治療剤
【課題】 クランベリー抽出物は、歯周病の予防剤、自己免疫疾患治療剤などの用途が知られている。本発明の課題は、これら以外の種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である、クランベリー抽出物を有効成分として用いる治療剤の提供にある。
【解決手段】 クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、コレステロール低下剤。
【解決手段】 クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、コレステロール低下剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする各種疾病に有用な治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
クランベリー抽出物は、歯周病の予防剤（特許文献１）、自己免疫疾患治療剤（特許文献２）などの用途が知られている。
しかしながら、クランベリー抽出物とプロアントシアニジンとの組み合わせが、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効であるとの見地はない。
【特許文献１】特開２００７−９１７０３号公報
【特許文献２】国際公開ＷＯ２００５／０３０２００号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
請求項１に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤である。
請求項２に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤である。
請求項３に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項４に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項５に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤である。
請求項６に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするコレステロール低下剤である。
【発明の効果】
【０００５】
本発明によれば、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
【０００７】
本発明で用いられるクランベリー（Vaccinium macrocarpon Ait.）は、その品種に制限はないが、例えばクラウリー（Crowley）、スティーブンス（Stevens）、ベンレアー（Benlear）、ピルグリム（Pilgrim）、アーリーブラック（Early black）、バークマン（Bergman）等が挙げられる。なお市販されているクランベリーパウダーも利用でき、例えば、アーリーブラックは、米国デカスボタニアルシナジーズ社からＰＡＣｒａｎの商品名でパウダーが製造されている。
【０００８】
クランベリー抽出物としては、クランベリー果実、果皮、茎部、種子部から得た搾汁、その濃縮物、精製物、乾燥物および凍結乾燥物や、クランベリー果実、果皮、茎部、種子部を溶剤と接触させ得られる抽出液が挙げられる。
【０００９】
後者の形態において、用いる溶剤としては、極性溶媒、両極性溶媒等が挙げられる。例えば、水、有機溶剤、水と有機溶媒との混合液等が使用できる。有機溶媒としては例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノールに代表される低級アルコール類、、ジメチルエーテル、ジエチルエーテルに代表されるエーテル類、クロロホルム、四塩化炭素等に代表されるハロゲン化炭化水素、アセトニトリル、酢酸エチル、アセトン等が挙げられる。中でも、水、エタノール水溶液、アセトン水溶液、酢酸エチルが好ましい。
【００１０】
クランベリーの精製物、乾燥物、凍結乾燥物の形態である場合は、当業界で公知の手段を適宜採用すればよく、例えばカラムクロマトグラフィーを用いたクランベリー抽出物の精製方法は、前述の特許文献１に記載されている。
【００１１】
抽出時間は、抽出原料から十分に可溶性成分が抽出される時間であればよく、抽出温度などに応じて適宜設定すればよい。好ましくは３０分〜４８時間である。例えば、抽出温度が５０℃未満の場合は、６時間〜４８時間抽出され得、５０℃以上の場合は、３０分〜２４時間抽出され得る。
【００１２】
クランベリー抽出物の摂取量は、例えばクランベリー果実の水抽出物の凍結乾燥物の場合、成人１日１〜数回、１日の合計量として５０〜２０００ｍｇの範囲が好ましいが、とくに制限されない。
【００１３】
本発明で使用されるプロアントシアニジンとは、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上、好ましくは２〜１０量体、さらに好ましくは２〜４量体の縮重合体からなる化合物群、誘導体およびそれらの立体異性体を指称する。プロアントシアニジンのうち、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２〜４の縮重合体をＯＰＣ（オリゴメリックプロアントシアニジン；ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）という。ＯＰＣは強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果物の皮もしくは種子の部分に豊富に含有されている。具体的には、ブドウ、松の樹皮、ピーナッツの薄皮、イチョウ、ニセアカシアの果実、コケモモ、ブルーベリー、イチゴ、アボガド、大麦、小麦、大豆、黒大豆、カカオなどに含まれている。また、西アフリカのコーラナッツ、ペルーのラタニアの根にもＯＰＣが含まれていることが知られている。ＯＰＣはヒトの体内では生成することができない物質である。
【００１４】
本発明の有効成分として用いられるプロアントシアニジンについては、原料の由来あるいは原料の利用部分、製造法、精製法は何ら制限されないが、上記の樹皮、果実もしくは種子の粉砕物、またはこれらの抽出物のような食品原料を使用することができる。特に松樹皮、さらに好ましくはＯＰＣが豊富に含まれているフランス海岸松樹皮の抽出物を用いることが好ましい。フランス海岸松樹皮はプロアントシアニジンの原料として好ましく用いられる。
【００１５】
プロアントシアニジンは、公知の方法［例えば、松の樹皮からの抽出法；アール・ダブル・ヘミングウェイ（Ｒ．Ｗ．Ｈｅｍｉｎｇｗａｙ）ら、フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），１９８３年，第２２巻、ｐ．２７５−２８１］あるいはそれに準じた方法を採用することによって上記各種植物体から容易に得ることができる。
【００１６】
以下、ＯＰＣを豊富に含む松樹皮の抽出物を例に挙げて、プロアントシアニジンの調製方法を説明する。
【００１７】
