腫瘍壊死因子−アルファに対する改良ナノボディ（商標）
本発明は、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦ‐アルファ）に対する改良ナノボディ（商標）および１つ以上の前記のナノボディを含む、または主成分とするポリペプチドに関する。本発明は、前記のナノボディおよびポリペプチドをコードする核酸、前記のナノボディおよびポリペプチドの調製方法、前記のナノボディまたはポリペプチドを発現している、または発現可能な宿主細胞、前記のナノボディ、ポリペプチド、核酸、または宿主細胞を含む組成物、そして特に予防、治療、診断を目的とした前記のナノボディ、ポリペプチド、核酸、宿主細胞、組成物の使用法にも関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
四つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１からＦＲ４）および三つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１からＣＤＲ３）からなるＴＮＦ‐アルファに対するナノボディであって：
ｄ）ＣＤＲ１が：
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹ；または
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列
同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹと１つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列；
を含み、
ｅ）ＣＤＲ２が：
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧ；または
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧと少なくとも８０％、好ま
しくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧと２つ、または１つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列；
を含み、
ｆ）ＣＤＲ３が：
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮ；または
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列
同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮと１つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列、
を含む、
ナノボディ。
【請求項２】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項３】
ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項４】
ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項５】
請求項１記載のナノボディであって：
− ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含み；およびＣＤＲ３がアミノ酸配列Ｓ
ＰＳＧＦＮを含む；または
− ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含み；およびＣＤＲ２がアミノ酸配列Ｅ
ＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧを含む；または
− ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧを含み；および
ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含む、
ナノボディ。
【請求項６】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含み；およびＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項７】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含み；およびＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧを含み、およびＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のナノボディであって：
− 任意のアミノ酸置換が保存アミノ酸の置換であり、および／または
− 前記アミノ酸配列、上記のアミノ酸配列と比較した場合、アミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
ナノボディ。
【請求項９】
ヒト化ナノボディである、請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１０】
ＧＬＥＷ-クラスナノボディである、請求項１〜９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１１】
１０３番目の位置にアルギニン残基（Ｒ）を含む、請求項１〜９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１２】
ＧＬＥＷ‐クラスナノボディである、請求項１〜９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１３】
１０３番目の位置にアルギニン残基（Ｒ）を有するＧＬＥＷ‐クラスナノボディである、請求項１〜９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載のナノボディであって、配列番号：５２（ＴＮＦ１）、７６（ＴＮＦ１３）、７７（ＴＮＦ１４）、９５（ＴＮＦ２９）または９６（ＴＮＦ３０）のアミノ酸配列の１つと、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定）を有する、ナノボディ。
【請求項１５】
１０８番目の位置にロイシン残基（Ｌ）を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１６】
ＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも良好、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも良好である請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項１７】
国際公開第04/041862号の実施例１、３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号：４）のＥＣ５０値よりも大きい請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項１８】
国際公開第04/041862号の実施例１、３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が５ｎＭよりも大きい、請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項１９】
国際公開第04/041862号の実施例１、３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が３ｎＭよりも良好である、請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項２０】
四つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１からＦＲ４）と三つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１からＣＤＲ３）からなるＴＮＦ‐アルファに対するナノボディであって、
ｄ）ＣＤＲ１が：
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹ；または
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％
の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹと１つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列；
であり、
ｅ）ＣＤＲ２が：
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧ；または
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧと少なくとも８０％、好ま
しくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧと２つ、または１つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列；
であり、
ｆ）ＣＤＲ３が：
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮ；または
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列
同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮと１つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列、
である
ナノボディ。
【請求項２１】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２２】
ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２３】
ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２４】
請求項２０記載のナノボディであって：
− ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹであり；およびＣＤＲ３がアミノ酸配列Ｓ
ＰＳＧＦＮであり；または
− ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹであり；およびＣＤＲ２がアミノ酸配列Ｅ
ＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧであり；または
− ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧであり；および
ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮである、
ナノボディ。
【請求項２５】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹであり；およびＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２６】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹであり；およびＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧであり、およびＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２７】
請求項２０〜２６のいずれかに記載のナノボディであって：
− 任意のアミノ酸置換が保存アミノ酸の置換であり、
および／または
− 前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換を含む
のみで、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
ナノボディ。
【請求項２８】
ヒト化ナノボディである、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項２９】
ＧＬＥＷ‐クラスナノボディである、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３０】
１０３番目の位置にアルギニン残基（Ｒ）を含む、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３１】
１０３番目の位置にアルギニン残基（Ｒ）を有するＧＬＥＷ‐クラスナノボディである、請求項２０〜２７のいずれか１項記載のナノボディ、請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３２】
請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディであって、配列番号：５２（ＴＮＦ１）、７６（ＴＮＦ１３）、７７（ＴＮＦ１４）、９５（ＴＮＦ２９）もしくは９６（ＴＮＦ３０）のアミノ酸配列の１つと、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定）を有する、ナノボディ。
【請求項３３】
１０８番目の位置にロイシン残基（Ｌ）を含む、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３４】
ＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも大きく、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも大きい請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項３５】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞基づいた分析試験においてＥＣ５０値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号：４）のＥＣ５０値よりも大きい、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項３６】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が５ｎＭよりも大きい、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項３７】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が３ｎＭよりも大きい、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項３８】
ＴＮＦ１３（配列番号：７６）、ＴＮＦ１４（配列番号：７７）、ＴＮＦ２９（配列番号：９５）、ＴＮＦ３０（配列番号：９６）からなるグループから選択する、請求項１〜３７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３９】
ＴＮＦ３０（配列番号：９６）である、請求項１〜３８のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項４０】
請求項１〜３９のいずれかに記載のナノボディを含む、または主成分とするタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４１】
請求項１〜３９のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディを含む、または主成分とする、請求項４０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４２】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディを含む、請求項４０〜４１のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４３】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、ＴＮＦ三量体との結合時に前記ＴＮＦ三量体によって媒介されるＴＮＦ受容体の架橋および／または該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を、前記タンパク質またはポリペプチドが阻害または低下させることができる、請求項４０〜４２のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４４】
いずれかに記載の２つのナノボディを含み、ＴＮＦ三量体上の少なくとも２つのＴＮＦ受容体結合部位への分子内結合が可能である、請求項４０〜４２のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４５】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、互いに直接結合するか、互いにリンカーを介して結合する、請求項４２〜４４のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４６】
前記リンカーがアミノ酸配列を有する、請求項４５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４７】
前記リンカーが、少なくとも１４個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも１７個のアミノ酸、例えば約２０〜４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列を有する、請求項４６記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４８】
前記リンカーがグリシンおよびセリン残基を含む、請求項４７記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４９】
いずれのナノボディ ＴＮＦ１もヒト化されている、前記ポリペプチドＴＮＦ７（配列番号：７３）を含む、または主成分とする、請求項４２〜４８のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５０】
前記ポリペプチドＴＮＦ５５（配列番号：４１９）もしくはＴＮＦ５６（配列番号：４２０）を含むか、または主成分とする、請求項４２〜４９のいずれかに記載のタンパク質あるいはポリペプチド。
【請求項５１】
ペグ化された、請求項４０〜４９のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５２】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディをさらに含む、請求項４０〜４９のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５３】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）に存在するＣＤＲ配列を有する、請求項５２記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５４】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも１つのナノボディをさらに含む、請求項４２記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５５】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディが、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディと直接結合している、またはヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディとリンカーを介して結合している、請求項５４記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５６】
