ＰＣＬを含む微粒子及びその使用
本発明は、ＰＣＬを含む微粒子を調製するための方法、前記方法によって得られる微粒子、こうして得られたゲル、並びに皮膚の奇形又は傷跡を治療するための、及び／又は膀胱機能を制御するための、及び／又は胃逆流を制御するための、及び／又は勃起機能不全を治療するための、及び／又は声帯を治療するための薬剤を調製するためなどの、ゲルのいくつかの使用に関する。ゲルは、化粧上の応用にも使用できる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリ（ε−カプロラクトン）又はポリカプロラクトン（ＰＣＬ）を含む微粒子を調製するための方法、該微粒子、生分解性注射可能ゲル、及び該ゲルのいくつかの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢と共に及び／又はいくつかの疾患の結果として、筋肉及び脂肪をはじめとする身体の軟部組織は、減少し、容貌に影響を及ぼし且つ／又は機能を低下させることがある。例えば、膀胱機能及び胃逆流の制御など、身体の多くの自律機能を制御する括約筋は、年齢又は疾患に伴って減少する。注射可能なウシコラーゲンなどのいくつかの医療用フィラーが、既に開発されている。このフィラーは、アレルギーの危険及びクロイツフェルトヤコブ病によって高められた脅威に主として関連するいくつかの欠点を有する。注射可能なウシコラーゲンの代替物として、他のフィラー、例えば、乳酸及び／又はグリコール酸の反復単位を含むポリマー粒子の粒子懸濁液又は乳液を含むインプラントなどが開発されている（米国特許出願公開第２００３／０９３１５７号又は国際公開第９８／５６４３１号）。
【０００３】
しかし、これらの各特許出願中で開示されているようなフィラーは、いくつかの欠点を有し：このようなフィラーを含むゲルの混合及び流動特性（すなわち、流動注射可能性）は、最終製品を構成するのに最適ではない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、人体中で望ましくない反応をまったく引き起こさず、注射された場合に、凝集、注射針の詰まり、及び小結節形成を回避する本質的に球状の微小球であるため、流動特性などの優れた特性を有する、徐々に再吸収される医療用又は化粧用生分解性インプラントがなお求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
驚くべきことに、本発明者らは、流動特性などの優れた特性を有する微小球を、比較的高い粘度を有し且つ可溶化されたＰＣＬ及び界面活性剤を含む当初の混合物を使用する、効率的で迅速な方法で得ることができることを見出した。この方法の各特徴を、ここで広範囲に詳述する。
【０００６】
方法
第１の態様において、本発明は、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）含有微粒子を調製するための方法に関し、この方法は、
ａ１）ＰＣＬポリマーを可溶化し、続いて可溶化されたＰＣＬポリマーを、界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と混合するステップ、
ｂ）ステップａ１）で得られた溶液からＰＣＬを含む微粒子を形成するステップ
を含む。
【０００７】
第２の態様において、本発明は、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）含有微粒子を調製するための方法に関し、この方法は、
ａ２）ＰＣＬポリマーをジクロロメタン（ＤＣＭ）及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中で可溶化するステップ、
ｂ）ステップａ２）で得られた溶液からＰＣＬを含む微粒子を形成するステップ
を含む。
【０００８】
好ましい一実施形態において、ある方法が、上で規定した双方の態様による本発明に包含される。これは、ステップａ）において、ＰＣＬポリマーをＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中で可溶化し、続いて該可溶化されたＰＣＬポリマーを、界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と混合する方法である。続いてステップｂ）として、ａ）で得られた溶液からＰＣＬ含有微粒子を形成する。
【０００９】
ステップａ）
本発明の方法の第１ステップａ）は、可溶化ステップを含むか、可溶化ステップからなるか、又は可溶化ステップである。
【００１０】
ステップａ２）
本発明の方法の第１ステップは、可溶化ステップからなるか、又は可溶化ステップであり：ＰＣＬポリマーを、ジクロロメタン（ＤＣＭ）及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中で可溶化する。したがって、後に本明細書中で規定するような微粒子を含むゲルに対して意図された応用に応じて、本発明者らは、実質的に純粋なＴｗｅｅｎを使用することが、低分子量から中分子量の微粒子を調製する場合に、有機溶媒が存在しないので、特に魅力的であることを見出した。好ましくは、低分子量から中分子量とは、約１，０００〜約５０，０００Ｍｎ（数平均分子量）、より好ましくは約１，０００〜約４０，０００Ｍｎ、より好ましくは約５，０００〜約４０，０００Ｍｎ、より好ましくは約１，０００〜約３０，０００Ｍｎ、より好ましくは約１０，０００〜約３０，０００Ｍｎ、より好ましくは約２０，０００〜約３０，０００Ｍｎ、最も好ましくは約１，０００〜約３０，０００Ｍｎの範囲にある分子量を意味する。したがって、本発明のこの第２の方法において、３つの好ましい方法が提供され：その１つは、ＤＣＭを使用し、低分子量から中分子量、又は中分子量から高分子量を有する微粒子を提供するのに適している。好ましくは、中分子量から高分子量とは、約３０，０００〜約５００，０００Ｍｎ、より好ましくは約４０，０００〜約１５０，０００Ｍｎ、さらにより好ましくは約４０，０００〜約１００，０００Ｍｎの範囲にある分子量を意味する。もう１つの好ましい方法は、実質的に純粋なＴｗｅｅｎを使用し、該方法は、低分子量から中分子量を有する微粒子を得るのに適している。最後に、第３の方法は、ＤＣＭと実質的に純粋なＴｗｅｅｎとの組合せを使用する。
【００１１】
実質的に純粋なＴｗｅｅｎとは、好ましくは、少なくとも８０％のＴｗｅｅｎ、又は少なくとも９０％のＴｗｅｅｎ、又はほぼ１００％のＴｗｅｅｎを意味する。Ｔｗｅｅｎは、ポリオキシエチレンソルビタンのエステルである界面活性剤のファミリーである。Ｔｗｅｅｎ２０、４０、６０又は８０を使用できる。ステップａ２）で実質的に純粋なＴｗｅｅｎを使用する場合、その可溶化ステップは、好ましくは、ＰＣＬの溶融温度に近い温度又はそれを超える温度で実施される。この温度は、ほぼ、ＰＣＬの溶融温度である。好ましくは、この温度は、約５０〜約９０℃、又は約６０〜約９０℃の範囲にある。より好ましくは、この温度は約６０℃又は約８０℃である。
【００１２】
ステップａ２）でＤＣＭを使用したなら、続いて、ａ２）で得られた溶液を界面活性剤を含む液体に添加して、微粒子を含む液体を得る。界面活性剤又は張力作用剤（ｔｅｎｓｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）は、溶液の表面張力を低下させ、安定な小粒子の形成を可能にする化学物質である。界面活性剤は、微粒子形成中にそれらの微粒子を安定化する。適切な界面活性剤には、限定はされないが、メチルセルロース（ＭＣ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリソルベート（ポリオキシエチレンソルビタン又はＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）、好ましくはモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタン、又はモノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタンなど）が含まれ、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ６０（商標））、及びモノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ２０（商標））が好ましく、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））がより好ましい。
【００１３】
好ましい実施形態において、界面活性剤は、欧州特許出願公開第１８７２８０３号又は米国特許出願公開第２００３／０１５７１８７号に記載されているポリビニルアルコール（ＰＶＡ）などの限定された生体適合性を有する界面活性剤ではない。最も好ましい界面活性剤は、中でも、その生体適合性のためＭＣである。したがって、ＤＣＭ及び続いて界面活性剤としてＭＣを使用する方法は、ＤＣＭ及び続いて界面活性剤としてＰＶＡを使用する方法に比べてより効率的であると予想され；その生体適合性のため、形成された微粒子を工程の最後で界面活性剤を除去するために徹底的に洗浄する必要がない。
【００１４】
液体、好ましくは界面活性剤を含む液体又はゲル状液体は、好ましくは、約１〜約４００，０００ｃＰ、約１０〜約１００，０００ｃＰ、約５０〜約１００，０００ｃＰ、約７５〜約５０，０００ｃＰ、約１００〜約５０，０００ｃＰ、約１００〜約１，０００ｃＰ、又は約７５〜約１，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と規定される。最も好ましくは、該粘度は、約７５〜約３００ｃＰである。粘度は、好ましくは、室温で、又はＰＣＬを可溶化する温度で測定される。好ましい実施形態において、ある濃度の界面活性剤、より好ましくは約０．０１〜約５．０ｗ／ｗ％のＭＣが添加され、より好ましくは約０．１〜約５．０ｗ／ｗ％のＭＣが添加され、より好ましくは約０．５〜約２．５ｗ／ｗ％のＭＣが添加され、最も好ましくは約１．０ｗ／ｗ％のＭＣが添加される。異なる分子量：Ｍｎ＝１４，０００、Ｍｎ＝４１，０００、Ｍｎ＝６３，０００又はＭｎ＝８８，０００を有するいくつかの種類のＭＣが、市販されている。好ましくは、Ｍｎ＝６３，０００の分子量を有するＭＣが使用される。
【００１５】
好ましい実施形態において、好ましくは約１．０ｗ／ｗ％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）が使用される。このような高濃度のＭＣを使用することは、その方法の効率及び形成される微粒子の特性のために魅力的であり：当初のＭＣ溶液の粘度は高い（１００〜１２０ｃＰ）。本発明者らは、驚くべきことに、大量の濃厚なＤＣＭ中のＰＣＬ溶液を粘性のあるＭＣ溶液へかなり迅速（１分未満）に添加することができ、結果として、得られる混合物の粘度もかなり高いことを見出した。得られる混合物の粘度は、ＭＣ溶液のそれとほぼ同じである。激しい撹拌は、後に本明細書中で確認されるように、実質的に球状である微粒子の形成につながる。ＤＣＭ中のＰＣＬ濃度は、後に本明細書中で規定される。さらに、蒸発によるＤＣＭの除去は、はるかに少ないＭＣを使用する通常の抽出蒸発法（Ｉｏｏｓｓ Ｐら（２００１）、２２：２７８５〜２７９４）に比べてより迅速（１〜３時間内）に行われ得る。
【００１６】
ステップａ１）
本発明の方法の第１ステップは、可溶化ステップを含む。ステップａ１）に示す可溶化ステップは、好ましくは、ステップａ２）に記載したように実施される。しかし、他の液体、溶媒又は界面活性剤を使用してＰＣＬポリマーを可溶化できる。例には、脂肪族化合物、芳香族化合物、ハロゲン含有化合物、クロロホルム、ハロゲン非含有化合物、アセトン、ＴＨＦ、トルエン、酢酸エチル、又は乳酸エチルなどが含まれる。
【００１７】
続いて、可溶化されたＰＣＬポリマーを、界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰ又は約１０〜約１００，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と混合する。粘度は、好ましくは、約１０〜約３０，０００ｃＰ、好ましくは約１５〜約２０，０００ｃＰ、より好ましくは約２０〜約１０，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約４０〜約５，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約５０〜約２，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約７５〜約２，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約７５〜約１，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約１００〜約１，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約７５〜約５００ｃＰ、又はさらにより好ましくは約７５〜約４００ｃＰ、最も好ましくは約７５〜約３００ｃＰの範囲にある。粘度は、好ましくは、室温、又はＰＣＬを可溶化する温度で測定される。
【００１８】
ステップａ１）で使用される界面活性剤は、好ましくは、ステップａ２）で使用されるものと同一である。このような界面活性剤は、前に本明細書中で明らかにしている。好ましい界面活性剤には、中でも、その生体適合性のためＭＣが含まれる。ＭＣの好ましい濃度及び種類は、前に本明細書中で規定している。最も好ましくは、約１．０ｗ／ｗ％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００ｃＰ）が使用される。このような高濃度のＭＣを使用すると、後に本明細書中で規定するような方法の効率性及び形成される微粒子の特性のため魅力的である粘性溶液が得られる。好ましくは、何らかの理論によって拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、重要なのは、ステップａ１）で使用される液体の粘度及び／又はステップａ１）の最後に形成される溶液の粘度であると考える。これらの粘度のどれか又は双方は、ステップｂ）を促進するほど、及び後に本明細書中で規定するような高度に均一な微粒子の高収率での形成を可能にするほど十分に高いことが好ましい。実施例中で例示されるように、約３８〜７５μｍの範囲の直径を有する粒子を、かなり有利であるほぼ６０〜８０％の収率で得ることができる。このような直径を有する粒子を、ほぼ７０〜８０％の収率で得ることさえできる。液体及び得られる溶液の好ましい粘度は、双方とも本明細書中で規定される。
【００１９】
ステップｂ）
続いて、ＰＣＬ含有微粒子は、ａ１）又はａ２）で得られた溶液又は混合物から形成される。中でも、ステップａ１）又はａ２）中で使用される溶媒の正体（中でも、ＤＣＭ及び／又はＴｗｅｅｎ）に応じて、別個のステップを、下記で説明するように実施する。ステップａ１）又はａ２）でＤＣＭを使用するなら、ＤＣＭを、粘性液体中に分散されたＰＣＬ含有微粒子から抽出蒸発によって抽出する。抽出蒸発法は、蒸発抽出法としても周知であり、当業者に周知であり、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ中に記載されている（「生分解性微小球及びマイクロカプセルの調製（Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ）」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、（１９９１）、ｖｏｌｕｍｅ １７：１〜２２）。本明細書中で規定されるような混合物の高粘度ゆえに、激しく撹拌しなければならない可能性がある（実施例中で例示するようにほぼ１，０００ｒｐｍ）。なんらかの理論によって拘束されるものではないが、本発明者らは、激しい撹拌により、混合物中に空気が組み込まれ、泡を作り出すことが可能になり、そのことが、抽出／蒸発法を促進すると考えられると予想する。加えて、抽出／蒸発法は、比較的少量のＤＣＭ（すなわち、後に本明細書中で規定するような高いＰＣＬ／ＤＣＭ比）を、抽出／蒸発させればよいという事実によって促進される。前記方法は、ほぼ３時間継続するが、一方、はるかに低い粘度（実施例参照）を有する混合物を使用する通常の抽出／蒸発法は、１４時間を超えてはるかに長く継続すると予想される。抽出蒸発中に、ＰＣＬ含有微粒子中に含まれるＤＣＭのかなりの部分乃至殆どは、水中に抽出され、表面で蒸発する。
【００２０】
ステップａ１）又はａ２）でＴｗｅｅｎを単独の溶媒として加熱して使用するなら、制御された冷却及び撹拌条件の結果として、微粒子が形成される。最終温度は、一般に室温である。混合物を、８０℃まで加熱できる。撹拌は、約５００ｒｍｐでよい。制御された冷却は、１〜１２時間継続できる。
【００２１】
本発明の工程の最終時点で、ＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎを実質的に含まない微粒子が得られる。実質的に含まないとは、好ましくは、当初のＤＣＭ又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎの７０ｗｔ％未満、より好ましくは６０ｗｔ％、５０ｗｔ％、４０ｗｔ％、３０ｗｔ％、２０ｗｔ％、１０ｗｔ％、５ｗｔ％、２ｗｔ％、１ｗｔ％、０．５ｗｔ％、０．３ｗｔ％、０．２ｗｔ％未満、又はさらには０．１ｗｔ％未満がなお存在することを意味する。一実施形態において、ＤＣＭ及び／又はＴｗｅｅｎは、形成された微粒子中で検出できない。ＤＣＭ又はＴｗｅｅｎは、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）を使用して検出できる。微粒子は、ＰＣＬポリマーを含むか、或いはＰＣＬポリマーからなる。工程の最終時点で、微粒子を、任意選択で、水中で１回又は数回洗浄してＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎを除去することができる。
【００２２】
本発明の方法で溶媒としてＤＣＭ及びＴｗｅｅｎを組み合わせるなら、この方法は、ＤＣＭが単独の溶媒として存在する場合と同じであるのが好ましい。
