血中中性脂肪濃度上昇抑制作用を有する薬剤及び飲食物
【課題】食習慣を変えることなく手軽かつ安全に摂取でき、血中中性脂肪濃度の上昇を抑制し、ひいては肥満症や動脈硬化症等の生活習慣病の予防できる薬剤及び飲食物を提供する。
【解決手段】エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物を有効成分とする血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を提供する。
【解決手段】エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物を有効成分とする血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血中中性脂肪濃度の上昇を抑制する作用を有する薬剤及び飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、日本人の食生活において高カロリー化が進み、脂肪摂取割合が高くなっていることが問題視されている。脂肪の過剰摂取は、肥満ばかりでなく、動脈硬化症、高脂血症、糖尿病、心筋梗塞や脳梗塞などの疾病を引き起こすおそれもある。
【０００３】
食事中の脂肪（トリグリセリド、中性脂肪）はそのままでは消化管から吸収されず、消化酵素の一つである膵リパーゼによって２−モノアシルグリセロールと脂肪酸に分解されてはじめて消化管から吸収される。吸収された２−モノアシルグリセロールは小腸上皮細胞で中性脂肪であるトリグリセリドに再合成され、カイロミクロンに取り込まれリンパを経て血中に放出される。血中に放出された中性脂肪は、リポタンパクリパーゼによって脂肪酸とグリセリンに分解され、脂肪組織に取り込まれ、トリグリセリドに再合成される。一方、ホルモン感受性リパーゼは脂肪組織中のトリグリセリドを分解して血中に脂肪酸を放出させる。
【０００４】
血中中性脂肪濃度は食事の影響を受けやすく、食後は食事由来の中性脂肪が流入し、血中中性脂肪濃度は上昇する。一方、空腹時血中中性脂肪濃度が上昇する要因には、脂肪や糖質の過剰摂取、過食等による肝臓でのＶＬＤＬの合成の増加等がある。しかしながら肥満や動脈硬化症、高脂血症等の疾病を抑制するためには、食後や空腹時を問わず血中中性脂肪濃度を上昇させないことが有効である。
【０００５】
近年、カテキンの機能性を期待して、カテキンと他の天然物由来物質とを組み合わせた、血中中性脂肪濃度の上昇を抑制させる医薬、組成物、及びそれらを含む食品が開示されている。
【０００６】
特許文献１には、松樹皮抽出物のＯＰＣ（oligomeric proanthocyanidin）を２０重量％以上含有し、かつ、カテキン（catechin）類を５．０重量％以上含有し、この松樹皮抽出物とアスコルビン酸またはその塩とを含有する、優れた高脂血症改善効果を有し、中性脂肪等を低下させると同時に、ＨＤＬコレステロールを上昇させることができる高脂血症改善剤およびこれを含有する健康食品が開示されている。
【０００７】
特許文献２には、ブドウ種子抽出物、ブルーベリーエキス、パッションフラワーエキス、ルチン及び緑茶カテキンから選ばれた１種又は２種以上からなるポリフェノール含有素材と、ニンニク由来のニンニク素材及び／又は無臭ニンニク由来の無臭ニンニク素材とを含む、血中総コレステロール値、血中中性脂肪値及び血液流動性を総合的に改善する、循環器疾患予防用組成物、または、これを含む健康食品が開示されている。
【０００８】
【特許文献１】特開２００３−１４６８９８号公報
【特許文献２】特開２００３−０９５９６８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、食習慣を変えることなく手軽かつ安全に摂取でき、血中中性脂肪濃度の上昇を抑制し、ひいては肥満症や動脈硬化症等の生活習慣病の予防できる薬剤及び飲食物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、従来、エステル型カテキンが膵リパーゼ阻害作用を有し、中でも（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇよりもそれらのエピマーである（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇが強い膵リパーゼ阻害作用を有することを見出し、リパーゼ阻害剤及びリパーゼ阻害飲食物の発明を完成させ特許出願（特願２００４−６０１６０号、平成１６年３月４日出願、未公開）を行った。
本発明者は、上記の中性脂肪吸収メカニズム及び該発明であるカテキンの膵リパーゼの阻害作用に基き、カテキンの食事中の脂肪吸収を阻害又は遅延しうる可能性についてさらに研究を進めた結果、エステル型カテキン（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇが、食事中の脂肪吸収を阻害又は遅延することができ、食後の血中中性脂肪濃度の上昇を抑制することができる強い効果を見出した。さらにはエステル型カテキンを長期的かつ継続的に摂取しつづけることで、空腹時の血中中性脂肪濃度を抑制する効果も併せ持つことも見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物を有効成分とする血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を提供する。
【００１２】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、食事由来の血中中性脂肪の吸収阻害効果を有し、食後の血中中性脂肪濃度の上昇を抑制することができる。さらに、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、長期的かつ継続的に摂取することで、空腹時の血中中性脂肪濃度も抑制することができ、肥満症や動脈硬化症などの生活習慣病の予防につながる効果を有する。また、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、食習慣を変えることなく、副作用を気にせず安全かつ有効的に摂取することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下に本発明の実施形態について説明する。ただし、本発明の範囲が以下に説明する実施形態に限定されるものではない。
【００１４】
（血中中性脂肪濃度上昇抑制剤）
本発明は、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物を有効成分とする血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を提供する。
【００１５】
本発明でいうカテキンとは、（−）-エピガロカテキンガレート；ＥＧＣｇ、（−）-ガロカテキンガレート；ＧＣｇ、（−）-エピカテキンガレート；ＥＣｇ、（−）-カテキンガレート；Ｃｇ、（−）-エピガロカテキン；ＥＧＣ、（−）-ガロカテキン；ＧＣ、（−）-エピカテキン；ＥＣ、（−）-カテキン；Ｃ、（＋）-カテキン；（＋）Ｃである。カテキンは紫外部波長で検出する高速液体クロマトグラフィーを用いた方法によって定性及び定量することができる。
【００１６】
「カテキン組成物を有効成分とする」の「有効成分とする」には、カテキンの血中中性脂肪濃度上昇抑制作用を備えていれば、カテキンのうち一種類以上の成分を任意の割合で含んでいればよいことが包含される。
【００１７】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤の有効成分であるカテキン組成物は、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物であればよく、９０質量％以上含有するのがより好ましい。
【００１８】
ここで、エステル型カテキンは、（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇを意味し、それぞれのカテキン骨格と没食子酸とがエステル結合した化合物の総称であり、従来公知の方法或いは今後公知となる方法によって得ることができる。
具体的には、エステル型カテキンは、茶葉を含めて天然植物中に存在することから、天然植物から水乃至熱湯やエタノール等の水溶性の有機溶媒又はこれらの混合物により抽出できる。さらにエステル型カテキンの含有量を高めるように精製するとより好ましい。
【００１９】
