肺疾患を治療するためのアデノシンデアミナーゼの使用方法
ポリマー複合体化アデノシンデアミナーゼを有効量で投与することによって、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症および慢性閉塞性肺疾患など、アデノシンデアミナーゼにより媒介される肺疾患を、それを必要とする哺乳動物において治療する方法を提供する。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の説明】
【０００１】
本出願は、参照することにより本明細書に含まれる、２００６年１２月２９日出願の米国仮特許出願第６０／８８２，７４８号の優先権の利益を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、たとえば、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症および慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）を含む肺系の疾患および障害を、アデノシンデアミナーゼおよび／またはポリマー複合体化アデノシンデアミナーゼを使用して治療するための組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
従来の治療の有効性を高め、副作用を低減すると共に症状を治療するために、基礎となる病因に対処する、選択的な治療法の利用可能性の利益を受けるであろう、多くの肺疾患および障害が存在する。
【０００４】
喘息は気道の炎症性疾患である。米国では、成人約１０００万人および小児約５００万人がこの疾患に罹患している（非特許文献１）。喘息は、肺における免疫細胞の浸潤および活性化に代表され、次いで気道炎症および閉塞が生じる（非特許文献２）。基礎となる病因はよくわかっていないが、多数の因子が喘息を引き起こすことが知られている。しかしながら、Ｋｅｌｌｅｍｓらは、参照することにより本明細書に含まれる２００１年３月２７日登録の特許文献１（以降「Ｋｅｌｌｅｍｓ」）において、アデノシンデアミナーゼ（「ＡＤＡ」）酵素を欠損したノックアウトマウスを提供した。Ｋｅｌｌｅｍｓ ＡＤＡ欠損マウスから得られたデータは文書によって報告され、喘息の病態生理におけるアデノシン蓄積の果たす役割が確認された。ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）複合体化ＡＤＡ（アダジェン（ADAGEN（登録商標））、Ｅｎｚｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．社製）の形態をした外因性ポリマー複合体化ウシＡＤＡの注入が、アデノシンの肺蓄積を防ぎ、そうしなければＡＤＡ欠損マウスに存在するであろう炎症性好酸球増加症を食い止めることが、その文書によって示された。
【０００５】
肺線維症は肺胞、または肺の空気嚢が炎症を起こし、徐々に瘢痕組織によって置換される疾患である。疾患が進行すると、瘢痕組織が呼吸および酸素の移行を障害する。がん、慢性感染または炎症、工業粉じん、たとえば石綿、ある種の薬物などのいくつかの既知の原因がある。現在の治療は、糖質コルチコイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、コルヒチンなどの非特異的抗炎症剤／抗有糸分裂剤の長期投与を含む。これらの治療は常に有効なわけではなく、慢性的に投与される場合は顕著な副作用を有する。
【０００６】
嚢胞性線維症（「ＣＦ」）は米国で最も一般的な致死性遺伝疾患とされる。米国で約３０，０００人が罹患している。ＣＦは体内に濃厚で粘着性の粘液を産生させ、それが肺を詰まらせ、感染に繋がり、膵臓をブロックし、食物を消化するために必要とされる腸に消化酵素が到達するのを阻止する。以前は、この疾患の症状を治療する有効な方法は無かった。現在の緩和的治療には、食事の制限および、危険な分泌を緩和し、解消する非特異的方法が含まれる。
【０００７】
慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）は、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）の国立心肺血液研究所（U.S.National Heart,Lung and Blood Institute）による、米国および全世界における第４位の死因であるとされている。ＣＯＰＤは、細気管支および末端細気管支の両方およびそれらの各肺胞が損傷し、そのため呼吸が障害される肺疾患である。喫煙がＣＯＰＤの最も一般的な原因であるが、大気汚染、粉じん、または化学物質などの他の肺刺激因子への長期間の慢性曝露もまた、ＣＯＰＤを誘発するか一因となりうる。以前は、ＣＯＰＤのための有効な治療法は無く、患者は緩和的気管支拡張剤、非ステロイド抗炎症剤、およびコルチコステロイド抗炎症剤、ならびに酸素補充で管理されていた。
【０００８】
アデノシドデアミナーゼ、またはＡＤＡ、別名アデノシンアミノヒドロラーゼは、ＥＣ３．５．４．４（配列番号：１は天然ウシＡＤＡのペプチド配列を示す）で表される。ＡＤＡはアデノシンまたはデオキシアデノシンを、水の存在下で、イノシンまたはデオキシイノシンおよびアンモニアへ変換することから、プリンサルベージ経路にとって重要である。ＡＤＡのポリマー複合体化は、注入されたウシタンパク質に対する有害な抗原応答の可能性を最小化し、注入後の酵素の動態を改善する。「アダジェン」は、米国食品医薬品局によって、重症複合型免疫不全症、すなわちＳＣＩＤ（別名「バブルボーイ症候群」）の治療におけるオーファンドラッグとして現在認可されている。ＳＣＩＤは、ＳＣＩＤ患者における内因性ＡＤＡの欠損によって生じることが示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第６，２０７，８７６号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｒｅｄｄ，２００２，Ａｓｔｈｍａ Ｏｃｃｕｒｅｎｃｅ，Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ １１０ Ｓｕｐｐｌ ４，ｐｐ ５５７−５６０
【非特許文献２】Ｖｏｇｅｌ，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：１６４３−１６４６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
このように、前記の理由のすべてについて、上に列記したような肺疾患のための新しい治療、およびそのような疾患を治療するための吸入剤「アダジェン」の投与の成功が長期にわたり必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患および関連症状など、アデノシンデアミナーゼにより媒介される肺疾患を、それを必要とする哺乳動物において治療する方法を提供する。代替的な態様では、本発明は、アデノシン濃度の上昇に関連する肺疾患を治療する方法を提供する。本方法は、アデノシンデアミナーゼを有効量で、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。本明細書で意図される方法は、疾患が緩和されるまでの長期の連日投与を含む、１日以上にわたり１日１回以上、アデノシンデアミナーゼを投与することを含む。この実施形態の一部の態様では、アデノシンデアミナーゼは吸入または注入によって投与される。一部の好ましい態様では、酵素は、エアロゾルまたは乾燥粉末として、十分量の酵素を肺送達するため、当分野で認識される装置、すなわち吸入器などを用いて、吸入によって投与される。あるいは、アデノシンデアミナーゼまたはその複合体は、静脈内経路などを介して非経口的に投与される。
【００１３】
本発明のさらなる態様では、アデノシンデアミナーゼは、ウシ関連試料、ヒト関連試料または他の適当な哺乳動物関連試料から得ることができる。アデノシンデアミナーゼの組換え型もまた考えられる。
【００１４】
アデノシンデアミナーゼは、直鎖、分枝鎖またはマルチアームポリマーでありうるポリエチレングリコールなどのポリアルキレンオキサイドと複合体化されることが好ましい。適当なポリアルキレンオキサイドおよびＰＥＧは、約２，０００〜約４５，０００の範囲の分子量を有する。本発明の一部の特に好ましい態様では、ポリエチレングリコールと複合体化されたアデノシンデアミナーゼは、米国ニュージャージー州ブリッジウォーター所在のＥｎｚｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．社から入手可能な「アダジェン」（ペガデマーゼ（pegademase bovine））である。
本明細書に記載される通り、哺乳動物、好ましくはヒトへ投与されるアデノシンデアミナーゼの量は、血漿ＡＤＡ活性（トラフ濃度）を約１５〜約３５μｍｏｌ／時間／ｍＬ（３７℃にてアッセイ）を維持するのに十分な量であり；注入前サンプルで測定した正常アデノシン濃度と比較して、血球容量における赤血球ｄＡＴＰで≦約０．００５〜約０．０１５μｍｏｌ／ｍＬ、または総赤血球アデニンヌクレオチド（すなわち、ＡＴＰ＋ｄＡＴＰ含量）で＜約１％のように、アデノシンの減少を示した。言い換えれば、患者に投与されたアデノシンデアミナーゼの量は、肺アデノシン濃度を約１０ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満に低下させるのに十分な量であり、より好ましくは肺アデノシン濃度を約５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質に低下させるのに十分な量である。
【００１５】
本発明の代替的な実施形態は、第２の薬理学的に活性な薬剤を有効量でアデノシンデアミナーゼと組み合わせて、それを必要とする患者へ投与することを含む。適当な第２の薬理学的に活性な薬剤は、テオフィリンなどの気管支拡張薬、またはサルメテロール、アルブテロールまたはテルブタリンなど、β−アドレナリン作動性を有する他のよく知られた気管支拡張薬を含む。
本発明のさらに別の態様は、哺乳動物の肺疾患を治療するためのキット、すなわち、アデノシンデアミナーゼおよび気管支拡張薬を含む吸入製剤、および、本明細書に記載される吸入製剤および推進剤を含む、肺症状の治療用途に適する吸入器を含む。
【００１６】
本発明の目的では、「アデノシン」の語は、アデノシンおよびデオキシアデノシンを意味するものと解されるべきである。。アデノシンには、ＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ、ｄＡＭＰ、ｄＡＤＰまたはｄＡＴＰの形態で存在するアデノシンおよびデオキシアデノシンも含まれる。
【００１７】
本発明の目的では、「残基」の語は、別の化合物との置換反応を受けた後に残る、化合物、すなわちＰＥＧ、オリゴヌクレオチドなどの部分を意味するものと解されるべきである。。
【００１８】
本発明の目的において、本明細書では、「ポリマー残基」または「ＰＥＧ残基」の語は、他の化合物、部分などとの反応を受けた後に残る、それぞれポリマーまたはＰＥＧの部分を意味するものと解されるべきである。。
【００１９】
本発明の目的において、本明細書では、「アルキル」の語は、直鎖、分枝鎖、および環状アルキル基を含む、飽和脂肪族炭化水素のことをいう。「アルキル」の語はまた、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル基を含む。好ましくは、アルキル基は１から１２個の炭素を有する。より好ましくは、炭素約１から７個、さらにより好ましくは炭素約１から４個の低級アルキルである。アルキル基は置換または非置換でありうる。置換されている場合は、置換基は好ましくは、ハロ、オキシ、アジド、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アルキル−チオ、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、アルキルアミノ、トリハロメチル、ヒドロキシル、メルカプト、ヒドロキシ、シアノ、アルキルシリル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル、アリール、およびアミノ基を含む。
本発明の目的において、本明細書では、「置換」の語は、ハロ、オキシ、アジド、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アルキル−チオ、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、アルキルアミノ、トリハロメチル、ヒドロキシル、メルカプト、ヒドロキシ、シアノ、アルキルシリル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル、アリール、およびアミノ基の群に由来する部分の１つを付加するか、またはそれで官能基または化合物に含まれる１つ以上の原子を置き換えることをいう。
【００２０】
本明細書では「アルケニル」の語は、直鎖、分枝鎖、および環状基を含む、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む基のことをいう。好ましくは、アルケニル基は約２から１２個の炭素を有する。より好ましくは、炭素約２から７個、さらにより好ましくは炭素約２から４個の低級アルケニルである。アルケニル基は置換または非置換でありうる。置換されている場合は、置換基は好ましくは、ハロ、オキシ、アジド、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アルキル−チオ、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、アルキルアミノ、トリハロメチル、ヒドロキシル、メルカプト、ヒドロキシ、シアノ、アルキルシリル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル、アリール、およびアミノ基を含む。
【００２１】
本明細書では「アルキニル」の語は、直鎖、分枝鎖、および環状基を含む、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む基のことをいう。好ましくは、アルキニル基は約２から１２個の炭素を有する。より好ましくは、炭素約２から７個、さらにより好ましくは炭素約２から４個の低級アルキニルである。アルキニルは置換または非置換でありうる。置換されている場合は、置換基は好ましくは、ハロ、オキシ、アジド、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アルキル−チオ、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、アルキルアミノ、トリハロメチル、ヒドロキシル、メルカプト、ヒドロキシ、シアノ、アルキルシリル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル、アリール、およびアミノ基を含む。「アルキニル」の例は、プロパルギル、プロピン、および３−ヘキシンを含む。
本明細書では「アリール」の語は、少なくとも１つの芳香族環を含む、芳香族炭化水素環系のことをいう。芳香族環は、随意的に、他の芳香族炭化水素環または非芳香族炭化水素環と縮合または結合されうる。アリール基の例は、たとえば、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレンおよびビフェニルを含む。アリール基の好ましい例は、フェニルおよびナフチルを含む。
【００２２】
本明細書では「シクロアルキル」の語は、Ｃ３−８環状炭化水素のことをいう。シクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む。
【００２３】
本明細書では「シクロアルケニル」の語は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含むＣ３−８環状炭化水素のことをいう。シクロアルケニルの例は、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、１，３−シクロヘキサジエニル、シクロヘプテニル、シクロヘプタトリエニル、およびシクロオクテニルを含む。
【００２４】
本明細書では「シクロアルキルアルキル」の語は、Ｃ３−８シクロアルキル基で置換されたアルキル基のことをいう。シクロアルキルアルキル基の例は、シクロプロピルメチルおよびシクロペンチルエチルを含む。
【００２５】
本明細書では「アルコキシ」の語は、酸素架橋を介して親分子部分に結合した、記載される炭素原子数のアルキル基のことをいう。アルコキシ基の例は、たとえば、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよびイソプロポキシを含む。
【００２６】
本明細書では「アルキルアリール」基は、アルキル基で置換されたアリール基のことをいう。
【００２７】
本明細書では「アラルキル」基は、アリール基で置換されたアルキル基のことをいう。
【００２８】
本明細書では「アルコキシアルキル」基の語は、アルコキシ基で置換されたアルキル基のことをいう。
【００２９】
本明細書では「アルキル−チオ−アルキル」の語は、アルキル−Ｓ−アルキルチオエーテル、たとえばメチルチオメチルまたはメチルチオエチルのことをいう。
【００３０】
本明細書では「アミノ」の語は、１つ以上の水素ラジカルの有機ラジカルによる置換によってアンモニアから生じる、当分野で公知である通りの窒素含有基のことをいう。たとえば、「アシルアミノ」および「アルキルアミノ」の語は、それぞれアシルおよびアルキル置換基を有する特定のＮ−置換有機ラジカルのことをいう。
【００３１】
本明細書では「アルキルカルボニル」の語は、アルキル基で置換されたカルボニル基のことをいう。
【００３２】
本明細書では「ハロゲン」または「ハロ」の語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素のことをいう。
【００３３】
本明細書では「ヘテロシクロアルキル」の語は、窒素、酸素、および硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む非芳香族環系のことをいう。ヘテロシクロアルキル環は、随意的に、他のヘテロシクロアルキル環および／または非芳香族炭化水素環と融合または付加されうる。好ましいヘテロシクロアルキル基は、３〜７員である。ヘテロシクロアルキル基の例は、たとえば、ピペラジン、モルホリン、ピペリジン、テトラヒドロフラン、ピロリジン、およびピラゾールを含む。好ましいヘテロシクロアルキル基は、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、およびピロリジニルを含む。
【００３４】
本明細書では「ヘテロアリール」の語は、窒素、酸素、および硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む芳香族環系のことをいう。ヘテロアリール環は、１つ以上のヘテロアリール環、芳香族または非芳香族炭化水素環またはヘテロシクロアルキル環と融合または付加されうる。ヘテロアリール基の例は、たとえば、ピリジン、フラン、チオフェン、５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリンおよびピリミジンを含む。ヘテロアリール基の好ましい例は、チエニル、ベンゾチエニル、ピリジル、キノリル、ピラジニル、ピリミジル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、フラニル、ベンゾフラニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピロリル、インドリル、ピラゾリル、およびベンゾピラゾリルを含む。
【００３５】
本明細書では「ヘテロ原子」の語は、窒素、酸素、および硫黄のことをいう。
【００３６】
一部の実施形態では、置換アルキルはカルボキシアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ヒドロキシアルキルおよびメルカプトアルキルを含み；置換アルケニルはカルボキシアルケニル、アミノアルケニル、ジアルケニルアミノ、ヒドロキシアルケニルおよびメルカプトアルケニルを含み；置換アルキニルはカルボキシアルキニル、アミノアルキニル、ジアルキニルアミノ、ヒドロキシアルキニルおよびメルカプトアルキニルを含み；置換シクロアルキルは４−クロロシクロヘキシルなどの部分を含み；アリールはナフチルなどの部分を含み；置換アリールは３−ブロモフェニルなどの部分を含み；アラルキルはトリル（ｔｏｌｙｌ）などの部分を含み；ヘテロアルキルはエチルチオフェンなどの部分を含み；置換ヘテロアルキルは３−メトキシ−チオフェンなどの部分を含み；アルコキシはメトキシなどの部分を含み；およびフェノキシは３−ニトロフェノキシなどの部分を含む。ハロはフルオロ、クロロ、ヨードおよびブロモを含むものと解されるべきである。。
【００３７】
本発明の目的では、「正の整数」は１と等しいかまたは１より大きい整数を含むものと解されるべきであり、当業者に理解されるように、当業者にとって合理的範囲内である。
【００３８】
本発明の目的では、「結合した」の語は、１つの基と別の基との、共有（好ましくは）または非共有結合、すなわち化学反応の結果としての結合を含むものと解されるべきである。。
【００３９】
本発明の目的では、「有効量」および「十分量」の語は、当業者に理解される効果として、目的の効果または治療効果を達成する量を意味するものとする。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１Ａ】実施例１に記載される肺炎症および線維症におけるアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の治療効果。
【図１Ｂ】実施例１に記載される肺炎症および線維症におけるアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の治療効果。
【図２】実施例２に記載される肺線維症を有するマウスにおけるアデノシン濃度に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の効果。
【図３】実施例３に記載される肺線維症を有するマウスにおける体重減少に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の効果。
【図４Ａ】実施例４に記載される肺線維症を有するマウスにおける炎症に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の治療効果。
【図４Ｂ】実施例４に記載される肺線維症を有するマウスにおける炎症に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の治療効果。
【図５】実施例５に記載される肺線維症を有するマウスにおけるコラーゲン産生に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の効果。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
したがって、本発明は、患者の組織および／または体液に存在するアデノシンの量を低減するのに十分な量および期間にわたり、ＡＤＡ酵素を、それを必要とする患者に投与することによる、たとえば、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、およびＣＯＰＤを含む肺疾患および障害の治療のための新規の方法および組成物を提供する。ＡＤＡ酵素はポリマー複合体化されていることが好ましい。別の実施形態では、ＡＤＡ酵素は注入または吸入によって投与される。基礎となる肺病理を持続する内因性アデノシンの存在に依存する肺疾患過程では、投与されたＡＤＡによる内因性アデノシンの十分な低減が、疾患の症状および／または徴候を治療する。
【００４２】
本明細書では、「アデノシンデアミナーゼに媒介される肺疾患」とは、投与経路にかかわらず、ＡＤＡ、またはそれらの活性画分などの投与による利益を得る、任意の肺疾患、症状または障害を広く含むものと解されるべきである。。そのような肺疾患は、肺、細気管支、肺胞または関連する組織におけるアデノシン濃度の上昇に厳密に関連しているものに限定されない。
【００４３】
本発明の方法に従ったＡＤＡ酵素の投与は、「予防」または「治療」目的のいずれかでありうる。予防的に提供される場合、ＡＤＡ酵素は、何らかの肺症状より前に提供される。本薬剤の予防的投与は、以後の何らかの肺症状を防止または減弱させるのに役立つ。治療的に提供される場合、ＡＤＡ酵素は喘息の症状の発生時に（またはすぐ後に）提供される。ＡＤＡ酵素の治療的投与は、何らかの実際の肺症状発作を減弱させる役割を果たす。本発明の方法は、したがって、予測される肺症状の発生前に（予想される症状の重症度、持続時間または範囲を減弱させるように）、または症状の開始前に実施されうる。
【００４４】
さらに別の態様では、本明細書に記載される方法によるとＡＤＡ複合体は、化学療法剤治療と同時にまたは連続的に組み合わせて使用されうる。化学療法剤によって重度の合併症が肺に生じうる。たとえば、ＢＬＥＮＯＸＡＮＥの銘柄で販売されているブレオマイシンは、肺線維症を引き起こし、肺機能を障害することが知られている。本明細書に記載されるＡＤＡ複合体は、化学療法に随伴する肺疾患を減弱、低減または防止できる。したがって、本明細書に記載される方法に従ったＡＤＡ酵素は、化学療法剤の投与前に、投与と同時にまたはその後に、投与されうる。
【００４５】
肺疾患の治療の成功は、ＡＤＡ治療なしで観察した場合と比較して、アデノシン、炎症細胞、および／または当業者に考えられる他の臨床マーカーを含む線維症の少なくとも２０％または好ましくは３０％、より好ましくは４０％以上（すなわち、５０％または８０％）の減少が実現した場合に、起こると判断される。他の評価項目としては、細胞外マトリクス産生沈着の程度、線維芽細胞数、プロテイナーゼ−抗プロテイナーゼ酵素濃度、線維化誘導性媒介因子の濃度、および肺閉塞の組織病理的証拠が挙げられる。気道リモデリングおよび／または破壊もまた扱いやすい評価項目である。
【００４６】
Ａ．ＡＤＡポリマー複合体
概して、全身または局所アデノシン濃度を低減させるための方法および組成物が、肺系の疾患または障害を治療するために提供される。
【００４７】
一態様では、本発明に従った用途の医薬組成物は、ＡＤＡポリペプチド、またはそれらの変異体、多型および誘導体を含む、その活性画分を含む。好ましくは、ＡＤＡはウシまたはヒトＡＤＡであるが、他の哺乳動物種も考えられる。好ましい一実施形態では、ＡＤＡはウシ関連試料から精製される。天然に存在するウシＡＤＡのＣｙｓ７４残基がシステインでキャッピングまたは保護され、配列番号：１のＡＤＡをコードする遺伝子から予測される６個のＣ末端残基が存在しない。動物起源のＡＤＡが用いられる態様では、それは精製されるなど、すなわちウシなどから、当業者に既知の方法を用いて得られる。さらなる態様では、本発明は、予測される６個のＣ末端残基を含むか含まないかに関わらず、別の対立遺伝子および多型を含む、天然ウシＡＤＡの代替的な変異体を使用しうることが考えられる。ウシＡＤＡ多型は、たとえば、１９８位のリジンの代わりにグルタミン、２４５位のスレオニンの代わりにアラニン、３５１位のグリシンの代わりにアルギニンを含む。
【００４８】
別の態様では、ＡＤＡは組換えＡＤＡである。たとえば、アデノシンデアミナーゼは、配列番号：２または配列番号：４に従ったＤＮＡ分子から翻訳された、組換えウシアデノシンデアミナーゼ（配列番号：１）または組換えヒトアデノシンデアミナーゼ（「ｒｈＡＤＡ」、配列番号：３）でありうる。随意的に、組換えアデノシンデアミナーゼは、ウシアデノシンデアミナーゼの６個のＣ末端残基を欠如しうる。
【００４９】
本発明のさらなる態様では、ＡＤＡ酵素の誘導体は、非変異組換えＡＤＡ酵素と比較して安定性が増強されるように変異した、組換え産生されたＡＤＡ酵素を含みうる。これらは、溶媒に曝露された酸化可能なＣｙｓ残基を、適当な酸化できないアミノ酸残基で置換するため、たとえば、配列番号：１および／または、上述の多型のうちの１つ以上を有する配列番号：１から改変された組換えＡＤＡ酵素を含む。そのような酸化できないアミノ酸残基には、任意の当分野で公知の天然アミノ酸残基および／または任意の当分野で公知のそれらの誘導体が含まれる。組換えＡＤＡにおいて、随意的にシステインと置換される、好ましい天然に存在するアミノ酸は、たとえば、アラニン、セリン、アスパラギン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、スレオニン、チロシン、およびバリンを含む。セリンが最も好ましい。一部の好ましい組換えＡＤＡ変異タンパク質酵素は、配列番号：６または配列番号：８に従ったＤＮＡ分子から翻訳された配列番号：５（ウシＡＤＡ）および配列番号：７（ヒトＡＤＡ）で表される。そのような組換えＡＤＡ変異タンパク質、およびこれらのタンパク質の産生および精製に関するさらなる詳細は、参照することにより本明細書にその全体が含まれる、同一出願人が所有する米国仮特許出願第６０／９１３，００９号および同第６０／９１３，０３９号の各明細書によって提供される。ベクターおよび精製方法に関する具体的な詳細がそれらの明細書に、特に実施例の項に、とりわけ'００９号明細書の実施例１〜４に示されている。
さらなる態様では、組換えＡＤＡは、溶媒に曝露された酸化可能なＣｙｓ残基をキャッピングすることによって安定化されうる。組換えＡＤＡのシステイン残基のような酸化可能なアミノ酸は、酸化グルタチオン、ヨードアセトアミド、ヨード酢酸、システイン、他のジチオールおよびそれらの混合物などのキャッピング剤によって、ＡＤＡタンパク質を実質的に不活性化することなく、キャッピングされうる。組換えＡＤＡのキャッピングは、ＡＤＡを安定化し、分解から保護する。ＡＤＡのキャッピングの詳細は、参照することにより本明細書にその内容が含まれ、る米国特許出願第１１／７３８，０１２号明細書に記載されている。
【００５０】
好ましい態様では、ＡＤＡポリペプチドは、実質的に非抗原性なポリマー、好ましくはポリアルキレンオキサイド（「ＰＡＯ」）と複合体化される。
【００５１】
ＡＤＡ−ポリマー複合体は、一般的に式（Ｉ）に対応し：
（Ｉ） [Ｒ−ＮＨ]Ｚ−（ＡＤＡ）
ここで（ＡＤＡ）は、アデノシンデアミナーゼまたはその活性画分であって、ウシなどに由来する精製された形態または組換えＡＤＡのいずれかを表し；
ＮＨ−は、ポリマーと結合するＡＤＡ上に見られるアミノ酸のアミノ基であり；
ｚは正の整数、好ましくは約１〜約８０であり；
Ｒは、放出可能または放出不可能な形態であるか否かに関わらず、ＡＤＡに結合している実質的に非抗原性のポリマー残基を含む。
【００５２】
より好ましい態様では、ポリマーは、直鎖、分枝鎖またはマルチアームＰＥＧでありうるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。一般的に、ポリエチレングリコールは下記の式を有し：
−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−
ここで（ｎ）は正の整数であり、好ましくは約１０〜約２，３００である。ポリマーの平均分子量は約１０００〜約１００，０００の範囲である。より好ましくは、ポリマーは約５，０００〜約４５，０００、さらにより好ましくは、５，０００〜約２０，０００の平均分子量を有する。最も好ましくは、ＰＥＧの分子量は、「アダジェン」（ＰＥＧ化ウシアデノシンデアミナーゼ）に見られるように、約５，０００である。当業者の要望に合わせて、他の分子量もまた考えられる。
【００５３】
あるいは、本発明のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基部分は下記の構造で表すことができる：
【化１】
【００５４】
ここで：
Ｙ７１およびＹ７３は独立してＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲ７３または結合であり；
Ｙ７２はＯ、Ｓ、またはＮＲ７４であり；
Ｒ７１−７４は、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１９分枝アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ２−６置換アルケニル、Ｃ２−６置換アルキニル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシから独立して選択され；
（ａ７１）、（ａ７２）、および（ｂ７１）は独立してゼロまたは正の整数、好ましくは０〜６、およびより好ましくは１であり；
（ｎ）は約１０〜約２３００の整数である。
【００５５】
一例として、ＰＥＧは下記の非限定的な方法で官能化されうる：
−Ｃ（＝Ｙ７４）−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、
−Ｃ（＝Ｙ７４）−Ｙ−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、
−Ｃ（＝Ｙ７４）−ＮＲ１１−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、
−ＣＲ７５Ｒ７６−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−
ここで
Ｒ７５およびＲ７６はＨ、Ｃ１−６アルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキルおよび置換Ｃ１−６アルキルから独立して選択され；
ｍはゼロであるかまたは正の整数であり、好ましくは１であり；
Ｙ７４はＯまたはＳであり；
ｎは重合度を表す。
【００５６】
さらなる態様では、複合体のポリマー部分は、ＡＤＡの複数の結合点を提供できるものでありうる。あるいは、複数のＰＥＧがＡＤＡに結合されうる。
【００５７】
ＰＥＧ化ＡＤＡの薬物動態および他の性質は、必要に応じて、ＰＥＧ分子量、リンカー化学および酵素に対するＰＥＧ鎖の比率の操作によって、目的の臨床用途に調整されうる。
【００５８】
これらの態様では、ＡＤＡは、当分野で知られているさまざまなリンカーを介して放出可能なまたは放出不可能な形態で非抗原性ポリマーと結合されうる。
【００５９】
放出可能なポリマー系は、ベンジル脱離またはトリメチルロックラクトン化を基礎とすることができる。放出可能なポリマー系の、活性化されたポリマーリンカーは、参照することにより本明細書に含まれる、本願と同一譲受人に譲渡された米国特許第６，１８０，０９５号、同第６，７２０，３０６号、同第５，９６５，１１９号、同第６，６２４，１４２号および同第６，３０３，５６９号の各明細書に従って調製されうる。あるいは、ＡＤＡポリマー複合体は、参照することにより本明細書に含まれる、同一出願人による米国特許第７，１２２，１８９号および同第７，０８７，２２９号の各明細書および米国特許出願第１０／５５７，５２２号、同第１１／５０２，１０８号、および同第１１／０１１，８１８号の各明細書に記載されるもののような、ある種のビシンポリマー残基を用いて作製される。考えられる他の放出可能なポリマー系はまた、参照することにより本明細書に含まれる国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／７８６００号明細書に記載されている。
本明細書で意図されている放出可能なまたは放出不可能なＡＤＡポリマー複合体の具体例は、参照することにより本明細書に含まれる米国仮特許出願第６０／９１３，０３９号明細書に記載されている。
【００６０】
本発明の目的では、それらのポリマーは、ＡＤＡを付加するために官能化または活性化されるべきである。当業者は、過度の実験なしに、付加のためのポリマーのさまざまな活性化型を使用できる。一部の好ましい活性化ＰＥＧは、参照することにより本明細書に含まれる、同一出願人による米国特許第５，１２２，６１４号、同第５，３２４，８４４号、同第５，６１２，４６０号および同第５，８０８，０９６号の各明細書に開示されるものを含む。たとえば、Ｚａｌｉｐｓｋｙは、米国特許第５，１２２，６１４号明細書に、Ｎ−スクシンイミドカルボナート誘導体への変換によるＰＥＧの活性化について記載している（「ＳＣ−ＰＥＧ」）。
【００６１】
当業者に理解される通り、そのような複合体化反応は、典型的には適当な緩衝液中で数倍モル過剰の活性化ＰＥＧを用いて実施される。上述のＳＣ−ＰＥＧのような直鎖ＰＥＧを用いて作製される一部の好ましい複合体は、平均して、酵素当たり約２０〜約８０のＰＥＧ鎖を含みうる。結果として、これらについては、数百倍、たとえば、２００〜１０００倍のモル過剰が使用されうる。分枝鎖ＰＥＧおよび酵素に付加されたＰＥＧについて用いられるモル過剰はより低くなり、これは、本明細書に記載されるものと同一の記載をする特許および特許出願に記載される技法を用いて決定されうる。
【００６２】
これらの態様では、ポリアルキレンオキサイドは、たとえば、炭酸スクシンイミジル、チアゾリジンチオン、ウレタン、およびアミドを基礎とするリンカーを含むリンカー化学を介してタンパク質と複合体化される。ポリアルキレンオキサイドは、好ましくは、ウシから精製されたＡＤＡまたはシステイン安定化された組換えヒトアデノシンデアミナーゼ上のＬｙｓのεアミノ基と共有結合しているが、共有結合のための他の部位もまた当分野でよく知られている。キャッピングされたＡＤＡポリマー複合体は、酵素上のＬｙｓのεアミノ基と結合した少なくとも５つのポリエチレングリコール鎖を含みうるが、しかし代替的に、酵素上のＬｙｓのεアミノ基と結合した約１１〜１８のＰＥＧ鎖を含みうる。
【００６３】
「アダジェン」のＡＤＡは、リジン結合を介して、酵素分子あたり約１１〜約１８のＰＥＧ分子と複合体化している一方、ＰＥＧのＡＤＡに対する比は、任意の特定の臨床状況に適合するよう、結合した複合体の物理的および動態的特性を改変する目的で、変化させることができる。
本発明の追加の態様は、本明細書に記載される治療の方法に有用な複合体を提供するために、ＡＤＡ酵素またはその断片と複合体化させるための任意の市販のまたは報告された活性化ＰＥＧまたは同様のポリマーを用いることを含むことが前記から明らかとなる。たとえば、参照することにより本明細書にその全体が含まれる、２００４年のＮｅｋｔａｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎカタログ（Ｎｅｋｔａｒ社（米国カリフォルニア州サンカルロス所在））を参照。
【００６４】
別の一態様では、活性化ポリマーリンカーは、それぞれ参照することにより本明細書に含まれる、同一出願人による米国特許第５，６４３，５７５号、同第５，９１９，４５５号、同第６，１１３，９０６号および同第６，５６６，５０６号の各明細書に記載されるもののような分枝鎖ポリマー残基を用いて調製される。そのようなポリマーの非限定的な一覧は、下記の構造を有するポリマー系（ｉ）〜（ｖｉｉ）に対応する：
【化２−１】
【化２−２】
【００６５】
ここで
Ｙ６１−６２は独立してＯ、ＳまたはＮＲ６１であり；
Ｙ６３はＯ、ＮＲ６２、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ２であり
（ｗ６２）、（ｗ６３）および（ｗ６４）は独立して、０または正の整数、好ましくは約０〜約１０、より好ましくは約１〜約６であり；
（ｗ６１）は０または１であり；
ｍＰＥＧはメトキシＰＥＧであり
ここでＰＥＧは既に規定されており、ポリマー部分の総分子量は約１，０００〜約１００，０００であり；
Ｒ６１およびＲ６２は独立して、Ｒ７３に使用されうるのと同じ部分である。
【００６６】
Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの２００１年カタログ“Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ ａｎｄ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”に記載の「星状ＰＥＧ」およびマルチアームＰＥＧなどのマルチアームＰＥＧ誘導体もまた有用である。日油株式会社の薬物送達システムカタログ（Drug Delivery System Catalog）第８版、２００６年４月も参照のこと。前記のそれぞれの開示は参照することにより本明細書に含まれる。マルチアームポリマーは、４つ以上のポリマーアーム、好ましくは４つまたは８つのポリマーアームを含む。
説明の目的であって限定するものではないが、マルチアームポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基は下記でありうる：
【化３】
【００６７】
ここで
（ｘ）は０および正の整数、すなわち約０〜約２８であり；
（ｎ）は重合度である。
【００６８】
本発明の特定の一実施形態では、マルチアームＰＥＧは下記の構造を有し：
【化４】
【００６９】
ここで（ｎ）は正の整数である。本発明の好ましい一実施形態では、ポリマーは約１，０００〜約１００，０００、好ましくは５，０００〜４５，０００の総分子量を有する。
【００７０】
別の特定の一実施形態では、マルチアームＰＥＧは下記の構造を有し：
【化５】
【００７１】
ここで（ｎ）は正の整数である。
【００７２】
ポリマーは、米国特許第５，１２２，６１４号または同第５，８０８，０９６号の各明細書に記載される活性化法を用いて、適当に活性化されたポリマーへ変換されうる。具体的には、そのようなＰＥＧは次式のものでありうる：
【化６】
【００７３】
ここで：
（ｕ’）は正の整数であり；残基の３つまでの終端部分がメチルまたは他の低級アルキルでキャッピングされている。
【００７４】
一部の好ましい実施形態では、４つすべてのＰＥＧアームは、ＡＤＡとの結合を容易にするために、適当な活性化基に変換されうる。変換前のそのような化合物としては下記のものが挙げられる：
【化７−１】
【化７−２】
【００７５】
本明細書に含まれるポリマー物質は、好ましくは室温で水溶性である。そのようなポリマーの非限定的なリストには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレンオキサイドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらの共重合体および、ブロック共重合体の水溶性が維持されるように提供された、それらのブロック共重合体が含まれる。
【００７６】
さらなる実施形態では、およびＰＡＯ系ポリマーの代替として、他の適当なポリマーが、デキストラン、ポリビニルアルコール、炭化水素系ポリマー、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリアルキレンオキサイド、および／またはそれらの共重合体などの１つ以上の有効な非抗原性材料の中から、それぞれ随意的に選択される。参照することによりその内容が本明細書に含まれる、本願と同一譲受人に譲渡された米国特許第６，１５３，６５５号明細書も参照。ＰＥＧなどのＰＡＯについて本明細書に記載されたのと同じ種類の活性化が用いられることが、当業者に理解されよう。当業者はさらに、前記リストが単に説明のためであり、本明細書に記載される性質を有するすべてのポリマー材料が意図されること、およびポリプロピレングリコールなどの他のポリアルキレンオキサイド誘導体もまた意図されることについても、認識するであろう。
【００７７】
Ｂ．医薬組成物
注射可能な用途に適したＡＤＡまたはＡＤＡポリマー−複合体の医薬品形態としては、滅菌水溶液または分散剤；ゴマ油、ピーナッツ油またはプロピレングリコール水溶液を含む製剤；および注射可能な滅菌溶液または分散剤の即時調製用の滅菌粉末が挙げられる。すべての場合において、製剤は滅菌されていなければならず、シリンジから容易に送達できる程度に流体でなければならない。これは製造および保存の条件下で安定でなければならず、細菌 および 真菌などの微生物の混入作用に対して保存されなければならない。
遊離塩基または薬理学的に許容可能な塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適当に混合した水で調製されうる。分散剤もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物、ならびに油で調製されうる。好ましい一実施形態では、ＡＤＡポリペプチドはＰＥＧと複合体化されている。通常の保存および使用条件下では、これらの調製物には、微生物の増殖を防ぐための保存料が含まれる。
上記のようなＡＤＡ酵素は、中性または塩の形態の組成物に製剤されうる。薬学的に許容可能な塩は、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ酸を用いて形成される）を含む。一部の適当な無機酸は、たとえば、塩酸またはリン酸、あるいは酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸を含む。遊離カルボキシル基で形成される塩は、たとえば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄などの無機塩基、および、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から誘導することができる。
【００７８】
担体も、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適当な混合物、および植物油を含む、溶媒または分散媒でありうる。たとえば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、適当な流動性を維持することができる。微生物の作用の防止は、さまざまな抗菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって達成されうる。多くの場合、等張剤、たとえば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射可能な組成物の持続的吸収は、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を、組成物に使用することによって達成されうる。
【００７９】
注射可能な滅菌溶液は、必要な量の活性化合物を、必要に応じて上に列挙されたさまざまな他の成分と共に適当な溶媒に組み込み、次いでろ過滅菌を行うことによって調製される。一般的に，分散剤は、さまざまな滅菌活性成分を、塩基性の分散媒および上に列挙された必要とされる他の成分を含む滅菌媒体に組み込むことによって調製される。注射可能な滅菌溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、先に滅菌ろ過された溶液から、活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥および凍結乾燥法である。
【００８０】
活性成分としてのペプチド治療薬の使用は、それぞれ参照することにより本明細書に含まれる、米国特許第４，６０８，２５１号；同第４，６０１，９０３号；同第４，５９９，２３１号；同第４，５９９，２３０号；同第４，５９６，７９２号；および同第４，５７８，７７０号の各明細書の技術によって、より詳細に説明される。
【００８１】
直接注入のための、さらに、または高度に、濃縮された溶液の調製もまた意図されているが、その際、溶媒としてＤＭＳＯを使用することにより、結果的に、極めて迅速な透過を生じ、高濃度の活性薬剤を小さい領域に送達することが見込まれる。
【００８２】
製剤に際して、溶液は、投与製剤に適合するような方法で、および治療的に有効な量で、投与される。製剤は、上記のような注射可能な溶液のタイプなど、さまざまな剤形で容易に投与されるが、しかし薬剤放出カプセルなどもまた使用されうる。
【００８３】
水溶液での非経口投与では、たとえば、溶液は必要に応じて適切に緩衝されるべきであり、液体希釈剤は、最初に十分な生理食塩水またはグルコースで等張にすべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内投与に特に適する。これに関連して、使用されうる滅菌水系媒体は、本開示に照らして当業者に理解されよう。たとえば、１用量を１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液に溶解し、１０００ｍｌの皮下注入液に加えるかまたは注入予定位置に注入されうる（たとえば、"Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th Edition,pages 1035−1038 and 1570-1580を参照）。用量のいくらかの変化は、治療される対象の状態に応じて必然的に生じる。いずれにせよ、投与の責任者が、個別の対象についての適当な用量を決定する。
ＡＤＡのＰＥＧ−複合体または他のＡＤＡを含む療法は、約１００Ｕ〜約３００Ｕ／ｍｌ、好ましくは約２５０Ｕ／ｍｌの量で含むように治療用混合物に製剤化され、ここで、活性１単位とは、併発性疾患の治療に適応されるように、２５℃およびｐＨ７．３において、毎分アデノシン１μＭをイノシンに変換するＡＤＡの量として定義される。
【００８４】
静脈内または筋肉内注射などの、非経口投与用に製剤された化合物に加えて、他の薬学的に許容可能な剤形は、たとえば、錠剤または経口投与用の他の固体；リポソーム製剤；徐放カプセル；および現在用いられる任意の他の剤形を含む。
【００８５】
さらに、眼科用製剤に用いられるのと同様の抗菌保存料、および適当な薬剤安定剤が、必要に応じて、製剤に含まれうる。さまざまな市販の経鼻製剤が知られており、たとえば、抗生物質および抗ヒスタミンが含まれ、これらは喘息の予防に用いられる。
【００８６】
ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体を注入によって提供する際には、一般的に、
１）血漿ＡＤＡ活性を約１０〜１００μｍｏｌ／時間／ｍＬ、好ましくは約１５〜約３５μｍｏｌ／時間／ｍＬ（３７℃にてアッセイ）の範囲に維持する；および
２）注入前サンプルで測定した正常アデノシン濃度と比較して、血球容量における赤血球アデノシン、すなわち、ｄＡＴＰで＜約０．００１〜０．０５７μｍｏｌ／ｍＬ、好ましくは約０．００５〜約０．０１５μｍｏｌ／ｍＬへの低下を示し、または総赤血球アデノシン（すなわち、ＡＴＰ＋ｄＡＴＰ含量）で＜約１％への低下を示す、
であろう用量を受益者に提供することが望ましい。ｄＡＴＰの正常値は約０．００１μｍｏｌ／ｍＬ未満である。
【００８７】
本明細書で意図される方法は、アデノシンデアミナーゼを１週間以上にわたり、週に１回以上（すなわち２回）、肺疾患が緩和されるまで投与することを含みうる。組成物は１日１回投与して差し支えなくの、または複数週治療プロトコルの一部として投与されうる複数回用量に分割されうる。
【００８８】
Ｃ．吸入による送達
肺への薬物送達は、液体ネブライザー、空気または他の推進剤たとえばＨＦＡ−１３４ａ（１，１，１，２−テトラフルオロエタン）を用いるエアロゾル系の定量吸入器（ＭＤＩ）を含む、さまざまな手法で達成されうる。乾燥粉末分散装置もまた利用可能である。乾燥粉末分散装置は、乾燥粉末として容易に製剤化される薬剤、特にタンパク質およびポリペプチドを送達するために用いられる。さもなければ不安定なタンパク質およびポリペプチドの多くが、単独でまたは適当な粉末担体と組み合わせて凍結乾燥粉末または噴霧乾燥粉末として安定に保存されうる。
肺アデノシン濃度を低減できる吸入用のＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素を患者に提供する際、投与される薬剤の用量は、患者の年齢、体重、身長、性別、一般的病状、病歴などの因子に応じて変動する。当業者は、吸入ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体、たとえば「アダジェン」を、臨床的エンドポイントを達成するのに有効な用量および期間投与すると同時に、生じうる任意の副作用を回避または最小限に抑えることによって、症状の低減を達成および維持する、所望の臨床的エンドポイントまで最初の用量を漸増する必要があることを理解するであろう。
【００８９】
たとえば、定用量系によってなど、乾燥粉末として投与される場合、用量は、酵素の量に基づいて、たとえば、約０．１０Ｕ／ｋｇ〜約３０Ｕ／ｋｇ、好ましくは約０．５Ｕ／ｋｇ〜約２０Ｕ／ｋｇ、より好ましくは約０．５Ｕ／ｋｇ〜約１０Ｕ／ｋｇ（すなわち患者体重ｋｇ当たり）、さらにより好ましくは約０．５Ｕ／ｋｇ〜約５Ｕ／ｋｇの範囲にわたる。ＡＤＡの投薬情報はまた、参照することにより本明細書に含まれる、「アダジェン」の処方薬説明書に記載されている。
噴霧化した溶液で投与される場合、用量は、たとえば、約０．０１Ｕ／ｋｇ〜約５Ｕ／ｋｇの範囲にわたる。約０．１Ｕ／ｋｇ〜約１Ｕ／ｋｇがさらに好ましい。
一部の実施形態では、吸入用のＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素は、経口的に、たとえば皮下、静脈内および／または筋肉内などの注射によって、および／または吸入によって投与される、当分野で知られた他の肺用の薬剤と組み合わせて、または併用療法として投与されうる。そのような薬剤は、参照することによりその全体が本明細書に含まれる、Goodman and Gilman's, the Pharmacological Basis of Therapeutics, Eleventh Edition, Publ.McGraw Hillにより詳細に記載されるような、気管支拡張剤糖質コルチコイドなどを含む。具体的には、これらの追加の薬剤としては、たとえば、メチルキサンチン（たとえばテオフィリン）、β−アドレナリン作動性アゴニスト（たとえばカテコールアミン、レゾルシノール、サリゲニン、およびエフェドリン）、たとえばアルブテロール、テルブタリンなどの選択的β−アドレナリン作動性アゴニスト、糖質コルチコイド（たとえばヒドロコルチゾン）、肺症状の治療に用いられる他の吸入ステロイド、クロモン（たとえばクロモグリク酸ナトリウム）および抗コリン薬（たとえばアトロピン）、または、肺疾患または障害の症状の治療に必要とされるこれらの薬剤の量を減らすことを目的とする、任意の他の肺用の薬剤が挙げられる。本明細書では、２つの化合物が、両方の化合物が患者の血清中に同時に検出されうるような近い時間間隔で投与される場合、ある化合物は、第２の化合物と共に、追加的に投与されるものと考えられている。上記のメチルキサンチン、β−アドレナリン作動性アゴニストなどの気管支拡張薬の前投与は、随意的に、吸入用のＡＤＡのＰＥＧ複合体の、細気管支および肺胞内の作用部位への透過を助けることが好ましい。したがって、本明細書で使用されうる適当な第２の薬理学的に活性な薬剤の非限定的なリストは、アミノフィリン、テオフィリン、ビトルテロール（bitolerol）、ジフィリン、ホルモテロール、イプラトロピウム、レバルブテロール、メタプロテレノール（metoproterenol）、ピルブテロール、サルメテロール、テルブタリン、および本明細書に記載される肺症状の治療に有用であることが当業者に知られている他の薬剤を含む。
【００９０】
１．吸入用ＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素の乾燥粉末送達
吸入用ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体は、たとえば、参照することによりそのすべてが本明細書に含まれる、米国特許第６，５０９，００６号、同第６，５９２，９０４号、同第７，０９７，８２７号および同第６，３５８，５３０号の各明細書に従った方法を用いて、ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体を含む溶液を噴霧乾燥することによって、乾燥分散用に調製される。これらの特許は、吸入による投与のためのタンパク質治療薬の分散を助ける方法および賦形剤を提供する。典型的な乾燥粉末の賦形剤は、分散を助けるためにＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体と混合される低分子炭化水素またはポリペプチドを含む。
【００９１】
乾燥粉末分散用の担体として有用な医薬賦形剤の種類は、有用な分散剤でもあるヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの安定剤、糖質、アミノ酸およびポリペプチドなどの増量剤；ｐＨ調整剤または緩衝剤；塩化ナトリウムなどの塩；などを含む。これらの担体は、結晶形または非晶形であって差し支えなく、または両者の混合物でありうる。
粉末と組み合わせることができる増量剤は、適合性の糖質，ポリペプチド，アミノ酸またはその組み合わせを含む。適当な糖質は、ガラクトース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖；ラクトース、トレハロースなどの二糖；２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン；およびラフィノース、マルトデキストリン、デキストランなどの多糖；マンニトール、キシリトールなどのアルジトールを含む。糖質の好ましい群は、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マルトデキストリン、およびマンニトールを含む。適当なポリペプチドは、アスパルテームを含む。アミノ酸はアラニンおよびグリシンを含み、グリシンが好ましい。
添加剤は、噴霧乾燥中の立体構造安定性のために、および粉末の分散性を改善するために、たとえば、トリプトファン、チロシン、ロイシン、フェニルアラニンなどの疎水性アミノ酸が含まれうる。適当なｐＨ調整剤または緩衝剤は、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウムなどの有機酸および塩基から調製される有機塩を含み；クエン酸ナトリウムが好ましい。
肺送達のための単位用量剤形は、上記の乾燥粉末入りの単位用量容器を含む。粉末は適当な用量容器内に、対象へ単位用量治療のための薬剤を提供するのに十分な量でセットされる。用量容器は、ガス流への分散によってエアロゾルを生じ、次いでそのように生じたエアロゾルを、治療を必要とする対象によるその後の吸入のためにマウスピースが着いたチャンバー内に捕捉する、乾燥粉末組成物のエアロゾル化を可能にする適当な吸入器に適合するものである。そのような用量容器は、乾燥粉末組成物を分散するためにガス（たとえば空気）流を容器内に導くことを可能にする、取り外し部分を有するゼラチンまたはプラスチックのカプセルなど、当分野で知られている組成物を封入する任意の容器を含む。そのような容器は、参照することによりその全体が本明細書に含まれる、米国特許第４，２２７，５２２号、同第４，１９２，３０９号、および同第４，１０５，０２７号の各明細書に示されるものによって例示される。適当な容器はまた、Ｇｌａｘｏ社のＶｅｎｔｏｌｉｎ Ｒｏｔｏｈａｌｅｒという銘柄の粉末吸入器またはＦｉｓｏｎのＳｐｉｎｈａｌｅｒという銘柄の粉末吸入器と共に使用されるものを含む。優れた防湿層を提供する別の適当な単位用量容器は、アルミニウム箔プラスチックラミネートから形成される。ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体粉末は、重量または体積で、成形可能なホイル（foil）の凹部に充填され、カバーホイル−プラスチックラミネートで密閉される。粉末吸入器と共に使用するためのそのような容器は、参照することにより本明細書に含まれる米国特許第４，７７８，０５４号明細書に記載され、また、Ｇｌａｘｏ社のＤｉｓｋｈａｌｅｒに使用されている。参照することによりその全体が本明細書に含まれる、米国特許第４，６２７，４３２号；同第４，８１１，７３１号；および同第５，０３５，２３７号の各明細書を参照。好ましい乾燥粉末吸入器は、共に参照することにより本明細書に含まれる、米国特許出願第０８／３０９，６９１号および同第０８／４８７，１８４号の各明細書に記載されるものである。後者の出願は国際公開第９６／０９０８５号パンフレットとして公開されている。
噴霧工程は、噴霧器のいくつかの従来の型のうち任意の１つを利用しうる。特に好ましいのは、下記により詳細に記載されるような１０μｍ未満のメジアン径を有する小滴を生成可能な、２液噴霧ノズルの使用である。噴霧ガスは、通常は、微粒子および他の汚染物質が除去されるようにろ過または清浄化されている空気である。代替的に、窒素などの他の気体が使用されうる。噴霧ガスは、噴霧ノズルを通じた送達のために、典型的にはゲージ圧で１７２４００Ｐａ（２５ｐｓｉｇ）を上回る圧に加圧され、好ましくはゲージ圧で３４４８００Ｐａ（５０ｐｓｉｇ）を上回る。噴霧ガス流は一般的に音速に制限されるが、送達圧力が高いと、結果として噴霧ガス密度の増加が生じる。そのような増加したガス密度は、噴霧操作中に生じる液滴サイズを低下させることが見出されている。より小さな液滴サイズは、結果的により小さな粒径を生じる。噴霧ガス流速、噴霧ガス圧、液流速などを含む噴霧条件は、位相ドップラー速度測定による測定で平均直径１１μｍ未満の液小滴を生じるように調節される。好ましい噴霧器設計および操作条件の定義では、液体スプレーの液滴径分布は、Ａｅｒｏｍｅｔｒｉｃ社の位相ドップラー粒径分析器（Ｐｈａｓｅ Ｄｏｐｐｌｅｒ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いて直接測定される。液滴径分布はまた、測定された乾燥粒径分布（Ｈｏｒｉｂａ Ｃａｐａ ７００）および粒子密度から計算されうる。これらの２つの方法の結果は互いによく一致する。好ましくは、噴霧された液滴は、５μｍ〜１１μｍ、より好ましくは６μｍ〜８μｍの範囲の平均直径を有する。気：液流量比は好ましくは５より大に維持され、より好ましくは８〜１０の範囲である。気：液流量比のこの範囲内の調節は、粒子の液滴サイズの調節にとって特に重要である。
【００９２】
液体媒体は、適当な液体担体中の、ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体の溶液、懸濁液、または他の分散液でありうる。ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体は、薬学的に許容可能な担体と組み合わせて液体溶媒中で溶液として存在すること、および、その液体担体は水であることが好ましい。しかしながら、有機溶媒、エタノールなどの他の液体溶媒を使用することが可能である。総溶解固形分（最終乾燥粒子中に存在しうる、高分子および他の担体、賦形剤などを含む）は、幅広い濃度で存在する可能性があり、典型的には０．１％重量〜１０％重量で存在する。しかしながら、通常は、吸入サイズ範囲内の粒子を生じ、所望の分散特性を有する固体濃度を最大化することが望ましく、典型的には固体濃度は０．５％〜１０％、好ましくは１．０％〜５％の範囲にわたる。比較的低濃度のＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体を含む液体媒体は、比較的小さい直径を有する乾燥粒子を結果として生じる。
上記の方法と共に使用する装置は、たとえば、前掲の米国特許第７，０９７，８２７号明細書に記載されている。
【００９３】
２．溶液または懸濁液からのＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素のエアロゾル送達
肺症状の治療において、ＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素は、好ましくは、吸入器またはネブライザーを介して、サイズ範囲約１μｍ〜約５μｍのエアロゾルを送達するのに適した製剤で、喘息症状の重症度、程度または持続時間を減少または減弱するのに十分な量で、前掲の投与指針を用いて、投与される。一部の好ましい態様では、ＰＥＧ化されているか否か、にかかわらずＡＤＡ含有製剤の粒径は約２．５μｍである。
【００９４】
エアロゾル化吸入による薬剤の送達のためのハードウェアおよび製剤としては、たとえば、参照することにより本明細書に含まれる米国特許第５，６０５，６７４号明細書に記載されるような、計量バルブを備えたエアロゾル容器に入ったエアロゾル製剤が挙げられる。
【００９５】
使用されるＡＤＡ製剤にかかわらず、酵素の吸入に関連する要点の１つは、治療上有効な量が局所肺組織へ送達され、望ましい治療活性を生じさせるのに十分な時間、接触することであることが理解されよう。理論に縛られはしないが、肺組織のＡＤＡへの直接曝露は、そのような治療を必要とする哺乳動物において、炎症症状および組織病理状態に少なくともある程度有意な低減を、結果として生じると考えられている。さらには、本明細書に記載される発明は、線維症を主原因とする、特定の慢性肺疾患の治療において、「アダジェン」などの形態のＡＤＡを使用するための基礎を提供する。
【実施例１】
【００９６】
ブレオマイシンによって生じる肺炎症および線維症を有するマウスにおける「アダジェン」の全身曝露の効力
この実施例では、「アダジェン」を用いた全身治療の効力が、肺線維症などの肺疾患を有するマウスモデルにおいて判定された。肺線維症を有するマウスモデルは、ブレオマイシンによって確立された。ブレオマイシンは顕著なアデノシン蓄積および肺線維症を生じさせることが知られている。
【００９７】
マウスを生理食塩水またはブレオマイシン（用量＋２．０単位）に０日目に気管内曝露した。次いで、マウスを、２つの異なる治療計画にしたがって、腹腔内注射による全身「アダジェン」を用いて治療した；一方は、ブレオマイシン曝露の３日後に治療を開始して（早期治療）「アダジェン」が線維症を防ぐかどうか判定し、他方では治療を８日目に開始して（後期治療）活性疾患を停止および逆行させる作用を調べた。早期治療については、マウスは５単位の「アダジェン」を３日目に注入された。後期治療のマウスについては、５単位の「アダジェン」を８、１１および１４日目に投与した。生理食塩水溶液に曝露した対照マウスもまた、「アダジェン」処理ありまたは無しで調べた。
【００９８】
すべての分析は１４日目に実施した。総気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）細胞性および組織病理学的差異を調べた。肺細胞性は、炎症細胞を気道から洗い出し、血球計算盤を用いて細胞を計数することによって測定した。データは各群について平均細胞数＋ＳＥＭ、ｎ＝１１として表す。実験は２回反復した。肺組織像については、肺切片を作製し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色して組織病理学的変化を調べた。
【００９９】
ブレオマイシンによって生じた肺線維症を有するマウスでは、８日目に開始した「アダジェン」での全身治療は、肺炎症および線維症の顕著な低減を結果として生じた。後期治療の結果を図１Ａおよび図１Ｂに示す。
【０１００】
結果は、ブレオマイシン曝露は気管支肺胞洗浄液中の炎症細胞を増加させたことを示す。「アダジェン」での全身治療は、ＢＡＬ細胞性を（図１Ａ）に示す通り顕著に低減した。肺組織の組織学的分析は、ブレオマイシンに曝露されたマウスにおいて、重度の間質性炎症および線維性組織損傷を明らかにした。組織炎症および線維性損傷の程度は、８日目から「アダジェン」で治療されたマウスでは、はるかに重症度が低く見えた（図１Ｂ）。
【０１０１】
これらの知見は、「アダジェン」での全身治療は肺炎症および線維症の進行を停止でき、疾患の線維相の間に投与される場合は症状を逆行させることができることを示唆する。これらの知見は、「アダジェン」などのＡＤＡおよびＡＤＡポリマー複合体が、定着した肺線維症を有する患者の治療に有用であることを示す。
【実施例２】
【０１０２】
ブレオマイシンによって生じる肺炎症および線維症を有するマウスにおけるアデノシン濃度に対する「アダジェン」処理の効果
ブレオマイシンによって生じる肺線維症を有するマウスモデルにおいて、「アダジェン」処理がアデノシン濃度を低下させたかどうかを判定するために、アデノシン濃度を定量した。
【０１０３】
６週齢雌Ｃ５７Ｂｌｋ６マウスに、２．０単位のブレオマイシンを０日目に気管内投与した。マウスは、ブレオマイシン曝露の１０、１４および１８日後に５単位の「アダジェン」の腹腔内注射による処理を受けた。代替的に、マウスは腹腔内に５単位の「アダジェン」でプロトコルの１０、１４および２１日目に５単位の「アダジェン」を腹腔内に使用して処理された。すべての分析は２１日目に実施した。
【０１０４】
気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）をマウスから２１日目に回収し、逆相ＨＰＬＣを用いて定量した。結果を図２に示す。データは各群についてアデノシンの平均マイクロモル濃度＋ＳＥＭ、ｎ＝６として表す。実験は２回反復した。
「アダジェン」で処理したマウスでは、アデノシンは「アダジェン」処理無しのマウスと比較して９０％を超えて低下した。結果は、「アダジェン」はブレオマイシンに曝露された重度の肺炎症および線維症を示すマウスにおいてアデノシン濃度を低下させるのに有効であることを実証している。
【実施例３】
【０１０５】
ブレオマイシンによって生じる肺線維症を有するマウスにおける体重減少に対する「アダジェン」処理の効果
肺線維症を有するマウスにおける一般健康に対する「アダジェン」処理の効果の評価として、体重を監視した。
実施例２に記載される通り、ブレオマイシンに曝露されたマウスは、ブレオマイシン曝露の１０、１４および１８日後に５単位の「アダジェン」の腹腔内注入で、処理された。代替的に、マウスは１０、１４および２１日目に腹腔内に５単位の「アダジェン」で処理された。体重は、ブレオマイシン曝露後２１日目に測定した。結果を図３に示す。データは各群について平均体重グラム（ｇ）＋ＳＥＭ、ｎ＝８として表す。
【０１０６】
ブレオマイシンで処理されたマウスにおいて顕著な体重減少があった。ブレオマイシンによって生じた肺線維症に伴う体重減少は、「アダジェン」処理によって防がれ、「アダジェン」処理が疾患の治療および健康の改善に関連したことを示唆している。
【実施例４】
【０１０７】
ブレオマイシンによって生じる肺線維症を有するマウスにおける炎症に対する長期「アダジェン」処理の効果
炎症細胞を計数して、長期の「アダジェン」処理が肺線維症を有するマウスにおいて肺炎症を改善するかどうかを判定した。
【０１０８】
実施例２に記載される通り、ブレオマイシンに曝露されたマウスは、ブレオマイシン曝露の１０、１４および１８日後に５単位の「アダジェン」の腹腔内注入により処理された。代替的に、マウスは１０、１４および２１日目に腹腔内に５単位の「アダジェン」で処理された。２１日目に、炎症細胞を測定するために、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）をマウスから回収した。平均総炎症細胞（×１０４）＋ＳＥＭを、血球計算盤を用いて測定した。細胞を顕微鏡のスライド上にサイトスピンし、細胞判別を実施した。データは各群について平均細胞数（×１０４）＋ＳＥＭ、ｎ＝８として表す。
【０１０９】
ブレオマイシン曝露は「アダジェン」処理を受けなかったマウスにおいて炎症細胞を増加させた。「アダジェン」処理はブレオマイシンによって生じた炎症を顕著に減弱させた。結果を図４Ａに示す。結果はまた、「アダジェン」処理が肺胞マクロファージ、リンパ球、好中球および好酸球などの炎症細胞の部分集合を減弱したことを示す（図４Ｂ）。これらの細胞集団は、「アダジェン」処理無しのブレオマイシン処理マウスの肺で見られる濃度と比較して４０％減少した。これらの知見および実施例２の知見は、「アダジェン」処理でアデノシン濃度を低下させることが、ブレオマイシン曝露によって生じた肺炎症を減少させうることを示唆している。
【実施例５】
【０１１０】
ブレオマイシンによって生じる肺線維症を有するマウスにおけるコラーゲン産生に対する「アダジェン」処理の効果
ブレオマイシンによって生じる線維症に対して「アダジェン」が治療効果を有するかどうかを判定するために、コラーゲン濃度を調べた。ＢＡＬ液を、「アダジェン」で処理したマウスから２１日目に回収した。結果を図５に示す。データは各群について平均コラーゲン濃度＋ＳＥＭ、ｎ＝８として表す。
結果は、ブレオマイシンによって上昇したコラーゲン濃度が、「アダジェン」処理によって顕著に低下したことを示す。ブレオマイシンに曝露され、「アダジェン」で処理されたマウスは、「アダジェン」で処理されないマウスより４５％少ないコラーゲンを気道内に有した。これらのデータは、「アダジェン」および／またはＡＤＡが肺線維症を有する患者の治療に有用であることを示唆している。
【関連出願の説明】
【０００１】
本出願は、参照することにより本明細書に含まれる、２００６年１２月２９日出願の米国仮特許出願第６０／８８２，７４８号の優先権の利益を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、たとえば、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症および慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）を含む肺系の疾患および障害を、アデノシンデアミナーゼおよび／またはポリマー複合体化アデノシンデアミナーゼを使用して治療するための組成物および方法を提供する。
【背景技術】
【０００３】
従来の治療の有効性を高め、副作用を低減すると共に症状を治療するために、基礎となる病因に対処する、選択的な治療法の利用可能性の利益を受けるであろう、多くの肺疾患および障害が存在する。
【０００４】
喘息は気道の炎症性疾患である。米国では、成人約１０００万人および小児約５００万人がこの疾患に罹患している（非特許文献１）。喘息は、肺における免疫細胞の浸潤および活性化に代表され、次いで気道炎症および閉塞が生じる（非特許文献２）。基礎となる病因はよくわかっていないが、多数の因子が喘息を引き起こすことが知られている。しかしながら、Ｋｅｌｌｅｍｓらは、参照することにより本明細書に含まれる２００１年３月２７日登録の特許文献１（以降「Ｋｅｌｌｅｍｓ」）において、アデノシンデアミナーゼ（「ＡＤＡ」）酵素を欠損したノックアウトマウスを提供した。Ｋｅｌｌｅｍｓ ＡＤＡ欠損マウスから得られたデータは文書によって報告され、喘息の病態生理におけるアデノシン蓄積の果たす役割が確認された。ポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）複合体化ＡＤＡ（アダジェン（ADAGEN（登録商標））、Ｅｎｚｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．社製）の形態をした外因性ポリマー複合体化ウシＡＤＡの注入が、アデノシンの肺蓄積を防ぎ、そうしなければＡＤＡ欠損マウスに存在するであろう炎症性好酸球増加症を食い止めることが、その文書によって示された。
【０００５】
肺線維症は肺胞、または肺の空気嚢が炎症を起こし、徐々に瘢痕組織によって置換される疾患である。疾患が進行すると、瘢痕組織が呼吸および酸素の移行を障害する。がん、慢性感染または炎症、工業粉じん、たとえば石綿、ある種の薬物などのいくつかの既知の原因がある。現在の治療は、糖質コルチコイド、シクロホスファミド、アザチオプリン、コルヒチンなどの非特異的抗炎症剤／抗有糸分裂剤の長期投与を含む。これらの治療は常に有効なわけではなく、慢性的に投与される場合は顕著な副作用を有する。
【０００６】
嚢胞性線維症（「ＣＦ」）は米国で最も一般的な致死性遺伝疾患とされる。米国で約３０，０００人が罹患している。ＣＦは体内に濃厚で粘着性の粘液を産生させ、それが肺を詰まらせ、感染に繋がり、膵臓をブロックし、食物を消化するために必要とされる腸に消化酵素が到達するのを阻止する。以前は、この疾患の症状を治療する有効な方法は無かった。現在の緩和的治療には、食事の制限および、危険な分泌を緩和し、解消する非特異的方法が含まれる。
【０００７】
慢性閉塞性肺疾患（「ＣＯＰＤ」）は、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）の国立心肺血液研究所（U.S.National Heart,Lung and Blood Institute）による、米国および全世界における第４位の死因であるとされている。ＣＯＰＤは、細気管支および末端細気管支の両方およびそれらの各肺胞が損傷し、そのため呼吸が障害される肺疾患である。喫煙がＣＯＰＤの最も一般的な原因であるが、大気汚染、粉じん、または化学物質などの他の肺刺激因子への長期間の慢性曝露もまた、ＣＯＰＤを誘発するか一因となりうる。以前は、ＣＯＰＤのための有効な治療法は無く、患者は緩和的気管支拡張剤、非ステロイド抗炎症剤、およびコルチコステロイド抗炎症剤、ならびに酸素補充で管理されていた。
【０００８】
アデノシドデアミナーゼ、またはＡＤＡ、別名アデノシンアミノヒドロラーゼは、ＥＣ３．５．４．４（配列番号：１は天然ウシＡＤＡのペプチド配列を示す）で表される。ＡＤＡはアデノシンまたはデオキシアデノシンを、水の存在下で、イノシンまたはデオキシイノシンおよびアンモニアへ変換することから、プリンサルベージ経路にとって重要である。ＡＤＡのポリマー複合体化は、注入されたウシタンパク質に対する有害な抗原応答の可能性を最小化し、注入後の酵素の動態を改善する。「アダジェン」は、米国食品医薬品局によって、重症複合型免疫不全症、すなわちＳＣＩＤ（別名「バブルボーイ症候群」）の治療におけるオーファンドラッグとして現在認可されている。ＳＣＩＤは、ＳＣＩＤ患者における内因性ＡＤＡの欠損によって生じることが示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】米国特許第６，２０７，８７６号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｒｅｄｄ，２００２，Ａｓｔｈｍａ Ｏｃｃｕｒｅｎｃｅ，Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ １１０ Ｓｕｐｐｌ ４，ｐｐ ５５７−５６０
【非特許文献２】Ｖｏｇｅｌ，１９９７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７６：１６４３−１６４６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
