炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体、それからなる食品製剤、化粧品、抗炎症剤
【課題】 副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体、それからなる食品製剤、化粧品、抗炎症剤を提供する。
【解決手段】 副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体は、ピノセンブリンカルコンとパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかと結合してなる誘導体であり、マツバ又は緑茶の粉砕物とエステル交換用リパーゼを添加し加温、あるいは、大豆と納豆菌により発酵し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。食品製剤又は化粧品は、ピノセンブリンカルコン誘導体、アスタキサンチン、柿の葉エキス含有大豆油からなるものである。抗炎症剤はピノセンブリンカルコン誘導体からなるものである。
【解決手段】 副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体は、ピノセンブリンカルコンとパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかと結合してなる誘導体であり、マツバ又は緑茶の粉砕物とエステル交換用リパーゼを添加し加温、あるいは、大豆と納豆菌により発酵し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。食品製剤又は化粧品は、ピノセンブリンカルコン誘導体、アスタキサンチン、柿の葉エキス含有大豆油からなるものである。抗炎症剤はピノセンブリンカルコン誘導体からなるものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。また、前記のピノセンブリンカルコン誘導体、アスタキサンチン、柿の葉エキス含有大豆油を含有する組成物からなる食品製剤、化粧品及び抗炎症剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症性サイトカインとは、炎症時に、マクロファージ、リンパ球や単球などの炎症細胞により産生されるたんぱく質である。
【０００３】
また、炎症性サイトカインは炎症性プロスタグランジンを誘導し、これらが組織細胞に障害を与え、また、発熱、腫脹、赤み、痛みを全身に及ぼす。
【０００４】
炎症性サイトカインとしては、インターロイキン−１アルファ、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−６、インターロイキン−８、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦアルファ）があり、これらは分子量１万〜３万程度のたんぱく質である。
【０００５】
このうち、インターロイキン−１アルファ及びインターロイキン−１ベータは、炎症性細胞である単球やリンパ球から放出され、インターロイキン−６、インターロイキン−８、ＴＮＦアルファの分泌を促し、インターロイキン−６は発熱や組織の障害に関与している。ＴＮＦアルファは、カケクチンとも言われ、癌の悪液質の際に放出され、全身症状の悪化をもたらす（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００６】
これらの炎症性サイトカインは細菌やウイルス感染時により細胞内で生成が誘導されて産生される。その経路にはプロテインキナーゼＣ系やカルシウムを介した細胞内情報伝達系が存在している。さらに、核で転写因子である転写因子カッパＢ（ＮＦ−カッパＢ）やＮＦ−ＩＬ６が炎症性サイトカインのメッセンジャーＲＮＡの転写を促進すると報告されている（例えば、非特許文献２参照。）。
【０００７】
炎症性サイトカインの産生を抑制する物質としてステロイドホルモン製剤が存在し、このステロイドホルモン製剤は炎症細胞の中で、プロテインキナーゼＣ系や炎症性サイトカインの転写因子を抑制し、炎症性サイトカインの産生を抑制する（例えば、非特許文献３参照。）。
【０００８】
一方、ステロイドホルモン製剤としてはプロピオン酸クロベタゾール、酢酸ジフロラゾン、プレゾニドロン、コルチゾンなどがあるものの、副作用として免疫機能低下、日和見感染、副腎の機能低下、ステロイド紫斑などの皮膚炎などが知られている（例えば、非特許文献４参照。）。
【０００９】
その結果、ステロイドホルモン製剤は、長期間使用できないという欠点がある。
【００１０】
天然の抗炎症剤としては甘草やハーブが知られている。甘草にはグリチルリチン酸が含有され、その働きはステロイド様作用があると報告されている（例えば、非特許文献５参照。）。しかし、その働きは軽度であるという欠点がある。有用な天然由来植物素材は、医薬品、食品、化粧品などとして利用されており、このうち、アカマツである学名Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａの葉であるマツバにはスチルベン誘導体、フラボノイド類やカルコン類が含有されており、強い抗菌作用が知られているものの（例えば、非特許文献６参照。）、それらの抗炎症作用についての報告はない。
【００１１】
炎症性サイトカインの産生を抑制する物質又は抗炎症剤の発明としては、薬物結合タンパク質のアミノ酸配列を有するサイトカイン抑制抗炎症薬結合タンパク質をコードする単離された核酸分子またはその相補鎖分子に関するものがある（例えば、特許文献１参照。）。
【００１２】
また、ヒトＴＮＦアルファに結合するヒト抗体の発明があり、これは炎症性サイトカインに対して抑制作用を発揮する抗体に関するものである（例えば、特許文献２参照。）。
【００１３】
さらに、蛋白質複合体形成剤の発明では、ポリフェノールが有効成分であり、遺伝子複合体、細胞接着抑制剤又は免疫寛容剤として有効な蛋白質複合体形成剤に関するものがある（例えば、特許文献３参照。）。
【００１４】
しかし、炎症性サイトカイン産生を抑制するピノセンブリンカルコンに関する発明は見当たらない。
【特許文献１】特許第３３７７５２９号
【特許文献２】特開平５−９６
【特許文献３】特開２００２−２５５８１１
【非特許文献１】Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ、Ｊ．ら、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、４３、２９４−３０１、２００４。
【非特許文献２】Ｄｅｖａｒａｊ、Ｓ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、５４、８５−９１、２００５。
【非特許文献３】Ｗａｌｓｈ、Ｇ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１７８、３７−４３、２００３。
【非特許文献４】Ｂｒｕｎｅｒ、Ｃ．Ｒ．ら、Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｏｎｌｉｎｅ Ｊ、９、２、２００３。
【非特許文献５】Ｓａｓａｋｉ、Ｈ．ら、Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ、７０、２２９−２３６、２００２−２００３。
【非特許文献６】Ｐｒｉｃｅ、Ｃ．Ｔ．ら、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、６８、５４１７−５４２１、２００２。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従来、炎症性サイトカインを抑制する物質としてステロイド剤があるものの、副腎肥大や感染症などの副作用が認められるという問題点があった。また、天然由来の物質の作用は軽度であり、水溶性物質であることが多いため、作用の持続性が低いという問題点があった。
【００１６】
また、通常のカルコン類は種々の酸化ストレスや酸化物質により活性を消失しやすいという問題点があった。
【００１７】
この発明は上記のような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体を提供することにある。
【００１８】
また、マツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸又はドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体を提供することにある。
【００１９】
食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体を提供することにある。
【００２０】
さらに、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる副作用が弱く、優れた食品製剤を提供することにある。
【００２１】
加えて、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品を提供することにある。
【００２２】
また、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明は、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００２４】
【化１】
【００２５】
Ｘは、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つ。
【００２６】
請求項２に記載の発明は、マツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（２）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００２７】
【化２】
【００２８】
請求項３に記載の発明は、マツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸが１４−メチルパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（３）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００２９】
【化３】
【００３０】
請求項４に記載の発明は、マツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがエイコサペンタエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（４）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００３１】
【化４】
【００３２】
請求項５に記載の発明は、マツバ又は緑茶の粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがドコサヘキサエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（５）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００３３】
【化５】
【００３４】
請求項６に記載の発明は、食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる請求項１に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００３５】
請求項７に記載の発明は、請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる食品製剤に関するものである。
【００３６】
請求項８に記載の発明は、請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品に関するものである。
【００３７】
請求項９に記載の発明は、請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤に関するものである。
【００３８】
この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。
【００３９】
請求項１に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４０】
請求項２に記載のマツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるＸがパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４１】
請求項３に記載のマツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるＸが１４−メチルパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４２】
請求項４に記載のマツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるＸがエイコサペンタエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４３】
請求項５に記載のマツバ又は緑茶の粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるＸがドコサヘキサエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４４】
請求項６に記載の食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４５】
請求項７に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる食品製剤によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４６】
請求項８に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品によれば、副作用が弱く、優れたしわ改善作用が発揮される。
【００４７】
請求項９に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
以下、この発明を実施するための最良の形態について詳細に説明する。
【００４９】
まず、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【００５０】
【化６】
【００５１】
Ｘは、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つ。
【００５２】
そもそも、ピノセンブリンカルコンとは植物でフェニルアラニンを原料として生合成される桂皮酸の誘導体であり、シナモイルＣｏＡからカルコンシンターゼにより生成される化合物であり、８位は水素である。
【００５３】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、式（１）で示されるように、ピノセンブリンカルコンの８位の位置の水素に代わり、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが結合した誘導体である。
【００５４】
このピノセンブリンカルコン誘導体は、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかの物質のカルボン酸基から最も離れた炭素部分が共有結合している。
【００５５】
このピノセンブリンカルコンはマツバ又は緑茶に存在する。学名Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａのアカマツなどの葉、緑茶、バッカリスなどの植物の茎や葉に広く分布し、また、プロポリスにも含有されている成分で７位に反応性に富んだケトン体を有するため、強い抗酸化作用を呈し、かつ、抗菌作用も認められるものの、ピノセンブリンカルコンの構造が不安定であるという欠点がある。
【００５６】
一方、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸が結合することにより、ピノセンブリンカルコンの構造が安定化される特長を有する。
【００５７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【００５８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、炎症のシグナルの中心を担っているプロテインキナーゼＣの発現を抑制することにより、炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【００５９】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は脂溶性の高い特徴を有するパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが結合していることから小腸や皮膚の細胞膜に馴染みやすく、吸収されやすい特長を有する。
【００６０】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は過剰に摂取され、吸収された場合、その過剰量は血中のエステラーゼにより分解されてピノセンブリンカルコンとそれぞれのパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかに分解され、それぞれは安全性が確認されていることから、前記のピノセンブリンカルコン誘導体も安全性が高い。
【００６１】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがパルミチン酸の場合、パルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６２】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘが１４−メチルパルミチン酸の場合、１４−メチルパルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６３】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがエイコサペンタエン酸の場合、エイコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジン産生抑制作用を呈することから、アラキドン酸より生じる炎症性プロスタグランジンの量を減少させ、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６４】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサヘキサエン酸の場合、ドコサヘキサエン酸の不飽和脂肪酸残基が血小板凝集抑制及び動脈拡張の作用を呈することから、血流が改善され、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサペンタエン酸の場合、ドコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が毛細血管拡張の作用を呈することから、炎症局所の血流が改善され、炎症物が排泄されて抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６６】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがガンマ−リノレン酸の場合、ガンマ−リノレン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジンの反応を抑制させ、抗炎症作用が増加されることから好ましい。
【００６７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがアルファ−リポ酸の場合、アルファ−リポ酸のＳＨ基が抗酸化作用を呈し、酸化ストレスに対する組織の障害が防御されて、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがステアリン酸の場合、ステアリン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６９】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがメチルステアリン酸の場合、メチルステアリン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００７０】
また、ピノセンブリンカルコンをマツバ又は緑茶より抽出し、精製することは精製が容易なことから、好ましい。さらに、脂肪酸を魚油や魚類より精製し、また、精製された魚油由来の脂肪酸を用いることは、好ましい。
【００７１】
たとえば、これらの脂肪酸をニッスイ製薬、日水漁業、東洋漁業より入手して酵素を用いた生合成や化学的に合成することができる。
【００７２】
これらの原料から酵素反応によりピノセンブリンカルコン誘導体を得る場合には、エステル結合反応を生じる酵素、たとえば、アマノエンザイム製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどが用いられる。また、化学合成反応による場合には、マグネシウム、アルミニウムなどの金属触媒とともに、加温される。
【００７３】
これらの原料は、反応槽に入れられ、溶媒とともに、反応が行われる。また、前記の反応物は、溶媒を除去されて粗生成物として得ることは、精製に要するコストを削減できることから、好ましい。
【００７４】
目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を天然の素材から抽出し、あるいは、精製することにより得ることができる。天然の素材には、マツバ又は緑茶などの植物、海藻、キノコ、食用動物、食用魚類、軟体動物、昆虫、甲殻類などがある。特に、マツバ、食用魚類の頭部やウナギの頭部は、含量が高いことから、抽出しやすいという特徴がある。
【００７５】
産業上、食用魚類の頭部は食用魚類の加工時に除去され、廃棄物として廃棄されており、利用されていない。この食用魚類の頭部やウナギの頭部を原料として抽出、又は、精製することは廃棄物を有効に利用し、廃棄物の量を軽減することから好ましい。
【００７６】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体を微生物や酵母を用いた発酵により得ることは食用として安全性が確認されており、食経験も豊富であることから好ましく、この場合、用いる微生物としては納豆菌、乳酸菌、紅麹、枯草菌があり、酵母としてはビール酵母や酒精酵母があり、特に、納豆菌はエステル交換作用に優れていることから好ましい。
【００７７】
前記の発酵はマツバ又は緑茶、魚類、魚類の頭部や内臓、大豆や牛乳などの発酵ベースに前記の微生物又は酵母を添加して発酵タンクを用いて実施される。この発酵後、微生物又は酵母と発酵液の混合物から目的とする前記のピノセンブリンカルコン誘導体を得ることができる。
【００７８】
このうち、マツバ又は緑茶とウナギの頭部や内臓は食経験も豊富であり、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を安定的に供給できることから好ましい。
【００７９】
さらに、前記の発酵物から発酵物から目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離する場合、柿の葉エキス含有大豆油を用いて抽出して分離される油溶性部分を採取して得ることは、柿の葉エキス含有大豆油による抗酸化力により物質が安定化され、品質の高い誘導体が分離されることから好ましい。
【００８０】
植物から抽出する場合、学名Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａのアカマツのマツバ、学名Ｐｉｎｅ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓのセイヨウアカマツのマツバ、クロマツのマツバ、緑茶、ギョウジャニンニク、タマネギ、ニンニク、大豆、ギジギシ、カンゾウ、ツリフネソウ、ハナイカダ、大麦若葉、葛の花、トウガラシ、カキ、梨、栗、緑茶、タラ、ワサビ、ワラビ、稲、小麦、トウモロコシ、ダイコン、菜の花、サクラ、マツ、アオキ、アカネ、アカメガシワ、アケビ、アマチャズル、アマドコロ、アロエ、イカリソウ、イタドリ、イノコズチ、イブキジャコウソウ、ウコギ、ウツボグサ、ウド、ウメ、ウラジロガシ、エビスグサ、オウレン、オオバコ、オケラ、オクラ、オトギリソウ、オナモミ、オミナエシ、カキドオシ、カラスウリ、カラスビシャク、カワラケツメイ、カワラナデシコ、カンアオイ、キクイモ、キキョウ、キササゲ、キハダ、キランソウ、キンミズヒキ、クガイソウ、クサボケ、クズ、クチナシ、コウホネ、コブシ、サイカチ、サボンソウ、サルトリイバラバッケツ、サンシュユ、ジャノヒゲ、シラン、スイカズラ、セリ、センブリ、タムシバ、タラノキ、タンポポ、チガヤ、ツリガネニンジン、ツワブキ、ドクダミ、トチノキ、トチバニンジン、ナンテン、ノイバラ、ハコベ、ハトムギ、ハハコグサ、ヒキオコシ、ヒシ、ヒトツバ、ビワ、フキ、フクジュソウ、フジ、マタタビ、メハジキ、ヤマノイモ、ユキノシタ、ヨモギ、リンドウ、レンギョウ、ロウバイ、ワレモコウの葉、花又は根は、入手しやすいことから好ましい。
【００８１】
抽出する植物としてマツ科マツ属であるアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツ、アンジェリカズサンダーヘッド、アラカワショウ、バンダイショウ、ベニクジャクマツ、クジャクマツ、ニシキマツ、ジャノメクロマツ、オウゴンクロマツ、ビグマエア、サンダーヘッド、トラフマツ、ヤツブサクロマツ、イガゴヨウ、バーストルコーンマツ、アルマンマツ、アルマンパイン、チュウゴクシロマツ、バンクスマツ、ジャックパイン、バンクシアマツ、ジラードスウィーパー、スクーディック、シロマツ、サンコノマツ、シロカワマツ、ハクショウ、ジューンズブルーム、シルヴァーゴースト、カナリーマツ、ヨーロッパハイマツ、コウザンマツ、シャレー、シャモレー、コンパクタグラウカ、ナナ、シルヴァーシーン、ロッジポールマツ、オオミマツ、クールテリ、ビッグコーンパイン、エキナタマツ、エチナ−タマツ、ショートリーフパイン、フレキシマツ、フレクシリスマツ、エクストラブルー、ヴァンデルウォルフスピラミド、ハッコウダゴヨウ、アレッポマツ、ボスニアマツ、チョウセンゴヨウ、チョウセンマツ、ベニマツ、グラウカ、ジャックコービット、オキュラスドラコニス、シルヴァレイ、モンテズママツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウアメリカミヤマゴヨウ、シロマツ、モンタナマツ、スイスコウザンマツ、スイスミヤママツ、オーレア、ビッグツナ、グリーンキャンドル、ハニーコム、ミッチミニ、モップス、プロストラータ、シャーウッドコンパクト、ホワイトバド、ウィンターゴールド、ムグスマツ、プミリオ、ロストラタ、ビショップマツ、ヨーロッパクロマツ、オウシュウクロマツ、オーストリアマツ、ボビーマックレガー、ゴールドフィンガーズ、ヘレナ、ヘルガ、ホーニブルッキアナ、イエデロ、モセリ、ダイオウショウ、ダイオウマツ、ゴヨウマツ、ヒメコマツ、アイヅゴヨウ、アオイ、エンペラー、フクズミ、グラウカ、ジャノメゴヨウ、ネギシゴヨウ、テンペルホフ、ヤツブサゴヨウ、マルミゴヨウマツ、キタゴヨウマツ、パツラマツ、キタゴヨウマツ、マケドニアマツ、フランスカイガンショウ、カイガンショウ、フランスカイガンマツ、イタリアカサマツ、シルバークレスト、パラソルマツ、ポンデローサマツ、ハイマツ、シベリアマツ、プロストラータ、イエスアルパイン、ラジアータマツ、モントレーマツ、ラジアータパイン、レジノサマツ、レッドパイン、リギダマツ、アメリカミツバマツ、ミツバマツ、シャーマンエディー、ストローブマツ、ブルーシャグ、コンパクタ、コニーアイランド、ファスティギアータ、グロボーサ、ゴールデンキャンドルス、グレッグ、マコピン、メリマック、ミヌタ、ナナ、ポールワックスマン、ペンデュラ、ラディアータ、シーアーチン、ユーコン、アンブラキュリフェラ、ウンカテナ、フェルカーデスブルーム、ヨーロッパアカマツ、オウシュウアカマツ、ロシアアカマツ、アルビンス、アンドーラ、アルゲンテアコンパクタ、オーレア、ビューヴロネンシス、ファスティギアータ、ジラードピラミド、クロボーサナナ、グロボーサヴィリディス、ヒルサイドクリーパー、リトルブラリ、ミッチウィーピング、モセリ、ナナ、ナナコンパクタ、リペンス、チュウゴクアカマツ、タブリフォルミス、テーダマツ、タエダマツ、フランキンセンスマツ、クロマツ、オトコマツ、オマツ、バ−ジニアマツ、ヒマラヤゴヨウ、ブータンマツなどの葉、樹皮や実が用いられる。
【００８２】
このうち、アカマツの葉は、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を抽出しやすことから好ましく、かつ、自然廃棄物として廃棄されており、廃棄物を減らし、環境汚染を防ぐことができることから好ましい。
【００８３】
緑茶から抽出する場合、日本産の緑茶、粉茶、中国産のアッサム系の緑茶の葉部、茎又は根は、入手しやすいことから好ましい。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【００８４】
