コルテキソロンの１７α−モノエステルおよび／またはその９，１１−デヒドロ誘導体を得るための酵素的方法
本発明は、酵素的アルコーリシス反応を含む、対応する１７α，２１−ジエステルから出発するコルテキソロンの１７α−モノエステルおよび／またはその９，１１−デヒドロ誘導体を得るための、酵素的プロセスに関する。さらに本発明は、コルテキソロン１７α−プロピオネートおよび９，１１−デヒドロ−コルテキソロン１７α−ブタノエートの結晶形態に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
Ｃ−１７α位のヒドロキシル基が短鎖脂肪族または芳香族の酸でエステル化されているコルテキソロン誘導体と、それに対応する９，１１−デヒドロ誘導体は、抗アンドロゲン性効果を有することが知られている。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１は、動物の「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」および「ｉｎ ｖｉｖｏ」の両方で実証された高い抗アンドロゲン性生物活性に関し、コルテキソロン１７α−プロピオネートおよび９，１１−デヒドロ−コルテキソロン−１７−α−ブタノエートについて記述している。
【０００３】
上述の誘導体を得るための方法は、非特許文献１および特許文献２に記載されており、酸触媒（例えば、ＰＴＳＡ．Ｈ2Ｏ）の存在下、シクロヘキサンやＤＭＦなどの非プロトン性溶媒の混合物として市場で入手可能なオルトエステルを使用した、中間体オルトエステルでのコルテキソロンの形質転換または９，１１−デヒドロコルテキソロンの形質転換を示している。このように得られた中間体オルトエステルは、そのままで、または不純物を溶解することが可能な溶媒、好ましくはアルコールに懸濁することにより精製して、使用することができる。その後に実施される、好ましくは酢酸緩衝液中でｐＨ４〜５に緩衝された含水アルコール溶液中での加水分解は、所望のモノエステルを提供する。
【０００４】
そのような合成を、以下のダイアグラム１に示す。
【０００５】
【化１】
【０００６】
しかし、このように得られたモノエステルは、反応条件において不安定であり、その結果、取扱いおよび単離が難しかった（例えば、非特許文献２参照）。この不安定性は、とりわけ、１７位から２１位にエステル化アシル基が移行する二次反応に起因する。
【０００７】
このように、生物学的試験へと進めることができるよう化学的に純粋な上述のモノエステルを得るには、合成の終わりに、一般にカラムクロマトグラフィを用いて行われる精製プロセスを使用する必要があることが知られている。
【０００８】
さらに、特許文献２は、塩基性環境でのジエステルの加水分解が、初期の未反応生成物と平行して１７α，２１−ジオールと１７−および２１−モノエステルとの混合物が形成されることによって、どのように都合よくないのか記述している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】欧州特許第１４２１０９９号明細書
【特許文献２】米国特許第３１５２１５４号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Gardi et al. Gazz. Chim. It. 63, 43 1, 1963
【非特許文献２】R.Gardi et al Tetrahedron Letters, 448, 1961
【非特許文献３】B.Turner, Journal of American Chemical Society, 75, 3489, 1953
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
驚くべきことに、生体触媒としてカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）からのリパーゼを使用したアルコーリシス反応は、コルテキソロンの１７αモノエステルまたはその９，１１−デヒドロ誘導体の調製中に有用に利用できることが発見されている。
【００１２】
事実、コルテキソロンの１７，２１−ジエステルまたはその９，１１−デヒドロ誘導体のそのような酵素的アルコーリシスは、以下のダイアグラム２に示されるように、２１位で選択的に生じ、１７位でそれに対応するモノエステルに移動することが発見されている。
【００１３】
【化２】
【００１４】
本発明によれば、アルコーリシス条件での特殊な酵素反応の化学選択性は、文献に既に示されている方法に対し、１７α−モノエステルをより高い収率の工業的レベルで調製することに関し、新たな展望を開く。
【００１５】
本発明の反応の基質として提供されるジエステルは、従来技術により調製することができ、例えば、直鎖状カルボン酸を用いての、その無水物およびＰＴＳＡ一水和物の存在下でのコルチコステロイドのエステル化をもたらす非特許文献３に記述されている技術に従って、調製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図２】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図３】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図４】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩのＤＲＸを示す図である。
【図５】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩのＤＳＣを示す図である。
【図６】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩのＩＲを示す図である。
【図７】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＲＸを示す図である。
【図８】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＳＣを示す図である。
【図９】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＩＲを示す図である。
【図１０】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＲＸを示す図である。
【図１１】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＳＣを示す図である。
【図１２】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＩＲを示す図である。
【図１３】エタノール／水から得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＲＸを示す図である。
【図１４】エタノール／水から得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＳＣを示す図である。
【図１５】エタノール／水から得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＩＲを示す図である。
【図１６】ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図１７】ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図１８】ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図１９】ジイソプロピルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図２０】ジイソプロピルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図２１】ジイソプロピルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図２２】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図２３】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図２４】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図２５】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図２６】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図２７】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図２８】プロピレングリコール／水から得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの溶媒和物の結晶形態ＩＶのＤＲＸを示す図である。
【図２９】プロピレングリコール／水から得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの溶媒和物の結晶形態ＩＶのＩＲを示す図である。
【図３０】製剤（クリーム）中でのコルテキソロン１７α−プロピオネートのＤＲＸを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
したがって本発明の目的は、式Ｉの、コルテキソロンの１７αモノエステルとその９，１１−デヒドロ誘導体とを調製するための方法であって
【００１８】
【化３】
【００１９】
（式中、Ｒは、１から１０個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐鎖状の脂肪族または芳香族鎖である。）、
式ＩＩの化合物
【００２０】
【化４】
【００２１】
（式中、Ｒは、上記にて示されたものと同じ意味を有する。）
と、
式ＩＩＩの化合物
Ｒ’ＯＨ （ＩＩＩ）
（式中、Ｒ’は１から１０個の炭素原子を含有する直鎖であり、好ましくはＣ1〜Ｃ8アルキルである。）
とを、カンジダからのリパーゼの存在下で反応させることを特徴とする方法である。
本発明によれば、Ｒは、好ましくはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、さらにより好ましくは、ＣＨ3、ＣＨ3ＣＨ2、ＣＨ3（ＣＨ2）2、またはＣＨ3（ＣＨ2）3の中から選択される。
【００２２】
上述の式ＩおよびＩＩにおける９、１１位での破線の記号は、以下に記述される式に示されるように、二重結合を存在しても（９，１１−デヒドロ誘導体）またはそのような位置に存在しなくてもよいことを意味する。
【００２３】
【化５】
【００２４】
本発明の方法を触媒するのに使用されるカンジダからのリパーゼは、好ましくは、カンジダシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）（ＣＣＬ）からのリパーゼと、Ｂ型カンジダアンタークチカ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）（ＣＡＬＢ）からのリパーゼとの間で選択される。
【００２５】
カンジダからのリパーゼ、特にカンジダシリンドラセアおよびカンジダアンタークチカからのリパーゼは、ほとんど不活性であることが証明されているブタ膵リパーゼ（ＰＰＬ）およびシュードモナスフルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（ＰＦＬ）とは対照的に、２１位のエステル官能基を選択的に加水分解可能であることが証明されている。
【００２６】
初期の基質に対して計算された前記酵素の量は、使用される酵素のタイプに応じて変えてもよい。特に前記酵素は、好ましくは、１００から１００００００Ｕ／ｍｍｏｌの範囲の量で；より好ましくは、ＣＣＬの場合は１０００から１００００００Ｕ／ｍｍｏｌの範囲、ＣＡＬＢの場合は１００から１０００００の量で使用される。さらにより好ましくは、前記酵素は、ＣＣＬの場合に約６００００Ｕ／ｍｍｏｌの量で、ＣＡＬＢの場合に約５０００Ｕ／ｍｍｏｌの量で存在する。
【００２７】
さらに、経済的／工業的な観点から、触媒活性を失うことなくそのような酵素を数サイクルにわたって再利用する可能性が、明らかにされた。
【００２８】
式ＩＩの初期ジエステルの濃度は、好ましくは約０．０１から０．１５モルの範囲内であり、より好ましくは約０．０２５モルである。
【００２９】
本発明の方法は、好ましくは有機溶媒、より好ましくは非プロトン性有機溶媒の存在下で行われる。
【００３０】
次いで前記溶媒は、好ましくはトルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、および／またはクロロホルムの中から選択される。
【００３１】
本発明によるＲ’ＯＨアルコールは、好ましくはメタノール、エタノール、ブタノール、および／またはオクタノールから選択される。
【００３２】
前記アルコールは、好ましくは、初期基質１モル当たり約０．５から約５０モルの範囲の量で、より好ましくは基質１モル当たり５モルの量で存在する。
【００３３】
本発明による方法は、好ましくは、式ＩＩの初期ジエステルが溶解するまで、常に攪拌した状態で行われる。その後、使用された酵素を、濾過、好ましくはセライトでの濾過により除去し、低圧下での溶媒蒸発によって式Ｉのモノエステルが得られる。
【００３４】
式ＩＩの化合物がコルテキソロンの１７α，２１−ジエステルである場合、この方法の反応時間は、通常２０から１５０時間の範囲内であり、好ましくは２４から７２時間の範囲内であり、反応温度は、好ましくは約１０から４８℃の範囲内であり、より好ましくは２０から３２℃の範囲内である。
【００３５】
以下の表１は、本発明による、反応条件および酵素的アルコーリシスの結果についてまとめたものである。
【００３６】
【表１】
【００３７】
本発明による酵素的方法は、コルテキソロンの１７α−２１−ジエステルまたは９，１１−デヒドロ−コルテキソロンを変換する場合だけでなくその他の場合にも有用であることが証明され；特に、９，１１−デヒドロコルテキソロンの１７α−ブタノエートは、好ましくはＣＣＬ酵素とメタノールをアシル基のアクセプターアルコールとして使用して、対応するジブタノエートから出発することにより得られた。
【００３８】
初期９，１１−デヒドロ誘導体の濃度は、好ましくは０．０１から０．１５モルの範囲内であり、より好ましくは０．０２５モルである。
【００３９】
この場合、反応時間は、好ましくは４５から５５時間の範囲内であり、好ましくは５３時間である。
【００４０】
またこの場合、反応温度は、好ましくは１０から４８℃の範囲内であり、より好ましくは２０から３２℃の範囲内である。
【００４１】
以下の表２は、９，１１−デヒドロコルテキソロンの１７α，２１−ジブタノエートの酵素的アルコーリシスの反応条件と、これに関連したそれぞれのモノエステルの最終的な収率とを示す。
【００４２】
【表２】
【００４３】
さらに、本発明による方法は、有機溶媒、水、緩衝水溶液、および／またはこれらの混合物から結晶化する最終ステップを、任意選択で含んでもよい。
【００４４】
前記結晶化ステップの有機溶媒は、好ましくは、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒブチルメチルエーテル、ジクロロメタン、酢酸エチル、ヘキサン、アセトン、エタノール、水、またはこれらの任意の割合の混合物の中から選択される。
【００４５】
このように本発明のその他の目的は、結晶形態の、コルテキソロンの１７α−モノエステルおよびそれに対応する９，１１−デヒドロ誘導体である。
【００４６】
詳細には、本発明の目的は、結晶形態の、コルテキソロン１７α−プロピオネートおよび９，１１−コルテキソロン−１７α−ブタノエートである。
【００４７】
１７α−プロピオネートの結晶形態Ｉは、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルからの結晶化によって得られる。前記溶媒中の１７α−プロピオネートの濃度は、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル９〜１１ｍｌ中、０．９から１．１ｇの範囲内であり、好ましくは１０ｍｌ中１ｇである。前記結晶形態Ｉは、約１３３から１３５℃の範囲内の融点、および／または図１に示されるＤＲＸ、および／または図２に示されるＤＳＣ、および／または図３に示されるＩＲを特徴とする。
【００４８】
１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩは、好ましくはジイソプロピルエーテルからの結晶化によって得られる。前記溶媒中の濃度は、好ましくは、ジイソプロピルエーテル５４〜６６ｍｌ中、０．９から１．１ｇの範囲内である。
【００４９】
前記結晶形態ＩＩは、約１１４から１１６℃の範囲内の融点、および／または図４に示されるＤＲＸ、および／または図５に示されるＤＳＣ、および／または図６に示されるＩＲを特徴とする。
【００５０】
１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩは、好ましくは約１／３０の比のジクロロメタン／ｎ−ヘキサン、好ましくは約１／８の比のアセトン／ｎ−ヘキサン、または好ましくは約１／２の比のエタノール／水の混合物からの結晶化によって得られることが好ましい。
【００５１】
前記結晶形態ＩＩＩの融点は、決定することができなかった。
【００５２】
ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた結晶形態ＩＩＩは、図７に示されるＤＲＸおよび／または図８に示されるＤＳＣおよび／または図９に示されるＩＲを有する。
【００５３】
アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた結晶形態ＩＩＩは、図１０に示されるＤＲＸおよび／または図１１に示されるＤＳＣおよび／または図１２に示されるＩＲを有する。
【００５４】
エタノール／水から得られた結晶形態ＩＩＩは、図１３に示されるＤＲＸおよび／または図１４に示されるＤＳＣおよび／または図１５に示されるＩＲを有する。
【００５５】
９，１１−デヒドロ−１７α−コルテキソロンの結晶形態Ｉは、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジイソプロピルエーエル、好ましくは１／１５の比のジクロロメタン／ｎ−ヘキサン混合物、または好ましくは１／５の比のアセトン／ｎ−ヘキサン混合物から得られることが好ましい。
【００５６】
ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルから得られた結晶形態Ｉは、図１６に示されるＤＲＸおよび／または図１７に示されるＤＳＣおよび／または図１８に示されるＩＲを有する。