松樹皮抽出物は、松樹皮を水または有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には、温水または熱水が用いられる。抽出に用いる有機溶媒としては、食品あるいは薬剤製造に許容される有機溶媒が用いられ、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ブタン、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，２−トリクロロエテンなどが挙げられる。これらの水および有機溶媒は単独で用いてもよいし、組み合わせて用いてもよい。特に、熱水、含水エタノール、含水プロピレングリコールが好適に用いられる。
【００１８】
松樹皮からプロアントシアニジンを抽出する方法は、特に限定されないが、例えば、加温抽出法、超臨界流体抽出法などが用いられる。
【００１９】
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて抽出を行う方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、とりわけ二酸化炭素が好適に用いられる。
【００２０】
超臨界流体抽出法は、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程および目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程からなる。分離工程は、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤、吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
【００２１】
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、超臨界流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエンなどを２〜２０％程度添加し、得られた抽出流体で超臨界流体抽出を行うことによって、ＯＰＣなどの被抽出物の抽出流体に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、効率的に松樹皮抽出物を得る方法である。
【００２２】
松樹皮からの抽出は、上記の方法以外に、液体二酸化炭素回分法、液体二酸化炭素還流法、超臨界二酸化炭素還流法などにより行ってもよい。
【００２３】
以上のようにして得られたプロアントシアニジンは、液状もしくは半固形状の形態で得られるが、このものから抽出溶媒を減圧留去、スプレードライ、凍結乾燥等の公知の方法によって除去すれば、そのままプロアントシアニジン含有濃縮物や乾燥物として使用することができる。さらに精製するには、カラムクロマトグラフィー、向流分配法等の公知の精製手段を採用して、目的を達成することができる。
【００２４】
プロアントシアニジンは、水によく溶解し、生体への吸収性が高い。酸性、中性、アルカリ性のいずれの条件においても安定性が高い。
【００２５】
プロアントシアニジンの投与量は、その種類、その剤型、また患者の年令、体重、適応症状などによって異なるが、例えば、成人１日１〜数回、１回量約１〜５００ｍｇ、好ましくは３〜３００ｍｇ程度投与するのがよい。
【００２６】
本発明の治療剤は、錠剤、ピル、カプセル、顆粒、粉末、散剤、液剤等の固形または溶液の形態（以下、製剤ともいう）に公知の方法により適宜調製することができる。即ち、本発明に有用な固形製剤または液状製剤は、従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤または香料などが挙げられる。
【００２７】
上記賦形剤としては、例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール或いはキシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、白糖、乳糖或いは果糖などの糖類、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、βーシクロデキストリン、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、またはメタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどが挙げられる。
【００２８】
上記ｐＨ調整剤としては、例えばクエン酸、リンゴ酸、リン酸水素ナトリウムまたはリン酸二カリウムなどが挙げられる。
上記清涼化剤としては、例えばｌ−メントールまたはハッカ水などが挙げられる。
上記懸濁化剤としては、例えば、カオリン、カルメロースナトリウム、キサンタンガム、メチルセルロースまたはトラガントなどが挙げられる。
上記希釈剤としては、例えば精製水、エタノール、植物油または乳化剤等が挙げられる。
上記消泡剤としては、例えばジメチルポリシロキサンまたはシリコン消泡剤などが挙げられる。
【００２９】
上記粘稠剤としては、例えばキサンタンガム、トラガント、メチルセルロースまたはデキストリンなどが挙げられる。
上記溶解補助剤としては、例えばエタノール、ショ糖脂肪酸エステルまたはマクロゴールなどが挙げられる。
上記崩壊剤としては、例えば低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチまたは部分アルファー化デンプンなどが挙げられる。
【００３０】
上記結合剤としては、例えばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、プルラン、アルファー化デンプン、カンテン、トラガント、アルギン酸ナトリウムまたはアルギン酸プロピレングリコールエステルなどが挙げられる。
【００３１】
上記滑沢剤としては、例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、ミツロウまたはサラシミツロウなどが挙げられる。
上記抗酸化剤としては、例えばアスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸プロピル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、トコフェロール、アスコルビン酸またはクエン酸などが挙げられる。
【００３２】
上記コーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、メタアクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタートジエチルアミノアセテートまたはセラックなどが挙げられる。
上記着色剤としては、例えばウコン抽出液、リボフラビン、酸化チタンまたはカロチン液などが挙げられる。
【００３３】
上記矯味矯臭剤としては、例えばクエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、果糖、Ｄ−ソルビトール、ブドウ糖、サッカリンナトリウム、単シロップ、白糖、ハチミツ、アマチャ、カンゾウ、クエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、オレンジ油、トウヒチンキ、ウイキョウ油、ハッカまたはメントールなどが挙げられる。
