化粧料
【課題】アブラナ科ブラシカ属の植物を素材として得られ、従来公知の該植物の抽出物よりもすぐれた皮膚生理活性を具えると共に、皮膚刺激性や保存安定性に於いて上記の抽出物よりも改善された特性を示す新規な成分が配合されてなり、すぐれた皮膚健全化効果と高い生体安全性を有し、しかも品質保持性の良好な化粧料を提供すること。
【解決手段】アブラナ科ブラシカ属の植物を乳酸菌等で醗酵させて得られる発酵物を配合してなる化粧料の使用。
【解決手段】アブラナ科ブラシカ属の植物を乳酸菌等で醗酵させて得られる発酵物を配合してなる化粧料の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アブラナ科ブラシカ属に属する植物の発酵物を配合してなる化粧料に関し、詳しくは上記の発酵物を配合してなり、美白効果とさらに皮膚老化防止効果に於いて高い有効性を示し、総合的かつすぐれた皮膚健全化効果を発揮すると共に、生体安全性や品質安定性にもすぐれた化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
アブラナ科ブラシカ属の植物に含まれる成分は、皮膚を健全で若々しい状態に保持し或いは改善するために有効な様々な皮膚生理活性を具えており、化粧料用の配合成分として極めて有用性の高いものである。
このアブラナ科ブラシカ属植物（以下、ブラシカ属植物ということがある）の成分の示す生理活性とその皮膚に対する効果に関しては、該植物の抽出物についてよく研究、検討がなされており、例えば特開平８−３２５１３０号公報には、メラニン生成抑制作用及び抗炎症作用に基づく美白効果や美肌化効果が、特開２００３−８１８４８号公報には、スーパーオキサイドや過酸化水素などの活性酸素の消去作用に基づく皮膚老化防止効果が、又特開２００３−２３８４２９号公報には、線維芽細胞賦活作用に基づく皮膚老化防止効果及び肌荒れの予防・改善効果がそれぞれ開示されており、さらに特開２００３−３４２１５０号公報には、当該抽出物が線維芽細胞の産生する細胞外マトリックス成分のエラスチンに類似した作用を有し、同じく皮膚老化防止と肌荒れの予防・改善に有効であることが示されている。
【０００３】
【特許文献１】特開平８−３２５１３０号
【特許文献２】特開２００３−８１８４８号
【特許文献３】特開２００３−２３３８４２９号
【特許文献４】特開２００３−３４２１５０号
【０００４】
このようにブラシカ属植物、特にその抽出物は、多様でかつすぐれた皮膚生理活性を有し、化粧料配合原料として利用価値の高いものであるが、他方ブラシカ属植物の抽出物には、一般に保存中に着色やオリが発生し易く、保存安定性が必ずしも十分ではないという難点があり、又該植物のうちでも、白芥（Brassica alba)、黄芥(Brassica juncea)、黒芥(Brassica nigra)などの場合、就中それらの種子の場合には、その抽出物が皮膚に対して多少の刺激性を示すという問題もあって、それらの難点を改善し或いは解消することが、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物を化粧料配合成分として使用するに当たっての解決課題となっている。
【０００５】
これに対して本発明者らは先に、ブラシカ属植物の抽出物を蛋白分解酵素で処理した場合、該抽出物の有するすぐれた皮膚生理活性はこれを保持したまま、その保存安定性と皮膚刺激性を大きく改善することが可能であることを見い出し、かかる知見に基づいてブラシカ属植物抽出物の酵素処理分解物とこれを含む化粧料について特許出願を行った（特願2004-141666号）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ブラシカ属植物の化粧料への利用に係る上述の如き技術的背景の下になされたものであり、その目的とするところは、ブラシカ属植物を素材として用いて、保存安定性と生体安全性の点では上記の酵素処理分解物と同様のすぐれた特性を有すると共に、皮膚生理活性に於いては酵素処理分解物や従来公知の抽出物よりもさらに高い有効性を示す化粧料配合成分を調製することにより、品質安定性と生体安全性にすぐれ、しかも皮膚健全化効果の一段と改善された化粧料の提供を可能ならしめることにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
即ち本発明は、アブラナ科ブラシカ属（Brassica）の植物を発酵させた発酵物を配合してなる化粧料に関するものである。
なおここで、化粧料なる文言は所謂化粧料のほかに医薬部外品をも含む広義で用いる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明で化粧料配合成分として用いるアブラナ科ブラシカ属植物の発酵物は、該植物の抽出物や酵素処理分解物に比べてより高められた線維芽細胞賦活作用と同等或いはそれ以上のメラニン生成抑制作用を有し、皮膚生理活性に於いてそれら抽出物や酵素処理分解物よりもすぐれるばかりでなく、保存安定性や皮膚刺激性の面では、酵素処理分解物と同様に大きく改善されたものとなっている（後述の試験例参照）。
従って、かかる発酵物を配合してなる本発明の化粧料は、ブラシカ植物の抽出物や酵素処理分解物を配合した化粧料よりも一層すぐれた、そして総合的な皮膚健全化効果を発揮するばかりでなく、発酵物の有する高い保存安定性の故に、長期保存中にも着色やオリを生ずることがなく品質保持性にすぐれ、しかも該発酵物が実質的に皮膚刺激性を有さないことから、皮膚に適用した場合、紅斑等の発生の恐れがなく安全性にも極めてすぐれている。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明で用いるブラシカ属植物としては、例えば白芥（Brassica alba）、黄芥（Brassica juncea）、黒芥（Brassica nigra）、アブラナ（Brassica ropa）などを挙げることができる。それらブラシカ属植物のうちでも、得られる発酵物の線維芽細胞賦活作用、メラニン生成抑制作用等の皮膚生理活性の観点から、白芥、黄芥或いは黒芥などの芥子類、就中それらの種子が好ましく、特に白芥の種子（白芥子）を用いた場合、すぐれた皮膚生理活性を有する発酵物が得られることから最も好ましい。
【００１０】
それらブラシカ属植物を素材として用いて本発明の発酵物を調製する方法としては、該植物の種子、葉、花、雄しべ、雌しべ、茎、根、全草など適宜の部分、好ましくは種子を、必要に応じて予め水洗、乾燥し、又好適には細切もしくは粉砕した上、発酵媒体中に懸濁させて発酵させる方法、或いは上記と同様にして得られるブラシカ属植物の細切物もしくは粉砕物を溶媒で抽出し、ここに得られる抽出物を発酵させる方法などが好ましく用いられるが、発酵方法はそれらに限定されるものではなく、要はブラシカ属植物の含有乃至構成成分を発酵せしめ得る方法であればいずれでもよい。
【００１１】
発酵に用いる菌としては、乳酸菌、麹菌、納豆菌、酵母等が挙げられ、それらの菌のいずれを用いた場合であっても、すぐれた線維芽細胞賦活作用とメラニン生成抑制作用を有し、しかも高い保存安定性と生体安全性を示す発酵物が得られるが、なかでも乳酸菌を用いた場合に特に好ましい結果が得られる。
【００１２】
ここで乳酸菌としては、例えばラクトバシルス プランタラム（Lactobacillus plantarum)、ラクトバシルス ブレビス（L. brevis)、ラクトバシルス カゼイ（L. casei)等のラクトバシルス（Lactobacillus）属の乳酸菌；カルノバクテリウム ディバージェンス（Carmobacterium divergens)、カルノバクテリウム ピシコーラ(Carmobacterium piscicola)等のカルノバクテリウム（Carmobacterium）属の乳酸菌；ロイコノストック メセンテロイズ（Leuconostoc mesenteroides)、ロイコノストック シトレウム（Leuconostoc citreum)等のロイコノストック（Leuconostoc）属の乳酸菌； ストレプトコッカス フェーカリス（Streptococcus faecalis)、ストレプトコッカス ビオジェネス（Streptococcus pyogenes)等のストレプトコッカス属の乳酸菌；エンテロコッカス カゼリフラバス（Enterococcus caseliflavus)、エンテロコッカス サルフレウス（Enterococcus sulfreus)等のエンテロコッカス（ Enterococcus）属の乳酸菌；ラクトコッカス プランタラム（Lactococcus plantarum) ラクトコッカス ラフィノラクティス（Lactococcus rafinolactis)等のラクトコッカス属の乳酸菌；ヴェイセラ コンフューザ（Weissella confusa)、ヴェイセラ カンドュレリ（Weissella kandleri)等のヴェイセラ属の乳酸菌；アトポビウム ミニュタム（Atopobium minutum)、アトポビウム パービュラス（Atopobiumparvulus)等のアトポビウム（Atopobium）属の乳酸菌；バゴコッカス フルビアリス（Vagococcus fluvialis）、バゴコッカス サーモニナラム（Vagococcus salmoninarum)等のバゴコッカス（Vagococcus）属の乳酸菌；ペディオコッカス ダムノサス（Pediococcus damnosus)、ペディオコッカス ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus)等のペディオコッカス（Pediococcus）属の乳酸菌等が挙げられる。それら乳酸菌のうちでも、得られる発酵物の皮膚生理活性と取り扱いのし易さの観点から、ラクトバシルス プランタラム（Lactobacillus plantarum)の使用が最も好ましい。
【００１３】
麹菌としては、例えばアスペルギルス オリゼー（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス フラバス（Aspergillus flavus）、アスペルギルス ポリオキソジェネス（Aspergillus polyoxogenes）、アスペルギルス ソーヤ（Aspergillus sojae）等の黄麹菌、アスペルギルス アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス カワウチ（Aspergillus kawauchii）、アスペルギルス ウサミ（Aspergillus usami）、
アスペルギルス ニガー（Aspergillus niger）等の黒麹菌、モナスカス アンカ（Monascus anka）、モナスカス ピロサス（Monascus pilosus）等の紅麹菌などが挙げられる。それらのうちでも、発酵液の着色や発酵臭が比較的少ないことから、アスペルギルス オリゼー（Aspergillus oryzae）が最も好ましい。
【００１４】
納豆菌としては、例えばバシルス ナットー(Bacillus natto)、バシルス サブチルス(Bacillus subtilis)、バシルス サーキュランス(Bacillus circulans)等のバシルス属の細菌などが挙げられる。なかでも、食品に広く使用されており、安全性が高い点でバシルス ナットー(Bacillus natto)が最も好ましい。
【００１５】
酵母としては、例えばサッカロミセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、サッカロミセス アワモリ(Saccharomyces awamori)、サッカロミセス チェバリエリ(Saccharomyces chevalieri)、サッカロミセス カールスバージェンシス(Saccharomyces carlsbergensis)、サッカロミセス バヨナス（Saccharomyces bayo
nus)等のサッカロミセス属の酵母、トルラスポラ デルブルエキ(Torulaspora delbruekii)、トルラスポラ ファーメンタチ(Torulaspora fermentati)、トルラスポラ ロゼー(Torulaspora rosei)等のトルラスポラ属の酵母、ジゴサッカロミセス ローキシ(Zygosaccharomyces rouxii)、ジゴサッカロミセス ソーヤ(Zygosacchar
omyces soya)、ジゴサッカロミセス サケ(Zygosaccharomyces sake)、ジゴサッカロミセス ミソ(Zygosaccharomyces miso)、ジゴサッカロミセス ラクティス(Zygosaccharomyces lactis)等のジゴサッカロミセス属の酵母、カンディダ ベルサチリス(Candida versatilis)、カンディダ エチェリシイ(Candida etchellsii)、カンディダ ケフィール（Candida kefyr）、カンディダ サケ（Candida sake）、カンディダ スコッティ（Candida scottii）等のカンディダ属の酵母などが挙げられる。
それらのうちでも、食品に最も広く利用され、発酵力が強いという点からサッカロミセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)が最も好ましい。
【００１６】
発酵方法として、ブラシカ属植物を発酵媒体中に懸濁させて発酵を行わしめる
方法を用いる場合、発酵媒体としては、水、水とエタノール、プロパノールなどの低級アルコール類との混合液、水とエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどのグリコール類との混合液、水とソルビトール、グルコースなどの糖類との混合液等を用いることができるが、発酵に用いる菌が最も作用し易い点とブラシカ属植物以外に菌の栄養源となる成分を含まない点で、水単独が最も好ましい。
混合液を用いる場合は、水１００重量部に対して低級アルコール類、グリコール類、糖類などを一般に２０重量部以下、特に１０重量部以下混合するようにするのがよい。
ブラシカ属植物と上記の抽出媒体との混合比は、重量比で一般に１：１〜１：１０００の範囲であり、好ましくは１：２〜１：１００、より好ましくは１：５〜１：５０の範囲である。ブラシカ属植物の量比が大きすぎると発酵液の収量が低下し、又小さすぎると発酵液の濃度が希薄となっていずれも好ましくない。
【００１７】
一方、発酵法としてブラシカ属植物の抽出物を発酵させる方法を用いる場合、抽出方法としては浸漬法、向流抽出法などを用いることができる。又超臨界抽出法を用いてもよい。
抽出溶媒としては、前記の懸濁液の調製に用いた発酵媒体と同様のもの、即ち水或いは水と低級アルコール類、グリコール類或いは糖類等との混合液、特に水単独が好ましく用いられる。抽出溶媒として酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類或いはｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などを用いることもできるが、それらを抽出溶媒として用いた場合には、得られた抽出液から一旦溶媒を留去して固形分を分取した上、これを水或いは上記の混合液に再溶解もしくは再分散させて発酵を行わしめるようにする。
ブラシカ属植物と抽出溶媒の量比としては、前述の懸濁液の調製に於けるブラシカ属植物と発酵媒体との混合比と同様の範囲が一般に用いられる。
【００１８】
抽出に際して、抽出液のｐＨに特に限定はないが、一般には３．０〜９．０の範囲とすることが好ましく、かかる意味で、必要ならば前記の抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤や、クエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤等を添加し、目的とするｐＨとなるように調整してもよい。
【００１９】
抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨ、或いは被抽出物の細切度、粒度等によっても異なるが、例えば水を抽出溶媒とする浸漬法の場合であれば、抽出温度は一般に１〜９０℃、好ましくは２０〜６０℃の範囲であり、又抽出時間は、室温抽出の場合で一般に０．５〜７２時間の範囲、特に１〜２４時間の範囲である。
【００２０】
以上の如きブラシカ属植物の懸濁液或いは抽出物溶液の菌による発酵は、例えば以下のようにして行われる。
即ち、発酵に先立ってまず懸濁液や抽出物溶液に殺菌処理を施す。殺菌処理としては、それらの液を１２０〜１３０℃で１０〜２０分間加熱するオートクレーブ殺菌法や、８０〜９０℃に６０〜１２０分間保持することを１日１回２〜３日間繰り返す間断殺菌法といった加熱殺菌法が一般に用いられる。
懸濁液や抽出物溶液を殺菌する方法に代えて、素材のブラシカ属植物それ自体を予め殺菌用エタノール等で洗浄殺菌し、これを無菌水等の無菌媒体と混合することにより、無菌化された懸濁液或いは抽出物溶液を調製するようにしてもよい。
【００２１】
次に、無菌化した懸濁液或いは抽出物溶液に菌を接種する。菌の接種量は１０７〜１０８個／ｍＬが適量である。接種量が上記の範囲より多くなっても発酵の進行時間は殆ど変わらず、一方上記の範囲より少なくなると発酵完了迄に長時間を要することとなって好ましくない。
【００２２】
発酵温度は、５〜５０℃の範囲であれば発酵が進行し目的の発酵物を得ることができるが、より好ましくは各菌の生育至適温度である３０〜４０℃の範囲である。
発酵日数は、上記の至適温度で発酵を行う場合で一般に１〜１０日であり、より好ましくは２〜５日である。発酵日数が１日より短いと発酵が十分に行われず、目的とする高い皮膚生理活性を具えた発酵物を得ることが困難となる。一方、発酵日数が１０日を越えて長くなり過ぎても、それ以上発酵は進行せず発酵物の有効性に向上が認められないだけでなく、かえって着色や発酵臭が強まるなどの不都合が生じ好ましくない。
【００２３】
所定の発酵日数が経過したならば、次に発酵液を、例えば８０〜９０℃で６０〜１２０分間加熱する方法などを用いて殺菌し、発酵を停止せしめた後、ろ過或いは遠心分離などの固液分離手段を用いて不溶物を除去し、目的の発酵物を含む溶液を得る。
ここに得られる発酵物溶液は、一般にはｐＨを４〜８に調整した上、これをそのまま化粧料に配合するか、もしくは必要ならば減圧濃縮等により所定の濃度に調整した上化粧料に配合する。又場合によっては、スプレードライ法、凍結乾燥法など常法に従って粉末化してもよい。
【００２４】
なお、以上の発酵を行うに際して、ブラシカ属植物の懸濁液或いは抽出物溶液に、蛋白分解酵素による加水分解処理を施すようにしてもよく、これによって発酵後の固液分離操作が容易となるだけでなく、発酵液の保存安定性もさらに良好なものとなる。
この酵素加水分解処理は、発酵の前に行ってもよく、又発酵と並行してこれを行ってもよい。
【００２５】
酵素加水分解処理を行う場合、酵素としては、例えばアクチナーゼなどのアクチナーゼ類、ペプシンなどのペプシン類、トリプシン、キモトリプシンなどのトリプシン類、パパイン、キモパパインなどのパパイン類、グリシルグリシンペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼなどのペプチダーゼ類、ブロメラインなどを用いることができ、それらはいずれか１種を単独で用いても或いは２種以上を組み合わせ用いてもよい。
それら酵素のうちでも、アクチナーゼなどのアクチナーゼ類、パパイン、キモパパインなどのパパイン類或いはブロメラインが特に好ましい。
【００２６】
酵素の使用量は、懸濁液或いは抽出物溶液中の固形分に対して、０．０１〜１０重量％の範囲とするのがよく、より好ましくは０．１〜５．０重量％の範囲である。
ｐＨ、温度、時間などの処理条件は、発酵と同条件であって差し支えないが、発酵前に酵素加水分解処理を行う場合には、用いる酵素の至適ｐＨ、至適温度付近で２〜２４時間処理を行うようにすることが好ましい。
【００２７】
以上の如くして得られる本発明の発酵物を配合してなる化粧料としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、洗顔料などの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リキッドファンデーション、メイクアッププレスパウダーなどのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディシャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。
【００２８】
本発明の化粧料中に於ける発酵物の配合量は、固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に０．００１〜５．０重量％、好ましくは０．０１〜２．０重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．００１〜３．０重量％、好ましくは０．０１〜１．０重量％の範囲、清浄用化粧料の場合は、一般に０．００１〜５．０重量％、好ましくは０．０１〜２．０重量％の範囲、又浴剤の場合は、一般に０．００１〜５．０重量％、好ましくは０．０１〜２．０重量％の範囲である。
【００２９】
本発明の化粧料には、上記の必須成分の他に、通常化粧料に用いられる配合成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、色素、香料、抗酸化剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００３０】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００３１】
界面活性剤としては，例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。
又、乳化剤乃至乳化助剤として、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、レシチン及びその誘導体、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀など）、ジュアゼイロ（Zizyphus juazeiro：Rhamnaceae)抽出物等を配合することもできる。
【００３２】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、乳酸菌醗酵米、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、ビャッキュウ抽出物、魚介類由来コラーゲン及びその誘導体、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００３３】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻或いは紅藻由来成分、ビャッキュウ抽出物、ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリグルタミン酸及びその誘導体、グルコシルトレハロースと加水分解水添デンプンを主体とする糖化合物等が挙げられる。
【００３４】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物等がある。
【００３５】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、６−又は12−ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビなど）のパウダー、豆類（大豆、小豆など）のパウダー等がある。
【００３６】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００３７】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体、イネ抽出物等がある。
【００３８】
さらに必要ならば、本発明で用いる発酵物の作用効果及び特長を損なわない範囲で、他の活性成分（美白剤、皮膚老化防止・美肌化剤等）を配合してもよく、かかるものとしては、例えば美白剤であれば、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン誘導体、エラグ酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、米糠抽出物、米糠抽出物加水分解物、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀類）、党参抽出物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物（商品名：カモミラET)、コンブ等の海藻の抽出物、アマモ等の海草の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸など）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体等が、又皮膚老化防止・美肌化成分であれば、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、アラントイン、α−ヒドロキシ酸類、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナエキス、甘草エキス、ハトムギエキス、カミツレエキス、ニンジンエキス、アロエエキスなどの生薬抽出エキス、米糠抽出物加水分解物、米抽出物加水分解物、米醗酵エキス、ハス発酵液、アナアオサ抽出物、アマモ等の海草の抽出物、ソウハクヒエキス、ジュアゼイロ（Zizyphus juazeiro：Rhamnaceae)抽出物、紫蘭根抽出物、ムラサキシキブ抽出物、サンゴ草抽出物等が挙げられる。
【００３９】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシドなどのコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド（５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）などのアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、レゾルシノール誘導体としては、例えば４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、ビタミンＥ誘導体としては、例えばビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００４０】
次に、製造例、実施例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下に於いて、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００４１】
製造例１ 発酵物溶液の調製（１）
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて懸濁液を調製した。この懸濁液に蛋白分解酵素（アクチナーゼAS；科研ファルマ株式会社製）０．１ｇを加えて４０℃で２時間加水分解した後、８０℃で１時間抽出並びに酵素失活処理を行い、室温まで冷却後ろ過して白芥子の抽出物溶液を得た。
次に、この液を加熱殺菌し、乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、室温まで冷却後ろ過して白芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６５０ｇ（固形分濃度２．１％）を得た。
【００４２】
製造例２．発酵物溶液の調製（２）
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて８０℃で１時間抽出を行い、室温まで冷却後ろ過して白芥子の抽出物溶液を得た。
次に、この液を加熱殺菌し、乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、室温まで冷却後ろ過して白芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６３０ｇ（固形分濃度１．９％）を得た。
【００４３】
製造例３．発酵物溶液の調製（３）
乳酸菌としてラクトバシルス プランタラムに代えてストレプトコッカス フェーカリスを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６２０ｇ（固形分濃度２．０％）を得た。
【００４４】
製造例４．発酵物溶液の調製（４）
乳酸菌に代えて麹菌のアスペルギルス オリゼーを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の麹菌発酵物溶液６３０ｇ（固形分濃度１．９％）を得た。
【００４５】
製造例５．発酵物溶液の調製（５）
乳酸菌に代えて麹菌のアスペルギルス アワモリを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の麹菌発酵物溶液６３０ｇ（固形分濃度１．８％）を得た。
【００４６】
製造例６．発酵物溶液の調製（６)
乳酸菌に代えて納豆菌のバシルス ナットーを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の納豆菌発酵物溶液６７０ｇ（固形分濃度１．８％）を得た。
【００４７】
製造例７．発酵物溶液の調製（７）
乳酸菌に代えて納豆菌のバシルス サブチルスを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の納豆菌発酵物溶液６４０ｇ（固形分濃度１．７％）を得た。
【００４８】
製造例８．発酵物溶液の調製（８）
乳酸菌に代えて酵母のサッカロミセス セレビシエを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の酵母発酵物溶液７１０ｇ（固形分濃度２．０％）を得た。
【００４９】
製造例９．発酵物溶液の調製（９）
乳酸菌に代えて酵母のカンディダ ケフィールを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の麹菌発酵物溶液７００ｇ（固形分濃度１．７％）を得た。
【００５０】
製造例１０．発酵物溶液の調製（１０）
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて懸濁液を調製し加熱殺菌した。この液に乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、さらに蛋白分解酵素（アクチナーゼAS；科研ファルマ株式会社製）０．１ｇを加えて３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、室温まで冷却後ろ過して白芥子懸濁液の乳酸菌発酵物溶液８１０ｇ（固形分濃度３．２％）を得た。
【００５１】
製造例１１．発酵物溶液の調製（１１）
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて懸濁液を調製し加熱殺菌した。この液に乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、室温まで冷却後ろ過して白芥子懸濁液の乳酸菌発酵物溶液８００ｇ（固形分濃度２．９％）を得た。
【００５２】
製造例１２．発酵物溶液の調製（１２）
発酵素材として白芥子に代えて白芥の葉の乾燥物を用いるほかは製造例１と同様にして、白芥の葉の抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液５５０ｇ（固形分濃度０．９％）を得た。
【００５３】
製造例１３．発酵物溶液の調製（１３）
発酵素材として白芥子に代えて白芥の全草を用いるほかは製造例１と同様にして、白芥全草の抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液５４０ｇ（固形分濃度０．９％）を得た。
【００５４】
製造例１４．発酵物溶液の調製（１４）
発酵素材として白芥子に代えて黄芥の種子（黄芥子）を用いるほかは製造例２と同様にして、黄芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６００ｇ（固形分濃度２．０％）を得た。
【００５５】
製造例１５．発酵物溶液の調製（１５）
発酵素材として白芥子に代えて黒芥の種子（黒芥子）を用いるほかは製造例２と同様にして、黒芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６１０ｇ（固形分濃度１．９％）を得た。
【００５６】
製造例１６．発酵物溶液の調製（１６）
発酵素材として白芥子に代えてアブラナの全草を用いるほかは製造例２と同様にして、アブラナ全草の抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液５２０ｇ（固形分濃度１．０％）を得た。
【００５７】
製造例１７．発酵物粉末の調製
製造例１と同様にして調製した白芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液５００ｇを５０ｇに濃縮した後凍結乾燥し、これを粉砕して白芥子の乳酸菌発酵物粉末１０ｇを得た。
【００５８】
比較製造例１．白芥子抽出物溶液の調製
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて８０℃で１時間抽出を行い、室温まで冷却後ろ過して白芥子の抽出物溶液６８０ｇ（固形分濃度１．２％）を得た。
【００５９】
比較製造例２．白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液の調製
比較製造例１と全く同様にして得られた白芥子抽出物溶液に、アクチナーゼAS（科研ファルマ株式会社製）０．１ｇを加えて４０℃で２時間加水分解した後、８０℃で１時間加熱して酵素を失活させ、室温まで冷却後ろ過して白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液６６０ｇ（固形分濃度１．４％）を得た。
【００６０】
比較製造例３．白芥の葉の抽出物溶液の調製
白芥子に代えて白芥の葉の乾燥物を用いるほか比較製造例１と同様にして白芥の葉の抽出物溶液５５０ｇ（固形分濃度０．９％）を得た。
【００６１】
比較製造例４．黄芥子の抽出物溶液の調製
白芥子に代えて黄芥子を用いるほか比較製造例１と同様にして黄芥子の抽出物溶液６７０ｇ（固形分濃度１．２％）を得た。
【００６２】
比較製造例５．黒芥子の抽出物溶液の調製
白芥子に代えて黒芥子を用いるほか比較製造例１と同様にして黒芥子の抽出物溶液６６０ｇ（固形分濃度１．３％）を得た。
【００６３】
実施例１．クリーム
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ５．０
ヘキサラン （注１） ４．０
パラフィン ５．０
グリセリルモノステアレート ２．０
ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモノステアレート ６．０
ブチルパラベン ０．１
（注１）株式会社テクノーブル製 トリオクタン酸グリセリル
［Ｂ成分］
製造例１の発酵物溶液 １０．０
グリセリン ５．０
カルボキシメチルモノステアレート ０．１
モイストン・Ｃ （注２） １．０
精製水 全量が１００部となる量
（注２）株式会社テクノーブル製 ＮＭＦ成分
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合してクリームを得た。
【００６４】
実施例２．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
メチルパラベン ０．１５
エチルパラベン ０．０３
［Ｂ成分］
製造例１の発酵物溶液 １０．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。こ
れを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００６５】
実施例３．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例２の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００６６】
実施例４．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例４の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００６７】
実施例５．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例６の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００６８】
実施例６．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例８の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００６９】
実施例７．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例１５の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００７０】
実施例８．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例１６の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００７１】
実施例９．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例１７の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００７２】
実施例１０．ローション
［成分］ 部
製造例３の発酵物溶液 １５．０
エタノール １０．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
メチルパラベン ０．２
クエン酸 ０．１
クエン酸ナトリウム ０．３
カルボキシビニルポリマー ０．１
香料 適量
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
【００７３】
実施例１１．ローション
実施例１０の成分中製造例３の発酵物溶液に代えて製造例５の発酵物溶液を用いるほかは実施例１０と同様にして乳液を得た。
【００７４】
実施例１２．ローション
実施例１０の成分中製造例３の発酵物溶液に代えて製造例７の発酵物溶液を用いるほかは実施例１０と同様にして乳液を得た。
【００７５】
実施例１３．ローション
実施例１０の成分中製造例３の発酵物溶液に代えて製造例９の発酵物溶液を用いるほかは実施例１０と同様にして乳液を得た。
【００７６】
実施例１４．化粧水
［Ａ成分］ 部
オリーブ油 １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール ５．０
ブチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
製造例２の発酵物溶液 １５．０
エタノール ５．０
グリセリン ５．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
メチルパラベン ０．１
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。
これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して化粧水を得た。
【００７７】
実施例１５．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
メチルパラベン ０．１５
エチルパラベン ０．０３
［Ｂ成分］
製造例１の発酵物溶液 １０．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
水酸化カリウム ０．５
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００７８】
実施例１６．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム２．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００７９】
実施例１７．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム２．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００８０】
実施例１８．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン２．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００８１】
実施例１９．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えて米糠抽出物加水分解物（株式会社テクノーブル製、商品名「グレイスノウ＊雪＊ＨＰ」、固形分濃度3.5％）５．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００８２】
実施例２０．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてγ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸１．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００８３】
実施例２１．プレスドパウダー
［Ａ成分］ 部
ベンガラ ０．５
黄酸化鉄 １．５
黒酸化鉄 ０．１
酸化チタン １０．０
ナイロンパウダー ４．０
セリサイト 全量が１００部となる量
マイカ ２３．０
タルク ２５．０
製造例１４の発酵物粉末 ０．５
［Ｂ成分］
スクワラン １．０
メチルポリシロキサン ４．０
プロピルパラベン ０．１
デヒドロ酢酸 ０．１
流動パラフィン ２．０
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ混合攪拌し混合した後、２００メッシュのタイラーメッシュの篩にかけ、得られた混合粉末を金型に打型してプレスドパウダーを得た。
【００８４】
実施例２２．リキッドファンデーション
［Ａ成分］ 部
ステアリン酸 ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール ２．０
セトステアリルアルコール ０．２
液状ラノリン ２．０
流動パラフィン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．５
プロピルパラベン ０．０５
［Ｂ成分］
製造例１０の発酵物溶液 １０．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．２
ベントナイト ０．５
プロピレングリコール ４．０
トリエタノールアミン １．１
メチルパラベン ０．１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン ８．０
タルク ４．０
着色顔料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のＣ成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。
【００８５】
実施例２３．リキッドファンデーション
実施例２２のＢ成分中製造例１０の発酵物溶液に代えて製造例１１の発酵物溶液を用いるほかは実施例２２と同様にしてリキッドファンデーションを得た。
【００８６】
実施例２４．リキッドファンデーション
実施例２２のＢ成分中製造例１０の発酵物溶液に代えて製造例１２の発酵物溶液を用いるほかは実施例２２と同様にしてリキッドファンデーションを得た。
【００８７】
実施例２５．リキッドファンデーション
実施例２２のＢ成分中製造例１０の発酵物溶液に代えて製造例１３の発酵物溶液を用いるほかは実施例２２と同様にしてリキッドファンデーションを得た。
【００８８】
実施例２６．クリームファンデーション
［Ａ成分］ 部
ステアリン酸 ５．０
セタノール ２．０
モノステアリン酸グリセリル ３．０
流動パラフィン ５．０
スクワラン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．０
ポリオキシエチレン（２０）モノステアリン酸グリセリル ２．０
プロピルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
製造例２の発酵物溶液 ５．０
ソルビトール ３．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
トリエタノールアミン １．５
メチルパラベン ０．１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン ８．０
タルク ２．０
カオリン ５．０
ベントナイト １．０
着色顔料 適 量
［Ｄ成分］
香料 ０．３
Ｃ成分を混合し、粉砕機で粉砕した。Ｂ成分を混合し、これに粉砕したＣ成分を加え、コロイドミルで均一分散させた。Ａ成分及び均一分散させたＢ、Ｃ成分をそれぞれ８０℃に加温後、Ｂ、Ｃ成分にＡ成分を攪拌しながら加え、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｄ成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却してクリームファンデーションを得た。
【００８９】
実施例２７．クリームファンデーション
実施例２６のＢ成分中製造例２の発酵物溶液に代えて製造例１５の発酵物溶液を用いるほかは実施例２６と同様にしてクリームファンデーションを得た。
【００９０】
実施例２８．ボディシャンプー
［Ａ成分］ 部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％） ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ３．０
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
製造例１３の発酵物溶液 １０．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
精製水 全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。
【００９１】
実施例２９．石けん
［Ａ成分］ 部
硬化ヒマシ油 ２６．０
ヤシ油 １０．０
オリーブ油 ４．０
［Ｂ成分］
水酸化ナトリウム ６．０
砂糖 １０．０
グリセリン ５．０
製造例１４の発酵物粉末 ０．５
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
エタノール ２０．０
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加えてケン化した。これを攪拌しながら５０℃まで冷却し、Ｃ成分を加えた。これを型に流し込み冷却した後、室温下で数日間乾燥させ、充分に乾燥したものを型から取りだして石けんを得た。
【００９２】
試験例１．線維芽細胞賦活作用（１）
ブラシカ属植物として白芥子を用い、これを乳酸菌で発酵して得られる発酵物について線維芽細胞賦活作用を調べた。又、比較のため白芥子の抽出物及び白芥子抽出物の酵素処理分解物についても同様の試験を実施した。
［試料］
(1) 製造例１で得られた発酵物溶液
(2) 製造例２で得られた発酵物溶液
(3) 製造例１０で得られた発酵物溶液
(4) 製造例１１で得られた発酵物溶液
(5) 比較製造例１で得られた抽出物溶液
(6) 比較製造例２で得られた酵素処理分解物溶液
【００９３】
［試験方法］
ヒト真皮由来線維芽細胞NB1RGB(Lot.040514(7)）を、０．５％NCS含有イーグル最少必須培地を入れた９６穴マイクロプレートに１×１０４ 個／穴播種し、３７℃,５．０％ＣＯ２の条件下に１日間プレ培養した後、培地に試料溶液を５．０％の濃度となるように添加し、同条件でさらに３日間培養した。次に、培地を除去し、０．０３％のＭＴＴを添加して３７℃に１時間保持した後、生成したホルマザンを酸性イソプロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダー(Model 450、バイオラッド社製）を用いて波長370−630nmでＭＴＴ値を測定した。
試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたＭＴＴ値に対する各試料添加時のＭＴＴ値の相対値を求め、線維芽細胞ＭＴＴ活性率（％）とした。
なお比較のため、試料溶液の代わりにグルコースを５０ｍＭ添加した場合（陽性対照）についても、同様の試験を行った。
【００９４】
［結果］
結果を表１に示す。
【表１】
【００９５】
表１に示す通り、比較製造例１の白芥子の抽出物溶液や比較製造例２の白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液に比べ、白芥子の抽出物溶液を乳酸菌で発酵させるかもしくは懸濁液を乳酸菌で発酵させた本発明の発酵物溶液（製造例２、製造例１１）の方がMTT活性が強く、又乳酸菌発酵の前或いは発酵と同時に蛋白分解酵素による加水分解処理を行った場合（製造例１、製造例１０）にも、同様に比較実施例１、２に比べてMTT活性が高い結果となった。
このことから、本発明の乳酸菌発酵処理により白芥子の線維芽細胞MTT活性 が高まることが明らかとなった。
【００９６】
試験例２．線維芽細胞賦活作用（２）
ブラシカ属植物として白芥子を用い、これを各種の菌で発酵して得られる発酵物について線維芽細胞賦活作用を調べた。又、比較のため白芥子の抽出物及び白芥子抽出物の酵素処理分解物についても同様の試験を実施した。
［試料］
(1) 製造例３で得られた発酵物溶液
(2) 製造例４で得られた発酵物溶液
(3) 製造例６で得られた発酵物溶液
(4) 製造例８で得られた発酵物溶液
(5) 比較製造例１で得られた抽出物溶液
(6) 比較製造例２で得られた酵素分解物溶液
【００９７】
［試験方法］
試験例１と同様にして行った。
【００９８】
［結果］
結果を表２に示す。
【表２】
【００９９】
表２に示すとおり、比較製造例１の白芥子の抽出物溶液や比較製造例２の白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液に比べ、白芥子の加水分解抽出物溶液を乳酸菌、麹菌、納豆菌或いは酵母で発酵させた製造例３、４、６、８の発酵物溶液の方がMTT活性が高い結果となった。
このことから、乳酸菌、麹菌、納豆菌或いは酵母による発酵処理により白芥子の線維芽細胞MTT活性 が高まること、又乳酸菌が特に好結果を与えることが明らかとなった。
【０１００】
試験例３．線維芽細胞賦活作用（３）
各種のブラシカ属植物を素材として用い、これを乳酸菌で発酵して得られる発酵物について線維芽細胞賦活作用を調べた。又、素材として用いた各植物の抽出物についても同様の試験を実施した。
［試料］
(1) 製造例１2で得られた発酵物溶液
(2) 製造例１4で得られた発酵物溶液
(3) 製造例１5で得られた発酵物溶液
(4) 比較製造例3で得られた抽出物溶液
(5) 比較製造例4で得られた抽出物溶液
(6) 比較製造例5で得られた抽出物溶液
【０１０１】
［試験方法］
試験例１と同様にして行った。
【０１０２】
［結果］
結果を表３に示す。
【表３】
【０１０３】
表３に示す通り、白芥の葉、黄芥子及び黒芥子のいずれの場合も、それらの抽出物溶液（比較製造例３、４、５）よりも抽出物発酵物溶液（製造例１２、１４、１５）の方がMTT活性が高い結果となった。
このことから、本発明の発酵処理によりブラシカ属植物の線維芽細胞MTT活性が高まることが明らかとなった。
【０１０４】
試験例４．B16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用（１）
ブラシカ属植物として白芥子を用い、これを乳酸菌で発酵して得られる発酵物についてB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を調べた。又、比較のため白芥子の抽出物及び白芥子抽出物酵素処理分解物についても同様の試験を実施した。
［試料］
試験例1に同じ。
【０１０５】
［試験方法］
培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（Lot.040409(4))を、９６穴マイクロプレートに８×１０３個／穴播種し、１０％FBS含有イーグル最小必須培地中、３７℃、５．０％ＣＯ２の条件下に１日間プレ培養した後、１０％FBS含有イーグル最小必須培地で試料溶液を２．５又は５．０％の濃度（溶液として）となるように希釈した液に置換し、同条件で３日間培養した。
次に培養液を除去し、界面活性剤（Triton X-100）と５mMＬ−ドーパ溶液を添加して３７℃で反応を行った後、マイクロプレートリーダー（Model 450、バイオラッド社製）を用い、波長４９０nmでドーパ値を測定した。
試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたドーパ値に対する各試料添加時のドーパ値の相対値を求め、チロシナーゼ活性率（％）とした。
なお、比較のため、試料溶液の代わりに、３mMのアルブチンを添加した場合（陽性対照）についても同様の試験を行った。
【０１０６】
［結果］
上記の試験で得られた結果を表４に示した。
【表４】
【０１０７】
表４に示す通り、白芥子の抽出液や懸濁液を乳酸菌で発酵させて得られる製造例２及び１１の発酵物溶液は、白芥子抽出物の酵素処理分解物（比較製造例２）や白芥子の抽出物溶液（比較製造例１）と比べて、それと同等もしくはそれよりまさるB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を発揮する。又、この傾向は、乳酸菌発酵前或いは発酵と同時に酵素加水分解処理を行って得られる発酵物（製造例１、１０）についても同様である。
【０１０８】
試験例５．B16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用（２）
ブラシカ属植物として白芥子を用い、これを各種の菌で発酵して得られる発酵物についてB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を調べた。又、比較のため白芥子の抽出物及び白芥子抽出物の酵素分解処理物についても同様の試験を実施した。
［試料］
試験例２に同じ。
【０１０９】
［試験方法］
試験例４と同様にして行った。
【０１１０】
［結果］
結果を表５に示す。
【表５】
【０１１１】
表５に示す通り、白芥子の加水分解抽出物溶液を乳酸菌、麹菌、納豆菌或いは酵母で発酵させた製造例３、４、６、８の発酵物溶液は、比較製造例１の白芥子の抽出物溶液や比較製造例２の白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液に比べ、それらと同等もしくはより強いB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を示し、又特に乳酸菌の場合に好結果が得られた。
【０１１２】
試験例６．B16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用（３）
各種のブラシカ属植物を素材として用い、これを乳酸菌で発酵して得られる発酵物についてB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を調べた。又、素材として用いた各植物の抽出物についても同様の試験を実施した。
［試料］
試験例３に同じ。
【０１１３】
［試験方法］
試験例４と同様にして行った。
【０１１４】
［結果］
結果を表６に示す。
【表６】
【０１１５】
表６に示す通り、白芥の葉、黄芥子及び黒芥子のいずれの場合も、それらの抽出物発酵物溶液（製造例１２、１４、１５）は、抽出物溶液（比較製造例３、４、５）と同等以上のB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を発揮する。
【０１１６】
試験例７．白色モルモットを用いた皮膚一次刺激性試験
［試料］
(1) 製造例２で得られた発酵物溶液（本発明試料）
(2) 製造例１４で得られた発酵物溶液（本発明試料）
(3) 比較製造例１の抽出物溶液（比較試料）
(4) 比較製造例２の酵素処理分解物溶液（比較試料）
(5) 比較製造例４の抽出物溶液（比較試料）
(6) 精製水（対照）
【０１１７】
［試験方法］
雄性白色モルモット（Clean Kwl：Hartley、４週齢、体重250〜300ｇ）３匹（GA、GB及びGC)を５日間予備飼育した後、一般状態及び皮膚に異常のないことを確認して試験に供した。
白色モルモットの背部の被毛を、電気バリカン及び電気シェーバーを用いて皮膚に損傷を与えないように刈毛及び剃毛し、１．５×１．５cmの試験部位を６ヶ所設定した。各試料をそれぞれ２００μL宛パッチテスト絆（鳥居薬品製）に塗布したものを５ヶ所の試験部位のいずれかに貼付し、テーピングテープでその上を覆った。貼付開始から２４時間後にパッチ絆を除去し、除去直後（貼付開始から２４時間後）、除去２４時間後（貼付開始から４８時間後） 及び除去４８時間後（貼付開始から７２時間後）に、試料貼付部位の紅斑・痂皮形成及び浮腫形成の程度を観察し、下記のドレイズ（Draize）の判定基準に従って評価した。
【０１１８】
（紅斑・浮腫形成）
スコア 皮膚の状態
０ ： 紅斑なし
１ ： 極く軽度の紅斑
２ ： 明らかな紅斑
３ ： 中程度から強い紅斑
４ ： 深紅色の強い紅斑に軽い痂皮形成
（浮腫形成）
スコア 皮膚の状態
０ ： 浮腫なし
１ ： 極く軽度の浮腫
２ ： 明らかな浮腫（周囲と明らかに区別可能）
３ ： 中程度の浮腫（約１mmの膨隆）
４ ： 強い浮腫（１mmを越える膨隆と貼付部周辺への広がり）
【０１１９】
［結果］
上記の方法により求めた紅斑・痂皮形成及び浮腫形成の判定値を表７に示した。
【表７】
【０１２０】
又、３匹のモルモットのそれぞれについて、各試験部位（試料貼付部位）に於ける貼付開始２４時間後及び７２時間後の紅斑・痂皮形成及び浮腫形成の判定値を合計し、合計値を２で割って得られた数値を一次刺激インデックス（Ｐ.Ｉ.Ｉ.)として表８に示した。
【０１２１】
【表８】
【０１２２】
さらに、表８に示した各試料のP . I . I .の平均値（３匹のモルモットの平均）から、下記のドレイズ（Draize）の方法による刺激物質の安全性評価区分に基づいて各試料の皮膚一次刺激性を評価した。
安全性評価区分 P . I . I .の平均値
非刺激性〜弱い刺激性 ０〜２
中程度の刺激 ３〜５
強い刺激性 ６〜８
【０１２３】
以上に示す通り、白芥子や黄芥子の抽出物溶液（比較製造例１、４）には、中程度の刺激性が見られたが、それらの抽出物溶液に発酵処理を施して得られた製造例２及び１４の発酵物溶液には、比較製造例２の酵素処理分解物溶液の場合と同様に、刺激性は全く認められなかった。
このことから、本発明の発酵処理によってブラシカ属植物抽出物の皮膚刺激性が低下することが明らかとなった。
【０１２４】
試験例８．保存安定性試験
［試料］
(1) 製造例２で得られた発酵物溶液（本発明試料）
(2) 製造例１４で得られた発酵物溶液（本発明試料）
(3) 比較製造例１の抽出物溶液（比較試料）
(4) 比較製造例２の酵素処理分解物溶液（比較試料）
(5) 比較製造例４の抽出物溶液（比較試料）
【０１２５】
［試験方法］
各試料４５mLをそれぞれ容量５０mLの硝子製スクリュー管（透明硝子瓶）に入れ、プラスチック製の蓋で栓をして４℃、２０℃及び４０℃の条件下に６カ月間保管し、その間の色調変化、析出物の有無及び匂いの変化を、毎日１回目視又は官能検査により観察した。６カ月の試験期間内であっても、上記の観察項目のいずれかに変化が認められた試料については不安定であると判断し、それ以降の観察を中止した。なお、試験は各試料のそれぞれ３ロットについて行った。
【０１２６】
［結果］
試験結果を表９及び表１０に示す。
【表９】
【０１２７】
【表１０】
【０１２８】
表９及び表１０に示す通り、比較製造例１、４の抽出物溶液では、１〜２ヶ月の保存観察中に、高温（４０℃）保存品の場合は着色が進み、又低温（４℃）保存品の場合は沈殿（オリ)の発生が見られたが、発酵処理を施して得られた製造例２及び１４の発酵物溶液については、比較製造例２の酵素処理分解物溶液の場合と同様に、６ヶ月の保存中、高温、室温及び低温のいずれの保管条件下に於いても全く変化は認められなかった。
このことから、本発明の発酵処理によってブラシカ属植物抽出物の保存安定性が非常に高くなることが明らかとなった。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アブラナ科ブラシカ属に属する植物の発酵物を配合してなる化粧料に関し、詳しくは上記の発酵物を配合してなり、美白効果とさらに皮膚老化防止効果に於いて高い有効性を示し、総合的かつすぐれた皮膚健全化効果を発揮すると共に、生体安全性や品質安定性にもすぐれた化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
アブラナ科ブラシカ属の植物に含まれる成分は、皮膚を健全で若々しい状態に保持し或いは改善するために有効な様々な皮膚生理活性を具えており、化粧料用の配合成分として極めて有用性の高いものである。
このアブラナ科ブラシカ属植物（以下、ブラシカ属植物ということがある）の成分の示す生理活性とその皮膚に対する効果に関しては、該植物の抽出物についてよく研究、検討がなされており、例えば特開平８−３２５１３０号公報には、メラニン生成抑制作用及び抗炎症作用に基づく美白効果や美肌化効果が、特開２００３−８１８４８号公報には、スーパーオキサイドや過酸化水素などの活性酸素の消去作用に基づく皮膚老化防止効果が、又特開２００３−２３８４２９号公報には、線維芽細胞賦活作用に基づく皮膚老化防止効果及び肌荒れの予防・改善効果がそれぞれ開示されており、さらに特開２００３−３４２１５０号公報には、当該抽出物が線維芽細胞の産生する細胞外マトリックス成分のエラスチンに類似した作用を有し、同じく皮膚老化防止と肌荒れの予防・改善に有効であることが示されている。
【０００３】
【特許文献１】特開平８−３２５１３０号
【特許文献２】特開２００３−８１８４８号
【特許文献３】特開２００３−２３３８４２９号
【特許文献４】特開２００３−３４２１５０号
【０００４】