また、後述する茶の抽出液或いは浸出液などの（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇを含有するカテキン溶液、又は、市販の茶抽出物も使用することができる。また、エステル型カテキン量が所望組成になるように、精製したエステル型カテキンのうち一種類以上添加して、配合することができる。
【００２０】
（エピ体／非エピ体の比率）
また、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、エステル型カテキンのうち、非エピ体である（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を４０質量％以上含有すると好ましく、４０質量％〜６０質量％含有するとさらに好ましい。
【００２１】
ここで、非エピ体カテキンである（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇは、茶葉を含めて天然植物中にほとんど存在しない。しかし、例えば（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ又はこれらの混合物を約８０℃以上で加熱処理して熱異性化（エピマ−化）を促すことにより得ることができる。
従って、非エピ体カテキンは、例えば精製した（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、或いはこれらの混合物、又は、茶の抽出液或いは浸出液などの（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇを含有するカテキン溶液を、約８０℃以上で加熱処理してカテキンの熱異性化を促すことにより、（−）Ｃｇ及び（−）ＧＣｇの含有濃度を高めることができ、この加熱処理物から（−）Ｃｇ及び（−）ＧＣｇ或いはこれらの混合物、或いはこれらを高濃度で含有する混合物を分離・精製することができる。
【００２２】
また、後述する茶の抽出液或いは浸出液などのカテキン溶液、又は、市販の茶抽出物も使用することができる。このとき必要に応じて、上記のように加熱処理することで非エピ体カテキンの所望組成になるように質量比率を調整することができる。また、非エピ体カテキンの所望組成になるように、精製した非エピ体カテキンのうち一種類以上添加して、配合することができる。
【００２３】
（茶抽出物）
また、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤の有効成分であるカテキン組成物として、所望のエステル型カテキン比率の茶抽出物を用いることができる。以下に茶抽出物について説明する。
【００２４】
この際、原料とし得る茶は、カテキンを含有していれば特に種類、部位などには制限されず、例えば茶生葉、紅茶やプアール茶等の発酵茶、ウーロン茶や包種茶等の半発酵茶、緑茶や釜煎り緑茶、ほうじ茶等の不発酵茶のいずれか（単独）、又は、これらの２種類以上の混合物を抽出して得られるもの、或いはそれぞれを抽出して得られたものの混合物を用いることができる。
【００２５】
茶の抽出は、茶を水、温水または熱水、好ましくは４０℃〜１００℃の温熱水、中でも６０〜１００℃の温熱水、或いは人体に無害なエタノール水溶液またはエタノールなどの有機溶媒で抽出して茶抽出物を得、更にこの茶抽出物を溶媒抽出法、樹脂吸着法、限外濾過・逆浸透濾過等の濾過などの精製手段によってエステル型カテキンの含有量を高める方向に精製して茶抽出物を得る。さらに、精製して得られたカテキン溶液をさらに濃縮・乾燥し、固形物として得ることができる。この際の濃縮・乾燥工程は、減圧濃縮や凍結乾燥など通常の濃縮・乾燥方法により行うことができる。
【００２６】
また、市販の茶抽出物を用いて上記の如くエステル型カテキン比率を高める方向に処理するようにしてもよい。例えば、テアフラン３０Ａ（商品名；伊藤園社製）は、緑茶を熱水抽出処理し、この抽出物を乾燥させてカテキン濃度を約３０％とした緑茶抽出物であり、テアフラン９０Ｓ（商品名；伊藤園社製）は、緑茶を熱水抽出処理して得た抽出物を、水と低・高濃度アルコールを使って吸着カラムにて分離し乾燥させ、茶ポリフェノール濃度を約８５〜９９．５％とした緑茶抽出物である。その他、市販の茶抽出物として三井農林（株）製「ポリフェノン」、太陽化学（株）製「サンフェノン」、サントリー（株）製「サンウーロン」等も用いることができる。
【００２７】
さらに、茶抽出物又は市販の茶抽出物は、適宜加熱処理することによりエピ体カテキン量又は非エピ体カテキン量の質量比率を調整することができる。また、上記の加熱処理に加え、茶抽出物又は市販の茶抽出物に精製したカテキンのうち一種類以上添加して、カテキンの所望組成を調製することができる。
【００２８】
（カフェイン比率）
さらに、血中中性脂肪濃度上昇抑制剤の有効成分として用いる茶抽出物に含有するカフェイン含有量は質量比率で、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ の合計含有量に対して、０．２以下であれば好ましく、０．１５以下であればさらに好ましい。
【００２９】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤に含まれるカフェイン量は、必要に応じて茶抽出物中に含まれるカフェインの一部を樹脂吸着法等の公知技術によって除去したり、精製したカフェインを所望量添加したりして、所定の比率に調整することができる。また、カフェインもエステル型カテキンと遊離型カテキンの測定法で同時定量が可能である。
【００３０】
カフェイン含量の質量比率が０．２以下であれば、摂取する際にカフェインに由来する苦味・エグ味を低減することができるだけでなく、多量摂取によるカフェインの毒性を回避しうる。
【００３１】
なお、本発明の血中中性脂肪濃度抑制剤は、カフェインを含まなくてもよい。茶抽出物中に含まれるすべてのカフェインは、上述の公知技術を用い、さらに適宜条件を変更することで完全に除去することができる。また、カフェインを含まない市販の茶抽出物を用いることもできる。カフェインを含まない場合、多量摂取によるカフェインの毒性を考える必要はない。
【００３２】
（血中中性脂肪濃度上昇抑制剤の剤型、製造）
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、経口投与剤または非経口投与剤（筋肉注射、静脈注射、皮下投与、直腸投与、経皮投与、経鼻投与など）として使用することができ、それぞれの投与に適した配合及び剤型とするのが好ましい。
剤型について言えば、例えば経口投与剤用としては液剤、錠剤、散剤、顆粒、糖衣錠、カプセル、懸濁液、乳剤、丸剤などの形態に調製することができ、非経口投与剤用としては注射剤、アンプル剤、直腸投与剤、油脂性坐剤、水溶性坐剤などの形態に調製することができる。
配合（製剤）について言えば、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、表面活性剤、潤滑剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤などを用いて常法により製造することができる。また、例えば乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウムなどの無毒性の添加剤を配合することも可能である。
【００３３】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、医薬品のほか、医薬部外品、薬理効果を備えた健康食品・健康飲料・特定保健用食品・機能性食品、食品添加剤、その他ヒト以外の動物に対する薬剤や餌、餌用添加剤などとして提供することもできる。
例えば、医薬部外品として調製し、これを瓶ドリンク飲料等の飲用形態、或いはタブレット、カプセル、顆粒等の形態とすることにより、より一層摂取し易くすることができる。
【００３４】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤には、酸化防止剤、乳化剤、保存料、ｐＨ調整剤、香料、調味料、甘味料、酸味料、品質安定剤等の添加剤を単独、あるいは併用して配合しても良い。例えば、酸化防止剤としてはビタミンＣ、ビタミンＥ、システインなどを用いることができ、特にビタミンＣを０．００５〜０．０５重量％含有するのがよい。また、例えば甘味料としてはぶどう糖、果糖、異性化液糖、フラクトオリゴ糖、乳化オリゴ糖、大豆オリゴ糖、サイクロデキストリン、アスパルテーム、ラカンカエキスなどを用いることができる。
【００３５】
（血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲食物）
次に、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲食物（すなわち、血中中性脂肪濃度上昇抑制食品及び飲料を含む。）について詳しく説明する。