前記リンカーがアミノ酸配列を有する、請求項５５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５７】
前記リンカーが３〜４０個のアミノ酸残基、例えば５〜１５個の間のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を有する、請求項５５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５８】
前記リンカーがグリシンおよびセリン残基からなる、請求項５６もしくは５７のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５９】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）に存在するＣＤＲ配列を有する、請求項５４〜５８のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６０】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがヒト化ナノボディである、請求項５４〜５９のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６１】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがナノボディＡＬＢ １（配列番号：６３）のヒト化変異体である、請求項６０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６２】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディが、ＡＬＢ３（配列番号：８７）、ＡＬＢ４（配列番号：８８）、ＡＬＢ５（配列番号：８９）、ＡＬＢ６（配列番号：１００）、ＡＬＢ７（配列番号：１０１）、ＡＬＢ８（配列番号：１０２）、ＡＬＢ９（配列番号：１０３）およびＡＬＢ１０（配列番号：１０４）からなるグループから選択される、請求項６０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６３】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）である、請求項６２記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６４】
請求項１〜３９のいずれか１項記載のナノボディのヒト化変異体およびナノボディ ＡＬＢ１（配列番号：６３）の１つのヒト化変異体である２つのナノボディを含むか、もしくは主成分とする、請求項５４〜６３のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６５】
ナノボディ ＴＮＦ１とナノボディ ＡＬＢ１のいずれもヒト化された、ポリペプチドＴＮＦ２４（配列番号：９０）を含むか、もしくは主成分とする、請求項５４〜６４のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６６】
２つのナノボディ ＴＮＦ３０と１つのナノボディ ＡＬＢ ８を含むか、もしくは主成分とする、請求項５４〜６５のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６７】
前記ポリペプチドＴＮＦ６０（配列番号：４１７）を含むか、もしくは主成分とする、請求項５４〜６６のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６８】
ＴＮＦ‐アルファに対するナノボディが以下のフレームワーク配列：
ＦＲ１：配列番号：１３０、ＦＲ２：配列番号：１９８、ＦＲ３：配列番号：２６６、ＦＲ４：配列番号：３３４
を有しており、ＴＮＦ‐アルファに対するナノボディのヒト化変異体である、ＴＮＦ‐アルファに対するナノボディ。
【請求項６９】
ナノボディのＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも大きく、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも大きくなるようなＣＤＲを伴う、請求項６８項記載のナノボディ。
【請求項７０】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用した細胞ベース分析試験でのナノボディのＥＣ５０値が、同じ分析試験での国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号４）のＥＣ５０値よりも大きく、特に１２ｎＭ以上、さらに特に５ｎＭ以上、さらに特に３ｎＭ以上であるＣＤＲを伴う、請求項６８または６９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項７１】
ＴＮＦ１と同じＴＮＦのエピトープ（つまり、ＴＮＦ三量体）に対して指向性を有する、請求項６８〜７０のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項７２】
ナノボディ ＴＮＦ１（配列番号：５２）と同じＴＮＦ‐アルファの三量体上のエピトープに対して指向性を有するナノボディ。
【請求項７３】
ナノボディ ＴＮＦ３（配列番号：６０）と同じＴＮＦ‐アルファの三量体上のエピトープに対して指向性を有するナノボディ。
【請求項７４】
ナノボディのＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも大きく、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも大きくなるようなＣＤＲを伴う、請求項７３項記載のナノボディ。
【請求項７５】
国際公開第04/041862号の実施例１、３）に記載のＫＹＭ細胞を使用した細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号：４）のＥＣ５０値よりも大きく、特に１２ｎＭ以上、さらに特に５ｎＭ以上、さらに特に３ｎＭ以上であるＣＤＲを伴う、請求項７３または７４のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項７６】
ナノボディ ＴＮＦ１（配列番号：５２）のヒト化変異体であるナノボディ。
【請求項７７】
ナノボディのＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも大きく、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも大きくなるようなＣＤＲを有する、請求項７６項記載のナノボディ。
【請求項７８】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号４）のＥＣ５０値よりも大きく、特に１２ｎＭ以上、さらに特に５ｎＭ以上、さらに特に３ｎＭ以上であるＣＤＲを有する、請求項７６または７７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項７９】
請求項６８〜７８のいずれかに記載のナノボディを含むか、もしくは主成分とする、タンパク質またはポリペプチド。
【請求項８０】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディを含むか、もしくは主成分とする、請求項７９記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８１】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含む、請求項７９もしくは８０のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８２】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、 タンパク質またはポリペプチドが、ＴＮＦ三量体との結合時に前記ＴＮＦ三量体によって媒介される前記ＴＮＦ受容体の架橋および／もしくは該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下させることができるような、請求項７９〜８１のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８３】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、ＴＮＦ三量体上の少なくとも２つのＴＮＦ受容体結合部位への分子内結合が可能である、請求項７９〜８１のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８４】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、互いに直接結合しまたは互いにリンカーを介して結合する、請求項８１〜８３のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８５】
前記リンカーがアミノ酸配列を有する、請求項８４記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８６】
前記リンカーが少なくとも１４個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも１７個のアミノ酸、例えば約２０〜４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列を有する、請求項８５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８７】
前記リンカーがグリシンおよびセリン残基を含む、請求項８６記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８８】
いずれのナノボディ ＴＮＦ１もヒト化されている、ポリペプチドＴＮＦ７（配列番号：７３）を含むか、もしくは主成分とする、請求項８１〜８３のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８９】
