蛋白修飾物生成抑制剤
（課題）
強力かつ優れた蛋白修飾物生成抑制効果を有し、さらに血圧降下を伴わない蛋白修飾物生成抑制剤を提供すること。
（解決手段）
テトラゾール環にメチレンを介して各種の置換基を有する化合物、特に次の式で示される化合物（Ｉ）または（ＩＩ）：
[化１]
[化２]
[式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。]
を有効成分と使用することにより、上記課題を解決することが出来た。この蛋白修飾物生成抑制剤は、ＡＧＥｓやＡＬＥｓに関連する疾患の予防や治療に有用であって、具体的には腎組織保護剤として単独でまたは腹膜または血液透析液に配合して使用される。
強力かつ優れた蛋白修飾物生成抑制効果を有し、さらに血圧降下を伴わない蛋白修飾物生成抑制剤を提供すること。
（解決手段）
テトラゾール環にメチレンを介して各種の置換基を有する化合物、特に次の式で示される化合物（Ｉ）または（ＩＩ）：
[化１]
[化２]
[式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。]
を有効成分と使用することにより、上記課題を解決することが出来た。この蛋白修飾物生成抑制剤は、ＡＧＥｓやＡＬＥｓに関連する疾患の予防や治療に有用であって、具体的には腎組織保護剤として単独でまたは腹膜または血液透析液に配合して使用される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、蛋白修飾物生成抑制剤、特に非酵素的条件下にカルボニル化合物と反応することによって生じる糖化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下、「ＡＧＥｓ」と称する）、脂質過酸化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｌｉｐｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｅｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下、「ＡＬＥｓ」と称する）などの蛋白修飾物の生成を抑制する薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖化反応（グリケーション）とは、ペプチドや蛋白質などのアミノ基と還元糖などのカルボニル基との非酵素的反応から始まる一連の反応（メイラード反応（非特許文献１参照））をいい、初期段階と後期段階に大別することができる。初期段階は糖の濃度と反応時間とに依存する可逆反応であり、前記アミノ基と前記カルボニル基とが非酵素的に反応してシッフ塩基を形成し、さらにアマドリ転位によりアマドリ化合物を形成する。
【０００３】
後期段階では初期段階で生成したアマドリ化合物が非可逆的に脱水、縮合、環状化、酸化、断片化、重合、転位などを受け、最終的にＡＧＥｓと呼ばれる蛋白修飾物を形成する。糖の自動酸化などにより、３−デオキシグルコソン（以下、「３−ＤＧ」と称する）、グリオキサール（以下、「ＧＯ」と称する）およびメチルグリオキサール（以下、「ＭＧＯ」と称する）などの反応性の高いジカルボニル化合物が生成するが、これらのカルボニル化合物も蛋白と反応し、多くの場合、蛋白質のリジン残基やアルギニン残基などが修飾されたＡＧＥｓを生成する。
【０００４】
また、酸化ストレス下では、生体内に豊富に存在する糖、脂質、アミノ酸などは酸化反応などにより、反応性の高いカルボニル化合物へと変化する。その結果生じる、ＧＯ、ＭＧＯ、アラビノース、グリコールアルデヒドなどの化合物はＡＧＥｓの前駆物質となる。また、アスコルビン酸の酸化により生成するデヒドロアスコルビン酸もＡＧＥｓの前駆物質となる。これらの前駆物質はいずれもカルボニル基を有しており、蛋白質のアミノ基と非酵素的に反応してシッフ塩基を生成してＡＧＥｓを形成する（非特許文献２参照）。
【０００５】
一方、酸化ストレス下では脂質過酸化も進行し、マロンジアルデヒド、ヒドロキシノネナールおよびアクロレインのような、様々なカルボニル化合物が形成される（非特許文献３参照）。これらのカルボニル化合物も蛋白質のアミノ基などと反応し、マロンジアルデヒド修飾リジンやヒドロキシノネナール修飾物などのＡＬＥｓと呼ばれる蛋白修飾物を形成する（非特許文献２参照）。
【０００６】
更に、セリンやスレオニンなどのアミノ酸も酸化によりアクロレイン、ＧＯなどのカルボニル化合物が生成し、蛋白修飾物を形成する（非特許文献４参照）。多くのカルボニル化合物は酸化的経路で生成されるが、３−ＤＧのように非酸化的経路を経て生成されるカルボニル化合物も存在する。
【０００７】
公知のＡＧＥｓ生成経路として、（１）シッフ塩基、アマドリ化合物から３−ＤＧを経由する経路；（２）シッフ塩基が酸化的にグリコールアルデヒド−アルキルイミンへ変化し、アルドアミンを経てＡＧＥｓに至る経路；（３）アルドアミンがグリオキサールモノアルキルイミンを経てＡＧＥｓに至る経路；（４）アマドリ化合物から２，３−エンジオールを経て生成されるＭＧＯを中間体とする経路；（５）その他などがある。
【０００８】
最近、ＡＧＥｓのひとつであるカルボキシメチルリジンが不飽和脂肪酸の脂質酸化反応の結果生じるＧＯによっても生成することが明らかになり、糖化・酸化反応と脂質酸化反応が共通の基盤で起こっていると考えられる。
【０００９】
以上のように、糖、脂質、アミノ酸およびアスコルビン酸から酸化的、非酸化的経路により生成されたカルボニル化合物は、蛋白を非酵素的に修飾して最終的にＡＧＥｓやＡＬＥｓなどの蛋白修飾物を形成するに至る。特に、複数の反応経路を経て生成されたカルボニル化合物により蛋白修飾反応が亢進している状態をカルボニル過剰による蛋白修飾、すなわち、カルボニルストレスと呼んでいる。
【００１０】
公知のＡＧＥｓとしては、ペントシジン（非特許文献５参照）、クロスリン（非特許文献６参照）、Ｘ１（フルオロリンク）、ピロピリジン（非特許文献７参照）、ピラリン（非特許文献８参照）、カルボキシメチルリジン（非特許文献９参照）、イミダゾロン化合物（非特許文献１０参照）、カルボキシエチルリジン（非特許文献１１参照）、ＭＧＯダイマー（非特許文献１２参照）、ＧＯダイマー（非特許文献１３参照）、イミダゾリジン（非特許文献１４参照）およびアルグピリミジン（非特許文献１５参照）などが知られている。
【００１１】
現在クローニングされているＡＧＥｓ受容体として、ＲＡＧＥ（非特許文献１６参照）、マクロファージスカベンジャー受容体クラスＡ（非特許文献１７参照）、ガレクチン３（非特許文献１８参照）、ＯＳＴ−４８および８０Ｋ−Ｈなどがある（非特許文献１７参照）。
【００１２】
血管組織においてＡＧＥｓがＲＡＧＥ（免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞膜貫通型蛋白質）に結合すると、細胞内で活性酸素が生成し、ｐ２１ｒａｓ／ＭＡＰＫ経路が活性化され（非特許文献１９参照）、これにより転写因子ＮＦ−κβ活性化が誘導され、ＶＣＡＭ−１などの血管障害関連因子の発現が誘導されることが報告されている（非特許文献２０参照）。また、ＡＧＥｓはＲＡＧＥを介して、微小血管の内皮細胞の増殖を制御し、恒常性維持に重要な役割を果たしている周皮細胞の増殖を制御するとともに、毒性効果を発揮することが報告されている（非特許文献２１参照）。
【００１３】
さらに、ＡＧＥｓは、ＲＡＧＥを介して微小血管の内皮細胞に直接的に作用し血管新生を促進することや、ＰＧＩ２の産生を阻害して血栓傾向となること（非特許文献２２参照）が報告されている。その他、ＡＧＥｓやＡＬＥｓなどの生理活性として、メサンギウム細胞の基質産生の亢進、単球遊走能の亢進、マクロファージからの炎症性サイトカインの放出、滑膜細胞のコラゲナーゼ産生促進、破骨細胞の活性化、血管平滑筋の増殖作用、血小板凝集の促進、ＮＯ活性とその平滑筋弛緩反応の抑制が報告されている（非特許文献２３参照）。
【００１４】
ＡＧＥｓが関与する疾患として、（１）糖尿病合併症である腎症（非特許文献２４参照）、神経障害（非特許文献２５参照）、網膜症（非特許文献２１参照）および白内障、（２）動脈硬化（非特許文献２６参照）、（３）透析合併症である透析アミロイドーシス（非特許文献２７参照）および腹膜透析患者における腹膜硬化症、（４）中枢神経疾患であるアルツハイマー病（非特許文献２８参照）、ピック病およびパーキンソン病、（５）リウマチ性関節炎（非特許文献２９参照）、（６）日光弾性線維症、（７）老化、（８）腎不全（非特許文献３０参照）などが知られている。その他、糖尿病の場合、血管内皮由来の血管拡張がＡＧＥｓによって障害されること（非特許文献３１参照）、ＡＧＥｓが腎硬化を促進させること（非特許文献３２参照）などが報告されている。
【００１５】
以上のことから、ＡＧＥｓを初めとする蛋白修飾物は、直接的にまたは受容体を介して生体に悪影響を与えることが明らかとなっている。
【００１６】
一方、腎機能が低下するに従って、血中のＡＧＥｓの濃度が上昇することが知られている。腎機能低下により、分子量５ｋＤａ以下と考えられるカルボニル化合物は体内に蓄積する。ペントシジンやピラリンなどの場合、遊離型も存在するが、血清アルブミンなどへの蛋白結合型が大部分を占めている（非特許文献３３参照）。また、血中ペントシジン濃度は糸球体濾過機能の影響を強く受けるという報告がある（非特許文献３４参照）。
【００１７】
この様に、ＡＧＥｓはその大部分が腎において処理され、健康時には血中濃度は低く保たれているが、腎機能が低下すると、尿毒症毒素（ｕｒｅｍｉｃ ｔｏｘｉｎ）として慢性の生物活性をもたらすようになる。
【００１８】
透析療法によって遊離型のものは除去されるが、蛋白結合型のものや分子内架橋を形成するものは除去することが困難である（非特許文献３５参照）。従って、腎不全期間の経過と共に蛋白修飾物の生体内蓄積量は増加する。また、生体内で糖が反応する基本的な過程以外に食品中から供給される遊離型ＡＧＥｓや、生体内で既に形成されたアマドリ化合物などから形成される活性の強い３−ＤＧ、ＧＯ、ＭＧＯなどの中間体が次々に蛋白と反応し、ＡＧＥｓの産生を促進することが認められている。また、血液は透析膜と接触することによって、補体系や白血球の活性化などの様々な影響を受け、フリーラジカルの産生亢進へとつながるなど、透析療法そのものによる酸化の亢進も存在し、ＡＧＥｓ生成の一因となっている。
【００１９】
ゆえに、透析療法での対策としては透析導入の初期からこれらの遊離型物質の除去を図り、結合型のＡＧＥｓ形成を極力抑制することが重要であり、上記のように結合型のＡＧＥｓを透析療法によって除去することは困難であるので、透析療法では蛋白修飾物の生成を抑制する薬物の開発が希求されている。
【００２０】
また、腎機能に起因するばかりではなく、腎不全に伴う抗酸化防御機構の低下も蛋白修飾物の蓄積に関与していると考えられる。腎不全患者では、血中還元型グルタチオンに対する酸化型グルタチオンの上昇（非特許文献３６参照）、グルタチオン依存酵素群の活性低下、保存期腎不全血漿グルタチオンペルオキシダーゼの低下（非特許文献３７参照）、全血中グルタチオンの低下（非特許文献３８参照）ならびに血漿セレン濃度の低下に対する血漿スーパーオキサイドジスムターゼの活性上昇（非特許文献３９参照）といった抗酸化能の不均衡が示唆されている（非特許文献４０参照）。
【００２１】
また、一般に慢性腎不全の患者では、高血糖の有無に関わらず血中や組織中に反応性の高いカルボニル化合物やＡＧＥｓが著しく蓄積していることが報告されている（非特許文献４１参照）。腎不全においては、非酵素的化学反応によりカルボニル化合物が高負荷の状態（カルボニルストレス）となり、蛋白質修飾が亢進される病態が存在しており、糖・脂質からカルボニル化合物が生成され蛋白質を修飾するためであると考えられる（非特許文献４２参照）。
【００２２】
ゆえに、様々な要因によって生じる蛋白修飾物の生成を抑制することが、組織障害の軽減につながり、ＡＧＥｓなどの蛋白修飾物質が関与する病態を予防および治療することができる。
【００２３】
慢性腎不全患者に行われる透析には、血液透析と腹膜透析がある。腹膜透析の場合、血中の老廃物は腹膜を通して腹膜透析液中に排泄される。高浸透圧の腹膜透析液（グルコース、イコデキストリンまたはアミノ酸などを含有する）は、腎不全患者の血中に蓄積した反応性の高いカルボニル化合物（たとえば腎不全患者の血中に酸化ストレスに伴って蓄積する、炭水化物に由来するカルボニル化合物（アラビノース、ＧＯ、ＭＧＯ、３−ＤＧ）、アスコルビン酸に由来するカルボニル化合物（デヒドロアスコルビン酸）、脂質に由来するカルボニル化合物（ヒドロキシノネナール、マロンジアルデヒド、アクロレイン））を、腹膜を介して腹腔内の腹膜透析液中に集める作用がある。
【００２４】
また、腹膜透析液の滅菌や保存中に、反応性の高いカルボニル化合物（３−ＤＧ、５−ヒドロキシメチルフルフラール、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、ＧＯ、ＭＧＯ、レブリン酸、フルフラール、アラビノースなどのカルボニル化合物）が腹膜透析液中に生成することが知られている（非特許文献４３参照）。
【００２５】
そのため腹膜透析液中の前記カルボニル化合物濃度は上昇し、蛋白修飾物質の生成が亢進する。その結果、腹膜の機能が低下し、除水能の低下や腹膜硬化症への進展に関与すると考えられる（非特許文献４４参照）。
【００２６】
実際に腹膜透析患者においては、導入されたグルコースによって腹腔内がカルボニルストレス状態となっていることが、内皮および中皮の免疫組織学的検討から証明されている（非特許文献４５参照）。
【００２７】
この様に、透析患者においてもカルボニル化合物による蛋白修飾物の生成が腹膜の形態学的変化およびこれに伴う機能（除水能）の低下の原因となっていることが推測されており、その改善方法の提供が求められている。
【００２８】
以上の事実と腎不全をはじめとする種々の病態を考え合わせると、カルボニル化合物蓄積がＡＧＥｓ産生亢進の原因のひとつであると考えられ（非特許文献４６参照）、ＡＧＥｓの産生を抑制することが、ＡＧＥｓが関連する病態に対し有効であると考えられる。
【００２９】
代表的なＡＧＥｓ生成阻害薬としてアミノグアニジンがある。アミノグアニジンはグルコース、シッフ塩基やアマドリ生成物から生成される３−ＤＧなどのジカルボニル化合物と反応してチアゾリンを形成することによってＡＧＥｓ生成を阻害すると考えられている。糖尿病モデル動物を用いた解析では、糖尿病性腎症（非特許文献４７参照）、網膜症（非特許文献４８参照）および白内障（非特許文献４９参照）の進展を遅延させる効果が確認されている。
【００３０】
他に、この種に属する化合物としてピリドキサミン誘導体（ピリドリン）がある。また、ＯＰＢ−９１９５（（±）２−イソプロピリデンヒドラゾノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イルアセトアニリド）はヒドラジンの窒素原子がカルボニル基と反応して安定な構造を形成し、遊離または蛋白に結合した反応性カルボニルを捕捉することにより（非特許文献５０参照）、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＧＥｓのみならずＡＬＥｓの生成も抑制する。メトホルミンやブホルミンなどのビグアナイド化合物もカルボニル化合物を捕捉できるため（非特許文献５１参照）、ＡＧＥｓ生成阻害薬として利用できる可能性がある。さらに、ＡＧＥｓの特徴である架橋を切断するタイプのＡＧＥｓ阻害剤、アマドリ化合物を分解する酵素（ａｍａｄｏｒｉａｓｅ）などの提案もされている。
【００３１】
一方、カルボニル化合物を消去することにより、ＡＧＥｓやＡＬＥｓの生成を阻害する可能性も検討されている。カルボニル化合物の消去にはいくつかの酵素や酵素的経路が存在し、たとえばアルドール還元酵素、アルデヒドデヒドロゲナーゼやグリオキサラーゼ経路が挙げられるが（非特許文献５２参照）、還元型グルタチオン（ＧＳＨ）やＮＡＤ（Ｐ）Ｈなどのレドックス補酵素はこれらの経路の活性に重要な要素である。
【００３２】
これらの消去系の低下は同時に多数のカルボニル化合物の上昇につながる。ＭＧＯ、ＧＯなどのカルボニル化合物はＧＳＨのチオール基と反応し、結果的に酵素グリオキサラーゼにより代謝される。ＮＡＤ（Ｐ）Ｈはグルタチオン還元酵素を活性化し、ＧＳＨレベルを上昇させる。すなわち、細胞内レドックス機構の不均衡によるＧＳＨおよびＮＡＤ（Ｐ）Ｈの低下によりカルボニル化合物の消去系が阻害され、ＡＧＥｓやＡＬＥｓの蓄積につながると考えられる。また、糖尿病においては、高血糖によりポリオール経路が活性化され、ＮＡＤ（Ｐ）ＨやＧＳＨが低下し、結果的にカルボニル化合物の消去系が低下することが示唆される。
【００３３】
前述したようにＧＳＨおよびＮＡＤ（Ｐ）Ｈなどのチオール濃度の低下がカルボニル化合物消去の低下につながり、結果としてＡＧＥｓやＡＬＥｓを形成する原因のひとつとなっているとすれば、チオールレベルを上昇させることによりカルボニル化合物を減少できる可能性がある。これには、ＧＳＨ、システイン、アセチルシステインなどによりチオール基を補充する方法、ビタミンＥやユビキノールなどによりＧＳＨ需要を低下させる方法、アルドース還元酵素阻害薬などによりポリオール系を阻害する方法が提案されている。さらに、アミノグアニジン、ピリドキサミン、ヒドラジン、ビグアナイド化合物およびＳＨ基含有化合物を用いて、カルボニル化合物をトラップさせる方法も提案されている（特許文献１参照）。
【００３４】
以上詳細に述べたように、ＡＧＥｓおよびＡＬＥｓの生成を阻害することが、これらに関連する病態を予防または治療できる方法である。
【特許文献１】国際公開第ＷＯ００／１０６０６ 号
【非特許文献１】メイラード， エル， シー（Ｍａｉｌｌａｒｄ， Ｌ． Ｃ．）ら著， 「コンプテス・レンダス・ヘブドマダイレス・デス・シンシズ・デ・ラ・ソサイエテ・デ・バイオロジー（Ｃｏｍｐｔ． Ｒｅｎｄ． Ｓｏｃ． Ｂｉｏｌ．）」， （フランス）， １９１２年， 第７２巻， ｐ５９９
【非特許文献２】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， １９９９年， 第５５巻， ｐ３８９−３９９
【非特許文献３】エステルバウアー， エイチ（Ｅｓｔｅｒｂａｕｅｒ， Ｈ．）ら著， 「フリーラジカル・バイオロジー・アンド・メディスン（Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ． Ｂｉｏｌ． Ｍｅｄ．）」， （アメリカ）， １９９１年， 第１１巻， ｐ８１−１２８
【非特許文献４】アンダーソン， エム， エム（Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｍ． Ｍ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」， （アメリカ）， １９９７年， 第９９巻， ｐ４２４−４３２
【非特許文献５】セル， ディー， アール（Ｓｅｌｌ， Ｄ． Ｒ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９８９年， 第２６４巻， ｐ２１５９７−２１６０２
【非特許文献６】ナカムラ， ケイ（Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｋ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・ザ・ケミカル・ソサエティー・ケミカル・コミュニケーションズ（Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍｕｎ．）」， （イギリス）， １９９２年， 第１５巻， ｐ９９２−９９４
【非特許文献７】ハヤセ， エフ（Ｈａｙａｓｅ， Ｆ．）ら著， 「バイオサイエンス・バイオテクノロジー・アンド・バイオケミストリー（Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．）」， （日本）， １９９４年， 第５８巻， ｐ１９３６−１９３７
【非特許文献８】ヌジョロージ， エフ， ジー（Ｎｊｏｒｏｇｅ， Ｆ． Ｇ．）ら著， 「カルボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ． Ｒｅｓ．）」， （オランダ）， １９８７年， 第１６７巻， ｐ２１１−２２０
【非特許文献９】アーメッド， エム， ユー（Ａｈｍｅｄ， Ｍ． Ｕ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９８６年， 第２６１巻， ｐ４８８９−４８９４
【非特許文献１０】ハヤセ， エフ（Ｈａｙａｓｅ， Ｆ．）ら著， 「バイオサイエンス・バイオテクノロジー・アンド・バイオケミストリー（Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．）」， （日本）， １９９５年， 第５９巻， ｐ１４０７−１４１１
【非特許文献１１】アーメッド， エム， ユー（Ａｈｍｅｄ， Ｍ． Ｕ．）ら著， 「バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ．）」，（イギリス）， １９９７年， 第３２４巻， ｐ５６５−５７０
【非特許文献１２】ブリンクマン， イー（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ， Ｅ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサエティー・パーキン・トランスザクションズ（Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｐｅｒｋｉｎ． Ｔｒａｎｓ．）」， （イギリス）， １９９５年， 第２巻， ｐ１−２
【非特許文献１３】ウェル−クネヒト， ケイ， ジェイ（Ｗｅｌｌ−Ｋｎｅｃｈｔ， Ｋ． Ｊ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）１９９５年， 第６０巻， ｐ６２４６−６２４７
【非特許文献１４】ナガラ， アール， エイチ（Ｎａｇａｒａｊ， Ｒ． Ｈ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９９６年， 第２７１巻， ｐ１９３３８−１９３４５
【非特許文献１５】シパノバ， アイ， エヌ（Ｓｈｉｐａｎｏｖａ， Ｉ． Ｎ．）ら著， 「アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．）」，（アメリカ）， １９９７年， 第３３４巻， ｐ２９−３６
【非特許文献１６】ネッパー， エム（Ｎｅｅｐｅｒ， Ｍ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９９２年， 第２６７巻， ｐ１４９９８−１５００４
【非特許文献１７】スズキ， エイチ（Ｓｕｚｕｋｉ， Ｈ．）ら著，「ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）」，（イギリス）１９９７年， 第３８６巻， ｐ２９２−２９５
【非特許文献１８】ブラッサラ， エイチ（Ｖｌａｓｓａｒａ， Ｈ）ら著， 「モレキュラー・メディスン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）」，（アメリカ）， １９９５年， 第１巻， ｐ６３４−６４６
【非特許文献１９】ランダー， エイチ， エム（Ｌａｎｄｅｒ， Ｈ． Ｍ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９９７年， 第２７２巻， ｐ１７８１０−１７８１４
【非特許文献２０】チャッペイ， オー（Ｃｈａｐｐｅｙ， Ｏ．）ら著， 「ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」，（イギリス）， １９９７年， 第２７巻， ｐ９７−１０８
【非特許文献２１】ヤマギシ， エス（Ｙａｍａｇｉｓｈｉ， Ｓ．）ら著， 「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．）， （アメリカ）， １９９５年， 第２１３巻， ｐ６８１−６８７
【非特許文献２２】ヤマギシ， エス（Ｙａｍａｇｉｓｈｉ， Ｓ．）ら著， 「エフイービーエス・レター（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．）」，（オランダ）， １９９６年， 第３８４巻， ｐ１０３−１０６
【非特許文献２３】ドイ， ティー（Ｄｏｉ， Ｔ．）ら著， 「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）」， （アメリカ）， １９９２年， 第８９巻， ｐ２８７３−２８７７
