徐放性ステロイド組成物
【要約書】抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物は、様々な大きさの結晶及び結晶複合体で含まれ、組成物中で大きさが約２０μｍよりも大きい結晶及び結晶複合体の割合は、大きさが約２０μｍ未満の結晶及び結晶複合体の割合よりも多い。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
参照による援用
本願は、２００４年２月４日出願オーストラリア仮出願番号２００４９００５４６号明細書、２００４年９月１０日出願オーストラリア仮出願番号２００４９０５１９５号明細書、２００４年１０月２５日出願オーストラリア仮出願番号２００４９０６１２５号明細書、及び２００５年１月２１日出願オーストラリア仮出願番号２００５９００２５３号明細書の恩恵を主張する。
先行出願、及び本願で示すメーカーの使用説明書、記載、製品規格、及び製品シートと一緒に本願に引用する全ての文献、又は本願に援用する全ての文献を、参照することにより本願に援用し、また、本願の実施に用いられうる。
【０００２】
本発明は、微粒子形状で存在し、結晶の大きさ及び分布が決定及び選択可能な抗炎症ステロイドによる治療が適した変性網膜症の治療に関する。特に、トリアムシノロン、特に、眼の炎症状態の治療に使用されるトリアムシノロンアセトニドの結晶の大きさの使用範囲に関する。
【背景技術】
【０００３】
本発明者は、特許文献１（Ｂｉｌｌｓｏｎ及びＰｅｎｆｏｌｄ）の共同発明者であり、参照することにより全体を本願に援用する。特許文献１は、患者に加齢黄斑変性の治療方法を提供し、好ましくは、硝子体内注射で患者へ投与することで、硝子体内にやや溶け難い抗炎症ステロイドの効果的な量を蓄積形式で投与することを含む。特許文献１に記載の方法で使用される好適なステロイドは、トリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）を含む。
【０００４】
本発明者は、また、脈絡膜血管新生を患う危険性が高いと特定された眼に、抗炎症ステロイドを硝子体内注射することで新血管形成を予防することを対象とした特許文献２（Ｇｉｌｌｉｅｓ、Ｐｅｎｆｏｌｄ及びＢｉｌｌｓｏｎ）の共同発明者である。特許文献２の方法で使用される好適なステロイドは、トリアムシノロンアセトニド及びフルオシノロンアセトニドを含む。
【０００５】
これらの特許明細書に提示される治療方法は、例えば、予備実験及びその後に続く臨床試験の両方に関して奨励されているが、変性網膜症、眼内血管新生、及び眼の炎症症状を含むがこれらに限定されない上記眼症状の治療方法を更に改善する必要性がある。
【０００６】
そのような望ましい改善の１つは、特に、特定の適応症及び病状を考慮して、抗炎症薬の治療効果を持続させることである。例えば、トリアムシノロンアセトニドを投与する場合、Ｍａｓｓｉｎ他は、ほとんどの場合、臨床的に有意な黄斑浮腫及び他の網膜疾患の治療において、トリアムシノロンアセトニドの常用量（４ｍｇ）の硝子体内注射の薬効が約３ヶ月後に減退することを見出した（例えば、非特許文献１）。Ｍａｓｓｉｎ他は、視力の測定に基づいてトリアムシノロンアセトニドの薬効を測定した。例えば、黄斑浮腫の場合に使用される光コヒーレンストモグラフィーは、１回硝子体内注射したトリアムシノロンアセトニドのピーク有効性が、該硝子体内注射約６週間後に達成され、その後、視力の低下、及び黄斑の肥厚が起こることを示す。他の研究は、１回の硝子体内注射として投与したトリアムシノロンアセトニドの平均排出半減期が硝子体切除していない患者で１８．６日であったことを示した（例えば、非特許文献２）。約５半減期後で全てのトリアムシノロンアセトニドが放出されると仮定すると、トリアムシノロンアセトニドは、硝子体切除を受けていない患者において、約３ヶ月（９３±２８日）間、硝子体液に測定可能な濃度で持続するはずである。トリアムシノロンアセトニドのような抗炎症ステロイドの３ヶ月滞留時間は、特定の病状に対しては適度であるが、多くの患者は、注射頻度がより少なければ、眼内注射に付随する合併症の危険性がより低いため、治療効果のある更に長い滞留時間の恩恵を受ける。
【０００７】
抗炎症薬の効果を持続させるために多くの方策が推進されている。使用されているアプローチの１つは、投与量を単に増加させる（上限２５ｍｇ）ことである（例えば、非特許文献３及び４。）これは、トリアムシノロンアセトニドの治療効果の持続時間を延長するが、また、合併症の発生率及び重症度も増加させ、特に、ステロイド誘導により眼内圧を亢進させる（例えば、非特許文献５）。
【０００８】
抗炎症薬効果の持続に使用可能な他の可能なアプローチは、他の硝子体内ステロイド製剤と効果的に使用される、徐放性賦形剤を使用することである。しかしながら、このアプローチの主な不利点は、複雑となることから、米国食品医薬品局等の管理機関からの徐放性賦形剤を配合した薬の最終的な認可が、遅れるかもしれないことである。
【０００９】
抗炎症薬の治療効果のある滞留時間を増大させる第３のアプローチは、粒径を変えることである。しかしながら、このアプローチは、眼病治療薬等の多くの薬には定着していない。実際に、粒径と硝子体内での治療効果のある滞留時間との相互関係を示さない薬もあるようである。例えば、最近の研究では、メジアン粒径が大きく異なる２つのトリアムシノロンアセトニド製剤（４μ及び１７．３μ）が、硝子体内で本質的に同じ薬物半減期を有することが報告されている（例えば、非特許文献６）。
【００１０】
治療効果のある滞留時間を調節するための薬の粒径の変更に関する他の問題は、特定の薬物粒子、特に粒径が０.５μｍ未満〜約１μｍの抗炎症ステロイドが、投与に用いる注射針の閉塞を生じる傾向があるという発明者の発見に関連する。一般的に、硝子体に薬を投与する場合、眼科医は、強膜等の眼の外側組織を突き通るために出来る限り細い（例えば、直径が小さい）針の使用を好む。直感的に、より小さな直径の針を使用することは、ステロイドを眼に注射する間により大きな粒子は針を詰まらせる傾向がある論理的予想を考慮して、注入されるより小さい薬物粒子、例えば小さい粒子の抗炎症ステロイド等を選択することにもつながる。しかしながら、発明者は、０.５μｍ未満〜約１μｍの粒子は「凝集」又は「圧縮」と言われるプロセスにより針を詰まらせる傾向があることを発見した。
【００１１】
従って、１回の硝子体内注射後、トリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイドの治療効果を持続する手段を開発する必要があり、もう一方で、そのような化合物の送達に付随する問題を改善する。
【００１２】
本願における文献の引用又は同定は、そのような文献が本発明の先行技術として有用であることの承認ではない。
【００１３】
【特許文献１】米国特許第５,７７０,５８９号明細書（米国特許出願第０８／５８６,７５０号明細書）
【特許文献２】オーストラリア特許第７６９,６７１号明細書（オーストラリア特許出願第４６７３２／９９号明細書）
【非特許文献１】Ｍａｓｓｉｎ Ｐ他（２００４）“Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ ｆｏｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｄｉｆｆｕｓｅ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ： ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ” Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ, １１１（２）:２１８−２４
【非特許文献２】Ｂｅｅｒ ＰＭ他（２００３）“Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ ａｆｔｅｒ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ” Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ, １１０（４）：６８１−６
【非特許文献３】Ｊｏｎａｓ ＪＢ他（２００４）“Ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｄｉｆｆｕｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ” Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ., １３８（１)：１５８−６０
【非特許文献４】Ｊｏｎａｓ ＪＢ他（２００４）“Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ” Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ, １３７（３）：５６０−２
【非特許文献５】Ｄｅｇｅｎｒｉｎｇ ＲＦ他（２００４）“Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ｆｏｒ ｄｉｆｆｕｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ” Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｅ., １０１（３）：２５１−４
【非特許文献６】Ｒｏｂｉｎｓｏｎ他“Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ Ａｃｅｔｏｎｉｄｅ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｆｒｅｅ （ＴＡＣ‐ＰＦ） Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ,” Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ, （ＡＲＶＯ）, ２００４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
先行技術に付随する問題に対応するために行った研究で、トリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイド薬が、微粉化結晶として調製される場合に、しばしば融着、集合、又は凝集して結晶複合体の形状になることが明らかになった。結晶複合体は、外見は大きい粒子だが、実際には小さな結晶からなる（例えば、図１参照）。更に、結晶複合体の溶解速度は、小さな結晶の溶解速度と同等である。従って、本発明の１つの原理によると、治療製剤中の薬の総濃度を増加させずに、トリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイドを硝子体内で治療効果のある滞留時間を増大させる鍵は、抗炎症ステロイドのより大きな結晶の割合を増加させると同時にステロイドの結晶複合体の割合を減少させることである。従って、トリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイド等の溶解速度は、治療組成物すなわち製剤中のより大きな薬物結晶の相対的な存在比を増加させることで減速（即ち、より長い溶解時間）することができる。より大きな薬物結晶は、結晶複合体と比較して体積に対する表面積がより小さく、そのようなものは溶解速度が遅い。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の第１の態様によると、様々な大きさの結晶及び結晶複合体の形状を含む抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物を提供し、組成物中で大きさが約２０μｍよりも大きい結晶及び結晶複合体の割合は、大きさが約２０μｍ未満の結晶及び結晶複合体の割合よりも多い。好ましくは、組成物は、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶を含む。好ましくは、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合は、同様の大きさの結晶複合体の割合よりも多い。
【００１６】
本発明の第２の態様によると、様々な大きさの結晶及び結晶複合体の形状で含まれる抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物を提供し、結晶は約０.５μｍ〜約４０μｍ、及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさに凝集する。好ましくは、結晶は、約０.５μｍ〜約４０μｍ、及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさで結晶複合体よりも凝集する。更により好ましくは、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合は、大きさが約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶の割合よりも多い。
【００１７】
本発明の第３の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法を提供し、該方法は、結晶複合体と比較して、組成物中の結晶の濃度を増加する工程を含む。
【００１８】
本発明の第４の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法を提供し、該方法は、特定のトリアムシノロン製剤中で約５０μｍ〜約６００μｍの結晶複合体の割合と比較して、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合を増加させる工程を含む。
【００１９】
本発明の第５の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容される組成物の調製方法を提供し、該方法は、結晶及び結晶複合体を含むトリアムシノロン組成物から約５０μｍ〜約６００μｍの大きさのトリアムシノロン結晶を選択する工程を含む。該方法は、眼科的に許容されるキャリア、希釈剤及び／又は賦形剤に結晶を前記範囲で添加する工程を更に含む。
【００２０】
本発明の第６の態様によると、本発明の第３、４又は５の態様に記載される方法のいずれかにより調製される薬学的に許容される組成物を提供する。
【００２１】
本発明の第７の態様によると、治療を必要とする患者の眼の炎症症状の治療方法を提供し、該方法は少なくとも１つの眼組織に又はその傍に、ここで開示される薬学的に許容される組成物、又はここで開示される方法により調製される薬学的に許容される組成物を投与する工程を含む。
【００２２】
好ましくは、抗炎症ステロイドは、トリアムシノロン類製剤の一つである。本発明の非常に好適な形態において、使用されるトリアムシノロン製剤は、トリアムシノロンアセトニドである。更に、明細書は、本発明の「活性」化合物又は「治療」化合物として、本発明のトリアムシノロンアセトニドを含む本発明の抗炎症ステロイドに言及する。本発明の薬学的に許容される組成物は、好ましくは、硝子体内注射、又は局所適用により眼に送達される。しかしながら、送達形態、いわゆる、送達ルート又は方法は、硝子体内注射、又は局所適用に制限されず、むしろ、当業者に公知の又は使用される適切な方法を含むことが理解されよう。
【００２３】
本発明の他の目的、特徴、及び利点は、添付の請求項の観点から検討する場合、詳細については上記及び下記記載より検討されるとおりである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
総則
本明細書に記載の発明が、具体的に記載するもの以外の変形及び変更を受けることが当業者に理解されよう。
本発明は、全ての変形及び変更を含む。本発明は、また、明細書に参照される、又は示される全ての工程、特徴、組成物及び化合物を、個別に又は集団で、並びに工程又は特徴のいずれか及び全ての組合せ、又はいずれか２つ以上を含む。
この本文で引用する各文献、引例、特許出願、又は特許は、参照することにより全てが明示的に援用され、これは、本文の１部として読者に読まれ、及び検討されるべきことを意味する。この本文で引用する各文献、引例、特許出願、又は特許は、単に簡潔性の理由により繰り返されない。
本発明は、本明細書に記載される例証の目的のためだけに示される詳細な実施形態により範囲を制限されない。機能的に同等の製品、組成物、及び方法は、明らかに本明細書に記載される発明の範囲内である。
本明細書に記載される発明は、１つ以上の値の範囲（例えば、大きさ、濃度等）を含む。値の範囲は、範囲内の全ての値を含むと理解され、範囲を規定する値、及び同じ又は範囲の境界を規定する値に隣接値として実質的に同じ結果をもたらす範囲付近の値を含む。
この明細書を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む」又は「含んでいる」等の派生語は、記載される実体又は実体の群を含むことを意味するが、しかし、他の実体又は他の実体の群を除外するものではない。この開示において、及び特に請求項及び／又は段落において、「含む」及びその派生語は、米国特許法に帰属する意味であることに留意すべきである（例えば、「有する」及びその派生語を意味する。「本質的に…からなる」及びその派生語は、米国特許法に帰属する意味である。例えば、明らかには引用されていない要素を許容するが、先行技術に見られる、又は本発明の基本的な、若しくは新規の特徴に影響を及ぼす要素は除外する。
ここで使用される選択された用語の他の定義は、本発明の明細書内に見出され、明細書を通して適用される。定義さていなければ、ここで使用される他の全ての科学的及び技術的用語は、本発明が属する当業者に一般的に理解されるような同じ意味を有する。
【００２５】
本発明は、特定の抗炎症ステロイド製剤中で結晶複合体を除外すると同時に、結晶の大きさを増大させることで活性化合物の作用部位での薬物暴露の総量を変えずに抗炎症ステロイドのほぼ平らな溶解曲線が実現できる予想外の発見に基づく。結晶は複合体とは異なり、眼内でより長く持続する活性化合物源を提供する。
【００２６】
本発明の第１の態様によると、様々な大きさの結晶及び結晶複合体の形状で含まれるトリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物であって、該組成物中で大きさが約２０μｍよりも大きい結晶及び結晶複合体の割合は、大きさが約２０μｍ未満の結晶及び結晶複合体の割合よりも多い組成物を提供する。好ましくは、組成物は、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶を含む。好ましくは、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合は、同様の大きさの結晶複合体の割合よりも多い。
【００２７】
本発明の第２の態様によると、様々な大きさの結晶及び結晶複合体の形状で含まれるトリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物であって、結晶は約０.５μｍ〜約４０μｍ、及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさに凝集する組成物を提供する。好ましくは、結晶は、約０．５μｍ〜約４０μｍ、及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさで結晶複合体よりも凝集する。更により好ましくは、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合は、大きさが約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶の割合よりも多い。
【００２８】
本明細書で使用する「結晶複合体」とは、集合、融着、又は何か他の方法で互いに結合する、結晶及び非結晶を含む。この語句は、注射針（２７ゲージ針等、しかしこれに限定されない）通過後に集合したままの複合体を含む。光散乱測定を参照すると（表６、表７、図３Ａ、図３Ｂ、図４及び図５）、結晶の大きさが、約０.５μｍ（ケナコルト（Ｒ）Ａ４０中）〜約６００μｍ（ＮｅｗＣｈｅｍ非微粉化物質中）の範囲であることが分かる。
【００２９】
本発明の文脈において、本明細書で使用する「結晶」は、その通常の意味として特徴的な内部構造を有し、且つ一定の特徴的な角度で交差する対称的に配列された平面に囲まれる固体を有する。通常、結晶は、より小さな結晶の複合体にはならない。しかしながら、単一の大結晶は、大結晶に付着する非常により小さな結晶を有し得る。結晶がそのような形態で含まれる場合には、結晶複合体とは見なされない。図６及び図７は、例えば、走査電子顕微鏡検査により、結晶の大きさは様々であるが１２０μｍよりも大きい結晶が観察できることを示す（図６の底辺の１１個の点は１２０μｍを示し、及び図７の底辺の１１個の点は１２０μｍを示す）。
【００３０】
結晶は、特定の大きさの範囲で結晶含有量を増やすようにされた製剤中で凝集すると考えられており、これは、特定の大きさの結晶を選択した後で、他の製剤とそれら結晶を組み合わせることにより、あるいは製剤としてそれら結晶を使用することにより達成される。特定の大きさの結晶の選択方法は当業者により理解される。
【００３１】
上記範囲内での結晶の大きさは、治療対象の眼組織中又はその傍での、必要とされる抗炎症ステロイドの溶解時間及び作用寿命に応じて変わる。好ましくは、大粒径の結晶の範囲は、約５０μｍ〜約６００μｍ、約６０μｍ〜約５００μｍ、約７０μｍ〜約４００μｍ、約８０μｍ〜約３００μｍ、約９０μｍ〜約２５０μｍ、又は約１００μｍ〜約２００μｍで変わる。小粒径範囲の結晶を含む場合、該結晶の大きさは、約１μｍ〜約４０μｍ、約５μｍ〜約３５μｍ、約１０μｍ〜約３０μｍ、約１５μｍ〜約２５μｍ、又は約２０μｍ〜約２２μｍで変わる。
【００３２】
本発明で使用される抗炎症薬ステロイドは、本明細書に記載の範囲の大きさの結晶、又は結晶複合体のいずれかで調製可能であり、抗炎症薬作用を有し、また眼領域の炎症性疾患の治療での使用に適している。好適な抗炎症ステロイドは、例えば、下記式に示す１１−置換−１６α,１７α−置換メチレンジオキシステロイドを含む：
【化９】
式中、
【化１０】
は、
【化１１】
又は、
【化１２】
であり、
Ｒ１及びＲ２は、水素、又はアルキルであり、
【化１３】
は、
【化１４】
であり、
Ｒ３は、メチル、ヒドロキシメチル、又はメチルアミノアルキレンカルボニルオキシメチル、アルキルカルボニルオキシメチル、又はフェニルアミノアルキレンカルボニルオキシメチルであり、
Ｒ４は、アルカノイルであり、Ｘはハロゲンである。
【００３３】
より好ましくは、下記式に示す化合物である：
【化１５】
Ｒ３は、ヒドロキシメチル、フェニルカルボニルアミノイソプロピルカルボニルオキシメチル、又は、２,２−ジメチルプロピルカルボニルオキシメチルである。
【００３４】
好適なステロイドの１つは、結晶構造の９−フルオロ−１１,２１−ジヒドロキシ−１６,１７−［１−メチルエチリジンビス（オキシ）］プレグナ−１,４−ジエン−３,２０−ジオンである。
【化１６】
この化合物は、一般名であるトリアムシノロンアセトニドとしてもまた知られており、公知の方法で好適に調製される。例えば、Ｆｒｉｅｄ他、（１９５８）,Ｊ. Ａｍ. Ｃｈｅｍ. Ｓｏｃ. ８０,２３３８ （１９５８）、米国特許第２,９９０,４０１号明細書、米国特許第３,０４８,５８１号明細書、又は米国特許第３,０３５,０５０号明細書に開示され、これらはそれぞれ参照することにより本願に明確に援用する。
【００３５】
本発明の活性化合物（即ち、本明細書に記載の抗炎症ステロイド）は、結晶複合体よりもむしろ結晶形状で含まれることを確実にするために、好ましくは、複合体を本発明の組成物の調製よりも前に分離させる。抗炎症薬ステロイドの結晶複合体は、超音波破砕、及び微粉化（３０μｍ未満の粒子と定義する）等の当技術分野で周知の様々な方法により分離される。超音波破砕は、短期間（例えば、３０秒）使用する場合に結晶複合体を破壊し、又はより長期間使用する場合に結晶を破砕するために使用される。結晶の大きさは、更に、再結晶化／再結晶成長、γ線照射、及び高温（例えば、加圧滅菌）により影響される。粒子又は結晶は、また、不活性キャリアの密度勾配遠心分離、選択ろ過、又は乾燥篩分け等の当技術で公知の方法、又は微細物質を分割する当技術の他の方法により分画される。
【００３６】
約０.５μｍ未満〜約１μｍの粒子及び結晶は、組成物が注射により送達される場合に、凝集又は圧縮作用により針を詰まらせる傾向があることが分かっている。更に、これらのより小さな粒子は、硝子体内に迅速に溶解するため、より大きな粒子よりもより迅速に眼内環境から消失する。その一方、約１μｍ〜約１２μｍの粒子は、残留効果を与えるために十分な期間眼内環境に残り、また、注射器から送達される場合に針が詰まる傾向がない。
【００３７】
結晶が、約０.５μｍ〜約４０μｍ及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさで凝集する場合、組成物の特性は、大粒径範囲の粒子の体積あたりの相対的重量を小粒径範囲の粒子の体積あたりの重量に対して増減させることで変更される。組成物の特性の変更により、当業者が治療する病気、及び治療に必要とされる寿命に応じて重要である硝子体内での様々な滞留時間の組成物を開発可能である。例えば、大粒径範囲の結晶に対する、小粒径範囲の結晶の体積あたりの重量の比は、約１：１,１：２,２：１,１：３,３：１,２：３,３：２,１：４,４：１,３：４,４：３,１：５,５：１,２：５,５：２,３：５,５：３,４：５,５：４,１：６,６：１,５：６,６：５である。
【００３８】
