結合または連結基を介して２-オキシの位置で検出可能なラベルに接続したIP₃の接合体と、IP₃受容体の細胞外断片の切断部分を試薬として採用した、試料中のIP₃を測定するためのタンパク質結合測定法が提供される。試薬は試料と結合し、検出可能なラベルによってIP₃の量を測定する。β-ガラクトシダーゼの酵素ドナー断片または蛍光剤との接合体が特に述べられる。
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【課題】 グリコサミノグリカン分解酵素の活性を簡便、迅速、安価かつ高感度に、再現性・定量性良く測定する方法を提供すること。
【解決手段】（Ａ）「蛍光物質が結合したグリコサミノグリカン」と検体を接触させ、当該グリコサミノグリカンに検体中のグリコサミノグリカン分解酵素を作用させるステップ、（Ｂ）前記作用後のグリコサミノグリカンを蛍光偏光分析法によって検出するステップ、及び（Ｂ）で得られた検出結果と、検体中のグリコサミノグリカン分解酵素の活性とを関連づけるステップを少なくとも含む、検体中のグリコサミノグリカン分解酵素の活性測定方法。「蛍光物質が結合したグリコサミノグリカン」を少なくとも含有するグリコサミノグリカン分解酵素の活性測定剤。フルオレセイン−５−チオセミカルバジドとヒアルロン酸とが共有結合していることを特徴とする、ヒアルロン酸誘導体又はその塩。 （もっと読む）

本発明は、高感受性を有する組換えエンドヌクレアーゼを生産する方法、当該方法により得られるエンドヌクレアーゼ調製物、及び特にミスマッチの検出のためのそれらの使用に関する。

【配列表】
SEQUENCE LISTING

<110> GENOPLANTE-VALOR
INSTITUT NATIONAL DE LA RECHERCHE AGRONOMIQUE
BENDAHMANE, Abdelhafid
STURBOIS, Benedicte
TRIQUES, Karine
CABOCHE, Michel

<120> METHOD FOR PRODUCING HIGHLY SENSITIVE ENDONUCLEASES, NOVEL
PREPARATIONS OF ENDONUCLEASES AND USES THEREOF.

<130> MJP/bv1516-19

<150> PCT/EP2004/009159
<151> 2004-07-30

<150> PCT/EP2004/009166
<151> 2004-07-30

<160> 25

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1
<211> 2640
<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana


<220>
<221> misc#feature
<223> ENDO 1 Gene At1g11190

<400> 1
aaattcgatg aggttgttat agacaagaga agacattttt atacaaaaga gtttatcatt 60

atataagttt caaactttga agatatggca tcggctttta gatcatccac gaggttgatt 120

cttgtattag gtatactgat tttgtgttcg gtttcttctg tccgaagctg gagcaaagaa 180

ggtcatattc ttacttgtag aattgctcag gtaattaagt taatgatcta ttgtttgaag 240

caactatttt ggttattctt gtcttatata tgtattagtg agatatacct acaaattttt 300

aattaggatt gacttttaaa ttgctatacg ttaccatgcc taacatctca tgtagatgat 360

catgaataca aacatgtcta atggcatatc aaattccaag tttttttggt agagatctga 420

gtcatttgac cgttataaga ttcataacaa aagttcgtat gtgtgtgttt ttgtggtgtg 480

accagaatct tttagaagcc ggaccagcac atgtagtaga gaatctgtta ccggattacg 540

tgaaaggaga tttatcagca ttgtgtgtgt ggcctgacca gatccgacat tggtacaagt 600

atcgttggac cagccatctc cattacatcg acactcccga ccaagcctgc tcttacgaat 660

actctagtaa gtcacaaccg agacattttc agataacctt aatccgtttt ctaattatct 720

tgaaccggag ttaaccaaaa aatcaattac aaataccaaa ccggattaaa aacaggggat 780

tgtcatgatc aacatggatt gaaggatatg tgtgtggatg gagcaatcca gaatttcacg 840

tctcagcttc agcattacgg tgaaggaaca tctgatcgta gatgtatgtc atcattttca 900

tttatttcat ataatgatga tatccaaagt gtaactgcgt attttgtatt ttgatgcata 960

acttaagttt ttaaaattat aatatatcct tgttcaatca catagataac atgaccgaag 1020

cccttttgtt cttgtctcat ttcatgggag atattcatca ggtttattac tcatcatcga 1080

ttcatttcac acctccacac atatagctct atttccatgt taaatattta attaacatgg 1140

tttttttttt tttccttaaa aagccgatgc atgtgggatt cacaagtgat gaaggaggaa 1200

acacgataga tttacgttgg tacaaacaca aatccaatct acatcatgta agcttcttct 1260

tttgtctctt tcaactttaa atttcatcat gaaaacaaaa aaaaaattaa cgaaggaaac 1320

aaaatatgta ggtatgggat agagagatca ttctcacggc tctaaaagaa aactacgaca 1380

agaacttgga tcttctccaa gaggatcttg agaagaacat caccaatgta atagacacta 1440

atttattcat attttactat aattttaaga atctttataa tggttatcat atattaggga 1500

ttatggcacg acgatctatc ttcgtggaca gaatgcaacg atcttatcgc ttgtccacac 1560

aagtaagttt taaattactt ggtttaagat tggcttgacg ctcgtttgaa gctagctaca 1620

aattttgata ctttttctgg tccaaaaatc ttacaaagat actgaaaata aaataatagg 1680

ttttaaactt ttaatttatt tggagttgga taggattaag tttcactaac ttccaattca 1740

aagtcaatta atagtagttt accatgatta gtgggttgac taatgtacca tatatattac 1800

cttatatcac atcttatttc cgatgtgaga tttcttatga aacataatta gactcgaacc 1860

ttttgtgttt cgatatatgt agtgtattca tgatcagaat cttattaagt ttacaactga 1920

aaactaaaat attaacatca taattataga ttcttaagta ggttttgttt gggtggagaa 1980

aatatccaat ttcgaataac attatataaa atattgaact aattttaatt gtatacgcag 2040

gtatgcttca gagagtataa agttagcttg taaatgggga tacaaaggcg tcaagtctgg 2100

tgaaacgtta tcaggtacgt tgtttgcttc ttctttttct cgtacgctaa caaaaatatt 2160

taaaaataaa cccgaccaaa tgaagtttaa ttaatcggat taatgatttt taatagtcac 2220

tacttttttt gtgtgggata tatgactgtc taatatataa ttttataaga aagctaaagg 2280

atttgtttaa taatttccga taaataattt tgcagaagaa tatttcaata caaggttgcc 2340

aatagtgatg aagagaatag ttcagggagg agttagacta gccatgatac taaaccgggt 2400

ttttagtgac gatcatgcta ttgctggtgt tgctgccact tgaaccaaac ccgacatacc 2460

ggggcatcaa agcatttgat taagagatta tttgatacat tcacaaaatt aattaaggct 2520

gatcagacat tcttttcttt tagtagcttt atctatgtga cagctaatgc ctgtggactg 2580

ctttgtttag aagtgtttag cattagatca tatgctaatt caatgttatt aattcatcgt 2640


<210> 2
<211> 305
<212> PRT
<213> Arabidopsis thaliana


<220>
<221> misc#feature
<223> Protein ENDO 1 At1g11190

<400> 2

Met Ala Ser Ala Phe Arg Ser Ser Thr Arg Leu Ile Leu Val Leu Gly
1 5 10 15


Ile Leu Ile Leu Cys Ser Val Ser Ser Val Arg Ser Trp Ser Lys Glu
20 25 30


Gly His Ile Leu Thr Cys Arg Ile Ala Gln Asn Leu Leu Glu Ala Gly
35 40 45


Pro Ala His Val Val Glu Asn Leu Leu Pro Asp Tyr Val Lys Gly Asp
50 55 60


Leu Ser Ala Leu Cys Val Trp Pro Asp Gln Ile Arg His Trp Tyr Lys
65 70 75 80


Tyr Arg Trp Thr Ser His Leu His Tyr Ile Asp Thr Pro Asp Gln Ala
