ビタミンアパタイト複合体
【課題】生体への吸収が容易であり、ビタミン単独を直接に投与するよりも大きな活性を発現させることのできるビタミンアパタイト複合体を提供すること。
【解決手段】アパタイトにビタミン及び／又はビタミン前駆体を吸着させて成ることを特徴とするビタミンアパタイト複合体。
【解決手段】アパタイトにビタミン及び／又はビタミン前駆体を吸着させて成ることを特徴とするビタミンアパタイト複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、ビタミンアパタイト複合体に関し、さらに詳しくは、生体への吸収が容易であり、ビタミン単独を直接に投与するよりも大きな活性を発現させることのできるビタミンアパタイト複合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、アパタイトは、その優れた有機分子吸着特性を活かした材料として、ガス吸着材、ウイルス吸着材、カラム材等に利用されている。また、医療分野への応用として、骨誘導タンパク（ＢＭＰ）等のたんぱく質をアパタイトに吸着させた骨補填材の開発が試みられている（非特許文献１、２の内容を要約した。）。
【０００３】
【非特許文献１】インターネット＜ＵＲＬ：http://www.jda.or.jp/text/no158.doc
【非特許文献２】青木秀希 「驚異の生体物質 アパタイト」発行所医歯薬出版株式会社,１９９９年９月２０日第１版第１刷発行
【０００４】
一方、ビタミンには様々な効果がある。ビタミンＡ（レチノール）は、視覚機能の維持、及び、皮膚、粘膜の維持等に必要なビタミンである。また、体内でビタミンＡに変化するベータカロチンは抗酸化作用がある。葉酸（別名ビタミンＭ）は、ＤＮＡの生成、修正に大きく関与する栄養素で、ＤＮＡ生成に働きかけると同時に、ＤＮＡの正確な作成にも関係している。葉酸は、ミスコピーされたＤＮＡを分解する酵素の働きを左右するため、癌予防の上でも重要な栄養素である。ビタミンＣは、コラーゲン産生の補助及び抗酸化物質として知られる栄養素である。ビタミンＤ、ビタミンＫは、骨形成に深く関わるビタミンとして知られ、活性型ビタミンＤ及びビタミンＫは骨粗しょう症の治療薬としても臨床応用されている。これらは、骨芽細胞の活性化に深く関与している。ビタミンＥは、代表的な抗酸化物質で、ビタミンＣと共に細胞を傷つける活性酸素を消去する働きを持つ（以上の内容は、非特許文献３、４、５の内容を要約した。）。
【０００５】
【非特許文献３】糸川嘉則,柴田克巳編,栄養・健康科学シリーズ 「栄養学総論」発行所 株式会社 南江堂,２００４年２月２０日第３版第２刷発行,第１１９,２２４,２２６,２３８,２２９,２４０頁
【非特許文献４】インターネット＜ＵＲＬ：http://www.ss.iij4u.or.jp/~ana/vitamin.htm
【非特許文献５】インターネット＜ＵＲＬ：http://www3.ocn.ne.jp/~eiyou-km/newpage69.htm
【０００６】
これらのビタミンは通常、経口で摂取される。ビタミンが受動輸送により、細胞内に吸収されるためには、ビタミンの大量摂取が必要であり、しかも、必要量以上のビタミンは排出されてしまう。ビタミンは高価であるから大量にビタミンが排出されることは経済的無駄である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
この発明は、大量のビタミン摂取を必要とすることなく、必要最少量のビタミンを細胞内に効率的に輸送することのできるビタミンアパタイト複合体を提供することを、課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するための手段として、
請求項１は、アパタイトにビタミン及び／又はビタミン前駆体を吸着させて成ることを特徴とするビタミンアパタイト複合体であり、
請求項２は、アパタイトが、水酸アパタイトである請求項１記載のビタミンアパタイト複合体であり、
請求項３は、ビタミンが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、及び、葉酸よりなる群から選択される少なくとも一種であり、ビタミン前駆体がベータカロチンである請求項１又は２に記載のビタミンアパタイト複合体であり、
請求項４は、ビタミンは、その吸着量がアパタイトに対して０．００５〜５質量％である請求項１〜３のいずれか一項に記載のビタミンアパタイト複合体である。
【発明の効果】
【０００９】
この発明によると、アパタイトをビタミン担体としているので、細胞内への吸収性に優れ、したがって、大量のビタミンを経口投与しなくても必要最少量のビタミンを効率よく細胞内に輸送することのできるビタミンアパタイト複合体を提供することができる。この発明のビタミンアパタイト複合体は、生体に対する悪影響が極めて小さい。アパタイトにビタミンが吸着されているので、投与時のビタミン量が殆ど浪費されることなく、細胞内に輸送されるので、細胞に必要な微量のビタミンを細胞に吸収させるために大量のビタミンを生体に投与するにも拘わらず必要量以上のビタミンが排泄されて無駄になるといった問題点が、この発明のビタミンアパタイト複合体により、解決される。
【００１０】
したがって、この発明のビタミンアパタイト複合体は高価なビタミンを浪費することがない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
この発明におけるアパタイトは、厳密な定義によると、組成式Ｍ１０（ＺＯ４）６Ｘ２で表されることができる。前記組成式において、Ｍは、Ｃａ２＋、Ｃｄ２＋、Ｓｒ２＋、Ｂａ２＋、Ｐｂ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｆｅ２＋、Ｒａ２＋、Ｈ＋、Ｈ３Ｏ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ａｌ３＋、Ｙ３＋、Ｃｅ３＋、Ｎｄ３＋、Ｋａ３＋、Ｃ３＋空隙等を示し、ＺＯ４は、ＰＯ４３＋、ＣＯ３２＋、ＣｒＯ４３＋、ＡｓＯ４３＋、ＶＯ４３−、ＵＯ４３−、ＳＯ４２−、ＳｉＯ４４−、ＧｅＯ４４−等を示し、Ｘは、ＯＨ−、ＯＤ−、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、ＢＯ２−、ＣＯ３−、Ｏ２−等を示す。この発明におけるアパタイトは、天然物及び合成物のいずれをも使用されることができる。天然に産出されるアパタイトとしては、リン灰石があり、リン灰石をこの発明におけるアパタイトとして使用可能である。また、天然物として産生するとは言えないかもしれないが、天然物なる用語を人工的に製造されたものではないという意味で使用するとすれば、天然のアパタイトとして生体アパタイトを挙げることができ、この生体アパタイトもまたこの発明におけるアパタイトとして使用可能である。この生体アパタイトとしては、例えば動物の歯又は骨から得ることのできるアパタイトを挙げることができる。人工合成されたアパタイトとしては、溶液法、固相法（乾式法）、水熱法、アルコキシド法（熱分解反応）、及びフラックス法等の方法により合成されたアパタイトを挙げることができる。
