酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及びこれを含有してなる食品、飲料、洗浄剤及び抗菌剤
【課題】酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及び該抽出液又はその濃縮物を含有する物品を提供する。
【解決手段】緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及び該抽出液又はその濃縮物を含有する食品、飲料、洗浄剤及び抗菌剤。
【解決手段】緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及び該抽出液又はその濃縮物を含有する食品、飲料、洗浄剤及び抗菌剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及びこれを含有してなる食品、飲料、洗浄剤及び抗菌剤に関するものであり、詳細には、緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及び該抽出液又はその濃縮物を含有する食品、飲料、洗浄剤、抗菌剤等の物品に関する。
【背景技術】
【０００２】
緑茶は、酸化促進と酸化防止という相反する性質を有することが知られている。
そのため、緑茶抽出液は、酸化促進に基づく殺菌効果を期待して、抗菌グッズ等に関する研究開発が盛んに行われる一方、酸化防止に基づく生体酸化予防（抗加齢）効果を期待して、健康食品や医薬品に関する研究開発も盛んに行われている。
しかし、緑茶における上記酸化促進と酸化防止という相反する性質が何に起因し、またどのようにすれば、この相反する性質のバランスを変化させ得るかに付いては、必ずしも十分な検討がなされていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及びこれを含有してなる食品、飲料、洗浄剤及び抗菌剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理すると、該緑茶抽出液の酸化誘導性が向上すると伴に、抗酸化能が抑制されて、酸化促進に特化されることを見出し、これにより、該緑茶抽出液又はこの濃縮物を含有する物品は、抗菌活性に優れる食品、飲料、洗浄剤、抗菌剤等の物品となり得ることを見出し、本発明を完成させた。
【０００５】
即ち、本発明は、
（１）緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液、
（２）前記（１）に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食品、
（３）前記（１）に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる飲料、
（４）前記（１）に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる、固体、液体又は泡状の洗浄剤、
（５）前記（１）に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる抗菌剤、
に関する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明により、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液を容易に得ることが出来、これにより、抗菌効果に優れる食品、飲料、洗浄剤、抗菌剤等の物品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】超純水（ＰＷ（●））、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））の、紫外線照射条件下での、ｄＧから誘導された８ＯＨｄＧの量（酸化誘導性の指標）を示すグラフである。
【図２】超純水（ＰＷ（●））、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））の、紫外線照射条件下での、酸化剤（ＫＢｒＯ3）存在下におけるｄＧから誘導された８ＯＨｄＧの量（抗酸化能：酸化剤によるｄＧ酸化の抑制）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
更に詳細に本発明を説明する。
本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液は、緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される。
本発明に使用し得る緑茶抽出液としては、植物の抽出の際に一般的に用いられる方法によって容易に調製することができ、例えば、抽出原料である緑茶をそのまま、又は粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することによって調製され得る。
【０００９】
抽出原料である緑茶としては、特に制限されるものではなく、煎茶、玉露、かぶせ茶、てん茶、番茶、焙じ茶等の蒸し製茶、嬉野茶、青柳茶、各種中国茶等の釜炒り茶等を例示することができる。また、抽出に用いる緑茶の部位は、茶葉の他、茎、芽等を含み得る。
【００１０】
緑茶抽出に用いる抽出溶媒としては、水（熱水を含む）又はメタノール、エタノール、プロパノール、１,３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等の低級脂肪族アルコール或いはこれらの混合物を用いることができる。抽出溶媒は、室温又は該抽出溶媒の沸点以下で用いることが好ましい。
【００１１】
上記抽出溶媒として使用し得る水としては、超純水、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらの水に各種処理を施したものを挙げることができる。該処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１２】
緑茶の抽出処理は、特に限定されず、常法に従って行うことができ、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
例えば、上記抽出溶媒を満たした容器に、抽出原料である緑茶を投入し、ときどき撹拌しながら可溶性成分を溶出させる。この際、抽出条件は、抽出原料である緑茶の種類や部位等に応じて適宜調整し得るが、抽出溶媒量は、通常、抽出原料の５０〜２００倍量、好ましくは、８０〜１２０倍量（質量比）であり、抽出時間は、通常、沸騰水（１００℃）の場合は、３分〜１０分、好ましくは、４分〜８分程度、熱水の場合は７０〜１００℃で３分〜１時間程度、室温水の場合は１〜２４時間程度、低級脂肪族アルコール、水と低級脂肪族アルコールとの混合物の場合は室温で１０分〜２時間程度である。
【００１３】
抽出処理により緑茶可溶性成分を溶出させた後、必要に応じて、該抽出処理で得られた緑茶液を濾過あるいは遠心分離して抽出残渣を除去することによって、緑茶抽出液を調製することができるが、単に沈殿物のない上澄みをデカンテーション等の処理により得ることによっても調製することができる。
【００１４】
本発明に使用し得るタンナーゼ酵素としては、例えば、アスペルギルス属、ペニシリウム属、リゾプス属、ムコール属等に属するタンナーゼ生産菌を、これら糸状菌の培養に用いられる培地で、常法に従って固体培養又は液体培養し、得られる培養物又はその処理物を常法により精製処理したものを挙げることができる。
なお、市販されているタンナーゼ、例えば、タンナーゼキッコーマン（500Ｕ／ｇ）、
タンナーゼキッコーマン（5000Ｕ／ｇ）（以上、キッコーマン社製、商品名）、タンナーゼ三共（500Ｕ／ｇ）（三共社製、商品名）等を用いることもできる。
タンナーゼの使用量は、各酵素の力価等により異なるため、一概には決定できないが、通常、本発明に使用する緑茶抽出液１ｍＬ当たり、０．０５〜０．２ｍｇ、好ましくは、０．０８〜０．１２ｍｇの使用量を例示することができる。
【００１５】
本発明に使用し得る補酵素としては、塩化マグネシウム、塩化カリウム、グルコース−６−リン酸、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４：Ｎａ2ＨＰＯ4＋ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ）等の混合物が挙げられる。
上記補酵素としては、上記の試薬を混合して調製して使用することもできるが、市販のものを使用することもできる。
【００１６】
補酵素の具体例としては、例えば、下記成分を精製水１０ｍＬに溶解した溶液が挙げられる。
成分 質量 混合溶液中の濃度
塩化マグネシウム １６．３ｍｇ ８ｍｍｏｌ／Ｌ
塩化カリウム ２４．６ｍｇ ３３ｍｍｏｌ／Ｌ
グルコース−６−リン酸 １７．０ｍｇ ５ｍｍｏｌ／Ｌ
ＮＡＤＰＨ ３６．２ｍｇ ４ｍｍｏｌ／Ｌ
ＮＡＤＨ ３０．５ｍｇ ４ｍｍｏｌ／Ｌ
リン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．４） − １００ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｎａ2ＨＰＯ4 １１９．６ｍｇ −
ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ ２４．７ｍｇ −
補酵素の使用量は特に制限されるものではないが、例えば、上記混合溶液を使用する場合、本発明に使用する緑茶抽出液１ｍＬ当たり、約１００〜３０００μＬ、より好ましくは約５００〜２０００μＬの量で使用するのがよい。
【００１７】
緑茶抽出液のタンナーゼ酵素及び補酵素による処理は、本発明に使用する緑茶抽出液に、上記のタンナーゼ酵素及び補酵素を添加した後、２５〜４０℃、好ましくは３５〜３９℃で、３０分〜２時間、好ましくは、４５分〜１時間半反応させることにより達成される。
【００１８】
その後、４５℃〜９５℃、好ましくは７５℃〜９５℃まで昇温して、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させるのがよい。
また、酵素を失活させた後に、冷却、遠心分離、濾紙濾過等の適宜な分離手段によって緑茶抽出液中の不溶物を除去することもできる。
【００１９】
上記の処理方法により、本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液が製造される。
本発明の緑茶抽出液において、酸化誘導性が向上していることは、例えば、特開２００１−２７２３８８号公報に記載の評価法により確認することができる。
特開２００１−２７２３８８号公報に記載の評価法は、被験素材の溶液中に添加した２´−デオキシグアノシン（ｄＧ）が、８−ヒドロキシ−２´−デオキシグアノシン（８ＯＨｄＧ）にどれだけ変化したかを測定することで、酸化誘導率もしくは抗酸化能を評価する試験であるが、該評価法を利用するＧＯ試験は、変異原性試験（Ａｍｅｓ試験）との一致率が９０．０％（Ｐ＜０．０１）、発がん性試験との一致率が７２．０％（Ｐ＜０．０１）と、両試験において高い一致率を示す（例えば、食品と開発 ＶＯＬ．４５ ＮＯ．３ １３−１５頁 ２０１０年参照。）。
従って、特開２００１−２７２３８８号公報に記載の評価法は、信頼性の高い評価法と
考えられるものである。
【００２０】
本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液における酸化力は、特開２００１−２７２３８８号公報に記載の実施例１の方法に準じ、本発明の緑茶抽出液を被験素材として、２´−デオキシグアノシン（ｄＧ）を添加し、また同時にｄＧの感受性を向上させるための紫外線照射（例えば、２５４ｎｍ、６００〜９００μＷ／ｃｍ2、好ましくは、６００〜７００μＷ／ｃｍ2）による光励起を併用して、８ＯＨｄＧの生成量をＨＰＬＣを用いて定量し、同様にして測定された酵素処理されていない緑茶抽出液における８ＯＨｄＧの生成量との比較により確認できる。
【００２１】
図１に示すグラフには、上記の方法により測定された、超純水（ＰＷ（●））、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））の各被験素材における８ＯＨｄＧの生成量が比較されているが、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））が、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））に比して高い酸化誘導性を維持しているのが判る。
【００２２】
また、本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液における抗酸化能は、特開２００１−２７２３８８号公報に記載の実施例７の方法に準じて評価することができる。
即ち、ｄＧを８ＯＨｄＧに酸化することができる酸化剤（例えば、ＫＢｒＯ3）の存在下で、本発明の緑茶抽出液を被験素材として、ｄＧを添加し、また同時にｄＧの感受性を向上させるための紫外線照射（例えば、２５４ｎｍ、６００〜９００μＷ／ｃｍ2、好ましくは、６００〜７００μＷ／ｃｍ2）による光励起を併用して、８ＯＨｄＧの生成量をＨＰＬＣを用いて定量し、同様にして測定された酵素処理されていない緑茶抽出液における８ＯＨｄＧの生成量との比較により確認できる。
【００２３】
図２に示すグラフには、上記の方法により測定された、超純水（ＰＷ（●））、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））の各被験素材における８ＯＨｄＧの生成量が比較されているが、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））で示されている抗酸化能（酸化剤（ＫＢｒＯ3）による８ＯＨｄＧの生成を抑制する能力）が、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））において減弱しているのが判る。
【００２４】
上述のように、緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される本発明の該緑茶抽出液は、酸化誘導性が向上すると伴に、抗酸化能が抑制されて、酸化促進に特化されるものであり、そのため、本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液は、抗菌効果に優れる食品、飲料、洗浄剤、抗菌剤等の物品において有利に使用することができる。
【００２５】
本発明はまた、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食品にも関する。
前記抽出液の濃縮物を得るための濃縮方法としては、加熱により水を蒸発分離する方式が一般的である。
この場合、大気圧で蒸発させるには抽出液の沸点（１００℃近傍）まで、加熱する必要があり製品の風味に悪影響が出る恐れがある。そこで、抽出液が入った容器を減圧することにより低温で沸騰する環境をつくるのが好ましい。また、必要とする成分が濾過されずに残留する口径を持つ膜を流通させることにより、濃縮する方法も用いることができる。
【００２６】
濃縮物としては、例えば、濃縮物中の水分を０〜１０質量％、好ましくは２〜５質量％まで減少させ、必要に応じて、粉末状とするための乾燥を実施する場合も含む。該乾燥法として、凍結乾燥、噴霧乾燥等を選択することができる。噴霧乾燥は、大量の濃縮液を短時間で処理し、製品単位重量あたりに使用するエネルギーも他の方法に比べて少ないため好ましい。
本発明の緑茶抽出液及びその濃縮物の場合も含めて、その水分量が２〜９６質量％、さらに２〜９４質量％、特に２〜９３質量％であることが好ましい。
【００２７】
前記緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食品としては、例えば、菓子類（例えば、パン、ケーキ、クッキー、ビスケット等の焼菓子、チューインガム、チョコレート、キャンディー）、デザート類（例えば、ゼリー、ヨーグルト、アイスクリーム）、レトルト食品、調味料（例えば、ソース、スープ、ドレッシング、マヨネーズ、クリーム）が挙げられる。なお、飲食品の形態は特に限定されず、摂取しやすい形態であれば、固形、粉末、液体、ゲル状、スラリー状等のいずれであってもよい。
また、本発明の食品は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有するものであるため、優れた抗菌活性が期待でき、そのため、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品等に好適である。
上記食品（特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品）としては、例えば、錠剤、顆粒、トローチ、キャンディー（のど飴）等の形態が挙げられる。
【００２８】
本発明はまた、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる飲料にも関する。
前記抽出液の濃縮物としては、上記したものと同様の濃縮物を使用することができる。
前記緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食飲料としては、例えば、茶飲料、非茶系飲料が挙げられる。茶飲料としては、例えば、緑茶飲料、野草類ブレンド茶飲料、烏龍茶飲料、紅茶飲料が挙げられる。また、非茶系飲料としては、清涼飲料（例えば、果汁ジュース、野菜ジュース、スポーツ飲料、アイソトニック飲料）、コーヒー飲料、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の非アルコール飲料、ビール、ワイン、清酒、梅酒、発泡酒、ウィスキー、ブランデー、焼酎、ラム、ジン、リキュール類等のアルコール飲料が挙げられる。
また、本発明の飲料は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有するものであるため、優れた抗菌活性が期待でき、そのため、健康飲料等に好適である。
上記健康飲料としては、例えば、健康茶等が挙げられる。
【００２９】
本発明はまた、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる、固体、液体又は泡状の洗浄剤にも関する。
固体の洗浄剤としては、所謂、石鹸が挙げられる。
該石鹸は、通常、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含む溶液と粉末の石鹸基材とを均一に混合し、該混合溶液に含まれる水や他の溶剤を除去した後、冷却固化することにより製造することができる。
石鹸に用いる石鹸基材は通常粉末状で使用され、具体的な石鹸基材としては、高級脂肪酸、樹脂酸、ナフテン酸等のナトリウムやカリウム等の金属塩等が挙げられる。
前記石鹸基材の使用量は、石鹸の質量に基づき６０〜９９．９質量％の範囲である。
前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物と粉末の石鹸基材との混合比は、最終的に得られる石鹸中に含まれる前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物の乾燥質量が、得られた石鹸の質量に基づき０．００１〜１０質量％の範囲となるような比率となる。
前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物と粉末の石鹸基材との具体的な混合比は、例えば、質量に基づき、３０：７０〜７０：３０の範囲である。
【００３０】
前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物と粉末の石鹸基材との混合は、室温ないし加熱条件下で数時間行うことにより達成できるが、好ましくは、３０〜６０℃で、１〜３時間攪拌することにより達成される。
水や他の溶剤の除去は、室温ないし加熱条件下で数時間ないし数日放置することにより達成できるが、好ましくは、３０〜６０℃で、１時間〜３日間放置することにより達成される。
また、最終的に得られる石鹸の含水率は、５〜２０％程度とし、１０〜１８％程度とするのが好ましい。
尚、最終的に得られた前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物の乾燥質量の含有量は、得られた石鹸の質量に基づき、０．００１〜１０質量％、好ましくは、０．０１〜１質量％、また、０．１５〜１質量％の範囲である。
【００３１】
液体の洗浄剤としては、所謂、液体石鹸が挙げられる。
該液体石鹸の成分としては、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物に加えて、例えば、ヤシ脂肪酸、パーム核脂肪酸、パーム脂肪酸、牛脂脂肪酸、及びラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸等の単蒸留した脂肪酸、オレイン酸、リノール酸等の飽和あるいは不飽和脂肪酸を単独または混合した脂肪酸と水酸化カリウム、水酸化ナトリウム等のアルカリ金属、またはトリエタノールアミン、アミノメチルフェノール等のアルカノールアミンで適量中和したものが挙げられるが、これらのアルカリ金属塩およびアルカノールアミン塩は夫々単独あるいは併用してもよい。
前記成分を含む液体石鹸組成物中の石鹸の含有量は５〜３０質量％が好ましく、含有量が５質量％に満たないと洗浄剤としての機能を果たさず、３０質量％を上回ると粘度が高くなりすぎてゲル化し、液状を維持できなくなる。
【００３２】
上記液体石鹸組成物の粘度は２５℃において５００〜８０００ｃｐｓであり、好ましくは、５００〜３０００ｃｐｓ、更に好ましくは６００から１５００ｃｐｓである。粘度が５００ｃｐｓに満たないと、使用時に指の間からこぼれやすく使用に適さない。また、８０００ｃｐｓを越えると使用時に水への分散性が劣り、起泡性が損なわれ不都合である。また液体石鹸組成物のｐＨは８．４〜１０．０が好適である。また、この液体石鹸組成物はボディシャンプー、ハンドソープなどの身体用洗浄剤にも利用することができる。
最終的に得られた液体石鹸組成物における、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物の乾燥質量の含有量は、組成物の質量に基づき、０．００１〜１０質量％、好ましくは、０．０１〜１質量％、また、０．１５〜１質量％の範囲である。
尚、前記液体石鹸組成物は、上記成分に加え、公知のアニオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、湿潤剤、防腐剤、色素、保湿剤、キレート剤、紫外線吸収剤、薬効剤、着香剤等を適宜配合することができる。
【００３３】
泡状の洗浄剤は、通常、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物に加え、界面活性剤、アルコール、噴射剤、水等を含む。
前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物の乾燥質量の含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、０．００１〜１０質量％、好ましくは、０．０１〜１質量％、また、０．１５〜１質量％の範囲である。
上記界面活性剤としては、特に限定されず、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性界面活性剤または非イオン界面活性剤の各種界面活性剤を使用することができる。
陰イオン界面活性剤としては、例えばカルボン酸塩、スルホン酸塩、硫酸エステル塩、リン酸エステル塩、ホスホン酸塩等を用いることができ、具体的には、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム等が挙げられ、陽イオン界面活性剤としては、例えば４級アンモニウム塩等を用いることができ、具体的にはアルキルトリメチルアンモニウムハライド等が挙げられ、両性界面活性剤としては、例えば長鎖
アルキルアミノ酸等を用いることができ、具体的には、２−アルキル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、アルキルジエチレントリアミノ酢酸等が挙げられ、非イオン界面活性剤としては、例えば非イオン性の極性基を持つものを用いることができ、具体的には脂肪酸モノグリセリンエステル、脂肪酸ソルビタンエステル、脂肪酸ポリグリセリンエステル、脂肪酸アルカノールアミド、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシラノリンエーテル、ポリオキシエチレンコレステロール等が挙げられる。
以上のような界面活性剤は１種または２種以上を組み合わせて使用することができる。
上記界面活性剤の含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、０．３〜２０質量％の範囲、好ましくは、０．４〜１５質量％の範囲である。
【００３４】
上記アルコールとしては、特に限定されないが、例えばメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等、水と任意の割合で混合可能なものが好ましく、これらを１種または２種以上混合して用いてもよい。
上記アルコールの含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、０．１〜１０質量％の範囲、好ましくは、０．５〜５質量％の範囲である。
上記噴射剤としては、例えば、プロパン、ブタン、ペタン、またはこれらを主成分とする石油液化ガス（ＬＰＧ）、ジメチルエーテル、窒素ガス等を使用することができる。
上記噴射剤の含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、２〜７０質量％の範囲、好ましくは、５〜７０質量％の範囲である。
上記水は、泡状の洗浄剤の品質維持、成分安定性等を担保するべく、通常、蒸留水（精製水）が使用される。
上記水の含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、１５〜５０質量％の範囲、好ましくは、２０〜４０質量％の範囲である。
尚、前記液体石鹸組成物は、上記成分に加え、例えば、保湿剤、増泡剤、防腐剤、乳濁剤、殺菌剤、香料、着色料、パール剤、コンディショニング剤、増粘剤、ｐＨ調整剤等を適宜配合することができる。
【００３５】
本発明の固体、液体又は泡状の洗浄剤は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有するものであるため、優れた抗菌活性が期待でき、そのため、殺菌用洗浄剤等に好適である。
【００３６】
本発明はまた、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる抗菌剤にも関する。
本発明の抗菌剤は、大腸菌（Escherichia coli）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）等に対する優れた抗菌活性が期待できる。
そのため、文房具等の日用雑貨、化粧品、トイレタリー用品、洗剤等のパーソナルケア製品、口腔ケア剤、皮膚ケア剤、うがい薬等のヘルスケア製品などに用いる抗菌剤として有利に使用し得る。
【実施例】
【００３７】
製造例１：緑茶抽出液の調製
緑茶（やぶきた Ｆ−０６３０）の乾燥茶葉１ｇを１００ｍＬの超純水に浸し、ガスバーナーで加温し、５分間煮沸した。
煮沸後速やかに常温まで冷やすことにより、緑茶抽出液を調製した。
尚、以降の試験では、上記緑茶抽出液の上澄み（沈殿物のない）を使用した。
【００３８】
製造例２：補酵素溶液の調製
以下の成分を１０ｍＬの精製水に溶解して０．４５μｍのフィルターでろ過して補酵素溶液を調製した。
成分 質量
塩化マグネシウム １６．３ｍｇ
塩化カリウム ２４．６ｍｇ
グルコース−６−リン酸 １７．０ｍｇ
ＮＡＤＰＨ ３６．２ｍｇ
ＮＡＤＨ ３０．５ｍｇ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）
Ｎａ2ＨＰＯ4 １１９．６ｍｇ
ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ ２４．７ｍｇ
【００３９】
実施例１：緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）の調製
製造例１で調製した緑茶１ｍＬに、０．４％タンナーゼ水溶液２５μＬ及び製造例２で調製した補酵素溶液９６５μＬを添加し、３７℃で１時間インキュベートすることにより、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を調製した。
また、比較のため、製造例１で調製した緑茶１ｍＬに、０．４％タンナーゼ水溶液２５μＬ及び超純水９６５μＬを添加し、３７℃で１時間インキュベートすることにより、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）を調製した。
【００４０】
試験例１：酸化誘導性評価
実施例１で調製した緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）、緑茶抽出液（未処理）及び超純水の各々に、２３ｍｇ／ｍＬのｄＧ（超純水に溶解）４５０μＬを加え、紫外線照射箱中で紫外線（２５４ｎｍ、６００−７００μＷ／ｃｍ2）を照射し、照射開始時（０ｈｒ）、１時間後（１ｈｒ）及び２時間後（２ｈｒ）にサンプリングを行い、等量の２０％グリセロール溶液と混和し、ＨＰＬＣ（使用カラム：ＣＡ−５０ＤＳ（エイコム社製）、移動相溶液：０．１Ｍリン酸緩衝液、３〜１０％メタノール、ＳＯＳ９０〜１００ｍｇ）により、ｄＧと８ＯＨｄＧとを分離し、該ＨＰＬＣに連結したＵＶ検出器と電気化学的検出器により８ＯＨｄＧを定量し、結果を図１に示した。尚、表中、ＰＷ（●）は、超純水を示し、緑茶（○）は、緑茶抽出液（未処理）を示し、緑茶（Ｔａｓｅ１）（△）は、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）を示し、緑茶（Ｔａｓｅ２）（□）は、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を示す。
図１より、緑茶抽出液＋（タンナーゼ酵素＋補酵素）処理の溶液（□：緑茶（Ｔａｓｅ２））が、緑茶抽出液（○：緑茶）及び緑茶抽出液＋タンナーゼ酵素処理の溶液（△：緑茶（Ｔａｓｅ１））に比して高い酸化誘導性を維持しているのが判る。
【００４１】
試験例２：抗酸化能の評価
実施例１で調製した緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）、緑茶抽出液（未処理）及び超純水の各々に、２０ｍｇ／ｍＬの臭素酸カリウム（ＫＢｒＯ3）溶液５０μＬ及び２３ｍｇ／ｍＬのｄＧ（超純水に溶解）４００μＬを加え、紫外線照射箱中で紫外線（２５４ｎｍ、６００−７００μＷ／ｃｍ2）を照射し、照射開始時（０ｈｒ）、１時間後（１ｈｒ）及び２時間後（２ｈｒ）にサンプリングを行い、等量の２０％グリセロール溶液と混和し、ＨＰＬＣ（使用カラム：ＣＡ−５０ＤＳ（エイコム社製）、移動相溶液：０．１Ｍリン酸緩衝液、３〜１０％メタノール、ＳＯＳ９０〜１００ｍｇ）により、ｄＧと８ＯＨｄＧとを分離し、該ＨＰＬＣに連結したＵＶ検出器と電気化学的検出器により８ＯＨｄＧを定量し、結果を図２に示した。尚、表中、ＰＷ（●）は、超純水を示し、緑茶（○）は、緑茶抽出液（未処理）を示し、緑茶（Ｔａｓｅ１）（△）は、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）を示し、緑茶（Ｔａｓｅ２）（□）は、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を示す。
図２より、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））で示されている抗酸化能（酸化剤（ＫＢｒＯ3）による８ＯＨｄＧの生成を抑制する能力）が、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑
茶（Ｔａｓｅ２）（□））において減弱しているのが判る。
【００４２】
実施例２：緑茶飲料の調製
実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を１００ｍＬ調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、以下の成分を添加することにより、緑茶飲料を調製した。
成分 量（ｇ）
糖類 １．４５ｇ
塩類 ０．３２ｇ
甘味料 ０．０１ｇ
ビタミンＣ ０．０５ｇ
果汁 ０．１０ｇ
香料 ０，２０ｇ
【００４３】
実施例３：緑茶成分が配合されたキャンディーの調製
下記の成分を配合し、常法により、本発明の緑茶抽出液の濃縮物（緑茶抽出物）を含有するキャンディーを製造した。なお、緑茶抽出物は、実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、凍結乾燥することにより製造された粉末を意味する。
成分 質量部
砂糖 ５０
水飴 ３３
緑茶抽出物 ４
水 １３
【００４４】
実施例４：石鹸の製造
実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を２００ｍＬ調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、該抽出液と石鹸基材２００ｇを均一になるまで４５℃で１時間攪拌した。
この溶液を冷却固化し、切断後、含水率が１５％になるまで乾燥して固形石鹸を得た。
【００４５】
実施例５：液体石鹸の製造
下記の成分を配合し、常法により、本発明の緑茶抽出液の濃縮物（緑茶抽出物）を含有する液体石鹸を製造した。なお、緑茶抽出物は、実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、凍結乾燥することにより製造された粉末を意味する。
成分 質量％
ラウリン酸 １５．０
ミリスチン酸 ５．０
ステアリン酸 １．０
緑茶抽出物 １．０
水酸化カリウム（ｐＨ９．６に調整） 適量
精製水 残部
【００４６】
実施例６：泡状の洗浄剤の製造
下記の成分を配合し、常法により、本発明の緑茶抽出液の濃縮物（緑茶抽出物）を含有する液体石鹸を製造した。なお、緑茶抽出物は、実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、凍結乾燥することにより製造された粉末を意味する。
成分 質量％
界面活性剤
（ポリエチレングリコールジラウレート） １．１７
緑茶抽出物 １．０
エタノール ３．０
水 ２５．８
香料 ０．０３
噴射剤（ＬＰＧ） ６９．０
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及びこれを含有してなる食品、飲料、洗浄剤及び抗菌剤に関するものであり、詳細には、緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及び該抽出液又はその濃縮物を含有する食品、飲料、洗浄剤、抗菌剤等の物品に関する。
【背景技術】
【０００２】
緑茶は、酸化促進と酸化防止という相反する性質を有することが知られている。
そのため、緑茶抽出液は、酸化促進に基づく殺菌効果を期待して、抗菌グッズ等に関する研究開発が盛んに行われる一方、酸化防止に基づく生体酸化予防（抗加齢）効果を期待して、健康食品や医薬品に関する研究開発も盛んに行われている。
しかし、緑茶における上記酸化促進と酸化防止という相反する性質が何に起因し、またどのようにすれば、この相反する性質のバランスを変化させ得るかに付いては、必ずしも十分な検討がなされていない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液及びこれを含有してなる食品、飲料、洗浄剤及び抗菌剤の提供を課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者等は、上記課題を解決するために鋭意検討した結果、緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理すると、該緑茶抽出液の酸化誘導性が向上すると伴に、抗酸化能が抑制されて、酸化促進に特化されることを見出し、これにより、該緑茶抽出液又はこの濃縮物を含有する物品は、抗菌活性に優れる食品、飲料、洗浄剤、抗菌剤等の物品となり得ることを見出し、本発明を完成させた。
【０００５】
即ち、本発明は、
（１）緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液、
（２）前記（１）に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食品、
（３）前記（１）に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる飲料、
（４）前記（１）に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる、固体、液体又は泡状の洗浄剤、
（５）前記（１）に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる抗菌剤、
に関する。
【発明の効果】
【０００６】
本発明により、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液を容易に得ることが出来、これにより、抗菌効果に優れる食品、飲料、洗浄剤、抗菌剤等の物品を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】超純水（ＰＷ（●））、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））の、紫外線照射条件下での、ｄＧから誘導された８ＯＨｄＧの量（酸化誘導性の指標）を示すグラフである。
【図２】超純水（ＰＷ（●））、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））の、紫外線照射条件下での、酸化剤（ＫＢｒＯ3）存在下におけるｄＧから誘導された８ＯＨｄＧの量（抗酸化能：酸化剤によるｄＧ酸化の抑制）を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
更に詳細に本発明を説明する。
本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液は、緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される。
本発明に使用し得る緑茶抽出液としては、植物の抽出の際に一般的に用いられる方法によって容易に調製することができ、例えば、抽出原料である緑茶をそのまま、又は粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することによって調製され得る。
【０００９】
抽出原料である緑茶としては、特に制限されるものではなく、煎茶、玉露、かぶせ茶、てん茶、番茶、焙じ茶等の蒸し製茶、嬉野茶、青柳茶、各種中国茶等の釜炒り茶等を例示することができる。また、抽出に用いる緑茶の部位は、茶葉の他、茎、芽等を含み得る。
【００１０】
緑茶抽出に用いる抽出溶媒としては、水（熱水を含む）又はメタノール、エタノール、プロパノール、１,３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等の低級脂肪族アルコール或いはこれらの混合物を用いることができる。抽出溶媒は、室温又は該抽出溶媒の沸点以下で用いることが好ましい。
【００１１】
上記抽出溶媒として使用し得る水としては、超純水、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらの水に各種処理を施したものを挙げることができる。該処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、濾過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１２】
緑茶の抽出処理は、特に限定されず、常法に従って行うことができ、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
例えば、上記抽出溶媒を満たした容器に、抽出原料である緑茶を投入し、ときどき撹拌しながら可溶性成分を溶出させる。この際、抽出条件は、抽出原料である緑茶の種類や部位等に応じて適宜調整し得るが、抽出溶媒量は、通常、抽出原料の５０〜２００倍量、好ましくは、８０〜１２０倍量（質量比）であり、抽出時間は、通常、沸騰水（１００℃）の場合は、３分〜１０分、好ましくは、４分〜８分程度、熱水の場合は７０〜１００℃で３分〜１時間程度、室温水の場合は１〜２４時間程度、低級脂肪族アルコール、水と低級脂肪族アルコールとの混合物の場合は室温で１０分〜２時間程度である。
【００１３】
抽出処理により緑茶可溶性成分を溶出させた後、必要に応じて、該抽出処理で得られた緑茶液を濾過あるいは遠心分離して抽出残渣を除去することによって、緑茶抽出液を調製することができるが、単に沈殿物のない上澄みをデカンテーション等の処理により得ることによっても調製することができる。
【００１４】
本発明に使用し得るタンナーゼ酵素としては、例えば、アスペルギルス属、ペニシリウム属、リゾプス属、ムコール属等に属するタンナーゼ生産菌を、これら糸状菌の培養に用いられる培地で、常法に従って固体培養又は液体培養し、得られる培養物又はその処理物を常法により精製処理したものを挙げることができる。
なお、市販されているタンナーゼ、例えば、タンナーゼキッコーマン（500Ｕ／ｇ）、
タンナーゼキッコーマン（5000Ｕ／ｇ）（以上、キッコーマン社製、商品名）、タンナーゼ三共（500Ｕ／ｇ）（三共社製、商品名）等を用いることもできる。
タンナーゼの使用量は、各酵素の力価等により異なるため、一概には決定できないが、通常、本発明に使用する緑茶抽出液１ｍＬ当たり、０．０５〜０．２ｍｇ、好ましくは、０．０８〜０．１２ｍｇの使用量を例示することができる。
【００１５】
本発明に使用し得る補酵素としては、塩化マグネシウム、塩化カリウム、グルコース−６−リン酸、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）、リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４：Ｎａ2ＨＰＯ4＋ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ）等の混合物が挙げられる。
上記補酵素としては、上記の試薬を混合して調製して使用することもできるが、市販のものを使用することもできる。
【００１６】
補酵素の具体例としては、例えば、下記成分を精製水１０ｍＬに溶解した溶液が挙げられる。
成分 質量 混合溶液中の濃度
塩化マグネシウム １６．３ｍｇ ８ｍｍｏｌ／Ｌ
塩化カリウム ２４．６ｍｇ ３３ｍｍｏｌ／Ｌ
グルコース−６−リン酸 １７．０ｍｇ ５ｍｍｏｌ／Ｌ
ＮＡＤＰＨ ３６．２ｍｇ ４ｍｍｏｌ／Ｌ
ＮＡＤＨ ３０．５ｍｇ ４ｍｍｏｌ／Ｌ
リン酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．４） − １００ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｎａ2ＨＰＯ4 １１９．６ｍｇ −
ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ ２４．７ｍｇ −
補酵素の使用量は特に制限されるものではないが、例えば、上記混合溶液を使用する場合、本発明に使用する緑茶抽出液１ｍＬ当たり、約１００〜３０００μＬ、より好ましくは約５００〜２０００μＬの量で使用するのがよい。
【００１７】
緑茶抽出液のタンナーゼ酵素及び補酵素による処理は、本発明に使用する緑茶抽出液に、上記のタンナーゼ酵素及び補酵素を添加した後、２５〜４０℃、好ましくは３５〜３９℃で、３０分〜２時間、好ましくは、４５分〜１時間半反応させることにより達成される。
【００１８】
その後、４５℃〜９５℃、好ましくは７５℃〜９５℃まで昇温して、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させるのがよい。
また、酵素を失活させた後に、冷却、遠心分離、濾紙濾過等の適宜な分離手段によって緑茶抽出液中の不溶物を除去することもできる。
【００１９】
上記の処理方法により、本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液が製造される。
本発明の緑茶抽出液において、酸化誘導性が向上していることは、例えば、特開２００１−２７２３８８号公報に記載の評価法により確認することができる。
特開２００１−２７２３８８号公報に記載の評価法は、被験素材の溶液中に添加した２´−デオキシグアノシン（ｄＧ）が、８−ヒドロキシ−２´−デオキシグアノシン（８ＯＨｄＧ）にどれだけ変化したかを測定することで、酸化誘導率もしくは抗酸化能を評価する試験であるが、該評価法を利用するＧＯ試験は、変異原性試験（Ａｍｅｓ試験）との一致率が９０．０％（Ｐ＜０．０１）、発がん性試験との一致率が７２．０％（Ｐ＜０．０１）と、両試験において高い一致率を示す（例えば、食品と開発 ＶＯＬ．４５ ＮＯ．３ １３−１５頁 ２０１０年参照。）。
従って、特開２００１−２７２３８８号公報に記載の評価法は、信頼性の高い評価法と
考えられるものである。
【００２０】
本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液における酸化力は、特開２００１−２７２３８８号公報に記載の実施例１の方法に準じ、本発明の緑茶抽出液を被験素材として、２´−デオキシグアノシン（ｄＧ）を添加し、また同時にｄＧの感受性を向上させるための紫外線照射（例えば、２５４ｎｍ、６００〜９００μＷ／ｃｍ2、好ましくは、６００〜７００μＷ／ｃｍ2）による光励起を併用して、８ＯＨｄＧの生成量をＨＰＬＣを用いて定量し、同様にして測定された酵素処理されていない緑茶抽出液における８ＯＨｄＧの生成量との比較により確認できる。
【００２１】
図１に示すグラフには、上記の方法により測定された、超純水（ＰＷ（●））、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））の各被験素材における８ＯＨｄＧの生成量が比較されているが、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））が、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））に比して高い酸化誘導性を維持しているのが判る。
【００２２】
また、本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液における抗酸化能は、特開２００１−２７２３８８号公報に記載の実施例７の方法に準じて評価することができる。
即ち、ｄＧを８ＯＨｄＧに酸化することができる酸化剤（例えば、ＫＢｒＯ3）の存在下で、本発明の緑茶抽出液を被験素材として、ｄＧを添加し、また同時にｄＧの感受性を向上させるための紫外線照射（例えば、２５４ｎｍ、６００〜９００μＷ／ｃｍ2、好ましくは、６００〜７００μＷ／ｃｍ2）による光励起を併用して、８ＯＨｄＧの生成量をＨＰＬＣを用いて定量し、同様にして測定された酵素処理されていない緑茶抽出液における８ＯＨｄＧの生成量との比較により確認できる。
【００２３】
図２に示すグラフには、上記の方法により測定された、超純水（ＰＷ（●））、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））の各被験素材における８ＯＨｄＧの生成量が比較されているが、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））で示されている抗酸化能（酸化剤（ＫＢｒＯ3）による８ＯＨｄＧの生成を抑制する能力）が、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ２）（□））において減弱しているのが判る。
【００２４】
上述のように、緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される本発明の該緑茶抽出液は、酸化誘導性が向上すると伴に、抗酸化能が抑制されて、酸化促進に特化されるものであり、そのため、本発明の酸化誘導性が向上した緑茶抽出液は、抗菌効果に優れる食品、飲料、洗浄剤、抗菌剤等の物品において有利に使用することができる。
【００２５】
本発明はまた、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食品にも関する。
前記抽出液の濃縮物を得るための濃縮方法としては、加熱により水を蒸発分離する方式が一般的である。
この場合、大気圧で蒸発させるには抽出液の沸点（１００℃近傍）まで、加熱する必要があり製品の風味に悪影響が出る恐れがある。そこで、抽出液が入った容器を減圧することにより低温で沸騰する環境をつくるのが好ましい。また、必要とする成分が濾過されずに残留する口径を持つ膜を流通させることにより、濃縮する方法も用いることができる。
【００２６】
濃縮物としては、例えば、濃縮物中の水分を０〜１０質量％、好ましくは２〜５質量％まで減少させ、必要に応じて、粉末状とするための乾燥を実施する場合も含む。該乾燥法として、凍結乾燥、噴霧乾燥等を選択することができる。噴霧乾燥は、大量の濃縮液を短時間で処理し、製品単位重量あたりに使用するエネルギーも他の方法に比べて少ないため好ましい。
本発明の緑茶抽出液及びその濃縮物の場合も含めて、その水分量が２〜９６質量％、さらに２〜９４質量％、特に２〜９３質量％であることが好ましい。
【００２７】
前記緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食品としては、例えば、菓子類（例えば、パン、ケーキ、クッキー、ビスケット等の焼菓子、チューインガム、チョコレート、キャンディー）、デザート類（例えば、ゼリー、ヨーグルト、アイスクリーム）、レトルト食品、調味料（例えば、ソース、スープ、ドレッシング、マヨネーズ、クリーム）が挙げられる。なお、飲食品の形態は特に限定されず、摂取しやすい形態であれば、固形、粉末、液体、ゲル状、スラリー状等のいずれであってもよい。
また、本発明の食品は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有するものであるため、優れた抗菌活性が期待でき、そのため、特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品等に好適である。
上記食品（特定保健用食品、栄養補助食品、機能性食品）としては、例えば、錠剤、顆粒、トローチ、キャンディー（のど飴）等の形態が挙げられる。
【００２８】
本発明はまた、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる飲料にも関する。
前記抽出液の濃縮物としては、上記したものと同様の濃縮物を使用することができる。
前記緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食飲料としては、例えば、茶飲料、非茶系飲料が挙げられる。茶飲料としては、例えば、緑茶飲料、野草類ブレンド茶飲料、烏龍茶飲料、紅茶飲料が挙げられる。また、非茶系飲料としては、清涼飲料（例えば、果汁ジュース、野菜ジュース、スポーツ飲料、アイソトニック飲料）、コーヒー飲料、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の非アルコール飲料、ビール、ワイン、清酒、梅酒、発泡酒、ウィスキー、ブランデー、焼酎、ラム、ジン、リキュール類等のアルコール飲料が挙げられる。
また、本発明の飲料は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有するものであるため、優れた抗菌活性が期待でき、そのため、健康飲料等に好適である。
上記健康飲料としては、例えば、健康茶等が挙げられる。
【００２９】
本発明はまた、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる、固体、液体又は泡状の洗浄剤にも関する。
固体の洗浄剤としては、所謂、石鹸が挙げられる。
該石鹸は、通常、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含む溶液と粉末の石鹸基材とを均一に混合し、該混合溶液に含まれる水や他の溶剤を除去した後、冷却固化することにより製造することができる。
石鹸に用いる石鹸基材は通常粉末状で使用され、具体的な石鹸基材としては、高級脂肪酸、樹脂酸、ナフテン酸等のナトリウムやカリウム等の金属塩等が挙げられる。
前記石鹸基材の使用量は、石鹸の質量に基づき６０〜９９．９質量％の範囲である。
前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物と粉末の石鹸基材との混合比は、最終的に得られる石鹸中に含まれる前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物の乾燥質量が、得られた石鹸の質量に基づき０．００１〜１０質量％の範囲となるような比率となる。
前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物と粉末の石鹸基材との具体的な混合比は、例えば、質量に基づき、３０：７０〜７０：３０の範囲である。
【００３０】
前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物と粉末の石鹸基材との混合は、室温ないし加熱条件下で数時間行うことにより達成できるが、好ましくは、３０〜６０℃で、１〜３時間攪拌することにより達成される。
水や他の溶剤の除去は、室温ないし加熱条件下で数時間ないし数日放置することにより達成できるが、好ましくは、３０〜６０℃で、１時間〜３日間放置することにより達成される。
また、最終的に得られる石鹸の含水率は、５〜２０％程度とし、１０〜１８％程度とするのが好ましい。
尚、最終的に得られた前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物の乾燥質量の含有量は、得られた石鹸の質量に基づき、０．００１〜１０質量％、好ましくは、０．０１〜１質量％、また、０．１５〜１質量％の範囲である。
【００３１】
液体の洗浄剤としては、所謂、液体石鹸が挙げられる。
該液体石鹸の成分としては、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物に加えて、例えば、ヤシ脂肪酸、パーム核脂肪酸、パーム脂肪酸、牛脂脂肪酸、及びラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸等の単蒸留した脂肪酸、オレイン酸、リノール酸等の飽和あるいは不飽和脂肪酸を単独または混合した脂肪酸と水酸化カリウム、水酸化ナトリウム等のアルカリ金属、またはトリエタノールアミン、アミノメチルフェノール等のアルカノールアミンで適量中和したものが挙げられるが、これらのアルカリ金属塩およびアルカノールアミン塩は夫々単独あるいは併用してもよい。
前記成分を含む液体石鹸組成物中の石鹸の含有量は５〜３０質量％が好ましく、含有量が５質量％に満たないと洗浄剤としての機能を果たさず、３０質量％を上回ると粘度が高くなりすぎてゲル化し、液状を維持できなくなる。
【００３２】
上記液体石鹸組成物の粘度は２５℃において５００〜８０００ｃｐｓであり、好ましくは、５００〜３０００ｃｐｓ、更に好ましくは６００から１５００ｃｐｓである。粘度が５００ｃｐｓに満たないと、使用時に指の間からこぼれやすく使用に適さない。また、８０００ｃｐｓを越えると使用時に水への分散性が劣り、起泡性が損なわれ不都合である。また液体石鹸組成物のｐＨは８．４〜１０．０が好適である。また、この液体石鹸組成物はボディシャンプー、ハンドソープなどの身体用洗浄剤にも利用することができる。
最終的に得られた液体石鹸組成物における、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物の乾燥質量の含有量は、組成物の質量に基づき、０．００１〜１０質量％、好ましくは、０．０１〜１質量％、また、０．１５〜１質量％の範囲である。
尚、前記液体石鹸組成物は、上記成分に加え、公知のアニオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、湿潤剤、防腐剤、色素、保湿剤、キレート剤、紫外線吸収剤、薬効剤、着香剤等を適宜配合することができる。
【００３３】
泡状の洗浄剤は、通常、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物に加え、界面活性剤、アルコール、噴射剤、水等を含む。
前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物の乾燥質量の含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、０．００１〜１０質量％、好ましくは、０．０１〜１質量％、また、０．１５〜１質量％の範囲である。
上記界面活性剤としては、特に限定されず、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両性界面活性剤または非イオン界面活性剤の各種界面活性剤を使用することができる。
陰イオン界面活性剤としては、例えばカルボン酸塩、スルホン酸塩、硫酸エステル塩、リン酸エステル塩、ホスホン酸塩等を用いることができ、具体的には、α−オレフィンスルホン酸ナトリウム、アルキルベンゼンスルホン酸ナトリウム等が挙げられ、陽イオン界面活性剤としては、例えば４級アンモニウム塩等を用いることができ、具体的にはアルキルトリメチルアンモニウムハライド等が挙げられ、両性界面活性剤としては、例えば長鎖
アルキルアミノ酸等を用いることができ、具体的には、２−アルキル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、アルキルジエチレントリアミノ酢酸等が挙げられ、非イオン界面活性剤としては、例えば非イオン性の極性基を持つものを用いることができ、具体的には脂肪酸モノグリセリンエステル、脂肪酸ソルビタンエステル、脂肪酸ポリグリセリンエステル、脂肪酸アルカノールアミド、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシラノリンエーテル、