アゼチジノンの生産のためのケトレダクターゼポリペプチド
ケトレダクターゼ（ＫＲＥＤ）またはカルボニルレダクターゼクラス（ＥＣ１．１．１．１８４）に属する酵素は、対応するプロ立体異性体ケトン基質または対応するラセミのアルデヒド基質から光学活性アルコールを合成するのに有用である。本開示は、天然に存在する野生型ケトレダクターゼ酵素と比較して改良された特性を有する組み換えケトレダクターゼ酵素を提供する。また、組み換えられたケトレダクターゼ酵素をコードするポリヌクレオチド、組み換えケトレダクターゼ酵素を発現することができる宿主細胞、および様々なキラル化合物を合成するために組み換えケトレダクターゼ酵素を用いる方法が提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに、少なくとも約６０％の立体異性体過剰率（％）で変換することができるケトレダクターゼポリペプチド。
【請求項２】
以下の特徴：Ｘ９４に対応する残基がトレオニンである；Ｘ１９９に対応する残基がヒスチジンである；およびＸ２０２に対応する残基がバリンまたはロイシンである、を有する配列番号２または４または８６に基づく参照配列に対して、少なくとも約８５％が同一であるアミノ酸配列を含み、但し、Ｘ９４に対応する残基が、脂肪族または極性残基であり；Ｘ１９９に対応する残基が、脂肪族、拘束性、または極性残基であり；およびＸ２０２に対応する残基が、バリンまたはロイシンであるアミノ酸配列を有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】
Ｘ９４に対応する残基がトレオニンである、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
Ｘ１９９に対応する残基が、アラニン、ヒスチジン、またはアスパラギンである、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項５】
Ｘ９４に対応する残基が、極性残基であり；Ｘ１９９に対応する残基が、脂肪族、拘束性、または極性残基であり；およびＸ２０２に対応する残基が、バリンまたはロイシンである、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項６】
Ｘ９４に対応する残基が、トレオニンであり、Ｘ１９９に対応する残基が、アラニン、ヒスチジン、またはアスパラギンであり；およびＸ２０２に対応する残基が、バリンまたはロイシンである、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項７】
ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ２に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ４に対応する残基が、塩基性残基またはシステインである；
Ｘ１１に対応する残基が、非極性、脂肪族、または芳香族残基である；
Ｘ４０に対応する残基が、拘束性、または塩基性残基である；
Ｘ８０に対応する残基が、非極性、脂肪族、または極性残基である；
Ｘ８６に対応する残基が、非極性、脂肪族、または極性残基である；
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１０５に対応する残基が、非極性、脂肪族、塩基性、または酸性残基である；
Ｘ１２９に対応する残基が、非極性、または極性残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１５３に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９０に対応する残基が、芳香族、または拘束性残基である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２０６に対応する残基が、非極性、または芳香族残基である；
Ｘ２２６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２４８に対応する残基が、非極性、または塩基性残基である；
Ｘ２４９に対応する残基が、芳香族残基である；
の１つ以上をさらに有し、ここで該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項２〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ２に対応する残基が、アラニンである；
Ｘ４に対応する残基が、システインである；
Ｘ１１に対応する残基が、フェニルアラニンである；
Ｘ４０に対応する残基が、アルギニンである；
Ｘ８０に対応する残基が、トレオニンである；
Ｘ８６に対応する残基が、イソロイシンである；
Ｘ９６に対応する残基が、バリンまたはフェニルアラニンである；
Ｘ１０５に対応する残基が、グリシンである；
Ｘ１２９に対応する残基が、トレオニンである；
Ｘ１４７に対応する残基が、メチオニンまたはロイシンである；
Ｘ１５３に対応する残基が、アラニンまたはセリンである；
Ｘ１９０に対応する残基が、ヒスチジンまたはプロリンである；
Ｘ１９５に対応する残基が、バリンである；
Ｘ１９６に対応する残基が、ロイシンである；
Ｘ２０６に対応する残基が、フェニルアラニンである；
Ｘ２２６に対応する残基が、バリンである；
Ｘ２４８に対応する残基が、リジン、またはアルギニンである；
Ｘ２４９に対応する残基が、トリプトファンである；
の１つ以上をさらに有し、ここで、該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項２〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ４０に対応する残基が、拘束性、または塩基性残基である；および
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
の１つ以上をさらに有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性であるか、芳香族であるか、非極性であるか、または脂肪族である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２２６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２４８に対応する残基が、非極性、または塩基性残基である；
Ｘ２４９に対応する残基が、芳香族残基である；
の１つ以上をさらに有する、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ２に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ４に対応する残基が、塩基性残基またはシステインである；
Ｘ１１に対応する残基が、非極性、脂肪族、または芳香族残基である；
Ｘ８０に対応する残基が、非極性、脂肪族、または極性残基である；
Ｘ８６に対応する残基が、非極性、脂肪族、または極性残基である；
Ｘ１０５に対応する残基が、非極性、脂肪族、塩基性、または酸性残基である；