【００１２】
この発明においてはアパタイトとして水酸アパタイト及びフッ素アパタイトを好適例として挙げることができる。また、水酸アパタイトの中でも炭酸イオンを含有するアパタイトを炭酸含有水酸アパタイトと称され、この炭酸含有水酸アパタイトもまたこの発明におけるアパタイトとして好適に使用されることができる。
【００１３】
なお、水酸アパタイトは、ハイドロキシアパタイト、ハイドロオキシアパタイト、ヒドロキシアパタイト、ヒドロキシルアパタイト等と称されることがある。この発明においては、この発明の作用効果と同等の作用効果を奏することのできるアパタイト鉱物及びその外のものもまた、この発明におけるアパタイトの均等物である。
【００１４】
使用するアパタイトの形状としては、ビタミンを吸着させることができ、しかも生体に投与可能である限り、特に限定されるものではない。例えば、このビタミンアパタイト複合体を経口投与可能な錠剤にする場合、錠剤に形成可能な粉体となるようにアパタイトの形状を調製することが望ましい。このビタミンアパタイト複合体を経口投与可能な粉末剤にする場合には、水等に均一に分散可能な粉末としてアパタイトの形状を調製することが望ましい。このビタミンアパタイト複合体を経皮投与可能な粉体にする場合には、ナノオーダーの径を有する微粉末に調製することが望ましい。
【００１５】
いずれの形状にするにせよアパタイトの形態としては、平均粒径が０．０１〜２μｍ、好ましくは０．０３〜１μｍである粒子（これを一次粒子と称することがある。）、又は平均粒径が０．１〜５０μｍ、好ましくは１〜２５μｍであるところの、前記一次粒子が凝集して形成された粒子（これを二次粒子と称することがある。）を挙げることができる。
【００１６】
この発明におけるビタミンとしては、水溶性ビタミン、脂溶性ビタミンを挙げることができ、水溶性ビタミンとしてはビタミンＢ１（化学名：チアミン）、ビタミンＢ２（化学名：リボフラビン）、ビタミンＢ３（化学名：ニコチン酸）、ビタミンＢ４（化学名：アルギニン）、ビタミンＢ５（化学名：パントテン酸）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ８、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１０、ビタミンＢ１１、ビタミンＢ１２（化学名：コバラミン）、ビタミンＢ１３（化学名：オロット酸）、ビタミンＢ１４、ビタミンＢ１５、ビタミンＢ１７等のビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＨ、及び葉酸等を挙げることができ、脂溶性ビタミンとしては、ビタミンＡ１（化学名：レチノール）等のビタミンＡ、ビタミンＤ２（化学名：エルゴカルシフェロール）、ビタミンＤ３（化学名：コレカルシフェロール）、活性型ビタミンＤ３（化学名：カルシトリオール）等のビタミンＤ、ビタミンＥ（化学名：トコフェロール）、ビタミンＫ１（化学名：キロフェノン）、ビタミンＫ２（化学名：メナキニオン）等のビタミンＫ等を挙げることができる。なお、ビタミンＤ３は、肝臓で水酸化されて２５ビタミンＤ３(化学名：カルシフェジオール)になり、さらに腎臓で水酸化されて前記活性型ビタミンＤ３になり、いずれも作用する。
また、ビタミン前駆体（なお、ビタミン前駆体はプロビタミンと称されることもある。）はビタミンと同様にアパタイトに吸着されることができる。ビタミン前駆体としては、例えば、ビタミンＡの前駆体であるベータカロチンを挙げることができる。
【００１７】
前記各種のビタミンのうちいずれのビタミンを採用するかは、ビタミンアパタイト複合体に機能させようとする、生体に対する活性乃至生理作用に応じて適宜に決定されることができる。例えば、生体の視覚作用を維持し、上皮細胞例えば皮膚及び粘膜を正常に維持し、発育促進及び生命維持の生理作用をビタミンアパタイト複合体に発揮させようとするのであれば、アパタイトに吸着されるビタミンとして、ビタミンＡを選択するのがよい。ビタミンＡを含有するビタミンアパタイト複合体は、生体に投与されると、夜盲症の防止並びに皮膚及び粘膜の角化を防止することができる。また、小腸からカルシウムとリンとの吸収を促進し、カルシウム及びリンの代謝調節をし、骨及び歯にカルシウムの沈着を促進させようとするのであれば、アパタイトに吸着されるビタミンとして、ビタミンＤを選択するのがよい。ビタミンＤを含有するビタミンアパタイト複合体は、生体に投与されると、くる病、骨軟化症、骨粗鬆症等を防止することができる。例えば血液の凝固に関与している物質の産生を促進し、グルコースの代謝に関与し、骨タンパク質の形成に関与させようとするのであれば、アパタイトに吸着されるビタミンとして、ビタミンＫを選択するのがよい。ビタミンＫを含有するビタミンアパタイト複合体は、生体に投与されると、出血性疾患の治療に有効である。例えば生殖機能を正常に維持し、抗酸化作用を発揮して過酸化脂質の生成を防止し、筋肉の萎縮を防止させようとするのであれば、アパタイトに吸着されるビタミンとして、ビタミンＥを選択するのがよい。ビタミンＥを含有するビタミンアパタイト複合体は、生体に投与されると、不妊治療、溶血性貧血の治療に有効である。
【００１８】
上述したビタミンの生理作用については、例えば非特許文献３の第２２２〜２２３ページに記載の表１４−１に記載されているので、この非特許文献３の記載を参考にすることにより、アパタイトに吸着させるビタミンの種類を適宜に決定することができる。また、アパタイトに吸着させるビタミンは一種単独であっても、また、二種以上であってもよい。
【００１９】
ビタミンアパタイト複合体におけるビタミンの含有量は、ビタミンの種類により相違し、また、ビタミンの種類に応じて適宜に決定することができるのであって、通常の場合、アパタイトに対して０．００５〜５質量％であることが好ましい。
【００２０】
この発明に係るビタミンアパタイト複合体は、経口投与、経皮投与、静脈注射、皮下注射、座薬投与、体内埋め込みによる投与等の各種形態をもって、生体に投与される。したがって、ビタミンアパタイト複合体の投与の態様に応じた形態にビタミンアパタイト複合体が調製される。既に一部説明をしたように、経口投与可能なビタミンアパタイト複合体は、錠剤、粉末剤の形態にされ、経皮投与又は注射等の投与形態であればビタミンアパタイト複合体は微粉末、又は微粉末含有液の形態に調製される。ビタミンアパタイト複合体を座薬として投与する場合には、ビタミンアパタイト複合体を挿入可能な形状に成形してなる成形体とすればよい。
【００２１】
この発明に係るビタミンアパタイト複合体を生体に投与するときのその投与量は、ビタミンの種類に応じて適宜に決定される。
【００２２】
この発明に係るビタミンアパタイト複合体は、以下のように製造することができる。
【００２３】
アパタイトに吸着させるべく適宜に選択された一種又は二種以上のビタミンを適宜の溶媒に溶解し、ビタミン含有液を調製する。そのビタミン含有液におけるビタミンの濃度は、ビタミンアパタイト複合体が目指す目的に応じて決定されるが、通常は、１〜１０ｍｇ／ｍｌが好ましい。溶媒としては、ビタミンを溶解することができるのであれば、特に限定されなく、例えば水溶性ビタミンにおいては、水、及び水とアルコールとの混合物等の水性溶媒を挙げることができ、脂溶性ビタミンにおいては、キシレン、クロロホルム、メタノール、エタノール、アセトン等をあげることができる。さらには、ビタミンＤ３においては、エタノール、キシレン等が好ましく、活性型ビタミンＤ３においては、エタノール、メタノール等が好ましい、ベータカロチン、ビタミンＥ、ビタミンＫにおいては、アセトン等が好ましい。ビタミン含有液に適当量のアパタイトを添加し、混合し、次いで静置した後に、固液分離により液成分を除去することにより、固形分としてビタミンアパタイト複合体を得ることができる。前記の静置に要する時間は、適宜に決定することができる。ビタミン含有液とアパタイトとの混合に際し、必要に応じて加熱下に混合してもよい。前記の静置中に、ビタミン含有液を加熱してもよく、具体的には、加熱によりビタミン含有液を４０℃くらいまでに昇温してもよい。固液分離には遠心分離法、ろ過法等を適宜に採用することができる。
【００２４】
以下、実施例によりこの発明を具体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例】
【００２５】
（実施例１）
溶媒としてキシレン、クロロホルム、アセトン、ジメチルスルホキシドにビタミンＤ３（コレカルシフェロール）を１ｍｇ／ｍｌの濃度なるように溶解し、得られた溶液から採取された１ｍｌの溶液をガラス管に入れ、このガラス管内の溶液に水酸アパタイト（以下において単にアパタイトと称する。）０．１gを添加した。添加後に、ガラス管を室温にて５分間静置した。５分が経過した後、そのガラス管を遠心分離機に装着してガラス管内の内容物を遠心分離した。ガラス管内の上澄み液に含まれるビタミンＤ３の含有量を、高速液体クロマトグラフィー（HPLC,HITACHI L-2420 UV-VIS Detector）により測定した。前記溶液中に含まれるビタミンＤ３の全体量から上澄み液中に含まれていたビタミンＤ３の含有量を差し引くことにより、アパタイトに吸着されたビタミンＤ３の吸着量を定量した。またビタミンが吸着されるアパタイトには、加焼しなかったアパタイト（１次粒子径０．０５〜１μm、２次粒子径１５〜３５μｍ）と、５００℃で２時間の加焼を行ったアパタイト（１次粒子径０．５〜３μm、２次粒子径２０〜５０μm）との２種類を用いた。
【００２６】
キシレンを用いて得られた溶液を用いるとビタミンＤ３は０．１５８質量％の割合でアパタイトに吸着され、また、クロロホルムを用いて得られた溶液を用いるとビタミンＤ３は０．０９１質量％の割合でアパタイトに吸着され、他の溶媒を用いた場合には吸着量は検出限界以下であった。また、加焼されたアパタイトと加焼されていないアパタイトとでは、ビタミンの吸着量に差が見られなかった。
【００２７】
これらの結果から、溶媒を適切に選択することによりビタミンがアパタイトに吸着されることが、理解される。
【００２８】
（実施例２）
ビタミンとして２５ビタミンＤ３（化学名：カルシフェジオール）を採用し、ビタミンを溶解する溶媒としてキシレン、クロロホルム、アセトン、及びジメチルスルホキシドの代わりにキシレン、クロロホルム、メタノール、アセトン、及びジメチルスルホキシドを採用する他は、前記実施例１と同様に実施した。
【００２９】
その結果、溶媒としてメタノールを用いたときには、アパタイトにビタミンが０．１２質量％の割合で吸着した。キシレン、クロロホルムには２５ビタミンＤ３は不溶であり、他の溶媒では吸着量は検出限界以下であった。また、加焼されたアパタイトと加焼されていないアパタイトとでは、ビタミンの吸着量に差が見られなかった。
【００３０】
これらの結果から、溶媒を適切に選択することによりビタミンがアパタイトに吸着されることが、理解される。
【００３１】
（実施例３）
吸着条件（温度・時間）を変えることによる、キシレン溶媒に溶解したビタミンＤ３（化学名：コレカルシフェロール）のアパタイトへの吸着量を、測定した。すなわち、溶媒としてキシレンを選択し、５分間の静置時間から種々の時間の静置時間に変化させ、また静置時の温度を常温から４〜３７℃の種々の静置時温度に変えた他は、前記実施例１と同様に実施した。
【００３２】
その結果として、静置中の前記溶液の温度を４〜３７℃のいずれの温度に維持した場合には、０．０８０〜０．１７６質量％の範囲でアパタイトにビタミンの吸着が見られた。しかしながら、前記溶液を５０℃に維持しながら静置したときには、アパタイトへのビタミンの吸着は認められなかった。また、吸着時間に応じた吸着量の差異が認められなかった。また、加焼されたアパタイトと加焼されていないアパタイトとでは、ビタミンの吸着量に差が見られなかった。
【００３３】
（実施例４）
溶媒としてキシレンを用いて前記実施例１と同様にして、加焼なしアパタイトにビタミンＤ３を０．１５質量％の割合で吸着してなるビタミンアパタイト複合体を製造した。このビタミンアパタイト複合体１００ｍｇを１ｍｌの生理食塩水に浸漬し、そのまま３７℃の温度に維持しつつビタミンアパタイト複合体含有の生理食塩水を静置した。２４時間後、及び４８時間後に、前記ビタミンアパタイト複合体含有の生理食塩水中に遊離しているビタミンＤ３を、ＨＰＬＣにて測定した。そして当初にアパタイトに欠乏したビタミンＤ３量から、生理食塩水中に遊離したビタミンＤ３の量を差し引くことにより、ビタミンＤ３の溶出量を、測定した。
【００３４】
その結果、アパタイトからのビタミンＤ３の溶出量は、２４時間後、及び４８時間後のいずれにおいても検出限界以下であった。このことは、アパタイトにビタミンＤ３が安定的に吸着していることを示すと考えられる。
【００３５】
（実施例５）
前記実施例１における手順に沿って製造されたところの、ビタミンＤ３の吸着量が０．４μｇであるビタミンアパタイト複合体０．１ｍｇを使用して、これとは別に、アパタイトに吸着させることなく、かつアパタイトとを併用することなくビタミンＤ３０．４μｇを使用して、又、ビタミンＤ３を吸着も並存もさせない状態にあるアパタイト０．１ｍｇを使用して、マウス由来骨芽細胞(ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１)の各試料に対するアルカリフォスファターゼ活性を測定した。
【００３６】
ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞２万個を各ウエルに培地とともに入れ、インキュベータ内にて、３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％雰囲気にて、静置する。２４時間後、培地を新しいものに取替え、各試料を入れて、再び前述と同様の雰囲気にて培養を行なった。４８時間後に各試料におけるアルカリフォスファターゼ活性を測定した。測定には、和光純薬製ラボアッセイを用い、吸光度測定にはBioRad社製model680を用いて、波長には４０５ｎｍを使用した。結果を図１に示した。
【００３７】
図１より、ビタミンアパタイト複合体は他の試料に比べてアルカリフォスファターゼ活性が最も高いことがわかり、骨形成能が高いことがわかる。
【００３８】
（実施例６）
ベータカロチン、ビタミンＥ、ビタミンＫ２それぞれをキシレンに溶かし、また、ベータカロチン、ビタミンＥ、ビタミンＫ２それぞれをアセトンに溶かし、得られたそれぞれの６試料につき、実施例１に準じた操作を行ってアパタイトに対する吸着量を測定した。
【００３９】
その結果、アセトンに溶解した試料につき、ベータカロチン及びビタミンＥは検出限界以下であり、ビタミンＫ２は０．１７〜０．２１質量％の吸着量であり、キシレンに溶解した試料につき、ベータカロチンは０．２０〜０．２５質量％、ビタミンＥは０．０１〜０．０３質量％の吸着量であり、ビタミンＫ２はＨＰＬＣ波形のピークが分裂して正確な測定ができなかった。
【００４０】
（実施例７）
ビタミンＤ３、２５ビタミンＤ３、ビタミンＫ２それぞれを、メタノール、エタノール、アセトンそれぞれに添加した。ビタミンＫ２はエタノール及びメタノールに溶解しなかった。結局、前記三種の溶媒それぞれにビタミンそれぞれを溶解して１．０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する７種のビタミン含有液を調製した。これらのビタミン含有液１．０ｍｌとアパタイト１００ｍｇとを各別にマイクロチューブに入れ、２０℃の温度に維持しつつ混合した。１０分後、前記マイクロチューブ内に窒素ガスを導入して溶媒を除去し、その後に除去した溶媒と同じ溶媒１．０ｍｌを新たに入れ、アパタイトに吸着されなかったビタミンを溶媒中に溶解した。さらに１０分経過後に、上澄みの各ビタミン濃度（Ｃ１）を測定した。また、吸着操作中のビタミンの劣化を考慮するために、あらかじめ、コントロールとして、同濃度のビタミン溶液を収容するマイクロチューブ内に窒素ガスを導入して溶媒を除去し、更にこのマイクロチューブ内に除去した溶媒と同じ溶媒を１．０ｍｌ入れ、そのときのマイクロチューブ内のビタミン濃度（Ｃ２）を測定し、Ｃ２−Ｃ1をアパタイトへの吸着量とした。
【００４１】
その結果、エタノールを使用した試料につき、ビタミンＤ３は０．２２〜０．３２質量％、２５ビタミンＤ３は０．６２〜０．７３質量％、ビタミンＫ２は不溶であり、メタノールを使用した試料につき、ビタミンＤ３は０．２０〜０．２５質量％、２５ビタミンＤ３は０．２７〜０．３７質量％、ビタミンＫ２は不溶であり、アセトンを使用した試料につき、ビタミンＤ３は検出限界以下であり、２５ビタミンＤ３も検出限界以下であり、ビタミンＫ２は０．６２〜０．７５質量％であった。
【００４２】
（実施例８）
ビタミンＣを蒸留水に溶かし、１．０ｍｇ／ｍｌ、５．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌのビタミンＣ溶液それぞれにアパタイト０．１ｇを浸漬し、実施例１に準じた操作を行ってアパタイトの吸着量を測定した。
【００４３】
その結果、濃度に比例して吸着量が増加し、アパタイトに対して、ビタミンＣは１ｍｇ／ｍｌ溶液につき０．０３〜０．０６質量％、５．０ｍｇ／ｍｌ溶液につき０．６１〜０．８５質量％、また１０ｍｇ／ｍｌ溶液につき２．５〜４．２質量％の吸着量を示した。
【００４４】
これらの結果から、ビタミンの種類によりアパタイトに対する吸着量が相違することが明らかになった。
【００４５】
（実施例９）
アパタイト及びアルミナ粉末に対する細胞の活性度を調べた。ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞二万個を各ウエルに培地とともに入れ、アパタイト及びアルミナ粉末それぞれを０．１ｍｇ／ｍｌを添加し、インキュベータ内にて、３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％雰囲気にて、静置する。細胞活性度の測定には、ＭＴＴ法（テトラゾリウム塩染色法）を用いた。ＭＴＴ法とは１９８３年にＭｏｓｍａｎｎにより開発された細胞の呼吸数を調べる方法である。この呼吸数が細胞の活性度を表す。試料添加後、１日、２日、４日、７日に呼吸度を、５７０ｎｍの測定波長にて測定した。
【００４６】
図２より、アルミナに比べてアパタイトのほうが細胞に効果的に取り込まれ、しかも、細胞活性度の高いことがわかる。
（実施例１０）
この実施例はビタミンアパタイト複合体のビタミン徐放性に関する。前記実施例４と同様の方法により２５ビタミンＤ３をアパタイトに吸着させてなるビタミンアパタイト複合体（溶媒としてエタノールを使用）、及びビタミンＫ２をアパタイトに吸着させてなるビタミンアパタイト複合体（溶媒としてアセトンを使用）を生理食塩水に浸漬してビタミンの徐放性を測定した。
２４時間が経過してもこれら２種のビタミンアパタイト複合体にあってはビタミンは検出限界以下であり、４８時間後には、２５ビタミンＤ３を吸着させてなるビタミンアパタイト複合体からの２５ビタミンＤ３の遊離量は０．１９〜０．２３質量％であり、ビタミンＫ２を吸着させてなるビタミンアパタイト複合体からのビタミンＫ２の遊離量は０．１４〜０．１９質量％であった。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】図１は、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞のコレカルシフェロール−アパタイト複合体、アパタイト、コレカルシフェロールに対するアルカリフォスファターゼ活性を示した図である。
【図２】図２は、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞のアパタイト及びアルミナに対する細胞活性度を示した図である。
【技術分野】
【０００１】
この発明は、ビタミンアパタイト複合体に関し、さらに詳しくは、生体への吸収が容易であり、ビタミン単独を直接に投与するよりも大きな活性を発現させることのできるビタミンアパタイト複合体に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、アパタイトは、その優れた有機分子吸着特性を活かした材料として、ガス吸着材、ウイルス吸着材、カラム材等に利用されている。また、医療分野への応用として、骨誘導タンパク（ＢＭＰ）等のたんぱく質をアパタイトに吸着させた骨補填材の開発が試みられている（非特許文献１、２の内容を要約した。）。
【０００３】
