ザクロ抽出物、該抽出物を含有する栄養製品及びその用途
【課題】 従来技術に関連する問題点を解決し、そして、ザクロ抽出物及び当該ザクロ抽出物を含有する栄養製品を提供する。
【解決手段】 本発明の新規なザクロ抽出物は、水溶性食物繊維を併用又は併用せず、如何なる種類の有機溶媒も含有せず、冷水に高い濃度で溶解可能であり、糖類含量は極めて低く、特にプニカラギンを標準化する。更に、本発明の新規なザクロ抽出物は、心臓血管系疾患、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防及び治療のためのプニカラギン源として使用されるべき高抗酸化能力を有する栄養製品を提供するために食品及び飲料に添加される。
【解決手段】 本発明の新規なザクロ抽出物は、水溶性食物繊維を併用又は併用せず、如何なる種類の有機溶媒も含有せず、冷水に高い濃度で溶解可能であり、糖類含量は極めて低く、特にプニカラギンを標準化する。更に、本発明の新規なザクロ抽出物は、心臓血管系疾患、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防及び治療のためのプニカラギン源として使用されるべき高抗酸化能力を有する栄養製品を提供するために食品及び飲料に添加される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エラジタンニンを含有するザクロ抽出物、エラジタンニンが添加されたザクロ抽出物を含有する栄養製品及び心臓血管系疾患（ＣＶＤ）、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防及び治療に使用される、ザクロ抽出物及び当該ザクロ抽出物で機能性化された栄養製品に関する。また、本発明は、全形ザクロ果実から得られたザクロ抽出物（ザクロエキス）を飲料及び人間用又は獣用食料品に添加し、抗酸化剤（特に、エラジタンニン、一層特定的にはプニカラギン）のレベルを高めることに関する。更に詳細には、本発明は、プニカラギンリッチ組成物の栄養供給により、心臓血管系疾患、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防及び治療用のプニカラギン源として使用されるべき栄養製品の機能性化又は栄養強化に関する。
【背景技術】
【０００２】
英国心臓財団により２００５年に発行された欧州心臓血管系疾患統計増刊号によれば、ＣＶＤはヨーロッパにおける主要な死亡原因であり、毎年４３５万人以上がＣＶＤで死亡している。冠動脈系心臓疾患（ＣＨＤ）それ自体はヨーロッパにおける単一の最も一般的な死亡原因であり、ヨーロッパでは毎年１９５万人がＣＨＤで死亡している。
【０００３】
ＣＶＤのトータルコストは総計１６９０億ユーロに達し、そのうち、１０５０億ユーロは欧州連合（ＥＵ）におけるＣＶＤ治療費であり、６４０億ユーロは喪失された生産性とインフォーマルケアのコストによるものである。
【０００４】
アテローム性動脈硬化症とも呼ばれる動脈内へのプラーク堆積は、ＣＶＤの主因であり、また、ＣＨＤの最も常習的原因である。動脈内におけるアテローム性動脈硬化症的プラーク堆積は動脈の一般的な障害である。これは、動脈血管壁に脂肪、コレステロール及びその他の物質が堆積し、そして、プラークと呼ばれる硬質物質を生成することにより
発症する。
【０００５】
最後には、プラーク堆積物は動脈の狭窄と柔軟性低下を引き起こす。これは血液の流れを益々困難にする。冠動脈が狭くなると、心臓への血流が低下又は停止し、胸郭の苦痛（持続性アンギナ）、短呼吸、心臓発作及びその他の症状を引き起こす。
【０００６】
プラーク片はバラバラに破壊され、血流に乗って移動することができる。これは心臓発作の一般的な原因である。血塊はプラーク堆積物の周囲にも生成することができる。血塊は血流をブロックする。血塊が心臓、肺又は脳内を移動すると、これは脳卒中、心臓発作又は肺塞栓症を引き起こす。
【０００７】
動脈性高血圧症、血中のトリグリセリド及び総コレステロールの値が高いことや喫煙は、この疾患の進展の一因となるファクターであることが立証されている。最近、研究者らは、これらリスクファクター（危険因子）の幾つかが或る人々の間で密集していることを発見した。これらのリスクファクターの密集はメタボリック症候群として知られているいる。
【０００８】
メタボリック症候群の人々は下記のような密集的リスクファクターを有する。
・中央肥満。これは、腹部（胃部）における余分体重を意味する。
・ブドウ糖と呼ばれるタイプの糖の消化障害（ブドウ糖不耐症）。メタボリック症 候群の患者は通常、高インスリン血症又は２型糖尿病を有する。
・血流中の低密度リポ蛋白（ＬＤＬ）及びトリグリセリドの値が高い。
・血流中の高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）の値が低い。
・高血圧症
【０００９】
メタボリック症候群については究明すべきことが依然として多々あるが、医師は、メタボリック症候群の人々が高いＣＶＤリスクを有することを知っている。多くの研究が、ＬＤＬの生体内酸化がアテローム性動脈硬化症の進展に中心的な役割を演じていることを証明している(Knight, 1995; Witzum, 1994)。
【００１０】
実験室研究及び臨床研究の両方において、ザクロは心臓血管系疾患の予防において有望な結果を示す。研究者らは幾つかのメカニズム、例えば、ＬＤＬの酸化阻止と、窒素酸化物の合成及び活性の支持(De Nigrisら, Nitric Oxide, 2006)、血管の酸化ストレス及び炎症損傷の低減(De Nigrisら, Cardiovasc. Res., 2007; Rozenbergら, Atherosclerosis, 2006)、アンギオテンシン変換酵素の活性低下(Aviramら, Atherosclerosis, 2001)などにより、ザクロ研究から植物栄養素(phytochemicals)に関する証拠（エビデンス）を提供する。これらの証拠を積み上げると、プニカラギンとして知られているザクロ内の化合物が、それらの強力な抗酸化作用及び抗炎症作用により、心臓血管系を保護することが示唆される。
【００１１】
M. Shinerら, Atherosclerosis 195, 2007は、プニカラギン及び没食子酸によるパラオキソナーゼ２の発現上昇の効果を報告している。パラオキソナーゼ２は、未だ不明の生理学的役割により、酸化ストレスに対抗するマクロファージを保護することが示された。
【００１２】
更に別の研究は、ザクロジュースは、ブルーベリージュース、クランベリージュース、緑茶又は赤ワインなどのような他の飲み物よりも高い抗酸化特性を有することを示した。プニカラギンα及びβアノマーは、ザクロジュースにおける主要なエラジタンニンであり、ザクロジュースの抗酸化特性の主要な発現元である。それにも拘わらず、研究は、プニカラギンα及びβアノマーと、その他のエラジタンニン（例えば、エラグ酸及びそのグリコシド化誘導体類）並びにその他のマイナーなザクロエラジタンニンとの併用は、ザクロジュースの健康上の効果を高める重要な相乗効果を発揮することを指摘した。
【００１３】
最も最近の研究のレビューは、Lanskyら, Journal of Ethnopharmacology 109, 2007, 177-206に掲載されている。このレビューは、ザクロ、特に種の油相から得られた物質の、癌の治療又は予防に対する力価を強調している。しかし、このレビューは、確定的ではないが、報告された研究は、相応に設計された医薬製品の臨床試験を含む更なる研究が必要であることを示唆して終わっている。
【００１４】
プニカラギンα及びβアノマーは主にザクロ包皮内に存在する。従って、プニカラギンα及びβアノマーは、ジュース抽出のための圧搾中に一次ジュースに移行する。プニカラギンα及びβアノマーは次の構造式を有する。
【００１５】
【００１６】
これらの研究により多数の特許出願が為された。例えば、国際公開第ＷＯ０２／０５６８９９号パンフレットは、血中のオキシステロールの低減と、コレステロールと血圧の正常化に関する組成物及び方法に関する。この特許出願明細書は、好ましくは、ノニ(Morinda Citrifolia)抽出物、赤ワイン抽出物、プルーン抽出物、ブルーベリー抽出物、ザクロ抽出物、リンゴ抽出物及び酵素混合物からなる組成物を開示している。この特許出願は、前記ザクロ抽出物が約４０％のエラグ酸と約６０％のポリフェノール類からなる前記組成物を投与するステップからなる、血中のオキシステロール類を維持又は低減する方法を特許請求している。更に、遊離エラグ酸を経口投与する場合、このエラグ酸は殆ど吸収されない。
【００１７】
米国特許出願第２００６／０２１１６３５号明細書には、商業的なジュース生産の副生物である果実の包皮に由来するザクロエラジタンニンの精製方法が記載されている。この方法は、樹脂表面に吸着されたエラジタンニンの溶出のために、有機溶媒（おそらく、有毒なメタノール）を使用しなければならない欠点及び、実際ジュースが消費者により消費される製品である場合に、ザクロジュース画分中に殆ど存在する幾つかの植物栄養素（最近の研究では、ザクロから得られる健康上の効果の元になっていると言われている）を含有しない抽出物を産生する欠点を有する。
【００１８】
国際公開第ＷＯ２００６／１２７８３２号パンフレットは、ジュース生産の副生物からザクロ抽出物を製造する方法を開示している。開示された製造方法は、ザクロ抽出物を加熱する（４３〜７１℃で２時間加熱し、そして、低温殺菌する）などの幾つかの熱処理を含む。ザクロジュースの低温殺菌は、プニカラギンなどのような大きなエラジタンニンの分解により遊離エラグ酸を生成する。この遊離エラグ酸はザクロジュース飲用の健康上の効果を減少させる。これらの熱処理工程は取り除くことが困難な幾つかの副生物を生成し、更に、ジュース生産により生じたザクロ固形物の使用は、ザクロジュース画分中に殆ど存在する幾つかの植物栄養素を含まない抽出物を産生する。この理由により、国際公開第ＷＯ２００６／１２７８３２号パンフレットは、ザクロ抽出物とザクロジュースとの併用を開示している。実際、この併用により、全形ザクロ果実内に存在する植物栄養素の広範なスペクトルが提供されるが、ザクロジュース及びザクロ抽出物の両方に存在する糖類による高カロリー値という欠点も有する。更に、高糖類含量は、このようなザクロ抽出物の工業的処理を困難にする。なぜなら、プニカラギンの精製は困難であり、また、固形抽出物は乾燥装置の内壁面に粘着するからである。ザクロ抽出物からなる飲料及び食料品に関する特許請求の範囲は、果皮、内膜及び種子からなる群から選択されるザクロ固形物から製造された抽出物を挙げているが、全形ザクロ果実から製造された抽出物は挙げていない。
【００１９】
米国特許出願第２００７０１７８１８０号は、ザクロ抽出物及びその使用方法に関する。更に特定的には、ヒトの動脈硬化症による障害の後退を起こさせるためにザクロ抽出物を使用する方法に関する。この明細書には、頸動脈狭窄症（ＣＡＳ）を患う１９人の患者について人体実験したことが記載されている。これら患者のうち１０人は、１２ヶ月間の間、毎日ザクロジュースをグラス一杯飲んだ。この特許出願人は、人体実験の結果はＣＡＳを患う患者がザクロジュースを飲むと統計的に有意な抗動脈硬化効果を証明していると結論している。使用されたザクロジュース及び前記特許出願明細書に従って製造されたザクロ抽出物の両方とも、何ら特別な精製工程を実施すること無く製造されている。
【００２０】
米国特許出願第２００２００１２７１０号は、健康改善に有用なザクロ製品に関する。この出願は、ザクロ種子油（ザクロシードオイル）を患者に投与し、生理学的作用効果を発揮することからなる、ザクロ種子油の使用方法を特許請求している。このような生理学的作用効果には、抗酸化作用が含まれる。更に、この出願は、発酵されたザクロジュースを患者に投与することからなる、動脈硬化の進行を遅らせる方法も特許請求している。
【００２１】
欧州特許第ＥＰ１２９３１３０号公報に記載されているように、ザクロ抽出物は乳酸菌飲料を酸化から保護するためにも使用されている。ここで、ザクロ抽出物は、水中で還流し、濾過し、活性炭で処理するか又は水／エタノールから処理することにより得ることができる。この飲料中のザクロ抽出物の濃度は、１０ｐｐｍ〜５０ｐｐｍの範囲内である。抽出物の組成に関する記載は存在しない。
【００２２】
要するに、前記の技術は、ザクロ製品を提供することはする。しかし、このザクロ製品は健康上の効果は提供するが、機能性食品及び飲料工業のある種の技術的用途については依然として粗製度が高すぎ、下記のような欠点が想定される。
− ザクロジュース又はザクロ粗製物を定期的に消費すると、これらの中に存在する糖類により、高カロリー値を摂取することが想定される。“ザクロジュースの組成”(Seeramら, J. Nutr. 136:2481-2485, 2006年10月)。人間の飲用に供される単一濃度形（２４０ｍｌ）のザクロジュース（ＰＪ）は、糖類３４ｇ、総炭水化物３５ｇ、ナトリウム３０ｍｇ、カリウム４３０ｍｇ、ビタミンＣ及びビタミンＡのＲＤＡ０％、カルシウム４％及び鉄分２％(Pom Wonderful)を含有している。ＰＪは次のポリフェノール類を含有している。アントシアニン３８７ｍｇ／Ｌ、プニカラギン１５６１ｍｇ／Ｌ、エラグ酸１２１ｍｇ／Ｌ、及びその他の加水分解性タンニン類４１７ｍｇ／Ｌ。
− 上記のザクロ抽出物の幾つかを得るために有機溶媒を使用する。
− 上記のザクロ抽出物の幾つかの標準化は、全形ザクロ果実の加工処理により得られる天然ザクロジュース中に存在する植物栄養素類（例えば、エラジタンニンなど）の自然プロファイルと全くかけ離れている。例えば、幾つかのザクロ抽出物は、代表的な市販のザクロジュース（通常、エラグ酸の含有量が０．１％未満であり、かつ、プニカラギンの含有量が約０．２％である）と比較して、プニカラギンの代わりにエラグ酸含有量が４０％に標準化されていると言われている。
− 前記のような製品は完全な水溶性ではなく、特に、このザクロ抽出物はエラグ酸含有量が高い。この事実は、このザクロ抽出物を飲料に添合すると濁りが生じ、消費者にとって魅力の劣る製品をもたらすことを意味する。
− 経口摂取する際、遊離エラグ酸は殆ど吸収されない。
【００２３】
更に、プニカラギン含量は前記の殆どのザクロ製品において標準化されない。
【００２４】
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２５】
【特許文献１】国際公開第ＷＯ０２／０５６８９９号パンフレット
【特許文献２】米国特許出願第２００６／０２１１６３５号明細書
【特許文献３】国際公開第ＷＯ２００６／１２７８３２号パンフレット
【特許文献４】米国特許出願第２００７０１７８１８０号明細書
【特許文献５】欧州特許第ＥＰ１２９３１３０号公報
【非特許文献】
【００２６】
【非特許文献１】De Nigrisら, Nitric Oxide, 2006
【非特許文献２】De Nigrisら, Cardiovasc. Res., 2007
【非特許文献３】Rozenbergら, Atherosclerosis, 2006
【非特許文献４】Aviramら, Atherosclerosis, 2001
【非特許文献５】M. Shinerら, Atherosclerosis 195, 2007
【非特許文献６】Lanskyら, Journal of Ethnopharmacology 109, 2007, 177-206
【非特許文献７】Seeramら, J. Nutr. 136:2481-2485, 2006年10月
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２７】
本発明の目的は、前記の従来技術に関連する問題点を解決し、そして、ザクロ抽出物及び当該ザクロ抽出物を含有する栄養製品を提供することであり、前記ザクロ抽出物はエラジタンニンを含有し、かつ、ザクロ抽出物が添合された食品を摂取する際に、該食品に必要な健康上有用な作用効果を付与するような組成を有する。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
前記目的は、請求項１に記載されたザクロ抽出物、及び請求項６に記載されたザクロ抽出物含有機能性食品及び機能性飲料を提供する本発明により達成される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明により得られた異なる栄養製品の抗酸化能力と、本発明による得られたザクロ抽出物の配合量を増大させた結果としてＨＰＬＣにより測定されたプニカラギン含量との間の線形相関を示すグラフ図であり、プロットａは実施例１のザクロ抽出物含有機能性オレンジジュースに関する線形相関を示すグラフ図であり、プロットｂは実施例２のザクロ抽出物含有機能性乳製品に関する線形相関を示すグラフ図である。
【図２】本発明により得られた異なる栄養製品の抗酸化能力と、本発明による得られたザクロ抽出物の配合量を増大させた結果としてＨＰＬＣにより測定されたプニカラギン含量との間の線形相関を示すグラフ図であり、プロットａは実施例３のザクロ抽出物含有機能性ボイルドハムに関する線形相関を示すグラフ図であり、プロットｂは実施例４のザクロ抽出物含有ツナ缶詰に関する線形相関を示すグラフ図である。
【図３】実施例５により得られたザクロ抽出物含有機能性半生ドッグフードの抗酸化能力と、本発明により得られたザクロ抽出物の配合量を増大させた結果としてＨＰＬＣにより測定されたプニカラギン含量との間の線形相関を示すグラフ図である。
【図４】実施例６における、ラットの動脈硬化指数（総コレステロール値／ＨＤＬコレステロール値）に対するザクロ抽出物の効果を示すグラフ図である。
【図５】実施例７における、ラットの収縮期血圧に対するザクロ抽出物の効果を示すグラフ図である。
【図６】実施例８における、ラットの動脈硬化指数（総コレステロール値／ＨＤＬコレステロール値）に対する、本発明によるザクロ抽出物と水溶性食物繊維との併用効果を示すグラフ図である。
【図７】実施例９における、ラットの体重に対するザクロ抽出物と水溶性食物繊維との併用効果を示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