【００５７】
ジイソプロピルエーテルから得られた結晶形態Ｉは、図１９に示されるＤＲＸおよび／または図２０に示されるＤＳＣおよび／または図２１に示されるＩＲを有する。
【００５８】
ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた結晶形態Ｉは、図２２に示されるＤＲＸおよび／または図２３に示されるＤＳＣおよび／または図２４に示されるＩＲを有する。
【００５９】
アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた結晶形態Ｉは、図２５に示されるＤＲＸおよび／または図２６に示されるＤＳＣおよび／または図２７に示されるＩＲを有する。
【００６０】
形態ＩＩＩの１７α−プロピオネートに関するＤＲＸダイアグラムおよび形態Ｉの９，１１−デヒドロ誘導体に関するＤＲＸダイアグラムで観察可能な相違は、これらの相違が結晶の配向度の低下という現象に起因するという点から、関連はないと考えられる。
【００６１】
同様に、ＩＲおよびＤＳＣで観察される相違は、これらの相違がサンプル調製のときおよび／または分析を行うときのばらつきに起因するという点から、関連はないと考えられる。
【００６２】
表３は、いくつかの同定パラメータ、および上述の結晶形態を得るための条件を示す。
【００６３】
【表３】
【００６４】
【表４】
【００６５】
結晶化水分子の存在を特徴とし、かつ溶媒和物形態ＩＶと定義された、１７α−プロピオネートの擬似多型結晶形態の存在が、決定された。
【００６６】
１７α−プロピオネートの溶媒和物結晶形態ＩＶは、一般に１／２から２／１の範囲内にある比の有機／水溶媒混合物から、好ましくは１／１の比にあるプロピレングリコール／水から、または１／１の比にあるポリエチレングリコール／水からの結晶化によって得られることが好ましい。
【００６７】
プロピレングリコール／水 １／１から得られた溶媒和物結晶形態ＩＶは、図２８に示されるＤＲＸおよび／または図２９に示されるＩＲを有する。
【００６８】
溶媒和物形態の１７α−プロピオネートの結晶化は、最終的な医薬品形態の配合プロセス中に行ってもよく、この場合、医薬品形態の製造プロセスは、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、または短鎖脂肪族アルコールなどの有機溶媒に活性成分を溶解し、その後、活性成分の溶解に使用された有機溶媒に対して１／３から３／１の比で、水を添加するものである。
【００６９】
さらに本発明の目的は、少なくとも１種の生理学的に許容される賦形剤と共に上述の結晶形態の少なくとも１種を含有する医薬組成物である。
【００７０】
本発明の組成物は、固体、半固体、ペースト状、または液体形態のものにすることができ、好ましくは、どちらもすぐに使用することができまたは使用前に元に戻すことができる、錠剤、カプセル、粉末、ペレット、懸濁液、エマルジョン、溶液、クリーム、ゲル、軟膏、ローション、またはペーストの中から選択される。
【００７１】
最後に本発明の目的は、泌尿生殖器系、内分泌系、皮膚、および／または皮膚付属器に影響を及ぼす病状を治療する医薬品を調製するための、上述の結晶形態および／または溶媒和物の少なくとも１種の、好ましくは人間のための使用である。
【００７２】
具体的には本発明の目的は、泌尿生殖器系、内分泌系、皮膚、および／または皮膚付属器に影響を及ぼす病状を治療する医薬品を調製するための、溶液および結晶分散体状態にある、なお後者の場合は有機溶媒または有機溶媒の混合物中に結晶活性成分を含有する溶液に、水または水溶液を添加して同活性成分を沈殿させることによって、おそらくは即座に得られる状態にある、溶媒和物形態Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの中から選択された結晶形態、好ましくは溶媒和物形態ＩＶ中に、０．１から２重量％の範囲内、好ましくは０．２から１％の範囲内でコルテキソロン−１７α−プロピオネートを含有する、例えばクリーム、ゲル、軟膏、エマルジョン、または分散体などの、局所施用のための液体または半液体製剤の使用である。
【００７３】
さらに本発明の目的は、泌尿生殖器系、内分泌系、皮膚、および／または皮膚付属器に影響を及ぼす病状を治療するための、溶媒和物形態ＩまたはＩＶの中から選択された結晶形態にある、全製剤が２００ｍｇの最終重量を有する場合には前記全製剤に対して４から６５重量％の範囲内、好ましくは５から５０％の範囲内、または前記全製剤が５００ｍｇの最終重量を有する場合には１から２５重量％の範囲内、好ましくは２から２０％の範囲内の投薬量で９，１１−デヒドロ−コルテキソロン−１７α−ブタノエートを含有する、例えば錠剤、カプセル、顆粒、または粉末などの経口または全身投与のための液体または固体製剤の使用である。
【００７４】
本発明による前記病状は、好ましくは、にきび、脂漏性皮膚炎、男性ホルモン性脱毛症、多毛症、良性前立腺過形成、前立腺癌の諸形態、男性避妊、多嚢胞性卵巣症候群、攻撃的または異常な性行動の制御、および性的早熟症候群の中から選択される。
【００７５】
以下の実施例は、本発明をいかなる方法によっても制限することなく、本発明の理解を高めるために含まれる。
【実施例１】
【００７６】
コルテキソロン１７α，２１−ジプロピオネートのＣＣＬによるアルコーリシス
ブタノール（０．４ｇ、５．４５ｍｍｏｌ）およびＣＣＬ（１７．４ｇ、３．８６Ｕ／ｍｇ、ＦＬＵＫＡ）を、コルテキソロン−１７α，２１−ジプロピオネート（０．５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）をトルエン（５０ｍｌ）に溶かした溶液に添加する。混合物を攪拌しながら３０℃に維持し、その後、初期材料が溶解するまで（２４時間）反応をＴＬＣ（トルエン／酢酸エチル ６／４）中で進行させる。セライト層を使用した濾過を用いて、酵素を除去する。低圧下で蒸発させた後、コルテキソロン１７α−プロピオネート（０．４３７、９９％）を回収する。ジイソプロピルエーテルからの結晶化により、ＨＰＬＣで純度＞９９％の生成物が得られる。
【００７７】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) 関連シグナルδ(ppm) 5.78 (br s, 1H, H-4)、4.32 (dd, 1H, H-21)、4.25 (dd, 1H, H-21)、1.22 (s, 3H, CH3-19)、1.17 (t, 3H, CH3)、0.72 (s, 3H, CH3-18)。P.f. 114℃
【実施例２】
【００７８】
実施例１に記述される方法により、コルテキソロン−１７α−ブタノエートを調製する。
【００７９】
1H-NMR 関連シグナルδ(ppm) 5.78 (br s, 1H, H-4)、4.32 (dd, 1H, H-21)、4.26 (dd, 1H, H-21)、1.23 (s, 3H, CH3-19)、0.97 (t, 3H, CH3)、0.73 (s, 3H, CH3-18)。P.F. 134〜136℃
【実施例３】
【００８０】
実施例に記述される方法により、コルテキソロン−１７α−バレレートを調製する。
【００８１】
1H-NMR 関連シグナルδ(ppm) 5.77 (br s, 1H, H-4)、4.32 (dd, 1H, H-21)、4.26 (dd, 1H, H-21)、1.22 (s, 3H, CH3-19)、0.95 (t, 3H, CH3)、0.72 (s, 3H, CH3-18)。P.f. 114℃ (ジイソプロピルエーテル)。
【実施例４】
【００８２】
実施例に記述される方法により、９，１１−デヒドロ−コルテキソロン−１７α−ブタノエートを調製する。
【００８３】
1H-NMR 関連シグナルδ(ppm) 5.77 (br s, 1H, H-4)、5.54 (m, 1H, H-9)、4.29 (dd, 1H, H-21)、4.24 (dd, 1H, H-21)、1.32 (s, 3H, CH3-19)、0.94 (t, 3H, CH3)、0.68 (s, 3H, CH3-18)。P.f. 135〜136℃ (アセトン／ヘキサン)。
【実施例５】
【００８４】
コルテキソロン−１７α−，２１−ジプロピオネートのＣＡＬＢによるアルコーリシス
コルテキソロン，１７α，２−ジプロピオネート（０．５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４０ｍｌ）に溶解し、ＣＡＬＢ（２．３ｇ、２．５Ｕ／ｍｇ Ｆｌｕｋａ）およびオクタノール（０．８７５ｍｌ）を添加する。混合物を攪拌しながら３０℃に、７６時間維持する。濾紙を使用した濾過を用いて酵素を除去する。溶媒が蒸発したら、固体（０．４７５８）を回収するが、この固体は、分析1Ｈ−ＮＭＲにより、９１％のコルテキソロン−１７α−プロピオネートで構成されたと見なされるものである。
【実施例６】
【００８５】
結晶化
溶媒（ｔ−ブチルメチルエーテルまたはジイソプロピルエーテル）を、表３に示される比によりサンプルに添加する。混合物を、攪拌しながらサンプルが完全に溶解するまで、溶媒の沸騰温度に加熱する。室温に冷却し、攪拌しながら６時間、この温度のままにする。ブフナー漏斗を使用して濾過し、低圧下で得られた固体を室温で１５時間維持し、次いで４０℃で５時間維持する。
【実施例７】
【００８６】
沈殿
サンプルを、表３に示される比に従って、適切な溶媒（ジクロロメタン、アセトン、酢酸エチル、またはエタノール）に溶解し、次いで溶媒、ヘキサン、または水を、表３に示される比に従って添加し、混合物を、攪拌しながら室温で維持する。ブフナー漏斗を使用した濾過によって沈殿物を回収し、実施例６の場合と同様に乾燥する。
【実施例８】
【００８７】
画定された結晶形態で医薬品を含有する医薬品形態を得る。
【００８８】
２％のセチルアルコール、１６％のモノステアリン酸グリセリル、１０％のワセリン油、１３％のプロピレングリコール、１０％の低重合度のポリエチレングリコール、１．５％のポリソルベート８０、および４７．５％の精製水を含有する液状クリームを調製する。結晶形態ＩＩＩのコルテキソロン１７α−プロピオネート１ｇを、このクリーム１００ｇに添加し、混合物に均質性が得られるまで、混合物をタービン攪拌器によって均質化する。製剤ビヒクルに溶解した活性成分の画分と、結晶形態ＩＩＩの結晶として存在する溶解していない活性成分の画分とを含有するクリームが得られる。この調製物は、Ｆｒａｎｚセルでの皮膚浸透試験用の製剤ビヒクルとして使用するのに適しており、０．０４から０．０３ｃｍ／時の範囲内の浸透係数が、この調製物に関して観察される。
【実施例９】
【００８９】
生薬配合手順中に溶媒を代え、溶媒和物形態ＩＶの医薬品を含有する医薬品形態を得る。
【００９０】
結晶形態ＩＩＩのコルテキソロン１７α−プロピオネート１００ｇを、室温で攪拌しながらプロピレングリコール２５００ｇに溶解する。これとは別に、約７０℃まで温度を上昇させるターボ乳化器（ｔｕｒｂｏｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）を使用することによって、セチルアルコール２５０ｇ、モノステアリン酸グリセリル１５００ｇ、液体パラフィン１０００ｇ、混合トコフェロール５ｇ、ポリソルベート８０ １００ｇ、および水４６５０ｇを含むエマルジョンを調製する。エマルジョンを約３０℃まで冷却した後、攪拌しながらかつ陰圧下で、コルテキソロン１７α−プロピオネートのプロピレングリコール溶液を添加する。エマルジョン化したクリームを、冷却剤を循環させることによって温度が確実に低く保持した状態で、均質性が得られるまで攪拌しながら維持する。
【００９１】
クリームは、活性成分が主に水性の製剤に添加されたときに、その活性成分を含有するグリコール溶液から活性成分そのものの沈殿によって形成された、溶媒和物結晶形態ＩＶの活性成分で構成される、分散した結晶画分を含有する。クリーム中に存在する結晶形態のＤＲＸスペクトルを、図３０に示す。
【技術分野】
【０００１】
Ｃ−１７α位のヒドロキシル基が短鎖脂肪族または芳香族の酸でエステル化されているコルテキソロン誘導体と、それに対応する９，１１−デヒドロ誘導体は、抗アンドロゲン性効果を有することが知られている。
【背景技術】
【０００２】
特許文献１は、動物の「ｉｎ ｖｉｔｒｏ」および「ｉｎ ｖｉｖｏ」の両方で実証された高い抗アンドロゲン性生物活性に関し、コルテキソロン１７α−プロピオネートおよび９，１１−デヒドロ−コルテキソロン−１７−α−ブタノエートについて記述している。
【０００３】
上述の誘導体を得るための方法は、非特許文献１および特許文献２に記載されており、酸触媒（例えば、ＰＴＳＡ．Ｈ2Ｏ）の存在下、シクロヘキサンやＤＭＦなどの非プロトン性溶媒の混合物として市場で入手可能なオルトエステルを使用した、中間体オルトエステルでのコルテキソロンの形質転換または９，１１−デヒドロコルテキソロンの形質転換を示している。このように得られた中間体オルトエステルは、そのままで、または不純物を溶解することが可能な溶媒、好ましくはアルコールに懸濁することにより精製して、使用することができる。その後に実施される、好ましくは酢酸緩衝液中でｐＨ４〜５に緩衝された含水アルコール溶液中での加水分解は、所望のモノエステルを提供する。
【０００４】
そのような合成を、以下のダイアグラム１に示す。
【０００５】
【化１】
【０００６】
しかし、このように得られたモノエステルは、反応条件において不安定であり、その結果、取扱いおよび単離が難しかった（例えば、非特許文献２参照）。この不安定性は、とりわけ、１７位から２１位にエステル化アシル基が移行する二次反応に起因する。
【０００７】
このように、生物学的試験へと進めることができるよう化学的に純粋な上述のモノエステルを得るには、合成の終わりに、一般にカラムクロマトグラフィを用いて行われる精製プロセスを使用する必要があることが知られている。
【０００８】
さらに、特許文献２は、塩基性環境でのジエステルの加水分解が、初期の未反応生成物と平行して１７α，２１−ジオールと１７−および２１−モノエステルとの混合物が形成されることによって、どのように都合よくないのか記述している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】欧州特許第１４２１０９９号明細書
【特許文献２】米国特許第３１５２１５４号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Gardi et al. Gazz. Chim. It. 63, 43 1, 1963
【非特許文献２】R.Gardi et al Tetrahedron Letters, 448, 1961
【非特許文献３】B.Turner, Journal of American Chemical Society, 75, 3489, 1953
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
驚くべきことに、生体触媒としてカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）からのリパーゼを使用したアルコーリシス反応は、コルテキソロンの１７αモノエステルまたはその９，１１−デヒドロ誘導体の調製中に有用に利用できることが発見されている。
【００１２】
事実、コルテキソロンの１７，２１−ジエステルまたはその９，１１−デヒドロ誘導体のそのような酵素的アルコーリシスは、以下のダイアグラム２に示されるように、２１位で選択的に生じ、１７位でそれに対応するモノエステルに移動することが発見されている。
【００１３】
【化２】
【００１４】
本発明によれば、アルコーリシス条件での特殊な酵素反応の化学選択性は、文献に既に示されている方法に対し、１７α−モノエステルをより高い収率の工業的レベルで調製することに関し、新たな展望を開く。
【００１５】
本発明の反応の基質として提供されるジエステルは、従来技術により調製することができ、例えば、直鎖状カルボン酸を用いての、その無水物およびＰＴＳＡ一水和物の存在下でのコルチコステロイドのエステル化をもたらす非特許文献３に記述されている技術に従って、調製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図２】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図３】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図４】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩのＤＲＸを示す図である。
【図５】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩのＤＳＣを示す図である。
【図６】コルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩのＩＲを示す図である。
【図７】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＲＸを示す図である。
【図８】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＳＣを示す図である。
【図９】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＩＲを示す図である。
【図１０】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＲＸを示す図である。
【図１１】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＳＣを示す図である。
【図１２】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＩＲを示す図である。
【図１３】エタノール／水から得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＲＸを示す図である。
【図１４】エタノール／水から得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＤＳＣを示す図である。
【図１５】エタノール／水から得られたコルテキソロン１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩのＩＲを示す図である。
【図１６】ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図１７】ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図１８】ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図１９】ジイソプロピルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図２０】ジイソプロピルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図２１】ジイソプロピルエーテルから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図２２】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図２３】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図２４】ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図２５】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＲＸを示す図である。
【図２６】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＤＳＣを示す図である。
【図２７】アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの結晶形態ＩのＩＲを示す図である。
【図２８】プロピレングリコール／水から得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの溶媒和物の結晶形態ＩＶのＤＲＸを示す図である。
【図２９】プロピレングリコール／水から得られた９−デヒドロコルテキソロン１７α−ブチレートの溶媒和物の結晶形態ＩＶのＩＲを示す図である。
【図３０】製剤（クリーム）中でのコルテキソロン１７α−プロピオネートのＤＲＸを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
したがって本発明の目的は、式Ｉの、コルテキソロンの１７αモノエステルとその９，１１−デヒドロ誘導体とを調製するための方法であって
【００１８】
【化３】
【００１９】
（式中、Ｒは、１から１０個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐鎖状の脂肪族または芳香族鎖である。）、
式ＩＩの化合物
【００２０】
【化４】
【００２１】
（式中、Ｒは、上記にて示されたものと同じ意味を有する。）
と、
式ＩＩＩの化合物
Ｒ’ＯＨ （ＩＩＩ）
（式中、Ｒ’は１から１０個の炭素原子を含有する直鎖であり、好ましくはＣ1〜Ｃ8アルキルである。）
とを、カンジダからのリパーゼの存在下で反応させることを特徴とする方法である。
本発明によれば、Ｒは、好ましくはＣ1〜Ｃ4アルキルであり、さらにより好ましくは、ＣＨ3、ＣＨ3ＣＨ2、ＣＨ3（ＣＨ2）2、またはＣＨ3（ＣＨ2）3の中から選択される。
【００２２】
上述の式ＩおよびＩＩにおける９、１１位での破線の記号は、以下に記述される式に示されるように、二重結合を存在しても（９，１１−デヒドロ誘導体）またはそのような位置に存在しなくてもよいことを意味する。
【００２３】
【化５】
【００２４】
本発明の方法を触媒するのに使用されるカンジダからのリパーゼは、好ましくは、カンジダシリンドラセア（Ｃａｎｄｉｄａ ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）（ＣＣＬ）からのリパーゼと、Ｂ型カンジダアンタークチカ（Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａ）（ＣＡＬＢ）からのリパーゼとの間で選択される。
【００２５】
カンジダからのリパーゼ、特にカンジダシリンドラセアおよびカンジダアンタークチカからのリパーゼは、ほとんど不活性であることが証明されているブタ膵リパーゼ（ＰＰＬ）およびシュードモナスフルオレセンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）（ＰＦＬ）とは対照的に、２１位のエステル官能基を選択的に加水分解可能であることが証明されている。
【００２６】
初期の基質に対して計算された前記酵素の量は、使用される酵素のタイプに応じて変えてもよい。特に前記酵素は、好ましくは、１００から１００００００Ｕ／ｍｍｏｌの範囲の量で；より好ましくは、ＣＣＬの場合は１０００から１００００００Ｕ／ｍｍｏｌの範囲、ＣＡＬＢの場合は１００から１０００００の量で使用される。さらにより好ましくは、前記酵素は、ＣＣＬの場合に約６００００Ｕ／ｍｍｏｌの量で、ＣＡＬＢの場合に約５０００Ｕ／ｍｍｏｌの量で存在する。
【００２７】
さらに、経済的／工業的な観点から、触媒活性を失うことなくそのような酵素を数サイクルにわたって再利用する可能性が、明らかにされた。
【００２８】
式ＩＩの初期ジエステルの濃度は、好ましくは約０．０１から０．１５モルの範囲内であり、より好ましくは約０．０２５モルである。
【００２９】
本発明の方法は、好ましくは有機溶媒、より好ましくは非プロトン性有機溶媒の存在下で行われる。
【００３０】
次いで前記溶媒は、好ましくはトルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、および／またはクロロホルムの中から選択される。
【００３１】
本発明によるＲ’ＯＨアルコールは、好ましくはメタノール、エタノール、ブタノール、および／またはオクタノールから選択される。
【００３２】
前記アルコールは、好ましくは、初期基質１モル当たり約０．５から約５０モルの範囲の量で、より好ましくは基質１モル当たり５モルの量で存在する。
【００３３】
本発明による方法は、好ましくは、式ＩＩの初期ジエステルが溶解するまで、常に攪拌した状態で行われる。その後、使用された酵素を、濾過、好ましくはセライトでの濾過により除去し、低圧下での溶媒蒸発によって式Ｉのモノエステルが得られる。
【００３４】
式ＩＩの化合物がコルテキソロンの１７α，２１−ジエステルである場合、この方法の反応時間は、通常２０から１５０時間の範囲内であり、好ましくは２４から７２時間の範囲内であり、反応温度は、好ましくは約１０から４８℃の範囲内であり、より好ましくは２０から３２℃の範囲内である。
【００３５】
以下の表１は、本発明による、反応条件および酵素的アルコーリシスの結果についてまとめたものである。
【００３６】
【表１】
【００３７】
本発明による酵素的方法は、コルテキソロンの１７α−２１−ジエステルまたは９，１１−デヒドロ−コルテキソロンを変換する場合だけでなくその他の場合にも有用であることが証明され；特に、９，１１−デヒドロコルテキソロンの１７α−ブタノエートは、好ましくはＣＣＬ酵素とメタノールをアシル基のアクセプターアルコールとして使用して、対応するジブタノエートから出発することにより得られた。
【００３８】
初期９，１１−デヒドロ誘導体の濃度は、好ましくは０．０１から０．１５モルの範囲内であり、より好ましくは０．０２５モルである。
【００３９】
この場合、反応時間は、好ましくは４５から５５時間の範囲内であり、好ましくは５３時間である。
【００４０】
またこの場合、反応温度は、好ましくは１０から４８℃の範囲内であり、より好ましくは２０から３２℃の範囲内である。
【００４１】
以下の表２は、９，１１−デヒドロコルテキソロンの１７α，２１−ジブタノエートの酵素的アルコーリシスの反応条件と、これに関連したそれぞれのモノエステルの最終的な収率とを示す。
【００４２】
【表２】
【００４３】
さらに、本発明による方法は、有機溶媒、水、緩衝水溶液、および／またはこれらの混合物から結晶化する最終ステップを、任意選択で含んでもよい。
【００４４】
前記結晶化ステップの有機溶媒は、好ましくは、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒブチルメチルエーテル、ジクロロメタン、酢酸エチル、ヘキサン、アセトン、エタノール、水、またはこれらの任意の割合の混合物の中から選択される。
【００４５】
このように本発明のその他の目的は、結晶形態の、コルテキソロンの１７α−モノエステルおよびそれに対応する９，１１−デヒドロ誘導体である。
【００４６】
詳細には、本発明の目的は、結晶形態の、コルテキソロン１７α−プロピオネートおよび９，１１−コルテキソロン−１７α−ブタノエートである。
【００４７】
１７α−プロピオネートの結晶形態Ｉは、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルからの結晶化によって得られる。前記溶媒中の１７α−プロピオネートの濃度は、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル９〜１１ｍｌ中、０．９から１．１ｇの範囲内であり、好ましくは１０ｍｌ中１ｇである。前記結晶形態Ｉは、約１３３から１３５℃の範囲内の融点、および／または図１に示されるＤＲＸ、および／または図２に示されるＤＳＣ、および／または図３に示されるＩＲを特徴とする。
【００４８】
１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩは、好ましくはジイソプロピルエーテルからの結晶化によって得られる。前記溶媒中の濃度は、好ましくは、ジイソプロピルエーテル５４〜６６ｍｌ中、０．９から１．１ｇの範囲内である。
【００４９】
前記結晶形態ＩＩは、約１１４から１１６℃の範囲内の融点、および／または図４に示されるＤＲＸ、および／または図５に示されるＤＳＣ、および／または図６に示されるＩＲを特徴とする。
【００５０】