【００３６】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を有効成分として、飲食物に添加し、血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲食物とすることができる。本発明では食品及び飲料をまとめて「飲食物」という。よって、飲食物には食品及び飲料が含まれる。
【００３７】
通常の茶系飲料（本発明において、茶葉等抽出成分を含有する飲料の総称として茶系飲料という）に含まれるエステル型カテキンは、全カテキン量に対して５０％程度（残りは遊離型カテキンである）である。
従って、茶葉等を抽出して得られるカテキン溶液を作製し、これを上述した加熱処理や加水分解処理を適宜行うことにより、非エピ体カテキン質量比率又は／及び遊離型カテキン質量比率を所望量、中でもエステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上であって、かつエステル型カテキンのうち、非エピ体である（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を４０質量％以上含有する茶系飲料由来の血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲料を製造することができる。また、非エピ体カテキン又は／及びエステル型カテキンの所望組成になるように、精製したカテキンのうち一種類以上添加して、配合することができる。
【００３８】
さらに本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲食物は、上記のようにして得られたカテキン溶液の加熱処理液や加水分解処理液をそのまま或いは風味改善のため適宜茶抽出物やその他の物質を添加して調製すればよい。
【００３９】
なお、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物は、上記のようにして得られたカテキン溶液の加熱処理液や加水分解処理液をさらに濃縮・乾燥し、得られた固形物を配合して製造することができる。この際の濃縮・乾燥工程は、減圧濃縮や凍結乾燥など通常の濃縮・乾燥方法により行うことができる。
【００４０】
血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた健康食品・健康飲料・特定保健用食品・機能性食品としては、例えば、カテキン溶液を、炭酸、賦形剤（造粒剤含む）、希釈剤、或いは更に甘味剤、フレーバー、小麦粉、でんぷん、糖、油脂類等の各種タンパク質、糖質原料やビタミン、ミネラルなどの飲食品材料群から選ばれた一種或いは二種以上と混合したり、或いは、現在公知の飲食品、例えばスポーツ飲料、果実飲料、乳飲料、茶飲料、野菜ジュース、乳性飲料、アルコール飲料、ゼリー、ゼリー飲料、炭酸飲料、チューインガム、チョコレート、キャンディ、ビスケット、スナック、パン、乳製品、魚肉練り製品、畜肉製品、冷菓、乾燥食品、サプリメントなどに添加して製造することができる。
【００４１】
（投与量）
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物におけるカテキンの必要摂取量は、一般成人で１日当たり２００〜２１００ｍｇ程度であると考えられる。摂取量は使用方法によって適宜選ぶことができ、中でも乾燥重量換算でエステル型カテキンを１４０ｍｇ〜１４７０ｍｇ程度（そのうち（−）ＧＣｇ及び（−）Ｃｇは、合計量で６０〜５９０ｍｇ程度含まれる）摂取するのが好ましい。特に乾燥重量換算でエステル型カテキンを２００ｍｇ〜７００ｍｇ程度（そのうち（−）ＧＣｇ及び（−）Ｃｇは、合計量で７０〜３００ｍｇ程度含まれる）摂取するのが好ましい。
【００４２】
上記の必要摂取量から考えると、固形形態の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物の場合、エステル型カテキン類を約０．１〜１００質量％含有させるようにするのが好ましく、中でも（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇ或いはこれらの混合物を、約０．０４〜１００質量％、特に約０．１〜６０質量％配合するのが好ましい。
エステル型カテキン類約０．１質量％未満では、摂取すべき固形物の量が１日当たり約２ｋｇを超えることがあるため好ましくない。
【００４３】
他方、液状の形態の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物の場合、エステル型カテキン類を約５００〜６０００ｍｇ／Ｌ程度の濃度で含有させるのが好ましく、中でも（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇ或いはこれらの混合物を約２００ｍｇ／Ｌ、以上、特に約２００〜３６００ｍｇ／Ｌ程度の濃度で含有させるのが好ましい。
エステル型カテキン類濃度が５００ｍｇ／Ｌ未満では、摂取すべき飲料の体積が１日当たり４Ｌを超えることがあるため好ましくない。６０００ｍｇ/Ｌを超えると、カテキン類が高濃度となり渋味が強すぎるため好ましくない。より好ましくは、エステル型カテキン類濃度７５０〜３７５０ｍｇ／Ｌ程度である。
【００４４】
（効果）
このようにして得られた血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物は、主原料として天然物、特に日常多量に飲用している茶から得た成分を用いるので、安心して日常的に摂取することができる保健用飲食物として提供することができる。また、食習慣を変えることなく摂取でき、安全かつ有効的な薬剤及び飲食物である。
【実施例】
【００４５】
以下に実施例を示す。なお、実施例における各測定値は平均値±標準偏差で示し、有意差検定は分散分析にて行い、ｐ＜０．０５を有意差とした。
【００４６】
（実施例１）ラットにおける中性脂肪のリンパ吸収におよぼすカテキンサンプルの影響の検討
【００４７】
（サンプル調製）
タウロコール酸ナトリウム２００ｍｇ、脂肪酸を含まないウシアルブミン分画Ｖ５０ｍｇ、トリオレイルグリセロール２００ｍｇ及び３７ｋＢｑの14Ｃ−トリオレイルグリセロールを含有させ超音波処理により作製した、14Ｃ-トリオレイルグリセロール含有エマルション３ｍＬを調製し、これをコントロール１とした。
また、カテキンサンプルは、サンプルＡはカテキン製剤（テアフラン９０Ｓ、（株）伊藤園製）、サンプルＢは熱異性化（１２３℃、７分間）したカテキン製剤（テアフラン９０Ｓ，（株）伊藤園製）を用いた。コントロール１（該エマルション３ｍＬ）にそれぞれ１００ｍｇずつ添加し、サンプルＡ含有エマルション及びサンプルＢ含有エマルションを調整した。カテキンサンプルＡ及びＢのカテキン組成を表1に示す。
【００４８】
【表１】
【００４９】
予備飼育として、手術する１週間前より市販の固形食（ＮＭＦ、日本オリエンタル酵母製）を与えた８週齢ＳＤラットを準備した。
次に該８週齢ＳＤラットに、ソムノペンチル麻酔薬（０．０８ｍｌ／１００ｇ体重、共立商事（株））を投与後、これらのラットの頭部くも膜下槽乳糜（にゅうび）への左胸部リンパ管に、カテーテル（ＳＶ３５、夏目製作所（株））を挿入し、胃には後述するサンプルを投与するためのカテーテル（ＳＰ５５、夏目製作所（株））を挿入固定する手術を行った。
手術後、１３９ｍＭ グルコース−８５ｍＭ ＮａＣｌ溶液を自由摂取させた。また、手術後から実験終了まで、カテーテルを介して１３９ｍＭグルコース−８５ｍＭ ＮａＣｌ溶液を３．４ｍｌ／ｈｏｕｒ／ｒａｔとなるように持続的に胃に注入した。
翌朝、手術したＳＤラットを平均リンパ流速が等しくなるように３群に分けた（対照群、サンプルＡ群、サンプルＢ群、それぞれｎ＝７）。対照群にはコントロール１を、サンプルＡ群にはサンプルＡ含有エマルションを、サンプルＢ群にはサンプルＢ含有エマルションをそれぞれ投与した。
サンプル投与後１、２、３、４、５、６、８および２４時間後のリンパ液を、ＥＤＴＡを含む氷冷管で捕集して、リンパ液中の14Ｃ−放射活性を測定した。
【００５０】
図1に示すように、カテキンサンプルＡ及びＢにより、試験エマルション投与後２時間まで有意に中性脂肪のリンパ吸収が阻害されており、その傾向は投与後８時間まで続いた。
【００５１】
（実施例２） ラットにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度におよぼすカテキンサンプルの影響
予備飼育として、３日前より市販の固形食（ＣＥ−２、日本クレア製）を与え、次いで一晩絶食させた８週齢Ｗｉｓｔｅｒ系雄ラットを準備した。