上記界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウム、マクロゴール類またはショ糖脂肪酸エステルなどが挙げられる。
上記可塑剤としては、例えばクエン酸トリエチル、ポリエチレングリコール、トリアセチンまたはセタノールなどが挙げられる。
上記香料としては、例えば、動物性香料或いは植物性香料等の天然香料、または単離香料或いは純合成香料等の合成香料などが挙げられる。
【００３４】
本発明の治療剤は、飲食品材料に配合してもよい。このような材料としては、例えば、パン、チューインガム、クッキー、チョコレート、シリアル等の固形食品、ジャム、アイスクリーム、ヨーグルト、ゼリー等のジャム状、クリーム状またはゲル状食品、ジュース、コーヒー、ココア、緑茶、ウーロン茶、紅茶等の飲料等が挙げられる。また、調味料、食品添加物等に配合することもできる。
【００３５】
さらに本発明においては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体等）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛等）、セレン、レシチン、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン等）、サポニン（ギムネマ酸、大豆サポニン、人参サポニン等）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチン等）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖等）、リン脂質及びその誘導体（フォスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミド等）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタン等）、糖アルコール、リグナン類（セサミン等）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガ等）、麦若葉末等のイネ科植物の緑葉、ケール等のアブラナ科植物の緑葉、サボテンの乾燥葉、ターミナリアベリリカ抽出物、サツマイモの茎葉をまるごと粉砕した素材、大豆から抽出したセラミド様成分含有物、チャンカピエドラのようなハーブ類、などを併用することもできる
【実施例】
【００３６】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明の治療剤は、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、コレステロール低下剤としてきわめて有用である。以下、上記各種薬効について実施例でもって説明する。
【００３７】
実施例１（抗アレルギー剤としての有用性）
クランベリーの果実の乾燥品に対し、２０倍量の熱水（８０℃）を加え、２時間攪拌し、クランベリー熱水抽出物１を得た。クランベリー熱水抽出物１を減圧濃縮および凍結乾燥し、粉末１を得た。
【００３８】
一方、松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱抽出した。次いで、直ちに濾過して濾液を得た。濾過後の残渣を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮の熱水粗抽出液を得た。この抽出液１ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥重量は８ｍｇであった。
【００３９】
上記粗抽出液１Ｌ（粉末乾燥重量８ｇ）を２５℃まで放冷し、塩化ナトリウムを１００％飽和濃度となるまで添加してよく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過し、９１０ｍＬの濾液を得た。この濾液を以下に示す工程によりさらに精製した。まず、水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）を１００ｍＬ充填した３０×３００ｍｍのカラムに上記濾液を通液し、さらに１Ｌの精製水で洗浄した。次いで、カラムから１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒で溶出し、２００ｍＬの松樹皮の熱水抽出精製物を得た（以下、松樹皮の熱水抽出物１とする）。得られた精製物を凍結乾燥して粉末化した。本操作を繰り返して、９Ｌの松樹皮の熱水抽出液から松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末７．５１ｇを得た（以下、粉末２という）。
【００４０】
上記粉末２中のプロアントシアニジンおよびＯＰＣの含有量を、特開２００５−２３０３２号公報に記載の方法により測定した結果、プロアントシアニジンは、上記粉末２中に４０重量％含有されていた。また、ＯＰＣは、２〜４量体として、上記粉末２中に２０重量％含有されていた。
【００４１】
ＲＡＳＴ法による食物アレルゲン陽性の慢性じんま疹の患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末１および粉末２をそれぞれ３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表１に示す。
【００４２】
【表１】
【００４３】
実施例２
ＲＡＳＴ法によるアトピー性皮膚炎患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末１および粉末２をそれぞれ３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表２に示す。
【００４４】
【表２】
【００４５】
実施例３（高尿酸血症の改善効果）
実験方法
供試動物はWistar系ラット雌（８週令、体重約180g）を１群６匹で用いた。
試験飼料に0.75％の濃度でアデニンを加えてラットに給与し、腎臓からの尿中への尿酸排泄阻害を起こさせて高尿酸血症のモデル動物とした。
対照群は、上記の0.75％アデニン飼料のみ、薬剤投与群は、０．７５％アデニンと実施例１の粉末１および粉末２含有飼料とした。飼料は自由摂取としたが、薬剤投与群の試験飼料中の上記粉末１および粉末２の濃度を、摂取量がそれぞれ１ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整した。試験開始日及び24日目に血中の尿酸値を測定した。
その結果、対照群の試験開始日の血中尿酸濃度は、０．５７ｍｇ／ｍｌであり、２４日目が２．３３ｍｇ／ｍｌであったのに対し、薬剤投与群の２４日目の血中尿酸濃度は０．７８ｍｇ／ｍｌであった。
この結果から明らかなように、対照群では血中尿酸濃度が大幅に増加するのに対し、薬剤投与群ではいずれもその濃度は増加しなかった。したがって、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分として含有する薬剤は、高尿酸血症の予防または改善剤として有用であることが示された。
【００４６】
実施例４（抗骨粗鬆症効果）
骨粗鬆症改善効果試験