請求項１〜５に記載のザクロ抽出物は、血液中のコレステロール成分類の濃度及び動脈血圧の双方を正常レベルに維持するか又は正常レベルにまで低下させるために使用するのに特に適している。より一般的には、請求項１〜５に記載のザクロ抽出物は、栄養強化飲料の混濁及び高カロリー成分の増大などのように、栄養強化食品の特性を望ましくない方向に改変すること無く、前記非特許文献及び特許文献に述べられた有利な特性及び効果を提供するために特に適している。更に、本発明のザクロ抽出物には痕跡量の有機溶媒さえも存在しないので、従来の残留有機溶媒を含有するザクロ抽出物に比べて、経済的観点及び健康上の観点の両面から好都合である。
【００３１】
前記のザクロ抽出物は、同時継続欧州特許出願第ＥＰ０７００４７６５．９及び同第ＥＰ０８００４２４２．７号明細書に記載された方法により得ることができる。前記明細書に記載された方法は、４℃〜３０℃、好ましくは８℃〜２５℃の範囲内の温度及び３．５〜５．０の範囲内のｐＨ値において、全体ブレンド果実の抽出を水中で行う工程からなる。抽出はミル内で行い、前記抽出工程の時間は１５〜１５０分間の範囲内である。次いで、抽出混合物を処理して固形物を除去し、清澄な水溶液を得る。この清澄水溶液を非イオン性吸着樹脂が充填されたクロマトグラフカラムに装填する。クロマトグラフカラムに保持された生成物を塩基性溶液でｐＨ値を変え、そして生成物を脱イオン水で置換することにより溶離する。好ましくは、前記ｐＨ値の変化は、炭酸水素ナトリウム溶出緩衝液で行う。
【００３２】
吸着樹脂から溶離された液状生成物は好ましくは、ナノ濾過により濃縮し、そして、生成物が固形状になるまで水を除去する。この方法により、糖含量が極めて低い生成物を得ることができる。このような生成物は前記従来技術に関する説明で挙げたような文献には記載されていなかった。同時継続出願の前記欧州特許出願第０８００４２４２．７号明細書に開示された或る実施態様よれば、ザクロ抽出物は可溶性食物繊維（特に、燕麦及び大麦などのβグルカンを大量に含む可溶性食物繊維）の存在下で濃縮され、そして乾燥させる。このような可溶性食物繊維は担体として機能し、少なくとも３０％以上の量で配合することが好ましい。好ましくは、可溶性食物繊維のβグルカン含量（乾燥基準）は少なくとも３０％で、３０％〜６０％の範囲内が特に好ましい。この特徴に関する欧州特許出願第ＥＰ０８００４２４２．７号の優先権及び先願である欧州特許出願第ＥＰ０７００４７６５．９号に記載されていない特徴は本願により特許請求されている。
【００３３】
前記同時継続欧州特許出願第ＥＰ０７００４７６５．９号及び同欧州特許出願第第ＥＰ０８００４２４２．７号で論ぜられたような溶媒不含有天然ザクロ抽出物の製造方法は、簡単であり、効率的であり、しかも安価であり、溶媒可溶性エラグ酸よりもむしろ水溶性プニカラギンと、全形ザクロ果実内に存在し、抽出物の主要化合物の活性を高めるのに有用な様々な天然有機化合物類の広範なスペクトルとの両方を提供する。
【００３４】
本発明の一側面は、ザクロ抽出物に関し、更に、当該ザクロ抽出物を、可能であれば食品用等級の水溶性食物繊維と共に食品（飲料を含む）に添加することにより得られる栄養製品に関する。これらの製品は、ザクロ抽出物を栄養強化すべき食料品に添合し、混合することにより得られる。
【００３５】
本発明の別の側面は、心臓血管系疾患（ＣＶＤ）、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群からなる群から選択される一つ以上の症状の予防又は治療のために、栄養製品、機能性食品及び飲料を使用することに関する。
【００３６】
本発明を理解し易くするために、本発明の天然ザクロ抽出物の組成を下記の段落００３７に要約する。
【００３７】
本発明により得ることができる組成物は液状又は固形状のエラジタンニン含有製品であり、下記の特性を有することを特徴とする。
− プニカラギン含量（％ｗ／ｗとして）は３０％以上である。
− エラグ酸（遊離酸）含量（％ｗ／ｗとして）は５％以下である。
− 総フェノール含量（没食子酸当量の％ｗ／ｗとして）は２０％以上である。
− 水溶性（％ｗ／ｖとして）は３％以上、好ましくは７％以上、更に好ましくは１０％以上である。
− 残留有機溶媒含量は不検出であるか、又は存在していたとしても、１ｐｐｂ未満である（即ち、本発明のザクロ抽出物は有機溶媒を含有しない）。
− 総糖類含量が３％（ｗ／ｗ）以下、好ましくは１％（ｗ／ｗ）以下である。
− その他の加水分解性タンニン類の含量が８％（ｗ／ｗ）以上である。
− アントシアニン含量が０．３％（ｗ／ｗ）未満、好ましくは０．２％（ｗ／ｗ）以下である。
【００３８】
これらの組成において、プニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜３５／１の範囲内、好ましくは２０／１〜３５／１の範囲内であり、プニカラギン／果実糖類の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜５０／１の範囲内、好ましくは３０／１〜５０／１の範囲内である。実際、本発明のザクロ抽出物は糖類を殆ど含有せず（但し、元々の糖類が０．０６％だけ抽出物中に存在する）、かつ、アントシアニンも殆ど含有しない（但し、元々のアントシアニンが０．９６％だけ存在する）。総糖類含量については、ザクロジュースから由来する糖類であり、主に、グルコース及びフルクトースなどの“果糖類”を意味する。糖類の含量は例えば、高速液体クロマトグラフ（以下、「ＨＰＬＣ」と言う）により測定される。
【００３９】
ザクロ抽出物の代表的な組成及び１グラス（即ち、ザクロジュース（ＰＪ）１杯分又は２４０ｍＬ）と同等量のプニカラギンを服用するのに必要な関連ジュース組成を下記の表１に要約して示す。表中の第２縦欄は、ザクロジュース（ＰＪ）１杯（２４０ｍＬ）中に存在するプニカラギン量に対応する、プニカラギン３７４．６ｐｐｍをもたらすのに必要なザクロ抽出物の量の組成を示す。
【００４０】
表中の第３縦欄は、元々のザクロジュース（ＰＪ）に対する、ザクロ抽出物中に存在する各化合物の百分率（％）を示す。換言すれば、第３縦欄は、プニカラギンが１００％回収され、ジュース中に元々存在する糖類０．０６％がそのままザクロ抽出物中にも存在することを示す。前記のように、０．３％未満、通常は０．２％未満の元々のアントシアニンがザクロ抽出物中に存在する。ザクロジュースの平均組成のデータは本明細書の段落００２２に記載されている。
【００４１】
表１
PJ240mLと同等の 抽出物/ジュース
ザクロ抽出物の量 の相対的化合物
ザクロ抽出物 の組成 組成
化合物 含量, %(w/w) 含量, ppm 含量, %
アントシアアニン 0.05〜0.20 0.9 0.96
プニカラギン 30.0〜60.0 374.6 100
エラグ酸 0.5〜15.0 21.4 73.72
その他の加水分解 8.0〜15.0 107.0 106.95
性タンニン類
糖類 <3.0 20.0 0.06
有機溶媒 不検出 不検出 −−
【００４２】
前記の含量はザクロ抽出物サンプルを分析することにより得られた。アントシアニンは分光光度分析法により、プニカラギン、エラグ酸及びその他の加水分解性タンニン類はＨＰＬＣ法により、糖類はＨＰＬＣ法により、及び有機溶媒はガスクロマトグラフ法（ＧＣ）により測定した。
【００４３】
前記のように、前記の表１に示された比率に従うザクロ抽出物を使用することにより、食品の官能特性を危うくすることなく、食品（飲料を含む）を栄養強化することができ、しかも、同時に、栄養強化食品（すなわち、栄養製品）に、必要な健康上有用な効果を付与できる、という驚くべき事実が発見された。
【００４４】
この結果は別の点からも驚くべきものである。なぜなら、前記のように、抽出作業中にアントシアニンが失われるために、ザクロ抽出物中に存在するアントシアニンが極めて少ないからである。
【００４５】
従って、本発明による栄養製品において、プニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）は１０／１〜３５／１、好ましくは２０／１〜３５／１の範囲内であり、また、プニカラギン／添加ザクロ糖類の比率（ｗ／ｗ％）は１０／１〜５０／１、好ましくは３０／１〜５０／１の範囲内である。特に、抽出物中のプニカラギン対フルクトースの比率、なかんずく、本発明による食品類（例えば、最初からフルクトースを含まない食品類）中のプニカラギン対フルクトースの比率は２０／１〜１００／１の範囲内である。
【００４６】
更に別の有利な側面は、本発明のザクロ抽出物が食品用等級の水溶性食物繊維、特に燕麦及び大麦などの、βグルカンを多量に含む水溶性食物繊維と併用されることである。これらの水溶性食物繊維は、乾燥工程で使用される担体として機能することができ、あるいは、単に、他の添加担体無しに乾燥により得られるザクロ抽出物と混合され、そして、好ましい３０％以上の含量で提供される。好ましくは、水溶性食物繊維のβグルカン（乾燥基準）含量は３０％以上であり、更に好ましくは３０％〜６０％の範囲内である。
【００４７】
欧州特許出願第ＥＰ０７００４７６５．９号及び欧州特許出願第第ＥＰ０８００４２４２．７号による天然のザクロ抽出物を使用することにより、最終生成物中に有機溶媒が全く存在せず、同様に、特に、心臓血管系疾患（ＣＶＤ）、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防又は治療に使用するという観点から、その他のザクロ製品中に存在する糖類による高カロリー値が避けられる。
【００４８】
ザクロ抽出物（場合により水溶性食物繊維を併用）による栄養（又は栄養強化）食品（以下、「食品」という用語は「飲料」を含む）の製造方法は、ザクロ抽出物を、水溶性食物繊維と併用するか又は併用せずに、食品に添合し、そして混合し、いわゆる機能性又は機能性化栄養製品を得ることからなる。ザクロ抽出物の栄養製品への添加は、機能性化される各栄養製品を製造する技術的方法に従って混合及び均質化することにより得られる。
【００４９】
人間又は動物が消費するための固形食品の機能性化（即ち、栄養強化）は、当業者に公知の技術に従って、成分類がその他の成分類と予備混合されているか、又は水中に分散されているか否かに拘わらず、ザクロ抽出物の添合及び均質分散を促進するために、通常は、製造工程のできるだけ早期の段階で、ザクロ抽出物を水溶性食物繊維と共に又はザクロ抽出物のみを添加する工程からなる。
【００５０】
飲料の機能性化（栄養強化）は、ザクロ抽出物を水溶性食物繊維と共に又はザクロ抽出物のみを、飲料製造の技術的工程中に、添合し、溶解させる工程からなる。一般的な方法では、ザクロ抽出物粉末及び場合により、水溶性食物繊維及び更に親水性成分類などを所望の重量比で、飲料に添加し、そして、極めて厳格に制御された温度及び撹拌パラメータの下で、完全に溶解させる。この工程は、腐敗を避けるために、飲料が殺菌される前又は食用酸類及び／又は食品保存料が添加される前に行うことが好ましい。
【００５１】
本明細書において、「栄養製品」という用語は、或る量のザクロ抽出物を添合した人間又は動物類が消費するための全ての食品類（飲料、塩、砂糖及びシーズニングを含む）を意味する。
【００５２】
本発明による栄養製品、即ち、ザクロ抽出物を含む食品において、プニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）は１０／１〜３５／１、好ましくは２０／１〜３５／１の範囲内であり、また、プニカラギン／添加ザクロ糖類の比率（ｗ／ｗ％）は１０／１〜５０／１、好ましくは３０／１〜５０／１の範囲内である。本発明の栄養製品は好ましくは、プニカラギン含量が０．００５％（ｗ／ｗ）〜５％（ｗ／ｗ）と同等の、或る濃度の本発明のザクロ抽出物を含有する。更に詳細には、本発明の栄養製品は、消費者が毎日プニカラギンを少なくとも１０ｍｇ摂取する、上記に定義されたような或る量のザクロ抽出物を含有する。換言すれば、栄養製品は一杯分毎に少なくとも５ｍｇのプニカラギンを供給する。
【００５３】
本明細書において、「一杯分(serving)」という用語は、
- 一杯(helping)、即ち食事の一部として摂取する個別量の食品又は飲み物、又は
- 一食、即ち人間又は動物が食事中に食べるであろう食品又は飲み物の量
を意味する。
【００５４】
前記の説明は、例えば、食品のカロリー含量を評価する時に使用される標準的な意味であり、別名「公約数(Common Measure)」とも呼ばれる。「一杯分(serving)」又は「公約数(Common Measure)」のリストは、米国農務省、農業リサーチサービス(Agricultural Research Service)のウエブサイトから入手可能な例えば、「米国農務省国立栄養データベース標準リファレンス，リリース２０，栄養リスト(USDA National Nutrient Database for Standard Reference, Release 20, Nutrient List)」などで見つけ出すことができる。
【００５５】
好ましい範囲は、０．０１％（ｗ／ｗ）〜０．１％（ｗ／ｗ）の範囲内の栄養製品中のプニカラギン含量と同等のザクロ抽出物量からなる。
【００５６】
この添加量のザクロ抽出物を含有する栄養製品は、例えば、果実香料飲料、オレンジ香料飲料、レモンライム香料飲料、ルートビアー、コーラ、フルーツジュース、フルーツ含有飲料、野菜ジュース、野菜含有飲料、スポーツ飲料、エネルギー飲料、香料付き水、酪農成分含有飲料、ミルク、ミルクセーキ、発酵乳、香料付きミルクオルチャッタ、ビール、ビール風味スパークリング飲料、ワイン、ワイン風味飲料、コーヒー、コーヒー系飲料、紅茶、紅茶系飲料、インフュージョン、前記飲料類の技術的に改変された誘導体類又は前記の飲料類又は誘導体類の２種類以上の混合物などである。
【００５７】
別の好ましい範囲は、０．０２％（ｗ／ｗ）〜０．２０％（ｗ／ｗ）の範囲内のプニカラギン含量と同等のザクロ抽出物量からなる。この添加量のザクロ抽出物を含有する栄養製品は、例えば、
- ヨーグルト、アイスクリーム、チーズなどのような酪農製品、
- オリーブオイル（エキストラバージンオリーブオイル、バージンオリーブオイル、ランパンテオリーブオイル、精製オリーブオイル、粗製オリーブ搾り滓オイル、精製オリーブ搾り滓オイル）、ヒマワリ油、トウモロコシ油、大豆油、亜麻仁油、扁桃油、キャノーラ油、サフラワー油、パーム油、ココヤシ油、菜種油、藻類、オキアミ、大型ニシン、アンチョビ、マグロ（ツナ）などのような様々な原料から得られる植物油、魚介油又は魚油類、
- チキン、七面鳥、アヒル、ポーク、ビーフなどの肉類又はこれらから製造されたソーセージ、スモーク乾燥ミート又はコールドミート（例えば、生ハム、ボイルドハム、スモークドハム、サラミ、パテ、調理済みミート缶詰）などのような食肉製品又は鶏肉製品、
- パン、ベーグル、ビスケット、クッキー、ケーキ、パストリー、パイ、マカロニ、スパゲッティーなどのようなベーカリー製品又はパスタ系製品、
- トマト缶詰、アーティチョーク缶詰、パイナップル缶詰、ピーチ缶詰、ジャム、ママレード、ジェリー、ピクルスなどのような野菜又は果実コンサーブ類、
- エビ、ロブスター、イカ、カニ、イガイ、ザルガイ、マグロ（ツナ）、サーディンなどのようなシーフード缶詰又は魚類缶詰、
- アーモンド、ピーナッツ、ピスタッチオ、クルミ、ポップコーン、チョコレート、チューインガム、キャンディーなどのようなスナック又はスイーツ、
又は前記食品類の技術的に改変された誘導体類又はこれら食品類及び誘導体類の２種類以上の混合物類などである。
【００５８】
更に別の好ましい範囲は、０．０２５％（ｗ／ｗ）〜０．２５％（ｗ／ｗ）の範囲内のプニカラギン含量と同等のザクロ抽出物量からなる。この添加量のザクロ抽出物を含有する栄養製品は、例えば、生ペットフード缶詰、乾燥ペットフード、半生ペットフード、スナック、又は前記ペットフードの技術的に改変された誘導体類若しくは前記ペットフード及び誘導体類の２種類以上の混合物類などのようなペットフード類である。
【００５９】
食品の風味、香味及び一般的な官能特性は、本発明によるザクロ抽出物の添加により改変されない。
【００６０】
本発明によれば、ザクロ抽出物は０．５％〜５％（重量基準）の範囲内の量で塩に添加することもでき、また、０．２％〜２％（重量基準）の範囲内の量で砂糖に添加することもできる。本発明によるザクロ抽出物の低糖含量は、ザクロ抽出物をシーズニング（例えば、バルサミコ酢）、塩、砂糖及び甘味料（例えば、アスパルテーム）などに添加するために特に魅力的であり、これらの香味はザクロ抽出物により殆ど改変されない。
【００６１】
最後に、本発明の他の側面は、心臓血管系疾患（ＣＶＤ）、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防又は治療のために、水溶性食物繊維を併用した又は併用しないザクロ抽出物で機能性化された本発明の栄養製品を使用することに関する。水溶性食物繊維を併用した又は併用しないザクロ抽出物含有機能性食品又は飲料の摂取は、所定の養生法（好ましくは一日当たり２〜３杯分）に従うことが好ましい。また、慢性治療のように長期間に亘って摂取することが好ましく、可能であれば、消費者の人生を含めて１年間以上持続することが好ましい。
【００６２】
本発明によれば、水溶性食物繊維を併用した又は併用しない所定量の本発明のザクロ抽出物を含有する機能性栄養製品の推奨日用量は、消費者が所定の養生法に従って一日当たり２〜３杯分摂取した場合、所期の目的を達するために十分な量でなければならない。或る実施態様では、プニカラギンは機能性栄養製品中に、１杯分当たり５ｍｇ〜５０００ｍｇ、好ましくは１５ｍｇ〜５００ｍｇ、更に好ましくは４０ｍｇ〜２００ｍｇの範囲内の量で存在する。
【００６３】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、栄養強化即ち機能性化栄養製品は前記ザクロ抽出物とヒドロキシチロソルを含有する。好ましくは、ヒドロキシチロソルは、本願と同じ出願人による同時継続欧州特許出願第ＥＰ−Ａ−０７００１７９１号明細書（出願日：２００７年１月２６日）及びＰＣＴ／ＩＢ２００８／０００１７３号明細書（出願日：２００８年１月２８日）に記載された抽出方法により得られる。
【実施例１】
【００６４】
ザクロ抽出物含有機能性オレンジジュースの製造
濃縮オレンジジュースに水及び水溶性成分を添加することにより製品を製造した。次いで、ザクロ抽出物を添加し、混合し、そして、得られた製品を低温殺菌し、均質化した。最後に、製品を冷却し、包装した。アスコルビン酸、クエン酸及び類似物などのようなその他の成分を使用する場合、同じ方法に従って製造した。