次いで該ラットから、頸静脈採血を行った。このときを０時間とした。
このラットを３群に分け（対照群（ｎ＝８）、サンプルＡ群（ｎ＝７）、サンプルＢ群（ｎ＝８））、対照群には脱イオン水を、サンプルＡ群には脱イオン水に溶解したカテキンサンプルＡを、サンプルＢ群には脱イオン水に溶解したカテキンサンプルＢをそれぞれ５ｍＬ／ｋｇ−ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ（１００ｍｇサンプル／ｋｇ−ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）経口投与した。なお、カテキンサンプルＡ及びＢは前述したように調整し、それぞれのカテキン組成を表1に示す。
その直後、脂質エマルション（Soybean oil 10g, Egg yolk lecithin 0.6g, Glycerol 1.125g / 50 ml脱イオン水、J. Nutr, 133, 1887-1891, 2003）を１０ｍｌ／ｋｇ−ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔそれぞれ経口投与した。脂質エマルション投与後、１、２、３、４、６、および８時間後に頸静脈採血を行った。
採血後、血漿を分離し、トリグリセライドＥ−テストワコー（和光純薬工業製）を用い、血中中性脂肪濃度を測定した。
【００５２】
図２に示すように、サンプルＡ及びサンプルＢ は、脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度の上昇を有意に抑制した。
実施例１及び実施例２より、カテキンによる食後血中中性脂肪濃度の上昇抑制作用機構は、エステル型カテキンの膵リパーゼ阻害作用による中性脂肪の吸収の遅延によるものと示唆される。
【００５３】
（実施例３） ヒトにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度におよぼすカテキンサンプルの影響
【００５４】
（サンプル調製）
湯（７０℃）６０ｍＬに１．５ｇの日本産緑茶葉を加え、５分間攪拌抽出して緑茶抽出液を得、さらに合成吸着樹脂（ＰＶＰＰ）１ｇを投入し、１０分間攪拌した後、ろ過により、該茶葉、該合成吸着樹脂を除去した。この抽出液に環状オリゴ糖（日本食品加工（株）製）０．５ｇ、茶抽出物（テアフラン９０Ｓ、（株）伊藤園製、組成は表２を参照）をそれぞれ０（サンプルＣ）、０．３４５ｇ（サンプルＤ）、１．０３５ｇ（サンプルＥ）及びビタミンＣ適量加え、炭酸水素ナトリウムでｐＨを調整した後、純水を加え全量２５０ｍＬとした。この液を微細ろ過、さらに加熱殺菌（１３５℃、３０秒）を行い、飲料を調製した。茶抽出物の添加量ごとにサンプルＣ、サンプルＤ、サンプルＥとし、それぞれのカテキン組成を表３に示す。
【００５５】
【表２】
【００５６】
【表３】
【００５７】
被験者９名にトリプルクロスオーバー、二重盲検で脂肪分を１８．８ｇ含む高脂肪負荷食を摂取させ、食事中にサンプルＣ、サンプルＤ、サンプルＥのいずれか２５０ｍｌ摂取させた。
高脂肪負荷食を食べる直前を０時間とし、０、１、２、３、４、６時間後に採血を行い、血中中性脂肪濃度を測定した。
なお、被験者には医師より試験の目的、方法などについて十分に説明し、ヘルシンキ宣言の趣旨に従い本人の文書による同意を得た上で実施した。
【００５８】
図３に示すように、摂取後２時間まではサンプルＤ及びサンプルＥは血中中性脂肪濃度の変化量が対照であるサンプルＣと比較して有意に低かった。また、図４に示すように、中性脂肪ΔＡＵＣはサンプルＤ及びサンプルＥは、サンプルＣと比較して有意に低かった。エステル型カテキンの割合の多いカテキン組成物の摂取は、有効に食後血中中性脂肪濃度の上昇抑制すると示唆される。
【００５９】
（実施例４）ヒトにおける血中中性脂肪濃度におよぼすカテキンサンプル長期摂取の影響
【００６０】
（サンプル調製）
湯（７０℃）６０ｍＬに１．５ｇの日本産緑茶葉を加え、５分間攪拌抽出して緑茶抽出液を得、さらに合成吸着樹脂（ＰＶＰＰ）１ｇを投入し、１０分間攪拌した後、ろ過により、該茶葉、該合成吸着樹脂を除去した。この抽出液に環状オリゴ糖（日本食品加工（株）製）０．５ｇ、茶抽出物（テアフラン９０Ｓ、（株）伊藤園製、組成は表２を参照）をそれぞれ０（サンプルＦ）、０．３４５ｇ（サンプルＧ）及びビタミンＣ適量加え、炭酸水素ナトリウムでｐＨを調整した後、純水を加え全量２５０ｍＬとした。この液を微細ろ過、さらに加熱殺菌（１３５℃、３０秒）を行い、飲料を調製した。茶抽出物の添加量ごとにサンプルＦ、サンプルＧとし、それぞれのカテキン組成を表４に示す。
【００６１】
【表４】
【００６２】
ＢＭＩ２２．５〜３０の２０〜５０代の男女の被験者１９５名を３群にわけた（サンプルＦ３本／日群、サンプルＧ２本／日群、サンプルＧ３本／日群、それぞれｎ＝６６、６５、６４）。サンプルＦ３本／日群にはサンプルＦ３本／日を、サンプルＧ２本／日群にはサンプルＧ２本／日とサンプルＦ１本／日を、サンプルＧ３本／日群にはサンプルＧ３本／日を、普段の食生活を変えることなく１２週間摂取させた。
なお、被験者には医師より試験の目的、方法などについて十分に説明し、ヘルシンキ宣言の趣旨に従い本人の文書による同意を得た上で実施した。
【００６３】
図５に示すように、摂取開始４〜１２週、さらに後観察２０週目まで、対照であるサンプルＦ３本／日群の血中中性脂肪濃度と比較して、サンプルＧ３本／日群の血中中性脂肪濃度は減少する傾向にあった。特に後観察期間の１６週目には有意であった。また、後観察期間の１６〜２０週目において、対照であるサンプルＦ３本／日群の血中中性脂肪濃度と比較して、サンプルＧ２本／日群の血中中性脂肪濃度は減少する傾向にあった。
実施例４より、エステル型カテキンの割合の多いカテキン組成物を長期的・継続的に摂取することで空腹時の血中中性脂肪濃度をも低下させることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】ラットにおける中性脂肪のリンパ吸収率の経時変化を示す図である。
【図２】ラットにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度の経時変化を示す図である。
【図３】ヒトにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度の経時変化を示す図である。
【図４】ヒトにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度のΔＡＵＣへのカテキンサンプルの影響を示す図である。
【図５】ヒトにおけるカテキンサンプルの長期摂取による空腹時血中中性脂肪濃度の経週変化を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血中中性脂肪濃度の上昇を抑制する作用を有する薬剤及び飲食物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、日本人の食生活において高カロリー化が進み、脂肪摂取割合が高くなっていることが問題視されている。脂肪の過剰摂取は、肥満ばかりでなく、動脈硬化症、高脂血症、糖尿病、心筋梗塞や脳梗塞などの疾病を引き起こすおそれもある。
【０００３】
食事中の脂肪（トリグリセリド、中性脂肪）はそのままでは消化管から吸収されず、消化酵素の一つである膵リパーゼによって２−モノアシルグリセロールと脂肪酸に分解されてはじめて消化管から吸収される。吸収された２−モノアシルグリセロールは小腸上皮細胞で中性脂肪であるトリグリセリドに再合成され、カイロミクロンに取り込まれリンパを経て血中に放出される。血中に放出された中性脂肪は、リポタンパクリパーゼによって脂肪酸とグリセリンに分解され、脂肪組織に取り込まれ、トリグリセリドに再合成される。一方、ホルモン感受性リパーゼは脂肪組織中のトリグリセリドを分解して血中に脂肪酸を放出させる。
【０００４】
血中中性脂肪濃度は食事の影響を受けやすく、食後は食事由来の中性脂肪が流入し、血中中性脂肪濃度は上昇する。一方、空腹時血中中性脂肪濃度が上昇する要因には、脂肪や糖質の過剰摂取、過食等による肝臓でのＶＬＤＬの合成の増加等がある。しかしながら肥満や動脈硬化症、高脂血症等の疾病を抑制するためには、食後や空腹時を問わず血中中性脂肪濃度を上昇させないことが有効である。
【０００５】
近年、カテキンの機能性を期待して、カテキンと他の天然物由来物質とを組み合わせた、血中中性脂肪濃度の上昇を抑制させる医薬、組成物、及びそれらを含む食品が開示されている。
【０００６】
