２時間インキュベーションし、次いで、ガラスファイバーフィルターにかけて急速濾過させることにより結合および遊離放射性リガンドを分離する。３回洗浄した後、フィルターを乾燥させ、シンチレーションカウンターを用いて放射活性（１２５Ｉからのオージェ電子）をカウントする。全ての放射性リガンド結合データを、非線形最小二乗曲線適合プログラムＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｉｎｃ）またはＸＬｆｉｔ（ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｔｄ）を用いて分析してもよい。
【００８６】
実施例２１
ＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性
本発明の化合物はまた、様々な機能的試験により評価してもよい。例えば、本発明の化合物は、ＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性についてスクリーニングしてもよい。ＣＲＦ刺激性アデニル酸シクラーゼ活性を測定するためのアッセイは、全細胞調製物に対するアッセイに適合するように修飾を加えて、Ｂａｔｔａｇｌｉａら（Ｓｙｎａｐｓｅ １：５７２，１９８７）により一般的に記載されたものにしたがって実施してもよい。
より具体的には、標準的なアッセイ混合物は、０．１ｍＬの最終容量で、ＤＭＥＭ緩衝液中、以下：２ｍＭのＬ−グルタミン、２０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１ｍＭのＩＭＢＸを含んでいてもよい。刺激試験において、トランスフェクトしたＣＲＦ受容体を有する全細胞を、９６ウェルプレート中に播種し、様々な濃度のＣＲＦ関連および非関連ペプチドと共に３７℃で３０分間インキュベートし、特定の受容体サブタイプの薬理学的序列統計データを構築する。インキュベーション後、試料中のｃＡＭＰを、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製ｃＡＭＰ−ＳｃｒｅｅｎＴＭなどの標準的な市販キットを用いて測定する。化合物の機能的評価において、ｃＡＭＰ産生の５０％刺激を惹起する細胞および単一濃度のＣＲＦまたは関連ペプチドは、様々な濃度の競合化合物と共に３７℃で３０分間インキュベーションし、上記のようにｃＡＭＰを測定した。
【００８７】
本発明の特定の実施態様は、例示の目的のために本明細書に記載されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、様々な修飾がされてもよいことが理解されるであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲により限定する場合を除き、限定するものではない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の構造：
【化１】
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは、０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３または−ＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
により示される化合物またはその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
Ｒ１がメチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ｎが１である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が置換アリールである、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が置換ヘテロアリールである、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が−ＯＲ３である、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシアルキルまたはヘテロアリールアルキルである、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が−ＮＲ４ａＲ４ｂである、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４ａおよびＲ４ｂが、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルである、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ５がメチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
Ｈｅｔが置換ヘテロシクリルである、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１およびＲ５のそれぞれがメチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
ｎが１である、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
Ａｒ−Ｈｅｔが、式：
【化２】
［式中：ｍは１、２、３または４であり；および
Ｒ６は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロゲンである］
である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ６が各場合において、メチル、メトキシおよびトリハロメチルの群から選択される、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
Ｈｅｔがピリジルまたは置換ピリジルである、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
Ｈｅｔがピリジルである、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
医薬上許容される担体もしくは希釈剤および医薬上有効な量の下記の構造：
【化３】
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３または−ＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
により示される化合物またはその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体もしくはプロドラッグを含む医薬組成物。
【請求項２０】
Ｒ１がメチルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２１】
ｎが１である、請求項１９記載の組成物。
【請求項２２】
Ｒ２がＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２３】
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシアルキルまたはヘテロアリールアルキルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２４】
Ｒ５がメチルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２５】
Ｈｅｔが置換複素環である、請求項１９記載の組成物。
【請求項２６】
Ｒ１およびＲ５のそれぞれがメチルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２７】
ｎが１である、請求項２６記載の組成物。
【請求項２８】
Ａｒ−Ｈｅｔが、式：
【化４】
［式中：ｍは１、２、３または４であり；および
Ｒ６は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロゲンである］
である、請求項２７記載の組成物。
【請求項２９】
Ｒ６が各場合において、メチル、メトキシおよびトリハロメチルの群から選択される、請求項２８記載の組成物。
【請求項３０】
Ｈｅｔがピリジルまたは置換ピリジルである、請求項２９記載の組成物。
【請求項３１】
Ｈｅｔがピリジルである、請求項３０記載の組成物。
【請求項３２】
ＣＲＦアンタゴニストでの治療の影響を受けやすい疾患または病態を有する哺乳類を治療する方法であって、医薬上許容される担体または希釈剤および医薬上有効な量の下記の構造：
【化５】
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは、０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３または−ＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
により示される化合物またはその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体もしくはプロドラッグを含む医薬組成物を前記動物へ投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記疾患または病態が、情動障害、摂食障害、心疾患、免疫抑制障害および炎症性疾患の群から選択される、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記疾患または病態が、鬱、不安、パニック、強迫性障害、不安定狭心症、反応性高血圧、拒食症、過食症および過敏性腸症候群の群から選択される、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
前記動物がヒトである、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記障害が発作である、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
前記障害が鬱である、請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
前記障害が不安に関する障害である、請求項３５記載の方法。
【請求項３９】
前記障害が強迫性障害である、請求項３５記載の方法。
【請求項４０】
前記障害が過敏性腸症候群である、請求項３５記載の方法。
【請求項４１】
前記障害が拒食症である、請求項３５記載の方法。
【請求項１】
下記の構造：
【化１】
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは、０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３または−ＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
により示される化合物またはその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体もしくはプロドラッグ。
【請求項２】
Ｒ１がメチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ｎが１である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２がＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が置換アリールである、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が置換ヘテロアリールである、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が−ＯＲ３である、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシアルキルまたはヘテロアリールアルキルである、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が−ＮＲ４ａＲ４ｂである、請求項１記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４ａおよびＲ４ｂが、独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルである、請求項９記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ５がメチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
Ｈｅｔが置換ヘテロシクリルである、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１およびＲ５のそれぞれがメチルである、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
ｎが１である、請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
Ａｒ−Ｈｅｔが、式：
【化２】
［式中：ｍは１、２、３または４であり；および
Ｒ６は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロゲンである］
である、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ６が各場合において、メチル、メトキシおよびトリハロメチルの群から選択される、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
Ｈｅｔがピリジルまたは置換ピリジルである、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
Ｈｅｔがピリジルである、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
医薬上許容される担体もしくは希釈剤および医薬上有効な量の下記の構造：
【化３】
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３または−ＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
により示される化合物またはその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体もしくはプロドラッグを含む医薬組成物。
【請求項２０】
Ｒ１がメチルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２１】
ｎが１である、請求項１９記載の組成物。
【請求項２２】
Ｒ２がＣ１−Ｃ６アルキルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２３】
Ｒ３が、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシアルキルまたはヘテロアリールアルキルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２４】
Ｒ５がメチルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２５】
Ｈｅｔが置換複素環である、請求項１９記載の組成物。
【請求項２６】
Ｒ１およびＲ５のそれぞれがメチルである、請求項１９記載の組成物。
【請求項２７】
ｎが１である、請求項２６記載の組成物。
【請求項２８】
Ａｒ−Ｈｅｔが、式：
【化４】
［式中：ｍは１、２、３または４であり；および
Ｒ６は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、置換Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６アルコキシまたはハロゲンである］
である、請求項２７記載の組成物。
【請求項２９】
Ｒ６が各場合において、メチル、メトキシおよびトリハロメチルの群から選択される、請求項２８記載の組成物。
【請求項３０】
Ｈｅｔがピリジルまたは置換ピリジルである、請求項２９記載の組成物。
【請求項３１】
Ｈｅｔがピリジルである、請求項３０記載の組成物。
【請求項３２】
ＣＲＦアンタゴニストでの治療の影響を受けやすい疾患または病態を有する哺乳類を治療する方法であって、医薬上許容される担体または希釈剤および医薬上有効な量の下記の構造：
【化５】
［式中：Ｒ１は各場合において独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキルであり；
ｎは、０、１または２であり；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−ＯＲ３または−ＮＲ４ａＲ４ｂであり；
Ｒ３は、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキル、複素環アルキルまたは置換複素環アルキルであり；
Ｒ４ａおよびＲ４ｂは、同一であるかまたは異なり、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ１０アルキル、置換Ｃ１−Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、置換ヘテロアリールアルキル、Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルまたは置換Ｃ１−Ｃ１０アルコキシアルキルであり（ただし、Ｒ４ａおよびＲ４ｂが共に水素であることはない）；
Ｒ５は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ａｒは、置換フェニル、ピリジルまたは置換ピリジルであり；および
Ｈｅｔは、ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルである］
により示される化合物またはその医薬上許容される塩、エステル、溶媒和物、立体異性体もしくはプロドラッグを含む医薬組成物を前記動物へ投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記疾患または病態が、情動障害、摂食障害、心疾患、免疫抑制障害および炎症性疾患の群から選択される、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記疾患または病態が、鬱、不安、パニック、強迫性障害、不安定狭心症、反応性高血圧、拒食症、過食症および過敏性腸症候群の群から選択される、請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
前記動物がヒトである、請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
前記障害が発作である、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
前記障害が鬱である、請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
前記障害が不安に関する障害である、請求項３５記載の方法。
【請求項３９】
前記障害が強迫性障害である、請求項３５記載の方法。
【請求項４０】
前記障害が過敏性腸症候群である、請求項３５記載の方法。
【請求項４１】
前記障害が拒食症である、請求項３５記載の方法。
【公表番号】特表２００８−５１７０６０（Ｐ２００８−５１７０６０Ａ）
【公表日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５３７９５２（Ｐ２００７−５３７９５２）
【出願日】平成１７年１０月１７日（２００５．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３７２９５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４４８２１
【国際公開日】平成１８年４月２７日（２００６．４．２７）
【出願人】（５０２０７８２３９）エスビー・ファルムコ・プエルト・リコ・インコーポレイテッド (22)
【氏名又は名称原語表記】ＳＢ Ｐｈａｒｍｃｏ Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ Ｉｎｃ
【出願人】（５００３８９７９３）ニューロクライン バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド (16)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年５月２２日（２００８．５．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１０月１７日（２００５．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０３７２９５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０４４８２１
【国際公開日】平成１８年４月２７日（２００６．４．２７）
【出願人】（５０２０７８２３９）エスビー・ファルムコ・プエルト・リコ・インコーポレイテッド (22)
【氏名又は名称原語表記】ＳＢ Ｐｈａｒｍｃｏ Ｐｕｅｒｔｏ Ｒｉｃｏ Ｉｎｃ
【出願人】（５００３８９７９３）ニューロクライン バイオサイエンシーズ， インコーポレイテッド (16)
【Ｆターム（参考）】
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