全血または血液製剤から白血球を分離するためのフィルター、前記フィルターの作製方法、対応する装置およびその使用
本発明は、疎水性支持材料とポリマー系コーティング材料を含む全血から白血球を分離するためのフィルターであって、そのフィルターの表面が５０〜８０ダイン／ｃｍの範囲の限界表面ぬれ張力を有し、ポリマー系コーティング材料が、疎水性モノマーと親水性モノマーを含む混合物の重合反応によって得られるフィルターに関する。本発明はさらに、前記フィルターの作製方法および全血から白血球を分離するための装置、およびそのフィルターの使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全血および／または血液製剤から白血球を分離するためのフィルター、そのフィルターの作製方法および前記フィルターを含む装置に関する。さらに、本発明は、全血および／または血液製剤から白血球を分離するためのそのフィルターの使用に関する。
【０００２】
ある種の疾患の患者を治療するために、患者に投与する血液成分の濃縮物の使用が行われている。血液成分濃縮物は、密度遠心分離に全血をかけることによって得ることができる。白血球が患者の中で免疫反応を引き起こすことがあるので、この濃縮物では、白血球の濃度をできるだけ低くしなければならない。この理由のため、血液製剤から白血球を除去する試みがなされている。
【背景技術】
【０００３】
血液製剤から白血球を分離するためのフィルターは従来技術である。例えば、米国特許第４８８０５４８号、同５４４５７３６号および同５５８０４６５号は血小板（ＰＬＴ）の濃縮物から白血球（ＷＢＣ）を分離することができるフィルターを記載している。しかし、フィルター材料と接触して赤血球（ＲＣ）が改変されるので、そうしたフィルターは全血から白血球を分離するのには適していない。
【０００４】
全血からの白血球の分離は米国特許第５８９５５７５号に記載されている。フィルター材料に、水に溶解性の親水性多糖類がそれに塗布された疎水性支持材料、例えばポリエチレンテレフタレートの繊維不織布を組み込んでいる。ここでの問題は、全血からの白血球の分離度が比較的低いことである。米国特許第４８８０５４８号に記載のフィルターと比べて、多糖類でコーティングされたフィルターは、血液製剤から分離される白血球が遥かに少ない。この分離はニトロセルロースフィルターによって改善することができるが、このようなシステムは購入して使用するのには高価である。さらに、コーティング材料の水への溶解性が問題である。全血は大量の水を含むので、コーティング材料がウォッシュアウトされることがある。しかし、結果として、血小板すなわちプラツロサイト（ｐｌａｔｕｌｏｃｙｔｅ）はフィルター材料上に保持される。ここで特に問題なのはこの損失が連続的に起こることである。その溶解性を低下させることを意図した架橋反応が米国特許第５８９５５７５号に記載されているが、そうした架橋は別の問題を引き起こす。特に、架橋剤の残分が血液循環系に達することがある。さらに、非常に強力な架橋によってフィルターの透過性が低下する結果となることがある。しかし、架橋が弱すぎると、そのウォッシュアウトを完全に阻止することはできない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の１つの目的は、白血球を極めて効率的に保持するが、詰りをできるだけ少なくして血小板および赤血球を通過させることができる、全血および／または血液製剤から白血球を分離するためのフィルターを提供することにある。
【０００６】
本発明の他の目的は、高い耐久性を示すフィルターを提供することにある。特に、フィルターは、長期間使用した後でも、血小板の透過性を保持しなければならない。
【０００７】
本発明の他の目的は、製造するのに簡単で安価なフィルターを入手できるようにすることである。特に、医療用の要件に適合するように、使用した材料を問題なく清浄化できなければならない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記の目的、ならびに具体的には述べなかったがここで考察した文脈から導かれる、あるいは、それらから必然的にもたらされる他の目的は請求項１の特徴で達成される。本発明によるフィルターの適当な変更形態は、請求項１に従属する従属請求項の目的を構成する。
【０００９】
従属請求項１７、２０および２２は、そのフィルターを作製するための方法および全血から白血球を分離するための装置、およびそのフィルターの使用に関する。
【００１０】
疎水性支持材料およびポリマー系コーティング材料（ポリマー系コーティング材料は疎水性モノマーと親水性モノマーを含む混合物の重合反応（ｐｏｌｙｒｅａｃｔｉｏｎ）で得ることができる）を含むフィルターの表面は、５０〜８０ダイン／ｃｍの範囲の限界表面ぬれ張力も示すので、著しく高い白血球保持能力を有する、全血からの白血球の分離用フィルターを得ることができる。
【００１１】
本発明の手段をとることによって具体的には以下の利点が実現される。
【００１２】
・ 本発明によるフィルターは高い血小板および赤血球の透過性を示す。
【００１３】
・ 本発明によるフィルターは長期の耐久性を示し、特に血小板の透過性は長期使用で高く保持される。本発明によるフィルターは非常に低いウォッシュアウト性を示す。
【００１４】
・ フィルターは安価に作製することができ、使用する材料を簡単に清浄化することができるので、医療用の要件に適合する。
【００１５】
・ フィルターは優れた伝導性（ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ）を示す。例えば、本発明によるフィルターは、著しく高い血小板の透過性および血小板に対する低い保持能力を有する、白血球の高度の分離によって特徴付けられる。さらに、本発明によるフィルターは比較的速い流速で操作することができる。さらに、あるフィルター効率を達成するのに、フィルター材料用として比較的少ない材料しか必要としない。
【００１６】
本発明によるフィルターは疎水性支持材料を含む。そうした材料は当分野の技術者に周知であり、特に、サイズの差によって粒子を分離できる膜および繊維不織布などの平らな構造のものである。疎水性という用語は、支持材料が水に不溶性であり、水への溶解度が２０℃で０．１ｇ／ｌ以下であることを意味する。
【００１７】
膜は、とりわけ、ポリカーボネート、アクリルポリマー、ポリ塩化ビニル、ポリアミドおよびニトロセルロースから作製することができる。これらの膜の細孔径は、なんら制限するものではないが、好ましくは２〜２０μｍの範囲である。
【００１８】
理想的な繊維不織布は、とりわけ、ポリエステル、セルロース、ポリアミドおよびポリプロピレンから得ることができる。これらの材料のうちポリエステル、例えばポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）およびポリトリメチレンテレフタレート（ＰＴＴ）が特に好ましい。このような不織布は、０．５〜８μｍ、特に１〜４μｍ、特に好ましくは１．８〜３μｍの範囲の直径を有する繊維で作製することが好ましい。この場合、その結晶化度が少なくとも５０％、特に少なくとも８０％である結晶性繊維が特に好ましい。結晶化度の値はＸ線回折で測定することができる。
【００１９】
繊維不織布の表面密度は、なんら制限するものではないが、一般には１０〜２００ｇ／ｍ2、特に１５〜１００ｇ／ｍ2、特に好ましくは２０〜６０ｇ／ｍ2の範囲である。表面密度は、例えばＩＳＯ９０７３−１：１９８９およびＥＤＡＮＡ ＥＲＴ４０．９−９０によって測定することができる。不織布の厚さは広い範囲であってよく、コーティング前で好ましくは約０．１〜１．３ｍｍ、好ましくは０．３〜０．７、特に好ましくは０．４〜０．６ｍｍである。これらの値はＩＳＯ９０７３−１：１９９７−２によって測定される。この場合測定された表面積は０．５ｋＰａで２５ｃｍ2である。繊維不織布の好ましい密度は０．０５〜０．５０ｇ／ｃｍ3、特に０．１５〜０．３０ｇ／ｃｍ3の範囲である。