本発明を別の方法で考察すると、小粒径範囲の粒子又は結晶の割合は、１％（ｗ／ｖ）,５％（ｗ／ｖ）,１０％（ｗ／ｖ）,１５％（ｗ／ｖ）,２０％（ｗ／ｖ）,２５％（ｗ／ｖ）,３０％（ｗ／ｖ）,３５％（ｗ／ｖ）,４０％（ｗ／ｖ）,４５％（ｗ／ｖ）,５０％（ｗ／ｖ）,５５％（ｗ／ｖ）,６０％（ｗ／ｖ）,６５％（ｗ／ｖ）,７０％（ｗ／ｖ）,７５％（ｗ／ｖ）,８０％（ｗ／ｖ）,８５％（ｗ／ｖ）,９０％（ｗ／ｖ）,９５％（ｗ／ｖ）,９９％（ｗ／ｖ）よりも大きく、大粒径範囲はその逆数である。同様に、大粒径範囲の粒子又は結晶の割合は、１％（ｗ／ｖ）,５％（ｗ／ｖ）,１０％（ｗ／ｖ）,１５％（ｗ／ｖ）,２０％（ｗ／ｖ）,２５％（ｗ／ｖ）,３０％（ｗ／ｖ）,３５％（ｗ／ｖ）,４０％（ｗ／ｖ）,４５％（ｗ／ｖ）,５０％（ｗ／ｖ）,５５％（ｗ／ｖ）,６０％（ｗ／ｖ）,６５％（ｗ／ｖ）,７０％（ｗ／ｖ）,７５％（ｗ／ｖ）,８０％（ｗ／ｖ）,８５％（ｗ／ｖ）,９０％（ｗ／ｖ）,９５％（ｗ／ｖ）,９９％（ｗ／ｖ）よりも大きく、小粒径範囲はその逆数である。
【００３９】
約０.５μｍ〜約４０μｍ分画と比較して約５０μｍ〜約６００μｍ分画の結晶の分布に応じて、製剤の滞留時間が実質的に向上可能である。ここで使用する滞留時間とは、治療組成物が病気に対する治療効果を達成可能である治療に使用される時間を示す。
【００４０】
一般的に、約５０μｍ〜約６００μｍ分画の結晶の割合が増加するほど、滞留時間が改善されるが、長い滞留時間と治療効果の達成を上手く両立する必要がある。この両立は、眼内で必要とされる抗炎症薬効果の寿命及び病気によって異なる。本発明により調製される製剤は、好ましくは、少なくとも２ヶ月を超える滞留時間を有する。より好ましくは、滞留時間は３ヶ月よりも長く、４,５,６,７〜１２ヶ月よりも長い滞留時間が達成可能であり、非常に好ましい。
【００４１】
実例として、本発明の組成物は、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を２５％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を７５％（ｗ／ｖ）含む。組成物は、好ましくは、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２０％（ｗ／ｖ）及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を約８０％（ｗ／ｖ）含む。これらの割合とすることで、抗炎症ステロイドのほぼ均一な溶解曲線の長期間持続及び滞留時間の増加が続く活性化合物の初期投与が可能となる。あるいは、約５０％（ｗ／ｖ）の約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶と約５０％（ｗ／ｖ）の約５０μｍ〜約６００μｍ結晶との組成物、又は約７５％（ｗ／ｖ）の約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶と約２５％（ｗ／ｖ）の約５０μｍ〜約６００μｍ結晶との組成物が提供されうる。
【００４２】
好適な形態は、本発明は、約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶を約２５％（ｗ／ｖ）と約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）含む。好ましくは、組成物は、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２０％（ｗ／ｖ）と約１００μｍ〜約２００μｍの結晶を約８０％（ｗ／ｖ）含む。また、約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶を約５０％（ｗ／ｖ）と約１００μｍ〜約２００μｍの結晶を約５０％（ｗ／ｖ）含むか、あるいは、約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶を約７５％（ｗ／ｖ）と約１００μｍ〜約２００μｍの結晶を約２５％（ｗ／ｖ）含む。
【００４３】
本発明の抗炎症ステロイドの薬学的に許容される塩の結晶もまた検討される。本明細書に記載の抗炎症ステロイドの薬学的に許容される塩は、例えば、薬学的に許容される酸と一緒に形成される無毒性酸付加塩が挙げられる。例えば、これらに限定されないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸及びリン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、グルコナート、乳酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、及び酒石酸塩等が挙げられる。本発明の使用に適切な抗炎症ステロイドは、また、基剤と一緒に薬学的に許容される金属塩、特に、無毒性アルカリ金属塩も含む。例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４４】
本発明は、様々な大きさの結晶状で存在する単一抗炎症ステロイド組成物を投与するものとして記載されるが、一方で、該結晶は、約０.５μｍ〜約４０μｍ及び約５０μｍ〜約６００μｍの混合物、又は約０.５μｍ〜約４０μｍ及び約１００μｍ〜約２００μｍの混合物に存在するが、これらに限定されると理解すべきではない。２つ以上の抗炎症ステロイド、又は抗炎症ステロイド及び他の活性剤の組合せもまた、本発明の方法で使用される。このような性質の組合せは、公知の方法で調製可能である。同様に、本発明は、小粒径範囲のステロイドが大粒径範囲で使用されるステロイドと異なる、ステロイドの組合せを含む。
【００４５】
本発明の第３の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法を提供し、該方法は、結晶複合体と比較して、組成物中の結晶の濃度を増加する工程を含む。
【００４６】
本発明の第４の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法を提供し、該方法は、特定のトリアムシノロン製剤中で約５０μｍ〜約６００μｍの結晶複合体の割合と比較して、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合を増加させる工程を含む。
【００４７】
本発明の第５の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容される組成物の調製方法を提供し、該方法は、結晶及び結晶複合体のどちらも含むトリアムシノロン組成物から約５０μｍ〜約６００μｍの大きさのトリアムシノロン結晶を選択する工程を含む。また、該方法は、結晶及び結晶複合体のどちらも含むトリアムシノロン組成物から約１００μｍ〜約２００μｍの大きさのトリアムシノロン結晶を選択する工程を含む。該方法は、眼科的に許容されるキャリア、希釈剤及び／又は賦形剤に結晶を前記範囲で添加する工程を更に含む。
【００４８】
本発明の第６の態様によると、本発明の第３、４又は５の態様に記載される方法のいずれかにより調製される薬学的に許容される組成物を提供する。
【００４９】
本発明の薬学的組成物で使用される的確な製剤は、広範囲の商業及び科学的基準により変わる。好ましくは、薬学的組成物への添加剤は、硝子体内蓄積注射として薬学的組成物の送達に適している。
【００５０】
組成物は、少なくとも薬学的に許容される添加剤（希釈剤、キャリア、添加剤、賦形剤、又は無毒、非医薬、非免疫抗原性の安定薬等）も更に含む。好ましくは、薬学的に許容される添加剤は眼科的に許容され、好ましくは硝子体に適合し、及び眼内に視力を損なう残留物を残すべきではない。組成物中で使用される薬学的に許容される添加剤は、好ましくは、硝子体内蓄積注射として薬学的組成物の送達に適している。
【００５１】
薬学的に許容される組成物の製剤に使用される希釈剤は、好ましくは、組成物の生物活性に過度に作用しないように選択される。注射可能な製剤に特に有効である希釈剤は、例えば、水、様々な塩類溶液、有機又は無機塩溶液、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンクス液が挙げられる。
【００５２】
更に、薬学的組成物は、他の緩衝剤、希釈剤、キャリア、抗原性補強剤、又は賦形剤等の添加剤等が挙げられる。眼に適用可能な薬理学的に許容される緩衝剤が使用され、例えば、トリス緩衝液、又はリン酸塩緩衝液が挙げられる。他の作用薬が様々な目的の製剤に用いられる。例えば、緩衝剤、防腐剤、補助溶剤、界面活性剤、油、湿潤剤、緩和剤、安定剤、又は抗酸化剤が用いられる。使用する水溶性防腐剤は、亜硫酸水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、エチルアルコール、メチルパラベン、ポリビニルアルコール、ベンジルアルコール、及びフェニルエチルアルコール等が挙げられる。これらの作用薬の量は、それぞれ約０.００１重量％〜約５重量％、及び好ましくは約０.０１重量％〜約２重量％で含まれる。使用する適切な水溶性緩衝剤は、米国食品医薬品局によって認可されている炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウム等が所望の投与経路に対して使用される。これらの作用薬は、システムのｐＨを約２〜約９、及び好ましくは約４〜約８に維持するために十分な量で含まれる。該緩衝剤は、重量対重量百分率に基づいて組成物全体の約５％程度である。電解液として塩化ナトリウム及び塩化カリウム等もまた製剤に含まれるが、これらに限定されない。
【００５３】
いくつかの既存製品、例えば、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０等に提供される薬学的に許容される添加剤又は希釈剤としては、ベンジルアルコール等の溶媒等が挙げられ、これらは硝子体内で粒子をより速く消失させることが分かっている。これにより意外にも抗炎症ステロイドの寿命及び効果が、市販の組成物である希釈剤により弱まることが発見された。本発明は、意外にもまた、粒子又は結晶が生理食塩水又は同様の溶液に懸濁されれば、硝子体内での溶解が更に延長されることも分かった。平衡塩類溶液は、生理食塩水の代わりに使用し得る。本発明の実施に適切な様々な平衡塩類溶液は、当業者に周知である。例えば、乳酸リンゲル液の媒体が使用される。平衡塩類溶液の選択で、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０に比べて活性剤の即効性を高めることができる。希釈剤の選択に関する結果は、実施例４に詳細を示す。本発明の送達のための希釈剤の選択は、賦形剤の潜在的な毒性及び／又は炎症性を避けるためにもまた選択される。
【００５４】
従って、本発明は、また、抗炎症ステロイドが懸濁する希釈剤も対象とする。好ましくは、希釈剤は、平衡塩類溶液である。最も好ましくは、平衡塩類溶液が乳酸リンゲル液の媒体である。
【００５５】
本発明の第７の態様によると、治療を必要とする患者の眼の炎症症状の治療方法を提供し、該方法は少なくとも１つの眼組織に又はその傍に、ここで開示される薬学的に許容される組成物、又は、ここで開示される方法により調製される薬学的に許容される組成物に投与する工程を含む。
【００５６】
「治療」又は「治療する」という用語は、本発明の対象とする眼の炎症症状の予防、遅延、停止、改善を示すためにここでは同意語として使用される。
【００５７】
ここで使用される「眼の炎症症状」とは、眼の障害又は病態、例えば、病状の構成要素として炎症に起因する、又は炎症を有する健全な状態の動物に正常でない眼疾患を示す。眼疾患は、眼の血管新生、網膜疾患（糖尿病性網膜症、鎌状赤血球性網膜症、未熟児網膜症、黄斑変性（例えば、若年性黄斑変性、新生血管黄斑変性、加齢性黄斑変性））、虹彩ルベオーシス、炎症性疾患、慢性ブドウ膜を含む炎前部及び後部ブドウ膜炎、新生物（網膜芽細胞腫、偽神経膠腫）、フックス虹彩毛様体炎、血管新生緑内障、角膜血管新生（炎症性、移植による）、血管疾患の後遺症（網膜虚血、脈絡膜血管機能不全、脈絡膜血栓症（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、頸動脈虚血)、脈絡膜血管新生、翼状片、眼神経の新生血管形成、眼球穿通又は眼球打撲による新生血管形成及び近視性網膜症のような滲出性網膜症、様々な原因論から生じる類嚢胞黄斑浮腫、滲出性の黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、中心静脈閉塞、分枝静脈閉塞、及び網膜のレーザー治療に起因する黄斑浮腫等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５８】
各必要用量（即ち、各用量及び投与頻度）は疾病の重症度、投与方法、患者の反応、患者の健康状態及び患者の病歴により変わる。影響のある化合物の有効量が本発明の方法で好適に用いられる。本発明により使用される化合物の用量は、化合物、組成物の製剤、投与方法、及び治療条件により変わる。眼球外及び眼球内製剤（侵襲的な器具で送達される）に対して、治療組成物は、標的となる眼の区画（例えば、網膜疾患の治療に対する後眼房）内で最終濃度が約０.０５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌに達するような高濃度で送達される。
【００５９】
硝子体内注射によりステロイドを投与する場合に、抗炎症ステロイドを注射用に体積を最小化するために凝集させなければならない。好ましくは、抗炎症ステロイドが眼内送達により投与される場合に、治療製剤の最終濃度は約０.０５ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌである。より好ましくは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約７ｍｇ／ｍｌ、約１.５ｍｇ／ｍｌ〜約６ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、又は約３ｍｇ／ｍｌ〜約４ｍｇ／ｍｌである。実例として、抗炎症ステロイドは、約４ｍｇ／ｍｌで硝子体内に沈殿する。この適量範囲で治療する病状に投与される。
【００６０】
本発明の方法を使用して、薬学的に許容される製剤は、少なくとも眼の炎症状態の部位に治療薬を送達する方法により患者に投与される。好ましくは、組成物は、正確な投与量の単回投与に適切な単位投与形態で投与される。好適な送達方法は、眼内送達であるが、本発明は、眼内送達に限定されない。本発明の実施に適切な投与経路は、また、局所適用、カニューレによる送達、眼窩底への眼窩周囲注射（テノン嚢下を含む）、結膜下注射、縫合有無での眼内への移植（例えば、水晶体嚢への移植）、及び硝子体内注射を含むが、これらに限定されない。１つ以上のステロイド、又は付加的な活性剤が投与されれば、投与は、例えば、硝子体内注射による第１ステロイド、及び局所適用による第２ステロイドの送達等の投与方法の組合せによる。
【００６１】
組成物の投与は、好ましくは眼内注射によるが、十分な量のステロイドが治療する組織に接触すれば、他の投与様式が効果的でありうる。眼内注射は、ステロイドを含む浸透組成物を使用する場合に、硝子体内注射、眼房注射、結膜下注射若しくはテノン嚢下注射等の眼の外層への注射、又は軟膏、ゲル、若しくは点眼液として角膜への局所適用により効果をもたらす。好ましくは、眼内注射は硝子体内注射であり、好ましくは、セルフシール２１〜３０ゲージ針、又は他の適切な目盛りつき送達装置による。眼内注射は、セルフシール針で毛様体扁平部を通して注射される。好ましくは、２７ゲージ針がこの目的に使用される。
【００６２】
本発明の実施に使用される注射器は、２１〜３０ゲージ針（例えば、２３,２４,２５,２６又は２７ゲージ針）を収容可能な適切な注射器であり、好ましくは、小容量であり、例えば、１.５ｍＬ、又はより好ましくは０.５ｍＬである。針、及び注射器は、針が注射器から取外しできるタイプが可能であるが、器具は単一の注射針構造が好ましい。これは、注射器から針が離脱する可能性を明らかに制限する。器具は、また、好ましくは、改ざん防止である。従って、本発明のこの組成物は、投与準備が整っている事前に準備した注射器に単回投与量の形態で提供される。
【００６３】
適切な様式の注射器は、ユニジェクト（Ｒ）（ベクトン・ディッキンソン株式会社）の名で販売されている。この様式の注射器では、プランジャーよりはむしろ針を供給する柔軟なリザーバ側に圧力を印加することで、物質が針を通って眼内に注入される。名前が示唆するように、リザーバ及び針の構成は、単一ユニットを形成する。
【００６４】
本発明の治療頻度は、治療する疾病、抗炎症ステロイドの送達可能な濃度、及び送達方法等を含むが、これらに限定されない様々な要因によって決定する。治療頻度に影響する他の要因は、また患者の健康及び病歴も含む。硝子体内注射により抗炎症ステロイドが送達されれば、投薬頻度は、毎月又は３ヶ月毎である。投薬頻度は、３ヶ月毎よりも少ないことが好ましい。前回投与したステロイド物質が目で観て分解した場合に投与して、投薬頻度を目視によって決定してもよい。しかしながら、ステロイド物質は目に見えて分解するが、眼内で溶解した治療レベルで存在しうるため、この計量には注意するべきである。治療結果が達成されると、薬を漸減、又は投与中止可能となる。時々、副作用が治療中止の根拠となる。一般的に、化合物の有効量とは、自覚症状を取り除く、あるいは、臨床医学者若しくは他の有資格のオブザーバーによる客観的に特定可能な改善を提供するものである。
【００６５】
硝子体内注射は、当技術分野で周知の様々な方法で達成される。例えば、眼を、ベタジン（Ｒ）等の滅菌剤で洗浄して、眼内でステロイド結晶が腹側表面に向かって後極に定着する位置に細いゲージ針（例えば、２７ゲージ）を用いてステロイドを適切なキャリアに注射する。注射前に眼に陽圧をかけて、眼を注射に備える必要がある。症例によっては、穿刺術が必要である。局部麻酔、又は全身麻酔が必要である。
【００６６】
本発明は、また、様々な大きさの結晶形状で含まれる抗炎症ステロイドの薬学的に許容される組成物、又はその薬学的に許容される塩を提供し、結晶は、ここで記載される大きさの範囲の混合物で、生体適合性及び生分解性マトリックスで、例えば、局所形式で含まれる。
【００６７】
抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩の局所適用は、ｉｎ−ｓｉｔｕゲル化可能な水性組成物である。該組成物は、眼、又は眼の外部で涙液と接触することでゲル化を促進する効果的な濃度でゲル化剤を含む。適切なゲル化剤は、エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのテトラ置換エチレンジアミンブロック共重合体（例えば、ポロキサミン）等の熱硬化性重合体、ポリカルボフィル、及びジェラン、カラギナン（例えば、κ-カラギナン及びι-カラギナン）、キトサン、及びアルギン酸ゴム等の多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
ここで使用される「ｉｎ−ｓｉｔｕゲル化可能な」とは、眼と、又は眼の外部で涙液との接触でゲルを形成する低粘性の液体だけではなく、また、眼に投与すると実質的に増加した粘度、又はゲル剛性を示す半液体及びチキソトロピーゲルなどのより粘性のある液体も含む。実に、本発明の組成物をゲルとして製剤することは、例えば、反射性まばたきでの流涙等による、投与直後に組成物の損失を最低化するために都合が良い。投与することで更に粘度の増加、又はゲル剛性を示す組成物が好まれるが、最初のゲルが涙液の排液による損失に十分な耐性を示して、ここで特定した効果的な滞留時間を提供すれば、絶対に必要なものではない。
【００６９】
眼科疾患の治療に対する局所製剤を調製するために、治療効果をもたらす量の抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩が、当技術分野で公知の眼科用賦形剤中に含有される。投与される治療化合物の量、及び局所製剤中の化合物濃度は、希釈剤、選択される送達システム又は器具、患者の病態、副作用及び製剤中の化合物の安定性によって決定される。よって、医師は、本願で問題となる患者、又は同様の患者における臨床経験により、治療化合物の適切な濃度を含む適切な製剤を用い、及び投与する製剤の量を選択する。
【００７０】
本発明の方法は、単一、または光ダイナミック療法、レーザー治療、又は１つ以上の生物学的又は薬学的治療等の１つ以上の他の治療との組合せで行われる。
【００７１】
網膜のレーザー治療が示唆される場合は、レーザー治療の前又は後で、抗炎症ステロイドが注射により投与される。
【００７２】
抗生物質、又は抗血管新生薬等の他の物質が、抗炎症ステロイドとの併用療法で注射される。本発明の方法で用いることが可能な内皮細胞に対するＶＥＧＦ作用を阻害するために設計された２つの抗血管新生薬は、（ａ）ルーセンティス（Ｒ）（ジェネンテック）、（ｂ）マキュジェン（Ｒ）（アイテック・ファーマシューティカルズ）である。ルーセンティス（Ｒ）及びマキュジェン（Ｒ）は、硝子体内に注射される化合物、及び効力のある抗血管新生製剤である。非常に好適な形体において、本発明の薬学的組成物は、記載される抗炎症ステロイド、及びルーセンティス（Ｒ）又はマキュジェン（Ｒ）等の抗血管新生製剤を含む。
【００７３】
以前は、ｒｈｕＦａｂ Ｖ２、又はＡＮＤ−Ｆａｂとして知られていたルーセンティス（Ｒ）（ラニビツマブ（ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ））は、ジェネンテックが開発した治療用ヒト化抗ＶＥＧＦ(血管内皮細胞増殖因子)抗体フラグメントであり、血管新生（新しい血管の形成）に重要な役割をするタンパク質であるＶＥＧＦを結合、又は抑制する。ルーセンティス（Ｒ）は、新規の血管の成長を阻止し、滲出型加齢性黄班変性（ＡＭＤ）の疾患の増悪に導くと考えられる血液の漏れを減らすように設計される。本発明により調製された薬学的組成物と併用して投与される場合、ルーセンティス（Ｒ）は、用量が約３００μｇ又は約５００μｇのいずれかで４回投与されるべきである。
【００７４】
マキュジェン（Ｒ）（ペガプタニブナトリウム、抗ＶＥＧＦアプタマー、又はＥＹＥ００１ アイテック・ファーマシューティカルズ）は、特に、ＶＥＧＦ分子を結合し、及び内皮細胞表面のレセプターの活性化を阻止する遺伝物質の合成フラグメントからなる。本発明により調製された薬学的組成物と併用して投与される場合、マキュジェン（Ｒ）は、用量が約０.３ｍｇ又は約３.０ｍｇのいずれかで４又は６週間毎に投与されるべきである。
【００７５】
本発明の他の態様において、抗炎症ステロイドは、ここで説明される眼科疾患治療のために、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾロン、プレドニゾン）、エストロゲン（例えば、エストラジオール）、アンドロゲン（例えば、テストステロン）レチノイン酸誘導体（例えば、９シスレチノイン酸、１３トランスレチノイン酸、オールトランスレチノイン酸）、ビタミンＤ誘導体（例えば、カルシポトリオール、カルシポトリエン）、非ステロイド抗炎症薬、ビタミンＤ誘導体、抗感染症薬、タンパク質キナーゼＣ阻害薬、ＭＡＰキナーゼ阻害薬、抗アポトーシス薬、成長因子、栄養ビタミン、不飽和脂肪酸、及び／又は眼用抗感染薬と併用して調製される。更に、本発明の他の実施形態において、これらの薬剤の混合物が使用される。
【００７６】
ここで記載する眼用抗感染薬は、ペニシリン（アンピシリン、アゾシリン、カルベニシリン、ジクロキサシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ピペラシリン、及びチカルシリン）、セファロスポリン（セファマンドール、セファゾリン、セフォタキシム、セフスロジン、セフタジジム、セフトリアキソン、セファロチン、及びモキサラクタム）、アミノグリコシド（アミカシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン及びネオマイシン）、アズトレオナム、バシトラシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、クロラムフェニコール、コトリモキサゾール、フシジン酸、イミペネム、メトロニダゾール、テイコプラニン及びバンコマイシン等の各種薬剤、抗真菌性薬（アンホテリシンＢ、クロトリマゾール、エコナゾール、フルコナゾール、フルシトシン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、ナタマイシン、オキシコナゾール、及びテルコナゾール）、抗ウイルス性薬（アシクロビル、エチルデオキシウリジン（ｅｔｈｙｌｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ホスカネット、ガンシクロビル、イドクスウリジン、トリフルリジン、ビダラビン、及び(Ｓ)‐１‐（３‐ヒドロキシ‐２‐フォスフォニルエトキシプロピル）シトシン（(Ｓ)‐１‐（３‐ｄｙｄｒｏｘｙ‐２‐ｐｈｏｓｐｈｏ‐ｎｙｌｕｅｔｈｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ｃｙｔｏｓｉｎｅ）（ＨＰＭＰＣ）、抗腫瘍薬（アルキル化剤、(クロラムブシル、シクロホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、及びブスルファン)、アントラサイクリン系抗生物質（ドキソルビシン、ダウノマイシン、及びダクチノマイシン）、シスプラチン、及びニトロソウレア等の細胞周期（分裂）非特異性剤）)、ピリミジン拮抗薬（シタラビン、フルオロウラシル及びアザシチジン）等の代謝拮抗薬、葉酸拮抗薬（メトトレキサート）、プリン拮抗薬（メルカプトプリン及びチオグアニン）、ブレオマイシン、ビンカアルカロイド類（ビンクリスチン及びビンブラスチン)、ポドフィロトキシン類（エトポシド（ＶＰ−１６）)、及びニトロソウレア類（カルムスチン（ＢＣＮＵ）)、シクロスポリンＡ及びＳＫ５０６等の免疫抑制薬、及び抗炎症薬又は抑制因子（阻害因子）、プラスミノゲン活性化因子の阻害因子等のタンパク質分解酵素の阻害因子等が挙げられるがこれらに限定されない。硝子体内投与及び硝子体半減期に加えて上記薬剤の局所及び結膜下投与の用量が“Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ”，Ｐｅｙｍａｎ Ｇ Ａ ａｎｄ Ｓｈｕｌｍａｎ， Ｊ Ｅｄｓ．， ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， １９９４，（Ａｐｐｌｅｔｏｎ−Ｌｏｎｇｅ）に開示され、この関連部分を本願に明示的に援用する。