【００６５】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は２００ｍｇ／Ｋｇ〜１０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００６６】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，２００，４００，６００，８００及び１０００ｐｐｍ含有する６本のガラス瓶のオレンジジュースを前記のようにして調製した。オレンジジュースサンプル４０ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図１のプロットａ参照）、線形相関が得られた。具体的に、非機能性ジュースの抗酸化能力は１．３９ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比の機能性ジュースの抗酸化能力は３．１３ｍＭトロロックス当量／ｇであった。すなわち、抗酸化能力が２．３倍高められたジュースが得られたことを意味する。
【実施例２】
【００６７】
ザクロ抽出物含有機能性乳製品の製造
酸素の不存在下で、ザクロ抽出物を液体牛乳に添加した。その後、得られた乳製品をＵ．Ｈ．Ｔ．処理（１５０℃で４〜６秒間加熱）し、そして、最後に酸素の不存在下で包装した。
【００６８】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は２００ｍｇ／Ｋｇ〜１０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００６９】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，２００，４００，６００，８００及び１０００ｐｐｍ含有する６本のガラス瓶の牛乳を前記のようにして調製した。牛乳サンプル４０ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図１のプロットｂ参照）、線形相関が得られた。非機能性牛乳の抗酸化能力は０ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比の機能性牛乳の抗酸化能力は２．９７ｍＭトロロックス当量／ｇであった。
【実施例３】
【００７０】
ザクロ抽出物含有機能性ボイルドハムの製造
ザクロ抽出物を予め製造用成分類の混合物（塩、グルコースシロップ、砂糖、数種類の食品添加物類）と混合しておき、この混合物を塩水溶液に添合した。その直後に、塩水溶液はハムピースの孔内に押し込まれた。温度１０℃以下の減圧下で、このハムピースを何回か押し揉みした。次いで、このハムピースを４〜６℃の温度で少なくとも４８時間の間、液体に浸して柔らかくした。その後、このハムピースを再び押し揉みし、そして、モールド内に配置された調理用袋内に減圧下で充填包装した。その後、このハムピースを、その中心部の温度が６５℃に達するまで、スチームオーブン内で焼成した。その直後に、ボイルドハムピースを冷却し、そして、５℃で保存した。最後に、２４時間経過後に、モールド内から取り出した。
【００７１】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は４００ｍｇ／Ｋｇ〜４０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００７２】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，４００，１０００，２０００，３０００及び４０００ｐｐｍ含有する６個のボイルドハムを前記のようにして調製した。各ボイルドハムのサンプル３ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図２のプロットａ参照）、線形相関が得られた。具体的に、非機能性ボイルドハムの抗酸化能力は０．１１ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比のボイルドハムの抗酸化能力は９．９３ｍＭトロロックス当量／ｇであった。すなわち、抗酸化能力が９０．３倍高められたボイルドハムが得られたことを意味する。
【実施例４】
【００７３】
ザクロ抽出物含有ツナ缶詰の製造
公知技術に従って、成分類がその他の乾燥成分類と予備混合又は水中に分散されていようとなかろうと、ザクロ抽出物を製造工程の出来るだけ早期の段階で添加し、その添合及び均質分散を促進させた。
【００７４】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は４００ｍｇ／Ｋｇ〜４０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００７５】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，４００，１０００，２０００，３０００及び４０００ｐｐｍ含有する６個のツナ缶詰を前記のようにして調製した。各ツナ缶詰のサンプル３ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図２のプロットｂ参照）、線形相関が得られた。具体的に、非機能性ツナ缶詰の抗酸化能力は０ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比のツナ缶詰の抗酸化能力は５．５４ｍＭトロロックス当量／ｇであった。
【実施例５】
【００７６】
ザクロ抽出物含有機能性半生ドッグフードの製造
公知技術に従って、成分類がその他の乾燥成分類と予備混合又は水中に分散されていようとなかろうと、ザクロ抽出物を製造工程の出来るだけ早期の段階で添加し、その添合及び均質分散を促進させた。
【００７７】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は４００ｍｇ／Ｋｇ〜５０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００７８】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，４３３，１０００，１６００，４０００及び５０００ｐｐｍ含有する６個の半生ドッグフードを前記のようにして調製した。各半生ドッグフードのサンプル３ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図３参照）、線形相関が得られた。具体的に、非機能性半生ドッグフードの抗酸化能力は０．０２ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比の半生ドッグフードの抗酸化能力は６．９５ｍＭトロロックス当量／ｇであった。すなわち、抗酸化能力が３４７．５倍高められた半生ドッグフードが得られたことを意味する。
【実施例６】
【００７９】
心臓血管系疾患の予防又は治療におけるザクロ抽出物の使用
６．１ 動物
オスのスプラーグ・ドーリーラット４０匹（平均体重１５０〜１８０ｇ）をHarlan Interfauna Iberica SA社（スペインのバルセロナに所在）から購入し、全ての実験中、Murcia大学の動物実験施設内で飼育した。ラットを無作為に、各８匹毎の５個の実験群に割り振った。各群の４匹のラットをサブグループとして、照明（１２時間毎の日中／夜間サイクル）、温度（２２±２℃）及び湿度（６０％）の標準的条件下で飼育ケージに収容した。
【００８０】
６．２ 食餌
この実験に使用した食餌は次の通りであった。
・ 対照食餌（Ｃ）：固形の標準ラット食餌(Panlab社製)
・ アテローム性食餌（Ａ）：９５．５％標準ラット食餌(Panlab社製)に、アテローム性動脈硬化症を誘発させるためにコレステロール(Aldrich社製)１．５％及びラード３％を添加。
・ アテローム性食餌＋ザクロ抽出物（Ｐ）：９５．０％標準ラット食餌(Panlab社製)、コレステロール(Aldrich社製)１．５％、ラード３％及びザクロ抽出物０．５％（プニカラギン含量：５０％ｗ／ｗ）。
・ 標準ラット食餌＋強制経口投与（プニカラギン160mg/kg(体重））（Ｇ１６０）：標準ラット食餌(Panlab社製)の他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン１６０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させる。
【００８１】
飲料水と食餌は任意に摂取させた。しかし、全研究を通じて、各ラット毎の平均給餌量は１５ｇ／日（ラット毎の実際の食餌摂取量は不知）であった。更に、Ｇ１６０食餌を与えられているラット群に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン１６０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。脂肪の酸化を避けるために、アテローム性食餌（Ａ）及びアテローム性食餌＋ザクロ抽出物（Ｐ）は使用直前まで４℃の冷暗所に保存した。また、摂取されずに残った前日の食餌は廃棄した。本研究に使用したＰ及びＧ１６０食餌内のプニカラギン濃度はＨＰＬＣにより測定した。
【００８２】
１０．３ 実験計画
実験計画を下記の表２に示す。
【００８３】
表２
群 初日から ３１日目から 備考
３０日目まで ６０日目まで
１ 食餌Ｃ 食餌Ｃ
２ 食餌Ａ 食餌Ａ
３ 食餌Ａ 食餌Ｃ
４ 食餌Ｐ 食餌Ｐ
５ 食餌Ａ 標準食餌＋ Ｇ１６０ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン
１６０ｍｇを水に入れて、強制
経口投与により毎日服用させた。
【００８４】
ラット群ＣＣ、ＡＡ、ＡＣ、ＰＰ及びＡＧ１６０には次のようにして食餌を給餌した。ラット群ＣＣ、ＡＡ又はＰＰにはそれぞれ、食餌Ｃ、Ａ又はＰを２ヶ月間給餌し、ラット群ＡＣには、食餌Ａを１ヶ月間、続いて食餌Ｃを１ヶ月間給餌し、ラット群ＡＧ１６０には、標準ラット食餌(Panlab社製)を給餌した他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン１６０ｍｇを強制経口投与した。実験終了時点で、絶食ラットに麻酔をかけ、安楽死させた直後に心臓内穿刺を行い血液を試験管に捕集し、各試験管にクエン酸ナトリウム３．８％を添加した。分析のために血漿を遠心分離法により分離させた。
【００８５】
６．４ 血漿中の脂質の測定
総コレステロール（ＴＣ）、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）及びトリグリセリド（ＴＧ）の血漿濃度を、（スペインのバルセロナに所在する）Biosystems社から購入した市販のキットを使用し、製造者の取り扱い指示書に従って、比色定量分析法により測定した。
【００８６】
６．５ 統計分析
データは、平均値±平均値の標準誤差(S.E.M.)として表示され、かつ、一方向ANOVA（分散分析）により分析した。グループ間の差分はTukeyテスト（多重比較検定）により評価した。差分はＰ値が＜０．０５である場合に、有意と見做された。データはSigmaStatソフトウェア（バージョン２．０３）を用いて解析した。結果を図４に示す。
【００８７】
６．６ 考察
図４は、動脈硬化指数と、異なる食餌スキームに従って分類されたラットとの間の相関関係を示す。図４によれば、ＣＣ食餌（対照食餌を２ヶ月間給餌）で処理されたラット群１は最も低い動脈硬化指数を示すが、ＡＡ食餌（負対照のアテローム性食餌を２ヶ月間給餌）で処理されたラット群２は最も高い動脈硬化指数を示す。ラット群１とラット群２の間の動脈硬化指数差は、Ｐ値が＜０．００１なので、統計的に有意である。興味深い結果が、最初の１ヶ月間は食餌Ａが給餌され、次の１ヶ月間はＧ１６０食餌が給餌されたラット群５について示されている。ラット群５とラット群１との間には、動脈硬化指数の統計的有意差が認められなかった。換言すれば、ラット群５については、Ｇ１６０食餌で処理された１ヶ月間の後、動脈硬化指数が、ＣＣ食餌（対照食餌を２ヶ月間給餌）で得られるレベルに匹敵する値にまで顕著に低下することが認められた。これに対して、標準食餌だけを１ヶ月間与えられ、続いて、アテローム性食餌で１ヶ月間処理されたラット群３については同じ結果は認められなかった。この場合、（負対照ラット群２の動脈硬化指数と統計的有意差が存在したとしても）動脈硬化指数は、対照食餌を２ヶ月間給餌されたラット群（ラット群１）について検出された動脈硬化指数に対して、統計的有意差（Ｐ値＜０．０５）を生じた。
【００８８】
高コレステロール／トリグリセリドレベル、低ＨＤＬコレステロールレベル及び特に被酸化ＬＤＬは、動脈内のアテローム性プラーク堆積及びメタボリック症候群に付随するリスクファクター（危険因子）である。本発明者らは、ザクロ抽出物を含有する機能性栄養製品が心臓血管系発作に対するバイオマーカーを有していることの効果に関する研究及びザクロ抽出物を含有する機能性栄養製品を、ザクロ抽出物を有する類似の非機能性栄養製品と比較する研究を行った。測定された全てのパラメータを考慮すると（図４参照）、ザクロ抽出物を含有する栄養製品の規則的服用は心臓血管系を保護し、心臓血管系発作の発生を大なり小なり防止し、その結果、当該製品は健康増進栄養製品として申し分の無いものであるということが結論付けられる。
【００８９】
特に注目すべき事実は、脂肪及びコレステロールを多く含む食餌にザクロ抽出物を添加すると（ＰＰ，ラット群４）、標準食餌（ＣＣ，ラット群１）と比較した場合、統計的有意差の無い動脈硬化指数値を維持することができることである。
【実施例７】
【００９０】
高血圧症治療におけるザクロ抽出物の使用
７．１ 動物
オスのスプラーグ・ドーリーラット２４匹（試験開始時点の体重約２００ｇ）をHarlan Interfauna Iberica SA社（スペインのバルセロナに所在）から購入し、全ての実験中、Murcia大学の動物実験施設内で飼育した。ラットを無作為に、４個の実験群（各群当たりラット６匹）に割り振り、照明（１２時間の日中／夜間サイクル）、温度（２２±２℃）及び湿度（６０％）の標準的条件下で飼育ケージに収容した。
【００９１】
７．２ 食餌
順化及び試験期間中、ラットには固形のラット用標準食餌(Panlab社製)を給餌した。飲料水及び餌は自由に摂取させた。順化期間の７日間が経過した後、下記の実験計画に従って処置を開始した。
【００９２】
７．３ 実験計画
ザクロ抽出物の効果を測定するため、高血圧症モデルの誘発用としてＮ−ニトロ−Ｌ−アルギニン−メチルエステル(L-NAME)を使用した。順化期間経過後、L-NAME誘発高血圧症治療の開始前に、動脈血圧の基礎データ(D0)をLetica5002測定器で測定した。
【００９３】
ラットを下記の表３に示される実験計画に従って処置した。
【００９４】
表３
L-NAME＊
群 含有飲料水 強制経口投与 備考
１ 無し 無し
２ 40mgL-NAME/kg 無し
３ 40mgL-NAME/kg プニカラギン プニカラギンは水に添合
160mg／Kg（体重） して服用させた
４ 40mgL-NAME/kg カプトプリル 正対照：カプトプリル 100mg／Kg（体重） 100mg（水に溶解させた）
＊Ｌ−ＮＡＭＥ処置剤は、ラット１匹当たり２００ｇの体重を考慮し、そして、ラットへの平均一日給水量を４０ｍＬ／日に標準化して、自由に摂取できる飲料水摂取を通して全てのラット群に投与した。但し、ラット毎の実際の水摂取量は不知。
【００９５】
１１．４ 活性の実施計画（タイムテーブル）
ラットを習慣付けるために、順化期間中、Lectica5002測定器を用いて尻尾動脈の脈動を記録することにより動脈血圧の測定を行った。
【００９６】
試験測定／処置の実施計画を下記の表４に要約して示す。
【００９７】
表４
日数 動脈血圧の測定 L-NAME添加 強制経口投与
飲料水
０ 有り 有り 無し
１ 無し 有り 有り
２ 有り 有り 有り
３ 無し 有り 有り
４ 有り 有り 有り
５ 無し 有り 有り
６ 無し 有り 有り
７ 有り 有り 有り
【００９８】
７．４ 動脈血圧の測定
動脈血圧は前記のタイムテーブルに従って、尾カフ(tail-cuff)法により定期的に測定した。尾動脈の脈動を検出可能にするため、測定前にラットを３７℃で１０分間静置した。本研究で使用した測定器のLE5002(スペインのバルセロナに所在するLetica,Hospitalet社製)は正確なマイクロプロセッサプログラムと結合された高感度パルス変換器を有し、その結果、正確な動脈血圧の測定ができる。動脈血圧測定は、概日周期の如何なる影響も避けるために、一日の同じ時間に行った。
【００９９】
７．５ 統計分析
データは、平均値±平均値の標準誤差(S.E.M.)として表示され、かつ、SigmaStatソフトウェア（バージョン２．０３）を用いて解析した。結果を図５に示す。
【０１００】
７．６ 考察
動脈性高血圧症は動脈内のアテローム性プラーク堆積及びメタボリック症候群に付随するリスクファクター（危険因子）である。本発明者らは、ザクロ抽出物が動脈血圧に及ぼす効果について研究し、そして、その結果をザクロ抽出物による処置を受けなかった対照と比較した。抗高血圧作用を示すザクロ抽出物は、心臓血管系発作の発生を大なり小なり防止し、従って、健康を増進する栄養補助食品と見做すことができ、また、抗高血圧作用を有する機能性食品及び機能性飲料を製造するための有効な手段であると結論付けられる。
【実施例８】
【０１０１】
心臓血管系疾患の予防又は治療におけるザクロ抽出物及び水溶性食物繊維の使用
８．１ 動物
オスのスプラーグ・ドーリーラット７２匹（平均体重１５０〜１８０ｇ）をHarlan Interfauna Iberica SA社（スペインのバルセロナに所在）から購入し、全ての実験中、Murcia大学の動物実験施設内で飼育した。ラットを無作為に、各群８匹の９個の実験群に割り振った。各群の４匹のラットをサブグループとして、照明（１２時間毎の日中／夜間サイクル）、温度（２２±２℃）及び湿度（６０％）の標準的条件下で飼育ケージに収容した。
【０１０２】
８．２ 食餌
この実験に使用した食餌は次の通りであった。
・ 対照食餌（Ｃ）：固形の標準ラット食餌(Panlab社製)