特許文献１には、松樹皮抽出物のＯＰＣ（oligomeric proanthocyanidin）を２０重量％以上含有し、かつ、カテキン（catechin）類を５．０重量％以上含有し、この松樹皮抽出物とアスコルビン酸またはその塩とを含有する、優れた高脂血症改善効果を有し、中性脂肪等を低下させると同時に、ＨＤＬコレステロールを上昇させることができる高脂血症改善剤およびこれを含有する健康食品が開示されている。
【０００７】
特許文献２には、ブドウ種子抽出物、ブルーベリーエキス、パッションフラワーエキス、ルチン及び緑茶カテキンから選ばれた１種又は２種以上からなるポリフェノール含有素材と、ニンニク由来のニンニク素材及び／又は無臭ニンニク由来の無臭ニンニク素材とを含む、血中総コレステロール値、血中中性脂肪値及び血液流動性を総合的に改善する、循環器疾患予防用組成物、または、これを含む健康食品が開示されている。
【０００８】
【特許文献１】特開２００３−１４６８９８号公報
【特許文献２】特開２００３−０９５９６８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、食習慣を変えることなく手軽かつ安全に摂取でき、血中中性脂肪濃度の上昇を抑制し、ひいては肥満症や動脈硬化症等の生活習慣病の予防できる薬剤及び飲食物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者は、従来、エステル型カテキンが膵リパーゼ阻害作用を有し、中でも（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇよりもそれらのエピマーである（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇが強い膵リパーゼ阻害作用を有することを見出し、リパーゼ阻害剤及びリパーゼ阻害飲食物の発明を完成させ特許出願（特願２００４−６０１６０号、平成１６年３月４日出願、未公開）を行った。
本発明者は、上記の中性脂肪吸収メカニズム及び該発明であるカテキンの膵リパーゼの阻害作用に基き、カテキンの食事中の脂肪吸収を阻害又は遅延しうる可能性についてさらに研究を進めた結果、エステル型カテキン（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇが、食事中の脂肪吸収を阻害又は遅延することができ、食後の血中中性脂肪濃度の上昇を抑制することができる強い効果を見出した。さらにはエステル型カテキンを長期的かつ継続的に摂取しつづけることで、空腹時の血中中性脂肪濃度を抑制する効果も併せ持つことも見出した。
【００１１】
すなわち、本発明は、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物を有効成分とする血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を提供する。
【００１２】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、食事由来の血中中性脂肪の吸収阻害効果を有し、食後の血中中性脂肪濃度の上昇を抑制することができる。さらに、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、長期的かつ継続的に摂取することで、空腹時の血中中性脂肪濃度も抑制することができ、肥満症や動脈硬化症などの生活習慣病の予防につながる効果を有する。また、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、食習慣を変えることなく、副作用を気にせず安全かつ有効的に摂取することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下に本発明の実施形態について説明する。ただし、本発明の範囲が以下に説明する実施形態に限定されるものではない。
【００１４】
（血中中性脂肪濃度上昇抑制剤）
本発明は、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物を有効成分とする血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を提供する。
【００１５】
本発明でいうカテキンとは、（−）-エピガロカテキンガレート；ＥＧＣｇ、（−）-ガロカテキンガレート；ＧＣｇ、（−）-エピカテキンガレート；ＥＣｇ、（−）-カテキンガレート；Ｃｇ、（−）-エピガロカテキン；ＥＧＣ、（−）-ガロカテキン；ＧＣ、（−）-エピカテキン；ＥＣ、（−）-カテキン；Ｃ、（＋）-カテキン；（＋）Ｃである。カテキンは紫外部波長で検出する高速液体クロマトグラフィーを用いた方法によって定性及び定量することができる。
【００１６】
「カテキン組成物を有効成分とする」の「有効成分とする」には、カテキンの血中中性脂肪濃度上昇抑制作用を備えていれば、カテキンのうち一種類以上の成分を任意の割合で含んでいればよいことが包含される。
【００１７】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤の有効成分であるカテキン組成物は、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物であればよく、９０質量％以上含有するのがより好ましい。
【００１８】
ここで、エステル型カテキンは、（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇを意味し、それぞれのカテキン骨格と没食子酸とがエステル結合した化合物の総称であり、従来公知の方法或いは今後公知となる方法によって得ることができる。
具体的には、エステル型カテキンは、茶葉を含めて天然植物中に存在することから、天然植物から水乃至熱湯やエタノール等の水溶性の有機溶媒又はこれらの混合物により抽出できる。さらにエステル型カテキンの含有量を高めるように精製するとより好ましい。
【００１９】
また、後述する茶の抽出液或いは浸出液などの（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇを含有するカテキン溶液、又は、市販の茶抽出物も使用することができる。また、エステル型カテキン量が所望組成になるように、精製したエステル型カテキンのうち一種類以上添加して、配合することができる。
【００２０】
（エピ体／非エピ体の比率）
また、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、エステル型カテキンのうち、非エピ体である（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を４０質量％以上含有すると好ましく、４０質量％〜６０質量％含有するとさらに好ましい。
【００２１】
ここで、非エピ体カテキンである（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇは、茶葉を含めて天然植物中にほとんど存在しない。しかし、例えば（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ又はこれらの混合物を約８０℃以上で加熱処理して熱異性化（エピマ−化）を促すことにより得ることができる。
従って、非エピ体カテキンは、例えば精製した（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、或いはこれらの混合物、又は、茶の抽出液或いは浸出液などの（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇを含有するカテキン溶液を、約８０℃以上で加熱処理してカテキンの熱異性化を促すことにより、（−）Ｃｇ及び（−）ＧＣｇの含有濃度を高めることができ、この加熱処理物から（−）Ｃｇ及び（−）ＧＣｇ或いはこれらの混合物、或いはこれらを高濃度で含有する混合物を分離・精製することができる。
【００２２】
また、後述する茶の抽出液或いは浸出液などのカテキン溶液、又は、市販の茶抽出物も使用することができる。このとき必要に応じて、上記のように加熱処理することで非エピ体カテキンの所望組成になるように質量比率を調整することができる。また、非エピ体カテキンの所望組成になるように、精製した非エピ体カテキンのうち一種類以上添加して、配合することができる。
【００２３】
（茶抽出物）
また、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤の有効成分であるカテキン組成物として、所望のエステル型カテキン比率の茶抽出物を用いることができる。以下に茶抽出物について説明する。
【００２４】