85 90 95


Cys Ser Tyr Glu Tyr Ser Arg Asp Cys His Asp Gln His Gly Leu Lys
100 105 110


Asp Met Cys Val Asp Gly Ala Ile Gln Asn Phe Thr Ser Gln Leu Gln
115 120 125


His Tyr Gly Glu Gly Thr Ser Asp Arg Arg Tyr Asn Met Thr Glu Ala
130 135 140


Leu Leu Phe Leu Ser His Phe Met Gly Asp Ile His Gln Pro Met His
145 150 155 160


Val Gly Phe Thr Ser Asp Glu Gly Gly Asn Thr Ile Asp Leu Arg Trp
165 170 175


Tyr Lys His Lys Ser Asn Leu His His Val Trp Asp Arg Glu Ile Ile
180 185 190


Leu Thr Ala Leu Lys Glu Asn Tyr Asp Lys Asn Leu Asp Leu Leu Gln
195 200 205


Glu Asp Leu Glu Lys Asn Ile Thr Asn Gly Leu Trp His Asp Asp Leu
210 215 220


Ser Ser Trp Thr Glu Cys Asn Asp Leu Ile Ala Cys Pro His Lys Tyr
225 230 235 240


Ala Ser Glu Ser Ile Lys Leu Ala Cys Lys Trp Gly Tyr Lys Gly Val
245 250 255


Lys Ser Gly Glu Thr Leu Ser Glu Glu Tyr Phe Asn Thr Arg Leu Pro
260 265 270


Ile Val Met Lys Arg Ile Val Gln Gly Gly Val Arg Leu Ala Met Ile
275 280 285


Leu Asn Arg Val Phe Ser Asp Asp His Ala Ile Ala Gly Val Ala Ala
290 295 300


Thr
305


<210> 3
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer 4-960

<400> 3
gtgtttgtcc agtaatagtg tcagcata 28


<210> 4
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer 4-721

<400> 4
aggaacctga gaaaagactc gccagc 26


<210> 5
<211> 40
<212> DNA
<213> Artificial Sequence

<220>
<223> CEL N Terminal

<400> 5
tatcgttcta gagggaatga cgcgattata ttctgtgttc 40


<210> 6
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> CEL C Terminal

<400> 6
tatctgaatt catgccaaag aatgatc 27


<210> 7
<211> 50
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> CEL C terminal 8 His

<400> 7
aattcaatgg tgatggtggt gatggtgatg tgccaaagaa tgatctgcgg 50


<210> 8
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer (R21)

<400> 8
gacatatgga ctacagaagc ttggg 25


<210> 9
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer (R22)

<400> 9
gttcacgggt cacatcatgc attcc 25


<210> 10
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer 4m118

<400> 10
ttggttggac ttcactttga gc 22


<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer 4m984

<400> 11
cacaacaatc agcaatgaca gc 22


<210> 12
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer 4-347

<400> 12
gtgattgctc cacctccgcc acc 23


<210> 13
<211> 30
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer 4-134

<400> 13
tacagcgatt gatataatat aaaattatcc 30


<210> 14
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer le 2462

<400> 14
tgatattgtc gtgcaatatg atgaaac 27


<210> 15
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Primer le 3082

<400> 15
atacctattt agcccacttg gacac 25


<210> 16
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Forward Primer for ENDO5

<400> 16
aaggatccga aagctctgtg tttcaga 27


<210> 17
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Reverse Primer for ENDO5

<400> 17
ggagttgtta cgtgggttct caaggatc 28


<210> 18
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Forward Primer for ENDO4

<400> 18
ctggatccct gtttttaact ttggaaag 28


<210> 19
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Reverse Primer for ENDO4

<400> 19
ggatgttcaa gtgattctcc tggatc 26


<210> 20
<211> 27
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Forward Primer for ENDO3

<400> 20
aaggatccat tcgacaaact ttgtaac 27


<210> 21
<211> 28
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Reverse Primer for ENDO3

<400> 21
agagtggtct tgggaatatt tatctcag 28


<210> 22
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Forward Primer for ENDO2

<400> 22
acggatccca tttcaaagaa ctctga 26


<210> 23
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Reverse Primer for ENDO2

<400> 23
gaccaatcat tatgctgtaa cttcag 26


<210> 24
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Forward Primer for ENDO1

