ピリミジン誘導体
式Ｉ
【化１】
の新規ピリミジン誘導体、それらの製造法、医薬としてのそれらの使用およびそれらを含む医薬組成物。
【化１】
の新規ピリミジン誘導体、それらの製造法、医薬としてのそれらの使用およびそれらを含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ピリミジン誘導体、それらの製造法、医薬としてのそれらの使用およびそれらを含む医薬組成物に関する。
【発明の開示】
【０００２】
より特に本発明は、第一の局面において、式Ｉ
【化１】
〔式中、
Ｒ０は水素であり；
Ｒ１は、ＮおよびＯから独立して選択された１個または２個のヘテロ原子を含む、非置換または置換６員単環または１０員二環式−ヘテロ環であり；
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＣおよびＮと一体となって、Ｎから独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含むヘテロ環を形成し、それは非置換または低級アルキルおよびオキソから独立して選択される１個以上の置換基で置換されており；
Ｒ４は水素であり；
Ｒ５はハロゲンであり；
Ｒ６は水素であり；
Ｒ７は水素であり；
Ｒ８は水素；ハロゲン、Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されたカルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；ＮまたはＯから独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、非置換またはヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、モノ−またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノ、１個または２個のＮ環原子を含む６員ヘテロ環(これは非置換であるか、またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されている)から独立して選択される置換基で置換されている５または６員ヘテロ環；１個のＮ環原子を含み、非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されている５または６員ヘテロ環−Ｃ１−Ｃ７アルコキシであり；
Ｒ９は水素であり；
Ｒ１０は水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである。〕
の化合物またはその塩を提供する。
【０００３】
前記および後記で使用する一般的用語は、好ましくは、特記されない限り、本明細書の内容の範囲内で、下記の意味を有する：
化合物、塩などについて複数表現が使用されているとき、これはまた単独の化合物、塩などを意味すると取るべきである。
【０００４】
全ての不斉炭素原子は、(Ｒ)−、(Ｓ)−または(Ｒ,Ｓ)−立体配置、好ましくは(Ｒ)−または(Ｓ)−立体配置で存在し得る。本化合物は、故に異性体混合物としてまたは純粋異性体として、好ましくはエナンチオマー−純粋ジアステレオマーとして存在できる。
本発明は、式Ｉの化合物の可能な互変異性体にも関する。
【０００５】
Ｃ１−Ｃ８アルキルは、１個から８個、とりわけ４個までの炭素原子を有するアルキルラジカルであって、当該ラジカルは、直鎖であるか、または１箇所もしくは複数箇所枝分かれで分枝しており；好ましくは、Ｃ１−Ｃ８アルキルはブチル、例えばｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、プロピル、例えばｎ−プロピルまたはイソプロピル、エチルまたはメチル；とりわけメチル、プロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。
【０００６】
Ｃ２−Ｃ８アルケニルは、２個から８個、とりわけ５個までの炭素原子を有するアルケニルラジカルであり、当該ラジカルは、直鎖であるか、または１箇所もしくは複数箇所枝分かれで分枝しており；好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルケニルはペンテニル、例えば３−メチル−２−ブテン−２−イル、ブテニル、例えば１−または２−ブテニルまたは２−ブテン−２−イル、プロペニル、例えば１−プロペニルまたはアリル、またはビニルである。
【０００７】
Ｃ２−Ｃ８アルキニルは、２個から８個、とりわけ５個までの炭素原子を有するアルキニルラジカルであり、当該ラジカルは直鎖または分枝鎖であり；好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルキニルはプロピニル、例えば１−プロピニルまたはプロパルギル、またはアセチレニルである。
【０００８】
Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルは、３個から８個までの炭素原子を有するシクロアルキルラジカル、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチル、好ましくはシクロプロピル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【０００９】
Ｃ１−Ｃ８アルコキシはとりわけメトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、またはｔｅｒｔ−ブトキシである。
ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキルはとりわけヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチルまたは２−ヒドロキシ−２−プロピルである。
ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルコキシは、とりわけ２−ヒドロキシエトキシまたは３−ヒドロキシプロポキシである。
【００１０】
Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルコキシはとりわけ２−メトキシエトキシである。
Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキルはとりわけメトキシメチル、２−メトキシエチルまたは２−エトキシエチルである。
ハロゲンは好ましくはフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素、とりわけフッ素、塩素、または臭素である。
【００１１】
ハロＣ１−Ｃ８アルキルは好ましくはクロロＣ１−Ｃ８アルキルまたはフルオロＣ１−Ｃ８アルキル、とりわけトリフルオロメチルまたはペンタフルオロエチルである。
ハロＣ１−Ｃ８アルコキシは好ましくはクロロＣ１−Ｃ８アルコキシまたはフルオロＣ１−Ｃ８アルコキシ、とりわけトリフルオロメトキシである。
Ｃ１−Ｃ８アルコキシカルボニルはとりわけｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、イソ−プロポキシカルボニル、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルである。
【００１２】
非置換または置換カルバモイルは、水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、非置換または置換Ｃ５−Ｃ１０アリール、またはアミノＣ１−Ｃ８アルキルから選択される１個または２個の置換基で置換されたカルバモイル、またはカルバモイル基の置換基および窒素原子が、Ｎ、ＯおよびＳから選択される０個、１個または２個のヘテロ原子をさらに含む５または６員ヘテロシクリルを示すカルバモイルであり；好ましくはカルバモイル、メチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、プロピルカルバモイル、ヒドロキシエチル−メチル−カルバモイル、ジ(ヒドロキシエチル)カルバモイル、ジメチルアミノエチルカルバモイル、またはピロリジノカルボニル、ピペリジノカルボニル、Ｎ−メチルピペラジノカルボニルまたはモルホリノカルボニル、とりわけカルバモイルまたはジメチルカルバモイルである。
【００１３】
非置換または置換スルファモイルは、水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、非置換または置換Ｃ５−Ｃ１０アリール、またはアミノＣ１−Ｃ８アルキルから選択される１個または２個の置換基で置換されたスルファモイル、またはスルファモイル基の置換基および窒素原子が、Ｎ、ＯおよびＳから選択される０個、１個または２個のヘテロ原子をさらに含む５または６員ヘテロシクリルを示すスルファモイルであり；好ましくはスルファモイル、メチルスルファモイル、プロピルスルファモイル、シクロプロピルメチル−スルファモイル、２,２,２−トリフルオロエチルスルファモイル、ジメチルアミノエチルスルファモイル、ジメチルスルファモイル、ヒドロキシエチル−メチル−スルファモイル、ジ(ヒドロキシエチル)スルファモイル、またはピロリジノスルホニル、ピペリジノスルホニル、Ｎ−メチルピペラジノスルホニルまたはモルホリノスルホニル、とりわけスルファモイルまたはメチルスルファモイルである。
【００１４】
非置換または置換アミノは、水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、非置換または置換Ｃ５−Ｃ１０アリール、アミノＣ１−Ｃ８アルキル、アシル、例えばホルミル、Ｃ１−Ｃ８アルキルカルボニル、Ｃ５−Ｃ１０アリールカルボニル、Ｃ１−Ｃ８アルキルスルホニルまたはＣ５−Ｃ１０アリールスルホニルから選択される１個または２個の置換基で置換されたアミノであり、好ましくはアミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、プロピルアミノ、ベンジルアミノ、ヒドロキシエチル−メチル−アミノ、ジ(ヒドロキシエチル)アミノ、ジメチルアミノエチルアミノ、アセチルアミノ、アセチル−メチル−アミノ、ベンゾイルアミノ、メチルスルホニルアミノまたはフェニルスルホニルアミノ、とりわけアミノまたはジメチルアミノである。
【００１５】
アミノＣ１−Ｃ８アルキルは、とりわけアミノエチル、メチルアミノエチル、ジメチルアミノエチルまたはジメチルアミノプロピルである。
【００１６】
非置換または置換Ｃ５−Ｃ１０アリールは、例えば、所望によりＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、メチレンジオキシ、アミノ、置換アミノ、ハロゲン、カルボキシ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシカルボニル、カルバモイル、スルファモイル、シアノまたはニトロで置換されていてよい、フェニル、インデニル、インダニル、ナフチル、または１,２,３,４−テトラヒドロナフタレニル；好ましくはフェニル、トリル、トリフルオロメチルフェニル、メトキシフェニル、ジメトキシフェニル、メチレンジオキシフェニル、クロロフェニルまたはブロモフェニルであり、ここで、置換基は、オルト位、パラ位またはメタ位にあってよく、好ましくはメタ位またはパラ位である。
【００１７】
Ｃ５−Ｃ１０アリールオキシはとりわけフェノキシまたはメトキシフェノキシ、例えばｐ−メトキシフェノキシである。
Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルキルはとりわけベンジルまたは２−フェニルエチルである。
Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルコキシはとりわけベンジルオキシまたは２−フェニルエトキシである。
【００１８】
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個、２個または３個のヘテロ原子を含む非置換または置換５または６員ヘテロシクリルは、不飽和、部分的不飽和または飽和であってよく、さらにベンゾ基または５もしくは６員ヘテロシクリル基に縮合していてよく、そしてヘテロまたは炭素原子を介して結合してよく、例えば、ピロリル、インドリル、ピロリジニル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、１,２,３,４−テトラヒドロキノリニル、ピペリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピペラジニル、プリニル、テトラジニル、オキサゾリル、イソキサリル、モルホリニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、オキサジアゾリル、およびベンゾオキサジアゾリルである。考えられる置換基はＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルコキシ、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、アミノ、置換アミノ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、Ｃ１−Ｃ８アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｃ１−Ｃ８アルキルカルバモイル、シアノ、オキソ、またはこの段落で定義の通りの非置換または置換５または６員ヘテロシクリルである。５または６員ヘテロシクリルは、好ましくはＮ、ＯおよびＳから選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、とりわけインドリル、ピロリジニル、ピロリドニル、イミダゾリル、Ｎ−メチルイミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、Ｓ,Ｓ−ジオキソイソチアゾリジニル、ピペリジル、４−アセチルアミノピペリジル、４−メチルカルバモイルピペリジル、４−ピペリジノピペリジル、４−シアノピペリジル、ピペラジニル、Ｎ−メチルピペラジニル、Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)ピペラジニル、モルホリニル、１−アザ−２,２−ジオキソ−２−チアシクロヘキシル、またはスルフォラニルである。
【００１９】
非置換または置換ヘテロシクリルオキシにおいて、ヘテロシクリルは上記で定義の通りの意味を有し、とりわけＮ−メチル−４−ピペリジルオキシである。非置換または置換ヘテロシクリルＣ１−Ｃ８アルコキシにおいて、ヘテロシクリルは上記で定義の通りの意味を有し、とりわけ２−ピロリジノエトキシ、２−モルホリノエトキシ、３−モルホリノプロポキシ、１−メチル−ピペリジン−３−イルメトキシ、３−(Ｎ−メチルピペラジノ)プロポキシまたは２−(１−イミダゾリル)エトキシである。
【００２０】
Ｎ、ＯおよびＳから選択される０個、１個、２個または３個のヘテロ原子を含み、２個の隣接置換基とベンゼン環が一体となって形成される、５または６員炭素環式もしくはヘテロ環式環において、環は、例えばＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、アミノ、置換アミノ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシカルボニル、カルバモイル、シアノ、またはオキソでさらに置換されていてよい。このような環を形成する２個の隣接置換基は、好ましくはプロピレン、ブチレン、１−アザ−２−プロピリデン、３−アザ−１−プロピリデン、１,２−ジアザ−２−プロピリデン、２,３−ジアザ−１−プロピリデン、１−オキサプロピレン、１−オキサプロピリデン、メチレンジオキシ、ジフルオロメチレンジオキシ、２−アザ−１−オキソプロピレン、２−アザ−２−メチル−１−オキソプロピレン、１−アザ−２−オキソプロピレン、２−アザ−１,１−ジオキソ−１−チアプロピレンまたは６員環を形成する対応するブチレン誘導体である。
【００２１】
塩は、とりわけ式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩である。
このような塩は、例えば、酸付加塩として、好ましくは有機または無機酸と、塩基性窒素原子を有する式Ｉの化合物から形成され、とりわけ薬学的に許容される塩である。適当な無機酸は、例えば、ハロゲン酸、例えば塩酸、硫酸、またはリン酸である。適当な有機酸は、例えば、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸またはスルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アミノ酸、例えばグルタミン酸またはアスパラギン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、アダマンタンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、ケイ皮酸、メタン−またはエタン−スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１,２−ジスホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１,５−ナフタレン−ジスホン酸、２−、３−または４−メチルベンゼンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−またはＮ−プロピル−スルファミン酸、または他の有機プロトン酸、例えばアスコルビン酸である。
【００２２】
単離または精製目的で、薬学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩の使用も可能である。治療的使用のために、薬学的に許容される塩または遊離化合物のみを用い(適用可能であれば、医薬製剤の形で)、故に、これらが好ましい。
【００２３】
遊離形の、および中間体として、例えば新規化合物の精製または同定に使用できる塩を含む塩の形の新規化合物密接な関係から、上記および下記の遊離化合物に関する全ての言及は、適当であり、好都合である限り、対応する塩も言及すると理解される。
【００２４】
式Ｉの化合物は、上記および下記の通りの価値ある薬理学的特性を有する。
【００２５】
式Ｉにおいて、下記の意味が、独立して、集合的にまたは任意の組合せもしくは下位の組み合わせで好ましい。
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がピペリジニル、ピペラジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり、その各々は非置換であるか、またはピペリジニル(pipereridinyl)、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、ピペラジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニルで置換されており；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってインドリルまたはイソキノリニルを形成し、この両方は非置換であるか、またはＣ１−Ｃ７アルキルおよび／またはオキソで置換されており；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がハロゲンであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；ハロゲン、Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されたカルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；モルホリノ；ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ピロリジニル；ピペラジニル−ピペリジニルであり；ここで、ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ、モルホリノ；ピペリジニル(piperindinyl)、ビピペリジニル(bipiperindinyl)、ピロリジニル、ピペラジニル−ピペリジニルは非置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、モノ−またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノから独立して選択される置換基で置換されており；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである。
【００２６】
より好ましいのは、独立して、集合的にまたは任意の組合せもしくは下位の組み合わせの下記の意味である：
Ａ)
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がヒドロキシ−ピペリジニル、ピペリジニル−ピペリジニル、ピペラジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル、ピペラジニル−ピペリジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−ピペリジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってインドリルまたはイソキノリニルを形成し、この両方はＣ１−Ｃ７アルキルおよびオキソで置換されており；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がハロゲンであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；ハロゲン、Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換Ｃ１−Ｃ７アルキル−カルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；モルホリノ；ヒドロキシ−ピペリジニル(piperindinyl)；Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノ−ピロリジニルであり；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである。
【００２７】
Ｂ)
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がヒドロキシ−ピペリジニル、ピペリジニル−ピペリジニル、ピペラジニル、メチル−ピペラジニル、イソプロピル−ピペラジニル、ピペラジニル−ピペリジニル、メチル−ピペラジニル−ピペリジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってメチル−イソインドロンまたはメチル−イソキノリノンを形成し；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がクロロであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；フルオロ、メトキシ；非置換メチル−カルボミル；メトキシ−エトキシ；メチル−ピペラジニル−エトキシ；モルホリノ；ヒドロキシ−ピペリジニル(piperindinyl)；メチル−ピペラジニル−ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ジメチルアミノ−ピロリジニルであり；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、フルオロまたはメトキシである。
【００２８】
式Ｉの化合物として最も好ましいは、置換基が、実施例に記載の意味を有するものである。
【００２９】
４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−｛５−クロロ−２−[２−メトキシ−４−(２−メトキシ−エトキシ)−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(Ｒ)−ヘキサヒドロ−ピラノジノ[２,１−ｃ][１,４]オキサジン−８−イル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル、
７−｛５−クロロ−２−[４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メトキシ−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(Ｒ)−ヘキサヒドロ−ピラノジノ[２,１−ｃ][１,４]オキサジン−８−イル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
【００３０】
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
４−｛５−クロロ−４−[７−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルアミノ]−ピリミジン−２−イルアミノ｝−３−メトキシ−Ｎ−メチル−ベンズアミド、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−｛５−クロロ−２−[４−((Ｓ)−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル)−２−メトキシ−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−(５−クロロ−２−｛２−メトキシ−４−[２−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−エトキシ]−フェニルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
【００３１】
７−｛５−クロロ−２−[４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メトキシ−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−｛５−クロロ−２−[４−((Ｒ)−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル)−２−メトキシ−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[２−(４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−２−メトキシ−フェニルアミノ)−５−クロロ−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−(５−クロロ−２−｛２−メトキシ−４−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−フェニルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−｛５−クロロ−２−[２−メトキシ−４−(２−メトキシ−エトキシ)−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
８−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
【００３２】
８−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
８−[５−クロロ−２−(２−フルオロ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
８−｛５−クロロ−２−[２−メトキシ−４−(２−メトキシ−エトキシ)−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
８−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
から選択される式Ｉの化合物またはその塩が最も好ましい。
【００３３】
本発明はまた式Ｉの化合物の製造法であって、式II
【化２】
〔式中、
Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は上記で定義の通りであり、そしてＹは脱離基、好ましくはハロゲン、例えば臭素、ヨウ素または特に塩素である。〕
の化合物と、式III
【化３】
〔式中、
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は上記で定義の通りである。〕
の化合物を反応させ；
そして、所望により、置換基が上記で定義の意味を有する式Ｉの化合物を、上記で定義の他の式Ｉの化合物に変換し；
そして得られた式Ｉの化合物を遊離形または塩として回収し、そして、必要なとき、遊離形で得られた式Ｉの化合物を所望の塩に、または得られた塩を遊離形に変換する
ことを含む、方法も提供する。
【００３４】
本反応は、それ自体既知の方法で、反応条件は、本質的に脱離基Ｙの反応性および式IIIのアニリン中のアミノ基の反応性に依存して、通常、適当な溶媒または希釈剤またはそれらの混合物の存在下であり、必要であれば、酸または塩基存在下、冷却または、好ましくは、加熱しながら、例えば約−３０℃から約＋１５０℃、とりわけ約０℃から＋１００℃、好ましくは室温(約＋２０℃)から＋８０℃の温度範囲で、開放または密封容器中および／または不活性ガス、例えば窒素雰囲気下行うことができる。
【００３５】
１個以上の他の官能基、例えばカルボキシ、ヒドロキシまたはアミノが式IIまたはIIIの化合物において、それらが反応に参加すべきでないため保護する必要があるとき、これらはペプチド化合物、セファロスポリンおよびペニシリン、ならびに核酸誘導体および糖の合成において通常使用されるこのような基が存在する。
【００３６】
保護基は既に前駆体に存在していてよく、望ましくない二次反応、例えば置換反応または加溶媒分解に対して関与する官能基を保護しなければならない。それ自体容易に、すなわち望まない二次反応なしに、典型的に、加溶媒分解、還元、光分解あるいはまた酵素活性により、例えば生理学的条件に類似の条件で除去されることを助け、最終産物に存在しないのが保護基の特徴である。当業者は、その保護基が上記の反応に適当であるか、知っており、または容易に確立できる。
【００３７】
塩形成基を有する式Ｉの化合物の塩は、それ自体既知の方法で製造できる。式Ｉの化合物の酸付加塩は、故に、酸または適当なアニオン交換試薬での処理により得ることができる。
【００３８】
塩は、通常遊離形の化合物に、例えば適当な塩基性試薬、例えばアルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素塩、またはアルカリ金属水酸化物、典型的に炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムで処理することにより、変換できる。
【００３９】
立体異性体混合物、例えばジアステレオマーの混合物は、それらの対応する異性体に、適当な分離法の手段により、それ自体既知の方法で分離できる。ジアステレオマー混合物は、例えばそれらの個々のジアステレオマーに、分別結晶、クロマトグラフィー、溶媒分布、および類似の方法の手段により分離できる。この分離は出発化合物のレベルまたは式Ｉの化合物それ自体で行い得る。エナンチオマーは、例えばエナンチオマー−純粋キラル酸との塩形成による、ジアステレオマー塩の形成を介して、またはキラルリガンドの支持体を使用したクロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣの手段で分離できる。
【００４０】
この章に記載の変換に類似した反応はまた適当な中間体のレベルで行うことができることは強調すべきである。
【００４１】
式Ｉの化合物(その塩を含む)は水和物の形で得ることができ、またはそれらの結晶は、例えば結晶化に使用した溶媒を含み得る(溶媒和物として存在)。
【００４２】
出発物質として使用する式IIの化合物は、式IV
【化４】
の化合物と式Ｖ
【化５】
の化合物の反応により得ることができる(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は上記で定義の通りであり、そしてＹ１およびＹ２は、上記でＹについて定義した通りの同一または異なる脱離基である)。反応条件は、上記で式IIの化合物と式IIIの化合物の反応について記載したものである。
【００４３】
式IVおよびＶの化合物は既知であるか、または既知の方法に従って製造できる。
【００４４】
式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される塩は、インビトロ無細胞キナーゼアッセイおよび細胞アッセイで試験したとき価値ある薬理学的特性を示し、故に、医薬として有用である。特に、本発明の化合物は、接着斑キナーゼの阻害剤であり、接着斑キナーゼに接続したシグナルカスケードの不全が原因の状態、特に下記の腫瘍の処置のための医薬として有用である。
【００４５】
接着斑キナーゼ(ＦＡＫ)は、インテグリン介在アウトサイド・イン・シグナルカスケードにおける重要な酵素である(D. Schlaepfer et al., Prog Biophys Mol Biol 1999, 71, 435-478)。細胞と細胞外マトリックス(ＥＣＭ)タンパク質の間の相互作用が、細胞表面受容体、インテグリンを介して、増殖、生存および移動に重要な細胞内シグナルとして伝達される。ＦＡＫは、これらのインテグリン介在アウトサイド・イン・シグナルカスケードにおいて必須の役割を有する。本シグナル伝達カスケードにおける引き金は、Ｙ３９７の自己リン酸化である。リン酸化Ｙ３９７は、ＳｒｃファミリーチロシンキナーゼのためのＳＨ２ドッキング部位である。結合したｃ−Ｓｒｃキナーゼは、ＦＡＫにおける他のチロシン残基をリン酸化する。これらの中で、リン酸化Ｙ９２５が、Ｇｒｂ２小アダプタータンパク質のＳＨ２部位のための結合部位となる。このＧｒｂ２とＦＡＫの直接の結合は、Ｒａｓ−ＥＲＫ２／ＭＡＰキナーゼカスケードのような下流標的の活性化のための重要な工程の一つである。
【００４６】
内因性ＦＡＫシグナル伝達の阻害は、減少した運動性をもたらし、ある場合細胞死を誘発する。他方、ＦＡＫシグナル伝達の外因性発現による増加は、細胞運動性を増加させ、ＥＣＭから細胞生存シグナルを伝達する。加えてＦＡＫは、侵襲性および転移性上皮性、間葉性、甲状腺および前立腺癌において過剰発現される。結果として、ＦＡＫの阻害剤は、抗腫瘍増殖および転移のための薬剤である可能性がある。本発明の化合物は、故に、例えば、新生物疾患、特に乳房腫瘍、腸の癌(結腸および直腸)、胃癌および卵巣および前立腺の癌、非小細胞性肺癌、小細胞肺癌、肝臓の癌、黒色腫、膀胱腫瘍および頭頚部の癌を有する脊椎動物、およびより特に哺乳動物の予防および／または処置のために指示される。
【００４７】
ＦＡＫ阻害と免疫系の間の関係は、例えばG.A. van Seventer et al., Eur. J. Immunol. 2001, 31, 1417-1427に記載されている。故に、本発明の化合物は、例えば、免疫系障害、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、肥満細胞および／または好酸球が介在する疾患または障害、例えば臓器または組織同種もしくは異種移植片の急性または慢性拒絶反応、アテローム性動脈硬化症、血管形成術のような血管傷害が原因の血管閉塞、再狭窄、高血圧、心不全、慢性閉塞性肺疾患、ＣＮＳ疾患、例えばアルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症、癌、感染疾患、例えばＡＩＤＳ、敗血症性ショックまたは成人呼吸窮迫症候群、虚血／再潅流傷害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血性ショック、または外傷性ショックを有する脊椎動物、およびより特に哺乳動物の予防および／または処置に有用である。本発明の薬剤はまた急性または慢性炎症性疾患または障害または自己免疫性疾患、例えばリウマチ性関節炎、骨関節症、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、糖尿病(Ｉ型およびII型)およびその合併症、呼吸器疾患、例えば喘息または炎症性肝臓傷害、炎症性糸球体傷害、免疫介在障害の皮膚発現または病気、炎症性および過増殖性皮膚疾患(例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性接触性皮膚炎およびさらなる湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎)、炎症性眼疾患、例えばシェーグレン症候群、角結膜炎またはブドウ膜炎、炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎の処置および／または予防においても有用である。
【００４８】
本発明の化合物は、実施例で記載のＦＡＫアッセイ系で活性であり、１nMから１００nM範囲の阻害ＩＣ５０を示す。
【００４９】
本発明の化合物はまた、未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)およびＮＰＭ−ＡＬＫの融合タンパク質のチロシンキナーゼ活性の強力な阻害を示す。このタンパク質チロシンキナーゼは、ヌクレオホスミン(ＮＰＭ)および未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫの融合に起因し)、タンパク質チロシンキナーゼ活性をＡＬＫリガンド非依存的とする。ＮＰＭ−ＡＬＫは、多くの造血および他のヒト細胞のシグナル伝達において重要な役割を有し、血液学的疾患および新生物疾患、例えば未分化大細胞リンパ腫(ＡＬＣＬ)および非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、特にＡＬＫ＋ＮＨＬまたはＡｌｋｏｍａｓ、炎症性筋線維芽細胞腫瘍(ＩＭＴ)および神経芽腫に至る(Duyster J et al. 2001 Oncogene 20, 5623-5637)。ＮＰＭ−ＡＬＫに加えて、他の遺伝子融合；主にＴＰＭ３−ＡＬＫ(非筋肉トロポミオシンとＡＬＫの融合)がヒト血液学的疾患および新生物疾患で同定されている。