【非特許文献２４】ホリエ， ケイ（Ｈｏｒｉｅ， Ｋ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」，（アメリカ）， １９９７年， 第１００巻， ｐ２９９５−３００４
【非特許文献２５】スギモト， ケイ（Ｓｕｇｉｍｏｔｏ， Ｋ．）ら著， 「ダイアベートロジア（Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ）」， （ドイツ）， １９９７年， 第４０巻， ｐ１３８０−１３８７
【非特許文献２６】パーク， エル（Ｐａｒｋ， Ｌ．）ら著， 「ネイチャー・メディスン（Ｎａｔ． Ｍｅｄ．）」，（アメリカ）， １９９８年， 第４巻， ｐ１０２５−１０３１
【非特許文献２７】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」，（アメリカ）１９９３年， 第９２巻， ｐ１２４３−１２５２
【非特許文献２８】スミス， エム， エー（Ｓｍｉｔｈ， Ｍ． Ａ．）ら著， 「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）」， （アメリカ）， １９９４年， 第９１（１２）巻， ｐ５７１０−５７１４
【非特許文献２９】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．）」， （アメリカ）， １９９９年， 第２４４巻， ｐ４５−４９
【非特許文献３０】マキタ， ゼット（Ｍａｋｉｔａ， Ｚ．）ら著， 「ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディスン（Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．）」， （アメリカ）， １９９１年， 第３２５巻， ｐ８３６−８４２
【非特許文献３１】ブカラ， アール（Ｂｕｃａｌａ， Ｒ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」， （アメリカ）， １９９１年， 第８７巻， ｐ４３２−４３８
【非特許文献３２】ブラッサラ， エイチ（Ｖｌａｓｓａｒａ， Ｈ．）ら著， 「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）」， （アメリカ）， １９９４年， 第９１巻， ｐ１１７０４−１１７０８
【非特許文献３３】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ソサエティー・オブ・ネフロロジー（Ｊ． Ａｍ． Ｓｏｃ． Ｎｅｐｈｒｏｌ．）」， （アメリカ）， １９９６年， 第７巻， ｐ１１９８−１２０６
【非特許文献３４】スギヤマ， エス（Ｓｕｇｉｙａｍａ， Ｓ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ソサエティー・オブ・ネフロロジー（Ｊ． Ａｍ． Ｓｏｃ． Ｎｅｐｈｒｏｌ．）」， （アメリカ）， １９９８年， 第９巻， ｐ１６８１−１６８８
【非特許文献３５】ミヤタ・ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， １９９６年， 第４９巻， ｐ１３０４−１３１３
【非特許文献３６】カネストラリ， エフ（Ｃａｎｅｓｔｒａｒｉ， Ｆ．）ら著， 「アクタ・ヘマトロジカ（Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ．）」， （スイス）， １９９４年， 第９１巻， ｐ１８７−１９３
【非特許文献３７】ウエダ， ワイ（Ｕｅｄａ， Ｙ．）ら著， 「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．）， （アメリカ）， １９９８年， 第２４５巻， ｐ７８５−７９０
【非特許文献３８】カネストラリ， エフ（Ｃａｎｅｓｔｒａｒｉ， Ｆ．）ら著， 「アクタ・ヘマトロジカ（Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ．）」， （スイス）， １９９４年， 第９１巻， ｐ１８７−１９３
【非特許文献３９】リチャード， エム， ジェイ（Ｒｉｃｈａｒｄ， Ｍ． Ｊ．）ら著， 「ネフロン（Ｎｅｐｈｒｏｎ）」， （スイス）， １９９１年， 第５７巻， ｐ１０−１５
【非特許文献４０】ヤドウル， エム（Ｊａｄｏｕｌ， Ｍ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， １９９９年， 第５５巻， ｐ２４８７−２４９２
【非特許文献４１】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）１９９７年， 第５１巻， ｐ１１７０−１１８１
【非特許文献４２】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， １９９９年， 第５５巻， ｐ３８９−３９９
【非特許文献４３】リチャード， ジェイ， ユー（Ｒｉｃｈａｒｄ， Ｊ． Ｕ．）ら著， 「ファンダメンタル・アンド・アプライド・トキシコロジー（Ｆｕｎｄ． Ａｐｐｌ． Ｔｏｘｉｃ．）」， （アメリカ）， １９８４年， 第４巻， ｐ８４３−８５３
【非特許文献４４】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， ２０００年， 第５８巻， ｐ４２５−４３５
【非特許文献４５】ヤマダ， ケイ（Ｙａｍａｄａ， Ｋ．）ら著， 「クリニカル・ネフロロジー（Ｃｌｉｎ． Ｎｅｐｈｒｏｌ．）」， （ドイツ）， １９９４年， 第４２巻， ｐ３５４−３６１
【非特許文献４６】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「ネフロロジー・ダイアリシス・トランスプランテーション（Ｎｅｐｈｒｏｌ． Ｄｉａｌ． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．）」， （イギリス）， １９９７年， 第１２巻， ｐ２５５−２５８
【非特許文献４７】エデルステイン， ディー（Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎ， Ｄ．）ら著， 「ダイアベートロジア（Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ）， （ドイツ）， １９９２年， 第３５巻， ｐ９６−１０１
【非特許文献４８】ハメス， エイチ， ピー（Ｈａｍｍｅｓ， Ｈ． Ｐ．）ら著， 「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）」， （アメリカ）， １９９１年， 第８８巻， ｐ１１５５５−１１５６１
【非特許文献４９】マツモト， ケイ（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ， Ｋ．）ら著， 「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．）」， （アメリカ）， １９９７年 第２４１巻， ｐ３５２−３５４
【非特許文献５０】ナカムラ， エス（Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｓ．）ら著， 「ダイアベーツ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）」， （アメリカ）， １９９７年， 第４６巻， ｐ８９５−８９９
【非特許文献５１】ベイスウェンゲル， ピー， ジェイ（Ｂｅｉｓｓｗｅｎｇｅｒ， Ｐ． Ｊ．）ら著， 「ダイアベーツ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）， （アメリカ）， １９９９年， 第４８巻， ｐ１９８−２０２
【非特許文献５２】ソマリー， ピー， ジェイ（Ｔｈｏｒｎａｌｌｅｙ， Ｐ． Ｊ．）ら著， 「エンドクリノロジー・アンド・メタボリズム（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． Ｍｅｔａｂ．）」， （アメリカ）， １９９６年， 第３巻， ｐ１４９−１６６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３５】
これまで蛋白修飾抑制剤として知られているアミノグアニジンやＯＰＢ−９１９５などは、これらを生体内に投与した場合、重篤なビタミンＢ６欠乏症を起こすことが判明している。本発明者らは、この欠陥を克服すべく研究を進めたところ、そのようなビタミンＢ６欠乏症は、血中に存在するビタミンＢ６分子が当該蛋白修飾抑制剤によって捕捉されることに基因するものであることが明らかとなった。
【００３６】
本発明者らは、上記従来技術に基づく知見を前提として、非酵素的条件下、カルボニル化合物と反応することによって生じる蛋白修飾物（ＡＧＥｓおよび／またはＡＬＥｓ）が関与する病態を予防および／または治療し、なおかつ、副作用としてのビタミンＢ６欠乏症を抑制し得る薬剤を開発すべく鋭意研究を行った結果、先に、テトラゾール基を有する化合物、とりわけテトラゾール基を有するアンジオテンシンＩＩ受容体ブロッカーまたは薬理学的に許容されるそれらの塩が効果的にＡＧＥｓ、ＡＬＥｓなどの蛋白修飾物の生成を抑制する事実を発見し、この発見に基づいて、当該物質を有効成分とする蛋白修飾物生成抑制剤の発明を完成した（特願２００１−１４７１１５号明細書）。
【００３７】
アンジオテンシンＩＩ受容体ブロッカーは、蛋白修飾物生成抑制剤として優れた効果を示すが、同時に血圧降下作用を有するため、血圧の変動が好ましくない病態においては使用が制限される虞がある。本発明の目的のひとつは、血圧降下を伴わない蛋白修飾物生成抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００３８】
本発明者らは、上記成果を踏まえ、より一層優れた蛋白修飾物生成抑制剤を開発すべく鋭意研究を行った結果、テトラゾール環にメチレンを介して各種の置換基を有する化合物が強力かつ優れた蛋白修飾物生成抑制効果を有し、さらに血圧降下を伴わない蛋白修飾物生成抑制剤となり得ることを新たに見出した。
【００３９】
すなわち、本発明は蛋白修飾物生成抑制作用を有し、かつ、副作用としてのビタミンＢ６欠乏症が抑制される化合物を有効成分とし、さらに好ましくは血圧降下を伴うことのない化合物を有効成分とする、蛋白修飾物生成抑制剤を提供するものであって、その技術的範囲には、具体的に、以下の技術的態様が包含される：
（１）遊離形または塩形の５−置換テトラゾール環化合物であって、該テトラゾール環の１位または３位にメチレン含有基を有する化合物を有効成分とする、蛋白修飾物生成抑制剤。
（２）有効成分である化合物が、遊離形または塩形の式（Ｉ）：
【化１】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される、上記（１）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（３）有効成分である化合物が、遊離形または塩形の式（ＩＩ）：
【化２】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される、上記（１）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（４）Ｒ１が置換されていることもあるフェニル基であり、Ｒ２が置換されていることもある環構成原子の数が１０個を越えない超えない異項環基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（５）Ｒ１が置換されていることもあるフェニル基であり、Ｒ２が低級アルキル基、低級アルコキシ基またはヒドロキシ基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（６）Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２がモルホリノ基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（７）Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２が５−メチル−３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（８）Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２がヒドロキシメチル基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（９）蛋白修飾物が、ＡＧＥｓ、ＡＬＥｓおよびこれらの組合せよりなる群から選択されるものである、上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（１０）蛋白修飾物がＡＧＥｓである、上記（９）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（１１）ＡＧＥｓがペントシジンである、上記（１０）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（１２）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、腎組織保護剤。
（１３）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、腹膜透析液。
（１４）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、血液透析液。
（１５）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を液体試料と接触させる工程を含む、液体試料のカルボニル化合物含有量を低減させる方法。
（１６）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を患者の血液または腹膜透析液と接触させる工程を含む、蛋白修飾物の生成抑制方法。
（１７）蛋白修飾物の生成により介在される疾患を処置する方法であって、かかる処置を必要とする患者に、治療上有効量の上記（１）〜（８）のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を投与することを含んでなる方法。
（１８）蛋白修飾物の生成により介在される疾患を処置するための医薬の製造のための、上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤の使用。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
本発明は、遊離形または塩形の５−置換テトラゾール環化合物であって該テトラゾール環の１位または３位にメチレン含有基を有する化合物を有効成分とする、蛋白修飾物生成抑制剤を提供するものであって、当該有効成分は、具体的には、遊離形または塩形の式（Ｉ）：
【化３】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
および遊離形または塩形の式（ＩＩ）：
【化４】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される。当該有効成分は、蛋白修飾物生成抑制作用を有する一方、副作用としてのビタミンＢ６欠乏症を抑制されており、さらに血圧の変動が少ない化合物とすることができるので、薬剤としての使用に適している。
【００４１】
ここに「蛋白修飾物」とは、非酵素的条件下にカルボニル化合物と反応することによって生じる蛋白修飾物（たとえばＡＧＥｓ、ＡＬＥｓなど）をいい、特記しない限りＡＧＥｓとＡＬＥｓの両者を含むものとする。蛋白修飾物はＡＧＥｓ、ＡＬＥｓまたはこれらの組み合わせであってもよく、ＡＧＥｓには、たとえばペントシジン、クロスリン、Ｘ１（フルオロリンク）、ピロピリジン、ピラリン、カルボキシメチルリジン、イミダゾロン化合物、カルボキシエチルリジン、ＭＧＯダイマー、ＧＯダイマー、イミダゾリジン、アルグピリミジンなどが含まれ、ＡＬＥｓには、たとえばマロンジアルデヒドリジン、ヒドロキシノネナール修飾物などが含まれる。
【００４２】
本明細書において、「カルボニル化合物」とは、生体由来または非生体由来に関係なく、蛋白修飾の原因となるカルボニル基を有する化合物であればよく、ジカルボニル化合物も含まれる。従って、カルボニル化合物の具体例としては、アラビノース、ＧＯ、ＭＧＯ、３−ＤＧ、グリコールアルデヒド、デヒドロアスコルビン酸、ヒドロキシノネナール、マロンジアルデヒド、アクロレイン、５−ヒドロキシメチルフルフラール、ホルムアルデヒド、レプリン酸、フルフラールなどが含まれる。
【００４３】
「ビタミンＢ６欠乏症」とは、ビタミンＢ６の欠乏に基因する諸疾患をいい、口角炎、口内炎、舌炎、口唇炎、急性および慢性湿疹、接触性皮膚炎、末梢神経炎、神経障害、貧血、リンパ球減少症などが例示される。
【００４４】
「蛋白修飾物生成抑制剤」の有効成分である、遊離形または塩形の５−置換テトラゾール環を有する化合物であって該テトラゾール環の１位または３位にメチレン含有基を有する化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏに拘わらず、蛋白修飾物の生成を結果的に抑制することができる。「結果的に抑制する」とは、カルボニル化合物をトラップする作用を有することによるものであってもよく、蛋白修飾物を生成する反応を抑制することによるものであってもよく、最終的に蛋白修飾物の生成を抑制すればよく、その作用機序には限定されない。なお、「抑制剤」または「保護剤」の語には、予防または／および治療のために使用する薬剤が包含される。
【００４５】
本発明にかかる蛋白修飾物生成抑制剤の有効成分として使用される５−置換テトラゾール環化合物は、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表わすことができるものである。
【００４６】
式（Ｉ）および（ＩＩ）において、Ｒ１は、置換または非置換の芳香環（異項環を含む）基を表わす。「芳香環基」には、２０個を越えることのない環構成原子数（そのなかに酸素、硫黄、窒素などのヘテロ原子が存在してもよいが、それらの数が３個を越えることはない）を有するものが包含され、特に環構成炭素原子数６〜１０個を有するアリール（たとえばフェニル、ナフチル）が好ましい。
【００４７】
置換基としては、たとえば低級アルキル（たとえばメチル、エチル、プロピル）、低級アルケニル（たとえばビニル、アリル）、低級アルコキシ（たとえばメトキシ、エトキシ、プロポキシ）、低級アルケニルオキシ（たとえばビニルオキシ、アリルオキシ）、低級アルカノイル（たとえばアセチル、プロピオニル、ブチリル）、ハロ（低級）アルキル（たとえばモノクロロメチル、ジクロロメチル、トリフルオロメチル、ジクロロエチル）、カルボキシル、（低級）アルコキシカルボニル（たとえばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル）、カルボキシ（低級）アルキル（たとえばカルボキシメチル、カルボキシエチル、カルボキシプロピル）、ハロゲン（たとえば塩素、臭素、ヨウ素、フッ素）、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシスルホニル、アミノスルホニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリルなどの中から１種またはそれ以上のものが選択されてよい。置換基の数に制限はないが、通常、３個を越えることはない。
【００４８】
Ｒ２は、１価の有機基を表わす。「１価の有機基」には、置換または非置換の炭化水素基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボキシル基、低級アルコキシカルボニル基、カルボキシアルキル基、アミノ基、低級アルカノイルアミノ基、アリールオキシアミノ基、３〜７員ヘテロ環基などが包含される。「炭化水素基」には、炭素数３０個を越えない鎖状または環状の、脂肪族、脂環式または芳香族炭化水素基が包含され、具体的にはアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基などが例示される。「３〜７員ヘテロ環基」は、環構成原子として３個を越えないヘテロ原子を含むものであり、たとえばピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノ、チアモルホリノなどが挙げられる。置換基の種類と数は、Ｒ１について説明したのと同様である。Ｒ２として特に好ましい有機基は、ヒドロキシ、モルホリノ、ピロロトリアゾリルなどであって、これらは、さらに低級アルキル、オキソなどで置換されていてもよい。
【００４９】
なお、上記において、アルキル、アルコキシ、アルカノイルなどの語に関連して使用された「低級」なる言葉は、通常、炭素数８個まで、好ましくは炭素数５個までの基を指称するものとして使用される。
【００５０】
本発明の化合物（Ｉ）の具体例を挙げれば、次のとおりである：
【表１】
【００５１】
上記本発明化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を製造するには、一般に、５−置換テトラゾールと１位または３位に導入すべきメチレン含有基の種類に応じて、適宜、自体公知の化学反応に付すればよい。
たとえば、５−フェニルテトラゾールとモルホリンをホルマリン存在下で反応させることによって、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリンを製造することができる。反応は、通常、両者を、有機溶媒（メタノール）中、５℃で処理することによって実施することができる。
【００５２】
本発明化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は、生体内において、副作用としてのビタミンＢ６欠乏症を示すことなく、それ自体で蛋白修飾物生成抑制作用を示すものである。この事実は、次の試験によって確認することができる：
（Ａ）化合物（Ｉ）または（ＩＩ）がそれ自体で蛋白修飾物生成抑制作用を示す事実を証明する試験：代表的なＡＧＥｓであるペントシジンを指標として、非糖尿病の腎不全透析患者から血漿を採取し、本発明化合物を加え、一定時間後のペントシジン生成量を測定する。
（Ｂ）化合物（Ｉ）または（ＩＩ）がビタミンＢ６欠乏症を惹起しないことを証明する試験：ビタミンＢ６溶液に本発明の化合物を加え、一定時間後のビタミンＢ６残存量を測定する。
【００５３】
化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を有効成分として含有する本発明の蛋白修飾物生成抑制剤は、以下に例示する病態の予防および／または治療に有用である：腎障害、糖尿病合併症（腎症、神経障害、網膜症、白内障など）、動脈硬化、透析合併症である透析アミロイドーシス、腹膜透析患者における腹膜硬化症、中枢神経疾患であるアルツハイマー病、ピック病およびパーキンソン病、リウマチ性関節炎、日光弾性線維症、老化など。当該抑制剤は、特に腎障害を予防および／または治療するのに有用である。
【００５４】
予防剤または治療剤として用いる場合、本発明化合物（Ｉ）を、そのままあるいは水に希釈するなどの処理を施して使用することができ、医薬品、医薬部外品などに配合して使用することができる。この場合の配合量は、病態や製品に応じて適宜選択されるが、通常全身投与製剤の場合には、０．００１〜５０重量％、特に０．０１〜１０重量％とすることができ、０．００１重量％より少ないと満足する予防または治療作用が認められない可能性があり、また、５重量％を越えると製品そのものの安定性や香味などの特性が損なわれる可能性があるので好ましくない。
【００５５】
本発明化合物（Ｉ）は、遊離形または塩形で製剤中に含有されてよい。塩形としては、通常、薬剤学的に許容されているもの、たとえば無機塩基や有機塩基との塩、無機酸、有機酸、塩基性または酸性アミノ酸などの酸付加塩などが挙げられる。無機塩基との塩としては、たとえばアルカリ金属（ナトリウム、カリウムなど）塩、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウムなど）塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。有機塩基との塩としては、たとえば第１級アミン（エタノールアミンなど）、第２級アミン（ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジシクロへキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなど）、第３級アミン（トリメチルアミン、トリエチルアミン、ビリジン、ピコリン、トリエタノールアミンなど）との塩が挙げられる。