このように、前記の理由のすべてについて、上に列記したような肺疾患のための新しい治療、およびそのような疾患を治療するための吸入剤「アダジェン」の投与の成功が長期にわたり必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患および関連症状など、アデノシンデアミナーゼにより媒介される肺疾患を、それを必要とする哺乳動物において治療する方法を提供する。代替的な態様では、本発明は、アデノシン濃度の上昇に関連する肺疾患を治療する方法を提供する。本方法は、アデノシンデアミナーゼを有効量で、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。本明細書で意図される方法は、疾患が緩和されるまでの長期の連日投与を含む、１日以上にわたり１日１回以上、アデノシンデアミナーゼを投与することを含む。この実施形態の一部の態様では、アデノシンデアミナーゼは吸入または注入によって投与される。一部の好ましい態様では、酵素は、エアロゾルまたは乾燥粉末として、十分量の酵素を肺送達するため、当分野で認識される装置、すなわち吸入器などを用いて、吸入によって投与される。あるいは、アデノシンデアミナーゼまたはその複合体は、静脈内経路などを介して非経口的に投与される。
【００１３】
本発明のさらなる態様では、アデノシンデアミナーゼは、ウシ関連試料、ヒト関連試料または他の適当な哺乳動物関連試料から得ることができる。アデノシンデアミナーゼの組換え型もまた考えられる。
【００１４】
アデノシンデアミナーゼは、直鎖、分枝鎖またはマルチアームポリマーでありうるポリエチレングリコールなどのポリアルキレンオキサイドと複合体化されることが好ましい。適当なポリアルキレンオキサイドおよびＰＥＧは、約２，０００〜約４５，０００の範囲の分子量を有する。本発明の一部の特に好ましい態様では、ポリエチレングリコールと複合体化されたアデノシンデアミナーゼは、米国ニュージャージー州ブリッジウォーター所在のＥｎｚｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．社から入手可能な「アダジェン」（ペガデマーゼ（pegademase bovine））である。
本明細書に記載される通り、哺乳動物、好ましくはヒトへ投与されるアデノシンデアミナーゼの量は、血漿ＡＤＡ活性（トラフ濃度）を約１５〜約３５μｍｏｌ／時間／ｍＬ（３７℃にてアッセイ）を維持するのに十分な量であり；注入前サンプルで測定した正常アデノシン濃度と比較して、血球容量における赤血球ｄＡＴＰで≦約０．００５〜約０．０１５μｍｏｌ／ｍＬ、または総赤血球アデニンヌクレオチド（すなわち、ＡＴＰ＋ｄＡＴＰ含量）で＜約１％のように、アデノシンの減少を示した。言い換えれば、患者に投与されたアデノシンデアミナーゼの量は、肺アデノシン濃度を約１０ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満に低下させるのに十分な量であり、より好ましくは肺アデノシン濃度を約５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質に低下させるのに十分な量である。
【００１５】
本発明の代替的な実施形態は、第２の薬理学的に活性な薬剤を有効量でアデノシンデアミナーゼと組み合わせて、それを必要とする患者へ投与することを含む。適当な第２の薬理学的に活性な薬剤は、テオフィリンなどの気管支拡張薬、またはサルメテロール、アルブテロールまたはテルブタリンなど、β−アドレナリン作動性を有する他のよく知られた気管支拡張薬を含む。
本発明のさらに別の態様は、哺乳動物の肺疾患を治療するためのキット、すなわち、アデノシンデアミナーゼおよび気管支拡張薬を含む吸入製剤、および、本明細書に記載される吸入製剤および推進剤を含む、肺症状の治療用途に適する吸入器を含む。
【００１６】
本発明の目的では、「アデノシン」の語は、アデノシンおよびデオキシアデノシンを意味するものと解されるべきである。。アデノシンには、ＡＭＰ、ＡＤＰ、ＡＴＰ、ｄＡＭＰ、ｄＡＤＰまたはｄＡＴＰの形態で存在するアデノシンおよびデオキシアデノシンも含まれる。
【００１７】
本発明の目的では、「残基」の語は、別の化合物との置換反応を受けた後に残る、化合物、すなわちＰＥＧ、オリゴヌクレオチドなどの部分を意味するものと解されるべきである。。
【００１８】
本発明の目的において、本明細書では、「ポリマー残基」または「ＰＥＧ残基」の語は、他の化合物、部分などとの反応を受けた後に残る、それぞれポリマーまたはＰＥＧの部分を意味するものと解されるべきである。。
【００１９】
本発明の目的において、本明細書では、「アルキル」の語は、直鎖、分枝鎖、および環状アルキル基を含む、飽和脂肪族炭化水素のことをいう。「アルキル」の語はまた、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル基を含む。好ましくは、アルキル基は１から１２個の炭素を有する。より好ましくは、炭素約１から７個、さらにより好ましくは炭素約１から４個の低級アルキルである。アルキル基は置換または非置換でありうる。置換されている場合は、置換基は好ましくは、ハロ、オキシ、アジド、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アルキル−チオ、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、アルキルアミノ、トリハロメチル、ヒドロキシル、メルカプト、ヒドロキシ、シアノ、アルキルシリル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル、アリール、およびアミノ基を含む。
本発明の目的において、本明細書では、「置換」の語は、ハロ、オキシ、アジド、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アルキル−チオ、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、アルキルアミノ、トリハロメチル、ヒドロキシル、メルカプト、ヒドロキシ、シアノ、アルキルシリル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル、アリール、およびアミノ基の群に由来する部分の１つを付加するか、またはそれで官能基または化合物に含まれる１つ以上の原子を置き換えることをいう。
【００２０】
本明細書では「アルケニル」の語は、直鎖、分枝鎖、および環状基を含む、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む基のことをいう。好ましくは、アルケニル基は約２から１２個の炭素を有する。より好ましくは、炭素約２から７個、さらにより好ましくは炭素約２から４個の低級アルケニルである。アルケニル基は置換または非置換でありうる。置換されている場合は、置換基は好ましくは、ハロ、オキシ、アジド、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アルキル−チオ、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、アルキルアミノ、トリハロメチル、ヒドロキシル、メルカプト、ヒドロキシ、シアノ、アルキルシリル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル、アリール、およびアミノ基を含む。
【００２１】
本明細書では「アルキニル」の語は、直鎖、分枝鎖、および環状基を含む、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含む基のことをいう。好ましくは、アルキニル基は約２から１２個の炭素を有する。より好ましくは、炭素約２から７個、さらにより好ましくは炭素約２から４個の低級アルキニルである。アルキニルは置換または非置換でありうる。置換されている場合は、置換基は好ましくは、ハロ、オキシ、アジド、ニトロ、シアノ、アルキル、アルコキシ、アルキル−チオ、アルキル−チオ−アルキル、アルコキシアルキル、アルキルアミノ、トリハロメチル、ヒドロキシル、メルカプト、ヒドロキシ、シアノ、アルキルシリル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、Ｃ１−６ヒドロカルボニル、アリール、およびアミノ基を含む。「アルキニル」の例は、プロパルギル、プロピン、および３−ヘキシンを含む。
本明細書では「アリール」の語は、少なくとも１つの芳香族環を含む、芳香族炭化水素環系のことをいう。芳香族環は、随意的に、他の芳香族炭化水素環または非芳香族炭化水素環と縮合または結合されうる。アリール基の例は、たとえば、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレンおよびビフェニルを含む。アリール基の好ましい例は、フェニルおよびナフチルを含む。
【００２２】
本明細書では「シクロアルキル」の語は、Ｃ３−８環状炭化水素のことをいう。シクロアルキルの例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む。
【００２３】
本明細書では「シクロアルケニル」の語は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含むＣ３−８環状炭化水素のことをいう。シクロアルケニルの例は、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、１，３−シクロヘキサジエニル、シクロヘプテニル、シクロヘプタトリエニル、およびシクロオクテニルを含む。
【００２４】
本明細書では「シクロアルキルアルキル」の語は、Ｃ３−８シクロアルキル基で置換されたアルキル基のことをいう。シクロアルキルアルキル基の例は、シクロプロピルメチルおよびシクロペンチルエチルを含む。
【００２５】
本明細書では「アルコキシ」の語は、酸素架橋を介して親分子部分に結合した、記載される炭素原子数のアルキル基のことをいう。アルコキシ基の例は、たとえば、メトキシ、エトキシ、プロポキシおよびイソプロポキシを含む。
【００２６】
本明細書では「アルキルアリール」基は、アルキル基で置換されたアリール基のことをいう。
【００２７】
本明細書では「アラルキル」基は、アリール基で置換されたアルキル基のことをいう。
【００２８】
本明細書では「アルコキシアルキル」基の語は、アルコキシ基で置換されたアルキル基のことをいう。
【００２９】
本明細書では「アルキル−チオ−アルキル」の語は、アルキル−Ｓ−アルキルチオエーテル、たとえばメチルチオメチルまたはメチルチオエチルのことをいう。
【００３０】
本明細書では「アミノ」の語は、１つ以上の水素ラジカルの有機ラジカルによる置換によってアンモニアから生じる、当分野で公知である通りの窒素含有基のことをいう。たとえば、「アシルアミノ」および「アルキルアミノ」の語は、それぞれアシルおよびアルキル置換基を有する特定のＮ−置換有機ラジカルのことをいう。
【００３１】
本明細書では「アルキルカルボニル」の語は、アルキル基で置換されたカルボニル基のことをいう。
【００３２】
本明細書では「ハロゲン」または「ハロ」の語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素のことをいう。
【００３３】
本明細書では「ヘテロシクロアルキル」の語は、窒素、酸素、および硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む非芳香族環系のことをいう。ヘテロシクロアルキル環は、随意的に、他のヘテロシクロアルキル環および／または非芳香族炭化水素環と融合または付加されうる。好ましいヘテロシクロアルキル基は、３〜７員である。ヘテロシクロアルキル基の例は、たとえば、ピペラジン、モルホリン、ピペリジン、テトラヒドロフラン、ピロリジン、およびピラゾールを含む。好ましいヘテロシクロアルキル基は、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、およびピロリジニルを含む。
【００３４】
本明細書では「ヘテロアリール」の語は、窒素、酸素、および硫黄から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む芳香族環系のことをいう。ヘテロアリール環は、１つ以上のヘテロアリール環、芳香族または非芳香族炭化水素環またはヘテロシクロアルキル環と融合または付加されうる。ヘテロアリール基の例は、たとえば、ピリジン、フラン、チオフェン、５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリンおよびピリミジンを含む。ヘテロアリール基の好ましい例は、チエニル、ベンゾチエニル、ピリジル、キノリル、ピラジニル、ピリミジル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、フラニル、ベンゾフラニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピロリル、インドリル、ピラゾリル、およびベンゾピラゾリルを含む。
【００３５】
本明細書では「ヘテロ原子」の語は、窒素、酸素、および硫黄のことをいう。
【００３６】
一部の実施形態では、置換アルキルはカルボキシアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ヒドロキシアルキルおよびメルカプトアルキルを含み；置換アルケニルはカルボキシアルケニル、アミノアルケニル、ジアルケニルアミノ、ヒドロキシアルケニルおよびメルカプトアルケニルを含み；置換アルキニルはカルボキシアルキニル、アミノアルキニル、ジアルキニルアミノ、ヒドロキシアルキニルおよびメルカプトアルキニルを含み；置換シクロアルキルは４−クロロシクロヘキシルなどの部分を含み；アリールはナフチルなどの部分を含み；置換アリールは３−ブロモフェニルなどの部分を含み；アラルキルはトリル（ｔｏｌｙｌ）などの部分を含み；ヘテロアルキルはエチルチオフェンなどの部分を含み；置換ヘテロアルキルは３−メトキシ−チオフェンなどの部分を含み；アルコキシはメトキシなどの部分を含み；およびフェノキシは３−ニトロフェノキシなどの部分を含む。ハロはフルオロ、クロロ、ヨードおよびブロモを含むものと解されるべきである。。
【００３７】
本発明の目的では、「正の整数」は１と等しいかまたは１より大きい整数を含むものと解されるべきであり、当業者に理解されるように、当業者にとって合理的範囲内である。
【００３８】
本発明の目的では、「結合した」の語は、１つの基と別の基との、共有（好ましくは）または非共有結合、すなわち化学反応の結果としての結合を含むものと解されるべきである。。
【００３９】
本発明の目的では、「有効量」および「十分量」の語は、当業者に理解される効果として、目的の効果または治療効果を達成する量を意味するものとする。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１Ａ】実施例１に記載される肺炎症および線維症におけるアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の治療効果。
【図１Ｂ】実施例１に記載される肺炎症および線維症におけるアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の治療効果。
【図２】実施例２に記載される肺線維症を有するマウスにおけるアデノシン濃度に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の効果。
【図３】実施例３に記載される肺線維症を有するマウスにおける体重減少に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の効果。
【図４Ａ】実施例４に記載される肺線維症を有するマウスにおける炎症に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の治療効果。
【図４Ｂ】実施例４に記載される肺線維症を有するマウスにおける炎症に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の治療効果。
【図５】実施例５に記載される肺線維症を有するマウスにおけるコラーゲン産生に対するアデノシンデアミナーゼポリマー複合体の効果。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
したがって、本発明は、患者の組織および／または体液に存在するアデノシンの量を低減するのに十分な量および期間にわたり、ＡＤＡ酵素を、それを必要とする患者に投与することによる、たとえば、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症、およびＣＯＰＤを含む肺疾患および障害の治療のための新規の方法および組成物を提供する。ＡＤＡ酵素はポリマー複合体化されていることが好ましい。別の実施形態では、ＡＤＡ酵素は注入または吸入によって投与される。基礎となる肺病理を持続する内因性アデノシンの存在に依存する肺疾患過程では、投与されたＡＤＡによる内因性アデノシンの十分な低減が、疾患の症状および／または徴候を治療する。
【００４２】
本明細書では、「アデノシンデアミナーゼに媒介される肺疾患」とは、投与経路にかかわらず、ＡＤＡ、またはそれらの活性画分などの投与による利益を得る、任意の肺疾患、症状または障害を広く含むものと解されるべきである。。そのような肺疾患は、肺、細気管支、肺胞または関連する組織におけるアデノシン濃度の上昇に厳密に関連しているものに限定されない。
【００４３】
本発明の方法に従ったＡＤＡ酵素の投与は、「予防」または「治療」目的のいずれかでありうる。予防的に提供される場合、ＡＤＡ酵素は、何らかの肺症状より前に提供される。本薬剤の予防的投与は、以後の何らかの肺症状を防止または減弱させるのに役立つ。治療的に提供される場合、ＡＤＡ酵素は喘息の症状の発生時に（またはすぐ後に）提供される。ＡＤＡ酵素の治療的投与は、何らかの実際の肺症状発作を減弱させる役割を果たす。本発明の方法は、したがって、予測される肺症状の発生前に（予想される症状の重症度、持続時間または範囲を減弱させるように）、または症状の開始前に実施されうる。
【００４４】
さらに別の態様では、本明細書に記載される方法によるとＡＤＡ複合体は、化学療法剤治療と同時にまたは連続的に組み合わせて使用されうる。化学療法剤によって重度の合併症が肺に生じうる。たとえば、ＢＬＥＮＯＸＡＮＥの銘柄で販売されているブレオマイシンは、肺線維症を引き起こし、肺機能を障害することが知られている。本明細書に記載されるＡＤＡ複合体は、化学療法に随伴する肺疾患を減弱、低減または防止できる。したがって、本明細書に記載される方法に従ったＡＤＡ酵素は、化学療法剤の投与前に、投与と同時にまたはその後に、投与されうる。
【００４５】
肺疾患の治療の成功は、ＡＤＡ治療なしで観察した場合と比較して、アデノシン、炎症細胞、および／または当業者に考えられる他の臨床マーカーを含む線維症の少なくとも２０％または好ましくは３０％、より好ましくは４０％以上（すなわち、５０％または８０％）の減少が実現した場合に、起こると判断される。他の評価項目としては、細胞外マトリクス産生沈着の程度、線維芽細胞数、プロテイナーゼ−抗プロテイナーゼ酵素濃度、線維化誘導性媒介因子の濃度、および肺閉塞の組織病理的証拠が挙げられる。気道リモデリングおよび／または破壊もまた扱いやすい評価項目である。
【００４６】
Ａ．ＡＤＡポリマー複合体
概して、全身または局所アデノシン濃度を低減させるための方法および組成物が、肺系の疾患または障害を治療するために提供される。
【００４７】