【００５０】
ＡＬＫチロシンキナーゼ活性の阻害は既知の方法を使用して、例えばJ. Wood et al. Cancer Res. 60, 2178-2189 (2000)に記載のＶＥＧＦ−Ｒキナーゼアッセイに準じて、ＡＬＫのみ換えキナーゼドメインを使用して証明できる。ＧＳＴ−ＡＬＫタンパク質チロシンキナーゼを使用したインビトロ酵素アッセイは、フィルター結合アッセイのように９６ウェルプレートで、２０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ＝７.５、３mM ＭｇＣｌ２、１０mM ＭｎＣｌ２、１mM ＤＴＴ、０.１μCi／アッセイ(＝３０μl)[γ−３３Ｐ]−ＡＴＰ、２μM ＡＴＰ、３μg／ml ポリ(Ｇｌｕ、Ｔｙｒ ４：１)Ｐｏｌｙ−ＥＹ(Sigma P-0275)、１％ＤＭＳＯ、２５ng ＡＬＫ酵素中で行う。アッセイを１０分、環境温度でインキュベートする。反応を５０μlの１２５mM ＥＤＴＡの添加により停止させ、反応混合物を、予めメタノールで湿られたMAIP Multiscreenプレート(Millipore, Bedford, MA, USA)に移し、５分、Ｈ２Ｏで再水和する。洗浄(０.５％Ｈ３ＰＯ４)後、プレートを液体シンチレーションカウンターで計測する。ＩＣ５０値を阻害％の直線回帰分析により計算する。阻害剤なしのコントロールと比較して、式Ｉの化合物は酵素活性を、例えば０.００１から０.５μM、とりわけ０.０１から０.１μMの濃度で５０％(ＩＣ５０)阻害する。
【００５１】
式Ｉの化合物は、ヒトＮＰＭ−ＡＬＫ過剰発現マウスＢａＦ３細胞の増殖を強力に阻害する(DSMZ Deutsche Sammlungvon Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany)。ＮＰＭ−ＡＬＫの発現は、ＢａＦ３細胞系をＮＰＭ−ＡＬＫをコードする発現ベクターｐＣＩｎｅｏTM(Promega Corp., Madison WI, USA)でトランスフェクトし、続いてＧ４１８耐性細胞を選択することにより達成する。トランスフェクトしていないＢａＦ３細胞は、細胞生存をＩＬ−３に依存する。対照的にＮＰＭ−ＡＬＫ発現ＢａＦ３細胞(以後ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫと呼ぶ)は、それらがＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼを介して増殖性シグナルを得るため、ＩＬ−３非存在下で増殖できる。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤は、故に増殖シグナルをなくし、抗増殖性活性をもたらす。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤の抗増殖性活性は、しかし、ＮＰＭ−ＡＬＫ非依存的機構を介した増殖シグナルを提供するＩＬ−３の添加により打ち消され得る[ＦＬＴ３キナーゼを使用した類似の細胞系についてE Weisberg et al. Cancer Cell;1, 433-443(2002)参照]。式Ｉの化合物の阻害活性は、簡単に言うと、下記の通り決定する：ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞(１５,０００／マイクロタイタープレートウェル)を９６ウェルマイクロタイタープレートに移す。試験化合物[ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解]を、ＤＭＳＯの最終濃度が１％(ｖ／ｖ)を超えない方法で、連続濃度で添加する(希釈シリーズ)。添加後、プレートを２日間インキュベートし、その間、試験化合物なしのコントロールは、２回の細胞分割サイクルを受け得る。ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞の増殖を、YoproTM染色の手段により測定する[T Idziorek et al. J. Immunol. Methods;185:249-258(1995)]：２０mM クエン酸ナトリウム、ｐＨ４.０、２６.８mM 塩化ナトリウム、０.４％ＮＰ４０、２０mM ＥＤＴＡおよび２０mMから成る２５μlの溶解緩衝液を各ウェルに添加する。細胞溶解は室温で６０分以内に完了し、ＤＮＡに結合したYoprの総量を、下記設定のCytofluor II ９６ウェルリーダー(PerSeptive Biosystems)を使用して測定することにより決定する：励起(nm)４８５／２０および放出(nm)５３０／２５。
【００５２】
ＩＣ５０値は、式：
ＩＣ５０＝[(ＡＢＳ試験−ＡＢＳ開始時)／(ＡＢＳ対象−ＡＢＳ開始時)]×１００
(ＡＢＳ＝吸光度)
を使用したコンピューターを利用したシステムにより決定する。
【００５３】
これらの実験のＩＣ５０値は、阻害剤なしのコントロールを使用して得られたより５０％低い細胞数をもたらす、問題の試験化合物の濃度として示す。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【００５４】
式Ｉの化合物の抗増殖性作用はまた、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞系(DSMZ Deutsche Sammlungvon Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany)[WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56(2002)に記載]において、ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞系について上記したのと同じ方法を使用して決定できる。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【００５５】
ＡＬＫの自己リン酸化に対する式Ｉの化合物の作用は、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞系において、WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56(2002)に記載の免疫ブロットの手段により、決定できる。その試験において、式Ｉの化合物は、約０.００１から１μMのＩＣ５０を示す。
【００５６】
新生物疾患および免疫系障害の処置における上記使用について、必要な投与量は、投与の形態、処置すべき特定の状態および望む効果に依存して変化する。一般に、約０.１から約１００mg／体重kgの一日投与量で、満足な結果が全身的に得られることが示される。大型哺乳動物、例えばヒトにおける指示される一日量は、約０.５mgから約２０００mgの範囲であり、簡便には、例えば、１日４回までの分割量でまたは徐放形で投与する。
【００５７】
本発明の化合物は、任意の慣用の経路で、特に非経腸的に、例えば注射可能溶液または懸濁液の形で、経腸的に、好ましくは経口で、例えば錠剤またはカプセルの形で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形で、または経鼻または坐薬形態で投与できる。本発明の化合物を少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤との混合による慣用法で製造できる。経口投与用単位投与形態は、例えば、約０.１mgから約５００mgの活性物質を含む。局所投与は、例えば皮膚にである。局所投与の別の形は眼にである。
【００５８】
本発明の医薬組成物は、それ自体既知の方法で、例えば慣用の混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥工程の手段により、製造する。
【００５９】
活性成分の溶液、およびまた懸濁液または分散、とりわけ等張水性溶液、分散または懸濁液の使用が好ましく、これらは、例えば活性成分単独でまたは担体、例えばマンニトールと共に含む凍結乾燥組成物の場合、使用前に構築できる。医薬組成物は滅菌できおよび／または賦形剤、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整用塩および／または乾燥剤を含んでよく、それ自体既知の方法で、例えば慣用の溶解および凍結乾燥工程で製造する。該溶液または懸濁液は、増粘剤、典型的にカルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドン、またはゼラチン、あるいはまた可溶化剤、例えばＴｗｅｅｎ ８０(登録商標)(ポリオキシエチレン(２０)ソルビタンモノ−オレエート)を含み得る。
【００６０】
油中懸濁液は、油成分として、注射目的に慣習的な植物油、合成油、または半合成油を含む。これに関連して、酸成分として８個から２２個、とりわけ１２個から２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸、例えばラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸または対応する不飽和酸、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラッシジン酸またはリノール酸を含み、所望により抗酸化剤、例えばビタミンＥ、β−カロテンまたは３,５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエンを添加された、液体脂肪酸エステルを特記できる。これらの脂肪酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子であり、一価または多価であり、例えば一、二または三価、アルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはペンタノールまたはそれらの異性体であるが、とりわけグリコールおよびグリセロールである。脂肪酸エステルとして、故に、下記を特記する：エチルオレート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、“Labrafil M 2375”(ポリオキシエチレングリセロール)、“Labrafil M 1944 CS”(杏仁油のアルコール分解により製造し、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルから成る不飽和ポリグリコール化グリセリド)、“Labrasol”(ＴＣＭのアルコール分解により製造し、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルから成る飽和ポリグリコール化グリセリド；全てGattefosse, Franceから入手可能)、および／または“Miglyol 812”(Huels AG, Germanyから入手可能なＣ８からＣ１２鎖長の飽和脂肪酸のトリグリセリド)であるが、とりわけ植物油、例えば綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、ダイズ油およびよりとりわけ落花生油。
【００６１】
注射可能製剤の製造は、通常、滅菌条件下で行い、それは例えば、アンプルまたはバイアルへの充填および容器の密封も同様である。
【００６２】
経口投与用医薬組成物は、例えば、活性成分と１種以上の固体担体を合わせ、所望により得られた混合物を造粒し、該混合物または顆粒を、所望によりまたは必要であれば、さらなる賦形剤の添加により、錠剤または錠剤コアを形成させるために加工する。
【００６３】
適当な担体は、とりわけ増量剤、例えば糖、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース製剤、および／またはリン酸カルシウム、例えばリン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム、およびまた結合剤、例えばデンプン、例えばコーン、小麦、コメまたはジャガイモデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン、および／または、所望により、崩壊剤、例えば上記デンプン、またカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムである。さらなる賦形剤は、とりわけ流動調節剤および滑剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウム、および／またはポリエチレングリコール、またはその誘導体である。
【００６４】
錠剤コアは適当な、所望により腸溶性の、コーティングを、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタンを含み得る糖溶液、または適当な有機溶媒中もしくは溶媒混合物のコーティング溶液、または、腸溶性コーティングの製造のために、適当なセルロース製剤、例えば酢酸フタル酸セルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの溶液の使用により施し得る。色素または着色剤を錠剤または錠剤コーティングに、例えば同定目的でまたは活性成分の異なる用量を示すために添加し得る。
【００６５】
経口投与用医薬組成物はまた、ゼラチンから成る硬カプセル、およびまたゼラチンと可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールから成る軟、密封カプセルを含む。硬カプセルは、活性成分を、例えば増量剤、例えばコーンデンプン、結合剤、および／または流動促進剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および所望により安定化剤と混合された顆粒の形で含む。軟カプセルにおいて、活性成分は好ましくは適当な液体賦形剤、例えば脂肪油、パラフィン油または液体ポリエチレングリコールまたはエチレンもしくはプロピレングリコールの脂肪酸エステル中に溶解または懸濁しており、それに、安定化剤および、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルタイプの界面活性剤も添加し得る。
【００６６】
直腸投与に適当な医薬組成物は、例えば、活性成分と坐薬基剤の組合せから成る坐薬である。適当な坐薬基剤は、例えば、天然または合成トリグリセリド、パラフィン炭化水素、ポリエチレングリコールまたは高級アルカノールである。
【００６７】
非経腸投与のために、水溶性形態の、例えば水溶性塩の活性成分の水性溶液または、増粘物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストラン、および、所望により、安定化剤を含む水性注射懸濁液がとりわけ適する。活性成分は、所望により賦形剤と共に、凍結乾燥物の形であり、適当な溶媒の添加により非経腸投与前に溶液にすることができる。
【００６８】
例えば非経腸投与に使用されるような溶液はまた輸液としても使用できる。
好ましい防腐剤は、例えば、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、または殺菌剤、例えばソルビン酸または安息香酸である。
【００６９】
本発明の化合物は、唯一の活性成分として、または新生物疾患に対して有用なもしくは免疫調節レジメンにおいて有用な他の薬剤と共に投与できる。例えば、本発明の薬剤は、本発明にしたがい、上記の種々の疾患に有効な医薬組成物との、例えばシクロホスファミド、５−フルオロウラシル、フルダラビン、ゲムシタビン、シスプラスチン、カルボプラチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、イリノテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、リツキサン、ドキソルビシン、ゲフィチニブ、またはイマチニブとの；あるいはまたシクロスポリン、ラパマイシン、アスコマイシンまたはそれらの免疫抑制性類似体、例えばシクロスポリンＡ、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、シロリムスまたはエベロリムス、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、シクロホスファミド、アザチオプレン、メトトレキサート、金塩、スルファサラジン、抗マラリア剤、ブレキナール(brequinar)、レフルノミド、ミゾルビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば白血球受容体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−４またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体、または他の免疫調節性化合物、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇとの組合せ剤で使用できる。
【００７０】
前記によって、本発明はまた下記を提供する：
(１)医薬として使用するための本発明の化合物；
(２)例えば、上記の特定の適応症のいずれかに使用するための、ＦＡＫ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤および／またはＺＡＰ−７０阻害として使用するための本発明の化合物；
(３)本発明の化合物を活性成分として、１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、例えば、上記の特定の適応症のいずれかに使用するための医薬組成物；
(４)有効量の本発明の化合物またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における、上記の特定の適応症のいずれかを処置する方法；
(５)ＦＡＫ、ＡＬＫおよび／またはＺＡＰ−７０活性化が役割を有するまたは関与する疾患または状態の処置または予防用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用；
(６)治療的有効量の本発明の化合物および、前記の特定の適応症のいずれかに有用な１種以上のさらなる医薬物質の、例えば、同時のまたは連続した併用投与を含む、上記(４)に定義の通りの方法；
【００７１】
(７)治療的有効量の本発明の化合物および、前記の特定の適応症のいずれかに有用な１種以上のさらなる医薬物質を含む、組合せ剤；
(８)未分化リンパ腫キナーゼの阻害に応答する疾患の処置または予防用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用；
(９)処置される疾患が未分化大細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍および神経芽腫から選択される、(８)に記載の使用；
(１０)化合物が、実施例のいずれか１つに記載のものまたは薬学的に許容される塩である、(８)または(９)に記載の使用；
(１１)有効量の本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、未分化リンパ腫キナーゼの処置に応答する疾患、とりわけ未分化大細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍および神経芽腫から選択される疾患の処置法。
【００７２】
さらに上記のとおり有用である好ましい本発明の化合物は、実施例で具体的に気合いの化合物である。
ＦＡＫ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤のいずれかとして、または両方の阻害のために有用であり、本質的に前記の方法に従い製造できる、さらなる特に好ましい本発明の化合物は、下記のものである：
【実施例】
【００７３】
略語
ＡｃＯＨ＝酢酸、ＡＬＫ＝未分化リンパ腫キナーゼ、ＡＴＰ＝アデノシン５'−トリホスフェート、塩水＝飽和塩化ナトリウム溶液、Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン、ＤＩＡＤ＝ジイソプロピルアゾジカルボキシレート、ＤＩＰＣＤＩ＝Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド、ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン、ＤＭＦ＝Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＴＴ＝１,４−ジチオ−Ｄ,Ｌ−スレイトール、ＥＤＴＡ＝エチレンジアミンテトラ酢酸、Ｅｔ＝エチル、ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、ＥｔＯＨ＝エタノール、Ｅｕ−ＰＴ６６＝ＬＡＮＣＥＴＭユーロピウム−Ｗ１０２４標識抗ホスホチロシン抗体(Perkin Elmer)、ＦＡＫ＝接着斑キナーゼ、ＦＲＥＴ＝蛍光共鳴エネルギー移動、ＨＥＰＥＳ＝Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ'−２−エタンスルホン酸、ＨＯＡｔ＝１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、Ｍｅ＝メチル、ＲＴ−ＰＣＲ＝逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、ＳＡ−(ＳＬ)ＡＰＣ＝ＳｕｐｅｒＬｉｇｈｔＴＭアロフィコシアニンに接合したストレプトアビジン(Perkin Elmer)、subst.＝置換、ＴＢＴＵ＝Ｏ−(ベンゾトリアゾル−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルアンモニウムテトラフルオロボレート、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン.
【００７４】
ＨＰＬＣ条件
カラム：YMC CombiScreen ODS-A(５um、１２nm)、５０×４.６mm Ｉ.Ｄ.
流速：２.０ml／分
溶離剤：Ａ)ＴＦＡ／水(０.１／１００)、Ｂ)ＴＦＡ／アセトニトリル(０.１／１００)
勾配：５−１００％Ｂ(０−５分)
検出：２１５nmのＵＶ
【００７５】
実施例１
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化６】
４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２.７９ｇ、５.６５mmol)の２−メトキシエタノール(３０mL)に、ｏ−アニシジン(７００μL)および４Ｎ 塩化水素の酢酸エチル溶液(１.４mL)を添加し、混合物を１２０℃で５時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、次いで水性飽和炭酸水素ナトリウムに注ぐ。得られた淡黄色固体を濾過により回収する。固体をメタノールおよび酢酸エチルで洗浄し、真空乾燥し、７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンを淡黄色固体(２.７１ｇ)として定量的収率で得る。Ｒｆ＝０.０８(ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ＝１／２)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):3.05-3.01(m, 8H), 3.21(s, 3H), 3.92(s, 3H), 4.38(s, 2H), 6.92(dd, 1H), 7.02-6.98(m, 2H), 7.12(d, 1H), 7.46(s, 1H), 8.11(s, 1H), 8.34(dd, 1H), 8.67(d, 1H), 10.5(s, 1H)。
【００７６】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１】
【００７７】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表２】
【００７８】
【表３】
【表４】
【００７９】
下記４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表５】
【表６】
【００８０】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表７】
【００８１】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(Ｒ)−ヘキサヒドロ−ピラノジノ[２,１−ｃ][１,４]オキサジン−８−イル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(Ｒ)−ヘキサヒドロ−ピラノジノ[２,１−ｃ][１,４]オキサジン−８−イル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表８】
【００８２】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表９】
【００８３】
下記４−[４,４']ビピペリジニル−１−イル−７−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、１'−[７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル]−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１０】
【００８４】
下記８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−ピペラジン−１−イル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、４−[８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１１】
【表１２】
【００８５】
下記８−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１３】
【表１４】
【００８６】
下記８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、４−｛１−[８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル]−ピペリジン−４−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１５】
【００８７】
実施例４７：
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化７】
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(２.０ｇ、４.１７mmol)のジクロロエタン(５０mL)溶液に、ホルムアルデヒド(３８０μL、５.０mmol)を添加し、混合物を室温で１.５時間撹拌した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１.０６ｇ、５.０mmol)添加後、混合物を室温で１.５時間撹拌した。混合物を１Ｎ 水酸化ナトリウムに注ぎ、室温で１０分撹拌し、次いでジクロロメタンで２回抽出する。有機層を水および塩水で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させる。得られた固体をメタノールおよび酢酸エチルで洗浄して、７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.２ｇ)を淡黄色固体として、５８％収率で得る。Ｒｆ＝０.３０(ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ＝１／２)。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４９４ [ＭＨ]＋。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):2.38(s, 3H), 2.66-2.57(m, 4H), 3.09-3.07(m, 4H), 3.21(s, 3H), 3.92(s, 3H), 4.37(s, 2H), 6.92(dd, 1H), 7.03-6.96(m, 2H), 7.13(d, 1H), 7.45(s, 1H), 8.11(s, 1H), 8.33(dd, 1H), 8.67(d, 1H), 10.5(s, 1H)。
【００８８】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表１６】
【００８９】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−[５−クロロ−２−(２−置換−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表１７】
【００９０】
下記７−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−４−(１'−メチル−[４,４']ビピペリジニル−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−[４,４']ビピペリジニル−１−イル−７−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表１８】
【００９１】
下記８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−ピペラジン−１−イル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表１９】
【表２０】
【００９２】
下記８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表２１】
【００９３】
実施例Ｉ１：
４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化８】
３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸の２００mLのメタノール溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３(４.３４ｇ、１３.３mmol)を添加し、室温で撹拌する。溶液を減圧下濃縮し、次いで得られた黄色固体を２６mlのＤＭＦに懸濁。ヨードメタン(１.７ml、２６.６mol)を０℃で添加し、室温で３０分撹拌する。水を溶液に添加し、酢酸エチルで抽出する。有機層をＨ２Ｏ、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(５.７０ｇ)を黄色油状物として定量的収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.30(d, 3H), 3.99(s, 3H), 7.22(dd, 1H), 8.07(dd, 1H)。
【００９４】
【化９】
３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(６.１ｇ、２８.６mmol)およびＮ−ブロモスクシンイミドの７０mLのＣＣｌ４中の懸濁液に、２,２'−アゾビスイソブチロニトリルを、室温で窒素雰囲気下添加する。反応混合物を８５℃で６時間、Ｎ２下撹拌し、次いで室温に冷却し、濾過する。濾液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、水性ＮａＨＣＯ３溶液、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させる。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１)で精製して、２−ブロモメチル−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(４.４８ｇ、１５.３mmol、５４％)を黄色油状物として得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:4.01(s, 3H), 4.53(d, 2H), 7.31(dd, 1H), 8.17(dd, 1H)。
【００９５】
【化１０】
室温で、２−ブロモメチル−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(４.４８ｇ、１５.３mmol)のＴＨＦ(１００mL)溶液をＴＨＦ中メチルアミンの２Ｍ溶液(２３mL、４６mmol)で処理し、混合物を４８時間、室温で撹拌する。反応混合物をガラスフィルターを通して濾過し、沈殿物を回収し、酢酸エチルで洗浄する。濾液をＮａＨＣＯ３の飽和水性溶液および塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮して、４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.６ｇ、７.６１mmol、５０％)を黄色固体として得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:3.22(s, 3H), 4.47(s, 2H), 7.32(dd, 1H), 7.84(dd, 1H)。
【００９６】
実施例Ｉ２：
４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１１】
４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(２.０ｇ、８.５２mmol)および炭酸カリウム(６５７.９mg、４.７６mmol)の懸濁液に、トリエチルアミン(２.０mL、１４.３mmol)のジメチルスルホキシド(２０mL)溶液、ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１.７７ｇ、９.５２mmol)を添加し、混合物を６０℃で６時間撹拌する。混合物を氷水に注ぎ、得られた褐色固体を濾過により回収する。得られた固体を、真空で５０℃で乾燥させ、４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、褐色固体として７５％収率で得る。Ｒｆ＝０.２５(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.50(s, 9H), 3.13(t, 4H), 3.20(s, 3H), 3.61(t, 4H), 4.37(s, 2H), 7.04(d, 1H), 7.78(d, 1H)。
【００９７】
実施例Ｉ３：
４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化１２】
４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(５.０ｇ、２４mmol)および炭酸カリウム(３.３２ｇ、２４mmol)の懸濁液に、トリエチルアミン(６.７mL、２８.８mmol)のジメチルスルホキシド(５０mL)溶液、１−イソプロピルピペラジン(４.１mL、２８.８mmol)を添加し、混合物を６０℃で４時間撹拌する。混合物を氷水に注ぎ、得られた褐色固体を濾過により回収し、真空で５０℃で乾燥させて、４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンを、褐色固体として９１％収率で得る。Ｒｆ＝０.１４(ＡｃＯＥｔ)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.09(s, 3H), 1.11(s, 3H), 2.70(t, 4H), 2.80-2.74(m, 1H), 3.19(s, 3H), 3.21(t, 4H), 4.37(s, 2H), 7.01(d, 1H), 7.78(d, 1H)。
【００９８】
実施例Ｉ４：
下記２−メチル−７−ニトロ−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアミンから、実施例Ｉ３の方法に従い製造する。
【表２２】
【００９９】
実施例Ｉ９：
４−[１−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１３】
２−メチル−７−ニトロ−４−(４−オキソ−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(４.２ｇ、１４.５mmol)およびピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(３.２４ｇ、１７.４mmol)の１,２−ジクロロエタン溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(３.６９ｇ、１７.４mmol)を、０℃で窒素雰囲気下添加する。混合物を室温で５時間撹拌後、１Ｎ 水酸化ナトリウム水性溶液を０℃で添加する。混合物をジクロロメタンで抽出し、有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＡｃＯＥｔ；ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ＝９：１)で精製して、４−[１−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(４.１６ｇ、６２％)を得る。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.47(s, 9H), 1.66-1.76(m, 2H), 1.94-2.02(m, 2H), 2.42-2.59(m, 5H), 2.84-2.93(m, 2H), 3.05(s, 3H), 3.40-3.49(m, 4H), 3.49-3.57(m, 2H), 4.35(s, 2H), 7.00(d, 1H), 7.76(d, 1H)。