このようにブラシカ属植物、特にその抽出物は、多様でかつすぐれた皮膚生理活性を有し、化粧料配合原料として利用価値の高いものであるが、他方ブラシカ属植物の抽出物には、一般に保存中に着色やオリが発生し易く、保存安定性が必ずしも十分ではないという難点があり、又該植物のうちでも、白芥（Brassica alba)、黄芥(Brassica juncea)、黒芥(Brassica nigra)などの場合、就中それらの種子の場合には、その抽出物が皮膚に対して多少の刺激性を示すという問題もあって、それらの難点を改善し或いは解消することが、アブラナ科ブラシカ属植物の抽出物を化粧料配合成分として使用するに当たっての解決課題となっている。
【０００５】
これに対して本発明者らは先に、ブラシカ属植物の抽出物を蛋白分解酵素で処理した場合、該抽出物の有するすぐれた皮膚生理活性はこれを保持したまま、その保存安定性と皮膚刺激性を大きく改善することが可能であることを見い出し、かかる知見に基づいてブラシカ属植物抽出物の酵素処理分解物とこれを含む化粧料について特許出願を行った（特願2004-141666号）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、ブラシカ属植物の化粧料への利用に係る上述の如き技術的背景の下になされたものであり、その目的とするところは、ブラシカ属植物を素材として用いて、保存安定性と生体安全性の点では上記の酵素処理分解物と同様のすぐれた特性を有すると共に、皮膚生理活性に於いては酵素処理分解物や従来公知の抽出物よりもさらに高い有効性を示す化粧料配合成分を調製することにより、品質安定性と生体安全性にすぐれ、しかも皮膚健全化効果の一段と改善された化粧料の提供を可能ならしめることにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
即ち本発明は、アブラナ科ブラシカ属（Brassica）の植物を発酵させた発酵物を配合してなる化粧料に関するものである。
なおここで、化粧料なる文言は所謂化粧料のほかに医薬部外品をも含む広義で用いる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明で化粧料配合成分として用いるアブラナ科ブラシカ属植物の発酵物は、該植物の抽出物や酵素処理分解物に比べてより高められた線維芽細胞賦活作用と同等或いはそれ以上のメラニン生成抑制作用を有し、皮膚生理活性に於いてそれら抽出物や酵素処理分解物よりもすぐれるばかりでなく、保存安定性や皮膚刺激性の面では、酵素処理分解物と同様に大きく改善されたものとなっている（後述の試験例参照）。
従って、かかる発酵物を配合してなる本発明の化粧料は、ブラシカ植物の抽出物や酵素処理分解物を配合した化粧料よりも一層すぐれた、そして総合的な皮膚健全化効果を発揮するばかりでなく、発酵物の有する高い保存安定性の故に、長期保存中にも着色やオリを生ずることがなく品質保持性にすぐれ、しかも該発酵物が実質的に皮膚刺激性を有さないことから、皮膚に適用した場合、紅斑等の発生の恐れがなく安全性にも極めてすぐれている。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明で用いるブラシカ属植物としては、例えば白芥（Brassica alba）、黄芥（Brassica juncea）、黒芥（Brassica nigra）、アブラナ（Brassica ropa）などを挙げることができる。それらブラシカ属植物のうちでも、得られる発酵物の線維芽細胞賦活作用、メラニン生成抑制作用等の皮膚生理活性の観点から、白芥、黄芥或いは黒芥などの芥子類、就中それらの種子が好ましく、特に白芥の種子（白芥子）を用いた場合、すぐれた皮膚生理活性を有する発酵物が得られることから最も好ましい。
【００１０】
それらブラシカ属植物を素材として用いて本発明の発酵物を調製する方法としては、該植物の種子、葉、花、雄しべ、雌しべ、茎、根、全草など適宜の部分、好ましくは種子を、必要に応じて予め水洗、乾燥し、又好適には細切もしくは粉砕した上、発酵媒体中に懸濁させて発酵させる方法、或いは上記と同様にして得られるブラシカ属植物の細切物もしくは粉砕物を溶媒で抽出し、ここに得られる抽出物を発酵させる方法などが好ましく用いられるが、発酵方法はそれらに限定されるものではなく、要はブラシカ属植物の含有乃至構成成分を発酵せしめ得る方法であればいずれでもよい。
【００１１】
発酵に用いる菌としては、乳酸菌、麹菌、納豆菌、酵母等が挙げられ、それらの菌のいずれを用いた場合であっても、すぐれた線維芽細胞賦活作用とメラニン生成抑制作用を有し、しかも高い保存安定性と生体安全性を示す発酵物が得られるが、なかでも乳酸菌を用いた場合に特に好ましい結果が得られる。
【００１２】
ここで乳酸菌としては、例えばラクトバシルス プランタラム（Lactobacillus plantarum)、ラクトバシルス ブレビス（L. brevis)、ラクトバシルス カゼイ（L. casei)等のラクトバシルス（Lactobacillus）属の乳酸菌；カルノバクテリウム ディバージェンス（Carmobacterium divergens)、カルノバクテリウム ピシコーラ(Carmobacterium piscicola)等のカルノバクテリウム（Carmobacterium）属の乳酸菌；ロイコノストック メセンテロイズ（Leuconostoc mesenteroides)、ロイコノストック シトレウム（Leuconostoc citreum)等のロイコノストック（Leuconostoc）属の乳酸菌； ストレプトコッカス フェーカリス（Streptococcus faecalis)、ストレプトコッカス ビオジェネス（Streptococcus pyogenes)等のストレプトコッカス属の乳酸菌；エンテロコッカス カゼリフラバス（Enterococcus caseliflavus)、エンテロコッカス サルフレウス（Enterococcus sulfreus)等のエンテロコッカス（ Enterococcus）属の乳酸菌；ラクトコッカス プランタラム（Lactococcus plantarum) ラクトコッカス ラフィノラクティス（Lactococcus rafinolactis)等のラクトコッカス属の乳酸菌；ヴェイセラ コンフューザ（Weissella confusa)、ヴェイセラ カンドュレリ（Weissella kandleri)等のヴェイセラ属の乳酸菌；アトポビウム ミニュタム（Atopobium minutum)、アトポビウム パービュラス（Atopobiumparvulus)等のアトポビウム（Atopobium）属の乳酸菌；バゴコッカス フルビアリス（Vagococcus fluvialis）、バゴコッカス サーモニナラム（Vagococcus salmoninarum)等のバゴコッカス（Vagococcus）属の乳酸菌；ペディオコッカス ダムノサス（Pediococcus damnosus)、ペディオコッカス ペントサセウス（Pediococcus pentosaceus)等のペディオコッカス（Pediococcus）属の乳酸菌等が挙げられる。それら乳酸菌のうちでも、得られる発酵物の皮膚生理活性と取り扱いのし易さの観点から、ラクトバシルス プランタラム（Lactobacillus plantarum)の使用が最も好ましい。
【００１３】
麹菌としては、例えばアスペルギルス オリゼー（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス フラバス（Aspergillus flavus）、アスペルギルス ポリオキソジェネス（Aspergillus polyoxogenes）、アスペルギルス ソーヤ（Aspergillus sojae）等の黄麹菌、アスペルギルス アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス カワウチ（Aspergillus kawauchii）、アスペルギルス ウサミ（Aspergillus usami）、
アスペルギルス ニガー（Aspergillus niger）等の黒麹菌、モナスカス アンカ（Monascus anka）、モナスカス ピロサス（Monascus pilosus）等の紅麹菌などが挙げられる。それらのうちでも、発酵液の着色や発酵臭が比較的少ないことから、アスペルギルス オリゼー（Aspergillus oryzae）が最も好ましい。
【００１４】
納豆菌としては、例えばバシルス ナットー(Bacillus natto)、バシルス サブチルス(Bacillus subtilis)、バシルス サーキュランス(Bacillus circulans)等のバシルス属の細菌などが挙げられる。なかでも、食品に広く使用されており、安全性が高い点でバシルス ナットー(Bacillus natto)が最も好ましい。
【００１５】
酵母としては、例えばサッカロミセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)、サッカロミセス アワモリ(Saccharomyces awamori)、サッカロミセス チェバリエリ(Saccharomyces chevalieri)、サッカロミセス カールスバージェンシス(Saccharomyces carlsbergensis)、サッカロミセス バヨナス（Saccharomyces bayo
nus)等のサッカロミセス属の酵母、トルラスポラ デルブルエキ(Torulaspora delbruekii)、トルラスポラ ファーメンタチ(Torulaspora fermentati)、トルラスポラ ロゼー(Torulaspora rosei)等のトルラスポラ属の酵母、ジゴサッカロミセス ローキシ(Zygosaccharomyces rouxii)、ジゴサッカロミセス ソーヤ(Zygosacchar
omyces soya)、ジゴサッカロミセス サケ(Zygosaccharomyces sake)、ジゴサッカロミセス ミソ(Zygosaccharomyces miso)、ジゴサッカロミセス ラクティス(Zygosaccharomyces lactis)等のジゴサッカロミセス属の酵母、カンディダ ベルサチリス(Candida versatilis)、カンディダ エチェリシイ(Candida etchellsii)、カンディダ ケフィール（Candida kefyr）、カンディダ サケ（Candida sake）、カンディダ スコッティ（Candida scottii）等のカンディダ属の酵母などが挙げられる。
それらのうちでも、食品に最も広く利用され、発酵力が強いという点からサッカロミセス セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)が最も好ましい。
【００１６】
発酵方法として、ブラシカ属植物を発酵媒体中に懸濁させて発酵を行わしめる
方法を用いる場合、発酵媒体としては、水、水とエタノール、プロパノールなどの低級アルコール類との混合液、水とエチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどのグリコール類との混合液、水とソルビトール、グルコースなどの糖類との混合液等を用いることができるが、発酵に用いる菌が最も作用し易い点とブラシカ属植物以外に菌の栄養源となる成分を含まない点で、水単独が最も好ましい。
混合液を用いる場合は、水１００重量部に対して低級アルコール類、グリコール類、糖類などを一般に２０重量部以下、特に１０重量部以下混合するようにするのがよい。
ブラシカ属植物と上記の抽出媒体との混合比は、重量比で一般に１：１〜１：１０００の範囲であり、好ましくは１：２〜１：１００、より好ましくは１：５〜１：５０の範囲である。ブラシカ属植物の量比が大きすぎると発酵液の収量が低下し、又小さすぎると発酵液の濃度が希薄となっていずれも好ましくない。
【００１７】
一方、発酵法としてブラシカ属植物の抽出物を発酵させる方法を用いる場合、抽出方法としては浸漬法、向流抽出法などを用いることができる。又超臨界抽出法を用いてもよい。
抽出溶媒としては、前記の懸濁液の調製に用いた発酵媒体と同様のもの、即ち水或いは水と低級アルコール類、グリコール類或いは糖類等との混合液、特に水単独が好ましく用いられる。抽出溶媒として酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチルなどのエステル類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、エチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類或いはｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルムなどの炭化水素系溶媒などを用いることもできるが、それらを抽出溶媒として用いた場合には、得られた抽出液から一旦溶媒を留去して固形分を分取した上、これを水或いは上記の混合液に再溶解もしくは再分散させて発酵を行わしめるようにする。
ブラシカ属植物と抽出溶媒の量比としては、前述の懸濁液の調製に於けるブラシカ属植物と発酵媒体との混合比と同様の範囲が一般に用いられる。
【００１８】
抽出に際して、抽出液のｐＨに特に限定はないが、一般には３．０〜９．０の範囲とすることが好ましく、かかる意味で、必要ならば前記の抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウムなどのアルカリ性調整剤や、クエン酸、塩酸、リン酸、硫酸などの酸性調整剤等を添加し、目的とするｐＨとなるように調整してもよい。
【００１９】
抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨ、或いは被抽出物の細切度、粒度等によっても異なるが、例えば水を抽出溶媒とする浸漬法の場合であれば、抽出温度は一般に１〜９０℃、好ましくは２０〜６０℃の範囲であり、又抽出時間は、室温抽出の場合で一般に０．５〜７２時間の範囲、特に１〜２４時間の範囲である。
【００２０】
以上の如きブラシカ属植物の懸濁液或いは抽出物溶液の菌による発酵は、例えば以下のようにして行われる。
即ち、発酵に先立ってまず懸濁液や抽出物溶液に殺菌処理を施す。殺菌処理としては、それらの液を１２０〜１３０℃で１０〜２０分間加熱するオートクレーブ殺菌法や、８０〜９０℃に６０〜１２０分間保持することを１日１回２〜３日間繰り返す間断殺菌法といった加熱殺菌法が一般に用いられる。
懸濁液や抽出物溶液を殺菌する方法に代えて、素材のブラシカ属植物それ自体を予め殺菌用エタノール等で洗浄殺菌し、これを無菌水等の無菌媒体と混合することにより、無菌化された懸濁液或いは抽出物溶液を調製するようにしてもよい。
【００２１】
次に、無菌化した懸濁液或いは抽出物溶液に菌を接種する。菌の接種量は１０７〜１０８個／ｍＬが適量である。接種量が上記の範囲より多くなっても発酵の進行時間は殆ど変わらず、一方上記の範囲より少なくなると発酵完了迄に長時間を要することとなって好ましくない。
【００２２】
発酵温度は、５〜５０℃の範囲であれば発酵が進行し目的の発酵物を得ることができるが、より好ましくは各菌の生育至適温度である３０〜４０℃の範囲である。
発酵日数は、上記の至適温度で発酵を行う場合で一般に１〜１０日であり、より好ましくは２〜５日である。発酵日数が１日より短いと発酵が十分に行われず、目的とする高い皮膚生理活性を具えた発酵物を得ることが困難となる。一方、発酵日数が１０日を越えて長くなり過ぎても、それ以上発酵は進行せず発酵物の有効性に向上が認められないだけでなく、かえって着色や発酵臭が強まるなどの不都合が生じ好ましくない。
【００２３】
所定の発酵日数が経過したならば、次に発酵液を、例えば８０〜９０℃で６０〜１２０分間加熱する方法などを用いて殺菌し、発酵を停止せしめた後、ろ過或いは遠心分離などの固液分離手段を用いて不溶物を除去し、目的の発酵物を含む溶液を得る。
ここに得られる発酵物溶液は、一般にはｐＨを４〜８に調整した上、これをそのまま化粧料に配合するか、もしくは必要ならば減圧濃縮等により所定の濃度に調整した上化粧料に配合する。又場合によっては、スプレードライ法、凍結乾燥法など常法に従って粉末化してもよい。