Ｘ１２９に対応する残基が、非極性、または極性残基である；
Ｘ１５３に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９０に対応する残基が、芳香族、または拘束性残基である；
Ｘ２０６に対応する残基が、非極性、または芳香族残基である；
の１つ以上をさらに有する、請求項９または１０に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：
Ｘ４０に対応する残基が、拘束性、または塩基性残基である；および
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
をさらに有し、ここで、該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：
Ｘ４０に対応する残基が、拘束性、または塩基性残基である；
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
を有し、ここで、該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
を有し、ここで、該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：Ｘ４０に対応する残基が、アルギニンである、を有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：Ｘ１４７に対応する残基が、メチオニンまたはロイシンである、を有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：Ｘ４０に対応する残基が、アルギニンである；およびＸ１４７に対応する残基が、メチオニンまたはロイシンである、を有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
前記ケトレダクターゼポリペプチドが、以下の特徴：Ｘ９４に対応する残基がトレオニンである；Ｘ１９９に対応する残基がヒスチジンである；およびＸ２０２に対応する残基がバリンまたはロイシンである、を有する配列番号２、４または８６に基づく参照配列の残基９０〜２１１に対して、少なくとも８５％が同一であるアミノ酸配列を有する領域またはドメインを含み；但し、該ケトレダクターゼドメインまたは領域は、Ｘ９４に対応する残基が、脂肪族または極性残基であり；Ｘ１９９に対応する残基が脂肪族、拘束性、または極性残基であり；およびＸ２０２に対応する残基がロイシンまたはバリンであるアミノ酸配列を有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、Ｘ９４に対応する残基がトレオニンであるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、Ｘ１９９に対応する残基がアラニン、ヒスチジンまたはアスパラギンであるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、Ｘ９４に対応する残基が極性残基であり；Ｘ１９９に対応する残基が脂肪族、拘束性、または極性残基であり；およびＸ２０２に対応する残基がバリンまたはロイシンであるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、Ｘ９４に対応する残基がトレオニンであり；Ｘ１９９に対応する残基がアラニン、ヒスチジン、またはアスパラギンであり；およびＸ２０２に対応する残基がバリンまたはロイシンであるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１０５に対応する残基が、非極性、脂肪族、塩基性、または酸性残基である；
Ｘ１２９に対応する残基が、非極性、または極性残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１５３に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９０に対応する残基が、芳香族、または拘束性残基である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２０６に対応する残基が、非極性、または芳香族残基である；
の１つ以上をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して残基９０〜２１１に対応するドメインでの他のアミノ酸残基位置において１つ以上の違いを場合により有する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、バリンまたはフェニルアラニンである；
Ｘ１０５に対応する残基が、グリシンである；
Ｘ１２９に対応する残基が、トレオニンである；
Ｘ１４７に対応する残基が、メチオニンまたはロイシンである；
Ｘ１５３に対応する残基が、アラニンまたはセリンである；
Ｘ１９０に対応する残基が、ヒスチジンまたはプロリンである；
Ｘ１９５に対応する残基が、バリンである；
Ｘ１９６に対応する残基が、ロイシンである；
Ｘ２０６に対応する残基が、フェニルアラニンである；
の１つ以上をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して残基９０〜２１１に対応するドメインでの他のアミノ酸残基位置において１つ以上の違いを場合により有する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２５】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２７】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
配列番号６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４６、５０、５２、５４、５６、５８、６０、および６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項２９】
少なくとも約９０％の立体異性体過剰率（％）で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３０】
配列番号６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、４０、４２、５０、５２、５６、５８、６０、または６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
少なくとも約９５％の立体異性体過剰率（％）で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
配列番号６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、４２、５０、５２、５６、５８、６０、または６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
少なくとも約９９％の立体異性体過剰率（％）で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