ＳＤ系ラット（２２週齢）メスの卵巣を外科的に取り除き、骨粗鬆症のモデルラットを作成した。卵巣摘出ラットを７匹ずつ６群に分け、３５日間の試験期間中、１日置きに（計１７回）、前記実施例１の粉末１および粉末２の摂取量がそれぞれ１ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を２ｍｌ経口投与した。飼料はオリエンタル酵母株式会社のマウス・ラット・ハムスター用固形飼料ＣＲＦ−１を用い、給餌および給水方法は自由摂取とした。試験期間中、各群間で、餌の摂取量に差は認められなかった。試験開始後３５日目にラットの体重を測定した後、大腿骨を取り出した。大腿骨は、接着組織および筋肉を取り除いて分析に使用した。大腿骨の体積を測定した後、エタノールで３回洗浄し、次にアセトンで３回洗浄したのち、一晩乾燥し、その後、重量を測定して大腿骨の乾燥重量を求めた。体積および乾燥重量から、骨密度（乾燥重量ｇ／体積ｍｍ3 ）を測定した。なお対照実験として、前記粉末１および粉末２を含まない生理食塩水をラットに投与したこと以外は、上記実験を繰り返した例（比較例）も併せて、その結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
【００４８】
実施例４と比較例とを対比したところ、実施例４はp＜0.05の危険率で有意差が認められた。
【００４９】
実施例５（抗鬱・抗ストレス効果）
上記実施例１の粉末１および粉末２の治療効果を調べた。
マウス強制水泳試験による精神安定作用の評価
本発明の治療剤の評価は、１９７７年にPorsoltにより開発されたマウス強制水泳試験を採用した。本試験は鬱病の動物モデル実験として最も多用される方法のひとつである。本試験では、マウスをある限られたスペースの中で強制的に泳がせて「無動状態」を惹起させる。この無動状態は、ストレスを負荷された動物が水からの逃避を放棄した一種の「絶望状態」を反映するものと考えられ、ヒトにおける鬱状態、ストレス状態と関連づけられている。事実、抗鬱薬は特異的にこの状況下における無動状態の持続時間を短縮させることがわかっており、この短縮作用は臨床力価との間に有意な相関を有することが認められている。
【００５０】
本試験方法は次のとおりである。
２５℃の水を深さ１５ｃｍまで入れたプラスチック円筒中でマウスを強制水泳させる。５分間の強制水泳後、３０℃の乾燥機中で１５分間乾燥し、ホームケージに戻す。翌日マウスに試験試料を腹腔内投与して、その１時間後に再び５分間の強制水泳を課し、現れた無動状態の持続時間をストップウォッチを用いて測定する。マウスが水に浮かんで静止している状態を無動状態と判定する。無動状態持続時間については有意差検定を行い、統計学的に有意差を検定する。実験には雄のｄｄYマウスを使用し、１群６匹とする。なお、試験は全て午後１時から午後６時の間に行う。また、ポジティブコントロールとして抗鬱薬であるイミプラミンを用いた試験も行う。
【００５１】
その結果、粉末１および粉末２をそれぞれ３０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスの無動状態持続時間は、１７２．５±３．７秒であった。コントロール（生理食塩水のみ）は２２０．０±２．２秒であった。ポジティブコントロール（３０ｍｇ／ｋｇ投与）のマウスの無動状態持続時間は、１７６．５±４．０秒であった。本実施例およびポジティブコントロールの無動状態持続時間は、危険率１％で有意差を有する。なお、粉末１および粉末２を２〜３倍量使用しても、同様の結果を得た。
【００５２】
実施例６
アディポネクチン産生上昇確認試験
正常ヒト前駆脂肪細胞を使用し、１．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはヒト前駆脂肪細胞基礎培地を用いた。２４時間後に分化誘導添加剤と実施例１の粉末１および粉末２を加えた増殖培地に交換し、さらに１週間培養した。その後、培養上清中に産生されたアディポネクチン量をＥＬＩＳＡ法により定量した。各試料の評価結果を、ブランク（試料未添加）のアディポネクチン量を１００とした場合の相対値にて下記に示す。なお、添加した粉末１および粉末２濃度は、それぞれ１０μｇ／ｍｌであった。
【００５３】
上記試験結果：相対値＝３７３。この数値は、危険率１％で有意差を有する。
【００５４】
実施例７（コレステロール低下作用）
体重２０ｇ前後のＩＣＲ系雄性マウス（１群５匹）に、高コレステロール−コール酸食餌（７１．９％標準餌、１５％ショ糖、２％食塩、１０％ココナッツオイル、０．６％コレステロール、０．２％コール酸、０．３％塩化コリン）を試験第１日目から第７日目まで給餌（自由摂取）した。試験第６日目と第７日目に、上記実施例１の粉末１および粉末２のそれぞれ５ｍｇを蒸留水に溶解し、経口投与した。その後、２４時間の絶食を行い、試験第８日目にマウスから血液を採取し、血清を分離した。
【００５５】
また、採取した血清の一部にヘパリンを添加し沈降させ、低比重リポタンパク（ＬＤＬ）としてヘパリン沈降リポタンパクを得た。血清中の総コレステロール値及びＬＤＬ中のコレステロール値を、シー・シー・アライン（Ｃ．Ｃ．Ａｌｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．）らの報告（クリニカル ケミストリイ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９７４年、２０巻、４７０−４７５頁）に従って、測定した。
【００５６】
血清中の総コレステロール値からＬＤＬコレステロール値を引いた値を、高比重リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロール値として算出した。なお対照群は、上記粉末１および粉末２を投与していない群である。
【００５７】
その結果を表５に示した。表５から明らかなように、血清中総コレステロールを低下させる明らかな作用が認められた。
【００５８】
【表４】
【００５９】
なお、上記各例において、実施例１のクランベリー熱水抽出物１の調製の際に、熱水を用いずに２０〜１００容量％エタノール水溶液またはアセトン水溶液を用いて抽出物を調製した場合においても、上記と同様の結果を得た。
また、本発明ではクランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを併用したときに両者の相乗効果が生じることが確認されている。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明の治療剤は、医薬、食品、飼料の形態として有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とする各種疾病に有用な治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
クランベリー抽出物は、歯周病の予防剤（特許文献１）、自己免疫疾患治療剤（特許文献２）などの用途が知られている。
しかしながら、クランベリー抽出物とプロアントシアニジンとの組み合わせが、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効であるとの見地はない。
【特許文献１】特開２００７−９１７０３号公報
