リファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤または免疫調節剤
【課題】 本願は、炎症性疾患、例えば動脈硬化または経皮的血管形成術後の再狭窄等に対する予防及び治療のための抗炎症剤または免疫調節剤を提供することを課題とする。
【解決手段】 上記課題は、炎症性細胞の増殖または炎症性サイトカイン産生を抑制するリファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤または免疫調節剤とすることにより、解決される。このような抗炎症剤または免疫調節剤は、炎症性疾患の予防または治療に特に有効に利用することが可能である。
【解決手段】 上記課題は、炎症性細胞の増殖または炎症性サイトカイン産生を抑制するリファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤または免疫調節剤とすることにより、解決される。このような抗炎症剤または免疫調節剤は、炎症性疾患の予防または治療に特に有効に利用することが可能である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リファイマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤および免疫調節剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、傷害または感染に対する身体の正常な応答である。しかし、炎症性疾患では、免疫系細胞の活性異常が生じることにより、免疫系細胞の異常増殖やそれらから分泌される炎症性サイトカインの過剰産生が生じ、病的状態を引き起こしている。炎症性サイトカインとは、リンパ球やマクロファージなどから産生され、細菌やウイルス感染、腫瘍、組織損傷に伴う炎症反応に関与する物質である。例えばインターロイキン（ＩＬ）−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、単球走化活性因子（ＭＣＰ−１）、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ等がある。
【０００３】
炎症性サイトカインの過剰産生により引き起こされる炎症性疾患には、全身性炎症反応症候群、慢性関節リウマチなどの膠原病、アレルギー疾患、動脈硬化、経皮的血管形成術後の再狭窄、インスリン抵抗性、糖尿病などの代謝性疾患や、多発性硬化症、移植片対宿主症、ウイルス肝炎、ＨＩＶ感染などの感染症等がある。
【０００４】
従って、炎症性サイトカインの過剰な産生を抑制することは、これら病態の予防、治療、改善、再発防止に非常に有益となり得る。
【０００５】
例えば、シクロスポリンやＦＫ５０６（タクロリムス）は炎症性サイトカインの産生を抑制することが知られており（非特許文献１、２参照）、皮膚疾患あるいは関節リウマチなどに対して有効とされている。
【０００６】
【非特許文献１】Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｔ．， ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ｓｃｉ． ２００７ ６９（９） ８８７−８９２
【非特許文献２】Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｊ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９９２ ７５（１） １３６−１４２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本願発明の課題は、炎症性サイトカインの過剰な産生を抑制することにより、上記病態の予防、治療、改善、再発防止が可能な手法を見出すことにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、抗菌作用を有する化合物として知られているリファマイシン誘導体により、免疫系細胞の活性を調節することが可能であって、その結果炎症性サイトカインの過剰な産生を抑制することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、リファマイシン誘導体を有効成分とし、免疫系細胞の活性を調節することを特徴とする抗炎症剤または免疫調節剤に関する。
【００１０】
前記リファマイシン誘導体は、下記式（Ｉ）：
【００１１】
【化１０】
で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好ましい。このうち、リファマイシン誘導体は、リファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはそれらの生理学的に許容される塩であるのが好ましい。なお、リファラジルの化学式は、後述の実施形態の項目で説明する。
【００１２】
また、前記免疫系細胞が好中球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージからなる群より選択される抗炎症剤または免疫調節剤であるのが好ましい。
【００１３】
免疫系細胞の活性を調節は、前記免疫系細胞の増殖を抑制することにより行いうる。
【００１４】
また、免疫系細胞の活性を調節は、前記免疫系細胞のサイトカインの産生を調節することにより行いうる。このうち、前記サイトカインが、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５，ＩＬ−１６、ＩＬ−１７ 、ＩＬ−１８ 、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、およびＲＡＮＴＥＳから選ばれるのが好ましい。
【００１５】
更には、炎症性サイトカインの産生を抑制する抗炎症剤または免疫調節剤であるのが好ましい。このうち、前記炎症性サイトカインがＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−γから選ばれるものである抗炎症剤または免疫抑制剤であるのが好ましい。
【００１６】
また、本発明の抗炎症剤または免疫調節剤は、感染症、炎症性疾患の予防または治療のために使用するものであるのが好ましい。
【００１７】
また、前記炎症性疾患が、血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、癌、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症であることを特徴とする抗炎症剤または免疫調節剤であるのが好ましい。
【００１８】
また、前記血管性疾患が、動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞であることを特徴とする抗炎症剤または免疫調節剤であるのが好ましい。
【００１９】
また、本発明にかかる抗炎症剤または免疫調節剤は、経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与からなる群より選択される非経口投与により血中への徐放が実施されるのが好ましい。このうち、インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、バルーンカテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であるのが好ましい。
【００２０】
本発明の別の態様として、前記抗炎症剤または免疫調節剤を含むインプラントがある。
【００２１】
また、本発明の別の態様として、抗炎症剤または免疫調節剤製造のための、前記リファマイシン誘導体の使用がある。
【００２２】
また、本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体を使用する炎症の抑制方法がある。
【００２３】
また、本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体を使用する免疫の調節方法がある。
【００２４】
また、本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体を使用する炎症性疾患の予防または治療方法がある。
【００２５】