【００５６】
無機酸との塩としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が例示され、有機酸との塩としては、ギ酸、酢酸、乳酸、トリフルオロ酢酸、フマール酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、安息香酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が例示される。さらに、塩基性アミノ酸との塩としては、アルギニン、リジン、オルニチンなどとの塩が例示され、酸性アミノ酸との塩としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が例示される。
【００５７】
本発明の化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は、必要に応じて、アミノグアニジン、ピリドキサミン誘導体、ＯＰＢ−９１９５、ビグアナイド化合物、架橋形成阻害薬、アマドリ化合物を分解する酵素、ＧＳＨ、システイン、アセチルシステイン、ビタミンＥ、ユビキノール、アルドース還元酵素阻害薬、カルボニル化合物トラップ剤など、公知の薬物と共に使用されてもよく、これにより蛋白修飾物生成抑制作用の持続性を高めることができる。また、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を失活化または分解する物質を同定し、これを阻害する物質を選択し、これを併用あるいは配合し、組成物中の有効成分の安定化を図ることができる。
【００５８】
本発明の薬剤の投与方法として、経口投与や静脈内投与以外に、経粘膜投与、経皮投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸内投与などが適宜選択でき、その投与方法に応じて、種々の製剤として用いることができる。以下に、各製剤について記載するが、本発明において用いられる剤型はこれらに限定されるものではなく、医薬製剤分野において通常用いられる各種製剤として用いることができる。
【００５９】
蛋白修飾物が関与する病態に対する予防薬または治療薬として用いる場合には、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）の経口投与量は、一般に０．３ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇの範囲が好ましく、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。全身投与を行う場合、特に静脈内投与の場合には老若男女または体型などにより変動があるが、通常、有効血中濃度が２μｇ／ｍＬ〜２００μｇ／ｍＬ、より好ましくは５μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬの範囲となるように投与する。
【００６０】
経口投与を行う場合の剤型として、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、錠剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤などがあり、適宜選択することができる。また、口腔内局所投与を行う場合の剤型として、岨囁剤、舌下剤、バッカル剤、トローチ剤、軟膏剤、貼布剤、液剤などがあり、適宜選択することができる。なお、上記製剤について徐放化、安定化、易崩壊化、難崩壊化、腸溶性化、易吸収化などの修飾を施してもよい。
【００６１】
上記の各剤型について、公知のドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の技術を採用することができる。本明細書に言うＤＤＳ製剤とは、徐放化製剤、局所適用製剤（トローチ、バッカル錠、舌下錠など）、薬物放出制御製剤、腸溶性製剤、胃溶性製剤などのような、投与経路、バイオアベイラビリティー、副作用などを勘案して、最適の製剤形態にした製剤をいう。
【００６２】
ＤＤＳの構成要素には、基本的に薬物、薬物放出モジュール、被包体および治療プログラムが含まれ、各々の構成要素について、特に放出を停止させた時に速やかに血中濃度が低下する半減期の短い薬物が好ましく、投与部位の生体組織と反応しない被包体が好ましく、さらに、設定された期間において最良の薬物濃度を維持する治療プログラムを有するのが好ましい。薬物放出モジュールは、基本的に薬物貯蔵庫、放出制御部、エネルギー源および放出孔または放出表面を有している。これら基本的構成要素は全て揃っている必要はなく、適宜追加あるいは削除などを行い、最良の形態を選択することができる。
【００６３】
ＤＤＳに使用できる材料としては、高分子、シクロデキストリン誘導体、レシチンなどがある。高分子には不溶性高分子（シリコーン、エチレン・酢酸ビニル共重合体、エチレン・ビニルアルコール共重合体、エチルセルロース、セルロースアセテートなど）、水溶性高分子およびヒドロキシルゲル形成高分子（ポリアクリルアミド、ポリヒドロキシエチルメタクリレート架橋体、ポリアクリル架橋体、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、水溶性セルロース誘導体、架橋ポロキサマー、キチン、キトサンなど）、徐溶解性高分子（エチルセルロース、メチルビニルエーテル・無水マレイン酸共重合体の部分エステルなど）、胃溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースナトリウム、マクロゴール、ポリビニルピロリドン、メタアクリル酸ジメチルアミノエチル・メタアクリル酸メチルコポリマーなど）、腸溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸フタルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、アクリル酸系ポリマーなど）、生分解性高分子（熱凝固または架橋アルブミン、架橋ゼラチン、コラーゲン、フィプリン、ポリシアノアクリレート、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリβ−ヒドロキシ酢酸、ポリカブロラクトンなど）があり、剤型によって適宜選択することができる。
【００６４】
特に、シリコン、エチレン・酢酸ビニル共重合体、エチレン−ビニルアルコール共重合体およびメチルビニルエーテル・無水マレイン酸共重合体の部分エステルは薬物の放出制御に使用でき、セルロースアセテートは浸透圧ポンプの材料として使用でき、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースおよびメチルセルロースは、徐放性製剤の膜素材として使用でき、ポリアクリル架橋体は口腔粘膜あるいは眼粘膜付着剤として使用できる。
【００６５】
また、製剤中には、その剤形（経口投与剤、注射剤、座剤など）に応じて、溶剤、賦形剤、コーティング剤、基剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶解補助剤、懸濁化剤、粘桐剤、乳化剤、安定剤、緩衝剤、など張化剤、無痛化剤、保存剤、矯味剤、芳香剤、着色剤など適宜の添加剤を配合して製造することができる。これら各添加剤について、以下にそれぞれの具体例を挙げるが、これらに特に限定されるものではない。
【００６６】
溶剤としては、精製水、注射用水、生理食塩液、ラッカセイ油、エタノール、グリセリンなどを挙げることができる。賦形剤としては、デンプン類、乳糖、ブドウ糖、白糖、結晶セルロース、硫酸カルシウム、炭酸カルシウム、タルク、酸化チタン、トレハロース、キシリトールなどを挙げることができる。コーティング剤としては、白糖、ゼラチン、酢酸フタル酸セルロースおよび上記記載した高分子などを挙げることができる。基剤としては、ワセリン、植物油、マクロゴール、水中油型乳剤性基剤、油中水型乳剤性基剤などを挙げることができる。
【００６７】
結合剤としては、デンプンおよびその誘導体、セルロースおよびその誘導体、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、トラガント、アラビアゴムなどの天然高分子化合物、ポリビニルピロリドンなどの合成高分子化合物、デキストリン、ヒドロキシプロピルスターチなどを挙げることができる。滑沢剤としては、ステアリン酸およびその塩類、タルク、ワックス類、小麦デンプン、マクロゴール、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールなどを挙げることができる。崩壊剤としては、デンプンおよびその誘導体、寒天、ゼラチン末、炭酸水素ナトリウム、セルロースおよびその誘導体、カルメロースカルシウム、ヒドロキシプロピルスターチ、カルポキシメチルセルロースおよびその塩類ならびにその架橋体、低置換型ヒドロキシプロピルセルロースなどを挙げることができる。
【００６８】
溶解補助剤としては、シクロデキストリン、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。懸濁化剤としては、アラビアゴム、トラガント、アルギン酸ナトリウム、モノステアリン酸アルミニウム、クエン酸、各種界面活性剤などが挙げられる。粘稠剤としては、カルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、トラガント、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウムなどが挙げられる。乳化剤としては、アラビアゴム、コレステロール、トラガント、メチルセルロース、各種界面活性剤、レシチンなどが挙げられる。
【００６９】
安定剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、トコフェロール、キレート剤、不活性ガス、還元性物質などがある。緩衝剤としては、リン酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸などがある。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖などがある。無痛化剤としては、塩酸プロカイン、リドカイン、ベンジルアルコールなどがある。保存剤としては、安息香酸およびその塩類、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、逆性石けん、ベンジルアルコール、フェノール、チロメサールなどがある。矯味剤としては、白糖、サッカリン、カンゾウエキス、ソルビトール、キシリトール、グリセリンなどがある。芳香剤としては、トウヒチンキ、ローズ油などがある。着色剤としては、水溶性食用色素、レーキ色素などがある。
【００７０】
上記したように、医薬品を徐放化製剤、腸溶性製剤または薬物放出制御製剤のようなＤＤＳ製剤化することにより、薬物の有効血中濃度の持続化、バイオアベイラビリティーの向上などの効果が期待できる。しかし、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は生体内で失活化または分解され、その結果、所望の効果が低下または消失する可能性がある。従って、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を失活化または分解する物質を阻害する物質を本発明の蛋白修飾物に関与する病態の予防または治療組成物と併用することにより、成分の効果をさらに持続化させ得る。これらは製剤中に配合してもよく、または別々に投与してもよい。当業者は適切に、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を失活化または分解する物質を同定し、これを阻害する物質を選択し、配合あるいは併用することができる。
【００７１】
製剤中には、上記以外の添加物として通常の組成物に使用されている成分を用いることができ、これらの成分の添加量は、本発明の効果を妨げない範囲で通常量とすることができる。
【００７２】
本発明の化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は、また、腹膜透析や血液透析における蛋白修飾物質による障害を抑制するために使用することができる。すなわち、蛋白修飾物生成抑制剤としての化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を、常套の腹膜透析液や血液透析液中に配合すればよい。
【００７３】
本発明による液体試料中のカルボニル化合物含有量を低減させる方法は、蛋白修飾物生成抑制剤としての化合物（Ｉ）または（ＩＩ）と当該液体試料とを接触させる工程を含むものである。
【００７４】
また、本発明の蛋白修飾物の生成抑制方法は、蛋白修飾物生成抑制剤としての化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を、患者血液または腹膜透析液と接触させる工程を含むものである。透析における蛋白修飾物としては、腹膜透析または血液透析を受ける患者に由来するカルボニル化合物により生成される蛋白修飾物および腹膜透析液または血液透析液自体に由来するカルボニル化合物により生成される蛋白修飾物などが含まれる。
【００７５】
本発明における化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を添加する腹膜透析液または血液透析液の組成は、公知のものでよい。一般的な腹膜透析液は、浸透圧調節剤（グルコースなど）、緩衝剤（乳酸、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、ピルビン酸、コハク酸、炭酸水素ナトリウムなど）、無機塩類（ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、塩素イオンなど）などで構成されている。化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を添加した腹膜透析液または血液透析液は、そのまま密封して加熱滅菌することができる。そうすることによって、加熱滅菌処理時または保存時に伴う、これら主成分からの蛋白修飾物の生成を抑制することができる。
【００７６】
また、第一室および第二室からなる分画された容器に腹膜透析などの液を収容し、第一室に還元糖を収容し、第二室に化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を収容し、使用直前に混合しても良い。アミノ酸が含まれる場合には、当業者は適宜第三室を設けるなど、最良の形態をとることができる。
【００７７】
腹腔内または血管内に投与された後は、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）が蛋白修飾物の生成を抑制するため、腹膜硬化のような副作用を軽減できる。さらに、その他の病態（糖尿病合併症など）の予防・治療にも効果を発挿することが期待できる。透析液には、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）の他に、公知のアミノグアニジンなどの薬物を混合して用いることができる。また、粉末型透析剤にも応用可能である。
【００７８】
適当な混注用コネクターを装備した透析回路に、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を注入することもできる。また、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を直接腹腔内に注入して、腹腔内で腹膜透析液と混合することもできる。また、腹膜透析液を患者へ注入する前、または腹腔内貯留中に、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を静脈内注射することにより、蛋白修飾物の生成を効果的に抑制することもできる。
【００７９】
透析液などは、適当な密閉容器に充填し、滅菌処理する。滅菌処理には高圧蒸気滅菌や熱水滅菌などの加熱滅菌が有効である。この場合、高温で有害物質を溶出せず、滅菌後も輸送に耐える強度を備えた容器を用いる。具体的には、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエステル、エチレン酢酸ビニル共重合体などからなる可換性プラスチックバッグが挙げられる。また、外気の影響による液の劣化を避けるために、透析液などを充填した容器をさらにガスバリアー性の高い包装材で包装しても良い。
【００８０】
高圧加熱滅菌を含む加熱滅菌により滅菌処理を行う場合、用いられる化合物（Ｉ）または（ＩＩ）が加熱などの処理に対して十分安定であるならば、透析液配合時に化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を予め添加してから、加熱滅菌操作を行うこともできる。用いる化合物（Ｉ）または（ＩＩ）が加熱滅菌に安定でない場合は、加熱を要しない滅菌法を用いることもできる。この様な滅菌法には、たとえば濾過滅菌などがある。
【００８１】
たとえば、孔径０．２μｍ程度のメンブランフィルターを備えた精密濾過器を用いて濾過することにより滅菌することができる。濾過滅菌された透析液は、可撓性プラスチックバックなどの容器に充填された後、密封される。また、予め加熱滅菌した腹膜透析液などに、後で化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を添加しても良い。
【００８２】
添加する時期は特に限定されない。液を滅菌後あるいは滅菌前に化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を添加しても良いし、透析直前または同時に添加しても良いし、透析液を注入した後に直接腹腔内に注入しても良い。
【００８３】
本発明の腹膜透析液は、現行の腹膜透析液や血液透析液と同様の透析処理に利用される。すなわち、腹膜透析の場合にあっては、透析患者の腹腔内に本発明による腹膜透析液を適量注入し、腹膜を通過して生体内の低分子量成分を腹膜透析液内に移行させる。腹膜透析液は間欠的に循環させ、患者の症状に応じて透析を継続する。このとき、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は透析液内または生体内での蛋白修飾物の生成を抑制する。クレアチニンや無機塩類、あるいは塩素イオンなどの透析成分とともに、カルボニル化合物も血中や腹膜内から腹膜透析液中へ移行する。ゆえに、蛋白修飾物による生体への悪影響が減少される。
【００８４】
化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は透析液のみに使用できるのではなく、栄養輸液、電解質輸液、経腸・経管栄養剤など、あらゆる液剤に利用できる。
【実施例】
【００８５】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。
【００８６】
［製造例１］４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）の製造
５−フェニルテトラゾール２６．０ｇ（０．１８ｍｏｌ）のメタノール溶液２７０ｍＬに５℃でモルホリン１７．０ｇ（０．２ｍｏｌ）および３６％ホルマリン１７．８ｇを添加した後、室温で一晩撹拌した。反応液にヘキサン２００ｍＬを添加し、析出した結晶を濾過した。真空乾燥の後、白色結晶４３．６ｇ（収率９９％）の４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリンを得た。核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）およびマススペクトル（Ｍａｓｓ）により構造を確認した。
【００８７】
ＮＭＲ：主なシグナル
２．７１４ｐｐｍ ｔ ４Ｈ モルホリンＣＨ２
３．７０９ｐｐｍ ｔ ４Ｈ モルホリンＣＨ２
５．４９９ｐｐｍ ｓ ２Ｈ テトラゾールとモルホリン間のＣＨ２
７．４９４ｐｐｍ ｍ ３Ｈ フェニルＣＨ
８．１７１ｐｐｍ ｍ ２Ｈ フェニルＣＨ
【００８８】
Ｍａｓｓ（ＥＩ−ＭＳ）：ｍ／ｚ ２４５（分子量）
【００８９】
同様にして５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）を合成した。これらの化合物はいずれも公知化合物である。
【００９０】
［製造例２］１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物４）の製造方法
５−フェニルテトラゾール２．００ｇ（１３．８ｍｍｏｌ）をメタノール２０ｍｌに加えて溶解した後に、１０℃以下でピペラジン２．３７ｇ（２７．６ｍｍｏｌ）と３６％ホルマリン１．３４２ｇ（１６．５４ｍｍｏｌ）を加えて撹拌し、室温に戻した。この混合液を一晩撹拌し、反応させた。反応の進行に伴って生成する目的化合物は非常に難溶性であるため、結晶として析出する。反応終了後、析出した結晶を濾過し、次いで、真空下、デシケーター中でよく乾燥し、１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの白色結晶０．９５９ｇを得た。
【００９１】
［製造例３］１−メチル−４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物５）の製造方法
５−フェニルテトラゾール１３．０ｇ（８９．６ｍｍｏｌ）をメタノール１１３ｍｌに加え冷却し、メチルピペラジン９．８２ｇ（９８．０ｍｍｏｌ）と３６％ホルマリン９．２ｇ（０．１１ｍｏｌ）を加えて撹拌した。次いで、室温で一晩撹拌して反応させた後、メタノールを留去し、水を加えて懸濁させ、析出した結晶を濾別した。水洗、乾燥の後、１−メチル−４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの肌色結晶１３．０ｇ（収率５６．２％）を得た。
１−メチル−４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの構造確認は、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）で行い、その結果は目的化合物を支持するものであった。そのときのデータを以下に示す。
【００９２】
ＮＭＲ：主なシグナル
２．２５８ｐｐｍ ｓ ３Ｈ ＣＨ３
２．４５５ｐｐｍ ｔ ４Ｈ ピペラジンＣＨ２
３．７６１ｐｐｍ ｔ ４Ｈ ピペラジンＣＨ２
５．５２１ｐｐｍ ｓ ２Ｈ テトラゾールとピペラジンを連結したＣＨ２
７．４８０ｐｐｍ ｍ ３Ｈ フェニルＣＨ
８．１２５ｐｐｍ ｍ ２Ｈ フェニルＣＨ
【００９３】
［製造例４］４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−チオモルホリン（化合物６）の製造方法
メタノール１３３ｍｌに５−フェニルテトラゾール１３．０ｇ（０．０８９ｍｏｌ）を加えて溶解した液を５℃未満に冷却し、チオモルホリン１０．０ｇ（０．１０ｍｏｌ）と３６％ホルマリン９．２ｇを添加した後、室温で一晩撹拌して反応させた。目的化合物は反応溶液中に結晶として析出するので反応終了後、反応液を濾過して結晶を取り、真空デシケーター中で乾燥して４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−チオモルホリンの白色結晶を１１．５ｇ（収率４９．１％）得た。
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−チオモルホリンの構造確認は、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）で行い、その結果は目的化合物を支持するものであった。そのときのデータを以下に示す。
【００９４】
ＮＭＲ：主なシグナル
２．６８５ｐｐｍ ｔ ４Ｈ チオモルホリンＣＨ２
２．９８８ｐｐｍ ｔ ４Ｈ チオモルホリンＣＨ２
５．４８０ｐｐｍ ｓ ２Ｈ テトラゾールとチオモルホリンを連結したＣＨ２
７．４９４ｐｐｍ ｍ ３Ｈ フェニルＣＨ
８．１６２ｐｐｍ ｍ ２Ｈ フェニルＣＨ
【００９５】
［製造例５］１−４−ビス−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物７）の製造方法