また、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体の分離としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。分離する場合、柿の葉エキス含有大豆油を粗精製の段階で用いることにより、柿の葉エキスによる抗酸化作用が発揮され、目的とする誘導体が安定に維持される。
【００８５】
前記の反応物や組成物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。高度に精製される場合、分離用担体又は樹脂が利用され、精製される。分離用担体又は樹脂としては、表面が後述のようにコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。０．１〜３００μｍの粒度を有するものが好ましく、粒度が細かい程、精度の高い分離が行なわれるが、分離時間が長い欠点がある。
【００８６】
例えば、逆相担体又は樹脂として表面が疎水性化合物でコーティングされたものは、疎水性の高い物質の分離に利用される。陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性に荷電した物質の分離に適している。
【００８７】
また、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性に荷電した物質の分離に適している。特異的な抗体をコーティングした場合には、特異的な物質のみを分離するアフィニティ担体又は樹脂として利用される。
【００８８】
アフィニティ担体又は樹脂は、抗原抗体反応を利用して抗原の特異的な調製に利用される。分配性担体又は樹脂は、シリカゲル（メルク社製）等のように、物質と分離用溶媒の間の分配係数に差異がある場合、それらの物質の単離に利用される。
【００８９】
これらのうち、製造コストを低減することができる点から、吸着性担体又は樹脂、分配性担体又は樹脂、分子篩用担体又は樹脂及びイオン交換担体又は樹脂が好ましい。さらに、分離用溶媒に対して分配係数の差異が大きい点から、逆相担体又は樹脂及び分配性担体又は樹脂はより好ましい。
【００９０】
分離用溶媒として有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒に耐性を有する担体又は樹脂が用いられる。また、医薬品製造又は食品製造に利用される担体又は樹脂は好ましい。
【００９１】
これらの点から吸着性担体としてダイヤイオン（三菱化学（株）社製）及びＸＡＤ−２又はＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）、分子篩用担体としてセファデックスＬＨ−２０（アマシャムファルマシア社製）、分配用担体としてシリカゲル、イオン交換担体としてＩＲＡ−４１０（ロームアンドハース社製）、逆相担体としてＤＭ１０２０Ｔ（富士シリシア社製）がより好ましい。これらのうち、ダイヤイオン、セファデックスＬＨ−２０及びＤＭ１０２０Ｔはさらに好ましい。
【００９２】
得られた抽出物は、分離前に分離用担体又は樹脂を膨潤化させるための溶媒に溶解される。その量は、分離効率の点から抽出物の重量に対して１〜５０倍量が好ましく、３〜２０倍量がより好ましい。分離の温度としては物質の安定性の点から４〜３０℃が好ましく、１０〜２５℃がより好ましい。
【００９３】
分離用溶媒には、水、又は、水を含有する低級アルコール、親水性溶媒、親油性溶媒が用いられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが用いられるが、食用として利用されているエタノールが好ましい。
【００９４】
セファデックスＬＨ−２０を用いる場合、分離用溶媒には低級アルコールが好ましい。シリカゲルを用いる場合、分離用溶媒にはクロロホルム、メタノール、酢酸又はそれらの混合液が好ましい。ダイヤイオン及びＤＭ１０２０Ｔを用いる場合、分離用溶媒はメタノール、エタノール等の低級アルコール又は低級アルコールと水の混合液が好ましい。
【００９５】
採取後、乾燥又は真空乾燥により溶媒を除去し、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を粉末又は濃縮液として得ることは溶媒による影響を除外できることから、好ましい。前記のピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤、化粧品、衛生用具などに利用される。
【００９６】
医薬品としては、皮膚、全身又は局所の抗炎症剤、抗アレルギー剤、花粉症改善剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤などに利用される。
【００９７】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【００９８】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。
【００９９】
特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。衛生用具ではガーゼ、マスク、花粉対策用のマスク、生理用品などに利用される。また、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０１００】
次に、マツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる前記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（２）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０１０１】
【化７】
【０１０２】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体であり、ピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸のカルボキシル酸から最も離れた炭素が共有結合した誘導体である。
【０１０３】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１０４】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する。また、前記のピノセンブリンカルコン誘導体において、パルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０１０５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はマツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。
【０１０６】
マツバとはアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツの葉であり、神農本草経にも記載され、薬膳料理に古くから利用され、食経験が豊富であり、安全性が確認されている。緑茶は日本産、中国産の緑茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０１０７】
また、化粧品原料としてもマツバエキス又は緑茶葉として利用されている。ここで用いるマツバは日本、韓国、中国、台湾などのアジア、北アメリカ、南アメリカ、オセアニア、アフリカに自然に繁殖したもの、または、栽培されたいずれのマツバでも、用いられ、このうち、日本、中国産のものは、農薬の使用履歴が追跡でき、品質が安定し、安価であることから、好ましい。
【０１０８】
マツバ又は緑茶は新鮮なもの、乾燥されたもののいずれでも良い。
【０１０９】
採取されたマツバ又は緑茶は水道水で洗浄されることは好ましい。
【０１１０】
マツバ又は緑茶は粉砕される。粉砕は、粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【０１１１】
ここで用いられるパルミチン酸は、魚類、リョーショク、不二製油株式会社などのナタネ、ゴマなどの植物より抽出され、精製されたものが、不純物の少ないことから好ましい。
【０１１２】
ここで用いるエステル交換用リパーゼは、エステル交換反応用リパーゼとしては、たとえば、ノボザイム社製のリポザイムやノボザイム４３５、名糖産業社製のリパーゼＰＬやリパーゼＱＬＭ、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどの品質が高いものが用いられ、これらは安全性が確認されていることから、好ましい。
【０１１３】
清浄なステンレス製寸胴などに前記のマツバ又は緑茶の粉砕物、パルミチン酸及びエステル交換用リパーゼが添加され、加温される。ここに、溶媒として水道水を添加することは、反応を円滑にすることから好ましい。
【０１１４】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、パルミチン酸は０．０２〜０．５重量が好ましく、エステル交換用リパーゼは０．０００１〜０．０４重量が好ましい。
【０１１５】
前記の加温の温度として、１０〜３０℃が好ましく、１３〜２７℃がより好ましい。
【０１１６】
前記の加温の時間として、１〜２４時間が好ましく、２〜１４時間がより好ましい。
【０１１７】
前記の加温は、攪拌されながら、行うことが好ましく、１分間当たり８〜１２０回の速度が好ましい。
【０１１８】
加温された後に、冷却される。冷却方法は、自然冷却又は水冷が好ましい。
【０１１９】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０１２０】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０１２１】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０１２２】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０１２３】
添加するマツバの粉砕物１重量に対し、添加する柿の葉エキス含有大豆油は０．４〜３重量が好ましい。
【０１２４】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０１２５】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０１２６】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０１２７】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０１２８】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０１２９】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０１３０】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０１３１】
次に、マツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる前記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘが１４−メチルパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（３）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０１３２】
【化８】
【０１３３】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体であり、ピノセンブリンカルコンの８位に、１４−メチルパルミチン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合した誘導体である。
【０１３４】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１３５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１３６】
このピノセンブリンカルコン誘導体は１４−メチルパルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０１３７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はマツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。
【０１３８】
マツバとはアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツの葉であり、神農本草経にも記載され、薬膳料理に古くから利用され、食経験が豊富であり、安全性が確認されている。緑茶は日本産の緑茶アッサム系の緑茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０１３９】
また、化粧品原料としてもマツバエキス又は緑茶葉として利用されている。
【０１４０】
ここで用いるマツバは日本、韓国、中国、台湾などのアジア、北アメリカ、南アメリカ、オセアニア、アフリカに自然に繁殖したもの、または、栽培されたいずれのマツバでも、用いられる。このうち、日本、中国産のものは、農薬の使用履歴が追跡でき、品質が安定し、安価であることから、好ましい。
【０１４１】
マツバ又は緑茶は新鮮なもの、乾燥されたもののいずれでも良い。
【０１４２】
採取されたマツバ又は緑茶は水道水で洗浄されることは好ましい。
【０１４３】
マツバ又は緑茶は粉砕される。粉砕は、粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【０１４４】
ここで用いられる１４−メチルパルミチン酸は、リョーショク、オリザ油化株式会社、不二製油株式会社産の魚類、ゴマ、ナタネ、クルミなどより抽出され、精製されたものが、不純物の少ないことから好ましい。
【０１４５】
ここで用いるエステル交換用リパーゼは、エステル交換反応用リパーゼであり、たとえば、ノボザイム社製のリポザイムやノボザイム４３５、名糖産業社製のリパーゼＰＬやリパーゼＱＬＭ、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどの品質が高いものであり、これらは安全性が高いことから、好ましい。
【０１４６】
清浄なステンレス製寸胴などに前記のマツバ又は緑茶の粉砕物、１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼが添加され、加温される。ここに、溶媒として水道水を添加することは、反応を円滑にすることから好ましい。
【０１４７】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、１４−メチルパルミチン酸は０．０２〜０．５重量が好ましく、エステル交換用リパーゼは０．０００１〜０．０４重量が好ましい。
【０１４８】
前記の加温の温度として、１０〜３０℃が好ましく、１３〜２７℃がより好ましい。
【０１４９】
前記の加温の時間として、１〜２４時間が好ましく、２〜１４時間がより好ましい。
【０１５０】
前記の加温は、攪拌されながら、行うことが好ましく、１分間当たり８〜１２０回の速度が好ましい。
【０１５１】
加温された後に、冷却される。冷却方法は、自然冷却又は水冷が好ましい。
【０１５２】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０１５３】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を酸化から防御し、その構造を安定的に維持することができる。
【０１５４】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０１５５】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が用いられ、農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０１５６】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、添加する柿の葉エキス含有大豆油は０．４〜３重量が好ましい。
【０１５７】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０１５８】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０１５９】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０１６０】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０１６１】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０１６２】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０１６３】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０１６４】
次に、マツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる前記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがエイコサペンタエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（４）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０１６５】
【化９】
【０１６６】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体であり、ピノセンブリンカルコンの８位に、エイコサペンタエン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合した誘導体である。
【０１６７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１６８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１６９】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は、エイコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジン産生抑制作用を呈することから、アラキドン酸より生じる炎症性プロスタグランジンの量を減少させ、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０１７０】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はマツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。
【０１７１】
マツバとはアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツの葉であり、神農本草経にも記載され、薬膳料理に古くから利用され、食経験が豊富であり、安全性が確認されている。緑茶は日本産や中国産の緑茶やアッサム系の緑茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０１７２】
また、化粧品原料としてもマツバエキス又は緑茶葉として利用されている。
【０１７３】
ここで用いるマツバは日本、韓国、中国、台湾などのアジア、北アメリカ、南アメリカ、オセアニア、アフリカに自然に繁殖したもの、または、栽培されたいずれのマツバでも、用いられる。このうち、日本、中国産のものは、農薬の使用履歴が追跡でき、品質が安定し、安価であることから、好ましい。
【０１７４】
マツバ又は緑茶は新鮮なもの、乾燥されたもののいずれでも良い。
【０１７５】
採取されたマツバ又は緑茶は水道水で洗浄されることは好ましい。
【０１７６】
マツバ又は緑茶は粉砕される。粉砕は、粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【０１７７】
ここで用いられるエイコサペンタエン酸は、東洋水産株式会社、日水製薬株式会社製造のイワシ、サバなどからの魚類から抽出、精製された製品が、品質が高く、不純物も少ないことから好ましい。
【０１７８】
ここで用いるエステル交換用リパーゼは、エステル交換反応用リパーゼとしては、たとえば、ノボザイム社製のリポザイムやノボザイム４３５、名糖産業社製のリパーゼＰＬやリパーゼＱＬＭ、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどの品質が高いものが用いられ、これらは安全性が確認されていることから、好ましい。
【０１７９】
清浄なステンレス製寸胴などに前記のマツバ又は緑茶の粉砕物、エイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼが添加され、加温される。ここに、溶媒として水道水を添加することは、反応を円滑にすることから好ましい。
【０１８０】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、エイコサペンタエン酸は０．１３〜０．８重量が好ましく、エステル交換用リパーゼは０．０００１〜０．０４重量が好ましい。
【０１８１】
前記の加温の温度として、１０〜３０℃が好ましく、１８〜２５℃がより好ましい。
【０１８２】
前記の加温の時間として、１〜２４時間が好ましく、３〜１２時間がより好ましい。
【０１８３】
前記の加温は、攪拌されながら、行うことが好ましく、１分間当たり１０〜１００回の速度が好ましい。
【０１８４】
加温された後に、冷却される。冷却方法は、自然冷却又は水冷が好ましい。
【０１８５】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０１８６】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０１８７】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０１８８】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０１８９】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、添加する柿の葉エキス含有大豆油は０．４〜３重量が好ましい。
【０１９０】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０１９１】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０１９２】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０１９３】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０１９４】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０１９５】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０１９６】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０１９７】
次に、マツバ又は緑茶の粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる前記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサヘキサエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（５）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０１９８】
【化１０】
【０１９９】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体であり、ピノセンブリンカルコンの８位に、ドコサヘキサエン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合した誘導体である。
【０２００】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０２０１】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０２０２】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は、ドコサヘキサエン酸の不飽和脂肪酸残基が血小板凝集抑制及び動脈拡張の作用を呈することから、血流が改善され、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２０３】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はマツバの粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。
【０２０４】
マツバとはアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツの葉であり、神農本草経にも記載され、薬膳料理に古くから利用され、食経験が豊富であり、安全性が確認されている。緑茶は日本産や中国産の緑茶やアッサム系の茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０２０５】
また、化粧品原料としてもマツバエキス又は緑茶葉として利用されている。
【０２０６】
ここで用いるマツバは日本、韓国、中国、台湾などのアジア、北アメリカ、南アメリカ、オセアニア、アフリカに自然に繁殖したもの、または、栽培されたいずれのマツバでも、用いられる。このうち、日本、中国産のものは、農薬の使用履歴が追跡でき、品質が安定し、安価であることから、好ましい。
【０２０７】
マツバ又は緑茶は新鮮なもの、乾燥されたもののいずれでも良い。
【０２０８】
採取されたマツバ又は緑茶は水道水で洗浄されることは好ましい。
【０２０９】
マツバ又は緑茶は粉砕される。粉砕は、粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【０２１０】
ここで用いられるドコサヘキサエン酸は、東洋水産株式会社、日水製薬株式会社、日本水産株式会社製の藻類、イワシ、サバなどの魚類より抽出し、精製されたものが用いられ。これらは品質が高く、不純物が少ない。
【０２１１】
ここで用いるエステル交換用リパーゼは、エステル交換反応用リパーゼとしては、たとえば、ノボザイム社製のリポザイムやノボザイム４３５、名糖産業社製のリパーゼＰＬやリパーゼＱＬＭ、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどの品質が高いものが用いられ、これらは安全性が確認されていることから、好ましい。
【０２１２】
清浄なステンレス製寸胴などに前記のマツバ又は緑茶の粉砕物、ドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼが添加され、加温される。ここに、溶媒として水道水を添加することは、反応を円滑にすることから好ましい。
【０２１３】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、ドコサヘキサエン酸は０．２３〜０．８重量が好ましく、エステル交換用リパーゼは０．０００１〜０．０４重量が好ましい。
【０２１４】
前記の加温の温度として、１０〜３０℃が好ましく、１８〜２５℃がより好ましい。
【０２１５】
前記の加温の時間として、１〜２４時間が好ましく、３〜１２時間がより好ましい。
【０２１６】
前記の加温は、攪拌されながら、行うことが好ましく、１分間当たり１０〜１００回の速度が好ましい。
【０２１７】
加温された後に、冷却される。冷却方法は、自然冷却又は水冷が好ましい。
【０２１８】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０２１９】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０２２０】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０２２１】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０２２２】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、添加する柿の葉エキス含有大豆油は０．４〜３重量が好ましい。
【０２２３】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０２２４】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０２２５】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０２２６】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０２２７】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０２２８】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０２２９】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０２３０】