また、本発明のその他の態様およびこれらの効果は、以下に説明する実施形態および図面によって明らかにされる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明にかかるリファマイシン誘導体含む抗炎症剤または免疫調節剤は、免疫系細胞の活性を調節することが可能である。特に、リファマイシン誘導体が免疫系細胞の増殖や、炎症性サイトカインの産生を抑制する抗炎症剤または免疫調節剤は、炎症性疾患の予防または治療に特に有効に利用することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
以下、本発明の実施形態としてのリファマイシン誘導体を利用した抗炎症剤または免疫調節剤、およびそれらを利用したインプラントについて詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、本願発明において、「リファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤」とは、リファマイシン誘導体を有効成分とする炎症性疾患治療用組成物または製剤（医薬品）を含む概念である。同様に、「リファマイシン誘導体を有効成分とする免疫調節剤」とは、リファマイシン誘導体を有効成分とする免疫調節用組成物または製剤（医薬品）を含む概念である。
【００２８】
１．リファマイシン誘導体
本願発明で用いられるリファマイシン誘導体としては、以下の式（Ｉ）：
【００２９】
【化１１】
（式（Ｉ）中、Ｘ１は酸素原子または硫黄原子を示し、Ｒ１はアセチル基または水素原子を示し、Ｒ２はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ３、Ｒ４は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、下記式（II）で表される基、または、下記式（IV）で表される基を示す）で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好ましい。
【００３０】
【化１２】
【００３１】
【化１３】
上記式（II）中、Ｒ５、Ｒ６は同一または相異なり、炭素数１から３のアルキル基、または式（III）で表される基を示す。
【００３２】
【化１４】
（式（III）中、ｊは１から３の整数を示す）
上記式（IV）中、Ｒ７、Ｒ８は同一または相異なり、水素原子または炭素数１から３のアルキル基を示し、Ｘ２は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式（V）で表される基、または、下記式（VI）で表される基を示す。
【００３３】
【化１５】
【００３４】
【化１６】
上記式（V）中、Ｒ９、Ｒ１０は同一または相異なり、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、またはＲ９とＲ１０が結合して下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ２）ｋ−
（式中、ｋは１から４の整数を示す）
上記式（VI）中、ｍは０または１を示し、Ｒ１１は水素原子、炭素数１から７のアルキル基、または下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ２）ｎＸ３
（式中、ｎは１から４の整数を示し、Ｘ３は炭素数１から３のアルコキシ基、ビニル基、エチニル基、または下記式（VII）で表される基を示す。）
【００３５】
【化１７】
【００３６】
上記式（Ｉ）において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０の炭素数１から３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基およびシクロプロピル基が挙げることができ、Ｒ１１の炭素数１から６のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、ヘキシル基、４−メチルペンチル基、シクロヘキシル基、３−メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基などの鎖状または環状アルキル基を挙げることができる。
【００３７】
Ｘ３の炭素数１から３のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基およびシクロプロポキシ基を挙げることができる。
【００３８】
好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ１が酸素原子であり、Ｒ１がアセチル基または水素原子を示し、Ｒ２はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ３、Ｒ４は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、または式（VIII）：
【００３９】
【化１８】
（式中、Ｒ１２は水素原子、または炭素数１から７のアルキル基を示す）で表されるリファマイシン誘導体またはその生理学的に許容される塩である。
【００４０】
Ｒ１２の炭素数１から７のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１，２−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、ヘキシル基、４−メチルペンチル基、シクロヘキシキル基、３−メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基などの鎖状または環状のアルキル基を挙げることができる。
【００４１】
好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ１が酸素原子であり、Ｒ１がアセチル基であり、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ３が水酸基であり、Ｒ４が式（IX）：
【００４２】
【化１９】
で表されるリファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはその生理学的に許容される塩である。ただし、本発明で用いられるリファマイシン誘導体は、これらの化合物に限定されるものではない。
【００４３】
２．リファマイシン誘導体の作用
従来、リファマイシン誘導体は肺炎クラミジアやヘリコバクター・ピロリに対して極めて強い抗菌活性を有する抗生物質であることが知られており、使用の際は、極めて低濃度で用いられていた。本願発明は、リファマイシン誘導体が、従来と比較して高濃度で用いられた場合、免疫系細胞の活性を調節する作用を示すという、抗菌活性とは関連のない意外な効果を初めて見出したことによりなされたものである。
【００４４】
免疫系細胞の活性の調節は、例えば、免疫系細胞の増殖を抑制することにより行われる。このうち、免疫系細胞としては、好中球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージなどが挙げられる。
【００４５】
また、免疫系細胞の活性の調節は、免疫系細胞のサイトカインの産生を調節することにより行われる。ここで、サイトカインの産生の調節とは、炎症性サイトカインの産生を抑制すること、および、抗炎症性サイトカインの産生を促進することを意味する。
【００４６】
サイトカインとしては、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５，ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳなどが挙げられる。また、炎症性サイトカインとしては、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−γなどが挙げられる。
【００４７】
近年、種々の疾患において炎症性変化の重要性が指摘されている。例えば、動脈硬化または経皮的血管形成術（ＰＴＣＡ）後の血管再狭窄の発生早期において、病変部位における免疫系細胞（好中球、Ｔリンパ球、単球／マクロファージ）の浸潤、炎症性サイトカインの発現増加が認められている。さらに、前記疾患は肺炎クラミジアやヘリコバクター・ピロリの感染との関連性が指摘されている（Ｊｏｈｎ Ｄａｎｅｓｈ， ｅｔ ａｌ． Ｌａｎｃｅｔ １９９７ ３５０ ４３０−４３６）。従って、抗菌作用、抗炎症作用を有するリファマイシン誘導体は、動脈硬化またはＰＴＣＡ後の再狭窄の予防または治療や、炎症性疾患の予防または治療に有効に利用することができると考えられる。特に、微生物感染を伴う疾患には好適である。
【００４８】
３．炎症性疾患の例