【００２０】
さらに、本発明によるフィルターは支持材料に塗布されるポリマー系コーティング材料を組み込む。
【００２１】
疎水性支持材料をポリマー系コーティング材料でコーティングした後で、フィルターは５０〜８０ダイン／ｃｍ、特に５５〜７２ダイン／ｃｍ、好ましくは５５〜６９ダイン／ｃｍの範囲の限界表面ぬれ張力を示す。この値は米国特許第５４４５７３６号および同４８８０５４８号に記載されている方法によって測定することができる。
【００２２】
このような表面ぬれ張力を実現するために、ポリマー系コーティング剤は親水性基を組み込む。その基はｐＨ７．０で水の中でイオン的に荷電されている基が好ましい。これらの基には、とりわけ、ｐＨ７．０で水の中でイオン的に荷電されている、例えばスルホン酸、ホスホン酸およびカルボキシ基が含まれる。所要の表面ぬれ張力を達成するために、上記の条件下で、カチオンに荷電された基も存在することができる。これらのカチオン性基には、特に、アミノ、Ｎ−ピロリドンおよびグアニジノ基が含まれる。さらに、ポリマーは、ポリエチレングリコールユニットなどの中性、極性基を組み込むこともできる。
【００２３】
したがって、例えば親水性モノマーと疎水性モノマーを用いる重合反応によって、ポリマー系コーティング剤を得ることができる。疎水性と親水性という用語は、一般に当技術分野で知られており、モノマーから得られたポリマーの水に対する湿潤性に関する。水に対する湿潤性は、重合反応後にポリマー中に存在する極性基によって増大する。したがって、モノマーが極性基、例えばヒドロキシル、エーテル、カルボキシル、カルボキシレート、アミド、アミン、ピロリジン、ピロリドン、ラクタム、スルフォナート、ホスホナートまたはグアニジン基、および比較的低い割合の無極性基、特に炭化水素基を含む場合、モノマーは親水性である。多くのモノマーの親水性は、例えばホモポリマーの溶解性から決定することができる。ポリマーを作製するために異なるモノマーを必要とする場合、例えば多くのポリエステルの場合、モノマーの親水性は、そのモノマーに加えて、エチレン基を有する適切な第２のモノマーも組み込んだポリマーの溶解性から決定される。テレフタル酸の親水性を決定するために、テレフタル酸を例えばグリコールで転換させる。親水性はＰＥＴの溶解性から得られる。
【００２４】
一般にモノマーは、そのホモポリマーまたは先に開示したポリマーの溶解性が１ｇ／ｌ以上、特に５ｇ／ｌ、特に好ましくは１０ｇ／ｌ以上である場合、親水性である。
【００２５】
一般にモノマーは、そのホモポリマーまたは先に開示したポリマーの溶解性が１ｇ／ｌ未満、特に０．５ｇ／ｌ以下、特に好ましくは０．１ｇ／ｌ以下である場合、疎水性である。
【００２６】
ポリマーの溶解性は分子量によって影響されることは当分野の技術者に周知である。先に開示した溶解度の値は２００，０００ｇ／モルの分子量の重量平均について適用することができる。この分子量は、当分野の技術者に周知の方法、例えばゲル透過クロマトグラフィーによって測定することができる。溶解度測定の温度は２０℃である。
【００２７】
先に開示した重合反応は一般によく知られており、具体的には、ラジカル重合、重付加反応および重縮合が含まれる。
【００２８】
ラジカル的に重合可能なモノマーの疎水性は、水中でのこれらのモノマーの混和性または溶解性をもとに推定することができる。疎水性モノマーは一般に、水中での非常に限定された混和性によって特徴付けられ、他方、親水性モノマーは水と容易に混和する。
【００２９】
本発明の特定の態様によれば、疎水性でラジカル的に重合可能な好ましいモノマーは、２０℃で２０ｇ／ｌ、特に１６ｇ／ｌ、特に好ましくは１０ｇ／ｌ以下の水中での溶解度によって特徴付けられる。これに対して、親水性でラジカル的に重合可能な好ましいモノマーの２０℃での溶解度は少なくとも５０ｇ／ｌ、好ましくは少なくとも１００ｇ／ｌであり、親水性モノマーは２０℃で水と任意の比で混和できることが特に好ましい。
【００３０】
ラジカル的に重合可能な親水性モノマーには、とりわけ、酢酸ビニルなどのビニルエステル；エチレン、プロピレン、ヘキサン−１、ヘプテン−１、ビニルシクロヘキサン、３，３−ジメチル−１−プロペン、３−メチル−１−ジイソブチレン、４−メチルペンテン−１などのアルケン；ならびに飽和アルコールから誘導されるアルキル（メタ）アクリレート、例えばメチルアクリレート、エチル（メタ）アクリレート、プロピル（メタ）アクリレート、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、ｔｅｒｔ−ブチル（メタ）アクリレートが含まれる。（メタ）アクリレートという表現にはメタクリレートおよびアクリレートならびに両方の混合物が含まれる。
【００３１】
ラジカル的に重合可能な、親水性モノマーには、とりわけ、酸基を有するモノマー、例えばビニルホスホン酸、ビニルスルホン酸、アクリル酸およびメタクリル酸；塩基を有するモノマー、特にビニルピリジン、３−ビニルピリジン、２−メチル−５−ビニルピリジン、３−エチル−４−ビニルピリジン、２，３−ジメチル−５−ビニルピリジン、Ｎ−ビニルピロリドン、２−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルピロリジンおよび３−ビニルピロリジン；ならびに極性基を有するモノマー、例えば２−メタクリルオキシエチルホスホリルコリン、ビニルアルコールなどが含まれる。ビニルアルコールは、ビニルエステルの鹸化により重合した後に得ることができる。
【００３２】
特に好ましいモノマーはｐＨ７．０でイオン性基を含む。これらには、とりわけ、少なくとも１種の塩基または酸基を含む上記モノマーが含まれる。
【００３３】
重付加反応または重縮合反応で使用できる疎水性モノマーには、とりわけ、ブチレンオキシド、ヘキシレンオキシドなどのアルケンオキシド；イソホロンジイソシアナート、ヘキサメチレンジイソシアナート、ヘキサン−１，６−ジオールおよびテレフタル酸などのポリエステル、ポリカーボネートおよびポリウレタンを作製するのに使用されるモノマーが含まれる。
【００３４】
重付加反応または重縮合反応で使用できる親水性モノマーには、とりわけ、酸化エチレンまたはグリコールを含むことができ、これは、特にポリエチレングリコールとして使用できる、
上記の親水性モノマーおよび疎水性モノマーを単独でまたは２種以上の混合物として使用して、統計コポリマー、ブロックコポリマーおよび／またはグラフトコポリマーを得ることができる。ポリマー鎖全体にわたって異なったモノマーの本質的にランダムな組み込みを示すので、これらのポリマーのうちでは統計コポリマーが特に好ましい。
【００３５】
本発明の特別な態様によれば、ポリマー系コーティング材料を作製のための混合物には、なんら制限するものではないが、１〜４０重量％、好ましくは４〜２５重量％の親水性モノマー、および９９〜６０重量％、特に９６〜７５重量％の疎水性モノマーが組み込まれる。
【００３６】
ポリマー系コーティング剤を作製のための重合反応は従来技術のものであり、例えば、「Ｕｌｌｍａｎｎ’ｓ Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第５版、ＣＤＲＯＭに記載されている。これにはさらに参考文献が付けられている。
【００３７】
さらに、疎水性ポリマーを転換させ、それによって先に開示した基を含むようにすることもできる。これは例えば従来技術のグラフト化反応によって実現できる。疎水性ポリマー上に親水性モノマーがグラフト化される。さらに、ポリメチル（メタ）アクリレートなどの疎水性ポリマーを、部分的に鹸化してカルボキシ基を含むポリマーを得ることもできる。
【００３８】
ポリマー系コーティング材料中に含まれるポリマーの分子量は、広い範囲で変動させることができる。一般に、分子量平均重量Ｍwは１０，０００〜２００，０００ｇ／モル、好ましくは２０，０００〜１００，０００ｇ／モルの範囲である。
【００３９】