ペグ化された、請求項８０〜８８のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９０】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、タンパク質またはポリペプチドがヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディをさらに含む、請求項８０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９１】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の前記２つのナノボディが、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディと直接結合しているか、またはヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディとリンカーを介して結合している、請求項９０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９２】
前記リンカーがアミノ酸配列を有する、請求項９１記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９３】
前記リンカーが３〜４０個のアミノ酸残基、例えば５〜１５個のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を有する、請求項９２記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９４】
前記リンカーがグリシンおよびセリン残基からなる、請求項９２または９３のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９５】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）に存在するＣＤＲ配列を伴う、請求項９０〜９４のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９６】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがヒト化ナノボディである、請求項９０〜９５のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９７】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがナノボディ ＡＬＢ １（配列番号：６３）のヒト化変異体である、請求項９６記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９８】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディが、ＡＬＢ３（配列番号：８７）、ＡＬＢ４（配列番号：８８）、ＡＬＢ５（配列番号：８９）、ＡＬＢ６（配列番号：１００）、ＡＬＢ７（配列番号：１０１）、ＡＬＢ８（配列番号：１０２）、ＡＬＢ９（配列番号：１０３）およびＡＬＢ１０（配列番号：１０４）からなるグループから選択される、請求項９７記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９９】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）である請求項９８記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項１００】
請求項６５〜６７のいずれかに記載のナノボディのヒト化変異体およびナノボディ ＡＬＢ１（配列番号：６３）の１つのヒト化変異体である２つのナノボディを含むか、もしくは主成分とする、請求項８１〜９９のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項１０１】
前記ポリペプチドが、ＴＮＦ三量体と結合することで、前記ＴＮＦ三量体によって媒介されるＴＮＦ受容体の架橋および／または該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害もしくは低下させることができるように、ＴＮＦ三量体の受容体結合部位に位置し、および／または一部を形成し、それぞれＴＮＦ‐アルファ、特にＴＮＦ‐アルファ三量体上のエピトープに対して指向性を有する２以上の免疫グロブリン可変領域もしくはその適切な断片を含むか、または主成分とするタンパク質あるいはポリペプチド。
【請求項１０２】
前記ポリペプチドが、ＴＮＦ三量体上の少なくとも２つのＴＮＦ受容体結合部位への分子内結合が可能であるように、ＴＮＦ三量体の受容体結合部位に位置し、および／または一部を形成し、それぞれＴＮＦ‐アルファ、特にＴＮＦ‐アルファ三量体上のエピトープに対して指向性を有する２以上の免疫グロブリン可変領域もしくはその適切な断片を含むか、または主成分とするタンパク質あるいはポリペプチド。
【請求項１０３】
前記２つ以上の免疫グロブリン可変領域がナノボディ ＴＮＦ１（配列番号：５２）と同じエピトープに対して指向性を有する、請求項１０１または１０２のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項１０４】
前記２つ以上の免疫グロブリン可変領域がナノボディである、請求項１０１もしくは１０２に記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項１０５】
前記請求項のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質またはポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列または核酸。
【請求項１０６】
請求項１０５記載のヌクレオチド配列または核酸を含むか、あるいは請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質もしくはポリペプチドを発現するかまたは発現可能な宿主細胞。
【請求項１０７】
前記宿主細胞が請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質もしくはポリペプチドを産生または発現する条件下での請求項１０６記載の宿主細胞の培養または維持することを含み；および請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質またはポリペプチドを単離することを場合により更に含む、請求項１〜１０２のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質またはポリペプチドの調製方法。
【請求項１０８】
請求項１〜１０４のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディ、タンパク質またはポリペプチド、および任意で少なくとも１つの医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１０９】
炎症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、喘息、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸症候群、多発性硬化症、アジソン病、自己免疫性肝炎、自己免疫耳下腺炎、糖尿病Ｉ型 、精巣上体炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、男性不妊症、多発性硬化症、重症筋無力症、天痘瘡、乾癬、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、脊椎関節症、甲状腺炎および脈管炎からなるグループから選択される少なくとも１つの疾患および障害の治療のための、請求項１０８記載の医薬組成物または請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質もしくはポリペプチド。
【請求項１１０】
炎症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、喘息、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸症候群、多発性硬化症、アジソン病、自己免疫性肝炎、自己免疫耳下腺炎、糖尿病Ｉ型、精巣上体炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、男性不妊症、多発性硬化症、重症筋無力症、天痘瘡、乾癬、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、脊椎関節症、甲状腺炎および脈管炎からなるグループから選択される少なくとも１つの疾患および障害の治療のための医薬品の調製において、請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質またはポリペプチドの使用。
【請求項１１１】
ＴＮＦ６０（配列番号：４１７）と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定）を有する、タンパク質もしくはポリペプチド。
【請求項１】
四つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１からＦＲ４）および三つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１からＣＤＲ３）からなるＴＮＦ‐アルファに対するナノボディであって：
ｄ）ＣＤＲ１が：
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹ；または
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列
同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹと１つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列；
を含み、