【０１００】
実施例Ｉ１０：
４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１４】
４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(５.３７ｇ、１４mmol)のエタノール(２００mL)溶液に、鉄粉末(３.９８ｇ、７０mmol)および１Ｎ 塩化水素(２８mL)を添加し、混合物を６０℃で２時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、次いで１Ｎ 水酸化ナトリウム(２８mL)を添加する。不溶性物質を濾過により除去後、混合物を濃縮する。残渣をジクロロメタンで２回抽出する。有機層を連続的に水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させ、４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(４.９ｇ)を、淡緑色無定形固体として９９％収率で得る。Ｒｆ＝０.１８(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.49(s, 9H), 2.85(t, 4H), 3.13(s, 3H), 3.54(t, 4H), 4.28(s, 2H), 5.03(s, 2H), 6.56(d, 1H), 6.96(d, 1H)。
【０１０１】
実施例Ｉ１１：
７−アミノ−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化１５】
４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(４.５６ｇ、１４mmol)のエタノール(１３０mL)溶液に、鉄粉末(４.０ｇ、７０mmol)および１Ｎ 塩酸(２８mL)を添加し、混合物を６０℃で３時間撹拌する。混合物を冷却し、次いで、１Ｎ 水酸化ナトリウム(２８mL)を添加する。不溶性物質を濾過により除去後、混合物を蒸発させる。得られた淡黄色固体を濾過により回収し、真空で５０℃で乾燥させて、７−アミノ−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(３.４３ｇ)を、褐色固体として８３％収率で得る。Ｒｆ＝０.１８(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.09(s, 3H), 1.10(s, 3H), 2.65(t, 4H), 2.75-2.69(m, 1H), 2.96(t, 4H), 3.13(s, 3H), 4.28(s, 2H), 4.99(s, 2H), 6.56(d, 1H), 6.99(d, 1H)。
【０１０２】
下記７−アミノ−２−メチル−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、対応する２−メチル−７−ニトロ−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから、実施例Ｉ１１の方法に従い製造する。
【表２３】
【０１０３】
実施例Ｉ１７：
４−[７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１６】
４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(６.１４ｇ、１８mmol)および炭酸カリウム(３.８６ｇ、４.７６mmol)のジメチルスルホキシド(６０mL)中の懸濁液に、２,４,５−トリクロロピリミジン(３.１mL、２７mmol)を添加し、混合物を６０℃で２時間撹拌する。混合物に、２,４,５−トリクロロピリミジン(１.０mL、９mmol)を添加する。６０℃で２時間撹拌後、２,４,５−トリクロロピリミジン(１.０mL、９mmol)を添加し、混合物をさらに６０℃で１０時間撹拌する。混合物を冷却し、次いで氷水に注ぐ。得られた褐色固体を濾過により回収し、ＭｅＯＨで洗浄し、真空で５０℃で乾燥させて、４−[７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(５.２９ｇ)を褐色固体として６０％収率で得る。Ｒｆ＝０.２８(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.50(s, 9H), 2.99(t, 4H), 3.23(s, 3H), 3.59(t, 4H), 4.40(s, 2H), 7.18(d, 1H), 8.21(s,1H), 8.67(d, 1H), 11.0(s, 1H)。
【０１０４】
実施例Ｉ１８：
７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化１７】
７−アミノ−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.６２ｇ、５.６mmol)および炭酸カリウム(２.５５ｇ、８.７mmol)のジメチルスルホキシド(３０mL)中の懸濁液、２,４,５−トリクロロピリミジン(９７０μL、８.４mmol)を添加し、７０℃で４時間撹拌する。混合物に、２,４,５−トリクロロピリミジン(６５０μL、５.６mmol)を添加し、混合物を７０℃で６時間撹拌する。混合物を冷却し、次いでジクロロメタンで２回抽出する。有機層を連続的に水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させる。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.９５ｇ)を黄色固体として８０％収率で得る。Ｒｆ＝０.２６(ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ＝１／４)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.13(s, 3H), 1.14(s, 3H), 2.87-2.69(m, 5H), 3.18-3.08(m, 4H), 3.22(s, 3H), 4.40(s, 2H), 7.20(d, 1H), 8.20(s, 1H), 8.66(d, 1H), 11.0(s, 1H)。
【０１０５】
下記７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、対応する７−アミノ−２−メチル−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび２,４,５−トリクロロピリミジンから、実施例Ｄの方法に従い製造する。
【表２４】
【０１０６】
実施例Ｉ２７：
５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの製造
【化１８】
滴下漏斗および温度計を備えたＩＬ、三首、丸底フラスコに、２０ｇ(０.１３mol)の２−アミノ−３−フルオロ−安息香酸および１６０mLのアセトニトリルを入れた。０℃に冷却後、１６０mLの臭化水素酸(４７％)を、１０分にわたり滴下した。得られた溶液に、１０ｇのＮａＮＯ２(０.１４５mol)の水(２０mL)溶液を１時間にわたり滴下した。添加後、反応混合物を０℃で５分撹拌し、２１.８ｇのＣｕ(Ｉ)Ｂｒ(０.１５mol)を３０分にわたり少しずつ添加した。撹拌を７０℃で油浴中１時間続けた。０℃に冷却後、７００mLのＨ２Ｏを添加し、沈殿を濾過し、冷水で洗浄し、真空で乾燥させて、２−ブロモ−３−フルオロ−安息香酸対応するオレンジ色固体を得た(２２ｇ、７８％)。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):7.32(ddd, 1H), 7.39(ddd, 1H), 7.74-7.80(m, 1H)。
【０１０７】
【化１９】
滴下漏斗および温度計を備えたＩＬ、三首、丸底フラスコに３３ｇ(０.１５mol)の２−ブロモ−３−フルオロ−安息香酸および２００mLの濃硫酸を入れた。０℃に冷却後、１６mLのＨＮＯ３(７０％)を３０分にわたり、温度を１０℃以下に維持しながら滴下した。１時間後、反応混合物ををクラッシュ・アイスに温度を２０℃以下に維持しながら注いだ。混合物を２回酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下除去し、２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸および２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸混合物(２：１)を褐色固体として、定量的収率で得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm)
２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸：7.37(dd, 1H), 8.27(dd, 1H)、
２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸：8.15(dd, 1H), 8.62-8.65(m, 1H)。
【０１０８】
【化２０】
２Ｌ、一首、丸底フラスコに、１３０ｇ(０.４９mol)の２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸および２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸の混合物および９００mLのメタノールを入れた。混合物に、８４ｇ(０.５２mol)の炭酸セシウムを添加し、得られた懸濁液を３０分撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮して、溶媒を除去した。混合物に、９００mLのＤＭＦ、続いてヨードメタン(３３.７mL、０.５４mmol)を添加し、混合物を１７時間撹拌した。反応混合物をクラッシュ・アイスに注ぎ、２回酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水、１Ｍ ＨＣｌおよび塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下蒸発させて、２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ安息香酸メチルエステルおよび２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル混合物(２：１)を、褐色油状物として定量的収率で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ(400MHz, CDCl3, δ, ppm)
２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ安息香酸メチルエステル：4.04(s, 3H), 7.34(dd, 1H), 8.24(dd, 1H)、
２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル：4.02(s, 3H), 8.10(dd, 1H), 8.47-8.50(m, 1H)。
【０１０９】
【化２１】
２Ｌ、一首、丸底フラスコに、１３０ｇ(０.４７mol)の２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ安息香酸メチルエステルおよび２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステルの混合物、１５９mL(０.５２mol)のアリルトリブチル錫および１.２Ｌのトルエンを入れた。混合物に、２７ｇ(２.３mmol)のテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)を添加し、混合物を１３０℃で７時間撹拌した。室温に冷却後、９０ｇ(２.１mol)のフッ化ナトリウムの８００mLの水溶液を反応混合物も添加した。
【０１１０】
混合物を２回酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下蒸発させて、２４７ｇの黒色油状物を得た。粗生成物を、注意深くシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ、９５／５)で精製し、２−アリル−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(７１ｇ、６３％)を黄色油状物として得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):3.45(dd, 2H), 3.95(s, 3H), 5.01-5.13(m, 2H), 5.79-5.92(m, 1H), 7.21-7.28(m, 1H), 8.10(d, 1H)。
【０１１１】
【化２２】
２Ｌ、三首、丸底フラスコに、８９２mL(０.４５mol)の９−ＢＢＮ(０.５Ｍ)および１００mLのＴＨＦを入れた。０℃に冷却後、７１ｇ(０.３mol)の２−アリル−３−フルオロ−６−ニトロ安息香酸メチルエステルの１５０mLのＴＨＦ溶液を３０分にわたり添加し、混合物を室温で５時間撹拌すた。０℃に冷却後、７００mLの１Ｍ ＮａＯＨ水溶液を反応混合物に添加し、それを３０分撹拌した。混合物に、２００mLの過酸化水素(３５％)を３０分にわたり添加し、次いで室温で１時間撹拌した。混合物を２回酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水、チオ硫酸ナトリウム溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下除去し、１０４ｇの３−フルオロ−２−(３−ヒドロキシ−プロピル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステルをオレンジ色油状物として得た。粗生成物を次反応に使用した。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.83-1.92(m, 2H), 2.74-2.79(m, 2H), 3.66(t, 2H), 3.98(s, 3H), 7.21-7.27(m, 1H), 8.10(dd, 1H)。
【０１１２】
【化２３】
３−フルオロ−２−(２−ヒドロキシエチル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(５１.４ｇ、０.２mol)のアセトン(１０００mL)溶液に、２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル、フリーラジカル、(４６０.６mg、２.９５mmol)、ナトリウムヒドロカルボキシドの水性１５％溶液(４００mL)およびナトリウムブロマイド(３.０２ｇ、２９.３mmol)を添加した。トリクロロイソシアヌル酸(６８.４ｇ、０.２９mol)を、次いでゆっくり３０分以内に、ｒｔで添加した。添加が完了し、ｒｔで２.５時間撹拌後、１５mLのイソプロパノールを０℃で注意深く添加した。混合物を減圧下濃縮した。混合物を３回酢酸エチルで抽出した。有機層を３回１Ｎ 水酸化ナトリウムで抽出した。合わせた水層を１回酢酸エチルで洗浄し、次いで５Ｎ 塩化水素で０℃で酸性化した。４回酢酸エチルで抽出後、有機層を水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させた。表題化合物２−(２−カルボキシ−エチル)−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(２８.７ｇ)が、黄色固体として７２％収率で得られた(２工程)。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):2.63-2.71(m, 2H), 2.95-3.04(m, 2H), 3.99(s, 3H), 7.22-7.28(m, 1H), 8.12(dd, 1H)。
【０１１３】
【化２４】
２−(２−カルボキシ−エチル)−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(２０.７ｇ、７６mol)中に含まれる水をトルエンとの２回の共沸により除去し、出発物質を乾燥トルエン(３８０mL)に溶解した。この溶液に、ジフェニルホスホリルアジド(１７.１mL、８０mmol)およびトリエチルアミン(１１.６mL、８３.６mmol)をｒｔで添加し、混合物を８０℃で２.０時間撹拌した。次いで、塩化銅(１.０２ｇ、７.６mmol)の乾燥メタノール(１７０mL)溶液を添加し、得られた混合物をさらに８０℃で１.５時間撹拌した。冷却後、飽和炭酸水素ナトリウムを添加し、混合物を３回酢酸エチルで抽出した。有機層を３回水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させた。得られた固体をメタノール、次いでエーテルで洗浄し、３−フルオロ−２−(２−メトキシ−カルボニルアミノ−エチル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(１６.６ｇ)を淡褐色固体として、７２％収率で得た。濾液をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン／酢酸エチル＝４／１から１／１)で精製して、さらなる表題化合物(３.８ｇ)を淡褐色物として得た。結果として、合計２０.４ｇの３−フルオロ−２−(２−メトキシカルボニルアミノ−エチル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステルが８９％収率で得られた。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):2.85-2.93(m, 2H), 3.35-3.48(m, 2H), 3.64(s, 3H), 4.00(s, 3H), 5.02(br.s, 1H), 7.23-7.28(m, 1H), 8.13(d, 1H)。
【０１１４】
【化２５】
３−フルオロ−２−(２−メトキシカルボニルアミノ−エチル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(２０.４ｇ、６８mmol)のＴＨＦ(２００mL)溶液に、水素化ナトリウム(５.４４ｇ、１３６mmol)を０℃で添加し、混合物をｒｔで２.０時間撹拌した。反応混合物に、ヨウ化メチル(１２.７mL、２０４mmol)を０℃で添加し、混合物をｒｔで１.５時間撹拌した。混合物に、飽和塩化アンモニウム溶液を０℃で添加し、混合物を３回酢酸エチルで抽出した。有機層を２回水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン／酢酸エチル／ヘキサン：９９／１／５０から９９／２／５０)で精製し、５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン(１０.９ｇ)を黄色固体として７１％収率で得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):3.04(t, 2H), 3.16(s, 3H), 3.64(t, 2H), 7.19-7.27(m, 1H), 7.42(dd, 1H)。
【０１１５】
実施例Ｉ２８：
４−[１−(２−メチル−８−ニトロ−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２６】
５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン(１１.６５ｇ、０.０５２mol)、４−ピペリジン−４−イル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２８.０ｇ、０.１０３９mol)、Ｋ２ＣＯ３(８.９８ｇ、０.０６５mol)の混合物のＤＭＳＯ(３５０mL)溶液を、８５℃で１２時間撹拌した。室温に冷却後、氷水(５００mL)を添加した。混合物をＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を水、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＡｃＯＥｔ；次いでＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ＝６／１)で精製して、１０.０９ｇの所望の生成物４−[１−(２−メチル−８−ニトロ−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを淡黄色固体として、４１％収率で得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.47(s, 9H), 1.62-1.80(m, 2H), 1.91-1.99(m, 2H), 2.00-2.08(m, 1H), 2.34-2.45(m, 1H), 2.48-2.62(m, 4H), 2.66-2.74(m, 1H), 2.94(t, 2H), 3.16(s, 3H), 3.08-3.21(m, 2H), 3.38-3.51(m, 4H), 3.55(t, 2H), 7.09(d, 1H), 7.38(d, 1H)。
【０１１６】
下記２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−５−置換−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンおよび対応するアミンから、実施例Ｉ２８の方法に従い製造する。
【表２５】
【０１１７】
実施例Ｉ３１：
４−[１−(８−アミノ−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２７】
２０ｇのニトロ化合物４−[１−(２−メチル−８−ニトロ−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(０.０２１１mol)の混合物のＥｔＯＨ(２００mL)溶液に、鉄粉末(５.９ｇ、０.１０６mol)および２Ｎ ＨＣｌ水溶液(２１mL、０.０４２mol)を添加し、混合物を８０℃で３時間撹拌した。室温に冷却後、２Ｎ ＮａＯＨ水溶液(２２mL)を添加した。得られた混合物をセライトを通して濾過し、真空で蒸発させ、９３.３８ｇの所望のアニリン４−[１−(８−アミノ−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(９.３８ｇ、定量的収率)を淡黄色無定形粉末として得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.47(s, 9H), 1.58-1.73(m, 2H), 1.84-1.93(m, 2H), 2.27-2.44 m, 1H), 2.46-2.66(m, 6H), 2.88-2.99(m, 4H), 3.11(s, 3H), 3.40-3.53(m, 6H), 5.20-6.35(br.s., 2H), 6.50(d, 1H), 7.00(d, 1H)。
【０１１８】
下記５−置換−８−アミノ−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、５−置換−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンから、実施例Ｉ３１の方法に従い製造する。
【表２６】
【０１１９】
実施例Ｉ３４：
４−｛１−[８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル]−ピペリジン−４−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２８】
４−[１−(８−アミノ−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸−ｔｅｒｔ−ブチルエステル(９.２０ｇ、２０.７mmol)、２,４,５−トリクロロピリミジン(５.９６mL、５１.８mmol)、Ｋ２ＣＯ３(７.１７ｇ、５１.８mmol)の混合物のＤＭＳＯ(２００mL)溶液を６０℃で１２時間撹拌した。室温に冷却後、７００mLの水を撹拌しながら添加した。混合物を濾過した。得られた褐色固体をＣＨ３ＣＮ(約２００mL)に懸濁させ、しばらく撹拌し、濾過した。残渣をさらにＣＨ３ＣＮで洗浄し、減圧下乾燥させて、８.７５ｇの４−｛１−[８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル]−ピペリジン−４−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを淡ベージュ色固体として７２％収率で得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.47(s, 9H), 1.61-1.74(m, 2H), 1.88-1.97(m, 2H), 2.33-2.42(m, 1H), 2.51-2.59(m, 4H), 2.65-2.73(m, 2H), 2.98-3.11(m, 4H), 3.19(s, 3H), 3.41-3.54(m, 6H), 7.24-7.27(m, 1H), 8.17(s, 1H), 8.63(d, 1H), 12.77(s, 1H)。
【０１２０】
下記５−置換−８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、５−置換−８−アミノ−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンおよび２,４,５−トリクロロピリミジンから、実施例Ｉ３４の方法に従い製造する。
【表２７】
【０１２１】
実施例Ｉ３７：
４−ヒドロキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化２９】
撹拌している３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(６ｇ、２８.２mmol)および２−(メチルスルホニル)エタノール(５.２ｇ、４２.２mmol)の４７mLのＤＭＦ溶液に、水素化ナトリウム(３.３８ｇ、８４.６mmol)を０℃で添加し、反応混合物を室温に温め、次いで１.５時間撹拌する。混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルとの間で分配する。有機層を塩水で洗浄し、濃縮乾固し、粗有機物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、３−ヒドロキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(５.３ｇ)を８９％収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.22(s, 3H), 3.99(s, 3H), 6.38(s, 1H), 6.87(d, 1H,), 7.99(d, 1H)。
【０１２２】
【化３０】
３−ヒドロキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(５.３ｇ、２５.１mmol)の７０mLのＤＭＦ溶液に、イミダゾール(２.５６ｇ、３７.７mmol)およびｔ−ブチルジメチルシリルクロライド(５.６７ｇ、３７.７mmol)を０℃で添加し、室温で１時間撹拌する。クラッシュ・アイスを溶液に添加し、酢酸エチルとの間で分配する。有機層を水および塩水で洗浄し、濃縮乾固して、３−ヒドロキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(８.９ｇ)を得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:0.19(s, 6H), 0.92(s, 9H), 2.09(s, 3H), 3.87(s, 3H), 6.76(d, 1H), 7.89(d, 1H)。
【０１２３】
【化３１】
３−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ)−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(８.９ｇ、２５.１mmol)およびＮ−ブロモスクシンイミド(５.３６ｇ、３０.１mmol)の５０mLのＣＣｌ４溶液に、２,２'−アゾビスイソブチロニトリル(４１２mg、２.５mmol)を室温で添加する。反応混合物を８０℃で２２時間撹拌し、次いで室温に冷却し、次いでクラッシュ・アイスでクエンチする。混合物をジクロロメタンで抽出し、水性ＮａＨＣＯ３溶液、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、２−ブロモメチル−３−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(１２.６ｇ)を褐色油状物として得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:0.37(s, 6H), 1.07(s, 9H), 4.0(s, 3H), 4.49(s, 2H), 6.94(d, 1H), 8.09(d, 1H)。
【０１２４】
【化３２】
室温で、２−ブロモメチル−３−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(１２.６ｇ、２５.１mmol)の６０mLのＴＨＦ溶液に、ＴＨＦ中メチルアミンの２Ｍ溶液(３７.７mL、７５.３mmol)を０℃で添加し、次いで反応混合物を６時間、室温で撹拌する。メタノールおよび１Ｍ 塩酸溶液を反応混合物に添加する。混合物を真空で蒸発させ、沈殿を回収し、４−ヒドロキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(２.１ｇ)を黄色固体として３工程で４０％収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)DMSO:3.05(s, 3H), 4.37(s, 2H), 7.02(d, 1H), 7.8(d, 1H)。
【０１２５】
実施例Ｉ３８：
４−メトキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化３３】
撹拌している３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸(４.２ｇ、２１mmol)のＴＨＦ(４０mL)およびメタノール(４０mL)溶液に、カリウムメトキシドのメタノール(１５ｇ、６３mmol)溶液を添加し、溶液を１００℃で２時間加熱する。反応混合物を室温に冷却し、次いで混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルとの間で分配する。有機層を塩水で洗浄し、次いで濃縮し、３−メトキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸(４.３ｇ)を定量的収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.32(s, 3H), 3.98(s, 3H), 6.95(d, 1H), 8.15(d, 1H)。
【０１２６】
【化３４】
３−メトキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸の４５mLのメタノール溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３(７.８ｇ、２４mmol)を添加し、室温で１時間撹拌する。溶液を減圧下濃縮し、次いで得られた黄色固体を４５mlのＤＭＦに懸濁する。ヨードメタン(１.５ml、２４mol)を０℃で添加し、室温で２１時間撹拌する。水を溶液に添加し、沈殿物を回収し、水で洗浄し、３−メトキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(４.０ｇ)をオレンジ色固体として８１％収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.2(s, 3H), 3.93(s, 3H), 3.98(s, 3H), 6.91(d, 1H), 8.11(d, 1H)。
【０１２７】
【化３５】
３−メトキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(４.１ｇ、１８.２mmol)およびＮ−ブロモスクシンイミド(３.８９ｇ、２１.８mmol)の５０mLのＣＣｌ４中の懸濁液に、２,２'−アゾビスイソブチロニトリル(２９９mg、１.８２mmol)を室温で添加する。反応混合物を８５℃で２１時間撹拌し、次いで室温に冷却する。反応混合物を室温に冷却し、次いでクラッシュ・アイスでクエンチする。混合物を酢酸エチルで抽出し、水性ＮａＨＣＯ３溶液、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、２−ブロモメチル−３−メトキシ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(７.１ｇ)をオレンジ色油状物として得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:4.0(s, 3H), 4.05(s, 3H), 4.52(s, 2H), 7.02(d, 1H), 8.2(d, 1H)。
【０１２８】
【化３６】
室温で、２−ブロモメチル−３−メトキシ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(粗７.０ｇ、１８.２mmol)の４６mLのＴＨＦ溶液を、ＴＨＦ中メチルアミンの２Ｍ溶液(２７.３mL、５４.６mmol)で処理し、混合物を４時間、室温で撹拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチルとの間で分配する。有機層を塩水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、その後濃縮し、４−メトキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(３.１ｇ)をオレンジ色固体として７７％収率で得る(２工程)。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:3.19(s, 3H), 3.99(s, 3H), 4.32(s, 2H), 7.0(d, 1H), 7.89(d, 1H)。
【０１２９】
実施例Ｉ３９：
４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルオキシ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化３７】
４−ヒドロキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(７００mg、３.３６mmol)、４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(８１１mg、４.０３mmol)およびトリフェニルホスフィン(１.０６ｇ、４.０３mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液に、ジエチルアザジカルボキシレート(０.６３mL、４.０３mmol)を０℃で滴下する。混合物を撹拌する室温で１２時間撹拌後、混合物を氷水に注ぎ、ジクロロメタンで２回抽出する。合わせた有機層を１Ｎ 水酸化ナトリウム(２回)、水、次いで塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させる。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗く精製し、３.２３ｇの４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルオキシ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの混合物を得て、それを、さらに精製することなく次反応に使用する。
【０１３０】
４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルオキシ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(６５４mg、１.０mmol)、鉄粉末(２８０mg、５.０mmol)、および１Ｎ 塩化水素(２mL、２.０mmol)の混合物のエタノール(５mL)溶液を８０℃で１時間、窒素雰囲気下撹拌する。室温に冷却後、氷および１Ｎ 水酸化ナトリウムを添加し、混合物を濾過する。濾液をジクロロメタン(２回)で抽出する。合わせた有機層を水、次いで塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、５９７mgの４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルオキシ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得て、それを、さらに精製することなく次反応に使用する。
【０１３１】
実施例Ｉ４０：
７−アミノ−２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化３８】