コーティング材料のポリマーでは、多分散性指数Ｍw／Ｍnは、なんら制限するものではないが、１〜５、特に好ましくは１．２〜４の範囲を示すことが好ましい。
【００４０】
数平均分子量Ｍnおよび重量平均分子量はゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定することができる。
【００４１】
ポリマー系コーティング材料は、２０℃で１ｇ／ｌ以下、好ましくは０．５ｇ／ｌ以下の水への溶解度を示す。ポリマーの低い溶解度は特に、支持材料にそれが塗布される前の、ポリマーの条件にも関係する。この値は重量測定法で測定することができる。
【００４２】
コーティング材料のポリマーは、水に沈澱させることによって残留モノマーや他の副生成物を除いて清浄化することができる。このために、ポリマーの溶液を大量の水に単に加え、水にとける構成成分を水に溶解させて除去する。ポリマーを溶解できる溶媒には、とりわけ、アルコール特にエタノール；ケトン特にアセトン；およびアルカン特にヘキサンが含まれる。
【００４３】
沈殿させた後、ポリマーを乾燥して再度有機溶媒中に混合することができる。
【００４４】
本発明の特別な態様によれば、コーティングされた支持材料のうちの非常にわずかな割合だけを３７℃で水に抽出することができる。１ｌ／時の流速で、コーティングされたフィルターの全重量に対して最大０．５重量％、好ましくは最大０．３重量％が１時間以内に抽出される。この割合は重量測定法で測定することができる。
【００４５】
コーティングされた好ましいフィルター材料の抽出性が低いことは、とりわけ、酸化レベルが低いことに反映される。酸化レベルを決定するために、約６０ｇ／ｍ2の表面密度と約５０ｃｍ2のフィルター面積の、３０のフィルター層を有するフィルターを、２５０ｍｌの水で３７℃、２時間で抽出することができる。次いで抽出溶液のうちの２０ｍｌを、１ｍｌの硫酸 の存在下で、２０ｍｌの０．０１Ｎ過マンガン酸カリウム溶液で処理する。ここで反応混合物を還流下で３分間加熱する。次いで２０℃で過剰のヨウ化カリウムを加えることができる。抽出物中の酸化可能な化合物の割合は０．０１Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液によって生成したヨウ素を滴定して測定する。酸化レベルは、水への抽出液とブラインドサンプルからの容積差として得られる。コーティングされた好ましいフィルター材料は３ｍｌ以下、特に２ｍｌ以下の酸化レベルΔＯXで特徴付けられる。
【００４６】
コーティングされたフィルターの表面密度は一般に繊維不織布の表面密度より若干高い。一般にその値は、なんら制限するものではないが、１６〜２４０ｇ／ｍ2、特に２０〜１１０ｇ／ｍ2、特に好ましくは２６〜７０ｇ／ｍ2の範囲である。
【００４７】
材料の高い適合性に言及するとすれば、支持材料およびポリマー系コーティング材料は生体適合性であることが好ましい。
【００４８】
一般にポリマー系コーティング剤は、支持材料の表面の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９９％をカバーする。この値は、支持材料とコーティング剤の組合せによって、当分野の技術者に知られている様々な方法で測定することができる。該当する方法では通常検量曲線が作成される。これらの方法には、とりわけ、ＥＳＣＡ法などの分光学的方法、および光学的方法が含まれる。後者では、例えばヨウ素との錯体の生成によってコーティング材料は染まるが、支持材料はヨウ素で染まらない。その表面のカバー率は、ヨウ素で染められた表面の割合で測定することができる。
【００４９】
支持材料に塗布されるコーティング材料の量は支持材料の特性とコーティング材料の特性に左右される。ここで、限界表面ぬれ張力は５０〜８０ダイン／ｃｍの範囲を達成しなければならない。したがってこの値は広い範囲にあってよい。一般に、フィルターには１〜２５重量％のポリマー系コーティング材料と９９〜７５重量％の支持材料を組み込む。
【００５０】
本発明の特別な態様によれば、ポリマー系コーティング材料を、有機溶媒の１つを用いてフィルターから抽出することができる。具体的には、抽出は、当該の溶媒の沸点より若干低い温度で実施することができる。
【００５１】
全血から白血球を分離するための本発明によるフィルターは、ポリマー系コーティング材料と溶媒を含む溶液で疎水性支持材料をコーティングし、次いで溶媒を、ポリマー系コーティング剤を与えられた支持材料から除去することによって、容易に作成することができる。
【００５２】
支持材料のコーティングは任意の既知の方法、例えば浸漬法によって実施することができる。
【００５３】
溶液中の溶媒の割合は、支持材料に塗布されるポリマー系コーティング材料の量に応じて変わる。溶液は５０〜９９．５重量％、特に好ましくは７０〜９９重量％の溶媒を含むことが好ましい。
【００５４】
本発明によるフィルターは一般に血液製剤を清浄化するための装置で使用される。このような装置には通常、容器例えば清浄化すべき血液を収容するバッグ、フィルターで２つのチャンバーに分割されたハウジング、およびその中にろ液を捕集する別の容器が組み込まれており、装置のこれらの部分はホースで連結されている。血液を、重力のみによって、またはポンプ、好ましくは蠕動ポンプによって、第１の容器からフィルターを通して第２の容器に輸送することができる。このような装置は、例えば米国特許第５４４５７３６号および同５１６２１０２号に記載されている。
【００５５】
ハウジング内に位置するフィルターには１つまたは複数のフィルター層を組み込むことができる。本発明の特定の態様によれば、フィルターには１５〜５０、好ましくは２０〜４０のフィルター層が組み込まれる。
【００５６】
本発明を、以下の実施例および比較例でより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５７】
実施例１
酢酸ビニルとビニルピロリドンの統計コポリマーをラジカル重合によって作製した。その酢酸ビニルとビニルピロリドンの重量比は７を用いた。この目的のために、液体試薬は窒素雰囲気中で蒸留によって清浄化した。酢酸ビニル９８．５ｇ、ビニルピロリドン１４ｇおよびアゾビスイソブチロニトリル０．５９ｇをアセトン２００ｍｌに加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、約５４℃で７２時間攪拌した。次いで、得られたポリマーを２００ｍｌのヘキサンで抽出した。１０００ｍｌの水を加えて、ポリマーをヘキサン溶液から沈澱させた。単離したポリマーをアセトン中に溶解して、統計コポリマーを得た。ゲル透過クロマトグラフィーによるその分子量の重量平均は５６，６１１ｇ／モルであり、その多分散性指数は３．５であった。スチレンジビニルベンゾールポリマーを固定相として用い、クロロホルムを流動相として用いた。
【００５８】
このようにして得られたポリマーを、モノマー残渣を除去するために水に数回沈澱させて清浄化した。このために、ポリマーを、アセトン中に溶解し、室温で水に加えた。沈殿物を乾燥し再度アセトン中に溶解させた。
【００５９】
次いで４重量％のポリマーを含有するアセトン溶液を作製した。ポリブチレンテレフタレート不織布をこの溶液中に浸漬した。その布は、５０ｇ／ｍ2の表面密度を有し、２μｍの直径を有する繊維（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ ＨｅｍｏＣａｒｅ Ｉｔａｌｉａから入手できる）から作製した。
【００６０】
浸漬後、過剰の溶液をドリップした。次いでコーティングされた不織布を通常の装置を用いて乾燥した（処理速度は９５℃で５ｍ／分）。表面密度は５８．８ｇ／ｍ2であった。
【００６１】