【特許文献２】国際公開ＷＯ２００５／０３０２００号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
請求項１に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤である。
請求項２に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤である。
請求項３に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤である。
請求項４に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤である。
請求項５に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤である。
請求項６に記載の発明は、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするコレステロール低下剤である。
【発明の効果】
【０００５】
本発明によれば、下記で説明する本発明で適用される種々の疾病に、とりわけ顕著な効果でもって有効である各種治療剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、本発明をさらに詳しく説明する。
【０００７】
本発明で用いられるクランベリー（Vaccinium macrocarpon Ait.）は、その品種に制限はないが、例えばクラウリー（Crowley）、スティーブンス（Stevens）、ベンレアー（Benlear）、ピルグリム（Pilgrim）、アーリーブラック（Early black）、バークマン（Bergman）等が挙げられる。なお市販されているクランベリーパウダーも利用でき、例えば、アーリーブラックは、米国デカスボタニアルシナジーズ社からＰＡＣｒａｎの商品名でパウダーが製造されている。
【０００８】
クランベリー抽出物としては、クランベリー果実、果皮、茎部、種子部から得た搾汁、その濃縮物、精製物、乾燥物および凍結乾燥物や、クランベリー果実、果皮、茎部、種子部を溶剤と接触させ得られる抽出液が挙げられる。
【０００９】
後者の形態において、用いる溶剤としては、極性溶媒、両極性溶媒等が挙げられる。例えば、水、有機溶剤、水と有機溶媒との混合液等が使用できる。有機溶媒としては例えば、エタノール、メタノール、プロパノール、ブタノールに代表される低級アルコール類、、ジメチルエーテル、ジエチルエーテルに代表されるエーテル類、クロロホルム、四塩化炭素等に代表されるハロゲン化炭化水素、アセトニトリル、酢酸エチル、アセトン等が挙げられる。中でも、水、エタノール水溶液、アセトン水溶液、酢酸エチルが好ましい。
【００１０】
クランベリーの精製物、乾燥物、凍結乾燥物の形態である場合は、当業界で公知の手段を適宜採用すればよく、例えばカラムクロマトグラフィーを用いたクランベリー抽出物の精製方法は、前述の特許文献１に記載されている。
【００１１】
抽出時間は、抽出原料から十分に可溶性成分が抽出される時間であればよく、抽出温度などに応じて適宜設定すればよい。好ましくは３０分〜４８時間である。例えば、抽出温度が５０℃未満の場合は、６時間〜４８時間抽出され得、５０℃以上の場合は、３０分〜２４時間抽出され得る。
【００１２】
クランベリー抽出物の摂取量は、例えばクランベリー果実の水抽出物の凍結乾燥物の場合、成人１日１〜数回、１日の合計量として５０〜２０００ｍｇの範囲が好ましいが、とくに制限されない。
【００１３】
本発明で使用されるプロアントシアニジンとは、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２以上、好ましくは２〜１０量体、さらに好ましくは２〜４量体の縮重合体からなる化合物群、誘導体およびそれらの立体異性体を指称する。プロアントシアニジンのうち、フラバン−３−オールおよび／またはフラバン−３，４−ジオールを構成単位とする重合度が２〜４の縮重合体をＯＰＣ（オリゴメリックプロアントシアニジン；ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎ）という。ＯＰＣは強力な抗酸化物質であり、植物の葉、樹皮、果物の皮もしくは種子の部分に豊富に含有されている。具体的には、ブドウ、松の樹皮、ピーナッツの薄皮、イチョウ、ニセアカシアの果実、コケモモ、ブルーベリー、イチゴ、アボガド、大麦、小麦、大豆、黒大豆、カカオなどに含まれている。また、西アフリカのコーラナッツ、ペルーのラタニアの根にもＯＰＣが含まれていることが知られている。ＯＰＣはヒトの体内では生成することができない物質である。
【００１４】
本発明の有効成分として用いられるプロアントシアニジンについては、原料の由来あるいは原料の利用部分、製造法、精製法は何ら制限されないが、上記の樹皮、果実もしくは種子の粉砕物、またはこれらの抽出物のような食品原料を使用することができる。特に松樹皮、さらに好ましくはＯＰＣが豊富に含まれているフランス海岸松樹皮の抽出物を用いることが好ましい。フランス海岸松樹皮はプロアントシアニジンの原料として好ましく用いられる。
【００１５】
プロアントシアニジンは、公知の方法［例えば、松の樹皮からの抽出法；アール・ダブル・ヘミングウェイ（Ｒ．Ｗ．Ｈｅｍｉｎｇｗａｙ）ら、フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ），１９８３年，第２２巻、ｐ．２７５−２８１］あるいはそれに準じた方法を採用することによって上記各種植物体から容易に得ることができる。
【００１６】
以下、ＯＰＣを豊富に含む松樹皮の抽出物を例に挙げて、プロアントシアニジンの調製方法を説明する。
【００１７】
松樹皮抽出物は、松樹皮を水または有機溶媒で抽出して得られる。水を用いる場合には、温水または熱水が用いられる。抽出に用いる有機溶媒としては、食品あるいは薬剤製造に許容される有機溶媒が用いられ、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ブタン、アセトン、ヘキサン、シクロヘキサン、プロピレングリコール、含水エタノール、含水プロピレングリコール、エチルメチルケトン、グリセリン、酢酸メチル、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、食用油脂、１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，２−トリクロロエテンなどが挙げられる。これらの水および有機溶媒は単独で用いてもよいし、組み合わせて用いてもよい。特に、熱水、含水エタノール、含水プロピレングリコールが好適に用いられる。
【００１８】
松樹皮からプロアントシアニジンを抽出する方法は、特に限定されないが、例えば、加温抽出法、超臨界流体抽出法などが用いられる。
【００１９】
超臨界流体抽出法は、物質の気液の臨界点（臨界温度、臨界圧力）を超えた状態の流体である超臨界流体を用いて抽出を行う方法である。超臨界流体としては、二酸化炭素、エチレン、プロパン、亜酸化窒素（笑気ガス）などが用いられ、とりわけ二酸化炭素が好適に用いられる。
【００２０】