一態様では、本発明に従った用途の医薬組成物は、ＡＤＡポリペプチド、またはそれらの変異体、多型および誘導体を含む、その活性画分を含む。好ましくは、ＡＤＡはウシまたはヒトＡＤＡであるが、他の哺乳動物種も考えられる。好ましい一実施形態では、ＡＤＡはウシ関連試料から精製される。天然に存在するウシＡＤＡのＣｙｓ７４残基がシステインでキャッピングまたは保護され、配列番号：１のＡＤＡをコードする遺伝子から予測される６個のＣ末端残基が存在しない。動物起源のＡＤＡが用いられる態様では、それは精製されるなど、すなわちウシなどから、当業者に既知の方法を用いて得られる。さらなる態様では、本発明は、予測される６個のＣ末端残基を含むか含まないかに関わらず、別の対立遺伝子および多型を含む、天然ウシＡＤＡの代替的な変異体を使用しうることが考えられる。ウシＡＤＡ多型は、たとえば、１９８位のリジンの代わりにグルタミン、２４５位のスレオニンの代わりにアラニン、３５１位のグリシンの代わりにアルギニンを含む。
【００４８】
別の態様では、ＡＤＡは組換えＡＤＡである。たとえば、アデノシンデアミナーゼは、配列番号：２または配列番号：４に従ったＤＮＡ分子から翻訳された、組換えウシアデノシンデアミナーゼ（配列番号：１）または組換えヒトアデノシンデアミナーゼ（「ｒｈＡＤＡ」、配列番号：３）でありうる。随意的に、組換えアデノシンデアミナーゼは、ウシアデノシンデアミナーゼの６個のＣ末端残基を欠如しうる。
【００４９】
本発明のさらなる態様では、ＡＤＡ酵素の誘導体は、非変異組換えＡＤＡ酵素と比較して安定性が増強されるように変異した、組換え産生されたＡＤＡ酵素を含みうる。これらは、溶媒に曝露された酸化可能なＣｙｓ残基を、適当な酸化できないアミノ酸残基で置換するため、たとえば、配列番号：１および／または、上述の多型のうちの１つ以上を有する配列番号：１から改変された組換えＡＤＡ酵素を含む。そのような酸化できないアミノ酸残基には、任意の当分野で公知の天然アミノ酸残基および／または任意の当分野で公知のそれらの誘導体が含まれる。組換えＡＤＡにおいて、随意的にシステインと置換される、好ましい天然に存在するアミノ酸は、たとえば、アラニン、セリン、アスパラギン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、フェニルアラニン、スレオニン、チロシン、およびバリンを含む。セリンが最も好ましい。一部の好ましい組換えＡＤＡ変異タンパク質酵素は、配列番号：６または配列番号：８に従ったＤＮＡ分子から翻訳された配列番号：５（ウシＡＤＡ）および配列番号：７（ヒトＡＤＡ）で表される。そのような組換えＡＤＡ変異タンパク質、およびこれらのタンパク質の産生および精製に関するさらなる詳細は、参照することにより本明細書にその全体が含まれる、同一出願人が所有する米国仮特許出願第６０／９１３，００９号および同第６０／９１３，０３９号の各明細書によって提供される。ベクターおよび精製方法に関する具体的な詳細がそれらの明細書に、特に実施例の項に、とりわけ'００９号明細書の実施例１〜４に示されている。
さらなる態様では、組換えＡＤＡは、溶媒に曝露された酸化可能なＣｙｓ残基をキャッピングすることによって安定化されうる。組換えＡＤＡのシステイン残基のような酸化可能なアミノ酸は、酸化グルタチオン、ヨードアセトアミド、ヨード酢酸、システイン、他のジチオールおよびそれらの混合物などのキャッピング剤によって、ＡＤＡタンパク質を実質的に不活性化することなく、キャッピングされうる。組換えＡＤＡのキャッピングは、ＡＤＡを安定化し、分解から保護する。ＡＤＡのキャッピングの詳細は、参照することにより本明細書にその内容が含まれ、る米国特許出願第１１／７３８，０１２号明細書に記載されている。
【００５０】
好ましい態様では、ＡＤＡポリペプチドは、実質的に非抗原性なポリマー、好ましくはポリアルキレンオキサイド（「ＰＡＯ」）と複合体化される。
【００５１】
ＡＤＡ−ポリマー複合体は、一般的に式（Ｉ）に対応し：
（Ｉ） [Ｒ−ＮＨ]Ｚ−（ＡＤＡ）
ここで（ＡＤＡ）は、アデノシンデアミナーゼまたはその活性画分であって、ウシなどに由来する精製された形態または組換えＡＤＡのいずれかを表し；
ＮＨ−は、ポリマーと結合するＡＤＡ上に見られるアミノ酸のアミノ基であり；
ｚは正の整数、好ましくは約１〜約８０であり；
Ｒは、放出可能または放出不可能な形態であるか否かに関わらず、ＡＤＡに結合している実質的に非抗原性のポリマー残基を含む。
【００５２】
より好ましい態様では、ポリマーは、直鎖、分枝鎖またはマルチアームＰＥＧでありうるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。一般的に、ポリエチレングリコールは下記の式を有し：
−Ｏ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−
ここで（ｎ）は正の整数であり、好ましくは約１０〜約２，３００である。ポリマーの平均分子量は約１０００〜約１００，０００の範囲である。より好ましくは、ポリマーは約５，０００〜約４５，０００、さらにより好ましくは、５，０００〜約２０，０００の平均分子量を有する。最も好ましくは、ＰＥＧの分子量は、「アダジェン」（ＰＥＧ化ウシアデノシンデアミナーゼ）に見られるように、約５，０００である。当業者の要望に合わせて、他の分子量もまた考えられる。
【００５３】
あるいは、本発明のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基部分は下記の構造で表すことができる：
【化１】
【００５４】
ここで：
Ｙ７１およびＹ７３は独立してＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、ＮＲ７３または結合であり；
Ｙ７２はＯ、Ｓ、またはＮＲ７４であり；
Ｒ７１−７４は、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、Ｃ３−１９分枝アルキル、Ｃ３−８シクロアルキル、Ｃ１−６置換アルキル、Ｃ２−６置換アルケニル、Ｃ２−６置換アルキニル、Ｃ３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ１−６ヘテロアルキル、Ｃ１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシから独立して選択され；
（ａ７１）、（ａ７２）、および（ｂ７１）は独立してゼロまたは正の整数、好ましくは０〜６、およびより好ましくは１であり；
（ｎ）は約１０〜約２３００の整数である。
【００５５】
一例として、ＰＥＧは下記の非限定的な方法で官能化されうる：
−Ｃ（＝Ｙ７４）−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、
−Ｃ（＝Ｙ７４）−Ｙ−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、
−Ｃ（＝Ｙ７４）−ＮＲ１１−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、
−ＣＲ７５Ｒ７６−（ＣＨ２）ｍ−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−
ここで
Ｒ７５およびＲ７６はＨ、Ｃ１−６アルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキルおよび置換Ｃ１−６アルキルから独立して選択され；
ｍはゼロであるかまたは正の整数であり、好ましくは１であり；
Ｙ７４はＯまたはＳであり；
ｎは重合度を表す。
【００５６】
さらなる態様では、複合体のポリマー部分は、ＡＤＡの複数の結合点を提供できるものでありうる。あるいは、複数のＰＥＧがＡＤＡに結合されうる。
【００５７】
ＰＥＧ化ＡＤＡの薬物動態および他の性質は、必要に応じて、ＰＥＧ分子量、リンカー化学および酵素に対するＰＥＧ鎖の比率の操作によって、目的の臨床用途に調整されうる。
【００５８】
これらの態様では、ＡＤＡは、当分野で知られているさまざまなリンカーを介して放出可能なまたは放出不可能な形態で非抗原性ポリマーと結合されうる。
【００５９】
放出可能なポリマー系は、ベンジル脱離またはトリメチルロックラクトン化を基礎とすることができる。放出可能なポリマー系の、活性化されたポリマーリンカーは、参照することにより本明細書に含まれる、本願と同一譲受人に譲渡された米国特許第６，１８０，０９５号、同第６，７２０，３０６号、同第５，９６５，１１９号、同第６，６２４，１４２号および同第６，３０３，５６９号の各明細書に従って調製されうる。あるいは、ＡＤＡポリマー複合体は、参照することにより本明細書に含まれる、同一出願人による米国特許第７，１２２，１８９号および同第７，０８７，２２９号の各明細書および米国特許出願第１０／５５７，５２２号、同第１１／５０２，１０８号、および同第１１／０１１，８１８号の各明細書に記載されるもののような、ある種のビシンポリマー残基を用いて作製される。考えられる他の放出可能なポリマー系はまた、参照することにより本明細書に含まれる国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ０７／７８６００号明細書に記載されている。
本明細書で意図されている放出可能なまたは放出不可能なＡＤＡポリマー複合体の具体例は、参照することにより本明細書に含まれる米国仮特許出願第６０／９１３，０３９号明細書に記載されている。
【００６０】
本発明の目的では、それらのポリマーは、ＡＤＡを付加するために官能化または活性化されるべきである。当業者は、過度の実験なしに、付加のためのポリマーのさまざまな活性化型を使用できる。一部の好ましい活性化ＰＥＧは、参照することにより本明細書に含まれる、同一出願人による米国特許第５，１２２，６１４号、同第５，３２４，８４４号、同第５，６１２，４６０号および同第５，８０８，０９６号の各明細書に開示されるものを含む。たとえば、Ｚａｌｉｐｓｋｙは、米国特許第５，１２２，６１４号明細書に、Ｎ−スクシンイミドカルボナート誘導体への変換によるＰＥＧの活性化について記載している（「ＳＣ−ＰＥＧ」）。
【００６１】
当業者に理解される通り、そのような複合体化反応は、典型的には適当な緩衝液中で数倍モル過剰の活性化ＰＥＧを用いて実施される。上述のＳＣ−ＰＥＧのような直鎖ＰＥＧを用いて作製される一部の好ましい複合体は、平均して、酵素当たり約２０〜約８０のＰＥＧ鎖を含みうる。結果として、これらについては、数百倍、たとえば、２００〜１０００倍のモル過剰が使用されうる。分枝鎖ＰＥＧおよび酵素に付加されたＰＥＧについて用いられるモル過剰はより低くなり、これは、本明細書に記載されるものと同一の記載をする特許および特許出願に記載される技法を用いて決定されうる。
【００６２】
これらの態様では、ポリアルキレンオキサイドは、たとえば、炭酸スクシンイミジル、チアゾリジンチオン、ウレタン、およびアミドを基礎とするリンカーを含むリンカー化学を介してタンパク質と複合体化される。ポリアルキレンオキサイドは、好ましくは、ウシから精製されたＡＤＡまたはシステイン安定化された組換えヒトアデノシンデアミナーゼ上のＬｙｓのεアミノ基と共有結合しているが、共有結合のための他の部位もまた当分野でよく知られている。キャッピングされたＡＤＡポリマー複合体は、酵素上のＬｙｓのεアミノ基と結合した少なくとも５つのポリエチレングリコール鎖を含みうるが、しかし代替的に、酵素上のＬｙｓのεアミノ基と結合した約１１〜１８のＰＥＧ鎖を含みうる。
【００６３】
「アダジェン」のＡＤＡは、リジン結合を介して、酵素分子あたり約１１〜約１８のＰＥＧ分子と複合体化している一方、ＰＥＧのＡＤＡに対する比は、任意の特定の臨床状況に適合するよう、結合した複合体の物理的および動態的特性を改変する目的で、変化させることができる。
本発明の追加の態様は、本明細書に記載される治療の方法に有用な複合体を提供するために、ＡＤＡ酵素またはその断片と複合体化させるための任意の市販のまたは報告された活性化ＰＥＧまたは同様のポリマーを用いることを含むことが前記から明らかとなる。たとえば、参照することにより本明細書にその全体が含まれる、２００４年のＮｅｋｔａｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｅｇｙｌａｔｉｏｎカタログ（Ｎｅｋｔａｒ社（米国カリフォルニア州サンカルロス所在））を参照。
【００６４】
別の一態様では、活性化ポリマーリンカーは、それぞれ参照することにより本明細書に含まれる、同一出願人による米国特許第５，６４３，５７５号、同第５，９１９，４５５号、同第６，１１３，９０６号および同第６，５６６，５０６号の各明細書に記載されるもののような分枝鎖ポリマー残基を用いて調製される。そのようなポリマーの非限定的な一覧は、下記の構造を有するポリマー系（ｉ）〜（ｖｉｉ）に対応する：
【化２−１】
【化２−２】
【００６５】
ここで
Ｙ６１−６２は独立してＯ、ＳまたはＮＲ６１であり；
Ｙ６３はＯ、ＮＲ６２、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ２であり
（ｗ６２）、（ｗ６３）および（ｗ６４）は独立して、０または正の整数、好ましくは約０〜約１０、より好ましくは約１〜約６であり；
（ｗ６１）は０または１であり；
ｍＰＥＧはメトキシＰＥＧであり
ここでＰＥＧは既に規定されており、ポリマー部分の総分子量は約１，０００〜約１００，０００であり；
Ｒ６１およびＲ６２は独立して、Ｒ７３に使用されうるのと同じ部分である。
【００６６】
Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎの２００１年カタログ“Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ ａｎｄ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ”に記載の「星状ＰＥＧ」およびマルチアームＰＥＧなどのマルチアームＰＥＧ誘導体もまた有用である。日油株式会社の薬物送達システムカタログ（Drug Delivery System Catalog）第８版、２００６年４月も参照のこと。前記のそれぞれの開示は参照することにより本明細書に含まれる。マルチアームポリマーは、４つ以上のポリマーアーム、好ましくは４つまたは８つのポリマーアームを含む。
説明の目的であって限定するものではないが、マルチアームポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基は下記でありうる：
【化３】
【００６７】
ここで
（ｘ）は０および正の整数、すなわち約０〜約２８であり；
（ｎ）は重合度である。
【００６８】
本発明の特定の一実施形態では、マルチアームＰＥＧは下記の構造を有し：
【化４】
【００６９】
ここで（ｎ）は正の整数である。本発明の好ましい一実施形態では、ポリマーは約１，０００〜約１００，０００、好ましくは５，０００〜４５，０００の総分子量を有する。
【００７０】
別の特定の一実施形態では、マルチアームＰＥＧは下記の構造を有し：
【化５】
【００７１】
ここで（ｎ）は正の整数である。
【００７２】
ポリマーは、米国特許第５，１２２，６１４号または同第５，８０８，０９６号の各明細書に記載される活性化法を用いて、適当に活性化されたポリマーへ変換されうる。具体的には、そのようなＰＥＧは次式のものでありうる：
【化６】
【００７３】
ここで：
（ｕ’）は正の整数であり；残基の３つまでの終端部分がメチルまたは他の低級アルキルでキャッピングされている。
【００７４】
一部の好ましい実施形態では、４つすべてのＰＥＧアームは、ＡＤＡとの結合を容易にするために、適当な活性化基に変換されうる。変換前のそのような化合物としては下記のものが挙げられる：
【化７−１】
【化７−２】
【００７５】
本明細書に含まれるポリマー物質は、好ましくは室温で水溶性である。そのようなポリマーの非限定的なリストには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレンオキサイドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらの共重合体および、ブロック共重合体の水溶性が維持されるように提供された、それらのブロック共重合体が含まれる。
【００７６】
さらなる実施形態では、およびＰＡＯ系ポリマーの代替として、他の適当なポリマーが、デキストラン、ポリビニルアルコール、炭化水素系ポリマー、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリアルキレンオキサイド、および／またはそれらの共重合体などの１つ以上の有効な非抗原性材料の中から、それぞれ随意的に選択される。参照することによりその内容が本明細書に含まれる、本願と同一譲受人に譲渡された米国特許第６，１５３，６５５号明細書も参照。ＰＥＧなどのＰＡＯについて本明細書に記載されたのと同じ種類の活性化が用いられることが、当業者に理解されよう。当業者はさらに、前記リストが単に説明のためであり、本明細書に記載される性質を有するすべてのポリマー材料が意図されること、およびポリプロピレングリコールなどの他のポリアルキレンオキサイド誘導体もまた意図されることについても、認識するであろう。
【００７７】
Ｂ．医薬組成物
注射可能な用途に適したＡＤＡまたはＡＤＡポリマー−複合体の医薬品形態としては、滅菌水溶液または分散剤；ゴマ油、ピーナッツ油またはプロピレングリコール水溶液を含む製剤；および注射可能な滅菌溶液または分散剤の即時調製用の滅菌粉末が挙げられる。すべての場合において、製剤は滅菌されていなければならず、シリンジから容易に送達できる程度に流体でなければならない。これは製造および保存の条件下で安定でなければならず、細菌 および 真菌などの微生物の混入作用に対して保存されなければならない。
遊離塩基または薬理学的に許容可能な塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適当に混合した水で調製されうる。分散剤もまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物、ならびに油で調製されうる。好ましい一実施形態では、ＡＤＡポリペプチドはＰＥＧと複合体化されている。通常の保存および使用条件下では、これらの調製物には、微生物の増殖を防ぐための保存料が含まれる。
上記のようなＡＤＡ酵素は、中性または塩の形態の組成物に製剤されうる。薬学的に許容可能な塩は、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ酸を用いて形成される）を含む。一部の適当な無機酸は、たとえば、塩酸またはリン酸、あるいは酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸を含む。遊離カルボキシル基で形成される塩は、たとえば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄などの無機塩基、および、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から誘導することができる。
【００７８】
担体も、たとえば、水、エタノール、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、それらの適当な混合物、および植物油を含む、溶媒または分散媒でありうる。たとえば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散剤の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、適当な流動性を維持することができる。微生物の作用の防止は、さまざまな抗菌剤および抗真菌剤、たとえば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによって達成されうる。多くの場合、等張剤、たとえば、糖または塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射可能な組成物の持続的吸収は、たとえば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を、組成物に使用することによって達成されうる。