４−ヒドロキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.０４ｇ、５.０mmol)、４−(２−クロロ−エチル)−モルホリン塩化水素(１.１２ｇ、６.０mmol)、炭酸カリウム(８３０mg、６.０mmol)、ヨウ化カリウム(２４９mg、１.５mmol)の混合物のＤＭＦ(１５mL)溶液を、７０℃で１６時間撹拌する。混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出する(２回)。合わせた有機層を水、次いで塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、４５０mgの粗物質を得る。水層をジクロロメタン(３回)で抽出する。合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させる。得られた残渣を２回シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール)で精製し、７００mgの生成物を得る。合計で、１.１５ｇの２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンを得る。
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ ppm:2.55-2.61(m, 4H), 2.86(t, 2H), 3.20(s, 3H), 3.69-3.79(m, 4H), 4.28(t, 2H), 4.32(s, 2H), 7.00(d, 1H), 7.99(d, 1H)。
【０１３２】
７−アミノ−２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンを、上記の反応により製造する。３４０mgの７−アミノ−２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンが３８０mgの２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから得られる。
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ ppm:2.50-2.64(m, 4H), 2.76(t, 2H), 3.13(s, 3H), 3.69-3.77(m, 4H), 4.10(t, 2H), 4.26(s, 2H), 4.78-4.96(br.s, 2H), 6.55(d, 1H), 6.82(d, 1H)。
【０１３３】
下記４−置換−７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−置換−７−アミノ−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび２,４,５−トリクロロピリミジンから、実施例Ｉ３２の方法に従い製造する。
【表２８】
【０１３４】
実施例Ｉ４３：
５−メトキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの製造
【化３９】
撹拌している５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン(２.２４ｇ、１０mmol)のＤＭＦ(１５mL)溶液に、２−(メチルスルホニル)エタノール(１.８６ｇ、１５mmol)を添加し、溶液を０℃に冷却する。水素化ナトリウム(１.２ｇ、３０mmol)を添加し、反応混合物を室温に温め、次いで１時間撹拌する。混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルおよび塩水に分配する。有機層を濃縮乾固し、粗有機物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−ヒドロキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを７０％収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)アセトン-d6:2.85-3.0(m, 2H), 3.06(s, 3H), 3.6-3.7(m, 2H), 7.05-7.1(m, 1H,), 7.35-7.41(m, 1H), 9.62(brs, IH)。
【０１３５】
実施例Ｉ４４：
５−メトキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの製造
【化４０】
撹拌している５−ヒドロキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン(４４４mg、２.０mmol)のＤＭＦ(５mL)溶液に、炭酸カリウム(５５３mg、４.０mmoL)を添加し、溶液を０℃に冷却する。ヨードメタン(０.２５mL、４.０mmoL)を添加し、反応混合物を室温に温め、次いで１時間撹拌する。混合物を冷水でクエンチし、次いで沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空で乾燥させて、５−メトキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンに対応する白色固体を得る(３３６mg、７１％)。
1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.94(t, 2H), 3.15(s, 3H), 3.58(t, 2H), 3.91(s, 3H), 6.92(d, 1H,), 7.45(d, 1H), 9.62(brs, 1H)。
【０１３６】
下記５−置換−８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、５−置換−８−アミノ−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンおよび２,４,５−トリクロロピリミジンから、実施例Ｉ３２の方法に従い製造する。
【表２９】
【０１３７】
実施例Ｉ４７：
１'−(４−アミノ−３−メトキシ−フェニル)−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化４１】
４−フルオロ−２−メトキシ−１−ニトロベンゼン(１.０２ｇ、５.９７mmol)、[４,４']ビピペリジニル(３.６ｇ、１４.９mmol)、２Ｎ 水酸化ナトリウム(３０mL)、トルエン(１５mL)およびｎ−ブチルアンモニウムブロマイド(９６mg、０.３０mmol)の混合物を８０℃で１８時間激しく撹拌する。１０mLの水を添加後、混合物を濾過する。残渣を水で洗浄し、次いで乾燥させて、１−(３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル)−[４,４']ビピペリジン(１.７９ｇ、９４％収率)を黄色固体として得る。
1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:1.12-1.44(m, 6H), 1.65-1.73(m, 2H), 1.77-1.89(m, 2H), 2.52-2.63(m, 2H), 2.84-2.96(m, 2H), 3.05-3.14(m, 2H), 3.89-3.98(m, 2H), 3.95(s, 3H), 6.30(d, 1H), 6.41(dd, 1H), 8.00(d, 1H)。
【０１３８】
１−(３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル)−[４,４']ビピペリジン(１.７５ｇ、５.４８mmol)、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボキシレート(１.２０ｇ、５.４８mmol)のアセトニトリル(５５mL)中の懸濁液に、四塩化ジルコニウム(１２８mg、０.５５mmol)を添加し、混合物を環境温度で３０分撹拌する。水および水性炭酸水素ナトリウムを添加後、混合物を濾過し、乾燥させて、１'−(３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル)−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(５.１１ｇ、９２％収率)を黄色固体として得る。
1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:1.10-1.43(m, 6H), 1.46(s, 9H), 1.64-1.72(m, 2H), 1.76-1.89(m, 2H), 2.58-2.71(m, 2H), 2.84-2.95(m, 2H), 3.90-3.99(m, 2H), 3.95(s, 3H), 4.06-4.22(m, 2H), 6.30(d, 1H), 6.41(dd, 1H), 8.00(d, 1H)。
【０１３９】
１'−(３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル)−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２.０ｇ、４.７７mmol)、鉄粉末(１.３３ｇ、２３.８５mmol)、１Ｎ 塩化水素(９.５４mL、９.５４mmol)のエタノール(５０mL)中の混合物を８０℃で３時間撹拌する。室温に冷却後、２Ｎ 塩化水素(５mL)および酢酸エチルを添加し、次いで混合物を濾過する。真空で濃縮後、混合物をＡｃＯＥｔで抽出し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、１'−(４−アミノ−３−メトキシ−フェニル)−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１.７７ｇ、９５％ｙｉｅｌｄ)を淡紫色固体として得る。
1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:1.09-1.33(m, 4H), 1.37-1.50(m, 2H), 1.46(s, 9H), 1.66-1.74(m, 2H), 1.75-1.83(m, 2H), 2.50-2.59(m, 2H), 2.59-2.73(m, 2H), 3.42-3.59(m, 4H), 3.83(s, 3H), 4.03-4.23(m, 2H), 6.42(dd, 1H), 6.53(d, 1H), 6.63(d, 1H)。
【０１４０】
実施例Ａ：ＦＡＫアッセイ
全工程を９６ウェル黒色マイクロタイタープレートで行う。精製した組み換え６ヒスチジン標識ヒトＦＡＫキナーゼドメインを希釈緩衝液(５０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.５、０.０１％ＢＳＡ、０.０５％Ｔｗｅｅｎ−２０の水溶液)で９４ng／mL(２.５nM)の濃度まで希釈する。反応混合物を１０μL ５×キナーゼ緩衝液(２５０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.５、５０μM Ｎａ３ＶＯ４、５mM ＤＴＴ、１０mM ＭｇＣｌ２、５０mM ＭｎＣｌ２、０.０５％ＢＳＡ、０.２５％Ｔｗｅｅｎ−２０の水溶液)、２０μL 水、５μLの４μM ビオチニル化ペプチド基質(Ｂｉｏｔ−Ｙ３９７)の水性溶液、５μLの試験化合物のＤＭＳＯ溶液、および５μLの組み換え酵素溶液の混合により調製し、３０分、室温でインキュベートする。酵素反応を５μLの５μM ＡＴＰの水溶液添加により開始させ、混合物を３時間、３７℃でインキュベートする。反応を２００μLの検出混合物(１nM Ｅｕ−ＰＴ６６(Perkin Elmer, No. AD0068)、２.５μg／mL ＳＡ−(ＳＬ)ＡＰＣ(Perkin Elmer, No. CR130-100)、希釈緩衝液中６.２５mM ＥＤＴＡ)の添加により停止させ、ユーロピウムからアロフィコシアニンへのＦＲＥＴシグナルをEnVision多標識リーダー(Perkin Elmer)で３０分の室温でのインキュベーション後に測定する。６６５nm対６１５nmの蛍光強度比を、試験化合物による退色効果の中和のためのデータ分析のためのＦＲＥＴシグナルとして使用する。結果を酵素活性の阻害％として示す。背景シグナルのレベルをＡＴＰは存在しないが、ＤＭＳＯを０％阻害のコントロールとして使用して、測定する。ＩＣ５０値を非直線的曲線適合分析(non-linear curve fit analysis)により、OriginPro 6.１プログラム(OriginLab)を使用して決定する。
【０１４１】
Ｂｉｏｔ−Ｙ３９７ペプチド(ビオチン−SETDDYAEIIDアンモニウム塩)を、ヒトＦＡＫ(GenBank Accession Number L13616)のＳ３９２からＤ４０２の領域と同じアミノ酸配列を有するように設計し、標準法により製造する。
【０１４２】
精製した組み換え６ヒスチジン標識ヒトＦＡＫキナーゼドメインを下記方法で得る：完全長ヒトＦＡＫｃＤＮＡを、ヒト胎盤Marathon-ReadyＴＭ ｃＤＮＡ(Clontech, No. 7411-1)からの、５' ＰＣＲプライマー(ATGGCAGCTGCTTACCTTGAC)および３' ＰＣＲプライマー(TCAGTGTGGTCTCGTCTGCCC)を用いたＰＣＲ増幅により単離し、ｐＧＥＭ−Ｔベクター(Promega, No. A3600)にサブクローン化する。ＡｃｃIIIで消化後、精製したＤＮＡフラグメントをクレノウフラグメントで処理する。ｃＤＮＡフラグメントをＢａｍＨＩで消化し、ＢａｍＨＩおよびＳｔｕＩで予め切断したｐＦａｓｔＢａｃＨＴｂプラスミド(Invitrogen, 10584-027)にクローン化する。得られたプラスミド、ｈＦＡＫＫＤ(Ｍ３８４−Ｇ７０６)／ｐＦａｓｔＢａｃＨＴｂを配列決定し、その構造を確認する。得られたＤＮＡは、Ｎ末端に６ヒスチジン・タグ、スペーサー領域およびｒＴＥＶプロテアーゼ開裂部位ならびに、ＦＡＫ(Ｍｅｔ３８４−Ｇｌｙ７０６)のキナーゼドメインの２９位から３５１位を含む、３６４個のアミノ酸のタンパク質をコードする。
【０１４３】
ドナープラスミドを、バキュロウイルスゲノム中に、MaxEfficacy DH10Bac大腸菌細胞(Invitrogen, No. 10361-012)を使用して輸送する。Ｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを、Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ(登録商標)バキュロウイルス発現系(Invitrogen, No. 10359-016)に記載の、単純なアルカリ融解プロトコールにより調製する。Ｓｆ９昆虫細胞を、販売者(CellFECTHIN(登録商標), Invitrogen)により提供されたプロトコールに基づき、トランスフェクトする。各融解物へのＦＡＫ発現をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび抗ヒトＦＡＫモノクローナル抗体(Transduction Laboratories, No. F15020)でのウェスタン・ブロット法により分析する。
【０１４４】
最高の発現を示すウイルスクローンを、Ｓｆ９細胞への感染によりさらに増幅する。大規模発現のために、増幅したウイルスをExpression in ExpresSF+(登録商標)細胞に５ＭＯＩで７２時間感染させ、これらの条件が、ほとんど分解なく、高レベルのタンパク質をもたらす。細胞融解物を、硫酸ニッケルを充填し、５０mM ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.５、０.５Ｍ ＮａＣｌおよび１０mM イミダゾールで平衡化したHiTrapTM Chelathing Sepharose HP(Amersham Biosciences, No. 17-0409-01)カラムに入れる。捕捉タンパク質を、ＨＥＰＥＳ緩衝液／ＮａＣｌ中イミダゾールの量を増やしながら溶出し、緩衝液を透析により５０mM ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.５、１０％グリセロールおよび１mM ＤＴＴに変える。
【０１４５】
実施例Ｂ：ＦＡＫのリン酸化レベル
Ｔｙｒ３９７でのＦＡＫのリン酸化レベルを、サンドイッチＥＬＩＳＡにより定量する。マウス乳癌腫４Ｔ１細胞(１×１０５)を、９６ウェル培養プレートのウェルに播き、阻害剤有りまたは無しで、１時間、０.５％ＢＳＡ含有ダルベッコ改変イーグル培地でインキュベートする。培地を除去し、細胞を１％ＮＰ−４０、０.２５％デオキシコール酸ナトリウム、１５０mM ＮａＣｌ、１mM ＥＤＴＡ、１mM ＰＭＳＦ、１mM Ｎａ３ＶＯ４、１mM ＮａＦ、１μg／mL アプロチニン、１μg／mL ロイペプチンおよび１μg／mL ペプスタチンを含む、２００μL ５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４中に溶解する。遠心分離後、上清をサンドイッチＥＬＩＳＡに付し、リン酸化ＦＡＫおよび総ＦＡＫを定量する。細胞融解物を、１５０mM ＮａＣｌ含有５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ９.５中、１００μL／ウェルの４μg／mL マウスモノクローナル抗ＦＡＫ抗体(クローン７７、Becton Dickinson Transduction Laboratories)で１８時間、４℃でプレコートし、Ｈ２Ｏで１：４希釈した３００μLのBlockAce(Dainippon Pharmaceuticals Co.)で室温で２時間ブロックした９６ウェル平底ＥＬＩＳＡプレートに添加した。ＴＢＳＮ(３００mM ＮａＣｌ、０.１％ＳＤＳおよび０.０５％ＮＰ−４０含有２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８.３)で洗浄後、総ＦＡＫを１００μLの１μg／ml 抗ＦＡＫポリクローナル抗体(#65-6140, Upstate Biology Inc.)で検出し、そして、リン酸化ＦＡＫをＨ２Ｏで１：１０希釈したBlockAce中の１００μLの０.２５μg／μL 抗リン酸化ＦＡＫ(Ｙ３９７)抗体(Affinity BioReagents, #OPA1-03071)で検出する。１時間、室温でインキュベーション後、プレートをＴＢＳＮで洗浄し、Ｈ２Ｏで１：１０希釈したBlockAceで１：２０００希釈した１００μLのビオチニル化抗ウサギＩｇＧ(#65-6140, Zymed Laboratolies Inc.)と室温で１時間インキュベートする。ＴＢＳＮで洗浄後、ＡＢＴＳ溶液基質キット(#00-2011, Zymed Lobolatories Inc.)を発色のために使用する。４０５nmの吸光度を、室温で２０分インキュベーション後に測定する。ＦＡＫのリン酸化レベルの５０％減少をもたらす化合物濃度を決定する。
【０１４６】
実施例Ｃ：固定−非依存的腫瘍細胞増殖アッセイ
マウス乳癌腫４Ｔ１細胞(５×１０３)を、９６ウェルUltra low Attachmentプレート(#3474, Corning Inc.)中、１００μLの１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ改変イーグル培地に播く。細胞を２時間培養し、阻害剤を、最終濃度０.１％ＤＭＳＯ中の種々の濃度で添加する。４８時間後、細胞増殖を細胞計数キット−８(和光純薬)でアッセイし、それは水溶性テトラゾリウム塩ＷＳＴ８を使用する。２０μLの試薬を各ウェルに添加し、細胞をさらに２時間培養する。光学密度を４５０nmで測定する。増殖の５０％阻害をもたらす濃度を測定する。
【０１４７】
実施例Ｄ：インビトロＴ細胞遊走アッセイ：
免疫細胞の移動性に対するＦＡＫ阻害剤の阻害活性を、下記インビトロ試験により確認する。すなわち、Ｊｕｒｋａｔ Ｔヒト白血病細胞系を、１×１０５細胞で、８μm孔(Beckton Dickinson, UK)を有するFluoroblockの上部チャンバーに置き、４時間、３７℃、９５％空気−５％ＣＯ２の培養により、ウシ胎児血清(１０％ＦＢＳ)の濃度勾配に依存して、移動させる。細胞移動性を、下部チャンバーに移動した細胞数を、１時間、ＨＢＳＳ中８μg／mlのカルセイン−ＡＭ(Molecular Probes, Netherlands)で標識することにより概算する。ＦＡＫ阻害剤の評価のために、上部および下部チャンバーに種々の濃度のＦＡＫ阻害剤(０.０３−１０μM)を添加する。ＩＣ５０値を、Ascent(励起：４８５nm、放出：５３８nm)で測定したこれらの蛍光強度を、媒体処置群のものと比較することにより計算する。
【０１４８】
実施例：Ｅ
ＡＬＫアッセイ
ＡＬＫチロシンキナーゼ活性阻害は既知法を使用して、例えばJ. Wood et al. Cancer Res. 60, 2178-2189(2000)に記載のＶＥＧＦ−Ｒキナーゼアッセイに準じて、ＡＬＫの組み換えキナーゼドメインを使用して、測定する。
【０１４９】
式Ｉの化合物は、ヒトＮＰＭ−ＡＬＫ過剰発現マウスＢａＦ３細胞の増殖を強力に阻害する。ＮＰＭ−ＡＬＫの発現は、ＢａＦ３細胞系を、ＮＰＭ−ＡＬＫをコードする発現ベクターｐＣＩｎｅｏTM(Promega Corp., Madison WI, USA)でトランスフェクトし、でトランスフェクトし、続いてＧ４１８耐性細胞を選択することにより達成する。トランスフェクトしていないＢａＦ３細胞は、細胞生存をＩＬ−３に依存する。対照的にＮＰＭ−ＡＬＫ発現ＢａＦ３細胞(以後ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫと呼ぶ)は、それらがＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼを介して増殖性シグナルを得るため、ＩＬ−３非存在下で増殖できる。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤は、故に増殖シグナルをなくし、抗増殖性活性をもたらす。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤の抗増殖性活性は、しかし、ＮＰＭ−ＡＬＫ非依存的機構を介した増殖シグナルを提供するＩＬ−３の添加により打ち消され得る[ＦＬＴ３キナーゼを使用した類似の細胞系についてE Weisberg et al. Cancer Cell;1, 433-443(2002)参照]。式Ｉの化合物の阻害活性は、簡単に言うと、下記の通り決定する：ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞(１５０００／マイクロタイタープレートウェル)を９６ウェルマイクロタイタープレートに移す。試験化合物[ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解]ＤＭＳＯの最終濃度が１％(ｖ／ｖ)を超えない方法で、連続濃度で添加する(希釈シリーズ)。添加後、プレートを２日間インキュベートし、その間、試験化合物なしのコントロールは、２回の細胞分割サイクルを受け得る。ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞の増殖を、YoproTM染色の手段により測定する(T Idziorek et al. J. Immunol. Methods;185:249-58 [1995])：２０mM クエン酸ナトリウム、ｐＨ４.０、２６.８mM 塩化ナトリウム、０.４％ＮＰ４０、２０mM ＥＤＴＡおよび２０mMから成る２５μlの溶解緩衝液を各ウェルに添加する。細胞溶解は室温で６０分以内に完了し、ＤＮＡに結合したYoproの総量を、下記設定のCytofluor II ９６ウェルリーダー(PerSeptive Biosystems)を使用して測定することにより決定する：励起(nm)４８５／２０および放出(nm)５３０／２５。
ＩＣ５０値は、式：
ＩＣ５０＝[(ＡＢＳ試験−ＡＢＳ開始時)／(ＡＢＳ対象−ＡＢＳ開始時)]×１００
を使用したコンピューターを利用したシステムにより決定する。
【０１５０】
これらの実験のＩＣ５０値は、阻害剤なしのコントロールを使用して得られたより５０％低い細胞数をもたらす、問題の試験化合物の濃度として示す。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【０１５１】
式Ｉの化合物の抗増殖性作用はまた、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞系(WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56(2002)に記載)において、ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞系について上記したのと同じ方法を使用して決定できる。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【０１５２】
実施例Ｆ：ヌードマウス異種移植片モデルにおけるインビボ活性：
雌または雄ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス(５−８週齢、日本チャールス・リバー株式会社、横浜、日本)を滅菌条件下に保ち、水および餌は自由に摂取させる。腫瘍細胞(ヒト上皮性細胞系ＭＩＡ ＰａＣａ−２；European Collection of Cell Cultures (ECACC), Salisbury, Wiltshire, UK, Catalogue Number 85062806；６５歳白人男性からの細胞系；未分化型ヒト膵臓癌腫細胞系)を、マウスの左または右脇腹に、Forene(登録商標)麻酔(アボット ジャパン株式会社、東京、日本)下に皮下注射することにより、腫瘍を誘発する。試験化合物での処置を、腫瘍体積が約１００mm３に達したときに開始する。腫瘍増殖を週に２回、および最後の処置１日後に、２垂直軸を測定することにより測定する。腫瘍体積を、文献法(Evans et al., Brit. J. Cancer 45, 466-8, 1982参照)に従い計算する。抗腫瘍効果を、処置動物の腫瘍体積の平均増加を、非処置動物(コントロールの)腫瘍体積の平均増加で割り、１００を掛けた後、デルタＴ／Ｃ[％]として示す。腫瘍緩解を、処置動物の腫瘍体積の平均変化を、処置開始時の平均腫瘍体積で割り、１００を掛けた後、緩解[％]として示す。試験化合物を、経口で毎日、休薬日有りまたは無しで投与する。
【０１５３】
細胞系ＭＩＡ ＰａＣａ−２の代わりに、他の細胞系も同じ方法で使用でき、その例は下記である：
− ４Ｔ１乳癌腫細胞系(ATCC Number CRL-2539；Cancer. 88(12 Supple), 2979-2988, 2000もまた参照)で雌ＢＡＬＢ／ｃマウス(乳房脂肪パッドに注射)。
【０１５４】
実施例Ｇ：錠剤
５０mgの活性成分、例えば実施例１から１３１に記載の式Ｉの化合物のいずれかひとつを含み、下記組成を有する錠剤を、慣用法で製造する：
【表３０】
【０１５５】
製造：活性成分を、小麦デンプンの一部、ラクトースおよびコロイド状ケイ酸と混合し、混合物を篩過させる。さらに一部の小麦デンプンを水浴上で、５倍量の水とペースト状にし、粉末混合物をそのペーストとわずかに可塑性の塊が得られるまで練る。
可塑性の塊を約３mmメッシュサイズの篩を通し、乾燥させ、得られた乾燥顆粒を再び篩過させる。次いで小麦デンプンの残り、タルクおよびステアリン酸マグネシウムを混ぜ入れ、混合物を圧縮して、１４５mg重量で、割線を有する錠剤に整形する。
【０１５６】
実施例Ｈ：軟カプセル
各々５０mgの活性成分、例えば実施例１から３３に記載の式Ｉの化合物のいずれかひとつを含む５０００個の軟ゼラチンカプセルを、慣用法で製造する：
【表３１】
【０１５７】
製造：微粉化活性成分をLauroglykol(登録商標)(プロピレングリコールラウレート、Gattefosse S.A., Saint Priest, France)に懸濁させ、湿式微粉機で、約１から３μmの粒子サイズまで挽く。混合物の０.４１９ｇ分を、次いで軟ゼラチンカプセルに、カプセル充填機を使用して分配する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規ピリミジン誘導体、それらの製造法、医薬としてのそれらの使用およびそれらを含む医薬組成物に関する。
【発明の開示】
【０００２】
より特に本発明は、第一の局面において、式Ｉ
【化１】
〔式中、
Ｒ０は水素であり；
Ｒ１は、ＮおよびＯから独立して選択された１個または２個のヘテロ原子を含む、非置換または置換６員単環または１０員二環式−ヘテロ環であり；
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＣおよびＮと一体となって、Ｎから独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含むヘテロ環を形成し、それは非置換または低級アルキルおよびオキソから独立して選択される１個以上の置換基で置換されており；
Ｒ４は水素であり；
Ｒ５はハロゲンであり；
Ｒ６は水素であり；
Ｒ７は水素であり；
Ｒ８は水素；ハロゲン、Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されたカルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；ＮまたはＯから独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、非置換またはヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、モノ−またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノ、１個または２個のＮ環原子を含む６員ヘテロ環(これは非置換であるか、またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されている)から独立して選択される置換基で置換されている５または６員ヘテロ環；１個のＮ環原子を含み、非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されている５または６員ヘテロ環−Ｃ１−Ｃ７アルコキシであり；
Ｒ９は水素であり；
Ｒ１０は水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである。〕
の化合物またはその塩を提供する。
【０００３】
前記および後記で使用する一般的用語は、好ましくは、特記されない限り、本明細書の内容の範囲内で、下記の意味を有する：
化合物、塩などについて複数表現が使用されているとき、これはまた単独の化合物、塩などを意味すると取るべきである。
【０００４】
全ての不斉炭素原子は、(Ｒ)−、(Ｓ)−または(Ｒ,Ｓ)−立体配置、好ましくは(Ｒ)−または(Ｓ)−立体配置で存在し得る。本化合物は、故に異性体混合物としてまたは純粋異性体として、好ましくはエナンチオマー−純粋ジアステレオマーとして存在できる。
本発明は、式Ｉの化合物の可能な互変異性体にも関する。
【０００５】
Ｃ１−Ｃ８アルキルは、１個から８個、とりわけ４個までの炭素原子を有するアルキルラジカルであって、当該ラジカルは、直鎖であるか、または１箇所もしくは複数箇所枝分かれで分枝しており；好ましくは、Ｃ１−Ｃ８アルキルはブチル、例えばｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、プロピル、例えばｎ−プロピルまたはイソプロピル、エチルまたはメチル；とりわけメチル、プロピルまたはｔｅｒｔ−ブチルである。
【０００６】
Ｃ２−Ｃ８アルケニルは、２個から８個、とりわけ５個までの炭素原子を有するアルケニルラジカルであり、当該ラジカルは、直鎖であるか、または１箇所もしくは複数箇所枝分かれで分枝しており；好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルケニルはペンテニル、例えば３−メチル−２−ブテン−２−イル、ブテニル、例えば１−または２−ブテニルまたは２−ブテン−２−イル、プロペニル、例えば１−プロペニルまたはアリル、またはビニルである。
【０００７】
Ｃ２−Ｃ８アルキニルは、２個から８個、とりわけ５個までの炭素原子を有するアルキニルラジカルであり、当該ラジカルは直鎖または分枝鎖であり；好ましくは、Ｃ２−Ｃ８アルキニルはプロピニル、例えば１−プロピニルまたはプロパルギル、またはアセチレニルである。
【０００８】
Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルは、３個から８個までの炭素原子を有するシクロアルキルラジカル、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチル、好ましくはシクロプロピル、シクロペンチルまたはシクロヘキシルである。
【０００９】
Ｃ１−Ｃ８アルコキシはとりわけメトキシ、エトキシ、イソプロピルオキシ、またはｔｅｒｔ−ブトキシである。
ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキルはとりわけヒドロキシメチル、２−ヒドロキシエチルまたは２−ヒドロキシ−２−プロピルである。
ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルコキシは、とりわけ２−ヒドロキシエトキシまたは３−ヒドロキシプロポキシである。
【００１０】
Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルコキシはとりわけ２−メトキシエトキシである。
Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキルはとりわけメトキシメチル、２−メトキシエチルまたは２−エトキシエチルである。
ハロゲンは好ましくはフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素、とりわけフッ素、塩素、または臭素である。
【００１１】
ハロＣ１−Ｃ８アルキルは好ましくはクロロＣ１−Ｃ８アルキルまたはフルオロＣ１−Ｃ８アルキル、とりわけトリフルオロメチルまたはペンタフルオロエチルである。
ハロＣ１−Ｃ８アルコキシは好ましくはクロロＣ１−Ｃ８アルコキシまたはフルオロＣ１−Ｃ８アルコキシ、とりわけトリフルオロメトキシである。
Ｃ１−Ｃ８アルコキシカルボニルはとりわけｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、イソ−プロポキシカルボニル、メトキシカルボニルまたはエトキシカルボニルである。
【００１２】
非置換または置換カルバモイルは、水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、非置換または置換Ｃ５−Ｃ１０アリール、またはアミノＣ１−Ｃ８アルキルから選択される１個または２個の置換基で置換されたカルバモイル、またはカルバモイル基の置換基および窒素原子が、Ｎ、ＯおよびＳから選択される０個、１個または２個のヘテロ原子をさらに含む５または６員ヘテロシクリルを示すカルバモイルであり；好ましくはカルバモイル、メチルカルバモイル、ジメチルカルバモイル、プロピルカルバモイル、ヒドロキシエチル−メチル−カルバモイル、ジ(ヒドロキシエチル)カルバモイル、ジメチルアミノエチルカルバモイル、またはピロリジノカルボニル、ピペリジノカルボニル、Ｎ−メチルピペラジノカルボニルまたはモルホリノカルボニル、とりわけカルバモイルまたはジメチルカルバモイルである。
【００１３】
非置換または置換スルファモイルは、水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、非置換または置換Ｃ５−Ｃ１０アリール、またはアミノＣ１−Ｃ８アルキルから選択される１個または２個の置換基で置換されたスルファモイル、またはスルファモイル基の置換基および窒素原子が、Ｎ、ＯおよびＳから選択される０個、１個または２個のヘテロ原子をさらに含む５または６員ヘテロシクリルを示すスルファモイルであり；好ましくはスルファモイル、メチルスルファモイル、プロピルスルファモイル、シクロプロピルメチル−スルファモイル、２,２,２−トリフルオロエチルスルファモイル、ジメチルアミノエチルスルファモイル、ジメチルスルファモイル、ヒドロキシエチル−メチル−スルファモイル、ジ(ヒドロキシエチル)スルファモイル、またはピロリジノスルホニル、ピペリジノスルホニル、Ｎ−メチルピペラジノスルホニルまたはモルホリノスルホニル、とりわけスルファモイルまたはメチルスルファモイルである。
【００１４】
非置換または置換アミノは、水素、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３−Ｃ８シクロアルキルＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、非置換または置換Ｃ５−Ｃ１０アリール、アミノＣ１−Ｃ８アルキル、アシル、例えばホルミル、Ｃ１−Ｃ８アルキルカルボニル、Ｃ５−Ｃ１０アリールカルボニル、Ｃ１−Ｃ８アルキルスルホニルまたはＣ５−Ｃ１０アリールスルホニルから選択される１個または２個の置換基で置換されたアミノであり、好ましくはアミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、プロピルアミノ、ベンジルアミノ、ヒドロキシエチル−メチル−アミノ、ジ(ヒドロキシエチル)アミノ、ジメチルアミノエチルアミノ、アセチルアミノ、アセチル−メチル−アミノ、ベンゾイルアミノ、メチルスルホニルアミノまたはフェニルスルホニルアミノ、とりわけアミノまたはジメチルアミノである。
【００１５】
アミノＣ１−Ｃ８アルキルは、とりわけアミノエチル、メチルアミノエチル、ジメチルアミノエチルまたはジメチルアミノプロピルである。
【００１６】
非置換または置換Ｃ５−Ｃ１０アリールは、例えば、所望によりＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、メチレンジオキシ、アミノ、置換アミノ、ハロゲン、カルボキシ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシカルボニル、カルバモイル、スルファモイル、シアノまたはニトロで置換されていてよい、フェニル、インデニル、インダニル、ナフチル、または１,２,３,４−テトラヒドロナフタレニル；好ましくはフェニル、トリル、トリフルオロメチルフェニル、メトキシフェニル、ジメトキシフェニル、メチレンジオキシフェニル、クロロフェニルまたはブロモフェニルであり、ここで、置換基は、オルト位、パラ位またはメタ位にあってよく、好ましくはメタ位またはパラ位である。