配列番号６、８、１０、１２、１４、２０、２２、２４、３０、３２、３４、６０、および６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
配列番号４８の参照ポリペプチドよりも少なくとも１５倍大きい比率で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
配列番号６、８、１０、１２、１４、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、５０、６０、および６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載のポリペプチド。
【請求項３７】
配列番号４８の参照ポリペプチドよりも少なくとも３０倍大きい比率で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３８】
配列番号６、８、１０、１２、１４、２０、２２、２４、２６、３０、３４、６０、および６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載のポリペプチド。
【請求項３９】
配列番号４８の参照ポリペプチドよりも少なくとも４０倍大きい比率で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４０】
配列番号６、８、１０、１２、１４、２２、および６０に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
配列番号４８の参照ポリペプチドよりも少なくとも５０倍大きい比率で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４２】
配列番号６、８、１０、および１２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載のポリペプチド。
【請求項４３】
基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを生成物２Ｒ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに、少なくとも約８５％の立体異性体過剰率（％）で変換することができるケトレダクターゼポリペプチド。
【請求項４４】
配列番号６８、７２、７４、７６、７８、および８２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載のポリペプチド。
【請求項４５】
請求項１〜４２のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項４６】
配列番号５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４５、４９、５１、５３、５５、５７、５９、または６１に対応する配列である、請求項４５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４７】
請求項４３または４４に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項４８】
配列番号６７、７１、７３、７５、７７、または８１に対応する配列である、請求項４７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
宿主細胞での発現を方向づけるのに適した制御配列に作動可能に連結された請求項４５または４７に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項５０】
前記制御配列がプロモーターを含む、請求項４９に記載の発現ベクター。
【請求項５１】
前記プロモーターが、Ｅ．ｃｏｌｉプロモーターを含む、請求項５０に記載の発現ベクター。
【請求項５２】
前記制御配列が分泌シグナルを含む、請求項５０に記載の発現ベクター。
【請求項５３】
請求項４９に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項５４】
Ｅ．ｃｏｌｉである、請求項５３に記載の宿主細胞。
【請求項５５】
請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼ、および化合物メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートまたは化合物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートを含む、組成物。
【請求項５６】
前記化合物が、メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートである、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
補因子再生系をさらに含む、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５８】
前記補因子再生系が、グルコースデヒドロゲナーゼとグルコース；ホルメートデヒドロゲナーゼとホルメート；またはイソプロパノールと第２級アルコールデヒドロゲナーゼを含む、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを、生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに還元する方法であって、該方法は、基質を生成物に還元するのに適した反応条件下で、該基質を請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼポリペプチドと接触させるか、またはインキュベーションすることを含む、方法。
【請求項６０】
前記生成物が約９９％より大きい立体異性体過剰率（％）で存在する、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
ケトレダクターゼ酵素を発現する全細胞、またはそのような細胞の抽出物もしくは溶解物を用いて実施される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
ケトレダクターゼが、単離および／または精製され、還元反応が、ケトレダクターゼのための補因子および場合により補因子のための再生系の存在下で実施される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６３】
補因子再生系が、グルコースデヒドロゲナーゼとグルコース；ホルメートデヒドロゲナーゼとホルメート；またはイソプロパノールと第２級アルコールデヒドロゲナーゼを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６４】
前記第２級アルコールデヒドロゲナーゼが、ケトレダクターゼである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
式（ＩＶａ）：
【化３６】
