抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤
【課題】 天然由来成分の中には、その効果が充分ではなく、より優れた成分の開発が求められていた。それ故、本発明は抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果を有する優れた皮膚外用剤を提供することにある。
【解決手段】 アカネ科フタバムグラ属ソナレムグラから得られる成分が、抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果に優れていることを見出し、抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤を提供するに至った。
【解決手段】 アカネ科フタバムグラ属ソナレムグラから得られる成分が、抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果に優れていることを見出し、抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤を提供するに至った。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アカネ科（Rubiaceae）フタバムグラ属（Hedyotis）ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）から得られる成分を含有することを特徴とする、抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、皮膚の乾燥を防ぎ、皮膚にうるおいを与える保湿成分を提供するために、様々な有効成分の配合検討がなされてきた。また、加齢、疾患、ストレス、紫外線などによるシワ、シミ、皮膚の弾力低下といった皮膚症状の要因として、乾燥、細胞機能低下、紫外線によるメラニン産生や色素沈着、真皮マトリックス成分の減少や変性、紫外線などによる細胞の酸化障害などが挙げられる。このような皮膚症状を防止・改善するために、様々な有効成分の検索および配合検討がなされてきた。特に天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などの抽出物の皮膚外用剤への応用が検討されてきた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
例えば、皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤を得るために、真皮線維芽細胞の賦活あるいは増殖促進作用を有する成分としてポンカンのエッセンス（特許文献１参照）等、皮膚の保湿効果と安全性に優れた保湿剤としてハリブキ属植物の抽出物（特許文献２参照）等、美白剤としては、白鶴霊芝の抽出物（特許文献３参照）等、抗酸化剤としてはサルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献４参照）等、抗炎症作用を有する植物エキスとして、蘇葉、カカオ及び茴香の乾燥物又はその熱水抽出エキス（特許文献５参照）、カンナ科植物の溶媒抽出物（特許文献６参照）等が開示されている。
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２００７−７７０７２号公報
【特許文献３】特開２００３−８９６３０号公報
【特許文献４】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献５】特開２００３−２０１２４６号公報
【特許文献６】特開平４−２７０２２４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このように、これまで様々な天然由来成分が応用されてきた。しかしながら、天然由来成分の中には、その効果が充分ではなく、より優れた成分の開発が求められていた。それ故、本発明は抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果を有する優れた皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
ソナレムグラから得られる成分が、抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果に優れていることを見出し、抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤を提供するに至った。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、ソナレムグラから得られる成分を配合することにより、優れた効果を有する抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明で用いるソナレムグラは、アカネ科、フタバムグラ属の双子葉植物で、草本または小低木であり、本州の千葉県以南、四国、九州、琉球に分布する。
【０００８】
本発明でソナレムグラを使用する際は、その使用部位には特に制限はなく、葉、茎、花、根等の各部位および全草を用いることができるが、好ましくは全草を用いるのがよい。
【０００９】
抽出の際は、ソナレムグラを生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。
【００１０】
抽出は、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬して行うことができる。抽出溶媒は、必要に応じて加熱してもよい。抽出効率を上げるため、撹拌したり、抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１１】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、好ましくは、水、エタノールがよい。これらは単独で用いられるほか、任意の２種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種または２種以上の超臨界液体や亜臨界液体を用いてもよい。
【００１２】
本発明で用いるソナレムグラの上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、一定期間そのまま静置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。あるいは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。植物および貝類の前記抽出物やその処理物および分画物は、各処理および分画後に凍結乾燥し、用時溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００１３】
ソナレムグラまたはその抽出物は、優れた抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果を有し、抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤として利用することができる。
【００１４】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする抗老化剤は、ヒト真皮線維芽細胞の賦活作用を有し、老化症状の防止・改善に優れた効果を発揮する。
【００１５】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする保湿剤は、ヒト真皮線維芽細胞のヒアルロン酸産生促進作用およびヒト表皮角化細胞のアルギナーゼ活性促進作用を有し、優れた保湿効果を発揮する。
【００１６】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする美白剤は、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞メラニン産生抑制作用を有し、色素沈着、シミ、そばかす等を予防・改善して、優れた美白効果を発揮する。
【００１７】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、ラジカル消去作用、スーパーオキサイドアニオン消去作用を有し、優れた抗酸化効果を発揮する。
【００１８】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする抗炎症剤は、ホスホリパーゼＡ２阻害作用を有し、優れた抗炎症効果を発揮する。