１７α−プロピオネートの結晶形態ＩＩＩは、好ましくは約１／３０の比のジクロロメタン／ｎ−ヘキサン、好ましくは約１／８の比のアセトン／ｎ−ヘキサン、または好ましくは約１／２の比のエタノール／水の混合物からの結晶化によって得られることが好ましい。
【００５１】
前記結晶形態ＩＩＩの融点は、決定することができなかった。
【００５２】
ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた結晶形態ＩＩＩは、図７に示されるＤＲＸおよび／または図８に示されるＤＳＣおよび／または図９に示されるＩＲを有する。
【００５３】
アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた結晶形態ＩＩＩは、図１０に示されるＤＲＸおよび／または図１１に示されるＤＳＣおよび／または図１２に示されるＩＲを有する。
【００５４】
エタノール／水から得られた結晶形態ＩＩＩは、図１３に示されるＤＲＸおよび／または図１４に示されるＤＳＣおよび／または図１５に示されるＩＲを有する。
【００５５】
９，１１−デヒドロ−１７α−コルテキソロンの結晶形態Ｉは、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ジイソプロピルエーエル、好ましくは１／１５の比のジクロロメタン／ｎ−ヘキサン混合物、または好ましくは１／５の比のアセトン／ｎ−ヘキサン混合物から得られることが好ましい。
【００５６】
ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルから得られた結晶形態Ｉは、図１６に示されるＤＲＸおよび／または図１７に示されるＤＳＣおよび／または図１８に示されるＩＲを有する。
【００５７】
ジイソプロピルエーテルから得られた結晶形態Ｉは、図１９に示されるＤＲＸおよび／または図２０に示されるＤＳＣおよび／または図２１に示されるＩＲを有する。
【００５８】
ジクロロメタン／ｎ−ヘキサンから得られた結晶形態Ｉは、図２２に示されるＤＲＸおよび／または図２３に示されるＤＳＣおよび／または図２４に示されるＩＲを有する。
【００５９】
アセトン／ｎ−ヘキサンから得られた結晶形態Ｉは、図２５に示されるＤＲＸおよび／または図２６に示されるＤＳＣおよび／または図２７に示されるＩＲを有する。
【００６０】
形態ＩＩＩの１７α−プロピオネートに関するＤＲＸダイアグラムおよび形態Ｉの９，１１−デヒドロ誘導体に関するＤＲＸダイアグラムで観察可能な相違は、これらの相違が結晶の配向度の低下という現象に起因するという点から、関連はないと考えられる。
【００６１】
同様に、ＩＲおよびＤＳＣで観察される相違は、これらの相違がサンプル調製のときおよび／または分析を行うときのばらつきに起因するという点から、関連はないと考えられる。
【００６２】
表３は、いくつかの同定パラメータ、および上述の結晶形態を得るための条件を示す。
【００６３】
【表３】
【００６４】
【表４】
【００６５】
結晶化水分子の存在を特徴とし、かつ溶媒和物形態ＩＶと定義された、１７α−プロピオネートの擬似多型結晶形態の存在が、決定された。
【００６６】
１７α−プロピオネートの溶媒和物結晶形態ＩＶは、一般に１／２から２／１の範囲内にある比の有機／水溶媒混合物から、好ましくは１／１の比にあるプロピレングリコール／水から、または１／１の比にあるポリエチレングリコール／水からの結晶化によって得られることが好ましい。
【００６７】
プロピレングリコール／水 １／１から得られた溶媒和物結晶形態ＩＶは、図２８に示されるＤＲＸおよび／または図２９に示されるＩＲを有する。
【００６８】
溶媒和物形態の１７α−プロピオネートの結晶化は、最終的な医薬品形態の配合プロセス中に行ってもよく、この場合、医薬品形態の製造プロセスは、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、または短鎖脂肪族アルコールなどの有機溶媒に活性成分を溶解し、その後、活性成分の溶解に使用された有機溶媒に対して１／３から３／１の比で、水を添加するものである。
【００６９】
さらに本発明の目的は、少なくとも１種の生理学的に許容される賦形剤と共に上述の結晶形態の少なくとも１種を含有する医薬組成物である。
【００７０】
本発明の組成物は、固体、半固体、ペースト状、または液体形態のものにすることができ、好ましくは、どちらもすぐに使用することができまたは使用前に元に戻すことができる、錠剤、カプセル、粉末、ペレット、懸濁液、エマルジョン、溶液、クリーム、ゲル、軟膏、ローション、またはペーストの中から選択される。
【００７１】
最後に本発明の目的は、泌尿生殖器系、内分泌系、皮膚、および／または皮膚付属器に影響を及ぼす病状を治療する医薬品を調製するための、上述の結晶形態および／または溶媒和物の少なくとも１種の、好ましくは人間のための使用である。
【００７２】
具体的には本発明の目的は、泌尿生殖器系、内分泌系、皮膚、および／または皮膚付属器に影響を及ぼす病状を治療する医薬品を調製するための、溶液および結晶分散体状態にある、なお後者の場合は有機溶媒または有機溶媒の混合物中に結晶活性成分を含有する溶液に、水または水溶液を添加して同活性成分を沈殿させることによって、おそらくは即座に得られる状態にある、溶媒和物形態Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの中から選択された結晶形態、好ましくは溶媒和物形態ＩＶ中に、０．１から２重量％の範囲内、好ましくは０．２から１％の範囲内でコルテキソロン−１７α−プロピオネートを含有する、例えばクリーム、ゲル、軟膏、エマルジョン、または分散体などの、局所施用のための液体または半液体製剤の使用である。
【００７３】
さらに本発明の目的は、泌尿生殖器系、内分泌系、皮膚、および／または皮膚付属器に影響を及ぼす病状を治療するための、溶媒和物形態ＩまたはＩＶの中から選択された結晶形態にある、全製剤が２００ｍｇの最終重量を有する場合には前記全製剤に対して４から６５重量％の範囲内、好ましくは５から５０％の範囲内、または前記全製剤が５００ｍｇの最終重量を有する場合には１から２５重量％の範囲内、好ましくは２から２０％の範囲内の投薬量で９，１１−デヒドロ−コルテキソロン−１７α−ブタノエートを含有する、例えば錠剤、カプセル、顆粒、または粉末などの経口または全身投与のための液体または固体製剤の使用である。
【００７４】
本発明による前記病状は、好ましくは、にきび、脂漏性皮膚炎、男性ホルモン性脱毛症、多毛症、良性前立腺過形成、前立腺癌の諸形態、男性避妊、多嚢胞性卵巣症候群、攻撃的または異常な性行動の制御、および性的早熟症候群の中から選択される。
【００７５】
以下の実施例は、本発明をいかなる方法によっても制限することなく、本発明の理解を高めるために含まれる。
【実施例１】
【００７６】
コルテキソロン１７α，２１−ジプロピオネートのＣＣＬによるアルコーリシス
ブタノール（０．４ｇ、５．４５ｍｍｏｌ）およびＣＣＬ（１７．４ｇ、３．８６Ｕ／ｍｇ、ＦＬＵＫＡ）を、コルテキソロン−１７α，２１−ジプロピオネート（０．５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）をトルエン（５０ｍｌ）に溶かした溶液に添加する。混合物を攪拌しながら３０℃に維持し、その後、初期材料が溶解するまで（２４時間）反応をＴＬＣ（トルエン／酢酸エチル ６／４）中で進行させる。セライト層を使用した濾過を用いて、酵素を除去する。低圧下で蒸発させた後、コルテキソロン１７α−プロピオネート（０．４３７、９９％）を回収する。ジイソプロピルエーテルからの結晶化により、ＨＰＬＣで純度＞９９％の生成物が得られる。
【００７７】
1H-NMR (500MHz, CDCl3) 関連シグナルδ(ppm) 5.78 (br s, 1H, H-4)、4.32 (dd, 1H, H-21)、4.25 (dd, 1H, H-21)、1.22 (s, 3H, CH3-19)、1.17 (t, 3H, CH3)、0.72 (s, 3H, CH3-18)。P.f. 114℃
【実施例２】
【００７８】
実施例１に記述される方法により、コルテキソロン−１７α−ブタノエートを調製する。
【００７９】
1H-NMR 関連シグナルδ(ppm) 5.78 (br s, 1H, H-4)、4.32 (dd, 1H, H-21)、4.26 (dd, 1H, H-21)、1.23 (s, 3H, CH3-19)、0.97 (t, 3H, CH3)、0.73 (s, 3H, CH3-18)。P.F. 134〜136℃
【実施例３】
【００８０】
実施例に記述される方法により、コルテキソロン−１７α−バレレートを調製する。
【００８１】
1H-NMR 関連シグナルδ(ppm) 5.77 (br s, 1H, H-4)、4.32 (dd, 1H, H-21)、4.26 (dd, 1H, H-21)、1.22 (s, 3H, CH3-19)、0.95 (t, 3H, CH3)、0.72 (s, 3H, CH3-18)。P.f. 114℃ (ジイソプロピルエーテル)。
【実施例４】
【００８２】
実施例に記述される方法により、９，１１−デヒドロ−コルテキソロン−１７α−ブタノエートを調製する。
【００８３】
1H-NMR 関連シグナルδ(ppm) 5.77 (br s, 1H, H-4)、5.54 (m, 1H, H-9)、4.29 (dd, 1H, H-21)、4.24 (dd, 1H, H-21)、1.32 (s, 3H, CH3-19)、0.94 (t, 3H, CH3)、0.68 (s, 3H, CH3-18)。P.f. 135〜136℃ (アセトン／ヘキサン)。