（式中、Ｒ１はＨまたは水酸基の保護基であり、Ｒ１０はハロゲンまたは−ＯＡｃであり、ここでＡｃはアセタートである）の中間体を合成する方法であって、
該方法の工程は、基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼと、該基質を生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに還元または変換するのに適した反応条件下で、接触または反応させることを含む、方法。
【請求項６６】
構造式（ＩＸ）
【化３７】
（式中、Ｒ２は、ＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルであり；Ｒ３は、Ｈまたは水酸基の保護基であり；Ｒ４は、Ｈ、カルボキシ基の保護基、アンモニア基、アルカリ金属、またはアルカリ土類金属であり；およびＸは、ＯＨまたは脱離基である）の中間体を合成する方法であって、
該方法での工程は、基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼと、該基質を生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに還元または変換するのに適した反応条件下で、接触または反応させることを含む、方法。
【請求項６７】
構造式（Ｖ）：
【化３８】
(式中、Ｒ２は、Ｈまたは−ＣＨ３であり；Ｒ５は置換または非置換アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、および置換または非置換ヘテロアリールアルキルから選択され；およびＲ６は、Ｈまたはプロ基である）のカルバペネムまたはその溶媒和物、水和物、塩もしくはプロドラッグを合成する方法であって、
該方法での工程は、基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼと、該基質を生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに還元または変換するのに適した反応条件下で、接触または反応させることを含む、方法。
【請求項６８】
前記カルバペネムが、構造式（Ｘ）：
【化３９】
を有する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記カルバペネムが、構造式（ＸＩ）：
【化４０】
を有する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記カルバペネムが、構造式（ＸＩＩ）：
【化４１】
を有する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記カルバペネムが、構造式（ＸＩＩＩ）：
【化４２】
を有する、請求項６７に記載の方法。
【請求項１】
基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに、少なくとも約６０％の立体異性体過剰率（％）で変換することができるケトレダクターゼポリペプチド。
【請求項２】
以下の特徴：Ｘ９４に対応する残基がトレオニンである；Ｘ１９９に対応する残基がヒスチジンである；およびＸ２０２に対応する残基がバリンまたはロイシンである、を有する配列番号２または４または８６に基づく参照配列に対して、少なくとも約８５％が同一であるアミノ酸配列を含み、但し、Ｘ９４に対応する残基が、脂肪族または極性残基であり；Ｘ１９９に対応する残基が、脂肪族、拘束性、または極性残基であり；およびＸ２０２に対応する残基が、バリンまたはロイシンであるアミノ酸配列を有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】
Ｘ９４に対応する残基がトレオニンである、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
Ｘ１９９に対応する残基が、アラニン、ヒスチジン、またはアスパラギンである、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項５】
Ｘ９４に対応する残基が、極性残基であり；Ｘ１９９に対応する残基が、脂肪族、拘束性、または極性残基であり；およびＸ２０２に対応する残基が、バリンまたはロイシンである、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項６】
Ｘ９４に対応する残基が、トレオニンであり、Ｘ１９９に対応する残基が、アラニン、ヒスチジン、またはアスパラギンであり；およびＸ２０２に対応する残基が、バリンまたはロイシンである、請求項２に記載のポリペプチド。
【請求項７】
ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ２に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ４に対応する残基が、塩基性残基またはシステインである；
Ｘ１１に対応する残基が、非極性、脂肪族、または芳香族残基である；
Ｘ４０に対応する残基が、拘束性、または塩基性残基である；
Ｘ８０に対応する残基が、非極性、脂肪族、または極性残基である；
Ｘ８６に対応する残基が、非極性、脂肪族、または極性残基である；
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１０５に対応する残基が、非極性、脂肪族、塩基性、または酸性残基である；
Ｘ１２９に対応する残基が、非極性、または極性残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１５３に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９０に対応する残基が、芳香族、または拘束性残基である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２０６に対応する残基が、非極性、または芳香族残基である；
Ｘ２２６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２４８に対応する残基が、非極性、または塩基性残基である；
Ｘ２４９に対応する残基が、芳香族残基である；
の１つ以上をさらに有し、ここで該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項２〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ２に対応する残基が、アラニンである；
Ｘ４に対応する残基が、システインである；
Ｘ１１に対応する残基が、フェニルアラニンである；
Ｘ４０に対応する残基が、アルギニンである；
Ｘ８０に対応する残基が、トレオニンである；
Ｘ８６に対応する残基が、イソロイシンである；
Ｘ９６に対応する残基が、バリンまたはフェニルアラニンである；
Ｘ１０５に対応する残基が、グリシンである；
Ｘ１２９に対応する残基が、トレオニンである；
Ｘ１４７に対応する残基が、メチオニンまたはロイシンである；
Ｘ１５３に対応する残基が、アラニンまたはセリンである；
Ｘ１９０に対応する残基が、ヒスチジンまたはプロリンである；