【００１９】
ソナレムグラまたはその抽出物を含有する皮膚外用剤は、優れた抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果などを発揮する。
【００２０】
これらの各剤は、ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分として含む限り、その形態およびその他成分の配合の有無等については、何ら制限されない。形態については、液状、ペースト状、ゲル状、固体状または粉末状等の任意の形態を、その用途等に応じて選択でき、その形態とするために必要なビヒクル（賦形剤）、溶剤、またはその他の一般的な添加剤（酸化防止剤、着色剤または分散剤等）を任意に含むことができる。
【００２１】
ここで皮膚外用剤とは、化粧料、医薬部外品または外用医薬品等の皮膚または毛髪に外用される全ての外用組成物を意味している。
【００２２】
皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローション等の可溶化系、カラミンローション等の分散系、またはクリームや乳液等の乳化系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填するエアゾール形態、軟膏剤またはパップ剤等の種々の剤型で提供することもできる。
【００２３】
具体的には、乳液、クリーム、ローション、化粧水、パック、美容液、洗浄料またはメイクアップ化粧料等の各種化粧料；液剤、軟膏、粉末、顆粒、エアゾール剤、貼付剤またはパップ剤等の様々な形態の化粧料、医薬部外品または外用医薬品などが例示できる。
【００２４】
皮膚外用剤には、ソナレムグラまたはその抽出物の他に、その用途と必要に応じて、医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料および洗浄料等に通常配合される任意の成分、例えば水、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、ゲル化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、抗炎症剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、薬剤（薬効成分）、香料、樹脂、防菌防かび剤、抗酸化剤、またはアルコール類等を適宜配合することができる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、抗老化剤、抗酸化剤、痩身剤、美白剤、抗炎症剤、免疫賦活剤あるいはソナレムグラ以外の植物またはその抽出物との併用も可能である。
【００２５】
ソナレムグラまたはその抽出物の皮膚外用剤への配合量は、種類や目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して固形分換算で、好ましくは０．０００１〜１０．０質量％であり、より好ましくは０．００１〜５．０質量％であり、さらに好ましくは０．０１〜５．０質量％であり、一層好ましくは０．１〜５．０質量％である。
【００２６】
以下にソナレムグラ抽出物の調製例、抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、および抗炎症効果を評価するための試験方法、皮膚外用剤としての処方例についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらによってなんら限定されるものではない。
【実施例】
【００２７】
［抽出物１］
ソナレムグラの全草の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物１を得た。
【００２８】
上記抽出物を用いて、各効果の評価を行った。なお各評価結果に記載した＊および＊＊は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊でそれぞれ表したものである。
【００２９】
［実施例１］
＜抗老化効果（ヒト真皮線維芽細胞賦活作用の評価）＞
クラボウ社（倉敷紡績株式会社）製正常ヒト真皮線維芽細胞を、１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレート播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、表１に示す各濃度となるように抽出物１を添加した１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養した。上清を除いた後、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して約２時間培養した。その後、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価では、試料を含む培地の他に、コントロールとして１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。評価結果を、コントロールにおける細胞賦活作用を１００とした場合の相対値として表１に示す。
【００３０】
【表１】
【００３１】
表１の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な抗老化効果が認められた。
【００３２】
［実施例２］
＜保湿効果（ヒト真皮線維芽細胞ヒアルロン酸産生促進作用の評価）＞
正常ヒト真皮繊維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて表２に示す各濃度となるように抽出物１を添加したサンプル培養液に交換し、さらに３日間培養した。培養上清中に分泌されたヒアルロン酸の定量には、プロテオグリカンを用いた間接ＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）および過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡプロテインアッセイキットにて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を１００とした相対値にて表２に示す。
【００３３】
【表２】
【００３４】
［実施例３］
＜保湿効果（ヒト表皮角化細胞アルギナーゼ活性促進作用の評価）＞
ヒト表皮角化細胞ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後１．２ｍＭ ＣａＣｌ２を含む５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地（分化誘導培地）にて表３に示す各濃度に抽出物１を添加したサンプル培養液に交換し、さらに９日間培養した。培地交換は３日に１回のペースで行った。培養上清中に分泌された尿素の定量には、尿素窒素 Ｂ−テストワコー（和光純薬）を用いた。アルギナーゼはアルギニンを加水分解し、オルニチン、尿素を生成する。尿素はウレアーゼによってアンモニアに分解され、アンモニアはペンタシアノニトロシル鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム二水和物（ニトロプルシッドナトリウム）存在下でサリチル酸、次亜塩素酸と反応し、インドフェノールが生成する。アルカリ性条件下でインドフェノールに由来する５７０ｎｍの吸光度を測定し、尿素濃度を求め、アルギナーゼ活性の定量を行った。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡプロテインアッセイキットにて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を１００とした時の相対値にて表３に示す。
【００３５】
【表３】
【００３６】
表２および３の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な保湿効果が認められた。
【００３７】
［実施例４］
＜美白効果（Ｂ１６マウスメラノーマ細胞メラニン産生抑制作用の評価）＞