５−フェニルテトラゾール２０．０ｇ（０．１４ｍｏｌ）のメタノール２０５ｍｌ溶液に５℃未満でピペラジン５．３ｇ（０．０６２ｍｏｌ）と３６％ホルマリン１４．１ｇ添加した。その後、室温で一晩撹拌して反応させた。反応終了後、析出した結晶を濾過し、真空デシケーター中で乾燥の後、２３．７ｇ（収率９５．０％）の１−４−ビス−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの白色結晶を得た。
１−４−ビス−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの構造確認は、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）で行い、その結果は目的化合物を支持するものであった。そのときのデータを以下に示す。
【００９６】
ＮＭＲ：主なシグナル
２．７６７ｐｐｍ ｓ ８Ｈ ピペラジンＣＨ２
５．４６９ｐｐｍ ｓ ４Ｈ テトラゾールとピペラジンを連結したＣＨ２
７．４９６ｐｐｍ ｍ ６Ｈ フェニルＣＨ
８．１７１ｐｐｍ ｍ ２Ｈ フェニルＣＨ
【００９７】
［試験例１］
ＡＧＥｓ生成抑制効果の検証
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）について、代表的なＡＧＥｓであるペントシジン生成量を指標として、ＡＧＥｓ生成抑制効果を以下の方法により検証した。
【００９８】
非糖尿病の腎不全透析患者から同意を得て透析前に採血し、新鮮ヘパリン化血漿試料とした。数名の患者（ｎ＝３〜５）から得られたプール血漿を実験に供した。プールした血漿（９００μＬ）に所定濃度（最終濃度８、２０、および５０ｍＭ）に調製した４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液（１００μＬ）を加え、３７℃で７日間、空気存在下でインキュベーションした後、ペントシジン含量を測定し、タンパク質の糖化反応を抑制する強さを評価した。
【００９９】
ペントシジンの測定は、以下のようにして行った。インキュベーションの後の各サンプル（５０μＬ）に、等容積の１０％トリクロロ酢酸を加えた後、５０００ｇで５分間遠心分離した。上清を除去後、ペレットを５％トリクロロ酢酸（３００μＬ）で洗浄した。ペレットを減圧下乾燥後、窒素雰囲気下で６Ｎ ＨＣｌ溶液（１００μＬ）中にて、１１０℃で１６時間加水分解を行った。次いで加水分解物に５Ｎ ＮａＯＨ（１００μＬ）および０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）（２００μＬ）を添加した後、０．５μｍ孔のポアフィルタを通して濾過し、ＰＢＳで希釈した。遊離したペントシジンの濃度は、蛍光検出器（ＲＦ−１０Ａ、島津製作所）を用いた逆相ＨＰＬＣを用いて測定した（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ． ｅｔ ａｌ． ； Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９３， ２３５３−２３５８， １９９６）。 流出液を３３５／３８５ｎｍの励起／発光波長でモニターした。合成ペントシジンを標準物質として使用した。ペントシジンの検出限界は、０．１ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質であった。
【０１００】
抑制効果は、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）と同様にして反応させた陽性対照（アミノグアニジンおよびピリドキサミン（シグマ））と比較することにより評価した。
【０１０１】
透析患者血漿とインキュベートしたときの４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオンおよび（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノールのペントシジン生成抑制効果（ペントシジン生成量ｎｍｏｌ／ｍＬ）を表２に、ペントシジン生成率（％）を図１に示す。
【表２】
【０１０２】
表２および図１に示すごとく、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）は、透析患者血漿におけるペントシジンの生成を強く抑制した。
【０１０３】
同様にして、１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物４）、１−メチル−４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物５）、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−チオモルホリン（化合物６）および１−４−ビス−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物７）のペントシジン生成抑制活性を測定した（表３および図６参照）。これらの化合物はペントシジンの生成を強く抑制した。
【表３】
【０１０４】
［試験例２］
（１）ヒドロキシラジカルによるフェニルアラニンのヒドロキシル化反応抑制効果
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）について、ヒドロキシラジカルによるフェニルアラニンのヒドロキシル化反応抑制効果を検討した。
【０１０５】
フェニルアラニン（最終濃度：１ｍＭ）、試験化合物（最終濃度：０．１、０．５、２．５ｍＭ）、過酸化水素（最終濃度：５ｍＭ）、硫酸銅（最終濃度：０．１ｍＭ）を２００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し（全量５００μＬ）、３７℃で４時間インキュベートした。インキュベ−ト終了後、ＤＴＰＡ（最終濃度：１ｍＭ）、２６０ｕｎｉｔのカタラーゼを添加して反応を停止させた。ｏ−チロシンおよびｍ−チロシンの生成量をＨＰＬＣで分析した。すなわち、一定時間後、反応液を１００倍希釈し２０μＬをＨＰＬＣにインジュクトし、Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ：野村化学製）で分離後、励起波長２７５ｎｍ、蛍光波長３０５ｎｍの条件で蛍光検出器（ＲＦ−１０Ａ：島津製作所）を用いて検出した。移動相は、０．６ｍＬ／分の流速で、バッファＢ濃度を６．５％から１０％まで２５分間で変化させた（バッファＡ：０．１０％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：０．０８％トリフルオロ酢酸を含む８０％アセトニトリル）。結果を図２に示す。
【０１０６】
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）は、ヒドロキシラジカルによるフェニルアラニンのヒドロキシル化を、陽性対照のピリドキサミン（シグマ）に比較して非常に強く抑制した。
【０１０７】
（２）パーオキシナイトライトによるチロシンのニトロ化反応の抑制効果
Ｐａｎｎａｌａ ＡＳらの方法（Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ ２４：５９４−６０６， １９９８）に準じて実施した。すなわち、チロシン（最終濃度：１００μＭ）、試験化合物（最終濃度：０．１、０．５、２．５ｍＭおよび５ｍＭ）、パーオキシナイトライト（同仁化学製）（最終濃度：５００μＭ）を２００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し（液量５００μＬ）、３７℃で１５分間インキュベートさせた。インキュベート終了後、ニトロチロシンの生成量をＨＰＬＣで分析した。すなわち、一定時間後、反応液（２０μＬ）をＨＰＬＣにインジェクトし、Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ：ウォーターズ製）で分離後、紫外検出器（ＲＦ−１０Ａ：島津製作所）を用い２８０ｎｍの波長で検出した。移動相は、０．６ｍＬ／分の流速で、バッファＢ濃度を５．０％から３０％まで３０分間で変化させた（バッファＡ：０．１０％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：０．０８％トリフルオロ酢酸を含む８０％アセトニトリル）。４−ヒドロキシ−３−ニトロ安息香酸（１００μＭ）を内部標準として使用した。結果を図３に示す。
【０１０８】
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）は、チロシンのニトロ化によるニトロチロシンの生成を、陽性対照のピリドキサミン（シグマ）に比較して非常に強く抑制した。
【０１０９】
［試験例３］
ビタミンＢ６（ＰＬＰ／ピリドキサールリン酸）の捕捉試験
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）、並びに陽性対照のアミノグアニジンを所定の濃度でＤＭＳＯに溶解してサンプル溶液とした。陰性対照として薬剤無添加のＤＭＳＯを用いた。さらに、ピリドキサールリン酸（ＰＬＰ）を所定の濃度で精製水に溶解した。被検化合物、陽性対照および陰性対照にＰＢＳを添加し、それぞれを最終濃度５００μＭの溶液とした。この溶液に前述のＰＬＰ水溶液を最終濃度５０μＭになるように加えＰＬＰ反応液とした。ＨＰＬＣを用いて、０時間、１時間後、１０時間後のＰＬＰ量を測定し、各化合物のＰＬＰ捕捉量を判定した。
【０１１０】
ＨＰＬＣの分析条件は、逆相系Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ：ウォーターズ製）で分離後、蛍光検出器（ＲＦ−１０Ａ：島津製作所／励起波長３００ｎｍ、蛍光波長４００ｎｍ）を用いた。移動層は０．６ｍＬ／ｍｉｎの流速で、バッファＢ濃度を０％から３％まで２５分間で変化させた（バッファＡ：０．１０％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：０．０８％トリフルオロ酢酸を含む８０％アセトニトリル）。ＰＬＰ残存率を図４に示す。
【０１１１】
上記の結果より、陽性対照のアミノグアニジンは強いＰＬＰの捕捉が見られたが、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）は、いずれもＰＬＰの捕捉は認められなかった。
【０１１２】
［試験例４］
吸収性試験
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）について、吸収性を試験した。各化合物を所定の濃度でカルボキシメチルセルロースに懸濁させ、経口投与試料として調製した。次いでラットにゾンデを用いて、各投与試料をそれぞれ５０ｍｇ／ｋｇの割合で経口投与した。ウイスター（Ｗｉｓｔｅｒ）系のラット（雄、８週齢のクローズドコロニー）を１群につき５匹使用した。化合物投与後、１時間、２時間、６時間および２４時間後に採血した。採血した検体を直ちに３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して血漿を回収し、ＨＰＬＣで検体中の化合物の濃度を定量した。すなわち、回収した血漿１００μＬに対してアセトニトリル２００μＬを添加し、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上清を回収し、除蛋白し、ＨＰＬＣに供した。ＨＰＬＣの測定条件は、各化合物に適した分離、定量ができる条件を選んだ。たとえば、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）の場合、逆相系Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ：ウォーターズ製）で分離後、紫外検出器（ＲＦ−１０Ａ：島津製作所）を用いて２４０ｎｍの波長で検出して定量した。移動層は０．８ｍＬ／ｍｉｎの流速で、溶媒は水：アセニトリルを用いた。結果を図５に示す。いずれの化合物も良好な吸収性を示した。
【０１１３】
［試験例５］
急性毒性試験
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）について、マウスを用いて急性毒性試験を行った。各化合物を所定の濃度でカルボキシメチルセルロースに懸濁させ、経口投与試料として調製した。次いでマウスにゾンデを用いて単回経口投与した。投与量は１００、２５０、５００、１０００、２０００ｍｇ／ｋｇの５点で行った。アイ・シー・アール（ＩＣＲ）系のマウス（雄、８週齢のクローズドコロニー）を１群につき５匹を使用した。被検物質を投与しＬＤ５０値を求めた。結果を表４に示す。いずれの化合物も毒性は低かった。
【表４】
【０１１４】
［試験例６］
糸球体腎炎に対する作用
Ｗｉｓｔａｒラット（雄、体重１５０ｇ、６週齢）に抗Ｔｈｙ−１抗体であるＯＸ−７を１．２ｍｇ／ｋｇ尾静脈投与することによって、メサンギウム増殖性腎炎を呈する代表的な糸球体腎炎モデル作製する。抗Ｔｈｙ−１抗体を投与した後、被検化合物（４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、１ｍｇ／ｋｇ体重、１日１回）を０．５％カルボキシメチルセルロースに懸濁させ、ゾンデにより５日間連続強制投与し、６日目に採材し、腎臓を採取、病理解析（糸球体細胞数のカウント）を行った。具体的には、常法に従いＰＡＳ染色した染色像を３ＣＣＤカメラ（オリンパス）で取り込んだ後、イメージグラヴァＰＣＩ（富士写真フィルム）とマックアスペクト（三谷株式会社）のソフトウエアを使用して解析した。また、血液・尿の生化学的解析（臨床解析受託会社：ＳＲＬ）も行った。
それらの結果を図７〜図９に示す。
【０１１５】
［試験例７］
虚血再灌流腎不全モデルラットに対する腎保護作用
本病態モデルは、代表的な急性腎不全モデルである。作製方法として、Ｗｉｓｔａｒラット（雄、体重１５０ｇ、６週齢）の右腎摘出手術を行い、翌日全身麻酔下に残った左片腎の腎動脈をクリップで結紮する。クリップ後体温が下がらないように加温器の上で４５分間観察（虚血）した後、クリップをはずし、再灌流を行う。虚血再還灌流モデル作製後、被検化合物（４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、１ｍｇ／ｋｇ体重、１日１回）を０．５％カルボキシメチルセルロースに懸濁させ、ゾンデにより２日間連続強制投与し、３日目に腎臓を採取し、病理解析（尿細管間質障害のスコアリング）を行った。具体的には、常法に従いＰＡＳ染色した腎染色像の尿細管間質障害は尿細管壊死、尿細管肥大、尿細管萎縮、尿細管基底膜肥厚、ｃａｓｔの有無を評価した。併せて血液の生化学的解析（臨床解析受託会社：ＳＲＬ）も行った。
それらの結果を図１０および図１１に示す。
【０１１６】
［試験例８］
中大脳動脈虚血再還流モデルにおける脳保護作用
体重２７０〜３５０ｇのＣＤ（ＳＤ）ＩＧＳ雄性ラット（日本チャルスリバー株式会社 日野生産場２２号室特定生産）（１群８匹）を２％イソフルラン（７０％Ｎ２Ｏ（笑気ガス）と３０％Ｏ２の混合ガス）で麻酔して不動化した後に、ヒーティングパット上に置き、動物の直腸温と脳温を３７〜３８℃に保持した。次いで、実験上の安定性を観察するために、該動物の尾動脈にポリエチレン製カニューレ（ＰＥ−５０、ベクトン・ディッキンソン社製）を挿入、留置し、これより採血や血圧測定を行い血糖値、ヘマトクリット、ＣＯ２濃度、酸素分圧、ｐＨ、血圧等の生化学的パラメーターをモニターした。また、皮質における脳血流量はレイザー・ドップラー・フルオメトリー（ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．ｉｎｃ社製／製品名：ＯＭＥＧＡ ＦＬＯＷ（ＦＬＯ−Ｃ１））検出部位をブレグマ左４ｍｍの位置に、直接頭蓋にあてて測定した。このように準備された動物左頚部を切開し、総頚動脈の内頚・外頚動脈分岐点から内頚動脈の上流に向け、長さ１６ｍｍ、直径０．２〜０．３ｍｍで先端３ｍｍをシリコンコーティングしたナイロン製外科用スレッドを通したまま留置し、２時間のあいだ中大脳動脈を閉塞した。その後スレッドを抜き取り、中大脳動脈を開放し、２１時間のあいだ血液を再還流した。それぞれ、対照である３．０ｍｇ／ｋｇの３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン（以下、エダラボンという）および被検薬物である４．２３ｍｇ／ｋｇの４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）（以下、ＴＭ−３００１という）を、中大脳動脈を閉塞後５分後と５時間後に尾動脈に留置したカニューレより２回投与した。上記手技が終了後、動物より脳を摘出し、２ｍｍ厚で７枚の脳切片を調製後、生理食塩水４０ｍｌに２，３，５−ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ（シグマ社製）を０．８ｇ溶解した液（ＴＴＣ染色液）に３７℃で１５分間浸漬して染色処理を施した後に１０％の中性ホルマリン液を用いて固定し、標本とした。これらの標本は、それぞれＣＣＤカメラで画像化し、Ｓｗａｎｓｏｎ等の方法（Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ １０：２９０−２９３； １９９４）によって解析した。その結果、賦形剤単回投与群に比較し対照薬剤のエダラボンおよび被検薬剤のＴＭ−３００１は有意差をもって脳梗塞巣を縮小した。結果を図１３に示す。また、神経状態の評価は施術ラットを水平な台の上におき、横から押して麻痺なく正常に歩ける状態のものをグレード０、横から押して抵抗があり、前にまっすぐ歩けるが、前肢の屈曲を呈するような状態をグレード１、横から押して抵抗がないが、前にまっすぐ歩ける状態のものをグレード２、横から押すと抵抗がなく前にまっすぐ歩けない（回転や転倒する）状態のものをグレード３に分類し、四段階の基準による、Ｂｅｄｅｒｓｏｎらの方法によるグレーディングシステム（Ｓｔｒｏｋｅ １７：４７２−４７６， １９９０）で評価した。更に、機能回復の面では、回転ローター上にマウスを歩かせ、その歩行状態がどの程度可能であるかを評価する方法による、ローターロッド試験を施術前後に行い、その評価を行った。その結果、賦形剤単開投与群と比較して、エダラボン（対照薬剤）およびＴＭ−３００１（被検薬剤）は、有意差をもって神経状態の改善および機能回復を示した。その結果を表５に示す。
【０１１７】
【表５】
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明により、テトラゾール環にメチレンを介して各種の置換基を有する化合物、特に化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を有効成分とする、強力かつ優れた蛋白修飾物生成抑制効果を有し、さらに血圧降下を伴わない蛋白修飾物生成抑制剤が提供される。この蛋白修飾物生成抑制剤は、ＡＧＥｓやＡＬＥｓに関連する疾患の予防や治療に有用であって、具体的には腎組織保護剤として単独でまたは腹膜または血液透析液に配合して使用される。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】図１は、本発明化合物のペントシジン抑制効果を示すグラフである。
【図２】図２は、本発明化合物のヒドロキシラジカルによるフェニルアラニンのヒドロキシル化反応抑制効果を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明化合物によるパーオキシナイトライトによるチロシンのニトロ化反応の抑制効果を示すグラフである。
【図４】図４は、本発明化合物のビタミンＢ６捕捉能を示すグラフである。
【図５】図５は、本発明化合物の吸収性を示すグラフである。
【図６】図６は、化合物４〜７のペントシジン生成抑制効果を示すグラフである。
【図７】図７は、糸球体腎炎モデルにおける化合物１のＢＵＮ低減化効果を示すグラフである。
【図８】図８は、糸球体腎炎モデルにおける化合物１の尿蛋白減少効果を示すグラフである。
【図９】図９は、化合物１が糸球体腎炎モデルの糸球体細胞に与える影響を示すグラフである。
【図１０】図１０は、腎不全モデルにおける化合物１のＢＵＮ低減化効果を示すグラフである。
【図１１】図１１は、腎不全モデルにおける化合物１の間質障害スコアーを示すグラフである。
【図１２】図１２は、化合物１が脳梗塞巣を縮小することを示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
この発明は、蛋白修飾物生成抑制剤、特に非酵素的条件下にカルボニル化合物と反応することによって生じる糖化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下、「ＡＧＥｓ」と称する）、脂質過酸化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｌｉｐｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｅｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、以下、「ＡＬＥｓ」と称する）などの蛋白修飾物の生成を抑制する薬剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖化反応（グリケーション）とは、ペプチドや蛋白質などのアミノ基と還元糖などのカルボニル基との非酵素的反応から始まる一連の反応（メイラード反応（非特許文献１参照））をいい、初期段階と後期段階に大別することができる。初期段階は糖の濃度と反応時間とに依存する可逆反応であり、前記アミノ基と前記カルボニル基とが非酵素的に反応してシッフ塩基を形成し、さらにアマドリ転位によりアマドリ化合物を形成する。
【０００３】
後期段階では初期段階で生成したアマドリ化合物が非可逆的に脱水、縮合、環状化、酸化、断片化、重合、転位などを受け、最終的にＡＧＥｓと呼ばれる蛋白修飾物を形成する。糖の自動酸化などにより、３−デオキシグルコソン（以下、「３−ＤＧ」と称する）、グリオキサール（以下、「ＧＯ」と称する）およびメチルグリオキサール（以下、「ＭＧＯ」と称する）などの反応性の高いジカルボニル化合物が生成するが、これらのカルボニル化合物も蛋白と反応し、多くの場合、蛋白質のリジン残基やアルギニン残基などが修飾されたＡＧＥｓを生成する。
【０００４】
また、酸化ストレス下では、生体内に豊富に存在する糖、脂質、アミノ酸などは酸化反応などにより、反応性の高いカルボニル化合物へと変化する。その結果生じる、ＧＯ、ＭＧＯ、アラビノース、グリコールアルデヒドなどの化合物はＡＧＥｓの前駆物質となる。また、アスコルビン酸の酸化により生成するデヒドロアスコルビン酸もＡＧＥｓの前駆物質となる。これらの前駆物質はいずれもカルボニル基を有しており、蛋白質のアミノ基と非酵素的に反応してシッフ塩基を生成してＡＧＥｓを形成する（非特許文献２参照）。
【０００５】
一方、酸化ストレス下では脂質過酸化も進行し、マロンジアルデヒド、ヒドロキシノネナールおよびアクロレインのような、様々なカルボニル化合物が形成される（非特許文献３参照）。これらのカルボニル化合物も蛋白質のアミノ基などと反応し、マロンジアルデヒド修飾リジンやヒドロキシノネナール修飾物などのＡＬＥｓと呼ばれる蛋白修飾物を形成する（非特許文献２参照）。
【０００６】
更に、セリンやスレオニンなどのアミノ酸も酸化によりアクロレイン、ＧＯなどのカルボニル化合物が生成し、蛋白修飾物を形成する（非特許文献４参照）。多くのカルボニル化合物は酸化的経路で生成されるが、３−ＤＧのように非酸化的経路を経て生成されるカルボニル化合物も存在する。
【０００７】
公知のＡＧＥｓ生成経路として、（１）シッフ塩基、アマドリ化合物から３−ＤＧを経由する経路；（２）シッフ塩基が酸化的にグリコールアルデヒド−アルキルイミンへ変化し、アルドアミンを経てＡＧＥｓに至る経路；（３）アルドアミンがグリオキサールモノアルキルイミンを経てＡＧＥｓに至る経路；（４）アマドリ化合物から２，３−エンジオールを経て生成されるＭＧＯを中間体とする経路；（５）その他などがある。
【０００８】
最近、ＡＧＥｓのひとつであるカルボキシメチルリジンが不飽和脂肪酸の脂質酸化反応の結果生じるＧＯによっても生成することが明らかになり、糖化・酸化反応と脂質酸化反応が共通の基盤で起こっていると考えられる。
【０００９】