【実施例】
【００７７】
本発明の更なる特徴は、以下の限定的でない実施例により詳細に記載される。しかし、当然のことながら、この詳細な説明は本発明を例示する目的のためだけに挙げられる。上記に示した本発明の大まかな説明を限定すると決して理解すべきではない。
【００７８】
実施例１
組成物１の調製
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の形状のＴＡ試料を天津天藥藥業股フェン有限公司（Ｔｉａｎｊｉｎ Ｔｉａｎｙａｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ 中国天津）のＴＡ試料と均等な割合で混合した（「中国試料」）。これにより粒径が１μｍ〜１００μｍのＴＡを含む組成物を得る。
【００７９】
組成物２の調製
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の形状のＴＡ試料を分画して約１μｍ〜２０μｍの大きさの結晶を抽出する。更に、中国試料のＴＡを分画して約８０μｍ〜１２０μｍの大きさの結晶を抽出する。そして、分画した物質を、４対１（ｗ／ｖ）の割合で混合する。これにより粒径が１μｍ〜１２０μｍのＴＡを含む組成物を得る。
【００８０】
組成物３の調製
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の形状のＴＡ試料を分画して約５μｍ〜２０μｍの大きさの結晶を抽出する。更に、中国試料のＴＡを分画する約１０５μｍ〜１２０μｍの大きさの結晶を抽出する。そして、分画した物質を、１対１（ｗ／ｖ）の割合で混合する。これにより粒径が１μｍ〜１２０μｍのＴＡを含む組成物を得る。
【００８１】
組成物４の調製
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の形状のＴＡ試料を分画して約５μｍ〜１５μｍの大きさの結晶を抽出する。更に、中国試料のＴＡを分画して約１１０μｍ〜１２０μｍの大きさの結晶を抽出する。そして、分画した物質を、１対４（ｗ／ｖ）の割合で混合する。これにより粒径が１μｍ〜１２０μｍのＴＡを含む組成物を得る。
【００８２】
実施例２
粒径分析
新しい及び古いケナコルト（Ｒ）Ａ４０試料に対してレーザー散乱法（マルバーン）を使用して粒径分析を行ったところ、ＴＡ粒子は平均の大きさが１３μｍであった。両方とも分布が非常に狭かった。
ＳＩＣＯＲ Ｓ．ｐ．Ａ（イタリア、ミラノ）（「イタリア試料」）の物質分析を図４に示す。
【００８３】
微粉化された中国のＴＡ試料を分析すると、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０物質と同様に平均粒径は１１.４８μｍ（図５）であった。しかしながら、粒径分布は、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０試料よりも広かった。
これらの結果の１つの重要な発見は、ＴＡ結晶は古い試料では成長せず、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０生成物中の粒子分布は、かなり狭い範囲内に良く調整されていることである。中国試料のより広い粒径分布によって、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０製品よりも一定な放出率が長い期間にわたって提供されることが期待される。
【００８４】
実施例３
トリアムシノロンアセトニドの溶解試験−比較試験
方法
試料１０ｍｇを１％のＴｗｅｅｎ８０を含む平衡塩類溶液１０ｍＬに溶解して試料を調製した。そして、溶液中の試料を激しく振とうさせ、２２ゲージ針を通して何度も高速放出させた。そして、この懸濁２ｍＬを実質的に全粒子を保持する２２μｍのデュラポア（Ｒ）メンブレンフィルターでろ過した。そして、フィルターを水２ｍＬでリンスした。
この試料の調製方法は、大きな結晶として溶解してそのため結果に偏りを生じると考えられる大きな結晶の凝塊からなる粒子の問題を回避する。
【００８５】
溶解は、約１１ｍＬ／分で溶解チャンバを通して２０％メタノール水のガス抜きした溶剤溶液をくみ上げる流入システムを使用して行った。この流速は、溶剤／吸光剤／キャリア許容量の大きな余剰が実験を通して維持されるシンク条件に維持した。流速と溶剤溶液との組合せにより、流入セルが実質的に全実行時間３０分間で許容域に吸光値を記録可能であり且つ実験が適当な期間内に完了可能な割合で、ＴＡ結晶が溶解する。
【００８６】
溶剤溶液へのＴＡの溶解度は、水単独へのＴＡの溶解度の約２〜３倍である。しかしながら、溶剤溶液の湿潤特性は、水単独の湿潤特性よりも優れている。
【００８７】
試料約２ｍｇを上記に概要を説明したようにフィルター上で調製した。そして、フィルターを、溶解チャンバとして使用した変更したステンレス鋼ｓｗｉｎｎｅｘ（Ｒ）アダプターに置いた。溶解チャンバからの流出液は、波長２３８ｎｍで分光光度計日立１００１の低容量流入セルに通した。吸光度は振れ１００％を生じる２吸光度単位でチャート式記録計に記録した。
【００８８】
溶解試験は、流速１１ｍＬ／分で３０分間行なった。２分間の平均吸光値を算出した。実験はデュプリケートで行い、各試料に対する２つの吸光値を平均した。
【００８９】
結果
中国試料
【表１】
表１の結果を検討すると、吸光値の合計は２.２２２（平均０.１４８）であり、従って、チャンバを通った溶解液の量を考慮すると、この期間中に溶解したＴＡの量（３５０のＥ１％を使用する）は１.４０ｍｇであると計算できる。
【００９０】
これは、溶解チャンバに入れた試料の量に基づいて、予想していたほぼ２ｍｇ未満である。
しかしながら、試料溶液は、溶解チャンバに加える数時間前に調製したため、実験の開始前にかなりの量の物質が溶解した可能性がある。これは、最初の溶解速度を遅らせるが、その後の溶解速度に影響しない。
【００９１】
・ケナコルト（Ｒ）Ａ４０試料
【表２】
表２の結果を検討すると、吸光値の合計は２.８６２（平均０.１９１）であり、従って、チャンバを通った溶解液の量を考慮すると、この期間中に溶解したＴＡの量（３５０のＥ１％を使用する）は１.８０ｍｇであると計算できる。
これは、溶解チャンバに入れた試料の量に基づいて、予想していたほぼ２ｍｇ未満である。
しかしながら、試料溶液は４０ｍｇ／ｍｌの懸濁液から調製した。おそらく４０ｍｇよりも多い量が（過量のため）アンプルから移動したであろうが、しかし、溶液中で更に時間がたてば粒子は溶解するであろうことは間違いない。この試料は、調製後に適度に迅速に使用した。
【００９２】
・イタリア試料
【表３】
表３の結果を検討すると、吸光値の合計は３.０４９（平均０.２０３）であり、従って、チャンバを通った溶解液の量を考慮すると、この期間中に溶解したＴＡの量（３５０のＥ１％を使用する）は１.９２ｍｇであると計算できる。
結論
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０及び中国試料の両方は１０分間で、同程度（それぞれ、８９.７％及び８９.０％）溶解した一方で、イタリア試料は９９.３％溶解した。イタリア試料は１４分間で完全に溶解したが、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０及び中国試料は、２０分間後に９８％及び９７.３％だけ溶解した。
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０及び中国試料の溶解特性に大差がないことが分かる。
【００９３】
実施例４
様々な媒体中のトリアムシノロンアセトニドの平衡溶解度
ＨＰＬＣアッセイ法をＴＡ用に開発した。これは、様々な媒体中でのＴＡの平衡溶解度の決定に使用した。アセトニトリル溶液が、溶剤／吸光剤／キャリア許容量の大きな余剰が維持されるシンク条件の維持に有利であると考えられる。ケナコルト（Ｒ）Ａ４０上清中のＴＡ濃度もまた調査した。結果を表４に示す。
【表４】
特筆すべきことに、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の上清中のＴＡ濃度が、水又は生理食塩水中よりもかなりかなり高い。ＴＡの平衡濃度は、アセトニトリルの濃度の増加と共に増加する。これによって、上清だけの場合に観察された最初の臨床効果が説明される。このＴＡの高濃度は、ベンジルアルコール、又はケナコルト（Ｒ）Ａ４０の製剤に用いられる界面活性剤中でのミセル可溶化によるものである。
【００９４】
実施例５
溶解試験
最初の溶解試験は、水に様々な濃度で溶かしたアセトニトリルを溶媒として使用し、中国試料に対して行った。結果は表５に示す。
【表５】
アセトニトリル濃度の増加に伴って、試料中のＴＡの溶解速度が増加しているのが明らかである。
【００９５】
実施例６
トリアムシノロンアセトニド試料の分画−密度遠心分離
ＴＡの乾燥粉末試料を、４℃の蒸留水中で密度遠心分離により分画した。
【００９６】
実施例７
トリアムシノロンアセトニド試料の分画−ろ過
蒸留水中で懸濁したＴＡ試料を、最大孔径１０μｍ〜５０μｍのミリポアフィルターを通して分画した。
【００９７】
実施例８
様々なソースのトリアムシノロンアセトニド結晶構造
Ｆａｒｍａｂｉｏｓ Ｓ．ｐ．Ａ（イタリア Ｇｒｏｐｅｌｌｏ Ｃａｉｒｏｌｉ）（以下「Ｆａｒｍａｂｉｏｓ」とする）及びＮｅｗＣｈｅｍ Ｓ．ｐ．Ａ（イタリア ミラノ）（以下「ＮｅｗＣｈｅｍ」とする）のＴＡ結晶を走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で観察した。図８及び図９からわかるように、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの結晶は、「ずんぐり」しており、一方、ＮｅｗＣｈｅｍの結晶は、より高いアスペクト比を有する「針状」であった。更に、図１０及び図１１では結晶の多孔率の相違が観察される。
【００９８】
実施例９
様々なソースからのトリアムシノロンアセトニド結晶の粒径分布
方法
微粉化Ｆａｒｍａｂｉｏｓ、並びに非微粉化Ｆａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍ ＴＡ試料の粒径分布をレーザー光散乱法により分析した。粒径分布は、室温で磁気攪拌したセルＭＳ７を使用したＭａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ Ｓ（マルバーン）で測定し、３ＮＤＤを示した。ＭｉｌｌｉＱ水のバックグラウンド測定を得た。試料は、懸濁溶液（エッペンドルフ型チューブ内でＭｉｌｌｉＱ水にＴｗｅｅｎ２０を０.２５％及びカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液［ＮａＣＭＣ］を０．２５％）２５０μＬ中に高濃度懸濁５ｍｇとして調製して、最大攪拌スピードの半分で攪拌しながら、最大２０ｍＬのＭｉｌｌｉＱ水を含む磁気攪拌したセルに懸濁液の全体量を加えた。この速度は、大粒子のＴＡの分散に対して事前に最適化した。必要に応じて、懸濁液を更に水で希釈して、１５％〜２０％のあいまいな数値とした。測定は２５００走査を実施した。
結果
図１２及び図１３は、３つのＴＡ試料に対して得られた粒径分布を示す。３つのＴＡ試料に対して得られたＤ（ｖ，０.９）値を下記表６に一覧にする。Ｄ（ｖ，０．９）は、最大に理解されると９０％平均値となり、即ち、粒子の１０％だけがこの値よりも大きいと推定される。
【表６】
２つの非微粉化試料に対するＤ（ｖ，０.９）値は同様であった。微粉化物質は、予想よりもより大きく、これは、凝集体が形成されたことを示す。（試料は超音波破砕しなかった）。
【００９９】
実施例１０
異なるソースからのトリアムシノロンアセトニド試料の溶解
方法
・溶解試験
ＴＡの懸濁液２０ｍｇ／ｍＬを、懸濁溶液（ＭｉｌｌｉＱ水中にＴｗｅｅｎ２００.２５％及びカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液［ＮａＣＭＣ］０．２５％）で調製した。離型剤４００ｍＬ（生理食塩水、ＭｉｌｌｉＱ水にＮａＣｌ０.９％）をＥｒｗｅｋａ製１Ｌ溶出器内に投入し、そして、これを３７℃に温度調節した米国薬局方（ＵＳＰ）２適合溶出装置（Ｅｒｗｅｋａ）内に置いた。離型剤を１００ｒｐｍ、３７℃で攪拌して平衡化した時点で、ＴＡ懸濁液をボルテックスして混合し、時間＝０の時に懸濁液１００μＬ（２ｍｇ）をピペットで離型剤に直ちに加えた。
その後、試験下のシステムで決定された間隔で、離型剤１ｍＬを使い捨て注射器１ｍＬに吸引した。そして、注射器フィルター（スーポア アクロディスク（Ｒ） ０.２μｍ、Ｐａｌｌ Ｇｅｌｍａｎ)を取り付け、試料０.８ｍＬを注射器からフィルターを通して放出して、再び離型剤に戻した。
最後の２００μＬ迄をエッペンドルフチューブに回収して、１００μＬを、アセトニトリル１００μＬを含む第２エッペンドルフチューブに正確にピペットで加えて、ボルテックスして混合した。そして、この混合物を注射用に、挿入されたＨＰＬＣガラスバイアルに移した。
このプロセスは、毎回新しい注射器、及び注射器フィルターを使用して繰り返された。
【０１００】
・フィルター確認
飽和度の１％及び１０％溶液を、ＴＡ（１５μｇ／ｍＬ）で飽和した生理食塩水原液から調製した。溶液を注射器フィルターでろ過して、ろ液を２００μＬずつ回収した。ＨＰＬＣにより、ろ液中のＴＡ濃度が、ＴＡ溶液６００μＬがフィルターを通った後で、それぞれ９４％及び９５％に達したことが示された。その結果として、ろ過前の量８００μＬ（上記溶解方法参照）は、ろ液濃度が溶解容器内で溶解した代表的なＴＡ濃度であることを確定的にするのに十分であると仮定した。
【０１０１】
・ＨＰＬＣ法
アセトニトリル４０％及びＭｉｌｌｉＱ水６０％からなる移動相を調製し、ろ過前にトリフルオロ酢酸０.１％を加えた。１６８ ＰＤＡ検出器を備えたＢｅｃｋｍａｎ ｓｙｓｔｅｍ Ｇｏｌｄ（Ｒ）及びＷａｔｅｒｓ ７１７ Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒを使用し、移動相をＢｅｃｋｍａｎ Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ（Ｒ）カラムＣ８カラム（４.６ｍｍ×２５ｃｍ,５μｍ）に、１.２ｍＬ／分でポンプで通した。１００μＬ注入後、ＴＡ保持時間は約７分であった。
標準液を、アセトニトリル中で１ｍｇ／ｍＬ濃度のＴＡ原液から１０００ｎｇ／ｍＬ,５００ｎｇ／ｍＬ,２５０ｎｇ／ｍＬ,１００ｎｇ／ｍＬ,７５ｎｇ／ｍＬ及び５０ｎｇ／ｍＬの濃度で移動相中に調製した。５０ｎｇ／ｍＬ標準液は、正に許容可能な精度限界内（％ＣＶ＝２０％,ｎ＝４ 注入）であり、他の濃度は全て％ＣＶ＜１０％、直線性＞０．９９９であった。水系試料は、移動相との混和性を確実にする注入前に、アセトニトリルに５０％（ｖ／ｖ）で希釈した。
結果
ＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化ＴＡが、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの非微粉化ＴＡと同じ振る舞いをすることが分かった。Ｆａｒｍａｂｉｏｓ又はＮｅｗＣｈｅｍのいずれかのＴＡ間の結晶形状及び多孔率の相違にも係わらず、図１４の予備データ及び図１５及び図１６の更なるデータは、これらの試験で使用した条件下のいずれかのソースの非微粉化ＴＡ間の溶解速度に識別可能な相違がないことを示す。
注記：図１６のＮｅｗＣｈｅｍ試料の試料採取点間の隙間は、溶解が週末に放置されたためであり（非採取）、一方で、Ｆａｒｍａｂｉｏｓ試料は平日中に採取して、この場合、中間の試料は採取した。
図１６において、６０％辺りで溶解が平坦な理由は、微粉化懸濁に比べて、懸濁溶液中にＴＡ非微粉化試料原液を調製したエッペンドルフチューブからのＴＡ非微粉化試料原液の全てを移すのはより難しいことに起因しうる。より多くの非微粉化物質が、溶解容器にＴＡ懸濁を移すために使用したピペットチップに残るかもしれない。
【０１０２】
実施例１１
微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニドの溶解
方法
溶解試験は、微粉化及び非微粉化ＦａｒｍａｂｉｏｓＴＡ試料と、微粉化ＴＡ：非微粉化ＴＡの割合が８０ｗ／ｗ：２０ｗ／ｗ、５０ｗ／ｗ：５０ｗ／ｗ、及び２０ｗ／ｗ：８０ｗ／ｗの混合物とについて行った。溶解の基本的な測定方法は、上記実施例１０に記載の方法と同様な方法を使用した。２つの個別の試料及び３つの混合物を、エッペンドルフチューブに重量（２.０ｍｇ）で調製し、懸濁媒体（Ｔｗｅｅｎ２０ ０.２５％及びカルボキシメチルセルロースナトリウム０.２５％）１ｍＬを、３７℃で生理食塩水（ＭｉｌｌｉＱ水にＮａＣｌ０.９％）４００ｍＬを含む溶出槽（Ｅｒｗｅｋａ）に含有物を加える直前に、粉体を湿らすために加えた。懸濁媒体は、ＵＳＰ２適合パドルを用いて１００ｒｐｍで攪拌した。試料を設定した時間間隔で溶解槽から注射器で吸引・ろ過し、ろ液の最後の１００μｌを、ＨＰＬＣに注入前にアセトニトリル１００μｌで希釈して、懸濁媒体中のＴＡ濃度を測定した。
結果
溶解は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの微粉化及び非微粉化ＴＡを６時間（図１７）及び２０時間（図１８）プロファイルし、図１９では微粉化及び非微粉化ＴＡの混合物が、非微粉化ＴＡ量が増加するにつれて溶解速度がより遅くなる安定した経過を示す。図２０では、１００％微粉化ＴＡが同じ動向で追随する。
【０１０３】
実施例１２
粘性媒体の溶解試験
方法
溶解試験は、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ナトリウム媒体粘度グレード３％を生理食塩水に加えて調製した粘性ゲル中で行った。この溶解試験では、ｉｎ ｖｉｖｏの状況とより酷似するがシンク条件を今だ維持するシステムの溶解データが得られた。溶解の基本的な測定方法は、上記実施例１０で述べた通りである。しかし、試料（０.５ｍＬ）は、ＴＡ量を測定する前に、ゲルから取り除いた後で３分間遠心分離した。遠心分離工程は、ゲルが簡単にろ過できないために必要であった。
結果
結果にいくつかばらつきがあるが、図２１及び図２２に示すデータは、上記実施例１１に示すように、生理食塩水に溶解した微粉化ＴＡ、非微粉化ＴＡ及び混合物で観察されたものと基本的に同じ動向を示す。
【０１０４】
実施例１３
模擬眼球拡散装置
臨床症状に近い粘性媒体中のＴＡの溶解度を説明するために、模擬眼球の基準としてｉｎ ｖｉｔｒｏ溶解セルを使用した。
方法
セル（図２３）は、容積がそれぞれ約９ｍＬで、透析膜（３）（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｏｒ ３、分画分子量３５００)で分割される２つの区画（ドナーチャンバ（１）及びレセプターチャンバ（２））からなる。ゲル（４）（生理食塩水に１％ヒアルロン酸（ＨＡ）；模擬硝子体液）をドナーチャンバ（１）に置き、生理食塩水離型剤（５）を透析膜（３）の反対側のレセプターチャンバ（２）に置いた。透析膜（３）は、ＴＡは通すが、ＨＡは通さないので、ゲル（４）が損なわれないことを確実にする。そして、ＴＡ（６）を含む組成物をドナーチャンバ（１）内のゲル（４）に注入して、試料採取口（７）からレセプターチャンバ（２）の全内容物を取り除くことで、レセプターチャンバ（２）内の生理食塩水離型剤（５）中の遊離薬物の出現をＨＰＬＣによりモニターした。レセプターチャンバ（２）内の生理食塩水離型剤（５）は、試料の採取毎に交換した。全実験中、装置全体を振とうしながら（１００ｒｐｍ）３７℃の水槽に浸した。
ＦａｒｍａｂｉｏｓＴＡ４ｍｇを微粉化又は非微粉化形状で４０ｍｇ／ｍＬ懸濁液としてゲルに注入した。レセプターチャンバから回収した試料を最大１０ｍｌまで生理食塩水で希釈し、試料をＨＰＬＣにかけてＴＡ量を測定した。
結果
図２４及び図２５に示すように、微粉化物質が非微粉化ＴＡよりもより速くレセプター溶液に出現し、２週間にわたる微粉化又は非微粉化製剤の放出プロファイルの累積は異なる。
【０１０５】
実施例１４
トリアムシノロンアセトニド試料の分画−沈殿
方法
ＴＡ濃縮懸濁液（１ｍＬ，１００ｍｇ／ｍＬ）を、底にクランプで取り付けたＭｉｌｌｉＱ水４００ｍＬを含むガラスチューブ（高さ１０００ｍｍ×内径２５ｍｍ）の先端部にピペットで加えた。粒子を、７０秒間（より大きい粒子の殆どを、小さい粒子とは異なる「区画」に明白に分割するために十分な時間）重力下で沈殿させ、クランプを開放して分散体１５０ｍＬを回収して、大「区画」を単離した。そして、分散体を、ワットマン＃１フィルター紙でろ過して、６０℃で４時間乾燥した。
結果
より大きい粒子はより小さい粒子よりも早く沈殿するため、大きさの分類が可能となる。ある時点でカラムの底から物質を取り除くことで、異なる粒径分布の分画が得られた。
ＮｅｗＣｈｅｍ ＴＡ物質を異なる大きさの分画に分割することができた。様々な分画の粒径を下記表７及び図２６に示す。明らかな分離が達成され、明確なＤ（ｖ，０.９）値を下記表に示す。試料は非常に違って見え、分粒の結果を反映した。
【表７】
【０１０６】
実施例１５
均質化による粒径減少
方法
沈殿により小さい分画を得たＴＡよりもＴＡの粒径を非常に小さく減少させるために、ＴＡの懸濁液（懸濁溶液中に２０ｍｇ／ｍＬ)を４ｍＬチューブに加え、精製を始める前に、懸濁液にローターステーター方式Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（Ｒ）ホモジナイザーの軸を浸した。
結果
ホモジナイザーは、ローターとステーターとの間に詰まった大きな粒子を断片に実質的に破砕した。２００μｍ未満の結晶が好ましかった。しかしながら、好ましくない溶解特性が得られるため、微粒子の過剰な生成は避けるのが望ましかった。下記表８は、ホモジナイザー速度及び曝露時間による粒子特性の変化を示す。
【表８】
＊最大値は、最大粒子数、すなわち、％対粒径プロットにおける最大値である。
粒子の精製は、精製時間１分、最大速度６で、Ｄ（ｖ，０．９）を約２００μｍまで小さくすることに成功した。
【０１０７】
実施例１６
注射能力
方法
注射能力を補助するために、非微粉化ＴＡ１６０ｍｇ、微粉化ＴＡ４０ｍｇ及び生理食塩水(ＭｉｌｌｉＱ水に０.９％ＮａＣl)５ｍＬを攪拌して混合することでＴＡ溶液を調製した。懸濁したＴＡを超音波破砕器Ｂｒａｎｓｏｎ ２２０（２５０℃，５０Ｈｚ〜６０Ｈｚ，１２５Ｗ）で３０秒間、短時間超音波破砕して、攪拌器に戻した。
ヒアルロン酸（ＨＡ）５０ｍｇを計量し、このヒアルロン酸の約１／３を懸濁液に加えた。３０秒間攪拌後、懸濁液を３０秒間超音波破砕した後攪拌器に戻した。ヒアルロン酸を添加、攪拌、及び超音波破壊する工程は、ヒアルロン酸が全て添加されるまで繰り返した。ヒアルロン酸が全て溶解するまで、更に３０分間懸濁液を混合した。懸濁液は２３ゲージ針で送達可能である。
結晶を実質的に破壊せずに弱い結晶複合体を粉砕するために、短時間の超音波破砕（例えば３０秒）とした。
【０１０８】
実施例１７
Ｉｎ Ｖｉｖｏ試験
微粉化ＴＡ／非微粉化ＴＡの２０／８０混合物４００μｇをウサギの眼に注射する。ＴＡは一方の眼のみに注射し、他方の眼は対照となるため、各個体がその対照となる。
試料は、一定の間隔で前眼房から取り出す。前眼房内のＴＡの濃度は、硝子体内のＴＡの濃度と相関する。硝子体から前眼房へのＴＡの通過メカニズムは簡単な拡散の１つであり、また認可された評価方法である（Ｂｅｅｒ他、Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ＴＡ ａｆｔｅｒ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ２００３；１１０：６８１−６８６）。硝子体内の試料は一定の間隔で取り出す。全ての試料ＴＡ含有量をＨＰＬＣにより算定する。試験期間の終了後動物を屠殺し、眼球組織試料を採取する。
投与量は、治療容量よりも低いが、このより低い容量で効能が示される。
【０１０９】
実施例１８
Ｉｎ Ｖｉｖｏ−微粉化ＴＡ対非微粉化ＴＡ
方法
体重２ｋｇ〜３ｋｇの２５羽のニュージーランド白ウサギをこの実験に使用した。動物は、眼科と視覚に関する研究会議（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ）の研究に使用された動物の管理及び処理に対する決議に基づいて扱った。
全ての調査及び手順の前に、動物を塩酸ケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）及び塩酸キシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の混合物約１ｍｌで麻酔した。局所麻酔は、プロパラカイン０.５％の局所投与により達成された。
細隙灯検査及び非直像眼底鏡による検査は、全ての眼に対する薬の投与前後、１，２，３，６，９，１３，１６，２０，及び２１日目に行われた。
ウサギは５つのグループに分けた。グループ１（ｎ＝５）にはＴＡ４００μｇ／０.１ｍｌ(１日２回)を局所投与、グループ２（ｎ＝５）にはＴＡ４００μｇ／０.１ｍｌを硝子体内注射、グループ３（ｎ＝５）にはＴＡ４００μｇ／０．１ｍｌを結膜下注射、グループ４（ｎ＝５）には微粉化ＴＡ４００μｇ／０．１ｍｌを硝子体内注射、グループ５（ｎ＝５）には微粉化ＴＡ４００μｇ／０．１ｍｌを結膜下投与した。
全ての処置が無菌状態で、視覚化のために顕微鏡を操作しながら行われた。
【０１１０】
・局所適用
グループ１の眼には、試験期間中１日２回ＴＡ４００μgの滴を局所適用した。薬は、５０μＬ一滴を眼に投与した。
・硝子体内注射