次に、食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０２３１】
ここでいう炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体である。
【０２３２】
すなわち、ピノセンブリンカルコンの８位の位置の水素に代わりパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが結合した誘導体である。
【０２３３】
このピノセンブリンカルコン誘導体は、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかの物質のカルボン酸基から最も離れた炭素部分が共有結合している。
【０２３４】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸が結合することにより、ピノセンブリンカルコンの構造が安定化される特長を有する。
【０２３５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０２３６】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、炎症のシグナルの中心を担っているプロテインキナーゼＣの発現を抑制することにより、炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０２３７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は脂溶性の高い特徴を有するパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが結合していることから小腸や皮膚の細胞膜に馴染みやすく、吸収されやすい特長を有する。
【０２３８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は過剰に摂取され、吸収された場合、その過剰量は血中のエステラーゼにより分解されてピノセンブリンカルコンとそれぞれのパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかに分解され、それぞれは安全性が確認されていることから、前記のピノセンブリンカルコン誘導体も安全性が高い。
【０２３９】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがパルミチン酸の場合、パルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４０】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘが１４−メチルパルミチン酸の場合、１４−メチルパルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４１】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがエイコサペンタエン酸の場合、エイコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジン産生抑制作用を呈することから、アラキドン酸より生じる炎症性プロスタグランジンの量を減少させ、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４２】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサヘキサエン酸の場合、ドコサヘキサエン酸の不飽和脂肪酸残基が血小板凝集抑制及び動脈拡張の作用を呈することから、血流が改善され、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４３】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサペンタエン酸の場合、ドコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が毛細血管拡張の作用を呈することから、炎症局所の血流が改善され、炎症物が排泄されて抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４４】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがガンマ−リノレン酸の場合、ガンマ−リノレン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジンの反応を抑制させ、抗炎症作用が増加されることから好ましい。
【０２４５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがアルファ−リポ酸の場合、アルファ−リポ酸のＳＨ基が抗酸化作用を呈し、酸化ストレスに対する組織の障害が防御されて、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４６】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがステアリン酸の場合、ステアリン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがメチルステアリン酸の場合、メチルステアリン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は、食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるものである。ここでいう食用魚類としては、食用に用いる魚類のことであり、このうち、ウナギは食経験が豊富である。
【０２４９】
ウナギの頭部や内臓は食経験もあり、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸を含んでいることから好ましい。
【０２５０】
また、 漁業では加工過程においてウナギの頭部や内臓は廃棄されることから、廃棄物の有用利用ができることから好ましい。
【０２５１】
このうち、浜名湖湖畔で養殖されて成長したウナギは、好ましい。また、解体場で屠殺後解体し、頭部及び内臓を切断し、採取することは好ましい。
【０２５２】
集められたウナギの頭部及び内臓を包丁により裁断し、中山技術研究所製ＤＭ−６にて粉砕することは好ましい。
【０２５３】
ここでいうマツバとは、マツ科マツ属であるアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツ、アンジェリカズサンダーヘッド、アラカワショウ、バンダイショウ、ベニクジャクマツ、クジャクマツ、ニシキマツ、ジャノメクロマツ、オウゴンクロマツ、ビグマエア、サンダーヘッド、トラフマツ、ヤツブサクロマツ、イガゴヨウ、バーストルコーンマツ、アルマンマツ、アルマンパイン、チュウゴクシロマツ、バンクスマツ、ジャックパイン、バンクシアマツ、ジラードスウィーパー、スクーディック、シロマツ、サンコノマツ、シロカワマツ、ハクショウ、ジューンズブルーム、シルヴァーゴースト、カナリーマツ、ヨーロッパハイマツ、コウザンマツ、シャレー、シャモレー、コンパクタグラウカ、ナナ、シルヴァーシーン、ロッジポールマツ、オオミマツ、クールテリ、ビッグコーンパイン、エキナタマツ、エチナ−タマツ、ショートリーフパイン、フレキシマツ、フレクシリスマツ、エクストラブルー、ヴァンデルウォルフスピラミド、ハッコウダゴヨウ、アレッポマツ、ボスニアマツ、チョウセンゴヨウ、チョウセンマツ、ベニマツ、グラウカ、ジャックコービット、オキュラスドラコニス、シルヴァレイ、モンテズママツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウアメリカミヤマゴヨウ、シロマツ、モンタナマツ、スイスコウザンマツ、スイスミヤママツ、オーレア、ビッグツナ、グリーンキャンドル、ハニーコム、ミッチミニ、モップス、プロストラータ、シャーウッドコンパクト、ホワイトバド、ウィンターゴールド、ムグスマツ、プミリオ、ロストラタ、ビショップマツ、ヨーロッパクロマツ、オウシュウクロマツ、オーストリアマツ、ボビーマックレガー、ゴールドフィンガーズ、ヘレナ、ヘルガ、ホーニブルッキアナ、イエデロ、モセリ、ダイオウショウ、ダイオウマツ、ゴヨウマツ、ヒメコマツ、アイヅゴヨウ、アオイ、エンペラー、フクズミ、グラウカ、ジャノメゴヨウ、ネギシゴヨウ、テンペルホフ、ヤツブサゴヨウ、マルミゴヨウマツ、キタゴヨウマツ、パツラマツ、キタゴヨウマツ、マケドニアマツ、フランスカイガンショウ、カイガンショウ、フランスカイガンマツ、イタリアカサマツ、シルバークレスト、パラソルマツ、ポンデローサマツ、ハイマツ、シベリアマツ、プロストラータ、イエスアルパイン、ラジアータマツ、モントレーマツ、ラジアータパイン、レジノサマツ、レッドパイン、リギダマツ、アメリカミツバマツ、ミツバマツ、シャーマンエディー、ストローブマツ、ブルーシャグ、コンパクタ、コニーアイランド、ファスティギアータ、グロボーサ、ゴールデンキャンドルス、グレッグ、マコピン、メリマック、ミヌタ、ナナ、ポールワックスマン、ペンデュラ、ラディアータ、シーアーチン、ユーコン、アンブラキュリフェラ、ウンカテナ、フェルカーデスブルーム、ヨーロッパアカマツ、オウシュウアカマツ、ロシアアカマツ、アルビンス、アンドーラ、アルゲンテアコンパクタ、オーレア、ビューヴロネンシス、ファスティギアータ、ジラードピラミド、クロボーサナナ、グロボーサヴィリディス、ヒルサイドクリーパー、リトルブラリ、ミッチウィーピング、モセリ、ナナ、ナナコンパクタ、リペンス、チュウゴクアカマツ、タブリフォルミス、テーダマツ、タエダマツ、フランキンセンスマツ、クロマツ、オトコマツ、オマツ、バ−ジニアマツ、ヒマラヤゴヨウ、ブータンマツなどマツの葉である。
【０２５４】
このうち、アカマツの葉は、目的とするピノセンブリンカルコンを多く含有し、抽出しやすことから好ましく、かつ、自然廃棄物として廃棄されており、廃棄物を減らし、環境汚染を防ぐことができることから好ましい。
【０２５５】
静岡産の無農薬で栽培された緑茶を用いることは、好ましい。また、緑茶は日本産や中国産の緑茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０２５６】
マツバ又は緑茶は中山技術研究所製ＤＭ−６などの粉砕機で粉砕されることは好ましい。
ここでいう大豆は、日本産、中国産、アメリカ産、ロシア産などいずれの産地のものも、利用でき、使用に際して中山技術研究所製ＤＭ−６などの粉砕機で粉砕されることが好ましい。
【０２５７】
ここでいう納豆菌とは、納豆や食品の加工用に用いられる枯草菌の一種である。納豆素本舗製の納豆菌は発酵に適していることから、好ましい。
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０２５８】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０２５９】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０２６０】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉は農薬の混入を回避できる点から好ましい。
【０２６１】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０２６２】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０２６３】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０２６４】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０２６５】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０２６６】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除くために効果的である。
【０２６７】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０２６８】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０２６９】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０２７０】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０２７１】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０２７２】
前記の発酵に関するそれぞれの添加量は、食用魚類１重量に対し、マツバ又は緑茶は０．０３〜０．３重量が好ましく、大豆は０．１〜３重量が好ましく、納豆菌は０．００１〜０．０３重量が好ましい。
【０２７３】
前記の発酵は清浄な培養用タンクで実施され、水道水により前記の材料を混合することは好ましい。
【０２７４】
また、この発酵は、３０〜４０℃に加温され、発酵は、２４〜７２時間行われる。発酵後に、抽出を効率良く実施するために、水道水で希釈される。
【０２７５】
さらに、発酵物は、柿の葉エキス含有大豆油で抽出される。前記の発酵物１重量に対して柿の葉エキス含有大豆油の添加量は、０．０２〜２重量である。この場合、攪拌による抽出が好ましく、攪拌温度は１０〜３０℃が好ましく、攪拌時間は０．５〜３時間が好ましい。
【０２７６】
前記の攪拌後、上層に分離した柿の葉エキス含有大豆油を採取し、水分を除去することは好ましい。水分を除去するために、東洋技研製ＴＧＤ−２５０ＬＦ２などの乾燥機が用いられる。
【０２７７】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０２７８】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０２７９】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０２８０】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０２８１】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０２８２】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０２８３】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０２８４】
次に、前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる食品製剤について説明する。
【０２８５】
ここでいう炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体とは、粗生成物、混合物、合成された物、抽出して精製された純度の高い物質のいずれでもよく、前記のピノセンブリンカルコン誘導体とは、ピノセンブリンカルコンに、Ｘの位置にパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが共有結合した誘導体である。
【０２８６】
また、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０２８７】
さらに、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０２８８】
アスタキサンチンはカロチノイド系色素の一種であり、ヘマトコッカス藻が太陽光に当たり生成される赤色の色素である。サケ、イクラにも含有される天然の物質であり、その安全性と強い抗酸化力が検証されている。
【０２８９】
アスタキサンチンはヘマトコッカス藻を培養した後に、炭酸ガスを用いた超臨界抽出により得られる。
【０２９０】
武田紙器株式会社、富士化学株式会社製のアスタキサンチンは品質が高く、不純物が少ないことから、好ましい。
【０２９１】
柿の葉エキス含有大豆油は、日本、中国、アジア産の富有柿、次郎柿、平核無柿、甲州百目柿、四溝柿、堂上蜂屋柿の葉を粉砕機により粉砕され、大豆油により抽出して得られる。
【０２９２】
柿の葉の粉砕された原料を、ヤクルト薬品工業株式会社製のオノズカＲ−１０、Ｙ−ＮＣ、アマノエンザイム株式会社製のセルラーゼ Ａ「アマノ」３、セルラーゼ Ｔ「アマノ」４などのセルラーゼにより処理することは、抽出効率が向上することから好ましい。
【０２９３】
前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、添加されるアスタキサンチンは０．０１〜０．５重量であり、柿の葉エキス含有大豆油は０．０１〜０．５重量であり、これにより組成物が得られる。
【０２９４】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、アスタキサンチンの重量が０．０１重量を下回る場合、目的とする組成物が十分に得られないおそれがある。
【０２９５】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、アスタキサンチンの重量が０．５重量を上回る場合、ピノセンブリンカルコン誘導体の溶解性が低下し、析出するおそれがある。
【０２９６】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、柿の葉エキス含有大豆油の重量が０．０１重量を下回る場合、目的とする組成物が十分に得られないおそれがある。
【０２９７】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、柿の葉エキス含有大豆油の重量が０．５重量を上回る場合、ピノセンブリンカルコン誘導体の溶解性が低下し、析出するおそれがある。
【０２９８】
前記の組成物を得るために、混合後も加温されることは好ましい。加温条件として温度は３０〜４５℃であり、加温時間は６〜４０時間である。
【０２９９】
加温温度が３０℃を下回る場合、十分な反応が生じないおそれがある。加温温度が４５℃を上回る場合、酸化により生成された反応物が褐色に変色するおそれがある。加温時間が６時間を下回る場合、十分な生成物が得られないおそれがある。加温時間が４０時間を上回る場合、酸化により生成された生成物が褐色に変色するおそれがある。
【０３００】
この組成物は、前記のピノセンブリンカルコン誘導体を少しずつ、持続的に放出させて、持続性組成物となることから、好ましい。
【０３０１】
また、このように構成することにより、ピノセンブリンカルコン誘導体がアスタキサンチンの抗酸化力により安定に維持されて酸化による分解が抑制される。特に、不飽和脂肪酸の二重結合が酸化から守られて構造を維持する。
【０３０２】
さらに、前記の組成物が他の原料とともに加工され、食品製剤になる。この場合、種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって、例えば、粉末状、錠剤状、液状（ドリンク剤等）、カプセル状等の形状の食品製剤にすることができる。また、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤等を適宜添加してもよい。
【０３０３】
前記の食品製剤は、１日数回に分けて経口摂取される。１日の摂取量は０．２〜１０ｇが好ましく、０．３〜６ｇがより好ましく、０．５〜４ｇがさらに好ましい。１日の摂取量が、０．２ｇを下回る場合、十分な抗炎症作用が発揮されないおそれがある。１日の摂取量が、１０ｇを越える場合、コストが高くなるおそれがある。上記の他に、飴、せんべい、クッキー、飲料等の形態で使用することができる。
【０３０４】
ここでいう食品製剤とは、人間が食する保健機能食品、健康補助食品、一般食品、病院で用いる病院用食品、また、動物用の飼料又はペット用サプリメント、ペットフードである。
【０３０５】
この食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０３０６】
次に、前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品について説明する。
【０３０７】
ここでいう炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体とは、粗生成物、混合物、合成された物、抽出して精製された純度の高い物質のいずれでもよく、前記のピノセンブリンカルコン誘導体とは、ピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが共有結合した誘導体である。
【０３０８】
また、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０３０９】
さらに、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０３１０】
アスタキサンチンはカロチノイド系色素の一種であり、ヘマトコッカス藻が太陽光に当たり生成される赤色の色素である。サケ、イクラにも含有される天然の物質であり、その安全性と強い抗酸化力が検証されている。
【０３１１】
アスタキサンチンはヘマトコッカス藻を培養した後に、炭酸ガスを用いた超臨界抽出により得られる。
【０３１２】
武田紙器株式会社、富士化学株式会社製のアスタキサンチンは品質が高く、不純物が少ないことから、好ましい。
【０３１３】
柿の葉エキス含有大豆油は、日本、中国、アジア産の富有柿、次郎柿、平核無柿、甲州百目柿、四溝柿、堂上蜂屋柿の葉を粉砕機により粉砕され、大豆油により抽出して得られる。
【０３１４】
柿の葉の粉砕された原料を、ヤクルト薬品工業株式会社製のオノズカＲ−１０、Ｙ−ＮＣ、アマノエンザイム株式会社製のセルラーゼ Ａ「アマノ」３、セルラーゼ Ｔ「アマノ」４などのセルラーゼにより処理することは、抽出効率が向上することから好ましい。
【０３１５】
前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、添加されるアスタキサンチンは０．００６〜０．４重量であり、柿の葉エキス含有大豆油は０．０５〜０．８重量であり、これにより組成物が得られる。
【０３１６】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、アスタキサンチンの重量が０．００６重量を下回る場合、目的とする組成物が十分に得られないおそれがある。
【０３１７】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、アスタキサンチンの重量が０．４重量を上回る場合、ピノセンブリンカルコン誘導体の溶解性が低下し、析出するおそれがある。
【０３１８】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、柿の葉エキス含有大豆油の重量が０．０５重量を下回る場合、目的とする組成物が十分に得られないおそれがある。
【０３１９】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、柿の葉エキス含有大豆油の重量が０．８重量を上回る場合、ピノセンブリンカルコン誘導体の溶解性が低下し、析出するおそれがある。
【０３２０】
前記の組成物を得るために、混合後も加温されることは好ましい。加温条件として温度は３０〜４５℃であり、加温時間は６〜４０時間である。
【０３２１】
加温温度が３０℃を下回る場合、十分な反応が生じないおそれがある。加温温度が４５℃を上回る場合、酸化により生成された反応物が褐色に変色するおそれがある。加温時間が６時間を下回る場合、十分な生成物が得られないおそれがある。
【０３２２】
加温時間が４０時間を上回る場合、酸化により生成された生成物が褐色に変色するおそれがある。
【０３２３】
この組成物は、前記のピノセンブリンカルコン誘導体を少しずつ、持続的に放出させて、持続性組成物となることから、好ましい。
【０３２４】
また、このように構成することにより、ピノセンブリンカルコン誘導体がアスタキサンチンの抗酸化力により安定に維持されて酸化による分解が抑制される。特に、不飽和脂肪酸の二重結合が酸化から守られて構造を維持する。
【０３２５】
さらに、化粧品として前記の組成物が他の原料とともに加工される。その後、常法に従って油分、界面活性化剤、ビタミン剤、紫外線吸収剤、増粘剤、保湿剤、副素材等とともに用いることができる。
【０３２６】
化粧水、クリーム、軟膏、ローション、乳液、パック、オイル、石鹸、洗顔料、香料、オーディコロン、浴用剤、シャンプー、リンス等の形態とすることができる。化粧品製剤の形態は任意であり、溶液状、クリーム状、ペースト状、ゲル状、ジェル状、固形状又は粉末状として用いることができる。
【０３２７】
化粧品として皮膚に１日数回に分けて塗布される。１日の塗布量は０．０１〜１０ｇが好ましく、０．０５〜３ｇがより好ましく、０．１〜２ｇがさらに好ましい。１日の塗布量が、０．０１ｇを下回る場合、しわやたるみの治療または防止効果が発揮されないおそれがある。１日の塗布量が、１０ｇを越える場合、コストが高くなるおそれがある。
【０３２８】
ここでいう化粧品とは、人間に用いる化粧品である基礎化粧品、美白化粧品、毛髪洗浄剤、トリートメント剤、染め剤、育毛剤、養毛剤、ボディウォッシュ、医薬部外品である。その他に、動物に用いる皮膚改善剤又はペット用シャンプー、ボディウォッシュである。
【０３２９】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。
【０３３０】
特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０３３１】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０３３２】
次に、前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤について説明する。
【０３３３】
ここでいう炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体とは、粗生成物、混合物、合成された物、抽出して精製された純度の高い物質のいずれでもよく、前記のピノセンブリンカルコン誘導体とは、ピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが共有結合した誘導体である。
【０３３４】
また、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０３３５】
さらに、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０３３６】
医薬品として用いる場合には、不純物による影響を除去することが必要となるために、酵素反応により合成され、溶媒の残留の少ない前記の構造のピノセンブリンカルコン誘導体を用いることが好ましい。
【０３３７】
医薬品として経口剤又は非経口剤として利用され、医薬部外品としては、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、石鹸、歯磨き粉等に配合されて利用される。
【０３３８】
経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。前記の錠剤及びカプセル剤に混和される場合には、結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等とともに用いることができる。前記の錠剤は、シェラック又は砂糖で被覆することもできる。
【０３３９】
また、前記のカプセル剤の場合には、上記の材料にさらに油脂等の液体担体を含有させることができる。前記のシロップ剤及びドリンク剤の場合には、甘味剤、防腐剤、色素香味剤等を含有させることができる。
【０３４０】
非経口剤としては、軟膏剤、クリーム剤、水剤等の外用剤の他に、注射剤が挙げられる。ここで用いる外用剤の基材としては、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールド等が用いられ、通常の方法によって軟膏剤やクリーム剤等とすることができる。
【０３４１】
注射剤には、液剤があり、その他、凍結乾燥剤がある。これは使用時、注射用蒸留水や生理食塩液等に無菌的に溶解して用いられる。
【０３４２】
ここでいう抗炎症剤は、皮膚や全身又は局所の炎症に対して治療又は予防効果を目的とした医薬品又は医薬部外品製剤である。
【０３４３】
全身の炎症には、発熱、発赤、浮腫などがあり、臓器ごとの炎症として、肺炎、脳炎、咽頭炎、気管支炎、角膜炎、腸炎、胃炎、十二指腸炎、大腸炎、肝炎、腎炎、膀胱炎、膵炎、神経炎、筋肉炎、動脈炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、日焼けによる皮膚炎などであり、特に、日焼けによる皮膚炎に対しては外用剤として利用される。
【０３４４】
これらの全身及び局所の書く臓器の炎症に対して炎症性サイトカインの産生を抑制する作用機序により効果を発揮する。
【０３４５】
加えて、肥満した家畜、ペットの治療を目的とした獣医用医薬品としても利用できる。
【０３４６】
以下、前記実施形態を実施例及び試験例を用いて具体的に説明する。なお、以下の説明は例であり、形態を変化させて実施することができる。