以上のように、糖、脂質、アミノ酸およびアスコルビン酸から酸化的、非酸化的経路により生成されたカルボニル化合物は、蛋白を非酵素的に修飾して最終的にＡＧＥｓやＡＬＥｓなどの蛋白修飾物を形成するに至る。特に、複数の反応経路を経て生成されたカルボニル化合物により蛋白修飾反応が亢進している状態をカルボニル過剰による蛋白修飾、すなわち、カルボニルストレスと呼んでいる。
【００１０】
公知のＡＧＥｓとしては、ペントシジン（非特許文献５参照）、クロスリン（非特許文献６参照）、Ｘ１（フルオロリンク）、ピロピリジン（非特許文献７参照）、ピラリン（非特許文献８参照）、カルボキシメチルリジン（非特許文献９参照）、イミダゾロン化合物（非特許文献１０参照）、カルボキシエチルリジン（非特許文献１１参照）、ＭＧＯダイマー（非特許文献１２参照）、ＧＯダイマー（非特許文献１３参照）、イミダゾリジン（非特許文献１４参照）およびアルグピリミジン（非特許文献１５参照）などが知られている。
【００１１】
現在クローニングされているＡＧＥｓ受容体として、ＲＡＧＥ（非特許文献１６参照）、マクロファージスカベンジャー受容体クラスＡ（非特許文献１７参照）、ガレクチン３（非特許文献１８参照）、ＯＳＴ−４８および８０Ｋ−Ｈなどがある（非特許文献１７参照）。
【００１２】
血管組織においてＡＧＥｓがＲＡＧＥ（免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞膜貫通型蛋白質）に結合すると、細胞内で活性酸素が生成し、ｐ２１ｒａｓ／ＭＡＰＫ経路が活性化され（非特許文献１９参照）、これにより転写因子ＮＦ−κβ活性化が誘導され、ＶＣＡＭ−１などの血管障害関連因子の発現が誘導されることが報告されている（非特許文献２０参照）。また、ＡＧＥｓはＲＡＧＥを介して、微小血管の内皮細胞の増殖を制御し、恒常性維持に重要な役割を果たしている周皮細胞の増殖を制御するとともに、毒性効果を発揮することが報告されている（非特許文献２１参照）。
【００１３】
さらに、ＡＧＥｓは、ＲＡＧＥを介して微小血管の内皮細胞に直接的に作用し血管新生を促進することや、ＰＧＩ２の産生を阻害して血栓傾向となること（非特許文献２２参照）が報告されている。その他、ＡＧＥｓやＡＬＥｓなどの生理活性として、メサンギウム細胞の基質産生の亢進、単球遊走能の亢進、マクロファージからの炎症性サイトカインの放出、滑膜細胞のコラゲナーゼ産生促進、破骨細胞の活性化、血管平滑筋の増殖作用、血小板凝集の促進、ＮＯ活性とその平滑筋弛緩反応の抑制が報告されている（非特許文献２３参照）。
【００１４】
ＡＧＥｓが関与する疾患として、（１）糖尿病合併症である腎症（非特許文献２４参照）、神経障害（非特許文献２５参照）、網膜症（非特許文献２１参照）および白内障、（２）動脈硬化（非特許文献２６参照）、（３）透析合併症である透析アミロイドーシス（非特許文献２７参照）および腹膜透析患者における腹膜硬化症、（４）中枢神経疾患であるアルツハイマー病（非特許文献２８参照）、ピック病およびパーキンソン病、（５）リウマチ性関節炎（非特許文献２９参照）、（６）日光弾性線維症、（７）老化、（８）腎不全（非特許文献３０参照）などが知られている。その他、糖尿病の場合、血管内皮由来の血管拡張がＡＧＥｓによって障害されること（非特許文献３１参照）、ＡＧＥｓが腎硬化を促進させること（非特許文献３２参照）などが報告されている。
【００１５】
以上のことから、ＡＧＥｓを初めとする蛋白修飾物は、直接的にまたは受容体を介して生体に悪影響を与えることが明らかとなっている。
【００１６】
一方、腎機能が低下するに従って、血中のＡＧＥｓの濃度が上昇することが知られている。腎機能低下により、分子量５ｋＤａ以下と考えられるカルボニル化合物は体内に蓄積する。ペントシジンやピラリンなどの場合、遊離型も存在するが、血清アルブミンなどへの蛋白結合型が大部分を占めている（非特許文献３３参照）。また、血中ペントシジン濃度は糸球体濾過機能の影響を強く受けるという報告がある（非特許文献３４参照）。
【００１７】
この様に、ＡＧＥｓはその大部分が腎において処理され、健康時には血中濃度は低く保たれているが、腎機能が低下すると、尿毒症毒素（ｕｒｅｍｉｃ ｔｏｘｉｎ）として慢性の生物活性をもたらすようになる。
【００１８】
透析療法によって遊離型のものは除去されるが、蛋白結合型のものや分子内架橋を形成するものは除去することが困難である（非特許文献３５参照）。従って、腎不全期間の経過と共に蛋白修飾物の生体内蓄積量は増加する。また、生体内で糖が反応する基本的な過程以外に食品中から供給される遊離型ＡＧＥｓや、生体内で既に形成されたアマドリ化合物などから形成される活性の強い３−ＤＧ、ＧＯ、ＭＧＯなどの中間体が次々に蛋白と反応し、ＡＧＥｓの産生を促進することが認められている。また、血液は透析膜と接触することによって、補体系や白血球の活性化などの様々な影響を受け、フリーラジカルの産生亢進へとつながるなど、透析療法そのものによる酸化の亢進も存在し、ＡＧＥｓ生成の一因となっている。
【００１９】
ゆえに、透析療法での対策としては透析導入の初期からこれらの遊離型物質の除去を図り、結合型のＡＧＥｓ形成を極力抑制することが重要であり、上記のように結合型のＡＧＥｓを透析療法によって除去することは困難であるので、透析療法では蛋白修飾物の生成を抑制する薬物の開発が希求されている。
【００２０】
また、腎機能に起因するばかりではなく、腎不全に伴う抗酸化防御機構の低下も蛋白修飾物の蓄積に関与していると考えられる。腎不全患者では、血中還元型グルタチオンに対する酸化型グルタチオンの上昇（非特許文献３６参照）、グルタチオン依存酵素群の活性低下、保存期腎不全血漿グルタチオンペルオキシダーゼの低下（非特許文献３７参照）、全血中グルタチオンの低下（非特許文献３８参照）ならびに血漿セレン濃度の低下に対する血漿スーパーオキサイドジスムターゼの活性上昇（非特許文献３９参照）といった抗酸化能の不均衡が示唆されている（非特許文献４０参照）。
【００２１】
また、一般に慢性腎不全の患者では、高血糖の有無に関わらず血中や組織中に反応性の高いカルボニル化合物やＡＧＥｓが著しく蓄積していることが報告されている（非特許文献４１参照）。腎不全においては、非酵素的化学反応によりカルボニル化合物が高負荷の状態（カルボニルストレス）となり、蛋白質修飾が亢進される病態が存在しており、糖・脂質からカルボニル化合物が生成され蛋白質を修飾するためであると考えられる（非特許文献４２参照）。
【００２２】
ゆえに、様々な要因によって生じる蛋白修飾物の生成を抑制することが、組織障害の軽減につながり、ＡＧＥｓなどの蛋白修飾物質が関与する病態を予防および治療することができる。
【００２３】
慢性腎不全患者に行われる透析には、血液透析と腹膜透析がある。腹膜透析の場合、血中の老廃物は腹膜を通して腹膜透析液中に排泄される。高浸透圧の腹膜透析液（グルコース、イコデキストリンまたはアミノ酸などを含有する）は、腎不全患者の血中に蓄積した反応性の高いカルボニル化合物（たとえば腎不全患者の血中に酸化ストレスに伴って蓄積する、炭水化物に由来するカルボニル化合物（アラビノース、ＧＯ、ＭＧＯ、３−ＤＧ）、アスコルビン酸に由来するカルボニル化合物（デヒドロアスコルビン酸）、脂質に由来するカルボニル化合物（ヒドロキシノネナール、マロンジアルデヒド、アクロレイン））を、腹膜を介して腹腔内の腹膜透析液中に集める作用がある。
【００２４】
また、腹膜透析液の滅菌や保存中に、反応性の高いカルボニル化合物（３−ＤＧ、５−ヒドロキシメチルフルフラール、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、ＧＯ、ＭＧＯ、レブリン酸、フルフラール、アラビノースなどのカルボニル化合物）が腹膜透析液中に生成することが知られている（非特許文献４３参照）。
【００２５】
そのため腹膜透析液中の前記カルボニル化合物濃度は上昇し、蛋白修飾物質の生成が亢進する。その結果、腹膜の機能が低下し、除水能の低下や腹膜硬化症への進展に関与すると考えられる（非特許文献４４参照）。
【００２６】
実際に腹膜透析患者においては、導入されたグルコースによって腹腔内がカルボニルストレス状態となっていることが、内皮および中皮の免疫組織学的検討から証明されている（非特許文献４５参照）。
【００２７】
この様に、透析患者においてもカルボニル化合物による蛋白修飾物の生成が腹膜の形態学的変化およびこれに伴う機能（除水能）の低下の原因となっていることが推測されており、その改善方法の提供が求められている。
【００２８】
以上の事実と腎不全をはじめとする種々の病態を考え合わせると、カルボニル化合物蓄積がＡＧＥｓ産生亢進の原因のひとつであると考えられ（非特許文献４６参照）、ＡＧＥｓの産生を抑制することが、ＡＧＥｓが関連する病態に対し有効であると考えられる。
【００２９】
代表的なＡＧＥｓ生成阻害薬としてアミノグアニジンがある。アミノグアニジンはグルコース、シッフ塩基やアマドリ生成物から生成される３−ＤＧなどのジカルボニル化合物と反応してチアゾリンを形成することによってＡＧＥｓ生成を阻害すると考えられている。糖尿病モデル動物を用いた解析では、糖尿病性腎症（非特許文献４７参照）、網膜症（非特許文献４８参照）および白内障（非特許文献４９参照）の進展を遅延させる効果が確認されている。
【００３０】
他に、この種に属する化合物としてピリドキサミン誘導体（ピリドリン）がある。また、ＯＰＢ−９１９５（（±）２−イソプロピリデンヒドラゾノ−４−オキソ−チアゾリジン−５−イルアセトアニリド）はヒドラジンの窒素原子がカルボニル基と反応して安定な構造を形成し、遊離または蛋白に結合した反応性カルボニルを捕捉することにより（非特許文献５０参照）、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＡＧＥｓのみならずＡＬＥｓの生成も抑制する。メトホルミンやブホルミンなどのビグアナイド化合物もカルボニル化合物を捕捉できるため（非特許文献５１参照）、ＡＧＥｓ生成阻害薬として利用できる可能性がある。さらに、ＡＧＥｓの特徴である架橋を切断するタイプのＡＧＥｓ阻害剤、アマドリ化合物を分解する酵素（ａｍａｄｏｒｉａｓｅ）などの提案もされている。
【００３１】
一方、カルボニル化合物を消去することにより、ＡＧＥｓやＡＬＥｓの生成を阻害する可能性も検討されている。カルボニル化合物の消去にはいくつかの酵素や酵素的経路が存在し、たとえばアルドール還元酵素、アルデヒドデヒドロゲナーゼやグリオキサラーゼ経路が挙げられるが（非特許文献５２参照）、還元型グルタチオン（ＧＳＨ）やＮＡＤ（Ｐ）Ｈなどのレドックス補酵素はこれらの経路の活性に重要な要素である。
【００３２】
これらの消去系の低下は同時に多数のカルボニル化合物の上昇につながる。ＭＧＯ、ＧＯなどのカルボニル化合物はＧＳＨのチオール基と反応し、結果的に酵素グリオキサラーゼにより代謝される。ＮＡＤ（Ｐ）Ｈはグルタチオン還元酵素を活性化し、ＧＳＨレベルを上昇させる。すなわち、細胞内レドックス機構の不均衡によるＧＳＨおよびＮＡＤ（Ｐ）Ｈの低下によりカルボニル化合物の消去系が阻害され、ＡＧＥｓやＡＬＥｓの蓄積につながると考えられる。また、糖尿病においては、高血糖によりポリオール経路が活性化され、ＮＡＤ（Ｐ）ＨやＧＳＨが低下し、結果的にカルボニル化合物の消去系が低下することが示唆される。
【００３３】
前述したようにＧＳＨおよびＮＡＤ（Ｐ）Ｈなどのチオール濃度の低下がカルボニル化合物消去の低下につながり、結果としてＡＧＥｓやＡＬＥｓを形成する原因のひとつとなっているとすれば、チオールレベルを上昇させることによりカルボニル化合物を減少できる可能性がある。これには、ＧＳＨ、システイン、アセチルシステインなどによりチオール基を補充する方法、ビタミンＥやユビキノールなどによりＧＳＨ需要を低下させる方法、アルドース還元酵素阻害薬などによりポリオール系を阻害する方法が提案されている。さらに、アミノグアニジン、ピリドキサミン、ヒドラジン、ビグアナイド化合物およびＳＨ基含有化合物を用いて、カルボニル化合物をトラップさせる方法も提案されている（特許文献１参照）。
【００３４】
以上詳細に述べたように、ＡＧＥｓおよびＡＬＥｓの生成を阻害することが、これらに関連する病態を予防または治療できる方法である。
【特許文献１】国際公開第ＷＯ００／１０６０６ 号
【非特許文献１】メイラード， エル， シー（Ｍａｉｌｌａｒｄ， Ｌ． Ｃ．）ら著， 「コンプテス・レンダス・ヘブドマダイレス・デス・シンシズ・デ・ラ・ソサイエテ・デ・バイオロジー（Ｃｏｍｐｔ． Ｒｅｎｄ． Ｓｏｃ． Ｂｉｏｌ．）」， （フランス）， １９１２年， 第７２巻， ｐ５９９
【非特許文献２】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， １９９９年， 第５５巻， ｐ３８９−３９９
【非特許文献３】エステルバウアー， エイチ（Ｅｓｔｅｒｂａｕｅｒ， Ｈ．）ら著， 「フリーラジカル・バイオロジー・アンド・メディスン（Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ． Ｂｉｏｌ． Ｍｅｄ．）」， （アメリカ）， １９９１年， 第１１巻， ｐ８１−１２８
【非特許文献４】アンダーソン， エム， エム（Ａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｍ． Ｍ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」， （アメリカ）， １９９７年， 第９９巻， ｐ４２４−４３２
【非特許文献５】セル， ディー， アール（Ｓｅｌｌ， Ｄ． Ｒ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９８９年， 第２６４巻， ｐ２１５９７−２１６０２
【非特許文献６】ナカムラ， ケイ（Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｋ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・ザ・ケミカル・ソサエティー・ケミカル・コミュニケーションズ（Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍｕｎ．）」， （イギリス）， １９９２年， 第１５巻， ｐ９９２−９９４
【非特許文献７】ハヤセ， エフ（Ｈａｙａｓｅ， Ｆ．）ら著， 「バイオサイエンス・バイオテクノロジー・アンド・バイオケミストリー（Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．）」， （日本）， １９９４年， 第５８巻， ｐ１９３６−１９３７
【非特許文献８】ヌジョロージ， エフ， ジー（Ｎｊｏｒｏｇｅ， Ｆ． Ｇ．）ら著， 「カルボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ． Ｒｅｓ．）」， （オランダ）， １９８７年， 第１６７巻， ｐ２１１−２２０
【非特許文献９】アーメッド， エム， ユー（Ａｈｍｅｄ， Ｍ． Ｕ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９８６年， 第２６１巻， ｐ４８８９−４８９４
【非特許文献１０】ハヤセ， エフ（Ｈａｙａｓｅ， Ｆ．）ら著， 「バイオサイエンス・バイオテクノロジー・アンド・バイオケミストリー（Ｂｉｏｓｃｉ． Ｂｉｏｔｅｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．）」， （日本）， １９９５年， 第５９巻， ｐ１４０７−１４１１
【非特許文献１１】アーメッド， エム， ユー（Ａｈｍｅｄ， Ｍ． Ｕ．）ら著， 「バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ．）」，（イギリス）， １９９７年， 第３２４巻， ｐ５６５−５７０
【非特許文献１２】ブリンクマン， イー（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ， Ｅ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・ケミカル・ソサエティー・パーキン・トランスザクションズ（Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｐｅｒｋｉｎ． Ｔｒａｎｓ．）」， （イギリス）， １９９５年， 第２巻， ｐ１−２
【非特許文献１３】ウェル−クネヒト， ケイ， ジェイ（Ｗｅｌｌ−Ｋｎｅｃｈｔ， Ｋ． Ｊ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・オーガニック・ケミストリー（ Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）１９９５年， 第６０巻， ｐ６２４６−６２４７
【非特許文献１４】ナガラ， アール， エイチ（Ｎａｇａｒａｊ， Ｒ． Ｈ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９９６年， 第２７１巻， ｐ１９３３８−１９３４５
【非特許文献１５】シパノバ， アイ， エヌ（Ｓｈｉｐａｎｏｖａ， Ｉ． Ｎ．）ら著， 「アーカイブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス（Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．）」，（アメリカ）， １９９７年， 第３３４巻， ｐ２９−３６
【非特許文献１６】ネッパー， エム（Ｎｅｅｐｅｒ， Ｍ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９９２年， 第２６７巻， ｐ１４９９８−１５００４
【非特許文献１７】スズキ， エイチ（Ｓｕｚｕｋｉ， Ｈ．）ら著，「ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）」，（イギリス）１９９７年， 第３８６巻， ｐ２９２−２９５
【非特許文献１８】ブラッサラ， エイチ（Ｖｌａｓｓａｒａ， Ｈ）ら著， 「モレキュラー・メディスン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）」，（アメリカ）， １９９５年， 第１巻， ｐ６３４−６４６
【非特許文献１９】ランダー， エイチ， エム（Ｌａｎｄｅｒ， Ｈ． Ｍ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．）」， （アメリカ）， １９９７年， 第２７２巻， ｐ１７８１０−１７８１４
【非特許文献２０】チャッペイ， オー（Ｃｈａｐｐｅｙ， Ｏ．）ら著， 「ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」，（イギリス）， １９９７年， 第２７巻， ｐ９７−１０８
【非特許文献２１】ヤマギシ， エス（Ｙａｍａｇｉｓｈｉ， Ｓ．）ら著， 「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．）， （アメリカ）， １９９５年， 第２１３巻， ｐ６８１−６８７
【非特許文献２２】ヤマギシ， エス（Ｙａｍａｇｉｓｈｉ， Ｓ．）ら著， 「エフイービーエス・レター（ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．）」，（オランダ）， １９９６年， 第３８４巻， ｐ１０３−１０６
【非特許文献２３】ドイ， ティー（Ｄｏｉ， Ｔ．）ら著， 「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ザ・ユナイテッド・ステイツ・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）」， （アメリカ）， １９９２年， 第８９巻， ｐ２８７３−２８７７
【非特許文献２４】ホリエ， ケイ（Ｈｏｒｉｅ， Ｋ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」，（アメリカ）， １９９７年， 第１００巻， ｐ２９９５−３００４
【非特許文献２５】スギモト， ケイ（Ｓｕｇｉｍｏｔｏ， Ｋ．）ら著， 「ダイアベートロジア（Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ）」， （ドイツ）， １９９７年， 第４０巻， ｐ１３８０−１３８７
【非特許文献２６】パーク， エル（Ｐａｒｋ， Ｌ．）ら著， 「ネイチャー・メディスン（Ｎａｔ． Ｍｅｄ．）」，（アメリカ）， １９９８年， 第４巻， ｐ１０２５−１０３１
【非特許文献２７】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」，（アメリカ）１９９３年， 第９２巻， ｐ１２４３−１２５２
【非特許文献２８】スミス， エム， エー（Ｓｍｉｔｈ， Ｍ． Ａ．）ら著， 「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）」， （アメリカ）， １９９４年， 第９１（１２）巻， ｐ５７１０−５７１４
【非特許文献２９】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．）」， （アメリカ）， １９９９年， 第２４４巻， ｐ４５−４９
【非特許文献３０】マキタ， ゼット（Ｍａｋｉｔａ， Ｚ．）ら著， 「ニュー・イングランド・ジャーナル・オブ・メディスン（Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．）」， （アメリカ）， １９９１年， 第３２５巻， ｐ８３６−８４２
【非特許文献３１】ブカラ， アール（Ｂｕｃａｌａ， Ｒ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．）」， （アメリカ）， １９９１年， 第８７巻， ｐ４３２−４３８
【非特許文献３２】ブラッサラ， エイチ（Ｖｌａｓｓａｒａ， Ｈ．）ら著， 「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）」， （アメリカ）， １９９４年， 第９１巻， ｐ１１７０４−１１７０８
【非特許文献３３】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ソサエティー・オブ・ネフロロジー（Ｊ． Ａｍ． Ｓｏｃ． Ｎｅｐｈｒｏｌ．）」， （アメリカ）， １９９６年， 第７巻， ｐ１１９８−１２０６
【非特許文献３４】スギヤマ， エス（Ｓｕｇｉｙａｍａ， Ｓ．）ら著， 「ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・ソサエティー・オブ・ネフロロジー（Ｊ． Ａｍ． Ｓｏｃ． Ｎｅｐｈｒｏｌ．）」， （アメリカ）， １９９８年， 第９巻， ｐ１６８１−１６８８
【非特許文献３５】ミヤタ・ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， １９９６年， 第４９巻， ｐ１３０４−１３１３
【非特許文献３６】カネストラリ， エフ（Ｃａｎｅｓｔｒａｒｉ， Ｆ．）ら著， 「アクタ・ヘマトロジカ（Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ．）」， （スイス）， １９９４年， 第９１巻， ｐ１８７−１９３
【非特許文献３７】ウエダ， ワイ（Ｕｅｄａ， Ｙ．）ら著， 「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．）， （アメリカ）， １９９８年， 第２４５巻， ｐ７８５−７９０
【非特許文献３８】カネストラリ， エフ（Ｃａｎｅｓｔｒａｒｉ， Ｆ．）ら著， 「アクタ・ヘマトロジカ（Ａｃｔａ Ｈａｅｍａｔｏｌ．）」， （スイス）， １９９４年， 第９１巻， ｐ１８７−１９３
【非特許文献３９】リチャード， エム， ジェイ（Ｒｉｃｈａｒｄ， Ｍ． Ｊ．）ら著， 「ネフロン（Ｎｅｐｈｒｏｎ）」， （スイス）， １９９１年， 第５７巻， ｐ１０−１５
【非特許文献４０】ヤドウル， エム（Ｊａｄｏｕｌ， Ｍ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， １９９９年， 第５５巻， ｐ２４８７−２４９２
【非特許文献４１】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）１９９７年， 第５１巻， ｐ１１７０−１１８１
【非特許文献４２】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， １９９９年， 第５５巻， ｐ３８９−３９９
【非特許文献４３】リチャード， ジェイ， ユー（Ｒｉｃｈａｒｄ， Ｊ． Ｕ．）ら著， 「ファンダメンタル・アンド・アプライド・トキシコロジー（Ｆｕｎｄ． Ａｐｐｌ． Ｔｏｘｉｃ．）」， （アメリカ）， １９８４年， 第４巻， ｐ８４３−８５３