本発明においては、抗炎症剤または免疫調節剤は、感染症、炎症性疾患の予防または治療のために使用することができる。
【００４９】
前記炎症性疾患としては、血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、癌、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症が挙げられる。
【００５０】
また、前記血管性疾患としては、動脈硬化症(アテローム性動脈硬化症、中膜石灰化硬化症)、細小動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、または透析シャントを含む自然発生的血管性疾患、経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞を含む非自然発生的血管性疾患が挙げられる。さらに、血管形成術としては、例えば、バルーン拡張術、ステント留置術、アテレクトミー、レーザー血管形成術が挙げられる。
【００５１】
４．抗炎症剤または免疫調節剤
（４−１．他の薬剤を含む実施形態）
例えば、炎症性疾患の予防または治療を目的とした製剤を製造する際には、他の薬剤（抗凝固薬、抗血小板物質、抗痙薬、抗菌薬、抗腫瘍薬、抗微生物剤、抗炎症剤、抗物質代謝剤、免疫抑制剤等）と組み合わせてもよい。
【００５２】
本実施態様においても、リファマイシン誘導体は、免疫系細胞の活性を調節する作用を示し、免疫系細胞の増殖を抑制、あるいは炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【００５３】
（４−２．製剤の実施形態）
本発明の抗炎症剤または免疫調節剤は、所望により医薬上許容される担体または賦形剤と合して、経口投与または非経口投与用の製剤とすることができ、所望の成分を混合、溶解するような公知の製剤技術に従って、自体公知の剤型に調製できる。上記剤型のうち、経口的に投与される剤型としては、例えば、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤および液剤等が挙げられる。剤型が粉末、顆粒、錠剤等として処方される場合、固形組成物を処方するのに好適な任意の製薬担体、例えば、賦形剤（澱粉、ブドウ糖、果糖、白糖等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、崩壊剤（澱粉、結晶セルロース等）、結合剤（澱粉、アラビアゴム等）等を用いることができ、コーティング剤（ゼラチン、白糖等）でコーティングされていてもよい。また、剤型がシロップや液剤として処方される場合、例えば、安定化剤（エデト酸ナトリウム等）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロース等）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖等）、芳香剤等を適宜に選択して使用することができる。非経口的に処方される剤型としては、注射剤、坐剤等が挙げられる。注射剤として処方される場合、例えば、溶剤（注射用蒸留水等）、安定化剤（エデト酸ナトリウム等）、等張化剤（塩化ナトリウム、グリセリン、マンニトール等）、ｐＨ調整剤（塩酸、クエン酸、水酸化ナトリウム等）を用いることができ、坐剤として処方される場合、例えば、坐剤基剤（カカオ脂、マクロゴール等）等を適宜に選択して使用することができる。
【００５４】
局所投与の剤型としては、例えば、点眼剤、眼軟膏、点鼻剤等が挙げられる。点眼剤、眼軟膏または点鼻剤として処方される場合、例えば、溶剤（生理食塩水、精製水等）、安定化剤（エデト酸ナトリウム、クエン酸等）、乳化剤（ポリビニルピロリドン等）および乳化基剤（ヒマシ油等）、界面活性剤（ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等）、保存剤（塩化ベンザルコニウム、パラベン類、クロロブタノール等）、緩衝剤（ホウ酸、ホウ砂、酢酸ナトリウム、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤等）、等張化剤（塩化ナトリウム、グリセリン、マンニトール等）、ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム等）、軟膏基剤（ワセリン、ラノリン等）、粘性剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等）等公知の化合物を適宜に選択して使用することができる。
【００５５】
（４−３．血中に徐放させる実施形態）
リファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤または免疫調節剤を予防及び治療の目的で血中に徐放させる場合、投与経路は特に限定されず、経口投与若しくは非経口投与（例えば、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、鼻腔などへの粘膜投与または吸入投与、インプラントを利用した投与）のいずれでもよい。インプラントとしては、例えば、ステント、ステントグラフト、カテーテル（バルーンカテーテルも含む）が挙げられる。
【実施例】
【００５６】
以下の実施例では、ヒト単球系株化細胞であるＴＨＰ−１を用いて、リファマイシン誘導体が炎症性サイトカインの産生を抑制する、本願発明の一実施形態について説明するが、本発明の範囲は下記の実施例により限定されるものではない。
【００５７】
（実施例１）ＴＨＰ−１の培養
ＴＨＰ−１（ＤＳ−バイオファーマバイオメディカル株式会社）を、ＲＰＭＩ１６４０培地｛１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭグルタミン、５０ＩＵ／ｍｌペニシリン、５０μｇ/ｍｌストレプトマイシン含有｝を用いて、２〜９×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌを維持しながら浮遊細胞用フラスコにて３７℃の５％ＣＯ２条件下で培養した。
【００５８】
（実施例２）ＴＨＰ−１の増殖抑制試験
前記方法で培養したＴＨＰ−１を血清不含のＲＰＭＩ１６４０培地で４８時間培養した。次に、ＴＨＰ−１を９６穴のマイクロプレートに播種し、種々の濃度（１０、１００、１，０００ｎＭ）のリファラジルを含むＲＰＭＩ１６４０培地（１％ＦＢＳ）で７２時間培養した。その後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（株式会社同仁化学研究所）を用いて生細胞数を比較した。
【００５９】
図１は、薬剤の各濃度と吸光度の関係を示すグラフである。各値は平均値±標準誤差を示す。グラフ中の、＊＊は統計学的に有意であることを示す。統計処理は、例示としてダネット検定を行った。
【００６０】
図１に示されるように、リファラジルは実施した全ての濃度において統計学的に有意にＴＨＰ−１の増殖を抑制した。
【００６１】
（実施例３）ＴＨＰ−１のサイトカイン産生抑制試験
実施例１に記載の方法で培養したＴＨＰ−１を９６穴のマイクロプレートに播種し、５ｎｇ／ｍｌのＰｈｏｒｂｏｌ １２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３-ａｃｅｔａｔｅを含むＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＢＳ）で４８時間培養し、マクロファージ様に分化させた。次に、上清を除去し、リファラジルを含むＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＢＳ）で４時間培養した後、終濃度が２５ｎｇ／ｍｌとなるようにリポポリサッカライドを添加し２０時間培養した後、培養上清を回収した。回収した上清は−２０℃にて濃度測定まで凍結保存した。培養上清中のＴＮＦ−αの測定は、市販のＥＬＩＳＡキット（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いた。
【００６２】
図２および後述する図３は、薬剤の各濃度と培養上清中のＴＮＦ−α濃度との関係を示すグラフである。各値は平均値±標準誤差を示す。グラフ中の、＊＊は統計学的に有意であることを示す。統計処理は、例示としてダネット検定を行った。
【００６３】
図２に示されるように、リファラジルは１００ｎＭ及び１，０００ｎＭにおいて統計学的に優位にＴＮＦ−αの産生を抑制した。
【００６４】
（比較例１）