【０３４７】
まず、発酵により得られるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【実施例１】
【０３４８】
浜名湖湖畔で養殖されて成長したウナギ（学名Ａｎｇｕｉｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ）１００匹を原料として用いた。成長したウナギを解体場で屠殺後解体し、頭部及び内臓を切断し、採取した。体部は、食用に供し、頭部及び内臓を集めた。
【０３４９】
集められた頭部及び内臓１．８ｋｇを包丁により裁断し、中山技術研究所製ＤＭ−６にて粉砕した。
【０３５０】
これを清浄な培養用タンクに入れ、水道水３．５Ｌを添加した。これに無農薬で栽培された静岡県で採取されたアカマツの葉、すなわち、マツバの１．８ｋｇを水道水で洗浄後、乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により乾燥し、ハサミで裁断し、中山技術研究所製ＤＭ−６にて粉砕した。この粉砕物１８０ｇを前記の寸胴に添加した。これに、中国産大豆を水洗後、３６分間３６℃に加温し、さらに大豆粉砕物１．８ｋｇを添加した。
【０３５１】
これに、納豆素本舗製の納豆菌１８ｇを添加した。３６℃の温度で、攪拌しながら、４７時間発酵した。
【０３５２】
発酵が終了したタンクに、水道水３．６Ｌを添加した。これを発酵物とした。
【０３５３】
一方、無農薬で栽培された岐阜県産の富有柿の若葉の２．１ｋｇを乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により１１時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で粒径約０．７マイクロｍに粉砕した。
【０３５４】
この粉砕物１．９ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１９ｇを添加し、２７℃で１１時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油を添加し、攪拌して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３５５】
前記の発酵物に、前記の柿の葉エキス含有大豆油の１ｋｇを添加して１時間攪拌し、混合した。
【０３５６】
これを静置して上層に分離した柿の葉エキス含有大豆油により分離される油溶性部分を液体として採取した。水分を除去するために、東洋技研製ＴＧＤ−２５０ＬＦ２に供し、油状物質として、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得た。これを実施例１の検体とした。
【０３５７】
以下に、バルミチン酸を共有結合させたピノセンブリンカルコン誘導体の調製について記載する。
【実施例２】
【０３５８】
無農薬で栽培された静岡産の緑茶、学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓの９ｋｇを購入し、水道水により十分に洗浄し、乾燥機により乾燥させた。
【０３５９】
この緑茶３ｋｇを粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）に供し、粉砕して緑茶の粉砕物とした。
【０３６０】
清浄な寸胴に緑茶の粉砕物１ｋｇを入れ、水道水を１０Ｌ添加した。これに、リョーショクより購入したバルミチン酸３００ｇを添加して攪拌した。
【０３６１】
これに、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇを１１ｇ添加し、２６℃に加温して、６７回／分の速度で１１時間攪拌し、これを加温液とした。
【０３６２】
一方、日本産富有柿の若葉の１．８ｋｇを乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により１２時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で粒径０．７マイクロｍに粉砕した。
【０３６３】
この粉砕物１．７ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１７ｇを添加し、２６℃で１２時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油で抽出して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３６４】
前記の加温液の入った寸胴を水道水により冷却後、前記の柿の葉エキス含有大豆油１ｋｇを添加し、油部分を採取した。
【０３６５】
この油部分を真空乾燥機（エーキューエム九州テクノス製、クリーンドライ）により乾燥してパルミチン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体を油状の液体として得た。また、これを実施例２の検体とした。
【０３６６】
以下に、１４−メチルパルミチン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体の調製について記載する。
【実施例３】
【０３６７】
無農薬で栽培された静岡産のアカマツのマツバ１０ｋｇを採取し、水道水により十分に洗浄し、乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により乾燥させた。これを原料のマツバとした。
【０３６８】
このマツバ２ｋｇを粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）に供し、粉砕してマツバの粉砕物とした。
【０３６９】
清浄な寸胴にマツバの粉砕物１ｋｇを入れ、水道水を１０Ｌ添加した。これに、リョーショクより購入した１４−メチルパルミチン酸３００ｇを添加して攪拌した。
【０３７０】
これに、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇを１０ｇ添加し、２５℃に加温して、５８回／分の速度で１０時間攪拌し、これを加温液とした。
【０３７１】
一方、日本産富有柿の若葉の２ｋｇを乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により１２時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で粒径０．７マイクロｍに粉砕した。
【０３７２】
この粉砕物１．８ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１８ｇを添加し、２５℃で１４時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油で抽出して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３７３】
前記の加温液の入った寸胴を水道水により冷却後、前記の柿の葉エキス含有大豆油１ｋｇを添加し、油部分を採取した。
【０３７４】
これを真空乾燥機（エーキューエム九州テクノス製、クリーンドライ）により乾燥して１４−メチルパルミチン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体を油状の液体として得た。また、これを実施例３の検体とした。
【０３７５】
以下に、エイコサペンタエン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体の調製について記載する。
【実施例４】
【０３７６】
無農薬で栽培された静岡産のアカマツのマツバ１２ｋｇを採取し、水道水により十分に洗浄し、乾燥機により乾燥させた。これを原料のマツバとした。このマツバ２．４ｋｇを粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）に供し、粉砕してマツバの粉砕物とした。
【０３７７】
清浄な寸胴にマツバの粉砕物１．１ｋｇを入れ、水道水を１１Ｌ添加した。これに、日本水産製のエイコサペンタエン酸２９０ｇを添加して攪拌した。
【０３７８】
これに、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇを１１ｇ添加し、２５℃に加温して、６１回／分の速度で１１時間攪拌し、これを加温液とした。
【０３７９】
一方、日本産富有柿の若葉の２ｋｇを乾燥機により１２時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で粒径０．７マイクロｍに粉砕した。
【０３８０】
この粉砕物１．８ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１８ｇを添加し、２５℃で１２時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油で抽出して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３８１】
前記の加温液の入った寸胴を水道水により冷却後、前記の柿の葉エキス含有大豆油１ｋｇを添加し、油部分を採取した。
【０３８２】
これを真空乾燥機（エーキューエム九州テクノス製、クリーンドライ）により乾燥してエイコサペンタエン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体を油状の液体として得た。また、これを実施例４の検体とした。
【０３８３】
以下に、ドコサヘキサエン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体の調製について記載する。
【実施例５】
【０３８４】
無農薬で栽培された静岡産のアカマツのマツバ１３ｋｇを採取し、水道水により十分に洗浄し、乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により乾燥させた。これを原料のマツバとした。
【０３８５】
このマツバ２ｋｇを粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）に供し、粉砕してマツバの粉砕物とした。
【０３８６】
清浄な寸胴にマツバの粉砕物１．１ｋｇを入れ、水道水を１０Ｌ添加した。これに、日水製薬製のドコサヘキサエン酸３３０ｇを添加して攪拌した。
【０３８７】
これに、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇを１１ｇ添加し、２５℃に加温して、５５回／分の速度で１０時間攪拌し、これを加温液とした。
【０３８８】
一方、日本産富有柿の若葉の２ｋｇを乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により１２時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で、粒径０．７マイクロｍに粉砕した。この粉砕物１．８ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１８ｇを添加し、２５℃で１２時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油で抽出して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３８９】
前記の加温液の入った寸胴を水道水により冷却後、前記の柿の葉エキス含有大豆油１ｋｇを添加し、油部分を採取した。
【０３９０】
これを真空乾燥機（エーキューエム九州テクノス製、クリーンドライ）により乾燥してドコサヘキサエン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体を油状の液体として得た。また、これを実施例５の検体とした。
【０３９１】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体の精製物について説明する。
【実施例６】
【０３９２】
実施例４で得られたピノセンブリンカルコン誘導体３０ｇをエタノール１．２Ｌに懸濁し、三菱化学製ダイヤイオンの４８０ｇを充填したカラムに供した。これを１０％エタノール含有水８５０ｍＬで洗浄した。さらに３５％エタノール含有水５００ｍＬで洗浄後、８０％エタノール含有水５００ｍＬで溶出して、８０％エタノール含有水の分画を採取した。
【０３９３】
これを減圧乾燥機に供してエタノールと水を留去した後、日本エフディ製の凍結乾燥機によりピノセンブリンカルコン誘導体の油状の精製物５ｇを得た。これを実施例６の検体とした。
【０３９４】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体の同定試験について説明する。
（試験例１）
【０３９５】
上記のように得られた実施例１、実施例２、実施例３、実施例４、実施例５及び実施例６で得られたそれぞれのピノセンブリンカルコン誘導体を精製エタノールに溶解し、質量分析器付き高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ、島津製作所）で分析し、さらに、核磁気共鳴装置（ＮＭＲ、ブルカー製、ＡＣ−２５０）で解析した。
【０３９６】
その結果、実施例１の検体からは、ピノセンブリンカルコン誘導体としてピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。
【０３９７】
また、実施例２の検体からは、ピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。パルミチン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合していた。
【０３９８】
また、実施例３の検体からは、ピノセンブリンカルコンの８位に、１４−メチルパルミチン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。１４−メチルパルミチン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合していた。
【０３９９】
また、実施例４及び実施例６の検体からは、ピノセンブリンカルコンの８位に、エイコサペンタエン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。エイコサペンタエン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合していた。
【０４００】
また、実施例５の検体からは、ピノセンブリンカルコンの８位に、ドコサヘキサエン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。ドコサヘキサエン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合していた。
【０４０１】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体の炎症性サイトカイン産生の抑制試験について説明する。
（試験例２）
試験にはスキ花粉症に感染した年齢２１歳〜７７歳の男性４名及び年齢２９歳〜６５歳の女性４名よりヘパリン加血液を採取し、ＭＥＭ（日水製薬）により単球を培養した。
【０４０２】
この単球１０００個を３５ｍｍ径の培養シャーレに播種し、５％炭酸ガス下、３７℃で２４時間培養した。
【０４０３】
これに、スギ花粉（フナミシ製）１０ｎｇ及び実施例１〜６で得られた検体をジメチルスルホキシドに溶解してそれぞれ１ｎｇを添加し、添加後、４８時間した。培養上清を採取し、炎症性サイトカインとしてインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−６及びＴＮＦアルファ量をＥＬＩＳＡキット（アムジェン製）を用いて吸光度法により定量した。
【０４０４】
なお、溶媒対照として検体の代わりに、ジメチルスルホキシドを用いた。
【０４０５】
また、陽性対照としてステロイド剤であるプロピオン酸クロベタゾールを用いた。
【０４０６】
その結果、インターロイキン−１アルファ量の場合、溶媒対照の量を１００％とした場合、それぞれ１ｎｇの添加量で実施例１では６０％、実施例２では５７％、実施例３では５０％、実施例４では４２％、実施例５では４４％及び実施例６では３６％となった。なお、プロピオン酸クロベタゾールは６１％であった。
【０４０７】
したがって、実施例１〜６の検体は、いずれも、スギ花粉に対してインターロイキン−１アルファの産生を抑制すると結論された。
【０４０８】
また、インターロイキン−６量の場合、溶媒対照の量を１００％とした場合、それぞれ１ｎｇの添加量で実施例１では７６％、実施例２では７９％、実施例３では７１％、実施例４では７０％、実施例５では７９％及び実施例６では６７％となった。なお、プロピオン酸クロベタゾールは７９％であった。
【０４０９】
したがって、実施例１〜６の検体は、いずれも、スギ花粉に対してインターロイキン−６の産生を抑制すると結論された。
【０４１０】
また、ＴＮＦアルファ量の場合、溶媒対照の量を１００％とした場合、それぞれ１ｎｇの添加量で実施例１では５９％、実施例２では６５％、実施例３では５９％、実施例４では４９％、実施例５では５５％及び実施例６では３３％となった。なお、プロピオン酸クロベタゾールは７２％であった。
【０４１１】
したがって、実施例１〜６の検体は、いずれも、スギ花粉に対してＴＮＦアルファの産生を抑制すると結論された。
【０４１２】
以上の結果、実施例１〜６の検体は、炎症性サイトカインの産生をプロピオン酸クロベタゾールと同程度に抑制するものと考えられた。
【０４１３】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体を含有する食品製剤の製造について記載する。
【実施例７】
【０４１４】
前記の実施例１で得られたピノセンブリンカルコン誘導体１００ｇを食品加工用混合器（ツカサ製、パウミキサー、シングルタイプ）に入れ、武田紙器製のアスタキサンチン２５ｇを添加した。これに、柿の葉エキス含有大豆油１１ｇを添加し、攪拌しながらこれを３７℃で２４時間加温して冷却後、組成物約１２０ｇを得た。
【０４１５】
この組成物１００ｇに、食用セルロース３００ｇ、アスコルビン酸１ｇ及び食用香料９ｇを食品加工用ミキサー（ツカサ製、パウミキサー、Ｗタイプ）に添加し、混合した。これを常法により粉末化し、乾燥後、ブタ由来ゼラチン製ハードカプセルに、１粒２５０ｍｇとして充填し、食品製剤を得た。これを実施例７の検体とした。
【０４１６】
以下に、食品製剤を用いた抗炎症作用について述べる。
（試験例３）
【０４１７】
３５〜６９歳のスギ花粉によりクシャミやハナミズを呈する男性６例に、前記の実施例７で得られた食品製剤を１日１回１０カプセルずつ、すなわと、１日２．５ｇずつ、１４日間毎日摂食させた。摂食前及び摂食１４日目に、スギ花粉による反応性を観察した。さらに、摂食前及び摂食１４日目に、血液を採取し、ＩｇＥ量を免疫抗体法により測定した。
【０４１８】
その結果、摂食後、スギ花粉によるクシャミやハナミズの発現数は、摂食前に比し、平均で３４％となり、明らかな反応性の減少が認められた。
【０４１９】
さらに、血液ＩｇＥ量は、摂食前に比して平均値で４２％となり、ＩｇＥ量の減少が認められた。また、摂食後に、体調や健康状態に異常は、認められなかった。
【実施例８】
【０４２０】
前記の実施例２で得られたピノセンブリンカルコン誘導体１１０ｇを化粧品加工用混合器（寿工業製、ポーレコンテナミキサー）に入れ、武田紙器製のアスタキサンチン１１ｇを添加した。
【０４２１】
これに、柿の葉エキス含有大豆油５０ｇを添加し、攪拌しながらこれを３７℃で３０時間加温して冷却後、組成物約１６０ｇを得た。
【０４２２】
この組成物を前記の混合器に入れ、ミツロウ（アピ製）１ｋｇ及びスクワラン（日本水産製）１ｇを添加し、混合して、化粧品製剤としてクリームを得た。これを実施例８の検体とした。同時に、実施例２で得られたピノセンブリンカルコン誘導体を除いた基材のみのクリームを調製した。
（試験例４）
【０４２３】
実施例８で得られたクリームを使用して、２３〜７８才の女性１０例を対象に、紫外線に対するしわ改善試験を行なった。すなわち、１０例を２群に分け、前記の実施例８のピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームを１日当たり１ｇずつ、７日間、顔面部に塗布させた。同時に、基材のみを含有するクリームを使用する群を設定した。
【０４２４】
前記の女性に、日焼け用紫外線照射装置（エムロック製、ネオタン８８８）により毎日１時間、紫外線を浴びさせた。使用前及び使用７日後に、顔面の肌温度、皮表角層水分量測定装置（ＩＢＳ社製、ＳＫＩＣＯＮ２００）を用いて角質水分量、弾力計（クトメーター）を用いて肌弾性及び単位面積当たりのしわの長さを計測した。
【０４２５】
さらに、汗と皮脂を採取し、含有される炎症性サイトカインであるＴＮＦアルファ量を免疫酵素法（アムジェン製）により測定した。
【０４２６】
その結果、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、平均値として０．４１℃の肌温度の低下が認められた。また、皮表角層水分量は、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、１７９％に増加した。さらに、弾力計による弾力は、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、１９９％に増加した。
【０４２７】
しわの長さは、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、５５％となり、明らかに、しわの減少が認められた。
【０４２８】
加えて、汗と皮脂中のＴＮＦアルファ量は、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、平均値として６３％に減少した。
【０４２９】
さらに、ピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームでは副作用は認められず、使用感も良好であった。
【０４３０】
したがって、実施例８のクリームには紫外線によるサイトカイン産生を抑制し、しわを改善する作用が確認され、安全性も高かった。
【０４３１】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤について述べる。
【実施例９】
【０４３２】
清浄なステンレス製溶解槽に、前記の実施例２で得られたピノセンブリンカルコン誘導体４０ｇ、ラノリン１１０ｇ、マクロゴールド１３０ｇ、ミツロウ１０ｇ、オゾケライト２０ｇを添加し、３０℃で１時間溶解した。これを混練機に供し、混合した。これを再度、溶解槽で溶解して、過熱し、脱気装置により脱気させて、目的とする抗炎症剤を軟膏剤として得た。
【０４３３】
なお、対照として前記の実施例２で得られたピノセンブリンカルコン誘導体の代わりとしてラノリンを用いた対照となる検体を作製し、対照検体として試験に用いた。
（試験例５）
【０４３４】
３０〜５９歳のスギ花粉によりクシャミやハナミズを呈する男性４例及び女性３名に、前記の実施例９で得られた抗炎症剤を１日１回１ｇずつ、１４日間に鼻腔外部、鼻腔周囲や口腔周囲部分に塗布した。
【０４３５】
塗布前及び塗布１４日目に、スギ花粉による反応性を観察した。さらに、塗布前及び塗布１４日目に、血液を採取し、ＴＮＦアルファ量及びＩｇＥ量を免疫抗体法により測定した。
【０４３６】
その結果、塗布後、スギ花粉によるクシャミやハナミズの発現数は、塗布前に比して平均で、３１％となり、いずれも花粉に対する反応性の減少が認められた。血中のＴＮＦアルファ量は、塗布前に比して平均値で３０％となり、炎症性サイトカインであるＴＮＦアルファ量の減少が認められた。
【０４３７】
血中ＩｇＥ量は、塗布前の値に比して４４％となり、ＩｇＥ量の減少が認められた。また、塗布後に、体調や健康状態、その他の臨床検査値に異常は、認められなかった。
【０４３８】
したがって、ピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤は花粉症に対して炎症性サイトカインとＩｇＥ量を低下させ、優れた抗炎症効果を呈し、かつ、安全性も確認された。
【０４３９】
一方、ピノセンブリンカルコン誘導体の代わりとしてラノリンを用いた対照検体を用いた場合には、スギ花粉によるクシャミやハナミズの発現数は、塗布前に比して平均値で１０２％となり、花粉に対する反応性に変化はなかった。
【０４４０】
また、血中のＴＮＦアルファ量は、塗布前に比して平均値で１０１％となり、炎症性サイトカインであるＴＮＦアルファ量に変化はなかった。
【０４４１】
血中ＩｇＥ量も平均値で１０４％となり、変化は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【０４４２】
本発明である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体は、全身及び局所の炎症の防止及び改善を目的とした副作用の弱い、優れた働きを示し、皮膚炎、肺炎、気管支炎、肝炎など種々の炎症に苦しむ患者又は半健康人のＱＯＬを改善するものである。
【０４４３】
また、本発明である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる食品製剤は、花粉症、シックハウス症候群、風邪、アレルギー、皮膚炎などの炎症の改善又はその発症を予防し、国民生活の質的向上に寄与するものである。
【０４４４】
さらに、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる化粧品は、日焼けによるしわやくすみ、皮膚の炎症やアトピーなどの炎症に対して改善又は予防効果を示し、国民のＱＯＬを向上させるものである。
【０４４５】
加えて、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤によれば、皮膚炎、肝炎、脳炎、肺炎、風邪、膵炎、花粉症、アレルギーなどの炎症の改善又は予防に貢献し、国民生活を向上させる。この抗炎症剤は副作用が少なく、優れた抗炎症作用を発揮することにより、医療及び医薬品業界の活性化に寄与するものである。
【０４４６】
マツバや食用魚類の頭部や内臓は、廃棄物として処理されている。本発明は、これらの廃棄物を有効に利用する点から廃棄物を減少させ、廃棄物による土壌や海洋の富栄養による環境破壊を予防でき、かつ、漁業や農業資源の有効活用が期待され、さらに、漁業や農業や関連産業の発展に寄与するものである。
【技術分野】
【０００１】
この発明は、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。また、前記のピノセンブリンカルコン誘導体、アスタキサンチン、柿の葉エキス含有大豆油を含有する組成物からなる食品製剤、化粧品及び抗炎症剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
炎症性サイトカインとは、炎症時に、マクロファージ、リンパ球や単球などの炎症細胞により産生されるたんぱく質である。
【０００３】
また、炎症性サイトカインは炎症性プロスタグランジンを誘導し、これらが組織細胞に障害を与え、また、発熱、腫脹、赤み、痛みを全身に及ぼす。
【０００４】
炎症性サイトカインとしては、インターロイキン−１アルファ、インターロイキン−１ベータ、インターロイキン−６、インターロイキン−８、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦアルファ）があり、これらは分子量１万〜３万程度のたんぱく質である。
【０００５】
このうち、インターロイキン−１アルファ及びインターロイキン−１ベータは、炎症性細胞である単球やリンパ球から放出され、インターロイキン−６、インターロイキン−８、ＴＮＦアルファの分泌を促し、インターロイキン−６は発熱や組織の障害に関与している。ＴＮＦアルファは、カケクチンとも言われ、癌の悪液質の際に放出され、全身症状の悪化をもたらす（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００６】
これらの炎症性サイトカインは細菌やウイルス感染時により細胞内で生成が誘導されて産生される。その経路にはプロテインキナーゼＣ系やカルシウムを介した細胞内情報伝達系が存在している。さらに、核で転写因子である転写因子カッパＢ（ＮＦ−カッパＢ）やＮＦ−ＩＬ６が炎症性サイトカインのメッセンジャーＲＮＡの転写を促進すると報告されている（例えば、非特許文献２参照。）。
【０００７】
炎症性サイトカインの産生を抑制する物質としてステロイドホルモン製剤が存在し、このステロイドホルモン製剤は炎症細胞の中で、プロテインキナーゼＣ系や炎症性サイトカインの転写因子を抑制し、炎症性サイトカインの産生を抑制する（例えば、非特許文献３参照。）。
【０００８】
一方、ステロイドホルモン製剤としてはプロピオン酸クロベタゾール、酢酸ジフロラゾン、プレゾニドロン、コルチゾンなどがあるものの、副作用として免疫機能低下、日和見感染、副腎の機能低下、ステロイド紫斑などの皮膚炎などが知られている（例えば、非特許文献４参照。）。
【０００９】
その結果、ステロイドホルモン製剤は、長期間使用できないという欠点がある。
【００１０】