【００２４】
なお、以上の発酵を行うに際して、ブラシカ属植物の懸濁液或いは抽出物溶液に、蛋白分解酵素による加水分解処理を施すようにしてもよく、これによって発酵後の固液分離操作が容易となるだけでなく、発酵液の保存安定性もさらに良好なものとなる。
この酵素加水分解処理は、発酵の前に行ってもよく、又発酵と並行してこれを行ってもよい。
【００２５】
酵素加水分解処理を行う場合、酵素としては、例えばアクチナーゼなどのアクチナーゼ類、ペプシンなどのペプシン類、トリプシン、キモトリプシンなどのトリプシン類、パパイン、キモパパインなどのパパイン類、グリシルグリシンペプチダーゼ、カルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダーゼなどのペプチダーゼ類、ブロメラインなどを用いることができ、それらはいずれか１種を単独で用いても或いは２種以上を組み合わせ用いてもよい。
それら酵素のうちでも、アクチナーゼなどのアクチナーゼ類、パパイン、キモパパインなどのパパイン類或いはブロメラインが特に好ましい。
【００２６】
酵素の使用量は、懸濁液或いは抽出物溶液中の固形分に対して、０．０１〜１０重量％の範囲とするのがよく、より好ましくは０．１〜５．０重量％の範囲である。
ｐＨ、温度、時間などの処理条件は、発酵と同条件であって差し支えないが、発酵前に酵素加水分解処理を行う場合には、用いる酵素の至適ｐＨ、至適温度付近で２〜２４時間処理を行うようにすることが好ましい。
【００２７】
以上の如くして得られる本発明の発酵物を配合してなる化粧料としては、例えば乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、洗顔料などの基礎化粧料、口紅、ファンデーション、リキッドファンデーション、メイクアッププレスパウダーなどのメイクアップ化粧料、洗顔料、ボディシャンプー、石けんなどの清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。
【００２８】
本発明の化粧料中に於ける発酵物の配合量は、固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に０．００１〜５．０重量％、好ましくは０．０１〜２．０重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．００１〜３．０重量％、好ましくは０．０１〜１．０重量％の範囲、清浄用化粧料の場合は、一般に０．００１〜５．０重量％、好ましくは０．０１〜２．０重量％の範囲、又浴剤の場合は、一般に０．００１〜５．０重量％、好ましくは０．０１〜２．０重量％の範囲である。
【００２９】
本発明の化粧料には、上記の必須成分の他に、通常化粧料に用いられる配合成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、色素、香料、抗酸化剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００３０】
ここで、油性成分としては、例えばオリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米胚芽油、ヤシ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワランなどの植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油などの動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリンなどのロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワランなどの炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、ｃｉｓ−１１−エイコセン酸などの脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコールなどの高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）などの合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００３１】
界面活性剤としては，例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステルなどの非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩などのアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩などのカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタインなどの両性界面活性剤等を使用することができる。
又、乳化剤乃至乳化助剤として、酵素処理ステビアなどのステビア誘導体、レシチン及びその誘導体、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀など）、ジュアゼイロ（Zizyphus juazeiro：Rhamnaceae)抽出物等を配合することもできる。
【００３２】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、乳酸菌醗酵米、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体など）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、ビャッキュウ抽出物、魚介類由来コラーゲン及びその誘導体、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００３３】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻或いは紅藻由来成分、ビャッキュウ抽出物、ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体等の多糖類、キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体、ポリグルタミン酸及びその誘導体、グルコシルトレハロースと加水分解水添デンプンを主体とする糖化合物等が挙げられる。
【００３４】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチルなどのパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物等がある。
【００３５】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、６−又は12−ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビなど）のパウダー、豆類（大豆、小豆など）のパウダー等がある。
【００３６】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００３７】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ビタミンＥ及びその誘導体、イネ抽出物等がある。
【００３８】
さらに必要ならば、本発明で用いる発酵物の作用効果及び特長を損なわない範囲で、他の活性成分（美白剤、皮膚老化防止・美肌化剤等）を配合してもよく、かかるものとしては、例えば美白剤であれば、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン誘導体、エラグ酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、米糠抽出物、米糠抽出物加水分解物、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀類）、党参抽出物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物（商品名：カモミラET)、コンブ等の海藻の抽出物、アマモ等の海草の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸など）、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体等が、又皮膚老化防止・美肌化成分であれば、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、アラントイン、α−ヒドロキシ酸類、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナエキス、甘草エキス、ハトムギエキス、カミツレエキス、ニンジンエキス、アロエエキスなどの生薬抽出エキス、米糠抽出物加水分解物、米抽出物加水分解物、米醗酵エキス、ハス発酵液、アナアオサ抽出物、アマモ等の海草の抽出物、ソウハクヒエキス、ジュアゼイロ（Zizyphus juazeiro：Rhamnaceae)抽出物、紫蘭根抽出物、ムラサキシキブ抽出物、サンゴ草抽出物等が挙げられる。
【００３９】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレートなどのコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシドなどのコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウムなどのアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド（２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド（５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸）などのアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基など）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステルなどのＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、レゾルシノール誘導体としては、例えば４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、ビタミンＥ誘導体としては、例えばビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００４０】
次に、製造例、実施例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下に於いて、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００４１】
製造例１ 発酵物溶液の調製（１）
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて懸濁液を調製した。この懸濁液に蛋白分解酵素（アクチナーゼAS；科研ファルマ株式会社製）０．１ｇを加えて４０℃で２時間加水分解した後、８０℃で１時間抽出並びに酵素失活処理を行い、室温まで冷却後ろ過して白芥子の抽出物溶液を得た。
次に、この液を加熱殺菌し、乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、室温まで冷却後ろ過して白芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６５０ｇ（固形分濃度２．１％）を得た。
【００４２】
製造例２．発酵物溶液の調製（２）
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて８０℃で１時間抽出を行い、室温まで冷却後ろ過して白芥子の抽出物溶液を得た。
次に、この液を加熱殺菌し、乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、室温まで冷却後ろ過して白芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６３０ｇ（固形分濃度１．９％）を得た。
【００４３】
製造例３．発酵物溶液の調製（３）
乳酸菌としてラクトバシルス プランタラムに代えてストレプトコッカス フェーカリスを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６２０ｇ（固形分濃度２．０％）を得た。
【００４４】
製造例４．発酵物溶液の調製（４）
乳酸菌に代えて麹菌のアスペルギルス オリゼーを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の麹菌発酵物溶液６３０ｇ（固形分濃度１．９％）を得た。
【００４５】
製造例５．発酵物溶液の調製（５）
乳酸菌に代えて麹菌のアスペルギルス アワモリを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の麹菌発酵物溶液６３０ｇ（固形分濃度１．８％）を得た。
【００４６】
製造例６．発酵物溶液の調製（６)
乳酸菌に代えて納豆菌のバシルス ナットーを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の納豆菌発酵物溶液６７０ｇ（固形分濃度１．８％）を得た。
【００４７】
製造例７．発酵物溶液の調製（７）
乳酸菌に代えて納豆菌のバシルス サブチルスを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の納豆菌発酵物溶液６４０ｇ（固形分濃度１．７％）を得た。
【００４８】
製造例８．発酵物溶液の調製（８）
乳酸菌に代えて酵母のサッカロミセス セレビシエを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の酵母発酵物溶液７１０ｇ（固形分濃度２．０％）を得た。
【００４９】
製造例９．発酵物溶液の調製（９）
乳酸菌に代えて酵母のカンディダ ケフィールを用いるほかは製造例１と同様にして、白芥子抽出物溶液の麹菌発酵物溶液７００ｇ（固形分濃度１．７％）を得た。
【００５０】
製造例１０．発酵物溶液の調製（１０）
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて懸濁液を調製し加熱殺菌した。この液に乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、さらに蛋白分解酵素（アクチナーゼAS；科研ファルマ株式会社製）０．１ｇを加えて３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、室温まで冷却後ろ過して白芥子懸濁液の乳酸菌発酵物溶液８１０ｇ（固形分濃度３．２％）を得た。
【００５１】
製造例１１．発酵物溶液の調製（１１）
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて懸濁液を調製し加熱殺菌した。この液に乳酸菌（ラクトバシルス プランタラム）を１０８個／ｍＬ接種し、３７℃で３日間静置培養した。培養終了後培養液を加熱殺菌し、室温まで冷却後ろ過して白芥子懸濁液の乳酸菌発酵物溶液８００ｇ（固形分濃度２．９％）を得た。
【００５２】
製造例１２．発酵物溶液の調製（１２）
発酵素材として白芥子に代えて白芥の葉の乾燥物を用いるほかは製造例１と同様にして、白芥の葉の抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液５５０ｇ（固形分濃度０．９％）を得た。