Ｘ１９５に対応する残基が、バリンである；
Ｘ１９６に対応する残基が、ロイシンである；
Ｘ２０６に対応する残基が、フェニルアラニンである；
Ｘ２２６に対応する残基が、バリンである；
Ｘ２４８に対応する残基が、リジン、またはアルギニンである；
Ｘ２４９に対応する残基が、トリプトファンである；
の１つ以上をさらに有し、ここで、該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項２〜６のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ４０に対応する残基が、拘束性、または塩基性残基である；および
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
の１つ以上をさらに有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性であるか、芳香族であるか、非極性であるか、または脂肪族である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２２６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２４８に対応する残基が、非極性、または塩基性残基である；
Ｘ２４９に対応する残基が、芳香族残基である；
の１つ以上をさらに有する、請求項９に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下の特徴：
Ｘ２に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ４に対応する残基が、塩基性残基またはシステインである；
Ｘ１１に対応する残基が、非極性、脂肪族、または芳香族残基である；
Ｘ８０に対応する残基が、非極性、脂肪族、または極性残基である；
Ｘ８６に対応する残基が、非極性、脂肪族、または極性残基である；
Ｘ１０５に対応する残基が、非極性、脂肪族、塩基性、または酸性残基である；
Ｘ１２９に対応する残基が、非極性、または極性残基である；
Ｘ１５３に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９０に対応する残基が、芳香族、または拘束性残基である；
Ｘ２０６に対応する残基が、非極性、または芳香族残基である；
の１つ以上をさらに有する、請求項９または１０に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：
Ｘ４０に対応する残基が、拘束性、または塩基性残基である；および
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
をさらに有し、ここで、該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：
Ｘ４０に対応する残基が、拘束性、または塩基性残基である；
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
を有し、ここで、該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
を有し、ここで、該アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：Ｘ４０に対応する残基が、アルギニンである、を有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：Ｘ１４７に対応する残基が、メチオニンまたはロイシンである、を有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
前記ケトレダクターゼアミノ酸配列が、以下のさらなる特徴：Ｘ４０に対応する残基が、アルギニンである；およびＸ１４７に対応する残基が、メチオニンまたはロイシンである、を有する、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１８】
前記ケトレダクターゼポリペプチドが、以下の特徴：Ｘ９４に対応する残基がトレオニンである；Ｘ１９９に対応する残基がヒスチジンである；およびＸ２０２に対応する残基がバリンまたはロイシンである、を有する配列番号２、４または８６に基づく参照配列の残基９０〜２１１に対して、少なくとも８５％が同一であるアミノ酸配列を有する領域またはドメインを含み；但し、該ケトレダクターゼドメインまたは領域は、Ｘ９４に対応する残基が、脂肪族または極性残基であり；Ｘ１９９に対応する残基が脂肪族、拘束性、または極性残基であり；およびＸ２０２に対応する残基がロイシンまたはバリンであるアミノ酸配列を有する、請求項１記載のポリペプチド。
【請求項１９】
前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、Ｘ９４に対応する残基がトレオニンであるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、Ｘ１９９に対応する残基がアラニン、ヒスチジンまたはアスパラギンであるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、Ｘ９４に対応する残基が極性残基であり；Ｘ１９９に対応する残基が脂肪族、拘束性、または極性残基であり；およびＸ２０２に対応する残基がバリンまたはロイシンであるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、Ｘ９４に対応する残基がトレオニンであり；Ｘ１９９に対応する残基がアラニン、ヒスチジン、またはアスパラギンであり；およびＸ２０２に対応する残基がバリンまたはロイシンであるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１０５に対応する残基が、非極性、脂肪族、塩基性、または酸性残基である；
Ｘ１２９に対応する残基が、非極性、または極性残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１５３に対応する残基が、極性、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９０に対応する残基が、芳香族、または拘束性残基である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ２０６に対応する残基が、非極性、または芳香族残基である；
の１つ以上をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して残基９０〜２１１に対応するドメインでの他のアミノ酸残基位置において１つ以上の違いを場合により有する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、バリンまたはフェニルアラニンである；
Ｘ１０５に対応する残基が、グリシンである；
Ｘ１２９に対応する残基が、トレオニンである；
Ｘ１４７に対応する残基が、メチオニンまたはロイシンである；
Ｘ１５３に対応する残基が、アラニンまたはセリンである；