天然の抗炎症剤としては甘草やハーブが知られている。甘草にはグリチルリチン酸が含有され、その働きはステロイド様作用があると報告されている（例えば、非特許文献５参照。）。しかし、その働きは軽度であるという欠点がある。有用な天然由来植物素材は、医薬品、食品、化粧品などとして利用されており、このうち、アカマツである学名Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａの葉であるマツバにはスチルベン誘導体、フラボノイド類やカルコン類が含有されており、強い抗菌作用が知られているものの（例えば、非特許文献６参照。）、それらの抗炎症作用についての報告はない。
【００１１】
炎症性サイトカインの産生を抑制する物質又は抗炎症剤の発明としては、薬物結合タンパク質のアミノ酸配列を有するサイトカイン抑制抗炎症薬結合タンパク質をコードする単離された核酸分子またはその相補鎖分子に関するものがある（例えば、特許文献１参照。）。
【００１２】
また、ヒトＴＮＦアルファに結合するヒト抗体の発明があり、これは炎症性サイトカインに対して抑制作用を発揮する抗体に関するものである（例えば、特許文献２参照。）。
【００１３】
さらに、蛋白質複合体形成剤の発明では、ポリフェノールが有効成分であり、遺伝子複合体、細胞接着抑制剤又は免疫寛容剤として有効な蛋白質複合体形成剤に関するものがある（例えば、特許文献３参照。）。
【００１４】
しかし、炎症性サイトカイン産生を抑制するピノセンブリンカルコンに関する発明は見当たらない。
【特許文献１】特許第３３７７５２９号
【特許文献２】特開平５−９６
【特許文献３】特開２００２−２５５８１１
【非特許文献１】Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ、Ｊ．ら、Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ、４３、２９４−３０１、２００４。
【非特許文献２】Ｄｅｖａｒａｊ、Ｓ．ら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ、５４、８５−９１、２００５。
【非特許文献３】Ｗａｌｓｈ、Ｇ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１７８、３７−４３、２００３。
【非特許文献４】Ｂｒｕｎｅｒ、Ｃ．Ｒ．ら、Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｏｎｌｉｎｅ Ｊ、９、２、２００３。
【非特許文献５】Ｓａｓａｋｉ、Ｈ．ら、Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ、７０、２２９−２３６、２００２−２００３。
【非特許文献６】Ｐｒｉｃｅ、Ｃ．Ｔ．ら、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、６８、５４１７−５４２１、２００２。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
従来、炎症性サイトカインを抑制する物質としてステロイド剤があるものの、副腎肥大や感染症などの副作用が認められるという問題点があった。また、天然由来の物質の作用は軽度であり、水溶性物質であることが多いため、作用の持続性が低いという問題点があった。
【００１６】
また、通常のカルコン類は種々の酸化ストレスや酸化物質により活性を消失しやすいという問題点があった。
【００１７】
この発明は上記のような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体を提供することにある。
【００１８】
また、マツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸又はドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体を提供することにある。
【００１９】
食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる副作用が弱く、優れた炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体を提供することにある。
【００２０】
さらに、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる副作用が弱く、優れた食品製剤を提供することにある。
【００２１】
加えて、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品を提供することにある。
【００２２】
また、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明は、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００２４】
【化１】
【００２５】
Ｘは、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つ。
【００２６】
請求項２に記載の発明は、マツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（２）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００２７】
【化２】
【００２８】
請求項３に記載の発明は、マツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸが１４−メチルパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（３）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００２９】
【化３】
【００３０】
請求項４に記載の発明は、マツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがエイコサペンタエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（４）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００３１】
【化４】
【００３２】
請求項５に記載の発明は、マツバ又は緑茶の粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがドコサヘキサエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（５）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００３３】
【化５】
【００３４】
請求項６に記載の発明は、食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる請求項１に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体に関するものである。
【００３５】
請求項７に記載の発明は、請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる食品製剤に関するものである。
【００３６】
請求項８に記載の発明は、請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品に関するものである。
【００３７】
請求項９に記載の発明は、請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤に関するものである。
【００３８】
この発明は、以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。
【００３９】
請求項１に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４０】
請求項２に記載のマツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるＸがパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４１】
請求項３に記載のマツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるＸが１４−メチルパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４２】
請求項４に記載のマツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるＸがエイコサペンタエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４３】
請求項５に記載のマツバ又は緑茶の粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるＸがドコサヘキサエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４４】
請求項６に記載の食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４５】
請求項７に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる食品製剤によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【００４６】
請求項８に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品によれば、副作用が弱く、優れたしわ改善作用が発揮される。
【００４７】
請求項９に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤によれば、副作用が弱く、優れた抗炎症作用が発揮される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４８】
以下、この発明を実施するための最良の形態について詳細に説明する。
【００４９】
まず、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【００５０】
【化６】
【００５１】
Ｘは、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つ。
【００５２】
そもそも、ピノセンブリンカルコンとは植物でフェニルアラニンを原料として生合成される桂皮酸の誘導体であり、シナモイルＣｏＡからカルコンシンターゼにより生成される化合物であり、８位は水素である。
【００５３】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、式（１）で示されるように、ピノセンブリンカルコンの８位の位置の水素に代わり、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが結合した誘導体である。
【００５４】
このピノセンブリンカルコン誘導体は、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかの物質のカルボン酸基から最も離れた炭素部分が共有結合している。
【００５５】
このピノセンブリンカルコンはマツバ又は緑茶に存在する。学名Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａのアカマツなどの葉、緑茶、バッカリスなどの植物の茎や葉に広く分布し、また、プロポリスにも含有されている成分で７位に反応性に富んだケトン体を有するため、強い抗酸化作用を呈し、かつ、抗菌作用も認められるものの、ピノセンブリンカルコンの構造が不安定であるという欠点がある。
【００５６】
一方、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸が結合することにより、ピノセンブリンカルコンの構造が安定化される特長を有する。
【００５７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【００５８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、炎症のシグナルの中心を担っているプロテインキナーゼＣの発現を抑制することにより、炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【００５９】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は脂溶性の高い特徴を有するパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが結合していることから小腸や皮膚の細胞膜に馴染みやすく、吸収されやすい特長を有する。
【００６０】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は過剰に摂取され、吸収された場合、その過剰量は血中のエステラーゼにより分解されてピノセンブリンカルコンとそれぞれのパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかに分解され、それぞれは安全性が確認されていることから、前記のピノセンブリンカルコン誘導体も安全性が高い。
【００６１】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがパルミチン酸の場合、パルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６２】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘが１４−メチルパルミチン酸の場合、１４−メチルパルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６３】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがエイコサペンタエン酸の場合、エイコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジン産生抑制作用を呈することから、アラキドン酸より生じる炎症性プロスタグランジンの量を減少させ、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６４】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサヘキサエン酸の場合、ドコサヘキサエン酸の不飽和脂肪酸残基が血小板凝集抑制及び動脈拡張の作用を呈することから、血流が改善され、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサペンタエン酸の場合、ドコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が毛細血管拡張の作用を呈することから、炎症局所の血流が改善され、炎症物が排泄されて抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６６】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがガンマ−リノレン酸の場合、ガンマ−リノレン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジンの反応を抑制させ、抗炎症作用が増加されることから好ましい。
【００６７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがアルファ−リポ酸の場合、アルファ−リポ酸のＳＨ基が抗酸化作用を呈し、酸化ストレスに対する組織の障害が防御されて、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがステアリン酸の場合、ステアリン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００６９】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがメチルステアリン酸の場合、メチルステアリン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【００７０】
また、ピノセンブリンカルコンをマツバ又は緑茶より抽出し、精製することは精製が容易なことから、好ましい。さらに、脂肪酸を魚油や魚類より精製し、また、精製された魚油由来の脂肪酸を用いることは、好ましい。
【００７１】
たとえば、これらの脂肪酸をニッスイ製薬、日水漁業、東洋漁業より入手して酵素を用いた生合成や化学的に合成することができる。
【００７２】
これらの原料から酵素反応によりピノセンブリンカルコン誘導体を得る場合には、エステル結合反応を生じる酵素、たとえば、アマノエンザイム製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどが用いられる。また、化学合成反応による場合には、マグネシウム、アルミニウムなどの金属触媒とともに、加温される。
【００７３】
これらの原料は、反応槽に入れられ、溶媒とともに、反応が行われる。また、前記の反応物は、溶媒を除去されて粗生成物として得ることは、精製に要するコストを削減できることから、好ましい。
【００７４】
目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を天然の素材から抽出し、あるいは、精製することにより得ることができる。天然の素材には、マツバ又は緑茶などの植物、海藻、キノコ、食用動物、食用魚類、軟体動物、昆虫、甲殻類などがある。特に、マツバ、食用魚類の頭部やウナギの頭部は、含量が高いことから、抽出しやすいという特徴がある。
【００７５】
産業上、食用魚類の頭部は食用魚類の加工時に除去され、廃棄物として廃棄されており、利用されていない。この食用魚類の頭部やウナギの頭部を原料として抽出、又は、精製することは廃棄物を有効に利用し、廃棄物の量を軽減することから好ましい。
【００７６】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体を微生物や酵母を用いた発酵により得ることは食用として安全性が確認されており、食経験も豊富であることから好ましく、この場合、用いる微生物としては納豆菌、乳酸菌、紅麹、枯草菌があり、酵母としてはビール酵母や酒精酵母があり、特に、納豆菌はエステル交換作用に優れていることから好ましい。
【００７７】
前記の発酵はマツバ又は緑茶、魚類、魚類の頭部や内臓、大豆や牛乳などの発酵ベースに前記の微生物又は酵母を添加して発酵タンクを用いて実施される。この発酵後、微生物又は酵母と発酵液の混合物から目的とする前記のピノセンブリンカルコン誘導体を得ることができる。
【００７８】
このうち、マツバ又は緑茶とウナギの頭部や内臓は食経験も豊富であり、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を安定的に供給できることから好ましい。
【００７９】
さらに、前記の発酵物から発酵物から目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離する場合、柿の葉エキス含有大豆油を用いて抽出して分離される油溶性部分を採取して得ることは、柿の葉エキス含有大豆油による抗酸化力により物質が安定化され、品質の高い誘導体が分離されることから好ましい。
【００８０】
植物から抽出する場合、学名Ｐｉｎｕｓ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒａのアカマツのマツバ、学名Ｐｉｎｅ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓのセイヨウアカマツのマツバ、クロマツのマツバ、緑茶、ギョウジャニンニク、タマネギ、ニンニク、大豆、ギジギシ、カンゾウ、ツリフネソウ、ハナイカダ、大麦若葉、葛の花、トウガラシ、カキ、梨、栗、緑茶、タラ、ワサビ、ワラビ、稲、小麦、トウモロコシ、ダイコン、菜の花、サクラ、マツ、アオキ、アカネ、アカメガシワ、アケビ、アマチャズル、アマドコロ、アロエ、イカリソウ、イタドリ、イノコズチ、イブキジャコウソウ、ウコギ、ウツボグサ、ウド、ウメ、ウラジロガシ、エビスグサ、オウレン、オオバコ、オケラ、オクラ、オトギリソウ、オナモミ、オミナエシ、カキドオシ、カラスウリ、カラスビシャク、カワラケツメイ、カワラナデシコ、カンアオイ、キクイモ、キキョウ、キササゲ、キハダ、キランソウ、キンミズヒキ、クガイソウ、クサボケ、クズ、クチナシ、コウホネ、コブシ、サイカチ、サボンソウ、サルトリイバラバッケツ、サンシュユ、ジャノヒゲ、シラン、スイカズラ、セリ、センブリ、タムシバ、タラノキ、タンポポ、チガヤ、ツリガネニンジン、ツワブキ、ドクダミ、トチノキ、トチバニンジン、ナンテン、ノイバラ、ハコベ、ハトムギ、ハハコグサ、ヒキオコシ、ヒシ、ヒトツバ、ビワ、フキ、フクジュソウ、フジ、マタタビ、メハジキ、ヤマノイモ、ユキノシタ、ヨモギ、リンドウ、レンギョウ、ロウバイ、ワレモコウの葉、花又は根は、入手しやすいことから好ましい。
【００８１】
抽出する植物としてマツ科マツ属であるアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツ、アンジェリカズサンダーヘッド、アラカワショウ、バンダイショウ、ベニクジャクマツ、クジャクマツ、ニシキマツ、ジャノメクロマツ、オウゴンクロマツ、ビグマエア、サンダーヘッド、トラフマツ、ヤツブサクロマツ、イガゴヨウ、バーストルコーンマツ、アルマンマツ、アルマンパイン、チュウゴクシロマツ、バンクスマツ、ジャックパイン、バンクシアマツ、ジラードスウィーパー、スクーディック、シロマツ、サンコノマツ、シロカワマツ、ハクショウ、ジューンズブルーム、シルヴァーゴースト、カナリーマツ、ヨーロッパハイマツ、コウザンマツ、シャレー、シャモレー、コンパクタグラウカ、ナナ、シルヴァーシーン、ロッジポールマツ、オオミマツ、クールテリ、ビッグコーンパイン、エキナタマツ、エチナ−タマツ、ショートリーフパイン、フレキシマツ、フレクシリスマツ、エクストラブルー、ヴァンデルウォルフスピラミド、ハッコウダゴヨウ、アレッポマツ、ボスニアマツ、チョウセンゴヨウ、チョウセンマツ、ベニマツ、グラウカ、ジャックコービット、オキュラスドラコニス、シルヴァレイ、モンテズママツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウアメリカミヤマゴヨウ、シロマツ、モンタナマツ、スイスコウザンマツ、スイスミヤママツ、オーレア、ビッグツナ、グリーンキャンドル、ハニーコム、ミッチミニ、モップス、プロストラータ、シャーウッドコンパクト、ホワイトバド、ウィンターゴールド、ムグスマツ、プミリオ、ロストラタ、ビショップマツ、ヨーロッパクロマツ、オウシュウクロマツ、オーストリアマツ、ボビーマックレガー、ゴールドフィンガーズ、ヘレナ、ヘルガ、ホーニブルッキアナ、イエデロ、モセリ、ダイオウショウ、ダイオウマツ、ゴヨウマツ、ヒメコマツ、アイヅゴヨウ、アオイ、エンペラー、フクズミ、グラウカ、ジャノメゴヨウ、ネギシゴヨウ、テンペルホフ、ヤツブサゴヨウ、マルミゴヨウマツ、キタゴヨウマツ、パツラマツ、キタゴヨウマツ、マケドニアマツ、フランスカイガンショウ、カイガンショウ、フランスカイガンマツ、イタリアカサマツ、シルバークレスト、パラソルマツ、ポンデローサマツ、ハイマツ、シベリアマツ、プロストラータ、イエスアルパイン、ラジアータマツ、モントレーマツ、ラジアータパイン、レジノサマツ、レッドパイン、リギダマツ、アメリカミツバマツ、ミツバマツ、シャーマンエディー、ストローブマツ、ブルーシャグ、コンパクタ、コニーアイランド、ファスティギアータ、グロボーサ、ゴールデンキャンドルス、グレッグ、マコピン、メリマック、ミヌタ、ナナ、ポールワックスマン、ペンデュラ、ラディアータ、シーアーチン、ユーコン、アンブラキュリフェラ、ウンカテナ、フェルカーデスブルーム、ヨーロッパアカマツ、オウシュウアカマツ、ロシアアカマツ、アルビンス、アンドーラ、アルゲンテアコンパクタ、オーレア、ビューヴロネンシス、ファスティギアータ、ジラードピラミド、クロボーサナナ、グロボーサヴィリディス、ヒルサイドクリーパー、リトルブラリ、ミッチウィーピング、モセリ、ナナ、ナナコンパクタ、リペンス、チュウゴクアカマツ、タブリフォルミス、テーダマツ、タエダマツ、フランキンセンスマツ、クロマツ、オトコマツ、オマツ、バ−ジニアマツ、ヒマラヤゴヨウ、ブータンマツなどの葉、樹皮や実が用いられる。
【００８２】
このうち、アカマツの葉は、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を抽出しやすことから好ましく、かつ、自然廃棄物として廃棄されており、廃棄物を減らし、環境汚染を防ぐことができることから好ましい。
【００８３】
緑茶から抽出する場合、日本産の緑茶、粉茶、中国産のアッサム系の緑茶の葉部、茎又は根は、入手しやすいことから好ましい。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【００８４】
また、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体の分離としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。分離する場合、柿の葉エキス含有大豆油を粗精製の段階で用いることにより、柿の葉エキスによる抗酸化作用が発揮され、目的とする誘導体が安定に維持される。
【００８５】
前記の反応物や組成物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。高度に精製される場合、分離用担体又は樹脂が利用され、精製される。分離用担体又は樹脂としては、表面が後述のようにコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。０．１〜３００μｍの粒度を有するものが好ましく、粒度が細かい程、精度の高い分離が行なわれるが、分離時間が長い欠点がある。
【００８６】
例えば、逆相担体又は樹脂として表面が疎水性化合物でコーティングされたものは、疎水性の高い物質の分離に利用される。陽イオン物質でコーティングされたものは陰イオン性に荷電した物質の分離に適している。
【００８７】
また、陰イオン物質でコーティングされたものは陽イオン性に荷電した物質の分離に適している。特異的な抗体をコーティングした場合には、特異的な物質のみを分離するアフィニティ担体又は樹脂として利用される。
【００８８】
アフィニティ担体又は樹脂は、抗原抗体反応を利用して抗原の特異的な調製に利用される。分配性担体又は樹脂は、シリカゲル（メルク社製）等のように、物質と分離用溶媒の間の分配係数に差異がある場合、それらの物質の単離に利用される。
【００８９】
これらのうち、製造コストを低減することができる点から、吸着性担体又は樹脂、分配性担体又は樹脂、分子篩用担体又は樹脂及びイオン交換担体又は樹脂が好ましい。さらに、分離用溶媒に対して分配係数の差異が大きい点から、逆相担体又は樹脂及び分配性担体又は樹脂はより好ましい。
【００９０】
分離用溶媒として有機溶媒を用いる場合には、有機溶媒に耐性を有する担体又は樹脂が用いられる。また、医薬品製造又は食品製造に利用される担体又は樹脂は好ましい。
【００９１】
これらの点から吸着性担体としてダイヤイオン（三菱化学（株）社製）及びＸＡＤ−２又はＸＡＤ−４（ロームアンドハース社製）、分子篩用担体としてセファデックスＬＨ−２０（アマシャムファルマシア社製）、分配用担体としてシリカゲル、イオン交換担体としてＩＲＡ−４１０（ロームアンドハース社製）、逆相担体としてＤＭ１０２０Ｔ（富士シリシア社製）がより好ましい。これらのうち、ダイヤイオン、セファデックスＬＨ−２０及びＤＭ１０２０Ｔはさらに好ましい。
【００９２】
得られた抽出物は、分離前に分離用担体又は樹脂を膨潤化させるための溶媒に溶解される。その量は、分離効率の点から抽出物の重量に対して１〜５０倍量が好ましく、３〜２０倍量がより好ましい。分離の温度としては物質の安定性の点から４〜３０℃が好ましく、１０〜２５℃がより好ましい。
【００９３】
分離用溶媒には、水、又は、水を含有する低級アルコール、親水性溶媒、親油性溶媒が用いられる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールが用いられるが、食用として利用されているエタノールが好ましい。
【００９４】
セファデックスＬＨ−２０を用いる場合、分離用溶媒には低級アルコールが好ましい。シリカゲルを用いる場合、分離用溶媒にはクロロホルム、メタノール、酢酸又はそれらの混合液が好ましい。ダイヤイオン及びＤＭ１０２０Ｔを用いる場合、分離用溶媒はメタノール、エタノール等の低級アルコール又は低級アルコールと水の混合液が好ましい。
【００９５】
採取後、乾燥又は真空乾燥により溶媒を除去し、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を粉末又は濃縮液として得ることは溶媒による影響を除外できることから、好ましい。前記のピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤、化粧品、衛生用具などに利用される。
【００９６】
医薬品としては、皮膚、全身又は局所の抗炎症剤、抗アレルギー剤、花粉症改善剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤などに利用される。
【００９７】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【００９８】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。