・ アテローム性食餌（Ａ）：９５．５％標準ラット食餌(Panlab社製)に、アテローム性動脈硬化症を誘発させるためにコレステロール(Aldrich社製)１．５％及びラード３％を添加。
・ 標準食餌＋強制経口投与（プニカラギン40mg/kg（体重））（Ｇ４０）：標準ラット食餌(Panlab社製)の他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン１６０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。
・ 水溶性食物繊維食餌（Ｆ）：９５％標準ラット食餌(Panlab社製)と５％水溶性食物繊維
・ 水溶性食物繊維＋強制経口投与（プニカラギン40mg/kg（体重））（ＦＧ）：９５％標準ラット食餌(Panlab社製)と５％水溶性食物繊維の他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。
・ アテローム性食餌＋強制経口投与（プニカラギン40mg/kg（体重））（ＡＧ）：９５．５％標準ラット食餌(Panlab社製)、１．５％コレステロール(Aldrich社製)、３％ラードの他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。
・ アテローム性食餌＋水溶性食物繊維（ＡＦ）：９０．５％標準ラット食餌(Panlab社製)、アテローム性動脈硬化症を誘発させるための１．５％コレステロール(Aldrich社製)及び３％ラードと、５％水溶性食物繊維
・ アテローム性食餌＋水溶性食物繊維＋強制経口投与（プニカラギン40mg/kg（体重））（ＡＦＧ）：９０．５％標準ラット食餌(Panlab社製)、アテローム性動脈硬化症を誘発させるための１．５％コレステロール(Aldrich社製)及び３％ラードと、５％水溶性食物繊維の他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。
【０１０３】
飲料水と食餌は任意に摂取させた。しかし、全研究を通じて、各ラット毎の平均給餌量は１５ｇ／日（ラット毎の実際の食餌摂取量は不知）であった。更に、Ｇ４０、ＦＧ、ＡＧ及びＡＦＧ食餌を与えられている各ラット群に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。脂肪の酸化を避けるために、アテローム性食餌は使用直前まで４℃の冷暗所に保存した。また、摂取されずに残った前日の食餌は廃棄した。Ｇ４０、ＦＧ、ＡＧ及びＡＦＧ食餌内のプニカラギン濃度はＨＰＬＣにより測定した。
【０１０４】
８．３ 実験計画
実験計画を下記の表５に示す。
【０１０５】
表５
群 初日から ３１日目から 備考
３０日目まで ６０日目まで
１ 食餌Ｃ 食餌Ｃ
２ 食餌Ａ 食餌Ａ
３ 食餌Ａ 食餌Ｃ
４ 食餌Ａ 食餌Ｆ
５ 食餌Ａ 食餌Ｇ４０ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇ を水に入れて、強制経口投与により毎日 服用させた。
６ 食餌Ａ 食餌ＦＧ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇ を水に入れて、強制経口投与により毎日 服用させた。
７ 食餌ＡＦ 食餌ＡＦ
８ 食餌ＡＧ 食餌ＡＧ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇ を水に入れて、強制経口投与により毎日 服用させた。
９ 食餌ＡＦＧ 食餌ＡＦＧ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇ を水に入れて、強制経口投与により毎日 服用させた。
【０１０６】
ラット群１、２、７、８及び９のそれぞれには、２ヶ月間食餌Ｃ、Ａ、ＡＦ、ＡＧ又はＡＦＧを給餌した。ラット群３、４、５及び６のそれぞれには、最初の１ヶ月間は食餌Ａを給餌し、次の１ヶ月間は食餌Ｃ、Ｆ、Ｇ４０又はＦＧを給餌した。実験終了時点で、絶食ラットに麻酔をかけ、安楽死させた直後に心臓内穿刺を行い血液を試験管に捕集した。分析のために血清を遠心分離法により分離させた。
【０１０７】
８．４ 統計分析
データは、平均値±平均値の標準誤差(S.E.M.)として表示され、かつ、一方向ANOVA（分散分析）により解析した。グループ間の差分はTukeyテスト（多重比較検定）により評価した。差分はＰ値が＜０．０５である場合に、有意と見做された。データはSigmaStatソフトウェア（バージョン２．０３）を用いて解析した。
【０１０８】
ラットの体重に関するデータは、平均値±平均値の標準誤差(S.E.M.)として表示される。また、データはSigmaStatソフトウェア（バージョン２．０３）を用いて解析した。
【０１０９】
８．５ 考察
得られた結果を図６に示す。動脈硬化指数は前記のように表５に示される各ラット群と相関されている。
【０１１０】
図６は、動脈硬化指数と、異なる食餌スキームにより分類されたラットとの間の相関関係を示す。ＣＣ食餌（対照食餌を２ヶ月間）で処理されたラット群１は最低動脈硬化指数を示すが、ＡＡ食餌（アテローム性食餌（負対照）を２ヶ月間）で処理されたラット群２は最高動脈硬化指数を示す。Ｐ値＜０．００１なので、ラット群１とラット群２との間には動脈硬化指数の統計的有意差が存在する。興味深い結果が、最初の１ヶ月間は食餌Ａで処理され、次の１ヶ月間は食餌ＦＧで処理されたラット群６について示されている。ラット群６とラット群１との間の動脈硬化指数の統計的有意差は認められなかった。換言すれば、ラット群６については、食餌ＦＧで１ヶ月間処理した後、食餌ＣＣ（対照食餌を２ヶ月間）で得られるレベルに匹敵する値に対して、その動脈硬化指数値が顕著に低下（食餌Ａ−Ｃで処理されたラット群３について得られた平均値よりも３０．２％低下）することが認められた。これに対して、アテローム性食餌で１ヶ月間処理した後、次の１ヶ月間は標準食餌の他に水溶性食物繊維（食餌Ｆ）だけで処理したラット群４又は次の１ヶ月間は標準食餌の他に体重１ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを強制経口投与したラット群５については同じ効果が認められなかった。この場合、（負対照ラット群２の動脈硬化指数と統計的有意差が存在したとしても）動脈硬化指数は、対照食餌を２ヶ月間給餌されたラット群（ラット群１）について検出された動脈硬化指数に対して、統計的有意差（Ｐ値＜０．０５）を生じた。驚くべきことに、食餌Ａ−Ｃで処理されたラット群３について得られた平均値を越える動脈硬化指数値の低下率は、ラット群４の場合、６．９％、ラット群５の場合、１７．２％であった。この事実は、ラット群６について得られた３０．２％の低下率と比較した場合、３０．２％は驚くべき数値であり、水溶性食物繊維と本発明のザクロ果実抽出物との併用による相乗効果であることを示唆する。
【０１１１】
別の興味深い結果は、本実験において食餌ＡＦＧで処理されたラット群９について示されている。ラット群９とラット群１との間の動脈硬化指数の統計的有意差は認められなかった。換言すれば、水溶性食物繊維とプニカラギン高含有ザクロ果実抽出物の強制経口投与が追加されたアテローム性食餌で２ヶ月間処理した後、食餌ＡＦＧ−ＡＦＧが給餌されたラット群９については、対照食餌により得られるレベルに匹敵する値と変わらない動脈硬化指数値が認められた。これに対して、２ヶ月間の実験期間中、食餌ＡＦ又はＡＧだけが給餌されたラット群７（食餌ＡＦ−ＡＦ）及びラット群８（食餌ＡＧ−ＡＧ）については同じ効果は認められなかった。この場合、（負対照ラット群２の動脈硬化指数と統計的有意差が存在したとしても）動脈硬化指数値は、対照食餌を２ヶ月間給餌されたラット群（ラット群１）について検出された動脈硬化指数値に対して、統計的有意差（Ｐ値＜０．０５）を生じた。ラット群９から得られた動脈硬化指数値は、本発明により得られたプニカラギン高含有ザクロ果実抽出物による予防効果を示唆し、また、水溶性食物繊維と本発明によるザクロ果実抽出物との併用による効果の改善を示唆する。
【実施例９】
【０１１２】
肥満はメタボリック症候群に付随するリスクファクター（危険因子）であり、メタボリック症候群を有する人々は心臓血管系疾患の高いリスクを有する。本発明者らは、ラットの体重（ＢＷ）に対する水溶性食物繊維とザクロ抽出物の併用効果を研究し、そして、この効果を、水溶性食物繊維と本発明によるザクロ果実抽出物を併用せずに処置した対照群と比較した。
【０１１３】
図７は、異なる食餌スキームにより分類され、そして前記実施例８の表５に示された実験計画に従って給餌飼育された、実施例８で使用されたラットと同じラットの体重と実験期間との間の相関関係を示す。
【０１１４】
図７によれば、２ヶ月間の実験期間終了後、食餌ＣＣ（対照食餌）で処理されたラット群１は最低体重を示すが、食餌ＡＡ（負対照のアテローム性食餌）で処理されたラット群２は最高体重を示す。総コレステロール（ＴＣ）、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）及びトリグリセリドの血漿濃度について得られるデータの正しい解釈に悪影響を及ぼすであろうラットの肥満を避けるために、アテローム性食餌及び総実験期間を選択した。
【０１１５】
実験期間中、食餌ＡＦＧで処理されたラット群９のラットについて興味深い結果が示された。２ヶ月間の実験期間中、ラット群９及びラット群１の間で、ラットの体重の類似的傾向が認められた。換言すれば、水溶性食物繊維とプニカラギン高含有ザクロ果実抽出物の強制経口投与が追加されたアテローム性食餌で２ヶ月間処理した後、食餌ＡＦＧ−ＡＦＧが給餌されたラット群９について、対照食餌により得られた値に匹敵するラット体重が認められた。これに対して、２ヶ月間の実験期間中、食餌ＡＦ又は食餌食餌ＡＧだけが給餌された各ラット群７及びラット群８については同じ効果は認められなかった。この場合、ラット群７及びラット群８のラット体重傾向が発現し、最高体重傾向のラット群２と最低体重傾向のラット群１との間の位置に入る。ラット群９により示される体重傾向は、本発明によるザクロ果実抽出物と水溶性食物繊維との併用による過体重／肥満予防効果を示唆する。
【０１１６】
全ての測定パラメータを考慮すれば、本発明によるザクロ果実抽出物と水溶性食物繊維との併用物の規則的服用は心臓血管系を保護し、大なり小なり、動脈内におけるアテローム性プラークの堆積及びメタボリック症候群に付随すると考えられる幾つかのリスクの発現を防止するものと結論付けることができる。従って、機能性食品及び栄養補助食品の製造に使用すべき、健康促進天然抽出物であると十分に考えられる。
【０１１７】
以上の説明は、本発明の一実施例に関するもので、この技術分野の当業者であれば、本発明の種々の変形例を考え得るが、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。特許請求の範囲の構成要素の後に記載した括弧内の番号は、図面の部品番号に対応し、発明の容易なる理解の為に付したものであり、発明を限定的に解釈するために用いてはならない。また、同一番号でも明細書と特許請求の範囲の部品名は必ずしも同一ではない。これは上記した理由による。用語「又は」に関して、例えば「Ａ又はＢ」は、「Ａのみ」、「Ｂのみ」ならず、「ＡとＢの両方」を選択することも含む。特に記載のない限り、装置又は手段の数は、単数か複数かを問わない。
【符号の説明】
【０１１８】
図１ 縦軸：抗酸化能力，ｍＭトロロックス当量／ｇ（オレンジジュース又は牛乳）
横軸：（プニカラギン）ｇ／Ｋｇ （オレンジジュース又は牛乳）
プロットaはオレンジジュース、プロットｂは牛乳
図２ 縦軸：抗酸化能力，ｍＭトロロックス当量／ｇ（ボイルドハム又はツナ缶詰）
横軸：（プニカラギン）ｇ／Ｋｇ （オレンジジュース又はツナ缶詰）
プロットaはボイルドハム、プロットｂはツナ缶詰
図３ 縦軸：抗酸化能力，ｍＭトロロックス当量／ｇ（ドッグフード）
横軸：（プニカラギン）ｇ／Ｋｇ （ドッグフード）
図４ 縦軸：動脈硬化指数（総コレステロール値／ＨＤＬコレステロール値）
横軸：ラット群１ ラット群２ ラット群３ ラット群４ ラット群５
＊Turkeyテストにより評価した対照ラット群１との有意差（Ｐ＜０．０５）を示す
＊＊Turkeyテストにより評価した対照ラット群１との有意差（Ｐ＜０．００１）を示す
図５ 縦軸：収縮期血圧（ｍｍＨｇ）
横軸：ラット群１ ラット群２ ラット群３ ラット群４
図６ 縦軸：動脈硬化指数（総コレステロール値／ＨＤＬコレステロール値）
横軸：ラット群１ ラット群２ ラット群３ ラット群４ ラット群５ ラット群６ ラット群７ ラット群８ ラット群９
＊Turkeyテストにより評価した対照ラット群１との有意差（Ｐ＜０．０５）を示す
＊＊Turkeyテストにより評価した対照ラット群１との有意差（Ｐ＜０．００１）を示す
図７ 縦軸：体重(BW)（ｇ）
横軸：日数
（枠内、上から）：ラット群１，ラット群２，ラット群７，ラット群９，ラット群８
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エラジタンニンを含有するザクロ抽出物、エラジタンニンが添加されたザクロ抽出物を含有する栄養製品及び心臓血管系疾患（ＣＶＤ）、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防及び治療に使用される、ザクロ抽出物及び当該ザクロ抽出物で機能性化された栄養製品に関する。また、本発明は、全形ザクロ果実から得られたザクロ抽出物（ザクロエキス）を飲料及び人間用又は獣用食料品に添加し、抗酸化剤（特に、エラジタンニン、一層特定的にはプニカラギン）のレベルを高めることに関する。更に詳細には、本発明は、プニカラギンリッチ組成物の栄養供給により、心臓血管系疾患、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防及び治療用のプニカラギン源として使用されるべき栄養製品の機能性化又は栄養強化に関する。
【背景技術】
【０００２】
英国心臓財団により２００５年に発行された欧州心臓血管系疾患統計増刊号によれば、ＣＶＤはヨーロッパにおける主要な死亡原因であり、毎年４３５万人以上がＣＶＤで死亡している。冠動脈系心臓疾患（ＣＨＤ）それ自体はヨーロッパにおける単一の最も一般的な死亡原因であり、ヨーロッパでは毎年１９５万人がＣＨＤで死亡している。
【０００３】
ＣＶＤのトータルコストは総計１６９０億ユーロに達し、そのうち、１０５０億ユーロは欧州連合（ＥＵ）におけるＣＶＤ治療費であり、６４０億ユーロは喪失された生産性とインフォーマルケアのコストによるものである。
【０００４】
アテローム性動脈硬化症とも呼ばれる動脈内へのプラーク堆積は、ＣＶＤの主因であり、また、ＣＨＤの最も常習的原因である。動脈内におけるアテローム性動脈硬化症的プラーク堆積は動脈の一般的な障害である。これは、動脈血管壁に脂肪、コレステロール及びその他の物質が堆積し、そして、プラークと呼ばれる硬質物質を生成することにより
発症する。
【０００５】
最後には、プラーク堆積物は動脈の狭窄と柔軟性低下を引き起こす。これは血液の流れを益々困難にする。冠動脈が狭くなると、心臓への血流が低下又は停止し、胸郭の苦痛（持続性アンギナ）、短呼吸、心臓発作及びその他の症状を引き起こす。
【０００６】
プラーク片はバラバラに破壊され、血流に乗って移動することができる。これは心臓発作の一般的な原因である。血塊はプラーク堆積物の周囲にも生成することができる。血塊は血流をブロックする。血塊が心臓、肺又は脳内を移動すると、これは脳卒中、心臓発作又は肺塞栓症を引き起こす。
【０００７】
動脈性高血圧症、血中のトリグリセリド及び総コレステロールの値が高いことや喫煙は、この疾患の進展の一因となるファクターであることが立証されている。最近、研究者らは、これらリスクファクター（危険因子）の幾つかが或る人々の間で密集していることを発見した。これらのリスクファクターの密集はメタボリック症候群として知られているいる。
【０００８】
メタボリック症候群の人々は下記のような密集的リスクファクターを有する。
・中央肥満。これは、腹部（胃部）における余分体重を意味する。
・ブドウ糖と呼ばれるタイプの糖の消化障害（ブドウ糖不耐症）。メタボリック症 候群の患者は通常、高インスリン血症又は２型糖尿病を有する。
・血流中の低密度リポ蛋白（ＬＤＬ）及びトリグリセリドの値が高い。
・血流中の高密度リポ蛋白（ＨＤＬ）の値が低い。
・高血圧症
【０００９】
メタボリック症候群については究明すべきことが依然として多々あるが、医師は、メタボリック症候群の人々が高いＣＶＤリスクを有することを知っている。多くの研究が、ＬＤＬの生体内酸化がアテローム性動脈硬化症の進展に中心的な役割を演じていることを証明している(Knight, 1995; Witzum, 1994)。
【００１０】
実験室研究及び臨床研究の両方において、ザクロは心臓血管系疾患の予防において有望な結果を示す。研究者らは幾つかのメカニズム、例えば、ＬＤＬの酸化阻止と、窒素酸化物の合成及び活性の支持(De Nigrisら, Nitric Oxide, 2006)、血管の酸化ストレス及び炎症損傷の低減(De Nigrisら, Cardiovasc. Res., 2007; Rozenbergら, Atherosclerosis, 2006)、アンギオテンシン変換酵素の活性低下(Aviramら, Atherosclerosis, 2001)などにより、ザクロ研究から植物栄養素(phytochemicals)に関する証拠（エビデンス）を提供する。これらの証拠を積み上げると、プニカラギンとして知られているザクロ内の化合物が、それらの強力な抗酸化作用及び抗炎症作用により、心臓血管系を保護することが示唆される。
【００１１】
M. Shinerら, Atherosclerosis 195, 2007は、プニカラギン及び没食子酸によるパラオキソナーゼ２の発現上昇の効果を報告している。パラオキソナーゼ２は、未だ不明の生理学的役割により、酸化ストレスに対抗するマクロファージを保護することが示された。
【００１２】