【非特許文献１】インターネット＜ＵＲＬ：http://www.jda.or.jp/text/no158.doc
【非特許文献２】青木秀希 「驚異の生体物質 アパタイト」発行所医歯薬出版株式会社,１９９９年９月２０日第１版第１刷発行
【０００４】
一方、ビタミンには様々な効果がある。ビタミンＡ（レチノール）は、視覚機能の維持、及び、皮膚、粘膜の維持等に必要なビタミンである。また、体内でビタミンＡに変化するベータカロチンは抗酸化作用がある。葉酸（別名ビタミンＭ）は、ＤＮＡの生成、修正に大きく関与する栄養素で、ＤＮＡ生成に働きかけると同時に、ＤＮＡの正確な作成にも関係している。葉酸は、ミスコピーされたＤＮＡを分解する酵素の働きを左右するため、癌予防の上でも重要な栄養素である。ビタミンＣは、コラーゲン産生の補助及び抗酸化物質として知られる栄養素である。ビタミンＤ、ビタミンＫは、骨形成に深く関わるビタミンとして知られ、活性型ビタミンＤ及びビタミンＫは骨粗しょう症の治療薬としても臨床応用されている。これらは、骨芽細胞の活性化に深く関与している。ビタミンＥは、代表的な抗酸化物質で、ビタミンＣと共に細胞を傷つける活性酸素を消去する働きを持つ（以上の内容は、非特許文献３、４、５の内容を要約した。）。
【０００５】
【非特許文献３】糸川嘉則,柴田克巳編,栄養・健康科学シリーズ 「栄養学総論」発行所 株式会社 南江堂,２００４年２月２０日第３版第２刷発行,第１１９,２２４,２２６,２３８,２２９,２４０頁
【非特許文献４】インターネット＜ＵＲＬ：http://www.ss.iij4u.or.jp/~ana/vitamin.htm
【非特許文献５】インターネット＜ＵＲＬ：http://www3.ocn.ne.jp/~eiyou-km/newpage69.htm
【０００６】
これらのビタミンは通常、経口で摂取される。ビタミンが受動輸送により、細胞内に吸収されるためには、ビタミンの大量摂取が必要であり、しかも、必要量以上のビタミンは排出されてしまう。ビタミンは高価であるから大量にビタミンが排出されることは経済的無駄である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
この発明は、大量のビタミン摂取を必要とすることなく、必要最少量のビタミンを細胞内に効率的に輸送することのできるビタミンアパタイト複合体を提供することを、課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
前記課題を解決するための手段として、
請求項１は、アパタイトにビタミン及び／又はビタミン前駆体を吸着させて成ることを特徴とするビタミンアパタイト複合体であり、
請求項２は、アパタイトが、水酸アパタイトである請求項１記載のビタミンアパタイト複合体であり、
請求項３は、ビタミンが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、及び、葉酸よりなる群から選択される少なくとも一種であり、ビタミン前駆体がベータカロチンである請求項１又は２に記載のビタミンアパタイト複合体であり、
請求項４は、ビタミンは、その吸着量がアパタイトに対して０．００５〜５質量％である請求項１〜３のいずれか一項に記載のビタミンアパタイト複合体である。
【発明の効果】
【０００９】
この発明によると、アパタイトをビタミン担体としているので、細胞内への吸収性に優れ、したがって、大量のビタミンを経口投与しなくても必要最少量のビタミンを効率よく細胞内に輸送することのできるビタミンアパタイト複合体を提供することができる。この発明のビタミンアパタイト複合体は、生体に対する悪影響が極めて小さい。アパタイトにビタミンが吸着されているので、投与時のビタミン量が殆ど浪費されることなく、細胞内に輸送されるので、細胞に必要な微量のビタミンを細胞に吸収させるために大量のビタミンを生体に投与するにも拘わらず必要量以上のビタミンが排泄されて無駄になるといった問題点が、この発明のビタミンアパタイト複合体により、解決される。
【００１０】
したがって、この発明のビタミンアパタイト複合体は高価なビタミンを浪費することがない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
この発明におけるアパタイトは、厳密な定義によると、組成式Ｍ１０（ＺＯ４）６Ｘ２で表されることができる。前記組成式において、Ｍは、Ｃａ２＋、Ｃｄ２＋、Ｓｒ２＋、Ｂａ２＋、Ｐｂ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋、Ｍｎ２＋、Ｆｅ２＋、Ｒａ２＋、Ｈ＋、Ｈ３Ｏ＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、Ａｌ３＋、Ｙ３＋、Ｃｅ３＋、Ｎｄ３＋、Ｋａ３＋、Ｃ３＋空隙等を示し、ＺＯ４は、ＰＯ４３＋、ＣＯ３２＋、ＣｒＯ４３＋、ＡｓＯ４３＋、ＶＯ４３−、ＵＯ４３−、ＳＯ４２−、ＳｉＯ４４−、ＧｅＯ４４−等を示し、Ｘは、ＯＨ−、ＯＤ−、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、ＢＯ２−、ＣＯ３−、Ｏ２−等を示す。この発明におけるアパタイトは、天然物及び合成物のいずれをも使用されることができる。天然に産出されるアパタイトとしては、リン灰石があり、リン灰石をこの発明におけるアパタイトとして使用可能である。また、天然物として産生するとは言えないかもしれないが、天然物なる用語を人工的に製造されたものではないという意味で使用するとすれば、天然のアパタイトとして生体アパタイトを挙げることができ、この生体アパタイトもまたこの発明におけるアパタイトとして使用可能である。この生体アパタイトとしては、例えば動物の歯又は骨から得ることのできるアパタイトを挙げることができる。人工合成されたアパタイトとしては、溶液法、固相法（乾式法）、水熱法、アルコキシド法（熱分解反応）、及びフラックス法等の方法により合成されたアパタイトを挙げることができる。
【００１２】
この発明においてはアパタイトとして水酸アパタイト及びフッ素アパタイトを好適例として挙げることができる。また、水酸アパタイトの中でも炭酸イオンを含有するアパタイトを炭酸含有水酸アパタイトと称され、この炭酸含有水酸アパタイトもまたこの発明におけるアパタイトとして好適に使用されることができる。
【００１３】
なお、水酸アパタイトは、ハイドロキシアパタイト、ハイドロオキシアパタイト、ヒドロキシアパタイト、ヒドロキシルアパタイト等と称されることがある。この発明においては、この発明の作用効果と同等の作用効果を奏することのできるアパタイト鉱物及びその外のものもまた、この発明におけるアパタイトの均等物である。
【００１４】