【００９９】
特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。衛生用具ではガーゼ、マスク、花粉対策用のマスク、生理用品などに利用される。また、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０１００】
次に、マツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる前記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（２）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０１０１】
【化７】
【０１０２】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体であり、ピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸のカルボキシル酸から最も離れた炭素が共有結合した誘導体である。
【０１０３】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１０４】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する。また、前記のピノセンブリンカルコン誘導体において、パルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０１０５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はマツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。
【０１０６】
マツバとはアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツの葉であり、神農本草経にも記載され、薬膳料理に古くから利用され、食経験が豊富であり、安全性が確認されている。緑茶は日本産、中国産の緑茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０１０７】
また、化粧品原料としてもマツバエキス又は緑茶葉として利用されている。ここで用いるマツバは日本、韓国、中国、台湾などのアジア、北アメリカ、南アメリカ、オセアニア、アフリカに自然に繁殖したもの、または、栽培されたいずれのマツバでも、用いられ、このうち、日本、中国産のものは、農薬の使用履歴が追跡でき、品質が安定し、安価であることから、好ましい。
【０１０８】
マツバ又は緑茶は新鮮なもの、乾燥されたもののいずれでも良い。
【０１０９】
採取されたマツバ又は緑茶は水道水で洗浄されることは好ましい。
【０１１０】
マツバ又は緑茶は粉砕される。粉砕は、粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【０１１１】
ここで用いられるパルミチン酸は、魚類、リョーショク、不二製油株式会社などのナタネ、ゴマなどの植物より抽出され、精製されたものが、不純物の少ないことから好ましい。
【０１１２】
ここで用いるエステル交換用リパーゼは、エステル交換反応用リパーゼとしては、たとえば、ノボザイム社製のリポザイムやノボザイム４３５、名糖産業社製のリパーゼＰＬやリパーゼＱＬＭ、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどの品質が高いものが用いられ、これらは安全性が確認されていることから、好ましい。
【０１１３】
清浄なステンレス製寸胴などに前記のマツバ又は緑茶の粉砕物、パルミチン酸及びエステル交換用リパーゼが添加され、加温される。ここに、溶媒として水道水を添加することは、反応を円滑にすることから好ましい。
【０１１４】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、パルミチン酸は０．０２〜０．５重量が好ましく、エステル交換用リパーゼは０．０００１〜０．０４重量が好ましい。
【０１１５】
前記の加温の温度として、１０〜３０℃が好ましく、１３〜２７℃がより好ましい。
【０１１６】
前記の加温の時間として、１〜２４時間が好ましく、２〜１４時間がより好ましい。
【０１１７】
前記の加温は、攪拌されながら、行うことが好ましく、１分間当たり８〜１２０回の速度が好ましい。
【０１１８】
加温された後に、冷却される。冷却方法は、自然冷却又は水冷が好ましい。
【０１１９】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０１２０】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０１２１】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０１２２】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０１２３】
添加するマツバの粉砕物１重量に対し、添加する柿の葉エキス含有大豆油は０．４〜３重量が好ましい。
【０１２４】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０１２５】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０１２６】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０１２７】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０１２８】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０１２９】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０１３０】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０１３１】
次に、マツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる前記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘが１４−メチルパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（３）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０１３２】
【化８】
【０１３３】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体であり、ピノセンブリンカルコンの８位に、１４−メチルパルミチン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合した誘導体である。
【０１３４】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１３５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１３６】
このピノセンブリンカルコン誘導体は１４−メチルパルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０１３７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はマツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。
【０１３８】
マツバとはアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツの葉であり、神農本草経にも記載され、薬膳料理に古くから利用され、食経験が豊富であり、安全性が確認されている。緑茶は日本産の緑茶アッサム系の緑茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０１３９】
また、化粧品原料としてもマツバエキス又は緑茶葉として利用されている。
【０１４０】
ここで用いるマツバは日本、韓国、中国、台湾などのアジア、北アメリカ、南アメリカ、オセアニア、アフリカに自然に繁殖したもの、または、栽培されたいずれのマツバでも、用いられる。このうち、日本、中国産のものは、農薬の使用履歴が追跡でき、品質が安定し、安価であることから、好ましい。
【０１４１】
マツバ又は緑茶は新鮮なもの、乾燥されたもののいずれでも良い。
【０１４２】
採取されたマツバ又は緑茶は水道水で洗浄されることは好ましい。
【０１４３】
マツバ又は緑茶は粉砕される。粉砕は、粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【０１４４】
ここで用いられる１４−メチルパルミチン酸は、リョーショク、オリザ油化株式会社、不二製油株式会社産の魚類、ゴマ、ナタネ、クルミなどより抽出され、精製されたものが、不純物の少ないことから好ましい。
【０１４５】
ここで用いるエステル交換用リパーゼは、エステル交換反応用リパーゼであり、たとえば、ノボザイム社製のリポザイムやノボザイム４３５、名糖産業社製のリパーゼＰＬやリパーゼＱＬＭ、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどの品質が高いものであり、これらは安全性が高いことから、好ましい。
【０１４６】
清浄なステンレス製寸胴などに前記のマツバ又は緑茶の粉砕物、１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼが添加され、加温される。ここに、溶媒として水道水を添加することは、反応を円滑にすることから好ましい。
【０１４７】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、１４−メチルパルミチン酸は０．０２〜０．５重量が好ましく、エステル交換用リパーゼは０．０００１〜０．０４重量が好ましい。
【０１４８】
前記の加温の温度として、１０〜３０℃が好ましく、１３〜２７℃がより好ましい。
【０１４９】
前記の加温の時間として、１〜２４時間が好ましく、２〜１４時間がより好ましい。
【０１５０】
前記の加温は、攪拌されながら、行うことが好ましく、１分間当たり８〜１２０回の速度が好ましい。
【０１５１】
加温された後に、冷却される。冷却方法は、自然冷却又は水冷が好ましい。
【０１５２】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０１５３】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を酸化から防御し、その構造を安定的に維持することができる。
【０１５４】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０１５５】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が用いられ、農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０１５６】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、添加する柿の葉エキス含有大豆油は０．４〜３重量が好ましい。
【０１５７】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０１５８】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０１５９】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０１６０】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０１６１】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０１６２】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０１６３】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０１６４】
次に、マツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる前記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがエイコサペンタエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（４）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０１６５】
【化９】
【０１６６】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体であり、ピノセンブリンカルコンの８位に、エイコサペンタエン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合した誘導体である。
【０１６７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１６８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０１６９】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は、エイコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジン産生抑制作用を呈することから、アラキドン酸より生じる炎症性プロスタグランジンの量を減少させ、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０１７０】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はマツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。
【０１７１】
マツバとはアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツの葉であり、神農本草経にも記載され、薬膳料理に古くから利用され、食経験が豊富であり、安全性が確認されている。緑茶は日本産や中国産の緑茶やアッサム系の緑茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０１７２】
また、化粧品原料としてもマツバエキス又は緑茶葉として利用されている。
【０１７３】
ここで用いるマツバは日本、韓国、中国、台湾などのアジア、北アメリカ、南アメリカ、オセアニア、アフリカに自然に繁殖したもの、または、栽培されたいずれのマツバでも、用いられる。このうち、日本、中国産のものは、農薬の使用履歴が追跡でき、品質が安定し、安価であることから、好ましい。
【０１７４】
マツバ又は緑茶は新鮮なもの、乾燥されたもののいずれでも良い。
【０１７５】
採取されたマツバ又は緑茶は水道水で洗浄されることは好ましい。
【０１７６】
マツバ又は緑茶は粉砕される。粉砕は、粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【０１７７】
ここで用いられるエイコサペンタエン酸は、東洋水産株式会社、日水製薬株式会社製造のイワシ、サバなどからの魚類から抽出、精製された製品が、品質が高く、不純物も少ないことから好ましい。
【０１７８】
ここで用いるエステル交換用リパーゼは、エステル交換反応用リパーゼとしては、たとえば、ノボザイム社製のリポザイムやノボザイム４３５、名糖産業社製のリパーゼＰＬやリパーゼＱＬＭ、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどの品質が高いものが用いられ、これらは安全性が確認されていることから、好ましい。
【０１７９】
清浄なステンレス製寸胴などに前記のマツバ又は緑茶の粉砕物、エイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼが添加され、加温される。ここに、溶媒として水道水を添加することは、反応を円滑にすることから好ましい。
【０１８０】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、エイコサペンタエン酸は０．１３〜０．８重量が好ましく、エステル交換用リパーゼは０．０００１〜０．０４重量が好ましい。
【０１８１】
前記の加温の温度として、１０〜３０℃が好ましく、１８〜２５℃がより好ましい。
【０１８２】
前記の加温の時間として、１〜２４時間が好ましく、３〜１２時間がより好ましい。
【０１８３】
前記の加温は、攪拌されながら、行うことが好ましく、１分間当たり１０〜１００回の速度が好ましい。
【０１８４】
加温された後に、冷却される。冷却方法は、自然冷却又は水冷が好ましい。
【０１８５】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０１８６】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０１８７】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０１８８】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０１８９】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、添加する柿の葉エキス含有大豆油は０．４〜３重量が好ましい。
【０１９０】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０１９１】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０１９２】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０１９３】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０１９４】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０１９５】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０１９６】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０１９７】
次に、マツバ又は緑茶の粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる前記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサヘキサエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（５）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０１９８】
【化１０】
【０１９９】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体であり、ピノセンブリンカルコンの８位に、ドコサヘキサエン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合した誘導体である。
【０２００】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０２０１】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０２０２】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は、ドコサヘキサエン酸の不飽和脂肪酸残基が血小板凝集抑制及び動脈拡張の作用を呈することから、血流が改善され、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２０３】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はマツバの粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる。
【０２０４】
マツバとはアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツの葉であり、神農本草経にも記載され、薬膳料理に古くから利用され、食経験が豊富であり、安全性が確認されている。緑茶は日本産や中国産の緑茶やアッサム系の茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０２０５】
また、化粧品原料としてもマツバエキス又は緑茶葉として利用されている。
【０２０６】
ここで用いるマツバは日本、韓国、中国、台湾などのアジア、北アメリカ、南アメリカ、オセアニア、アフリカに自然に繁殖したもの、または、栽培されたいずれのマツバでも、用いられる。このうち、日本、中国産のものは、農薬の使用履歴が追跡でき、品質が安定し、安価であることから、好ましい。
【０２０７】
マツバ又は緑茶は新鮮なもの、乾燥されたもののいずれでも良い。
【０２０８】
採取されたマツバ又は緑茶は水道水で洗浄されることは好ましい。
【０２０９】
マツバ又は緑茶は粉砕される。粉砕は、粉砕機として株式会社奈良機械製作所製の自由ミル、スーパー自由ミル、サンプルミル、ゴブリン、スーパークリーンミル、マイクロス、減圧乾燥機として東洋理工製の小型減圧乾燥機、株式会社マツイ製の小型減圧伝熱式乾燥機ＤＰＴＨ−４０、エーキューエム九州テクノス株式会社製のクリーンドライＶＤ−７、ＶＤ−２０などが用いられる。
【０２１０】
ここで用いられるドコサヘキサエン酸は、東洋水産株式会社、日水製薬株式会社、日本水産株式会社製の藻類、イワシ、サバなどの魚類より抽出し、精製されたものが用いられ。これらは品質が高く、不純物が少ない。
【０２１１】
ここで用いるエステル交換用リパーゼは、エステル交換反応用リパーゼとしては、たとえば、ノボザイム社製のリポザイムやノボザイム４３５、名糖産業社製のリパーゼＰＬやリパーゼＱＬＭ、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇ、リパーゼＧ「アマノ」５０、リパーゼＦ−ＡＰ１５、ニューラーゼＦ３Ｇなどの品質が高いものが用いられ、これらは安全性が確認されていることから、好ましい。
【０２１２】
清浄なステンレス製寸胴などに前記のマツバ又は緑茶の粉砕物、ドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼが添加され、加温される。ここに、溶媒として水道水を添加することは、反応を円滑にすることから好ましい。
【０２１３】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、ドコサヘキサエン酸は０．２３〜０．８重量が好ましく、エステル交換用リパーゼは０．０００１〜０．０４重量が好ましい。
【０２１４】
前記の加温の温度として、１０〜３０℃が好ましく、１８〜２５℃がより好ましい。
【０２１５】
前記の加温の時間として、１〜２４時間が好ましく、３〜１２時間がより好ましい。
【０２１６】
前記の加温は、攪拌されながら、行うことが好ましく、１分間当たり１０〜１００回の速度が好ましい。
【０２１７】
加温された後に、冷却される。冷却方法は、自然冷却又は水冷が好ましい。
【０２１８】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０２１９】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０２２０】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０２２１】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０２２２】
添加するマツバ又は緑茶の粉砕物１重量に対し、添加する柿の葉エキス含有大豆油は０．４〜３重量が好ましい。
【０２２３】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０２２４】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０２２５】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０２２６】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０２２７】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０２２８】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０２２９】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０２３０】
次に、食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【０２３１】
ここでいう炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体とは、前記のピノセンブリンカルコン誘導体である。
【０２３２】
すなわち、ピノセンブリンカルコンの８位の位置の水素に代わりパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが結合した誘導体である。
【０２３３】
このピノセンブリンカルコン誘導体は、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかの物質のカルボン酸基から最も離れた炭素部分が共有結合している。
【０２３４】
ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸が結合することにより、ピノセンブリンカルコンの構造が安定化される特長を有する。
【０２３５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０２３６】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、炎症のシグナルの中心を担っているプロテインキナーゼＣの発現を抑制することにより、炎症性サイトカインの産生を抑制する。
【０２３７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は脂溶性の高い特徴を有するパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが結合していることから小腸や皮膚の細胞膜に馴染みやすく、吸収されやすい特長を有する。
【０２３８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は過剰に摂取され、吸収された場合、その過剰量は血中のエステラーゼにより分解されてピノセンブリンカルコンとそれぞれのパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸のいずれかに分解され、それぞれは安全性が確認されていることから、前記のピノセンブリンカルコン誘導体も安全性が高い。
【０２３９】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがパルミチン酸の場合、パルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４０】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘが１４−メチルパルミチン酸の場合、１４−メチルパルミチン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４１】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがエイコサペンタエン酸の場合、エイコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジン産生抑制作用を呈することから、アラキドン酸より生じる炎症性プロスタグランジンの量を減少させ、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４２】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサヘキサエン酸の場合、ドコサヘキサエン酸の不飽和脂肪酸残基が血小板凝集抑制及び動脈拡張の作用を呈することから、血流が改善され、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４３】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがドコサペンタエン酸の場合、ドコサペンタエン酸の不飽和脂肪酸残基が毛細血管拡張の作用を呈することから、炎症局所の血流が改善され、炎症物が排泄されて抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４４】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがガンマ−リノレン酸の場合、ガンマ−リノレン酸の不飽和脂肪酸残基が炎症性プロスタグランジンの反応を抑制させ、抗炎症作用が増加されることから好ましい。