比較例１では、被験物質をリファラジルに替えてリファンピシン（Ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ）とした他は前記実施例３と同様の方法でサイトカイン産生抑制試験を実施した。
【００６５】
図３に示されるように、リファンピシンは１００ｎＭ及び１，０００ｎＭにおいて統計学的に優位にＴＮＦ−αの産生を抑制しなかった。
【００６６】
以上より、リファラジルはＴＨＰ−１の増殖、及びＴＮＦ−α産生を抑制することが示された。したがって、リファラジルは抗炎症剤または免疫調節剤の有効成分となり得ることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】図１は、リファラジルの各濃度とＴＨＰ−１の増殖抑制作用との関係を示すグラフである。
【図２】図２は、リファラジルの各濃度と培養上清中のＴＮＦ−α濃度との関係を示すグラフである。
【図３】図３は、リファンピシンの各濃度と培養上清中のＴＮＦ−α濃度との関係を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リファイマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤および免疫調節剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、傷害または感染に対する身体の正常な応答である。しかし、炎症性疾患では、免疫系細胞の活性異常が生じることにより、免疫系細胞の異常増殖やそれらから分泌される炎症性サイトカインの過剰産生が生じ、病的状態を引き起こしている。炎症性サイトカインとは、リンパ球やマクロファージなどから産生され、細菌やウイルス感染、腫瘍、組織損傷に伴う炎症反応に関与する物質である。例えばインターロイキン（ＩＬ）−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）、単球走化活性因子（ＭＣＰ−１）、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ等がある。
【０００３】
炎症性サイトカインの過剰産生により引き起こされる炎症性疾患には、全身性炎症反応症候群、慢性関節リウマチなどの膠原病、アレルギー疾患、動脈硬化、経皮的血管形成術後の再狭窄、インスリン抵抗性、糖尿病などの代謝性疾患や、多発性硬化症、移植片対宿主症、ウイルス肝炎、ＨＩＶ感染などの感染症等がある。
【０００４】
従って、炎症性サイトカインの過剰な産生を抑制することは、これら病態の予防、治療、改善、再発防止に非常に有益となり得る。
【０００５】
例えば、シクロスポリンやＦＫ５０６（タクロリムス）は炎症性サイトカインの産生を抑制することが知られており（非特許文献１、２参照）、皮膚疾患あるいは関節リウマチなどに対して有効とされている。
【０００６】
【非特許文献１】Ｋｏｂａｙａｓｈｉ Ｔ．， ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｖｅｔ Ｍｅｄ Ｓｃｉ． ２００７ ６９（９） ８８７−８９２
【非特許文献２】Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｊ．， ｅｔ ａｌ． Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １９９２ ７５（１） １３６−１４２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本願発明の課題は、炎症性サイトカインの過剰な産生を抑制することにより、上記病態の予防、治療、改善、再発防止が可能な手法を見出すことにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、抗菌作用を有する化合物として知られているリファマイシン誘導体により、免疫系細胞の活性を調節することが可能であって、その結果炎症性サイトカインの過剰な産生を抑制することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、リファマイシン誘導体を有効成分とし、免疫系細胞の活性を調節することを特徴とする抗炎症剤または免疫調節剤に関する。
【００１０】
前記リファマイシン誘導体は、下記式（Ｉ）：
【００１１】
【化１０】
で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好ましい。このうち、リファマイシン誘導体は、リファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはそれらの生理学的に許容される塩であるのが好ましい。なお、リファラジルの化学式は、後述の実施形態の項目で説明する。
【００１２】
また、前記免疫系細胞が好中球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージからなる群より選択される抗炎症剤または免疫調節剤であるのが好ましい。
【００１３】
免疫系細胞の活性を調節は、前記免疫系細胞の増殖を抑制することにより行いうる。
【００１４】
また、免疫系細胞の活性を調節は、前記免疫系細胞のサイトカインの産生を調節することにより行いうる。このうち、前記サイトカインが、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５，ＩＬ−１６、ＩＬ−１７ 、ＩＬ−１８ 、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、およびＲＡＮＴＥＳから選ばれるのが好ましい。
【００１５】
更には、炎症性サイトカインの産生を抑制する抗炎症剤または免疫調節剤であるのが好ましい。このうち、前記炎症性サイトカインがＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−γから選ばれるものである抗炎症剤または免疫抑制剤であるのが好ましい。
【００１６】
また、本発明の抗炎症剤または免疫調節剤は、感染症、炎症性疾患の予防または治療のために使用するものであるのが好ましい。
【００１７】
また、前記炎症性疾患が、血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、癌、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症であることを特徴とする抗炎症剤または免疫調節剤であるのが好ましい。
【００１８】
また、前記血管性疾患が、動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞であることを特徴とする抗炎症剤または免疫調節剤であるのが好ましい。
【００１９】
また、本発明にかかる抗炎症剤または免疫調節剤は、経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与からなる群より選択される非経口投与により血中への徐放が実施されるのが好ましい。このうち、インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、バルーンカテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であるのが好ましい。
【００２０】
本発明の別の態様として、前記抗炎症剤または免疫調節剤を含むインプラントがある。
【００２１】
また、本発明の別の態様として、抗炎症剤または免疫調節剤製造のための、前記リファマイシン誘導体の使用がある。
【００２２】
また、本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体を使用する炎症の抑制方法がある。
【００２３】
また、本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体を使用する免疫の調節方法がある。
【００２４】
また、本発明の別の態様として、前記リファマイシン誘導体を使用する炎症性疾患の予防または治療方法がある。
【００２５】
また、本発明のその他の態様およびこれらの効果は、以下に説明する実施形態および図面によって明らかにされる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明にかかるリファマイシン誘導体含む抗炎症剤または免疫調節剤は、免疫系細胞の活性を調節することが可能である。特に、リファマイシン誘導体が免疫系細胞の増殖や、炎症性サイトカインの産生を抑制する抗炎症剤または免疫調節剤は、炎症性疾患の予防または治療に特に有効に利用することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