使用するアパタイトの形状としては、ビタミンを吸着させることができ、しかも生体に投与可能である限り、特に限定されるものではない。例えば、このビタミンアパタイト複合体を経口投与可能な錠剤にする場合、錠剤に形成可能な粉体となるようにアパタイトの形状を調製することが望ましい。このビタミンアパタイト複合体を経口投与可能な粉末剤にする場合には、水等に均一に分散可能な粉末としてアパタイトの形状を調製することが望ましい。このビタミンアパタイト複合体を経皮投与可能な粉体にする場合には、ナノオーダーの径を有する微粉末に調製することが望ましい。
【００１５】
いずれの形状にするにせよアパタイトの形態としては、平均粒径が０．０１〜２μｍ、好ましくは０．０３〜１μｍである粒子（これを一次粒子と称することがある。）、又は平均粒径が０．１〜５０μｍ、好ましくは１〜２５μｍであるところの、前記一次粒子が凝集して形成された粒子（これを二次粒子と称することがある。）を挙げることができる。
【００１６】
この発明におけるビタミンとしては、水溶性ビタミン、脂溶性ビタミンを挙げることができ、水溶性ビタミンとしてはビタミンＢ１（化学名：チアミン）、ビタミンＢ２（化学名：リボフラビン）、ビタミンＢ３（化学名：ニコチン酸）、ビタミンＢ４（化学名：アルギニン）、ビタミンＢ５（化学名：パントテン酸）、ビタミンＢ６、ビタミンＢ７、ビタミンＢ８、ビタミンＢ９、ビタミンＢ１０、ビタミンＢ１１、ビタミンＢ１２（化学名：コバラミン）、ビタミンＢ１３（化学名：オロット酸）、ビタミンＢ１４、ビタミンＢ１５、ビタミンＢ１７等のビタミンＢ、ビタミンＣ、ビタミンＨ、及び葉酸等を挙げることができ、脂溶性ビタミンとしては、ビタミンＡ１（化学名：レチノール）等のビタミンＡ、ビタミンＤ２（化学名：エルゴカルシフェロール）、ビタミンＤ３（化学名：コレカルシフェロール）、活性型ビタミンＤ３（化学名：カルシトリオール）等のビタミンＤ、ビタミンＥ（化学名：トコフェロール）、ビタミンＫ１（化学名：キロフェノン）、ビタミンＫ２（化学名：メナキニオン）等のビタミンＫ等を挙げることができる。なお、ビタミンＤ３は、肝臓で水酸化されて２５ビタミンＤ３(化学名：カルシフェジオール)になり、さらに腎臓で水酸化されて前記活性型ビタミンＤ３になり、いずれも作用する。
また、ビタミン前駆体（なお、ビタミン前駆体はプロビタミンと称されることもある。）はビタミンと同様にアパタイトに吸着されることができる。ビタミン前駆体としては、例えば、ビタミンＡの前駆体であるベータカロチンを挙げることができる。
【００１７】
前記各種のビタミンのうちいずれのビタミンを採用するかは、ビタミンアパタイト複合体に機能させようとする、生体に対する活性乃至生理作用に応じて適宜に決定されることができる。例えば、生体の視覚作用を維持し、上皮細胞例えば皮膚及び粘膜を正常に維持し、発育促進及び生命維持の生理作用をビタミンアパタイト複合体に発揮させようとするのであれば、アパタイトに吸着されるビタミンとして、ビタミンＡを選択するのがよい。ビタミンＡを含有するビタミンアパタイト複合体は、生体に投与されると、夜盲症の防止並びに皮膚及び粘膜の角化を防止することができる。また、小腸からカルシウムとリンとの吸収を促進し、カルシウム及びリンの代謝調節をし、骨及び歯にカルシウムの沈着を促進させようとするのであれば、アパタイトに吸着されるビタミンとして、ビタミンＤを選択するのがよい。ビタミンＤを含有するビタミンアパタイト複合体は、生体に投与されると、くる病、骨軟化症、骨粗鬆症等を防止することができる。例えば血液の凝固に関与している物質の産生を促進し、グルコースの代謝に関与し、骨タンパク質の形成に関与させようとするのであれば、アパタイトに吸着されるビタミンとして、ビタミンＫを選択するのがよい。ビタミンＫを含有するビタミンアパタイト複合体は、生体に投与されると、出血性疾患の治療に有効である。例えば生殖機能を正常に維持し、抗酸化作用を発揮して過酸化脂質の生成を防止し、筋肉の萎縮を防止させようとするのであれば、アパタイトに吸着されるビタミンとして、ビタミンＥを選択するのがよい。ビタミンＥを含有するビタミンアパタイト複合体は、生体に投与されると、不妊治療、溶血性貧血の治療に有効である。
【００１８】
上述したビタミンの生理作用については、例えば非特許文献３の第２２２〜２２３ページに記載の表１４−１に記載されているので、この非特許文献３の記載を参考にすることにより、アパタイトに吸着させるビタミンの種類を適宜に決定することができる。また、アパタイトに吸着させるビタミンは一種単独であっても、また、二種以上であってもよい。
【００１９】
ビタミンアパタイト複合体におけるビタミンの含有量は、ビタミンの種類により相違し、また、ビタミンの種類に応じて適宜に決定することができるのであって、通常の場合、アパタイトに対して０．００５〜５質量％であることが好ましい。
【００２０】
この発明に係るビタミンアパタイト複合体は、経口投与、経皮投与、静脈注射、皮下注射、座薬投与、体内埋め込みによる投与等の各種形態をもって、生体に投与される。したがって、ビタミンアパタイト複合体の投与の態様に応じた形態にビタミンアパタイト複合体が調製される。既に一部説明をしたように、経口投与可能なビタミンアパタイト複合体は、錠剤、粉末剤の形態にされ、経皮投与又は注射等の投与形態であればビタミンアパタイト複合体は微粉末、又は微粉末含有液の形態に調製される。ビタミンアパタイト複合体を座薬として投与する場合には、ビタミンアパタイト複合体を挿入可能な形状に成形してなる成形体とすればよい。
【００２１】
この発明に係るビタミンアパタイト複合体を生体に投与するときのその投与量は、ビタミンの種類に応じて適宜に決定される。
【００２２】
この発明に係るビタミンアパタイト複合体は、以下のように製造することができる。
【００２３】
アパタイトに吸着させるべく適宜に選択された一種又は二種以上のビタミンを適宜の溶媒に溶解し、ビタミン含有液を調製する。そのビタミン含有液におけるビタミンの濃度は、ビタミンアパタイト複合体が目指す目的に応じて決定されるが、通常は、１〜１０ｍｇ／ｍｌが好ましい。溶媒としては、ビタミンを溶解することができるのであれば、特に限定されなく、例えば水溶性ビタミンにおいては、水、及び水とアルコールとの混合物等の水性溶媒を挙げることができ、脂溶性ビタミンにおいては、キシレン、クロロホルム、メタノール、エタノール、アセトン等をあげることができる。さらには、ビタミンＤ３においては、エタノール、キシレン等が好ましく、活性型ビタミンＤ３においては、エタノール、メタノール等が好ましい、ベータカロチン、ビタミンＥ、ビタミンＫにおいては、アセトン等が好ましい。ビタミン含有液に適当量のアパタイトを添加し、混合し、次いで静置した後に、固液分離により液成分を除去することにより、固形分としてビタミンアパタイト複合体を得ることができる。前記の静置に要する時間は、適宜に決定することができる。ビタミン含有液とアパタイトとの混合に際し、必要に応じて加熱下に混合してもよい。前記の静置中に、ビタミン含有液を加熱してもよく、具体的には、加熱によりビタミン含有液を４０℃くらいまでに昇温してもよい。固液分離には遠心分離法、ろ過法等を適宜に採用することができる。