【００１７】
Ｃ５−Ｃ１０アリールオキシはとりわけフェノキシまたはメトキシフェノキシ、例えばｐ−メトキシフェノキシである。
Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルキルはとりわけベンジルまたは２−フェニルエチルである。
Ｃ５−Ｃ１０アリールＣ１−Ｃ８アルコキシはとりわけベンジルオキシまたは２−フェニルエトキシである。
【００１８】
Ｎ、ＯおよびＳから選択される１個、２個または３個のヘテロ原子を含む非置換または置換５または６員ヘテロシクリルは、不飽和、部分的不飽和または飽和であってよく、さらにベンゾ基または５もしくは６員ヘテロシクリル基に縮合していてよく、そしてヘテロまたは炭素原子を介して結合してよく、例えば、ピロリル、インドリル、ピロリジニル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、テトラゾリル、ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、１,２,３,４−テトラヒドロキノリニル、ピペリジル、ピリミジニル、ピラジニル、ピペラジニル、プリニル、テトラジニル、オキサゾリル、イソキサリル、モルホリニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、オキサジアゾリル、およびベンゾオキサジアゾリルである。考えられる置換基はＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシＣ１−Ｃ８アルコキシ、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、アミノ、置換アミノ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、Ｃ１−Ｃ８アルキルカルボニル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシカルボニル、カルバモイル、Ｃ１−Ｃ８アルキルカルバモイル、シアノ、オキソ、またはこの段落で定義の通りの非置換または置換５または６員ヘテロシクリルである。５または６員ヘテロシクリルは、好ましくはＮ、ＯおよびＳから選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、とりわけインドリル、ピロリジニル、ピロリドニル、イミダゾリル、Ｎ−メチルイミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、Ｓ,Ｓ−ジオキソイソチアゾリジニル、ピペリジル、４−アセチルアミノピペリジル、４−メチルカルバモイルピペリジル、４−ピペリジノピペリジル、４−シアノピペリジル、ピペラジニル、Ｎ−メチルピペラジニル、Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)ピペラジニル、モルホリニル、１−アザ−２,２−ジオキソ−２−チアシクロヘキシル、またはスルフォラニルである。
【００１９】
非置換または置換ヘテロシクリルオキシにおいて、ヘテロシクリルは上記で定義の通りの意味を有し、とりわけＮ−メチル−４−ピペリジルオキシである。非置換または置換ヘテロシクリルＣ１−Ｃ８アルコキシにおいて、ヘテロシクリルは上記で定義の通りの意味を有し、とりわけ２−ピロリジノエトキシ、２−モルホリノエトキシ、３−モルホリノプロポキシ、１−メチル−ピペリジン−３−イルメトキシ、３−(Ｎ−メチルピペラジノ)プロポキシまたは２−(１−イミダゾリル)エトキシである。
【００２０】
Ｎ、ＯおよびＳから選択される０個、１個、２個または３個のヘテロ原子を含み、２個の隣接置換基とベンゼン環が一体となって形成される、５または６員炭素環式もしくはヘテロ環式環において、環は、例えばＣ１−Ｃ８アルキル、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロＣ１−Ｃ８アルキル、ヒドロキシ、アミノ、置換アミノ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシ、ハロゲン、カルボキシ、Ｃ１−Ｃ８アルコキシカルボニル、カルバモイル、シアノ、またはオキソでさらに置換されていてよい。このような環を形成する２個の隣接置換基は、好ましくはプロピレン、ブチレン、１−アザ−２−プロピリデン、３−アザ−１−プロピリデン、１,２−ジアザ−２−プロピリデン、２,３−ジアザ−１−プロピリデン、１−オキサプロピレン、１−オキサプロピリデン、メチレンジオキシ、ジフルオロメチレンジオキシ、２−アザ−１−オキソプロピレン、２−アザ−２−メチル−１−オキソプロピレン、１−アザ−２−オキソプロピレン、２−アザ−１,１−ジオキソ−１−チアプロピレンまたは６員環を形成する対応するブチレン誘導体である。
【００２１】
塩は、とりわけ式Ｉの化合物の薬学的に許容される塩である。
このような塩は、例えば、酸付加塩として、好ましくは有機または無機酸と、塩基性窒素原子を有する式Ｉの化合物から形成され、とりわけ薬学的に許容される塩である。適当な無機酸は、例えば、ハロゲン酸、例えば塩酸、硫酸、またはリン酸である。適当な有機酸は、例えば、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸またはスルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、オクタン酸、デカン酸、ドデカン酸、グリコール酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、アジピン酸、ピメリン酸、スベリン酸、アゼライン酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アミノ酸、例えばグルタミン酸またはアスパラギン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、シクロヘキサンカルボン酸、アダマンタンカルボン酸、安息香酸、サリチル酸、４−アミノサリチル酸、フタル酸、フェニル酢酸、マンデル酸、ケイ皮酸、メタン−またはエタン−スルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、エタン−１,２−ジスホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１,５−ナフタレン−ジスホン酸、２−、３−または４−メチルベンゼンスルホン酸、メチル硫酸、エチル硫酸、ドデシル硫酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−またはＮ−プロピル−スルファミン酸、または他の有機プロトン酸、例えばアスコルビン酸である。
【００２２】
単離または精製目的で、薬学的に許容されない塩、例えばピクリン酸塩または過塩素酸塩の使用も可能である。治療的使用のために、薬学的に許容される塩または遊離化合物のみを用い(適用可能であれば、医薬製剤の形で)、故に、これらが好ましい。
【００２３】
遊離形の、および中間体として、例えば新規化合物の精製または同定に使用できる塩を含む塩の形の新規化合物密接な関係から、上記および下記の遊離化合物に関する全ての言及は、適当であり、好都合である限り、対応する塩も言及すると理解される。
【００２４】
式Ｉの化合物は、上記および下記の通りの価値ある薬理学的特性を有する。
【００２５】
式Ｉにおいて、下記の意味が、独立して、集合的にまたは任意の組合せもしくは下位の組み合わせで好ましい。
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がピペリジニル、ピペラジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり、その各々は非置換であるか、またはピペリジニル(pipereridinyl)、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、ピペラジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニルで置換されており；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってインドリルまたはイソキノリニルを形成し、この両方は非置換であるか、またはＣ１−Ｃ７アルキルおよび／またはオキソで置換されており；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がハロゲンであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；ハロゲン、Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されたカルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；モルホリノ；ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ピロリジニル；ピペラジニル−ピペリジニルであり；ここで、ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ、モルホリノ；ピペリジニル(piperindinyl)、ビピペリジニル(bipiperindinyl)、ピロリジニル、ピペラジニル−ピペリジニルは非置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、モノ−またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノから独立して選択される置換基で置換されており；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである。
【００２６】
より好ましいのは、独立して、集合的にまたは任意の組合せもしくは下位の組み合わせの下記の意味である：
Ａ)
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がヒドロキシ−ピペリジニル、ピペリジニル−ピペリジニル、ピペラジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル、ピペラジニル−ピペリジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−ピペリジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってインドリルまたはイソキノリニルを形成し、この両方はＣ１−Ｃ７アルキルおよびオキソで置換されており；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がハロゲンであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；ハロゲン、Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換Ｃ１−Ｃ７アルキル−カルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；モルホリノ；ヒドロキシ−ピペリジニル(piperindinyl)；Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノ−ピロリジニルであり；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである。
【００２７】
Ｂ)
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がヒドロキシ−ピペリジニル、ピペリジニル−ピペリジニル、ピペラジニル、メチル−ピペラジニル、イソプロピル−ピペラジニル、ピペラジニル−ピペリジニル、メチル−ピペラジニル−ピペリジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってメチル−イソインドロンまたはメチル−イソキノリノンを形成し；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がクロロであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；フルオロ、メトキシ；非置換メチル−カルボミル；メトキシ−エトキシ；メチル−ピペラジニル−エトキシ；モルホリノ；ヒドロキシ−ピペリジニル(piperindinyl)；メチル−ピペラジニル−ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ジメチルアミノ−ピロリジニルであり；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、フルオロまたはメトキシである。
【００２８】
式Ｉの化合物として最も好ましいは、置換基が、実施例に記載の意味を有するものである。
【００２９】
４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−｛５−クロロ−２−[２−メトキシ−４−(２−メトキシ−エトキシ)−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(Ｒ)−ヘキサヒドロ−ピラノジノ[２,１−ｃ][１,４]オキサジン−８−イル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル、
７−｛５−クロロ−２−[４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メトキシ−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(Ｒ)−ヘキサヒドロ−ピラノジノ[２,１−ｃ][１,４]オキサジン−８−イル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
【００３０】
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
４−｛５−クロロ−４−[７−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルアミノ]−ピリミジン−２−イルアミノ｝−３−メトキシ−Ｎ−メチル−ベンズアミド、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−｛５−クロロ−２−[４−((Ｓ)−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル)−２−メトキシ−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−(５−クロロ−２−｛２−メトキシ−４−[２−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−エトキシ]−フェニルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
【００３１】
７−｛５−クロロ−２−[４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メトキシ−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−｛５−クロロ−２−[４−((Ｒ)−３−ジメチルアミノ−ピロリジン−１−イル)−２−メトキシ−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[２−(４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−２−メトキシ−フェニルアミノ)−５−クロロ−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−(５−クロロ−２−｛２−メトキシ−４−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−フェニルアミノ｝−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−｛５−クロロ−２−[２−メトキシ−４−(２−メトキシ−エトキシ)−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
７−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン、
８−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
【００３２】
８−[５−クロロ−２−(２,４−ジメトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
８−[５−クロロ−２−(２−フルオロ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
８−｛５−クロロ−２−[２−メトキシ−４−(２−メトキシ−エトキシ)−フェニルアミノ]−ピリミジン−４−イルアミノ｝−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
８−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−４−モルホリン−４−イル−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン、
から選択される式Ｉの化合物またはその塩が最も好ましい。
【００３３】
本発明はまた式Ｉの化合物の製造法であって、式II
【化２】
〔式中、
Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は上記で定義の通りであり、そしてＹは脱離基、好ましくはハロゲン、例えば臭素、ヨウ素または特に塩素である。〕
の化合物と、式III
【化３】
〔式中、
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は上記で定義の通りである。〕
の化合物を反応させ；
そして、所望により、置換基が上記で定義の意味を有する式Ｉの化合物を、上記で定義の他の式Ｉの化合物に変換し；
そして得られた式Ｉの化合物を遊離形または塩として回収し、そして、必要なとき、遊離形で得られた式Ｉの化合物を所望の塩に、または得られた塩を遊離形に変換する
ことを含む、方法も提供する。
【００３４】
本反応は、それ自体既知の方法で、反応条件は、本質的に脱離基Ｙの反応性および式IIIのアニリン中のアミノ基の反応性に依存して、通常、適当な溶媒または希釈剤またはそれらの混合物の存在下であり、必要であれば、酸または塩基存在下、冷却または、好ましくは、加熱しながら、例えば約−３０℃から約＋１５０℃、とりわけ約０℃から＋１００℃、好ましくは室温(約＋２０℃)から＋８０℃の温度範囲で、開放または密封容器中および／または不活性ガス、例えば窒素雰囲気下行うことができる。
【００３５】
１個以上の他の官能基、例えばカルボキシ、ヒドロキシまたはアミノが式IIまたはIIIの化合物において、それらが反応に参加すべきでないため保護する必要があるとき、これらはペプチド化合物、セファロスポリンおよびペニシリン、ならびに核酸誘導体および糖の合成において通常使用されるこのような基が存在する。
【００３６】
保護基は既に前駆体に存在していてよく、望ましくない二次反応、例えば置換反応または加溶媒分解に対して関与する官能基を保護しなければならない。それ自体容易に、すなわち望まない二次反応なしに、典型的に、加溶媒分解、還元、光分解あるいはまた酵素活性により、例えば生理学的条件に類似の条件で除去されることを助け、最終産物に存在しないのが保護基の特徴である。当業者は、その保護基が上記の反応に適当であるか、知っており、または容易に確立できる。
【００３７】
塩形成基を有する式Ｉの化合物の塩は、それ自体既知の方法で製造できる。式Ｉの化合物の酸付加塩は、故に、酸または適当なアニオン交換試薬での処理により得ることができる。
【００３８】
塩は、通常遊離形の化合物に、例えば適当な塩基性試薬、例えばアルカリ金属炭酸塩、アルカリ金属炭酸水素塩、またはアルカリ金属水酸化物、典型的に炭酸カリウムまたは水酸化ナトリウムで処理することにより、変換できる。
【００３９】
立体異性体混合物、例えばジアステレオマーの混合物は、それらの対応する異性体に、適当な分離法の手段により、それ自体既知の方法で分離できる。ジアステレオマー混合物は、例えばそれらの個々のジアステレオマーに、分別結晶、クロマトグラフィー、溶媒分布、および類似の方法の手段により分離できる。この分離は出発化合物のレベルまたは式Ｉの化合物それ自体で行い得る。エナンチオマーは、例えばエナンチオマー−純粋キラル酸との塩形成による、ジアステレオマー塩の形成を介して、またはキラルリガンドの支持体を使用したクロマトグラフィー、例えばＨＰＬＣの手段で分離できる。
【００４０】
この章に記載の変換に類似した反応はまた適当な中間体のレベルで行うことができることは強調すべきである。
【００４１】
式Ｉの化合物(その塩を含む)は水和物の形で得ることができ、またはそれらの結晶は、例えば結晶化に使用した溶媒を含み得る(溶媒和物として存在)。
【００４２】
出発物質として使用する式IIの化合物は、式IV
【化４】
の化合物と式Ｖ
【化５】
の化合物の反応により得ることができる(式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は上記で定義の通りであり、そしてＹ１およびＹ２は、上記でＹについて定義した通りの同一または異なる脱離基である)。反応条件は、上記で式IIの化合物と式IIIの化合物の反応について記載したものである。
【００４３】
式IVおよびＶの化合物は既知であるか、または既知の方法に従って製造できる。
【００４４】
式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される塩は、インビトロ無細胞キナーゼアッセイおよび細胞アッセイで試験したとき価値ある薬理学的特性を示し、故に、医薬として有用である。特に、本発明の化合物は、接着斑キナーゼの阻害剤であり、接着斑キナーゼに接続したシグナルカスケードの不全が原因の状態、特に下記の腫瘍の処置のための医薬として有用である。
【００４５】
接着斑キナーゼ(ＦＡＫ)は、インテグリン介在アウトサイド・イン・シグナルカスケードにおける重要な酵素である(D. Schlaepfer et al., Prog Biophys Mol Biol 1999, 71, 435-478)。細胞と細胞外マトリックス(ＥＣＭ)タンパク質の間の相互作用が、細胞表面受容体、インテグリンを介して、増殖、生存および移動に重要な細胞内シグナルとして伝達される。ＦＡＫは、これらのインテグリン介在アウトサイド・イン・シグナルカスケードにおいて必須の役割を有する。本シグナル伝達カスケードにおける引き金は、Ｙ３９７の自己リン酸化である。リン酸化Ｙ３９７は、ＳｒｃファミリーチロシンキナーゼのためのＳＨ２ドッキング部位である。結合したｃ−Ｓｒｃキナーゼは、ＦＡＫにおける他のチロシン残基をリン酸化する。これらの中で、リン酸化Ｙ９２５が、Ｇｒｂ２小アダプタータンパク質のＳＨ２部位のための結合部位となる。このＧｒｂ２とＦＡＫの直接の結合は、Ｒａｓ−ＥＲＫ２／ＭＡＰキナーゼカスケードのような下流標的の活性化のための重要な工程の一つである。
【００４６】
内因性ＦＡＫシグナル伝達の阻害は、減少した運動性をもたらし、ある場合細胞死を誘発する。他方、ＦＡＫシグナル伝達の外因性発現による増加は、細胞運動性を増加させ、ＥＣＭから細胞生存シグナルを伝達する。加えてＦＡＫは、侵襲性および転移性上皮性、間葉性、甲状腺および前立腺癌において過剰発現される。結果として、ＦＡＫの阻害剤は、抗腫瘍増殖および転移のための薬剤である可能性がある。本発明の化合物は、故に、例えば、新生物疾患、特に乳房腫瘍、腸の癌(結腸および直腸)、胃癌および卵巣および前立腺の癌、非小細胞性肺癌、小細胞肺癌、肝臓の癌、黒色腫、膀胱腫瘍および頭頚部の癌を有する脊椎動物、およびより特に哺乳動物の予防および／または処置のために指示される。
【００４７】
ＦＡＫ阻害と免疫系の間の関係は、例えばG.A. van Seventer et al., Eur. J. Immunol. 2001, 31, 1417-1427に記載されている。故に、本発明の化合物は、例えば、免疫系障害、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、肥満細胞および／または好酸球が介在する疾患または障害、例えば臓器または組織同種もしくは異種移植片の急性または慢性拒絶反応、アテローム性動脈硬化症、血管形成術のような血管傷害が原因の血管閉塞、再狭窄、高血圧、心不全、慢性閉塞性肺疾患、ＣＮＳ疾患、例えばアルツハイマー病または筋萎縮性側索硬化症、癌、感染疾患、例えばＡＩＤＳ、敗血症性ショックまたは成人呼吸窮迫症候群、虚血／再潅流傷害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血性ショック、または外傷性ショックを有する脊椎動物、およびより特に哺乳動物の予防および／または処置に有用である。本発明の薬剤はまた急性または慢性炎症性疾患または障害または自己免疫性疾患、例えばリウマチ性関節炎、骨関節症、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、糖尿病(Ｉ型およびII型)およびその合併症、呼吸器疾患、例えば喘息または炎症性肝臓傷害、炎症性糸球体傷害、免疫介在障害の皮膚発現または病気、炎症性および過増殖性皮膚疾患(例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触性皮膚炎、刺激性接触性皮膚炎およびさらなる湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎)、炎症性眼疾患、例えばシェーグレン症候群、角結膜炎またはブドウ膜炎、炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎の処置および／または予防においても有用である。
【００４８】
本発明の化合物は、実施例で記載のＦＡＫアッセイ系で活性であり、１nMから１００nM範囲の阻害ＩＣ５０を示す。
【００４９】
本発明の化合物はまた、未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫ)およびＮＰＭ−ＡＬＫの融合タンパク質のチロシンキナーゼ活性の強力な阻害を示す。このタンパク質チロシンキナーゼは、ヌクレオホスミン(ＮＰＭ)および未分化リンパ腫キナーゼ(ＡＬＫの融合に起因し)、タンパク質チロシンキナーゼ活性をＡＬＫリガンド非依存的とする。ＮＰＭ−ＡＬＫは、多くの造血および他のヒト細胞のシグナル伝達において重要な役割を有し、血液学的疾患および新生物疾患、例えば未分化大細胞リンパ腫(ＡＬＣＬ)および非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)、特にＡＬＫ＋ＮＨＬまたはＡｌｋｏｍａｓ、炎症性筋線維芽細胞腫瘍(ＩＭＴ)および神経芽腫に至る(Duyster J et al. 2001 Oncogene 20, 5623-5637)。ＮＰＭ−ＡＬＫに加えて、他の遺伝子融合；主にＴＰＭ３−ＡＬＫ(非筋肉トロポミオシンとＡＬＫの融合)がヒト血液学的疾患および新生物疾患で同定されている。
【００５０】
ＡＬＫチロシンキナーゼ活性の阻害は既知の方法を使用して、例えばJ. Wood et al. Cancer Res. 60, 2178-2189 (2000)に記載のＶＥＧＦ−Ｒキナーゼアッセイに準じて、ＡＬＫのみ換えキナーゼドメインを使用して証明できる。ＧＳＴ−ＡＬＫタンパク質チロシンキナーゼを使用したインビトロ酵素アッセイは、フィルター結合アッセイのように９６ウェルプレートで、２０mM Ｔｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ＝７.５、３mM ＭｇＣｌ２、１０mM ＭｎＣｌ２、１mM ＤＴＴ、０.１μCi／アッセイ(＝３０μl)[γ−３３Ｐ]−ＡＴＰ、２μM ＡＴＰ、３μg／ml ポリ(Ｇｌｕ、Ｔｙｒ ４：１)Ｐｏｌｙ−ＥＹ(Sigma P-0275)、１％ＤＭＳＯ、２５ng ＡＬＫ酵素中で行う。アッセイを１０分、環境温度でインキュベートする。反応を５０μlの１２５mM ＥＤＴＡの添加により停止させ、反応混合物を、予めメタノールで湿られたMAIP Multiscreenプレート(Millipore, Bedford, MA, USA)に移し、５分、Ｈ２Ｏで再水和する。洗浄(０.５％Ｈ３ＰＯ４)後、プレートを液体シンチレーションカウンターで計測する。ＩＣ５０値を阻害％の直線回帰分析により計算する。阻害剤なしのコントロールと比較して、式Ｉの化合物は酵素活性を、例えば０.００１から０.５μM、とりわけ０.０１から０.１μMの濃度で５０％(ＩＣ５０)阻害する。
【００５１】
式Ｉの化合物は、ヒトＮＰＭ−ＡＬＫ過剰発現マウスＢａＦ３細胞の増殖を強力に阻害する(DSMZ Deutsche Sammlungvon Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany)。ＮＰＭ−ＡＬＫの発現は、ＢａＦ３細胞系をＮＰＭ−ＡＬＫをコードする発現ベクターｐＣＩｎｅｏTM(Promega Corp., Madison WI, USA)でトランスフェクトし、続いてＧ４１８耐性細胞を選択することにより達成する。トランスフェクトしていないＢａＦ３細胞は、細胞生存をＩＬ−３に依存する。対照的にＮＰＭ−ＡＬＫ発現ＢａＦ３細胞(以後ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫと呼ぶ)は、それらがＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼを介して増殖性シグナルを得るため、ＩＬ−３非存在下で増殖できる。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤は、故に増殖シグナルをなくし、抗増殖性活性をもたらす。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤の抗増殖性活性は、しかし、ＮＰＭ−ＡＬＫ非依存的機構を介した増殖シグナルを提供するＩＬ−３の添加により打ち消され得る[ＦＬＴ３キナーゼを使用した類似の細胞系についてE Weisberg et al. Cancer Cell;1, 433-443(2002)参照]。式Ｉの化合物の阻害活性は、簡単に言うと、下記の通り決定する：ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞(１５,０００／マイクロタイタープレートウェル)を９６ウェルマイクロタイタープレートに移す。試験化合物[ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解]を、ＤＭＳＯの最終濃度が１％(ｖ／ｖ)を超えない方法で、連続濃度で添加する(希釈シリーズ)。添加後、プレートを２日間インキュベートし、その間、試験化合物なしのコントロールは、２回の細胞分割サイクルを受け得る。ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞の増殖を、YoproTM染色の手段により測定する[T Idziorek et al. J. Immunol. Methods;185:249-258(1995)]：２０mM クエン酸ナトリウム、ｐＨ４.０、２６.８mM 塩化ナトリウム、０.４％ＮＰ４０、２０mM ＥＤＴＡおよび２０mMから成る２５μlの溶解緩衝液を各ウェルに添加する。細胞溶解は室温で６０分以内に完了し、ＤＮＡに結合したYoprの総量を、下記設定のCytofluor II ９６ウェルリーダー(PerSeptive Biosystems)を使用して測定することにより決定する：励起(nm)４８５／２０および放出(nm)５３０／２５。
【００５２】
ＩＣ５０値は、式：
ＩＣ５０＝[(ＡＢＳ試験−ＡＢＳ開始時)／(ＡＢＳ対象−ＡＢＳ開始時)]×１００
(ＡＢＳ＝吸光度)
を使用したコンピューターを利用したシステムにより決定する。
【００５３】
これらの実験のＩＣ５０値は、阻害剤なしのコントロールを使用して得られたより５０％低い細胞数をもたらす、問題の試験化合物の濃度として示す。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【００５４】
式Ｉの化合物の抗増殖性作用はまた、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞系(DSMZ Deutsche Sammlungvon Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany)[WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56(2002)に記載]において、ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞系について上記したのと同じ方法を使用して決定できる。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【００５５】
ＡＬＫの自己リン酸化に対する式Ｉの化合物の作用は、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞系において、WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56(2002)に記載の免疫ブロットの手段により、決定できる。その試験において、式Ｉの化合物は、約０.００１から１μMのＩＣ５０を示す。
【００５６】
新生物疾患および免疫系障害の処置における上記使用について、必要な投与量は、投与の形態、処置すべき特定の状態および望む効果に依存して変化する。一般に、約０.１から約１００mg／体重kgの一日投与量で、満足な結果が全身的に得られることが示される。大型哺乳動物、例えばヒトにおける指示される一日量は、約０.５mgから約２０００mgの範囲であり、簡便には、例えば、１日４回までの分割量でまたは徐放形で投与する。
【００５７】
本発明の化合物は、任意の慣用の経路で、特に非経腸的に、例えば注射可能溶液または懸濁液の形で、経腸的に、好ましくは経口で、例えば錠剤またはカプセルの形で、局所的に、例えばローション、ゲル、軟膏またはクリームの形で、または経鼻または坐薬形態で投与できる。本発明の化合物を少なくとも１種の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤との混合による慣用法で製造できる。経口投与用単位投与形態は、例えば、約０.１mgから約５００mgの活性物質を含む。局所投与は、例えば皮膚にである。局所投与の別の形は眼にである。
【００５８】
本発明の医薬組成物は、それ自体既知の方法で、例えば慣用の混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥工程の手段により、製造する。
【００５９】
活性成分の溶液、およびまた懸濁液または分散、とりわけ等張水性溶液、分散または懸濁液の使用が好ましく、これらは、例えば活性成分単独でまたは担体、例えばマンニトールと共に含む凍結乾燥組成物の場合、使用前に構築できる。医薬組成物は滅菌できおよび／または賦形剤、例えば防腐剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調整用塩および／または乾燥剤を含んでよく、それ自体既知の方法で、例えば慣用の溶解および凍結乾燥工程で製造する。該溶液または懸濁液は、増粘剤、典型的にカルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドン、またはゼラチン、あるいはまた可溶化剤、例えばＴｗｅｅｎ ８０(登録商標)(ポリオキシエチレン(２０)ソルビタンモノ−オレエート)を含み得る。
【００６０】
油中懸濁液は、油成分として、注射目的に慣習的な植物油、合成油、または半合成油を含む。これに関連して、酸成分として８個から２２個、とりわけ１２個から２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸、例えばラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸または対応する不飽和酸、例えばオレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラッシジン酸またはリノール酸を含み、所望により抗酸化剤、例えばビタミンＥ、β−カロテンまたは３,５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエンを添加された、液体脂肪酸エステルを特記できる。これらの脂肪酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子であり、一価または多価であり、例えば一、二または三価、アルコール、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールまたはペンタノールまたはそれらの異性体であるが、とりわけグリコールおよびグリセロールである。脂肪酸エステルとして、故に、下記を特記する：エチルオレート、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテート、“Labrafil M 2375”(ポリオキシエチレングリセロール)、“Labrafil M 1944 CS”(杏仁油のアルコール分解により製造し、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルから成る不飽和ポリグリコール化グリセリド)、“Labrasol”(ＴＣＭのアルコール分解により製造し、グリセリドおよびポリエチレングリコールエステルから成る飽和ポリグリコール化グリセリド；全てGattefosse, Franceから入手可能)、および／または“Miglyol 812”(Huels AG, Germanyから入手可能なＣ８からＣ１２鎖長の飽和脂肪酸のトリグリセリド)であるが、とりわけ植物油、例えば綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、ダイズ油およびよりとりわけ落花生油。