以下、本発明の実施形態としてのリファマイシン誘導体を利用した抗炎症剤または免疫調節剤、およびそれらを利用したインプラントについて詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、本願発明において、「リファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤」とは、リファマイシン誘導体を有効成分とする炎症性疾患治療用組成物または製剤（医薬品）を含む概念である。同様に、「リファマイシン誘導体を有効成分とする免疫調節剤」とは、リファマイシン誘導体を有効成分とする免疫調節用組成物または製剤（医薬品）を含む概念である。
【００２８】
１．リファマイシン誘導体
本願発明で用いられるリファマイシン誘導体としては、以下の式（Ｉ）：
【００２９】
【化１１】
（式（Ｉ）中、Ｘ１は酸素原子または硫黄原子を示し、Ｒ１はアセチル基または水素原子を示し、Ｒ２はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ３、Ｒ４は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、下記式（II）で表される基、または、下記式（IV）で表される基を示す）で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であるのが好ましい。
【００３０】
【化１２】
【００３１】
【化１３】
上記式（II）中、Ｒ５、Ｒ６は同一または相異なり、炭素数１から３のアルキル基、または式（III）で表される基を示す。
【００３２】
【化１４】
（式（III）中、ｊは１から３の整数を示す）
上記式（IV）中、Ｒ７、Ｒ８は同一または相異なり、水素原子または炭素数１から３のアルキル基を示し、Ｘ２は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式（V）で表される基、または、下記式（VI）で表される基を示す。
【００３３】
【化１５】
【００３４】
【化１６】
上記式（V）中、Ｒ９、Ｒ１０は同一または相異なり、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、またはＲ９とＲ１０が結合して下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ２）ｋ−
（式中、ｋは１から４の整数を示す）
上記式（VI）中、ｍは０または１を示し、Ｒ１１は水素原子、炭素数１から７のアルキル基、または下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ２）ｎＸ３
（式中、ｎは１から４の整数を示し、Ｘ３は炭素数１から３のアルコキシ基、ビニル基、エチニル基、または下記式（VII）で表される基を示す。）
【００３５】
【化１７】
【００３６】
上記式（Ｉ）において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０の炭素数１から３のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基およびシクロプロピル基が挙げることができ、Ｒ１１の炭素数１から６のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、ヘキシル基、４−メチルペンチル基、シクロヘキシル基、３−メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基などの鎖状または環状アルキル基を挙げることができる。
【００３７】
Ｘ３の炭素数１から３のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基およびシクロプロポキシ基を挙げることができる。
【００３８】
好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ１が酸素原子であり、Ｒ１がアセチル基または水素原子を示し、Ｒ２はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ３、Ｒ４は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、または式（VIII）：
【００３９】
【化１８】
（式中、Ｒ１２は水素原子、または炭素数１から７のアルキル基を示す）で表されるリファマイシン誘導体またはその生理学的に許容される塩である。
【００４０】
Ｒ１２の炭素数１から７のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロブチル基、シクロプロピルメチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ｓｅｃ−ペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１，２−ジメチルプロピル基、１−エチルプロピル基、シクロペンチル基、シクロブチルメチル基、ヘキシル基、４−メチルペンチル基、シクロヘキシキル基、３−メチルシクロペンチル基、ヘプチル基、イソヘプチル基などの鎖状または環状のアルキル基を挙げることができる。
【００４１】
好ましくは、リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ１が酸素原子であり、Ｒ１がアセチル基であり、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ３が水酸基であり、Ｒ４が式（IX）：
【００４２】
【化１９】
で表されるリファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはその生理学的に許容される塩である。ただし、本発明で用いられるリファマイシン誘導体は、これらの化合物に限定されるものではない。
【００４３】
２．リファマイシン誘導体の作用
従来、リファマイシン誘導体は肺炎クラミジアやヘリコバクター・ピロリに対して極めて強い抗菌活性を有する抗生物質であることが知られており、使用の際は、極めて低濃度で用いられていた。本願発明は、リファマイシン誘導体が、従来と比較して高濃度で用いられた場合、免疫系細胞の活性を調節する作用を示すという、抗菌活性とは関連のない意外な効果を初めて見出したことによりなされたものである。
【００４４】
免疫系細胞の活性の調節は、例えば、免疫系細胞の増殖を抑制することにより行われる。このうち、免疫系細胞としては、好中球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージなどが挙げられる。
【００４５】
また、免疫系細胞の活性の調節は、免疫系細胞のサイトカインの産生を調節することにより行われる。ここで、サイトカインの産生の調節とは、炎症性サイトカインの産生を抑制すること、および、抗炎症性サイトカインの産生を促進することを意味する。
【００４６】
サイトカインとしては、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５，ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳなどが挙げられる。また、炎症性サイトカインとしては、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−γなどが挙げられる。
【００４７】
近年、種々の疾患において炎症性変化の重要性が指摘されている。例えば、動脈硬化または経皮的血管形成術（ＰＴＣＡ）後の血管再狭窄の発生早期において、病変部位における免疫系細胞（好中球、Ｔリンパ球、単球／マクロファージ）の浸潤、炎症性サイトカインの発現増加が認められている。さらに、前記疾患は肺炎クラミジアやヘリコバクター・ピロリの感染との関連性が指摘されている（Ｊｏｈｎ Ｄａｎｅｓｈ， ｅｔ ａｌ． Ｌａｎｃｅｔ １９９７ ３５０ ４３０−４３６）。従って、抗菌作用、抗炎症作用を有するリファマイシン誘導体は、動脈硬化またはＰＴＣＡ後の再狭窄の予防または治療や、炎症性疾患の予防または治療に有効に利用することができると考えられる。特に、微生物感染を伴う疾患には好適である。
【００４８】
３．炎症性疾患の例