【００５３】
製造例１３．発酵物溶液の調製（１３）
発酵素材として白芥子に代えて白芥の全草を用いるほかは製造例１と同様にして、白芥全草の抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液５４０ｇ（固形分濃度０．９％）を得た。
【００５４】
製造例１４．発酵物溶液の調製（１４）
発酵素材として白芥子に代えて黄芥の種子（黄芥子）を用いるほかは製造例２と同様にして、黄芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６００ｇ（固形分濃度２．０％）を得た。
【００５５】
製造例１５．発酵物溶液の調製（１５）
発酵素材として白芥子に代えて黒芥の種子（黒芥子）を用いるほかは製造例２と同様にして、黒芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液６１０ｇ（固形分濃度１．９％）を得た。
【００５６】
製造例１６．発酵物溶液の調製（１６）
発酵素材として白芥子に代えてアブラナの全草を用いるほかは製造例２と同様にして、アブラナ全草の抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液５２０ｇ（固形分濃度１．０％）を得た。
【００５７】
製造例１７．発酵物粉末の調製
製造例１と同様にして調製した白芥子抽出物溶液の乳酸菌発酵物溶液５００ｇを５０ｇに濃縮した後凍結乾燥し、これを粉砕して白芥子の乳酸菌発酵物粉末１０ｇを得た。
【００５８】
比較製造例１．白芥子抽出物溶液の調製
白芥の種子（白芥子）１００ｇを粉砕し、これに精製水９００ｇを加えて８０℃で１時間抽出を行い、室温まで冷却後ろ過して白芥子の抽出物溶液６８０ｇ（固形分濃度１．２％）を得た。
【００５９】
比較製造例２．白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液の調製
比較製造例１と全く同様にして得られた白芥子抽出物溶液に、アクチナーゼAS（科研ファルマ株式会社製）０．１ｇを加えて４０℃で２時間加水分解した後、８０℃で１時間加熱して酵素を失活させ、室温まで冷却後ろ過して白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液６６０ｇ（固形分濃度１．４％）を得た。
【００６０】
比較製造例３．白芥の葉の抽出物溶液の調製
白芥子に代えて白芥の葉の乾燥物を用いるほか比較製造例１と同様にして白芥の葉の抽出物溶液５５０ｇ（固形分濃度０．９％）を得た。
【００６１】
比較製造例４．黄芥子の抽出物溶液の調製
白芥子に代えて黄芥子を用いるほか比較製造例１と同様にして黄芥子の抽出物溶液６７０ｇ（固形分濃度１．２％）を得た。
【００６２】
比較製造例５．黒芥子の抽出物溶液の調製
白芥子に代えて黒芥子を用いるほか比較製造例１と同様にして黒芥子の抽出物溶液６６０ｇ（固形分濃度１．３％）を得た。
【００６３】
実施例１．クリーム
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ５．０
ヘキサラン （注１） ４．０
パラフィン ５．０
グリセリルモノステアレート ２．０
ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモノステアレート ６．０
ブチルパラベン ０．１
（注１）株式会社テクノーブル製 トリオクタン酸グリセリル
［Ｂ成分］
製造例１の発酵物溶液 １０．０
グリセリン ５．０
カルボキシメチルモノステアレート ０．１
モイストン・Ｃ （注２） １．０
精製水 全量が１００部となる量
（注２）株式会社テクノーブル製 ＮＭＦ成分
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合してクリームを得た。
【００６４】
実施例２．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
メチルパラベン ０．１５
エチルパラベン ０．０３
［Ｂ成分］
製造例１の発酵物溶液 １０．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。こ
れを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００６５】
実施例３．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例２の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００６６】
実施例４．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例４の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００６７】
実施例５．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例６の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００６８】
実施例６．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例８の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００６９】
実施例７．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例１５の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００７０】
実施例８．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例１６の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００７１】
実施例９．乳液
実施例２のＢ成分中製造例１の発酵物溶液に代えて製造例１７の発酵物溶液を用いるほかは実施例２と同様にして乳液を得た。
【００７２】
実施例１０．ローション
［成分］ 部
製造例３の発酵物溶液 １５．０
エタノール １０．０
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
メチルパラベン ０．２
クエン酸 ０．１
クエン酸ナトリウム ０．３
カルボキシビニルポリマー ０．１
香料 適量
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
上記の成分を混合してローションを得た。
【００７３】
実施例１１．ローション
実施例１０の成分中製造例３の発酵物溶液に代えて製造例５の発酵物溶液を用いるほかは実施例１０と同様にして乳液を得た。
【００７４】
実施例１２．ローション
実施例１０の成分中製造例３の発酵物溶液に代えて製造例７の発酵物溶液を用いるほかは実施例１０と同様にして乳液を得た。
【００７５】
実施例１３．ローション
実施例１０の成分中製造例３の発酵物溶液に代えて製造例９の発酵物溶液を用いるほかは実施例１０と同様にして乳液を得た。
【００７６】
実施例１４．化粧水
［Ａ成分］ 部
オリーブ油 １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール ５．０
ブチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
製造例２の発酵物溶液 １５．０
エタノール ５．０
グリセリン ５．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
メチルパラベン ０．１
水酸化カリウム 適量
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加温後、Ａ成分にＢ成分を加えて攪拌し、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。
これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えて攪拌混合し、さらに３０℃以下まで冷却して化粧水を得た。
【００７７】
実施例１５．乳液
［Ａ成分］ 部
流動パラフィン ６．０
ヘキサラン ４．０
ホホバ油 １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート ２．０
大豆レシチン １．５
メチルパラベン ０．１５
エチルパラベン ０．０３
［Ｂ成分］
製造例１の発酵物溶液 １０．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド ２．０
水酸化カリウム ０．５
グリセリン ３．０
１、３−ブチレングリコール ２．０
カルボキシメチルセルロース ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム ０．０１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ８０℃以上に加熱した後、攪拌混合した。これを５０℃まで冷却した後、Ｃ成分を加えてさらに攪拌混合して乳液を得た。
【００７８】
実施例１６．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム２．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００７９】
実施例１７．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム２．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００８０】
実施例１８．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン２．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００８１】
実施例１９．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えて米糠抽出物加水分解物（株式会社テクノーブル製、商品名「グレイスノウ＊雪＊ＨＰ」、固形分濃度3.5％）５．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００８２】
実施例２０．乳液
実施例１５のＢ成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてγ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸１．０部を用いるほかは実施例１５と同様にして乳液を得た。
【００８３】
実施例２１．プレスドパウダー
［Ａ成分］ 部
ベンガラ ０．５
黄酸化鉄 １．５
黒酸化鉄 ０．１
酸化チタン １０．０
ナイロンパウダー ４．０
セリサイト 全量が１００部となる量
マイカ ２３．０
タルク ２５．０
製造例１４の発酵物粉末 ０．５
［Ｂ成分］
スクワラン １．０
メチルポリシロキサン ４．０
プロピルパラベン ０．１
デヒドロ酢酸 ０．１
流動パラフィン ２．０
香料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ混合攪拌し混合した後、２００メッシュのタイラーメッシュの篩にかけ、得られた混合粉末を金型に打型してプレスドパウダーを得た。
【００８４】
実施例２２．リキッドファンデーション
［Ａ成分］ 部
ステアリン酸 ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール ２．０
セトステアリルアルコール ０．２
液状ラノリン ２．０
流動パラフィン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．５
プロピルパラベン ０．０５
［Ｂ成分］
製造例１０の発酵物溶液 １０．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．２
ベントナイト ０．５
プロピレングリコール ４．０
トリエタノールアミン １．１
メチルパラベン ０．１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン ８．０
タルク ４．０
着色顔料 適量
上記のＡ成分とＢ成分をそれぞれ加温した後混合攪拌した。これを再加温し、上記のＣ成分を添加して型に流し込み、室温になるまで攪拌してリキッドファンデーションを得た。
【００８５】
実施例２３．リキッドファンデーション
実施例２２のＢ成分中製造例１０の発酵物溶液に代えて製造例１１の発酵物溶液を用いるほかは実施例２２と同様にしてリキッドファンデーションを得た。
【００８６】
実施例２４．リキッドファンデーション
実施例２２のＢ成分中製造例１０の発酵物溶液に代えて製造例１２の発酵物溶液を用いるほかは実施例２２と同様にしてリキッドファンデーションを得た。
【００８７】
実施例２５．リキッドファンデーション
実施例２２のＢ成分中製造例１０の発酵物溶液に代えて製造例１３の発酵物溶液を用いるほかは実施例２２と同様にしてリキッドファンデーションを得た。
【００８８】
実施例２６．クリームファンデーション
［Ａ成分］ 部
ステアリン酸 ５．０
セタノール ２．０
モノステアリン酸グリセリル ３．０
流動パラフィン ５．０
スクワラン ３．０
ミリスチン酸イソプロピル ８．０
ポリオキシエチレン（２０）モノステアリン酸グリセリル ２．０
プロピルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
製造例２の発酵物溶液 ５．０
ソルビトール ３．０
１，３−ブチレングリコール ５．０
トリエタノールアミン １．５
メチルパラベン ０．１
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
酸化チタン ８．０
タルク ２．０
カオリン ５．０
ベントナイト １．０
着色顔料 適 量
［Ｄ成分］
香料 ０．３
Ｃ成分を混合し、粉砕機で粉砕した。Ｂ成分を混合し、これに粉砕したＣ成分を加え、コロイドミルで均一分散させた。Ａ成分及び均一分散させたＢ、Ｃ成分をそれぞれ８０℃に加温後、Ｂ、Ｃ成分にＡ成分を攪拌しながら加え、さらにヒスコトロン（５０００ｒｐｍ）で２分間ホモジナイズを行った。これを５０℃まで冷却した後、Ｄ成分を加えて攪拌混合し、さらに攪拌しながら３０℃以下まで冷却してクリームファンデーションを得た。
【００８９】
実施例２７．クリームファンデーション
実施例２６のＢ成分中製造例２の発酵物溶液に代えて製造例１５の発酵物溶液を用いるほかは実施例２６と同様にしてクリームファンデーションを得た。
【００９０】
実施例２８．ボディシャンプー
［Ａ成分］ 部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％） ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド ３．０
メチルパラベン ０．１
［Ｂ成分］
製造例１３の発酵物溶液 １０．０
１，３−ブチレングリコール ２．０
精製水 全量が１００部となる量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加え、攪拌を続けて室温まで冷却してボディシャンプーを得た。
【００９１】
実施例２９．石けん
［Ａ成分］ 部
硬化ヒマシ油 ２６．０
ヤシ油 １０．０
オリーブ油 ４．０
［Ｂ成分］
水酸化ナトリウム ６．０
砂糖 １０．０
グリセリン ５．０
製造例１４の発酵物粉末 ０．５
精製水 全量が１００部となる量
［Ｃ成分］
エタノール ２０．０
香料 適量