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６Ｆ０細胞）を１ディッシュ当り１８０００個となるように９０ｍｍディッシュに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて表４に示す濃度になるように抽出物１を添加した培養液に交換し、さらに５日間培養した。培養終了後、トリプシン処理にて細胞をはがし、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物は下記判定表を基にその黒化状況を肉眼判定した。評価ではネガティブコントロールに５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地、ポジティブコントロールに５０ｍＭ乳酸ナトリウムを含有する５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。これらの肉眼判定結果は判定５及び判定１とし、サンプル判定の指標とした。肉眼判定は下記に示す通り、５段階評価した。また同時に、沈殿物に組織溶解剤（商品名Ｓｏｌｖａｂｌｅ）を添加して煮沸し、室温に戻して分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ製分光光度計Ｕ−３０１０）により５００ｎｍの吸光度を測定し、総メラニン量を求めた。評価結果を表４に示す。
判定及び基準
判定 基準
１ ポジティブコントロールと同程度（ほぼ白）
２ ポジティブコントロールより僅かに黒化する（うすい褐色）
３ ポジティブコントロールとネガティブコントロールの中間（褐色）
４ ネガティブコントロールと比べやや黒化が抑制されている（黒褐色）
５ ネガティブコントロールと同程度（ほぼ黒）
【００３８】
【表４】
【００３９】
表４の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な美白効果が認められた。
【００４０】
［実施例５］
＜抗酸化効果（ＤＰＰＨラジカル消去作用の評価）＞
抽出物１を、５０質量％エタノールを用いて表５に示した濃度に調整して試料溶液とし、９６穴マイクロプレートに１００μＬずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジカル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を１００μＬずつ添加し、良く混合後、室温、暗所にて１０分間静置した。その後、ＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料を添加しなかった場合のコントロールの吸光度を（Ａ）、試料を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、ＤＰＰＨラジカルの消去率を式（１）に導入して求めた。測定結果を表５に示す。
式（１）：ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）
【００４１】
【表５】
【００４２】
表５の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な抗酸化効果が認められた。
【００４３】
［実施例６］
＜抗炎症効果（ホスホリパーゼＡ２阻害作用の評価）＞
６０ｎｇ／ｍＬとなるよう調整したホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）、表６に示した濃度に調製したサンプル、および１０ｍＭとなるよう調整したＤＴＮＢ（５，５−ジチオ−ビス−（２−ニトロ安息香酸））を各１０μＬずつ混合し、室温で１０分間静置した。さらに基質として１．６６ｍＭ のジヘプタノイル チオ−ＰＣを５０μＬ添加し、室温で４５分間反応させ、４１４ｎｍの吸光度を測定した。また、ＰＬＡ２溶液にかえてバッファー添加時の吸光度を測定し、両測定値の差を求めた。試料無添加のコントロールの値を（Ａ）、試料添加時の値を（Ｂ）とした時、ＰＬＡ２阻害作用は次式に定義される。
阻害率（％）＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
【００４４】
【表６】
【００４５】
表６の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な抗炎症効果が認められた。
【００４６】
続いて、上記各調製方法で得られたソナレムグラ抽出物を配合した皮膚外用剤の処方例を示す。
【００４７】
［実施例７］
乳液
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（10）精製水 １００とする残部
（11）アルギニン（１質量％水溶液） ２０．０
（12）抽出物１ ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。冷却後４０℃にて、（11）と（12）を順次加え、均一に混合する。
【００４８】
［実施例８］
化粧水
（１）エタノール １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 １００とする残部
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）抽出物１ １．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。さらに（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００４９】
［実施例９］
クリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（10）精製水 １００とする残部
（11）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（12）抽出物１ ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。（11）を添加して攪拌後、冷却し４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００５０】
［実施例１０］
美容液
（１）精製水 １００とする残部(質量％)
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１質量％水溶液) １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（10）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（11）ベヘニルアルコール ０．７５
（12）ミツロウ １．０
（13）ホホバ油 １．０
（14）１，３−ブチレングリコール １０．０
（15）Ｌ−アルギニン（１０質量％水溶液） ２．０
（16）抽出物１ ３．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（14）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。冷却後５０℃にて（15）を、４０℃にて（16）を加え、均一に混合する。
【００５１】
［実施例１１］
水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（質量％）
（２）精製水 １００とする残部
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液） ０．５
（４）エタノール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）香料 ０．１
（７）抽出物１ ０．５
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 １．０
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５２】
［実施例１２］
クレンジング料
（１）スクワラン ８１．０（質量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １５．０
（３）精製水 １００とする残部
（４）抽出物１ ４．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５３】
［実施例１３］
洗顔フォーム
（１）ステアリン酸 １６．０（質量％）
（２）ミリスチン酸 １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）グリセリン ２５．０
（５）水酸化ナトリウム ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １．０