本発明においては、抗炎症剤または免疫調節剤は、感染症、炎症性疾患の予防または治療のために使用することができる。
【００４９】
前記炎症性疾患としては、血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、癌、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症が挙げられる。
【００５０】
また、前記血管性疾患としては、動脈硬化症(アテローム性動脈硬化症、中膜石灰化硬化症)、細小動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、または透析シャントを含む自然発生的血管性疾患、経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞を含む非自然発生的血管性疾患が挙げられる。さらに、血管形成術としては、例えば、バルーン拡張術、ステント留置術、アテレクトミー、レーザー血管形成術が挙げられる。
【００５１】
４．抗炎症剤または免疫調節剤
（４−１．他の薬剤を含む実施形態）
例えば、炎症性疾患の予防または治療を目的とした製剤を製造する際には、他の薬剤（抗凝固薬、抗血小板物質、抗痙薬、抗菌薬、抗腫瘍薬、抗微生物剤、抗炎症剤、抗物質代謝剤、免疫抑制剤等）と組み合わせてもよい。
【００５２】
本実施態様においても、リファマイシン誘導体は、免疫系細胞の活性を調節する作用を示し、免疫系細胞の増殖を抑制、あるいは炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【００５３】
（４−２．製剤の実施形態）
本発明の抗炎症剤または免疫調節剤は、所望により医薬上許容される担体または賦形剤と合して、経口投与または非経口投与用の製剤とすることができ、所望の成分を混合、溶解するような公知の製剤技術に従って、自体公知の剤型に調製できる。上記剤型のうち、経口的に投与される剤型としては、例えば、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤および液剤等が挙げられる。剤型が粉末、顆粒、錠剤等として処方される場合、固形組成物を処方するのに好適な任意の製薬担体、例えば、賦形剤（澱粉、ブドウ糖、果糖、白糖等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム等）、崩壊剤（澱粉、結晶セルロース等）、結合剤（澱粉、アラビアゴム等）等を用いることができ、コーティング剤（ゼラチン、白糖等）でコーティングされていてもよい。また、剤型がシロップや液剤として処方される場合、例えば、安定化剤（エデト酸ナトリウム等）、懸濁化剤（アラビアゴム、カルメロース等）、矯味剤（単シロップ、ブドウ糖等）、芳香剤等を適宜に選択して使用することができる。非経口的に処方される剤型としては、注射剤、坐剤等が挙げられる。注射剤として処方される場合、例えば、溶剤（注射用蒸留水等）、安定化剤（エデト酸ナトリウム等）、等張化剤（塩化ナトリウム、グリセリン、マンニトール等）、ｐＨ調整剤（塩酸、クエン酸、水酸化ナトリウム等）を用いることができ、坐剤として処方される場合、例えば、坐剤基剤（カカオ脂、マクロゴール等）等を適宜に選択して使用することができる。
【００５４】
局所投与の剤型としては、例えば、点眼剤、眼軟膏、点鼻剤等が挙げられる。点眼剤、眼軟膏または点鼻剤として処方される場合、例えば、溶剤（生理食塩水、精製水等）、安定化剤（エデト酸ナトリウム、クエン酸等）、乳化剤（ポリビニルピロリドン等）および乳化基剤（ヒマシ油等）、界面活性剤（ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等）、保存剤（塩化ベンザルコニウム、パラベン類、クロロブタノール等）、緩衝剤（ホウ酸、ホウ砂、酢酸ナトリウム、クエン酸緩衝剤、リン酸緩衝剤等）、等張化剤（塩化ナトリウム、グリセリン、マンニトール等）、ｐＨ調整剤（塩酸、水酸化ナトリウム等）、軟膏基剤（ワセリン、ラノリン等）、粘性剤（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等）等公知の化合物を適宜に選択して使用することができる。
【００５５】
（４−３．血中に徐放させる実施形態）
リファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤または免疫調節剤を予防及び治療の目的で血中に徐放させる場合、投与経路は特に限定されず、経口投与若しくは非経口投与（例えば、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、鼻腔などへの粘膜投与または吸入投与、インプラントを利用した投与）のいずれでもよい。インプラントとしては、例えば、ステント、ステントグラフト、カテーテル（バルーンカテーテルも含む）が挙げられる。
【実施例】
【００５６】
以下の実施例では、ヒト単球系株化細胞であるＴＨＰ−１を用いて、リファマイシン誘導体が炎症性サイトカインの産生を抑制する、本願発明の一実施形態について説明するが、本発明の範囲は下記の実施例により限定されるものではない。
【００５７】
（実施例１）ＴＨＰ−１の培養
ＴＨＰ−１（ＤＳ−バイオファーマバイオメディカル株式会社）を、ＲＰＭＩ１６４０培地｛１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２ｍＭグルタミン、５０ＩＵ／ｍｌペニシリン、５０μｇ/ｍｌストレプトマイシン含有｝を用いて、２〜９×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍｌを維持しながら浮遊細胞用フラスコにて３７℃の５％ＣＯ２条件下で培養した。
【００５８】
（実施例２）ＴＨＰ−１の増殖抑制試験
前記方法で培養したＴＨＰ−１を血清不含のＲＰＭＩ１６４０培地で４８時間培養した。次に、ＴＨＰ−１を９６穴のマイクロプレートに播種し、種々の濃度（１０、１００、１，０００ｎＭ）のリファラジルを含むＲＰＭＩ１６４０培地（１％ＦＢＳ）で７２時間培養した。その後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ−８（株式会社同仁化学研究所）を用いて生細胞数を比較した。
【００５９】
図１は、薬剤の各濃度と吸光度の関係を示すグラフである。各値は平均値±標準誤差を示す。グラフ中の、＊＊は統計学的に有意であることを示す。統計処理は、例示としてダネット検定を行った。
【００６０】
図１に示されるように、リファラジルは実施した全ての濃度において統計学的に有意にＴＨＰ−１の増殖を抑制した。
【００６１】
（実施例３）ＴＨＰ−１のサイトカイン産生抑制試験
実施例１に記載の方法で培養したＴＨＰ−１を９６穴のマイクロプレートに播種し、５ｎｇ／ｍｌのＰｈｏｒｂｏｌ １２−Ｍｙｒｉｓｔａｔｅ １３-ａｃｅｔａｔｅを含むＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＢＳ）で４８時間培養し、マクロファージ様に分化させた。次に、上清を除去し、リファラジルを含むＲＰＭＩ１６４０培地（１０％ＦＢＳ）で４時間培養した後、終濃度が２５ｎｇ／ｍｌとなるようにリポポリサッカライドを添加し２０時間培養した後、培養上清を回収した。回収した上清は−２０℃にて濃度測定まで凍結保存した。培養上清中のＴＮＦ−αの測定は、市販のＥＬＩＳＡキット（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いた。
【００６２】
図２および後述する図３は、薬剤の各濃度と培養上清中のＴＮＦ−α濃度との関係を示すグラフである。各値は平均値±標準誤差を示す。グラフ中の、＊＊は統計学的に有意であることを示す。統計処理は、例示としてダネット検定を行った。
【００６３】
図２に示されるように、リファラジルは１００ｎＭ及び１，０００ｎＭにおいて統計学的に優位にＴＮＦ−αの産生を抑制した。
【００６４】
（比較例１）
比較例１では、被験物質をリファラジルに替えてリファンピシン（Ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ）とした他は前記実施例３と同様の方法でサイトカイン産生抑制試験を実施した。
【００６５】
図３に示されるように、リファンピシンは１００ｎＭ及び１，０００ｎＭにおいて統計学的に優位にＴＮＦ−αの産生を抑制しなかった。
【００６６】