【００２３】
本発明の状況で、ＰＣＬポリマーは、ポリ−ε−カプロラクトン又はポリカプロラクトンを含むポリマーを意味する。ＰＣＬは、生分解性で、免疫学的に不活性で、生体適合性で、且つ生体吸収性の合成ポリマーである。本発明で使用するためのＰＣＬポリマーは、市販されているか、或いは当業者に周知の方法で製造できる。好ましくは、生物医学又は化粧上の応用で使用するのに適した精製ＰＣＬポリマーが採用される。ポリマーは、モノマーと呼ばれる低分子量の反復単位から構成される分子である。モノマーを連結してポリマーを製造する方法は重合と呼ばれる。
【００２４】
本発明の状況で、ポリマーには、線状ポリマー、コポリマー、ブロックコポリマー、ターポリマー、又は異なる種類のホモポリマー、コポリマー、ブロックコポリマー若しくはターポリマーのブレンドをはじめとする、当業者に周知のすべての可能な意味を付与できる。さらなる好ましい方法において、ε−カプロラクトン（ＣＬ）のコポリマーが、ステップａ１）又はａ２）で使用される。ＣＬの好ましいコポリマーは、ＣＬと、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ＴＭＣ（炭酸トリメチレン）、ＰＥＯ（ポリエチレンオキシド）、グリコリド、及びＤＯ（ジオキサノン）からなる群から選択される少なくとも１種の化合物とのコポリマーである。ステップａ２）で実質的に純粋なＴｗｅｅｎを単独の溶媒として使用する方法において、ＣＬのコポリマー（コポリマー、ブロックコポリマー）を使用する場合、ＰＣＬの溶融温度は、ＣＬコポリマーが溶融する温度を意味すると解釈される。
【００２５】
好ましい方法では、ステップａ１）又はａ２）でＰＣＬのターポリマーが使用される。ＰＣＬの好ましいターポリマーは、ＣＬと、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ＴＭＣ、ＰＥＯ、グリコリド、及びＤＯからなるリストから選択される１種の化合物とのコポリマーである。ステップａ２）で実質的に純粋なＴｗｅｅｎを単独の溶媒として使用する方法において、ＰＣＬのターポリマーを使用する場合、ＰＣＬの溶融温度は、ＰＣＬターポリマーが溶融する温度を意味すると解釈される。
【００２６】
別法として、ＰＣＬのターポリマーは、ＰＣＬと、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ＴＭＣ、ＰＥＯ、グリコリド、及びＤＯからなる群から選択される２種の化合物とのポリマーである。上記に加え、ホモ−／コ−／ブロックコ−／ター−ポリマーと、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ｍｅｓｏ−ラクチド、ＴＭＣ、ＰＥＯ、グリコリド、及びＤＯからなる群から選択される成分とのブレンドである。他のＣＬコポリマー又はブレンドは、ポリエステル、ポリエーテル、ポリカーボネート、コポリオキサレート、ポリ（オルトカーボネート）、ポリ（アセタール）、ポリ無水物、ｐｂｔ／ｐｅｏコポリマー（ＰｏｌｙＡｃｔｉｖｅ（商標））、及びポリホスファジンを含むことができる。
【００２７】
別の好ましい方法では、ＰＣＬホモポリマーが使用される。ＰＣＬホモポリマーは、それが半結晶性であるので、有利である。したがって、それは安定な形態である。加えて、それは、疎水性物質であり、それゆえ、皮膚用フィラーとして使用した場合、非半結晶性の生体再吸収性ポリマーの対応する再吸収時間に比べてより長い再吸収時間を有する可能性がある。より好ましくは、グリコリド、ジオキサノン、炭酸トリメチレン、ラクチド、及びこれらの組合せからなる群から選択される第２モノマーを含まないＰＣＬポリマーが、使用される。
【００２８】
加えて、本発明の別の好ましい実施形態として、本明細書中で使用されるようなＰＣＬポリマーを、別のポリマーで置き換える。このような他のポリマーは、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ｍｅｓｏ−ラクチド、ＴＭＣ、グリコリド、又はジオキサノンをベースにしたポリマーでよい。
【００２９】
すべて本明細書中で開示されるポリマー、得られる微粒子、及び得られるゲルの特性は、意図した応用分野に応じて広範に異なり、一般には決定的なものではない。注射可能な応用分野の場合、ＰＣＬを含む微粒子は、適切な大きさのシリンジを介する注射に適しているべきである。
【００３０】
好ましい実施形態において、ＰＣＬポリマーは、重量基準でＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中に、ＤＣＭ（単独の溶媒として、又はＴｗｅｅｎと組み合わせた）の約１０％まで、ＤＣＭの約３０％まで（単独の溶媒として又はＴｗｅｅｎと組み合わせた）、或いはＴｗｅｅｎを単独の溶媒として使用するなら実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中に約５０％までである濃度で、添加され、溶解される。より好ましくは、ＰＣＬポリマーは、ＤＣＭ中に、約２５％まで、又は２５％までである濃度で添加され、溶解される。この割合は、主として使用するＰＣＬの分子量によって決まる。
【００３１】
より好ましい実施形態において、ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液の粘度は、ほぼ５〜５，０００ｃＰ（室温で測定して）の範囲でよい。この粘度は、主としてＰＣＬの分子量、並びに使用するＰＣＬ及びＤＣＭの濃度によって決まる。比率ＰＣＬ／ＤＣＭ（ｗ／ｗ）は、ほぼ、１０ｇ（ＰＣＬ）／１００ｇ（ＤＣＭ）中〜２０ｇ（ＰＣＬ）／１００ｇ（ＰＣＬ）中の範囲でよい。この比率は、従来技術で以前に使用されていた比率と比較して、高く設定される。
【００３２】
本明細書中で規定されるような高いＰＣＬ／ＤＣＭ比率を使用することは、できるだけ少ないＤＣＭが存在するので、有利である。したがって、本発明の微粒子を得るためのＤＣＭの蒸発工程は、本発明よりも多くのＤＣＭを使用する通常の工程に比べてより迅速であると予想される。
【００３３】
粒子の大きさ及び分布は、使用する界面活性剤（ＭＣが好ましい）、ＰＣＬポリマー（ホモポリマーが好ましい）の本体、ＰＣＬ／溶媒（ＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ）比（好ましい比率が付与される）によって、及び処理条件によって影響されると思われる。
【００３４】
微粒子
さらなる態様において、本発明は、前の節で略述したような第１及び／又は第２態様の方法で得ることのできる微粒子を提供する。
【００３５】
これらの微粒子は、それらが、下記に示すような所望の特性を有するなら、それ自体前述のような方法を使用して得られない。本発明の方法は、これらの微粒子を得るための１つの好ましい方法である。好ましくは、本発明の微粒子は、次の特性の少なくとも１つを有する：
ｉ）５〜２００μｍ、より好ましくは２０〜１５０μｍ、さらにより好ましくは３０〜９０μｍ、さらにより好ましくは２５〜７５μｍ、さらにより好ましくは３８〜７５μｍ、さらにより好ましくは２５〜５０μｍの範囲にある直径分布、
ｉｉ）均一な密度、形状、及び内容物（例として図１を参照されたい）：球形状及び表面の滑らかさ、
ｉｉｉ）本質的に球形の微小球。
【００３６】
本発明の微小球の均一特性（特徴ｉ）、ｉｉ）、及び／又はｉｉｉ））は、それから誘導されるゲルに対して最適な流動特性を付与するので、極めて魅力的であり（次の節で示すように）：本発明者らは、シリンジで注射する場合に、シリンジ中での凝集がなく、注射針の詰まりがないと予想する。この均一特性は、インプラントとして使用される既知のゲルに対する改善を意味する。例えば、本発明の微粒子は、好ましくは界面活性剤を含み、ステップａ１）において約１〜約４００，０００ｃＰの範囲である粘度を有する液体を使用するため、及び／又は好ましくは界面活性剤としてＭＣ、より好ましくは１％のＭＣ、さらにより好ましくは１％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）を使用するため、及び／又は好ましくは本明細書中で規定するようなより高比率のＰＣＬ／ＤＣＭを使用するため、及び／又は好ましくは抽出蒸発を実施する方式のため、欧州特許出願公開第１８７２８０３号又は米国特許出願公開第２００３／０１５７１８７号中に開示されているものに比べて、より魅力的な特性を有する。
【００３７】
別の例として、本発明の微粒子は、好ましくは界面活性剤を含み、ステップａ１）において約１０〜約１００，０００ｃＰの範囲である粘度を有する液体を使用するため、及び／又は好ましくは本明細書中で規定するようなより高比率のＰＣＬ／ＤＣＭを使用するため、及び／又は好ましくは界面活性剤として特定の種類及び濃度のＭＣを使用するため、より好ましくは１％のＭＣ、さらに好ましくは１％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）を使用するため、及び／又は好ましくは抽出蒸発を実施する方式のため、Ｉｏｏｓｓ（Ｉｏｏｓｓ Ｐら（２００１）、２２：２７８５〜２７９４）中に開示されているようなものと比べて、より魅力的な特性を有する。微粒子は、均一なので微小球と名付けることもできる。微粒子の均一性（球形状及び表面の滑らかさ、並びに既にｉ）、ｉｉ）及びｉｉｉ）として規定したような特徴のいずれか）は、中でも本発明の特殊な方法のため、好ましくは界面活性剤を含み、ステップａ１）において約１〜約４００，０００ｃＰの範囲である粘度を有する液体を使用するため、及び／又は好ましくは本明細書中で規定するような最適比率ＰＣＬ／ＤＣＭのため、及び／又は好ましくは使用される界面活性剤、より好ましくは１％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）のため、及び／又は好ましくは抽出／蒸発法を実施する方式のためである。
【００３８】
微粒子（微小球）の好ましい直径は、２０〜１５０μｍの範囲である。２０μｍより大きい直径が、マクロファージによる直接食作用を最小にするので、好ましい。１５０μｍより小さい直径が、ゲル中に存在する場合により良好な流動特性を有すると予想されるので、好ましい。別の選択肢として、好ましい直径は、２５〜５０μｍの範囲である。
【００３９】
驚くべきことに、本発明者らは、前に本明細書中で規定したような比較的低分子量から中分子量のＰＣＬを含む微粒子は、本発明で使用するのに極めて適していることを見出した。この低分子量から中分子量のＰＣＬを含む微粒子は、本発明のゲル中に存在する場合、後に本明細書中で規定するような中分子量から高分子量のＰＣＬを用いた微粒子を含むゲルのそれよりも比較的より短い再吸収時間を示す。
【００４０】
微粒子は、フリーズドライ、凍結乾燥、又は自由流動性粉末としてある１つの乾燥状態で貯蔵することができ、適切な条件下で数年間保存できる。凍結乾燥は、滅菌及び貯蔵を容易にするので、有利である。ポリマーの分子量及び微粒子の固有の物理特性（中でも、球形状及び表面の滑らかさ、前に本明細書中でｉ）、ｉｉ）及び／又はｉｉｉ）として規定したような特徴の少なくとも１つを参照されたい）は、ゲル中に存在する場合及びインビボで注射した場合に、それらのインビボでの分解挙動を少なくとも部分的に決定する。
【００４１】
ゲル
さらなる態様において、本発明は、前の節で規定したような微粒子及び担体を含む、生分解性注射可能ゲルに関する。担体は、粘度増強剤、密度増強剤、及び／又は張性湿潤化増強剤を含むことができる。粘度増強剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）からなる群から選択できる。しかし、当業者にとって容易に明らかであるような、その他の粘度増強剤も使用できる。ＣＭＣは、粘度増強剤として好ましい。
【００４２】
密度増強剤は、ソルビトール、マンニトール、及び果糖からなる群から選択できるが、その他の適切な密度増強剤も使用できる可能性がある。
【００４３】
張性湿潤化剤は、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ ２０、４０、６０、又は８０）でよい。その他の張性湿潤化剤も使用できる。本明細書中で開示されるゲルは、様々な量の粘度増強剤、密度増強剤、及び／又は張性湿潤化増強剤を含むことができる。好ましい実施形態において、ゲルは、約０〜８ｗｔ％の粘度増強剤、及び／又は約０〜約５０ｗｔ％の密度増強剤、及び／又は約０〜約５．０ｗｔ％の張性湿潤化剤を含む。より好ましくは、ゲルは、約０．１〜８ｗｔ％の粘度増強剤、及び／又は約０〜約５０ｗｔ％の密度増強剤、及び／又は約０〜約５．０ｗｔ％の張性湿潤化剤を含む。
【００４４】
本明細書中で開示されるゲルは、様々な量の微粒子を含むことができ、典型的には約１０ｗｔ％〜約５０ｗｔ％の微粒子、約１５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、約２５ｗｔ％〜約４５ｗｔ％、約３５ｗｔ％〜約４５ｗｔ％の微粒子を含むことができる。担体の量は、典型的には、所望の流動特性、すなわち、適切な粘度を有する懸濁液を得るように選択される。当業者は、本発明のゲルに関して想定される応用の種類に応じて、特定の特性を有する注射針を使用すればよいことがわかっている。使用する注射針のそれぞれの種類に対して、ゲルの粘度を最適化して所望の流動特性を付与すればよい。同じく好ましい実施形態であるゲージ２６〜３０の注射針及びＣＭＣを使用する例として、ほぼ２０，０００〜２００，０００ｃＰの範囲の粘度が適切である。好ましい実施形態において、担体は、医薬として又は化粧料として許容し得る担体及び／又は生物学的、医学的に許容し得る担体である。
【００４５】
生分解性は、生体再吸収性と同義である。ゲルの所望される生体再吸収性は、中でも使用するＰＣＬポリマーの種類、構想する使用／応用に応じて異なる可能性がある。好ましい実施形態において、本発明のゲルは、注射後１０年以内又は１０年未満に、或いは注射後５年以内又は５年未満に、或いは注射後２年間以内又は２年間未満、或いは注射後１年間以内又は１年間未満、生体再吸収性である。
【００４６】
得られるゲルは、前に規定したような微粒子の懸濁液を含み、他の周知のゲルに比べてより魅力的であり：本発明のゲルは、滑らかな表面を有する本質的に球状である微粒子（前に本明細書中で規定したような次の特徴、ｉ）、ｉｉ）及び／又はｉｉｉ）の少なくとも１つを有する）を含み、したがって、ゲルの流動特性が改善される。驚くべきことに、本発明者らは、低分子量から中分子量を有する微粒子を含むゲルを、有利に使用できることを見出した。本発明のゲルは、インビボで注射した場合に、より安定であるポリマー（分解の反応速度は、他のポリマーの場合よりも遅い）を含む。ゲルは、微粒子及び担体を含む。担体は、通常、注射後３〜４カ月以内に分解され、溶出され、又は再吸収される。微粒子の再吸収時間は、使用するＰＣＬの当初の分子量によって決まる。例えば、前に本明細書中で規定したような低分子量から中分子量を有するＰＣＬポリマーを含む微粒子は、ほぼ６カ月〜２年の範囲である分解又は再吸収時間を有すると予想される。例として、約１０，０００Ｍｎの分子量を有するＰＣＬポリマーを含む微粒子を含むゲルは、注射される場所及び微粒子のその他の特性に応じて、ほぼ６〜１５カ月、又は１２〜１５カ月の再吸収時間を有すると予想される。別の例として、約４０，０００Ｍｎの分子量を有するＰＣＬポリマーを含む微粒子を含むゲルは、注射される場所及び微粒子のその他の特性に応じて、ほぼ１８〜２４カ月、又は２０〜約２４カ月の再吸収時間を有すると予想される。このゲルは、以下の記載の通り数種類の用途に使用することもできる。ゲルは、無菌懸濁液の形態で容器中に貯蔵できる。好ましくは、容器は、即時使用用の事前充填シリンジである。シリンジは、一方が（フリーズドライの）微粒子を、他方が医薬として許容し得る担体を含む、２区画の事前充填シリンジとしても提供できる。例えば、水又は２回蒸留水で即座に注射可能な調合物に再構成したなら、次いで、ゲル（懸濁液）を、皮内又は皮下注射で適用することができる。別法として、容器は、バイアル瓶でよい。ここで、シリンジの場合のように、バイアル瓶も、即時に使用される本発明のゲルを含むことができる。別法として、バイアル瓶は、一方の区画に（フリーズドライの）微粒子を、もう１つの区画に医薬として許容し得る担体を含むことができる。
【００４７】
シリンジ又はバイアル瓶中でゲルを即席で再構成するのに使用される水は、好ましくは蒸留水、より好ましくは２回蒸留水、さらにより好ましくは無菌水である。最も好ましくは、ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）が使用される。担体は、さらに、凍結保護剤及び緩衝剤からなる群から選択される成分を含むことができる。
【００４８】
凍結保護剤は、冷却中に生物学的組織中で有害な氷結晶の形成を阻止又は低減する化学物質である。適切な凍結保護剤には、限定はされないが、ｄ−マンニトール、乳糖、蔗糖、果糖、ソルビトール、及びデキストランなどの糖類及び炭水化物が含まれ、ｄ−マンニトールが好ましい。ゲルの担体中の凍結保護剤濃度は、意図した応用、微粒子、及び選択した凍結保護剤の本体に応じて異なってもよい。ゲルは、典型的には、約０〜約４５重量％、又は約３０％〜約４０％の凍結保護剤を含むことができる。
【００４９】
緩衝剤は、その溶液が、希釈、又は少量の酸若しくは塩基の添加の結果としてのｐＨ変化に抵抗することを可能にするように、該溶液に添加される化合物又は化合物群である。効果的な緩衝系は、多量のほぼ同濃度の共役酸−塩基対（又は緩衝剤）を含む溶液を用いる。本明細書中で採用される緩衝剤は、医薬として許容し得る塩、例えば、限定はされないがリン酸及びクエン酸の塩（共役酸及び／又は塩基）であるような任意の化合物（単数又は複数）でよい。ゲルは、典型的には、約０〜約０．２重量％、又は約０．１％〜約０．１５％の緩衝剤を含むことができる。好ましい緩衝剤はＰＢＳである。
【００５０】
さらに好ましい実施形態において、微粒子を含むゲルは、薬剤として使用するためのものである。いかなる活性成分も含まない、又は好ましくは本明細書中に含まれるいかなる薬剤も含まない、ゲル自体も、薬剤と見なすことができる。この最初の事例において、ゲルは、好ましくは、皮膚の奇形又は傷跡の治療、膀胱機能の制御（泌尿器括約筋不全の治療）、及び／又は胃逆流の制御（幽門部括約筋不全の治療）、声帯不全、先天性奇形、歯科治療のためのガム補填を含む各種治療において、哺乳動物の軟部組織を補うためのフィラー又はインプラントとして使用される。これらのすべての使用において、哺乳動物は、好ましくは、ヒトである。これらのすべての使用において、ゲルは、典型的には、一般に皮内又は皮下シリンジ注射で治療又は投薬すべき組織部位中に導入される。