【非特許文献４４】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「キドニー・インターナショナル（Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．）」， （アメリカ）， ２０００年， 第５８巻， ｐ４２５−４３５
【非特許文献４５】ヤマダ， ケイ（Ｙａｍａｄａ， Ｋ．）ら著， 「クリニカル・ネフロロジー（Ｃｌｉｎ． Ｎｅｐｈｒｏｌ．）」， （ドイツ）， １９９４年， 第４２巻， ｐ３５４−３６１
【非特許文献４６】ミヤタ， ティー（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ．）ら著， 「ネフロロジー・ダイアリシス・トランスプランテーション（Ｎｅｐｈｒｏｌ． Ｄｉａｌ． Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．）」， （イギリス）， １９９７年， 第１２巻， ｐ２５５−２５８
【非特許文献４７】エデルステイン， ディー（Ｅｄｅｌｓｔｅｉｎ， Ｄ．）ら著， 「ダイアベートロジア（Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ）， （ドイツ）， １９９２年， 第３５巻， ｐ９６−１０１
【非特許文献４８】ハメス， エイチ， ピー（Ｈａｍｍｅｓ， Ｈ． Ｐ．）ら著， 「プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・オブ・ユー・エス・エー（Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ）」， （アメリカ）， １９９１年， 第８８巻， ｐ１１５５５−１１５６１
【非特許文献４９】マツモト， ケイ（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ， Ｋ．）ら著， 「バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｒｅｓ． Ｃｏｍｍｕｎ．）」， （アメリカ）， １９９７年 第２４１巻， ｐ３５２−３５４
【非特許文献５０】ナカムラ， エス（Ｎａｋａｍｕｒａ， Ｓ．）ら著， 「ダイアベーツ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）」， （アメリカ）， １９９７年， 第４６巻， ｐ８９５−８９９
【非特許文献５１】ベイスウェンゲル， ピー， ジェイ（Ｂｅｉｓｓｗｅｎｇｅｒ， Ｐ． Ｊ．）ら著， 「ダイアベーツ（Ｄｉａｂｅｔｅｓ）， （アメリカ）， １９９９年， 第４８巻， ｐ１９８−２０２
【非特許文献５２】ソマリー， ピー， ジェイ（Ｔｈｏｒｎａｌｌｅｙ， Ｐ． Ｊ．）ら著， 「エンドクリノロジー・アンド・メタボリズム（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． Ｍｅｔａｂ．）」， （アメリカ）， １９９６年， 第３巻， ｐ１４９−１６６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００３５】
これまで蛋白修飾抑制剤として知られているアミノグアニジンやＯＰＢ−９１９５などは、これらを生体内に投与した場合、重篤なビタミンＢ６欠乏症を起こすことが判明している。本発明者らは、この欠陥を克服すべく研究を進めたところ、そのようなビタミンＢ６欠乏症は、血中に存在するビタミンＢ６分子が当該蛋白修飾抑制剤によって捕捉されることに基因するものであることが明らかとなった。
【００３６】
本発明者らは、上記従来技術に基づく知見を前提として、非酵素的条件下、カルボニル化合物と反応することによって生じる蛋白修飾物（ＡＧＥｓおよび／またはＡＬＥｓ）が関与する病態を予防および／または治療し、なおかつ、副作用としてのビタミンＢ６欠乏症を抑制し得る薬剤を開発すべく鋭意研究を行った結果、先に、テトラゾール基を有する化合物、とりわけテトラゾール基を有するアンジオテンシンＩＩ受容体ブロッカーまたは薬理学的に許容されるそれらの塩が効果的にＡＧＥｓ、ＡＬＥｓなどの蛋白修飾物の生成を抑制する事実を発見し、この発見に基づいて、当該物質を有効成分とする蛋白修飾物生成抑制剤の発明を完成した（特願２００１−１４７１１５号明細書）。
【００３７】
アンジオテンシンＩＩ受容体ブロッカーは、蛋白修飾物生成抑制剤として優れた効果を示すが、同時に血圧降下作用を有するため、血圧の変動が好ましくない病態においては使用が制限される虞がある。本発明の目的のひとつは、血圧降下を伴わない蛋白修飾物生成抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００３８】
本発明者らは、上記成果を踏まえ、より一層優れた蛋白修飾物生成抑制剤を開発すべく鋭意研究を行った結果、テトラゾール環にメチレンを介して各種の置換基を有する化合物が強力かつ優れた蛋白修飾物生成抑制効果を有し、さらに血圧降下を伴わない蛋白修飾物生成抑制剤となり得ることを新たに見出した。
【００３９】
すなわち、本発明は蛋白修飾物生成抑制作用を有し、かつ、副作用としてのビタミンＢ６欠乏症が抑制される化合物を有効成分とし、さらに好ましくは血圧降下を伴うことのない化合物を有効成分とする、蛋白修飾物生成抑制剤を提供するものであって、その技術的範囲には、具体的に、以下の技術的態様が包含される：
（１）遊離形または塩形の５−置換テトラゾール環化合物であって、該テトラゾール環の１位または３位にメチレン含有基を有する化合物を有効成分とする、蛋白修飾物生成抑制剤。
（２）有効成分である化合物が、遊離形または塩形の式（Ｉ）：
【化１】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される、上記（１）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（３）有効成分である化合物が、遊離形または塩形の式（ＩＩ）：
【化２】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される、上記（１）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（４）Ｒ１が置換されていることもあるフェニル基であり、Ｒ２が置換されていることもある環構成原子の数が１０個を越えない超えない異項環基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（５）Ｒ１が置換されていることもあるフェニル基であり、Ｒ２が低級アルキル基、低級アルコキシ基またはヒドロキシ基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（６）Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２がモルホリノ基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（７）Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２が５−メチル−３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（８）Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２がヒドロキシメチル基である、上記（２）または（３）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（９）蛋白修飾物が、ＡＧＥｓ、ＡＬＥｓおよびこれらの組合せよりなる群から選択されるものである、上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（１０）蛋白修飾物がＡＧＥｓである、上記（９）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（１１）ＡＧＥｓがペントシジンである、上記（１０）項記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
（１２）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、腎組織保護剤。
（１３）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、腹膜透析液。
（１４）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、血液透析液。
（１５）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を液体試料と接触させる工程を含む、液体試料のカルボニル化合物含有量を低減させる方法。
（１６）上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を患者の血液または腹膜透析液と接触させる工程を含む、蛋白修飾物の生成抑制方法。
（１７）蛋白修飾物の生成により介在される疾患を処置する方法であって、かかる処置を必要とする患者に、治療上有効量の上記（１）〜（８）のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を投与することを含んでなる方法。
（１８）蛋白修飾物の生成により介在される疾患を処置するための医薬の製造のための、上記（１）〜（８）項のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤の使用。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４０】
本発明は、遊離形または塩形の５−置換テトラゾール環化合物であって該テトラゾール環の１位または３位にメチレン含有基を有する化合物を有効成分とする、蛋白修飾物生成抑制剤を提供するものであって、当該有効成分は、具体的には、遊離形または塩形の式（Ｉ）：
【化３】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
および遊離形または塩形の式（ＩＩ）：
【化４】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される。当該有効成分は、蛋白修飾物生成抑制作用を有する一方、副作用としてのビタミンＢ６欠乏症を抑制されており、さらに血圧の変動が少ない化合物とすることができるので、薬剤としての使用に適している。
【００４１】
ここに「蛋白修飾物」とは、非酵素的条件下にカルボニル化合物と反応することによって生じる蛋白修飾物（たとえばＡＧＥｓ、ＡＬＥｓなど）をいい、特記しない限りＡＧＥｓとＡＬＥｓの両者を含むものとする。蛋白修飾物はＡＧＥｓ、ＡＬＥｓまたはこれらの組み合わせであってもよく、ＡＧＥｓには、たとえばペントシジン、クロスリン、Ｘ１（フルオロリンク）、ピロピリジン、ピラリン、カルボキシメチルリジン、イミダゾロン化合物、カルボキシエチルリジン、ＭＧＯダイマー、ＧＯダイマー、イミダゾリジン、アルグピリミジンなどが含まれ、ＡＬＥｓには、たとえばマロンジアルデヒドリジン、ヒドロキシノネナール修飾物などが含まれる。
【００４２】
本明細書において、「カルボニル化合物」とは、生体由来または非生体由来に関係なく、蛋白修飾の原因となるカルボニル基を有する化合物であればよく、ジカルボニル化合物も含まれる。従って、カルボニル化合物の具体例としては、アラビノース、ＧＯ、ＭＧＯ、３−ＤＧ、グリコールアルデヒド、デヒドロアスコルビン酸、ヒドロキシノネナール、マロンジアルデヒド、アクロレイン、５−ヒドロキシメチルフルフラール、ホルムアルデヒド、レプリン酸、フルフラールなどが含まれる。
【００４３】
「ビタミンＢ６欠乏症」とは、ビタミンＢ６の欠乏に基因する諸疾患をいい、口角炎、口内炎、舌炎、口唇炎、急性および慢性湿疹、接触性皮膚炎、末梢神経炎、神経障害、貧血、リンパ球減少症などが例示される。
【００４４】
「蛋白修飾物生成抑制剤」の有効成分である、遊離形または塩形の５−置換テトラゾール環を有する化合物であって該テトラゾール環の１位または３位にメチレン含有基を有する化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏに拘わらず、蛋白修飾物の生成を結果的に抑制することができる。「結果的に抑制する」とは、カルボニル化合物をトラップする作用を有することによるものであってもよく、蛋白修飾物を生成する反応を抑制することによるものであってもよく、最終的に蛋白修飾物の生成を抑制すればよく、その作用機序には限定されない。なお、「抑制剤」または「保護剤」の語には、予防または／および治療のために使用する薬剤が包含される。
【００４５】
本発明にかかる蛋白修飾物生成抑制剤の有効成分として使用される５−置換テトラゾール環化合物は、上記式（Ｉ）または（ＩＩ）で表わすことができるものである。
【００４６】
式（Ｉ）および（ＩＩ）において、Ｒ１は、置換または非置換の芳香環（異項環を含む）基を表わす。「芳香環基」には、２０個を越えることのない環構成原子数（そのなかに酸素、硫黄、窒素などのヘテロ原子が存在してもよいが、それらの数が３個を越えることはない）を有するものが包含され、特に環構成炭素原子数６〜１０個を有するアリール（たとえばフェニル、ナフチル）が好ましい。
【００４７】
置換基としては、たとえば低級アルキル（たとえばメチル、エチル、プロピル）、低級アルケニル（たとえばビニル、アリル）、低級アルコキシ（たとえばメトキシ、エトキシ、プロポキシ）、低級アルケニルオキシ（たとえばビニルオキシ、アリルオキシ）、低級アルカノイル（たとえばアセチル、プロピオニル、ブチリル）、ハロ（低級）アルキル（たとえばモノクロロメチル、ジクロロメチル、トリフルオロメチル、ジクロロエチル）、カルボキシル、（低級）アルコキシカルボニル（たとえばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル）、カルボキシ（低級）アルキル（たとえばカルボキシメチル、カルボキシエチル、カルボキシプロピル）、ハロゲン（たとえば塩素、臭素、ヨウ素、フッ素）、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、ヒドロキシスルホニル、アミノスルホニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリルなどの中から１種またはそれ以上のものが選択されてよい。置換基の数に制限はないが、通常、３個を越えることはない。
【００４８】
Ｒ２は、１価の有機基を表わす。「１価の有機基」には、置換または非置換の炭化水素基、ヒドロキシ基、チオール基、カルボキシル基、低級アルコキシカルボニル基、カルボキシアルキル基、アミノ基、低級アルカノイルアミノ基、アリールオキシアミノ基、３〜７員ヘテロ環基などが包含される。「炭化水素基」には、炭素数３０個を越えない鎖状または環状の、脂肪族、脂環式または芳香族炭化水素基が包含され、具体的にはアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、アリール基などが例示される。「３〜７員ヘテロ環基」は、環構成原子として３個を越えないヘテロ原子を含むものであり、たとえばピロリジノ、ピペリジノ、モルホリノ、チアモルホリノなどが挙げられる。置換基の種類と数は、Ｒ１について説明したのと同様である。Ｒ２として特に好ましい有機基は、ヒドロキシ、モルホリノ、ピロロトリアゾリルなどであって、これらは、さらに低級アルキル、オキソなどで置換されていてもよい。
【００４９】
なお、上記において、アルキル、アルコキシ、アルカノイルなどの語に関連して使用された「低級」なる言葉は、通常、炭素数８個まで、好ましくは炭素数５個までの基を指称するものとして使用される。
【００５０】
本発明の化合物（Ｉ）の具体例を挙げれば、次のとおりである：
【表１】
【００５１】
上記本発明化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を製造するには、一般に、５−置換テトラゾールと１位または３位に導入すべきメチレン含有基の種類に応じて、適宜、自体公知の化学反応に付すればよい。
たとえば、５−フェニルテトラゾールとモルホリンをホルマリン存在下で反応させることによって、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリンを製造することができる。反応は、通常、両者を、有機溶媒（メタノール）中、５℃で処理することによって実施することができる。
【００５２】
本発明化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は、生体内において、副作用としてのビタミンＢ６欠乏症を示すことなく、それ自体で蛋白修飾物生成抑制作用を示すものである。この事実は、次の試験によって確認することができる：
（Ａ）化合物（Ｉ）または（ＩＩ）がそれ自体で蛋白修飾物生成抑制作用を示す事実を証明する試験：代表的なＡＧＥｓであるペントシジンを指標として、非糖尿病の腎不全透析患者から血漿を採取し、本発明化合物を加え、一定時間後のペントシジン生成量を測定する。
（Ｂ）化合物（Ｉ）または（ＩＩ）がビタミンＢ６欠乏症を惹起しないことを証明する試験：ビタミンＢ６溶液に本発明の化合物を加え、一定時間後のビタミンＢ６残存量を測定する。
【００５３】
化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を有効成分として含有する本発明の蛋白修飾物生成抑制剤は、以下に例示する病態の予防および／または治療に有用である：腎障害、糖尿病合併症（腎症、神経障害、網膜症、白内障など）、動脈硬化、透析合併症である透析アミロイドーシス、腹膜透析患者における腹膜硬化症、中枢神経疾患であるアルツハイマー病、ピック病およびパーキンソン病、リウマチ性関節炎、日光弾性線維症、老化など。当該抑制剤は、特に腎障害を予防および／または治療するのに有用である。
【００５４】
予防剤または治療剤として用いる場合、本発明化合物（Ｉ）を、そのままあるいは水に希釈するなどの処理を施して使用することができ、医薬品、医薬部外品などに配合して使用することができる。この場合の配合量は、病態や製品に応じて適宜選択されるが、通常全身投与製剤の場合には、０．００１〜５０重量％、特に０．０１〜１０重量％とすることができ、０．００１重量％より少ないと満足する予防または治療作用が認められない可能性があり、また、５重量％を越えると製品そのものの安定性や香味などの特性が損なわれる可能性があるので好ましくない。
【００５５】
本発明化合物（Ｉ）は、遊離形または塩形で製剤中に含有されてよい。塩形としては、通常、薬剤学的に許容されているもの、たとえば無機塩基や有機塩基との塩、無機酸、有機酸、塩基性または酸性アミノ酸などの酸付加塩などが挙げられる。無機塩基との塩としては、たとえばアルカリ金属（ナトリウム、カリウムなど）塩、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウムなど）塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩などが挙げられる。有機塩基との塩としては、たとえば第１級アミン（エタノールアミンなど）、第２級アミン（ジエチルアミン、ジエタノールアミン、ジシクロへキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなど）、第３級アミン（トリメチルアミン、トリエチルアミン、ビリジン、ピコリン、トリエタノールアミンなど）との塩が挙げられる。
【００５６】
無機酸との塩としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸などとの塩が例示され、有機酸との塩としては、ギ酸、酢酸、乳酸、トリフルオロ酢酸、フマール酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、安息香酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などとの塩が例示される。さらに、塩基性アミノ酸との塩としては、アルギニン、リジン、オルニチンなどとの塩が例示され、酸性アミノ酸との塩としては、アスパラギン酸、グルタミン酸などとの塩が例示される。
【００５７】
本発明の化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は、必要に応じて、アミノグアニジン、ピリドキサミン誘導体、ＯＰＢ−９１９５、ビグアナイド化合物、架橋形成阻害薬、アマドリ化合物を分解する酵素、ＧＳＨ、システイン、アセチルシステイン、ビタミンＥ、ユビキノール、アルドース還元酵素阻害薬、カルボニル化合物トラップ剤など、公知の薬物と共に使用されてもよく、これにより蛋白修飾物生成抑制作用の持続性を高めることができる。また、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を失活化または分解する物質を同定し、これを阻害する物質を選択し、これを併用あるいは配合し、組成物中の有効成分の安定化を図ることができる。
【００５８】
本発明の薬剤の投与方法として、経口投与や静脈内投与以外に、経粘膜投与、経皮投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸内投与などが適宜選択でき、その投与方法に応じて、種々の製剤として用いることができる。以下に、各製剤について記載するが、本発明において用いられる剤型はこれらに限定されるものではなく、医薬製剤分野において通常用いられる各種製剤として用いることができる。
【００５９】
蛋白修飾物が関与する病態に対する予防薬または治療薬として用いる場合には、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）の経口投与量は、一般に０．３ｍｇ／ｋｇ〜３００ｍｇ／ｋｇの範囲が好ましく、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。全身投与を行う場合、特に静脈内投与の場合には老若男女または体型などにより変動があるが、通常、有効血中濃度が２μｇ／ｍＬ〜２００μｇ／ｍＬ、より好ましくは５μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬの範囲となるように投与する。
【００６０】
経口投与を行う場合の剤型として、散剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤、錠剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤などがあり、適宜選択することができる。また、口腔内局所投与を行う場合の剤型として、岨囁剤、舌下剤、バッカル剤、トローチ剤、軟膏剤、貼布剤、液剤などがあり、適宜選択することができる。なお、上記製剤について徐放化、安定化、易崩壊化、難崩壊化、腸溶性化、易吸収化などの修飾を施してもよい。
【００６１】
上記の各剤型について、公知のドラッグデリバリーシステム（ＤＤＳ）の技術を採用することができる。本明細書に言うＤＤＳ製剤とは、徐放化製剤、局所適用製剤（トローチ、バッカル錠、舌下錠など）、薬物放出制御製剤、腸溶性製剤、胃溶性製剤などのような、投与経路、バイオアベイラビリティー、副作用などを勘案して、最適の製剤形態にした製剤をいう。
【００６２】
ＤＤＳの構成要素には、基本的に薬物、薬物放出モジュール、被包体および治療プログラムが含まれ、各々の構成要素について、特に放出を停止させた時に速やかに血中濃度が低下する半減期の短い薬物が好ましく、投与部位の生体組織と反応しない被包体が好ましく、さらに、設定された期間において最良の薬物濃度を維持する治療プログラムを有するのが好ましい。薬物放出モジュールは、基本的に薬物貯蔵庫、放出制御部、エネルギー源および放出孔または放出表面を有している。これら基本的構成要素は全て揃っている必要はなく、適宜追加あるいは削除などを行い、最良の形態を選択することができる。
【００６３】