【実施例５】
【００８４】
コルテキソロン−１７α−，２１−ジプロピオネートのＣＡＬＢによるアルコーリシス
コルテキソロン，１７α，２−ジプロピオネート（０．５ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４０ｍｌ）に溶解し、ＣＡＬＢ（２．３ｇ、２．５Ｕ／ｍｇ Ｆｌｕｋａ）およびオクタノール（０．８７５ｍｌ）を添加する。混合物を攪拌しながら３０℃に、７６時間維持する。濾紙を使用した濾過を用いて酵素を除去する。溶媒が蒸発したら、固体（０．４７５８）を回収するが、この固体は、分析1Ｈ−ＮＭＲにより、９１％のコルテキソロン−１７α−プロピオネートで構成されたと見なされるものである。
【実施例６】
【００８５】
結晶化
溶媒（ｔ−ブチルメチルエーテルまたはジイソプロピルエーテル）を、表３に示される比によりサンプルに添加する。混合物を、攪拌しながらサンプルが完全に溶解するまで、溶媒の沸騰温度に加熱する。室温に冷却し、攪拌しながら６時間、この温度のままにする。ブフナー漏斗を使用して濾過し、低圧下で得られた固体を室温で１５時間維持し、次いで４０℃で５時間維持する。
【実施例７】
【００８６】
沈殿
サンプルを、表３に示される比に従って、適切な溶媒（ジクロロメタン、アセトン、酢酸エチル、またはエタノール）に溶解し、次いで溶媒、ヘキサン、または水を、表３に示される比に従って添加し、混合物を、攪拌しながら室温で維持する。ブフナー漏斗を使用した濾過によって沈殿物を回収し、実施例６の場合と同様に乾燥する。
【実施例８】
【００８７】
画定された結晶形態で医薬品を含有する医薬品形態を得る。
【００８８】
２％のセチルアルコール、１６％のモノステアリン酸グリセリル、１０％のワセリン油、１３％のプロピレングリコール、１０％の低重合度のポリエチレングリコール、１．５％のポリソルベート８０、および４７．５％の精製水を含有する液状クリームを調製する。結晶形態ＩＩＩのコルテキソロン１７α−プロピオネート１ｇを、このクリーム１００ｇに添加し、混合物に均質性が得られるまで、混合物をタービン攪拌器によって均質化する。製剤ビヒクルに溶解した活性成分の画分と、結晶形態ＩＩＩの結晶として存在する溶解していない活性成分の画分とを含有するクリームが得られる。この調製物は、Ｆｒａｎｚセルでの皮膚浸透試験用の製剤ビヒクルとして使用するのに適しており、０．０４から０．０３ｃｍ／時の範囲内の浸透係数が、この調製物に関して観察される。
【実施例９】
【００８９】
生薬配合手順中に溶媒を代え、溶媒和物形態ＩＶの医薬品を含有する医薬品形態を得る。
【００９０】
結晶形態ＩＩＩのコルテキソロン１７α−プロピオネート１００ｇを、室温で攪拌しながらプロピレングリコール２５００ｇに溶解する。これとは別に、約７０℃まで温度を上昇させるターボ乳化器（ｔｕｒｂｏｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ）を使用することによって、セチルアルコール２５０ｇ、モノステアリン酸グリセリル１５００ｇ、液体パラフィン１０００ｇ、混合トコフェロール５ｇ、ポリソルベート８０ １００ｇ、および水４６５０ｇを含むエマルジョンを調製する。エマルジョンを約３０℃まで冷却した後、攪拌しながらかつ陰圧下で、コルテキソロン１７α−プロピオネートのプロピレングリコール溶液を添加する。エマルジョン化したクリームを、冷却剤を循環させることによって温度が確実に低く保持した状態で、均質性が得られるまで攪拌しながら維持する。
【００９１】
クリームは、活性成分が主に水性の製剤に添加されたときに、その活性成分を含有するグリコール溶液から活性成分そのものの沈殿によって形成された、溶媒和物結晶形態ＩＶの活性成分で構成される、分散した結晶画分を含有する。クリーム中に存在する結晶形態のＤＲＸスペクトルを、図３０に示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であって
【化１】
（式中、Ｒは、１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐鎖状の脂肪族または芳香族鎖である。）、
式ＩＩの化合物
【化２】
（式中、Ｒは、上記にて示されたものと同じ意味を有する。）
と、
式ＩＩＩの化合物
Ｒ’ＯＨ （ＩＩＩ）
（式中、Ｒ’は１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖状脂肪族鎖である。）
とを、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）からのリパーゼの存在下で反応させることを特徴とする方法。
【請求項２】
ＲがＣ1〜Ｃ4アルキルであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒが、ＣＨ3、ＣＨ3ＣＨ2、ＣＨ3（ＣＨ2）2、またはＣＨ3（ＣＨ2）3の中から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ’が、１〜８個の炭素原子を含有する脂肪族鎖であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
好ましくは非プロトン性である、有機溶媒の存在下で行われることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記溶媒が、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、および／またはクロロホルムの中から選択されることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記式ＩＩの化合物が、約０．０１から０．１５モルの範囲内の量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記式ＩＩの化合物が、０．０２５モルの量で存在することを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記式ＩＩＩの化合物が、メタノール、エタノール、ブタノール、および／またはオクタノールの中から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記式ＩＩＩの化合物が、初期基質のモル当たり、約０．５から約５０モルまでの様々な量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記式ＩＩＩの化合物が、基質のモル当たり、５モルの量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
カンジダからの前記リパーゼが、ＣＣＬとＣＡＬＢとから選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
カンジダからの前記リパーゼが、約１００から１００００００Ｕ／ｍｍｏｌまでの様々な量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
カンジダからの前記リパーゼが、ＣＣＬの場合は約１０００から１００００００Ｕ／ｍｍｏｌに及ぶ量で存在し、ＣＡＬＢの場合は約１００から１０００００Ｕ／ｍｍｏｌに及ぶことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
有機溶媒から結晶化するさらなるステップを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記結晶化溶媒が、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒブチルメチルエーテル、ジクロロメタン、ヘキサン、アセトン、エタノール、酢酸エチル、水、またはこれらの混合物の中から選択されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
反応温度が１０から４８℃の範囲内、好ましくは２０から３２℃の範囲内であることを特徴とする請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
図１に示されるＤＲＸ、および／または図２に示されるＤＳＣ、および／または図３に示されるＩＲを特徴とする結晶形態Ｉのコルテキソロン−１７α−プロピオネート。
【請求項１９】
図４に示されるＤＲＸ、および／または図５に示されるＤＳＣ、および／または図６に示されるＩＲを特徴とする結晶形態ＩＩのコルテキソロン−１７α−プロピオネート。
【請求項２０】
図７、１０、または１３に示されるＤＲＸ、および／または図８、１１、または１４に示されるＤＳＣ、および／または図９、１２、または１５に示されるＩＲを特徴とする結晶形態ＩＩＩのコルテキソロン−１７α−プロピオネート。
【請求項２１】
図２８に示されるＤＲＸ、および／または図２９に示されるＩＲを特徴とする結晶溶媒和物形態ＩＶのコルテキソロン−１７α−プロピオネート。
【請求項２２】
図１６、１９、２２、または２５に示されるＤＲＸ、および／または図１７、２０、２３、または２６に示されるＤＳＣ、および／または図１８、２１、２４、または２７に示されるＩＲを特徴とする結晶形態Ｉの９，１１−デヒドロ−コルテキソロン−１７α−ブタノエート。
【請求項２３】
請求項１８から２２に記載の結晶形態の少なくとも１種を、少なくとも１種の生理学的に許容される賦形剤と共に含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項２４】