<400> 24
caggatccaa gtttcaaact tgaag 25


<210> 25
<211> 26
<212> DNA
<213> Artificial sequence

<220>
<223> Reverse Primer for ENDO1

<400> 25
cggtatgtcg ggtttggttc aagtgg 26 （もっと読む）

【課題】 ウロン酸含有多糖を効率的に分解する手段を提供する。
【解決手段】 クロロウイルスCVK2から得られた多糖分解リアーゼであって、グルクロン酸残基間のβ-1,4結合又はα-1,4結合を切断する活性を持つリアーゼを用いて、２以上の連続したグルクロン酸残基を分子中に含む多糖を分解する方法。 （もっと読む）

本発明は、ユビキチンカルボキシ末端ヒドロラーゼ Ｌ１（ＵＣＨ−Ｌ１）のレベルまたはそのユビキチン−リガーゼ活性の変化に関連した、α−シヌクレイン症、詳しくはレビー小体型認知症（ＤＬＢ）の分子診断法に関する。本発明はまた、ＵＣＨ−Ｌ１レベルまたはＵＣＨ−Ｌ１の酵素活性を変更することができる化合物の使用にも関する。本発明は、ＤＬＢに罹患している患者の診断および治療において適用される。
（もっと読む）

【課題】 デンプン合成関連酵素等の機能解析を従来よりも簡便かつ短時間で行うことができる新たな解析手法を提供すること。
【解決手段】 本発明は、非変性の酵素を含む試料をゲル電気泳動後、ゲル内にて酵素反応させ、得られた反応生成物を含むゲル領域を切り出し、このゲル領域内の反応生成物の構造解析を行うことにより、当該酵素の機能を解析する方法である。たとえば、本発明の解析方法によってスターチシンターゼ（ＳＳ）の機能解析を行う場合には、Ｎａｔｉｖｅ−ＰＡＧＥ／ＳＳ活性染色法で染色されるバンドを含むゲルを切り出し、このゲル内に合成されたポリグルカンの鎖長構造をキャピラリー電気泳動法で決定するといった簡便な手法で、各アイソザイムの機能解析を簡便かつ短時間に行うことができる。 （もっと読む）

本発明は、フレーバーまたは香料としての、それらの前駆体としての、または香料もしくはフレーバーの知覚のモジュレーターとしての、化合物の同定に関する。本方法は、化合物を、鼻、口または気道中で発現される代謝酵素と反応させること、およびその後に、該化合物またはその代謝産物を、フレーバーもしくは香料として、それらの前駆体として、またはそれらの知覚もしくはそれらの対応する手掛かりの知覚のモジュレーターとして、同定することを含む。 （もっと読む）

【課題】新規メカニズムに基づく糖尿病治療剤のスクリーニング方法を提供する。
【解決手段】前記スクリーニング方法は、（１）α/βヒドロラーゼ２を抑制する活性があるか否かを検出する工程、及び（２）α/βヒドロラーゼ２を抑制する活性がある物質を選択する工程を含む。更に、抑制は発現抑制であり、プロモーター活性抑制活性を検出する工程を含む。 （もっと読む）

タンパク質の細胞内での状態およびタンパク質修飾を測定するための改善された方法を、酵素断片相補性複合体および標的タンパク質のメンバーからなる代用融合タンパク質を導入することによって提供する。代用融合タンパク質を形質転換された細胞を、環境の変化（たとえば候補薬剤）にさらした後に、細胞を溶解し、好都合にはゲル電気泳動法によって溶解物を分画またはバンドへと分離し、そしてウエスタンブロット法によってタンパク質をメンブレンへとトランスファーする。メンブレン上のバンドを、もう一方の酵素断片相補性複合体および検出可能なシグナルを発する基質を用いて発色させる。本方法は、高い感度を有することと、標的タンパク質の修飾を観察する能力があることが分かった。
（もっと読む）

バイオロジカルソイル検出器と、バイオソイルを検出するための方法とが提供される。バイオロジカルソイル検出器は、固体支持部材と、固体支持部材に固定された特異的指標であって、血液の存在に対して敏感な材料を含む特異的指標と、を含み、固体支持体および特異的指標は、表面の接触に用いられた液体との接触を容易にすべく検出器に対して配置されている。バイオソイルを検出するための方法において、この方法は、表面を液体と接触させるステップと、液体が表面と接触した後に、この液体を本願明細書にて記載の検出器の固体支持部材および特異的指標と接触させるステップと、固体支持部材の検出可能な応答を検査して、特異的指標がバイオロジカルソイルと相互作用したか否かを判断するステップと、を含む。
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