この際、原料とし得る茶は、カテキンを含有していれば特に種類、部位などには制限されず、例えば茶生葉、紅茶やプアール茶等の発酵茶、ウーロン茶や包種茶等の半発酵茶、緑茶や釜煎り緑茶、ほうじ茶等の不発酵茶のいずれか（単独）、又は、これらの２種類以上の混合物を抽出して得られるもの、或いはそれぞれを抽出して得られたものの混合物を用いることができる。
【００２５】
茶の抽出は、茶を水、温水または熱水、好ましくは４０℃〜１００℃の温熱水、中でも６０〜１００℃の温熱水、或いは人体に無害なエタノール水溶液またはエタノールなどの有機溶媒で抽出して茶抽出物を得、更にこの茶抽出物を溶媒抽出法、樹脂吸着法、限外濾過・逆浸透濾過等の濾過などの精製手段によってエステル型カテキンの含有量を高める方向に精製して茶抽出物を得る。さらに、精製して得られたカテキン溶液をさらに濃縮・乾燥し、固形物として得ることができる。この際の濃縮・乾燥工程は、減圧濃縮や凍結乾燥など通常の濃縮・乾燥方法により行うことができる。
【００２６】
また、市販の茶抽出物を用いて上記の如くエステル型カテキン比率を高める方向に処理するようにしてもよい。例えば、テアフラン３０Ａ（商品名；伊藤園社製）は、緑茶を熱水抽出処理し、この抽出物を乾燥させてカテキン濃度を約３０％とした緑茶抽出物であり、テアフラン９０Ｓ（商品名；伊藤園社製）は、緑茶を熱水抽出処理して得た抽出物を、水と低・高濃度アルコールを使って吸着カラムにて分離し乾燥させ、茶ポリフェノール濃度を約８５〜９９．５％とした緑茶抽出物である。その他、市販の茶抽出物として三井農林（株）製「ポリフェノン」、太陽化学（株）製「サンフェノン」、サントリー（株）製「サンウーロン」等も用いることができる。
【００２７】
さらに、茶抽出物又は市販の茶抽出物は、適宜加熱処理することによりエピ体カテキン量又は非エピ体カテキン量の質量比率を調整することができる。また、上記の加熱処理に加え、茶抽出物又は市販の茶抽出物に精製したカテキンのうち一種類以上添加して、カテキンの所望組成を調製することができる。
【００２８】
（カフェイン比率）
さらに、血中中性脂肪濃度上昇抑制剤の有効成分として用いる茶抽出物に含有するカフェイン含有量は質量比率で、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ の合計含有量に対して、０．２以下であれば好ましく、０．１５以下であればさらに好ましい。
【００２９】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤に含まれるカフェイン量は、必要に応じて茶抽出物中に含まれるカフェインの一部を樹脂吸着法等の公知技術によって除去したり、精製したカフェインを所望量添加したりして、所定の比率に調整することができる。また、カフェインもエステル型カテキンと遊離型カテキンの測定法で同時定量が可能である。
【００３０】
カフェイン含量の質量比率が０．２以下であれば、摂取する際にカフェインに由来する苦味・エグ味を低減することができるだけでなく、多量摂取によるカフェインの毒性を回避しうる。
【００３１】
なお、本発明の血中中性脂肪濃度抑制剤は、カフェインを含まなくてもよい。茶抽出物中に含まれるすべてのカフェインは、上述の公知技術を用い、さらに適宜条件を変更することで完全に除去することができる。また、カフェインを含まない市販の茶抽出物を用いることもできる。カフェインを含まない場合、多量摂取によるカフェインの毒性を考える必要はない。
【００３２】
（血中中性脂肪濃度上昇抑制剤の剤型、製造）
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、経口投与剤または非経口投与剤（筋肉注射、静脈注射、皮下投与、直腸投与、経皮投与、経鼻投与など）として使用することができ、それぞれの投与に適した配合及び剤型とするのが好ましい。
剤型について言えば、例えば経口投与剤用としては液剤、錠剤、散剤、顆粒、糖衣錠、カプセル、懸濁液、乳剤、丸剤などの形態に調製することができ、非経口投与剤用としては注射剤、アンプル剤、直腸投与剤、油脂性坐剤、水溶性坐剤などの形態に調製することができる。
配合（製剤）について言えば、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、表面活性剤、潤滑剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤などを用いて常法により製造することができる。また、例えば乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウムなどの無毒性の添加剤を配合することも可能である。
【００３３】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤は、医薬品のほか、医薬部外品、薬理効果を備えた健康食品・健康飲料・特定保健用食品・機能性食品、食品添加剤、その他ヒト以外の動物に対する薬剤や餌、餌用添加剤などとして提供することもできる。
例えば、医薬部外品として調製し、これを瓶ドリンク飲料等の飲用形態、或いはタブレット、カプセル、顆粒等の形態とすることにより、より一層摂取し易くすることができる。
【００３４】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤には、酸化防止剤、乳化剤、保存料、ｐＨ調整剤、香料、調味料、甘味料、酸味料、品質安定剤等の添加剤を単独、あるいは併用して配合しても良い。例えば、酸化防止剤としてはビタミンＣ、ビタミンＥ、システインなどを用いることができ、特にビタミンＣを０．００５〜０．０５重量％含有するのがよい。また、例えば甘味料としてはぶどう糖、果糖、異性化液糖、フラクトオリゴ糖、乳化オリゴ糖、大豆オリゴ糖、サイクロデキストリン、アスパルテーム、ラカンカエキスなどを用いることができる。
【００３５】
（血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲食物）
次に、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲食物（すなわち、血中中性脂肪濃度上昇抑制食品及び飲料を含む。）について詳しく説明する。
【００３６】
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を有効成分として、飲食物に添加し、血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲食物とすることができる。本発明では食品及び飲料をまとめて「飲食物」という。よって、飲食物には食品及び飲料が含まれる。
【００３７】
通常の茶系飲料（本発明において、茶葉等抽出成分を含有する飲料の総称として茶系飲料という）に含まれるエステル型カテキンは、全カテキン量に対して５０％程度（残りは遊離型カテキンである）である。
従って、茶葉等を抽出して得られるカテキン溶液を作製し、これを上述した加熱処理や加水分解処理を適宜行うことにより、非エピ体カテキン質量比率又は／及び遊離型カテキン質量比率を所望量、中でもエステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上であって、かつエステル型カテキンのうち、非エピ体である（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を４０質量％以上含有する茶系飲料由来の血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲料を製造することができる。また、非エピ体カテキン又は／及びエステル型カテキンの所望組成になるように、精製したカテキンのうち一種類以上添加して、配合することができる。
【００３８】
さらに本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた飲食物は、上記のようにして得られたカテキン溶液の加熱処理液や加水分解処理液をそのまま或いは風味改善のため適宜茶抽出物やその他の物質を添加して調製すればよい。
【００３９】
なお、本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物は、上記のようにして得られたカテキン溶液の加熱処理液や加水分解処理液をさらに濃縮・乾燥し、得られた固形物を配合して製造することができる。この際の濃縮・乾燥工程は、減圧濃縮や凍結乾燥など通常の濃縮・乾燥方法により行うことができる。
【００４０】