グループ２及び４の眼には、硝子体内注射を行った。注射の直後に、眼内圧を下げるため及び薬の逆流を最小化するために前眼房に栓をした。硝子体内注射は、２３ゲージ針を着けたツベルクリン注射器を角膜輪部の後部約２ｍｍに挿入（べべルを上に）して行った。
・結膜下注射
グループ３及び５の眼へは、２３ゲージ針を着けたツベルクリン注射器を結膜の後側頭部に挿入して結膜下注射を行った。薬の逆流を最小化するために注射の直後に綿棒をその領域に押した。
・前房穿刺
前房穿刺（０.１ｍｌ）は、全てのグループに対して、局所投与、結膜下注射又は硝子体内注射後１，２，３，６，９，１３，１６，２０日目に行った。２７ゲージ０.５インチ針を着けたツベルクリン注射器を、べベルを前に向けてべベル全体が角膜を貫通するまで、虹彩の上に平行な面で透明な補助角膜辺縁部（ｐａｒａｌｉｍｂａｌ ｃｌｅａｒ ｃｏｒｎｅａ）に挿入した。液体試料０.２ｍｌを取り出した。房水の試料は、直ぐに−７０℃で冷凍した。
・安楽死及び摘出
動物は、２１日目に、最初にペントバルビタールナトリウム1００ｍｇ／ｋｇを静脈注射して屠殺した。両眼を摘出し、−７０℃の凍結器に入れた。
・眼の解体
全ての凍結した眼を、５つの部分（角膜、房水、網膜、強膜、及び虹彩毛様体）に切り裂いた。グループ３及び５（結膜下注射）の強膜は、鼻側部分及び側頭部分の２つの部分に切り裂いた。組織を光学顕微鏡用に調製した。
【０１１１】
実施例１９
Ｉｎ Ｖｉｖｏ−浮腫モデル
血管浮腫をニュージーランド白／Ｄｕｔｃｈ−ｂｅｌｔｅｄウサギに誘発する。各ウサギの左目に生理的ｐＨで等張性の微粉化ＴＡ／非微粉化ＴＡの２０／８０混合物４００μｇを注射して被験眼とする。各動物の右目は対照とし、ケナログ（Ｒ）Ａ４０を注射する。
浮腫に対するＴＡの効果は、注射した眼を観察し（インドシアニン／蛍光眼底血管造影）、更に光コヒーレンス・トモグラフィー（ＯＣＴ）で調査する。
眼内圧は、第１週目は１日２回モニターし、そして、３ヶ月間毎日モニターする。この後眼内圧上昇が依然として観察されれば、必要に応じて眼内圧は６ヶ月以上モニターする。
毒性試験を、網膜電図を使用して試験中に非侵襲的に行う。注射から２週間後、２羽のウサギを屠殺して組織病理検査し、試験中に２週間毎に２羽のウサギを屠殺する。
【０１１２】
実施例２０
Ｉｎ Ｖｉｖｏ−新血管形成モデル
新血管形成をニュージーランド白／Ｄｕｔｃｈ−ｂｅｌｔｅｄウサギにレーザー焼灼で誘発する。各ウサギの左目に生理的ｐＨで等張性の微粉化ＴＡ／非微粉化ＴＡの２０／８０混合物４００μｇを注射して被験眼とする。各動物の右目は対照とし、ケナログ（Ｒ）Ａ４０を注射する。
新血管形成が、細隙灯生体顕微鏡検査法及び眼底撮影により観察される。
眼内圧は、第１週目は１日２回モニターし、そして、６ヶ月間毎日モニターする。
毒性試験を、網膜電図を使用して試験中に非侵襲的に行う。注射から２週間後、２羽のウサギを屠殺して組織病理検査し、試験中に２週間毎に２羽のウサギを屠殺する。
【０１１３】
本発明は、特定の好適な実施形態を参照して記載されるが、当然のことながら本発明の広義の原理の範囲内で多くの変形及び変更がなされる。従って、添付の請求項に定義されるように、好適な実施形態及びその変形及び変更の全ては、本発明の範囲及び精神内に含まれることを意図する。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
本発明は、添付の図面と共に詳細な説明を読むことで理解が容易になる。
【図１】図１は、トリアムシノロンアセトニド粒子の結晶の大きさを示す電子顕微鏡写真であり、図面の側辺に沿う１１個の点の列は４.３０μｍを示す。
【図２】図２は、トリアムシノロンアセトニドの粒子の特定の範囲の電子顕微鏡写真であり、図面の側辺に沿う１１個の点の列は１.１９μｍを示す。
【図３Ａ】図３Ａは、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０トリアムシノロンアセトニドの第１バッチの粒径分析を示すヒストグラムである。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０トリアムシノロンアセトニドの第２バッチの粒径分析を示すヒストグラムである。
【図４】図４は、イタリア試料のトリアムシノロンアセトニドのバッチの粒径分析を示すヒストグラムである。
【図５】図５は、中国試料のトリアムシノロンアセトニドのバッチの粒径分析を示すヒストグラムである。
【図６】図６は、トリアムシノロンアセトニドの粒子の結晶の大きさを示す電子顕微鏡写真であり、図面の底辺の１１個の点の列は１２０μｍを示す。
【図７】図７は、トリアムシノロンアセトニドの粒子の結晶の大きさを示すもう１つの電子顕微鏡写真であり、図面の底辺の１１個の点の列は１２０μｍを示す。
【図８】図８は、ずんぐりした形の結晶を示すＦａｒｍａｂｉｏｓの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの電子顕微鏡写真である（倍率１６０倍、長さ１００μｍ〜４００μｍ）。
【図９】図９は、針のような形状の結晶を示すＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの電子顕微鏡写真である（倍率１６０倍、長さ２００μｍ〜５００μｍ）。
【図１０】図１０は、結晶が多孔質であるＦａｒｍａｂｉｏｓの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの電子顕微鏡写真である（倍率１０２０倍、直径８０μｍ）。
【図１１】図１１は、結晶が非多孔質であるＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの電子顕微鏡写真である（倍率２６００倍、直径８０μｍ）。
【図１２】図１２は、レーザー光散乱法により決まるＦａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの粒径のプロファイルを示すグラフである（粒径２０μｍ〜９０μｍ、平均誤差棒（ｎ＝３）±ｓ.ｄ．）。
【図１３】図１３は、レーザー光散乱法により決まるＦａｒｍａｂｉｏｓの微粉化トリアムシノロンアセトニドの粒径のプロファイルを示すグラフである（粒径５μｍ〜５０μｍ、挿入図は同じデータを明確にするためのログスケールで示す。）。
【図１４】図１４は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニド試料を、ｔ＝０、３７℃、ＵＳＰ２適合装置内で生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬを加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図１５】図１５は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドを８時間放置した溶解速度の比較を示すグラフである。
【図１６】図１６は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドを８０時間放置した溶解速度の比較を示すグラフである。
【図１７】図１７は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニド試料を、ｔ＝０、６時間、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである。
【図１８】図１８は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニドを、ｔ＝０、２０時間、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で生理食塩水に懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである。
【図１９】図１９は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの微粉化トリアムシノロンアセトニド試料、非微粉化トリアムシノロンアセトニド試料、及びその混合物を、ｔ＝０、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図２０】図２０は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの１００％非微粉化トリアムシノロンアセトニドを、ｔ＝０、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図２１】図２１は、３％ＣＭＣゲルにＦａｒｍａｂｉｏｓの非微粉化トリアムシノロンアセトニドを、ｔ＝０、３７℃、１８０分間、ＵＳＰ２適合装置で３％ＣＭＣ含有生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図２２】図２２は、３％ＣＭＣゲルにＦａｒｍａｂｉｏｓ、ＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニド、及び非微粉化:微粉化＝８０：２０混合物を、ｔ＝０、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で３％ＣＭＣ含有生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図２３】図２３は、模擬眼球拡散装置の図である。
【図２４】図２４は、１％ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルに微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニドを３７℃、１４日間用いる模擬眼球拡散装置実験を示すグラフである（データは、平均値±範囲、ｎ＝２）。
【図２５】図２５は、１％ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルに微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニド及びその混合物を３７℃、１４日間用いる模擬眼球拡散装置実験を示すグラフである（データは、平均値±範囲、ｎ＝２）。
【図２６】図２６は、１ｍカラムに加えた化ＮｅｗＣｈｅｍ非微粉トリアムシノロンアセトニド１００ｍｇの沈殿分離から得る３つの分画の粒径を示すグラフである。
【符号の説明】
【０１１５】
１ ドナーチャンバ
２ レセプターチャンバ
３ 透析膜
４ ゲル
５ 生理食塩水離型剤
６ トリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）
７ 試料採取口
【技術分野】
【０００１】
参照による援用
本願は、２００４年２月４日出願オーストラリア仮出願番号２００４９００５４６号明細書、２００４年９月１０日出願オーストラリア仮出願番号２００４９０５１９５号明細書、２００４年１０月２５日出願オーストラリア仮出願番号２００４９０６１２５号明細書、及び２００５年１月２１日出願オーストラリア仮出願番号２００５９００２５３号明細書の恩恵を主張する。
先行出願、及び本願で示すメーカーの使用説明書、記載、製品規格、及び製品シートと一緒に本願に引用する全ての文献、又は本願に援用する全ての文献を、参照することにより本願に援用し、また、本願の実施に用いられうる。
【０００２】
本発明は、微粒子形状で存在し、結晶の大きさ及び分布が決定及び選択可能な抗炎症ステロイドによる治療が適した変性網膜症の治療に関する。特に、トリアムシノロン、特に、眼の炎症状態の治療に使用されるトリアムシノロンアセトニドの結晶の大きさの使用範囲に関する。
【背景技術】
【０００３】
本発明者は、特許文献１（Ｂｉｌｌｓｏｎ及びＰｅｎｆｏｌｄ）の共同発明者であり、参照することにより全体を本願に援用する。特許文献１は、患者に加齢黄斑変性の治療方法を提供し、好ましくは、硝子体内注射で患者へ投与することで、硝子体内にやや溶け難い抗炎症ステロイドの効果的な量を蓄積形式で投与することを含む。特許文献１に記載の方法で使用される好適なステロイドは、トリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）を含む。
【０００４】
本発明者は、また、脈絡膜血管新生を患う危険性が高いと特定された眼に、抗炎症ステロイドを硝子体内注射することで新血管形成を予防することを対象とした特許文献２（Ｇｉｌｌｉｅｓ、Ｐｅｎｆｏｌｄ及びＢｉｌｌｓｏｎ）の共同発明者である。特許文献２の方法で使用される好適なステロイドは、トリアムシノロンアセトニド及びフルオシノロンアセトニドを含む。
【０００５】
これらの特許明細書に提示される治療方法は、例えば、予備実験及びその後に続く臨床試験の両方に関して奨励されているが、変性網膜症、眼内血管新生、及び眼の炎症症状を含むがこれらに限定されない上記眼症状の治療方法を更に改善する必要性がある。
【０００６】
そのような望ましい改善の１つは、特に、特定の適応症及び病状を考慮して、抗炎症薬の治療効果を持続させることである。例えば、トリアムシノロンアセトニドを投与する場合、Ｍａｓｓｉｎ他は、ほとんどの場合、臨床的に有意な黄斑浮腫及び他の網膜疾患の治療において、トリアムシノロンアセトニドの常用量（４ｍｇ）の硝子体内注射の薬効が約３ヶ月後に減退することを見出した（例えば、非特許文献１）。Ｍａｓｓｉｎ他は、視力の測定に基づいてトリアムシノロンアセトニドの薬効を測定した。例えば、黄斑浮腫の場合に使用される光コヒーレンストモグラフィーは、１回硝子体内注射したトリアムシノロンアセトニドのピーク有効性が、該硝子体内注射約６週間後に達成され、その後、視力の低下、及び黄斑の肥厚が起こることを示す。他の研究は、１回の硝子体内注射として投与したトリアムシノロンアセトニドの平均排出半減期が硝子体切除していない患者で１８．６日であったことを示した（例えば、非特許文献２）。約５半減期後で全てのトリアムシノロンアセトニドが放出されると仮定すると、トリアムシノロンアセトニドは、硝子体切除を受けていない患者において、約３ヶ月（９３±２８日）間、硝子体液に測定可能な濃度で持続するはずである。トリアムシノロンアセトニドのような抗炎症ステロイドの３ヶ月滞留時間は、特定の病状に対しては適度であるが、多くの患者は、注射頻度がより少なければ、眼内注射に付随する合併症の危険性がより低いため、治療効果のある更に長い滞留時間の恩恵を受ける。
【０００７】
抗炎症薬の効果を持続させるために多くの方策が推進されている。使用されているアプローチの１つは、投与量を単に増加させる（上限２５ｍｇ）ことである（例えば、非特許文献３及び４。）これは、トリアムシノロンアセトニドの治療効果の持続時間を延長するが、また、合併症の発生率及び重症度も増加させ、特に、ステロイド誘導により眼内圧を亢進させる（例えば、非特許文献５）。
【０００８】
抗炎症薬効果の持続に使用可能な他の可能なアプローチは、他の硝子体内ステロイド製剤と効果的に使用される、徐放性賦形剤を使用することである。しかしながら、このアプローチの主な不利点は、複雑となることから、米国食品医薬品局等の管理機関からの徐放性賦形剤を配合した薬の最終的な認可が、遅れるかもしれないことである。
【０００９】
抗炎症薬の治療効果のある滞留時間を増大させる第３のアプローチは、粒径を変えることである。しかしながら、このアプローチは、眼病治療薬等の多くの薬には定着していない。実際に、粒径と硝子体内での治療効果のある滞留時間との相互関係を示さない薬もあるようである。例えば、最近の研究では、メジアン粒径が大きく異なる２つのトリアムシノロンアセトニド製剤（４μ及び１７．３μ）が、硝子体内で本質的に同じ薬物半減期を有することが報告されている（例えば、非特許文献６）。
【００１０】
治療効果のある滞留時間を調節するための薬の粒径の変更に関する他の問題は、特定の薬物粒子、特に粒径が０.５μｍ未満〜約１μｍの抗炎症ステロイドが、投与に用いる注射針の閉塞を生じる傾向があるという発明者の発見に関連する。一般的に、硝子体に薬を投与する場合、眼科医は、強膜等の眼の外側組織を突き通るために出来る限り細い（例えば、直径が小さい）針の使用を好む。直感的に、より小さな直径の針を使用することは、ステロイドを眼に注射する間により大きな粒子は針を詰まらせる傾向がある論理的予想を考慮して、注入されるより小さい薬物粒子、例えば小さい粒子の抗炎症ステロイド等を選択することにもつながる。しかしながら、発明者は、０.５μｍ未満〜約１μｍの粒子は「凝集」又は「圧縮」と言われるプロセスにより針を詰まらせる傾向があることを発見した。
【００１１】
従って、１回の硝子体内注射後、トリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイドの治療効果を持続する手段を開発する必要があり、もう一方で、そのような化合物の送達に付随する問題を改善する。
【００１２】
本願における文献の引用又は同定は、そのような文献が本発明の先行技術として有用であることの承認ではない。
【００１３】
【特許文献１】米国特許第５,７７０,５８９号明細書（米国特許出願第０８／５８６,７５０号明細書）
【特許文献２】オーストラリア特許第７６９,６７１号明細書（オーストラリア特許出願第４６７３２／９９号明細書）
【非特許文献１】Ｍａｓｓｉｎ Ｐ他（２００４）“Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ ｆｏｒ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｄｉｆｆｕｓｅ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ： ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｔｒｉａｌ” Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ, １１１（２）:２１８−２４
【非特許文献２】Ｂｅｅｒ ＰＭ他（２００３）“Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ ａｆｔｅｒ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ” Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ, １１０（４）：６８１−６
【非特許文献３】Ｊｏｎａｓ ＪＢ他（２００４）“Ｄｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｆｏｒ ｄｉｆｆｕｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ” Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ., １３８（１)：１５８−６０
【非特許文献４】Ｊｏｎａｓ ＪＢ他（２００４）“Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ａｃｅｔｏｎｉｄｅ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ” Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ, １３７（３）：５６０−２
【非特許文献５】Ｄｅｇｅｎｒｉｎｇ ＲＦ他（２００４）“Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ ｆｏｒ ｄｉｆｆｕｓｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍａｃｕｌａｒ ｅｄｅｍａ” Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｅ., １０１（３）：２５１−４
【非特許文献６】Ｒｏｂｉｎｓｏｎ他“Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ Ａｃｅｔｏｎｉｄｅ Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ Ｆｒｅｅ （ＴＡＣ‐ＰＦ） Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ,” Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ, （ＡＲＶＯ）, ２００４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
先行技術に付随する問題に対応するために行った研究で、トリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイド薬が、微粉化結晶として調製される場合に、しばしば融着、集合、又は凝集して結晶複合体の形状になることが明らかになった。結晶複合体は、外見は大きい粒子だが、実際には小さな結晶からなる（例えば、図１参照）。更に、結晶複合体の溶解速度は、小さな結晶の溶解速度と同等である。従って、本発明の１つの原理によると、治療製剤中の薬の総濃度を増加させずに、トリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイドを硝子体内で治療効果のある滞留時間を増大させる鍵は、抗炎症ステロイドのより大きな結晶の割合を増加させると同時にステロイドの結晶複合体の割合を減少させることである。従って、トリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイド等の溶解速度は、治療組成物すなわち製剤中のより大きな薬物結晶の相対的な存在比を増加させることで減速（即ち、より長い溶解時間）することができる。より大きな薬物結晶は、結晶複合体と比較して体積に対する表面積がより小さく、そのようなものは溶解速度が遅い。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の第１の態様によると、様々な大きさの結晶及び結晶複合体の形状を含む抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物を提供し、組成物中で大きさが約２０μｍよりも大きい結晶及び結晶複合体の割合は、大きさが約２０μｍ未満の結晶及び結晶複合体の割合よりも多い。好ましくは、組成物は、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶を含む。好ましくは、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合は、同様の大きさの結晶複合体の割合よりも多い。
【００１６】
本発明の第２の態様によると、様々な大きさの結晶及び結晶複合体の形状で含まれる抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物を提供し、結晶は約０.５μｍ〜約４０μｍ、及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさに凝集する。好ましくは、結晶は、約０.５μｍ〜約４０μｍ、及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさで結晶複合体よりも凝集する。更により好ましくは、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合は、大きさが約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶の割合よりも多い。
【００１７】
本発明の第３の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法を提供し、該方法は、結晶複合体と比較して、組成物中の結晶の濃度を増加する工程を含む。
【００１８】
本発明の第４の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法を提供し、該方法は、特定のトリアムシノロン製剤中で約５０μｍ〜約６００μｍの結晶複合体の割合と比較して、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合を増加させる工程を含む。
【００１９】
本発明の第５の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容される組成物の調製方法を提供し、該方法は、結晶及び結晶複合体を含むトリアムシノロン組成物から約５０μｍ〜約６００μｍの大きさのトリアムシノロン結晶を選択する工程を含む。該方法は、眼科的に許容されるキャリア、希釈剤及び／又は賦形剤に結晶を前記範囲で添加する工程を更に含む。
【００２０】
本発明の第６の態様によると、本発明の第３、４又は５の態様に記載される方法のいずれかにより調製される薬学的に許容される組成物を提供する。
【００２１】
本発明の第７の態様によると、治療を必要とする患者の眼の炎症症状の治療方法を提供し、該方法は少なくとも１つの眼組織に又はその傍に、ここで開示される薬学的に許容される組成物、又はここで開示される方法により調製される薬学的に許容される組成物を投与する工程を含む。
【００２２】
好ましくは、抗炎症ステロイドは、トリアムシノロン類製剤の一つである。本発明の非常に好適な形態において、使用されるトリアムシノロン製剤は、トリアムシノロンアセトニドである。更に、明細書は、本発明の「活性」化合物又は「治療」化合物として、本発明のトリアムシノロンアセトニドを含む本発明の抗炎症ステロイドに言及する。本発明の薬学的に許容される組成物は、好ましくは、硝子体内注射、又は局所適用により眼に送達される。しかしながら、送達形態、いわゆる、送達ルート又は方法は、硝子体内注射、又は局所適用に制限されず、むしろ、当業者に公知の又は使用される適切な方法を含むことが理解されよう。
【００２３】
本発明の他の目的、特徴、及び利点は、添付の請求項の観点から検討する場合、詳細については上記及び下記記載より検討されるとおりである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
総則
本明細書に記載の発明が、具体的に記載するもの以外の変形及び変更を受けることが当業者に理解されよう。