ｅ）ＣＤＲ２が：
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧ；または
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧと少なくとも８０％、好ま
しくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧと２つ、または１つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列；
を含み、
ｆ）ＣＤＲ３が：
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮ；または
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列
同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮと１つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列、
を含む、
ナノボディ。
【請求項２】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項３】
ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項４】
ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項５】
請求項１記載のナノボディであって：
− ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含み；およびＣＤＲ３がアミノ酸配列Ｓ
ＰＳＧＦＮを含む；または
− ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含み；およびＣＤＲ２がアミノ酸配列Ｅ
ＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧを含む；または
− ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧを含み；および
ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含む、
ナノボディ。
【請求項６】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含み；およびＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項７】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹを含み；およびＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧを含み、およびＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮを含む、請求項１記載のナノボディ。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のナノボディであって：
− 任意のアミノ酸置換が保存アミノ酸の置換であり、および／または
− 前記アミノ酸配列、上記のアミノ酸配列と比較した場合、アミノ酸置換を含むのみで、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
ナノボディ。
【請求項９】
ヒト化ナノボディである、請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１０】
ＧＬＥＷ-クラスナノボディである、請求項１〜９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１１】
１０３番目の位置にアルギニン残基（Ｒ）を含む、請求項１〜９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１２】
ＧＬＥＷ‐クラスナノボディである、請求項１〜９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１３】
１０３番目の位置にアルギニン残基（Ｒ）を有するＧＬＥＷ‐クラスナノボディである、請求項１〜９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載のナノボディであって、配列番号：５２（ＴＮＦ１）、７６（ＴＮＦ１３）、７７（ＴＮＦ１４）、９５（ＴＮＦ２９）または９６（ＴＮＦ３０）のアミノ酸配列の１つと、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定）を有する、ナノボディ。
【請求項１５】
１０８番目の位置にロイシン残基（Ｌ）を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項１６】
ＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも良好、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも良好である請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項１７】
国際公開第04/041862号の実施例１、３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号：４）のＥＣ５０値よりも大きい請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項１８】
国際公開第04/041862号の実施例１、３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が５ｎＭよりも大きい、請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項１９】
国際公開第04/041862号の実施例１、３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が３ｎＭよりも良好である、請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項２０】
四つのフレームワーク領域（それぞれＦＲ１からＦＲ４）と三つの相補性決定領域（それぞれＣＤＲ１からＣＤＲ３）からなるＴＮＦ‐アルファに対するナノボディであって、
ｄ）ＣＤＲ１が：
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹ；または
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％
の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＤＹＷＭＹと１つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列；
であり、
ｅ）ＣＤＲ２が：
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧ；または
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧと少なくとも８０％、好ま
しくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましく
は少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧと２つ、または１つだけア
ミノ酸が異なるアミノ酸配列；
であり、
ｆ）ＣＤＲ３が：
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮ；または
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮと少なくとも８０％、好ましくは少なくとも９０％、
より好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９９％の配列
同一性を有するアミノ酸配列；または
− アミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮと１つだけアミノ酸が異なるアミノ酸配列、
である
ナノボディ。
【請求項２１】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２２】
ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２３】
ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２４】
請求項２０記載のナノボディであって：
− ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹであり；およびＣＤＲ３がアミノ酸配列Ｓ
ＰＳＧＦＮであり；または
− ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹであり；およびＣＤＲ２がアミノ酸配列Ｅ
ＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧであり；または
− ＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧであり；および
ＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮである、
ナノボディ。
【請求項２５】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹであり；およびＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２６】
ＣＤＲ１がアミノ酸配列ＤＹＷＭＹであり；およびＣＤＲ２がアミノ酸配列ＥＩＮＴＮＧＬＩＴＫＹＰＤＳＶＫＧであり、およびＣＤＲ３がアミノ酸配列ＳＰＳＧＦＮである、請求項２０記載のナノボディ。
【請求項２７】
請求項２０〜２６のいずれかに記載のナノボディであって：