血中中性脂肪濃度上昇抑制効果を備えた健康食品・健康飲料・特定保健用食品・機能性食品としては、例えば、カテキン溶液を、炭酸、賦形剤（造粒剤含む）、希釈剤、或いは更に甘味剤、フレーバー、小麦粉、でんぷん、糖、油脂類等の各種タンパク質、糖質原料やビタミン、ミネラルなどの飲食品材料群から選ばれた一種或いは二種以上と混合したり、或いは、現在公知の飲食品、例えばスポーツ飲料、果実飲料、乳飲料、茶飲料、野菜ジュース、乳性飲料、アルコール飲料、ゼリー、ゼリー飲料、炭酸飲料、チューインガム、チョコレート、キャンディ、ビスケット、スナック、パン、乳製品、魚肉練り製品、畜肉製品、冷菓、乾燥食品、サプリメントなどに添加して製造することができる。
【００４１】
（投与量）
本発明の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物におけるカテキンの必要摂取量は、一般成人で１日当たり２００〜２１００ｍｇ程度であると考えられる。摂取量は使用方法によって適宜選ぶことができ、中でも乾燥重量換算でエステル型カテキンを１４０ｍｇ〜１４７０ｍｇ程度（そのうち（−）ＧＣｇ及び（−）Ｃｇは、合計量で６０〜５９０ｍｇ程度含まれる）摂取するのが好ましい。特に乾燥重量換算でエステル型カテキンを２００ｍｇ〜７００ｍｇ程度（そのうち（−）ＧＣｇ及び（−）Ｃｇは、合計量で７０〜３００ｍｇ程度含まれる）摂取するのが好ましい。
【００４２】
上記の必要摂取量から考えると、固形形態の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物の場合、エステル型カテキン類を約０．１〜１００質量％含有させるようにするのが好ましく、中でも（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇ或いはこれらの混合物を、約０．０４〜１００質量％、特に約０．１〜６０質量％配合するのが好ましい。
エステル型カテキン類約０．１質量％未満では、摂取すべき固形物の量が１日当たり約２ｋｇを超えることがあるため好ましくない。
【００４３】
他方、液状の形態の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物の場合、エステル型カテキン類を約５００〜６０００ｍｇ／Ｌ程度の濃度で含有させるのが好ましく、中でも（−）ＧＣｇ、（−）Ｃｇ或いはこれらの混合物を約２００ｍｇ／Ｌ、以上、特に約２００〜３６００ｍｇ／Ｌ程度の濃度で含有させるのが好ましい。
エステル型カテキン類濃度が５００ｍｇ／Ｌ未満では、摂取すべき飲料の体積が１日当たり４Ｌを超えることがあるため好ましくない。６０００ｍｇ/Ｌを超えると、カテキン類が高濃度となり渋味が強すぎるため好ましくない。より好ましくは、エステル型カテキン類濃度７５０〜３７５０ｍｇ／Ｌ程度である。
【００４４】
（効果）
このようにして得られた血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物は、主原料として天然物、特に日常多量に飲用している茶から得た成分を用いるので、安心して日常的に摂取することができる保健用飲食物として提供することができる。また、食習慣を変えることなく摂取でき、安全かつ有効的な薬剤及び飲食物である。
【実施例】
【００４５】
以下に実施例を示す。なお、実施例における各測定値は平均値±標準偏差で示し、有意差検定は分散分析にて行い、ｐ＜０．０５を有意差とした。
【００４６】
（実施例１）ラットにおける中性脂肪のリンパ吸収におよぼすカテキンサンプルの影響の検討
【００４７】
（サンプル調製）
タウロコール酸ナトリウム２００ｍｇ、脂肪酸を含まないウシアルブミン分画Ｖ５０ｍｇ、トリオレイルグリセロール２００ｍｇ及び３７ｋＢｑの14Ｃ−トリオレイルグリセロールを含有させ超音波処理により作製した、14Ｃ-トリオレイルグリセロール含有エマルション３ｍＬを調製し、これをコントロール１とした。
また、カテキンサンプルは、サンプルＡはカテキン製剤（テアフラン９０Ｓ、（株）伊藤園製）、サンプルＢは熱異性化（１２３℃、７分間）したカテキン製剤（テアフラン９０Ｓ，（株）伊藤園製）を用いた。コントロール１（該エマルション３ｍＬ）にそれぞれ１００ｍｇずつ添加し、サンプルＡ含有エマルション及びサンプルＢ含有エマルションを調整した。カテキンサンプルＡ及びＢのカテキン組成を表1に示す。
【００４８】
【表１】
【００４９】
予備飼育として、手術する１週間前より市販の固形食（ＮＭＦ、日本オリエンタル酵母製）を与えた８週齢ＳＤラットを準備した。
次に該８週齢ＳＤラットに、ソムノペンチル麻酔薬（０．０８ｍｌ／１００ｇ体重、共立商事（株））を投与後、これらのラットの頭部くも膜下槽乳糜（にゅうび）への左胸部リンパ管に、カテーテル（ＳＶ３５、夏目製作所（株））を挿入し、胃には後述するサンプルを投与するためのカテーテル（ＳＰ５５、夏目製作所（株））を挿入固定する手術を行った。
手術後、１３９ｍＭ グルコース−８５ｍＭ ＮａＣｌ溶液を自由摂取させた。また、手術後から実験終了まで、カテーテルを介して１３９ｍＭグルコース−８５ｍＭ ＮａＣｌ溶液を３．４ｍｌ／ｈｏｕｒ／ｒａｔとなるように持続的に胃に注入した。
翌朝、手術したＳＤラットを平均リンパ流速が等しくなるように３群に分けた（対照群、サンプルＡ群、サンプルＢ群、それぞれｎ＝７）。対照群にはコントロール１を、サンプルＡ群にはサンプルＡ含有エマルションを、サンプルＢ群にはサンプルＢ含有エマルションをそれぞれ投与した。
サンプル投与後１、２、３、４、５、６、８および２４時間後のリンパ液を、ＥＤＴＡを含む氷冷管で捕集して、リンパ液中の14Ｃ−放射活性を測定した。
【００５０】
図1に示すように、カテキンサンプルＡ及びＢにより、試験エマルション投与後２時間まで有意に中性脂肪のリンパ吸収が阻害されており、その傾向は投与後８時間まで続いた。
【００５１】
（実施例２） ラットにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度におよぼすカテキンサンプルの影響
予備飼育として、３日前より市販の固形食（ＣＥ−２、日本クレア製）を与え、次いで一晩絶食させた８週齢Ｗｉｓｔｅｒ系雄ラットを準備した。
次いで該ラットから、頸静脈採血を行った。このときを０時間とした。
このラットを３群に分け（対照群（ｎ＝８）、サンプルＡ群（ｎ＝７）、サンプルＢ群（ｎ＝８））、対照群には脱イオン水を、サンプルＡ群には脱イオン水に溶解したカテキンサンプルＡを、サンプルＢ群には脱イオン水に溶解したカテキンサンプルＢをそれぞれ５ｍＬ／ｋｇ−ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ（１００ｍｇサンプル／ｋｇ−ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ）経口投与した。なお、カテキンサンプルＡ及びＢは前述したように調整し、それぞれのカテキン組成を表1に示す。
その直後、脂質エマルション（Soybean oil 10g, Egg yolk lecithin 0.6g, Glycerol 1.125g / 50 ml脱イオン水、J. Nutr, 133, 1887-1891, 2003）を１０ｍｌ／ｋｇ−ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔそれぞれ経口投与した。脂質エマルション投与後、１、２、３、４、６、および８時間後に頸静脈採血を行った。
採血後、血漿を分離し、トリグリセライドＥ−テストワコー（和光純薬工業製）を用い、血中中性脂肪濃度を測定した。
【００５２】
図２に示すように、サンプルＡ及びサンプルＢ は、脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度の上昇を有意に抑制した。
実施例１及び実施例２より、カテキンによる食後血中中性脂肪濃度の上昇抑制作用機構は、エステル型カテキンの膵リパーゼ阻害作用による中性脂肪の吸収の遅延によるものと示唆される。
【００５３】
（実施例３） ヒトにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度におよぼすカテキンサンプルの影響
【００５４】
（サンプル調製）
湯（７０℃）６０ｍＬに１．５ｇの日本産緑茶葉を加え、５分間攪拌抽出して緑茶抽出液を得、さらに合成吸着樹脂（ＰＶＰＰ）１ｇを投入し、１０分間攪拌した後、ろ過により、該茶葉、該合成吸着樹脂を除去した。この抽出液に環状オリゴ糖（日本食品加工（株）製）０．５ｇ、茶抽出物（テアフラン９０Ｓ、（株）伊藤園製、組成は表２を参照）をそれぞれ０（サンプルＣ）、０．３４５ｇ（サンプルＤ）、１．０３５ｇ（サンプルＥ）及びビタミンＣ適量加え、炭酸水素ナトリウムでｐＨを調整した後、純水を加え全量２５０ｍＬとした。この液を微細ろ過、さらに加熱殺菌（１３５℃、３０秒）を行い、飲料を調製した。茶抽出物の添加量ごとにサンプルＣ、サンプルＤ、サンプルＥとし、それぞれのカテキン組成を表３に示す。