【００５１】
好ましい実施形態において、ゲルは、フィラー及び／又はインプラントとして使用される。より好ましい実施形態において、ゲルは、皮膚用フィラーである。皮膚用フィラーは、術後の皮膚奇形、又は熱傷等の傷跡など、対象の健康にとって脅威となる皮膚奇形を矯正するのに使用できる。ゲルを、薬剤として、及び皮膚用フィラーとしての応用に応じた皮膚用フィラーとして使用する場合、ＰＣＬポリマーは、好ましくは、前に本明細書中の本発明の方法のステップａ１）又はａ２）で規定したような低分子量から中分子量、又は中分子量から高分子量を有する。
【００５２】
別のより好ましい実施形態において、本明細書中で開示されるゲルは、尿失禁（膀胱機能の制御）などの各種の括約筋不全を治療するためのインプラント又はフィラーとして使用される。膀胱制御の低下は、肉体的活動（咳、くしゃみ、運動）によるストレスのため、及び／又は睡眠時を含む予期しない時刻での大量の尿意又は漏れのためである可能性がある。すべての型の失禁は、患者の年齢に関係なく、本発明のゲルを使用して治療できる。排尿自制は、従順な貯蔵器、及び２つの構成部分、すなわち（１）膀胱頚部の不随意平滑筋、及び（２）外側括約筋の随意骨格筋を有する括約筋の能力に依存する。
【００５３】
したがって、本発明のゲルを、括約筋又は尿道に圧迫を集中するように添加し、それによって、１回以上のゲルの注射により管腔の大きさを減少させ、かくして泌尿器のストレス性失禁を実質的に低減又は排除することができる。これらの例で、ゲルは、注射によって尿道又は尿道周囲組織中に挿入され得る。したがって、典型的な手順は、膀胱鏡の助けを借りてゲルを膀胱頚部周辺の組織中に注射すること、増大した組織容積を創り出すこと、続いて尿道管腔を接合することを含む。ゲルは、容積を加増し、尿道を閉じるのを助けてストレス性失禁を減らす。注射は、典型的には、最善の結果を得るために周期的に繰り返すことができる。
【００５４】
別のより好ましい実施形態において、ゲルは、胃逆流を制御する（幽門括約筋不全を治療する）ためのフィラー又はインプラントとして使用される。胃食道逆流疾患（ＧＥＲＤ）は、胃酸及びその他の内容物の食道又は隔膜中への逆流に関連し、逆流エピソードの７０％は、下部食道括約筋の自発弛緩中に、又は嚥下後の長期弛緩のため発生する。３０％は、下部括約筋の圧迫期間中に発生する。主な症状は、胸やけ（食後３０〜６０分）である。ＧＥＲＤの典型的でない発現には、喘息、慢性咳、喉頭炎、咽頭炎、及び非心原性胸痛が含まれる。ＧＥＲＤは、生活様式の変更及び医学的介入を必要とする終生続く疾患である。
【００５５】
したがって、本発明のゲルは、容積を加増し、下部食道括約筋に圧迫を集中させるように注射することができる。それゆえ、典型的な手順は、内視鏡の助けを借りてゲルを下部食道括約筋周辺の組織中に注射すること、増加した組織容積、結果としての接合を創り出すこと、括約筋圧迫を正常化することを含む。ゲルは、容積を加増し、括約筋を閉止するのを助けて逆流を減らす。注射は、最善の結果を得るために毎年繰り返すことができる。ゲルは、局所麻酔を使用して注射され得る。
【００５６】
膀胱機能及び／又は胃逆流を制御するための薬剤としてゲルを使用する場合、使用されるＰＣＬポリマーは、好ましくは、前に本明細書中の本発明の方法のステップａ１）又はａ２）で規定したような中分子量から高分子量を有する。そのため、使用したゲルが、注射部位により長く存在し続け（より低いインビボでの分解速度）、且つ外科的介入をしばしば繰り返す必要がないので、このことは好ましい。
【００５７】
別のより好ましい実施形態において、ゲルは、すべての年齢の男性を襲う可能性のある勃起機能不全（ＥＤ）を治療するためのフィラー又はインプラントとして使用される。本発明のゲルは、ＥＤを治療するのに使用できる。典型的な手順は、ゲルを海綿体の全長にわたって深筋膜部に直接注入することを含む。
【００５８】
別のより好ましい実施形態において、ゲルは、声帯を治療するためのフィラー又はインプラントとして使用される。本発明のゲルは、喉頭音声発生器の声帯内に注入し、この軟質組織体の形状を変えるために使用できる。
【００５９】
さらに、ゲル自体が薬剤（ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ）と見なされる場合、ゲルが、さらに、やはり好ましくは薬剤である活性成分を含むことも、本発明に包含される。本明細書中で使用する場合、「薬剤」は、任意の生物活性組成物、医薬、薬物、又はゲルの注入部位に投与することが望まれる化合物でよい。この場合、ゲルに添加される薬剤は、ゲルの機能を促進することができ、且つゲル注入に付随する疼痛又は不快を減らすための麻酔薬、或いはＰＣＬ又は微粒子の完全性を促進するか、或いは注入部位に対する外傷を減らすための組成物を含むことができる。１つの好ましい実施形態では、ゲルに薬剤を添加する。典型的な麻酔薬には、限定はされないが、リドカイン、キシロカイン、ノボカイン、ベンゾカイン、プリロカイン、リピバカイン、及びプロポフォールが含まれる。本明細書中で開示されるゲル中で採用できるその他の薬剤には、ペプチド、組織再生薬、抗生物質、ステロイド、フィブロネクチン、サイトカイン、増殖因子、鎮痛薬、防腐剤、α、β、若しくはγ−インターフェロン、エリスロポエチン、グルカゴン、カルシトニン、ヘパリン、インターロイキン−１、インターロイキン−２、フィルグラスチム、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、ペプチド、ＨＧＨ、黄体形成ホルモン、心房性ナトリウム利尿因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、及び卵胞刺激ホルモンが含まれる。薬剤は、注入直前に、前に本明細書中で規定したような担体との活性化混合中にゲルに添加されることが多い。典型的には、活性成分又は薬剤は、ゲル中に導入され得る微小球中に存在し、続いて、前記ゲルを注入することができる。
【００６０】
別法として、別の好ましい実施形態において、ゲル中に存在する薬剤は、ゲルの機能を促進するために存在するのではない。この場合、ゲルは、任意の既知の又は発見された薬剤のための制御放出系と見なされる。
【００６１】
別の好ましい実施形態において、ゲルは、化粧用ゲルである。化粧用ゲルは、皮膚用フィラーとして使用できる。この好ましい実施形態の範囲内で、最適の特性を有するゲルは、本発明の方法を実施する場合に、好ましくはステップａ１）で界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰの範囲である粘度を有する液体を使用し、且つ／又は好ましくは本明細書中で規定するような高比率のＰＣＬ／ＤＣＭを使用し、且つ／又は好ましくは界面活性剤としてＭＣ、より好ましくはほぼ１％のＭＣ、さらにより好ましくはほぼ１％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）を使用し、且つ／又は好ましくは抽出蒸発が好ましくは先に本明細書中で規定したように実施する場合に得られる。この好ましい実施形態の範囲内で、ＰＣＬポリマーは、好ましくはＰＣＬホモポリマーである。この好ましい実施形態の範囲内で、ゲルは、いかなる活性成分又は薬剤も含まない。ゲルが、皮膚用フィラーのような化粧用ゲルとして使用される場合、ＰＣＬポリマーは、好ましくは、先に本明細書中の本発明の方法のステップａ２）で規定したような低分子量から中分子量を有する。ゲルは、瘢痕、しわ、及び顔面脂肪減少を化粧的に治療するのに使用できる。本発明のゲルは、痘痕又は瘢痕（水痘、ざ瘡瘢痕、先天奇形（口唇裂など）及び皺などの軟部組織欠陥を充填し、滑らかにするのに使用できる。瘢痕は、任意の起源：疾患、術後、熱傷によるものでよい。ゲルは、また、ヒトにおける顔面組織又は脂肪減少を補うための増量剤として使用できる。ゲルを効率的に使用するための解剖学的領域は、皮膚、好ましくは顔面区域の皮膚：表皮及び／又は皮下でよい。考えられる具体的な化粧上の応用に応じて、注射部位は、異なってよい：ざ瘡瘢痕及び微妙な顔面ラインを治療するための部位、しわ、ひだ及び顔面輪郭の肉付きを治療するための深部位、並びにリポジストロフィーを治療するための深部位。
【００６２】
ゲルの使用
本発明のさらなる態様は、皮膚の奇形若しくは傷跡を治療するための、又は膀胱機能を制御するための、及び／又は胃逆流を制御するための、及び／又は勃起機能不全を治療するための、及び／又は声帯を治療するための薬剤の調製に関する本発明のゲルの使用に関する。
【００６３】
本発明のゲルのもう１つの使用は、化粧上の応用に関して前に本明細書中で規定したような、本発明の化粧用ゲルの使用である。
【００６４】
これらの使用のすべて特徴は、「ゲル」と題した前の節で既に規定している。
【００６５】
この文書及びその特許請求の範囲で、動詞「を含む（ｔｏ ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及びその活用形は、その非限定的な意味で使用され、該単語に続く品目を含むが、具体的に言及されていない品目を排除しないことを意味する。加えて、動詞「からなる（ｔｏ ｃｏｎｓｉｓｔ）」は、「から本質的になる（ｔｏ ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」で置き換えることができ、本明細書中で規定するような製品、組成物、ゲル、又は微粒子が、具体的に明らかにしたもの以外に、本発明の独特の特性を変えないさらなる成分（単数又は複数）を含むことができることを意味する。加えて、不定冠詞（「ａ」、「ａｎ」）を用いるある要素に対する言及は、文脈が１つ又はたった１つの要素が存在することを明確に要求していないなら、１つを超える要素が存在する可能性を排除しない。不定冠詞（「ａ」、「ａｎ」）は、かくして通常、「少なくとも１つ」を意味する。単語「約」又は「ほぼ」は、数値に付随して使用される場合（約１０など）、好ましくは、その値が、１０±その値の１％の所定値でよいことを意味する。
【００６６】
本明細書中で引用されるすべての特許及び参照文献は、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる。
【００６７】
後記の実施例は、単に例示の目的で提供されるものであり、本発明の範囲をいかなる意味でも限定することを意図しない。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】実施例２で調製される通りの微小球の顕微鏡写真を示す図である。
【図２】ＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）のＤＣＭ溶液、及びＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００ｇ／モル）の水溶液を使用して調製されたＰＣＬ微小球を示す図である。［ＰＣＬ］の濃度は２０ｇ／１００ｇＤＣＭであり、［ＭＣ］の濃度は１．１ｗｔ％である。表１を参照されたい。光学顕微鏡像、倍率１０×。
【図３】１０ｗｔ％ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液及び１．０ｗｔ％ＰＶＡ水溶液を使用し、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら調製されたＰＣＬ微小球を示す図である。表４のＨｕｎｔｅｒを参照されたい。光学顕微鏡像、倍率１０×。
【図４】１０ｗｔ％ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液及び３．０ｗｔ％ＰＶＡ水溶液を使用し、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら調製されたＰＣＬ微小球を示す図である。表４のＥｍｅｔａ及びＷｕを参照されたい。光学顕微鏡像、倍率１０×。
【図５】１０ｗｔ％ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液及び０．１ｗｔ％ＭＣ水溶液を使用し、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら調製されたＰＣＬ微小球を示す図である。表４のＩｏｏｓｓを参照されたい。光学顕微鏡像、倍率１０×。
【実施例】
【００６９】
微小球／微粒子の合成、及び担体を含むゲル中へのこれら粒子の即時使用のための懸濁に関する実験計画案を以下に記す。
１．微小球を、所望の特性を得るために、伝統的な溶媒蒸発技術を使用して、又は無溶媒合成技術を使用して調製する。
２．周知の調製技術を使用して所望の粘度を有するゲルを調製し、その後、該ゲル中に微小球を適切な混合によって懸濁させる。
３．次いで、制御された雰囲気中で、シリンジに滅菌されたゲル懸濁液を充填する。
【００７０】
以下の例を使用して又は組み合わせて、ポリマー又は前に述べたブレンドから構成される微粒子の即用性適用のための、或いは（フリーズドライの）バイアル瓶適用のための懸濁液を得ることができる。
【００７１】
（例１）
１０〜２０ｇのＰＣＬ（Ｍｎ１０，０００又はＭｎ４２，５００）をＤＣＭに溶解する（１０〜２０ｗ／ｗ％）。この溶液を、０．１〜５％のＭＣを含有する１，０００ｍＬの水中に分散させる。猛烈に撹拌（１，０００ｒｐｍ）しながら、説明中で引用される刊行物中に記載の通りの溶媒抽出によって、４０μｍの平均直径を有する微粒子が得られる。得られた微小球を、濾過し、洗浄し、乾燥する。続いて、１０〜５０％の微小球を、ＣＭＣ（０．１〜５％）ゲル又はＭＣ（０．１〜５％）ゲル中におだやかに撹拌して分散させ、さらに処理する。
【００７２】
（例２）
１０〜２０ｇのＰＣＬ（Ｍｎ＝４２，５００）をＤＣＭに溶解する（１０〜２０ｗ／ｗ％）。この溶液を、０．８％のＭＣを含有する１，０００ｍＬの水中に分散させる。猛烈に撹拌（１，０００ｒｐｍ）しながら、例１の通りの溶媒抽出によって、６０μｍの平均直径を有する微粒子が得られる。得られた微小球を、濾過し、洗浄し、乾燥する。続いて、１０〜５０％の微小球を、ＣＭＣ（０．１〜５％）ゲル又はＭＣ（０．１〜５％）ゲル中に穏やかに撹拌して分散させ、さらに処理する。例２で調製された微小球の顕微鏡写真を図１に示す。
【００７３】
（例３）
４０〜８０ｇのＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００）を、純粋なＴｗｅｅｎ ２０、４０、６０又は８０中に７０〜９０℃に加熱、撹拌（６００〜１，０００ｒｐｍ）して溶解し、その後、相分離及び３０分以内での５℃までの制御された冷却により微小球を得る。得られた微小球を、濾過し、洗浄し、乾燥する。平均分布は４５μｍであり、収率７５％が必要とされる範囲内にある。続いて、１０〜５０％の微小球を、ＣＭＣ（０．１〜５％）ゲル又はＭＣ（０．１〜５％）ゲルに穏やかに撹拌して分散させ、さらに処理する。
【００７４】
さらなる例
本発明は、生分解性微小球の効率的で効果的な調製方法に関する。重要な核心は、比較的高い濃度及び粘度を有する界面活性剤溶液の使用である。本発明は、滑らかな表面を有し、ほぼ３８〜７５μｍの範囲の所望される大きさの均一粒子の形成につながる。
【００７５】
Ａ）例４で詳しく例示するような本発明の一方法において、粘性ポリマー溶液は、激しく撹拌された界面活性剤水溶液に急速に添加される。混合物の激しい撹拌及び溶媒の蒸発により、粒子が形成される。ＤＣＭなどの揮発性溶媒が好ましい。この急速添加は、激しく撹拌された界面活性剤水溶液の高い粘度のため可能である。激しい撹拌は、また、短時間での溶媒蒸発を可能にし、その後、粒子を集め、さらに処理することができる。このことは効率的であるので、このことは、有利であり望ましい。
【００７６】
ポリマー微小球を回収することが可能であるためには、実質的にすべて（又は少なくとも大部分）のポリマー用溶媒を除去する必要がある。その場合にのみ、球状のポリマー粒子が硬化する（結晶性粒子の場合、それらは結晶化できる）。
【００７７】
溶媒を蒸発させ、除去するのに必要な時間は、いくつかの手段で決定できる：
・溶媒の蒸発により冷えた分散液は、再び外界温度まで温まる
・ＰＣＬ微小球の分散液は、ポリマーの結晶化により白色に変わる
・ＭＣなどの界面活性剤を用いるため、ＤＣＭが蒸発すると界面活性剤溶液の表面で泡が形成される。この泡は、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発すると消失する
・微小球は、放置しても凝集しない。
【００７８】
Ｂ）例７で詳しく例示するような本発明のもう１つの方法において、ＰＣＬポリマーは、Ｔｗｅｅｎなどの比較的粘性のある界面活性剤（溶液）に加熱して溶解される。ここで、ポリマーの小滴は、混合物の激しい撹拌により、界面活性剤溶液中で溶融ポリマーの分散液を形成する。混合物を絶え間なく撹拌し、室温まで（制御して）冷却すると、粒子が生じる。この方法は、揮発性溶媒を必要としないので、極めて効率的である。
【００７９】
方法の特徴：
・所望の粒径範囲：本発明者らは３８〜７５μｍの画分を集めた
・効率的な方法：ＤＣＭを使用する場合の短い蒸発時間、及び所望粒径範囲の高い収率
・効果的な方法：滑らかな表面を有する本質的に球形状の粒子、患者への優れた注射可能性をもたらす。
【００８０】
注射可能なゲルを、本発明により調製された微小球から、混合によって容易に形成できた。容積の５０％までの微小球を、ゆっくり撹拌することによって、カルボキシメチルセルロースゲル（ＣＭＣ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ社からのＡｑｕｌｏｎの水溶液又はリン酸緩衝化生理食塩水溶液）中に均一に混合できた。
【００８１】
（例４）
本発明の実験
ＰＣＬのＤＣＭ溶液、及びＭＣの水溶液を使用する微小球の調製
ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液をメチルセルロース（ＭＣ）の水溶液中に激しく混合し、続いてＤＣＭを蒸発させることによって、ＰＣＬ微小球を調製した。