更に別の研究は、ザクロジュースは、ブルーベリージュース、クランベリージュース、緑茶又は赤ワインなどのような他の飲み物よりも高い抗酸化特性を有することを示した。プニカラギンα及びβアノマーは、ザクロジュースにおける主要なエラジタンニンであり、ザクロジュースの抗酸化特性の主要な発現元である。それにも拘わらず、研究は、プニカラギンα及びβアノマーと、その他のエラジタンニン（例えば、エラグ酸及びそのグリコシド化誘導体類）並びにその他のマイナーなザクロエラジタンニンとの併用は、ザクロジュースの健康上の効果を高める重要な相乗効果を発揮することを指摘した。
【００１３】
最も最近の研究のレビューは、Lanskyら, Journal of Ethnopharmacology 109, 2007, 177-206に掲載されている。このレビューは、ザクロ、特に種の油相から得られた物質の、癌の治療又は予防に対する力価を強調している。しかし、このレビューは、確定的ではないが、報告された研究は、相応に設計された医薬製品の臨床試験を含む更なる研究が必要であることを示唆して終わっている。
【００１４】
プニカラギンα及びβアノマーは主にザクロ包皮内に存在する。従って、プニカラギンα及びβアノマーは、ジュース抽出のための圧搾中に一次ジュースに移行する。プニカラギンα及びβアノマーは次の構造式を有する。
【００１５】
【００１６】
これらの研究により多数の特許出願が為された。例えば、国際公開第ＷＯ０２／０５６８９９号パンフレットは、血中のオキシステロールの低減と、コレステロールと血圧の正常化に関する組成物及び方法に関する。この特許出願明細書は、好ましくは、ノニ(Morinda Citrifolia)抽出物、赤ワイン抽出物、プルーン抽出物、ブルーベリー抽出物、ザクロ抽出物、リンゴ抽出物及び酵素混合物からなる組成物を開示している。この特許出願は、前記ザクロ抽出物が約４０％のエラグ酸と約６０％のポリフェノール類からなる前記組成物を投与するステップからなる、血中のオキシステロール類を維持又は低減する方法を特許請求している。更に、遊離エラグ酸を経口投与する場合、このエラグ酸は殆ど吸収されない。
【００１７】
米国特許出願第２００６／０２１１６３５号明細書には、商業的なジュース生産の副生物である果実の包皮に由来するザクロエラジタンニンの精製方法が記載されている。この方法は、樹脂表面に吸着されたエラジタンニンの溶出のために、有機溶媒（おそらく、有毒なメタノール）を使用しなければならない欠点及び、実際ジュースが消費者により消費される製品である場合に、ザクロジュース画分中に殆ど存在する幾つかの植物栄養素（最近の研究では、ザクロから得られる健康上の効果の元になっていると言われている）を含有しない抽出物を産生する欠点を有する。
【００１８】
国際公開第ＷＯ２００６／１２７８３２号パンフレットは、ジュース生産の副生物からザクロ抽出物を製造する方法を開示している。開示された製造方法は、ザクロ抽出物を加熱する（４３〜７１℃で２時間加熱し、そして、低温殺菌する）などの幾つかの熱処理を含む。ザクロジュースの低温殺菌は、プニカラギンなどのような大きなエラジタンニンの分解により遊離エラグ酸を生成する。この遊離エラグ酸はザクロジュース飲用の健康上の効果を減少させる。これらの熱処理工程は取り除くことが困難な幾つかの副生物を生成し、更に、ジュース生産により生じたザクロ固形物の使用は、ザクロジュース画分中に殆ど存在する幾つかの植物栄養素を含まない抽出物を産生する。この理由により、国際公開第ＷＯ２００６／１２７８３２号パンフレットは、ザクロ抽出物とザクロジュースとの併用を開示している。実際、この併用により、全形ザクロ果実内に存在する植物栄養素の広範なスペクトルが提供されるが、ザクロジュース及びザクロ抽出物の両方に存在する糖類による高カロリー値という欠点も有する。更に、高糖類含量は、このようなザクロ抽出物の工業的処理を困難にする。なぜなら、プニカラギンの精製は困難であり、また、固形抽出物は乾燥装置の内壁面に粘着するからである。ザクロ抽出物からなる飲料及び食料品に関する特許請求の範囲は、果皮、内膜及び種子からなる群から選択されるザクロ固形物から製造された抽出物を挙げているが、全形ザクロ果実から製造された抽出物は挙げていない。
【００１９】
米国特許出願第２００７０１７８１８０号は、ザクロ抽出物及びその使用方法に関する。更に特定的には、ヒトの動脈硬化症による障害の後退を起こさせるためにザクロ抽出物を使用する方法に関する。この明細書には、頸動脈狭窄症（ＣＡＳ）を患う１９人の患者について人体実験したことが記載されている。これら患者のうち１０人は、１２ヶ月間の間、毎日ザクロジュースをグラス一杯飲んだ。この特許出願人は、人体実験の結果はＣＡＳを患う患者がザクロジュースを飲むと統計的に有意な抗動脈硬化効果を証明していると結論している。使用されたザクロジュース及び前記特許出願明細書に従って製造されたザクロ抽出物の両方とも、何ら特別な精製工程を実施すること無く製造されている。
【００２０】
米国特許出願第２００２００１２７１０号は、健康改善に有用なザクロ製品に関する。この出願は、ザクロ種子油（ザクロシードオイル）を患者に投与し、生理学的作用効果を発揮することからなる、ザクロ種子油の使用方法を特許請求している。このような生理学的作用効果には、抗酸化作用が含まれる。更に、この出願は、発酵されたザクロジュースを患者に投与することからなる、動脈硬化の進行を遅らせる方法も特許請求している。
【００２１】
欧州特許第ＥＰ１２９３１３０号公報に記載されているように、ザクロ抽出物は乳酸菌飲料を酸化から保護するためにも使用されている。ここで、ザクロ抽出物は、水中で還流し、濾過し、活性炭で処理するか又は水／エタノールから処理することにより得ることができる。この飲料中のザクロ抽出物の濃度は、１０ｐｐｍ〜５０ｐｐｍの範囲内である。抽出物の組成に関する記載は存在しない。
【００２２】
要するに、前記の技術は、ザクロ製品を提供することはする。しかし、このザクロ製品は健康上の効果は提供するが、機能性食品及び飲料工業のある種の技術的用途については依然として粗製度が高すぎ、下記のような欠点が想定される。
− ザクロジュース又はザクロ粗製物を定期的に消費すると、これらの中に存在する糖類により、高カロリー値を摂取することが想定される。“ザクロジュースの組成”(Seeramら, J. Nutr. 136:2481-2485, 2006年10月)。人間の飲用に供される単一濃度形（２４０ｍｌ）のザクロジュース（ＰＪ）は、糖類３４ｇ、総炭水化物３５ｇ、ナトリウム３０ｍｇ、カリウム４３０ｍｇ、ビタミンＣ及びビタミンＡのＲＤＡ０％、カルシウム４％及び鉄分２％(Pom Wonderful)を含有している。ＰＪは次のポリフェノール類を含有している。アントシアニン３８７ｍｇ／Ｌ、プニカラギン１５６１ｍｇ／Ｌ、エラグ酸１２１ｍｇ／Ｌ、及びその他の加水分解性タンニン類４１７ｍｇ／Ｌ。
− 上記のザクロ抽出物の幾つかを得るために有機溶媒を使用する。
− 上記のザクロ抽出物の幾つかの標準化は、全形ザクロ果実の加工処理により得られる天然ザクロジュース中に存在する植物栄養素類（例えば、エラジタンニンなど）の自然プロファイルと全くかけ離れている。例えば、幾つかのザクロ抽出物は、代表的な市販のザクロジュース（通常、エラグ酸の含有量が０．１％未満であり、かつ、プニカラギンの含有量が約０．２％である）と比較して、プニカラギンの代わりにエラグ酸含有量が４０％に標準化されていると言われている。
− 前記のような製品は完全な水溶性ではなく、特に、このザクロ抽出物はエラグ酸含有量が高い。この事実は、このザクロ抽出物を飲料に添合すると濁りが生じ、消費者にとって魅力の劣る製品をもたらすことを意味する。
− 経口摂取する際、遊離エラグ酸は殆ど吸収されない。
【００２３】
更に、プニカラギン含量は前記の殆どのザクロ製品において標準化されない。
【００２４】
【先行技術文献】
【特許文献】
【００２５】
【特許文献１】国際公開第ＷＯ０２／０５６８９９号パンフレット
【特許文献２】米国特許出願第２００６／０２１１６３５号明細書
【特許文献３】国際公開第ＷＯ２００６／１２７８３２号パンフレット
【特許文献４】米国特許出願第２００７０１７８１８０号明細書
【特許文献５】欧州特許第ＥＰ１２９３１３０号公報
【非特許文献】
【００２６】
【非特許文献１】De Nigrisら, Nitric Oxide, 2006
【非特許文献２】De Nigrisら, Cardiovasc. Res., 2007
【非特許文献３】Rozenbergら, Atherosclerosis, 2006
【非特許文献４】Aviramら, Atherosclerosis, 2001
【非特許文献５】M. Shinerら, Atherosclerosis 195, 2007
【非特許文献６】Lanskyら, Journal of Ethnopharmacology 109, 2007, 177-206
【非特許文献７】Seeramら, J. Nutr. 136:2481-2485, 2006年10月
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２７】
本発明の目的は、前記の従来技術に関連する問題点を解決し、そして、ザクロ抽出物及び当該ザクロ抽出物を含有する栄養製品を提供することであり、前記ザクロ抽出物はエラジタンニンを含有し、かつ、ザクロ抽出物が添合された食品を摂取する際に、該食品に必要な健康上有用な作用効果を付与するような組成を有する。
【課題を解決するための手段】
【００２８】
前記目的は、請求項１に記載されたザクロ抽出物、及び請求項６に記載されたザクロ抽出物含有機能性食品及び機能性飲料を提供する本発明により達成される。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明により得られた異なる栄養製品の抗酸化能力と、本発明による得られたザクロ抽出物の配合量を増大させた結果としてＨＰＬＣにより測定されたプニカラギン含量との間の線形相関を示すグラフ図であり、プロットａは実施例１のザクロ抽出物含有機能性オレンジジュースに関する線形相関を示すグラフ図であり、プロットｂは実施例２のザクロ抽出物含有機能性乳製品に関する線形相関を示すグラフ図である。
【図２】本発明により得られた異なる栄養製品の抗酸化能力と、本発明による得られたザクロ抽出物の配合量を増大させた結果としてＨＰＬＣにより測定されたプニカラギン含量との間の線形相関を示すグラフ図であり、プロットａは実施例３のザクロ抽出物含有機能性ボイルドハムに関する線形相関を示すグラフ図であり、プロットｂは実施例４のザクロ抽出物含有ツナ缶詰に関する線形相関を示すグラフ図である。
【図３】実施例５により得られたザクロ抽出物含有機能性半生ドッグフードの抗酸化能力と、本発明により得られたザクロ抽出物の配合量を増大させた結果としてＨＰＬＣにより測定されたプニカラギン含量との間の線形相関を示すグラフ図である。
【図４】実施例６における、ラットの動脈硬化指数（総コレステロール値／ＨＤＬコレステロール値）に対するザクロ抽出物の効果を示すグラフ図である。
【図５】実施例７における、ラットの収縮期血圧に対するザクロ抽出物の効果を示すグラフ図である。
【図６】実施例８における、ラットの動脈硬化指数（総コレステロール値／ＨＤＬコレステロール値）に対する、本発明によるザクロ抽出物と水溶性食物繊維との併用効果を示すグラフ図である。
【図７】実施例９における、ラットの体重に対するザクロ抽出物と水溶性食物繊維との併用効果を示すグラフ図である。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
請求項１〜５に記載のザクロ抽出物は、血液中のコレステロール成分類の濃度及び動脈血圧の双方を正常レベルに維持するか又は正常レベルにまで低下させるために使用するのに特に適している。より一般的には、請求項１〜５に記載のザクロ抽出物は、栄養強化飲料の混濁及び高カロリー成分の増大などのように、栄養強化食品の特性を望ましくない方向に改変すること無く、前記非特許文献及び特許文献に述べられた有利な特性及び効果を提供するために特に適している。更に、本発明のザクロ抽出物には痕跡量の有機溶媒さえも存在しないので、従来の残留有機溶媒を含有するザクロ抽出物に比べて、経済的観点及び健康上の観点の両面から好都合である。
【００３１】
前記のザクロ抽出物は、同時継続欧州特許出願第ＥＰ０７００４７６５．９及び同第ＥＰ０８００４２４２．７号明細書に記載された方法により得ることができる。前記明細書に記載された方法は、４℃〜３０℃、好ましくは８℃〜２５℃の範囲内の温度及び３．５〜５．０の範囲内のｐＨ値において、全体ブレンド果実の抽出を水中で行う工程からなる。抽出はミル内で行い、前記抽出工程の時間は１５〜１５０分間の範囲内である。次いで、抽出混合物を処理して固形物を除去し、清澄な水溶液を得る。この清澄水溶液を非イオン性吸着樹脂が充填されたクロマトグラフカラムに装填する。クロマトグラフカラムに保持された生成物を塩基性溶液でｐＨ値を変え、そして生成物を脱イオン水で置換することにより溶離する。好ましくは、前記ｐＨ値の変化は、炭酸水素ナトリウム溶出緩衝液で行う。
【００３２】
吸着樹脂から溶離された液状生成物は好ましくは、ナノ濾過により濃縮し、そして、生成物が固形状になるまで水を除去する。この方法により、糖含量が極めて低い生成物を得ることができる。このような生成物は前記従来技術に関する説明で挙げたような文献には記載されていなかった。同時継続出願の前記欧州特許出願第０８００４２４２．７号明細書に開示された或る実施態様よれば、ザクロ抽出物は可溶性食物繊維（特に、燕麦及び大麦などのβグルカンを大量に含む可溶性食物繊維）の存在下で濃縮され、そして乾燥させる。このような可溶性食物繊維は担体として機能し、少なくとも３０％以上の量で配合することが好ましい。好ましくは、可溶性食物繊維のβグルカン含量（乾燥基準）は少なくとも３０％で、３０％〜６０％の範囲内が特に好ましい。この特徴に関する欧州特許出願第ＥＰ０８００４２４２．７号の優先権及び先願である欧州特許出願第ＥＰ０７００４７６５．９号に記載されていない特徴は本願により特許請求されている。
【００３３】
前記同時継続欧州特許出願第ＥＰ０７００４７６５．９号及び同欧州特許出願第第ＥＰ０８００４２４２．７号で論ぜられたような溶媒不含有天然ザクロ抽出物の製造方法は、簡単であり、効率的であり、しかも安価であり、溶媒可溶性エラグ酸よりもむしろ水溶性プニカラギンと、全形ザクロ果実内に存在し、抽出物の主要化合物の活性を高めるのに有用な様々な天然有機化合物類の広範なスペクトルとの両方を提供する。
【００３４】
本発明の一側面は、ザクロ抽出物に関し、更に、当該ザクロ抽出物を、可能であれば食品用等級の水溶性食物繊維と共に食品（飲料を含む）に添加することにより得られる栄養製品に関する。これらの製品は、ザクロ抽出物を栄養強化すべき食料品に添合し、混合することにより得られる。
【００３５】
本発明の別の側面は、心臓血管系疾患（ＣＶＤ）、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群からなる群から選択される一つ以上の症状の予防又は治療のために、栄養製品、機能性食品及び飲料を使用することに関する。
【００３６】
本発明を理解し易くするために、本発明の天然ザクロ抽出物の組成を下記の段落００３７に要約する。
【００３７】
本発明により得ることができる組成物は液状又は固形状のエラジタンニン含有製品であり、下記の特性を有することを特徴とする。
− プニカラギン含量（％ｗ／ｗとして）は３０％以上である。
− エラグ酸（遊離酸）含量（％ｗ／ｗとして）は５％以下である。
− 総フェノール含量（没食子酸当量の％ｗ／ｗとして）は２０％以上である。
− 水溶性（％ｗ／ｖとして）は３％以上、好ましくは７％以上、更に好ましくは１０％以上である。
− 残留有機溶媒含量は不検出であるか、又は存在していたとしても、１ｐｐｂ未満である（即ち、本発明のザクロ抽出物は有機溶媒を含有しない）。
− 総糖類含量が３％（ｗ／ｗ）以下、好ましくは１％（ｗ／ｗ）以下である。
− その他の加水分解性タンニン類の含量が８％（ｗ／ｗ）以上である。
− アントシアニン含量が０．３％（ｗ／ｗ）未満、好ましくは０．２％（ｗ／ｗ）以下である。
【００３８】
これらの組成において、プニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜３５／１の範囲内、好ましくは２０／１〜３５／１の範囲内であり、プニカラギン／果実糖類の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜５０／１の範囲内、好ましくは３０／１〜５０／１の範囲内である。実際、本発明のザクロ抽出物は糖類を殆ど含有せず（但し、元々の糖類が０．０６％だけ抽出物中に存在する）、かつ、アントシアニンも殆ど含有しない（但し、元々のアントシアニンが０．９６％だけ存在する）。総糖類含量については、ザクロジュースから由来する糖類であり、主に、グルコース及びフルクトースなどの“果糖類”を意味する。糖類の含量は例えば、高速液体クロマトグラフ（以下、「ＨＰＬＣ」と言う）により測定される。
【００３９】
ザクロ抽出物の代表的な組成及び１グラス（即ち、ザクロジュース（ＰＪ）１杯分又は２４０ｍＬ）と同等量のプニカラギンを服用するのに必要な関連ジュース組成を下記の表１に要約して示す。表中の第２縦欄は、ザクロジュース（ＰＪ）１杯（２４０ｍＬ）中に存在するプニカラギン量に対応する、プニカラギン３７４．６ｐｐｍをもたらすのに必要なザクロ抽出物の量の組成を示す。
【００４０】
表中の第３縦欄は、元々のザクロジュース（ＰＪ）に対する、ザクロ抽出物中に存在する各化合物の百分率（％）を示す。換言すれば、第３縦欄は、プニカラギンが１００％回収され、ジュース中に元々存在する糖類０．０６％がそのままザクロ抽出物中にも存在することを示す。前記のように、０．３％未満、通常は０．２％未満の元々のアントシアニンがザクロ抽出物中に存在する。ザクロジュースの平均組成のデータは本明細書の段落００２２に記載されている。
【００４１】
表１
PJ240mLと同等の 抽出物/ジュース
ザクロ抽出物の量 の相対的化合物
ザクロ抽出物 の組成 組成
化合物 含量, %(w/w) 含量, ppm 含量, %
アントシアアニン 0.05〜0.20 0.9 0.96
プニカラギン 30.0〜60.0 374.6 100
エラグ酸 0.5〜15.0 21.4 73.72
その他の加水分解 8.0〜15.0 107.0 106.95
性タンニン類
糖類 <3.0 20.0 0.06
有機溶媒 不検出 不検出 −−
【００４２】