ＤＤＳに使用できる材料としては、高分子、シクロデキストリン誘導体、レシチンなどがある。高分子には不溶性高分子（シリコーン、エチレン・酢酸ビニル共重合体、エチレン・ビニルアルコール共重合体、エチルセルロース、セルロースアセテートなど）、水溶性高分子およびヒドロキシルゲル形成高分子（ポリアクリルアミド、ポリヒドロキシエチルメタクリレート架橋体、ポリアクリル架橋体、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、水溶性セルロース誘導体、架橋ポロキサマー、キチン、キトサンなど）、徐溶解性高分子（エチルセルロース、メチルビニルエーテル・無水マレイン酸共重合体の部分エステルなど）、胃溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースナトリウム、マクロゴール、ポリビニルピロリドン、メタアクリル酸ジメチルアミノエチル・メタアクリル酸メチルコポリマーなど）、腸溶性高分子（ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸フタルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルエチルセルロース、アクリル酸系ポリマーなど）、生分解性高分子（熱凝固または架橋アルブミン、架橋ゼラチン、コラーゲン、フィプリン、ポリシアノアクリレート、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリβ−ヒドロキシ酢酸、ポリカブロラクトンなど）があり、剤型によって適宜選択することができる。
【００６４】
特に、シリコン、エチレン・酢酸ビニル共重合体、エチレン−ビニルアルコール共重合体およびメチルビニルエーテル・無水マレイン酸共重合体の部分エステルは薬物の放出制御に使用でき、セルロースアセテートは浸透圧ポンプの材料として使用でき、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースおよびメチルセルロースは、徐放性製剤の膜素材として使用でき、ポリアクリル架橋体は口腔粘膜あるいは眼粘膜付着剤として使用できる。
【００６５】
また、製剤中には、その剤形（経口投与剤、注射剤、座剤など）に応じて、溶剤、賦形剤、コーティング剤、基剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、溶解補助剤、懸濁化剤、粘桐剤、乳化剤、安定剤、緩衝剤、など張化剤、無痛化剤、保存剤、矯味剤、芳香剤、着色剤など適宜の添加剤を配合して製造することができる。これら各添加剤について、以下にそれぞれの具体例を挙げるが、これらに特に限定されるものではない。
【００６６】
溶剤としては、精製水、注射用水、生理食塩液、ラッカセイ油、エタノール、グリセリンなどを挙げることができる。賦形剤としては、デンプン類、乳糖、ブドウ糖、白糖、結晶セルロース、硫酸カルシウム、炭酸カルシウム、タルク、酸化チタン、トレハロース、キシリトールなどを挙げることができる。コーティング剤としては、白糖、ゼラチン、酢酸フタル酸セルロースおよび上記記載した高分子などを挙げることができる。基剤としては、ワセリン、植物油、マクロゴール、水中油型乳剤性基剤、油中水型乳剤性基剤などを挙げることができる。
【００６７】
結合剤としては、デンプンおよびその誘導体、セルロースおよびその誘導体、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、トラガント、アラビアゴムなどの天然高分子化合物、ポリビニルピロリドンなどの合成高分子化合物、デキストリン、ヒドロキシプロピルスターチなどを挙げることができる。滑沢剤としては、ステアリン酸およびその塩類、タルク、ワックス類、小麦デンプン、マクロゴール、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ポリエチレングリコールなどを挙げることができる。崩壊剤としては、デンプンおよびその誘導体、寒天、ゼラチン末、炭酸水素ナトリウム、セルロースおよびその誘導体、カルメロースカルシウム、ヒドロキシプロピルスターチ、カルポキシメチルセルロースおよびその塩類ならびにその架橋体、低置換型ヒドロキシプロピルセルロースなどを挙げることができる。
【００６８】
溶解補助剤としては、シクロデキストリン、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。懸濁化剤としては、アラビアゴム、トラガント、アルギン酸ナトリウム、モノステアリン酸アルミニウム、クエン酸、各種界面活性剤などが挙げられる。粘稠剤としては、カルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアルコール、トラガント、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウムなどが挙げられる。乳化剤としては、アラビアゴム、コレステロール、トラガント、メチルセルロース、各種界面活性剤、レシチンなどが挙げられる。
【００６９】
安定剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、トコフェロール、キレート剤、不活性ガス、還元性物質などがある。緩衝剤としては、リン酸水素ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸などがある。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖などがある。無痛化剤としては、塩酸プロカイン、リドカイン、ベンジルアルコールなどがある。保存剤としては、安息香酸およびその塩類、パラオキシ安息香酸エステル類、クロロブタノール、逆性石けん、ベンジルアルコール、フェノール、チロメサールなどがある。矯味剤としては、白糖、サッカリン、カンゾウエキス、ソルビトール、キシリトール、グリセリンなどがある。芳香剤としては、トウヒチンキ、ローズ油などがある。着色剤としては、水溶性食用色素、レーキ色素などがある。
【００７０】
上記したように、医薬品を徐放化製剤、腸溶性製剤または薬物放出制御製剤のようなＤＤＳ製剤化することにより、薬物の有効血中濃度の持続化、バイオアベイラビリティーの向上などの効果が期待できる。しかし、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は生体内で失活化または分解され、その結果、所望の効果が低下または消失する可能性がある。従って、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を失活化または分解する物質を阻害する物質を本発明の蛋白修飾物に関与する病態の予防または治療組成物と併用することにより、成分の効果をさらに持続化させ得る。これらは製剤中に配合してもよく、または別々に投与してもよい。当業者は適切に、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を失活化または分解する物質を同定し、これを阻害する物質を選択し、配合あるいは併用することができる。
【００７１】
製剤中には、上記以外の添加物として通常の組成物に使用されている成分を用いることができ、これらの成分の添加量は、本発明の効果を妨げない範囲で通常量とすることができる。
【００７２】
本発明の化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は、また、腹膜透析や血液透析における蛋白修飾物質による障害を抑制するために使用することができる。すなわち、蛋白修飾物生成抑制剤としての化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を、常套の腹膜透析液や血液透析液中に配合すればよい。
【００７３】
本発明による液体試料中のカルボニル化合物含有量を低減させる方法は、蛋白修飾物生成抑制剤としての化合物（Ｉ）または（ＩＩ）と当該液体試料とを接触させる工程を含むものである。
【００７４】
また、本発明の蛋白修飾物の生成抑制方法は、蛋白修飾物生成抑制剤としての化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を、患者血液または腹膜透析液と接触させる工程を含むものである。透析における蛋白修飾物としては、腹膜透析または血液透析を受ける患者に由来するカルボニル化合物により生成される蛋白修飾物および腹膜透析液または血液透析液自体に由来するカルボニル化合物により生成される蛋白修飾物などが含まれる。
【００７５】
本発明における化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を添加する腹膜透析液または血液透析液の組成は、公知のものでよい。一般的な腹膜透析液は、浸透圧調節剤（グルコースなど）、緩衝剤（乳酸、クエン酸、リンゴ酸、酢酸、ピルビン酸、コハク酸、炭酸水素ナトリウムなど）、無機塩類（ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、塩素イオンなど）などで構成されている。化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を添加した腹膜透析液または血液透析液は、そのまま密封して加熱滅菌することができる。そうすることによって、加熱滅菌処理時または保存時に伴う、これら主成分からの蛋白修飾物の生成を抑制することができる。
【００７６】
また、第一室および第二室からなる分画された容器に腹膜透析などの液を収容し、第一室に還元糖を収容し、第二室に化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を収容し、使用直前に混合しても良い。アミノ酸が含まれる場合には、当業者は適宜第三室を設けるなど、最良の形態をとることができる。
【００７７】
腹腔内または血管内に投与された後は、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）が蛋白修飾物の生成を抑制するため、腹膜硬化のような副作用を軽減できる。さらに、その他の病態（糖尿病合併症など）の予防・治療にも効果を発挿することが期待できる。透析液には、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）の他に、公知のアミノグアニジンなどの薬物を混合して用いることができる。また、粉末型透析剤にも応用可能である。
【００７８】
適当な混注用コネクターを装備した透析回路に、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を注入することもできる。また、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を直接腹腔内に注入して、腹腔内で腹膜透析液と混合することもできる。また、腹膜透析液を患者へ注入する前、または腹腔内貯留中に、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を静脈内注射することにより、蛋白修飾物の生成を効果的に抑制することもできる。
【００７９】
透析液などは、適当な密閉容器に充填し、滅菌処理する。滅菌処理には高圧蒸気滅菌や熱水滅菌などの加熱滅菌が有効である。この場合、高温で有害物質を溶出せず、滅菌後も輸送に耐える強度を備えた容器を用いる。具体的には、ポリ塩化ビニル、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリエステル、エチレン酢酸ビニル共重合体などからなる可換性プラスチックバッグが挙げられる。また、外気の影響による液の劣化を避けるために、透析液などを充填した容器をさらにガスバリアー性の高い包装材で包装しても良い。
【００８０】
高圧加熱滅菌を含む加熱滅菌により滅菌処理を行う場合、用いられる化合物（Ｉ）または（ＩＩ）が加熱などの処理に対して十分安定であるならば、透析液配合時に化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を予め添加してから、加熱滅菌操作を行うこともできる。用いる化合物（Ｉ）または（ＩＩ）が加熱滅菌に安定でない場合は、加熱を要しない滅菌法を用いることもできる。この様な滅菌法には、たとえば濾過滅菌などがある。
【００８１】
たとえば、孔径０．２μｍ程度のメンブランフィルターを備えた精密濾過器を用いて濾過することにより滅菌することができる。濾過滅菌された透析液は、可撓性プラスチックバックなどの容器に充填された後、密封される。また、予め加熱滅菌した腹膜透析液などに、後で化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を添加しても良い。
【００８２】
添加する時期は特に限定されない。液を滅菌後あるいは滅菌前に化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を添加しても良いし、透析直前または同時に添加しても良いし、透析液を注入した後に直接腹腔内に注入しても良い。
【００８３】
本発明の腹膜透析液は、現行の腹膜透析液や血液透析液と同様の透析処理に利用される。すなわち、腹膜透析の場合にあっては、透析患者の腹腔内に本発明による腹膜透析液を適量注入し、腹膜を通過して生体内の低分子量成分を腹膜透析液内に移行させる。腹膜透析液は間欠的に循環させ、患者の症状に応じて透析を継続する。このとき、化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は透析液内または生体内での蛋白修飾物の生成を抑制する。クレアチニンや無機塩類、あるいは塩素イオンなどの透析成分とともに、カルボニル化合物も血中や腹膜内から腹膜透析液中へ移行する。ゆえに、蛋白修飾物による生体への悪影響が減少される。
【００８４】
化合物（Ｉ）または（ＩＩ）は透析液のみに使用できるのではなく、栄養輸液、電解質輸液、経腸・経管栄養剤など、あらゆる液剤に利用できる。
【実施例】
【００８５】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。
【００８６】
［製造例１］４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）の製造
５−フェニルテトラゾール２６．０ｇ（０．１８ｍｏｌ）のメタノール溶液２７０ｍＬに５℃でモルホリン１７．０ｇ（０．２ｍｏｌ）および３６％ホルマリン１７．８ｇを添加した後、室温で一晩撹拌した。反応液にヘキサン２００ｍＬを添加し、析出した結晶を濾過した。真空乾燥の後、白色結晶４３．６ｇ（収率９９％）の４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリンを得た。核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）およびマススペクトル（Ｍａｓｓ）により構造を確認した。
【００８７】
ＮＭＲ：主なシグナル
２．７１４ｐｐｍ ｔ ４Ｈ モルホリンＣＨ２
３．７０９ｐｐｍ ｔ ４Ｈ モルホリンＣＨ２
５．４９９ｐｐｍ ｓ ２Ｈ テトラゾールとモルホリン間のＣＨ２
７．４９４ｐｐｍ ｍ ３Ｈ フェニルＣＨ
８．１７１ｐｐｍ ｍ ２Ｈ フェニルＣＨ
【００８８】
Ｍａｓｓ（ＥＩ−ＭＳ）：ｍ／ｚ ２４５（分子量）
【００８９】
同様にして５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）を合成した。これらの化合物はいずれも公知化合物である。
【００９０】
［製造例２］１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物４）の製造方法
５−フェニルテトラゾール２．００ｇ（１３．８ｍｍｏｌ）をメタノール２０ｍｌに加えて溶解した後に、１０℃以下でピペラジン２．３７ｇ（２７．６ｍｍｏｌ）と３６％ホルマリン１．３４２ｇ（１６．５４ｍｍｏｌ）を加えて撹拌し、室温に戻した。この混合液を一晩撹拌し、反応させた。反応の進行に伴って生成する目的化合物は非常に難溶性であるため、結晶として析出する。反応終了後、析出した結晶を濾過し、次いで、真空下、デシケーター中でよく乾燥し、１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの白色結晶０．９５９ｇを得た。
【００９１】
［製造例３］１−メチル−４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物５）の製造方法
５−フェニルテトラゾール１３．０ｇ（８９．６ｍｍｏｌ）をメタノール１１３ｍｌに加え冷却し、メチルピペラジン９．８２ｇ（９８．０ｍｍｏｌ）と３６％ホルマリン９．２ｇ（０．１１ｍｏｌ）を加えて撹拌した。次いで、室温で一晩撹拌して反応させた後、メタノールを留去し、水を加えて懸濁させ、析出した結晶を濾別した。水洗、乾燥の後、１−メチル−４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの肌色結晶１３．０ｇ（収率５６．２％）を得た。
１−メチル−４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの構造確認は、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）で行い、その結果は目的化合物を支持するものであった。そのときのデータを以下に示す。
【００９２】
ＮＭＲ：主なシグナル
２．２５８ｐｐｍ ｓ ３Ｈ ＣＨ３
２．４５５ｐｐｍ ｔ ４Ｈ ピペラジンＣＨ２
３．７６１ｐｐｍ ｔ ４Ｈ ピペラジンＣＨ２
５．５２１ｐｐｍ ｓ ２Ｈ テトラゾールとピペラジンを連結したＣＨ２
７．４８０ｐｐｍ ｍ ３Ｈ フェニルＣＨ
８．１２５ｐｐｍ ｍ ２Ｈ フェニルＣＨ
【００９３】
［製造例４］４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−チオモルホリン（化合物６）の製造方法
メタノール１３３ｍｌに５−フェニルテトラゾール１３．０ｇ（０．０８９ｍｏｌ）を加えて溶解した液を５℃未満に冷却し、チオモルホリン１０．０ｇ（０．１０ｍｏｌ）と３６％ホルマリン９．２ｇを添加した後、室温で一晩撹拌して反応させた。目的化合物は反応溶液中に結晶として析出するので反応終了後、反応液を濾過して結晶を取り、真空デシケーター中で乾燥して４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−チオモルホリンの白色結晶を１１．５ｇ（収率４９．１％）得た。
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−チオモルホリンの構造確認は、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）で行い、その結果は目的化合物を支持するものであった。そのときのデータを以下に示す。
【００９４】
ＮＭＲ：主なシグナル
２．６８５ｐｐｍ ｔ ４Ｈ チオモルホリンＣＨ２
２．９８８ｐｐｍ ｔ ４Ｈ チオモルホリンＣＨ２
５．４８０ｐｐｍ ｓ ２Ｈ テトラゾールとチオモルホリンを連結したＣＨ２
７．４９４ｐｐｍ ｍ ３Ｈ フェニルＣＨ
８．１６２ｐｐｍ ｍ ２Ｈ フェニルＣＨ
【００９５】
［製造例５］１−４−ビス−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物７）の製造方法
５−フェニルテトラゾール２０．０ｇ（０．１４ｍｏｌ）のメタノール２０５ｍｌ溶液に５℃未満でピペラジン５．３ｇ（０．０６２ｍｏｌ）と３６％ホルマリン１４．１ｇ添加した。その後、室温で一晩撹拌して反応させた。反応終了後、析出した結晶を濾過し、真空デシケーター中で乾燥の後、２３．７ｇ（収率９５．０％）の１−４−ビス−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの白色結晶を得た。
１−４−ビス−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジンの構造確認は、核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）で行い、その結果は目的化合物を支持するものであった。そのときのデータを以下に示す。
【００９６】
ＮＭＲ：主なシグナル
２．７６７ｐｐｍ ｓ ８Ｈ ピペラジンＣＨ２
５．４６９ｐｐｍ ｓ ４Ｈ テトラゾールとピペラジンを連結したＣＨ２
７．４９６ｐｐｍ ｍ ６Ｈ フェニルＣＨ
８．１７１ｐｐｍ ｍ ２Ｈ フェニルＣＨ
【００９７】
［試験例１］
ＡＧＥｓ生成抑制効果の検証
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）について、代表的なＡＧＥｓであるペントシジン生成量を指標として、ＡＧＥｓ生成抑制効果を以下の方法により検証した。
【００９８】
非糖尿病の腎不全透析患者から同意を得て透析前に採血し、新鮮ヘパリン化血漿試料とした。数名の患者（ｎ＝３〜５）から得られたプール血漿を実験に供した。プールした血漿（９００μＬ）に所定濃度（最終濃度８、２０、および５０ｍＭ）に調製した４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）溶液（１００μＬ）を加え、３７℃で７日間、空気存在下でインキュベーションした後、ペントシジン含量を測定し、タンパク質の糖化反応を抑制する強さを評価した。
【００９９】
ペントシジンの測定は、以下のようにして行った。インキュベーションの後の各サンプル（５０μＬ）に、等容積の１０％トリクロロ酢酸を加えた後、５０００ｇで５分間遠心分離した。上清を除去後、ペレットを５％トリクロロ酢酸（３００μＬ）で洗浄した。ペレットを減圧下乾燥後、窒素雰囲気下で６Ｎ ＨＣｌ溶液（１００μＬ）中にて、１１０℃で１６時間加水分解を行った。次いで加水分解物に５Ｎ ＮａＯＨ（１００μＬ）および０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）（２００μＬ）を添加した後、０．５μｍ孔のポアフィルタを通して濾過し、ＰＢＳで希釈した。遊離したペントシジンの濃度は、蛍光検出器（ＲＦ−１０Ａ、島津製作所）を用いた逆相ＨＰＬＣを用いて測定した（Ｍｉｙａｔａ， Ｔ． ｅｔ ａｌ． ； Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９３， ２３５３−２３５８， １９９６）。 流出液を３３５／３８５ｎｍの励起／発光波長でモニターした。合成ペントシジンを標準物質として使用した。ペントシジンの検出限界は、０．１ｐｍｏｌ／ｍｇタンパク質であった。
【０１００】
抑制効果は、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）と同様にして反応させた陽性対照（アミノグアニジンおよびピリドキサミン（シグマ））と比較することにより評価した。
【０１０１】
透析患者血漿とインキュベートしたときの４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオンおよび（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノールのペントシジン生成抑制効果（ペントシジン生成量ｎｍｏｌ／ｍＬ）を表２に、ペントシジン生成率（％）を図１に示す。
【表２】
【０１０２】
表２および図１に示すごとく、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）は、透析患者血漿におけるペントシジンの生成を強く抑制した。
【０１０３】
同様にして、１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物４）、１−メチル−４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物５）、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−チオモルホリン（化合物６）および１−４−ビス−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−ピペラジン（化合物７）のペントシジン生成抑制活性を測定した（表３および図６参照）。これらの化合物はペントシジンの生成を強く抑制した。
【表３】
【０１０４】
［試験例２］
（１）ヒドロキシラジカルによるフェニルアラニンのヒドロキシル化反応抑制効果
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）について、ヒドロキシラジカルによるフェニルアラニンのヒドロキシル化反応抑制効果を検討した。
【０１０５】