【００８２】
Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手した種々の量のＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）をＤＣＭに溶解した。これらの溶液１００ｇを、２Ｌビーカー中の１，０００ｇのＭＣ水溶液に、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら２秒間以内に添加した。Ｃｏｌｏｒｃｏｎ社から入手した種々の分子量のＭＣ（Ｍｎ＝１４，０００ｇ／モル、Ｍｎ＝４１，０００ｇ／モル、及びＭｎ＝６３，０００ｇ／モル）を採用した。
【００８３】
室温で絶え間なく激しく撹拌している３時間以内に、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発した。撹拌を停止し、生じた微小球を、ビーカーの底部に沈降させた。上澄液を除去し、微小球を水で洗浄した。ステンレススチールの篩いを使用して、微小球を湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの直径を有する画分を集めた。
【００８４】
微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。光学顕微鏡法（倍率１０×）を採用して、得られた微小球の形態を分析した。
【００８５】
ＰＣＬ溶液の濃度及びＭＣ溶液の特徴を変えた一連の実験を実施した。結果を表１に示す。
表１．ＰＣＬのＤＣＭ溶液をＭＣの水溶液中に激しく撹拌しながら混合することによるＰＣＬ微小球の調製
【表１】
【００８６】
表１から、比較的高粘度のＭＣ溶液を使用すると、滑らかな球状粒子を効率的に得ることができると考えることができる。さらに、高濃度のＰＣＬ溶液は、高収率で、所望の粒径を有するＰＣＬ粒子をもたらす。
【００８７】
（例５）
本発明の実験
ＰＬＬＡのＤＣＭ溶液及びＭＣの水溶液を使用する微小球の調製
ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液をメチルセルロース（ＭＣ）の水溶液中に混合し、続いてＤＣＭを蒸発させることによって、ＰＬＬＡ微小球を調製した。
【００８８】
Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｃｈｅｍ社から入手した１０ｇのＰＬＬＡ（クロロホルム中で２．３ｄｌ／ｇの固有粘度を有する）を１００ｇのＤＣＭに溶解した。この溶液１００ｇを、２Ｌビーカー中の１，０００ｇのＭＣ水溶液に、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら２秒間以内に添加した。ＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００ｇ／モル）は、Ｃｏｌｏｒｃｏｎ社から入手した。
【００８９】
室温で絶え間なく激しく撹拌している３時間以内に、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発した。撹拌を停止し、生じた微小球を、ビーカーの底部に沈降させた。上澄液を除去し、微小球を水で洗浄した。ステンレススチールの篩いを使用して、微小球を湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの直径を有する画分を集めた。
【００９０】
微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。光学顕微鏡法（倍率１０×）を採用して、得られた微小球の形態を分析した。
表２．ＰＬＬＡのＤＣＭ溶液をＭＣの水溶液中に激しく撹拌しながら混合することによるＰＬＬＡ微小球の調製
【表２】
【００９１】
この表２は、ＰＬＬＡ微小球も効率的に調製することが可能であることを示している。高粘度のＭＣ溶液を使用すると、所望の粒径を有する滑らかな球状ＰＬＬＡ微小球を高収率で得ることができる。
【００９２】
（例６）
比較例実験
ＰＣＬとＣＬとのコポリマーのＤＣＭ溶液及び界面活性剤の水溶液を使用する微小球の調製
Ｉ．文献からの典型的なデータ
ＰＣＬとＣＬとのコポリマーの微小球の調製は、科学及び特許文献中に記載されている。例えば、Ｈｕｎｔｅｒ（米国特許出願公開第２００３／０１５７８７Ａ１号）、Ｅｒｎｅｔａ及びＷｕ（欧州特許出願公開第１８７２８０３Ａ１号）、及びＩｏｏｓら（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２２（２００１）２７８５〜２７９４）による刊行物中には、ＰＣＬのＤＣＭ溶液をポリビニルアルコール（ＰＶＡ）又はＭＣの水溶液に添加すると、ＰＣＬ微小球の形成をもたらすことができると記載されている。
【００９３】
撹拌された水性媒体中でのＰＣＬ溶液の凝集を防止するため、採用される条件には、ＰＣＬのＤＣＭ溶液を比較的長時間にわたって添加すること、及び分散されたＰＣＬ粒子が固化するのを可能にするための長いＤＣＭ蒸発時間が含まれる。その場合にのみ、形成された球状ＰＣＬ微小球は、集めるのに十分な安定性を有する。種々の実験設定、ＰＣＬとＣＬとの種々のコポリマー、界面活性剤濃度、添加速度、及び溶媒蒸発時間を採用して、ＰＣＬ微小球を調製した。
【００９４】
Ｈｕｎｔｅｒ（米国特許出願公開第２００３／０１５７１８７Ａ１号中の実施例４１）：
ＰＣＬ：Ｍｎ＝２５，０００〜４５，０００ｇ／モル；ＤＣＭ中のＰＣＬ濃度：９．５ｗｔ／ｖｏｌ％；ＰＶＡ：Ｍｎ＝１２，０００〜１８，０００ｇ／モル；２ｍＬのポリマー溶液を１００ｍＬの界面活性剤水溶液中に１，０００ｒｐｍの撹拌速度で注入した；ポリマー溶液の添加時間：１２０分；粒子を遠心分離し水で洗浄した；３０〜１００μｍの範囲の大きさを有する微小球が得られた。粒子は、球状であるが、粗い又は窪みのある形態を有した。
【００９５】
Ｅｒｎｅｔａ及びＷｕ（欧州特許出願公開第１８７２８０３Ａ１号中の実施例）：
半結晶性ＣＬコポリマー：５，０００〜２５，０００ｇ／モルの分子質量；ＤＣＭ中のポリマー濃度：４〜７．５ｗｔ／ｖｏｌ％、ＰＶＡ：Ｍｎは示されていない；ほぼ２７５ｇの溶液をほぼ１，５００ｍＬの界面活性剤水溶液中に２５０ｒｐｍ近辺の速度で撹拌しながら注入した；ポリマー溶液の添加時間：最長で１９分；ＤＣＭ蒸発時間；１４〜１６時間；回収された３８〜７５μｍの大きさを有する微小球の画分は最大７１％である；表面形態は、示されていない。
【００９６】
Ｉｏｏｓｓ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２２（２００１）２７８５〜２７９４）：
ＰＣＬ：Ｍｗ＝１５０，０００；ＭＣ：Ｍｎ＝１４，０００のＭｅｔｈｏｃｅｌ Ａ１５ＬＶ；ＤＣＭ中のＰＣＬ濃度：６．７〜９．１ｗｔ／ｖｏｌ％；１５ｍＬの溶液をＭＣ水溶液中に４００〜６００ｒｐｍで撹拌しながら１時間かけて注入する；ＤＣＭは、大量（１，０００ｍＬ）の水中に抽出することによって除去される；回収された８０μｍより小さい大きさを有するＰＣＬ粒子の画分は、ほぼ１〜４０％の間で変動する。
【００９７】
このデータの概要を表３に示す。
表３．ポリマーのＤＣＭ溶液を撹拌された界面活性剤水溶液中に混合することによって調製されるＰＣＬとＣＬとのコポリマーの微小球に関する文献データの概要
【表３】
【００９８】
ＩＩ．ＰＣＬのＤＣＭ溶液及び界面活性剤水溶液を使用する微小球の調製。ポリマー及び界面活性剤の濃度は文献に記載されている通りである。
８０ｇのＰＣＬ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手、Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）を８００ｇのＤＣＭに溶解した。この溶液１００ｇを、２Ｌビーカー中の１，０００ｇのＰＶＡ又はＭＣ界面活性剤の水溶液中に、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら２秒間以内に添加した。実験では、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手したＰＶＡ（Ｍｎ＝９，０００〜１０，０００ｇ／モル）、及びＣｏｌｏｒｃｏｎ社から入手したＭＣ（Ｍｎ＝１４，０００ｇ／モル）を採用した。
【００９９】
室温で絶え間なく１，０００ｒｐｍで激しく撹拌している３〜４時間以内に、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発した。撹拌を停止し、生じた微小球を、ビーカーの底部に沈降させた。上澄液を除去し、微小球を水で洗浄した。ステンレススチールの篩いを使用して、微小球を湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの直径を有する画分を集めた。
【０１００】
微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。光学顕微鏡法（倍率１０×）を採用して、得られた微小球の形態を分析した。
【０１０１】
比較実験は、Ｅｒｎｅｔａ及びＷｕによる文献（欧州特許出願公開第１８７２８０３Ａ１号）中に記載されている通りに実施した。そこで、２７０ｇの７．５ｗｔ％ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液を、１５００ｍＬの３．０ｗｔ％ＰＶＡ水溶液に２４０ｒｐｍで撹拌しながら１２分間にわたって添加した。微小球を集める前に、ＤＣＭを、絶え間なく１６時間撹拌して蒸発させた。
【０１０２】
結果を表４にまとめる。
表４．ＰＣＬのＤＣＭ溶液をＭＣの水溶液中に撹拌しながら混合することによるＰＣＬ微小球の調製。ポリマー及び界面活性剤の濃度は、文献中に記載されている実験で使用された濃度を代表する。
【表４】
ａ）図３に示す光学顕微鏡像を参照されたい。
ｂ）図４に示す光学顕微鏡像を参照されたい。
ｃ）図５に示す光学顕微鏡像を参照されたい。
【０１０３】
表４から、文献中に記載されているポリマー及び界面活性剤の代表的濃度を使用すると、所望の特徴を有する粒子を効率的に調製することは可能でないことになる。これらの低粘度の界面活性剤溶液の場合、所望の特徴を有する粒子を効率的に調製するためには、ポリマー溶液をより長い時間にわたって添加すること、比較的低速で撹拌すること、及びＤＣＭをより長い時間蒸発させることが、明らかに必要である。
【０１０４】
ＩＩＩ．ＰＣＬのＤＣＭ溶液及び粘性のある界面活性剤水溶液を使用する微小球の調製
ＰＣＬ微小球を、ＰＣＬのジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液を界面活性剤の水溶液中に激しく混合し、続いてＤＣＭを蒸発させることによって調製した。
【０１０５】
Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手した様々な量のＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）をＤＣＭに溶解した。これらの溶液１００ｇを、２Ｌビーカー中の１，０００ｇのＭＣ水溶液中に、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら２秒間以内に添加した。Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手したＰＶＡ（Ｍｎ＝９，０００〜１０，０００ｇ／モル）、及びＣｏｌｏｒｃｏｎ社から入手したＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００ｇ／モル）を採用した。
【０１０６】
室温で絶え間なく１，０００ｒｐｍで激しく撹拌している３〜４時間以内に、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発した。撹拌を停止し、生じた微小球を、ビーカーの底部に沈降させた。上澄液を除去し、微小球を水で洗浄した。ステンレススチールの篩いを使用して、微小球を湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの直径を有する画分を集めた。
【０１０７】
微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。光学顕微鏡法（倍率１０×）を採用して、得られた微小球の形態を分析した。
【０１０８】
界面活性剤溶液の性質及び濃度を変えた一連の実験を実施した。結果を表５に示す。
表５．ＰＣＬのＤＣＭ溶液を粘性界面活性剤水溶液中に激しく撹拌しながら混合することによるＰＣＬ微小球の調製
【表５】
ａ）図２に示す光学顕微鏡像を参照されたい。
【０１０９】
表５は、より高濃度でＰＶＡを使用すると、ＰＣＬ溶液を激しく撹拌された界面活性剤溶液に急速添加することによってＰＣＬ微小球を調製するのに使用できる粘性水溶液が生じることを示している。粒子の形態は適切であるが、極めて小さな粒子が得られ、回収できた大きさが所望範囲の粒子の収率は極めて低い。界面活性剤としてＭＣを使用すると、方法の効率は、かなり良好である。
【０１１０】
（例７）
本発明の実験：Ｔｗｅｅｎ混合物中への高められた温度でのＰＣＬの溶解、それに続く冷却による粒子形成
２５０ｍＬのガラス容器中で、ほぼ８０℃まで加熱し、且つ５００ｒｐｍで絶え間なく撹拌することによって、１５ｇのＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）を、Ｔｗｅｅｎ ６０と水との５０／５０（ｗｔ／ｗｔ）混合物１００ｍＬ中に分散させた。Ｔｗｅｅｎ ６０は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手される。溶融されたポリマーの小滴を、さらに２分間撹拌することによってこの分散状態で維持する。さらに撹拌しながら、次いで、液状分散液を室温まで一夜冷却する。分散されたポリマー小滴の固化により、デカンテーションで回収できる微小球が得られる。
【０１１１】
水で洗浄した後、ＰＣＬ微小球を、ステンレススチールの篩いを使用して湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの大きさを有する画分を集めた。次いで、微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。全部で１２．１ｇのＰＣＬ微小球が集められた。
表６．ＰＣＬのＴｗｅｅｎ ６０と水との混合物中の溶液を激しく撹拌しながら冷却することによるＰＣＬ微小球の調製。
【表６】
【０１１２】
この表から、Ｔｗｅｅｎ ６０と水との比較的粘性のある混合物を使用すると、高められた温度の撹拌されたポリマー溶液から、冷却することによってＰＣＬ微小球を形成できると考えることができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ポリ（ε−カプロラクトン）又はポリカプロラクトン（ＰＣＬ）を含む微粒子を調製するための方法、該微粒子、生分解性注射可能ゲル、及び該ゲルのいくつかの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
加齢と共に及び／又はいくつかの疾患の結果として、筋肉及び脂肪をはじめとする身体の軟部組織は、減少し、容貌に影響を及ぼし且つ／又は機能を低下させることがある。例えば、膀胱機能及び胃逆流の制御など、身体の多くの自律機能を制御する括約筋は、年齢又は疾患に伴って減少する。注射可能なウシコラーゲンなどのいくつかの医療用フィラーが、既に開発されている。このフィラーは、アレルギーの危険及びクロイツフェルトヤコブ病によって高められた脅威に主として関連するいくつかの欠点を有する。注射可能なウシコラーゲンの代替物として、他のフィラー、例えば、乳酸及び／又はグリコール酸の反復単位を含むポリマー粒子の粒子懸濁液又は乳液を含むインプラントなどが開発されている（米国特許出願公開第２００３／０９３１５７号又は国際公開第９８／５６４３１号）。
【０００３】
しかし、これらの各特許出願中で開示されているようなフィラーは、いくつかの欠点を有し：このようなフィラーを含むゲルの混合及び流動特性（すなわち、流動注射可能性）は、最終製品を構成するのに最適ではない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、人体中で望ましくない反応をまったく引き起こさず、注射された場合に、凝集、注射針の詰まり、及び小結節形成を回避する本質的に球状の微小球であるため、流動特性などの優れた特性を有する、徐々に再吸収される医療用又は化粧用生分解性インプラントがなお求められている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
驚くべきことに、本発明者らは、流動特性などの優れた特性を有する微小球を、比較的高い粘度を有し且つ可溶化されたＰＣＬ及び界面活性剤を含む当初の混合物を使用する、効率的で迅速な方法で得ることができることを見出した。この方法の各特徴を、ここで広範囲に詳述する。
【０００６】
方法
第１の態様において、本発明は、ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）含有微粒子を調製するための方法に関し、この方法は、
ａ１）ＰＣＬポリマーを可溶化し、続いて可溶化されたＰＣＬポリマーを、界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と混合するステップ、
ｂ）ステップａ１）で得られた溶液からＰＣＬを含む微粒子を形成するステップ
を含む。
【０００７】
第２の態様において、本発明は、ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）含有微粒子を調製するための方法に関し、この方法は、
ａ２）ＰＣＬポリマーをジクロロメタン（ＤＣＭ）及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中で可溶化するステップ、
ｂ）ステップａ２）で得られた溶液からＰＣＬを含む微粒子を形成するステップ
を含む。
【０００８】
