高効率で簡便にＰＮＰａｓｅを製造することができ、また医薬品原料としての核酸重合体の合成において問題となるエンドトキシンの混入を低減できる、ＰＮＰａｓｅの製造法を提供することである。ＰＮＰａｓｅ遺伝子とＴ７プロモーターとを連結する発現ベクターにより、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子を有する大腸菌等を形質転換したものを用いることなどにより、ＰＮＰａｓｅを製造する。また、ＰＮＰａｓｅの精製工程をより簡便にするために、タグ遺伝子を有する発現ベクターを利用したり、培養時間を長くする。 （もっと読む）

【課題】これまでのＤＮＡ合成反応に比べて優れた効率でＤＮＡ合成を実施することが可能な方法を提供すること。
【解決手段】３’→５’エキソヌクレアーゼ活性を有する２種以上のＤＮＡポリメラーゼを含有してなるＤＮＡ合成反応用組成物；ＤＮＡ合成反応を行なうに際し、３’→５’エキソヌクレアーゼ活性を有する２種以上のＤＮＡポリメラーゼを使用することを特徴とするＤＮＡ合成方法；ならびに、試験管内ＤＮＡ合成に使用されるキットであって、３’→５’エキソヌクレアーゼ活性を有する２種以上のＤＮＡポリメラーゼを含有してなるキット。 （もっと読む）

【課題】
【解決手段】
プラスミドＤＮＡ生成技術の改良は、将来のＤＮＡワクチン及びＤＮＡ治療の経済的実現可能性を保証するために必要である。一般的な方法が、記載されており、これによって醗酵層中でのプラスミドＤＮＡ生産性を劇的に増加することができる。これらのプロセスは、新規の増殖と誘導期の温度シフトと組み合わせて、流加培養醗酵戦略を特徴付ける。 （もっと読む）

【課題】
遺伝子発現分析を簡便かつ正確に行うためのＲＴ−ＰＣＲ法を提供する。
【解決手段】
逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）の全プロセスを、ポリプロピレンなどで作ったオリゴヌクレオチド固定化マイクロプレートを用いて簡略化する。マイクロプレートにはオリゴヌクレオチドが確実に固定化され、それをPCRの熱サイクルに供することができる。RT-PCRは好ましくは固相で行う。mRNAの捕捉およびRT-PCRを同一プレートで行うことができる。マイクロプレート上に捕捉されたmRNAから合成されたcDNAは２回以上使用することができる。さらに、マイクロプレートと組み合わせて、細胞溶解物の調製のためにフィルタープレートを用いて、標的細胞をこのフィルタープレート上に位置させ、溶解用緩衝液をフィルター上の細胞層を通過させて、細胞溶解物をウェルとウェルとの連通により直接にマイクロプレートに移すことができる。 （もっと読む）

本発明は、組織細胞および／または核酸分子の単離用の方法およびシステムに関する。特に、ｉ）組織試料を組織解離用の少なくとも１つの酵素で処理し、ｉｉ）溶解溶液を添加し、次いで、ｉｉｉ）核酸分子を単離することを含む、組織試料から核酸分子を単離する方法に関する。前記方法は、さらに、流体力学剪断力をステップ（ｉ）の生成物に適用するステップを含む。本発明による方法および／またはシステムは、ミクロ機械および／または自動化プロセスで用いるのに適合することができる。 （もっと読む）

【課題】タンパク質やRNAなどの生体高分子のハイスループットな試験管内合成反応法のシステム技術を開発する。
【課題を解決するための手段】
鋳型物質を原料にする合成系であって、以下の手段、その制御手段、又はその組合せを含むことを特徴とする無細胞系合成システム；
１）鋳型物質、基質、及び反応溶液を接触させて合成反応系に導く。
２）合成速度の略低下前後又は合成反応の略停止前後、又はそれらの途上に、反応系を合成反応系外におき溶液の希釈処理をする。
３）希釈処理に続いて、濃縮処理を行う。
４）反応系を合成反応系に戻す。
又は
１）鋳型物質、基質、及び反応溶液を接触させて合成反応に導く。
２）合成速度の略低下前後、合成反応の略停止前後、又はそれらの途上に、反応系を合成反応系外におき溶液を濃縮処理する。
３）濃縮処理に続いて希釈処理を行う。
４）希釈された反応系を合成反応系に戻す。 （もっと読む）