フェニルアラニン（最終濃度：１ｍＭ）、試験化合物（最終濃度：０．１、０．５、２．５ｍＭ）、過酸化水素（最終濃度：５ｍＭ）、硫酸銅（最終濃度：０．１ｍＭ）を２００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し（全量５００μＬ）、３７℃で４時間インキュベートした。インキュベ−ト終了後、ＤＴＰＡ（最終濃度：１ｍＭ）、２６０ｕｎｉｔのカタラーゼを添加して反応を停止させた。ｏ−チロシンおよびｍ−チロシンの生成量をＨＰＬＣで分析した。すなわち、一定時間後、反応液を１００倍希釈し２０μＬをＨＰＬＣにインジュクトし、Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ：野村化学製）で分離後、励起波長２７５ｎｍ、蛍光波長３０５ｎｍの条件で蛍光検出器（ＲＦ−１０Ａ：島津製作所）を用いて検出した。移動相は、０．６ｍＬ／分の流速で、バッファＢ濃度を６．５％から１０％まで２５分間で変化させた（バッファＡ：０．１０％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：０．０８％トリフルオロ酢酸を含む８０％アセトニトリル）。結果を図２に示す。
【０１０６】
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）は、ヒドロキシラジカルによるフェニルアラニンのヒドロキシル化を、陽性対照のピリドキサミン（シグマ）に比較して非常に強く抑制した。
【０１０７】
（２）パーオキシナイトライトによるチロシンのニトロ化反応の抑制効果
Ｐａｎｎａｌａ ＡＳらの方法（Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ ２４：５９４−６０６， １９９８）に準じて実施した。すなわち、チロシン（最終濃度：１００μＭ）、試験化合物（最終濃度：０．１、０．５、２．５ｍＭおよび５ｍＭ）、パーオキシナイトライト（同仁化学製）（最終濃度：５００μＭ）を２００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解し（液量５００μＬ）、３７℃で１５分間インキュベートさせた。インキュベート終了後、ニトロチロシンの生成量をＨＰＬＣで分析した。すなわち、一定時間後、反応液（２０μＬ）をＨＰＬＣにインジェクトし、Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ：ウォーターズ製）で分離後、紫外検出器（ＲＦ−１０Ａ：島津製作所）を用い２８０ｎｍの波長で検出した。移動相は、０．６ｍＬ／分の流速で、バッファＢ濃度を５．０％から３０％まで３０分間で変化させた（バッファＡ：０．１０％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：０．０８％トリフルオロ酢酸を含む８０％アセトニトリル）。４−ヒドロキシ−３−ニトロ安息香酸（１００μＭ）を内部標準として使用した。結果を図３に示す。
【０１０８】
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）は、チロシンのニトロ化によるニトロチロシンの生成を、陽性対照のピリドキサミン（シグマ）に比較して非常に強く抑制した。
【０１０９】
［試験例３］
ビタミンＢ６（ＰＬＰ／ピリドキサールリン酸）の捕捉試験
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）、並びに陽性対照のアミノグアニジンを所定の濃度でＤＭＳＯに溶解してサンプル溶液とした。陰性対照として薬剤無添加のＤＭＳＯを用いた。さらに、ピリドキサールリン酸（ＰＬＰ）を所定の濃度で精製水に溶解した。被検化合物、陽性対照および陰性対照にＰＢＳを添加し、それぞれを最終濃度５００μＭの溶液とした。この溶液に前述のＰＬＰ水溶液を最終濃度５０μＭになるように加えＰＬＰ反応液とした。ＨＰＬＣを用いて、０時間、１時間後、１０時間後のＰＬＰ量を測定し、各化合物のＰＬＰ捕捉量を判定した。
【０１１０】
ＨＰＬＣの分析条件は、逆相系Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ：ウォーターズ製）で分離後、蛍光検出器（ＲＦ−１０Ａ：島津製作所／励起波長３００ｎｍ、蛍光波長４００ｎｍ）を用いた。移動層は０．６ｍＬ／ｍｉｎの流速で、バッファＢ濃度を０％から３％まで２５分間で変化させた（バッファＡ：０．１０％トリフルオロ酢酸、バッファＢ：０．０８％トリフルオロ酢酸を含む８０％アセトニトリル）。ＰＬＰ残存率を図４に示す。
【０１１１】
上記の結果より、陽性対照のアミノグアニジンは強いＰＬＰの捕捉が見られたが、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、５−メチル−１−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，４−ｄ］［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン（化合物２）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）は、いずれもＰＬＰの捕捉は認められなかった。
【０１１２】
［試験例４］
吸収性試験
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）について、吸収性を試験した。各化合物を所定の濃度でカルボキシメチルセルロースに懸濁させ、経口投与試料として調製した。次いでラットにゾンデを用いて、各投与試料をそれぞれ５０ｍｇ／ｋｇの割合で経口投与した。ウイスター（Ｗｉｓｔｅｒ）系のラット（雄、８週齢のクローズドコロニー）を１群につき５匹使用した。化合物投与後、１時間、２時間、６時間および２４時間後に採血した。採血した検体を直ちに３０００ｒｐｍで１５分間遠心分離して血漿を回収し、ＨＰＬＣで検体中の化合物の濃度を定量した。すなわち、回収した血漿１００μＬに対してアセトニトリル２００μＬを添加し、１２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して上清を回収し、除蛋白し、ＨＰＬＣに供した。ＨＰＬＣの測定条件は、各化合物に適した分離、定量ができる条件を選んだ。たとえば、４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）の場合、逆相系Ｃ１８カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ：ウォーターズ製）で分離後、紫外検出器（ＲＦ−１０Ａ：島津製作所）を用いて２４０ｎｍの波長で検出して定量した。移動層は０．８ｍＬ／ｍｉｎの流速で、溶媒は水：アセニトリルを用いた。結果を図５に示す。いずれの化合物も良好な吸収性を示した。
【０１１３】
［試験例５］
急性毒性試験
４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）および（５−フェニル−テトラゾール−１−イル）メタノール（化合物３）について、マウスを用いて急性毒性試験を行った。各化合物を所定の濃度でカルボキシメチルセルロースに懸濁させ、経口投与試料として調製した。次いでマウスにゾンデを用いて単回経口投与した。投与量は１００、２５０、５００、１０００、２０００ｍｇ／ｋｇの５点で行った。アイ・シー・アール（ＩＣＲ）系のマウス（雄、８週齢のクローズドコロニー）を１群につき５匹を使用した。被検物質を投与しＬＤ５０値を求めた。結果を表４に示す。いずれの化合物も毒性は低かった。
【表４】
【０１１４】
［試験例６］
糸球体腎炎に対する作用
Ｗｉｓｔａｒラット（雄、体重１５０ｇ、６週齢）に抗Ｔｈｙ−１抗体であるＯＸ−７を１．２ｍｇ／ｋｇ尾静脈投与することによって、メサンギウム増殖性腎炎を呈する代表的な糸球体腎炎モデル作製する。抗Ｔｈｙ−１抗体を投与した後、被検化合物（４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、１ｍｇ／ｋｇ体重、１日１回）を０．５％カルボキシメチルセルロースに懸濁させ、ゾンデにより５日間連続強制投与し、６日目に採材し、腎臓を採取、病理解析（糸球体細胞数のカウント）を行った。具体的には、常法に従いＰＡＳ染色した染色像を３ＣＣＤカメラ（オリンパス）で取り込んだ後、イメージグラヴァＰＣＩ（富士写真フィルム）とマックアスペクト（三谷株式会社）のソフトウエアを使用して解析した。また、血液・尿の生化学的解析（臨床解析受託会社：ＳＲＬ）も行った。
それらの結果を図７〜図９に示す。
【０１１５】
［試験例７］
虚血再灌流腎不全モデルラットに対する腎保護作用
本病態モデルは、代表的な急性腎不全モデルである。作製方法として、Ｗｉｓｔａｒラット（雄、体重１５０ｇ、６週齢）の右腎摘出手術を行い、翌日全身麻酔下に残った左片腎の腎動脈をクリップで結紮する。クリップ後体温が下がらないように加温器の上で４５分間観察（虚血）した後、クリップをはずし、再灌流を行う。虚血再還灌流モデル作製後、被検化合物（４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）、１ｍｇ／ｋｇ体重、１日１回）を０．５％カルボキシメチルセルロースに懸濁させ、ゾンデにより２日間連続強制投与し、３日目に腎臓を採取し、病理解析（尿細管間質障害のスコアリング）を行った。具体的には、常法に従いＰＡＳ染色した腎染色像の尿細管間質障害は尿細管壊死、尿細管肥大、尿細管萎縮、尿細管基底膜肥厚、ｃａｓｔの有無を評価した。併せて血液の生化学的解析（臨床解析受託会社：ＳＲＬ）も行った。
それらの結果を図１０および図１１に示す。
【０１１６】
［試験例８］
中大脳動脈虚血再還流モデルにおける脳保護作用
体重２７０〜３５０ｇのＣＤ（ＳＤ）ＩＧＳ雄性ラット（日本チャルスリバー株式会社 日野生産場２２号室特定生産）（１群８匹）を２％イソフルラン（７０％Ｎ２Ｏ（笑気ガス）と３０％Ｏ２の混合ガス）で麻酔して不動化した後に、ヒーティングパット上に置き、動物の直腸温と脳温を３７〜３８℃に保持した。次いで、実験上の安定性を観察するために、該動物の尾動脈にポリエチレン製カニューレ（ＰＥ−５０、ベクトン・ディッキンソン社製）を挿入、留置し、これより採血や血圧測定を行い血糖値、ヘマトクリット、ＣＯ２濃度、酸素分圧、ｐＨ、血圧等の生化学的パラメーターをモニターした。また、皮質における脳血流量はレイザー・ドップラー・フルオメトリー（ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ．ｉｎｃ社製／製品名：ＯＭＥＧＡ ＦＬＯＷ（ＦＬＯ−Ｃ１））検出部位をブレグマ左４ｍｍの位置に、直接頭蓋にあてて測定した。このように準備された動物左頚部を切開し、総頚動脈の内頚・外頚動脈分岐点から内頚動脈の上流に向け、長さ１６ｍｍ、直径０．２〜０．３ｍｍで先端３ｍｍをシリコンコーティングしたナイロン製外科用スレッドを通したまま留置し、２時間のあいだ中大脳動脈を閉塞した。その後スレッドを抜き取り、中大脳動脈を開放し、２１時間のあいだ血液を再還流した。それぞれ、対照である３．０ｍｇ／ｋｇの３−メチル−１−フェニル−２−ピラゾリン−５−オン（以下、エダラボンという）および被検薬物である４．２３ｍｇ／ｋｇの４−（５−フェニル−テトラゾール−１−イルメチル）−モルホリン（化合物１）（以下、ＴＭ−３００１という）を、中大脳動脈を閉塞後５分後と５時間後に尾動脈に留置したカニューレより２回投与した。上記手技が終了後、動物より脳を摘出し、２ｍｍ厚で７枚の脳切片を調製後、生理食塩水４０ｍｌに２，３，５−ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ（シグマ社製）を０．８ｇ溶解した液（ＴＴＣ染色液）に３７℃で１５分間浸漬して染色処理を施した後に１０％の中性ホルマリン液を用いて固定し、標本とした。これらの標本は、それぞれＣＣＤカメラで画像化し、Ｓｗａｎｓｏｎ等の方法（Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ １０：２９０−２９３； １９９４）によって解析した。その結果、賦形剤単回投与群に比較し対照薬剤のエダラボンおよび被検薬剤のＴＭ−３００１は有意差をもって脳梗塞巣を縮小した。結果を図１３に示す。また、神経状態の評価は施術ラットを水平な台の上におき、横から押して麻痺なく正常に歩ける状態のものをグレード０、横から押して抵抗があり、前にまっすぐ歩けるが、前肢の屈曲を呈するような状態をグレード１、横から押して抵抗がないが、前にまっすぐ歩ける状態のものをグレード２、横から押すと抵抗がなく前にまっすぐ歩けない（回転や転倒する）状態のものをグレード３に分類し、四段階の基準による、Ｂｅｄｅｒｓｏｎらの方法によるグレーディングシステム（Ｓｔｒｏｋｅ １７：４７２−４７６， １９９０）で評価した。更に、機能回復の面では、回転ローター上にマウスを歩かせ、その歩行状態がどの程度可能であるかを評価する方法による、ローターロッド試験を施術前後に行い、その評価を行った。その結果、賦形剤単開投与群と比較して、エダラボン（対照薬剤）およびＴＭ−３００１（被検薬剤）は、有意差をもって神経状態の改善および機能回復を示した。その結果を表５に示す。
【０１１７】
【表５】
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明により、テトラゾール環にメチレンを介して各種の置換基を有する化合物、特に化合物（Ｉ）または（ＩＩ）を有効成分とする、強力かつ優れた蛋白修飾物生成抑制効果を有し、さらに血圧降下を伴わない蛋白修飾物生成抑制剤が提供される。この蛋白修飾物生成抑制剤は、ＡＧＥｓやＡＬＥｓに関連する疾患の予防や治療に有用であって、具体的には腎組織保護剤として単独でまたは腹膜または血液透析液に配合して使用される。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】図１は、本発明化合物のペントシジン抑制効果を示すグラフである。
【図２】図２は、本発明化合物のヒドロキシラジカルによるフェニルアラニンのヒドロキシル化反応抑制効果を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明化合物によるパーオキシナイトライトによるチロシンのニトロ化反応の抑制効果を示すグラフである。
【図４】図４は、本発明化合物のビタミンＢ６捕捉能を示すグラフである。
【図５】図５は、本発明化合物の吸収性を示すグラフである。
【図６】図６は、化合物４〜７のペントシジン生成抑制効果を示すグラフである。
【図７】図７は、糸球体腎炎モデルにおける化合物１のＢＵＮ低減化効果を示すグラフである。
【図８】図８は、糸球体腎炎モデルにおける化合物１の尿蛋白減少効果を示すグラフである。
【図９】図９は、化合物１が糸球体腎炎モデルの糸球体細胞に与える影響を示すグラフである。
【図１０】図１０は、腎不全モデルにおける化合物１のＢＵＮ低減化効果を示すグラフである。
【図１１】図１１は、腎不全モデルにおける化合物１の間質障害スコアーを示すグラフである。
【図１２】図１２は、化合物１が脳梗塞巣を縮小することを示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離形または塩形の５−置換テトラゾール環化合物であって、該テトラゾール環の１位または３位にメチレン含有基を有する化合物を有効成分とする、蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項２】
有効成分である化合物が、遊離形または塩形の式（Ｉ）：
【化１】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される、請求項１記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項３】
有効成分である化合物が、遊離形または塩形の式（ＩＩ）：
【化２】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される、請求項１記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項４】
Ｒ１が置換されていることもあるフェニル基であり、Ｒ２が置換されていることもある環構成原子の数が１０個を越えない超えない異項環基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項５】
Ｒ１が置換されていることもあるフェニル基であり、Ｒ２が低級アルキル基、低級アルコキシ基またはヒドロキシ基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項６】
Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２がモルホリノ基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項７】
Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２が５−メチル−３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項８】
Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２がヒドロキシメチル基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項９】
蛋白修飾物が、ＡＧＥｓ、ＡＬＥｓおよびこれらの組合せよりなる群から選択されるものである、請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項１０】
蛋白修飾物がＡＧＥｓである、請求項９記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項１１】
ＡＧＥｓがペントシジンである、請求項１０記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、腎組織保護剤。
【請求項１３】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、腹膜透析液。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、血液透析液。
【請求項１５】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を液体試料と接触させる工程を含む、液体試料のカルボニル化合物含有量を低減させる方法。
【請求項１６】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を患者の血液または腹膜透析液と接触させる工程を含む、蛋白修飾物の生成抑制方法。
【請求項１７】
蛋白修飾物の生成により介在される疾患を処置する方法であって、かかる処置を必要とする患者に、治療上有効量の請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を投与することを含んでなる方法。
【請求項１８】
蛋白修飾物の生成により介在される疾患を処置するための医薬の製造のための、請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤の使用。
【請求項１】
遊離形または塩形の５−置換テトラゾール環化合物であって、該テトラゾール環の１位または３位にメチレン含有基を有する化合物を有効成分とする、蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項２】
有効成分である化合物が、遊離形または塩形の式（Ｉ）：
【化１】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される、請求項１記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項３】
有効成分である化合物が、遊離形または塩形の式（ＩＩ）：
【化２】
［式中Ｒ１およびＲ２は、同一または異なった１価の有機基を表わす。］
で示される化合物から選択される、請求項１記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項４】
Ｒ１が置換されていることもあるフェニル基であり、Ｒ２が置換されていることもある環構成原子の数が１０個を越えない超えない異項環基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項５】
Ｒ１が置換されていることもあるフェニル基であり、Ｒ２が低級アルキル基、低級アルコキシ基またはヒドロキシ基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項６】
Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２がモルホリノ基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項７】
Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２が５−メチル−３ａ，６ａ−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［１，２，３］トリアゾール−４，６−ジオン基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項８】
Ｒ１が置換または非置換のフェニル基であり、Ｒ２がヒドロキシメチル基である、請求項２または３記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項９】
蛋白修飾物が、ＡＧＥｓ、ＡＬＥｓおよびこれらの組合せよりなる群から選択されるものである、請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項１０】
蛋白修飾物がＡＧＥｓである、請求項９記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項１１】
ＡＧＥｓがペントシジンである、請求項１０記載の蛋白修飾物生成抑制剤。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、腎組織保護剤。
【請求項１３】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、腹膜透析液。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を含む、血液透析液。
【請求項１５】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を液体試料と接触させる工程を含む、液体試料のカルボニル化合物含有量を低減させる方法。
【請求項１６】
請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を患者の血液または腹膜透析液と接触させる工程を含む、蛋白修飾物の生成抑制方法。
【請求項１７】
蛋白修飾物の生成により介在される疾患を処置する方法であって、かかる処置を必要とする患者に、治療上有効量の請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤を投与することを含んでなる方法。
【請求項１８】
蛋白修飾物の生成により介在される疾患を処置するための医薬の製造のための、請求項１〜８のいずれか記載の蛋白修飾物生成抑制剤の使用。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０５１９３０
【国際公開日】平成１７年６月９日（２００５．６．９）
【発行日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１５７６７（Ｐ２００５−５１５７６７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１７２６７
【国際出願日】平成１６年１１月１９日（２００４．１１．１９）
【出願人】（０００１２５３６９）学校法人東海大学 (352)
【出願人】（５９７１４２３７６）
【出願人】（５９７１４２３８７）
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年６月９日（２００５．６．９）
【発行日】平成１９年６月２１日（２００７．６．２１）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１７２６７
【国際出願日】平成１６年１１月１９日（２００４．１１．１９）
【出願人】（０００１２５３６９）学校法人東海大学 (352)
【出願人】（５９７１４２３７６）
【出願人】（５９７１４２３８７）
【Ｆターム（参考）】
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