【００５５】
【表２】
【００５６】
【表３】
【００５７】
被験者９名にトリプルクロスオーバー、二重盲検で脂肪分を１８．８ｇ含む高脂肪負荷食を摂取させ、食事中にサンプルＣ、サンプルＤ、サンプルＥのいずれか２５０ｍｌ摂取させた。
高脂肪負荷食を食べる直前を０時間とし、０、１、２、３、４、６時間後に採血を行い、血中中性脂肪濃度を測定した。
なお、被験者には医師より試験の目的、方法などについて十分に説明し、ヘルシンキ宣言の趣旨に従い本人の文書による同意を得た上で実施した。
【００５８】
図３に示すように、摂取後２時間まではサンプルＤ及びサンプルＥは血中中性脂肪濃度の変化量が対照であるサンプルＣと比較して有意に低かった。また、図４に示すように、中性脂肪ΔＡＵＣはサンプルＤ及びサンプルＥは、サンプルＣと比較して有意に低かった。エステル型カテキンの割合の多いカテキン組成物の摂取は、有効に食後血中中性脂肪濃度の上昇抑制すると示唆される。
【００５９】
（実施例４）ヒトにおける血中中性脂肪濃度におよぼすカテキンサンプル長期摂取の影響
【００６０】
（サンプル調製）
湯（７０℃）６０ｍＬに１．５ｇの日本産緑茶葉を加え、５分間攪拌抽出して緑茶抽出液を得、さらに合成吸着樹脂（ＰＶＰＰ）１ｇを投入し、１０分間攪拌した後、ろ過により、該茶葉、該合成吸着樹脂を除去した。この抽出液に環状オリゴ糖（日本食品加工（株）製）０．５ｇ、茶抽出物（テアフラン９０Ｓ、（株）伊藤園製、組成は表２を参照）をそれぞれ０（サンプルＦ）、０．３４５ｇ（サンプルＧ）及びビタミンＣ適量加え、炭酸水素ナトリウムでｐＨを調整した後、純水を加え全量２５０ｍＬとした。この液を微細ろ過、さらに加熱殺菌（１３５℃、３０秒）を行い、飲料を調製した。茶抽出物の添加量ごとにサンプルＦ、サンプルＧとし、それぞれのカテキン組成を表４に示す。
【００６１】
【表４】
【００６２】
ＢＭＩ２２．５〜３０の２０〜５０代の男女の被験者１９５名を３群にわけた（サンプルＦ３本／日群、サンプルＧ２本／日群、サンプルＧ３本／日群、それぞれｎ＝６６、６５、６４）。サンプルＦ３本／日群にはサンプルＦ３本／日を、サンプルＧ２本／日群にはサンプルＧ２本／日とサンプルＦ１本／日を、サンプルＧ３本／日群にはサンプルＧ３本／日を、普段の食生活を変えることなく１２週間摂取させた。
なお、被験者には医師より試験の目的、方法などについて十分に説明し、ヘルシンキ宣言の趣旨に従い本人の文書による同意を得た上で実施した。
【００６３】
図５に示すように、摂取開始４〜１２週、さらに後観察２０週目まで、対照であるサンプルＦ３本／日群の血中中性脂肪濃度と比較して、サンプルＧ３本／日群の血中中性脂肪濃度は減少する傾向にあった。特に後観察期間の１６週目には有意であった。また、後観察期間の１６〜２０週目において、対照であるサンプルＦ３本／日群の血中中性脂肪濃度と比較して、サンプルＧ２本／日群の血中中性脂肪濃度は減少する傾向にあった。
実施例４より、エステル型カテキンの割合の多いカテキン組成物を長期的・継続的に摂取することで空腹時の血中中性脂肪濃度をも低下させることが示された。
【図面の簡単な説明】
【００６４】
【図１】ラットにおける中性脂肪のリンパ吸収率の経時変化を示す図である。
【図２】ラットにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度の経時変化を示す図である。
【図３】ヒトにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度の経時変化を示す図である。
【図４】ヒトにおける脂肪負荷後の血中中性脂肪濃度のΔＡＵＣへのカテキンサンプルの影響を示す図である。
【図５】ヒトにおけるカテキンサンプルの長期摂取による空腹時血中中性脂肪濃度の経週変化を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物を有効成分とする血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項２】
エステル型カテキンのうち、非エピ体である（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を４０質量％以上含有することを特徴とする請求項１に記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項３】
カテキン組成物が茶抽出物であり、かつ、該茶抽出物中のカフェイン含有量が質量比率で、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ の合計含有量に対して、０．２以下であることを特徴とする請求項１又は２に記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項４】
エステル型カテキン類である（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ及び（−）Ｃｇを合計で、０．１〜１００質量％含有する請求項１〜３のいずれかに記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項５】
エステル型カテキン類である（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ及び（−）Ｃｇを合計で、５００〜６０００ｍｇ／Ｌ含有する請求項１〜３のいずれかに記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物。
【請求項１】
エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を、合計で全カテキン合計含有量の７０質量％以上含有するカテキン組成物を有効成分とする血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項２】
エステル型カテキンのうち、非エピ体である（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ を４０質量％以上含有することを特徴とする請求項１に記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項３】
カテキン組成物が茶抽出物であり、かつ、該茶抽出物中のカフェイン含有量が質量比率で、エステル型カテキンである（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ 及び （−）Ｃｇ の合計含有量に対して、０．２以下であることを特徴とする請求項１又は２に記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項４】
エステル型カテキン類である（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ及び（−）Ｃｇを合計で、０．１〜１００質量％含有する請求項１〜３のいずれかに記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項５】
エステル型カテキン類である（−）ＥＧＣｇ、（−）ＥＣｇ、（−）ＧＣｇ及び（−）Ｃｇを合計で、５００〜６０００ｍｇ／Ｌ含有する請求項１〜３のいずれかに記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の血中中性脂肪濃度上昇抑制剤を含有する飲食物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公開番号】特開２００６−８３１０６（Ｐ２００６−８３１０６Ａ）
【公開日】平成１８年３月３０日（２００６．３．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２７０３６３（Ｐ２００４−２７０３６３）
【出願日】平成１６年９月１６日（２００４．９．１６）
【出願人】（５９１０１４９７２）株式会社 伊藤園 (213)
【出願人】（５０４１４５３４２）国立大学法人九州大学 (960)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１８年３月３０日（２００６．３．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年９月１６日（２００４．９．１６）
【出願人】（５９１０１４９７２）株式会社 伊藤園 (213)
【出願人】（５０４１４５３４２）国立大学法人九州大学 (960)
【Ｆターム（参考）】
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