本発明は、全ての変形及び変更を含む。本発明は、また、明細書に参照される、又は示される全ての工程、特徴、組成物及び化合物を、個別に又は集団で、並びに工程又は特徴のいずれか及び全ての組合せ、又はいずれか２つ以上を含む。
この本文で引用する各文献、引例、特許出願、又は特許は、参照することにより全てが明示的に援用され、これは、本文の１部として読者に読まれ、及び検討されるべきことを意味する。この本文で引用する各文献、引例、特許出願、又は特許は、単に簡潔性の理由により繰り返されない。
本発明は、本明細書に記載される例証の目的のためだけに示される詳細な実施形態により範囲を制限されない。機能的に同等の製品、組成物、及び方法は、明らかに本明細書に記載される発明の範囲内である。
本明細書に記載される発明は、１つ以上の値の範囲（例えば、大きさ、濃度等）を含む。値の範囲は、範囲内の全ての値を含むと理解され、範囲を規定する値、及び同じ又は範囲の境界を規定する値に隣接値として実質的に同じ結果をもたらす範囲付近の値を含む。
この明細書を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、「含む」又は「含んでいる」等の派生語は、記載される実体又は実体の群を含むことを意味するが、しかし、他の実体又は他の実体の群を除外するものではない。この開示において、及び特に請求項及び／又は段落において、「含む」及びその派生語は、米国特許法に帰属する意味であることに留意すべきである（例えば、「有する」及びその派生語を意味する。「本質的に…からなる」及びその派生語は、米国特許法に帰属する意味である。例えば、明らかには引用されていない要素を許容するが、先行技術に見られる、又は本発明の基本的な、若しくは新規の特徴に影響を及ぼす要素は除外する。
ここで使用される選択された用語の他の定義は、本発明の明細書内に見出され、明細書を通して適用される。定義さていなければ、ここで使用される他の全ての科学的及び技術的用語は、本発明が属する当業者に一般的に理解されるような同じ意味を有する。
【００２５】
本発明は、特定の抗炎症ステロイド製剤中で結晶複合体を除外すると同時に、結晶の大きさを増大させることで活性化合物の作用部位での薬物暴露の総量を変えずに抗炎症ステロイドのほぼ平らな溶解曲線が実現できる予想外の発見に基づく。結晶は複合体とは異なり、眼内でより長く持続する活性化合物源を提供する。
【００２６】
本発明の第１の態様によると、様々な大きさの結晶及び結晶複合体の形状で含まれるトリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物であって、該組成物中で大きさが約２０μｍよりも大きい結晶及び結晶複合体の割合は、大きさが約２０μｍ未満の結晶及び結晶複合体の割合よりも多い組成物を提供する。好ましくは、組成物は、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶を含む。好ましくは、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合は、同様の大きさの結晶複合体の割合よりも多い。
【００２７】
本発明の第２の態様によると、様々な大きさの結晶及び結晶複合体の形状で含まれるトリアムシノロンアセトニド等の抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩を含む薬学的に許容される組成物であって、結晶は約０.５μｍ〜約４０μｍ、及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさに凝集する組成物を提供する。好ましくは、結晶は、約０．５μｍ〜約４０μｍ、及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさで結晶複合体よりも凝集する。更により好ましくは、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合は、大きさが約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶の割合よりも多い。
【００２８】
本明細書で使用する「結晶複合体」とは、集合、融着、又は何か他の方法で互いに結合する、結晶及び非結晶を含む。この語句は、注射針（２７ゲージ針等、しかしこれに限定されない）通過後に集合したままの複合体を含む。光散乱測定を参照すると（表６、表７、図３Ａ、図３Ｂ、図４及び図５）、結晶の大きさが、約０.５μｍ（ケナコルト（Ｒ）Ａ４０中）〜約６００μｍ（ＮｅｗＣｈｅｍ非微粉化物質中）の範囲であることが分かる。
【００２９】
本発明の文脈において、本明細書で使用する「結晶」は、その通常の意味として特徴的な内部構造を有し、且つ一定の特徴的な角度で交差する対称的に配列された平面に囲まれる固体を有する。通常、結晶は、より小さな結晶の複合体にはならない。しかしながら、単一の大結晶は、大結晶に付着する非常により小さな結晶を有し得る。結晶がそのような形態で含まれる場合には、結晶複合体とは見なされない。図６及び図７は、例えば、走査電子顕微鏡検査により、結晶の大きさは様々であるが１２０μｍよりも大きい結晶が観察できることを示す（図６の底辺の１１個の点は１２０μｍを示し、及び図７の底辺の１１個の点は１２０μｍを示す）。
【００３０】
結晶は、特定の大きさの範囲で結晶含有量を増やすようにされた製剤中で凝集すると考えられており、これは、特定の大きさの結晶を選択した後で、他の製剤とそれら結晶を組み合わせることにより、あるいは製剤としてそれら結晶を使用することにより達成される。特定の大きさの結晶の選択方法は当業者により理解される。
【００３１】
上記範囲内での結晶の大きさは、治療対象の眼組織中又はその傍での、必要とされる抗炎症ステロイドの溶解時間及び作用寿命に応じて変わる。好ましくは、大粒径の結晶の範囲は、約５０μｍ〜約６００μｍ、約６０μｍ〜約５００μｍ、約７０μｍ〜約４００μｍ、約８０μｍ〜約３００μｍ、約９０μｍ〜約２５０μｍ、又は約１００μｍ〜約２００μｍで変わる。小粒径範囲の結晶を含む場合、該結晶の大きさは、約１μｍ〜約４０μｍ、約５μｍ〜約３５μｍ、約１０μｍ〜約３０μｍ、約１５μｍ〜約２５μｍ、又は約２０μｍ〜約２２μｍで変わる。
【００３２】
本発明で使用される抗炎症薬ステロイドは、本明細書に記載の範囲の大きさの結晶、又は結晶複合体のいずれかで調製可能であり、抗炎症薬作用を有し、また眼領域の炎症性疾患の治療での使用に適している。好適な抗炎症ステロイドは、例えば、下記式に示す１１−置換−１６α,１７α−置換メチレンジオキシステロイドを含む：
【化９】
式中、
【化１０】
は、
【化１１】
又は、
【化１２】
であり、
Ｒ１及びＲ２は、水素、又はアルキルであり、
【化１３】
は、
【化１４】
であり、
Ｒ３は、メチル、ヒドロキシメチル、又はメチルアミノアルキレンカルボニルオキシメチル、アルキルカルボニルオキシメチル、又はフェニルアミノアルキレンカルボニルオキシメチルであり、
Ｒ４は、アルカノイルであり、Ｘはハロゲンである。
【００３３】
より好ましくは、下記式に示す化合物である：
【化１５】
Ｒ３は、ヒドロキシメチル、フェニルカルボニルアミノイソプロピルカルボニルオキシメチル、又は、２,２−ジメチルプロピルカルボニルオキシメチルである。
【００３４】
好適なステロイドの１つは、結晶構造の９−フルオロ−１１,２１−ジヒドロキシ−１６,１７−［１−メチルエチリジンビス（オキシ）］プレグナ−１,４−ジエン−３,２０−ジオンである。
【化１６】
この化合物は、一般名であるトリアムシノロンアセトニドとしてもまた知られており、公知の方法で好適に調製される。例えば、Ｆｒｉｅｄ他、（１９５８）,Ｊ. Ａｍ. Ｃｈｅｍ. Ｓｏｃ. ８０,２３３８ （１９５８）、米国特許第２,９９０,４０１号明細書、米国特許第３,０４８,５８１号明細書、又は米国特許第３,０３５,０５０号明細書に開示され、これらはそれぞれ参照することにより本願に明確に援用する。
【００３５】
本発明の活性化合物（即ち、本明細書に記載の抗炎症ステロイド）は、結晶複合体よりもむしろ結晶形状で含まれることを確実にするために、好ましくは、複合体を本発明の組成物の調製よりも前に分離させる。抗炎症薬ステロイドの結晶複合体は、超音波破砕、及び微粉化（３０μｍ未満の粒子と定義する）等の当技術分野で周知の様々な方法により分離される。超音波破砕は、短期間（例えば、３０秒）使用する場合に結晶複合体を破壊し、又はより長期間使用する場合に結晶を破砕するために使用される。結晶の大きさは、更に、再結晶化／再結晶成長、γ線照射、及び高温（例えば、加圧滅菌）により影響される。粒子又は結晶は、また、不活性キャリアの密度勾配遠心分離、選択ろ過、又は乾燥篩分け等の当技術で公知の方法、又は微細物質を分割する当技術の他の方法により分画される。
【００３６】
約０.５μｍ未満〜約１μｍの粒子及び結晶は、組成物が注射により送達される場合に、凝集又は圧縮作用により針を詰まらせる傾向があることが分かっている。更に、これらのより小さな粒子は、硝子体内に迅速に溶解するため、より大きな粒子よりもより迅速に眼内環境から消失する。その一方、約１μｍ〜約１２μｍの粒子は、残留効果を与えるために十分な期間眼内環境に残り、また、注射器から送達される場合に針が詰まる傾向がない。
【００３７】
結晶が、約０.５μｍ〜約４０μｍ及び約５０μｍ〜約６００μｍの大きさで凝集する場合、組成物の特性は、大粒径範囲の粒子の体積あたりの相対的重量を小粒径範囲の粒子の体積あたりの重量に対して増減させることで変更される。組成物の特性の変更により、当業者が治療する病気、及び治療に必要とされる寿命に応じて重要である硝子体内での様々な滞留時間の組成物を開発可能である。例えば、大粒径範囲の結晶に対する、小粒径範囲の結晶の体積あたりの重量の比は、約１：１,１：２,２：１,１：３,３：１,２：３,３：２,１：４,４：１,３：４,４：３,１：５,５：１,２：５,５：２,３：５,５：３,４：５,５：４,１：６,６：１,５：６,６：５である。
【００３８】
本発明を別の方法で考察すると、小粒径範囲の粒子又は結晶の割合は、１％（ｗ／ｖ）,５％（ｗ／ｖ）,１０％（ｗ／ｖ）,１５％（ｗ／ｖ）,２０％（ｗ／ｖ）,２５％（ｗ／ｖ）,３０％（ｗ／ｖ）,３５％（ｗ／ｖ）,４０％（ｗ／ｖ）,４５％（ｗ／ｖ）,５０％（ｗ／ｖ）,５５％（ｗ／ｖ）,６０％（ｗ／ｖ）,６５％（ｗ／ｖ）,７０％（ｗ／ｖ）,７５％（ｗ／ｖ）,８０％（ｗ／ｖ）,８５％（ｗ／ｖ）,９０％（ｗ／ｖ）,９５％（ｗ／ｖ）,９９％（ｗ／ｖ）よりも大きく、大粒径範囲はその逆数である。同様に、大粒径範囲の粒子又は結晶の割合は、１％（ｗ／ｖ）,５％（ｗ／ｖ）,１０％（ｗ／ｖ）,１５％（ｗ／ｖ）,２０％（ｗ／ｖ）,２５％（ｗ／ｖ）,３０％（ｗ／ｖ）,３５％（ｗ／ｖ）,４０％（ｗ／ｖ）,４５％（ｗ／ｖ）,５０％（ｗ／ｖ）,５５％（ｗ／ｖ）,６０％（ｗ／ｖ）,６５％（ｗ／ｖ）,７０％（ｗ／ｖ）,７５％（ｗ／ｖ）,８０％（ｗ／ｖ）,８５％（ｗ／ｖ）,９０％（ｗ／ｖ）,９５％（ｗ／ｖ）,９９％（ｗ／ｖ）よりも大きく、小粒径範囲はその逆数である。
【００３９】
約０.５μｍ〜約４０μｍ分画と比較して約５０μｍ〜約６００μｍ分画の結晶の分布に応じて、製剤の滞留時間が実質的に向上可能である。ここで使用する滞留時間とは、治療組成物が病気に対する治療効果を達成可能である治療に使用される時間を示す。
【００４０】
一般的に、約５０μｍ〜約６００μｍ分画の結晶の割合が増加するほど、滞留時間が改善されるが、長い滞留時間と治療効果の達成を上手く両立する必要がある。この両立は、眼内で必要とされる抗炎症薬効果の寿命及び病気によって異なる。本発明により調製される製剤は、好ましくは、少なくとも２ヶ月を超える滞留時間を有する。より好ましくは、滞留時間は３ヶ月よりも長く、４,５,６,７〜１２ヶ月よりも長い滞留時間が達成可能であり、非常に好ましい。
【００４１】
実例として、本発明の組成物は、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を２５％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を７５％（ｗ／ｖ）含む。組成物は、好ましくは、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２０％（ｗ／ｖ）及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を約８０％（ｗ／ｖ）含む。これらの割合とすることで、抗炎症ステロイドのほぼ均一な溶解曲線の長期間持続及び滞留時間の増加が続く活性化合物の初期投与が可能となる。あるいは、約５０％（ｗ／ｖ）の約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶と約５０％（ｗ／ｖ）の約５０μｍ〜約６００μｍ結晶との組成物、又は約７５％（ｗ／ｖ）の約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶と約２５％（ｗ／ｖ）の約５０μｍ〜約６００μｍ結晶との組成物が提供されうる。
【００４２】
好適な形態は、本発明は、約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶を約２５％（ｗ／ｖ）と約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）含む。好ましくは、組成物は、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２０％（ｗ／ｖ）と約１００μｍ〜約２００μｍの結晶を約８０％（ｗ／ｖ）含む。また、約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶を約５０％（ｗ／ｖ）と約１００μｍ〜約２００μｍの結晶を約５０％（ｗ／ｖ）含むか、あるいは、約０.５μｍ〜約４０μｍの結晶を約７５％（ｗ／ｖ）と約１００μｍ〜約２００μｍの結晶を約２５％（ｗ／ｖ）含む。
【００４３】
本発明の抗炎症ステロイドの薬学的に許容される塩の結晶もまた検討される。本明細書に記載の抗炎症ステロイドの薬学的に許容される塩は、例えば、薬学的に許容される酸と一緒に形成される無毒性酸付加塩が挙げられる。例えば、これらに限定されないが、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸及びリン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、グルコナート、乳酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、及び酒石酸塩等が挙げられる。本発明の使用に適切な抗炎症ステロイドは、また、基剤と一緒に薬学的に許容される金属塩、特に、無毒性アルカリ金属塩も含む。例えば、ナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４４】
本発明は、様々な大きさの結晶状で存在する単一抗炎症ステロイド組成物を投与するものとして記載されるが、一方で、該結晶は、約０.５μｍ〜約４０μｍ及び約５０μｍ〜約６００μｍの混合物、又は約０.５μｍ〜約４０μｍ及び約１００μｍ〜約２００μｍの混合物に存在するが、これらに限定されると理解すべきではない。２つ以上の抗炎症ステロイド、又は抗炎症ステロイド及び他の活性剤の組合せもまた、本発明の方法で使用される。このような性質の組合せは、公知の方法で調製可能である。同様に、本発明は、小粒径範囲のステロイドが大粒径範囲で使用されるステロイドと異なる、ステロイドの組合せを含む。
【００４５】
本発明の第３の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法を提供し、該方法は、結晶複合体と比較して、組成物中の結晶の濃度を増加する工程を含む。
【００４６】
本発明の第４の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法を提供し、該方法は、特定のトリアムシノロン製剤中で約５０μｍ〜約６００μｍの結晶複合体の割合と比較して、大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの結晶の割合を増加させる工程を含む。
【００４７】
本発明の第５の態様によると、患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容される組成物の調製方法を提供し、該方法は、結晶及び結晶複合体のどちらも含むトリアムシノロン組成物から約５０μｍ〜約６００μｍの大きさのトリアムシノロン結晶を選択する工程を含む。また、該方法は、結晶及び結晶複合体のどちらも含むトリアムシノロン組成物から約１００μｍ〜約２００μｍの大きさのトリアムシノロン結晶を選択する工程を含む。該方法は、眼科的に許容されるキャリア、希釈剤及び／又は賦形剤に結晶を前記範囲で添加する工程を更に含む。
【００４８】
本発明の第６の態様によると、本発明の第３、４又は５の態様に記載される方法のいずれかにより調製される薬学的に許容される組成物を提供する。
【００４９】
本発明の薬学的組成物で使用される的確な製剤は、広範囲の商業及び科学的基準により変わる。好ましくは、薬学的組成物への添加剤は、硝子体内蓄積注射として薬学的組成物の送達に適している。
【００５０】
組成物は、少なくとも薬学的に許容される添加剤（希釈剤、キャリア、添加剤、賦形剤、又は無毒、非医薬、非免疫抗原性の安定薬等）も更に含む。好ましくは、薬学的に許容される添加剤は眼科的に許容され、好ましくは硝子体に適合し、及び眼内に視力を損なう残留物を残すべきではない。組成物中で使用される薬学的に許容される添加剤は、好ましくは、硝子体内蓄積注射として薬学的組成物の送達に適している。
【００５１】
薬学的に許容される組成物の製剤に使用される希釈剤は、好ましくは、組成物の生物活性に過度に作用しないように選択される。注射可能な製剤に特に有効である希釈剤は、例えば、水、様々な塩類溶液、有機又は無機塩溶液、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンクス液が挙げられる。
【００５２】
更に、薬学的組成物は、他の緩衝剤、希釈剤、キャリア、抗原性補強剤、又は賦形剤等の添加剤等が挙げられる。眼に適用可能な薬理学的に許容される緩衝剤が使用され、例えば、トリス緩衝液、又はリン酸塩緩衝液が挙げられる。他の作用薬が様々な目的の製剤に用いられる。例えば、緩衝剤、防腐剤、補助溶剤、界面活性剤、油、湿潤剤、緩和剤、安定剤、又は抗酸化剤が用いられる。使用する水溶性防腐剤は、亜硫酸水素ナトリウム、硫酸水素ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、塩化ベンザルコニウム、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、エチルアルコール、メチルパラベン、ポリビニルアルコール、ベンジルアルコール、及びフェニルエチルアルコール等が挙げられる。これらの作用薬の量は、それぞれ約０.００１重量％〜約５重量％、及び好ましくは約０.０１重量％〜約２重量％で含まれる。使用する適切な水溶性緩衝剤は、米国食品医薬品局によって認可されている炭酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び炭酸水素ナトリウム等が所望の投与経路に対して使用される。これらの作用薬は、システムのｐＨを約２〜約９、及び好ましくは約４〜約８に維持するために十分な量で含まれる。該緩衝剤は、重量対重量百分率に基づいて組成物全体の約５％程度である。電解液として塩化ナトリウム及び塩化カリウム等もまた製剤に含まれるが、これらに限定されない。
【００５３】
いくつかの既存製品、例えば、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０等に提供される薬学的に許容される添加剤又は希釈剤としては、ベンジルアルコール等の溶媒等が挙げられ、これらは硝子体内で粒子をより速く消失させることが分かっている。これにより意外にも抗炎症ステロイドの寿命及び効果が、市販の組成物である希釈剤により弱まることが発見された。本発明は、意外にもまた、粒子又は結晶が生理食塩水又は同様の溶液に懸濁されれば、硝子体内での溶解が更に延長されることも分かった。平衡塩類溶液は、生理食塩水の代わりに使用し得る。本発明の実施に適切な様々な平衡塩類溶液は、当業者に周知である。例えば、乳酸リンゲル液の媒体が使用される。平衡塩類溶液の選択で、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０に比べて活性剤の即効性を高めることができる。希釈剤の選択に関する結果は、実施例４に詳細を示す。本発明の送達のための希釈剤の選択は、賦形剤の潜在的な毒性及び／又は炎症性を避けるためにもまた選択される。
【００５４】
従って、本発明は、また、抗炎症ステロイドが懸濁する希釈剤も対象とする。好ましくは、希釈剤は、平衡塩類溶液である。最も好ましくは、平衡塩類溶液が乳酸リンゲル液の媒体である。
【００５５】
本発明の第７の態様によると、治療を必要とする患者の眼の炎症症状の治療方法を提供し、該方法は少なくとも１つの眼組織に又はその傍に、ここで開示される薬学的に許容される組成物、又は、ここで開示される方法により調製される薬学的に許容される組成物に投与する工程を含む。
【００５６】
「治療」又は「治療する」という用語は、本発明の対象とする眼の炎症症状の予防、遅延、停止、改善を示すためにここでは同意語として使用される。
【００５７】
ここで使用される「眼の炎症症状」とは、眼の障害又は病態、例えば、病状の構成要素として炎症に起因する、又は炎症を有する健全な状態の動物に正常でない眼疾患を示す。眼疾患は、眼の血管新生、網膜疾患（糖尿病性網膜症、鎌状赤血球性網膜症、未熟児網膜症、黄斑変性（例えば、若年性黄斑変性、新生血管黄斑変性、加齢性黄斑変性））、虹彩ルベオーシス、炎症性疾患、慢性ブドウ膜を含む炎前部及び後部ブドウ膜炎、新生物（網膜芽細胞腫、偽神経膠腫）、フックス虹彩毛様体炎、血管新生緑内障、角膜血管新生（炎症性、移植による）、血管疾患の後遺症（網膜虚血、脈絡膜血管機能不全、脈絡膜血栓症（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）、頸動脈虚血)、脈絡膜血管新生、翼状片、眼神経の新生血管形成、眼球穿通又は眼球打撲による新生血管形成及び近視性網膜症のような滲出性網膜症、様々な原因論から生じる類嚢胞黄斑浮腫、滲出性の黄斑変性、糖尿病黄斑浮腫、中心静脈閉塞、分枝静脈閉塞、及び網膜のレーザー治療に起因する黄斑浮腫等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５８】
各必要用量（即ち、各用量及び投与頻度）は疾病の重症度、投与方法、患者の反応、患者の健康状態及び患者の病歴により変わる。影響のある化合物の有効量が本発明の方法で好適に用いられる。本発明により使用される化合物の用量は、化合物、組成物の製剤、投与方法、及び治療条件により変わる。眼球外及び眼球内製剤（侵襲的な器具で送達される）に対して、治療組成物は、標的となる眼の区画（例えば、網膜疾患の治療に対する後眼房）内で最終濃度が約０.０５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌに達するような高濃度で送達される。
【００５９】
硝子体内注射によりステロイドを投与する場合に、抗炎症ステロイドを注射用に体積を最小化するために凝集させなければならない。好ましくは、抗炎症ステロイドが眼内送達により投与される場合に、治療製剤の最終濃度は約０.０５ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌである。より好ましくは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約７ｍｇ／ｍｌ、約１.５ｍｇ／ｍｌ〜約６ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、又は約３ｍｇ／ｍｌ〜約４ｍｇ／ｍｌである。実例として、抗炎症ステロイドは、約４ｍｇ／ｍｌで硝子体内に沈殿する。この適量範囲で治療する病状に投与される。
【００６０】
本発明の方法を使用して、薬学的に許容される製剤は、少なくとも眼の炎症状態の部位に治療薬を送達する方法により患者に投与される。好ましくは、組成物は、正確な投与量の単回投与に適切な単位投与形態で投与される。好適な送達方法は、眼内送達であるが、本発明は、眼内送達に限定されない。本発明の実施に適切な投与経路は、また、局所適用、カニューレによる送達、眼窩底への眼窩周囲注射（テノン嚢下を含む）、結膜下注射、縫合有無での眼内への移植（例えば、水晶体嚢への移植）、及び硝子体内注射を含むが、これらに限定されない。１つ以上のステロイド、又は付加的な活性剤が投与されれば、投与は、例えば、硝子体内注射による第１ステロイド、及び局所適用による第２ステロイドの送達等の投与方法の組合せによる。
【００６１】
組成物の投与は、好ましくは眼内注射によるが、十分な量のステロイドが治療する組織に接触すれば、他の投与様式が効果的でありうる。眼内注射は、ステロイドを含む浸透組成物を使用する場合に、硝子体内注射、眼房注射、結膜下注射若しくはテノン嚢下注射等の眼の外層への注射、又は軟膏、ゲル、若しくは点眼液として角膜への局所適用により効果をもたらす。好ましくは、眼内注射は硝子体内注射であり、好ましくは、セルフシール２１〜３０ゲージ針、又は他の適切な目盛りつき送達装置による。眼内注射は、セルフシール針で毛様体扁平部を通して注射される。好ましくは、２７ゲージ針がこの目的に使用される。
【００６２】
本発明の実施に使用される注射器は、２１〜３０ゲージ針（例えば、２３,２４,２５,２６又は２７ゲージ針）を収容可能な適切な注射器であり、好ましくは、小容量であり、例えば、１.５ｍＬ、又はより好ましくは０.５ｍＬである。針、及び注射器は、針が注射器から取外しできるタイプが可能であるが、器具は単一の注射針構造が好ましい。これは、注射器から針が離脱する可能性を明らかに制限する。器具は、また、好ましくは、改ざん防止である。従って、本発明のこの組成物は、投与準備が整っている事前に準備した注射器に単回投与量の形態で提供される。
【００６３】
適切な様式の注射器は、ユニジェクト（Ｒ）（ベクトン・ディッキンソン株式会社）の名で販売されている。この様式の注射器では、プランジャーよりはむしろ針を供給する柔軟なリザーバ側に圧力を印加することで、物質が針を通って眼内に注入される。名前が示唆するように、リザーバ及び針の構成は、単一ユニットを形成する。
【００６４】
本発明の治療頻度は、治療する疾病、抗炎症ステロイドの送達可能な濃度、及び送達方法等を含むが、これらに限定されない様々な要因によって決定する。治療頻度に影響する他の要因は、また患者の健康及び病歴も含む。硝子体内注射により抗炎症ステロイドが送達されれば、投薬頻度は、毎月又は３ヶ月毎である。投薬頻度は、３ヶ月毎よりも少ないことが好ましい。前回投与したステロイド物質が目で観て分解した場合に投与して、投薬頻度を目視によって決定してもよい。しかしながら、ステロイド物質は目に見えて分解するが、眼内で溶解した治療レベルで存在しうるため、この計量には注意するべきである。治療結果が達成されると、薬を漸減、又は投与中止可能となる。時々、副作用が治療中止の根拠となる。一般的に、化合物の有効量とは、自覚症状を取り除く、あるいは、臨床医学者若しくは他の有資格のオブザーバーによる客観的に特定可能な改善を提供するものである。
【００６５】
硝子体内注射は、当技術分野で周知の様々な方法で達成される。例えば、眼を、ベタジン（Ｒ）等の滅菌剤で洗浄して、眼内でステロイド結晶が腹側表面に向かって後極に定着する位置に細いゲージ針（例えば、２７ゲージ）を用いてステロイドを適切なキャリアに注射する。注射前に眼に陽圧をかけて、眼を注射に備える必要がある。症例によっては、穿刺術が必要である。局部麻酔、又は全身麻酔が必要である。
【００６６】
本発明は、また、様々な大きさの結晶形状で含まれる抗炎症ステロイドの薬学的に許容される組成物、又はその薬学的に許容される塩を提供し、結晶は、ここで記載される大きさの範囲の混合物で、生体適合性及び生分解性マトリックスで、例えば、局所形式で含まれる。
【００６７】
抗炎症ステロイド、又はその薬学的に許容される塩の局所適用は、ｉｎ−ｓｉｔｕゲル化可能な水性組成物である。該組成物は、眼、又は眼の外部で涙液と接触することでゲル化を促進する効果的な濃度でゲル化剤を含む。適切なゲル化剤は、エチレンオキシドとプロピレンオキシドとのテトラ置換エチレンジアミンブロック共重合体（例えば、ポロキサミン）等の熱硬化性重合体、ポリカルボフィル、及びジェラン、カラギナン（例えば、κ-カラギナン及びι-カラギナン）、キトサン、及びアルギン酸ゴム等の多糖類が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６８】
ここで使用される「ｉｎ−ｓｉｔｕゲル化可能な」とは、眼と、又は眼の外部で涙液との接触でゲルを形成する低粘性の液体だけではなく、また、眼に投与すると実質的に増加した粘度、又はゲル剛性を示す半液体及びチキソトロピーゲルなどのより粘性のある液体も含む。実に、本発明の組成物をゲルとして製剤することは、例えば、反射性まばたきでの流涙等による、投与直後に組成物の損失を最低化するために都合が良い。投与することで更に粘度の増加、又はゲル剛性を示す組成物が好まれるが、最初のゲルが涙液の排液による損失に十分な耐性を示して、ここで特定した効果的な滞留時間を提供すれば、絶対に必要なものではない。
【００６９】
眼科疾患の治療に対する局所製剤を調製するために、治療効果をもたらす量の抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩が、当技術分野で公知の眼科用賦形剤中に含有される。投与される治療化合物の量、及び局所製剤中の化合物濃度は、希釈剤、選択される送達システム又は器具、患者の病態、副作用及び製剤中の化合物の安定性によって決定される。よって、医師は、本願で問題となる患者、又は同様の患者における臨床経験により、治療化合物の適切な濃度を含む適切な製剤を用い、及び投与する製剤の量を選択する。
【００７０】
本発明の方法は、単一、または光ダイナミック療法、レーザー治療、又は１つ以上の生物学的又は薬学的治療等の１つ以上の他の治療との組合せで行われる。
【００７１】
網膜のレーザー治療が示唆される場合は、レーザー治療の前又は後で、抗炎症ステロイドが注射により投与される。
【００７２】
抗生物質、又は抗血管新生薬等の他の物質が、抗炎症ステロイドとの併用療法で注射される。本発明の方法で用いることが可能な内皮細胞に対するＶＥＧＦ作用を阻害するために設計された２つの抗血管新生薬は、（ａ）ルーセンティス（Ｒ）（ジェネンテック）、（ｂ）マキュジェン（Ｒ）（アイテック・ファーマシューティカルズ）である。ルーセンティス（Ｒ）及びマキュジェン（Ｒ）は、硝子体内に注射される化合物、及び効力のある抗血管新生製剤である。非常に好適な形体において、本発明の薬学的組成物は、記載される抗炎症ステロイド、及びルーセンティス（Ｒ）又はマキュジェン（Ｒ）等の抗血管新生製剤を含む。
【００７３】
以前は、ｒｈｕＦａｂ Ｖ２、又はＡＮＤ−Ｆａｂとして知られていたルーセンティス（Ｒ）（ラニビツマブ（ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ））は、ジェネンテックが開発した治療用ヒト化抗ＶＥＧＦ(血管内皮細胞増殖因子)抗体フラグメントであり、血管新生（新しい血管の形成）に重要な役割をするタンパク質であるＶＥＧＦを結合、又は抑制する。ルーセンティス（Ｒ）は、新規の血管の成長を阻止し、滲出型加齢性黄班変性（ＡＭＤ）の疾患の増悪に導くと考えられる血液の漏れを減らすように設計される。本発明により調製された薬学的組成物と併用して投与される場合、ルーセンティス（Ｒ）は、用量が約３００μｇ又は約５００μｇのいずれかで４回投与されるべきである。
【００７４】
マキュジェン（Ｒ）（ペガプタニブナトリウム、抗ＶＥＧＦアプタマー、又はＥＹＥ００１ アイテック・ファーマシューティカルズ）は、特に、ＶＥＧＦ分子を結合し、及び内皮細胞表面のレセプターの活性化を阻止する遺伝物質の合成フラグメントからなる。本発明により調製された薬学的組成物と併用して投与される場合、マキュジェン（Ｒ）は、用量が約０.３ｍｇ又は約３.０ｍｇのいずれかで４又は６週間毎に投与されるべきである。
【００７５】
本発明の他の態様において、抗炎症ステロイドは、ここで説明される眼科疾患治療のために、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾロン、プレドニゾン）、エストロゲン（例えば、エストラジオール）、アンドロゲン（例えば、テストステロン）レチノイン酸誘導体（例えば、９シスレチノイン酸、１３トランスレチノイン酸、オールトランスレチノイン酸）、ビタミンＤ誘導体（例えば、カルシポトリオール、カルシポトリエン）、非ステロイド抗炎症薬、ビタミンＤ誘導体、抗感染症薬、タンパク質キナーゼＣ阻害薬、ＭＡＰキナーゼ阻害薬、抗アポトーシス薬、成長因子、栄養ビタミン、不飽和脂肪酸、及び／又は眼用抗感染薬と併用して調製される。更に、本発明の他の実施形態において、これらの薬剤の混合物が使用される。
【００７６】
ここで記載する眼用抗感染薬は、ペニシリン（アンピシリン、アゾシリン、カルベニシリン、ジクロキサシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ピペラシリン、及びチカルシリン）、セファロスポリン（セファマンドール、セファゾリン、セフォタキシム、セフスロジン、セフタジジム、セフトリアキソン、セファロチン、及びモキサラクタム）、アミノグリコシド（アミカシン、ゲンタマイシン、ネチルマイシン、トブラマイシン及びネオマイシン）、アズトレオナム、バシトラシン、シプロフロキサシン、クリンダマイシン、クロラムフェニコール、コトリモキサゾール、フシジン酸、イミペネム、メトロニダゾール、テイコプラニン及びバンコマイシン等の各種薬剤、抗真菌性薬（アンホテリシンＢ、クロトリマゾール、エコナゾール、フルコナゾール、フルシトシン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、ナタマイシン、オキシコナゾール、及びテルコナゾール）、抗ウイルス性薬（アシクロビル、エチルデオキシウリジン（ｅｔｈｙｌｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ）、ホスカネット、ガンシクロビル、イドクスウリジン、トリフルリジン、ビダラビン、及び(Ｓ)‐１‐（３‐ヒドロキシ‐２‐フォスフォニルエトキシプロピル）シトシン（(Ｓ)‐１‐（３‐ｄｙｄｒｏｘｙ‐２‐ｐｈｏｓｐｈｏ‐ｎｙｌｕｅｔｈｏｘｙｐｒｏｐｙｌ）ｃｙｔｏｓｉｎｅ）（ＨＰＭＰＣ）、抗腫瘍薬（アルキル化剤、(クロラムブシル、シクロホスファミド、メクロレタミン、メルファラン、及びブスルファン)、アントラサイクリン系抗生物質（ドキソルビシン、ダウノマイシン、及びダクチノマイシン）、シスプラチン、及びニトロソウレア等の細胞周期（分裂）非特異性剤）)、ピリミジン拮抗薬（シタラビン、フルオロウラシル及びアザシチジン）等の代謝拮抗薬、葉酸拮抗薬（メトトレキサート）、プリン拮抗薬（メルカプトプリン及びチオグアニン）、ブレオマイシン、ビンカアルカロイド類（ビンクリスチン及びビンブラスチン)、ポドフィロトキシン類（エトポシド（ＶＰ−１６）)、及びニトロソウレア類（カルムスチン（ＢＣＮＵ）)、シクロスポリンＡ及びＳＫ５０６等の免疫抑制薬、及び抗炎症薬又は抑制因子（阻害因子）、プラスミノゲン活性化因子の阻害因子等のタンパク質分解酵素の阻害因子等が挙げられるがこれらに限定されない。硝子体内投与及び硝子体半減期に加えて上記薬剤の局所及び結膜下投与の用量が“Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ”，Ｐｅｙｍａｎ Ｇ Ａ ａｎｄ Ｓｈｕｌｍａｎ， Ｊ Ｅｄｓ．， ２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ， １９９４，（Ａｐｐｌｅｔｏｎ−Ｌｏｎｇｅ）に開示され、この関連部分を本願に明示的に援用する。
【実施例】
【００７７】
本発明の更なる特徴は、以下の限定的でない実施例により詳細に記載される。しかし、当然のことながら、この詳細な説明は本発明を例示する目的のためだけに挙げられる。上記に示した本発明の大まかな説明を限定すると決して理解すべきではない。
【００７８】
実施例１
組成物１の調製
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の形状のＴＡ試料を天津天藥藥業股フェン有限公司（Ｔｉａｎｊｉｎ Ｔｉａｎｙａｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ 中国天津）のＴＡ試料と均等な割合で混合した（「中国試料」）。これにより粒径が１μｍ〜１００μｍのＴＡを含む組成物を得る。
【００７９】
組成物２の調製
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の形状のＴＡ試料を分画して約１μｍ〜２０μｍの大きさの結晶を抽出する。更に、中国試料のＴＡを分画して約８０μｍ〜１２０μｍの大きさの結晶を抽出する。そして、分画した物質を、４対１（ｗ／ｖ）の割合で混合する。これにより粒径が１μｍ〜１２０μｍのＴＡを含む組成物を得る。
【００８０】
組成物３の調製
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の形状のＴＡ試料を分画して約５μｍ〜２０μｍの大きさの結晶を抽出する。更に、中国試料のＴＡを分画する約１０５μｍ〜１２０μｍの大きさの結晶を抽出する。そして、分画した物質を、１対１（ｗ／ｖ）の割合で混合する。これにより粒径が１μｍ〜１２０μｍのＴＡを含む組成物を得る。
【００８１】
組成物４の調製
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の形状のＴＡ試料を分画して約５μｍ〜１５μｍの大きさの結晶を抽出する。更に、中国試料のＴＡを分画して約１１０μｍ〜１２０μｍの大きさの結晶を抽出する。そして、分画した物質を、１対４（ｗ／ｖ）の割合で混合する。これにより粒径が１μｍ〜１２０μｍのＴＡを含む組成物を得る。
【００８２】
実施例２
粒径分析
新しい及び古いケナコルト（Ｒ）Ａ４０試料に対してレーザー散乱法（マルバーン）を使用して粒径分析を行ったところ、ＴＡ粒子は平均の大きさが１３μｍであった。両方とも分布が非常に狭かった。
ＳＩＣＯＲ Ｓ．ｐ．Ａ（イタリア、ミラノ）（「イタリア試料」）の物質分析を図４に示す。
【００８３】
微粉化された中国のＴＡ試料を分析すると、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０物質と同様に平均粒径は１１.４８μｍ（図５）であった。しかしながら、粒径分布は、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０試料よりも広かった。
これらの結果の１つの重要な発見は、ＴＡ結晶は古い試料では成長せず、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０生成物中の粒子分布は、かなり狭い範囲内に良く調整されていることである。中国試料のより広い粒径分布によって、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０製品よりも一定な放出率が長い期間にわたって提供されることが期待される。
【００８４】
実施例３
トリアムシノロンアセトニドの溶解試験−比較試験
方法
試料１０ｍｇを１％のＴｗｅｅｎ８０を含む平衡塩類溶液１０ｍＬに溶解して試料を調製した。そして、溶液中の試料を激しく振とうさせ、２２ゲージ針を通して何度も高速放出させた。そして、この懸濁２ｍＬを実質的に全粒子を保持する２２μｍのデュラポア（Ｒ）メンブレンフィルターでろ過した。そして、フィルターを水２ｍＬでリンスした。
この試料の調製方法は、大きな結晶として溶解してそのため結果に偏りを生じると考えられる大きな結晶の凝塊からなる粒子の問題を回避する。
【００８５】
溶解は、約１１ｍＬ／分で溶解チャンバを通して２０％メタノール水のガス抜きした溶剤溶液をくみ上げる流入システムを使用して行った。この流速は、溶剤／吸光剤／キャリア許容量の大きな余剰が実験を通して維持されるシンク条件に維持した。流速と溶剤溶液との組合せにより、流入セルが実質的に全実行時間３０分間で許容域に吸光値を記録可能であり且つ実験が適当な期間内に完了可能な割合で、ＴＡ結晶が溶解する。
【００８６】
溶剤溶液へのＴＡの溶解度は、水単独へのＴＡの溶解度の約２〜３倍である。しかしながら、溶剤溶液の湿潤特性は、水単独の湿潤特性よりも優れている。
【００８７】
試料約２ｍｇを上記に概要を説明したようにフィルター上で調製した。そして、フィルターを、溶解チャンバとして使用した変更したステンレス鋼ｓｗｉｎｎｅｘ（Ｒ）アダプターに置いた。溶解チャンバからの流出液は、波長２３８ｎｍで分光光度計日立１００１の低容量流入セルに通した。吸光度は振れ１００％を生じる２吸光度単位でチャート式記録計に記録した。
【００８８】
溶解試験は、流速１１ｍＬ／分で３０分間行なった。２分間の平均吸光値を算出した。実験はデュプリケートで行い、各試料に対する２つの吸光値を平均した。
【００８９】
結果
中国試料
【表１】
表１の結果を検討すると、吸光値の合計は２.２２２（平均０.１４８）であり、従って、チャンバを通った溶解液の量を考慮すると、この期間中に溶解したＴＡの量（３５０のＥ１％を使用する）は１.４０ｍｇであると計算できる。
【００９０】
これは、溶解チャンバに入れた試料の量に基づいて、予想していたほぼ２ｍｇ未満である。
しかしながら、試料溶液は、溶解チャンバに加える数時間前に調製したため、実験の開始前にかなりの量の物質が溶解した可能性がある。これは、最初の溶解速度を遅らせるが、その後の溶解速度に影響しない。
【００９１】
・ケナコルト（Ｒ）Ａ４０試料
【表２】
表２の結果を検討すると、吸光値の合計は２.８６２（平均０.１９１）であり、従って、チャンバを通った溶解液の量を考慮すると、この期間中に溶解したＴＡの量（３５０のＥ１％を使用する）は１.８０ｍｇであると計算できる。
これは、溶解チャンバに入れた試料の量に基づいて、予想していたほぼ２ｍｇ未満である。
しかしながら、試料溶液は４０ｍｇ／ｍｌの懸濁液から調製した。おそらく４０ｍｇよりも多い量が（過量のため）アンプルから移動したであろうが、しかし、溶液中で更に時間がたてば粒子は溶解するであろうことは間違いない。この試料は、調製後に適度に迅速に使用した。
【００９２】
・イタリア試料
【表３】
表３の結果を検討すると、吸光値の合計は３.０４９（平均０.２０３）であり、従って、チャンバを通った溶解液の量を考慮すると、この期間中に溶解したＴＡの量（３５０のＥ１％を使用する）は１.９２ｍｇであると計算できる。
結論
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０及び中国試料の両方は１０分間で、同程度（それぞれ、８９.７％及び８９.０％）溶解した一方で、イタリア試料は９９.３％溶解した。イタリア試料は１４分間で完全に溶解したが、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０及び中国試料は、２０分間後に９８％及び９７.３％だけ溶解した。
ケナコルト（Ｒ）Ａ４０及び中国試料の溶解特性に大差がないことが分かる。
【００９３】
実施例４
様々な媒体中のトリアムシノロンアセトニドの平衡溶解度
ＨＰＬＣアッセイ法をＴＡ用に開発した。これは、様々な媒体中でのＴＡの平衡溶解度の決定に使用した。アセトニトリル溶液が、溶剤／吸光剤／キャリア許容量の大きな余剰が維持されるシンク条件の維持に有利であると考えられる。ケナコルト（Ｒ）Ａ４０上清中のＴＡ濃度もまた調査した。結果を表４に示す。
【表４】
特筆すべきことに、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０の上清中のＴＡ濃度が、水又は生理食塩水中よりもかなりかなり高い。ＴＡの平衡濃度は、アセトニトリルの濃度の増加と共に増加する。これによって、上清だけの場合に観察された最初の臨床効果が説明される。このＴＡの高濃度は、ベンジルアルコール、又はケナコルト（Ｒ）Ａ４０の製剤に用いられる界面活性剤中でのミセル可溶化によるものである。
【００９４】
実施例５
溶解試験
最初の溶解試験は、水に様々な濃度で溶かしたアセトニトリルを溶媒として使用し、中国試料に対して行った。結果は表５に示す。
【表５】
アセトニトリル濃度の増加に伴って、試料中のＴＡの溶解速度が増加しているのが明らかである。
【００９５】
実施例６
トリアムシノロンアセトニド試料の分画−密度遠心分離
ＴＡの乾燥粉末試料を、４℃の蒸留水中で密度遠心分離により分画した。
【００９６】
実施例７
トリアムシノロンアセトニド試料の分画−ろ過
蒸留水中で懸濁したＴＡ試料を、最大孔径１０μｍ〜５０μｍのミリポアフィルターを通して分画した。
【００９７】
実施例８
様々なソースのトリアムシノロンアセトニド結晶構造
Ｆａｒｍａｂｉｏｓ Ｓ．ｐ．Ａ（イタリア Ｇｒｏｐｅｌｌｏ Ｃａｉｒｏｌｉ）（以下「Ｆａｒｍａｂｉｏｓ」とする）及びＮｅｗＣｈｅｍ Ｓ．ｐ．Ａ（イタリア ミラノ）（以下「ＮｅｗＣｈｅｍ」とする）のＴＡ結晶を走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）で観察した。図８及び図９からわかるように、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの結晶は、「ずんぐり」しており、一方、ＮｅｗＣｈｅｍの結晶は、より高いアスペクト比を有する「針状」であった。更に、図１０及び図１１では結晶の多孔率の相違が観察される。
【００９８】
実施例９
様々なソースからのトリアムシノロンアセトニド結晶の粒径分布
方法
微粉化Ｆａｒｍａｂｉｏｓ、並びに非微粉化Ｆａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍ ＴＡ試料の粒径分布をレーザー光散乱法により分析した。粒径分布は、室温で磁気攪拌したセルＭＳ７を使用したＭａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ Ｓ（マルバーン）で測定し、３ＮＤＤを示した。ＭｉｌｌｉＱ水のバックグラウンド測定を得た。試料は、懸濁溶液（エッペンドルフ型チューブ内でＭｉｌｌｉＱ水にＴｗｅｅｎ２０を０.２５％及びカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液［ＮａＣＭＣ］を０．２５％）２５０μＬ中に高濃度懸濁５ｍｇとして調製して、最大攪拌スピードの半分で攪拌しながら、最大２０ｍＬのＭｉｌｌｉＱ水を含む磁気攪拌したセルに懸濁液の全体量を加えた。この速度は、大粒子のＴＡの分散に対して事前に最適化した。必要に応じて、懸濁液を更に水で希釈して、１５％〜２０％のあいまいな数値とした。測定は２５００走査を実施した。
結果
図１２及び図１３は、３つのＴＡ試料に対して得られた粒径分布を示す。３つのＴＡ試料に対して得られたＤ（ｖ，０.９）値を下記表６に一覧にする。Ｄ（ｖ，０．９）は、最大に理解されると９０％平均値となり、即ち、粒子の１０％だけがこの値よりも大きいと推定される。
【表６】
２つの非微粉化試料に対するＤ（ｖ，０.９）値は同様であった。微粉化物質は、予想よりもより大きく、これは、凝集体が形成されたことを示す。（試料は超音波破砕しなかった）。
【００９９】
実施例１０
異なるソースからのトリアムシノロンアセトニド試料の溶解
方法
・溶解試験
ＴＡの懸濁液２０ｍｇ／ｍＬを、懸濁溶液（ＭｉｌｌｉＱ水中にＴｗｅｅｎ２００.２５％及びカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液［ＮａＣＭＣ］０．２５％）で調製した。離型剤４００ｍＬ（生理食塩水、ＭｉｌｌｉＱ水にＮａＣｌ０.９％）をＥｒｗｅｋａ製１Ｌ溶出器内に投入し、そして、これを３７℃に温度調節した米国薬局方（ＵＳＰ）２適合溶出装置（Ｅｒｗｅｋａ）内に置いた。離型剤を１００ｒｐｍ、３７℃で攪拌して平衡化した時点で、ＴＡ懸濁液をボルテックスして混合し、時間＝０の時に懸濁液１００μＬ（２ｍｇ）をピペットで離型剤に直ちに加えた。
その後、試験下のシステムで決定された間隔で、離型剤１ｍＬを使い捨て注射器１ｍＬに吸引した。そして、注射器フィルター（スーポア アクロディスク（Ｒ） ０.２μｍ、Ｐａｌｌ Ｇｅｌｍａｎ)を取り付け、試料０.８ｍＬを注射器からフィルターを通して放出して、再び離型剤に戻した。
最後の２００μＬ迄をエッペンドルフチューブに回収して、１００μＬを、アセトニトリル１００μＬを含む第２エッペンドルフチューブに正確にピペットで加えて、ボルテックスして混合した。そして、この混合物を注射用に、挿入されたＨＰＬＣガラスバイアルに移した。
このプロセスは、毎回新しい注射器、及び注射器フィルターを使用して繰り返された。
【０１００】
・フィルター確認
飽和度の１％及び１０％溶液を、ＴＡ（１５μｇ／ｍＬ）で飽和した生理食塩水原液から調製した。溶液を注射器フィルターでろ過して、ろ液を２００μＬずつ回収した。ＨＰＬＣにより、ろ液中のＴＡ濃度が、ＴＡ溶液６００μＬがフィルターを通った後で、それぞれ９４％及び９５％に達したことが示された。その結果として、ろ過前の量８００μＬ（上記溶解方法参照）は、ろ液濃度が溶解容器内で溶解した代表的なＴＡ濃度であることを確定的にするのに十分であると仮定した。
【０１０１】
・ＨＰＬＣ法
アセトニトリル４０％及びＭｉｌｌｉＱ水６０％からなる移動相を調製し、ろ過前にトリフルオロ酢酸０.１％を加えた。１６８ ＰＤＡ検出器を備えたＢｅｃｋｍａｎ ｓｙｓｔｅｍ Ｇｏｌｄ（Ｒ）及びＷａｔｅｒｓ ７１７ Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒを使用し、移動相をＢｅｃｋｍａｎ Ｕｌｔｒａｓｐｈｅｒｅ（Ｒ）カラムＣ８カラム（４.６ｍｍ×２５ｃｍ,５μｍ）に、１.２ｍＬ／分でポンプで通した。１００μＬ注入後、ＴＡ保持時間は約７分であった。
標準液を、アセトニトリル中で１ｍｇ／ｍＬ濃度のＴＡ原液から１０００ｎｇ／ｍＬ,５００ｎｇ／ｍＬ,２５０ｎｇ／ｍＬ,１００ｎｇ／ｍＬ,７５ｎｇ／ｍＬ及び５０ｎｇ／ｍＬの濃度で移動相中に調製した。５０ｎｇ／ｍＬ標準液は、正に許容可能な精度限界内（％ＣＶ＝２０％,ｎ＝４ 注入）であり、他の濃度は全て％ＣＶ＜１０％、直線性＞０．９９９であった。水系試料は、移動相との混和性を確実にする注入前に、アセトニトリルに５０％（ｖ／ｖ）で希釈した。
結果
ＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化ＴＡが、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの非微粉化ＴＡと同じ振る舞いをすることが分かった。Ｆａｒｍａｂｉｏｓ又はＮｅｗＣｈｅｍのいずれかのＴＡ間の結晶形状及び多孔率の相違にも係わらず、図１４の予備データ及び図１５及び図１６の更なるデータは、これらの試験で使用した条件下のいずれかのソースの非微粉化ＴＡ間の溶解速度に識別可能な相違がないことを示す。
注記：図１６のＮｅｗＣｈｅｍ試料の試料採取点間の隙間は、溶解が週末に放置されたためであり（非採取）、一方で、Ｆａｒｍａｂｉｏｓ試料は平日中に採取して、この場合、中間の試料は採取した。
図１６において、６０％辺りで溶解が平坦な理由は、微粉化懸濁に比べて、懸濁溶液中にＴＡ非微粉化試料原液を調製したエッペンドルフチューブからのＴＡ非微粉化試料原液の全てを移すのはより難しいことに起因しうる。より多くの非微粉化物質が、溶解容器にＴＡ懸濁を移すために使用したピペットチップに残るかもしれない。
【０１０２】
実施例１１
微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニドの溶解
方法
溶解試験は、微粉化及び非微粉化ＦａｒｍａｂｉｏｓＴＡ試料と、微粉化ＴＡ：非微粉化ＴＡの割合が８０ｗ／ｗ：２０ｗ／ｗ、５０ｗ／ｗ：５０ｗ／ｗ、及び２０ｗ／ｗ：８０ｗ／ｗの混合物とについて行った。溶解の基本的な測定方法は、上記実施例１０に記載の方法と同様な方法を使用した。２つの個別の試料及び３つの混合物を、エッペンドルフチューブに重量（２.０ｍｇ）で調製し、懸濁媒体（Ｔｗｅｅｎ２０ ０.２５％及びカルボキシメチルセルロースナトリウム０.２５％）１ｍＬを、３７℃で生理食塩水（ＭｉｌｌｉＱ水にＮａＣｌ０.９％）４００ｍＬを含む溶出槽（Ｅｒｗｅｋａ）に含有物を加える直前に、粉体を湿らすために加えた。懸濁媒体は、ＵＳＰ２適合パドルを用いて１００ｒｐｍで攪拌した。試料を設定した時間間隔で溶解槽から注射器で吸引・ろ過し、ろ液の最後の１００μｌを、ＨＰＬＣに注入前にアセトニトリル１００μｌで希釈して、懸濁媒体中のＴＡ濃度を測定した。
結果
溶解は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの微粉化及び非微粉化ＴＡを６時間（図１７）及び２０時間（図１８）プロファイルし、図１９では微粉化及び非微粉化ＴＡの混合物が、非微粉化ＴＡ量が増加するにつれて溶解速度がより遅くなる安定した経過を示す。図２０では、１００％微粉化ＴＡが同じ動向で追随する。
【０１０３】
実施例１２
粘性媒体の溶解試験
方法
溶解試験は、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ナトリウム媒体粘度グレード３％を生理食塩水に加えて調製した粘性ゲル中で行った。この溶解試験では、ｉｎ ｖｉｖｏの状況とより酷似するがシンク条件を今だ維持するシステムの溶解データが得られた。溶解の基本的な測定方法は、上記実施例１０で述べた通りである。しかし、試料（０.５ｍＬ）は、ＴＡ量を測定する前に、ゲルから取り除いた後で３分間遠心分離した。遠心分離工程は、ゲルが簡単にろ過できないために必要であった。
結果
結果にいくつかばらつきがあるが、図２１及び図２２に示すデータは、上記実施例１１に示すように、生理食塩水に溶解した微粉化ＴＡ、非微粉化ＴＡ及び混合物で観察されたものと基本的に同じ動向を示す。
【０１０４】
実施例１３
模擬眼球拡散装置
臨床症状に近い粘性媒体中のＴＡの溶解度を説明するために、模擬眼球の基準としてｉｎ ｖｉｔｒｏ溶解セルを使用した。
方法
セル（図２３）は、容積がそれぞれ約９ｍＬで、透析膜（３）（Ｓｐｅｃｔｒｏｐｏｒ ３、分画分子量３５００)で分割される２つの区画（ドナーチャンバ（１）及びレセプターチャンバ（２））からなる。ゲル（４）（生理食塩水に１％ヒアルロン酸（ＨＡ）；模擬硝子体液）をドナーチャンバ（１）に置き、生理食塩水離型剤（５）を透析膜（３）の反対側のレセプターチャンバ（２）に置いた。透析膜（３）は、ＴＡは通すが、ＨＡは通さないので、ゲル（４）が損なわれないことを確実にする。そして、ＴＡ（６）を含む組成物をドナーチャンバ（１）内のゲル（４）に注入して、試料採取口（７）からレセプターチャンバ（２）の全内容物を取り除くことで、レセプターチャンバ（２）内の生理食塩水離型剤（５）中の遊離薬物の出現をＨＰＬＣによりモニターした。レセプターチャンバ（２）内の生理食塩水離型剤（５）は、試料の採取毎に交換した。全実験中、装置全体を振とうしながら（１００ｒｐｍ）３７℃の水槽に浸した。
ＦａｒｍａｂｉｏｓＴＡ４ｍｇを微粉化又は非微粉化形状で４０ｍｇ／ｍＬ懸濁液としてゲルに注入した。レセプターチャンバから回収した試料を最大１０ｍｌまで生理食塩水で希釈し、試料をＨＰＬＣにかけてＴＡ量を測定した。
結果
図２４及び図２５に示すように、微粉化物質が非微粉化ＴＡよりもより速くレセプター溶液に出現し、２週間にわたる微粉化又は非微粉化製剤の放出プロファイルの累積は異なる。
【０１０５】
実施例１４
トリアムシノロンアセトニド試料の分画−沈殿
方法
ＴＡ濃縮懸濁液（１ｍＬ，１００ｍｇ／ｍＬ）を、底にクランプで取り付けたＭｉｌｌｉＱ水４００ｍＬを含むガラスチューブ（高さ１０００ｍｍ×内径２５ｍｍ）の先端部にピペットで加えた。粒子を、７０秒間（より大きい粒子の殆どを、小さい粒子とは異なる「区画」に明白に分割するために十分な時間）重力下で沈殿させ、クランプを開放して分散体１５０ｍＬを回収して、大「区画」を単離した。そして、分散体を、ワットマン＃１フィルター紙でろ過して、６０℃で４時間乾燥した。
結果
より大きい粒子はより小さい粒子よりも早く沈殿するため、大きさの分類が可能となる。ある時点でカラムの底から物質を取り除くことで、異なる粒径分布の分画が得られた。
ＮｅｗＣｈｅｍ ＴＡ物質を異なる大きさの分画に分割することができた。様々な分画の粒径を下記表７及び図２６に示す。明らかな分離が達成され、明確なＤ（ｖ，０.９）値を下記表に示す。試料は非常に違って見え、分粒の結果を反映した。
【表７】
【０１０６】
実施例１５
均質化による粒径減少
方法
沈殿により小さい分画を得たＴＡよりもＴＡの粒径を非常に小さく減少させるために、ＴＡの懸濁液（懸濁溶液中に２０ｍｇ／ｍＬ)を４ｍＬチューブに加え、精製を始める前に、懸濁液にローターステーター方式Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（Ｒ）ホモジナイザーの軸を浸した。
結果
ホモジナイザーは、ローターとステーターとの間に詰まった大きな粒子を断片に実質的に破砕した。２００μｍ未満の結晶が好ましかった。しかしながら、好ましくない溶解特性が得られるため、微粒子の過剰な生成は避けるのが望ましかった。下記表８は、ホモジナイザー速度及び曝露時間による粒子特性の変化を示す。
【表８】
＊最大値は、最大粒子数、すなわち、％対粒径プロットにおける最大値である。
粒子の精製は、精製時間１分、最大速度６で、Ｄ（ｖ，０．９）を約２００μｍまで小さくすることに成功した。
【０１０７】
実施例１６
注射能力
方法
注射能力を補助するために、非微粉化ＴＡ１６０ｍｇ、微粉化ＴＡ４０ｍｇ及び生理食塩水(ＭｉｌｌｉＱ水に０.９％ＮａＣl)５ｍＬを攪拌して混合することでＴＡ溶液を調製した。懸濁したＴＡを超音波破砕器Ｂｒａｎｓｏｎ ２２０（２５０℃，５０Ｈｚ〜６０Ｈｚ，１２５Ｗ）で３０秒間、短時間超音波破砕して、攪拌器に戻した。
ヒアルロン酸（ＨＡ）５０ｍｇを計量し、このヒアルロン酸の約１／３を懸濁液に加えた。３０秒間攪拌後、懸濁液を３０秒間超音波破砕した後攪拌器に戻した。ヒアルロン酸を添加、攪拌、及び超音波破壊する工程は、ヒアルロン酸が全て添加されるまで繰り返した。ヒアルロン酸が全て溶解するまで、更に３０分間懸濁液を混合した。懸濁液は２３ゲージ針で送達可能である。
結晶を実質的に破壊せずに弱い結晶複合体を粉砕するために、短時間の超音波破砕（例えば３０秒）とした。
【０１０８】
実施例１７
Ｉｎ Ｖｉｖｏ試験
微粉化ＴＡ／非微粉化ＴＡの２０／８０混合物４００μｇをウサギの眼に注射する。ＴＡは一方の眼のみに注射し、他方の眼は対照となるため、各個体がその対照となる。
試料は、一定の間隔で前眼房から取り出す。前眼房内のＴＡの濃度は、硝子体内のＴＡの濃度と相関する。硝子体から前眼房へのＴＡの通過メカニズムは簡単な拡散の１つであり、また認可された評価方法である（Ｂｅｅｒ他、Ｉｎｔｒａｏｃｕｌａｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ＴＡ ａｆｔｅｒ ａ ｓｉｎｇｌｅ ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ， Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ２００３；１１０：６８１−６８６）。硝子体内の試料は一定の間隔で取り出す。全ての試料ＴＡ含有量をＨＰＬＣにより算定する。試験期間の終了後動物を屠殺し、眼球組織試料を採取する。
投与量は、治療容量よりも低いが、このより低い容量で効能が示される。
【０１０９】
実施例１８
Ｉｎ Ｖｉｖｏ−微粉化ＴＡ対非微粉化ＴＡ
方法
体重２ｋｇ〜３ｋｇの２５羽のニュージーランド白ウサギをこの実験に使用した。動物は、眼科と視覚に関する研究会議（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ）の研究に使用された動物の管理及び処理に対する決議に基づいて扱った。
全ての調査及び手順の前に、動物を塩酸ケタミン（５０ｍｇ／ｋｇ）及び塩酸キシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の混合物約１ｍｌで麻酔した。局所麻酔は、プロパラカイン０.５％の局所投与により達成された。
細隙灯検査及び非直像眼底鏡による検査は、全ての眼に対する薬の投与前後、１，２，３，６，９，１３，１６，２０，及び２１日目に行われた。
ウサギは５つのグループに分けた。グループ１（ｎ＝５）にはＴＡ４００μｇ／０.１ｍｌ(１日２回)を局所投与、グループ２（ｎ＝５）にはＴＡ４００μｇ／０.１ｍｌを硝子体内注射、グループ３（ｎ＝５）にはＴＡ４００μｇ／０．１ｍｌを結膜下注射、グループ４（ｎ＝５）には微粉化ＴＡ４００μｇ／０．１ｍｌを硝子体内注射、グループ５（ｎ＝５）には微粉化ＴＡ４００μｇ／０．１ｍｌを結膜下投与した。
全ての処置が無菌状態で、視覚化のために顕微鏡を操作しながら行われた。
【０１１０】
・局所適用
グループ１の眼には、試験期間中１日２回ＴＡ４００μgの滴を局所適用した。薬は、５０μＬ一滴を眼に投与した。
・硝子体内注射
グループ２及び４の眼には、硝子体内注射を行った。注射の直後に、眼内圧を下げるため及び薬の逆流を最小化するために前眼房に栓をした。硝子体内注射は、２３ゲージ針を着けたツベルクリン注射器を角膜輪部の後部約２ｍｍに挿入（べべルを上に）して行った。
・結膜下注射
グループ３及び５の眼へは、２３ゲージ針を着けたツベルクリン注射器を結膜の後側頭部に挿入して結膜下注射を行った。薬の逆流を最小化するために注射の直後に綿棒をその領域に押した。
・前房穿刺
前房穿刺（０.１ｍｌ）は、全てのグループに対して、局所投与、結膜下注射又は硝子体内注射後１，２，３，６，９，１３，１６，２０日目に行った。２７ゲージ０.５インチ針を着けたツベルクリン注射器を、べベルを前に向けてべベル全体が角膜を貫通するまで、虹彩の上に平行な面で透明な補助角膜辺縁部（ｐａｒａｌｉｍｂａｌ ｃｌｅａｒ ｃｏｒｎｅａ）に挿入した。液体試料０.２ｍｌを取り出した。房水の試料は、直ぐに−７０℃で冷凍した。
・安楽死及び摘出
動物は、２１日目に、最初にペントバルビタールナトリウム1００ｍｇ／ｋｇを静脈注射して屠殺した。両眼を摘出し、−７０℃の凍結器に入れた。
・眼の解体
全ての凍結した眼を、５つの部分（角膜、房水、網膜、強膜、及び虹彩毛様体）に切り裂いた。グループ３及び５（結膜下注射）の強膜は、鼻側部分及び側頭部分の２つの部分に切り裂いた。組織を光学顕微鏡用に調製した。
【０１１１】
実施例１９
Ｉｎ Ｖｉｖｏ−浮腫モデル
血管浮腫をニュージーランド白／Ｄｕｔｃｈ−ｂｅｌｔｅｄウサギに誘発する。各ウサギの左目に生理的ｐＨで等張性の微粉化ＴＡ／非微粉化ＴＡの２０／８０混合物４００μｇを注射して被験眼とする。各動物の右目は対照とし、ケナログ（Ｒ）Ａ４０を注射する。
浮腫に対するＴＡの効果は、注射した眼を観察し（インドシアニン／蛍光眼底血管造影）、更に光コヒーレンス・トモグラフィー（ＯＣＴ）で調査する。
眼内圧は、第１週目は１日２回モニターし、そして、３ヶ月間毎日モニターする。この後眼内圧上昇が依然として観察されれば、必要に応じて眼内圧は６ヶ月以上モニターする。
毒性試験を、網膜電図を使用して試験中に非侵襲的に行う。注射から２週間後、２羽のウサギを屠殺して組織病理検査し、試験中に２週間毎に２羽のウサギを屠殺する。
【０１１２】
実施例２０
Ｉｎ Ｖｉｖｏ−新血管形成モデル
新血管形成をニュージーランド白／Ｄｕｔｃｈ−ｂｅｌｔｅｄウサギにレーザー焼灼で誘発する。各ウサギの左目に生理的ｐＨで等張性の微粉化ＴＡ／非微粉化ＴＡの２０／８０混合物４００μｇを注射して被験眼とする。各動物の右目は対照とし、ケナログ（Ｒ）Ａ４０を注射する。
新血管形成が、細隙灯生体顕微鏡検査法及び眼底撮影により観察される。
眼内圧は、第１週目は１日２回モニターし、そして、６ヶ月間毎日モニターする。
毒性試験を、網膜電図を使用して試験中に非侵襲的に行う。注射から２週間後、２羽のウサギを屠殺して組織病理検査し、試験中に２週間毎に２羽のウサギを屠殺する。
【０１１３】
本発明は、特定の好適な実施形態を参照して記載されるが、当然のことながら本発明の広義の原理の範囲内で多くの変形及び変更がなされる。従って、添付の請求項に定義されるように、好適な実施形態及びその変形及び変更の全ては、本発明の範囲及び精神内に含まれることを意図する。
【図面の簡単な説明】
【０１１４】
本発明は、添付の図面と共に詳細な説明を読むことで理解が容易になる。
【図１】図１は、トリアムシノロンアセトニド粒子の結晶の大きさを示す電子顕微鏡写真であり、図面の側辺に沿う１１個の点の列は４.３０μｍを示す。
【図２】図２は、トリアムシノロンアセトニドの粒子の特定の範囲の電子顕微鏡写真であり、図面の側辺に沿う１１個の点の列は１.１９μｍを示す。
【図３Ａ】図３Ａは、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０トリアムシノロンアセトニドの第１バッチの粒径分析を示すヒストグラムである。
【図３Ｂ】図３Ｂは、ケナコルト（Ｒ）Ａ４０トリアムシノロンアセトニドの第２バッチの粒径分析を示すヒストグラムである。
【図４】図４は、イタリア試料のトリアムシノロンアセトニドのバッチの粒径分析を示すヒストグラムである。
【図５】図５は、中国試料のトリアムシノロンアセトニドのバッチの粒径分析を示すヒストグラムである。
【図６】図６は、トリアムシノロンアセトニドの粒子の結晶の大きさを示す電子顕微鏡写真であり、図面の底辺の１１個の点の列は１２０μｍを示す。
【図７】図７は、トリアムシノロンアセトニドの粒子の結晶の大きさを示すもう１つの電子顕微鏡写真であり、図面の底辺の１１個の点の列は１２０μｍを示す。
【図８】図８は、ずんぐりした形の結晶を示すＦａｒｍａｂｉｏｓの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの電子顕微鏡写真である（倍率１６０倍、長さ１００μｍ〜４００μｍ）。
【図９】図９は、針のような形状の結晶を示すＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの電子顕微鏡写真である（倍率１６０倍、長さ２００μｍ〜５００μｍ）。
【図１０】図１０は、結晶が多孔質であるＦａｒｍａｂｉｏｓの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの電子顕微鏡写真である（倍率１０２０倍、直径８０μｍ）。
【図１１】図１１は、結晶が非多孔質であるＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの電子顕微鏡写真である（倍率２６００倍、直径８０μｍ）。
【図１２】図１２は、レーザー光散乱法により決まるＦａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドの粒径のプロファイルを示すグラフである（粒径２０μｍ〜９０μｍ、平均誤差棒（ｎ＝３）±ｓ.ｄ．）。
【図１３】図１３は、レーザー光散乱法により決まるＦａｒｍａｂｉｏｓの微粉化トリアムシノロンアセトニドの粒径のプロファイルを示すグラフである（粒径５μｍ〜５０μｍ、挿入図は同じデータを明確にするためのログスケールで示す。）。
【図１４】図１４は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニド試料を、ｔ＝０、３７℃、ＵＳＰ２適合装置内で生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬを加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図１５】図１５は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドを８時間放置した溶解速度の比較を示すグラフである。
【図１６】図１６は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓ及びＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニドを８０時間放置した溶解速度の比較を示すグラフである。
【図１７】図１７は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニド試料を、ｔ＝０、６時間、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである。
【図１８】図１８は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニドを、ｔ＝０、２０時間、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で生理食塩水に懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである。
【図１９】図１９は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの微粉化トリアムシノロンアセトニド試料、非微粉化トリアムシノロンアセトニド試料、及びその混合物を、ｔ＝０、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図２０】図２０は、Ｆａｒｍａｂｉｏｓの１００％非微粉化トリアムシノロンアセトニドを、ｔ＝０、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図２１】図２１は、３％ＣＭＣゲルにＦａｒｍａｂｉｏｓの非微粉化トリアムシノロンアセトニドを、ｔ＝０、３７℃、１８０分間、ＵＳＰ２適合装置で３％ＣＭＣ含有生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図２２】図２２は、３％ＣＭＣゲルにＦａｒｍａｂｉｏｓ、ＮｅｗＣｈｅｍの非微粉化トリアムシノロンアセトニド、及び非微粉化:微粉化＝８０：２０混合物を、ｔ＝０、３７℃、ＵＳＰ２適合装置で３％ＣＭＣ含有生理食塩水４００ｍＬに懸濁液２ｍｇ／ｍＬ加えたもの１ｍＬを用いて溶解度を示すグラフである（データは、平均値±ｓ.ｄ.,ｎ＝３）。
【図２３】図２３は、模擬眼球拡散装置の図である。
【図２４】図２４は、１％ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルに微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニドを３７℃、１４日間用いる模擬眼球拡散装置実験を示すグラフである（データは、平均値±範囲、ｎ＝２）。
【図２５】図２５は、１％ヒアルロン酸（ＨＡ）ゲルに微粉化及び非微粉化トリアムシノロンアセトニド及びその混合物を３７℃、１４日間用いる模擬眼球拡散装置実験を示すグラフである（データは、平均値±範囲、ｎ＝２）。
【図２６】図２６は、１ｍカラムに加えた化ＮｅｗＣｈｅｍ非微粉トリアムシノロンアセトニド１００ｍｇの沈殿分離から得る３つの分画の粒径を示すグラフである。
【符号の説明】
【０１１５】
１ ドナーチャンバ
２ レセプターチャンバ
３ 透析膜
４ ゲル
５ 生理食塩水離型剤
６ トリアムシノロンアセトニド（ＴＡ）
７ 試料採取口
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に許容される組成物であって、
抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩を含み、
前記ステロイド又はその薬学的に許容される塩は結晶又は結晶複合体の形状であり、前記薬学的に許容される組成物は直径が約２０μｍ未満である結晶及び結晶複合体よりも、直径が約２０μｍよりも大きい結晶及び結晶複合体をより多い割合で含むことを特徴とする薬学的に許容される組成物。
【請求項２】
前記組成物が、直径が約５０μｍ〜約６００μｍの結晶を含む請求項１に記載の薬学的に許容される組成物。
【請求項３】
前記結晶の割合が、直径が約５０μｍ〜６００μｍの結晶複合体の割合よりも多い請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
薬学的に許容される組成物であって、
抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩
を含み、前記ステロイド又はその薬学的に許容される塩は、結晶又は結晶複合体として形成され、及び前記結晶は、更に直径が約０.５μｍ〜約４０μｍの第１結晶群及び大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの第２結晶群からなることを特徴とする薬学的に許容される組成物。
【請求項５】
前記第１結晶群が、前記結晶複合体よりも凝集する請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記第１結晶群が、直径が約１μｍ〜約４０μｍ、約５μｍ〜約３５μｍ、約１０μｍ〜約３０μｍ、約１５μｍ〜約２５μｍ、又は約２０μｍ〜約２２μｍである請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記第２結晶群が、直径が約７０μｍ〜約４００μｍ、約８０μｍ〜約３００μｍ、約９０μｍ〜約２５０μｍ、又は約１００μｍ〜約２００μｍである請求項４に記載の組成物。
【請求項８】
前記抗炎症ステロイドが、下記式で表される１１−置換−１６α,１７α−置換メチレンジオキシステロイドである請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
【化１】
式中
【化２】
は、
【化３】
又は、
【化４】
であり、
Ｒ１及びＲ２は、水素、又はアルキルであり、
【化５】
は、
【化６】
であり、
Ｒ３は、メチル、ヒドロキシメチル、又はメチルアミノアルキレンカルボニルオキシメチル、アルキルカルボニルオキシメチル、又はフェニルアミノアルキレンカルボニルオキシメチルであり、Ｒ４は、アルカノイルであり、Ｘはハロゲンである。
【請求項９】
前記化合物が、下記式で表される化合物である請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
【化７】
Ｒ３は、ヒドロキシメチル、フェニルカルボニルアミノイソプロピルカルボニルオキシメチル又は、２,２−ジメチルプロピルカルボニルオキシメチルである。
【請求項１０】
前記化合物が、下記の結晶構造の９−フルオロ−１１,２１−ジヒドロキシ−１６,１７−［１−メチルエチリジンビス（オキシ）］プレグナ−１,４−ジエン−３,２０−ジオンである請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
【化８】
【請求項１１】
前記化合物が、薬学的に許容される塩である請求項８から１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
前記第１結晶群の、前記第２結晶群に対する体積あたりの重量の比が、約１：１,１：２,２：１,１：３,３：１,２：３,３：２,１：４,４：１,３：４,４：３,１：５,５：１,２：５,５：２,３：５,５：３,４：５,５：４,１：６,６：１,５：６,又は６：５である請求項４から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２０％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を８０％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２５％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約５０％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を約５０％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を約２５％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２０％（ｗ／ｖ）、及び約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約８０％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２５％（ｗ／ｖ）、及び約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約５０％（ｗ／ｖ）、及び約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約５０％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）、及び約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約２５％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
組成物がトリアムシノロンアセトニドの結晶及び結晶複合体を含み、前記組成物において結晶複合体の濃度と比較して結晶の濃度を増加する工程を含むことを特徴とする患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロンアセトニド組成物の調製方法。
【請求項２２】
組成物がトリアムシノロンアセトニドの結晶及び結晶複合体を含み、前記組成物において結晶複合体の割合と比較して結晶の割合を増加する工程を含み、前記結晶及び結晶複合体は、直径が約５０μｍ〜約６００μｍであることを特徴とする患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロンアセトニド組成物の調製方法。
【請求項２３】
直径が約５０μｍ〜約６００μｍのトリアムシノロン結晶を、結晶及び結晶複合体のどちらも含むもう１つのトリアムシノロン組成物から選択する工程を含むことを特徴とする患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法。
【請求項２４】
大きさが約１００μｍ〜約２００μｍのトリアムシノロン結晶を、結晶及び結晶複合体のどちらも含むトリアムシノロン組成物から選択する工程を更に含む請求項２１から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
眼科的に許容されるキャリア、希釈剤及び／又は賦形剤に前記範囲の結晶を添加する工程を更に含む請求項２１から２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
請求項２１から２５のいずれかに記載の方法により調製されることを特徴とする薬学的に許容される組成物。
【請求項２７】
少なくとも１つの薬学的に許容される添加剤を更に含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
前記添加剤が、眼科的に許容される請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記添加剤が、硝子体に適合し、眼内に視力を損なう残留物を残さない請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記添加剤が、硝子体内蓄積注射として前記薬学的組成物の送達に適している請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
前記添加剤が希釈剤である請求項２７に記載の組成物。
【請求項３２】
前記希釈剤が、水、食塩水、有機塩溶液、無機塩溶液、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンクス液を含む群より選択される請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記希釈剤が平衡塩類溶液である請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記平衡塩類溶液が乳酸リンゲル液の媒体である請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
請求項１から２０のいずれかに記載の薬学的に許容される組成物、請求項２１から２５のいずれかに記載の方法により調製される薬学的に許容される組成物、又は請求項２６から３４のいずれかに記載の薬学的に許容される組成物を、少なくとも１つの眼組織に又はその傍に投与する工程を含むことを特徴とする治療を必要とする患者の眼の炎症症状の治療方法。
【請求項３６】
前記組成物が、局所適用、カニューレによる送達、眼窩底への眼窩周囲注射、結膜下注射、縫合有無での眼内への移植、又は眼内注射により投与される請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記眼内注射が、硝子体内注射、眼房注射、又は結膜下注射、若しくはテノン嚢下注射等の眼の外層への注射である請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記眼内注射が、セルフシール２１〜３０ゲージ針、又は他の適切な目盛りつき送達装置で毛様体扁平部を通して行われる請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記局所適用が軟膏、ゲル又は点眼液による請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記薬学的に許容される組成物が、標的となる眼の画分内で薬学的に許容される組成物の最終濃度が約０.０５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌに達するのに十分な濃度で送達される請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記薬学的に許容される組成物が眼内送達で投与され、前記薬学的に許容される組成物の最終濃度は約０.０５ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌである請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記濃度が約１ｍｇ／ｍｌ〜約７ｍｇ／ｍｌ、約１．５ｍｇ／ｍｌ〜約６ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、又は約３ｍｇ／ｍｌ〜約４ｍｇ／ｍｌである請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記薬学的に許容される組成物は、硝子体内投与され、前記薬学的に許容される組成化合物の最終濃度は、約４ｍｇ／ｍｌである請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記組成物が、正確な投与量の単回投与に適切な単位投与形態で投与される請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項４５】
前記組成物が１〜３ヶ月毎に投与される請求項３５に記載の方法。
【請求項４６】
前記組成物が、３ヶ月毎よりも少ない頻度で投与される請求項３５に記載の方法。
【請求項４７】
抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩の薬学的に許容される組成物であって、
前記抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩は結晶形状であり、前記結晶は、更に直径が約０.５μｍ〜約４０μｍの第１結晶群及び直径が約５０μｍ〜約６００μｍの第２結晶群を含み、及び前記薬学的に許容される組成物は、更に生体適合性及び生分解性マトリックスを含むことを特徴とする抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩の薬学的に許容される組成物。
【請求項４８】
前記薬学的に許容される組成物の投与が、光ダイナミック療法、レーザー治療、又は１つ以上の生物学的又は薬学的治療等の１つ以上の他の治療との組合せで行われる請求項３５に記載の方法。
【請求項４９】
前記他の治療が網膜のレーザー治療であり、及び前記レーザー治療の前後に抗炎症ステロイドが注射により投与される請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
少なくとも１つの付加化合物が、前記薬学的に許容される組成物と一緒に投与され、前記付加化合物は、抗生物質、抗血管新生薬、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾロン、プレドニゾン）、エストロゲン（例えば、エストラジオール）、アンドロゲン（例えば、テストステロン）、レチノイン酸誘導体（例えば、９シスレチノイン酸、１３トランスレチノイン酸、オールトランスレチノイン酸）、ビタミンＤ誘導体（例えば、カルシポトリオール、カルシポトリエン）、非ステロイド抗炎症薬、抗感染症薬、タンパク質キナーゼＣ阻害薬、ＭＡＰキナーゼ阻害薬、抗アポトーシス薬、成長因子、ビタミン、及び不飽和脂肪酸からなる群より選択される請求項３５に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗血管新生薬がルーセンティス（Ｒ）又はマキュジェン（Ｒ）である請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記組成物が、抗生物質、抗血管新生薬、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾロン、プレドニゾン）、エストロゲン（例えば、エストラジオール）、アンドロゲン（例えば、テストステロン）、レチノイン酸誘導体（例えば、９シスレチノイン酸、１３トランスレチノイン酸、オールトランスレチノイン酸）、ビタミンＤ誘導体（例えば、カルシポトリオール、カルシポトリエン）、非ステロイド抗炎症薬、抗感染症薬、タンパク質キナーゼＣ阻害薬、ＭＡＰキナーゼ阻害薬、抗アポトーシス薬、成長因子、ビタミン、及び不飽和脂肪酸からなる群より選択される少なくとも１つの付加化合物もまた含む請求項１から２０のいずれかに記載の薬学的に許容される組成物、請求項２１から２５のいずれかに記載の方法により調製される薬学的に許容される組成物、又は請求項２６から３４のいずれかに記載の薬学的に許容される組成物。
【請求項５３】
前記抗血管新生薬がルーセンティス（Ｒ）及びマキュジェン（Ｒ）からなる群より選択される請求項５２に記載の薬学的に許容される組成物。
【請求項１】
薬学的に許容される組成物であって、
抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩を含み、
前記ステロイド又はその薬学的に許容される塩は結晶又は結晶複合体の形状であり、前記薬学的に許容される組成物は直径が約２０μｍ未満である結晶及び結晶複合体よりも、直径が約２０μｍよりも大きい結晶及び結晶複合体をより多い割合で含むことを特徴とする薬学的に許容される組成物。
【請求項２】
前記組成物が、直径が約５０μｍ〜約６００μｍの結晶を含む請求項１に記載の薬学的に許容される組成物。
【請求項３】
前記結晶の割合が、直径が約５０μｍ〜６００μｍの結晶複合体の割合よりも多い請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
薬学的に許容される組成物であって、
抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩
を含み、前記ステロイド又はその薬学的に許容される塩は、結晶又は結晶複合体として形成され、及び前記結晶は、更に直径が約０.５μｍ〜約４０μｍの第１結晶群及び大きさが約５０μｍ〜約６００μｍの第２結晶群からなることを特徴とする薬学的に許容される組成物。
【請求項５】
前記第１結晶群が、前記結晶複合体よりも凝集する請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記第１結晶群が、直径が約１μｍ〜約４０μｍ、約５μｍ〜約３５μｍ、約１０μｍ〜約３０μｍ、約１５μｍ〜約２５μｍ、又は約２０μｍ〜約２２μｍである請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記第２結晶群が、直径が約７０μｍ〜約４００μｍ、約８０μｍ〜約３００μｍ、約９０μｍ〜約２５０μｍ、又は約１００μｍ〜約２００μｍである請求項４に記載の組成物。
【請求項８】
前記抗炎症ステロイドが、下記式で表される１１−置換−１６α,１７α−置換メチレンジオキシステロイドである請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
【化１】
式中
【化２】
は、
【化３】
又は、
【化４】
であり、
Ｒ１及びＲ２は、水素、又はアルキルであり、
【化５】
は、
【化６】
であり、
Ｒ３は、メチル、ヒドロキシメチル、又はメチルアミノアルキレンカルボニルオキシメチル、アルキルカルボニルオキシメチル、又はフェニルアミノアルキレンカルボニルオキシメチルであり、Ｒ４は、アルカノイルであり、Ｘはハロゲンである。
【請求項９】
前記化合物が、下記式で表される化合物である請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
【化７】
Ｒ３は、ヒドロキシメチル、フェニルカルボニルアミノイソプロピルカルボニルオキシメチル又は、２,２−ジメチルプロピルカルボニルオキシメチルである。
【請求項１０】
前記化合物が、下記の結晶構造の９−フルオロ−１１,２１−ジヒドロキシ−１６,１７−［１−メチルエチリジンビス（オキシ）］プレグナ−１,４−ジエン−３,２０−ジオンである請求項１から７のいずれかに記載の組成物。
【化８】
【請求項１１】
前記化合物が、薬学的に許容される塩である請求項８から１０のいずれかに記載の化合物。
【請求項１２】
前記第１結晶群の、前記第２結晶群に対する体積あたりの重量の比が、約１：１,１：２,２：１,１：３,３：１,２：３,３：２,１：４,４：１,３：４,４：３,１：５,５：１,２：５,５：２,３：５,５：３,４：５,５：４,１：６,６：１,５：６,又は６：５である請求項４から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２０％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を８０％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２５％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約５０％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を約５０％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）、及び約５０μｍ〜約６００μｍ結晶を約２５％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２０％（ｗ／ｖ）、及び約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約８０％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約２５％（ｗ／ｖ）、及び約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約５０％（ｗ／ｖ）、及び約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約５０％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、約０.５μｍ〜約４０μｍ結晶を約７５％（ｗ／ｖ）、及び約１００μｍ〜約２００μｍ結晶を約２５％（ｗ／ｖ）含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
組成物がトリアムシノロンアセトニドの結晶及び結晶複合体を含み、前記組成物において結晶複合体の濃度と比較して結晶の濃度を増加する工程を含むことを特徴とする患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロンアセトニド組成物の調製方法。
【請求項２２】
組成物がトリアムシノロンアセトニドの結晶及び結晶複合体を含み、前記組成物において結晶複合体の割合と比較して結晶の割合を増加する工程を含み、前記結晶及び結晶複合体は、直径が約５０μｍ〜約６００μｍであることを特徴とする患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロンアセトニド組成物の調製方法。
【請求項２３】
直径が約５０μｍ〜約６００μｍのトリアムシノロン結晶を、結晶及び結晶複合体のどちらも含むもう１つのトリアムシノロン組成物から選択する工程を含むことを特徴とする患者の硝子体内で改善された治療効果のある滞留時間を有する薬学的に許容されるトリアムシノロン組成物の調製方法。
【請求項２４】
大きさが約１００μｍ〜約２００μｍのトリアムシノロン結晶を、結晶及び結晶複合体のどちらも含むトリアムシノロン組成物から選択する工程を更に含む請求項２１から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
眼科的に許容されるキャリア、希釈剤及び／又は賦形剤に前記範囲の結晶を添加する工程を更に含む請求項２１から２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
請求項２１から２５のいずれかに記載の方法により調製されることを特徴とする薬学的に許容される組成物。
【請求項２７】
少なくとも１つの薬学的に許容される添加剤を更に含む請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２８】
前記添加剤が、眼科的に許容される請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記添加剤が、硝子体に適合し、眼内に視力を損なう残留物を残さない請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
前記添加剤が、硝子体内蓄積注射として前記薬学的組成物の送達に適している請求項２７に記載の組成物。
【請求項３１】
前記添加剤が希釈剤である請求項２７に記載の組成物。
【請求項３２】
前記希釈剤が、水、食塩水、有機塩溶液、無機塩溶液、リンゲル液、デキストロース溶液、及びハンクス液を含む群より選択される請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記希釈剤が平衡塩類溶液である請求項３１に記載の組成物。
【請求項３４】
前記平衡塩類溶液が乳酸リンゲル液の媒体である請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
請求項１から２０のいずれかに記載の薬学的に許容される組成物、請求項２１から２５のいずれかに記載の方法により調製される薬学的に許容される組成物、又は請求項２６から３４のいずれかに記載の薬学的に許容される組成物を、少なくとも１つの眼組織に又はその傍に投与する工程を含むことを特徴とする治療を必要とする患者の眼の炎症症状の治療方法。
【請求項３６】
前記組成物が、局所適用、カニューレによる送達、眼窩底への眼窩周囲注射、結膜下注射、縫合有無での眼内への移植、又は眼内注射により投与される請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記眼内注射が、硝子体内注射、眼房注射、又は結膜下注射、若しくはテノン嚢下注射等の眼の外層への注射である請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記眼内注射が、セルフシール２１〜３０ゲージ針、又は他の適切な目盛りつき送達装置で毛様体扁平部を通して行われる請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
前記局所適用が軟膏、ゲル又は点眼液による請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
前記薬学的に許容される組成物が、標的となる眼の画分内で薬学的に許容される組成物の最終濃度が約０.０５ｍｇ／ｍｌ〜約２５ｍｇ／ｍｌに達するのに十分な濃度で送達される請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】
前記薬学的に許容される組成物が眼内送達で投与され、前記薬学的に許容される組成物の最終濃度は約０.０５ｍｇ／ｍｌ〜約８ｍｇ／ｍｌである請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】
前記濃度が約１ｍｇ／ｍｌ〜約７ｍｇ／ｍｌ、約１．５ｍｇ／ｍｌ〜約６ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌ、又は約３ｍｇ／ｍｌ〜約４ｍｇ／ｍｌである請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記薬学的に許容される組成物は、硝子体内投与され、前記薬学的に許容される組成化合物の最終濃度は、約４ｍｇ／ｍｌである請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】
前記組成物が、正確な投与量の単回投与に適切な単位投与形態で投与される請求項１から１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項４５】
前記組成物が１〜３ヶ月毎に投与される請求項３５に記載の方法。
【請求項４６】
前記組成物が、３ヶ月毎よりも少ない頻度で投与される請求項３５に記載の方法。
【請求項４７】
抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩の薬学的に許容される組成物であって、
前記抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩は結晶形状であり、前記結晶は、更に直径が約０.５μｍ〜約４０μｍの第１結晶群及び直径が約５０μｍ〜約６００μｍの第２結晶群を含み、及び前記薬学的に許容される組成物は、更に生体適合性及び生分解性マトリックスを含むことを特徴とする抗炎症ステロイド又はその薬学的に許容される塩の薬学的に許容される組成物。
【請求項４８】
前記薬学的に許容される組成物の投与が、光ダイナミック療法、レーザー治療、又は１つ以上の生物学的又は薬学的治療等の１つ以上の他の治療との組合せで行われる請求項３５に記載の方法。
【請求項４９】
前記他の治療が網膜のレーザー治療であり、及び前記レーザー治療の前後に抗炎症ステロイドが注射により投与される請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
少なくとも１つの付加化合物が、前記薬学的に許容される組成物と一緒に投与され、前記付加化合物は、抗生物質、抗血管新生薬、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾロン、プレドニゾン）、エストロゲン（例えば、エストラジオール）、アンドロゲン（例えば、テストステロン）、レチノイン酸誘導体（例えば、９シスレチノイン酸、１３トランスレチノイン酸、オールトランスレチノイン酸）、ビタミンＤ誘導体（例えば、カルシポトリオール、カルシポトリエン）、非ステロイド抗炎症薬、抗感染症薬、タンパク質キナーゼＣ阻害薬、ＭＡＰキナーゼ阻害薬、抗アポトーシス薬、成長因子、ビタミン、及び不飽和脂肪酸からなる群より選択される請求項３５に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗血管新生薬がルーセンティス（Ｒ）又はマキュジェン（Ｒ）である請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記組成物が、抗生物質、抗血管新生薬、グルココルチコイド（例えば、プレドニゾロン、プレドニゾン）、エストロゲン（例えば、エストラジオール）、アンドロゲン（例えば、テストステロン）、レチノイン酸誘導体（例えば、９シスレチノイン酸、１３トランスレチノイン酸、オールトランスレチノイン酸）、ビタミンＤ誘導体（例えば、カルシポトリオール、カルシポトリエン）、非ステロイド抗炎症薬、抗感染症薬、タンパク質キナーゼＣ阻害薬、ＭＡＰキナーゼ阻害薬、抗アポトーシス薬、成長因子、ビタミン、及び不飽和脂肪酸からなる群より選択される少なくとも１つの付加化合物もまた含む請求項１から２０のいずれかに記載の薬学的に許容される組成物、請求項２１から２５のいずれかに記載の方法により調製される薬学的に許容される組成物、又は請求項２６から３４のいずれかに記載の薬学的に許容される組成物。
【請求項５３】
前記抗血管新生薬がルーセンティス（Ｒ）及びマキュジェン（Ｒ）からなる群より選択される請求項５２に記載の薬学的に許容される組成物。
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図１】
【図２】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２３】
【図３Ｂ】
【図４】
【図５】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２２】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図１】
【図２】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２３】
【公表番号】特表２００７−５２０４９６（Ｐ２００７−５２０４９６Ａ）
【公表日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５５１６８４（Ｐ２００６−５５１６８４）
【出願日】平成１７年２月４日（２００５．２．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２００５／０００１４６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０７４９４２
【国際公開日】平成１７年８月１８日（２００５．８．１８）
【出願人】（５０６２６７３２９）レットメッド ピーティーワイ リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年７月２６日（２００７．７．２６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年２月４日（２００５．２．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＡＵ２００５／０００１４６
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０７４９４２
【国際公開日】平成１７年８月１８日（２００５．８．１８）
【出願人】（５０６２６７３２９）レットメッド ピーティーワイ リミテッド (2)
【Ｆターム（参考）】
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