３０層のコーティングされた不織布を５０ｃｍ2のフィルター面積を有する矩形のフィルターハウジングに挿入した。得られたフィルターを通して、約５００ｍｌの全血を重力でろ過した。ろ過の前後の血小板濃度を、自動分析装置（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇｅｎ−ｓ；Ｂｅｃｋｍａｎ）で測定した。白血球の個数をＮａｇｅｏｔｔｅの血球計算器で測定した。ろ過後、この個数を希釈溶液（ＳｏｂｉｏｄａからのＬｅｕｋｏｐｌａｔｅ溶液）を用いてＢｕｒｋｅｒ型チャンバー中で数えた。
得られた結果を表１に示す。
【００６２】
さらに、得られたフィルターを、抽出可能な化合物について試験した。そのために、２５０ｍｌの蒸留水を、蠕動ポンプでフィルターを通して２時間ポンプ循環させた。温度は３７℃で流速は１ｌ／時であった。こうして得た混合物を残渣について試験した。抽出処理前のフィルターの重量に対して残渣は０．１重量％であった。
【００６３】
さらに、得られた抽出物を酸化可能な物質について試験した。そのために、２０ｍｌの抽出溶液を１ｍｌの硫酸の存在下で、２０ｍｌの０．０１Ｎ過マンガン酸カリウム溶液で処理した。反応混合物を還流下で３分間加熱した。次いで過剰のヨウ化カリウムを２０℃で加えた。生成したヨウ素を０．０１Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液で滴定した。酸化レベルは、水への抽出液とブラインドサンプルからの容積差として得られた。酸化レベルは０．４ｍｌであった。
【００６４】
実施例２
基本的には実施例１を繰り返したが、ここでは酢酸ビニルとビニルピロリドンの重量比は１２ではなく７を用いた。
【００６５】
統計コポリマーを得た。ゲル透過クロマトグラフィーによるその分子量の重量平均は５６，６１１ｇ／モルであり、多分散性指数が３．５であった。
コーティングされた不織布の表面密度は６０．２ｇ／ｍ2であった。
この全血ろ過の結果も表１に示す。
【００６６】
抽出可能な化合物についての分析は１．２ｍｌの酸化レベルであり、抽出物中に、処理前のフィルターの重量に対して０．３重量％の残渣が存在していた。
【００６７】
実施例３
基本的には実施例１を繰り返したが、ここでは酢酸ビニルとビニルピロリドン重量比は７でなく４を用いた。コーティングされた不織布の表面密度は５９．９ｇ／ｍ2であった。
この全血ろ過の結果も表１に示す。
【００６８】
比較例１
基本的には実施例１を繰り返したが、ここでは全血をろ過するためにコーティングされていないポリブチレンテレフタレートの布を用いた。この結果も表１に示す。
【００６９】
【表１】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全血および／または血液製剤から白血球を分離するためのフィルター、そのフィルターの作製方法および前記フィルターを含む装置に関する。さらに、本発明は、全血および／または血液製剤から白血球を分離するためのそのフィルターの使用に関する。
【０００２】
ある種の疾患の患者を治療するために、患者に投与する血液成分の濃縮物の使用が行われている。血液成分濃縮物は、密度遠心分離に全血をかけることによって得ることができる。白血球が患者の中で免疫反応を引き起こすことがあるので、この濃縮物では、白血球の濃度をできるだけ低くしなければならない。この理由のため、血液製剤から白血球を除去する試みがなされている。
【背景技術】
【０００３】
血液製剤から白血球を分離するためのフィルターは従来技術である。例えば、米国特許第４８８０５４８号、同５４４５７３６号および同５５８０４６５号は血小板（ＰＬＴ）の濃縮物から白血球（ＷＢＣ）を分離することができるフィルターを記載している。しかし、フィルター材料と接触して赤血球（ＲＣ）が改変されるので、そうしたフィルターは全血から白血球を分離するのには適していない。
【０００４】
全血からの白血球の分離は米国特許第５８９５５７５号に記載されている。フィルター材料に、水に溶解性の親水性多糖類がそれに塗布された疎水性支持材料、例えばポリエチレンテレフタレートの繊維不織布を組み込んでいる。ここでの問題は、全血からの白血球の分離度が比較的低いことである。米国特許第４８８０５４８号に記載のフィルターと比べて、多糖類でコーティングされたフィルターは、血液製剤から分離される白血球が遥かに少ない。この分離はニトロセルロースフィルターによって改善することができるが、このようなシステムは購入して使用するのには高価である。さらに、コーティング材料の水への溶解性が問題である。全血は大量の水を含むので、コーティング材料がウォッシュアウトされることがある。しかし、結果として、血小板すなわちプラツロサイト（ｐｌａｔｕｌｏｃｙｔｅ）はフィルター材料上に保持される。ここで特に問題なのはこの損失が連続的に起こることである。その溶解性を低下させることを意図した架橋反応が米国特許第５８９５５７５号に記載されているが、そうした架橋は別の問題を引き起こす。特に、架橋剤の残分が血液循環系に達することがある。さらに、非常に強力な架橋によってフィルターの透過性が低下する結果となることがある。しかし、架橋が弱すぎると、そのウォッシュアウトを完全に阻止することはできない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の１つの目的は、白血球を極めて効率的に保持するが、詰りをできるだけ少なくして血小板および赤血球を通過させることができる、全血および／または血液製剤から白血球を分離するためのフィルターを提供することにある。
【０００６】
本発明の他の目的は、高い耐久性を示すフィルターを提供することにある。特に、フィルターは、長期間使用した後でも、血小板の透過性を保持しなければならない。
【０００７】
本発明の他の目的は、製造するのに簡単で安価なフィルターを入手できるようにすることである。特に、医療用の要件に適合するように、使用した材料を問題なく清浄化できなければならない。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記の目的、ならびに具体的には述べなかったがここで考察した文脈から導かれる、あるいは、それらから必然的にもたらされる他の目的は請求項１の特徴で達成される。本発明によるフィルターの適当な変更形態は、請求項１に従属する従属請求項の目的を構成する。
【０００９】
従属請求項１７、２０および２２は、そのフィルターを作製するための方法および全血から白血球を分離するための装置、およびそのフィルターの使用に関する。
【００１０】
疎水性支持材料およびポリマー系コーティング材料（ポリマー系コーティング材料は疎水性モノマーと親水性モノマーを含む混合物の重合反応（ｐｏｌｙｒｅａｃｔｉｏｎ）で得ることができる）を含むフィルターの表面は、５０〜８０ダイン／ｃｍの範囲の限界表面ぬれ張力も示すので、著しく高い白血球保持能力を有する、全血からの白血球の分離用フィルターを得ることができる。
【００１１】
本発明の手段をとることによって具体的には以下の利点が実現される。
【００１２】
・ 本発明によるフィルターは高い血小板および赤血球の透過性を示す。
【００１３】
・ 本発明によるフィルターは長期の耐久性を示し、特に血小板の透過性は長期使用で高く保持される。本発明によるフィルターは非常に低いウォッシュアウト性を示す。
【００１４】
・ フィルターは安価に作製することができ、使用する材料を簡単に清浄化することができるので、医療用の要件に適合する。
【００１５】
・ フィルターは優れた伝導性（ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ）を示す。例えば、本発明によるフィルターは、著しく高い血小板の透過性および血小板に対する低い保持能力を有する、白血球の高度の分離によって特徴付けられる。さらに、本発明によるフィルターは比較的速い流速で操作することができる。さらに、あるフィルター効率を達成するのに、フィルター材料用として比較的少ない材料しか必要としない。
【００１６】
本発明によるフィルターは疎水性支持材料を含む。そうした材料は当分野の技術者に周知であり、特に、サイズの差によって粒子を分離できる膜および繊維不織布などの平らな構造のものである。疎水性という用語は、支持材料が水に不溶性であり、水への溶解度が２０℃で０．１ｇ／ｌ以下であることを意味する。
【００１７】
膜は、とりわけ、ポリカーボネート、アクリルポリマー、ポリ塩化ビニル、ポリアミドおよびニトロセルロースから作製することができる。これらの膜の細孔径は、なんら制限するものではないが、好ましくは２〜２０μｍの範囲である。
【００１８】
理想的な繊維不織布は、とりわけ、ポリエステル、セルロース、ポリアミドおよびポリプロピレンから得ることができる。これらの材料のうちポリエステル、例えばポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリブチレンテレフタレート（ＰＢＴ）およびポリトリメチレンテレフタレート（ＰＴＴ）が特に好ましい。このような不織布は、０．５〜８μｍ、特に１〜４μｍ、特に好ましくは１．８〜３μｍの範囲の直径を有する繊維で作製することが好ましい。この場合、その結晶化度が少なくとも５０％、特に少なくとも８０％である結晶性繊維が特に好ましい。結晶化度の値はＸ線回折で測定することができる。
【００１９】
繊維不織布の表面密度は、なんら制限するものではないが、一般には１０〜２００ｇ／ｍ2、特に１５〜１００ｇ／ｍ2、特に好ましくは２０〜６０ｇ／ｍ2の範囲である。表面密度は、例えばＩＳＯ９０７３−１：１９８９およびＥＤＡＮＡ ＥＲＴ４０．９−９０によって測定することができる。不織布の厚さは広い範囲であってよく、コーティング前で好ましくは約０．１〜１．３ｍｍ、好ましくは０．３〜０．７、特に好ましくは０．４〜０．６ｍｍである。これらの値はＩＳＯ９０７３−１：１９９７−２によって測定される。この場合測定された表面積は０．５ｋＰａで２５ｃｍ2である。繊維不織布の好ましい密度は０．０５〜０．５０ｇ／ｃｍ3、特に０．１５〜０．３０ｇ／ｃｍ3の範囲である。
【００２０】
さらに、本発明によるフィルターは支持材料に塗布されるポリマー系コーティング材料を組み込む。
【００２１】
疎水性支持材料をポリマー系コーティング材料でコーティングした後で、フィルターは５０〜８０ダイン／ｃｍ、特に５５〜７２ダイン／ｃｍ、好ましくは５５〜６９ダイン／ｃｍの範囲の限界表面ぬれ張力を示す。この値は米国特許第５４４５７３６号および同４８８０５４８号に記載されている方法によって測定することができる。
【００２２】
このような表面ぬれ張力を実現するために、ポリマー系コーティング剤は親水性基を組み込む。その基はｐＨ７．０で水の中でイオン的に荷電されている基が好ましい。これらの基には、とりわけ、ｐＨ７．０で水の中でイオン的に荷電されている、例えばスルホン酸、ホスホン酸およびカルボキシ基が含まれる。所要の表面ぬれ張力を達成するために、上記の条件下で、カチオンに荷電された基も存在することができる。これらのカチオン性基には、特に、アミノ、Ｎ−ピロリドンおよびグアニジノ基が含まれる。さらに、ポリマーは、ポリエチレングリコールユニットなどの中性、極性基を組み込むこともできる。
【００２３】
したがって、例えば親水性モノマーと疎水性モノマーを用いる重合反応によって、ポリマー系コーティング剤を得ることができる。疎水性と親水性という用語は、一般に当技術分野で知られており、モノマーから得られたポリマーの水に対する湿潤性に関する。水に対する湿潤性は、重合反応後にポリマー中に存在する極性基によって増大する。したがって、モノマーが極性基、例えばヒドロキシル、エーテル、カルボキシル、カルボキシレート、アミド、アミン、ピロリジン、ピロリドン、ラクタム、スルフォナート、ホスホナートまたはグアニジン基、および比較的低い割合の無極性基、特に炭化水素基を含む場合、モノマーは親水性である。多くのモノマーの親水性は、例えばホモポリマーの溶解性から決定することができる。ポリマーを作製するために異なるモノマーを必要とする場合、例えば多くのポリエステルの場合、モノマーの親水性は、そのモノマーに加えて、エチレン基を有する適切な第２のモノマーも組み込んだポリマーの溶解性から決定される。テレフタル酸の親水性を決定するために、テレフタル酸を例えばグリコールで転換させる。親水性はＰＥＴの溶解性から得られる。
【００２４】
一般にモノマーは、そのホモポリマーまたは先に開示したポリマーの溶解性が１ｇ／ｌ以上、特に５ｇ／ｌ、特に好ましくは１０ｇ／ｌ以上である場合、親水性である。
【００２５】
一般にモノマーは、そのホモポリマーまたは先に開示したポリマーの溶解性が１ｇ／ｌ未満、特に０．５ｇ／ｌ以下、特に好ましくは０．１ｇ／ｌ以下である場合、疎水性である。
【００２６】
ポリマーの溶解性は分子量によって影響されることは当分野の技術者に周知である。先に開示した溶解度の値は２００，０００ｇ／モルの分子量の重量平均について適用することができる。この分子量は、当分野の技術者に周知の方法、例えばゲル透過クロマトグラフィーによって測定することができる。溶解度測定の温度は２０℃である。
【００２７】
先に開示した重合反応は一般によく知られており、具体的には、ラジカル重合、重付加反応および重縮合が含まれる。
【００２８】
ラジカル的に重合可能なモノマーの疎水性は、水中でのこれらのモノマーの混和性または溶解性をもとに推定することができる。疎水性モノマーは一般に、水中での非常に限定された混和性によって特徴付けられ、他方、親水性モノマーは水と容易に混和する。
【００２９】
本発明の特定の態様によれば、疎水性でラジカル的に重合可能な好ましいモノマーは、２０℃で２０ｇ／ｌ、特に１６ｇ／ｌ、特に好ましくは１０ｇ／ｌ以下の水中での溶解度によって特徴付けられる。これに対して、親水性でラジカル的に重合可能な好ましいモノマーの２０℃での溶解度は少なくとも５０ｇ／ｌ、好ましくは少なくとも１００ｇ／ｌであり、親水性モノマーは２０℃で水と任意の比で混和できることが特に好ましい。
【００３０】
ラジカル的に重合可能な親水性モノマーには、とりわけ、酢酸ビニルなどのビニルエステル；エチレン、プロピレン、ヘキサン−１、ヘプテン−１、ビニルシクロヘキサン、３，３−ジメチル−１−プロペン、３−メチル−１−ジイソブチレン、４−メチルペンテン−１などのアルケン；ならびに飽和アルコールから誘導されるアルキル（メタ）アクリレート、例えばメチルアクリレート、エチル（メタ）アクリレート、プロピル（メタ）アクリレート、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、ｔｅｒｔ−ブチル（メタ）アクリレートが含まれる。（メタ）アクリレートという表現にはメタクリレートおよびアクリレートならびに両方の混合物が含まれる。
【００３１】
ラジカル的に重合可能な、親水性モノマーには、とりわけ、酸基を有するモノマー、例えばビニルホスホン酸、ビニルスルホン酸、アクリル酸およびメタクリル酸；塩基を有するモノマー、特にビニルピリジン、３−ビニルピリジン、２−メチル−５−ビニルピリジン、３−エチル−４−ビニルピリジン、２，３−ジメチル−５−ビニルピリジン、Ｎ−ビニルピロリドン、２−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルピロリジンおよび３−ビニルピロリジン；ならびに極性基を有するモノマー、例えば２−メタクリルオキシエチルホスホリルコリン、ビニルアルコールなどが含まれる。ビニルアルコールは、ビニルエステルの鹸化により重合した後に得ることができる。
【００３２】
特に好ましいモノマーはｐＨ７．０でイオン性基を含む。これらには、とりわけ、少なくとも１種の塩基または酸基を含む上記モノマーが含まれる。
【００３３】
重付加反応または重縮合反応で使用できる疎水性モノマーには、とりわけ、ブチレンオキシド、ヘキシレンオキシドなどのアルケンオキシド；イソホロンジイソシアナート、ヘキサメチレンジイソシアナート、ヘキサン−１，６−ジオールおよびテレフタル酸などのポリエステル、ポリカーボネートおよびポリウレタンを作製するのに使用されるモノマーが含まれる。
【００３４】
重付加反応または重縮合反応で使用できる親水性モノマーには、とりわけ、酸化エチレンまたはグリコールを含むことができ、これは、特にポリエチレングリコールとして使用できる、
上記の親水性モノマーおよび疎水性モノマーを単独でまたは２種以上の混合物として使用して、統計コポリマー、ブロックコポリマーおよび／またはグラフトコポリマーを得ることができる。ポリマー鎖全体にわたって異なったモノマーの本質的にランダムな組み込みを示すので、これらのポリマーのうちでは統計コポリマーが特に好ましい。
【００３５】
本発明の特別な態様によれば、ポリマー系コーティング材料を作製のための混合物には、なんら制限するものではないが、１〜４０重量％、好ましくは４〜２５重量％の親水性モノマー、および９９〜６０重量％、特に９６〜７５重量％の疎水性モノマーが組み込まれる。
【００３６】
ポリマー系コーティング剤を作製のための重合反応は従来技術のものであり、例えば、「Ｕｌｌｍａｎｎ’ｓ Ｅｎｃｙｃｌｏｐａｅｄｉａ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第５版、ＣＤＲＯＭに記載されている。これにはさらに参考文献が付けられている。
【００３７】
さらに、疎水性ポリマーを転換させ、それによって先に開示した基を含むようにすることもできる。これは例えば従来技術のグラフト化反応によって実現できる。疎水性ポリマー上に親水性モノマーがグラフト化される。さらに、ポリメチル（メタ）アクリレートなどの疎水性ポリマーを、部分的に鹸化してカルボキシ基を含むポリマーを得ることもできる。
【００３８】
ポリマー系コーティング材料中に含まれるポリマーの分子量は、広い範囲で変動させることができる。一般に、分子量平均重量Ｍwは１０，０００〜２００，０００ｇ／モル、好ましくは２０，０００〜１００，０００ｇ／モルの範囲である。
【００３９】
コーティング材料のポリマーでは、多分散性指数Ｍw／Ｍnは、なんら制限するものではないが、１〜５、特に好ましくは１．２〜４の範囲を示すことが好ましい。
【００４０】
数平均分子量Ｍnおよび重量平均分子量はゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定することができる。
【００４１】
ポリマー系コーティング材料は、２０℃で１ｇ／ｌ以下、好ましくは０．５ｇ／ｌ以下の水への溶解度を示す。ポリマーの低い溶解度は特に、支持材料にそれが塗布される前の、ポリマーの条件にも関係する。この値は重量測定法で測定することができる。
【００４２】
コーティング材料のポリマーは、水に沈澱させることによって残留モノマーや他の副生成物を除いて清浄化することができる。このために、ポリマーの溶液を大量の水に単に加え、水にとける構成成分を水に溶解させて除去する。ポリマーを溶解できる溶媒には、とりわけ、アルコール特にエタノール；ケトン特にアセトン；およびアルカン特にヘキサンが含まれる。
【００４３】
沈殿させた後、ポリマーを乾燥して再度有機溶媒中に混合することができる。
【００４４】
本発明の特別な態様によれば、コーティングされた支持材料のうちの非常にわずかな割合だけを３７℃で水に抽出することができる。１ｌ／時の流速で、コーティングされたフィルターの全重量に対して最大０．５重量％、好ましくは最大０．３重量％が１時間以内に抽出される。この割合は重量測定法で測定することができる。
【００４５】
コーティングされた好ましいフィルター材料の抽出性が低いことは、とりわけ、酸化レベルが低いことに反映される。酸化レベルを決定するために、約６０ｇ／ｍ2の表面密度と約５０ｃｍ2のフィルター面積の、３０のフィルター層を有するフィルターを、２５０ｍｌの水で３７℃、２時間で抽出することができる。次いで抽出溶液のうちの２０ｍｌを、１ｍｌの硫酸 の存在下で、２０ｍｌの０．０１Ｎ過マンガン酸カリウム溶液で処理する。ここで反応混合物を還流下で３分間加熱する。次いで２０℃で過剰のヨウ化カリウムを加えることができる。抽出物中の酸化可能な化合物の割合は０．０１Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液によって生成したヨウ素を滴定して測定する。酸化レベルは、水への抽出液とブラインドサンプルからの容積差として得られる。コーティングされた好ましいフィルター材料は３ｍｌ以下、特に２ｍｌ以下の酸化レベルΔＯXで特徴付けられる。
【００４６】
コーティングされたフィルターの表面密度は一般に繊維不織布の表面密度より若干高い。一般にその値は、なんら制限するものではないが、１６〜２４０ｇ／ｍ2、特に２０〜１１０ｇ／ｍ2、特に好ましくは２６〜７０ｇ／ｍ2の範囲である。
【００４７】
材料の高い適合性に言及するとすれば、支持材料およびポリマー系コーティング材料は生体適合性であることが好ましい。
【００４８】
一般にポリマー系コーティング剤は、支持材料の表面の少なくとも５０％、好ましくは少なくとも９０％、特に好ましくは少なくとも９９％をカバーする。この値は、支持材料とコーティング剤の組合せによって、当分野の技術者に知られている様々な方法で測定することができる。該当する方法では通常検量曲線が作成される。これらの方法には、とりわけ、ＥＳＣＡ法などの分光学的方法、および光学的方法が含まれる。後者では、例えばヨウ素との錯体の生成によってコーティング材料は染まるが、支持材料はヨウ素で染まらない。その表面のカバー率は、ヨウ素で染められた表面の割合で測定することができる。
【００４９】
支持材料に塗布されるコーティング材料の量は支持材料の特性とコーティング材料の特性に左右される。ここで、限界表面ぬれ張力は５０〜８０ダイン／ｃｍの範囲を達成しなければならない。したがってこの値は広い範囲にあってよい。一般に、フィルターには１〜２５重量％のポリマー系コーティング材料と９９〜７５重量％の支持材料を組み込む。
【００５０】
本発明の特別な態様によれば、ポリマー系コーティング材料を、有機溶媒の１つを用いてフィルターから抽出することができる。具体的には、抽出は、当該の溶媒の沸点より若干低い温度で実施することができる。
【００５１】
全血から白血球を分離するための本発明によるフィルターは、ポリマー系コーティング材料と溶媒を含む溶液で疎水性支持材料をコーティングし、次いで溶媒を、ポリマー系コーティング剤を与えられた支持材料から除去することによって、容易に作成することができる。
【００５２】
支持材料のコーティングは任意の既知の方法、例えば浸漬法によって実施することができる。
【００５３】
溶液中の溶媒の割合は、支持材料に塗布されるポリマー系コーティング材料の量に応じて変わる。溶液は５０〜９９．５重量％、特に好ましくは７０〜９９重量％の溶媒を含むことが好ましい。
【００５４】
本発明によるフィルターは一般に血液製剤を清浄化するための装置で使用される。このような装置には通常、容器例えば清浄化すべき血液を収容するバッグ、フィルターで２つのチャンバーに分割されたハウジング、およびその中にろ液を捕集する別の容器が組み込まれており、装置のこれらの部分はホースで連結されている。血液を、重力のみによって、またはポンプ、好ましくは蠕動ポンプによって、第１の容器からフィルターを通して第２の容器に輸送することができる。このような装置は、例えば米国特許第５４４５７３６号および同５１６２１０２号に記載されている。
【００５５】
ハウジング内に位置するフィルターには１つまたは複数のフィルター層を組み込むことができる。本発明の特定の態様によれば、フィルターには１５〜５０、好ましくは２０〜４０のフィルター層が組み込まれる。
【００５６】
本発明を、以下の実施例および比較例でより詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００５７】
実施例１
酢酸ビニルとビニルピロリドンの統計コポリマーをラジカル重合によって作製した。その酢酸ビニルとビニルピロリドンの重量比は７を用いた。この目的のために、液体試薬は窒素雰囲気中で蒸留によって清浄化した。酢酸ビニル９８．５ｇ、ビニルピロリドン１４ｇおよびアゾビスイソブチロニトリル０．５９ｇをアセトン２００ｍｌに加えた。得られた混合物を窒素雰囲気下、約５４℃で７２時間攪拌した。次いで、得られたポリマーを２００ｍｌのヘキサンで抽出した。１０００ｍｌの水を加えて、ポリマーをヘキサン溶液から沈澱させた。単離したポリマーをアセトン中に溶解して、統計コポリマーを得た。ゲル透過クロマトグラフィーによるその分子量の重量平均は５６，６１１ｇ／モルであり、その多分散性指数は３．５であった。スチレンジビニルベンゾールポリマーを固定相として用い、クロロホルムを流動相として用いた。
【００５８】
このようにして得られたポリマーを、モノマー残渣を除去するために水に数回沈澱させて清浄化した。このために、ポリマーを、アセトン中に溶解し、室温で水に加えた。沈殿物を乾燥し再度アセトン中に溶解させた。
【００５９】
次いで４重量％のポリマーを含有するアセトン溶液を作製した。ポリブチレンテレフタレート不織布をこの溶液中に浸漬した。その布は、５０ｇ／ｍ2の表面密度を有し、２μｍの直径を有する繊維（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ ＨｅｍｏＣａｒｅ Ｉｔａｌｉａから入手できる）から作製した。
【００６０】
浸漬後、過剰の溶液をドリップした。次いでコーティングされた不織布を通常の装置を用いて乾燥した（処理速度は９５℃で５ｍ／分）。表面密度は５８．８ｇ／ｍ2であった。
【００６１】
３０層のコーティングされた不織布を５０ｃｍ2のフィルター面積を有する矩形のフィルターハウジングに挿入した。得られたフィルターを通して、約５００ｍｌの全血を重力でろ過した。ろ過の前後の血小板濃度を、自動分析装置（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｇｅｎ−ｓ；Ｂｅｃｋｍａｎ）で測定した。白血球の個数をＮａｇｅｏｔｔｅの血球計算器で測定した。ろ過後、この個数を希釈溶液（ＳｏｂｉｏｄａからのＬｅｕｋｏｐｌａｔｅ溶液）を用いてＢｕｒｋｅｒ型チャンバー中で数えた。
得られた結果を表１に示す。
【００６２】
さらに、得られたフィルターを、抽出可能な化合物について試験した。そのために、２５０ｍｌの蒸留水を、蠕動ポンプでフィルターを通して２時間ポンプ循環させた。温度は３７℃で流速は１ｌ／時であった。こうして得た混合物を残渣について試験した。抽出処理前のフィルターの重量に対して残渣は０．１重量％であった。
【００６３】
さらに、得られた抽出物を酸化可能な物質について試験した。そのために、２０ｍｌの抽出溶液を１ｍｌの硫酸の存在下で、２０ｍｌの０．０１Ｎ過マンガン酸カリウム溶液で処理した。反応混合物を還流下で３分間加熱した。次いで過剰のヨウ化カリウムを２０℃で加えた。生成したヨウ素を０．０１Ｎチオ硫酸ナトリウム溶液で滴定した。酸化レベルは、水への抽出液とブラインドサンプルからの容積差として得られた。酸化レベルは０．４ｍｌであった。
【００６４】
実施例２
基本的には実施例１を繰り返したが、ここでは酢酸ビニルとビニルピロリドンの重量比は１２ではなく７を用いた。
【００６５】
統計コポリマーを得た。ゲル透過クロマトグラフィーによるその分子量の重量平均は５６，６１１ｇ／モルであり、多分散性指数が３．５であった。
コーティングされた不織布の表面密度は６０．２ｇ／ｍ2であった。
この全血ろ過の結果も表１に示す。
【００６６】
抽出可能な化合物についての分析は１．２ｍｌの酸化レベルであり、抽出物中に、処理前のフィルターの重量に対して０．３重量％の残渣が存在していた。
【００６７】
実施例３
基本的には実施例１を繰り返したが、ここでは酢酸ビニルとビニルピロリドン重量比は７でなく４を用いた。コーティングされた不織布の表面密度は５９．９ｇ／ｍ2であった。
この全血ろ過の結果も表１に示す。
【００６８】
比較例１
基本的には実施例１を繰り返したが、ここでは全血をろ過するためにコーティングされていないポリブチレンテレフタレートの布を用いた。この結果も表１に示す。
【００６９】
【表１】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
親水性支持材料およびポリマー系コーティング材料を含む、全血および／または血液製剤からの白血球の分離用フィルターであって、フィルターの表面が５０〜８０ダイン／ｃｍの範囲の限界表面ぬれ張力を示し、前記ポリマー系コーティング材料が、疎水性モノマーと親水性モノマーを含む混合物の重合反応によって得ることができることを特徴とするフィルター。
【請求項２】
最大で前記フィルターの０．５重量％が、３７℃で水で抽出されることを特徴とする請求項１に記載のフィルター。
【請求項３】
前記混合物が１〜４０重量％の親水性モノマーと、９９〜６０重量％の疎水性モノマーを含むことを特徴とする請求項２に記載のフィルター。
【請求項４】
前記疎水性モノマーが酢酸ビニル、メチルメタクリレートおよびイソホロンジイソシアナートからなる群から選択されることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項５】
前記コーティング剤が、ｐＨ７．０でイオン性基を含むことを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項６】
前記親水性モノマーがビニルピロリドン、アクリル酸およびポリエチレングリコールからなる群から選択されることを特徴とする請求項１から５のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項７】
前記コーティング剤が前記支持材料の表面の少なくとも９０％をカバーすることを特徴とする請求項１から６のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項８】
前記コーティング材料を製造するための重合反応が、ＰＥＧの場合に、ラジカル重合または重付加反応であることを特徴とする請求項１から７のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項９】
前記ポリマー系コーティング材料が１０，０００〜２００，０００ｇ／モルの範囲の分子量の重量平均Ｍwを示すことを特徴とする請求項１から８のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１０】
前記ポリマー系コーティング材料が１〜５の範囲の多分散性指数Ｍw／Ｍnを示すことを特徴とする請求項１から９のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１１】
前記ポリマー系コーティング材料が統計コポリマー（重付加反応の場合、非統計的である）であることを特徴とする請求項１から１０のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１２】
前記支持材料が結晶性繊維を組み込むことを特徴とする請求項１から１１のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１３】
前記繊維がポリエステルを含むことを特徴とする請求項１２に記載のフィルター。
【請求項１４】
前記繊維が０．５〜８μｍの範囲の直径を示すことを特徴とする請求項１２または１３に記載のフィルター。
【請求項１５】
前記支持材料が繊維不織布であることを特徴とする請求項１２から１４のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１６】
前記フィルターが１〜２５重量％のポリマー系コーティング材料を組み込むことを特徴とする請求項１から１５のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１７】
前記フィルターの表面密度が２０〜１１０ｇ／ｍ2の範囲であることを特徴とする請求項１から１６のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１８】
疎水性支持材料をポリマー系コーティング材料と溶媒を含む溶液でコーティングし、次いで前記溶媒を、ポリマー系コーティング剤を与えられた前記支持材料から除去することを特徴とする請求項１から１７のいずれか一項に記載のフィルターを作製する方法。
【請求項１９】
前記疎水性支持材料を溶液中に浸漬することを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
水中に沈澱させて前記ポリマー系コーティング材料を清浄化することを特徴とする請求項１８また１９に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１から１７のいずれか一項に記載の少なくとも１つのフィルターを組み込んだ、全血および／または血液製剤から白血球を分離するための装置。
【請求項２２】
前記フィルターが１５〜５０のフィルター層を組み込むことを特徴とする請求項２１に記載の装置。
【請求項２３】
全血から白血球を分離するための請求項１から１７のいずれか一項に記載のフィルターの使用。
【請求項１】
親水性支持材料およびポリマー系コーティング材料を含む、全血および／または血液製剤からの白血球の分離用フィルターであって、フィルターの表面が５０〜８０ダイン／ｃｍの範囲の限界表面ぬれ張力を示し、前記ポリマー系コーティング材料が、疎水性モノマーと親水性モノマーを含む混合物の重合反応によって得ることができることを特徴とするフィルター。
【請求項２】
最大で前記フィルターの０．５重量％が、３７℃で水で抽出されることを特徴とする請求項１に記載のフィルター。
【請求項３】
前記混合物が１〜４０重量％の親水性モノマーと、９９〜６０重量％の疎水性モノマーを含むことを特徴とする請求項２に記載のフィルター。
【請求項４】
前記疎水性モノマーが酢酸ビニル、メチルメタクリレートおよびイソホロンジイソシアナートからなる群から選択されることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項５】
前記コーティング剤が、ｐＨ７．０でイオン性基を含むことを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項６】
前記親水性モノマーがビニルピロリドン、アクリル酸およびポリエチレングリコールからなる群から選択されることを特徴とする請求項１から５のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項７】
前記コーティング剤が前記支持材料の表面の少なくとも９０％をカバーすることを特徴とする請求項１から６のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項８】
前記コーティング材料を製造するための重合反応が、ＰＥＧの場合に、ラジカル重合または重付加反応であることを特徴とする請求項１から７のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項９】
前記ポリマー系コーティング材料が１０，０００〜２００，０００ｇ／モルの範囲の分子量の重量平均Ｍwを示すことを特徴とする請求項１から８のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１０】
前記ポリマー系コーティング材料が１〜５の範囲の多分散性指数Ｍw／Ｍnを示すことを特徴とする請求項１から９のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１１】
前記ポリマー系コーティング材料が統計コポリマー（重付加反応の場合、非統計的である）であることを特徴とする請求項１から１０のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１２】
前記支持材料が結晶性繊維を組み込むことを特徴とする請求項１から１１のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１３】
前記繊維がポリエステルを含むことを特徴とする請求項１２に記載のフィルター。
【請求項１４】
前記繊維が０．５〜８μｍの範囲の直径を示すことを特徴とする請求項１２または１３に記載のフィルター。
【請求項１５】
前記支持材料が繊維不織布であることを特徴とする請求項１２から１４のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１６】
前記フィルターが１〜２５重量％のポリマー系コーティング材料を組み込むことを特徴とする請求項１から１５のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１７】
前記フィルターの表面密度が２０〜１１０ｇ／ｍ2の範囲であることを特徴とする請求項１から１６のいずれか一項に記載のフィルター。
【請求項１８】
疎水性支持材料をポリマー系コーティング材料と溶媒を含む溶液でコーティングし、次いで前記溶媒を、ポリマー系コーティング剤を与えられた前記支持材料から除去することを特徴とする請求項１から１７のいずれか一項に記載のフィルターを作製する方法。
【請求項１９】
前記疎水性支持材料を溶液中に浸漬することを特徴とする請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
水中に沈澱させて前記ポリマー系コーティング材料を清浄化することを特徴とする請求項１８また１９に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１から１７のいずれか一項に記載の少なくとも１つのフィルターを組み込んだ、全血および／または血液製剤から白血球を分離するための装置。
【請求項２２】
前記フィルターが１５〜５０のフィルター層を組み込むことを特徴とする請求項２１に記載の装置。
【請求項２３】
全血から白血球を分離するための請求項１から１７のいずれか一項に記載のフィルターの使用。
【公表番号】特表２００６−５１８４２０（Ｐ２００６−５１８４２０Ａ）
【公表日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５００００５（Ｐ２００６−５００００５）
【出願日】平成１６年１月２２日（２００４．１．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０００４８９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６４９８０
【国際公開日】平成１６年８月５日（２００４．８．５）
【出願人】（５０５２７５５９４）フレゼニウス エモカーレ イタリア ソシエタ ア レスポンサビリタ リミタータ (1)
【氏名又は名称原語表記】ＦＲＥＳＥＮＩＵＳ ＨＥＭＯＣＡＲＥ ＩＴＡＬＩＡ Ｓ．Ｒ．Ｌ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年８月１０日（２００６．８．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１月２２日（２００４．１．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／０００４８９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６４９８０
【国際公開日】平成１６年８月５日（２００４．８．５）
【出願人】（５０５２７５５９４）フレゼニウス エモカーレ イタリア ソシエタ ア レスポンサビリタ リミタータ (1)
【氏名又は名称原語表記】ＦＲＥＳＥＮＩＵＳ ＨＥＭＯＣＡＲＥ ＩＴＡＬＩＡ Ｓ．Ｒ．Ｌ．
【Ｆターム（参考）】
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