【００６１】
注射可能製剤の製造は、通常、滅菌条件下で行い、それは例えば、アンプルまたはバイアルへの充填および容器の密封も同様である。
【００６２】
経口投与用医薬組成物は、例えば、活性成分と１種以上の固体担体を合わせ、所望により得られた混合物を造粒し、該混合物または顆粒を、所望によりまたは必要であれば、さらなる賦形剤の添加により、錠剤または錠剤コアを形成させるために加工する。
【００６３】
適当な担体は、とりわけ増量剤、例えば糖、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース製剤、および／またはリン酸カルシウム、例えばリン酸三カルシウムまたはリン酸水素カルシウム、およびまた結合剤、例えばデンプン、例えばコーン、小麦、コメまたはジャガイモデンプン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン、および／または、所望により、崩壊剤、例えば上記デンプン、またカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、アルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムである。さらなる賦形剤は、とりわけ流動調節剤および滑剤、例えばケイ酸、タルク、ステアリン酸またはその塩、例えばステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウム、および／またはポリエチレングリコール、またはその誘導体である。
【００６４】
錠剤コアは適当な、所望により腸溶性の、コーティングを、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタンを含み得る糖溶液、または適当な有機溶媒中もしくは溶媒混合物のコーティング溶液、または、腸溶性コーティングの製造のために、適当なセルロース製剤、例えば酢酸フタル酸セルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの溶液の使用により施し得る。色素または着色剤を錠剤または錠剤コーティングに、例えば同定目的でまたは活性成分の異なる用量を示すために添加し得る。
【００６５】
経口投与用医薬組成物はまた、ゼラチンから成る硬カプセル、およびまたゼラチンと可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールから成る軟、密封カプセルを含む。硬カプセルは、活性成分を、例えば増量剤、例えばコーンデンプン、結合剤、および／または流動促進剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、および所望により安定化剤と混合された顆粒の形で含む。軟カプセルにおいて、活性成分は好ましくは適当な液体賦形剤、例えば脂肪油、パラフィン油または液体ポリエチレングリコールまたはエチレンもしくはプロピレングリコールの脂肪酸エステル中に溶解または懸濁しており、それに、安定化剤および、例えばポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルタイプの界面活性剤も添加し得る。
【００６６】
直腸投与に適当な医薬組成物は、例えば、活性成分と坐薬基剤の組合せから成る坐薬である。適当な坐薬基剤は、例えば、天然または合成トリグリセリド、パラフィン炭化水素、ポリエチレングリコールまたは高級アルカノールである。
【００６７】
非経腸投与のために、水溶性形態の、例えば水溶性塩の活性成分の水性溶液または、増粘物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストラン、および、所望により、安定化剤を含む水性注射懸濁液がとりわけ適する。活性成分は、所望により賦形剤と共に、凍結乾燥物の形であり、適当な溶媒の添加により非経腸投与前に溶液にすることができる。
【００６８】
例えば非経腸投与に使用されるような溶液はまた輸液としても使用できる。
好ましい防腐剤は、例えば、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、または殺菌剤、例えばソルビン酸または安息香酸である。
【００６９】
本発明の化合物は、唯一の活性成分として、または新生物疾患に対して有用なもしくは免疫調節レジメンにおいて有用な他の薬剤と共に投与できる。例えば、本発明の薬剤は、本発明にしたがい、上記の種々の疾患に有効な医薬組成物との、例えばシクロホスファミド、５−フルオロウラシル、フルダラビン、ゲムシタビン、シスプラスチン、カルボプラチン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド、イリノテカン、パクリタキセル、ドセタキセル、リツキサン、ドキソルビシン、ゲフィチニブ、またはイマチニブとの；あるいはまたシクロスポリン、ラパマイシン、アスコマイシンまたはそれらの免疫抑制性類似体、例えばシクロスポリンＡ、シクロスポリンＧ、ＦＫ−５０６、シロリムスまたはエベロリムス、コルチコステロイド、例えばプレドニゾン、シクロホスファミド、アザチオプレン、メトトレキサート、金塩、スルファサラジン、抗マラリア剤、ブレキナール(brequinar)、レフルノミド、ミゾルビン、ミコフェノール酸、ミコフェノール酸モフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば白血球受容体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５２、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＩＣＯＳ、ＬＦＡ−１、ＶＬＡ−４またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体、または他の免疫調節性化合物、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇとの組合せ剤で使用できる。
【００７０】
前記によって、本発明はまた下記を提供する：
(１)医薬として使用するための本発明の化合物；
(２)例えば、上記の特定の適応症のいずれかに使用するための、ＦＡＫ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤および／またはＺＡＰ−７０阻害として使用するための本発明の化合物；
(３)本発明の化合物を活性成分として、１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、例えば、上記の特定の適応症のいずれかに使用するための医薬組成物；
(４)有効量の本発明の化合物またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む、処置を必要とする対象における、上記の特定の適応症のいずれかを処置する方法；
(５)ＦＡＫ、ＡＬＫおよび／またはＺＡＰ−７０活性化が役割を有するまたは関与する疾患または状態の処置または予防用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用；
(６)治療的有効量の本発明の化合物および、前記の特定の適応症のいずれかに有用な１種以上のさらなる医薬物質の、例えば、同時のまたは連続した併用投与を含む、上記(４)に定義の通りの方法；
【００７１】
(７)治療的有効量の本発明の化合物および、前記の特定の適応症のいずれかに有用な１種以上のさらなる医薬物質を含む、組合せ剤；
(８)未分化リンパ腫キナーゼの阻害に応答する疾患の処置または予防用医薬の製造のための、本発明の化合物の使用；
(９)処置される疾患が未分化大細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍および神経芽腫から選択される、(８)に記載の使用；
(１０)化合物が、実施例のいずれか１つに記載のものまたは薬学的に許容される塩である、(８)または(９)に記載の使用；
(１１)有効量の本発明の化合物または薬学的に許容されるその塩を投与することを含む、未分化リンパ腫キナーゼの処置に応答する疾患、とりわけ未分化大細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、炎症性筋線維芽細胞腫瘍および神経芽腫から選択される疾患の処置法。
【００７２】
さらに上記のとおり有用である好ましい本発明の化合物は、実施例で具体的に気合いの化合物である。
ＦＡＫ阻害剤、ＡＬＫ阻害剤のいずれかとして、または両方の阻害のために有用であり、本質的に前記の方法に従い製造できる、さらなる特に好ましい本発明の化合物は、下記のものである：
【実施例】
【００７３】
略語
ＡｃＯＨ＝酢酸、ＡＬＫ＝未分化リンパ腫キナーゼ、ＡＴＰ＝アデノシン５'−トリホスフェート、塩水＝飽和塩化ナトリウム溶液、Ｂｏｃ＝ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン、ＤＩＡＤ＝ジイソプロピルアゾジカルボキシレート、ＤＩＰＣＤＩ＝Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド、ＤＭＡＰ＝４−ジメチルアミノピリジン、ＤＭＦ＝Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＴＴ＝１,４−ジチオ−Ｄ,Ｌ−スレイトール、ＥＤＴＡ＝エチレンジアミンテトラ酢酸、Ｅｔ＝エチル、ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、ＥｔＯＨ＝エタノール、Ｅｕ−ＰＴ６６＝ＬＡＮＣＥＴＭユーロピウム−Ｗ１０２４標識抗ホスホチロシン抗体(Perkin Elmer)、ＦＡＫ＝接着斑キナーゼ、ＦＲＥＴ＝蛍光共鳴エネルギー移動、ＨＥＰＥＳ＝Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ'−２−エタンスルホン酸、ＨＯＡｔ＝１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、Ｍｅ＝メチル、ＲＴ−ＰＣＲ＝逆転写ポリメラーゼ連鎖反応、ＳＡ−(ＳＬ)ＡＰＣ＝ＳｕｐｅｒＬｉｇｈｔＴＭアロフィコシアニンに接合したストレプトアビジン(Perkin Elmer)、subst.＝置換、ＴＢＴＵ＝Ｏ−(ベンゾトリアゾル−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチルアンモニウムテトラフルオロボレート、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン.
【００７４】
ＨＰＬＣ条件
カラム：YMC CombiScreen ODS-A(５um、１２nm)、５０×４.６mm Ｉ.Ｄ.
流速：２.０ml／分
溶離剤：Ａ)ＴＦＡ／水(０.１／１００)、Ｂ)ＴＦＡ／アセトニトリル(０.１／１００)
勾配：５−１００％Ｂ(０−５分)
検出：２１５nmのＵＶ
【００７５】
実施例１
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化６】
４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２.７９ｇ、５.６５mmol)の２−メトキシエタノール(３０mL)に、ｏ−アニシジン(７００μL)および４Ｎ 塩化水素の酢酸エチル溶液(１.４mL)を添加し、混合物を１２０℃で５時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、次いで水性飽和炭酸水素ナトリウムに注ぐ。得られた淡黄色固体を濾過により回収する。固体をメタノールおよび酢酸エチルで洗浄し、真空乾燥し、７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンを淡黄色固体(２.７１ｇ)として定量的収率で得る。Ｒｆ＝０.０８(ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ＝１／２)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):3.05-3.01(m, 8H), 3.21(s, 3H), 3.92(s, 3H), 4.38(s, 2H), 6.92(dd, 1H), 7.02-6.98(m, 2H), 7.12(d, 1H), 7.46(s, 1H), 8.11(s, 1H), 8.34(dd, 1H), 8.67(d, 1H), 10.5(s, 1H)。
【００７６】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１】
【００７７】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表２】
【００７８】
【表３】
【表４】
【００７９】
下記４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−[１,４']ビピペリジニル−１'−イル−７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表５】
【表６】
【００８０】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表７】
【００８１】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−４−(Ｒ)−ヘキサヒドロ−ピラノジノ[２,１−ｃ][１,４]オキサジン−８−イル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(Ｒ)−ヘキサヒドロ−ピラノジノ[２,１−ｃ][１,４]オキサジン−８−イル−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表８】
【００８２】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表９】
【００８３】
下記４−[４,４']ビピペリジニル−１−イル−７−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、１'−[７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル]−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１０】
【００８４】
下記８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−ピペラジン−１−イル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、４−[８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１１】
【表１２】
【００８５】
下記８−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−５−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１３】
【表１４】
【００８６】
下記８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、４−｛１−[８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル]−ピペリジン−４−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルおよび対応するアニリンから、実施例１の方法に従い製造する。
【表１５】
【００８７】
実施例４７：
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化７】
７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(２.０ｇ、４.１７mmol)のジクロロエタン(５０mL)溶液に、ホルムアルデヒド(３８０μL、５.０mmol)を添加し、混合物を室温で１.５時間撹拌した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(１.０６ｇ、５.０mmol)添加後、混合物を室温で１.５時間撹拌した。混合物を１Ｎ 水酸化ナトリウムに注ぎ、室温で１０分撹拌し、次いでジクロロメタンで２回抽出する。有機層を水および塩水で連続的に洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させる。得られた固体をメタノールおよび酢酸エチルで洗浄して、７−[５−クロロ−２−(２−メトキシ−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.２ｇ)を淡黄色固体として、５８％収率で得る。Ｒｆ＝０.３０(ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ＝１／２)。ＥＳＩ−ＭＳ ｍ／ｚ：４９４ [ＭＨ]＋。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):2.38(s, 3H), 2.66-2.57(m, 4H), 3.09-3.07(m, 4H), 3.21(s, 3H), 3.92(s, 3H), 4.37(s, 2H), 6.92(dd, 1H), 7.03-6.96(m, 2H), 7.13(d, 1H), 7.45(s, 1H), 8.11(s, 1H), 8.33(dd, 1H), 8.67(d, 1H), 10.5(s, 1H)。
【００８８】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−ピペラジン−１−イル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表１６】
【００８９】
下記７−[５−クロロ−２−(置換フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、７−[５−クロロ−２−(２−置換−フェニルアミノ)−ピリミジン−４−イルアミノ]−２−メチル−４−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表１７】
【００９０】
下記７−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−４−(１'−メチル−[４,４']ビピペリジニル−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−[４,４']ビピペリジニル−１−イル−７−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表１８】
【００９１】
下記８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−ピペラジン−１−イル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表１９】
【表２０】
【００９２】
下記８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−[４−(４−メチル−ピペラジン−１−イル)−ピペリジン−１−イル]−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、８−(５−クロロ−２−置換フェニルアミノ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−５−(４−ピペラジン−１−イル−ピペリジン−１−イル)−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンから、実施例８の方法に従い製造する。
【表２１】
【００９３】
実施例Ｉ１：
４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化８】
３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸の２００mLのメタノール溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３(４.３４ｇ、１３.３mmol)を添加し、室温で撹拌する。溶液を減圧下濃縮し、次いで得られた黄色固体を２６mlのＤＭＦに懸濁。ヨードメタン(１.７ml、２６.６mol)を０℃で添加し、室温で３０分撹拌する。水を溶液に添加し、酢酸エチルで抽出する。有機層をＨ２Ｏ、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(５.７０ｇ)を黄色油状物として定量的収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.30(d, 3H), 3.99(s, 3H), 7.22(dd, 1H), 8.07(dd, 1H)。
【００９４】
【化９】
３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(６.１ｇ、２８.６mmol)およびＮ−ブロモスクシンイミドの７０mLのＣＣｌ４中の懸濁液に、２,２'−アゾビスイソブチロニトリルを、室温で窒素雰囲気下添加する。反応混合物を８５℃で６時間、Ｎ２下撹拌し、次いで室温に冷却し、濾過する。濾液をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、水性ＮａＨＣＯ３溶液、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させる。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１)で精製して、２−ブロモメチル−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(４.４８ｇ、１５.３mmol、５４％)を黄色油状物として得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:4.01(s, 3H), 4.53(d, 2H), 7.31(dd, 1H), 8.17(dd, 1H)。
【００９５】
【化１０】
室温で、２−ブロモメチル−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(４.４８ｇ、１５.３mmol)のＴＨＦ(１００mL)溶液をＴＨＦ中メチルアミンの２Ｍ溶液(２３mL、４６mmol)で処理し、混合物を４８時間、室温で撹拌する。反応混合物をガラスフィルターを通して濾過し、沈殿物を回収し、酢酸エチルで洗浄する。濾液をＮａＨＣＯ３の飽和水性溶液および塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下濃縮して、４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.６ｇ、７.６１mmol、５０％)を黄色固体として得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:3.22(s, 3H), 4.47(s, 2H), 7.32(dd, 1H), 7.84(dd, 1H)。
【００９６】
実施例Ｉ２：
４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１１】
４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(２.０ｇ、８.５２mmol)および炭酸カリウム(６５７.９mg、４.７６mmol)の懸濁液に、トリエチルアミン(２.０mL、１４.３mmol)のジメチルスルホキシド(２０mL)溶液、ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１.７７ｇ、９.５２mmol)を添加し、混合物を６０℃で６時間撹拌する。混合物を氷水に注ぎ、得られた褐色固体を濾過により回収する。得られた固体を、真空で５０℃で乾燥させ、４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、褐色固体として７５％収率で得る。Ｒｆ＝０.２５(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.50(s, 9H), 3.13(t, 4H), 3.20(s, 3H), 3.61(t, 4H), 4.37(s, 2H), 7.04(d, 1H), 7.78(d, 1H)。
【００９７】
実施例Ｉ３：
４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化１２】
４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(５.０ｇ、２４mmol)および炭酸カリウム(３.３２ｇ、２４mmol)の懸濁液に、トリエチルアミン(６.７mL、２８.８mmol)のジメチルスルホキシド(５０mL)溶液、１−イソプロピルピペラジン(４.１mL、２８.８mmol)を添加し、混合物を６０℃で４時間撹拌する。混合物を氷水に注ぎ、得られた褐色固体を濾過により回収し、真空で５０℃で乾燥させて、４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンを、褐色固体として９１％収率で得る。Ｒｆ＝０.１４(ＡｃＯＥｔ)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.09(s, 3H), 1.11(s, 3H), 2.70(t, 4H), 2.80-2.74(m, 1H), 3.19(s, 3H), 3.21(t, 4H), 4.37(s, 2H), 7.01(d, 1H), 7.78(d, 1H)。
【００９８】
実施例Ｉ４：
下記２−メチル−７−ニトロ−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−フルオロ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび対応するアミンから、実施例Ｉ３の方法に従い製造する。
【表２２】
【００９９】
実施例Ｉ９：
４−[１−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１３】
２−メチル−７−ニトロ−４−(４−オキソ−ピペリジン−１−イル)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(４.２ｇ、１４.５mmol)およびピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(３.２４ｇ、１７.４mmol)の１,２−ジクロロエタン溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロハイドライド(３.６９ｇ、１７.４mmol)を、０℃で窒素雰囲気下添加する。混合物を室温で５時間撹拌後、１Ｎ 水酸化ナトリウム水性溶液を０℃で添加する。混合物をジクロロメタンで抽出し、有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空で濃縮する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＡｃＯＥｔ；ＡｃＯＥｔ：ＭｅＯＨ＝９：１)で精製して、４−[１−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(４.１６ｇ、６２％)を得る。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.47(s, 9H), 1.66-1.76(m, 2H), 1.94-2.02(m, 2H), 2.42-2.59(m, 5H), 2.84-2.93(m, 2H), 3.05(s, 3H), 3.40-3.49(m, 4H), 3.49-3.57(m, 2H), 4.35(s, 2H), 7.00(d, 1H), 7.76(d, 1H)。
【０１００】
実施例Ｉ１０：
４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１４】
４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(５.３７ｇ、１４mmol)のエタノール(２００mL)溶液に、鉄粉末(３.９８ｇ、７０mmol)および１Ｎ 塩化水素(２８mL)を添加し、混合物を６０℃で２時間撹拌する。混合物を室温に冷却し、次いで１Ｎ 水酸化ナトリウム(２８mL)を添加する。不溶性物質を濾過により除去後、混合物を濃縮する。残渣をジクロロメタンで２回抽出する。有機層を連続的に水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させ、４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(４.９ｇ)を、淡緑色無定形固体として９９％収率で得る。Ｒｆ＝０.１８(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.49(s, 9H), 2.85(t, 4H), 3.13(s, 3H), 3.54(t, 4H), 4.28(s, 2H), 5.03(s, 2H), 6.56(d, 1H), 6.96(d, 1H)。
【０１０１】
実施例Ｉ１１：
７−アミノ−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化１５】
４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(４.５６ｇ、１４mmol)のエタノール(１３０mL)溶液に、鉄粉末(４.０ｇ、７０mmol)および１Ｎ 塩酸(２８mL)を添加し、混合物を６０℃で３時間撹拌する。混合物を冷却し、次いで、１Ｎ 水酸化ナトリウム(２８mL)を添加する。不溶性物質を濾過により除去後、混合物を蒸発させる。得られた淡黄色固体を濾過により回収し、真空で５０℃で乾燥させて、７−アミノ−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(３.４３ｇ)を、褐色固体として８３％収率で得る。Ｒｆ＝０.１８(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.09(s, 3H), 1.10(s, 3H), 2.65(t, 4H), 2.75-2.69(m, 1H), 2.96(t, 4H), 3.13(s, 3H), 4.28(s, 2H), 4.99(s, 2H), 6.56(d, 1H), 6.99(d, 1H)。
【０１０２】
下記７−アミノ−２−メチル−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、対応する２−メチル−７−ニトロ−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから、実施例Ｉ１１の方法に従い製造する。
【表２３】
【０１０３】
実施例Ｉ１７：
４−[７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１６】
４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル)−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(６.１４ｇ、１８mmol)および炭酸カリウム(３.８６ｇ、４.７６mmol)のジメチルスルホキシド(６０mL)中の懸濁液に、２,４,５−トリクロロピリミジン(３.１mL、２７mmol)を添加し、混合物を６０℃で２時間撹拌する。混合物に、２,４,５−トリクロロピリミジン(１.０mL、９mmol)を添加する。６０℃で２時間撹拌後、２,４,５−トリクロロピリミジン(１.０mL、９mmol)を添加し、混合物をさらに６０℃で１０時間撹拌する。混合物を冷却し、次いで氷水に注ぐ。得られた褐色固体を濾過により回収し、ＭｅＯＨで洗浄し、真空で５０℃で乾燥させて、４−[７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(５.２９ｇ)を褐色固体として６０％収率で得る。Ｒｆ＝０.２８(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ＝１／１)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.50(s, 9H), 2.99(t, 4H), 3.23(s, 3H), 3.59(t, 4H), 4.40(s, 2H), 7.18(d, 1H), 8.21(s,1H), 8.67(d, 1H), 11.0(s, 1H)。
【０１０４】
実施例Ｉ１８：
７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化１７】
７−アミノ−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.６２ｇ、５.６mmol)および炭酸カリウム(２.５５ｇ、８.７mmol)のジメチルスルホキシド(３０mL)中の懸濁液、２,４,５−トリクロロピリミジン(９７０μL、８.４mmol)を添加し、７０℃で４時間撹拌する。混合物に、２,４,５−トリクロロピリミジン(６５０μL、５.６mmol)を添加し、混合物を７０℃で６時間撹拌する。混合物を冷却し、次いでジクロロメタンで２回抽出する。有機層を連続的に水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させる。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−４−(４−イソプロピル−ピペラジン−１−イル)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.９５ｇ)を黄色固体として８０％収率で得る。Ｒｆ＝０.２６(ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ＝１／４)。1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.13(s, 3H), 1.14(s, 3H), 2.87-2.69(m, 5H), 3.18-3.08(m, 4H), 3.22(s, 3H), 4.40(s, 2H), 7.20(d, 1H), 8.20(s, 1H), 8.66(d, 1H), 11.0(s, 1H)。
【０１０５】
下記７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、対応する７−アミノ−２−メチル−４−置換−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび２,４,５−トリクロロピリミジンから、実施例Ｄの方法に従い製造する。
【表２４】
【０１０６】
実施例Ｉ２７：
５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの製造
【化１８】
滴下漏斗および温度計を備えたＩＬ、三首、丸底フラスコに、２０ｇ(０.１３mol)の２−アミノ−３−フルオロ−安息香酸および１６０mLのアセトニトリルを入れた。０℃に冷却後、１６０mLの臭化水素酸(４７％)を、１０分にわたり滴下した。得られた溶液に、１０ｇのＮａＮＯ２(０.１４５mol)の水(２０mL)溶液を１時間にわたり滴下した。添加後、反応混合物を０℃で５分撹拌し、２１.８ｇのＣｕ(Ｉ)Ｂｒ(０.１５mol)を３０分にわたり少しずつ添加した。撹拌を７０℃で油浴中１時間続けた。０℃に冷却後、７００mLのＨ２Ｏを添加し、沈殿を濾過し、冷水で洗浄し、真空で乾燥させて、２−ブロモ−３−フルオロ−安息香酸対応するオレンジ色固体を得た(２２ｇ、７８％)。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):7.32(ddd, 1H), 7.39(ddd, 1H), 7.74-7.80(m, 1H)。
【０１０７】
【化１９】
滴下漏斗および温度計を備えたＩＬ、三首、丸底フラスコに３３ｇ(０.１５mol)の２−ブロモ−３−フルオロ−安息香酸および２００mLの濃硫酸を入れた。０℃に冷却後、１６mLのＨＮＯ３(７０％)を３０分にわたり、温度を１０℃以下に維持しながら滴下した。１時間後、反応混合物ををクラッシュ・アイスに温度を２０℃以下に維持しながら注いだ。混合物を２回酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下除去し、２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸および２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸混合物(２：１)を褐色固体として、定量的収率で得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm)
２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸：7.37(dd, 1H), 8.27(dd, 1H)、