（７）精製水 １００とする残部
（８）抽出物１ ０．１
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却後４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００５４】
［実施例１４］
メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン １０．２(質量％)
（２）セタノール ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル １．０
（５）プロピレングリコール １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（７）精製水 １００とする残部
（８）酸化チタン １．０
（９）ベンガラ ０．１
（10）黄酸化鉄 ０．４
（11）香料 ０．１
（12）抽出物１ ３．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（10）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００５５】
［実施例１５］
乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン ２．０(質量％)
（２）スクワラン ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
（４）セタノール １．０
（５）ポリオキシエチレン(２０Ｅ．Ｏ．)
ソルビタンモノステアリン酸エステル １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン ０．７
（７）１，３−ブチレングリコール ８．０
（８）キサンタンガム ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）精製水 １００とする残部
（11）酸化チタン ９．０
（12）タルク ７．４
（13）ベンガラ ０．５
（14）黄酸化鉄 １．１
（15）黒酸化鉄 ０．１
（16）香料 ０．１
（17）抽出物１ ０．５
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（10）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（11）〜（15）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。冷却後４０℃にて（16）と（17）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００５６】
［実施例１６］
油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン ３４．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）ワセリン ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル ５．０
（５）塩化ナトリウム １．３
（６）塩化カリウム ０．１
（７）プロピレングリコール ３．０
（８）１，３−ブチレングリコール ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）精製水 １００とする残部
（11）香料 ０．１
（12）抽出物１ ３．０
製法：（５）と（６）を（11）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（9）を（10）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（11）と(12)を加え、均一に混合する。
【００５７】
［実施例１７］
パック
（１）精製水 １００とする残部(質量％)
（２）ポリビニルアルコール １２．０
（３）エタノール １７．０
（４）グリセリン ９．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００） ２．０
（６）抽出物１ １．０
（７）香料 ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却する。４０℃にて（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００５８】
［実施例１８］
入浴剤
（１）香料 ０．３(質量％)
（２）抽出物１ ３．０
（３）炭酸水素ナトリウム ５０．０
（４）硫酸ナトリウム ４６．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００５９】
［実施例１９］
ヘアーワックス
（１）ステアリン酸 ３．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）セチルアルコール ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン ２．０
（５）メチルポリシロキサン ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体 １．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（８）１，３−ブチレングリコール ７．５
（９）アルギニン ０．７
（10）精製水 １００とする残部
（11）抽出物１ ２．０
（12）香料 ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（10）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００６０】
［実施例２０］
ヘアートニック
（１）エタノール ５０．０(質量％)
（２）精製水 １００とする残部
（３）抽出物１ ３．０
（４）香料 ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【００６１】
実施例７〜実施例２０に示した皮膚外用剤は、抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果を有する組成物であった。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明のソナレムグラから得られる成分は、皮膚化粧料、毛髪用化粧料または洗浄料等の皮膚外用剤、医薬品、医薬部外品に配合して用いるのに有用である。また、本発明に係る、ソナレムグラ抽出物は、天然由来成分であることから、安全性が高いことが容易に考えられ、皮膚外用剤としての意義も大きく、したがって本発明は、新たな皮膚外用剤として有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アカネ科（Rubiaceae）フタバムグラ属（Hedyotis）ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）から得られる成分を含有することを特徴とする、抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、皮膚の乾燥を防ぎ、皮膚にうるおいを与える保湿成分を提供するために、様々な有効成分の配合検討がなされてきた。また、加齢、疾患、ストレス、紫外線などによるシワ、シミ、皮膚の弾力低下といった皮膚症状の要因として、乾燥、細胞機能低下、紫外線によるメラニン産生や色素沈着、真皮マトリックス成分の減少や変性、紫外線などによる細胞の酸化障害などが挙げられる。このような皮膚症状を防止・改善するために、様々な有効成分の検索および配合検討がなされてきた。特に天然由来成分は、様々な薬理作用や美容効果を有することが知られ、これまでにも数多くの植物や菌類などの抽出物の皮膚外用剤への応用が検討されてきた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
例えば、皮膚の老化防止、改善作用を有する皮膚外用剤を得るために、真皮線維芽細胞の賦活あるいは増殖促進作用を有する成分としてポンカンのエッセンス（特許文献１参照）等、皮膚の保湿効果と安全性に優れた保湿剤としてハリブキ属植物の抽出物（特許文献２参照）等、美白剤としては、白鶴霊芝の抽出物（特許文献３参照）等、抗酸化剤としてはサルオガセ科サルオガセ属植物の抽出物（特許文献４参照）等、抗炎症作用を有する植物エキスとして、蘇葉、カカオ及び茴香の乾燥物又はその熱水抽出エキス（特許文献５参照）、カンナ科植物の溶媒抽出物（特許文献６参照）等が開示されている。
【特許文献１】特開２００１−１３１０４５号公報
【特許文献２】特開２００７−７７０７２号公報
【特許文献３】特開２００３−８９６３０号公報
【特許文献４】特開平１０−１８２４１３号公報
【特許文献５】特開２００３−２０１２４６号公報
【特許文献６】特開平４−２７０２２４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このように、これまで様々な天然由来成分が応用されてきた。しかしながら、天然由来成分の中には、その効果が充分ではなく、より優れた成分の開発が求められていた。それ故、本発明は抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果を有する優れた皮膚外用剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
ソナレムグラから得られる成分が、抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果に優れていることを見出し、抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤を提供するに至った。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、ソナレムグラから得られる成分を配合することにより、優れた効果を有する抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明で用いるソナレムグラは、アカネ科、フタバムグラ属の双子葉植物で、草本または小低木であり、本州の千葉県以南、四国、九州、琉球に分布する。
【０００８】
本発明でソナレムグラを使用する際は、その使用部位には特に制限はなく、葉、茎、花、根等の各部位および全草を用いることができるが、好ましくは全草を用いるのがよい。
【０００９】
抽出の際は、ソナレムグラを生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切、乾燥、粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。
【００１０】
抽出は、任意の抽出溶媒に所定時間浸漬して行うことができる。抽出溶媒は、必要に応じて加熱してもよい。抽出効率を上げるため、撹拌したり、抽出溶媒中でホモジナイズしたりしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は、抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１１】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール等の低級アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；エチルエーテル、プロピルエーテル等のエーテル類；酢酸ブチル、酢酸エチル等のエステル類；アセトン、エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、好ましくは、水、エタノールがよい。これらは単独で用いられるほか、任意の２種以上を組み合わせて用いてもよい。生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素、エチレン、プロピレン、エタノール、メタノール、アンモニアなどの１種または２種以上の超臨界液体や亜臨界液体を用いてもよい。
【００１２】
本発明で用いるソナレムグラの上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、一定期間そのまま静置して熟成させて用いてもよいし、濃縮、乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解して使用することもできる。あるいは、これらの生理作用を損なわない範囲で、脱色、脱臭、脱塩等の精製処理や、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。植物および貝類の前記抽出物やその処理物および分画物は、各処理および分画後に凍結乾燥し、用時溶媒に溶解して用いることもできる。また、リポソーム等のベシクルやマイクロカプセル等に内包させて用いることもできる。
【００１３】
ソナレムグラまたはその抽出物は、優れた抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果を有し、抗老化剤、保湿剤、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、皮膚外用剤として利用することができる。
【００１４】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする抗老化剤は、ヒト真皮線維芽細胞の賦活作用を有し、老化症状の防止・改善に優れた効果を発揮する。
【００１５】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする保湿剤は、ヒト真皮線維芽細胞のヒアルロン酸産生促進作用およびヒト表皮角化細胞のアルギナーゼ活性促進作用を有し、優れた保湿効果を発揮する。
【００１６】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする美白剤は、Ｂ１６マウスメラノーマ細胞メラニン産生抑制作用を有し、色素沈着、シミ、そばかす等を予防・改善して、優れた美白効果を発揮する。
【００１７】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする抗酸化剤は、ラジカル消去作用、スーパーオキサイドアニオン消去作用を有し、優れた抗酸化効果を発揮する。
【００１８】
ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分とする抗炎症剤は、ホスホリパーゼＡ２阻害作用を有し、優れた抗炎症効果を発揮する。
【００１９】
ソナレムグラまたはその抽出物を含有する皮膚外用剤は、優れた抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果などを発揮する。
【００２０】
これらの各剤は、ソナレムグラまたはその抽出物を有効成分として含む限り、その形態およびその他成分の配合の有無等については、何ら制限されない。形態については、液状、ペースト状、ゲル状、固体状または粉末状等の任意の形態を、その用途等に応じて選択でき、その形態とするために必要なビヒクル（賦形剤）、溶剤、またはその他の一般的な添加剤（酸化防止剤、着色剤または分散剤等）を任意に含むことができる。
【００２１】
ここで皮膚外用剤とは、化粧料、医薬部外品または外用医薬品等の皮膚または毛髪に外用される全ての外用組成物を意味している。
【００２２】
皮膚外用剤の剤型は任意であり、例えば、ローション等の可溶化系、カラミンローション等の分散系、またはクリームや乳液等の乳化系として提供することができる。さらに、噴射剤と共に充填するエアゾール形態、軟膏剤またはパップ剤等の種々の剤型で提供することもできる。
【００２３】
具体的には、乳液、クリーム、ローション、化粧水、パック、美容液、洗浄料またはメイクアップ化粧料等の各種化粧料；液剤、軟膏、粉末、顆粒、エアゾール剤、貼付剤またはパップ剤等の様々な形態の化粧料、医薬部外品または外用医薬品などが例示できる。
【００２４】
皮膚外用剤には、ソナレムグラまたはその抽出物の他に、その用途と必要に応じて、医薬品、医薬部外品、皮膚化粧料、毛髪用化粧料および洗浄料等に通常配合される任意の成分、例えば水、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、ゲル化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、抗炎症剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、薬剤（薬効成分）、香料、樹脂、防菌防かび剤、抗酸化剤、またはアルコール類等を適宜配合することができる。さらに、本発明の効果を損なわない範囲において、他の保湿剤、抗老化剤、抗酸化剤、痩身剤、美白剤、抗炎症剤、免疫賦活剤あるいはソナレムグラ以外の植物またはその抽出物との併用も可能である。
【００２５】
ソナレムグラまたはその抽出物の皮膚外用剤への配合量は、種類や目的等によって調整することができるが、効果や安定性などの点から、全量に対して固形分換算で、好ましくは０．０００１〜１０．０質量％であり、より好ましくは０．００１〜５．０質量％であり、さらに好ましくは０．０１〜５．０質量％であり、一層好ましくは０．１〜５．０質量％である。
【００２６】
以下にソナレムグラ抽出物の調製例、抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、および抗炎症効果を評価するための試験方法、皮膚外用剤としての処方例についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらによってなんら限定されるものではない。
【実施例】
【００２７】
［抽出物１］
ソナレムグラの全草の乾燥粉砕物１００ｇに、５０質量％エタノール水溶液を２．０Ｋｇ加え、撹拌しながら室温にて２時間抽出した。抽出液をろ過して回収し、減圧濃縮後、凍結乾燥を行い、抽出物１を得た。
【００２８】
上記抽出物を用いて、各効果の評価を行った。なお各評価結果に記載した＊および＊＊は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を＊で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を＊＊でそれぞれ表したものである。
【００２９】
［実施例１］
＜抗老化効果（ヒト真皮線維芽細胞賦活作用の評価）＞
クラボウ社（倉敷紡績株式会社）製正常ヒト真皮線維芽細胞を、１ウェル当たり２．０×１０４個となるように９６穴マイクロプレート播種した。播種培地には、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）に１質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したものを用いた。２４時間培養後、表１に示す各濃度となるように抽出物１を添加した１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地に交換し、さらに４８時間培養した。上清を除いた後、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を４００μｇ／ｍＬ含有する培地に交換して約２時間培養した。その後、テトラゾリウム環の開環により生じるフォルマザンを２−プロパノールにて抽出し、マイクロプレートリーダーにて５５０ｎｍの吸光度を測定した。同時に、濁度として６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両測定値の差により細胞賦活作用を評価した。評価では、試料を含む培地の他に、コントロールとして１質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。評価結果を、コントロールにおける細胞賦活作用を１００とした場合の相対値として表１に示す。
【００３０】
【表１】
【００３１】
表１の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な抗老化効果が認められた。
【００３２】
［実施例２］
＜保湿効果（ヒト真皮線維芽細胞ヒアルロン酸産生促進作用の評価）＞
正常ヒト真皮繊維芽細胞を１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、０．５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて表２に示す各濃度となるように抽出物１を添加したサンプル培養液に交換し、さらに３日間培養した。培養上清中に分泌されたヒアルロン酸の定量には、プロテオグリカンを用いた間接ＥＬＩＳＡ法を用い、最後は標識されたペルオキシダーゼに対し２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）ジアンモニウム塩（ＡＢＴＳ）および過酸化水素を添加し反応させた後、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定した。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡプロテインアッセイキットにて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのヒアルロン酸産生量を１００とした相対値にて表２に示す。
【００３３】
【表２】
【００３４】
［実施例３］
＜保湿効果（ヒト表皮角化細胞アルギナーゼ活性促進作用の評価）＞
ヒト表皮角化細胞ＨａＣａＴを１ウェル当り２．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後１．２ｍＭ ＣａＣｌ２を含む５質量％ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地（分化誘導培地）にて表３に示す各濃度に抽出物１を添加したサンプル培養液に交換し、さらに９日間培養した。培地交換は３日に１回のペースで行った。培養上清中に分泌された尿素の定量には、尿素窒素 Ｂ−テストワコー（和光純薬）を用いた。アルギナーゼはアルギニンを加水分解し、オルニチン、尿素を生成する。尿素はウレアーゼによってアンモニアに分解され、アンモニアはペンタシアノニトロシル鉄（ＩＩＩ）酸ナトリウム二水和物（ニトロプルシッドナトリウム）存在下でサリチル酸、次亜塩素酸と反応し、インドフェノールが生成する。アルカリ性条件下でインドフェノールに由来する５７０ｎｍの吸光度を測定し、尿素濃度を求め、アルギナーゼ活性の定量を行った。ＰＩＥＲＣＥ社製ＢＣＡプロテインアッセイキットにて各ウェルのタンパク量を測定し、単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を求めた。評価結果を試料無添加のコントロールにおける単位タンパク量当りのアルギナーゼ活性を１００とした時の相対値にて表３に示す。
【００３５】
【表３】
【００３６】
表２および３の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な保湿効果が認められた。
【００３７】
［実施例４］
＜美白効果（Ｂ１６マウスメラノーマ細胞メラニン産生抑制作用の評価）＞
Ｂ１６マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６Ｆ０細胞）を１ディッシュ当り１８０００個となるように９０ｍｍディッシュに播種した。播種培地には５質量％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を用いた。２４時間後、５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地にて表４に示す濃度になるように抽出物１を添加した培養液に交換し、さらに５日間培養した。培養終了後、トリプシン処理にて細胞をはがし、１．５ｍＬマイクロチューブに移して遠心操作して細胞沈殿物を得た。得られた沈殿物は下記判定表を基にその黒化状況を肉眼判定した。評価ではネガティブコントロールに５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地、ポジティブコントロールに５０ｍＭ乳酸ナトリウムを含有する５％質量ＦＢＳ添加ＤＭＥＭ培地を用いた。これらの肉眼判定結果は判定５及び判定１とし、サンプル判定の指標とした。肉眼判定は下記に示す通り、５段階評価した。また同時に、沈殿物に組織溶解剤（商品名Ｓｏｌｖａｂｌｅ）を添加して煮沸し、室温に戻して分光光度計（ＨＩＴＡＣＨＩ製分光光度計Ｕ−３０１０）により５００ｎｍの吸光度を測定し、総メラニン量を求めた。評価結果を表４に示す。
判定及び基準
判定 基準
１ ポジティブコントロールと同程度（ほぼ白）
２ ポジティブコントロールより僅かに黒化する（うすい褐色）
３ ポジティブコントロールとネガティブコントロールの中間（褐色）
４ ネガティブコントロールと比べやや黒化が抑制されている（黒褐色）
５ ネガティブコントロールと同程度（ほぼ黒）
【００３８】
【表４】
【００３９】
表４の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な美白効果が認められた。
【００４０】
［実施例５］
＜抗酸化効果（ＤＰＰＨラジカル消去作用の評価）＞
抽出物１を、５０質量％エタノールを用いて表５に示した濃度に調整して試料溶液とし、９６穴マイクロプレートに１００μＬずつ添加した。そこへ、０．２ｍＭの１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジカル（ＤＰＰＨ）エタノール溶液を１００μＬずつ添加し、良く混合後、室温、暗所にて１０分間静置した。その後、ＤＰＰＨラジカルに由来する５１６ｎｍの吸光度を測定した。試料を添加しなかった場合のコントロールの吸光度を（Ａ）、試料を添加した場合の吸光度を（Ｂ）としたとき、ＤＰＰＨラジカルの消去率を式（１）に導入して求めた。測定結果を表５に示す。
式（１）：ラジカル消去率＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００（％）
【００４１】
【表５】
【００４２】
表５の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な抗酸化効果が認められた。
【００４３】
［実施例６］
＜抗炎症効果（ホスホリパーゼＡ２阻害作用の評価）＞
６０ｎｇ／ｍＬとなるよう調整したホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）、表６に示した濃度に調製したサンプル、および１０ｍＭとなるよう調整したＤＴＮＢ（５，５−ジチオ−ビス−（２−ニトロ安息香酸））を各１０μＬずつ混合し、室温で１０分間静置した。さらに基質として１．６６ｍＭ のジヘプタノイル チオ−ＰＣを５０μＬ添加し、室温で４５分間反応させ、４１４ｎｍの吸光度を測定した。また、ＰＬＡ２溶液にかえてバッファー添加時の吸光度を測定し、両測定値の差を求めた。試料無添加のコントロールの値を（Ａ）、試料添加時の値を（Ｂ）とした時、ＰＬＡ２阻害作用は次式に定義される。
阻害率（％）＝｛１−（Ｂ）／（Ａ）｝×１００
【００４４】
【表６】
【００４５】
表６の結果から明らかなように、ソナレムグラ（全草）５０％エタノール抽出物（抽出物１）は有意な抗炎症効果が認められた。
【００４６】
続いて、上記各調製方法で得られたソナレムグラ抽出物を配合した皮膚外用剤の処方例を示す。
【００４７】
［実施例７］
乳液
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）メチルフェニルポリシロキサン ４．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）モノステアリン酸ポリオキシエチレン
ソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．） １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン １．０
（７）グリセリン ４．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）カルボキシビニルポリマー ０．１５
（10）精製水 １００とする残部
（11）アルギニン（１質量％水溶液） ２０．０
（12）抽出物１ ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。冷却後４０℃にて、（11）と（12）を順次加え、均一に混合する。
【００４８】
［実施例８］
化粧水
（１）エタノール １５．０（質量％）
（２）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 ０．３
（３）香料 ０．１
（４）精製水 １００とする残部
（５）クエン酸 ０．０２
（６）クエン酸ナトリウム ０．１
（７）グリセリン １．０
（８）ヒドロキシエチルセルロース ０．１
（９）抽出物１ １．０
製法：（１）に（２）及び（３）を溶解する。さらに（４）〜（８）を順次添加した後、十分に攪拌し、（９）を加え、均一に混合する。
【００４９】
［実施例９］
クリーム
（１）スクワラン １０．０（質量％）
（２）ステアリン酸 ２．０
（３）水素添加パーム核油 ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質 ０．１
（５）セタノール ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（７）グリセリン １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（９）アルギニン（２０質量％水溶液） １５．０
（10）精製水 １００とする残部
（11）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １５．０
（12）抽出物１ ５．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。（11）を添加して攪拌後、冷却し４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。
【００５０】
［実施例１０］
美容液
（１）精製水 １００とする残部(質量％)
（２）グリセリン １０．０
（３）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（４）カルボキシビニルポリマー（１質量％水溶液） １７．５
（５）アルギン酸ナトリウム(１質量％水溶液) １５．０
（６）モノラウリン酸ポリグリセリル １．０
（７）マカデミアナッツ油脂肪酸フィトステリル ３．０
（８）Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸
ジ（フィトステリル−２−オクチルドデシル） ２．０
（９）硬化パーム油 ２．０
（10）スクワラン（オリーブ由来） １．０
（11）ベヘニルアルコール ０．７５
（12）ミツロウ １．０
（13）ホホバ油 １．０
（14）１，３−ブチレングリコール １０．０
（15）Ｌ−アルギニン（１０質量％水溶液） ２．０
（16）抽出物１ ３．０
製法：（１）〜（６）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（14）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。次いで、上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化を行った後、ホモミキサーにて均一に乳化する。冷却後５０℃にて（15）を、４０℃にて（16）を加え、均一に混合する。
【００５１】
［実施例１１］
水性ジェル
（１）カルボキシビニルポリマー ０．５（質量％）
（２）精製水 １００とする残部
（３）水酸化ナトリウム（１０質量％水溶液） ０．５
（４）エタノール １０．０
（５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（６）香料 ０．１
（７）抽出物１ ０．５
（８）ポリオキシエチレン（６０Ｅ．Ｏ．）硬化ヒマシ油 １．０
製法：（１）を（２）に加え、均一に攪拌した後、（３）を加える。均一に攪拌した後、（４）に予め溶解した（５）を加える。均一に攪拌した後、予め混合しておいた（６）〜（８）を加え、均一に攪拌混合する。
【００５２】
［実施例１２］
クレンジング料
（１）スクワラン ８１．０（質量％）
（２）イソステアリン酸ポリオキシエチレングリセリル １５．０
（３）精製水 １００とする残部
（４）抽出物１ ４．０
製法：（１）と（２）を均一に溶解する。これに、（３）と（４）を順次加え、均一に混合する。
【００５３】
［実施例１３］
洗顔フォーム
（１）ステアリン酸 １６．０（質量％）
（２）ミリスチン酸 １６．０
（３）親油型モノステアリン酸グリセリン ２．０
（４）グリセリン ２５．０
（５）水酸化ナトリウム ７．５
（６）ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン １．０
（７）精製水 １００とする残部
（８）抽出物１ ０．１
製法：（１）〜（４）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（５）〜（７）の水相成分を８０℃にて加熱溶解し、油相成分と均一に混合撹拌する。冷却後４０℃にて（８）を加え、均一に混合する。
【００５４】
［実施例１４］