以上より、リファラジルはＴＨＰ−１の増殖、及びＴＮＦ−α産生を抑制することが示された。したがって、リファラジルは抗炎症剤または免疫調節剤の有効成分となり得ることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００６７】
【図１】図１は、リファラジルの各濃度とＴＨＰ−１の増殖抑制作用との関係を示すグラフである。
【図２】図２は、リファラジルの各濃度と培養上清中のＴＮＦ−α濃度との関係を示すグラフである。
【図３】図３は、リファンピシンの各濃度と培養上清中のＴＮＦ−α濃度との関係を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リファマイシン誘導体を有効成分とし、免疫系細胞の活性を調節することを特徴とする抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項２】
前記リファマイシン誘導体が、下記式（Ｉ）
【化１】
（式（Ｉ）中、Ｘ１は酸素原子または硫黄原子を示し、Ｒ１はアセチル基または水素原子を示し、Ｒ２はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ３、Ｒ４は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、下記（II）式で表される基、または、下記式（IV）で表される基を示す）で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項１に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【化２】
【化３】
上記式（II）中、Ｒ５、Ｒ６は同一または相異なり、炭素数１から３のアルキル基、または式（III）で表される基を示す。
【化４】
（式（III）中、ｊは１から３の整数を示す）
上記式（IV）中、Ｒ７、Ｒ８は同一または相異なり、水素原子または炭素数１から３のアルキル基を示し、Ｘ２は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式（V）で表される基、または、下記式（VI）で表される基を示す。
【化５】
【化６】
上記式（V）中、Ｒ９、Ｒ１０は同一または相異なり、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、またはＲ９とＲ１０が結合して下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ２）ｋ−
（式中、ｋは１から４の整数を示す）
上記式（VI）中、ｍは０または１を示し、Ｒ１１は水素原子、炭素数１から７のアルキル基、または下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ２）ｎＸ３
（式中、ｎは１から４の整数を示し、Ｘ３は炭素数１から３のアルコキシ基、ビニル基、エチニル基、または下記式（VII）で表される基を示す。）
【化７】
【請求項３】
前記リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ１が酸素原子であり、Ｒ１がアセチル基または水素原子を示し、Ｒ２はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ３、Ｒ４は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、または式（VIII）：
【化８】
（式中、Ｒ１２は水素原子、または炭素数１から７のアルキル基を示す）で表されるリファマイシン誘導体またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項２に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項４】
前記リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ１が酸素原子であり、Ｒ１がアセチル基であり、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ３が水酸基であり、Ｒ４が式（IX）：
【化９】
で表されるリファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項３に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項５】
前記免疫系細胞が好中球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージからなる群より選択される請求項１から４のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項６】
前記免疫系細胞の増殖を抑制することを特徴とする請求項１から５のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項７】
前記免疫系細胞のサイトカインの産生を調節することを特徴とする請求項１から５のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項８】
前記サイトカインが、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５，ＩＬ−１６、ＩＬ−１７ 、ＩＬ−１８ 、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、およびＲＡＮＴＥＳから選ばれることを特徴とする請求項７に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項９】
前記免疫系細胞の炎症性サイトカインの産生を抑制することを特徴とする請求項７または８に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１０】
前記炎症性サイトカインがＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−γから選ばれることを特徴とする請求項９に記載の抗炎症剤または免疫抑制剤。
【請求項１１】
感染症、炎症性疾患の治療に有用なことを特徴とする請求項１から１０のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１２】
前記炎症性疾患が血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、癌、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症から選択される請求項１１に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１３】
前記血管性疾患が動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞である請求項１２に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１４】
経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与からなる群より選択される非経口投与により血中への徐放が実施される請求項１から１３のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１５】
前記インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、バルーンカテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であることを特徴とする請求項１４に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１６】
前記リファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤または免疫調節剤を含むインプラント。
【請求項１７】
抗炎症剤または免疫調節剤製造のための、請求項１から４のいずれかに記載の前記リファマイシン誘導体の使用。
【請求項１８】
前記リファマイシン誘導体を使用する炎症の抑制方法。
【請求項１９】
前記リファマイシン誘導体を使用する免疫の調節方法。
【請求項２０】
前記リファマイシン誘導体を使用する炎症性疾患の予防または治療方法
【請求項１】
リファマイシン誘導体を有効成分とし、免疫系細胞の活性を調節することを特徴とする抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項２】