超臨界流体抽出法は、目的成分を超臨界流体によって抽出する抽出工程および目的成分と超臨界流体とを分離する分離工程からなる。分離工程は、圧力変化による抽出分離、温度変化による抽出分離、または吸着剤、吸収剤を用いた抽出分離のいずれを行ってもよい。
【００２１】
また、エントレーナー添加法による超臨界流体抽出を行ってもよい。この方法は、超臨界流体に、例えば、エタノール、プロパノール、ｎ−ヘキサン、アセトン、トルエンなどを２〜２０％程度添加し、得られた抽出流体で超臨界流体抽出を行うことによって、ＯＰＣなどの被抽出物の抽出流体に対する溶解度を飛躍的に上昇させる、あるいは分離の選択性を増強させる方法であり、効率的に松樹皮抽出物を得る方法である。
【００２２】
松樹皮からの抽出は、上記の方法以外に、液体二酸化炭素回分法、液体二酸化炭素還流法、超臨界二酸化炭素還流法などにより行ってもよい。
【００２３】
以上のようにして得られたプロアントシアニジンは、液状もしくは半固形状の形態で得られるが、このものから抽出溶媒を減圧留去、スプレードライ、凍結乾燥等の公知の方法によって除去すれば、そのままプロアントシアニジン含有濃縮物や乾燥物として使用することができる。さらに精製するには、カラムクロマトグラフィー、向流分配法等の公知の精製手段を採用して、目的を達成することができる。
【００２４】
プロアントシアニジンは、水によく溶解し、生体への吸収性が高い。酸性、中性、アルカリ性のいずれの条件においても安定性が高い。
【００２５】
プロアントシアニジンの投与量は、その種類、その剤型、また患者の年令、体重、適応症状などによって異なるが、例えば、成人１日１〜数回、１回量約１〜５００ｍｇ、好ましくは３〜３００ｍｇ程度投与するのがよい。
【００２６】
本発明の治療剤は、錠剤、ピル、カプセル、顆粒、粉末、散剤、液剤等の固形または溶液の形態（以下、製剤ともいう）に公知の方法により適宜調製することができる。即ち、本発明に有用な固形製剤または液状製剤は、従来充分に確立された公知の製剤製法を用いることにより製造される。添加剤としては、例えば賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、希釈剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、抗酸化剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤または香料などが挙げられる。
【００２７】
上記賦形剤としては、例えば、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール或いはキシリトールなどの糖アルコール、ブドウ糖、白糖、乳糖或いは果糖などの糖類、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、βーシクロデキストリン、軽質無水ケイ酸、酸化チタン、またはメタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどが挙げられる。
【００２８】
上記ｐＨ調整剤としては、例えばクエン酸、リンゴ酸、リン酸水素ナトリウムまたはリン酸二カリウムなどが挙げられる。
上記清涼化剤としては、例えばｌ−メントールまたはハッカ水などが挙げられる。
上記懸濁化剤としては、例えば、カオリン、カルメロースナトリウム、キサンタンガム、メチルセルロースまたはトラガントなどが挙げられる。
上記希釈剤としては、例えば精製水、エタノール、植物油または乳化剤等が挙げられる。
上記消泡剤としては、例えばジメチルポリシロキサンまたはシリコン消泡剤などが挙げられる。
【００２９】
上記粘稠剤としては、例えばキサンタンガム、トラガント、メチルセルロースまたはデキストリンなどが挙げられる。
上記溶解補助剤としては、例えばエタノール、ショ糖脂肪酸エステルまたはマクロゴールなどが挙げられる。
上記崩壊剤としては、例えば低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、ヒドロキシプロピルスターチまたは部分アルファー化デンプンなどが挙げられる。
【００３０】
上記結合剤としては、例えばメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニールピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、エチルセルロース、ポリビニルアルコール、プルラン、アルファー化デンプン、カンテン、トラガント、アルギン酸ナトリウムまたはアルギン酸プロピレングリコールエステルなどが挙げられる。
【００３１】
上記滑沢剤としては、例えばステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸ポリオキシル、セタノール、タルク、硬化油、ショ糖脂肪酸エステル、ジメチルポリシロキサン、ミツロウまたはサラシミツロウなどが挙げられる。
上記抗酸化剤としては、例えばアスコルビン酸、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、没食子酸プロピル、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、トコフェロール、アスコルビン酸またはクエン酸などが挙げられる。
【００３２】
上記コーティング剤としては、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、ポリビニルアセタールジエチルアミノアセテート、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、メタアクリル酸コポリマー、ポリビニルアセタートジエチルアミノアセテートまたはセラックなどが挙げられる。
上記着色剤としては、例えばウコン抽出液、リボフラビン、酸化チタンまたはカロチン液などが挙げられる。
【００３３】
上記矯味矯臭剤としては、例えばクエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、果糖、Ｄ−ソルビトール、ブドウ糖、サッカリンナトリウム、単シロップ、白糖、ハチミツ、アマチャ、カンゾウ、クエン酸、アジピン酸、アスコルビン酸、オレンジ油、トウヒチンキ、ウイキョウ油、ハッカまたはメントールなどが挙げられる。
上記界面活性剤としては、例えば、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウム、マクロゴール類またはショ糖脂肪酸エステルなどが挙げられる。
上記可塑剤としては、例えばクエン酸トリエチル、ポリエチレングリコール、トリアセチンまたはセタノールなどが挙げられる。
上記香料としては、例えば、動物性香料或いは植物性香料等の天然香料、または単離香料或いは純合成香料等の合成香料などが挙げられる。
【００３４】
本発明の治療剤は、飲食品材料に配合してもよい。このような材料としては、例えば、パン、チューインガム、クッキー、チョコレート、シリアル等の固形食品、ジャム、アイスクリーム、ヨーグルト、ゼリー等のジャム状、クリーム状またはゲル状食品、ジュース、コーヒー、ココア、緑茶、ウーロン茶、紅茶等の飲料等が挙げられる。また、調味料、食品添加物等に配合することもできる。