好ましい一実施形態において、ある方法が、上で規定した双方の態様による本発明に包含される。これは、ステップａ）において、ＰＣＬポリマーをＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中で可溶化し、続いて該可溶化されたＰＣＬポリマーを、界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と混合する方法である。続いてステップｂ）として、ａ）で得られた溶液からＰＣＬ含有微粒子を形成する。
【０００９】
ステップａ）
本発明の方法の第１ステップａ）は、可溶化ステップを含むか、可溶化ステップからなるか、又は可溶化ステップである。
【００１０】
ステップａ２）
本発明の方法の第１ステップは、可溶化ステップからなるか、又は可溶化ステップであり：ＰＣＬポリマーを、ジクロロメタン（ＤＣＭ）及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中で可溶化する。したがって、後に本明細書中で規定するような微粒子を含むゲルに対して意図された応用に応じて、本発明者らは、実質的に純粋なＴｗｅｅｎを使用することが、低分子量から中分子量の微粒子を調製する場合に、有機溶媒が存在しないので、特に魅力的であることを見出した。好ましくは、低分子量から中分子量とは、約１，０００〜約５０，０００Ｍｎ（数平均分子量）、より好ましくは約１，０００〜約４０，０００Ｍｎ、より好ましくは約５，０００〜約４０，０００Ｍｎ、より好ましくは約１，０００〜約３０，０００Ｍｎ、より好ましくは約１０，０００〜約３０，０００Ｍｎ、より好ましくは約２０，０００〜約３０，０００Ｍｎ、最も好ましくは約１，０００〜約３０，０００Ｍｎの範囲にある分子量を意味する。したがって、本発明のこの第２の方法において、３つの好ましい方法が提供され：その１つは、ＤＣＭを使用し、低分子量から中分子量、又は中分子量から高分子量を有する微粒子を提供するのに適している。好ましくは、中分子量から高分子量とは、約３０，０００〜約５００，０００Ｍｎ、より好ましくは約４０，０００〜約１５０，０００Ｍｎ、さらにより好ましくは約４０，０００〜約１００，０００Ｍｎの範囲にある分子量を意味する。もう１つの好ましい方法は、実質的に純粋なＴｗｅｅｎを使用し、該方法は、低分子量から中分子量を有する微粒子を得るのに適している。最後に、第３の方法は、ＤＣＭと実質的に純粋なＴｗｅｅｎとの組合せを使用する。
【００１１】
実質的に純粋なＴｗｅｅｎとは、好ましくは、少なくとも８０％のＴｗｅｅｎ、又は少なくとも９０％のＴｗｅｅｎ、又はほぼ１００％のＴｗｅｅｎを意味する。Ｔｗｅｅｎは、ポリオキシエチレンソルビタンのエステルである界面活性剤のファミリーである。Ｔｗｅｅｎ２０、４０、６０又は８０を使用できる。ステップａ２）で実質的に純粋なＴｗｅｅｎを使用する場合、その可溶化ステップは、好ましくは、ＰＣＬの溶融温度に近い温度又はそれを超える温度で実施される。この温度は、ほぼ、ＰＣＬの溶融温度である。好ましくは、この温度は、約５０〜約９０℃、又は約６０〜約９０℃の範囲にある。より好ましくは、この温度は約６０℃又は約８０℃である。
【００１２】
ステップａ２）でＤＣＭを使用したなら、続いて、ａ２）で得られた溶液を界面活性剤を含む液体に添加して、微粒子を含む液体を得る。界面活性剤又は張力作用剤（ｔｅｎｓｏａｃｔｉｖｅ ａｇｅｎｔ）は、溶液の表面張力を低下させ、安定な小粒子の形成を可能にする化学物質である。界面活性剤は、微粒子形成中にそれらの微粒子を安定化する。適切な界面活性剤には、限定はされないが、メチルセルロース（ＭＣ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリソルベート（ポリオキシエチレンソルビタン又はＰｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）、好ましくはモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、トリステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノパルミチン酸ポリオキシエチレンソルビタン、又はモノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタンなど）が含まれ、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ６０（商標））、及びモノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ２０（商標））が好ましく、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ８０（商標））がより好ましい。
【００１３】
好ましい実施形態において、界面活性剤は、欧州特許出願公開第１８７２８０３号又は米国特許出願公開第２００３／０１５７１８７号に記載されているポリビニルアルコール（ＰＶＡ）などの限定された生体適合性を有する界面活性剤ではない。最も好ましい界面活性剤は、中でも、その生体適合性のためＭＣである。したがって、ＤＣＭ及び続いて界面活性剤としてＭＣを使用する方法は、ＤＣＭ及び続いて界面活性剤としてＰＶＡを使用する方法に比べてより効率的であると予想され；その生体適合性のため、形成された微粒子を工程の最後で界面活性剤を除去するために徹底的に洗浄する必要がない。
【００１４】
液体、好ましくは界面活性剤を含む液体又はゲル状液体は、好ましくは、約１〜約４００，０００ｃＰ、約１０〜約１００，０００ｃＰ、約５０〜約１００，０００ｃＰ、約７５〜約５０，０００ｃＰ、約１００〜約５０，０００ｃＰ、約１００〜約１，０００ｃＰ、又は約７５〜約１，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と規定される。最も好ましくは、該粘度は、約７５〜約３００ｃＰである。粘度は、好ましくは、室温で、又はＰＣＬを可溶化する温度で測定される。好ましい実施形態において、ある濃度の界面活性剤、より好ましくは約０．０１〜約５．０ｗ／ｗ％のＭＣが添加され、より好ましくは約０．１〜約５．０ｗ／ｗ％のＭＣが添加され、より好ましくは約０．５〜約２．５ｗ／ｗ％のＭＣが添加され、最も好ましくは約１．０ｗ／ｗ％のＭＣが添加される。異なる分子量：Ｍｎ＝１４，０００、Ｍｎ＝４１，０００、Ｍｎ＝６３，０００又はＭｎ＝８８，０００を有するいくつかの種類のＭＣが、市販されている。好ましくは、Ｍｎ＝６３，０００の分子量を有するＭＣが使用される。
【００１５】
好ましい実施形態において、好ましくは約１．０ｗ／ｗ％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）が使用される。このような高濃度のＭＣを使用することは、その方法の効率及び形成される微粒子の特性のために魅力的であり：当初のＭＣ溶液の粘度は高い（１００〜１２０ｃＰ）。本発明者らは、驚くべきことに、大量の濃厚なＤＣＭ中のＰＣＬ溶液を粘性のあるＭＣ溶液へかなり迅速（１分未満）に添加することができ、結果として、得られる混合物の粘度もかなり高いことを見出した。得られる混合物の粘度は、ＭＣ溶液のそれとほぼ同じである。激しい撹拌は、後に本明細書中で確認されるように、実質的に球状である微粒子の形成につながる。ＤＣＭ中のＰＣＬ濃度は、後に本明細書中で規定される。さらに、蒸発によるＤＣＭの除去は、はるかに少ないＭＣを使用する通常の抽出蒸発法（Ｉｏｏｓｓ Ｐら（２００１）、２２：２７８５〜２７９４）に比べてより迅速（１〜３時間内）に行われ得る。
【００１６】
ステップａ１）
本発明の方法の第１ステップは、可溶化ステップを含む。ステップａ１）に示す可溶化ステップは、好ましくは、ステップａ２）に記載したように実施される。しかし、他の液体、溶媒又は界面活性剤を使用してＰＣＬポリマーを可溶化できる。例には、脂肪族化合物、芳香族化合物、ハロゲン含有化合物、クロロホルム、ハロゲン非含有化合物、アセトン、ＴＨＦ、トルエン、酢酸エチル、又は乳酸エチルなどが含まれる。
【００１７】
続いて、可溶化されたＰＣＬポリマーを、界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰ又は約１０〜約１００，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と混合する。粘度は、好ましくは、約１０〜約３０，０００ｃＰ、好ましくは約１５〜約２０，０００ｃＰ、より好ましくは約２０〜約１０，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約４０〜約５，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約５０〜約２，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約７５〜約２，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約７５〜約１，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約１００〜約１，０００ｃＰ、さらにより好ましくは約７５〜約５００ｃＰ、又はさらにより好ましくは約７５〜約４００ｃＰ、最も好ましくは約７５〜約３００ｃＰの範囲にある。粘度は、好ましくは、室温、又はＰＣＬを可溶化する温度で測定される。
【００１８】
ステップａ１）で使用される界面活性剤は、好ましくは、ステップａ２）で使用されるものと同一である。このような界面活性剤は、前に本明細書中で明らかにしている。好ましい界面活性剤には、中でも、その生体適合性のためＭＣが含まれる。ＭＣの好ましい濃度及び種類は、前に本明細書中で規定している。最も好ましくは、約１．０ｗ／ｗ％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００ｃＰ）が使用される。このような高濃度のＭＣを使用すると、後に本明細書中で規定するような方法の効率性及び形成される微粒子の特性のため魅力的である粘性溶液が得られる。好ましくは、何らかの理論によって拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、重要なのは、ステップａ１）で使用される液体の粘度及び／又はステップａ１）の最後に形成される溶液の粘度であると考える。これらの粘度のどれか又は双方は、ステップｂ）を促進するほど、及び後に本明細書中で規定するような高度に均一な微粒子の高収率での形成を可能にするほど十分に高いことが好ましい。実施例中で例示されるように、約３８〜７５μｍの範囲の直径を有する粒子を、かなり有利であるほぼ６０〜８０％の収率で得ることができる。このような直径を有する粒子を、ほぼ７０〜８０％の収率で得ることさえできる。液体及び得られる溶液の好ましい粘度は、双方とも本明細書中で規定される。
【００１９】
ステップｂ）
続いて、ＰＣＬ含有微粒子は、ａ１）又はａ２）で得られた溶液又は混合物から形成される。中でも、ステップａ１）又はａ２）中で使用される溶媒の正体（中でも、ＤＣＭ及び／又はＴｗｅｅｎ）に応じて、別個のステップを、下記で説明するように実施する。ステップａ１）又はａ２）でＤＣＭを使用するなら、ＤＣＭを、粘性液体中に分散されたＰＣＬ含有微粒子から抽出蒸発によって抽出する。抽出蒸発法は、蒸発抽出法としても周知であり、当業者に周知であり、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ中に記載されている（「生分解性微小球及びマイクロカプセルの調製（Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ）」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、（１９９１）、ｖｏｌｕｍｅ １７：１〜２２）。本明細書中で規定されるような混合物の高粘度ゆえに、激しく撹拌しなければならない可能性がある（実施例中で例示するようにほぼ１，０００ｒｐｍ）。なんらかの理論によって拘束されるものではないが、本発明者らは、激しい撹拌により、混合物中に空気が組み込まれ、泡を作り出すことが可能になり、そのことが、抽出／蒸発法を促進すると考えられると予想する。加えて、抽出／蒸発法は、比較的少量のＤＣＭ（すなわち、後に本明細書中で規定するような高いＰＣＬ／ＤＣＭ比）を、抽出／蒸発させればよいという事実によって促進される。前記方法は、ほぼ３時間継続するが、一方、はるかに低い粘度（実施例参照）を有する混合物を使用する通常の抽出／蒸発法は、１４時間を超えてはるかに長く継続すると予想される。抽出蒸発中に、ＰＣＬ含有微粒子中に含まれるＤＣＭのかなりの部分乃至殆どは、水中に抽出され、表面で蒸発する。
【００２０】
ステップａ１）又はａ２）でＴｗｅｅｎを単独の溶媒として加熱して使用するなら、制御された冷却及び撹拌条件の結果として、微粒子が形成される。最終温度は、一般に室温である。混合物を、８０℃まで加熱できる。撹拌は、約５００ｒｍｐでよい。制御された冷却は、１〜１２時間継続できる。
【００２１】
本発明の工程の最終時点で、ＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎを実質的に含まない微粒子が得られる。実質的に含まないとは、好ましくは、当初のＤＣＭ又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎの７０ｗｔ％未満、より好ましくは６０ｗｔ％、５０ｗｔ％、４０ｗｔ％、３０ｗｔ％、２０ｗｔ％、１０ｗｔ％、５ｗｔ％、２ｗｔ％、１ｗｔ％、０．５ｗｔ％、０．３ｗｔ％、０．２ｗｔ％未満、又はさらには０．１ｗｔ％未満がなお存在することを意味する。一実施形態において、ＤＣＭ及び／又はＴｗｅｅｎは、形成された微粒子中で検出できない。ＤＣＭ又はＴｗｅｅｎは、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）を使用して検出できる。微粒子は、ＰＣＬポリマーを含むか、或いはＰＣＬポリマーからなる。工程の最終時点で、微粒子を、任意選択で、水中で１回又は数回洗浄してＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎを除去することができる。
【００２２】
本発明の方法で溶媒としてＤＣＭ及びＴｗｅｅｎを組み合わせるなら、この方法は、ＤＣＭが単独の溶媒として存在する場合と同じであるのが好ましい。
【００２３】
本発明の状況で、ＰＣＬポリマーは、ポリ−ε−カプロラクトン又はポリカプロラクトンを含むポリマーを意味する。ＰＣＬは、生分解性で、免疫学的に不活性で、生体適合性で、且つ生体吸収性の合成ポリマーである。本発明で使用するためのＰＣＬポリマーは、市販されているか、或いは当業者に周知の方法で製造できる。好ましくは、生物医学又は化粧上の応用で使用するのに適した精製ＰＣＬポリマーが採用される。ポリマーは、モノマーと呼ばれる低分子量の反復単位から構成される分子である。モノマーを連結してポリマーを製造する方法は重合と呼ばれる。
【００２４】
本発明の状況で、ポリマーには、線状ポリマー、コポリマー、ブロックコポリマー、ターポリマー、又は異なる種類のホモポリマー、コポリマー、ブロックコポリマー若しくはターポリマーのブレンドをはじめとする、当業者に周知のすべての可能な意味を付与できる。さらなる好ましい方法において、ε−カプロラクトン（ＣＬ）のコポリマーが、ステップａ１）又はａ２）で使用される。ＣＬの好ましいコポリマーは、ＣＬと、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ＴＭＣ（炭酸トリメチレン）、ＰＥＯ（ポリエチレンオキシド）、グリコリド、及びＤＯ（ジオキサノン）からなる群から選択される少なくとも１種の化合物とのコポリマーである。ステップａ２）で実質的に純粋なＴｗｅｅｎを単独の溶媒として使用する方法において、ＣＬのコポリマー（コポリマー、ブロックコポリマー）を使用する場合、ＰＣＬの溶融温度は、ＣＬコポリマーが溶融する温度を意味すると解釈される。
【００２５】
好ましい方法では、ステップａ１）又はａ２）でＰＣＬのターポリマーが使用される。ＰＣＬの好ましいターポリマーは、ＣＬと、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ＴＭＣ、ＰＥＯ、グリコリド、及びＤＯからなるリストから選択される１種の化合物とのコポリマーである。ステップａ２）で実質的に純粋なＴｗｅｅｎを単独の溶媒として使用する方法において、ＰＣＬのターポリマーを使用する場合、ＰＣＬの溶融温度は、ＰＣＬターポリマーが溶融する温度を意味すると解釈される。
【００２６】
別法として、ＰＣＬのターポリマーは、ＰＣＬと、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ＴＭＣ、ＰＥＯ、グリコリド、及びＤＯからなる群から選択される２種の化合物とのポリマーである。上記に加え、ホモ−／コ−／ブロックコ−／ター−ポリマーと、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ｍｅｓｏ−ラクチド、ＴＭＣ、ＰＥＯ、グリコリド、及びＤＯからなる群から選択される成分とのブレンドである。他のＣＬコポリマー又はブレンドは、ポリエステル、ポリエーテル、ポリカーボネート、コポリオキサレート、ポリ（オルトカーボネート）、ポリ（アセタール）、ポリ無水物、ｐｂｔ／ｐｅｏコポリマー（ＰｏｌｙＡｃｔｉｖｅ（商標））、及びポリホスファジンを含むことができる。
【００２７】
別の好ましい方法では、ＰＣＬホモポリマーが使用される。ＰＣＬホモポリマーは、それが半結晶性であるので、有利である。したがって、それは安定な形態である。加えて、それは、疎水性物質であり、それゆえ、皮膚用フィラーとして使用した場合、非半結晶性の生体再吸収性ポリマーの対応する再吸収時間に比べてより長い再吸収時間を有する可能性がある。より好ましくは、グリコリド、ジオキサノン、炭酸トリメチレン、ラクチド、及びこれらの組合せからなる群から選択される第２モノマーを含まないＰＣＬポリマーが、使用される。
【００２８】
加えて、本発明の別の好ましい実施形態として、本明細書中で使用されるようなＰＣＬポリマーを、別のポリマーで置き換える。このような他のポリマーは、Ｌ−ラクチド、Ｄ−ラクチド、ＤＬ−ラクチド、ｍｅｓｏ−ラクチド、ＴＭＣ、グリコリド、又はジオキサノンをベースにしたポリマーでよい。
【００２９】