前記の含量はザクロ抽出物サンプルを分析することにより得られた。アントシアニンは分光光度分析法により、プニカラギン、エラグ酸及びその他の加水分解性タンニン類はＨＰＬＣ法により、糖類はＨＰＬＣ法により、及び有機溶媒はガスクロマトグラフ法（ＧＣ）により測定した。
【００４３】
前記のように、前記の表１に示された比率に従うザクロ抽出物を使用することにより、食品の官能特性を危うくすることなく、食品（飲料を含む）を栄養強化することができ、しかも、同時に、栄養強化食品（すなわち、栄養製品）に、必要な健康上有用な効果を付与できる、という驚くべき事実が発見された。
【００４４】
この結果は別の点からも驚くべきものである。なぜなら、前記のように、抽出作業中にアントシアニンが失われるために、ザクロ抽出物中に存在するアントシアニンが極めて少ないからである。
【００４５】
従って、本発明による栄養製品において、プニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）は１０／１〜３５／１、好ましくは２０／１〜３５／１の範囲内であり、また、プニカラギン／添加ザクロ糖類の比率（ｗ／ｗ％）は１０／１〜５０／１、好ましくは３０／１〜５０／１の範囲内である。特に、抽出物中のプニカラギン対フルクトースの比率、なかんずく、本発明による食品類（例えば、最初からフルクトースを含まない食品類）中のプニカラギン対フルクトースの比率は２０／１〜１００／１の範囲内である。
【００４６】
更に別の有利な側面は、本発明のザクロ抽出物が食品用等級の水溶性食物繊維、特に燕麦及び大麦などの、βグルカンを多量に含む水溶性食物繊維と併用されることである。これらの水溶性食物繊維は、乾燥工程で使用される担体として機能することができ、あるいは、単に、他の添加担体無しに乾燥により得られるザクロ抽出物と混合され、そして、好ましい３０％以上の含量で提供される。好ましくは、水溶性食物繊維のβグルカン（乾燥基準）含量は３０％以上であり、更に好ましくは３０％〜６０％の範囲内である。
【００４７】
欧州特許出願第ＥＰ０７００４７６５．９号及び欧州特許出願第第ＥＰ０８００４２４２．７号による天然のザクロ抽出物を使用することにより、最終生成物中に有機溶媒が全く存在せず、同様に、特に、心臓血管系疾患（ＣＶＤ）、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防又は治療に使用するという観点から、その他のザクロ製品中に存在する糖類による高カロリー値が避けられる。
【００４８】
ザクロ抽出物（場合により水溶性食物繊維を併用）による栄養（又は栄養強化）食品（以下、「食品」という用語は「飲料」を含む）の製造方法は、ザクロ抽出物を、水溶性食物繊維と併用するか又は併用せずに、食品に添合し、そして混合し、いわゆる機能性又は機能性化栄養製品を得ることからなる。ザクロ抽出物の栄養製品への添加は、機能性化される各栄養製品を製造する技術的方法に従って混合及び均質化することにより得られる。
【００４９】
人間又は動物が消費するための固形食品の機能性化（即ち、栄養強化）は、当業者に公知の技術に従って、成分類がその他の成分類と予備混合されているか、又は水中に分散されているか否かに拘わらず、ザクロ抽出物の添合及び均質分散を促進するために、通常は、製造工程のできるだけ早期の段階で、ザクロ抽出物を水溶性食物繊維と共に又はザクロ抽出物のみを添加する工程からなる。
【００５０】
飲料の機能性化（栄養強化）は、ザクロ抽出物を水溶性食物繊維と共に又はザクロ抽出物のみを、飲料製造の技術的工程中に、添合し、溶解させる工程からなる。一般的な方法では、ザクロ抽出物粉末及び場合により、水溶性食物繊維及び更に親水性成分類などを所望の重量比で、飲料に添加し、そして、極めて厳格に制御された温度及び撹拌パラメータの下で、完全に溶解させる。この工程は、腐敗を避けるために、飲料が殺菌される前又は食用酸類及び／又は食品保存料が添加される前に行うことが好ましい。
【００５１】
本明細書において、「栄養製品」という用語は、或る量のザクロ抽出物を添合した人間又は動物類が消費するための全ての食品類（飲料、塩、砂糖及びシーズニングを含む）を意味する。
【００５２】
本発明による栄養製品、即ち、ザクロ抽出物を含む食品において、プニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）は１０／１〜３５／１、好ましくは２０／１〜３５／１の範囲内であり、また、プニカラギン／添加ザクロ糖類の比率（ｗ／ｗ％）は１０／１〜５０／１、好ましくは３０／１〜５０／１の範囲内である。本発明の栄養製品は好ましくは、プニカラギン含量が０．００５％（ｗ／ｗ）〜５％（ｗ／ｗ）と同等の、或る濃度の本発明のザクロ抽出物を含有する。更に詳細には、本発明の栄養製品は、消費者が毎日プニカラギンを少なくとも１０ｍｇ摂取する、上記に定義されたような或る量のザクロ抽出物を含有する。換言すれば、栄養製品は一杯分毎に少なくとも５ｍｇのプニカラギンを供給する。
【００５３】
本明細書において、「一杯分(serving)」という用語は、
- 一杯(helping)、即ち食事の一部として摂取する個別量の食品又は飲み物、又は
- 一食、即ち人間又は動物が食事中に食べるであろう食品又は飲み物の量
を意味する。
【００５４】
前記の説明は、例えば、食品のカロリー含量を評価する時に使用される標準的な意味であり、別名「公約数(Common Measure)」とも呼ばれる。「一杯分(serving)」又は「公約数(Common Measure)」のリストは、米国農務省、農業リサーチサービス(Agricultural Research Service)のウエブサイトから入手可能な例えば、「米国農務省国立栄養データベース標準リファレンス，リリース２０，栄養リスト(USDA National Nutrient Database for Standard Reference, Release 20, Nutrient List)」などで見つけ出すことができる。
【００５５】
好ましい範囲は、０．０１％（ｗ／ｗ）〜０．１％（ｗ／ｗ）の範囲内の栄養製品中のプニカラギン含量と同等のザクロ抽出物量からなる。
【００５６】
この添加量のザクロ抽出物を含有する栄養製品は、例えば、果実香料飲料、オレンジ香料飲料、レモンライム香料飲料、ルートビアー、コーラ、フルーツジュース、フルーツ含有飲料、野菜ジュース、野菜含有飲料、スポーツ飲料、エネルギー飲料、香料付き水、酪農成分含有飲料、ミルク、ミルクセーキ、発酵乳、香料付きミルクオルチャッタ、ビール、ビール風味スパークリング飲料、ワイン、ワイン風味飲料、コーヒー、コーヒー系飲料、紅茶、紅茶系飲料、インフュージョン、前記飲料類の技術的に改変された誘導体類又は前記の飲料類又は誘導体類の２種類以上の混合物などである。
【００５７】
別の好ましい範囲は、０．０２％（ｗ／ｗ）〜０．２０％（ｗ／ｗ）の範囲内のプニカラギン含量と同等のザクロ抽出物量からなる。この添加量のザクロ抽出物を含有する栄養製品は、例えば、
- ヨーグルト、アイスクリーム、チーズなどのような酪農製品、
- オリーブオイル（エキストラバージンオリーブオイル、バージンオリーブオイル、ランパンテオリーブオイル、精製オリーブオイル、粗製オリーブ搾り滓オイル、精製オリーブ搾り滓オイル）、ヒマワリ油、トウモロコシ油、大豆油、亜麻仁油、扁桃油、キャノーラ油、サフラワー油、パーム油、ココヤシ油、菜種油、藻類、オキアミ、大型ニシン、アンチョビ、マグロ（ツナ）などのような様々な原料から得られる植物油、魚介油又は魚油類、
- チキン、七面鳥、アヒル、ポーク、ビーフなどの肉類又はこれらから製造されたソーセージ、スモーク乾燥ミート又はコールドミート（例えば、生ハム、ボイルドハム、スモークドハム、サラミ、パテ、調理済みミート缶詰）などのような食肉製品又は鶏肉製品、
- パン、ベーグル、ビスケット、クッキー、ケーキ、パストリー、パイ、マカロニ、スパゲッティーなどのようなベーカリー製品又はパスタ系製品、
- トマト缶詰、アーティチョーク缶詰、パイナップル缶詰、ピーチ缶詰、ジャム、ママレード、ジェリー、ピクルスなどのような野菜又は果実コンサーブ類、
- エビ、ロブスター、イカ、カニ、イガイ、ザルガイ、マグロ（ツナ）、サーディンなどのようなシーフード缶詰又は魚類缶詰、
- アーモンド、ピーナッツ、ピスタッチオ、クルミ、ポップコーン、チョコレート、チューインガム、キャンディーなどのようなスナック又はスイーツ、
又は前記食品類の技術的に改変された誘導体類又はこれら食品類及び誘導体類の２種類以上の混合物類などである。
【００５８】
更に別の好ましい範囲は、０．０２５％（ｗ／ｗ）〜０．２５％（ｗ／ｗ）の範囲内のプニカラギン含量と同等のザクロ抽出物量からなる。この添加量のザクロ抽出物を含有する栄養製品は、例えば、生ペットフード缶詰、乾燥ペットフード、半生ペットフード、スナック、又は前記ペットフードの技術的に改変された誘導体類若しくは前記ペットフード及び誘導体類の２種類以上の混合物類などのようなペットフード類である。
【００５９】
食品の風味、香味及び一般的な官能特性は、本発明によるザクロ抽出物の添加により改変されない。
【００６０】
本発明によれば、ザクロ抽出物は０．５％〜５％（重量基準）の範囲内の量で塩に添加することもでき、また、０．２％〜２％（重量基準）の範囲内の量で砂糖に添加することもできる。本発明によるザクロ抽出物の低糖含量は、ザクロ抽出物をシーズニング（例えば、バルサミコ酢）、塩、砂糖及び甘味料（例えば、アスパルテーム）などに添加するために特に魅力的であり、これらの香味はザクロ抽出物により殆ど改変されない。
【００６１】
最後に、本発明の他の側面は、心臓血管系疾患（ＣＶＤ）、動脈内へのプラーク堆積、動脈性高血圧症及びメタボリック症候群の予防又は治療のために、水溶性食物繊維を併用した又は併用しないザクロ抽出物で機能性化された本発明の栄養製品を使用することに関する。水溶性食物繊維を併用した又は併用しないザクロ抽出物含有機能性食品又は飲料の摂取は、所定の養生法（好ましくは一日当たり２〜３杯分）に従うことが好ましい。また、慢性治療のように長期間に亘って摂取することが好ましく、可能であれば、消費者の人生を含めて１年間以上持続することが好ましい。
【００６２】
本発明によれば、水溶性食物繊維を併用した又は併用しない所定量の本発明のザクロ抽出物を含有する機能性栄養製品の推奨日用量は、消費者が所定の養生法に従って一日当たり２〜３杯分摂取した場合、所期の目的を達するために十分な量でなければならない。或る実施態様では、プニカラギンは機能性栄養製品中に、１杯分当たり５ｍｇ〜５０００ｍｇ、好ましくは１５ｍｇ〜５００ｍｇ、更に好ましくは４０ｍｇ〜２００ｍｇの範囲内の量で存在する。
【００６３】
本発明の別の好ましい実施態様によれば、栄養強化即ち機能性化栄養製品は前記ザクロ抽出物とヒドロキシチロソルを含有する。好ましくは、ヒドロキシチロソルは、本願と同じ出願人による同時継続欧州特許出願第ＥＰ−Ａ−０７００１７９１号明細書（出願日：２００７年１月２６日）及びＰＣＴ／ＩＢ２００８／０００１７３号明細書（出願日：２００８年１月２８日）に記載された抽出方法により得られる。
【実施例１】
【００６４】
ザクロ抽出物含有機能性オレンジジュースの製造
濃縮オレンジジュースに水及び水溶性成分を添加することにより製品を製造した。次いで、ザクロ抽出物を添加し、混合し、そして、得られた製品を低温殺菌し、均質化した。最後に、製品を冷却し、包装した。アスコルビン酸、クエン酸及び類似物などのようなその他の成分を使用する場合、同じ方法に従って製造した。
【００６５】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は２００ｍｇ／Ｋｇ〜１０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００６６】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，２００，４００，６００，８００及び１０００ｐｐｍ含有する６本のガラス瓶のオレンジジュースを前記のようにして調製した。オレンジジュースサンプル４０ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図１のプロットａ参照）、線形相関が得られた。具体的に、非機能性ジュースの抗酸化能力は１．３９ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比の機能性ジュースの抗酸化能力は３．１３ｍＭトロロックス当量／ｇであった。すなわち、抗酸化能力が２．３倍高められたジュースが得られたことを意味する。
【実施例２】
【００６７】
ザクロ抽出物含有機能性乳製品の製造
酸素の不存在下で、ザクロ抽出物を液体牛乳に添加した。その後、得られた乳製品をＵ．Ｈ．Ｔ．処理（１５０℃で４〜６秒間加熱）し、そして、最後に酸素の不存在下で包装した。
【００６８】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は２００ｍｇ／Ｋｇ〜１０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００６９】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，２００，４００，６００，８００及び１０００ｐｐｍ含有する６本のガラス瓶の牛乳を前記のようにして調製した。牛乳サンプル４０ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図１のプロットｂ参照）、線形相関が得られた。非機能性牛乳の抗酸化能力は０ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比の機能性牛乳の抗酸化能力は２．９７ｍＭトロロックス当量／ｇであった。
【実施例３】
【００７０】
ザクロ抽出物含有機能性ボイルドハムの製造
ザクロ抽出物を予め製造用成分類の混合物（塩、グルコースシロップ、砂糖、数種類の食品添加物類）と混合しておき、この混合物を塩水溶液に添合した。その直後に、塩水溶液はハムピースの孔内に押し込まれた。温度１０℃以下の減圧下で、このハムピースを何回か押し揉みした。次いで、このハムピースを４〜６℃の温度で少なくとも４８時間の間、液体に浸して柔らかくした。その後、このハムピースを再び押し揉みし、そして、モールド内に配置された調理用袋内に減圧下で充填包装した。その後、このハムピースを、その中心部の温度が６５℃に達するまで、スチームオーブン内で焼成した。その直後に、ボイルドハムピースを冷却し、そして、５℃で保存した。最後に、２４時間経過後に、モールド内から取り出した。
【００７１】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は４００ｍｇ／Ｋｇ〜４０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００７２】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，４００，１０００，２０００，３０００及び４０００ｐｐｍ含有する６個のボイルドハムを前記のようにして調製した。各ボイルドハムのサンプル３ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図２のプロットａ参照）、線形相関が得られた。具体的に、非機能性ボイルドハムの抗酸化能力は０．１１ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比のボイルドハムの抗酸化能力は９．９３ｍＭトロロックス当量／ｇであった。すなわち、抗酸化能力が９０．３倍高められたボイルドハムが得られたことを意味する。
【実施例４】
【００７３】
ザクロ抽出物含有ツナ缶詰の製造
公知技術に従って、成分類がその他の乾燥成分類と予備混合又は水中に分散されていようとなかろうと、ザクロ抽出物を製造工程の出来るだけ早期の段階で添加し、その添合及び均質分散を促進させた。
【００７４】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は４００ｍｇ／Ｋｇ〜４０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００７５】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，４００，１０００，２０００，３０００及び４０００ｐｐｍ含有する６個のツナ缶詰を前記のようにして調製した。各ツナ缶詰のサンプル３ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図２のプロットｂ参照）、線形相関が得られた。具体的に、非機能性ツナ缶詰の抗酸化能力は０ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比のツナ缶詰の抗酸化能力は５．５４ｍＭトロロックス当量／ｇであった。
【実施例５】
【００７６】
ザクロ抽出物含有機能性半生ドッグフードの製造
公知技術に従って、成分類がその他の乾燥成分類と予備混合又は水中に分散されていようとなかろうと、ザクロ抽出物を製造工程の出来るだけ早期の段階で添加し、その添合及び均質分散を促進させた。
【００７７】
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）の含量は４００ｍｇ／Ｋｇ〜５０００ｍｇ／Ｋｇの範囲内である。
【００７８】
抗酸化能力の測定は次のようにして行った。
ザクロ抽出物（当該ザクロ抽出物のプニカラギン含量は５０％ｗ／ｗである）をそれぞれ０，４３３，１０００，１６００，４０００及び５０００ｐｐｍ含有する６個の半生ドッグフードを前記のようにして調製した。各半生ドッグフードのサンプル３ｇを使用し、抗酸化能力（標準物質としてトロロックスを使用し、７３４ｎｍで測定されたラジカルＡＢＴＳ吸収能力）を測定し、かつ、ＨＰＬＣによりプニカラギン含量を測定した。測定結果を抗酸化能力対プニカラギン含量としてプロットした場合（図３参照）、線形相関が得られた。具体的に、非機能性半生ドッグフードの抗酸化能力は０．０２ｍＭトロロックス当量／ｇであったが、本実施例で使用された最高重量比の半生ドッグフードの抗酸化能力は６．９５ｍＭトロロックス当量／ｇであった。すなわち、抗酸化能力が３４７．５倍高められた半生ドッグフードが得られたことを意味する。
【実施例６】
【００７９】
心臓血管系疾患の予防又は治療におけるザクロ抽出物の使用
６．１ 動物
オスのスプラーグ・ドーリーラット４０匹（平均体重１５０〜１８０ｇ）をHarlan Interfauna Iberica SA社（スペインのバルセロナに所在）から購入し、全ての実験中、Murcia大学の動物実験施設内で飼育した。ラットを無作為に、各８匹毎の５個の実験群に割り振った。各群の４匹のラットをサブグループとして、照明（１２時間毎の日中／夜間サイクル）、温度（２２±２℃）及び湿度（６０％）の標準的条件下で飼育ケージに収容した。
【００８０】
６．２ 食餌
この実験に使用した食餌は次の通りであった。
・ 対照食餌（Ｃ）：固形の標準ラット食餌(Panlab社製)
・ アテローム性食餌（Ａ）：９５．５％標準ラット食餌(Panlab社製)に、アテローム性動脈硬化症を誘発させるためにコレステロール(Aldrich社製)１．５％及びラード３％を添加。
・ アテローム性食餌＋ザクロ抽出物（Ｐ）：９５．０％標準ラット食餌(Panlab社製)、コレステロール(Aldrich社製)１．５％、ラード３％及びザクロ抽出物０．５％（プニカラギン含量：５０％ｗ／ｗ）。
・ 標準ラット食餌＋強制経口投与（プニカラギン160mg/kg(体重））（Ｇ１６０）：標準ラット食餌(Panlab社製)の他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン１６０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させる。
【００８１】
飲料水と食餌は任意に摂取させた。しかし、全研究を通じて、各ラット毎の平均給餌量は１５ｇ／日（ラット毎の実際の食餌摂取量は不知）であった。更に、Ｇ１６０食餌を与えられているラット群に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン１６０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。脂肪の酸化を避けるために、アテローム性食餌（Ａ）及びアテローム性食餌＋ザクロ抽出物（Ｐ）は使用直前まで４℃の冷暗所に保存した。また、摂取されずに残った前日の食餌は廃棄した。本研究に使用したＰ及びＧ１６０食餌内のプニカラギン濃度はＨＰＬＣにより測定した。
【００８２】
１０．３ 実験計画
実験計画を下記の表２に示す。
【００８３】
表２
群 初日から ３１日目から 備考
３０日目まで ６０日目まで
１ 食餌Ｃ 食餌Ｃ
２ 食餌Ａ 食餌Ａ
３ 食餌Ａ 食餌Ｃ
４ 食餌Ｐ 食餌Ｐ
５ 食餌Ａ 標準食餌＋ Ｇ１６０ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン
１６０ｍｇを水に入れて、強制
経口投与により毎日服用させた。
【００８４】
ラット群ＣＣ、ＡＡ、ＡＣ、ＰＰ及びＡＧ１６０には次のようにして食餌を給餌した。ラット群ＣＣ、ＡＡ又はＰＰにはそれぞれ、食餌Ｃ、Ａ又はＰを２ヶ月間給餌し、ラット群ＡＣには、食餌Ａを１ヶ月間、続いて食餌Ｃを１ヶ月間給餌し、ラット群ＡＧ１６０には、標準ラット食餌(Panlab社製)を給餌した他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン１６０ｍｇを強制経口投与した。実験終了時点で、絶食ラットに麻酔をかけ、安楽死させた直後に心臓内穿刺を行い血液を試験管に捕集し、各試験管にクエン酸ナトリウム３．８％を添加した。分析のために血漿を遠心分離法により分離させた。
【００８５】
６．４ 血漿中の脂質の測定
総コレステロール（ＴＣ）、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）及びトリグリセリド（ＴＧ）の血漿濃度を、（スペインのバルセロナに所在する）Biosystems社から購入した市販のキットを使用し、製造者の取り扱い指示書に従って、比色定量分析法により測定した。
【００８６】
６．５ 統計分析
データは、平均値±平均値の標準誤差(S.E.M.)として表示され、かつ、一方向ANOVA（分散分析）により分析した。グループ間の差分はTukeyテスト（多重比較検定）により評価した。差分はＰ値が＜０．０５である場合に、有意と見做された。データはSigmaStatソフトウェア（バージョン２．０３）を用いて解析した。結果を図４に示す。
【００８７】
６．６ 考察
図４は、動脈硬化指数と、異なる食餌スキームに従って分類されたラットとの間の相関関係を示す。図４によれば、ＣＣ食餌（対照食餌を２ヶ月間給餌）で処理されたラット群１は最も低い動脈硬化指数を示すが、ＡＡ食餌（負対照のアテローム性食餌を２ヶ月間給餌）で処理されたラット群２は最も高い動脈硬化指数を示す。ラット群１とラット群２の間の動脈硬化指数差は、Ｐ値が＜０．００１なので、統計的に有意である。興味深い結果が、最初の１ヶ月間は食餌Ａが給餌され、次の１ヶ月間はＧ１６０食餌が給餌されたラット群５について示されている。ラット群５とラット群１との間には、動脈硬化指数の統計的有意差が認められなかった。換言すれば、ラット群５については、Ｇ１６０食餌で処理された１ヶ月間の後、動脈硬化指数が、ＣＣ食餌（対照食餌を２ヶ月間給餌）で得られるレベルに匹敵する値にまで顕著に低下することが認められた。これに対して、標準食餌だけを１ヶ月間与えられ、続いて、アテローム性食餌で１ヶ月間処理されたラット群３については同じ結果は認められなかった。この場合、（負対照ラット群２の動脈硬化指数と統計的有意差が存在したとしても）動脈硬化指数は、対照食餌を２ヶ月間給餌されたラット群（ラット群１）について検出された動脈硬化指数に対して、統計的有意差（Ｐ値＜０．０５）を生じた。
【００８８】
高コレステロール／トリグリセリドレベル、低ＨＤＬコレステロールレベル及び特に被酸化ＬＤＬは、動脈内のアテローム性プラーク堆積及びメタボリック症候群に付随するリスクファクター（危険因子）である。本発明者らは、ザクロ抽出物を含有する機能性栄養製品が心臓血管系発作に対するバイオマーカーを有していることの効果に関する研究及びザクロ抽出物を含有する機能性栄養製品を、ザクロ抽出物を有する類似の非機能性栄養製品と比較する研究を行った。測定された全てのパラメータを考慮すると（図４参照）、ザクロ抽出物を含有する栄養製品の規則的服用は心臓血管系を保護し、心臓血管系発作の発生を大なり小なり防止し、その結果、当該製品は健康増進栄養製品として申し分の無いものであるということが結論付けられる。
【００８９】
特に注目すべき事実は、脂肪及びコレステロールを多く含む食餌にザクロ抽出物を添加すると（ＰＰ，ラット群４）、標準食餌（ＣＣ，ラット群１）と比較した場合、統計的有意差の無い動脈硬化指数値を維持することができることである。
【実施例７】
【００９０】
高血圧症治療におけるザクロ抽出物の使用
７．１ 動物
オスのスプラーグ・ドーリーラット２４匹（試験開始時点の体重約２００ｇ）をHarlan Interfauna Iberica SA社（スペインのバルセロナに所在）から購入し、全ての実験中、Murcia大学の動物実験施設内で飼育した。ラットを無作為に、４個の実験群（各群当たりラット６匹）に割り振り、照明（１２時間の日中／夜間サイクル）、温度（２２±２℃）及び湿度（６０％）の標準的条件下で飼育ケージに収容した。
【００９１】
７．２ 食餌
順化及び試験期間中、ラットには固形のラット用標準食餌(Panlab社製)を給餌した。飲料水及び餌は自由に摂取させた。順化期間の７日間が経過した後、下記の実験計画に従って処置を開始した。
【００９２】
７．３ 実験計画
ザクロ抽出物の効果を測定するため、高血圧症モデルの誘発用としてＮ−ニトロ−Ｌ−アルギニン−メチルエステル(L-NAME)を使用した。順化期間経過後、L-NAME誘発高血圧症治療の開始前に、動脈血圧の基礎データ(D0)をLetica5002測定器で測定した。
【００９３】
ラットを下記の表３に示される実験計画に従って処置した。
【００９４】
表３
L-NAME＊
群 含有飲料水 強制経口投与 備考
１ 無し 無し
２ 40mgL-NAME/kg 無し
３ 40mgL-NAME/kg プニカラギン プニカラギンは水に添合
160mg／Kg（体重） して服用させた
４ 40mgL-NAME/kg カプトプリル 正対照：カプトプリル 100mg／Kg（体重） 100mg（水に溶解させた）
＊Ｌ−ＮＡＭＥ処置剤は、ラット１匹当たり２００ｇの体重を考慮し、そして、ラットへの平均一日給水量を４０ｍＬ／日に標準化して、自由に摂取できる飲料水摂取を通して全てのラット群に投与した。但し、ラット毎の実際の水摂取量は不知。
【００９５】
１１．４ 活性の実施計画（タイムテーブル）
ラットを習慣付けるために、順化期間中、Lectica5002測定器を用いて尻尾動脈の脈動を記録することにより動脈血圧の測定を行った。
【００９６】
試験測定／処置の実施計画を下記の表４に要約して示す。
【００９７】
表４
日数 動脈血圧の測定 L-NAME添加 強制経口投与
飲料水
０ 有り 有り 無し
１ 無し 有り 有り
２ 有り 有り 有り
３ 無し 有り 有り
４ 有り 有り 有り
５ 無し 有り 有り
６ 無し 有り 有り
７ 有り 有り 有り
【００９８】
７．４ 動脈血圧の測定
動脈血圧は前記のタイムテーブルに従って、尾カフ(tail-cuff)法により定期的に測定した。尾動脈の脈動を検出可能にするため、測定前にラットを３７℃で１０分間静置した。本研究で使用した測定器のLE5002(スペインのバルセロナに所在するLetica,Hospitalet社製)は正確なマイクロプロセッサプログラムと結合された高感度パルス変換器を有し、その結果、正確な動脈血圧の測定ができる。動脈血圧測定は、概日周期の如何なる影響も避けるために、一日の同じ時間に行った。
【００９９】
７．５ 統計分析
データは、平均値±平均値の標準誤差(S.E.M.)として表示され、かつ、SigmaStatソフトウェア（バージョン２．０３）を用いて解析した。結果を図５に示す。
【０１００】
７．６ 考察
動脈性高血圧症は動脈内のアテローム性プラーク堆積及びメタボリック症候群に付随するリスクファクター（危険因子）である。本発明者らは、ザクロ抽出物が動脈血圧に及ぼす効果について研究し、そして、その結果をザクロ抽出物による処置を受けなかった対照と比較した。抗高血圧作用を示すザクロ抽出物は、心臓血管系発作の発生を大なり小なり防止し、従って、健康を増進する栄養補助食品と見做すことができ、また、抗高血圧作用を有する機能性食品及び機能性飲料を製造するための有効な手段であると結論付けられる。
【実施例８】
【０１０１】
心臓血管系疾患の予防又は治療におけるザクロ抽出物及び水溶性食物繊維の使用
８．１ 動物
オスのスプラーグ・ドーリーラット７２匹（平均体重１５０〜１８０ｇ）をHarlan Interfauna Iberica SA社（スペインのバルセロナに所在）から購入し、全ての実験中、Murcia大学の動物実験施設内で飼育した。ラットを無作為に、各群８匹の９個の実験群に割り振った。各群の４匹のラットをサブグループとして、照明（１２時間毎の日中／夜間サイクル）、温度（２２±２℃）及び湿度（６０％）の標準的条件下で飼育ケージに収容した。
【０１０２】
８．２ 食餌
この実験に使用した食餌は次の通りであった。
・ 対照食餌（Ｃ）：固形の標準ラット食餌(Panlab社製)
・ アテローム性食餌（Ａ）：９５．５％標準ラット食餌(Panlab社製)に、アテローム性動脈硬化症を誘発させるためにコレステロール(Aldrich社製)１．５％及びラード３％を添加。
・ 標準食餌＋強制経口投与（プニカラギン40mg/kg（体重））（Ｇ４０）：標準ラット食餌(Panlab社製)の他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン１６０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。
・ 水溶性食物繊維食餌（Ｆ）：９５％標準ラット食餌(Panlab社製)と５％水溶性食物繊維
・ 水溶性食物繊維＋強制経口投与（プニカラギン40mg/kg（体重））（ＦＧ）：９５％標準ラット食餌(Panlab社製)と５％水溶性食物繊維の他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。
・ アテローム性食餌＋強制経口投与（プニカラギン40mg/kg（体重））（ＡＧ）：９５．５％標準ラット食餌(Panlab社製)、１．５％コレステロール(Aldrich社製)、３％ラードの他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。
・ アテローム性食餌＋水溶性食物繊維（ＡＦ）：９０．５％標準ラット食餌(Panlab社製)、アテローム性動脈硬化症を誘発させるための１．５％コレステロール(Aldrich社製)及び３％ラードと、５％水溶性食物繊維
・ アテローム性食餌＋水溶性食物繊維＋強制経口投与（プニカラギン40mg/kg（体重））（ＡＦＧ）：９０．５％標準ラット食餌(Panlab社製)、アテローム性動脈硬化症を誘発させるための１．５％コレステロール(Aldrich社製)及び３％ラードと、５％水溶性食物繊維の他に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。
【０１０３】
飲料水と食餌は任意に摂取させた。しかし、全研究を通じて、各ラット毎の平均給餌量は１５ｇ／日（ラット毎の実際の食餌摂取量は不知）であった。更に、Ｇ４０、ＦＧ、ＡＧ及びＡＦＧ食餌を与えられている各ラット群に、体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを水に入れて、強制経口投与により毎日服用させた。脂肪の酸化を避けるために、アテローム性食餌は使用直前まで４℃の冷暗所に保存した。また、摂取されずに残った前日の食餌は廃棄した。Ｇ４０、ＦＧ、ＡＧ及びＡＦＧ食餌内のプニカラギン濃度はＨＰＬＣにより測定した。
【０１０４】
８．３ 実験計画
実験計画を下記の表５に示す。
【０１０５】
表５
群 初日から ３１日目から 備考
３０日目まで ６０日目まで
１ 食餌Ｃ 食餌Ｃ
２ 食餌Ａ 食餌Ａ
３ 食餌Ａ 食餌Ｃ
４ 食餌Ａ 食餌Ｆ
５ 食餌Ａ 食餌Ｇ４０ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇ を水に入れて、強制経口投与により毎日 服用させた。
６ 食餌Ａ 食餌ＦＧ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇ を水に入れて、強制経口投与により毎日 服用させた。
７ 食餌ＡＦ 食餌ＡＦ
８ 食餌ＡＧ 食餌ＡＧ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇ を水に入れて、強制経口投与により毎日 服用させた。
９ 食餌ＡＦＧ 食餌ＡＦＧ 体重１Ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇ を水に入れて、強制経口投与により毎日 服用させた。
【０１０６】
ラット群１、２、７、８及び９のそれぞれには、２ヶ月間食餌Ｃ、Ａ、ＡＦ、ＡＧ又はＡＦＧを給餌した。ラット群３、４、５及び６のそれぞれには、最初の１ヶ月間は食餌Ａを給餌し、次の１ヶ月間は食餌Ｃ、Ｆ、Ｇ４０又はＦＧを給餌した。実験終了時点で、絶食ラットに麻酔をかけ、安楽死させた直後に心臓内穿刺を行い血液を試験管に捕集した。分析のために血清を遠心分離法により分離させた。
【０１０７】
８．４ 統計分析
データは、平均値±平均値の標準誤差(S.E.M.)として表示され、かつ、一方向ANOVA（分散分析）により解析した。グループ間の差分はTukeyテスト（多重比較検定）により評価した。差分はＰ値が＜０．０５である場合に、有意と見做された。データはSigmaStatソフトウェア（バージョン２．０３）を用いて解析した。
【０１０８】
ラットの体重に関するデータは、平均値±平均値の標準誤差(S.E.M.)として表示される。また、データはSigmaStatソフトウェア（バージョン２．０３）を用いて解析した。
【０１０９】
８．５ 考察
得られた結果を図６に示す。動脈硬化指数は前記のように表５に示される各ラット群と相関されている。
【０１１０】
図６は、動脈硬化指数と、異なる食餌スキームにより分類されたラットとの間の相関関係を示す。ＣＣ食餌（対照食餌を２ヶ月間）で処理されたラット群１は最低動脈硬化指数を示すが、ＡＡ食餌（アテローム性食餌（負対照）を２ヶ月間）で処理されたラット群２は最高動脈硬化指数を示す。Ｐ値＜０．００１なので、ラット群１とラット群２との間には動脈硬化指数の統計的有意差が存在する。興味深い結果が、最初の１ヶ月間は食餌Ａで処理され、次の１ヶ月間は食餌ＦＧで処理されたラット群６について示されている。ラット群６とラット群１との間の動脈硬化指数の統計的有意差は認められなかった。換言すれば、ラット群６については、食餌ＦＧで１ヶ月間処理した後、食餌ＣＣ（対照食餌を２ヶ月間）で得られるレベルに匹敵する値に対して、その動脈硬化指数値が顕著に低下（食餌Ａ−Ｃで処理されたラット群３について得られた平均値よりも３０．２％低下）することが認められた。これに対して、アテローム性食餌で１ヶ月間処理した後、次の１ヶ月間は標準食餌の他に水溶性食物繊維（食餌Ｆ）だけで処理したラット群４又は次の１ヶ月間は標準食餌の他に体重１ｋｇ当たりプニカラギン４０ｍｇを強制経口投与したラット群５については同じ効果が認められなかった。この場合、（負対照ラット群２の動脈硬化指数と統計的有意差が存在したとしても）動脈硬化指数は、対照食餌を２ヶ月間給餌されたラット群（ラット群１）について検出された動脈硬化指数に対して、統計的有意差（Ｐ値＜０．０５）を生じた。驚くべきことに、食餌Ａ−Ｃで処理されたラット群３について得られた平均値を越える動脈硬化指数値の低下率は、ラット群４の場合、６．９％、ラット群５の場合、１７．２％であった。この事実は、ラット群６について得られた３０．２％の低下率と比較した場合、３０．２％は驚くべき数値であり、水溶性食物繊維と本発明のザクロ果実抽出物との併用による相乗効果であることを示唆する。
【０１１１】
別の興味深い結果は、本実験において食餌ＡＦＧで処理されたラット群９について示されている。ラット群９とラット群１との間の動脈硬化指数の統計的有意差は認められなかった。換言すれば、水溶性食物繊維とプニカラギン高含有ザクロ果実抽出物の強制経口投与が追加されたアテローム性食餌で２ヶ月間処理した後、食餌ＡＦＧ−ＡＦＧが給餌されたラット群９については、対照食餌により得られるレベルに匹敵する値と変わらない動脈硬化指数値が認められた。これに対して、２ヶ月間の実験期間中、食餌ＡＦ又はＡＧだけが給餌されたラット群７（食餌ＡＦ−ＡＦ）及びラット群８（食餌ＡＧ−ＡＧ）については同じ効果は認められなかった。この場合、（負対照ラット群２の動脈硬化指数と統計的有意差が存在したとしても）動脈硬化指数値は、対照食餌を２ヶ月間給餌されたラット群（ラット群１）について検出された動脈硬化指数値に対して、統計的有意差（Ｐ値＜０．０５）を生じた。ラット群９から得られた動脈硬化指数値は、本発明により得られたプニカラギン高含有ザクロ果実抽出物による予防効果を示唆し、また、水溶性食物繊維と本発明によるザクロ果実抽出物との併用による効果の改善を示唆する。
【実施例９】
【０１１２】
肥満はメタボリック症候群に付随するリスクファクター（危険因子）であり、メタボリック症候群を有する人々は心臓血管系疾患の高いリスクを有する。本発明者らは、ラットの体重（ＢＷ）に対する水溶性食物繊維とザクロ抽出物の併用効果を研究し、そして、この効果を、水溶性食物繊維と本発明によるザクロ果実抽出物を併用せずに処置した対照群と比較した。
【０１１３】
図７は、異なる食餌スキームにより分類され、そして前記実施例８の表５に示された実験計画に従って給餌飼育された、実施例８で使用されたラットと同じラットの体重と実験期間との間の相関関係を示す。
【０１１４】
図７によれば、２ヶ月間の実験期間終了後、食餌ＣＣ（対照食餌）で処理されたラット群１は最低体重を示すが、食餌ＡＡ（負対照のアテローム性食餌）で処理されたラット群２は最高体重を示す。総コレステロール（ＴＣ）、ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）及びトリグリセリドの血漿濃度について得られるデータの正しい解釈に悪影響を及ぼすであろうラットの肥満を避けるために、アテローム性食餌及び総実験期間を選択した。
【０１１５】
実験期間中、食餌ＡＦＧで処理されたラット群９のラットについて興味深い結果が示された。２ヶ月間の実験期間中、ラット群９及びラット群１の間で、ラットの体重の類似的傾向が認められた。換言すれば、水溶性食物繊維とプニカラギン高含有ザクロ果実抽出物の強制経口投与が追加されたアテローム性食餌で２ヶ月間処理した後、食餌ＡＦＧ−ＡＦＧが給餌されたラット群９について、対照食餌により得られた値に匹敵するラット体重が認められた。これに対して、２ヶ月間の実験期間中、食餌ＡＦ又は食餌食餌ＡＧだけが給餌された各ラット群７及びラット群８については同じ効果は認められなかった。この場合、ラット群７及びラット群８のラット体重傾向が発現し、最高体重傾向のラット群２と最低体重傾向のラット群１との間の位置に入る。ラット群９により示される体重傾向は、本発明によるザクロ果実抽出物と水溶性食物繊維との併用による過体重／肥満予防効果を示唆する。
【０１１６】
全ての測定パラメータを考慮すれば、本発明によるザクロ果実抽出物と水溶性食物繊維との併用物の規則的服用は心臓血管系を保護し、大なり小なり、動脈内におけるアテローム性プラークの堆積及びメタボリック症候群に付随すると考えられる幾つかのリスクの発現を防止するものと結論付けることができる。従って、機能性食品及び栄養補助食品の製造に使用すべき、健康促進天然抽出物であると十分に考えられる。
【０１１７】
以上の説明は、本発明の一実施例に関するもので、この技術分野の当業者であれば、本発明の種々の変形例を考え得るが、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。特許請求の範囲の構成要素の後に記載した括弧内の番号は、図面の部品番号に対応し、発明の容易なる理解の為に付したものであり、発明を限定的に解釈するために用いてはならない。また、同一番号でも明細書と特許請求の範囲の部品名は必ずしも同一ではない。これは上記した理由による。用語「又は」に関して、例えば「Ａ又はＢ」は、「Ａのみ」、「Ｂのみ」ならず、「ＡとＢの両方」を選択することも含む。特に記載のない限り、装置又は手段の数は、単数か複数かを問わない。
【符号の説明】
【０１１８】
図１ 縦軸：抗酸化能力，ｍＭトロロックス当量／ｇ（オレンジジュース又は牛乳）
横軸：（プニカラギン）ｇ／Ｋｇ （オレンジジュース又は牛乳）
プロットaはオレンジジュース、プロットｂは牛乳
図２ 縦軸：抗酸化能力，ｍＭトロロックス当量／ｇ（ボイルドハム又はツナ缶詰）
横軸：（プニカラギン）ｇ／Ｋｇ （オレンジジュース又はツナ缶詰）
プロットaはボイルドハム、プロットｂはツナ缶詰
図３ 縦軸：抗酸化能力，ｍＭトロロックス当量／ｇ（ドッグフード）
横軸：（プニカラギン）ｇ／Ｋｇ （ドッグフード）
図４ 縦軸：動脈硬化指数（総コレステロール値／ＨＤＬコレステロール値）
横軸：ラット群１ ラット群２ ラット群３ ラット群４ ラット群５
＊Turkeyテストにより評価した対照ラット群１との有意差（Ｐ＜０．０５）を示す
＊＊Turkeyテストにより評価した対照ラット群１との有意差（Ｐ＜０．００１）を示す
図５ 縦軸：収縮期血圧（ｍｍＨｇ）
横軸：ラット群１ ラット群２ ラット群３ ラット群４
図６ 縦軸：動脈硬化指数（総コレステロール値／ＨＤＬコレステロール値）
横軸：ラット群１ ラット群２ ラット群３ ラット群４ ラット群５ ラット群６ ラット群７ ラット群８ ラット群９
＊Turkeyテストにより評価した対照ラット群１との有意差（Ｐ＜０．０５）を示す
＊＊Turkeyテストにより評価した対照ラット群１との有意差（Ｐ＜０．００１）を示す
図７ 縦軸：体重(BW)（ｇ）
横軸：日数
（枠内、上から）：ラット群１，ラット群２，ラット群７，ラット群９，ラット群８
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プニカラギン、エラグ酸及び糖類を含有するザクロ抽出物であって、
プニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜３５／１の範囲内であり、プニカラギン／糖類の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜５０／１の範囲内であり、総糖類含量が３％（ｗ／ｗ）以下であり、更に、総フェノール類含量が少なくとも２０％（ｗ／ｗ）（没食子酸当量として表示される）で、水溶性が少なくとも３％ｗ／ｖ（３０ｇ／リットル）であることを特徴とするザクロ抽出物。
【請求項２】
プニカラギン含量が少なくとも３０％（ｗ／ｗ）であり、エラグ酸含量が２％（ｗ／ｗ）以下であり、総フェノール類含量が少なくとも３０％（ｗ／ｗ）（没食子酸当量として表示される）であり、水溶性が少なくとも７％ｗ／ｖ（７０ｇ／リットル）であり、総糖類含量が２％（ｗ／ｗ）以下であり、かつ、残留有機溶媒含量が１ｐｐｂ未満である請求項１記載のザクロ抽出物。
【請求項３】
水溶性が少なくとも１０％ｗ／ｖ（１００ｇ／リットル）であり、総糖類含量が１％（ｗ／ｗ）以下である請求項２記載のザクロ抽出物。
【請求項４】
βグルカン（乾燥基準）含量が少なくとも３０％の水溶性食物繊維を含有する請求項１〜３の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項５】
前記水溶性食物繊維は、オート麦βグルカンリッチ水溶性食物繊維、大麦βグルカンリッチ水溶性食物繊維及びこれらの混合物からなる群から選択される請求項４記載のザクロ抽出物。
【請求項６】
請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物からなる機能性食品又は機能性飲料である栄養製品であって、前記製品におけるプニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜３５／１の範囲内であることを特徴とする栄養製品。
【請求項７】
プニカラギン／添加ザクロ糖類の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜５０／１の範囲内である請求項６記載の栄養製品。
【請求項８】
フルクトースを含有し、前記栄養製品中のプニカラギン／フルクトースの比率（ｗ／ｗ％）が６０／１〜１００／１の範囲内である請求項６又は７記載の栄養製品。
【請求項９】
水溶性食物繊維を含有する請求項６〜８の何れかに記載の機能性栄養製品。
【請求項１０】
プニカラギン含量が０．００５％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗの範囲内であることを特徴とする請求項６〜８の何れかに記載の機能性栄養製品。
【請求項１１】
ヒドロキシチロソルを更に含有する請求項６〜１０の何れかに記載の機能性栄養製品。
【請求項１２】
前記製品は、飲み物、飲料、酪農製品、植物油、海産食用油、魚介食用油、肉製品、鶏肉製品、ベーカリー製品、パスタ系製品、野菜コンサーブ、果実コンサーブ、シーフード缶詰、魚類缶詰、スナック、スゥイーツ、塩、砂糖、シーズニング及びこれらの２種類以上の組合せからなる群から選択される請求項６〜１１の何れかに記載の栄養製品。
【請求項１３】
ペット用又は動物用機能性食品である請求項６〜１２の何れかに記載の栄養製品。
【請求項１４】
製品当たり少なくとも５ｍｇのプニカラギンを含有する請求項６〜１３の何れかに記載の栄養製品の製造方法であって、前記栄養製品の製造過程で、請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物を添加することからなる栄養製品の製造方法。
【請求項１５】
請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物を含有する栄養補助食品。
【請求項１６】
心臓血管系疾患、動脈性高血圧症、動脈内へのプラーク堆積及びメタボリック症候群からなる群から選択される１つ以上の症状の予防又は治療に使用される請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項１７】
食品及び飲料の脂質酸化を防止又は阻止するための食品添加物として使用される請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項１８】
黴、細菌及びその他の微生物による食品及び飲料の腐敗を防止又は阻止するための食品添加物として使用される請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項１９】
心臓血管系疾患、動脈性高血圧症、動脈内へのプラーク堆積及びメタボリック症候群の予防又は治療に使用される請求項６〜１３の何れかに記載の栄養製品。
【請求項２０】
心臓血管系疾患、動脈性高血圧症、動脈内へのプラーク堆積及びメタボリック症候群の予防又は治療用の薬剤及び／又は組成物の製造に使用される請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項２１】
心臓血管系疾患、動脈性高血圧症、動脈内へのプラーク堆積及びメタボリック症候群の予防又は治療用の薬剤及び／又は組成物の製造に使用される請求項６〜１３の何れかに記載の栄養製品。
【請求項１】
プニカラギン、エラグ酸及び糖類を含有するザクロ抽出物であって、
プニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜３５／１の範囲内であり、プニカラギン／糖類の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜５０／１の範囲内であり、総糖類含量が３％（ｗ／ｗ）以下であり、更に、総フェノール類含量が少なくとも２０％（ｗ／ｗ）（没食子酸当量として表示される）で、水溶性が少なくとも３％ｗ／ｖ（３０ｇ／リットル）であることを特徴とするザクロ抽出物。
【請求項２】
プニカラギン含量が少なくとも３０％（ｗ／ｗ）であり、エラグ酸含量が２％（ｗ／ｗ）以下であり、総フェノール類含量が少なくとも３０％（ｗ／ｗ）（没食子酸当量として表示される）であり、水溶性が少なくとも７％ｗ／ｖ（７０ｇ／リットル）であり、総糖類含量が２％（ｗ／ｗ）以下であり、かつ、残留有機溶媒含量が１ｐｐｂ未満である請求項１記載のザクロ抽出物。
【請求項３】
水溶性が少なくとも１０％ｗ／ｖ（１００ｇ／リットル）であり、総糖類含量が１％（ｗ／ｗ）以下である請求項２記載のザクロ抽出物。
【請求項４】
βグルカン（乾燥基準）含量が少なくとも３０％の水溶性食物繊維を含有する請求項１〜３の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項５】
前記水溶性食物繊維は、オート麦βグルカンリッチ水溶性食物繊維、大麦βグルカンリッチ水溶性食物繊維及びこれらの混合物からなる群から選択される請求項４記載のザクロ抽出物。
【請求項６】
請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物からなる機能性食品又は機能性飲料である栄養製品であって、前記製品におけるプニカラギン／エラグ酸の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜３５／１の範囲内であることを特徴とする栄養製品。
【請求項７】
プニカラギン／添加ザクロ糖類の比率（ｗ／ｗ％）が１０／１〜５０／１の範囲内である請求項６記載の栄養製品。
【請求項８】
フルクトースを含有し、前記栄養製品中のプニカラギン／フルクトースの比率（ｗ／ｗ％）が６０／１〜１００／１の範囲内である請求項６又は７記載の栄養製品。
【請求項９】
水溶性食物繊維を含有する請求項６〜８の何れかに記載の機能性栄養製品。
【請求項１０】
プニカラギン含量が０．００５％ｗ／ｗ〜５％ｗ／ｗの範囲内であることを特徴とする請求項６〜８の何れかに記載の機能性栄養製品。
【請求項１１】
ヒドロキシチロソルを更に含有する請求項６〜１０の何れかに記載の機能性栄養製品。
【請求項１２】
前記製品は、飲み物、飲料、酪農製品、植物油、海産食用油、魚介食用油、肉製品、鶏肉製品、ベーカリー製品、パスタ系製品、野菜コンサーブ、果実コンサーブ、シーフード缶詰、魚類缶詰、スナック、スゥイーツ、塩、砂糖、シーズニング及びこれらの２種類以上の組合せからなる群から選択される請求項６〜１１の何れかに記載の栄養製品。
【請求項１３】
ペット用又は動物用機能性食品である請求項６〜１２の何れかに記載の栄養製品。
【請求項１４】
製品当たり少なくとも５ｍｇのプニカラギンを含有する請求項６〜１３の何れかに記載の栄養製品の製造方法であって、前記栄養製品の製造過程で、請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物を添加することからなる栄養製品の製造方法。
【請求項１５】
請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物を含有する栄養補助食品。
【請求項１６】
心臓血管系疾患、動脈性高血圧症、動脈内へのプラーク堆積及びメタボリック症候群からなる群から選択される１つ以上の症状の予防又は治療に使用される請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項１７】
食品及び飲料の脂質酸化を防止又は阻止するための食品添加物として使用される請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項１８】
黴、細菌及びその他の微生物による食品及び飲料の腐敗を防止又は阻止するための食品添加物として使用される請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項１９】
心臓血管系疾患、動脈性高血圧症、動脈内へのプラーク堆積及びメタボリック症候群の予防又は治療に使用される請求項６〜１３の何れかに記載の栄養製品。
【請求項２０】
心臓血管系疾患、動脈性高血圧症、動脈内へのプラーク堆積及びメタボリック症候群の予防又は治療用の薬剤及び／又は組成物の製造に使用される請求項１〜５の何れかに記載のザクロ抽出物。
【請求項２１】
心臓血管系疾患、動脈性高血圧症、動脈内へのプラーク堆積及びメタボリック症候群の予防又は治療用の薬剤及び／又は組成物の製造に使用される請求項６〜１３の何れかに記載の栄養製品。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【公表番号】特表２０１０−５３９０７７（Ｐ２０１０−５３９０７７Ａ）
【公表日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２３６０２（Ｐ２０１０−５２３６０２）
【出願日】平成２０年９月５日（２００８．９．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００２３１６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３１０２３
【国際公開日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【出願人】（５０９２１１０２２）プロベルテ ファーマ，エス．エー． (5)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年１２月１６日（２０１０．１２．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年９月５日（２００８．９．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＩＢ２００８／００２３１６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０３１０２３
【国際公開日】平成２１年３月１２日（２００９．３．１２）
【出願人】（５０９２１１０２２）プロベルテ ファーマ，エス．エー． (5)
【Ｆターム（参考）】
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