前記リファマイシン誘導体が、下記式（Ｉ）
【化１】
（式（Ｉ）中、Ｘ１は酸素原子または硫黄原子を示し、Ｒ１はアセチル基または水素原子を示し、Ｒ２はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ３、Ｒ４は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、下記（II）式で表される基、または、下記式（IV）で表される基を示す）で表される化合物またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項１に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【化２】
【化３】
上記式（II）中、Ｒ５、Ｒ６は同一または相異なり、炭素数１から３のアルキル基、または式（III）で表される基を示す。
【化４】
（式（III）中、ｊは１から３の整数を示す）
上記式（IV）中、Ｒ７、Ｒ８は同一または相異なり、水素原子または炭素数１から３のアルキル基を示し、Ｘ２は酸素原子、硫黄原子、カルボニル基、下記式（V）で表される基、または、下記式（VI）で表される基を示す。
【化５】
【化６】
上記式（V）中、Ｒ９、Ｒ１０は同一または相異なり、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、またはＲ９とＲ１０が結合して下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ２）ｋ−
（式中、ｋは１から４の整数を示す）
上記式（VI）中、ｍは０または１を示し、Ｒ１１は水素原子、炭素数１から７のアルキル基、または下記式で表される基を示す。
−（ＣＨ２）ｎＸ３
（式中、ｎは１から４の整数を示し、Ｘ３は炭素数１から３のアルコキシ基、ビニル基、エチニル基、または下記式（VII）で表される基を示す。）
【化７】
【請求項３】
前記リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ１が酸素原子であり、Ｒ１がアセチル基または水素原子を示し、Ｒ２はメチル基またはヒドロキシメチル基を示し、Ｒ３、Ｒ４は同一または相異なり、水酸基、水素原子、炭素数１から３のアルキル基、または式（VIII）：
【化８】
（式中、Ｒ１２は水素原子、または炭素数１から７のアルキル基を示す）で表されるリファマイシン誘導体またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項２に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項４】
前記リファマイシン誘導体は、前記式（Ｉ）のＸ１が酸素原子であり、Ｒ１がアセチル基であり、Ｒ２がメチル基であり、Ｒ３が水酸基であり、Ｒ４が式（IX）：
【化９】
で表されるリファラジル｛Ｒｉｆａｌａｚｉｌ、３'-Ｈｙｄｒｏｘｙ−５’−（４−ｉｓｏｂｕｔｙｌ−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ）ｂｅｎｚｏｘａｚｉｎｏｒｉｆａｍｙｃｉｎ、ＫＲＭ１６４８｝またはその生理学的に許容される塩であることを特徴とする請求項３に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項５】
前記免疫系細胞が好中球、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、マクロファージからなる群より選択される請求項１から４のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項６】
前記免疫系細胞の増殖を抑制することを特徴とする請求項１から５のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項７】
前記免疫系細胞のサイトカインの産生を調節することを特徴とする請求項１から５のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項８】
前記サイトカインが、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５，ＩＬ−１６、ＩＬ−１７ 、ＩＬ−１８ 、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＴＧＦ−β、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＭＣＰ−１、およびＲＡＮＴＥＳから選ばれることを特徴とする請求項７に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項９】
前記免疫系細胞の炎症性サイトカインの産生を抑制することを特徴とする請求項７または８に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１０】
前記炎症性サイトカインがＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦ−α、ＭＣＰ−１、ＩＦＮ−γから選ばれることを特徴とする請求項９に記載の抗炎症剤または免疫抑制剤。
【請求項１１】
感染症、炎症性疾患の治療に有用なことを特徴とする請求項１から１０のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１２】
前記炎症性疾患が血管性疾患、炎症性腸疾患、炎症性神経系疾患、炎症性肺疾患、炎症性眼疾患、慢性炎症性歯肉疾患、慢性炎症性関節疾患、関節リウマチ、皮膚疾患、骨疾患、心疾患、腎不全、慢性脱髄疾患、内皮細胞疾患、アレルギー症候群、敗血症/敗血症ショック、癌、肝炎、髄膜炎、多発性硬化症、皮膚炎症、移植拒絶、自己免疫疾患、肥満症、風邪、鎌状赤血球貧血、糖尿病、脳卒中、及び悪性新生物化学療法または放射線療法後の炎症から選択される請求項１１に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１３】
前記血管性疾患が動脈硬化症、動脈瘤、仮性瘤、動脈解離症、炎症性動脈疾患、非炎症性動脈疾患、透析シャント、および経皮的血管形成術後の血管再狭窄または再閉塞である請求項１２に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１４】
経口投与、あるいは、筋肉内投与、動脈内投与、静脈内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、粘膜投与、吸入投与、およびインプラントを利用した投与からなる群より選択される非経口投与により血中への徐放が実施される請求項１から１３のいずれかに記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１５】
前記インプラントが、ステント、ステントグラフト、人工血管、カテーテル、バルーンカテーテル、人工心弁、ペースメーカーのリード線、骨ネジ、人工骨、人工気管、または縫合糸であることを特徴とする請求項１４に記載の抗炎症剤または免疫調節剤。
【請求項１６】
前記リファマイシン誘導体を有効成分とする抗炎症剤または免疫調節剤を含むインプラント。
【請求項１７】
抗炎症剤または免疫調節剤製造のための、請求項１から４のいずれかに記載の前記リファマイシン誘導体の使用。
【請求項１８】
前記リファマイシン誘導体を使用する炎症の抑制方法。
【請求項１９】
前記リファマイシン誘導体を使用する免疫の調節方法。
【請求項２０】
前記リファマイシン誘導体を使用する炎症性疾患の予防または治療方法
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２００９−１２０５７２（Ｐ２００９−１２０５７２Ａ）
【公開日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２９８４３３（Ｐ２００７−２９８４３３）
【出願日】平成１９年１１月１６日（２００７．１１．１６）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月１６日（２００７．１１．１６）
【出願人】（００００００９４１）株式会社カネカ (3,932)
【Ｆターム（参考）】
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