すべて本明細書中で開示されるポリマー、得られる微粒子、及び得られるゲルの特性は、意図した応用分野に応じて広範に異なり、一般には決定的なものではない。注射可能な応用分野の場合、ＰＣＬを含む微粒子は、適切な大きさのシリンジを介する注射に適しているべきである。
【００３０】
好ましい実施形態において、ＰＣＬポリマーは、重量基準でＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中に、ＤＣＭ（単独の溶媒として、又はＴｗｅｅｎと組み合わせた）の約１０％まで、ＤＣＭの約３０％まで（単独の溶媒として又はＴｗｅｅｎと組み合わせた）、或いはＴｗｅｅｎを単独の溶媒として使用するなら実質的に純粋なＴｗｅｅｎ中に約５０％までである濃度で、添加され、溶解される。より好ましくは、ＰＣＬポリマーは、ＤＣＭ中に、約２５％まで、又は２５％までである濃度で添加され、溶解される。この割合は、主として使用するＰＣＬの分子量によって決まる。
【００３１】
より好ましい実施形態において、ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液の粘度は、ほぼ５〜５，０００ｃＰ（室温で測定して）の範囲でよい。この粘度は、主としてＰＣＬの分子量、並びに使用するＰＣＬ及びＤＣＭの濃度によって決まる。比率ＰＣＬ／ＤＣＭ（ｗ／ｗ）は、ほぼ、１０ｇ（ＰＣＬ）／１００ｇ（ＤＣＭ）中〜２０ｇ（ＰＣＬ）／１００ｇ（ＰＣＬ）中の範囲でよい。この比率は、従来技術で以前に使用されていた比率と比較して、高く設定される。
【００３２】
本明細書中で規定されるような高いＰＣＬ／ＤＣＭ比率を使用することは、できるだけ少ないＤＣＭが存在するので、有利である。したがって、本発明の微粒子を得るためのＤＣＭの蒸発工程は、本発明よりも多くのＤＣＭを使用する通常の工程に比べてより迅速であると予想される。
【００３３】
粒子の大きさ及び分布は、使用する界面活性剤（ＭＣが好ましい）、ＰＣＬポリマー（ホモポリマーが好ましい）の本体、ＰＣＬ／溶媒（ＤＣＭ及び／又は実質的に純粋なＴｗｅｅｎ）比（好ましい比率が付与される）によって、及び処理条件によって影響されると思われる。
【００３４】
微粒子
さらなる態様において、本発明は、前の節で略述したような第１及び／又は第２態様の方法で得ることのできる微粒子を提供する。
【００３５】
これらの微粒子は、それらが、下記に示すような所望の特性を有するなら、それ自体前述のような方法を使用して得られない。本発明の方法は、これらの微粒子を得るための１つの好ましい方法である。好ましくは、本発明の微粒子は、次の特性の少なくとも１つを有する：
ｉ）５〜２００μｍ、より好ましくは２０〜１５０μｍ、さらにより好ましくは３０〜９０μｍ、さらにより好ましくは２５〜７５μｍ、さらにより好ましくは３８〜７５μｍ、さらにより好ましくは２５〜５０μｍの範囲にある直径分布、
ｉｉ）均一な密度、形状、及び内容物（例として図１を参照されたい）：球形状及び表面の滑らかさ、
ｉｉｉ）本質的に球形の微小球。
【００３６】
本発明の微小球の均一特性（特徴ｉ）、ｉｉ）、及び／又はｉｉｉ））は、それから誘導されるゲルに対して最適な流動特性を付与するので、極めて魅力的であり（次の節で示すように）：本発明者らは、シリンジで注射する場合に、シリンジ中での凝集がなく、注射針の詰まりがないと予想する。この均一特性は、インプラントとして使用される既知のゲルに対する改善を意味する。例えば、本発明の微粒子は、好ましくは界面活性剤を含み、ステップａ１）において約１〜約４００，０００ｃＰの範囲である粘度を有する液体を使用するため、及び／又は好ましくは界面活性剤としてＭＣ、より好ましくは１％のＭＣ、さらにより好ましくは１％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）を使用するため、及び／又は好ましくは本明細書中で規定するようなより高比率のＰＣＬ／ＤＣＭを使用するため、及び／又は好ましくは抽出蒸発を実施する方式のため、欧州特許出願公開第１８７２８０３号又は米国特許出願公開第２００３／０１５７１８７号中に開示されているものに比べて、より魅力的な特性を有する。
【００３７】
別の例として、本発明の微粒子は、好ましくは界面活性剤を含み、ステップａ１）において約１０〜約１００，０００ｃＰの範囲である粘度を有する液体を使用するため、及び／又は好ましくは本明細書中で規定するようなより高比率のＰＣＬ／ＤＣＭを使用するため、及び／又は好ましくは界面活性剤として特定の種類及び濃度のＭＣを使用するため、より好ましくは１％のＭＣ、さらに好ましくは１％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）を使用するため、及び／又は好ましくは抽出蒸発を実施する方式のため、Ｉｏｏｓｓ（Ｉｏｏｓｓ Ｐら（２００１）、２２：２７８５〜２７９４）中に開示されているようなものと比べて、より魅力的な特性を有する。微粒子は、均一なので微小球と名付けることもできる。微粒子の均一性（球形状及び表面の滑らかさ、並びに既にｉ）、ｉｉ）及びｉｉｉ）として規定したような特徴のいずれか）は、中でも本発明の特殊な方法のため、好ましくは界面活性剤を含み、ステップａ１）において約１〜約４００，０００ｃＰの範囲である粘度を有する液体を使用するため、及び／又は好ましくは本明細書中で規定するような最適比率ＰＣＬ／ＤＣＭのため、及び／又は好ましくは使用される界面活性剤、より好ましくは１％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）のため、及び／又は好ましくは抽出／蒸発法を実施する方式のためである。
【００３８】
微粒子（微小球）の好ましい直径は、２０〜１５０μｍの範囲である。２０μｍより大きい直径が、マクロファージによる直接食作用を最小にするので、好ましい。１５０μｍより小さい直径が、ゲル中に存在する場合により良好な流動特性を有すると予想されるので、好ましい。別の選択肢として、好ましい直径は、２５〜５０μｍの範囲である。
【００３９】
驚くべきことに、本発明者らは、前に本明細書中で規定したような比較的低分子量から中分子量のＰＣＬを含む微粒子は、本発明で使用するのに極めて適していることを見出した。この低分子量から中分子量のＰＣＬを含む微粒子は、本発明のゲル中に存在する場合、後に本明細書中で規定するような中分子量から高分子量のＰＣＬを用いた微粒子を含むゲルのそれよりも比較的より短い再吸収時間を示す。
【００４０】
微粒子は、フリーズドライ、凍結乾燥、又は自由流動性粉末としてある１つの乾燥状態で貯蔵することができ、適切な条件下で数年間保存できる。凍結乾燥は、滅菌及び貯蔵を容易にするので、有利である。ポリマーの分子量及び微粒子の固有の物理特性（中でも、球形状及び表面の滑らかさ、前に本明細書中でｉ）、ｉｉ）及び／又はｉｉｉ）として規定したような特徴の少なくとも１つを参照されたい）は、ゲル中に存在する場合及びインビボで注射した場合に、それらのインビボでの分解挙動を少なくとも部分的に決定する。
【００４１】
ゲル
さらなる態様において、本発明は、前の節で規定したような微粒子及び担体を含む、生分解性注射可能ゲルに関する。担体は、粘度増強剤、密度増強剤、及び／又は張性湿潤化増強剤を含むことができる。粘度増強剤は、カルボキシメチルセルロースナトリウム（ＣＭＣ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、メチルセルロース（ＭＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）からなる群から選択できる。しかし、当業者にとって容易に明らかであるような、その他の粘度増強剤も使用できる。ＣＭＣは、粘度増強剤として好ましい。
【００４２】
密度増強剤は、ソルビトール、マンニトール、及び果糖からなる群から選択できるが、その他の適切な密度増強剤も使用できる可能性がある。
【００４３】
張性湿潤化剤は、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ ２０、４０、６０、又は８０）でよい。その他の張性湿潤化剤も使用できる。本明細書中で開示されるゲルは、様々な量の粘度増強剤、密度増強剤、及び／又は張性湿潤化増強剤を含むことができる。好ましい実施形態において、ゲルは、約０〜８ｗｔ％の粘度増強剤、及び／又は約０〜約５０ｗｔ％の密度増強剤、及び／又は約０〜約５．０ｗｔ％の張性湿潤化剤を含む。より好ましくは、ゲルは、約０．１〜８ｗｔ％の粘度増強剤、及び／又は約０〜約５０ｗｔ％の密度増強剤、及び／又は約０〜約５．０ｗｔ％の張性湿潤化剤を含む。
【００４４】
本明細書中で開示されるゲルは、様々な量の微粒子を含むことができ、典型的には約１０ｗｔ％〜約５０ｗｔ％の微粒子、約１５ｗｔ％〜約５０ｗｔ％、約２５ｗｔ％〜約４５ｗｔ％、約３５ｗｔ％〜約４５ｗｔ％の微粒子を含むことができる。担体の量は、典型的には、所望の流動特性、すなわち、適切な粘度を有する懸濁液を得るように選択される。当業者は、本発明のゲルに関して想定される応用の種類に応じて、特定の特性を有する注射針を使用すればよいことがわかっている。使用する注射針のそれぞれの種類に対して、ゲルの粘度を最適化して所望の流動特性を付与すればよい。同じく好ましい実施形態であるゲージ２６〜３０の注射針及びＣＭＣを使用する例として、ほぼ２０，０００〜２００，０００ｃＰの範囲の粘度が適切である。好ましい実施形態において、担体は、医薬として又は化粧料として許容し得る担体及び／又は生物学的、医学的に許容し得る担体である。
【００４５】
生分解性は、生体再吸収性と同義である。ゲルの所望される生体再吸収性は、中でも使用するＰＣＬポリマーの種類、構想する使用／応用に応じて異なる可能性がある。好ましい実施形態において、本発明のゲルは、注射後１０年以内又は１０年未満に、或いは注射後５年以内又は５年未満に、或いは注射後２年間以内又は２年間未満、或いは注射後１年間以内又は１年間未満、生体再吸収性である。
【００４６】
得られるゲルは、前に規定したような微粒子の懸濁液を含み、他の周知のゲルに比べてより魅力的であり：本発明のゲルは、滑らかな表面を有する本質的に球状である微粒子（前に本明細書中で規定したような次の特徴、ｉ）、ｉｉ）及び／又はｉｉｉ）の少なくとも１つを有する）を含み、したがって、ゲルの流動特性が改善される。驚くべきことに、本発明者らは、低分子量から中分子量を有する微粒子を含むゲルを、有利に使用できることを見出した。本発明のゲルは、インビボで注射した場合に、より安定であるポリマー（分解の反応速度は、他のポリマーの場合よりも遅い）を含む。ゲルは、微粒子及び担体を含む。担体は、通常、注射後３〜４カ月以内に分解され、溶出され、又は再吸収される。微粒子の再吸収時間は、使用するＰＣＬの当初の分子量によって決まる。例えば、前に本明細書中で規定したような低分子量から中分子量を有するＰＣＬポリマーを含む微粒子は、ほぼ６カ月〜２年の範囲である分解又は再吸収時間を有すると予想される。例として、約１０，０００Ｍｎの分子量を有するＰＣＬポリマーを含む微粒子を含むゲルは、注射される場所及び微粒子のその他の特性に応じて、ほぼ６〜１５カ月、又は１２〜１５カ月の再吸収時間を有すると予想される。別の例として、約４０，０００Ｍｎの分子量を有するＰＣＬポリマーを含む微粒子を含むゲルは、注射される場所及び微粒子のその他の特性に応じて、ほぼ１８〜２４カ月、又は２０〜約２４カ月の再吸収時間を有すると予想される。このゲルは、以下の記載の通り数種類の用途に使用することもできる。ゲルは、無菌懸濁液の形態で容器中に貯蔵できる。好ましくは、容器は、即時使用用の事前充填シリンジである。シリンジは、一方が（フリーズドライの）微粒子を、他方が医薬として許容し得る担体を含む、２区画の事前充填シリンジとしても提供できる。例えば、水又は２回蒸留水で即座に注射可能な調合物に再構成したなら、次いで、ゲル（懸濁液）を、皮内又は皮下注射で適用することができる。別法として、容器は、バイアル瓶でよい。ここで、シリンジの場合のように、バイアル瓶も、即時に使用される本発明のゲルを含むことができる。別法として、バイアル瓶は、一方の区画に（フリーズドライの）微粒子を、もう１つの区画に医薬として許容し得る担体を含むことができる。
【００４７】
シリンジ又はバイアル瓶中でゲルを即席で再構成するのに使用される水は、好ましくは蒸留水、より好ましくは２回蒸留水、さらにより好ましくは無菌水である。最も好ましくは、ＰＢＳ（リン酸緩衝化生理食塩水）が使用される。担体は、さらに、凍結保護剤及び緩衝剤からなる群から選択される成分を含むことができる。
【００４８】
凍結保護剤は、冷却中に生物学的組織中で有害な氷結晶の形成を阻止又は低減する化学物質である。適切な凍結保護剤には、限定はされないが、ｄ−マンニトール、乳糖、蔗糖、果糖、ソルビトール、及びデキストランなどの糖類及び炭水化物が含まれ、ｄ−マンニトールが好ましい。ゲルの担体中の凍結保護剤濃度は、意図した応用、微粒子、及び選択した凍結保護剤の本体に応じて異なってもよい。ゲルは、典型的には、約０〜約４５重量％、又は約３０％〜約４０％の凍結保護剤を含むことができる。
【００４９】
緩衝剤は、その溶液が、希釈、又は少量の酸若しくは塩基の添加の結果としてのｐＨ変化に抵抗することを可能にするように、該溶液に添加される化合物又は化合物群である。効果的な緩衝系は、多量のほぼ同濃度の共役酸−塩基対（又は緩衝剤）を含む溶液を用いる。本明細書中で採用される緩衝剤は、医薬として許容し得る塩、例えば、限定はされないがリン酸及びクエン酸の塩（共役酸及び／又は塩基）であるような任意の化合物（単数又は複数）でよい。ゲルは、典型的には、約０〜約０．２重量％、又は約０．１％〜約０．１５％の緩衝剤を含むことができる。好ましい緩衝剤はＰＢＳである。
【００５０】
さらに好ましい実施形態において、微粒子を含むゲルは、薬剤として使用するためのものである。いかなる活性成分も含まない、又は好ましくは本明細書中に含まれるいかなる薬剤も含まない、ゲル自体も、薬剤と見なすことができる。この最初の事例において、ゲルは、好ましくは、皮膚の奇形又は傷跡の治療、膀胱機能の制御（泌尿器括約筋不全の治療）、及び／又は胃逆流の制御（幽門部括約筋不全の治療）、声帯不全、先天性奇形、歯科治療のためのガム補填を含む各種治療において、哺乳動物の軟部組織を補うためのフィラー又はインプラントとして使用される。これらのすべての使用において、哺乳動物は、好ましくは、ヒトである。これらのすべての使用において、ゲルは、典型的には、一般に皮内又は皮下シリンジ注射で治療又は投薬すべき組織部位中に導入される。
【００５１】
好ましい実施形態において、ゲルは、フィラー及び／又はインプラントとして使用される。より好ましい実施形態において、ゲルは、皮膚用フィラーである。皮膚用フィラーは、術後の皮膚奇形、又は熱傷等の傷跡など、対象の健康にとって脅威となる皮膚奇形を矯正するのに使用できる。ゲルを、薬剤として、及び皮膚用フィラーとしての応用に応じた皮膚用フィラーとして使用する場合、ＰＣＬポリマーは、好ましくは、前に本明細書中の本発明の方法のステップａ１）又はａ２）で規定したような低分子量から中分子量、又は中分子量から高分子量を有する。
【００５２】
別のより好ましい実施形態において、本明細書中で開示されるゲルは、尿失禁（膀胱機能の制御）などの各種の括約筋不全を治療するためのインプラント又はフィラーとして使用される。膀胱制御の低下は、肉体的活動（咳、くしゃみ、運動）によるストレスのため、及び／又は睡眠時を含む予期しない時刻での大量の尿意又は漏れのためである可能性がある。すべての型の失禁は、患者の年齢に関係なく、本発明のゲルを使用して治療できる。排尿自制は、従順な貯蔵器、及び２つの構成部分、すなわち（１）膀胱頚部の不随意平滑筋、及び（２）外側括約筋の随意骨格筋を有する括約筋の能力に依存する。
【００５３】
したがって、本発明のゲルを、括約筋又は尿道に圧迫を集中するように添加し、それによって、１回以上のゲルの注射により管腔の大きさを減少させ、かくして泌尿器のストレス性失禁を実質的に低減又は排除することができる。これらの例で、ゲルは、注射によって尿道又は尿道周囲組織中に挿入され得る。したがって、典型的な手順は、膀胱鏡の助けを借りてゲルを膀胱頚部周辺の組織中に注射すること、増大した組織容積を創り出すこと、続いて尿道管腔を接合することを含む。ゲルは、容積を加増し、尿道を閉じるのを助けてストレス性失禁を減らす。注射は、典型的には、最善の結果を得るために周期的に繰り返すことができる。
【００５４】
別のより好ましい実施形態において、ゲルは、胃逆流を制御する（幽門括約筋不全を治療する）ためのフィラー又はインプラントとして使用される。胃食道逆流疾患（ＧＥＲＤ）は、胃酸及びその他の内容物の食道又は隔膜中への逆流に関連し、逆流エピソードの７０％は、下部食道括約筋の自発弛緩中に、又は嚥下後の長期弛緩のため発生する。３０％は、下部括約筋の圧迫期間中に発生する。主な症状は、胸やけ（食後３０〜６０分）である。ＧＥＲＤの典型的でない発現には、喘息、慢性咳、喉頭炎、咽頭炎、及び非心原性胸痛が含まれる。ＧＥＲＤは、生活様式の変更及び医学的介入を必要とする終生続く疾患である。
【００５５】
したがって、本発明のゲルは、容積を加増し、下部食道括約筋に圧迫を集中させるように注射することができる。それゆえ、典型的な手順は、内視鏡の助けを借りてゲルを下部食道括約筋周辺の組織中に注射すること、増加した組織容積、結果としての接合を創り出すこと、括約筋圧迫を正常化することを含む。ゲルは、容積を加増し、括約筋を閉止するのを助けて逆流を減らす。注射は、最善の結果を得るために毎年繰り返すことができる。ゲルは、局所麻酔を使用して注射され得る。
【００５６】
膀胱機能及び／又は胃逆流を制御するための薬剤としてゲルを使用する場合、使用されるＰＣＬポリマーは、好ましくは、前に本明細書中の本発明の方法のステップａ１）又はａ２）で規定したような中分子量から高分子量を有する。そのため、使用したゲルが、注射部位により長く存在し続け（より低いインビボでの分解速度）、且つ外科的介入をしばしば繰り返す必要がないので、このことは好ましい。
【００５７】
別のより好ましい実施形態において、ゲルは、すべての年齢の男性を襲う可能性のある勃起機能不全（ＥＤ）を治療するためのフィラー又はインプラントとして使用される。本発明のゲルは、ＥＤを治療するのに使用できる。典型的な手順は、ゲルを海綿体の全長にわたって深筋膜部に直接注入することを含む。
【００５８】