− 任意のアミノ酸置換が保存アミノ酸の置換であり、
および／または
− 前記アミノ酸配列が、上記のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸置換を含む
のみで、アミノ酸の欠失または挿入を含まない、
ナノボディ。
【請求項２８】
ヒト化ナノボディである、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項２９】
ＧＬＥＷ‐クラスナノボディである、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３０】
１０３番目の位置にアルギニン残基（Ｒ）を含む、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３１】
１０３番目の位置にアルギニン残基（Ｒ）を有するＧＬＥＷ‐クラスナノボディである、請求項２０〜２７のいずれか１項記載のナノボディ、請求項１〜８のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３２】
請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディであって、配列番号：５２（ＴＮＦ１）、７６（ＴＮＦ１３）、７７（ＴＮＦ１４）、９５（ＴＮＦ２９）もしくは９６（ＴＮＦ３０）のアミノ酸配列の１つと、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定）を有する、ナノボディ。
【請求項３３】
１０８番目の位置にロイシン残基（Ｌ）を含む、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３４】
ＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも大きく、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも大きい請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項３５】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞基づいた分析試験においてＥＣ５０値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号：４）のＥＣ５０値よりも大きい、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項３６】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が５ｎＭよりも大きい、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項３７】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が３ｎＭよりも大きい、請求項２０〜２７のいずれかに記載のナノボディ、または該ナノボディのヒト化変異体。
【請求項３８】
ＴＮＦ１３（配列番号：７６）、ＴＮＦ１４（配列番号：７７）、ＴＮＦ２９（配列番号：９５）、ＴＮＦ３０（配列番号：９６）からなるグループから選択する、請求項１〜３７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項３９】
ＴＮＦ３０（配列番号：９６）である、請求項１〜３８のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項４０】
請求項１〜３９のいずれかに記載のナノボディを含む、または主成分とするタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４１】
請求項１〜３９のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディを含む、または主成分とする、請求項４０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４２】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディを含む、請求項４０〜４１のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４３】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、ＴＮＦ三量体との結合時に前記ＴＮＦ三量体によって媒介されるＴＮＦ受容体の架橋および／または該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を、前記タンパク質またはポリペプチドが阻害または低下させることができる、請求項４０〜４２のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４４】
いずれかに記載の２つのナノボディを含み、ＴＮＦ三量体上の少なくとも２つのＴＮＦ受容体結合部位への分子内結合が可能である、請求項４０〜４２のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４５】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、互いに直接結合するか、互いにリンカーを介して結合する、請求項４２〜４４のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４６】
前記リンカーがアミノ酸配列を有する、請求項４５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４７】
前記リンカーが、少なくとも１４個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも１７個のアミノ酸、例えば約２０〜４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列を有する、請求項４６記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４８】
前記リンカーがグリシンおよびセリン残基を含む、請求項４７記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項４９】
いずれのナノボディ ＴＮＦ１もヒト化されている、前記ポリペプチドＴＮＦ７（配列番号：７３）を含む、または主成分とする、請求項４２〜４８のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５０】
前記ポリペプチドＴＮＦ５５（配列番号：４１９）もしくはＴＮＦ５６（配列番号：４２０）を含むか、または主成分とする、請求項４２〜４９のいずれかに記載のタンパク質あるいはポリペプチド。
【請求項５１】
ペグ化された、請求項４０〜４９のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５２】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディをさらに含む、請求項４０〜４９のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５３】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）に存在するＣＤＲ配列を有する、請求項５２記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５４】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する少なくとも１つのナノボディをさらに含む、請求項４２記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５５】
請求項１〜３９のいずれかに記載の２つのナノボディが、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディと直接結合している、またはヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディとリンカーを介して結合している、請求項５４記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５６】
前記リンカーがアミノ酸配列を有する、請求項５５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５７】
前記リンカーが３〜４０個のアミノ酸残基、例えば５〜１５個の間のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を有する、請求項５５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５８】
前記リンカーがグリシンおよびセリン残基からなる、請求項５６もしくは５７のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項５９】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）に存在するＣＤＲ配列を有する、請求項５４〜５８のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６０】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがヒト化ナノボディである、請求項５４〜５９のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６１】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがナノボディＡＬＢ １（配列番号：６３）のヒト化変異体である、請求項６０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６２】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディが、ＡＬＢ３（配列番号：８７）、ＡＬＢ４（配列番号：８８）、ＡＬＢ５（配列番号：８９）、ＡＬＢ６（配列番号：１００）、ＡＬＢ７（配列番号：１０１）、ＡＬＢ８（配列番号：１０２）、ＡＬＢ９（配列番号：１０３）およびＡＬＢ１０（配列番号：１０４）からなるグループから選択される、請求項６０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６３】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）である、請求項６２記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６４】
請求項１〜３９のいずれか１項記載のナノボディのヒト化変異体およびナノボディ ＡＬＢ１（配列番号：６３）の１つのヒト化変異体である２つのナノボディを含むか、もしくは主成分とする、請求項５４〜６３のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６５】
ナノボディ ＴＮＦ１とナノボディ ＡＬＢ１のいずれもヒト化された、ポリペプチドＴＮＦ２４（配列番号：９０）を含むか、もしくは主成分とする、請求項５４〜６４のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６６】
２つのナノボディ ＴＮＦ３０と１つのナノボディ ＡＬＢ ８を含むか、もしくは主成分とする、請求項５４〜６５のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６７】
前記ポリペプチドＴＮＦ６０（配列番号：４１７）を含むか、もしくは主成分とする、請求項５４〜６６のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項６８】
ＴＮＦ‐アルファに対するナノボディが以下のフレームワーク配列：
ＦＲ１：配列番号：１３０、ＦＲ２：配列番号：１９８、ＦＲ３：配列番号：２６６、ＦＲ４：配列番号：３３４
を有しており、ＴＮＦ‐アルファに対するナノボディのヒト化変異体である、ＴＮＦ‐アルファに対するナノボディ。
【請求項６９】
ナノボディのＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも大きく、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも大きくなるようなＣＤＲを伴う、請求項６８項記載のナノボディ。
【請求項７０】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用した細胞ベース分析試験でのナノボディのＥＣ５０値が、同じ分析試験での国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号４）のＥＣ５０値よりも大きく、特に１２ｎＭ以上、さらに特に５ｎＭ以上、さらに特に３ｎＭ以上であるＣＤＲを伴う、請求項６８または６９のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項７１】
ＴＮＦ１と同じＴＮＦのエピトープ（つまり、ＴＮＦ三量体）に対して指向性を有する、請求項６８〜７０のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項７２】
ナノボディ ＴＮＦ１（配列番号：５２）と同じＴＮＦ‐アルファの三量体上のエピトープに対して指向性を有するナノボディ。
【請求項７３】
ナノボディ ＴＮＦ３（配列番号：６０）と同じＴＮＦ‐アルファの三量体上のエピトープに対して指向性を有するナノボディ。
【請求項７４】
ナノボディのＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも大きく、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも大きくなるようなＣＤＲを伴う、請求項７３項記載のナノボディ。
【請求項７５】
国際公開第04/041862号の実施例１、３）に記載のＫＹＭ細胞を使用した細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号：４）のＥＣ５０値よりも大きく、特に１２ｎＭ以上、さらに特に５ｎＭ以上、さらに特に３ｎＭ以上であるＣＤＲを伴う、請求項７３または７４のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項７６】
ナノボディ ＴＮＦ１（配列番号：５２）のヒト化変異体であるナノボディ。
【請求項７７】
ナノボディのＴＮＦに対するＫｏｆｆ速度が２．１０−３（1/s）よりも大きく、好ましくは１．１０−３（1/s）よりも大きくなるようなＣＤＲを有する、請求項７６項記載のナノボディ。
【請求項７８】
国際公開第04/041862号の実施例１の３）に記載のＫＹＭ細胞を使用する細胞ベース分析試験においてＥＣ５０値が、同じ分析試験で国際公開第04/041862号のナノボディ ＶＨＨ ３Ｅ（配列番号４）のＥＣ５０値よりも大きく、特に１２ｎＭ以上、さらに特に５ｎＭ以上、さらに特に３ｎＭ以上であるＣＤＲを有する、請求項７６または７７のいずれかに記載のナノボディ。
【請求項７９】
請求項６８〜７８のいずれかに記載のナノボディを含むか、もしくは主成分とする、タンパク質またはポリペプチド。
【請求項８０】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディを含むか、もしくは主成分とする、請求項７９記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８１】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含む、請求項７９もしくは８０のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８２】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、 タンパク質またはポリペプチドが、ＴＮＦ三量体との結合時に前記ＴＮＦ三量体によって媒介される前記ＴＮＦ受容体の架橋および／もしくは該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害または低下させることができるような、請求項７９〜８１のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８３】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、ＴＮＦ三量体上の少なくとも２つのＴＮＦ受容体結合部位への分子内結合が可能である、請求項７９〜８１のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８４】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、互いに直接結合しまたは互いにリンカーを介して結合する、請求項８１〜８３のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８５】
前記リンカーがアミノ酸配列を有する、請求項８４記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８６】
前記リンカーが少なくとも１４個のアミノ酸、より好ましくは少なくとも１７個のアミノ酸、例えば約２０〜４０個のアミノ酸を含むアミノ酸配列を有する、請求項８５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８７】
前記リンカーがグリシンおよびセリン残基を含む、請求項８６記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８８】
いずれのナノボディ ＴＮＦ１もヒト化されている、ポリペプチドＴＮＦ７（配列番号：７３）を含むか、もしくは主成分とする、請求項８１〜８３のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項８９】
ペグ化された、請求項８０〜８８のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９０】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の２つのナノボディを含み、タンパク質またはポリペプチドがヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディをさらに含む、請求項８０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９１】
請求項６８〜７８のいずれかに記載の前記２つのナノボディが、ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディと直接結合しているか、またはヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディとリンカーを介して結合している、請求項９０記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９２】
前記リンカーがアミノ酸配列を有する、請求項９１記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９３】
前記リンカーが３〜４０個のアミノ酸残基、例えば５〜１５個のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を有する、請求項９２記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９４】