Ａ成分及びＢ成分をそれぞれ８０℃に加温して均一に溶解した後、Ａ成分にＢ成分を加えてケン化した。これを攪拌しながら５０℃まで冷却し、Ｃ成分を加えた。これを型に流し込み冷却した後、室温下で数日間乾燥させ、充分に乾燥したものを型から取りだして石けんを得た。
【００９２】
試験例１．線維芽細胞賦活作用（１）
ブラシカ属植物として白芥子を用い、これを乳酸菌で発酵して得られる発酵物について線維芽細胞賦活作用を調べた。又、比較のため白芥子の抽出物及び白芥子抽出物の酵素処理分解物についても同様の試験を実施した。
［試料］
(1) 製造例１で得られた発酵物溶液
(2) 製造例２で得られた発酵物溶液
(3) 製造例１０で得られた発酵物溶液
(4) 製造例１１で得られた発酵物溶液
(5) 比較製造例１で得られた抽出物溶液
(6) 比較製造例２で得られた酵素処理分解物溶液
【００９３】
［試験方法］
ヒト真皮由来線維芽細胞NB1RGB(Lot.040514(7)）を、０．５％NCS含有イーグル最少必須培地を入れた９６穴マイクロプレートに１×１０４ 個／穴播種し、３７℃,５．０％ＣＯ２の条件下に１日間プレ培養した後、培地に試料溶液を５．０％の濃度となるように添加し、同条件でさらに３日間培養した。次に、培地を除去し、０．０３％のＭＴＴを添加して３７℃に１時間保持した後、生成したホルマザンを酸性イソプロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダー(Model 450、バイオラッド社製）を用いて波長370−630nmでＭＴＴ値を測定した。
試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたＭＴＴ値に対する各試料添加時のＭＴＴ値の相対値を求め、線維芽細胞ＭＴＴ活性率（％）とした。
なお比較のため、試料溶液の代わりにグルコースを５０ｍＭ添加した場合（陽性対照）についても、同様の試験を行った。
【００９４】
［結果］
結果を表１に示す。
【表１】
【００９５】
表１に示す通り、比較製造例１の白芥子の抽出物溶液や比較製造例２の白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液に比べ、白芥子の抽出物溶液を乳酸菌で発酵させるかもしくは懸濁液を乳酸菌で発酵させた本発明の発酵物溶液（製造例２、製造例１１）の方がMTT活性が強く、又乳酸菌発酵の前或いは発酵と同時に蛋白分解酵素による加水分解処理を行った場合（製造例１、製造例１０）にも、同様に比較実施例１、２に比べてMTT活性が高い結果となった。
このことから、本発明の乳酸菌発酵処理により白芥子の線維芽細胞MTT活性 が高まることが明らかとなった。
【００９６】
試験例２．線維芽細胞賦活作用（２）
ブラシカ属植物として白芥子を用い、これを各種の菌で発酵して得られる発酵物について線維芽細胞賦活作用を調べた。又、比較のため白芥子の抽出物及び白芥子抽出物の酵素処理分解物についても同様の試験を実施した。
［試料］
(1) 製造例３で得られた発酵物溶液
(2) 製造例４で得られた発酵物溶液
(3) 製造例６で得られた発酵物溶液
(4) 製造例８で得られた発酵物溶液
(5) 比較製造例１で得られた抽出物溶液
(6) 比較製造例２で得られた酵素分解物溶液
【００９７】
［試験方法］
試験例１と同様にして行った。
【００９８】
［結果］
結果を表２に示す。
【表２】
【００９９】
表２に示すとおり、比較製造例１の白芥子の抽出物溶液や比較製造例２の白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液に比べ、白芥子の加水分解抽出物溶液を乳酸菌、麹菌、納豆菌或いは酵母で発酵させた製造例３、４、６、８の発酵物溶液の方がMTT活性が高い結果となった。
このことから、乳酸菌、麹菌、納豆菌或いは酵母による発酵処理により白芥子の線維芽細胞MTT活性 が高まること、又乳酸菌が特に好結果を与えることが明らかとなった。
【０１００】
試験例３．線維芽細胞賦活作用（３）
各種のブラシカ属植物を素材として用い、これを乳酸菌で発酵して得られる発酵物について線維芽細胞賦活作用を調べた。又、素材として用いた各植物の抽出物についても同様の試験を実施した。
［試料］
(1) 製造例１2で得られた発酵物溶液
(2) 製造例１4で得られた発酵物溶液
(3) 製造例１5で得られた発酵物溶液
(4) 比較製造例3で得られた抽出物溶液
(5) 比較製造例4で得られた抽出物溶液
(6) 比較製造例5で得られた抽出物溶液
【０１０１】
［試験方法］
試験例１と同様にして行った。
【０１０２】
［結果］
結果を表３に示す。
【表３】
【０１０３】
表３に示す通り、白芥の葉、黄芥子及び黒芥子のいずれの場合も、それらの抽出物溶液（比較製造例３、４、５）よりも抽出物発酵物溶液（製造例１２、１４、１５）の方がMTT活性が高い結果となった。
このことから、本発明の発酵処理によりブラシカ属植物の線維芽細胞MTT活性が高まることが明らかとなった。
【０１０４】
試験例４．B16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用（１）
ブラシカ属植物として白芥子を用い、これを乳酸菌で発酵して得られる発酵物についてB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を調べた。又、比較のため白芥子の抽出物及び白芥子抽出物酵素処理分解物についても同様の試験を実施した。
［試料］
試験例1に同じ。
【０１０５】
［試験方法］
培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（Lot.040409(4))を、９６穴マイクロプレートに８×１０３個／穴播種し、１０％FBS含有イーグル最小必須培地中、３７℃、５．０％ＣＯ２の条件下に１日間プレ培養した後、１０％FBS含有イーグル最小必須培地で試料溶液を２．５又は５．０％の濃度（溶液として）となるように希釈した液に置換し、同条件で３日間培養した。
次に培養液を除去し、界面活性剤（Triton X-100）と５mMＬ−ドーパ溶液を添加して３７℃で反応を行った後、マイクロプレートリーダー（Model 450、バイオラッド社製）を用い、波長４９０nmでドーパ値を測定した。
試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたドーパ値に対する各試料添加時のドーパ値の相対値を求め、チロシナーゼ活性率（％）とした。
なお、比較のため、試料溶液の代わりに、３mMのアルブチンを添加した場合（陽性対照）についても同様の試験を行った。
【０１０６】
［結果］
上記の試験で得られた結果を表４に示した。
【表４】
【０１０７】
表４に示す通り、白芥子の抽出液や懸濁液を乳酸菌で発酵させて得られる製造例２及び１１の発酵物溶液は、白芥子抽出物の酵素処理分解物（比較製造例２）や白芥子の抽出物溶液（比較製造例１）と比べて、それと同等もしくはそれよりまさるB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を発揮する。又、この傾向は、乳酸菌発酵前或いは発酵と同時に酵素加水分解処理を行って得られる発酵物（製造例１、１０）についても同様である。
【０１０８】
試験例５．B16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用（２）
ブラシカ属植物として白芥子を用い、これを各種の菌で発酵して得られる発酵物についてB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を調べた。又、比較のため白芥子の抽出物及び白芥子抽出物の酵素分解処理物についても同様の試験を実施した。
［試料］
試験例２に同じ。
【０１０９】
［試験方法］
試験例４と同様にして行った。
【０１１０】
［結果］
結果を表５に示す。
【表５】
【０１１１】
表５に示す通り、白芥子の加水分解抽出物溶液を乳酸菌、麹菌、納豆菌或いは酵母で発酵させた製造例３、４、６、８の発酵物溶液は、比較製造例１の白芥子の抽出物溶液や比較製造例２の白芥子抽出物の酵素処理分解物溶液に比べ、それらと同等もしくはより強いB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を示し、又特に乳酸菌の場合に好結果が得られた。
【０１１２】
試験例６．B16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用（３）
各種のブラシカ属植物を素材として用い、これを乳酸菌で発酵して得られる発酵物についてB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を調べた。又、素材として用いた各植物の抽出物についても同様の試験を実施した。
［試料］
試験例３に同じ。
【０１１３】
［試験方法］
試験例４と同様にして行った。
【０１１４】
［結果］
結果を表６に示す。
【表６】
【０１１５】
表６に示す通り、白芥の葉、黄芥子及び黒芥子のいずれの場合も、それらの抽出物発酵物溶液（製造例１２、１４、１５）は、抽出物溶液（比較製造例３、４、５）と同等以上のB16細胞内チロシナーゼ活性抑制作用を発揮する。
【０１１６】
試験例７．白色モルモットを用いた皮膚一次刺激性試験
［試料］
(1) 製造例２で得られた発酵物溶液（本発明試料）
(2) 製造例１４で得られた発酵物溶液（本発明試料）
(3) 比較製造例１の抽出物溶液（比較試料）
(4) 比較製造例２の酵素処理分解物溶液（比較試料）
(5) 比較製造例４の抽出物溶液（比較試料）
(6) 精製水（対照）
【０１１７】
［試験方法］
雄性白色モルモット（Clean Kwl：Hartley、４週齢、体重250〜300ｇ）３匹（GA、GB及びGC)を５日間予備飼育した後、一般状態及び皮膚に異常のないことを確認して試験に供した。
白色モルモットの背部の被毛を、電気バリカン及び電気シェーバーを用いて皮膚に損傷を与えないように刈毛及び剃毛し、１．５×１．５cmの試験部位を６ヶ所設定した。各試料をそれぞれ２００μL宛パッチテスト絆（鳥居薬品製）に塗布したものを５ヶ所の試験部位のいずれかに貼付し、テーピングテープでその上を覆った。貼付開始から２４時間後にパッチ絆を除去し、除去直後（貼付開始から２４時間後）、除去２４時間後（貼付開始から４８時間後） 及び除去４８時間後（貼付開始から７２時間後）に、試料貼付部位の紅斑・痂皮形成及び浮腫形成の程度を観察し、下記のドレイズ（Draize）の判定基準に従って評価した。
【０１１８】
（紅斑・浮腫形成）
スコア 皮膚の状態
０ ： 紅斑なし
１ ： 極く軽度の紅斑
２ ： 明らかな紅斑
３ ： 中程度から強い紅斑
４ ： 深紅色の強い紅斑に軽い痂皮形成
（浮腫形成）
スコア 皮膚の状態
０ ： 浮腫なし
１ ： 極く軽度の浮腫
２ ： 明らかな浮腫（周囲と明らかに区別可能）
３ ： 中程度の浮腫（約１mmの膨隆）
４ ： 強い浮腫（１mmを越える膨隆と貼付部周辺への広がり）
【０１１９】
［結果］
上記の方法により求めた紅斑・痂皮形成及び浮腫形成の判定値を表７に示した。
【表７】
【０１２０】
又、３匹のモルモットのそれぞれについて、各試験部位（試料貼付部位）に於ける貼付開始２４時間後及び７２時間後の紅斑・痂皮形成及び浮腫形成の判定値を合計し、合計値を２で割って得られた数値を一次刺激インデックス（Ｐ.Ｉ.Ｉ.)として表８に示した。
【０１２１】
【表８】
【０１２２】
さらに、表８に示した各試料のP . I . I .の平均値（３匹のモルモットの平均）から、下記のドレイズ（Draize）の方法による刺激物質の安全性評価区分に基づいて各試料の皮膚一次刺激性を評価した。
安全性評価区分 P . I . I .の平均値
非刺激性〜弱い刺激性 ０〜２
中程度の刺激 ３〜５
強い刺激性 ６〜８
【０１２３】
以上に示す通り、白芥子や黄芥子の抽出物溶液（比較製造例１、４）には、中程度の刺激性が見られたが、それらの抽出物溶液に発酵処理を施して得られた製造例２及び１４の発酵物溶液には、比較製造例２の酵素処理分解物溶液の場合と同様に、刺激性は全く認められなかった。
このことから、本発明の発酵処理によってブラシカ属植物抽出物の皮膚刺激性が低下することが明らかとなった。
【０１２４】
試験例８．保存安定性試験
［試料］
(1) 製造例２で得られた発酵物溶液（本発明試料）
(2) 製造例１４で得られた発酵物溶液（本発明試料）
(3) 比較製造例１の抽出物溶液（比較試料）
(4) 比較製造例２の酵素処理分解物溶液（比較試料）
(5) 比較製造例４の抽出物溶液（比較試料）
【０１２５】
［試験方法］
各試料４５mLをそれぞれ容量５０mLの硝子製スクリュー管（透明硝子瓶）に入れ、プラスチック製の蓋で栓をして４℃、２０℃及び４０℃の条件下に６カ月間保管し、その間の色調変化、析出物の有無及び匂いの変化を、毎日１回目視又は官能検査により観察した。６カ月の試験期間内であっても、上記の観察項目のいずれかに変化が認められた試料については不安定であると判断し、それ以降の観察を中止した。なお、試験は各試料のそれぞれ３ロットについて行った。
【０１２６】
［結果］
試験結果を表９及び表１０に示す。
【表９】
【０１２７】
【表１０】
【０１２８】
表９及び表１０に示す通り、比較製造例１、４の抽出物溶液では、１〜２ヶ月の保存観察中に、高温（４０℃）保存品の場合は着色が進み、又低温（４℃）保存品の場合は沈殿（オリ)の発生が見られたが、発酵処理を施して得られた製造例２及び１４の発酵物溶液については、比較製造例２の酵素処理分解物溶液の場合と同様に、６ヶ月の保存中、高温、室温及び低温のいずれの保管条件下に於いても全く変化は認められなかった。
このことから、本発明の発酵処理によってブラシカ属植物抽出物の保存安定性が非常に高くなることが明らかとなった。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アブラナ科ブラシカ属（Brassica）の植物を発酵させた発酵物を配合したことを特徴とする化粧料。
【請求項２】
発酵に用いる菌が、乳酸菌、麹菌、納豆菌及び酵母から選ばれたものである請求項１に記載の化粧料。
【請求項３】
発酵に用いる菌が乳酸菌である請求項２に記載の化粧料。
【請求項４】
アブラナ科ブラシカ属（Brassica）の植物として白芥（Brassica alba）を用いる請求項１に記載の化粧料。
【請求項５】
白芥の種子（白芥子）を用いる請求項４に記載の化粧料。
【請求項１】
アブラナ科ブラシカ属（Brassica）の植物を発酵させた発酵物を配合したことを特徴とする化粧料。
【請求項２】
発酵に用いる菌が、乳酸菌、麹菌、納豆菌及び酵母から選ばれたものである請求項１に記載の化粧料。
【請求項３】
発酵に用いる菌が乳酸菌である請求項２に記載の化粧料。
【請求項４】
アブラナ科ブラシカ属（Brassica）の植物として白芥（Brassica alba）を用いる請求項１に記載の化粧料。
【請求項５】
白芥の種子（白芥子）を用いる請求項４に記載の化粧料。
【公開番号】特開２００６−１０４１２９（Ｐ２００６−１０４１２９Ａ）
【公開日】平成１８年４月２０日（２００６．４．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２９３３０７（Ｐ２００４−２９３３０７）
【出願日】平成１６年１０月６日（２００４．１０．６）
【出願人】（０００１６２０２１）共栄化学工業株式会社 (42)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年４月２０日（２００６．４．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１０月６日（２００４．１０．６）
【出願人】（０００１６２０２１）共栄化学工業株式会社 (42)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]