別のより好ましい実施形態において、ゲルは、声帯を治療するためのフィラー又はインプラントとして使用される。本発明のゲルは、喉頭音声発生器の声帯内に注入し、この軟質組織体の形状を変えるために使用できる。
【００５９】
さらに、ゲル自体が薬剤（ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔ）と見なされる場合、ゲルが、さらに、やはり好ましくは薬剤である活性成分を含むことも、本発明に包含される。本明細書中で使用する場合、「薬剤」は、任意の生物活性組成物、医薬、薬物、又はゲルの注入部位に投与することが望まれる化合物でよい。この場合、ゲルに添加される薬剤は、ゲルの機能を促進することができ、且つゲル注入に付随する疼痛又は不快を減らすための麻酔薬、或いはＰＣＬ又は微粒子の完全性を促進するか、或いは注入部位に対する外傷を減らすための組成物を含むことができる。１つの好ましい実施形態では、ゲルに薬剤を添加する。典型的な麻酔薬には、限定はされないが、リドカイン、キシロカイン、ノボカイン、ベンゾカイン、プリロカイン、リピバカイン、及びプロポフォールが含まれる。本明細書中で開示されるゲル中で採用できるその他の薬剤には、ペプチド、組織再生薬、抗生物質、ステロイド、フィブロネクチン、サイトカイン、増殖因子、鎮痛薬、防腐剤、α、β、若しくはγ−インターフェロン、エリスロポエチン、グルカゴン、カルシトニン、ヘパリン、インターロイキン−１、インターロイキン−２、フィルグラスチム、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ、タンパク質、ペプチド、ＨＧＨ、黄体形成ホルモン、心房性ナトリウム利尿因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、及び卵胞刺激ホルモンが含まれる。薬剤は、注入直前に、前に本明細書中で規定したような担体との活性化混合中にゲルに添加されることが多い。典型的には、活性成分又は薬剤は、ゲル中に導入され得る微小球中に存在し、続いて、前記ゲルを注入することができる。
【００６０】
別法として、別の好ましい実施形態において、ゲル中に存在する薬剤は、ゲルの機能を促進するために存在するのではない。この場合、ゲルは、任意の既知の又は発見された薬剤のための制御放出系と見なされる。
【００６１】
別の好ましい実施形態において、ゲルは、化粧用ゲルである。化粧用ゲルは、皮膚用フィラーとして使用できる。この好ましい実施形態の範囲内で、最適の特性を有するゲルは、本発明の方法を実施する場合に、好ましくはステップａ１）で界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰの範囲である粘度を有する液体を使用し、且つ／又は好ましくは本明細書中で規定するような高比率のＰＣＬ／ＤＣＭを使用し、且つ／又は好ましくは界面活性剤としてＭＣ、より好ましくはほぼ１％のＭＣ、さらにより好ましくはほぼ１％のＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００）を使用し、且つ／又は好ましくは抽出蒸発が好ましくは先に本明細書中で規定したように実施する場合に得られる。この好ましい実施形態の範囲内で、ＰＣＬポリマーは、好ましくはＰＣＬホモポリマーである。この好ましい実施形態の範囲内で、ゲルは、いかなる活性成分又は薬剤も含まない。ゲルが、皮膚用フィラーのような化粧用ゲルとして使用される場合、ＰＣＬポリマーは、好ましくは、先に本明細書中の本発明の方法のステップａ２）で規定したような低分子量から中分子量を有する。ゲルは、瘢痕、しわ、及び顔面脂肪減少を化粧的に治療するのに使用できる。本発明のゲルは、痘痕又は瘢痕（水痘、ざ瘡瘢痕、先天奇形（口唇裂など）及び皺などの軟部組織欠陥を充填し、滑らかにするのに使用できる。瘢痕は、任意の起源：疾患、術後、熱傷によるものでよい。ゲルは、また、ヒトにおける顔面組織又は脂肪減少を補うための増量剤として使用できる。ゲルを効率的に使用するための解剖学的領域は、皮膚、好ましくは顔面区域の皮膚：表皮及び／又は皮下でよい。考えられる具体的な化粧上の応用に応じて、注射部位は、異なってよい：ざ瘡瘢痕及び微妙な顔面ラインを治療するための部位、しわ、ひだ及び顔面輪郭の肉付きを治療するための深部位、並びにリポジストロフィーを治療するための深部位。
【００６２】
ゲルの使用
本発明のさらなる態様は、皮膚の奇形若しくは傷跡を治療するための、又は膀胱機能を制御するための、及び／又は胃逆流を制御するための、及び／又は勃起機能不全を治療するための、及び／又は声帯を治療するための薬剤の調製に関する本発明のゲルの使用に関する。
【００６３】
本発明のゲルのもう１つの使用は、化粧上の応用に関して前に本明細書中で規定したような、本発明の化粧用ゲルの使用である。
【００６４】
これらの使用のすべて特徴は、「ゲル」と題した前の節で既に規定している。
【００６５】
この文書及びその特許請求の範囲で、動詞「を含む（ｔｏ ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及びその活用形は、その非限定的な意味で使用され、該単語に続く品目を含むが、具体的に言及されていない品目を排除しないことを意味する。加えて、動詞「からなる（ｔｏ ｃｏｎｓｉｓｔ）」は、「から本質的になる（ｔｏ ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」で置き換えることができ、本明細書中で規定するような製品、組成物、ゲル、又は微粒子が、具体的に明らかにしたもの以外に、本発明の独特の特性を変えないさらなる成分（単数又は複数）を含むことができることを意味する。加えて、不定冠詞（「ａ」、「ａｎ」）を用いるある要素に対する言及は、文脈が１つ又はたった１つの要素が存在することを明確に要求していないなら、１つを超える要素が存在する可能性を排除しない。不定冠詞（「ａ」、「ａｎ」）は、かくして通常、「少なくとも１つ」を意味する。単語「約」又は「ほぼ」は、数値に付随して使用される場合（約１０など）、好ましくは、その値が、１０±その値の１％の所定値でよいことを意味する。
【００６６】
本明細書中で引用されるすべての特許及び参照文献は、参照によりその全体で本明細書に組み込まれる。
【００６７】
後記の実施例は、単に例示の目的で提供されるものであり、本発明の範囲をいかなる意味でも限定することを意図しない。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】実施例２で調製される通りの微小球の顕微鏡写真を示す図である。
【図２】ＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）のＤＣＭ溶液、及びＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００ｇ／モル）の水溶液を使用して調製されたＰＣＬ微小球を示す図である。［ＰＣＬ］の濃度は２０ｇ／１００ｇＤＣＭであり、［ＭＣ］の濃度は１．１ｗｔ％である。表１を参照されたい。光学顕微鏡像、倍率１０×。
【図３】１０ｗｔ％ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液及び１．０ｗｔ％ＰＶＡ水溶液を使用し、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら調製されたＰＣＬ微小球を示す図である。表４のＨｕｎｔｅｒを参照されたい。光学顕微鏡像、倍率１０×。
【図４】１０ｗｔ％ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液及び３．０ｗｔ％ＰＶＡ水溶液を使用し、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら調製されたＰＣＬ微小球を示す図である。表４のＥｍｅｔａ及びＷｕを参照されたい。光学顕微鏡像、倍率１０×。
【図５】１０ｗｔ％ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液及び０．１ｗｔ％ＭＣ水溶液を使用し、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら調製されたＰＣＬ微小球を示す図である。表４のＩｏｏｓｓを参照されたい。光学顕微鏡像、倍率１０×。
【実施例】
【００６９】
微小球／微粒子の合成、及び担体を含むゲル中へのこれら粒子の即時使用のための懸濁に関する実験計画案を以下に記す。
１．微小球を、所望の特性を得るために、伝統的な溶媒蒸発技術を使用して、又は無溶媒合成技術を使用して調製する。
２．周知の調製技術を使用して所望の粘度を有するゲルを調製し、その後、該ゲル中に微小球を適切な混合によって懸濁させる。
３．次いで、制御された雰囲気中で、シリンジに滅菌されたゲル懸濁液を充填する。
【００７０】
以下の例を使用して又は組み合わせて、ポリマー又は前に述べたブレンドから構成される微粒子の即用性適用のための、或いは（フリーズドライの）バイアル瓶適用のための懸濁液を得ることができる。
【００７１】
（例１）
１０〜２０ｇのＰＣＬ（Ｍｎ１０，０００又はＭｎ４２，５００）をＤＣＭに溶解する（１０〜２０ｗ／ｗ％）。この溶液を、０．１〜５％のＭＣを含有する１，０００ｍＬの水中に分散させる。猛烈に撹拌（１，０００ｒｐｍ）しながら、説明中で引用される刊行物中に記載の通りの溶媒抽出によって、４０μｍの平均直径を有する微粒子が得られる。得られた微小球を、濾過し、洗浄し、乾燥する。続いて、１０〜５０％の微小球を、ＣＭＣ（０．１〜５％）ゲル又はＭＣ（０．１〜５％）ゲル中におだやかに撹拌して分散させ、さらに処理する。
【００７２】
（例２）
１０〜２０ｇのＰＣＬ（Ｍｎ＝４２，５００）をＤＣＭに溶解する（１０〜２０ｗ／ｗ％）。この溶液を、０．８％のＭＣを含有する１，０００ｍＬの水中に分散させる。猛烈に撹拌（１，０００ｒｐｍ）しながら、例１の通りの溶媒抽出によって、６０μｍの平均直径を有する微粒子が得られる。得られた微小球を、濾過し、洗浄し、乾燥する。続いて、１０〜５０％の微小球を、ＣＭＣ（０．１〜５％）ゲル又はＭＣ（０．１〜５％）ゲル中に穏やかに撹拌して分散させ、さらに処理する。例２で調製された微小球の顕微鏡写真を図１に示す。
【００７３】
（例３）
４０〜８０ｇのＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００）を、純粋なＴｗｅｅｎ ２０、４０、６０又は８０中に７０〜９０℃に加熱、撹拌（６００〜１，０００ｒｐｍ）して溶解し、その後、相分離及び３０分以内での５℃までの制御された冷却により微小球を得る。得られた微小球を、濾過し、洗浄し、乾燥する。平均分布は４５μｍであり、収率７５％が必要とされる範囲内にある。続いて、１０〜５０％の微小球を、ＣＭＣ（０．１〜５％）ゲル又はＭＣ（０．１〜５％）ゲルに穏やかに撹拌して分散させ、さらに処理する。
【００７４】
さらなる例
本発明は、生分解性微小球の効率的で効果的な調製方法に関する。重要な核心は、比較的高い濃度及び粘度を有する界面活性剤溶液の使用である。本発明は、滑らかな表面を有し、ほぼ３８〜７５μｍの範囲の所望される大きさの均一粒子の形成につながる。
【００７５】
Ａ）例４で詳しく例示するような本発明の一方法において、粘性ポリマー溶液は、激しく撹拌された界面活性剤水溶液に急速に添加される。混合物の激しい撹拌及び溶媒の蒸発により、粒子が形成される。ＤＣＭなどの揮発性溶媒が好ましい。この急速添加は、激しく撹拌された界面活性剤水溶液の高い粘度のため可能である。激しい撹拌は、また、短時間での溶媒蒸発を可能にし、その後、粒子を集め、さらに処理することができる。このことは効率的であるので、このことは、有利であり望ましい。
【００７６】
ポリマー微小球を回収することが可能であるためには、実質的にすべて（又は少なくとも大部分）のポリマー用溶媒を除去する必要がある。その場合にのみ、球状のポリマー粒子が硬化する（結晶性粒子の場合、それらは結晶化できる）。
【００７７】
溶媒を蒸発させ、除去するのに必要な時間は、いくつかの手段で決定できる：
・溶媒の蒸発により冷えた分散液は、再び外界温度まで温まる
・ＰＣＬ微小球の分散液は、ポリマーの結晶化により白色に変わる
・ＭＣなどの界面活性剤を用いるため、ＤＣＭが蒸発すると界面活性剤溶液の表面で泡が形成される。この泡は、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発すると消失する
・微小球は、放置しても凝集しない。
【００７８】
Ｂ）例７で詳しく例示するような本発明のもう１つの方法において、ＰＣＬポリマーは、Ｔｗｅｅｎなどの比較的粘性のある界面活性剤（溶液）に加熱して溶解される。ここで、ポリマーの小滴は、混合物の激しい撹拌により、界面活性剤溶液中で溶融ポリマーの分散液を形成する。混合物を絶え間なく撹拌し、室温まで（制御して）冷却すると、粒子が生じる。この方法は、揮発性溶媒を必要としないので、極めて効率的である。
【００７９】
方法の特徴：
・所望の粒径範囲：本発明者らは３８〜７５μｍの画分を集めた
・効率的な方法：ＤＣＭを使用する場合の短い蒸発時間、及び所望粒径範囲の高い収率
・効果的な方法：滑らかな表面を有する本質的に球形状の粒子、患者への優れた注射可能性をもたらす。
【００８０】
注射可能なゲルを、本発明により調製された微小球から、混合によって容易に形成できた。容積の５０％までの微小球を、ゆっくり撹拌することによって、カルボキシメチルセルロースゲル（ＣＭＣ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ社からのＡｑｕｌｏｎの水溶液又はリン酸緩衝化生理食塩水溶液）中に均一に混合できた。
【００８１】
（例４）
本発明の実験
ＰＣＬのＤＣＭ溶液、及びＭＣの水溶液を使用する微小球の調製
ポリ（ε−カプロラクトン）（ＰＣＬ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液をメチルセルロース（ＭＣ）の水溶液中に激しく混合し、続いてＤＣＭを蒸発させることによって、ＰＣＬ微小球を調製した。
【００８２】
Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手した種々の量のＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）をＤＣＭに溶解した。これらの溶液１００ｇを、２Ｌビーカー中の１，０００ｇのＭＣ水溶液に、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら２秒間以内に添加した。Ｃｏｌｏｒｃｏｎ社から入手した種々の分子量のＭＣ（Ｍｎ＝１４，０００ｇ／モル、Ｍｎ＝４１，０００ｇ／モル、及びＭｎ＝６３，０００ｇ／モル）を採用した。
【００８３】
室温で絶え間なく激しく撹拌している３時間以内に、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発した。撹拌を停止し、生じた微小球を、ビーカーの底部に沈降させた。上澄液を除去し、微小球を水で洗浄した。ステンレススチールの篩いを使用して、微小球を湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの直径を有する画分を集めた。
【００８４】
微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。光学顕微鏡法（倍率１０×）を採用して、得られた微小球の形態を分析した。
【００８５】
ＰＣＬ溶液の濃度及びＭＣ溶液の特徴を変えた一連の実験を実施した。結果を表１に示す。
表１．ＰＣＬのＤＣＭ溶液をＭＣの水溶液中に激しく撹拌しながら混合することによるＰＣＬ微小球の調製
【表１】
【００８６】
表１から、比較的高粘度のＭＣ溶液を使用すると、滑らかな球状粒子を効率的に得ることができると考えることができる。さらに、高濃度のＰＣＬ溶液は、高収率で、所望の粒径を有するＰＣＬ粒子をもたらす。
【００８７】
（例５）
本発明の実験
ＰＬＬＡのＤＣＭ溶液及びＭＣの水溶液を使用する微小球の調製
ポリ（Ｌ−ラクチド）（ＰＬＬＡ）のジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液をメチルセルロース（ＭＣ）の水溶液中に混合し、続いてＤＣＭを蒸発させることによって、ＰＬＬＡ微小球を調製した。
【００８８】
Ｐｕｒａｃ Ｂｉｏｃｈｅｍ社から入手した１０ｇのＰＬＬＡ（クロロホルム中で２．３ｄｌ／ｇの固有粘度を有する）を１００ｇのＤＣＭに溶解した。この溶液１００ｇを、２Ｌビーカー中の１，０００ｇのＭＣ水溶液に、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら２秒間以内に添加した。ＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００ｇ／モル）は、Ｃｏｌｏｒｃｏｎ社から入手した。
【００８９】
室温で絶え間なく激しく撹拌している３時間以内に、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発した。撹拌を停止し、生じた微小球を、ビーカーの底部に沈降させた。上澄液を除去し、微小球を水で洗浄した。ステンレススチールの篩いを使用して、微小球を湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの直径を有する画分を集めた。
【００９０】
微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。光学顕微鏡法（倍率１０×）を採用して、得られた微小球の形態を分析した。
表２．ＰＬＬＡのＤＣＭ溶液をＭＣの水溶液中に激しく撹拌しながら混合することによるＰＬＬＡ微小球の調製
【表２】
【００９１】
この表２は、ＰＬＬＡ微小球も効率的に調製することが可能であることを示している。高粘度のＭＣ溶液を使用すると、所望の粒径を有する滑らかな球状ＰＬＬＡ微小球を高収率で得ることができる。
【００９２】
（例６）
比較例実験
ＰＣＬとＣＬとのコポリマーのＤＣＭ溶液及び界面活性剤の水溶液を使用する微小球の調製
Ｉ．文献からの典型的なデータ