【課題】様々な機能性分子を任意にナノレベルで配列させることができ、溶液中での機能性分子間の距離を一定に設定して制御することができ、機能性分子の種類の組み合わせを容易に変えることができ、機能性分子の機能を実質的に損なうことなく任意の溶液中で簡便に機能性分子をスペーサー分子に結合させることができる、機能性高分子複合体の製造方法を提供すること。
【解決手段】生体高分子との間で結合活性を有する機能性分子に対する結合性部位を有する２種のプライマーからなるプライマー対と、鋳型核酸との存在下に、ポリメラーゼ連鎖反応を行なうことを特徴とする、少なくとも２つの機能性分子を有する機能性高分子複合体の製造方法。 （もっと読む）

本発明は、グレリンのアンタゴニスト（ここで、該アンタゴニストは核酸であり、そして好ましくは、該核酸はグレリンに結合している）に関する。 （もっと読む）

本発明は、主要なエネルギー源としてＡＴＰを必要とする無細胞系における、生物高分子の生体外合成を増強するための方法及び組成を提供する。なお、前記無細胞系はＡＴＰ−スルフリラーゼで富化される。本発明は、また、生物高分子の生体外合成を増強するための、ＡＴＰ−スルフリラーゼで富化した無細胞系及び無細胞抽出物に関する。 （もっと読む）

本発明は、オリゴヌクレオチドの合成および精製に用いる方法および反応試薬に関する。本発明をひとつの側面から見ると、オリゴヌクレオチド合成において、ホスホルアミダイトの活性化に有用な化合物に関する。別の側面から見ると、本発明に従うアクチベーターを用いたホスホルアミダイト法によってオリゴヌクレオチドを調製する方法に関する。さらに別の側面から見ると、硫黄転移反応試薬に関する。好ましい実施態様においては、硫黄転移反応試薬は3−アミノ−1,2,4−ジチアゾリジン−5−オンである。別の側面から見ると、本発明に従う硫黄転移反応試薬を用いてホスファイトを処理することにより、ホスホロチオエートを調製する方法に関する。好ましい実施態様においては、硫黄転移反応試薬は3−アミノ−1,2,4−ジチアゾリジン−5−オンである。別の側面から見ると、エチルニトリル保護基を有するホスフェート基の脱保護中に生成したアクリロニトリルを捕獲する化合物に関する。好ましい実施態様においては、アクリロニトリル捕捉剤は、ポリマーに結合したチオールである。また別の側面から見ると、ホスファイトをホスフェートに酸化する際に使用する反応試薬に関する。好ましい実施態様においては、酸化剤は、亜塩素酸ナトリウム、クロロアミンまたはピリジン−N−オキシドである。さらにまた別の側面から見ると、第一の一本鎖オリゴヌクレオチドと第二の一本鎖オリゴヌクレオチドとをアニールさせて二本鎖オリゴヌクレオチドを形成させ、該二本鎖オリゴヌクレオチドをクロマトグラフィー精製することにより、オリゴヌクレオチドを精製する方法に関する。好ましい実施態様においては、クロマトグラフィー精製は、高速液体クロマトグラフィーである。 （もっと読む）

本発明は、原核生物ＤＮＡの分離および濃縮のうち少なくともいずれか一方を行う方法に関し、該方法は、（ａ）溶液中に存在する少なくとも１つの原核生物ＤＮＡを、原核生物ＤＮＡに特異的に結合し、野生型のＣＧＰＢタンパク質と２５％〜３５％の相同性を有するタンパク質と接触させることによって、タンパク質‐ＤＮＡ複合体を形成する工程と、（ｂ）前記複合体を分離する工程とからなる。本発明は前記方法を実施するためのキットにも関する。
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本発明は、全般的に、プラスミドＤＮＡ生産の収率を向上させるための方法に関する。本方法は、ＤＮＡプラスミドを含有する、これらに限定されないがＤＨ５株を含むＥ．コリ株の高生産性クローンサブタイプを選択し、既知組成の培地中で半回分発酵を用いて前記クローンサブタイプを培養する、段階を含む。本明細書中で述べるプラスミドＤＮＡ生産プロセスは、前記高生産性クローンサブタイプが工業スケールで培養される場合に、プラスミドＤＮＡの記録量を生じさせることができる。ポリヌクレオチドワクチン接種及び遺伝子治療処置計画での使用のための、医薬グレードのＤＮＡ生産のために、この開示方法を使用することができる。 （もっと読む）