【００２４】
以下、実施例によりこの発明を具体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例】
【００２５】
（実施例１）
溶媒としてキシレン、クロロホルム、アセトン、ジメチルスルホキシドにビタミンＤ３（コレカルシフェロール）を１ｍｇ／ｍｌの濃度なるように溶解し、得られた溶液から採取された１ｍｌの溶液をガラス管に入れ、このガラス管内の溶液に水酸アパタイト（以下において単にアパタイトと称する。）０．１gを添加した。添加後に、ガラス管を室温にて５分間静置した。５分が経過した後、そのガラス管を遠心分離機に装着してガラス管内の内容物を遠心分離した。ガラス管内の上澄み液に含まれるビタミンＤ３の含有量を、高速液体クロマトグラフィー（HPLC,HITACHI L-2420 UV-VIS Detector）により測定した。前記溶液中に含まれるビタミンＤ３の全体量から上澄み液中に含まれていたビタミンＤ３の含有量を差し引くことにより、アパタイトに吸着されたビタミンＤ３の吸着量を定量した。またビタミンが吸着されるアパタイトには、加焼しなかったアパタイト（１次粒子径０．０５〜１μm、２次粒子径１５〜３５μｍ）と、５００℃で２時間の加焼を行ったアパタイト（１次粒子径０．５〜３μm、２次粒子径２０〜５０μm）との２種類を用いた。
【００２６】
キシレンを用いて得られた溶液を用いるとビタミンＤ３は０．１５８質量％の割合でアパタイトに吸着され、また、クロロホルムを用いて得られた溶液を用いるとビタミンＤ３は０．０９１質量％の割合でアパタイトに吸着され、他の溶媒を用いた場合には吸着量は検出限界以下であった。また、加焼されたアパタイトと加焼されていないアパタイトとでは、ビタミンの吸着量に差が見られなかった。
【００２７】
これらの結果から、溶媒を適切に選択することによりビタミンがアパタイトに吸着されることが、理解される。
【００２８】
（実施例２）
ビタミンとして２５ビタミンＤ３（化学名：カルシフェジオール）を採用し、ビタミンを溶解する溶媒としてキシレン、クロロホルム、アセトン、及びジメチルスルホキシドの代わりにキシレン、クロロホルム、メタノール、アセトン、及びジメチルスルホキシドを採用する他は、前記実施例１と同様に実施した。
【００２９】
その結果、溶媒としてメタノールを用いたときには、アパタイトにビタミンが０．１２質量％の割合で吸着した。キシレン、クロロホルムには２５ビタミンＤ３は不溶であり、他の溶媒では吸着量は検出限界以下であった。また、加焼されたアパタイトと加焼されていないアパタイトとでは、ビタミンの吸着量に差が見られなかった。
【００３０】
これらの結果から、溶媒を適切に選択することによりビタミンがアパタイトに吸着されることが、理解される。
【００３１】
（実施例３）
吸着条件（温度・時間）を変えることによる、キシレン溶媒に溶解したビタミンＤ３（化学名：コレカルシフェロール）のアパタイトへの吸着量を、測定した。すなわち、溶媒としてキシレンを選択し、５分間の静置時間から種々の時間の静置時間に変化させ、また静置時の温度を常温から４〜３７℃の種々の静置時温度に変えた他は、前記実施例１と同様に実施した。
【００３２】
その結果として、静置中の前記溶液の温度を４〜３７℃のいずれの温度に維持した場合には、０．０８０〜０．１７６質量％の範囲でアパタイトにビタミンの吸着が見られた。しかしながら、前記溶液を５０℃に維持しながら静置したときには、アパタイトへのビタミンの吸着は認められなかった。また、吸着時間に応じた吸着量の差異が認められなかった。また、加焼されたアパタイトと加焼されていないアパタイトとでは、ビタミンの吸着量に差が見られなかった。
【００３３】
（実施例４）
溶媒としてキシレンを用いて前記実施例１と同様にして、加焼なしアパタイトにビタミンＤ３を０．１５質量％の割合で吸着してなるビタミンアパタイト複合体を製造した。このビタミンアパタイト複合体１００ｍｇを１ｍｌの生理食塩水に浸漬し、そのまま３７℃の温度に維持しつつビタミンアパタイト複合体含有の生理食塩水を静置した。２４時間後、及び４８時間後に、前記ビタミンアパタイト複合体含有の生理食塩水中に遊離しているビタミンＤ３を、ＨＰＬＣにて測定した。そして当初にアパタイトに欠乏したビタミンＤ３量から、生理食塩水中に遊離したビタミンＤ３の量を差し引くことにより、ビタミンＤ３の溶出量を、測定した。
【００３４】
その結果、アパタイトからのビタミンＤ３の溶出量は、２４時間後、及び４８時間後のいずれにおいても検出限界以下であった。このことは、アパタイトにビタミンＤ３が安定的に吸着していることを示すと考えられる。
【００３５】
（実施例５）
前記実施例１における手順に沿って製造されたところの、ビタミンＤ３の吸着量が０．４μｇであるビタミンアパタイト複合体０．１ｍｇを使用して、これとは別に、アパタイトに吸着させることなく、かつアパタイトとを併用することなくビタミンＤ３０．４μｇを使用して、又、ビタミンＤ３を吸着も並存もさせない状態にあるアパタイト０．１ｍｇを使用して、マウス由来骨芽細胞(ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１)の各試料に対するアルカリフォスファターゼ活性を測定した。
【００３６】
ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞２万個を各ウエルに培地とともに入れ、インキュベータ内にて、３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％雰囲気にて、静置する。２４時間後、培地を新しいものに取替え、各試料を入れて、再び前述と同様の雰囲気にて培養を行なった。４８時間後に各試料におけるアルカリフォスファターゼ活性を測定した。測定には、和光純薬製ラボアッセイを用い、吸光度測定にはBioRad社製model680を用いて、波長には４０５ｎｍを使用した。結果を図１に示した。
【００３７】
図１より、ビタミンアパタイト複合体は他の試料に比べてアルカリフォスファターゼ活性が最も高いことがわかり、骨形成能が高いことがわかる。
【００３８】
（実施例６）
ベータカロチン、ビタミンＥ、ビタミンＫ２それぞれをキシレンに溶かし、また、ベータカロチン、ビタミンＥ、ビタミンＫ２それぞれをアセトンに溶かし、得られたそれぞれの６試料につき、実施例１に準じた操作を行ってアパタイトに対する吸着量を測定した。
【００３９】
その結果、アセトンに溶解した試料につき、ベータカロチン及びビタミンＥは検出限界以下であり、ビタミンＫ２は０．１７〜０．２１質量％の吸着量であり、キシレンに溶解した試料につき、ベータカロチンは０．２０〜０．２５質量％、ビタミンＥは０．０１〜０．０３質量％の吸着量であり、ビタミンＫ２はＨＰＬＣ波形のピークが分裂して正確な測定ができなかった。
【００４０】
（実施例７）