前記リンカーがグリシンおよびセリン残基からなる、請求項９２または９３のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９５】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）に存在するＣＤＲ配列を伴う、請求項９０〜９４のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９６】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがヒト化ナノボディである、請求項９０〜９５のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９７】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがナノボディ ＡＬＢ １（配列番号：６３）のヒト化変異体である、請求項９６記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９８】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディが、ＡＬＢ３（配列番号：８７）、ＡＬＢ４（配列番号：８８）、ＡＬＢ５（配列番号：８９）、ＡＬＢ６（配列番号：１００）、ＡＬＢ７（配列番号：１０１）、ＡＬＢ８（配列番号：１０２）、ＡＬＢ９（配列番号：１０３）およびＡＬＢ１０（配列番号：１０４）からなるグループから選択される、請求項９７記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項９９】
ヒト血清アルブミンに対して指向性を有する前記少なくとも１つのナノボディがＡＬＢ ８（配列番号：１０２）である請求項９８記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項１００】
請求項６５〜６７のいずれかに記載のナノボディのヒト化変異体およびナノボディ ＡＬＢ１（配列番号：６３）の１つのヒト化変異体である２つのナノボディを含むか、もしくは主成分とする、請求項８１〜９９のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項１０１】
前記ポリペプチドが、ＴＮＦ三量体と結合することで、前記ＴＮＦ三量体によって媒介されるＴＮＦ受容体の架橋および／または該受容体の架橋によって媒介されるシグナル伝達を阻害もしくは低下させることができるように、ＴＮＦ三量体の受容体結合部位に位置し、および／または一部を形成し、それぞれＴＮＦ‐アルファ、特にＴＮＦ‐アルファ三量体上のエピトープに対して指向性を有する２以上の免疫グロブリン可変領域もしくはその適切な断片を含むか、または主成分とするタンパク質あるいはポリペプチド。
【請求項１０２】
前記ポリペプチドが、ＴＮＦ三量体上の少なくとも２つのＴＮＦ受容体結合部位への分子内結合が可能であるように、ＴＮＦ三量体の受容体結合部位に位置し、および／または一部を形成し、それぞれＴＮＦ‐アルファ、特にＴＮＦ‐アルファ三量体上のエピトープに対して指向性を有する２以上の免疫グロブリン可変領域もしくはその適切な断片を含むか、または主成分とするタンパク質あるいはポリペプチド。
【請求項１０３】
前記２つ以上の免疫グロブリン可変領域がナノボディ ＴＮＦ１（配列番号：５２）と同じエピトープに対して指向性を有する、請求項１０１または１０２のいずれかに記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項１０４】
前記２つ以上の免疫グロブリン可変領域がナノボディである、請求項１０１もしくは１０２に記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項１０５】
前記請求項のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質またはポリペプチドをコードする、ヌクレオチド配列または核酸。
【請求項１０６】
請求項１０５記載のヌクレオチド配列または核酸を含むか、あるいは請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質もしくはポリペプチドを発現するかまたは発現可能な宿主細胞。
【請求項１０７】
前記宿主細胞が請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質もしくはポリペプチドを産生または発現する条件下での請求項１０６記載の宿主細胞の培養または維持することを含み；および請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質またはポリペプチドを単離することを場合により更に含む、請求項１〜１０２のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質またはポリペプチドの調製方法。
【請求項１０８】
請求項１〜１０４のいずれかに記載の少なくとも１つのナノボディ、タンパク質またはポリペプチド、および任意で少なくとも１つの医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１０９】
炎症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、喘息、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸症候群、多発性硬化症、アジソン病、自己免疫性肝炎、自己免疫耳下腺炎、糖尿病Ｉ型 、精巣上体炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、男性不妊症、多発性硬化症、重症筋無力症、天痘瘡、乾癬、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、脊椎関節症、甲状腺炎および脈管炎からなるグループから選択される少なくとも１つの疾患および障害の治療のための、請求項１０８記載の医薬組成物または請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質もしくはポリペプチド。
【請求項１１０】
炎症、関節リウマチ、ＣＯＰＤ、喘息、クローン病、潰瘍性大腸炎、炎症性腸症候群、多発性硬化症、アジソン病、自己免疫性肝炎、自己免疫耳下腺炎、糖尿病Ｉ型、精巣上体炎、糸球体腎炎、グレーブス病、ギランバレー症候群、橋本病、溶血性貧血、全身性エリテマトーデス、男性不妊症、多発性硬化症、重症筋無力症、天痘瘡、乾癬、リウマチ熱、関節リウマチ、サルコイドーシス、強皮症、シェーグレン症候群、脊椎関節症、甲状腺炎および脈管炎からなるグループから選択される少なくとも１つの疾患および障害の治療のための医薬品の調製において、請求項１〜１０４のいずれかに記載のナノボディ、タンパク質またはポリペプチドの使用。
【請求項１１１】
ＴＮＦ６０（配列番号：４１７）と少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９９％の配列同一性（本明細書で規定）を有する、タンパク質もしくはポリペプチド。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１−１】
【図２１−２】
【図２１−３】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０−１】
【図３０−２】
【図３０−３】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０−１】
【図４０−２】
【図４１】
【図４２】
【図４３】
【図４４】
【図４５】
【図４６】
【図４７】
【図４８】
【図４９】
【図５０】
【図５１】
【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６】
【図７】
【図６２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１−１】
【図２１−２】
【図２１−３】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０−１】
【図３０−２】
【図３０−３】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図３６】
【図３７】
【図３８】
【図３９】
【図４０−１】
【図４０−２】
【図４１】
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【図４３】
【図４４】
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【図４８】
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【図５２】
【図５３】
【図５４】
【図５５】
【図５６】
【図５７】
【図５８】
【図５９】
【図６０】
【図６１】
【図６】
【図７】
【図６２】
【公表番号】特表２００８−５３９７７２（Ｐ２００８−５３９７７２Ａ）
【公表日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１１６２７（Ｐ２００８−５１１６２７）
【出願日】平成１８年５月１７日（２００６．５．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００４６７８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１２２７８６
【国際公開日】平成１８年１１月２３日（２００６．１１．２３）
【出願人】（５０５１６６２２５）アブリンクス エン．ヴェー． (28)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１１月２０日（２００８．１１．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年５月１７日（２００６．５．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／００４６７８
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１２２７８６
【国際公開日】平成１８年１１月２３日（２００６．１１．２３）
【出願人】（５０５１６６２２５）アブリンクス エン．ヴェー． (28)
【Ｆターム（参考）】
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