オリゴＲＮＡを液相合成するために重要であるリン酸トリエステル化された新規なリボ核酸化合物を提供する。
本発明として、次の一般式で表されるリボ核酸化合物を挙げることができる。


式中、Ｂは、アデニン、グアニン、シトシン、若しくはウラシル又はそれらの修飾体を示す。Ｒ^２１は置換されていてもよいアリール又は１〜２環性であって置換されていてもよい複素環基を示す。Ｒ^２０はＨ又は置換されていてもよいアルキルを示す。Ｒ^１は、０℃〜６０℃のいずれかの温度においてｐＨ２〜４の酸性条件下２４時間で９０％以上脱離することができる保護基を示す。 （もっと読む）

抗原に対する免疫応答を生じさせる方法を提供する。方法は抗原をコードする発現ベクターを投与して個体をプライミングすることを含む。ベクターは分泌可能な融合タンパク質をコードする転写ユニットを含み、融合タンパク質は抗原およびCD40リガンドを含む。抗原およびCD40リガンドを含む融合タンパク質の投与を用いて、ベクター投与のみで得られるより高く免疫応答を増強させる。本発明の方法を使用して癌が発現する腫瘍抗原（例えばムチンまたはヒト乳頭腫ウイルス腫瘍抗原）に対する免疫応答を生成し、感染性物質に対する免疫応答を生成してもよい。発現ベクターおよび融合タンパク質を同時に生成する方法も提供する。
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本発明は、コードオリゴヌクレオチドタグを含む分子のライブラリーを合成する方法を提供する。この方法では、コードオリゴヌクレオチドに連結された第１の基礎単位を含む開始剤を含む溶液を多数の画分に分割する「スプリット・アンド・プール」法が利用される。それぞれの画分において、開始剤が、第２の特有の基礎単位と、また、第２の基礎単位を特定する第２の特有のオリゴヌクレオチドと反応する。これらの反応は同時または逐次的であることが可能であり、逐次的である場合、いずれかの反応の前に、他方の反応を行うことができる。
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【課題】高純度のプラスミドＤＮＡを作成及び単離するための装置を提供する
【解決手段】本発明に係る装置は、細胞の溶解に用いられる装置であって、細胞懸濁液（（溶液１）を、細胞を溶解させる溶液（溶液２）と迅速に混合させる乱流手段（Ｂ１ａ）と、乱流手段で作成され該乱流手段から流れ込んだ混合液を、実質的に攪拌することなく培養する層流手段（Ｂ１ｂ）とを備えている。また、前記混合液を中性化する溶液（溶液３）を加える手段（Ｍ２）をさらに備えており、層流手段で培養された混合液が、層流手段から溶液３を加える手段に流れ込むように構成されている （もっと読む）

本発明は、ミクロRNAおよびsiRNA分子のような小型RNA分子(100ヌクレオチドまたはそれ未満)の単離のための方法および組成物の使用に関する。そのような分子は、日常的には、一般に用いられる単離手順において失われ、従って、本発明は、これらの小型RNA分子のより高レベルの濃縮または単離を可能にする。 （もっと読む）

本発明は、ポリマー成分および塩成分を有する水性２相系を使用することによって、バイオマスからプラスミドＤＮＡを単離する方法であって、使用されるバイオマスの再懸濁、バイオマスのアルカリ溶解、アルカリ溶解バッチの中和、および混入物（例えば、細胞壊死組織片、ＲＮＡおよびｇＤＮＡなど）からのプラスミドＤＮＡの分離が単一反応容器（ワンポット方法）で行われることを特徴とする方法に関する。本発明に従って、アルカリ溶解バッチの中和がリン酸カリウムの添加によって、１つおよび同じ容器内で行われ、したがって、水性２相系の一方の成分が既に存在する点から、かつ水性２相系の第２成分が数平均で約６００ｇ／ｍｏｌ〜１，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するＰＥＧであるが、好ましくはＰＥＧ６００とＰＥＧ１０００との混合物から形成されるという点から、これが可能となる。 （もっと読む）