ビタミンＤ３、２５ビタミンＤ３、ビタミンＫ２それぞれを、メタノール、エタノール、アセトンそれぞれに添加した。ビタミンＫ２はエタノール及びメタノールに溶解しなかった。結局、前記三種の溶媒それぞれにビタミンそれぞれを溶解して１．０ｍｇ／ｍｌの濃度を有する７種のビタミン含有液を調製した。これらのビタミン含有液１．０ｍｌとアパタイト１００ｍｇとを各別にマイクロチューブに入れ、２０℃の温度に維持しつつ混合した。１０分後、前記マイクロチューブ内に窒素ガスを導入して溶媒を除去し、その後に除去した溶媒と同じ溶媒１．０ｍｌを新たに入れ、アパタイトに吸着されなかったビタミンを溶媒中に溶解した。さらに１０分経過後に、上澄みの各ビタミン濃度（Ｃ１）を測定した。また、吸着操作中のビタミンの劣化を考慮するために、あらかじめ、コントロールとして、同濃度のビタミン溶液を収容するマイクロチューブ内に窒素ガスを導入して溶媒を除去し、更にこのマイクロチューブ内に除去した溶媒と同じ溶媒を１．０ｍｌ入れ、そのときのマイクロチューブ内のビタミン濃度（Ｃ２）を測定し、Ｃ２−Ｃ1をアパタイトへの吸着量とした。
【００４１】
その結果、エタノールを使用した試料につき、ビタミンＤ３は０．２２〜０．３２質量％、２５ビタミンＤ３は０．６２〜０．７３質量％、ビタミンＫ２は不溶であり、メタノールを使用した試料につき、ビタミンＤ３は０．２０〜０．２５質量％、２５ビタミンＤ３は０．２７〜０．３７質量％、ビタミンＫ２は不溶であり、アセトンを使用した試料につき、ビタミンＤ３は検出限界以下であり、２５ビタミンＤ３も検出限界以下であり、ビタミンＫ２は０．６２〜０．７５質量％であった。
【００４２】
（実施例８）
ビタミンＣを蒸留水に溶かし、１．０ｍｇ／ｍｌ、５．０ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌのビタミンＣ溶液それぞれにアパタイト０．１ｇを浸漬し、実施例１に準じた操作を行ってアパタイトの吸着量を測定した。
【００４３】
その結果、濃度に比例して吸着量が増加し、アパタイトに対して、ビタミンＣは１ｍｇ／ｍｌ溶液につき０．０３〜０．０６質量％、５．０ｍｇ／ｍｌ溶液につき０．６１〜０．８５質量％、また１０ｍｇ／ｍｌ溶液につき２．５〜４．２質量％の吸着量を示した。
【００４４】
これらの結果から、ビタミンの種類によりアパタイトに対する吸着量が相違することが明らかになった。
【００４５】
（実施例９）
アパタイト及びアルミナ粉末に対する細胞の活性度を調べた。ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞二万個を各ウエルに培地とともに入れ、アパタイト及びアルミナ粉末それぞれを０．１ｍｇ／ｍｌを添加し、インキュベータ内にて、３７℃、５％ＣＯ２、湿度１００％雰囲気にて、静置する。細胞活性度の測定には、ＭＴＴ法（テトラゾリウム塩染色法）を用いた。ＭＴＴ法とは１９８３年にＭｏｓｍａｎｎにより開発された細胞の呼吸数を調べる方法である。この呼吸数が細胞の活性度を表す。試料添加後、１日、２日、４日、７日に呼吸度を、５７０ｎｍの測定波長にて測定した。
【００４６】
図２より、アルミナに比べてアパタイトのほうが細胞に効果的に取り込まれ、しかも、細胞活性度の高いことがわかる。
（実施例１０）
この実施例はビタミンアパタイト複合体のビタミン徐放性に関する。前記実施例４と同様の方法により２５ビタミンＤ３をアパタイトに吸着させてなるビタミンアパタイト複合体（溶媒としてエタノールを使用）、及びビタミンＫ２をアパタイトに吸着させてなるビタミンアパタイト複合体（溶媒としてアセトンを使用）を生理食塩水に浸漬してビタミンの徐放性を測定した。
２４時間が経過してもこれら２種のビタミンアパタイト複合体にあってはビタミンは検出限界以下であり、４８時間後には、２５ビタミンＤ３を吸着させてなるビタミンアパタイト複合体からの２５ビタミンＤ３の遊離量は０．１９〜０．２３質量％であり、ビタミンＫ２を吸着させてなるビタミンアパタイト複合体からのビタミンＫ２の遊離量は０．１４〜０．１９質量％であった。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】図１は、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞のコレカルシフェロール−アパタイト複合体、アパタイト、コレカルシフェロールに対するアルカリフォスファターゼ活性を示した図である。
【図２】図２は、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞のアパタイト及びアルミナに対する細胞活性度を示した図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アパタイトにビタミン及び／又はビタミン前駆体を吸着させて成ることを特徴とするビタミンアパタイト複合体。
【請求項２】
アパタイトが、水酸アパタイトである請求項１記載のビタミンアパタイト複合体。
【請求項３】
ビタミンが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、及び、葉酸よりなる群から選択される少なくとも一種であり、ビタミン前駆体がベータカロチンである請求項１又は２に記載のビタミンアパタイト複合体。
【請求項４】
ビタミンは、その吸着量がアパタイトに対して０．００５〜５質量％である請求項１〜３のいずれか一項に記載のビタミンアパタイト複合体。
【請求項１】
アパタイトにビタミン及び／又はビタミン前駆体を吸着させて成ることを特徴とするビタミンアパタイト複合体。
【請求項２】
アパタイトが、水酸アパタイトである請求項１記載のビタミンアパタイト複合体。
【請求項３】
ビタミンが、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ、及び、葉酸よりなる群から選択される少なくとも一種であり、ビタミン前駆体がベータカロチンである請求項１又は２に記載のビタミンアパタイト複合体。
【請求項４】
ビタミンは、その吸着量がアパタイトに対して０．００５〜５質量％である請求項１〜３のいずれか一項に記載のビタミンアパタイト複合体。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００７−１５３８４２（Ｐ２００７−１５３８４２Ａ）
【公開日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−３５４０３７（Ｐ２００５−３５４０３７）
【出願日】平成１７年１２月７日（２００５．１２．７）
【出願人】（５０５３７３２４７）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１２月７日（２００５．１２．７）
【出願人】（５０５３７３２４７）
【Ｆターム（参考）】
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