固体、半固体、ペースト状、または液体形態にあることを特徴とする請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
錠剤、カプセル、粉末、ペレット、懸濁液、エマルジョン、溶液、クリーム、ゲル、軟膏、ローション、またはペーストの形をとることを特徴とする請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
泌尿生殖器系、内分泌系、皮膚、および／または皮膚付属器に影響を及ぼす病状を治療するためであることを特徴とする請求項１８から２２のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項２７】
にきび、脂漏性皮膚炎、男性ホルモン性脱毛症、多毛症、良性前立腺過形成、前立腺癌の諸形態、男性避妊、多嚢胞性卵巣症候群、性的早熟症候群、および攻撃的または異常な性行動の制御を治療するためであることを特徴とする請求項２６に記載の結晶形態。
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物を調製するための方法であって
【化１】
（式中、Ｒは、１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖状または分岐鎖状の脂肪族または芳香族鎖である。）、
式ＩＩの化合物
【化２】
（式中、Ｒは、上記にて示されたものと同じ意味を有する。）
と、
式ＩＩＩの化合物
Ｒ’ＯＨ （ＩＩＩ）
（式中、Ｒ’は１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖状脂肪族鎖である。）
とを、カンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）からのリパーゼの存在下で反応させることを特徴とする方法。
【請求項２】
ＲがＣ1〜Ｃ4アルキルであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｒが、ＣＨ3、ＣＨ3ＣＨ2、ＣＨ3（ＣＨ2）2、またはＣＨ3（ＣＨ2）3の中から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｒ’が、１〜８個の炭素原子を含有する脂肪族鎖であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
好ましくは非プロトン性である、有機溶媒の存在下で行われることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記溶媒が、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、および／またはクロロホルムの中から選択されることを特徴とする請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記式ＩＩの化合物が、約０．０１から０．１５モルの範囲内の量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記式ＩＩの化合物が、０．０２５モルの量で存在することを特徴とする請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記式ＩＩＩの化合物が、メタノール、エタノール、ブタノール、および／またはオクタノールの中から選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記式ＩＩＩの化合物が、初期基質のモル当たり、約０．５から約５０モルまでの様々な量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記式ＩＩＩの化合物が、基質のモル当たり、５モルの量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
カンジダからの前記リパーゼが、ＣＣＬとＣＡＬＢとから選択されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
カンジダからの前記リパーゼが、約１００から１００００００Ｕ／ｍｍｏｌまでの様々な量で存在することを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
カンジダからの前記リパーゼが、ＣＣＬの場合は約１０００から１００００００Ｕ／ｍｍｏｌに及ぶ量で存在し、ＣＡＬＢの場合は約１００から１０００００Ｕ／ｍｍｏｌに及ぶことを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
有機溶媒から結晶化するさらなるステップを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記結晶化溶媒が、ジイソプロピルエーテル、ｔｅｒブチルメチルエーテル、ジクロロメタン、ヘキサン、アセトン、エタノール、酢酸エチル、水、またはこれらの混合物の中から選択されることを特徴とする請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
反応温度が１０から４８℃の範囲内、好ましくは２０から３２℃の範囲内であることを特徴とする請求項１〜１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
図１に示されるＤＲＸ、および／または図２に示されるＤＳＣ、および／または図３に示されるＩＲを特徴とする結晶形態Ｉのコルテキソロン−１７α−プロピオネート。
【請求項１９】
図４に示されるＤＲＸ、および／または図５に示されるＤＳＣ、および／または図６に示されるＩＲを特徴とする結晶形態ＩＩのコルテキソロン−１７α−プロピオネート。
【請求項２０】
図７、１０、または１３に示されるＤＲＸ、および／または図８、１１、または１４に示されるＤＳＣ、および／または図９、１２、または１５に示されるＩＲを特徴とする結晶形態ＩＩＩのコルテキソロン−１７α−プロピオネート。
【請求項２１】
図２８に示されるＤＲＸ、および／または図２９に示されるＩＲを特徴とする結晶溶媒和物形態ＩＶのコルテキソロン−１７α−プロピオネート。
【請求項２２】
図１６、１９、２２、または２５に示されるＤＲＸ、および／または図１７、２０、２３、または２６に示されるＤＳＣ、および／または図１８、２１、２４、または２７に示されるＩＲを特徴とする結晶形態Ｉの９，１１−デヒドロ−コルテキソロン−１７α−ブタノエート。
【請求項２３】
請求項１８から２２に記載の結晶形態の少なくとも１種を、少なくとも１種の生理学的に許容される賦形剤と共に含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項２４】
固体、半固体、ペースト状、または液体形態にあることを特徴とする請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
錠剤、カプセル、粉末、ペレット、懸濁液、エマルジョン、溶液、クリーム、ゲル、軟膏、ローション、またはペーストの形をとることを特徴とする請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
泌尿生殖器系、内分泌系、皮膚、および／または皮膚付属器に影響を及ぼす病状を治療するためであることを特徴とする請求項１８から２２のいずれか一項に記載の結晶形態。
【請求項２７】
にきび、脂漏性皮膚炎、男性ホルモン性脱毛症、多毛症、良性前立腺過形成、前立腺癌の諸形態、男性避妊、多嚢胞性卵巣症候群、性的早熟症候群、および攻撃的または異常な性行動の制御を治療するためであることを特徴とする請求項２６に記載の結晶形態。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０】
【公表番号】特表２０１０−５３５１７３（Ｐ２０１０−５３５１７３Ａ）
【公表日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５１８６２８（Ｐ２０１０−５１８６２８）
【出願日】平成２０年７月２４日（２００８．７．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５９７０２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０１９１３８
【国際公開日】平成２１年２月１２日（２００９．２．１２）
【出願人】（５０４０４３８０８）コスモ・ソチエタ・ペル・アチオニ (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１１月１８日（２０１０．１１．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年７月２４日（２００８．７．２４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００８／０５９７０２
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０１９１３８
【国際公開日】平成２１年２月１２日（２００９．２．１２）
【出願人】（５０４０４３８０８）コスモ・ソチエタ・ペル・アチオニ (1)
【Ｆターム（参考）】
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