【００３５】
さらに本発明においては、例えば、ローヤルゼリー、プロポリス、ビタミン類（Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、葉酸、パントテン酸、ビオチン、これらの誘導体等）、ミネラル（鉄、マグネシウム、カルシウム、亜鉛等）、セレン、レシチン、カロテノイド（リコピン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、ルテイン等）、サポニン（ギムネマ酸、大豆サポニン、人参サポニン等）、脂肪酸、タンパク質（コラーゲン、エラスチン等）、オリゴ糖（イソマルトオリゴ糖、環状オリゴ糖等）、リン脂質及びその誘導体（フォスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、セラミド等）、含硫化合物（アリイン、セパエン、タウリン、グルタチオン、メチルスルホニルメタン等）、糖アルコール、リグナン類（セサミン等）、これらを含有する動植物抽出物、根菜類（ウコン、ショウガ等）、麦若葉末等のイネ科植物の緑葉、ケール等のアブラナ科植物の緑葉、サボテンの乾燥葉、ターミナリアベリリカ抽出物、サツマイモの茎葉をまるごと粉砕した素材、大豆から抽出したセラミド様成分含有物、チャンカピエドラのようなハーブ類、などを併用することもできる
【実施例】
【００３６】
以下、本発明を実施例によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。本発明の治療剤は、抗アレルギー剤、高尿酸血症の予防または改善剤、抗骨粗鬆症剤、抗鬱・抗ストレス剤、アディポネクチン産生促進剤、コレステロール低下剤としてきわめて有用である。以下、上記各種薬効について実施例でもって説明する。
【００３７】
実施例１（抗アレルギー剤としての有用性）
クランベリーの果実の乾燥品に対し、２０倍量の熱水（８０℃）を加え、２時間攪拌し、クランベリー熱水抽出物１を得た。クランベリー熱水抽出物１を減圧濃縮および凍結乾燥し、粉末１を得た。
【００３８】
一方、松樹皮９００ｇに精製水７．２Ｌを加え、ブレンダー（Ｗａｒｉｎｇ Ｂｌｅｎｄｅｒ）で破砕した後、１００℃で１０分間加熱抽出した。次いで、直ちに濾過して濾液を得た。濾過後の残渣を精製水１．８Ｌで洗浄し、濾液と洗浄液とを合わせて９Ｌの松樹皮の熱水粗抽出液を得た。この抽出液１ｍＬを凍結乾燥したところ、乾燥重量は８ｍｇであった。
【００３９】
上記粗抽出液１Ｌ（粉末乾燥重量８ｇ）を２５℃まで放冷し、塩化ナトリウムを１００％飽和濃度となるまで添加してよく攪拌した後、４℃で２４時間静置した。静置後、この溶液を濾過し、９１０ｍＬの濾液を得た。この濾液を以下に示す工程によりさらに精製した。まず、水で膨潤させた芳香族系合成樹脂（ダイアイオンＨＰ−２０：三菱化学株式会社製）を１００ｍＬ充填した３０×３００ｍｍのカラムに上記濾液を通液し、さらに１Ｌの精製水で洗浄した。次いで、カラムから１５％（Ｖ／Ｖ）のエタノール−水混合溶媒で溶出し、２００ｍＬの松樹皮の熱水抽出精製物を得た（以下、松樹皮の熱水抽出物１とする）。得られた精製物を凍結乾燥して粉末化した。本操作を繰り返して、９Ｌの松樹皮の熱水抽出液から松樹皮の熱水抽出物１の乾燥粉末７．５１ｇを得た（以下、粉末２という）。
【００４０】
上記粉末２中のプロアントシアニジンおよびＯＰＣの含有量を、特開２００５−２３０３２号公報に記載の方法により測定した結果、プロアントシアニジンは、上記粉末２中に４０重量％含有されていた。また、ＯＰＣは、２〜４量体として、上記粉末２中に２０重量％含有されていた。
【００４１】
ＲＡＳＴ法による食物アレルゲン陽性の慢性じんま疹の患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末１および粉末２をそれぞれ３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表１に示す。
【００４２】
【表１】
【００４３】
実施例２
ＲＡＳＴ法によるアトピー性皮膚炎患者２０名（２０〜２２歳の男性１０名及び女性１０名）に、１回の食事と共に前記粉末１および粉末２をそれぞれ３００ｍｇ、１カ月投与した。結果を以下の表２に示す。
【００４４】
【表２】
【００４５】
実施例３（高尿酸血症の改善効果）
実験方法
供試動物はWistar系ラット雌（８週令、体重約180g）を１群６匹で用いた。
試験飼料に0.75％の濃度でアデニンを加えてラットに給与し、腎臓からの尿中への尿酸排泄阻害を起こさせて高尿酸血症のモデル動物とした。
対照群は、上記の0.75％アデニン飼料のみ、薬剤投与群は、０．７５％アデニンと実施例１の粉末１および粉末２含有飼料とした。飼料は自由摂取としたが、薬剤投与群の試験飼料中の上記粉末１および粉末２の濃度を、摂取量がそれぞれ１ｍｇ／ｋｇ体重となるように調整した。試験開始日及び24日目に血中の尿酸値を測定した。
その結果、対照群の試験開始日の血中尿酸濃度は、０．５７ｍｇ／ｍｌであり、２４日目が２．３３ｍｇ／ｍｌであったのに対し、薬剤投与群の２４日目の血中尿酸濃度は０．７８ｍｇ／ｍｌであった。
この結果から明らかなように、対照群では血中尿酸濃度が大幅に増加するのに対し、薬剤投与群ではいずれもその濃度は増加しなかった。したがって、クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分として含有する薬剤は、高尿酸血症の予防または改善剤として有用であることが示された。
【００４６】
実施例４（抗骨粗鬆症効果）
骨粗鬆症改善効果試験
ＳＤ系ラット（２２週齢）メスの卵巣を外科的に取り除き、骨粗鬆症のモデルラットを作成した。卵巣摘出ラットを７匹ずつ６群に分け、３５日間の試験期間中、１日置きに（計１７回）、前記実施例１の粉末１および粉末２の摂取量がそれぞれ１ｍｇ／ｋｇとなるように、生理食塩水溶解した液体を２ｍｌ経口投与した。飼料はオリエンタル酵母株式会社のマウス・ラット・ハムスター用固形飼料ＣＲＦ−１を用い、給餌および給水方法は自由摂取とした。試験期間中、各群間で、餌の摂取量に差は認められなかった。試験開始後３５日目にラットの体重を測定した後、大腿骨を取り出した。大腿骨は、接着組織および筋肉を取り除いて分析に使用した。大腿骨の体積を測定した後、エタノールで３回洗浄し、次にアセトンで３回洗浄したのち、一晩乾燥し、その後、重量を測定して大腿骨の乾燥重量を求めた。体積および乾燥重量から、骨密度（乾燥重量ｇ／体積ｍｍ3 ）を測定した。なお対照実験として、前記粉末１および粉末２を含まない生理食塩水をラットに投与したこと以外は、上記実験を繰り返した例（比較例）も併せて、その結果を表３に示す。
【００４７】
【表３】
【００４８】
実施例４と比較例とを対比したところ、実施例４はp＜0.05の危険率で有意差が認められた。
【００４９】
実施例５（抗鬱・抗ストレス効果）
上記実施例１の粉末１および粉末２の治療効果を調べた。
マウス強制水泳試験による精神安定作用の評価