Ｘ１９０に対応する残基が、ヒスチジンまたはプロリンである；
Ｘ１９５に対応する残基が、バリンである；
Ｘ１９６に対応する残基が、ロイシンである；
Ｘ２０６に対応する残基が、フェニルアラニンである；
の１つ以上をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して残基９０〜２１１に対応するドメインでの他のアミノ酸残基位置において１つ以上の違いを場合により有する、請求項１８〜２１のいずれか１項に記載のポリペプチド。
【請求項２５】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２７】
残基９０〜２１１に対応する前記ケトレダクターゼドメインまたは領域が、以下の特徴：
Ｘ９６に対応する残基が、極性、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１４７に対応する残基が、芳香族、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９５に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
Ｘ１９６に対応する残基が、非極性、または脂肪族残基である；
をさらに有し、ここで、前記アミノ酸配列は、参照配列と比較して他のアミノ酸残基位置において１つ以上の残基の違いを場合により有する、請求項１８に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
配列番号６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、３８、４０、４２、４６、５０、５２、５４、５６、５８、６０、および６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項２９】
少なくとも約９０％の立体異性体過剰率（％）で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３０】
配列番号６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６、４０、４２、５０、５２、５６、５８、６０、または６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載のポリペプチド。
【請求項３１】
少なくとも約９５％の立体異性体過剰率（％）で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３２】
配列番号６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、４２、５０、５２、５６、５８、６０、または６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載のポリペプチド。
【請求項３３】
少なくとも約９９％の立体異性体過剰率（％）で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３４】
配列番号６、８、１０、１２、１４、２０、２２、２４、３０、３２、３４、６０、および６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載のポリペプチド。
【請求項３５】
配列番号４８の参照ポリペプチドよりも少なくとも１５倍大きい比率で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３６】
配列番号６、８、１０、１２、１４、２０、２２、２４、２６、２８、３０、３２、３４、５０、６０、および６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３５に記載のポリペプチド。
【請求項３７】
配列番号４８の参照ポリペプチドよりも少なくとも３０倍大きい比率で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３８】
配列番号６、８、１０、１２、１４、２０、２２、２４、２６、３０、３４、６０、および６２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３７に記載のポリペプチド。
【請求項３９】
配列番号４８の参照ポリペプチドよりも少なくとも４０倍大きい比率で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４０】
配列番号６、８、１０、１２、１４、２２、および６０に対応するアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
配列番号４８の参照ポリペプチドよりも少なくとも５０倍大きい比率で、基質を生成物に変換することができる、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項４２】
配列番号６、８、１０、および１２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項４１に記載のポリペプチド。
【請求項４３】
基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを生成物２Ｒ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに、少なくとも約８５％の立体異性体過剰率（％）で変換することができるケトレダクターゼポリペプチド。
【請求項４４】
配列番号６８、７２、７４、７６、７８、および８２に対応するアミノ酸配列を含む、請求項４３に記載のポリペプチド。
【請求項４５】
請求項１〜４２のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項４６】
配列番号５、７、９、１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、２９、３１、３３、３５、３７、３９、４１、４５、４９、５１、５３、５５、５７、５９、または６１に対応する配列である、請求項４５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４７】
請求項４３または４４に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
【請求項４８】
配列番号６７、７１、７３、７５、７７、または８１に対応する配列である、請求項４７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項４９】
宿主細胞での発現を方向づけるのに適した制御配列に作動可能に連結された請求項４５または４７に記載のポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
【請求項５０】
前記制御配列がプロモーターを含む、請求項４９に記載の発現ベクター。
【請求項５１】
前記プロモーターが、Ｅ．ｃｏｌｉプロモーターを含む、請求項５０に記載の発現ベクター。
【請求項５２】
前記制御配列が分泌シグナルを含む、請求項５０に記載の発現ベクター。