２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸：8.15(dd, 1H), 8.62-8.65(m, 1H)。
【０１０８】
【化２０】
２Ｌ、一首、丸底フラスコに、１３０ｇ(０.４９mol)の２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸および２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸の混合物および９００mLのメタノールを入れた。混合物に、８４ｇ(０.５２mol)の炭酸セシウムを添加し、得られた懸濁液を３０分撹拌した。反応混合物を減圧下濃縮して、溶媒を除去した。混合物に、９００mLのＤＭＦ、続いてヨードメタン(３３.７mL、０.５４mmol)を添加し、混合物を１７時間撹拌した。反応混合物をクラッシュ・アイスに注ぎ、２回酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水、１Ｍ ＨＣｌおよび塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下蒸発させて、２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ安息香酸メチルエステルおよび２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル混合物(２：１)を、褐色油状物として定量的収率で得た。
１Ｈ−ＮＭＲ(400MHz, CDCl3, δ, ppm)
２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ安息香酸メチルエステル：4.04(s, 3H), 7.34(dd, 1H), 8.24(dd, 1H)、
２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル：4.02(s, 3H), 8.10(dd, 1H), 8.47-8.50(m, 1H)。
【０１０９】
【化２１】
２Ｌ、一首、丸底フラスコに、１３０ｇ(０.４７mol)の２−ブロモ−３−フルオロ−６−ニトロ安息香酸メチルエステルおよび２−ブロモ−３−フルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステルの混合物、１５９mL(０.５２mol)のアリルトリブチル錫および１.２Ｌのトルエンを入れた。混合物に、２７ｇ(２.３mmol)のテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)を添加し、混合物を１３０℃で７時間撹拌した。室温に冷却後、９０ｇ(２.１mol)のフッ化ナトリウムの８００mLの水溶液を反応混合物も添加した。
【０１１０】
混合物を２回酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下蒸発させて、２４７ｇの黒色油状物を得た。粗生成物を、注意深くシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン／ＡｃＯＥｔ、９５／５)で精製し、２−アリル−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(７１ｇ、６３％)を黄色油状物として得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):3.45(dd, 2H), 3.95(s, 3H), 5.01-5.13(m, 2H), 5.79-5.92(m, 1H), 7.21-7.28(m, 1H), 8.10(d, 1H)。
【０１１１】
【化２２】
２Ｌ、三首、丸底フラスコに、８９２mL(０.４５mol)の９−ＢＢＮ(０.５Ｍ)および１００mLのＴＨＦを入れた。０℃に冷却後、７１ｇ(０.３mol)の２−アリル−３−フルオロ−６−ニトロ安息香酸メチルエステルの１５０mLのＴＨＦ溶液を３０分にわたり添加し、混合物を室温で５時間撹拌すた。０℃に冷却後、７００mLの１Ｍ ＮａＯＨ水溶液を反応混合物に添加し、それを３０分撹拌した。混合物に、２００mLの過酸化水素(３５％)を３０分にわたり添加し、次いで室温で１時間撹拌した。混合物を２回酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水、チオ硫酸ナトリウム溶液および塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧下除去し、１０４ｇの３−フルオロ−２−(３−ヒドロキシ−プロピル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステルをオレンジ色油状物として得た。粗生成物を次反応に使用した。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.83-1.92(m, 2H), 2.74-2.79(m, 2H), 3.66(t, 2H), 3.98(s, 3H), 7.21-7.27(m, 1H), 8.10(dd, 1H)。
【０１１２】
【化２３】
３−フルオロ−２−(２−ヒドロキシエチル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(５１.４ｇ、０.２mol)のアセトン(１０００mL)溶液に、２,２,６,６−テトラメチルピペリジン−１−オキシル、フリーラジカル、(４６０.６mg、２.９５mmol)、ナトリウムヒドロカルボキシドの水性１５％溶液(４００mL)およびナトリウムブロマイド(３.０２ｇ、２９.３mmol)を添加した。トリクロロイソシアヌル酸(６８.４ｇ、０.２９mol)を、次いでゆっくり３０分以内に、ｒｔで添加した。添加が完了し、ｒｔで２.５時間撹拌後、１５mLのイソプロパノールを０℃で注意深く添加した。混合物を減圧下濃縮した。混合物を３回酢酸エチルで抽出した。有機層を３回１Ｎ 水酸化ナトリウムで抽出した。合わせた水層を１回酢酸エチルで洗浄し、次いで５Ｎ 塩化水素で０℃で酸性化した。４回酢酸エチルで抽出後、有機層を水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させた。表題化合物２−(２−カルボキシ−エチル)−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(２８.７ｇ)が、黄色固体として７２％収率で得られた(２工程)。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):2.63-2.71(m, 2H), 2.95-3.04(m, 2H), 3.99(s, 3H), 7.22-7.28(m, 1H), 8.12(dd, 1H)。
【０１１３】
【化２４】
２−(２−カルボキシ−エチル)−３−フルオロ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(２０.７ｇ、７６mol)中に含まれる水をトルエンとの２回の共沸により除去し、出発物質を乾燥トルエン(３８０mL)に溶解した。この溶液に、ジフェニルホスホリルアジド(１７.１mL、８０mmol)およびトリエチルアミン(１１.６mL、８３.６mmol)をｒｔで添加し、混合物を８０℃で２.０時間撹拌した。次いで、塩化銅(１.０２ｇ、７.６mmol)の乾燥メタノール(１７０mL)溶液を添加し、得られた混合物をさらに８０℃で１.５時間撹拌した。冷却後、飽和炭酸水素ナトリウムを添加し、混合物を３回酢酸エチルで抽出した。有機層を３回水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させた。得られた固体をメタノール、次いでエーテルで洗浄し、３−フルオロ−２−(２−メトキシ−カルボニルアミノ−エチル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(１６.６ｇ)を淡褐色固体として、７２％収率で得た。濾液をカラムクロマトグラフィー(ヘキサン／酢酸エチル＝４／１から１／１)で精製して、さらなる表題化合物(３.８ｇ)を淡褐色物として得た。結果として、合計２０.４ｇの３−フルオロ−２−(２−メトキシカルボニルアミノ−エチル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステルが８９％収率で得られた。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):2.85-2.93(m, 2H), 3.35-3.48(m, 2H), 3.64(s, 3H), 4.00(s, 3H), 5.02(br.s, 1H), 7.23-7.28(m, 1H), 8.13(d, 1H)。
【０１１４】
【化２５】
３−フルオロ−２−(２−メトキシカルボニルアミノ−エチル)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(２０.４ｇ、６８mmol)のＴＨＦ(２００mL)溶液に、水素化ナトリウム(５.４４ｇ、１３６mmol)を０℃で添加し、混合物をｒｔで２.０時間撹拌した。反応混合物に、ヨウ化メチル(１２.７mL、２０４mmol)を０℃で添加し、混合物をｒｔで１.５時間撹拌した。混合物に、飽和塩化アンモニウム溶液を０℃で添加し、混合物を３回酢酸エチルで抽出した。有機層を２回水および塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ジクロロメタン／酢酸エチル／ヘキサン：９９／１／５０から９９／２／５０)で精製し、５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン(１０.９ｇ)を黄色固体として７１％収率で得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):3.04(t, 2H), 3.16(s, 3H), 3.64(t, 2H), 7.19-7.27(m, 1H), 7.42(dd, 1H)。
【０１１５】
実施例Ｉ２８：
４−[１−(２−メチル−８−ニトロ−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２６】
５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン(１１.６５ｇ、０.０５２mol)、４−ピペリジン−４−イル−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２８.０ｇ、０.１０３９mol)、Ｋ２ＣＯ３(８.９８ｇ、０.０６５mol)の混合物のＤＭＳＯ(３５０mL)溶液を、８５℃で１２時間撹拌した。室温に冷却後、氷水(５００mL)を添加した。混合物をＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を水、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＡｃＯＥｔ；次いでＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ＝６／１)で精製して、１０.０９ｇの所望の生成物４−[１−(２−メチル−８−ニトロ−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを淡黄色固体として、４１％収率で得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.47(s, 9H), 1.62-1.80(m, 2H), 1.91-1.99(m, 2H), 2.00-2.08(m, 1H), 2.34-2.45(m, 1H), 2.48-2.62(m, 4H), 2.66-2.74(m, 1H), 2.94(t, 2H), 3.16(s, 3H), 3.08-3.21(m, 2H), 3.38-3.51(m, 4H), 3.55(t, 2H), 7.09(d, 1H), 7.38(d, 1H)。
【０１１６】
下記２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−５−置換−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンおよび対応するアミンから、実施例Ｉ２８の方法に従い製造する。
【表２５】
【０１１７】
実施例Ｉ３１：
４−[１−(８−アミノ−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２７】
２０ｇのニトロ化合物４−[１−(２−メチル−８−ニトロ−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(０.０２１１mol)の混合物のＥｔＯＨ(２００mL)溶液に、鉄粉末(５.９ｇ、０.１０６mol)および２Ｎ ＨＣｌ水溶液(２１mL、０.０４２mol)を添加し、混合物を８０℃で３時間撹拌した。室温に冷却後、２Ｎ ＮａＯＨ水溶液(２２mL)を添加した。得られた混合物をセライトを通して濾過し、真空で蒸発させ、９３.３８ｇの所望のアニリン４−[１−(８−アミノ−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(９.３８ｇ、定量的収率)を淡黄色無定形粉末として得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.47(s, 9H), 1.58-1.73(m, 2H), 1.84-1.93(m, 2H), 2.27-2.44 m, 1H), 2.46-2.66(m, 6H), 2.88-2.99(m, 4H), 3.11(s, 3H), 3.40-3.53(m, 6H), 5.20-6.35(br.s., 2H), 6.50(d, 1H), 7.00(d, 1H)。
【０１１８】
下記５−置換−８−アミノ−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、５−置換−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンから、実施例Ｉ３１の方法に従い製造する。
【表２６】
【０１１９】
実施例Ｉ３４：
４−｛１−[８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル]−ピペリジン−４−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２８】
４−[１−(８−アミノ−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル)−ピペリジン−４−イル]−ピペラジン−１−カルボン酸−ｔｅｒｔ−ブチルエステル(９.２０ｇ、２０.７mmol)、２,４,５−トリクロロピリミジン(５.９６mL、５１.８mmol)、Ｋ２ＣＯ３(７.１７ｇ、５１.８mmol)の混合物のＤＭＳＯ(２００mL)溶液を６０℃で１２時間撹拌した。室温に冷却後、７００mLの水を撹拌しながら添加した。混合物を濾過した。得られた褐色固体をＣＨ３ＣＮ(約２００mL)に懸濁させ、しばらく撹拌し、濾過した。残渣をさらにＣＨ３ＣＮで洗浄し、減圧下乾燥させて、８.７５ｇの４−｛１−[８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−１−オキソ−１,２,３,４−テトラヒドロ−イソキノリン−５−イル]−ピペリジン−４−イル｝−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを淡ベージュ色固体として７２％収率で得た。
1H-NMR(400MHz, CDCl3, δ, ppm):1.47(s, 9H), 1.61-1.74(m, 2H), 1.88-1.97(m, 2H), 2.33-2.42(m, 1H), 2.51-2.59(m, 4H), 2.65-2.73(m, 2H), 2.98-3.11(m, 4H), 3.19(s, 3H), 3.41-3.54(m, 6H), 7.24-7.27(m, 1H), 8.17(s, 1H), 8.63(d, 1H), 12.77(s, 1H)。
【０１２０】
下記５−置換−８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、５−置換−８−アミノ−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンおよび２,４,５−トリクロロピリミジンから、実施例Ｉ３４の方法に従い製造する。
【表２７】
【０１２１】
実施例Ｉ３７：
４−ヒドロキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化２９】
撹拌している３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(６ｇ、２８.２mmol)および２−(メチルスルホニル)エタノール(５.２ｇ、４２.２mmol)の４７mLのＤＭＦ溶液に、水素化ナトリウム(３.３８ｇ、８４.６mmol)を０℃で添加し、反応混合物を室温に温め、次いで１.５時間撹拌する。混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルとの間で分配する。有機層を塩水で洗浄し、濃縮乾固し、粗有機物をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、３−ヒドロキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(５.３ｇ)を８９％収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.22(s, 3H), 3.99(s, 3H), 6.38(s, 1H), 6.87(d, 1H,), 7.99(d, 1H)。
【０１２２】
【化３０】
３−ヒドロキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(５.３ｇ、２５.１mmol)の７０mLのＤＭＦ溶液に、イミダゾール(２.５６ｇ、３７.７mmol)およびｔ−ブチルジメチルシリルクロライド(５.６７ｇ、３７.７mmol)を０℃で添加し、室温で１時間撹拌する。クラッシュ・アイスを溶液に添加し、酢酸エチルとの間で分配する。有機層を水および塩水で洗浄し、濃縮乾固して、３−ヒドロキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(８.９ｇ)を得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:0.19(s, 6H), 0.92(s, 9H), 2.09(s, 3H), 3.87(s, 3H), 6.76(d, 1H), 7.89(d, 1H)。
【０１２３】
【化３１】
３−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ)−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(８.９ｇ、２５.１mmol)およびＮ−ブロモスクシンイミド(５.３６ｇ、３０.１mmol)の５０mLのＣＣｌ４溶液に、２,２'−アゾビスイソブチロニトリル(４１２mg、２.５mmol)を室温で添加する。反応混合物を８０℃で２２時間撹拌し、次いで室温に冷却し、次いでクラッシュ・アイスでクエンチする。混合物をジクロロメタンで抽出し、水性ＮａＨＣＯ３溶液、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、２−ブロモメチル−３−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(１２.６ｇ)を褐色油状物として得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:0.37(s, 6H), 1.07(s, 9H), 4.0(s, 3H), 4.49(s, 2H), 6.94(d, 1H), 8.09(d, 1H)。
【０１２４】
【化３２】
室温で、２−ブロモメチル−３−(ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ)−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(１２.６ｇ、２５.１mmol)の６０mLのＴＨＦ溶液に、ＴＨＦ中メチルアミンの２Ｍ溶液(３７.７mL、７５.３mmol)を０℃で添加し、次いで反応混合物を６時間、室温で撹拌する。メタノールおよび１Ｍ 塩酸溶液を反応混合物に添加する。混合物を真空で蒸発させ、沈殿を回収し、４−ヒドロキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(２.１ｇ)を黄色固体として３工程で４０％収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)DMSO:3.05(s, 3H), 4.37(s, 2H), 7.02(d, 1H), 7.8(d, 1H)。
【０１２５】
実施例Ｉ３８：
４−メトキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化３３】
撹拌している３−フルオロ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸(４.２ｇ、２１mmol)のＴＨＦ(４０mL)およびメタノール(４０mL)溶液に、カリウムメトキシドのメタノール(１５ｇ、６３mmol)溶液を添加し、溶液を１００℃で２時間加熱する。反応混合物を室温に冷却し、次いで混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルとの間で分配する。有機層を塩水で洗浄し、次いで濃縮し、３−メトキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸(４.３ｇ)を定量的収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.32(s, 3H), 3.98(s, 3H), 6.95(d, 1H), 8.15(d, 1H)。
【０１２６】
【化３４】
３−メトキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸の４５mLのメタノール溶液に、Ｃｓ２ＣＯ３(７.８ｇ、２４mmol)を添加し、室温で１時間撹拌する。溶液を減圧下濃縮し、次いで得られた黄色固体を４５mlのＤＭＦに懸濁する。ヨードメタン(１.５ml、２４mol)を０℃で添加し、室温で２１時間撹拌する。水を溶液に添加し、沈殿物を回収し、水で洗浄し、３−メトキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(４.０ｇ)をオレンジ色固体として８１％収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.2(s, 3H), 3.93(s, 3H), 3.98(s, 3H), 6.91(d, 1H), 8.11(d, 1H)。
【０１２７】
【化３５】
３−メトキシ−２−メチル−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(４.１ｇ、１８.２mmol)およびＮ−ブロモスクシンイミド(３.８９ｇ、２１.８mmol)の５０mLのＣＣｌ４中の懸濁液に、２,２'−アゾビスイソブチロニトリル(２９９mg、１.８２mmol)を室温で添加する。反応混合物を８５℃で２１時間撹拌し、次いで室温に冷却する。反応混合物を室温に冷却し、次いでクラッシュ・アイスでクエンチする。混合物を酢酸エチルで抽出し、水性ＮａＨＣＯ３溶液、続いて塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空で蒸発させ、２−ブロモメチル−３−メトキシ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(７.１ｇ)をオレンジ色油状物として得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:4.0(s, 3H), 4.05(s, 3H), 4.52(s, 2H), 7.02(d, 1H), 8.2(d, 1H)。
【０１２８】
【化３６】
室温で、２−ブロモメチル−３−メトキシ−６−ニトロ−安息香酸メチルエステル(粗７.０ｇ、１８.２mmol)の４６mLのＴＨＦ溶液を、ＴＨＦ中メチルアミンの２Ｍ溶液(２７.３mL、５４.６mmol)で処理し、混合物を４時間、室温で撹拌する。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液でクエンチし、酢酸エチルとの間で分配する。有機層を塩水で洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、その後濃縮し、４−メトキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(３.１ｇ)をオレンジ色固体として７７％収率で得る(２工程)。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:3.19(s, 3H), 3.99(s, 3H), 4.32(s, 2H), 7.0(d, 1H), 7.89(d, 1H)。
【０１２９】
実施例Ｉ３９：
４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルオキシ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化３７】
４−ヒドロキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(７００mg、３.３６mmol)、４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(８１１mg、４.０３mmol)およびトリフェニルホスフィン(１.０６ｇ、４.０３mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液に、ジエチルアザジカルボキシレート(０.６３mL、４.０３mmol)を０℃で滴下する。混合物を撹拌する室温で１２時間撹拌後、混合物を氷水に注ぎ、ジクロロメタンで２回抽出する。合わせた有機層を１Ｎ 水酸化ナトリウム(２回)、水、次いで塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させる。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで粗く精製し、３.２３ｇの４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルオキシ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの混合物を得て、それを、さらに精製することなく次反応に使用する。
【０１３０】
４−(２−メチル−７−ニトロ−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルオキシ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(６５４mg、１.０mmol)、鉄粉末(２８０mg、５.０mmol)、および１Ｎ 塩化水素(２mL、２.０mmol)の混合物のエタノール(５mL)溶液を８０℃で１時間、窒素雰囲気下撹拌する。室温に冷却後、氷および１Ｎ 水酸化ナトリウムを添加し、混合物を濾過する。濾液をジクロロメタン(２回)で抽出する。合わせた有機層を水、次いで塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、５９７mgの４−(７−アミノ−２−メチル−１−オキソ−２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドル−４−イルオキシ)−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得て、それを、さらに精製することなく次反応に使用する。
【０１３１】
実施例Ｉ４０：
７−アミノ−２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンの製造
【化３８】
４−ヒドロキシ−２−メチル−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オン(１.０４ｇ、５.０mmol)、４−(２−クロロ−エチル)−モルホリン塩化水素(１.１２ｇ、６.０mmol)、炭酸カリウム(８３０mg、６.０mmol)、ヨウ化カリウム(２４９mg、１.５mmol)の混合物のＤＭＦ(１５mL)溶液を、７０℃で１６時間撹拌する。混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出する(２回)。合わせた有機層を水、次いで塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、真空で濃縮し、４５０mgの粗物質を得る。水層をジクロロメタン(３回)で抽出する。合わせた有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させる。得られた残渣を２回シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ＣＨ２Ｃｌ２／メタノール)で精製し、７００mgの生成物を得る。合計で、１.１５ｇの２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンを得る。
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ ppm:2.55-2.61(m, 4H), 2.86(t, 2H), 3.20(s, 3H), 3.69-3.79(m, 4H), 4.28(t, 2H), 4.32(s, 2H), 7.00(d, 1H), 7.99(d, 1H)。
【０１３２】
７−アミノ−２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンを、上記の反応により製造する。３４０mgの７−アミノ−２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンが３８０mgの２−メチル−４−(２−モルホリン−４−イル−エトキシ)−７−ニトロ−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンから得られる。
1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ ppm:2.50-2.64(m, 4H), 2.76(t, 2H), 3.13(s, 3H), 3.69-3.77(m, 4H), 4.10(t, 2H), 4.26(s, 2H), 4.78-4.96(br.s, 2H), 6.55(d, 1H), 6.82(d, 1H)。
【０１３３】
下記４−置換−７−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンは、４−置換−７−アミノ−２−メチル−２,３−ジヒドロ−イソインドル−１−オンおよび２,４,５−トリクロロピリミジンから、実施例Ｉ３２の方法に従い製造する。
【表２８】
【０１３４】
実施例Ｉ４３：
５−メトキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの製造
【化３９】
撹拌している５−フルオロ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン(２.２４ｇ、１０mmol)のＤＭＦ(１５mL)溶液に、２−(メチルスルホニル)エタノール(１.８６ｇ、１５mmol)を添加し、溶液を０℃に冷却する。水素化ナトリウム(１.２ｇ、３０mmol)を添加し、反応混合物を室温に温め、次いで１時間撹拌する。混合物を１Ｎ ＨＣｌ溶液でクエンチし、酢酸エチルおよび塩水に分配する。有機層を濃縮乾固し、粗有機物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、５−ヒドロキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンを７０％収率で得る。1H-NMR(400MHz, δ, ppm)アセトン-d6:2.85-3.0(m, 2H), 3.06(s, 3H), 3.6-3.7(m, 2H), 7.05-7.1(m, 1H,), 7.35-7.41(m, 1H), 9.62(brs, IH)。
【０１３５】
実施例Ｉ４４：
５−メトキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンの製造
【化４０】
撹拌している５−ヒドロキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン(４４４mg、２.０mmol)のＤＭＦ(５mL)溶液に、炭酸カリウム(５５３mg、４.０mmoL)を添加し、溶液を０℃に冷却する。ヨードメタン(０.２５mL、４.０mmoL)を添加し、反応混合物を室温に温め、次いで１時間撹拌する。混合物を冷水でクエンチし、次いで沈殿を濾過し、水で洗浄し、真空で乾燥させて、５−メトキシ−２−メチル−８−ニトロ−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンに対応する白色固体を得る(３３６mg、７１％)。
1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:2.94(t, 2H), 3.15(s, 3H), 3.58(t, 2H), 3.91(s, 3H), 6.92(d, 1H,), 7.45(d, 1H), 9.62(brs, 1H)。
【０１３６】
下記５−置換−８−(２,５−ジクロロ−ピリミジン−４−イルアミノ)−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンは、５−置換−８−アミノ−２−メチル−３,４−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−１−オンおよび２,４,５−トリクロロピリミジンから、実施例Ｉ３２の方法に従い製造する。
【表２９】
【０１３７】
実施例Ｉ４７：
１'−(４−アミノ−３−メトキシ−フェニル)−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化４１】
４−フルオロ−２−メトキシ−１−ニトロベンゼン(１.０２ｇ、５.９７mmol)、[４,４']ビピペリジニル(３.６ｇ、１４.９mmol)、２Ｎ 水酸化ナトリウム(３０mL)、トルエン(１５mL)およびｎ−ブチルアンモニウムブロマイド(９６mg、０.３０mmol)の混合物を８０℃で１８時間激しく撹拌する。１０mLの水を添加後、混合物を濾過する。残渣を水で洗浄し、次いで乾燥させて、１−(３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル)−[４,４']ビピペリジン(１.７９ｇ、９４％収率)を黄色固体として得る。
1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:1.12-1.44(m, 6H), 1.65-1.73(m, 2H), 1.77-1.89(m, 2H), 2.52-2.63(m, 2H), 2.84-2.96(m, 2H), 3.05-3.14(m, 2H), 3.89-3.98(m, 2H), 3.95(s, 3H), 6.30(d, 1H), 6.41(dd, 1H), 8.00(d, 1H)。
【０１３８】
１−(３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル)−[４,４']ビピペリジン(１.７５ｇ、５.４８mmol)、ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルボキシレート(１.２０ｇ、５.４８mmol)のアセトニトリル(５５mL)中の懸濁液に、四塩化ジルコニウム(１２８mg、０.５５mmol)を添加し、混合物を環境温度で３０分撹拌する。水および水性炭酸水素ナトリウムを添加後、混合物を濾過し、乾燥させて、１'−(３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル)−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(５.１１ｇ、９２％収率)を黄色固体として得る。
1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:1.10-1.43(m, 6H), 1.46(s, 9H), 1.64-1.72(m, 2H), 1.76-1.89(m, 2H), 2.58-2.71(m, 2H), 2.84-2.95(m, 2H), 3.90-3.99(m, 2H), 3.95(s, 3H), 4.06-4.22(m, 2H), 6.30(d, 1H), 6.41(dd, 1H), 8.00(d, 1H)。
【０１３９】
１'−(３−メトキシ−４−ニトロ−フェニル)−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２.０ｇ、４.７７mmol)、鉄粉末(１.３３ｇ、２３.８５mmol)、１Ｎ 塩化水素(９.５４mL、９.５４mmol)のエタノール(５０mL)中の混合物を８０℃で３時間撹拌する。室温に冷却後、２Ｎ 塩化水素(５mL)および酢酸エチルを添加し、次いで混合物を濾過する。真空で濃縮後、混合物をＡｃＯＥｔで抽出し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、蒸発させて、１'−(４−アミノ−３−メトキシ−フェニル)−[４,４']ビピペリジニル−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(１.７７ｇ、９５％ｙｉｅｌｄ)を淡紫色固体として得る。