ＰＣＬとＣＬとのコポリマーの微小球の調製は、科学及び特許文献中に記載されている。例えば、Ｈｕｎｔｅｒ（米国特許出願公開第２００３／０１５７８７Ａ１号）、Ｅｒｎｅｔａ及びＷｕ（欧州特許出願公開第１８７２８０３Ａ１号）、及びＩｏｏｓら（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２２（２００１）２７８５〜２７９４）による刊行物中には、ＰＣＬのＤＣＭ溶液をポリビニルアルコール（ＰＶＡ）又はＭＣの水溶液に添加すると、ＰＣＬ微小球の形成をもたらすことができると記載されている。
【００９３】
撹拌された水性媒体中でのＰＣＬ溶液の凝集を防止するため、採用される条件には、ＰＣＬのＤＣＭ溶液を比較的長時間にわたって添加すること、及び分散されたＰＣＬ粒子が固化するのを可能にするための長いＤＣＭ蒸発時間が含まれる。その場合にのみ、形成された球状ＰＣＬ微小球は、集めるのに十分な安定性を有する。種々の実験設定、ＰＣＬとＣＬとの種々のコポリマー、界面活性剤濃度、添加速度、及び溶媒蒸発時間を採用して、ＰＣＬ微小球を調製した。
【００９４】
Ｈｕｎｔｅｒ（米国特許出願公開第２００３／０１５７１８７Ａ１号中の実施例４１）：
ＰＣＬ：Ｍｎ＝２５，０００〜４５，０００ｇ／モル；ＤＣＭ中のＰＣＬ濃度：９．５ｗｔ／ｖｏｌ％；ＰＶＡ：Ｍｎ＝１２，０００〜１８，０００ｇ／モル；２ｍＬのポリマー溶液を１００ｍＬの界面活性剤水溶液中に１，０００ｒｐｍの撹拌速度で注入した；ポリマー溶液の添加時間：１２０分；粒子を遠心分離し水で洗浄した；３０〜１００μｍの範囲の大きさを有する微小球が得られた。粒子は、球状であるが、粗い又は窪みのある形態を有した。
【００９５】
Ｅｒｎｅｔａ及びＷｕ（欧州特許出願公開第１８７２８０３Ａ１号中の実施例）：
半結晶性ＣＬコポリマー：５，０００〜２５，０００ｇ／モルの分子質量；ＤＣＭ中のポリマー濃度：４〜７．５ｗｔ／ｖｏｌ％、ＰＶＡ：Ｍｎは示されていない；ほぼ２７５ｇの溶液をほぼ１，５００ｍＬの界面活性剤水溶液中に２５０ｒｐｍ近辺の速度で撹拌しながら注入した；ポリマー溶液の添加時間：最長で１９分；ＤＣＭ蒸発時間；１４〜１６時間；回収された３８〜７５μｍの大きさを有する微小球の画分は最大７１％である；表面形態は、示されていない。
【００９６】
Ｉｏｏｓｓ（Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２２（２００１）２７８５〜２７９４）：
ＰＣＬ：Ｍｗ＝１５０，０００；ＭＣ：Ｍｎ＝１４，０００のＭｅｔｈｏｃｅｌ Ａ１５ＬＶ；ＤＣＭ中のＰＣＬ濃度：６．７〜９．１ｗｔ／ｖｏｌ％；１５ｍＬの溶液をＭＣ水溶液中に４００〜６００ｒｐｍで撹拌しながら１時間かけて注入する；ＤＣＭは、大量（１，０００ｍＬ）の水中に抽出することによって除去される；回収された８０μｍより小さい大きさを有するＰＣＬ粒子の画分は、ほぼ１〜４０％の間で変動する。
【００９７】
このデータの概要を表３に示す。
表３．ポリマーのＤＣＭ溶液を撹拌された界面活性剤水溶液中に混合することによって調製されるＰＣＬとＣＬとのコポリマーの微小球に関する文献データの概要
【表３】
【００９８】
ＩＩ．ＰＣＬのＤＣＭ溶液及び界面活性剤水溶液を使用する微小球の調製。ポリマー及び界面活性剤の濃度は文献に記載されている通りである。
８０ｇのＰＣＬ（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手、Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）を８００ｇのＤＣＭに溶解した。この溶液１００ｇを、２Ｌビーカー中の１，０００ｇのＰＶＡ又はＭＣ界面活性剤の水溶液中に、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら２秒間以内に添加した。実験では、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手したＰＶＡ（Ｍｎ＝９，０００〜１０，０００ｇ／モル）、及びＣｏｌｏｒｃｏｎ社から入手したＭＣ（Ｍｎ＝１４，０００ｇ／モル）を採用した。
【００９９】
室温で絶え間なく１，０００ｒｐｍで激しく撹拌している３〜４時間以内に、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発した。撹拌を停止し、生じた微小球を、ビーカーの底部に沈降させた。上澄液を除去し、微小球を水で洗浄した。ステンレススチールの篩いを使用して、微小球を湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの直径を有する画分を集めた。
【０１００】
微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。光学顕微鏡法（倍率１０×）を採用して、得られた微小球の形態を分析した。
【０１０１】
比較実験は、Ｅｒｎｅｔａ及びＷｕによる文献（欧州特許出願公開第１８７２８０３Ａ１号）中に記載されている通りに実施した。そこで、２７０ｇの７．５ｗｔ％ＰＣＬ／ＤＣＭ溶液を、１５００ｍＬの３．０ｗｔ％ＰＶＡ水溶液に２４０ｒｐｍで撹拌しながら１２分間にわたって添加した。微小球を集める前に、ＤＣＭを、絶え間なく１６時間撹拌して蒸発させた。
【０１０２】
結果を表４にまとめる。
表４．ＰＣＬのＤＣＭ溶液をＭＣの水溶液中に撹拌しながら混合することによるＰＣＬ微小球の調製。ポリマー及び界面活性剤の濃度は、文献中に記載されている実験で使用された濃度を代表する。
【表４】
ａ）図３に示す光学顕微鏡像を参照されたい。
ｂ）図４に示す光学顕微鏡像を参照されたい。
ｃ）図５に示す光学顕微鏡像を参照されたい。
【０１０３】
表４から、文献中に記載されているポリマー及び界面活性剤の代表的濃度を使用すると、所望の特徴を有する粒子を効率的に調製することは可能でないことになる。これらの低粘度の界面活性剤溶液の場合、所望の特徴を有する粒子を効率的に調製するためには、ポリマー溶液をより長い時間にわたって添加すること、比較的低速で撹拌すること、及びＤＣＭをより長い時間蒸発させることが、明らかに必要である。
【０１０４】
ＩＩＩ．ＰＣＬのＤＣＭ溶液及び粘性のある界面活性剤水溶液を使用する微小球の調製
ＰＣＬ微小球を、ＰＣＬのジクロロメタン（ＤＣＭ）溶液を界面活性剤の水溶液中に激しく混合し、続いてＤＣＭを蒸発させることによって調製した。
【０１０５】
Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手した様々な量のＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）をＤＣＭに溶解した。これらの溶液１００ｇを、２Ｌビーカー中の１，０００ｇのＭＣ水溶液中に、１，０００ｒｐｍで激しく撹拌しながら２秒間以内に添加した。Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手したＰＶＡ（Ｍｎ＝９，０００〜１０，０００ｇ／モル）、及びＣｏｌｏｒｃｏｎ社から入手したＭＣ（Ｍｎ＝６３，０００ｇ／モル）を採用した。
【０１０６】
室温で絶え間なく１，０００ｒｐｍで激しく撹拌している３〜４時間以内に、本質的にすべてのＤＣＭが蒸発した。撹拌を停止し、生じた微小球を、ビーカーの底部に沈降させた。上澄液を除去し、微小球を水で洗浄した。ステンレススチールの篩いを使用して、微小球を湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの直径を有する画分を集めた。
【０１０７】
微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。光学顕微鏡法（倍率１０×）を採用して、得られた微小球の形態を分析した。
【０１０８】
界面活性剤溶液の性質及び濃度を変えた一連の実験を実施した。結果を表５に示す。
表５．ＰＣＬのＤＣＭ溶液を粘性界面活性剤水溶液中に激しく撹拌しながら混合することによるＰＣＬ微小球の調製
【表５】
ａ）図２に示す光学顕微鏡像を参照されたい。
【０１０９】
表５は、より高濃度でＰＶＡを使用すると、ＰＣＬ溶液を激しく撹拌された界面活性剤溶液に急速添加することによってＰＣＬ微小球を調製するのに使用できる粘性水溶液が生じることを示している。粒子の形態は適切であるが、極めて小さな粒子が得られ、回収できた大きさが所望範囲の粒子の収率は極めて低い。界面活性剤としてＭＣを使用すると、方法の効率は、かなり良好である。
【０１１０】
（例７）
本発明の実験：Ｔｗｅｅｎ混合物中への高められた温度でのＰＣＬの溶解、それに続く冷却による粒子形成
２５０ｍＬのガラス容器中で、ほぼ８０℃まで加熱し、且つ５００ｒｐｍで絶え間なく撹拌することによって、１５ｇのＰＣＬ（Ｍｎ＝１０，０００ｇ／モル）を、Ｔｗｅｅｎ ６０と水との５０／５０（ｗｔ／ｗｔ）混合物１００ｍＬ中に分散させた。Ｔｗｅｅｎ ６０は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社から入手される。溶融されたポリマーの小滴を、さらに２分間撹拌することによってこの分散状態で維持する。さらに撹拌しながら、次いで、液状分散液を室温まで一夜冷却する。分散されたポリマー小滴の固化により、デカンテーションで回収できる微小球が得られる。
【０１１１】
水で洗浄した後、ＰＣＬ微小球を、ステンレススチールの篩いを使用して湿り状態で篩い分け、３８〜７５μｍの大きさを有する画分を集めた。次いで、微小球を室温で真空乾燥し、収率を重量分析で測定した。全部で１２．１ｇのＰＣＬ微小球が集められた。
表６．ＰＣＬのＴｗｅｅｎ ６０と水との混合物中の溶液を激しく撹拌しながら冷却することによるＰＣＬ微小球の調製。
【表６】
【０１１２】
この表から、Ｔｗｅｅｎ ６０と水との比較的粘性のある混合物を使用すると、高められた温度の撹拌されたポリマー溶液から、冷却することによってＰＣＬ微小球を形成できると考えることができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）含有微粒子を調製するための方法であって、
ａ１）ＰＣＬポリマーを可溶化し、続いて可溶化されたＰＣＬポリマーを、界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と混合するステップ、
ｂ）ステップａ１）で得られた溶液からＰＣＬ含有微粒子を形成するステップ
を含む方法。
【請求項２】
ＰＣＬを含む微粒子を調製するための、好ましくは請求項１に記載の方法であって、
ａ２）ＰＣＬポリマーを実質的に純粋なＴｗｅｅｎ及び／又はジクロロメタン中で可溶化するステップ、
ｂ）ステップａ２）で得られた溶液からＰＣＬ含有微粒子を形成するステップ
を含む方法。
【請求項３】
可溶化ステップａ２）において実質的に純粋なＴｗｅｅｎが単独の溶媒として使用され、前記ステップが、ＰＣＬポリマーの溶融温度を超える温度又はそれに近い温度で実施される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ステップｂ）においてＰＣＬ含有微粒子が、制御された冷却及び撹拌条件の結果として形成される、請求項１又は３に記載の方法。
【請求項５】
可溶化ステップａ２）においてＤＣＭが使用され、ステップｂ）が、ゲル中に分散されたこれらのＰＣＬ含有微粒子から抽出蒸発によって界面活性剤を抽出することにより、ＰＣＬ含有微粒子を形成することを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
液体の粘度が約２０〜約２００ｃＰの範囲にある、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項７】
界面活性剤が、メチルセルロース、好ましくはほぼ１％のＭＣ（Ｍｎ６３，０００を有する）である、請求項１又は５又は６に記載の方法。
【請求項８】
ＰＣＬポリマーが、線状ポリマー、コポリマー、ターポリマー、又は種々のタイプのホモポリマー／コポリマー／ターポリマーのブレンドである、請求項１〜７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
請求項１〜８までのいずれか一項に記載の方法によって得られうる微粒子であって、好ましくは、次の特徴：
ｉ）５〜１００μｍの範囲にある直径、
ｉｉ）均一な密度、形状、及び内容物、
ｉｉｉ）本質的に球状の微小球
の少なくとも１つを有する微粒子。
【請求項１０】
請求項９に記載の微粒子及び担体を含み、任意選択で活性成分がさらに存在する、生分解性注射可能ゲル。
【請求項１１】
インプラント又はフィラーである、請求項１０に記載のゲル。
【請求項１２】
好ましくは皮膚の奇形又は傷跡を治療するための、及び／又は膀胱機能を制御するための、及び／又は胃逆流を制御するための、及び／又は勃起機能不全を治療するための、及び／又は声帯を治療するのに使用するための薬剤として使用するための、請求項１１〜１３までのいずれか一項に記載のゲル。
【請求項１３】
化粧用ゲルとしての、請求項１０又は１１に記載のゲル。
【請求項１４】
皮膚の奇形又は傷跡を治療するための、及び／又は膀胱機能を制御するための、及び／又は胃逆流を制御するための、及び／又は勃起機能不全を治療するための、及び／又は声帯を治療するための薬剤を調製するための、請求項１０〜１２までのいずれか一項で規定した通りのゲルの使用。
【請求項１５】
化粧上の応用における、請求項１３に記載のゲルの使用。
【請求項１】
ポリカプロラクトン（ＰＣＬ）含有微粒子を調製するための方法であって、
ａ１）ＰＣＬポリマーを可溶化し、続いて可溶化されたＰＣＬポリマーを、界面活性剤を含み、約１〜約４００，０００ｃＰの範囲にある粘度を有する液体と混合するステップ、
ｂ）ステップａ１）で得られた溶液からＰＣＬ含有微粒子を形成するステップ
を含む方法。
【請求項２】
ＰＣＬを含む微粒子を調製するための、好ましくは請求項１に記載の方法であって、
ａ２）ＰＣＬポリマーを実質的に純粋なＴｗｅｅｎ及び／又はジクロロメタン中で可溶化するステップ、
ｂ）ステップａ２）で得られた溶液からＰＣＬ含有微粒子を形成するステップ
を含む方法。
【請求項３】
可溶化ステップａ２）において実質的に純粋なＴｗｅｅｎが単独の溶媒として使用され、前記ステップが、ＰＣＬポリマーの溶融温度を超える温度又はそれに近い温度で実施される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
ステップｂ）においてＰＣＬ含有微粒子が、制御された冷却及び撹拌条件の結果として形成される、請求項１又は３に記載の方法。
【請求項５】
可溶化ステップａ２）においてＤＣＭが使用され、ステップｂ）が、ゲル中に分散されたこれらのＰＣＬ含有微粒子から抽出蒸発によって界面活性剤を抽出することにより、ＰＣＬ含有微粒子を形成することを含む、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
液体の粘度が約２０〜約２００ｃＰの範囲にある、請求項１又は４に記載の方法。
【請求項７】
界面活性剤が、メチルセルロース、好ましくはほぼ１％のＭＣ（Ｍｎ６３，０００を有する）である、請求項１又は５又は６に記載の方法。
【請求項８】
ＰＣＬポリマーが、線状ポリマー、コポリマー、ターポリマー、又は種々のタイプのホモポリマー／コポリマー／ターポリマーのブレンドである、請求項１〜７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
請求項１〜８までのいずれか一項に記載の方法によって得られうる微粒子であって、好ましくは、次の特徴：
ｉ）５〜１００μｍの範囲にある直径、
ｉｉ）均一な密度、形状、及び内容物、
ｉｉｉ）本質的に球状の微小球
の少なくとも１つを有する微粒子。
【請求項１０】
請求項９に記載の微粒子及び担体を含み、任意選択で活性成分がさらに存在する、生分解性注射可能ゲル。
【請求項１１】
インプラント又はフィラーである、請求項１０に記載のゲル。
【請求項１２】
好ましくは皮膚の奇形又は傷跡を治療するための、及び／又は膀胱機能を制御するための、及び／又は胃逆流を制御するための、及び／又は勃起機能不全を治療するための、及び／又は声帯を治療するのに使用するための薬剤として使用するための、請求項１１〜１３までのいずれか一項に記載のゲル。
【請求項１３】
化粧用ゲルとしての、請求項１０又は１１に記載のゲル。
【請求項１４】
皮膚の奇形又は傷跡を治療するための、及び／又は膀胱機能を制御するための、及び／又は胃逆流を制御するための、及び／又は勃起機能不全を治療するための、及び／又は声帯を治療するための薬剤を調製するための、請求項１０〜１２までのいずれか一項で規定した通りのゲルの使用。
【請求項１５】
化粧上の応用における、請求項１３に記載のゲルの使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２０１０−５３４６４９（Ｐ２０１０−５３４６４９Ａ）
【公表日】平成２２年１１月１１日（２０１０．１１．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１８１３９（Ｐ２０１０−５１８１３９）
【出願日】平成２０年７月２３日（２００８．７．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＬ２００８／０５０５０６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０１４４４１
【国際公開日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【出願人】（５１００２３１４８）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１１月１１日（２０１０．１１．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月２３日（２００８．７．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＮＬ２００８／０５０５０６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０１４４４１
【国際公開日】平成２１年１月２９日（２００９．１．２９）
【出願人】（５１００２３１４８）
【Ｆターム（参考）】
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