【００７９】
注射可能な滅菌溶液は、必要な量の活性化合物を、必要に応じて上に列挙されたさまざまな他の成分と共に適当な溶媒に組み込み、次いでろ過滅菌を行うことによって調製される。一般的に，分散剤は、さまざまな滅菌活性成分を、塩基性の分散媒および上に列挙された必要とされる他の成分を含む滅菌媒体に組み込むことによって調製される。注射可能な滅菌溶液を調製するための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、先に滅菌ろ過された溶液から、活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る、真空乾燥および凍結乾燥法である。
【００８０】
活性成分としてのペプチド治療薬の使用は、それぞれ参照することにより本明細書に含まれる、米国特許第４，６０８，２５１号；同第４，６０１，９０３号；同第４，５９９，２３１号；同第４，５９９，２３０号；同第４，５９６，７９２号；および同第４，５７８，７７０号の各明細書の技術によって、より詳細に説明される。
【００８１】
直接注入のための、さらに、または高度に、濃縮された溶液の調製もまた意図されているが、その際、溶媒としてＤＭＳＯを使用することにより、結果的に、極めて迅速な透過を生じ、高濃度の活性薬剤を小さい領域に送達することが見込まれる。
【００８２】
製剤に際して、溶液は、投与製剤に適合するような方法で、および治療的に有効な量で、投与される。製剤は、上記のような注射可能な溶液のタイプなど、さまざまな剤形で容易に投与されるが、しかし薬剤放出カプセルなどもまた使用されうる。
【００８３】
水溶液での非経口投与では、たとえば、溶液は必要に応じて適切に緩衝されるべきであり、液体希釈剤は、最初に十分な生理食塩水またはグルコースで等張にすべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下および腹腔内投与に特に適する。これに関連して、使用されうる滅菌水系媒体は、本開示に照らして当業者に理解されよう。たとえば、１用量を１ｍｌの等張ＮａＣｌ溶液に溶解し、１０００ｍｌの皮下注入液に加えるかまたは注入予定位置に注入されうる（たとえば、"Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th Edition,pages 1035−1038 and 1570-1580を参照）。用量のいくらかの変化は、治療される対象の状態に応じて必然的に生じる。いずれにせよ、投与の責任者が、個別の対象についての適当な用量を決定する。
ＡＤＡのＰＥＧ−複合体または他のＡＤＡを含む療法は、約１００Ｕ〜約３００Ｕ／ｍｌ、好ましくは約２５０Ｕ／ｍｌの量で含むように治療用混合物に製剤化され、ここで、活性１単位とは、併発性疾患の治療に適応されるように、２５℃およびｐＨ７．３において、毎分アデノシン１μＭをイノシンに変換するＡＤＡの量として定義される。
【００８４】
静脈内または筋肉内注射などの、非経口投与用に製剤された化合物に加えて、他の薬学的に許容可能な剤形は、たとえば、錠剤または経口投与用の他の固体；リポソーム製剤；徐放カプセル；および現在用いられる任意の他の剤形を含む。
【００８５】
さらに、眼科用製剤に用いられるのと同様の抗菌保存料、および適当な薬剤安定剤が、必要に応じて、製剤に含まれうる。さまざまな市販の経鼻製剤が知られており、たとえば、抗生物質および抗ヒスタミンが含まれ、これらは喘息の予防に用いられる。
【００８６】
ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体を注入によって提供する際には、一般的に、
１）血漿ＡＤＡ活性を約１０〜１００μｍｏｌ／時間／ｍＬ、好ましくは約１５〜約３５μｍｏｌ／時間／ｍＬ（３７℃にてアッセイ）の範囲に維持する；および
２）注入前サンプルで測定した正常アデノシン濃度と比較して、血球容量における赤血球アデノシン、すなわち、ｄＡＴＰで＜約０．００１〜０．０５７μｍｏｌ／ｍＬ、好ましくは約０．００５〜約０．０１５μｍｏｌ／ｍＬへの低下を示し、または総赤血球アデノシン（すなわち、ＡＴＰ＋ｄＡＴＰ含量）で＜約１％への低下を示す、
であろう用量を受益者に提供することが望ましい。ｄＡＴＰの正常値は約０．００１μｍｏｌ／ｍＬ未満である。
【００８７】
本明細書で意図される方法は、アデノシンデアミナーゼを１週間以上にわたり、週に１回以上（すなわち２回）、肺疾患が緩和されるまで投与することを含みうる。組成物は１日１回投与して差し支えなくの、または複数週治療プロトコルの一部として投与されうる複数回用量に分割されうる。
【００８８】
Ｃ．吸入による送達
肺への薬物送達は、液体ネブライザー、空気または他の推進剤たとえばＨＦＡ−１３４ａ（１，１，１，２−テトラフルオロエタン）を用いるエアロゾル系の定量吸入器（ＭＤＩ）を含む、さまざまな手法で達成されうる。乾燥粉末分散装置もまた利用可能である。乾燥粉末分散装置は、乾燥粉末として容易に製剤化される薬剤、特にタンパク質およびポリペプチドを送達するために用いられる。さもなければ不安定なタンパク質およびポリペプチドの多くが、単独でまたは適当な粉末担体と組み合わせて凍結乾燥粉末または噴霧乾燥粉末として安定に保存されうる。
肺アデノシン濃度を低減できる吸入用のＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素を患者に提供する際、投与される薬剤の用量は、患者の年齢、体重、身長、性別、一般的病状、病歴などの因子に応じて変動する。当業者は、吸入ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体、たとえば「アダジェン」を、臨床的エンドポイントを達成するのに有効な用量および期間投与すると同時に、生じうる任意の副作用を回避または最小限に抑えることによって、症状の低減を達成および維持する、所望の臨床的エンドポイントまで最初の用量を漸増する必要があることを理解するであろう。
【００８９】
たとえば、定用量系によってなど、乾燥粉末として投与される場合、用量は、酵素の量に基づいて、たとえば、約０．１０Ｕ／ｋｇ〜約３０Ｕ／ｋｇ、好ましくは約０．５Ｕ／ｋｇ〜約２０Ｕ／ｋｇ、より好ましくは約０．５Ｕ／ｋｇ〜約１０Ｕ／ｋｇ（すなわち患者体重ｋｇ当たり）、さらにより好ましくは約０．５Ｕ／ｋｇ〜約５Ｕ／ｋｇの範囲にわたる。ＡＤＡの投薬情報はまた、参照することにより本明細書に含まれる、「アダジェン」の処方薬説明書に記載されている。
噴霧化した溶液で投与される場合、用量は、たとえば、約０．０１Ｕ／ｋｇ〜約５Ｕ／ｋｇの範囲にわたる。約０．１Ｕ／ｋｇ〜約１Ｕ／ｋｇがさらに好ましい。
一部の実施形態では、吸入用のＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素は、経口的に、たとえば皮下、静脈内および／または筋肉内などの注射によって、および／または吸入によって投与される、当分野で知られた他の肺用の薬剤と組み合わせて、または併用療法として投与されうる。そのような薬剤は、参照することによりその全体が本明細書に含まれる、Goodman and Gilman's, the Pharmacological Basis of Therapeutics, Eleventh Edition, Publ.McGraw Hillにより詳細に記載されるような、気管支拡張剤糖質コルチコイドなどを含む。具体的には、これらの追加の薬剤としては、たとえば、メチルキサンチン（たとえばテオフィリン）、β−アドレナリン作動性アゴニスト（たとえばカテコールアミン、レゾルシノール、サリゲニン、およびエフェドリン）、たとえばアルブテロール、テルブタリンなどの選択的β−アドレナリン作動性アゴニスト、糖質コルチコイド（たとえばヒドロコルチゾン）、肺症状の治療に用いられる他の吸入ステロイド、クロモン（たとえばクロモグリク酸ナトリウム）および抗コリン薬（たとえばアトロピン）、または、肺疾患または障害の症状の治療に必要とされるこれらの薬剤の量を減らすことを目的とする、任意の他の肺用の薬剤が挙げられる。本明細書では、２つの化合物が、両方の化合物が患者の血清中に同時に検出されうるような近い時間間隔で投与される場合、ある化合物は、第２の化合物と共に、追加的に投与されるものと考えられている。上記のメチルキサンチン、β−アドレナリン作動性アゴニストなどの気管支拡張薬の前投与は、随意的に、吸入用のＡＤＡのＰＥＧ複合体の、細気管支および肺胞内の作用部位への透過を助けることが好ましい。したがって、本明細書で使用されうる適当な第２の薬理学的に活性な薬剤の非限定的なリストは、アミノフィリン、テオフィリン、ビトルテロール（bitolerol）、ジフィリン、ホルモテロール、イプラトロピウム、レバルブテロール、メタプロテレノール（metoproterenol）、ピルブテロール、サルメテロール、テルブタリン、および本明細書に記載される肺症状の治療に有用であることが当業者に知られている他の薬剤を含む。
【００９０】
１．吸入用ＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素の乾燥粉末送達
吸入用ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体は、たとえば、参照することによりそのすべてが本明細書に含まれる、米国特許第６，５０９，００６号、同第６，５９２，９０４号、同第７，０９７，８２７号および同第６，３５８，５３０号の各明細書に従った方法を用いて、ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体を含む溶液を噴霧乾燥することによって、乾燥分散用に調製される。これらの特許は、吸入による投与のためのタンパク質治療薬の分散を助ける方法および賦形剤を提供する。典型的な乾燥粉末の賦形剤は、分散を助けるためにＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体と混合される低分子炭化水素またはポリペプチドを含む。
【００９１】
乾燥粉末分散用の担体として有用な医薬賦形剤の種類は、有用な分散剤でもあるヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）などの安定剤、糖質、アミノ酸およびポリペプチドなどの増量剤；ｐＨ調整剤または緩衝剤；塩化ナトリウムなどの塩；などを含む。これらの担体は、結晶形または非晶形であって差し支えなく、または両者の混合物でありうる。
粉末と組み合わせることができる増量剤は、適合性の糖質，ポリペプチド，アミノ酸またはその組み合わせを含む。適当な糖質は、ガラクトース、Ｄ−マンノース、ソルボースなどの単糖；ラクトース、トレハロースなどの二糖；２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンなどのシクロデキストリン；およびラフィノース、マルトデキストリン、デキストランなどの多糖；マンニトール、キシリトールなどのアルジトールを含む。糖質の好ましい群は、ラクトース、トレハロース、ラフィノース、マルトデキストリン、およびマンニトールを含む。適当なポリペプチドは、アスパルテームを含む。アミノ酸はアラニンおよびグリシンを含み、グリシンが好ましい。
添加剤は、噴霧乾燥中の立体構造安定性のために、および粉末の分散性を改善するために、たとえば、トリプトファン、チロシン、ロイシン、フェニルアラニンなどの疎水性アミノ酸が含まれうる。適当なｐＨ調整剤または緩衝剤は、クエン酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウムなどの有機酸および塩基から調製される有機塩を含み；クエン酸ナトリウムが好ましい。
肺送達のための単位用量剤形は、上記の乾燥粉末入りの単位用量容器を含む。粉末は適当な用量容器内に、対象へ単位用量治療のための薬剤を提供するのに十分な量でセットされる。用量容器は、ガス流への分散によってエアロゾルを生じ、次いでそのように生じたエアロゾルを、治療を必要とする対象によるその後の吸入のためにマウスピースが着いたチャンバー内に捕捉する、乾燥粉末組成物のエアロゾル化を可能にする適当な吸入器に適合するものである。そのような用量容器は、乾燥粉末組成物を分散するためにガス（たとえば空気）流を容器内に導くことを可能にする、取り外し部分を有するゼラチンまたはプラスチックのカプセルなど、当分野で知られている組成物を封入する任意の容器を含む。そのような容器は、参照することによりその全体が本明細書に含まれる、米国特許第４，２２７，５２２号、同第４，１９２，３０９号、および同第４，１０５，０２７号の各明細書に示されるものによって例示される。適当な容器はまた、Ｇｌａｘｏ社のＶｅｎｔｏｌｉｎ Ｒｏｔｏｈａｌｅｒという銘柄の粉末吸入器またはＦｉｓｏｎのＳｐｉｎｈａｌｅｒという銘柄の粉末吸入器と共に使用されるものを含む。優れた防湿層を提供する別の適当な単位用量容器は、アルミニウム箔プラスチックラミネートから形成される。ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体粉末は、重量または体積で、成形可能なホイル（foil）の凹部に充填され、カバーホイル−プラスチックラミネートで密閉される。粉末吸入器と共に使用するためのそのような容器は、参照することにより本明細書に含まれる米国特許第４，７７８，０５４号明細書に記載され、また、Ｇｌａｘｏ社のＤｉｓｋｈａｌｅｒに使用されている。参照することによりその全体が本明細書に含まれる、米国特許第４，６２７，４３２号；同第４，８１１，７３１号；および同第５，０３５，２３７号の各明細書を参照。好ましい乾燥粉末吸入器は、共に参照することにより本明細書に含まれる、米国特許出願第０８／３０９，６９１号および同第０８／４８７，１８４号の各明細書に記載されるものである。後者の出願は国際公開第９６／０９０８５号パンフレットとして公開されている。
噴霧工程は、噴霧器のいくつかの従来の型のうち任意の１つを利用しうる。特に好ましいのは、下記により詳細に記載されるような１０μｍ未満のメジアン径を有する小滴を生成可能な、２液噴霧ノズルの使用である。噴霧ガスは、通常は、微粒子および他の汚染物質が除去されるようにろ過または清浄化されている空気である。代替的に、窒素などの他の気体が使用されうる。噴霧ガスは、噴霧ノズルを通じた送達のために、典型的にはゲージ圧で１７２４００Ｐａ（２５ｐｓｉｇ）を上回る圧に加圧され、好ましくはゲージ圧で３４４８００Ｐａ（５０ｐｓｉｇ）を上回る。噴霧ガス流は一般的に音速に制限されるが、送達圧力が高いと、結果として噴霧ガス密度の増加が生じる。そのような増加したガス密度は、噴霧操作中に生じる液滴サイズを低下させることが見出されている。より小さな液滴サイズは、結果的により小さな粒径を生じる。噴霧ガス流速、噴霧ガス圧、液流速などを含む噴霧条件は、位相ドップラー速度測定による測定で平均直径１１μｍ未満の液小滴を生じるように調節される。好ましい噴霧器設計および操作条件の定義では、液体スプレーの液滴径分布は、Ａｅｒｏｍｅｔｒｉｃ社の位相ドップラー粒径分析器（Ｐｈａｓｅ Ｄｏｐｐｌｅｒ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ）を用いて直接測定される。液滴径分布はまた、測定された乾燥粒径分布（Ｈｏｒｉｂａ Ｃａｐａ ７００）および粒子密度から計算されうる。これらの２つの方法の結果は互いによく一致する。好ましくは、噴霧された液滴は、５μｍ〜１１μｍ、より好ましくは６μｍ〜８μｍの範囲の平均直径を有する。気：液流量比は好ましくは５より大に維持され、より好ましくは８〜１０の範囲である。気：液流量比のこの範囲内の調節は、粒子の液滴サイズの調節にとって特に重要である。
【００９２】
液体媒体は、適当な液体担体中の、ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体の溶液、懸濁液、または他の分散液でありうる。ＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体は、薬学的に許容可能な担体と組み合わせて液体溶媒中で溶液として存在すること、および、その液体担体は水であることが好ましい。しかしながら、有機溶媒、エタノールなどの他の液体溶媒を使用することが可能である。総溶解固形分（最終乾燥粒子中に存在しうる、高分子および他の担体、賦形剤などを含む）は、幅広い濃度で存在する可能性があり、典型的には０．１％重量〜１０％重量で存在する。しかしながら、通常は、吸入サイズ範囲内の粒子を生じ、所望の分散特性を有する固体濃度を最大化することが望ましく、典型的には固体濃度は０．５％〜１０％、好ましくは１．０％〜５％の範囲にわたる。比較的低濃度のＡＤＡまたはＡＤＡのＰＥＧ−複合体を含む液体媒体は、比較的小さい直径を有する乾燥粒子を結果として生じる。
上記の方法と共に使用する装置は、たとえば、前掲の米国特許第７，０９７，８２７号明細書に記載されている。
【００９３】
２．溶液または懸濁液からのＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素のエアロゾル送達
肺症状の治療において、ＡＤＡまたはＰＥＧ−複合体化ＡＤＡ酵素は、好ましくは、吸入器またはネブライザーを介して、サイズ範囲約１μｍ〜約５μｍのエアロゾルを送達するのに適した製剤で、喘息症状の重症度、程度または持続時間を減少または減弱するのに十分な量で、前掲の投与指針を用いて、投与される。一部の好ましい態様では、ＰＥＧ化されているか否か、にかかわらずＡＤＡ含有製剤の粒径は約２．５μｍである。
【００９４】
エアロゾル化吸入による薬剤の送達のためのハードウェアおよび製剤としては、たとえば、参照することにより本明細書に含まれる米国特許第５，６０５，６７４号明細書に記載されるような、計量バルブを備えたエアロゾル容器に入ったエアロゾル製剤が挙げられる。
【００９５】
使用されるＡＤＡ製剤にかかわらず、酵素の吸入に関連する要点の１つは、治療上有効な量が局所肺組織へ送達され、望ましい治療活性を生じさせるのに十分な時間、接触することであることが理解されよう。理論に縛られはしないが、肺組織のＡＤＡへの直接曝露は、そのような治療を必要とする哺乳動物において、炎症症状および組織病理状態に少なくともある程度有意な低減を、結果として生じると考えられている。さらには、本明細書に記載される発明は、線維症を主原因とする、特定の慢性肺疾患の治療において、「アダジェン」などの形態のＡＤＡを使用するための基礎を提供する。
【実施例１】
【００９６】
ブレオマイシンによって生じる肺炎症および線維症を有するマウスにおける「アダジェン」の全身曝露の効力
この実施例では、「アダジェン」を用いた全身治療の効力が、肺線維症などの肺疾患を有するマウスモデルにおいて判定された。肺線維症を有するマウスモデルは、ブレオマイシンによって確立された。ブレオマイシンは顕著なアデノシン蓄積および肺線維症を生じさせることが知られている。
【００９７】
マウスを生理食塩水またはブレオマイシン（用量＋２．０単位）に０日目に気管内曝露した。次いで、マウスを、２つの異なる治療計画にしたがって、腹腔内注射による全身「アダジェン」を用いて治療した；一方は、ブレオマイシン曝露の３日後に治療を開始して（早期治療）「アダジェン」が線維症を防ぐかどうか判定し、他方では治療を８日目に開始して（後期治療）活性疾患を停止および逆行させる作用を調べた。早期治療については、マウスは５単位の「アダジェン」を３日目に注入された。後期治療のマウスについては、５単位の「アダジェン」を８、１１および１４日目に投与した。生理食塩水溶液に曝露した対照マウスもまた、「アダジェン」処理ありまたは無しで調べた。
【００９８】