【請求項５３】
請求項４９に記載の発現ベクターを含む、宿主細胞。
【請求項５４】
Ｅ．ｃｏｌｉである、請求項５３に記載の宿主細胞。
【請求項５５】
請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼ、および化合物メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートまたは化合物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートを含む、組成物。
【請求項５６】
前記化合物が、メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートである、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
補因子再生系をさらに含む、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５８】
前記補因子再生系が、グルコースデヒドロゲナーゼとグルコース；ホルメートデヒドロゲナーゼとホルメート；またはイソプロパノールと第２級アルコールデヒドロゲナーゼを含む、請求項５７に記載の組成物。
【請求項５９】
基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを、生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに還元する方法であって、該方法は、基質を生成物に還元するのに適した反応条件下で、該基質を請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼポリペプチドと接触させるか、またはインキュベーションすることを含む、方法。
【請求項６０】
前記生成物が約９９％より大きい立体異性体過剰率（％）で存在する、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
ケトレダクターゼ酵素を発現する全細胞、またはそのような細胞の抽出物もしくは溶解物を用いて実施される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６２】
ケトレダクターゼが、単離および／または精製され、還元反応が、ケトレダクターゼのための補因子および場合により補因子のための再生系の存在下で実施される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６３】
補因子再生系が、グルコースデヒドロゲナーゼとグルコース；ホルメートデヒドロゲナーゼとホルメート；またはイソプロパノールと第２級アルコールデヒドロゲナーゼを含む、請求項５９に記載の方法。
【請求項６４】
前記第２級アルコールデヒドロゲナーゼが、ケトレダクターゼである、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
式（ＩＶａ）：
【化３６】
（式中、Ｒ１はＨまたは水酸基の保護基であり、Ｒ１０はハロゲンまたは−ＯＡｃであり、ここでＡｃはアセタートである）の中間体を合成する方法であって、
該方法の工程は、基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼと、該基質を生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに還元または変換するのに適した反応条件下で、接触または反応させることを含む、方法。
【請求項６６】
構造式（ＩＸ）
【化３７】
（式中、Ｒ２は、ＨまたはＣ１−Ｃ４アルキルであり；Ｒ３は、Ｈまたは水酸基の保護基であり；Ｒ４は、Ｈ、カルボキシ基の保護基、アンモニア基、アルカリ金属、またはアルカリ土類金属であり；およびＸは、ＯＨまたは脱離基である）の中間体を合成する方法であって、
該方法での工程は、基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼと、該基質を生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに還元または変換するのに適した反応条件下で、接触または反応させることを含む、方法。
【請求項６７】
構造式（Ｖ）：
【化３８】
(式中、Ｒ２は、Ｈまたは−ＣＨ３であり；Ｒ５は置換または非置換アルキル、置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、および置換または非置換ヘテロアリールアルキルから選択され；およびＲ６は、Ｈまたはプロ基である）のカルバペネムまたはその溶媒和物、水和物、塩もしくはプロドラッグを合成する方法であって、
該方法での工程は、基質メチル−２−ベンズアミドメチル−３−オキソブチラートを請求項１〜４２のいずれか１項に記載のケトレダクターゼと、該基質を生成物２Ｓ，３Ｒ−メチル−２−ベンズアミドメチル−３−ヒドロキシブチラートに還元または変換するのに適した反応条件下で、接触または反応させることを含む、方法。
【請求項６８】
前記カルバペネムが、構造式（Ｘ）：
【化３９】
を有する、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
前記カルバペネムが、構造式（ＸＩ）：
【化４０】
を有する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
前記カルバペネムが、構造式（ＸＩＩ）：
【化４１】
を有する、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記カルバペネムが、構造式（ＸＩＩＩ）：
【化４２】
を有する、請求項６７に記載の方法。
【図１】
【公表番号】特表２０１０−５３９９５２（Ｐ２０１０−５３９９５２Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２７２５７（Ｐ２０１０−５２７２５７）
【出願日】平成２０年１０月１日（２００８．１０．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７８５１３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０４６１５３
【国際公開日】平成２１年４月９日（２００９．４．９）
【出願人】（５０６０３８２５７）コデクシス， インコーポレイテッド (11)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月１日（２００８．１０．１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７８５１３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０４６１５３
【国際公開日】平成２１年４月９日（２００９．４．９）
【出願人】（５０６０３８２５７）コデクシス， インコーポレイテッド (11)
【Ｆターム（参考）】
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