【０２４５】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがアルファ−リポ酸の場合、アルファ−リポ酸のＳＨ基が抗酸化作用を呈し、酸化ストレスに対する組織の障害が防御されて、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４６】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがステアリン酸の場合、ステアリン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４７】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体のうち、Ｘがメチルステアリン酸の場合、メチルステアリン酸の飽和脂肪酸残基が細胞膜に浸透し、細胞内に吸収されやすく、標的となるプロテインキナーゼＣに働きやすく、抗炎症作用が増強されることから好ましい。
【０２４８】
前記のピノセンブリンカルコン誘導体は、食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られるものである。ここでいう食用魚類としては、食用に用いる魚類のことであり、このうち、ウナギは食経験が豊富である。
【０２４９】
ウナギの頭部や内臓は食経験もあり、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸を含んでいることから好ましい。
【０２５０】
また、 漁業では加工過程においてウナギの頭部や内臓は廃棄されることから、廃棄物の有用利用ができることから好ましい。
【０２５１】
このうち、浜名湖湖畔で養殖されて成長したウナギは、好ましい。また、解体場で屠殺後解体し、頭部及び内臓を切断し、採取することは好ましい。
【０２５２】
集められたウナギの頭部及び内臓を包丁により裁断し、中山技術研究所製ＤＭ−６にて粉砕することは好ましい。
【０２５３】
ここでいうマツバとは、マツ科マツ属であるアカマツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウ、クロマツ、アンジェリカズサンダーヘッド、アラカワショウ、バンダイショウ、ベニクジャクマツ、クジャクマツ、ニシキマツ、ジャノメクロマツ、オウゴンクロマツ、ビグマエア、サンダーヘッド、トラフマツ、ヤツブサクロマツ、イガゴヨウ、バーストルコーンマツ、アルマンマツ、アルマンパイン、チュウゴクシロマツ、バンクスマツ、ジャックパイン、バンクシアマツ、ジラードスウィーパー、スクーディック、シロマツ、サンコノマツ、シロカワマツ、ハクショウ、ジューンズブルーム、シルヴァーゴースト、カナリーマツ、ヨーロッパハイマツ、コウザンマツ、シャレー、シャモレー、コンパクタグラウカ、ナナ、シルヴァーシーン、ロッジポールマツ、オオミマツ、クールテリ、ビッグコーンパイン、エキナタマツ、エチナ−タマツ、ショートリーフパイン、フレキシマツ、フレクシリスマツ、エクストラブルー、ヴァンデルウォルフスピラミド、ハッコウダゴヨウ、アレッポマツ、ボスニアマツ、チョウセンゴヨウ、チョウセンマツ、ベニマツ、グラウカ、ジャックコービット、オキュラスドラコニス、シルヴァレイ、モンテズママツ、ロウグロウ、モーリスアロボレイタムウィッチスブルーム、ジャノメアカマツ、シダレアカマツ、タンヨウショウ、タギョウショウアメリカミヤマゴヨウ、シロマツ、モンタナマツ、スイスコウザンマツ、スイスミヤママツ、オーレア、ビッグツナ、グリーンキャンドル、ハニーコム、ミッチミニ、モップス、プロストラータ、シャーウッドコンパクト、ホワイトバド、ウィンターゴールド、ムグスマツ、プミリオ、ロストラタ、ビショップマツ、ヨーロッパクロマツ、オウシュウクロマツ、オーストリアマツ、ボビーマックレガー、ゴールドフィンガーズ、ヘレナ、ヘルガ、ホーニブルッキアナ、イエデロ、モセリ、ダイオウショウ、ダイオウマツ、ゴヨウマツ、ヒメコマツ、アイヅゴヨウ、アオイ、エンペラー、フクズミ、グラウカ、ジャノメゴヨウ、ネギシゴヨウ、テンペルホフ、ヤツブサゴヨウ、マルミゴヨウマツ、キタゴヨウマツ、パツラマツ、キタゴヨウマツ、マケドニアマツ、フランスカイガンショウ、カイガンショウ、フランスカイガンマツ、イタリアカサマツ、シルバークレスト、パラソルマツ、ポンデローサマツ、ハイマツ、シベリアマツ、プロストラータ、イエスアルパイン、ラジアータマツ、モントレーマツ、ラジアータパイン、レジノサマツ、レッドパイン、リギダマツ、アメリカミツバマツ、ミツバマツ、シャーマンエディー、ストローブマツ、ブルーシャグ、コンパクタ、コニーアイランド、ファスティギアータ、グロボーサ、ゴールデンキャンドルス、グレッグ、マコピン、メリマック、ミヌタ、ナナ、ポールワックスマン、ペンデュラ、ラディアータ、シーアーチン、ユーコン、アンブラキュリフェラ、ウンカテナ、フェルカーデスブルーム、ヨーロッパアカマツ、オウシュウアカマツ、ロシアアカマツ、アルビンス、アンドーラ、アルゲンテアコンパクタ、オーレア、ビューヴロネンシス、ファスティギアータ、ジラードピラミド、クロボーサナナ、グロボーサヴィリディス、ヒルサイドクリーパー、リトルブラリ、ミッチウィーピング、モセリ、ナナ、ナナコンパクタ、リペンス、チュウゴクアカマツ、タブリフォルミス、テーダマツ、タエダマツ、フランキンセンスマツ、クロマツ、オトコマツ、オマツ、バ−ジニアマツ、ヒマラヤゴヨウ、ブータンマツなどマツの葉である。
【０２５４】
このうち、アカマツの葉は、目的とするピノセンブリンカルコンを多く含有し、抽出しやすことから好ましく、かつ、自然廃棄物として廃棄されており、廃棄物を減らし、環境汚染を防ぐことができることから好ましい。
【０２５５】
静岡産の無農薬で栽培された緑茶を用いることは、好ましい。また、緑茶は日本産や中国産の緑茶が用いられる。ここでいう緑茶とは、代表的には学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓであり、Ｃａｍｅｌｌｉａ属の全ての緑茶を含む。
【０２５６】
マツバ又は緑茶は中山技術研究所製ＤＭ−６などの粉砕機で粉砕されることは好ましい。
ここでいう大豆は、日本産、中国産、アメリカ産、ロシア産などいずれの産地のものも、利用でき、使用に際して中山技術研究所製ＤＭ−６などの粉砕機で粉砕されることが好ましい。
【０２５７】
ここでいう納豆菌とは、納豆や食品の加工用に用いられる枯草菌の一種である。納豆素本舗製の納豆菌は発酵に適していることから、好ましい。
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０２５８】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０２５９】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０２６０】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉は農薬の混入を回避できる点から好ましい。
【０２６１】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０２６２】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０２６３】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０２６４】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０２６５】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０２６６】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除くために効果的である。
【０２６７】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０２６８】
前記の反応物は柿の葉エキス含有大豆油により分離される。前記の反応物は、油溶性が高いことから、柿の葉エキス含有大豆油に溶解する。
【０２６９】
柿の葉エキス含有大豆油は、柿の葉の粉砕物に大豆油を添加して抽出される油溶性ポリフェノールを含有する抗酸化作用に優れた大豆油であり、目的とする誘導体を安定的に分離できる。
【０２７０】
柿の葉エキス含有大豆油に用いる柿の葉は、日本産、中国産、台湾産のいずれでも用いられる。
【０２７１】
農薬を使用せずに栽培された柿の葉が農薬による危険性を回避できることから好ましい。
【０２７２】
前記の発酵に関するそれぞれの添加量は、食用魚類１重量に対し、マツバ又は緑茶は０．０３〜０．３重量が好ましく、大豆は０．１〜３重量が好ましく、納豆菌は０．００１〜０．０３重量が好ましい。
【０２７３】
前記の発酵は清浄な培養用タンクで実施され、水道水により前記の材料を混合することは好ましい。
【０２７４】
また、この発酵は、３０〜４０℃に加温され、発酵は、２４〜７２時間行われる。発酵後に、抽出を効率良く実施するために、水道水で希釈される。
【０２７５】
さらに、発酵物は、柿の葉エキス含有大豆油で抽出される。前記の発酵物１重量に対して柿の葉エキス含有大豆油の添加量は、０．０２〜２重量である。この場合、攪拌による抽出が好ましく、攪拌温度は１０〜３０℃が好ましく、攪拌時間は０．５〜３時間が好ましい。
【０２７６】
前記の攪拌後、上層に分離した柿の葉エキス含有大豆油を採取し、水分を除去することは好ましい。水分を除去するために、東洋技研製ＴＧＤ−２５０ＬＦ２などの乾燥機が用いられる。
【０２７７】
分離されたピノセンブリンカルコン誘導体は、体内に吸収された後、過剰量は、エステラーゼにより分解され、さらに、肝臓において代謝されることから、安全性も高く、副作用も少ない。
【０２７８】
前記の反応物から、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を分離し、精製することは純度の高い物質として摂取量を減少させることができる点から好ましい。この精製の方法としては、分離用の樹脂などの精製操作を利用することが好ましい。
【０２７９】
分離用担体又は樹脂としては、表面がコーティングされた、多孔性の多糖類、酸化珪素化合物、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリプロピレン、スチレン−ビニルベンゼン共重合体等が用いられる。適切な分離用溶媒により分離し、精製され、溶媒を除去して目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得ることは好ましい。
【０２８０】
このようにして得られたピノセンブリンカルコン誘導体は、液体又は粉末として得られる。得られたピノセンブリンカルコン誘導体は医薬品、食品製剤又は化粧品に利用される。医薬品としては、抗炎症剤、抗肥満剤、脂肪分解剤、しわ除去剤、脂肪肝抑制剤、高脂血症改善剤、抗動脈硬化剤、抗アレルギー剤などに利用される。
【０２８１】
前記の食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０２８２】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０２８３】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０２８４】
次に、前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる食品製剤について説明する。
【０２８５】
ここでいう炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体とは、粗生成物、混合物、合成された物、抽出して精製された純度の高い物質のいずれでもよく、前記のピノセンブリンカルコン誘導体とは、ピノセンブリンカルコンに、Ｘの位置にパルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが共有結合した誘導体である。
【０２８６】
また、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０２８７】
さらに、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０２８８】
アスタキサンチンはカロチノイド系色素の一種であり、ヘマトコッカス藻が太陽光に当たり生成される赤色の色素である。サケ、イクラにも含有される天然の物質であり、その安全性と強い抗酸化力が検証されている。
【０２８９】
アスタキサンチンはヘマトコッカス藻を培養した後に、炭酸ガスを用いた超臨界抽出により得られる。
【０２９０】
武田紙器株式会社、富士化学株式会社製のアスタキサンチンは品質が高く、不純物が少ないことから、好ましい。
【０２９１】
柿の葉エキス含有大豆油は、日本、中国、アジア産の富有柿、次郎柿、平核無柿、甲州百目柿、四溝柿、堂上蜂屋柿の葉を粉砕機により粉砕され、大豆油により抽出して得られる。
【０２９２】
柿の葉の粉砕された原料を、ヤクルト薬品工業株式会社製のオノズカＲ−１０、Ｙ−ＮＣ、アマノエンザイム株式会社製のセルラーゼ Ａ「アマノ」３、セルラーゼ Ｔ「アマノ」４などのセルラーゼにより処理することは、抽出効率が向上することから好ましい。
【０２９３】
前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、添加されるアスタキサンチンは０．０１〜０．５重量であり、柿の葉エキス含有大豆油は０．０１〜０．５重量であり、これにより組成物が得られる。
【０２９４】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、アスタキサンチンの重量が０．０１重量を下回る場合、目的とする組成物が十分に得られないおそれがある。
【０２９５】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、アスタキサンチンの重量が０．５重量を上回る場合、ピノセンブリンカルコン誘導体の溶解性が低下し、析出するおそれがある。
【０２９６】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、柿の葉エキス含有大豆油の重量が０．０１重量を下回る場合、目的とする組成物が十分に得られないおそれがある。
【０２９７】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、柿の葉エキス含有大豆油の重量が０．５重量を上回る場合、ピノセンブリンカルコン誘導体の溶解性が低下し、析出するおそれがある。
【０２９８】
前記の組成物を得るために、混合後も加温されることは好ましい。加温条件として温度は３０〜４５℃であり、加温時間は６〜４０時間である。
【０２９９】
加温温度が３０℃を下回る場合、十分な反応が生じないおそれがある。加温温度が４５℃を上回る場合、酸化により生成された反応物が褐色に変色するおそれがある。加温時間が６時間を下回る場合、十分な生成物が得られないおそれがある。加温時間が４０時間を上回る場合、酸化により生成された生成物が褐色に変色するおそれがある。
【０３００】
この組成物は、前記のピノセンブリンカルコン誘導体を少しずつ、持続的に放出させて、持続性組成物となることから、好ましい。
【０３０１】
また、このように構成することにより、ピノセンブリンカルコン誘導体がアスタキサンチンの抗酸化力により安定に維持されて酸化による分解が抑制される。特に、不飽和脂肪酸の二重結合が酸化から守られて構造を維持する。
【０３０２】
さらに、前記の組成物が他の原料とともに加工され、食品製剤になる。この場合、種々の食品素材又は飲料品素材に添加することによって、例えば、粉末状、錠剤状、液状（ドリンク剤等）、カプセル状等の形状の食品製剤にすることができる。また、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤等を適宜添加してもよい。
【０３０３】
前記の食品製剤は、１日数回に分けて経口摂取される。１日の摂取量は０．２〜１０ｇが好ましく、０．３〜６ｇがより好ましく、０．５〜４ｇがさらに好ましい。１日の摂取量が、０．２ｇを下回る場合、十分な抗炎症作用が発揮されないおそれがある。１日の摂取量が、１０ｇを越える場合、コストが高くなるおそれがある。上記の他に、飴、せんべい、クッキー、飲料等の形態で使用することができる。
【０３０４】
ここでいう食品製剤とは、人間が食する保健機能食品、健康補助食品、一般食品、病院で用いる病院用食品、また、動物用の飼料又はペット用サプリメント、ペットフードである。
【０３０５】
この食品製剤は、抗炎症、鼻炎防止、花粉症防止、皮膚炎の予防、筋肉痛や筋肉疲労の予防、疲労回復、滋養強壮、肝臓機能の維持の目的などで使用される。
【０３０６】
次に、前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品について説明する。
【０３０７】
ここでいう炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体とは、粗生成物、混合物、合成された物、抽出して精製された純度の高い物質のいずれでもよく、前記のピノセンブリンカルコン誘導体とは、ピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが共有結合した誘導体である。
【０３０８】
また、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０３０９】
さらに、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０３１０】
アスタキサンチンはカロチノイド系色素の一種であり、ヘマトコッカス藻が太陽光に当たり生成される赤色の色素である。サケ、イクラにも含有される天然の物質であり、その安全性と強い抗酸化力が検証されている。
【０３１１】
アスタキサンチンはヘマトコッカス藻を培養した後に、炭酸ガスを用いた超臨界抽出により得られる。
【０３１２】
武田紙器株式会社、富士化学株式会社製のアスタキサンチンは品質が高く、不純物が少ないことから、好ましい。
【０３１３】
柿の葉エキス含有大豆油は、日本、中国、アジア産の富有柿、次郎柿、平核無柿、甲州百目柿、四溝柿、堂上蜂屋柿の葉を粉砕機により粉砕され、大豆油により抽出して得られる。
【０３１４】
柿の葉の粉砕された原料を、ヤクルト薬品工業株式会社製のオノズカＲ−１０、Ｙ−ＮＣ、アマノエンザイム株式会社製のセルラーゼ Ａ「アマノ」３、セルラーゼ Ｔ「アマノ」４などのセルラーゼにより処理することは、抽出効率が向上することから好ましい。
【０３１５】
前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、添加されるアスタキサンチンは０．００６〜０．４重量であり、柿の葉エキス含有大豆油は０．０５〜０．８重量であり、これにより組成物が得られる。
【０３１６】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、アスタキサンチンの重量が０．００６重量を下回る場合、目的とする組成物が十分に得られないおそれがある。
【０３１７】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、アスタキサンチンの重量が０．４重量を上回る場合、ピノセンブリンカルコン誘導体の溶解性が低下し、析出するおそれがある。
【０３１８】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、柿の葉エキス含有大豆油の重量が０．０５重量を下回る場合、目的とする組成物が十分に得られないおそれがある。
【０３１９】
ピノセンブリンカルコン誘導体１重量に対し、柿の葉エキス含有大豆油の重量が０．８重量を上回る場合、ピノセンブリンカルコン誘導体の溶解性が低下し、析出するおそれがある。
【０３２０】
前記の組成物を得るために、混合後も加温されることは好ましい。加温条件として温度は３０〜４５℃であり、加温時間は６〜４０時間である。
【０３２１】
加温温度が３０℃を下回る場合、十分な反応が生じないおそれがある。加温温度が４５℃を上回る場合、酸化により生成された反応物が褐色に変色するおそれがある。加温時間が６時間を下回る場合、十分な生成物が得られないおそれがある。
【０３２２】
加温時間が４０時間を上回る場合、酸化により生成された生成物が褐色に変色するおそれがある。
【０３２３】
この組成物は、前記のピノセンブリンカルコン誘導体を少しずつ、持続的に放出させて、持続性組成物となることから、好ましい。
【０３２４】
また、このように構成することにより、ピノセンブリンカルコン誘導体がアスタキサンチンの抗酸化力により安定に維持されて酸化による分解が抑制される。特に、不飽和脂肪酸の二重結合が酸化から守られて構造を維持する。
【０３２５】
さらに、化粧品として前記の組成物が他の原料とともに加工される。その後、常法に従って油分、界面活性化剤、ビタミン剤、紫外線吸収剤、増粘剤、保湿剤、副素材等とともに用いることができる。
【０３２６】
化粧水、クリーム、軟膏、ローション、乳液、パック、オイル、石鹸、洗顔料、香料、オーディコロン、浴用剤、シャンプー、リンス等の形態とすることができる。化粧品製剤の形態は任意であり、溶液状、クリーム状、ペースト状、ゲル状、ジェル状、固形状又は粉末状として用いることができる。
【０３２７】
化粧品として皮膚に１日数回に分けて塗布される。１日の塗布量は０．０１〜１０ｇが好ましく、０．０５〜３ｇがより好ましく、０．１〜２ｇがさらに好ましい。１日の塗布量が、０．０１ｇを下回る場合、しわやたるみの治療または防止効果が発揮されないおそれがある。１日の塗布量が、１０ｇを越える場合、コストが高くなるおそれがある。
【０３２８】
ここでいう化粧品とは、人間に用いる化粧品である基礎化粧品、美白化粧品、毛髪洗浄剤、トリートメント剤、染め剤、育毛剤、養毛剤、ボディウォッシュ、医薬部外品である。その他に、動物に用いる皮膚改善剤又はペット用シャンプー、ボディウォッシュである。
【０３２９】
この化粧品は炎症性サイトカインの産生を抑制することにより抗炎症作用を呈し、また、皮膚局所の血管拡張作用やリンバ管の拡張作用を呈することから、日焼けなどの炎症により発生したしわやたるみの抑制又は生成の予防に効果的である。
【０３３０】
特に、日焼けによる炎症に対して抗炎症作用を発揮し、しわやたるみの原因を取り除く。
【０３３１】
さらに、この化粧品は炎症性サイトカインが多量に産生されるアトピー性皮膚炎に対して優れた治療または予防的な働きを呈する。
【０３３２】
次に、前記の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤について説明する。
【０３３３】
ここでいう炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体とは、粗生成物、混合物、合成された物、抽出して精製された純度の高い物質のいずれでもよく、前記のピノセンブリンカルコン誘導体とは、ピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つが共有結合した誘導体である。
【０３３４】
また、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体はインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−８やＴＮＦアルファなどの炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０３３５】
さらに、ここでいうピノセンブリンカルコン誘導体は単球、マクロファージ、好中球などの炎症性細胞の細胞膜を通過し、核内に移動してＮＦ−カッパＢやＮＦ−ＩＬ６などの転写因子に作用し、転写因子が炎症性サイトカインの遺伝子レベルの発現を抑制して炎症性サイトカインの産生を抑制する誘導体である。
【０３３６】
医薬品として用いる場合には、不純物による影響を除去することが必要となるために、酵素反応により合成され、溶媒の残留の少ない前記の構造のピノセンブリンカルコン誘導体を用いることが好ましい。
【０３３７】
医薬品として経口剤又は非経口剤として利用され、医薬部外品としては、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤、石鹸、歯磨き粉等に配合されて利用される。
【０３３８】
経口剤としては、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、ドリンク剤等が挙げられる。前記の錠剤及びカプセル剤に混和される場合には、結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤等とともに用いることができる。前記の錠剤は、シェラック又は砂糖で被覆することもできる。
【０３３９】
また、前記のカプセル剤の場合には、上記の材料にさらに油脂等の液体担体を含有させることができる。前記のシロップ剤及びドリンク剤の場合には、甘味剤、防腐剤、色素香味剤等を含有させることができる。
【０３４０】
非経口剤としては、軟膏剤、クリーム剤、水剤等の外用剤の他に、注射剤が挙げられる。ここで用いる外用剤の基材としては、ワセリン、パラフィン、油脂類、ラノリン、マクロゴールド等が用いられ、通常の方法によって軟膏剤やクリーム剤等とすることができる。
【０３４１】
注射剤には、液剤があり、その他、凍結乾燥剤がある。これは使用時、注射用蒸留水や生理食塩液等に無菌的に溶解して用いられる。
【０３４２】
ここでいう抗炎症剤は、皮膚や全身又は局所の炎症に対して治療又は予防効果を目的とした医薬品又は医薬部外品製剤である。
【０３４３】
全身の炎症には、発熱、発赤、浮腫などがあり、臓器ごとの炎症として、肺炎、脳炎、咽頭炎、気管支炎、角膜炎、腸炎、胃炎、十二指腸炎、大腸炎、肝炎、腎炎、膀胱炎、膵炎、神経炎、筋肉炎、動脈炎、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、日焼けによる皮膚炎などであり、特に、日焼けによる皮膚炎に対しては外用剤として利用される。
【０３４４】
これらの全身及び局所の書く臓器の炎症に対して炎症性サイトカインの産生を抑制する作用機序により効果を発揮する。
【０３４５】
加えて、肥満した家畜、ペットの治療を目的とした獣医用医薬品としても利用できる。
【０３４６】
以下、前記実施形態を実施例及び試験例を用いて具体的に説明する。なお、以下の説明は例であり、形態を変化させて実施することができる。
【０３４７】
まず、発酵により得られるピノセンブリンカルコン誘導体について説明する。
【実施例１】
【０３４８】
浜名湖湖畔で養殖されて成長したウナギ（学名Ａｎｇｕｉｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ）１００匹を原料として用いた。成長したウナギを解体場で屠殺後解体し、頭部及び内臓を切断し、採取した。体部は、食用に供し、頭部及び内臓を集めた。
【０３４９】
集められた頭部及び内臓１．８ｋｇを包丁により裁断し、中山技術研究所製ＤＭ−６にて粉砕した。
【０３５０】
これを清浄な培養用タンクに入れ、水道水３．５Ｌを添加した。これに無農薬で栽培された静岡県で採取されたアカマツの葉、すなわち、マツバの１．８ｋｇを水道水で洗浄後、乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により乾燥し、ハサミで裁断し、中山技術研究所製ＤＭ−６にて粉砕した。この粉砕物１８０ｇを前記の寸胴に添加した。これに、中国産大豆を水洗後、３６分間３６℃に加温し、さらに大豆粉砕物１．８ｋｇを添加した。
【０３５１】
これに、納豆素本舗製の納豆菌１８ｇを添加した。３６℃の温度で、攪拌しながら、４７時間発酵した。
【０３５２】
発酵が終了したタンクに、水道水３．６Ｌを添加した。これを発酵物とした。
【０３５３】
一方、無農薬で栽培された岐阜県産の富有柿の若葉の２．１ｋｇを乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により１１時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で粒径約０．７マイクロｍに粉砕した。
【０３５４】
この粉砕物１．９ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１９ｇを添加し、２７℃で１１時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油を添加し、攪拌して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３５５】
前記の発酵物に、前記の柿の葉エキス含有大豆油の１ｋｇを添加して１時間攪拌し、混合した。
【０３５６】
これを静置して上層に分離した柿の葉エキス含有大豆油により分離される油溶性部分を液体として採取した。水分を除去するために、東洋技研製ＴＧＤ−２５０ＬＦ２に供し、油状物質として、目的とするピノセンブリンカルコン誘導体を得た。これを実施例１の検体とした。
【０３５７】
以下に、バルミチン酸を共有結合させたピノセンブリンカルコン誘導体の調製について記載する。
【実施例２】
【０３５８】