本発明の治療剤の評価は、１９７７年にPorsoltにより開発されたマウス強制水泳試験を採用した。本試験は鬱病の動物モデル実験として最も多用される方法のひとつである。本試験では、マウスをある限られたスペースの中で強制的に泳がせて「無動状態」を惹起させる。この無動状態は、ストレスを負荷された動物が水からの逃避を放棄した一種の「絶望状態」を反映するものと考えられ、ヒトにおける鬱状態、ストレス状態と関連づけられている。事実、抗鬱薬は特異的にこの状況下における無動状態の持続時間を短縮させることがわかっており、この短縮作用は臨床力価との間に有意な相関を有することが認められている。
【００５０】
本試験方法は次のとおりである。
２５℃の水を深さ１５ｃｍまで入れたプラスチック円筒中でマウスを強制水泳させる。５分間の強制水泳後、３０℃の乾燥機中で１５分間乾燥し、ホームケージに戻す。翌日マウスに試験試料を腹腔内投与して、その１時間後に再び５分間の強制水泳を課し、現れた無動状態の持続時間をストップウォッチを用いて測定する。マウスが水に浮かんで静止している状態を無動状態と判定する。無動状態持続時間については有意差検定を行い、統計学的に有意差を検定する。実験には雄のｄｄYマウスを使用し、１群６匹とする。なお、試験は全て午後１時から午後６時の間に行う。また、ポジティブコントロールとして抗鬱薬であるイミプラミンを用いた試験も行う。
【００５１】
その結果、粉末１および粉末２をそれぞれ３０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスの無動状態持続時間は、１７２．５±３．７秒であった。コントロール（生理食塩水のみ）は２２０．０±２．２秒であった。ポジティブコントロール（３０ｍｇ／ｋｇ投与）のマウスの無動状態持続時間は、１７６．５±４．０秒であった。本実施例およびポジティブコントロールの無動状態持続時間は、危険率１％で有意差を有する。なお、粉末１および粉末２を２〜３倍量使用しても、同様の結果を得た。
【００５２】
実施例６
アディポネクチン産生上昇確認試験
正常ヒト前駆脂肪細胞を使用し、１．０×１０４個となるように９６ウェルマイクロプレートに播種した。播種培地にはヒト前駆脂肪細胞基礎培地を用いた。２４時間後に分化誘導添加剤と実施例１の粉末１および粉末２を加えた増殖培地に交換し、さらに１週間培養した。その後、培養上清中に産生されたアディポネクチン量をＥＬＩＳＡ法により定量した。各試料の評価結果を、ブランク（試料未添加）のアディポネクチン量を１００とした場合の相対値にて下記に示す。なお、添加した粉末１および粉末２濃度は、それぞれ１０μｇ／ｍｌであった。
【００５３】
上記試験結果：相対値＝３７３。この数値は、危険率１％で有意差を有する。
【００５４】
実施例７（コレステロール低下作用）
体重２０ｇ前後のＩＣＲ系雄性マウス（１群５匹）に、高コレステロール−コール酸食餌（７１．９％標準餌、１５％ショ糖、２％食塩、１０％ココナッツオイル、０．６％コレステロール、０．２％コール酸、０．３％塩化コリン）を試験第１日目から第７日目まで給餌（自由摂取）した。試験第６日目と第７日目に、上記実施例１の粉末１および粉末２のそれぞれ５ｍｇを蒸留水に溶解し、経口投与した。その後、２４時間の絶食を行い、試験第８日目にマウスから血液を採取し、血清を分離した。
【００５５】
また、採取した血清の一部にヘパリンを添加し沈降させ、低比重リポタンパク（ＬＤＬ）としてヘパリン沈降リポタンパクを得た。血清中の総コレステロール値及びＬＤＬ中のコレステロール値を、シー・シー・アライン（Ｃ．Ｃ．Ａｌｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．）らの報告（クリニカル ケミストリイ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９７４年、２０巻、４７０−４７５頁）に従って、測定した。
【００５６】
血清中の総コレステロール値からＬＤＬコレステロール値を引いた値を、高比重リポタンパク（ＨＤＬ）コレステロール値として算出した。なお対照群は、上記粉末１および粉末２を投与していない群である。
【００５７】
その結果を表５に示した。表５から明らかなように、血清中総コレステロールを低下させる明らかな作用が認められた。
【００５８】
【表４】
【００５９】
なお、上記各例において、実施例１のクランベリー熱水抽出物１の調製の際に、熱水を用いずに２０〜１００容量％エタノール水溶液またはアセトン水溶液を用いて抽出物を調製した場合においても、上記と同様の結果を得た。
また、本発明ではクランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを併用したときに両者の相乗効果が生じることが確認されている。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
本発明の治療剤は、医薬、食品、飼料の形態として有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤。
【請求項３】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤。
【請求項４】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤。
【請求項５】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤。
【請求項６】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするコレステロール低下剤。
【請求項１】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項２】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする高尿酸血症の予防または改善剤。
【請求項３】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗骨粗鬆症剤。
【請求項４】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とする抗鬱・抗ストレス剤。
【請求項５】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするアディポネクチン産生促進剤。
【請求項６】
クランベリー抽出物およびプロアントシアニジンを有効成分とすることを特徴とするコレステロール低下剤。
【公開番号】特開２００９−２３４９１９（Ｐ２００９−２３４９１９Ａ）
【公開日】平成２１年１０月１５日（２００９．１０．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−７８８８２（Ｐ２００８−７８８８２）
【出願日】平成２０年３月２５日（２００８．３．２５）
【出願人】（７０７０００６９１）辻堂化学株式会社 (104)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年１０月１５日（２００９．１０．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２５日（２００８．３．２５）
【出願人】（７０７０００６９１）辻堂化学株式会社 (104)
【Ｆターム（参考）】
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