1H-NMR(400MHz, δ, ppm)CDCl3:1.09-1.33(m, 4H), 1.37-1.50(m, 2H), 1.46(s, 9H), 1.66-1.74(m, 2H), 1.75-1.83(m, 2H), 2.50-2.59(m, 2H), 2.59-2.73(m, 2H), 3.42-3.59(m, 4H), 3.83(s, 3H), 4.03-4.23(m, 2H), 6.42(dd, 1H), 6.53(d, 1H), 6.63(d, 1H)。
【０１４０】
実施例Ａ：ＦＡＫアッセイ
全工程を９６ウェル黒色マイクロタイタープレートで行う。精製した組み換え６ヒスチジン標識ヒトＦＡＫキナーゼドメインを希釈緩衝液(５０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.５、０.０１％ＢＳＡ、０.０５％Ｔｗｅｅｎ−２０の水溶液)で９４ng／mL(２.５nM)の濃度まで希釈する。反応混合物を１０μL ５×キナーゼ緩衝液(２５０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.５、５０μM Ｎａ３ＶＯ４、５mM ＤＴＴ、１０mM ＭｇＣｌ２、５０mM ＭｎＣｌ２、０.０５％ＢＳＡ、０.２５％Ｔｗｅｅｎ−２０の水溶液)、２０μL 水、５μLの４μM ビオチニル化ペプチド基質(Ｂｉｏｔ−Ｙ３９７)の水性溶液、５μLの試験化合物のＤＭＳＯ溶液、および５μLの組み換え酵素溶液の混合により調製し、３０分、室温でインキュベートする。酵素反応を５μLの５μM ＡＴＰの水溶液添加により開始させ、混合物を３時間、３７℃でインキュベートする。反応を２００μLの検出混合物(１nM Ｅｕ−ＰＴ６６(Perkin Elmer, No. AD0068)、２.５μg／mL ＳＡ−(ＳＬ)ＡＰＣ(Perkin Elmer, No. CR130-100)、希釈緩衝液中６.２５mM ＥＤＴＡ)の添加により停止させ、ユーロピウムからアロフィコシアニンへのＦＲＥＴシグナルをEnVision多標識リーダー(Perkin Elmer)で３０分の室温でのインキュベーション後に測定する。６６５nm対６１５nmの蛍光強度比を、試験化合物による退色効果の中和のためのデータ分析のためのＦＲＥＴシグナルとして使用する。結果を酵素活性の阻害％として示す。背景シグナルのレベルをＡＴＰは存在しないが、ＤＭＳＯを０％阻害のコントロールとして使用して、測定する。ＩＣ５０値を非直線的曲線適合分析(non-linear curve fit analysis)により、OriginPro 6.１プログラム(OriginLab)を使用して決定する。
【０１４１】
Ｂｉｏｔ−Ｙ３９７ペプチド(ビオチン−SETDDYAEIIDアンモニウム塩)を、ヒトＦＡＫ(GenBank Accession Number L13616)のＳ３９２からＤ４０２の領域と同じアミノ酸配列を有するように設計し、標準法により製造する。
【０１４２】
精製した組み換え６ヒスチジン標識ヒトＦＡＫキナーゼドメインを下記方法で得る：完全長ヒトＦＡＫｃＤＮＡを、ヒト胎盤Marathon-ReadyＴＭ ｃＤＮＡ(Clontech, No. 7411-1)からの、５' ＰＣＲプライマー(ATGGCAGCTGCTTACCTTGAC)および３' ＰＣＲプライマー(TCAGTGTGGTCTCGTCTGCCC)を用いたＰＣＲ増幅により単離し、ｐＧＥＭ−Ｔベクター(Promega, No. A3600)にサブクローン化する。ＡｃｃIIIで消化後、精製したＤＮＡフラグメントをクレノウフラグメントで処理する。ｃＤＮＡフラグメントをＢａｍＨＩで消化し、ＢａｍＨＩおよびＳｔｕＩで予め切断したｐＦａｓｔＢａｃＨＴｂプラスミド(Invitrogen, 10584-027)にクローン化する。得られたプラスミド、ｈＦＡＫＫＤ(Ｍ３８４−Ｇ７０６)／ｐＦａｓｔＢａｃＨＴｂを配列決定し、その構造を確認する。得られたＤＮＡは、Ｎ末端に６ヒスチジン・タグ、スペーサー領域およびｒＴＥＶプロテアーゼ開裂部位ならびに、ＦＡＫ(Ｍｅｔ３８４−Ｇｌｙ７０６)のキナーゼドメインの２９位から３５１位を含む、３６４個のアミノ酸のタンパク質をコードする。
【０１４３】
ドナープラスミドを、バキュロウイルスゲノム中に、MaxEfficacy DH10Bac大腸菌細胞(Invitrogen, No. 10361-012)を使用して輸送する。Ｂａｃｍｉｄ ＤＮＡを、Ｂａｃ−ｔｏ−Ｂａｃ(登録商標)バキュロウイルス発現系(Invitrogen, No. 10359-016)に記載の、単純なアルカリ融解プロトコールにより調製する。Ｓｆ９昆虫細胞を、販売者(CellFECTHIN(登録商標), Invitrogen)により提供されたプロトコールに基づき、トランスフェクトする。各融解物へのＦＡＫ発現をＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび抗ヒトＦＡＫモノクローナル抗体(Transduction Laboratories, No. F15020)でのウェスタン・ブロット法により分析する。
【０１４４】
最高の発現を示すウイルスクローンを、Ｓｆ９細胞への感染によりさらに増幅する。大規模発現のために、増幅したウイルスをExpression in ExpresSF+(登録商標)細胞に５ＭＯＩで７２時間感染させ、これらの条件が、ほとんど分解なく、高レベルのタンパク質をもたらす。細胞融解物を、硫酸ニッケルを充填し、５０mM ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.５、０.５Ｍ ＮａＣｌおよび１０mM イミダゾールで平衡化したHiTrapTM Chelathing Sepharose HP(Amersham Biosciences, No. 17-0409-01)カラムに入れる。捕捉タンパク質を、ＨＥＰＥＳ緩衝液／ＮａＣｌ中イミダゾールの量を増やしながら溶出し、緩衝液を透析により５０mM ＨＥＰＥＳ ｐＨ７.５、１０％グリセロールおよび１mM ＤＴＴに変える。
【０１４５】
実施例Ｂ：ＦＡＫのリン酸化レベル
Ｔｙｒ３９７でのＦＡＫのリン酸化レベルを、サンドイッチＥＬＩＳＡにより定量する。マウス乳癌腫４Ｔ１細胞(１×１０５)を、９６ウェル培養プレートのウェルに播き、阻害剤有りまたは無しで、１時間、０.５％ＢＳＡ含有ダルベッコ改変イーグル培地でインキュベートする。培地を除去し、細胞を１％ＮＰ−４０、０.２５％デオキシコール酸ナトリウム、１５０mM ＮａＣｌ、１mM ＥＤＴＡ、１mM ＰＭＳＦ、１mM Ｎａ３ＶＯ４、１mM ＮａＦ、１μg／mL アプロチニン、１μg／mL ロイペプチンおよび１μg／mL ペプスタチンを含む、２００μL ５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.４中に溶解する。遠心分離後、上清をサンドイッチＥＬＩＳＡに付し、リン酸化ＦＡＫおよび総ＦＡＫを定量する。細胞融解物を、１５０mM ＮａＣｌ含有５０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ９.５中、１００μL／ウェルの４μg／mL マウスモノクローナル抗ＦＡＫ抗体(クローン７７、Becton Dickinson Transduction Laboratories)で１８時間、４℃でプレコートし、Ｈ２Ｏで１：４希釈した３００μLのBlockAce(Dainippon Pharmaceuticals Co.)で室温で２時間ブロックした９６ウェル平底ＥＬＩＳＡプレートに添加した。ＴＢＳＮ(３００mM ＮａＣｌ、０.１％ＳＤＳおよび０.０５％ＮＰ−４０含有２０mM Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８.３)で洗浄後、総ＦＡＫを１００μLの１μg／ml 抗ＦＡＫポリクローナル抗体(#65-6140, Upstate Biology Inc.)で検出し、そして、リン酸化ＦＡＫをＨ２Ｏで１：１０希釈したBlockAce中の１００μLの０.２５μg／μL 抗リン酸化ＦＡＫ(Ｙ３９７)抗体(Affinity BioReagents, #OPA1-03071)で検出する。１時間、室温でインキュベーション後、プレートをＴＢＳＮで洗浄し、Ｈ２Ｏで１：１０希釈したBlockAceで１：２０００希釈した１００μLのビオチニル化抗ウサギＩｇＧ(#65-6140, Zymed Laboratolies Inc.)と室温で１時間インキュベートする。ＴＢＳＮで洗浄後、ＡＢＴＳ溶液基質キット(#00-2011, Zymed Lobolatories Inc.)を発色のために使用する。４０５nmの吸光度を、室温で２０分インキュベーション後に測定する。ＦＡＫのリン酸化レベルの５０％減少をもたらす化合物濃度を決定する。
【０１４６】
実施例Ｃ：固定−非依存的腫瘍細胞増殖アッセイ
マウス乳癌腫４Ｔ１細胞(５×１０３)を、９６ウェルUltra low Attachmentプレート(#3474, Corning Inc.)中、１００μLの１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ改変イーグル培地に播く。細胞を２時間培養し、阻害剤を、最終濃度０.１％ＤＭＳＯ中の種々の濃度で添加する。４８時間後、細胞増殖を細胞計数キット−８(和光純薬)でアッセイし、それは水溶性テトラゾリウム塩ＷＳＴ８を使用する。２０μLの試薬を各ウェルに添加し、細胞をさらに２時間培養する。光学密度を４５０nmで測定する。増殖の５０％阻害をもたらす濃度を測定する。
【０１４７】
実施例Ｄ：インビトロＴ細胞遊走アッセイ：
免疫細胞の移動性に対するＦＡＫ阻害剤の阻害活性を、下記インビトロ試験により確認する。すなわち、Ｊｕｒｋａｔ Ｔヒト白血病細胞系を、１×１０５細胞で、８μm孔(Beckton Dickinson, UK)を有するFluoroblockの上部チャンバーに置き、４時間、３７℃、９５％空気−５％ＣＯ２の培養により、ウシ胎児血清(１０％ＦＢＳ)の濃度勾配に依存して、移動させる。細胞移動性を、下部チャンバーに移動した細胞数を、１時間、ＨＢＳＳ中８μg／mlのカルセイン−ＡＭ(Molecular Probes, Netherlands)で標識することにより概算する。ＦＡＫ阻害剤の評価のために、上部および下部チャンバーに種々の濃度のＦＡＫ阻害剤(０.０３−１０μM)を添加する。ＩＣ５０値を、Ascent(励起：４８５nm、放出：５３８nm)で測定したこれらの蛍光強度を、媒体処置群のものと比較することにより計算する。
【０１４８】
実施例：Ｅ
ＡＬＫアッセイ
ＡＬＫチロシンキナーゼ活性阻害は既知法を使用して、例えばJ. Wood et al. Cancer Res. 60, 2178-2189(2000)に記載のＶＥＧＦ−Ｒキナーゼアッセイに準じて、ＡＬＫの組み換えキナーゼドメインを使用して、測定する。
【０１４９】
式Ｉの化合物は、ヒトＮＰＭ−ＡＬＫ過剰発現マウスＢａＦ３細胞の増殖を強力に阻害する。ＮＰＭ−ＡＬＫの発現は、ＢａＦ３細胞系を、ＮＰＭ−ＡＬＫをコードする発現ベクターｐＣＩｎｅｏTM(Promega Corp., Madison WI, USA)でトランスフェクトし、でトランスフェクトし、続いてＧ４１８耐性細胞を選択することにより達成する。トランスフェクトしていないＢａＦ３細胞は、細胞生存をＩＬ−３に依存する。対照的にＮＰＭ−ＡＬＫ発現ＢａＦ３細胞(以後ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫと呼ぶ)は、それらがＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼを介して増殖性シグナルを得るため、ＩＬ−３非存在下で増殖できる。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤は、故に増殖シグナルをなくし、抗増殖性活性をもたらす。ＮＰＭ−ＡＬＫキナーゼの推定阻害剤の抗増殖性活性は、しかし、ＮＰＭ−ＡＬＫ非依存的機構を介した増殖シグナルを提供するＩＬ−３の添加により打ち消され得る[ＦＬＴ３キナーゼを使用した類似の細胞系についてE Weisberg et al. Cancer Cell;1, 433-443(2002)参照]。式Ｉの化合物の阻害活性は、簡単に言うと、下記の通り決定する：ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞(１５０００／マイクロタイタープレートウェル)を９６ウェルマイクロタイタープレートに移す。試験化合物[ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解]ＤＭＳＯの最終濃度が１％(ｖ／ｖ)を超えない方法で、連続濃度で添加する(希釈シリーズ)。添加後、プレートを２日間インキュベートし、その間、試験化合物なしのコントロールは、２回の細胞分割サイクルを受け得る。ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞の増殖を、YoproTM染色の手段により測定する(T Idziorek et al. J. Immunol. Methods;185:249-58 [1995])：２０mM クエン酸ナトリウム、ｐＨ４.０、２６.８mM 塩化ナトリウム、０.４％ＮＰ４０、２０mM ＥＤＴＡおよび２０mMから成る２５μlの溶解緩衝液を各ウェルに添加する。細胞溶解は室温で６０分以内に完了し、ＤＮＡに結合したYoproの総量を、下記設定のCytofluor II ９６ウェルリーダー(PerSeptive Biosystems)を使用して測定することにより決定する：励起(nm)４８５／２０および放出(nm)５３０／２５。
ＩＣ５０値は、式：
ＩＣ５０＝[(ＡＢＳ試験−ＡＢＳ開始時)／(ＡＢＳ対象−ＡＢＳ開始時)]×１００
を使用したコンピューターを利用したシステムにより決定する。
【０１５０】
これらの実験のＩＣ５０値は、阻害剤なしのコントロールを使用して得られたより５０％低い細胞数をもたらす、問題の試験化合物の濃度として示す。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【０１５１】
式Ｉの化合物の抗増殖性作用はまた、ヒトＫＡＲＰＡＳ−２９９リンパ腫細胞系(WG Dirks et al. Int. J. Cancer 100, 49-56(2002)に記載)において、ＢａＦ３−ＮＰＭ−ＡＬＫ細胞系について上記したのと同じ方法を使用して決定できる。式Ｉの化合物は、約０.０１から１μMの範囲のＩＣ５０で阻害活性を示す。
【０１５２】
実施例Ｆ：ヌードマウス異種移植片モデルにおけるインビボ活性：
雌または雄ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス(５−８週齢、日本チャールス・リバー株式会社、横浜、日本)を滅菌条件下に保ち、水および餌は自由に摂取させる。腫瘍細胞(ヒト上皮性細胞系ＭＩＡ ＰａＣａ−２；European Collection of Cell Cultures (ECACC), Salisbury, Wiltshire, UK, Catalogue Number 85062806；６５歳白人男性からの細胞系；未分化型ヒト膵臓癌腫細胞系)を、マウスの左または右脇腹に、Forene(登録商標)麻酔(アボット ジャパン株式会社、東京、日本)下に皮下注射することにより、腫瘍を誘発する。試験化合物での処置を、腫瘍体積が約１００mm３に達したときに開始する。腫瘍増殖を週に２回、および最後の処置１日後に、２垂直軸を測定することにより測定する。腫瘍体積を、文献法(Evans et al., Brit. J. Cancer 45, 466-8, 1982参照)に従い計算する。抗腫瘍効果を、処置動物の腫瘍体積の平均増加を、非処置動物(コントロールの)腫瘍体積の平均増加で割り、１００を掛けた後、デルタＴ／Ｃ[％]として示す。腫瘍緩解を、処置動物の腫瘍体積の平均変化を、処置開始時の平均腫瘍体積で割り、１００を掛けた後、緩解[％]として示す。試験化合物を、経口で毎日、休薬日有りまたは無しで投与する。
【０１５３】
細胞系ＭＩＡ ＰａＣａ−２の代わりに、他の細胞系も同じ方法で使用でき、その例は下記である：
− ４Ｔ１乳癌腫細胞系(ATCC Number CRL-2539；Cancer. 88(12 Supple), 2979-2988, 2000もまた参照)で雌ＢＡＬＢ／ｃマウス(乳房脂肪パッドに注射)。
【０１５４】
実施例Ｇ：錠剤
５０mgの活性成分、例えば実施例１から１３１に記載の式Ｉの化合物のいずれかひとつを含み、下記組成を有する錠剤を、慣用法で製造する：
【表３０】
【０１５５】
製造：活性成分を、小麦デンプンの一部、ラクトースおよびコロイド状ケイ酸と混合し、混合物を篩過させる。さらに一部の小麦デンプンを水浴上で、５倍量の水とペースト状にし、粉末混合物をそのペーストとわずかに可塑性の塊が得られるまで練る。
可塑性の塊を約３mmメッシュサイズの篩を通し、乾燥させ、得られた乾燥顆粒を再び篩過させる。次いで小麦デンプンの残り、タルクおよびステアリン酸マグネシウムを混ぜ入れ、混合物を圧縮して、１４５mg重量で、割線を有する錠剤に整形する。
【０１５６】
実施例Ｈ：軟カプセル
各々５０mgの活性成分、例えば実施例１から３３に記載の式Ｉの化合物のいずれかひとつを含む５０００個の軟ゼラチンカプセルを、慣用法で製造する：
【表３１】
【０１５７】
製造：微粉化活性成分をLauroglykol(登録商標)(プロピレングリコールラウレート、Gattefosse S.A., Saint Priest, France)に懸濁させ、湿式微粉機で、約１から３μmの粒子サイズまで挽く。混合物の０.４１９ｇ分を、次いで軟ゼラチンカプセルに、カプセル充填機を使用して分配する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
〔式中、
Ｒ０は水素であり；
Ｒ１は、ＮおよびＯから独立して選択された１個または２個のヘテロ原子を含む、非置換または置換６員単環式または１０員二環式ヘテロ環であり；
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＣおよびＮと一体となって、Ｎから独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含むヘテロ環を形成し、それは非置換または低級アルキルおよびオキソから独立して選択される１個以上の置換基で置換されており；
Ｒ４は水素であり；
Ｒ５はハロゲンであり；
Ｒ６は水素であり；
Ｒ７は水素であり；
Ｒ８は水素；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されたカルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；ＮまたはＯから独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、非置換または、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、モノ−またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノ、１個または２個のＮ環原子を含む６員ヘテロ環(これは非置換であるか、またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されている)から独立して選択される置換基で置換されている５または６員ヘテロ環；１個のＮ環原子を含み、非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されている５または６員ヘテロ環−Ｃ１−Ｃ７アルコキシであり；
Ｒ９は水素であり；
Ｒ１０は水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである。〕
の化合物またはその塩。
【請求項２】
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がピペリジニル、ピペラジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり、その各々は非置換であるか、またはピペリジニル(pipereridinyl)、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、ピペラジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニルで置換されており；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってインドリルまたはイソキノリニルを形成し、この両方は非置換であるか、またはＣ１−Ｃ７アルキルおよび／またはオキソで置換されており；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がハロゲンであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されたカルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；モルホリノ；ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ピロリジニル；ピペラジニル−ピペリジニルであり；ここで、ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ、モルホリノ；ピペリジニル(piperindinyl)、ビピペリジニル(bipiperindinyl)、ピロリジニル、ピペラジニル−ピペリジニルは、非置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、モノ−またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノから独立して選択される置換基で置換されており；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである；
請求項１記載の式Ｉの化合物、またはその塩。
【請求項３】
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がヒドロキシ−ピペリジニル、ピペリジニル−ピペリジニル、ピペラジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル、ピペラジニル−ピペリジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−ピペリジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってインドリルまたはイソキノリニルを形成し、この両方はＣ１−Ｃ７アルキルおよびオキソで置換されており；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がハロゲンであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換Ｃ１−Ｃ７アルキル−カルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；モルホリノ；ヒドロキシ−ピペリジニル(piperindinyl)；Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノ−ピロリジニルであり；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである；
請求項１記載の式Ｉの化合物、またはその塩。
【請求項４】
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がヒドロキシ−ピペリジニル、ピペリジニル−ピペリジニル、ピペラジニル、メチル−ピペラジニル、イソプロピル−ピペラジニル、ピペラジニル−ピペリジニル、メチル−ピペラジニル−ピペリジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってメチル−イソインドロンまたはメチル−イソキノリノンを形成し；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がクロロであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；メトキシ；非置換メチル−カルボミル；メトキシ−エトキシ；メチル−ピペラジニル−エトキシ；モルホリノ；ヒドロキシ−ピペリジニル(piperindinyl)；メチル−ピペラジニル−ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ジメチルアミノ−ピロリジニルであり；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、フルオロまたはメトキシである；
請求項１記載の式Ｉの化合物、またはその塩。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載の式Ｉの化合物の製造法であって、式II
【化２】
〔式中、
Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は請求項１で定義の通りであり、そしてＹは脱離基である。〕
の化合物と、式III
【化３】
〔式中、
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は請求項１で定義の通りである。〕
の化合物を反応させ；
そして、所望により、置換基が請求項１で定義の意味を有する式Ｉの化合物を、請求項１で定義の他の式Ｉの化合物に変換し；
そして得られた式Ｉの化合物を遊離形または塩として回収し、そして、必要なとき、遊離形で得られた式Ｉの化合物を所望の塩に、または得られた塩を遊離形に変換する
ことを含む、方法。
【請求項６】
請求項１から４の何れかに記載の式Ｉの化合物を活性成分として、１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項７】
新生物疾患および免疫系障害の処置または予防用医薬の製造のための、請求項１から４のいずれかに記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項８】
治療的有効量の請求項１から４のいずれかに記載の式Ｉの化合物および、新生物疾患または免疫系障害の処置に有用である１種以上のさらなる医薬物質を含む、組合せ剤。
【請求項９】
請求項１から４のいずれかに記載の有効量の式Ｉの化合物、またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む、このような処置を必要とする対象における、新生物疾患および免疫系障害の処置法。
【請求項１０】
ＦＡＫおよび／またはＡＬＫの阻害に応答する疾患の処置または予防用医薬の製造のための、請求項１から４のいずれかに記載の式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１１】
処置される疾患が、増殖性疾患から選択される、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
処置される増殖性疾患が乳房、腎臓、前立腺、結腸直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、神経細胞、肺、子宮の腫瘍、および胃腸腫瘍ならびに骨肉腫および黒色腫から選択される、請求項１１記載の使用。
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
〔式中、
Ｒ０は水素であり；
Ｒ１は、ＮおよびＯから独立して選択された１個または２個のヘテロ原子を含む、非置換または置換６員単環式または１０員二環式ヘテロ環であり；
Ｒ２およびＲ３は、それらが結合しているＣおよびＮと一体となって、Ｎから独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含むヘテロ環を形成し、それは非置換または低級アルキルおよびオキソから独立して選択される１個以上の置換基で置換されており；
Ｒ４は水素であり；
Ｒ５はハロゲンであり；
Ｒ６は水素であり；
Ｒ７は水素であり；
Ｒ８は水素；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されたカルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；ＮまたはＯから独立して選択される１個または２個のヘテロ原子を含み、非置換または、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、モノ−またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノ、１個または２個のＮ環原子を含む６員ヘテロ環(これは非置換であるか、またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されている)から独立して選択される置換基で置換されている５または６員ヘテロ環；１個のＮ環原子を含み、非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されている５または６員ヘテロ環−Ｃ１−Ｃ７アルコキシであり；
Ｒ９は水素であり；
Ｒ１０は水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである。〕
の化合物またはその塩。
【請求項２】
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がピペリジニル、ピペラジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり、その各々は非置換であるか、またはピペリジニル(pipereridinyl)、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、ピペラジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニルで置換されており；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってインドリルまたはイソキノリニルを形成し、この両方は非置換であるか、またはＣ１−Ｃ７アルキルおよび／またはオキソで置換されており；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がハロゲンであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換またはＣ１−Ｃ７アルキルで置換されたカルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；モルホリノ；ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ピロリジニル；ピペラジニル−ピペリジニルであり；ここで、ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ、モルホリノ；ピペリジニル(piperindinyl)、ビピペリジニル(bipiperindinyl)、ピロリジニル、ピペラジニル−ピペリジニルは、非置換であるか、またはヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ７アルキル、モノ−またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノから独立して選択される置換基で置換されており；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである；
請求項１記載の式Ｉの化合物、またはその塩。
【請求項３】
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がヒドロキシ−ピペリジニル、ピペリジニル−ピペリジニル、ピペラジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル、ピペラジニル−ピペリジニル、Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−ピペリジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってインドリルまたはイソキノリニルを形成し、この両方はＣ１−Ｃ７アルキルおよびオキソで置換されており；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がハロゲンであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；非置換Ｃ１−Ｃ７アルキル−カルボミル；Ｃ１−Ｃ７アルコキシ−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−Ｃ１−Ｃ７アルコキシ；モルホリノ；ヒドロキシ−ピペリジニル(piperindinyl)；Ｃ１−Ｃ７アルキル−ピペラジニル−ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；またはジ−Ｃ１−Ｃ７アルキルアミノ−ピロリジニルであり；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、ハロゲンまたはＣ１−Ｃ７アルコキシである；
請求項１記載の式Ｉの化合物、またはその塩。
【請求項４】
Ｒ０が水素であり；
Ｒ１がヒドロキシ−ピペリジニル、ピペリジニル−ピペリジニル、ピペラジニル、メチル−ピペラジニル、イソプロピル−ピペラジニル、ピペラジニル−ピペリジニル、メチル−ピペラジニル−ピペリジニルまたはピラノジノ−オキサジニルであり；
Ｒ２およびＲ３が、それらが結合しているＣおよびＮと一体となってメチル−イソインドロンまたはメチル−イソキノリノンを形成し；
Ｒ４が水素であり；
Ｒ５がクロロであり；
Ｒ６が水素であり；
Ｒ７が水素であり；
Ｒ８が水素；メトキシ；非置換メチル−カルボミル；メトキシ−エトキシ；メチル−ピペラジニル−エトキシ；モルホリノ；ヒドロキシ−ピペリジニル(piperindinyl)；メチル−ピペラジニル−ピペリジニル(piperindinyl)；ビピペリジニル(bipiperindinyl)；ジメチルアミノ−ピロリジニルであり；
Ｒ９が水素であり；
Ｒ１０が水素、フルオロまたはメトキシである；
請求項１記載の式Ｉの化合物、またはその塩。
【請求項５】
請求項１から４のいずれかに記載の式Ｉの化合物の製造法であって、式II
【化２】
〔式中、
Ｒ０、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は請求項１で定義の通りであり、そしてＹは脱離基である。〕
の化合物と、式III
【化３】
〔式中、
Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０は請求項１で定義の通りである。〕
の化合物を反応させ；
そして、所望により、置換基が請求項１で定義の意味を有する式Ｉの化合物を、請求項１で定義の他の式Ｉの化合物に変換し；
そして得られた式Ｉの化合物を遊離形または塩として回収し、そして、必要なとき、遊離形で得られた式Ｉの化合物を所望の塩に、または得られた塩を遊離形に変換する
ことを含む、方法。
【請求項６】
請求項１から４の何れかに記載の式Ｉの化合物を活性成分として、１種以上の薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項７】
新生物疾患および免疫系障害の処置または予防用医薬の製造のための、請求項１から４のいずれかに記載の式Ｉの化合物の使用。
【請求項８】
治療的有効量の請求項１から４のいずれかに記載の式Ｉの化合物および、新生物疾患または免疫系障害の処置に有用である１種以上のさらなる医薬物質を含む、組合せ剤。
【請求項９】
請求項１から４のいずれかに記載の有効量の式Ｉの化合物、またはそれを含む医薬組成物を投与することを含む、このような処置を必要とする対象における、新生物疾患および免疫系障害の処置法。
【請求項１０】
ＦＡＫおよび／またはＡＬＫの阻害に応答する疾患の処置または予防用医薬の製造のための、請求項１から４のいずれかに記載の式Ｉの化合物、または薬学的に許容されるその塩の使用。
【請求項１１】
処置される疾患が、増殖性疾患から選択される、請求項１０記載の使用。
【請求項１２】
処置される増殖性疾患が乳房、腎臓、前立腺、結腸直腸、甲状腺、卵巣、膵臓、神経細胞、肺、子宮の腫瘍、および胃腸腫瘍ならびに骨肉腫および黒色腫から選択される、請求項１１記載の使用。
【公表番号】特表２００８−５１０７６５（Ｐ２００８−５１０７６５Ａ）
【公表日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２８７５６（Ｐ２００７−５２８７５６）
【出願日】平成１７年８月２６日（２００５．８．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００９２５５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２１４５７
【国際公開日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年８月２６日（２００５．８．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００９２５５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０２１４５７
【国際公開日】平成１８年３月２日（２００６．３．２）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
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