メイクアップベースクリーム
（１）スクワラン １０．２(質量％)
（２）セタノール ２．０
（３）グリセリントリ−２−エチルヘキサン酸エステル ２．５
（４）親油型モノステアリン酸グリセリル １．０
（５）プロピレングリコール １１．０
（６）ショ糖脂肪酸エステル １．３
（７）精製水 １００とする残部
（８）酸化チタン １．０
（９）ベンガラ ０．１
（10）黄酸化鉄 ０．４
（11）香料 ０．１
（12）抽出物１ ３．０
製法：（１）〜（４）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（５）〜（７）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（８）〜（10）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散させる。この水相成分に前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００５５】
［実施例１５］
乳液状ファンデーション
（１）メチルポリシロキサン ２．０(質量％)
（２）スクワラン ５．０
（３）ミリスチン酸オクチルドデシル ５．０
（４）セタノール １．０
（５）ポリオキシエチレン(２０Ｅ．Ｏ．)
ソルビタンモノステアリン酸エステル １．３
（６）モノステアリン酸ソルビタン ０．７
（７）１，３−ブチレングリコール ８．０
（８）キサンタンガム ０．１
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）精製水 １００とする残部
（11）酸化チタン ９．０
（12）タルク ７．４
（13）ベンガラ ０．５
（14）黄酸化鉄 １．１
（15）黒酸化鉄 ０．１
（16）香料 ０．１
（17）抽出物１ ０．５
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解する。一方、（７）〜（10）の水相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解し、これに（11）〜（15）の顔料を加え、ホモミキサーにて均一に分散する。油相成分を加え、乳化を行う。冷却後４０℃にて（16）と（17）の成分を順次加え、均一に混合する。
【００５６】
［実施例１６］
油中水型エモリエントクリーム
（１）流動パラフィン ３４．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）ワセリン ５．０
（４）ジグリセリンオレイン酸エステル ５．０
（５）塩化ナトリウム １．３
（６）塩化カリウム ０．１
（７）プロピレングリコール ３．０
（８）１，３−ブチレングリコール ５．０
（９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（10）精製水 １００とする残部
（11）香料 ０．１
（12）抽出物１ ３．０
製法：（５）と（６）を（11）の一部に溶解して５０℃とし、５０℃に加熱した（４）に撹拌しながら徐々に加える。これを混合した後、７０℃にて加熱溶解した（１）〜（３）に均一に分散する。これに（７）〜（9）を（10）の残部に７０℃にて加熱溶解したものを撹拌しながら加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（11）と(12)を加え、均一に混合する。
【００５７】
［実施例１７］
パック
（１）精製水 １００とする残部(質量％)
（２）ポリビニルアルコール １２．０
（３）エタノール １７．０
（４）グリセリン ９．０
（５）ポリエチレングリコール（平均分子量１０００） ２．０
（６）抽出物１ １．０
（７）香料 ０．１
製法：（２）と（３）を混合し、８０℃に加温した後、８０℃に加温した（１）に溶解する。均一に溶解した後、（４）と（５）を加え、攪拌しながら冷却する。４０℃にて（６）と（７）を加え、均一に混合する。
【００５８】
［実施例１８］
入浴剤
（１）香料 ０．３(質量％)
（２）抽出物１ ３．０
（３）炭酸水素ナトリウム ５０．０
（４）硫酸ナトリウム ４６．７
製法：（１）〜（４）を均一に混合する。
【００５９】
［実施例１９］
ヘアーワックス
（１）ステアリン酸 ３．０(質量％)
（２）マイクロクリスタリンワックス ２．０
（３）セチルアルコール ３．０
（４）高重合メチルポリシロキサン ２．０
（５）メチルポリシロキサン ５．０
（６）ポリ（オキシエチレン・オキシプロピレン）
メチルポリシロキサン共重合体 １．０
（７）パラオキシ安息香酸メチル ０．１
（８）１，３−ブチレングリコール ７．５
（９）アルギニン ０．７
（10）精製水 １００とする残部
（11）抽出物１ ２．０
（12）香料 ０．１
製法：（１）〜（６）の油相成分を混合し、７５℃にて加熱溶解後する。一方、（７）〜（10）の水相成分を７５℃にて加熱溶解し、前記油相成分を加え、ホモミキサーにて乳化する。冷却後４０℃にて（11）と（12）の成分を加え、均一に混合する。
【００６０】
［実施例２０］
ヘアートニック
（１）エタノール ５０．０(質量％)
（２）精製水 １００とする残部
（３）抽出物１ ３．０
（４）香料 ０．１
製法：（１）〜（４）の成分を混合、均一化する。
【００６１】
実施例７〜実施例２０に示した皮膚外用剤は、抗老化効果、保湿効果、美白効果、抗酸化効果、抗炎症効果を有する組成物であった。
【産業上の利用可能性】
【００６２】
本発明のソナレムグラから得られる成分は、皮膚化粧料、毛髪用化粧料または洗浄料等の皮膚外用剤、医薬品、医薬部外品に配合して用いるのに有用である。また、本発明に係る、ソナレムグラ抽出物は、天然由来成分であることから、安全性が高いことが容易に考えられ、皮膚外用剤としての意義も大きく、したがって本発明は、新たな皮膚外用剤として有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、抗老化剤。
【請求項２】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、保湿剤。
【請求項３】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、美白剤。
【請求項４】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、抗酸化剤。
【請求項５】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、抗炎症剤。
【請求項６】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
【請求項１】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、抗老化剤。
【請求項２】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、保湿剤。
【請求項３】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、美白剤。
【請求項４】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、抗酸化剤。
【請求項５】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、抗炎症剤。
【請求項６】
ソナレムグラ（Hedyotis strigulosa var. parvifolia）またはその抽出物を含有することを特徴とする、皮膚外用剤。
【公開番号】特開２０１０−２２９０８３（Ｐ２０１０−２２９０８３Ａ）
【公開日】平成２２年１０月１４日（２０１０．１０．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−７８７２７（Ｐ２００９−７８７２７）
【出願日】平成２１年３月２７日（２００９．３．２７）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１０月１４日（２０１０．１０．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年３月２７日（２００９．３．２７）
【出願人】（０００１３５３２４）株式会社ノエビア (258)
【Ｆターム（参考）】
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