無農薬で栽培された静岡産の緑茶、学名Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｎｓｉｓの９ｋｇを購入し、水道水により十分に洗浄し、乾燥機により乾燥させた。
【０３５９】
この緑茶３ｋｇを粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）に供し、粉砕して緑茶の粉砕物とした。
【０３６０】
清浄な寸胴に緑茶の粉砕物１ｋｇを入れ、水道水を１０Ｌ添加した。これに、リョーショクより購入したバルミチン酸３００ｇを添加して攪拌した。
【０３６１】
これに、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇを１１ｇ添加し、２６℃に加温して、６７回／分の速度で１１時間攪拌し、これを加温液とした。
【０３６２】
一方、日本産富有柿の若葉の１．８ｋｇを乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により１２時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で粒径０．７マイクロｍに粉砕した。
【０３６３】
この粉砕物１．７ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１７ｇを添加し、２６℃で１２時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油で抽出して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３６４】
前記の加温液の入った寸胴を水道水により冷却後、前記の柿の葉エキス含有大豆油１ｋｇを添加し、油部分を採取した。
【０３６５】
この油部分を真空乾燥機（エーキューエム九州テクノス製、クリーンドライ）により乾燥してパルミチン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体を油状の液体として得た。また、これを実施例２の検体とした。
【０３６６】
以下に、１４−メチルパルミチン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体の調製について記載する。
【実施例３】
【０３６７】
無農薬で栽培された静岡産のアカマツのマツバ１０ｋｇを採取し、水道水により十分に洗浄し、乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により乾燥させた。これを原料のマツバとした。
【０３６８】
このマツバ２ｋｇを粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）に供し、粉砕してマツバの粉砕物とした。
【０３６９】
清浄な寸胴にマツバの粉砕物１ｋｇを入れ、水道水を１０Ｌ添加した。これに、リョーショクより購入した１４−メチルパルミチン酸３００ｇを添加して攪拌した。
【０３７０】
これに、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇを１０ｇ添加し、２５℃に加温して、５８回／分の速度で１０時間攪拌し、これを加温液とした。
【０３７１】
一方、日本産富有柿の若葉の２ｋｇを乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により１２時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で粒径０．７マイクロｍに粉砕した。
【０３７２】
この粉砕物１．８ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１８ｇを添加し、２５℃で１４時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油で抽出して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３７３】
前記の加温液の入った寸胴を水道水により冷却後、前記の柿の葉エキス含有大豆油１ｋｇを添加し、油部分を採取した。
【０３７４】
これを真空乾燥機（エーキューエム九州テクノス製、クリーンドライ）により乾燥して１４−メチルパルミチン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体を油状の液体として得た。また、これを実施例３の検体とした。
【０３７５】
以下に、エイコサペンタエン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体の調製について記載する。
【実施例４】
【０３７６】
無農薬で栽培された静岡産のアカマツのマツバ１２ｋｇを採取し、水道水により十分に洗浄し、乾燥機により乾燥させた。これを原料のマツバとした。このマツバ２．４ｋｇを粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）に供し、粉砕してマツバの粉砕物とした。
【０３７７】
清浄な寸胴にマツバの粉砕物１．１ｋｇを入れ、水道水を１１Ｌ添加した。これに、日本水産製のエイコサペンタエン酸２９０ｇを添加して攪拌した。
【０３７８】
これに、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇを１１ｇ添加し、２５℃に加温して、６１回／分の速度で１１時間攪拌し、これを加温液とした。
【０３７９】
一方、日本産富有柿の若葉の２ｋｇを乾燥機により１２時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で粒径０．７マイクロｍに粉砕した。
【０３８０】
この粉砕物１．８ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１８ｇを添加し、２５℃で１２時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油で抽出して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３８１】
前記の加温液の入った寸胴を水道水により冷却後、前記の柿の葉エキス含有大豆油１ｋｇを添加し、油部分を採取した。
【０３８２】
これを真空乾燥機（エーキューエム九州テクノス製、クリーンドライ）により乾燥してエイコサペンタエン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体を油状の液体として得た。また、これを実施例４の検体とした。
【０３８３】
以下に、ドコサヘキサエン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体の調製について記載する。
【実施例５】
【０３８４】
無農薬で栽培された静岡産のアカマツのマツバ１３ｋｇを採取し、水道水により十分に洗浄し、乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により乾燥させた。これを原料のマツバとした。
【０３８５】
このマツバ２ｋｇを粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）に供し、粉砕してマツバの粉砕物とした。
【０３８６】
清浄な寸胴にマツバの粉砕物１．１ｋｇを入れ、水道水を１０Ｌ添加した。これに、日水製薬製のドコサヘキサエン酸３３０ｇを添加して攪拌した。
【０３８７】
これに、アマノエンザイム社製のリパーゼＡＹ「アマノ」３０Ｇを１１ｇ添加し、２５℃に加温して、５５回／分の速度で１０時間攪拌し、これを加温液とした。
【０３８８】
一方、日本産富有柿の若葉の２ｋｇを乾燥機（西村機械製、ＧＺＱ３型）により１２時間乾燥させ、粉砕機（三力製作所製、三力式万能粉砕機）で、粒径０．７マイクロｍに粉砕した。この粉砕物１．８ｋｇにヤクルト薬品工業株式会社製のセルラーゼ（Ｙ−ＮＣ）１８ｇを添加し、２５℃で１２時間攪拌した。得られた粉砕物を大豆油で抽出して柿の葉エキス含有大豆油を調製した。
【０３８９】
前記の加温液の入った寸胴を水道水により冷却後、前記の柿の葉エキス含有大豆油１ｋｇを添加し、油部分を採取した。
【０３９０】
これを真空乾燥機（エーキューエム九州テクノス製、クリーンドライ）により乾燥してドコサヘキサエン酸を結合させたピノセンブリンカルコン誘導体を油状の液体として得た。また、これを実施例５の検体とした。
【０３９１】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体の精製物について説明する。
【実施例６】
【０３９２】
実施例４で得られたピノセンブリンカルコン誘導体３０ｇをエタノール１．２Ｌに懸濁し、三菱化学製ダイヤイオンの４８０ｇを充填したカラムに供した。これを１０％エタノール含有水８５０ｍＬで洗浄した。さらに３５％エタノール含有水５００ｍＬで洗浄後、８０％エタノール含有水５００ｍＬで溶出して、８０％エタノール含有水の分画を採取した。
【０３９３】
これを減圧乾燥機に供してエタノールと水を留去した後、日本エフディ製の凍結乾燥機によりピノセンブリンカルコン誘導体の油状の精製物５ｇを得た。これを実施例６の検体とした。
【０３９４】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体の同定試験について説明する。
（試験例１）
【０３９５】
上記のように得られた実施例１、実施例２、実施例３、実施例４、実施例５及び実施例６で得られたそれぞれのピノセンブリンカルコン誘導体を精製エタノールに溶解し、質量分析器付き高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ、島津製作所）で分析し、さらに、核磁気共鳴装置（ＮＭＲ、ブルカー製、ＡＣ−２５０）で解析した。
【０３９６】
その結果、実施例１の検体からは、ピノセンブリンカルコン誘導体としてピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。
【０３９７】
また、実施例２の検体からは、ピノセンブリンカルコンの８位に、パルミチン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。パルミチン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合していた。
【０３９８】
また、実施例３の検体からは、ピノセンブリンカルコンの８位に、１４−メチルパルミチン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。１４−メチルパルミチン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合していた。
【０３９９】
また、実施例４及び実施例６の検体からは、ピノセンブリンカルコンの８位に、エイコサペンタエン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。エイコサペンタエン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合していた。
【０４００】
また、実施例５の検体からは、ピノセンブリンカルコンの８位に、ドコサヘキサエン酸が結合したピノセンブリンカルコン誘導体が同定された。ドコサヘキサエン酸のカルボン酸から最も離れた炭素が共有結合していた。
【０４０１】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体の炎症性サイトカイン産生の抑制試験について説明する。
（試験例２）
試験にはスキ花粉症に感染した年齢２１歳〜７７歳の男性４名及び年齢２９歳〜６５歳の女性４名よりヘパリン加血液を採取し、ＭＥＭ（日水製薬）により単球を培養した。
【０４０２】
この単球１０００個を３５ｍｍ径の培養シャーレに播種し、５％炭酸ガス下、３７℃で２４時間培養した。
【０４０３】
これに、スギ花粉（フナミシ製）１０ｎｇ及び実施例１〜６で得られた検体をジメチルスルホキシドに溶解してそれぞれ１ｎｇを添加し、添加後、４８時間した。培養上清を採取し、炎症性サイトカインとしてインターロイキン−１アルファ、インターロイキン−６及びＴＮＦアルファ量をＥＬＩＳＡキット（アムジェン製）を用いて吸光度法により定量した。
【０４０４】
なお、溶媒対照として検体の代わりに、ジメチルスルホキシドを用いた。
【０４０５】
また、陽性対照としてステロイド剤であるプロピオン酸クロベタゾールを用いた。
【０４０６】
その結果、インターロイキン−１アルファ量の場合、溶媒対照の量を１００％とした場合、それぞれ１ｎｇの添加量で実施例１では６０％、実施例２では５７％、実施例３では５０％、実施例４では４２％、実施例５では４４％及び実施例６では３６％となった。なお、プロピオン酸クロベタゾールは６１％であった。
【０４０７】
したがって、実施例１〜６の検体は、いずれも、スギ花粉に対してインターロイキン−１アルファの産生を抑制すると結論された。
【０４０８】
また、インターロイキン−６量の場合、溶媒対照の量を１００％とした場合、それぞれ１ｎｇの添加量で実施例１では７６％、実施例２では７９％、実施例３では７１％、実施例４では７０％、実施例５では７９％及び実施例６では６７％となった。なお、プロピオン酸クロベタゾールは７９％であった。
【０４０９】
したがって、実施例１〜６の検体は、いずれも、スギ花粉に対してインターロイキン−６の産生を抑制すると結論された。
【０４１０】
また、ＴＮＦアルファ量の場合、溶媒対照の量を１００％とした場合、それぞれ１ｎｇの添加量で実施例１では５９％、実施例２では６５％、実施例３では５９％、実施例４では４９％、実施例５では５５％及び実施例６では３３％となった。なお、プロピオン酸クロベタゾールは７２％であった。
【０４１１】
したがって、実施例１〜６の検体は、いずれも、スギ花粉に対してＴＮＦアルファの産生を抑制すると結論された。
【０４１２】
以上の結果、実施例１〜６の検体は、炎症性サイトカインの産生をプロピオン酸クロベタゾールと同程度に抑制するものと考えられた。
【０４１３】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体を含有する食品製剤の製造について記載する。
【実施例７】
【０４１４】
前記の実施例１で得られたピノセンブリンカルコン誘導体１００ｇを食品加工用混合器（ツカサ製、パウミキサー、シングルタイプ）に入れ、武田紙器製のアスタキサンチン２５ｇを添加した。これに、柿の葉エキス含有大豆油１１ｇを添加し、攪拌しながらこれを３７℃で２４時間加温して冷却後、組成物約１２０ｇを得た。
【０４１５】
この組成物１００ｇに、食用セルロース３００ｇ、アスコルビン酸１ｇ及び食用香料９ｇを食品加工用ミキサー（ツカサ製、パウミキサー、Ｗタイプ）に添加し、混合した。これを常法により粉末化し、乾燥後、ブタ由来ゼラチン製ハードカプセルに、１粒２５０ｍｇとして充填し、食品製剤を得た。これを実施例７の検体とした。
【０４１６】
以下に、食品製剤を用いた抗炎症作用について述べる。
（試験例３）
【０４１７】
３５〜６９歳のスギ花粉によりクシャミやハナミズを呈する男性６例に、前記の実施例７で得られた食品製剤を１日１回１０カプセルずつ、すなわと、１日２．５ｇずつ、１４日間毎日摂食させた。摂食前及び摂食１４日目に、スギ花粉による反応性を観察した。さらに、摂食前及び摂食１４日目に、血液を採取し、ＩｇＥ量を免疫抗体法により測定した。
【０４１８】
その結果、摂食後、スギ花粉によるクシャミやハナミズの発現数は、摂食前に比し、平均で３４％となり、明らかな反応性の減少が認められた。
【０４１９】
さらに、血液ＩｇＥ量は、摂食前に比して平均値で４２％となり、ＩｇＥ量の減少が認められた。また、摂食後に、体調や健康状態に異常は、認められなかった。
【実施例８】
【０４２０】
前記の実施例２で得られたピノセンブリンカルコン誘導体１１０ｇを化粧品加工用混合器（寿工業製、ポーレコンテナミキサー）に入れ、武田紙器製のアスタキサンチン１１ｇを添加した。
【０４２１】
これに、柿の葉エキス含有大豆油５０ｇを添加し、攪拌しながらこれを３７℃で３０時間加温して冷却後、組成物約１６０ｇを得た。
【０４２２】
この組成物を前記の混合器に入れ、ミツロウ（アピ製）１ｋｇ及びスクワラン（日本水産製）１ｇを添加し、混合して、化粧品製剤としてクリームを得た。これを実施例８の検体とした。同時に、実施例２で得られたピノセンブリンカルコン誘導体を除いた基材のみのクリームを調製した。
（試験例４）
【０４２３】
実施例８で得られたクリームを使用して、２３〜７８才の女性１０例を対象に、紫外線に対するしわ改善試験を行なった。すなわち、１０例を２群に分け、前記の実施例８のピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームを１日当たり１ｇずつ、７日間、顔面部に塗布させた。同時に、基材のみを含有するクリームを使用する群を設定した。
【０４２４】
前記の女性に、日焼け用紫外線照射装置（エムロック製、ネオタン８８８）により毎日１時間、紫外線を浴びさせた。使用前及び使用７日後に、顔面の肌温度、皮表角層水分量測定装置（ＩＢＳ社製、ＳＫＩＣＯＮ２００）を用いて角質水分量、弾力計（クトメーター）を用いて肌弾性及び単位面積当たりのしわの長さを計測した。
【０４２５】
さらに、汗と皮脂を採取し、含有される炎症性サイトカインであるＴＮＦアルファ量を免疫酵素法（アムジェン製）により測定した。
【０４２６】
その結果、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、平均値として０．４１℃の肌温度の低下が認められた。また、皮表角層水分量は、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、１７９％に増加した。さらに、弾力計による弾力は、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、１９９％に増加した。
【０４２７】
しわの長さは、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、５５％となり、明らかに、しわの減少が認められた。
【０４２８】
加えて、汗と皮脂中のＴＮＦアルファ量は、基材のみのクリーム使用に比してピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームの使用例では、平均値として６３％に減少した。
【０４２９】
さらに、ピノセンブリンカルコン誘導体を含有するクリームでは副作用は認められず、使用感も良好であった。
【０４３０】
したがって、実施例８のクリームには紫外線によるサイトカイン産生を抑制し、しわを改善する作用が確認され、安全性も高かった。
【０４３１】
以下に、ピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤について述べる。
【実施例９】
【０４３２】
清浄なステンレス製溶解槽に、前記の実施例２で得られたピノセンブリンカルコン誘導体４０ｇ、ラノリン１１０ｇ、マクロゴールド１３０ｇ、ミツロウ１０ｇ、オゾケライト２０ｇを添加し、３０℃で１時間溶解した。これを混練機に供し、混合した。これを再度、溶解槽で溶解して、過熱し、脱気装置により脱気させて、目的とする抗炎症剤を軟膏剤として得た。
【０４３３】
なお、対照として前記の実施例２で得られたピノセンブリンカルコン誘導体の代わりとしてラノリンを用いた対照となる検体を作製し、対照検体として試験に用いた。
（試験例５）
【０４３４】
３０〜５９歳のスギ花粉によりクシャミやハナミズを呈する男性４例及び女性３名に、前記の実施例９で得られた抗炎症剤を１日１回１ｇずつ、１４日間に鼻腔外部、鼻腔周囲や口腔周囲部分に塗布した。
【０４３５】
塗布前及び塗布１４日目に、スギ花粉による反応性を観察した。さらに、塗布前及び塗布１４日目に、血液を採取し、ＴＮＦアルファ量及びＩｇＥ量を免疫抗体法により測定した。
【０４３６】
その結果、塗布後、スギ花粉によるクシャミやハナミズの発現数は、塗布前に比して平均で、３１％となり、いずれも花粉に対する反応性の減少が認められた。血中のＴＮＦアルファ量は、塗布前に比して平均値で３０％となり、炎症性サイトカインであるＴＮＦアルファ量の減少が認められた。
【０４３７】
血中ＩｇＥ量は、塗布前の値に比して４４％となり、ＩｇＥ量の減少が認められた。また、塗布後に、体調や健康状態、その他の臨床検査値に異常は、認められなかった。
【０４３８】
したがって、ピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤は花粉症に対して炎症性サイトカインとＩｇＥ量を低下させ、優れた抗炎症効果を呈し、かつ、安全性も確認された。
【０４３９】
一方、ピノセンブリンカルコン誘導体の代わりとしてラノリンを用いた対照検体を用いた場合には、スギ花粉によるクシャミやハナミズの発現数は、塗布前に比して平均値で１０２％となり、花粉に対する反応性に変化はなかった。
【０４４０】
また、血中のＴＮＦアルファ量は、塗布前に比して平均値で１０１％となり、炎症性サイトカインであるＴＮＦアルファ量に変化はなかった。
【０４４１】
血中ＩｇＥ量も平均値で１０４％となり、変化は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【０４４２】
本発明である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体は、全身及び局所の炎症の防止及び改善を目的とした副作用の弱い、優れた働きを示し、皮膚炎、肺炎、気管支炎、肝炎など種々の炎症に苦しむ患者又は半健康人のＱＯＬを改善するものである。
【０４４３】
また、本発明である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる食品製剤は、花粉症、シックハウス症候群、風邪、アレルギー、皮膚炎などの炎症の改善又はその発症を予防し、国民生活の質的向上に寄与するものである。
【０４４４】
さらに、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる化粧品は、日焼けによるしわやくすみ、皮膚の炎症やアトピーなどの炎症に対して改善又は予防効果を示し、国民のＱＯＬを向上させるものである。
【０４４５】
加えて、炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤によれば、皮膚炎、肝炎、脳炎、肺炎、風邪、膵炎、花粉症、アレルギーなどの炎症の改善又は予防に貢献し、国民生活を向上させる。この抗炎症剤は副作用が少なく、優れた抗炎症作用を発揮することにより、医療及び医薬品業界の活性化に寄与するものである。
【０４４６】
マツバや食用魚類の頭部や内臓は、廃棄物として処理されている。本発明は、これらの廃棄物を有効に利用する点から廃棄物を減少させ、廃棄物による土壌や海洋の富栄養による環境破壊を予防でき、かつ、漁業や農業資源の有効活用が期待され、さらに、漁業や農業や関連産業の発展に寄与するものである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化１】
Ｘは、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つ。
【請求項２】
マツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（２）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化２】
【請求項３】
マツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸが１４−メチルパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（３）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化３】
【請求項４】
マツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがエイコサペンタエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（４）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化４】
【請求項５】
マツバ又は緑茶の粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがドコサヘキサエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（５）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化５】
【請求項６】
食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる請求項１に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体。
【請求項７】
請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる食品製剤。
【請求項８】
請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品。
【請求項９】
請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤。
【請求項１】
炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（１）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化１】
Ｘは、パルミチン酸、１４−メチルパルミチン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、ドコサペンタエン酸、アルファ−リポ酸、ガンマーリノレン酸、ステアリン酸、メチルステアリン酸から選択されるいずれか一つ。
【請求項２】
マツバ又は緑茶の粉砕物にパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（２）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化２】
【請求項３】
マツバ又は緑茶の粉砕物に１４−メチルパルミチン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸが１４−メチルパルミチン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（３）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化３】
【請求項４】
マツバ又は緑茶の粉砕物にエイコサペンタエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがエイコサペンタエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（４）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化４】
【請求項５】
マツバ又は緑茶の粉砕物にドコサヘキサエン酸及びエステル交換用リパーゼを添加し、加温し、柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られ、請求項１に記載のピノセンブリンカルコン誘導体のうちＸがドコサヘキサエン酸である炎症性サイトカイン産生抑制作用を有する下記の式（５）で示されるピノセンブリンカルコン誘導体。
【化５】
【請求項６】
食用魚類、マツバ又は緑茶及び大豆に納豆菌を添加して発酵させた発酵物を柿の葉エキス含有大豆油で抽出して得られる請求項１に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体。
【請求項７】
請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．０１〜０．５重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０１〜０．５重量を含有する組成物からなる食品製剤。
【請求項８】
請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体１重量に、アスタキサンチン０．００６〜０．４重量、柿の葉エキス含有大豆油０．０５〜０．８重量を含有する組成物からなる化粧品。
【請求項９】
請求項１又は請求項２又は請求項３又は請求項４又は請求項５又は請求項６に記載の炎症性サイトカイン産生抑制作用を有するピノセンブリンカルコン誘導体からなる抗炎症剤。
【公開番号】特開２００７−２０４４４４（Ｐ２００７−２０４４４４Ａ）
【公開日】平成１９年８月１６日（２００７．８．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２６９０８（Ｐ２００６−２６９０８）
【出願日】平成１８年２月３日（２００６．２．３）
【出願人】（５０４４４７１９８）
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年８月１６日（２００７．８．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年２月３日（２００６．２．３）
【出願人】（５０４４４７１９８）
【Ｆターム（参考）】
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