すべての分析は１４日目に実施した。総気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）細胞性および組織病理学的差異を調べた。肺細胞性は、炎症細胞を気道から洗い出し、血球計算盤を用いて細胞を計数することによって測定した。データは各群について平均細胞数＋ＳＥＭ、ｎ＝１１として表す。実験は２回反復した。肺組織像については、肺切片を作製し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色して組織病理学的変化を調べた。
【００９９】
ブレオマイシンによって生じた肺線維症を有するマウスでは、８日目に開始した「アダジェン」での全身治療は、肺炎症および線維症の顕著な低減を結果として生じた。後期治療の結果を図１Ａおよび図１Ｂに示す。
【０１００】
結果は、ブレオマイシン曝露は気管支肺胞洗浄液中の炎症細胞を増加させたことを示す。「アダジェン」での全身治療は、ＢＡＬ細胞性を（図１Ａ）に示す通り顕著に低減した。肺組織の組織学的分析は、ブレオマイシンに曝露されたマウスにおいて、重度の間質性炎症および線維性組織損傷を明らかにした。組織炎症および線維性損傷の程度は、８日目から「アダジェン」で治療されたマウスでは、はるかに重症度が低く見えた（図１Ｂ）。
【０１０１】
これらの知見は、「アダジェン」での全身治療は肺炎症および線維症の進行を停止でき、疾患の線維相の間に投与される場合は症状を逆行させることができることを示唆する。これらの知見は、「アダジェン」などのＡＤＡおよびＡＤＡポリマー複合体が、定着した肺線維症を有する患者の治療に有用であることを示す。
【実施例２】
【０１０２】
ブレオマイシンによって生じる肺炎症および線維症を有するマウスにおけるアデノシン濃度に対する「アダジェン」処理の効果
ブレオマイシンによって生じる肺線維症を有するマウスモデルにおいて、「アダジェン」処理がアデノシン濃度を低下させたかどうかを判定するために、アデノシン濃度を定量した。
【０１０３】
６週齢雌Ｃ５７Ｂｌｋ６マウスに、２．０単位のブレオマイシンを０日目に気管内投与した。マウスは、ブレオマイシン曝露の１０、１４および１８日後に５単位の「アダジェン」の腹腔内注射による処理を受けた。代替的に、マウスは腹腔内に５単位の「アダジェン」でプロトコルの１０、１４および２１日目に５単位の「アダジェン」を腹腔内に使用して処理された。すべての分析は２１日目に実施した。
【０１０４】
気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）をマウスから２１日目に回収し、逆相ＨＰＬＣを用いて定量した。結果を図２に示す。データは各群についてアデノシンの平均マイクロモル濃度＋ＳＥＭ、ｎ＝６として表す。実験は２回反復した。
「アダジェン」で処理したマウスでは、アデノシンは「アダジェン」処理無しのマウスと比較して９０％を超えて低下した。結果は、「アダジェン」はブレオマイシンに曝露された重度の肺炎症および線維症を示すマウスにおいてアデノシン濃度を低下させるのに有効であることを実証している。
【実施例３】
【０１０５】
ブレオマイシンによって生じる肺線維症を有するマウスにおける体重減少に対する「アダジェン」処理の効果
肺線維症を有するマウスにおける一般健康に対する「アダジェン」処理の効果の評価として、体重を監視した。
実施例２に記載される通り、ブレオマイシンに曝露されたマウスは、ブレオマイシン曝露の１０、１４および１８日後に５単位の「アダジェン」の腹腔内注入で、処理された。代替的に、マウスは１０、１４および２１日目に腹腔内に５単位の「アダジェン」で処理された。体重は、ブレオマイシン曝露後２１日目に測定した。結果を図３に示す。データは各群について平均体重グラム（ｇ）＋ＳＥＭ、ｎ＝８として表す。
【０１０６】
ブレオマイシンで処理されたマウスにおいて顕著な体重減少があった。ブレオマイシンによって生じた肺線維症に伴う体重減少は、「アダジェン」処理によって防がれ、「アダジェン」処理が疾患の治療および健康の改善に関連したことを示唆している。
【実施例４】
【０１０７】
ブレオマイシンによって生じる肺線維症を有するマウスにおける炎症に対する長期「アダジェン」処理の効果
炎症細胞を計数して、長期の「アダジェン」処理が肺線維症を有するマウスにおいて肺炎症を改善するかどうかを判定した。
【０１０８】
実施例２に記載される通り、ブレオマイシンに曝露されたマウスは、ブレオマイシン曝露の１０、１４および１８日後に５単位の「アダジェン」の腹腔内注入により処理された。代替的に、マウスは１０、１４および２１日目に腹腔内に５単位の「アダジェン」で処理された。２１日目に、炎症細胞を測定するために、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）をマウスから回収した。平均総炎症細胞（×１０４）＋ＳＥＭを、血球計算盤を用いて測定した。細胞を顕微鏡のスライド上にサイトスピンし、細胞判別を実施した。データは各群について平均細胞数（×１０４）＋ＳＥＭ、ｎ＝８として表す。
【０１０９】
ブレオマイシン曝露は「アダジェン」処理を受けなかったマウスにおいて炎症細胞を増加させた。「アダジェン」処理はブレオマイシンによって生じた炎症を顕著に減弱させた。結果を図４Ａに示す。結果はまた、「アダジェン」処理が肺胞マクロファージ、リンパ球、好中球および好酸球などの炎症細胞の部分集合を減弱したことを示す（図４Ｂ）。これらの細胞集団は、「アダジェン」処理無しのブレオマイシン処理マウスの肺で見られる濃度と比較して４０％減少した。これらの知見および実施例２の知見は、「アダジェン」処理でアデノシン濃度を低下させることが、ブレオマイシン曝露によって生じた肺炎症を減少させうることを示唆している。
【実施例５】
【０１１０】
ブレオマイシンによって生じる肺線維症を有するマウスにおけるコラーゲン産生に対する「アダジェン」処理の効果
ブレオマイシンによって生じる線維症に対して「アダジェン」が治療効果を有するかどうかを判定するために、コラーゲン濃度を調べた。ＢＡＬ液を、「アダジェン」で処理したマウスから２１日目に回収した。結果を図５に示す。データは各群について平均コラーゲン濃度＋ＳＥＭ、ｎ＝８として表す。
結果は、ブレオマイシンによって上昇したコラーゲン濃度が、「アダジェン」処理によって顕著に低下したことを示す。ブレオマイシンに曝露され、「アダジェン」で処理されたマウスは、「アダジェン」で処理されないマウスより４５％少ないコラーゲンを気道内に有した。これらのデータは、「アダジェン」および／またはＡＤＡが肺線維症を有する患者の治療に有用であることを示唆している。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アデノシンデアミナーゼを有効量で、それを必要とする哺乳動物へ投与することを含む、アデノシンデアミナーゼに媒介される肺疾患を治療する方法。
【請求項２】
前記肺疾患が、高濃度のアデノシンによって媒介されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記肺疾患が、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症および慢性閉塞性肺疾患からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記肺疾患が、化学療法に媒介される肺疾患であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記アデノシンデアミナーゼが、吸入によって、または非経口的に投与されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記アデノシンデアミナーゼが、化学療法剤の前に、同時にまたは続いて投与されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記アデノシンデアミナーゼが、ポリアルキレンオキサイドと複合体化されていることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記ポリアルキレンオキサイドと複合体化されたアデノシンデアミナーゼが、エアロゾルとして、または乾燥粉末として投与されることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記アデノシンデアミナーゼがウシ関連試料から得られることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記アデノシンデアミナーゼがヒト関連試料から得られることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記アデノシンデアミナーゼが組換えアデノシンデアミナーゼであることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリアルキレンオキサイドの分子量が約５，０００〜約４５，０００の範囲の大きさであることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項１３】
前記ポリアルキレンオキサイドが、直鎖、分枝鎖、またはマルチアーム鎖を含むことを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリアルキレンオキサイドがポリエチレングリコールであることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項１５】
前記ポリエチレングリコールと複合体化されたアデノシンデアミナーゼが、ペガデマーゼであることを特徴とする、請求項１４の方法。
【請求項１６】
前記哺乳動物に投与されるアデノシンデアミナーゼの量が、血漿ＡＤＡ活性を約１５〜約３５μｍｏｌ／時間／ｍＬの範囲に維持するのに十分な量であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記哺乳動物に投与されるアデノシンデアミナーゼの量が、肺アデノシン濃度を約１０ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満に低減するのに十分な量であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記哺乳動物に投与されるアデノシンデアミナーゼの量が、肺アデノシン濃度を約５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満に低減するのに十分な量であることを特徴とする、請求項１７の方法。
【請求項１９】
第２の薬理学的に活性な薬剤を有効量で、アデノシンデアミナーゼと組み合わせて投与することをさらに含むことを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
前記第２の薬理学的に活性な薬剤が、テオフィリンまたは気管支拡張薬であることを特徴とする、請求項１９の方法。
【請求項２１】
前記気管支拡張薬が、β−アドレナリン作動性気管支拡張薬であることを特徴とする、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
前記β−アドレナリン作動性気管支拡張薬がサルメテロール、アルブテロールまたはテルブタリンからなる群より選択されることを特徴とする、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
アデノシンデアミナーゼおよび、肺疾患の治療用の説明書を含む、哺乳動物の肺疾患を治療するためのキット。
【請求項２４】
アデノシンデアミナーゼおよび気管支拡張薬を含んでなる、吸入製剤。
【請求項２５】
請求項２４記載の吸入製剤および推進剤を含んでなる、肺症状の治療用途に好適な吸入器。
【請求項１】
アデノシンデアミナーゼを有効量で、それを必要とする哺乳動物へ投与することを含む、アデノシンデアミナーゼに媒介される肺疾患を治療する方法。
【請求項２】
前記肺疾患が、高濃度のアデノシンによって媒介されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記肺疾患が、喘息、肺線維症、嚢胞性線維症および慢性閉塞性肺疾患からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記肺疾患が、化学療法に媒介される肺疾患であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項５】
前記アデノシンデアミナーゼが、吸入によって、または非経口的に投与されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記アデノシンデアミナーゼが、化学療法剤の前に、同時にまたは続いて投与されることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項７】
前記アデノシンデアミナーゼが、ポリアルキレンオキサイドと複合体化されていることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記ポリアルキレンオキサイドと複合体化されたアデノシンデアミナーゼが、エアロゾルとして、または乾燥粉末として投与されることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記アデノシンデアミナーゼがウシ関連試料から得られることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
前記アデノシンデアミナーゼがヒト関連試料から得られることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
前記アデノシンデアミナーゼが組換えアデノシンデアミナーゼであることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリアルキレンオキサイドの分子量が約５，０００〜約４５，０００の範囲の大きさであることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項１３】
前記ポリアルキレンオキサイドが、直鎖、分枝鎖、またはマルチアーム鎖を含むことを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリアルキレンオキサイドがポリエチレングリコールであることを特徴とする、請求項７記載の方法。
【請求項１５】
前記ポリエチレングリコールと複合体化されたアデノシンデアミナーゼが、ペガデマーゼであることを特徴とする、請求項１４の方法。
【請求項１６】
前記哺乳動物に投与されるアデノシンデアミナーゼの量が、血漿ＡＤＡ活性を約１５〜約３５μｍｏｌ／時間／ｍＬの範囲に維持するのに十分な量であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１７】
前記哺乳動物に投与されるアデノシンデアミナーゼの量が、肺アデノシン濃度を約１０ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満に低減するのに十分な量であることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項１８】
前記哺乳動物に投与されるアデノシンデアミナーゼの量が、肺アデノシン濃度を約５ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質未満に低減するのに十分な量であることを特徴とする、請求項１７の方法。
【請求項１９】
第２の薬理学的に活性な薬剤を有効量で、アデノシンデアミナーゼと組み合わせて投与することをさらに含むことを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項２０】
前記第２の薬理学的に活性な薬剤が、テオフィリンまたは気管支拡張薬であることを特徴とする、請求項１９の方法。
【請求項２１】
前記気管支拡張薬が、β−アドレナリン作動性気管支拡張薬であることを特徴とする、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
前記β−アドレナリン作動性気管支拡張薬がサルメテロール、アルブテロールまたはテルブタリンからなる群より選択されることを特徴とする、請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
アデノシンデアミナーゼおよび、肺疾患の治療用の説明書を含む、哺乳動物の肺疾患を治療するためのキット。
【請求項２４】
アデノシンデアミナーゼおよび気管支拡張薬を含んでなる、吸入製剤。
【請求項２５】
請求項２４記載の吸入製剤および推進剤を含んでなる、肺症状の治療用途に好適な吸入器。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５】
【公表番号】特表２０１０−５１４８０３（Ｐ２０１０−５１４８０３Ａ）
【公表日】平成２２年５月６日（２０１０．５．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５４４２９８（Ｐ２００９−５４４２９８）
【出願日】平成１９年１２月２８日（２００７．１２．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８９０８５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０８３３０２
【国際公開日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【出願人】（５０５３５４８９９）エンゾン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド (28)
【氏名又は名称原語表記】ＥＮＺＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【出願人】（５０９１８３１４３）ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティー オブ テキサス システム (1)
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年５月６日（２０１０．５．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月２８日（２００７．１２．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０８９０８５
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０８３３０２
【国際公開日】平成２０年７月１０日（２００８．７．１０）
【出願人】（５０５３５４８９９）エンゾン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド (28)
【氏名又は名称原語表記】ＥＮＺＯＮ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ， ＩＮＣ．
【出願人】（５０９１８３１４３）ボード オブ リージェンツ オブ ザ ユニヴァーシティー オブ テキサス システム (1)
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＲＥＧＥＮＴＳ ＯＦ ＴＨＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＸＡＳ ＳＹＳＴＥＭ
【Ｆターム（参考）】
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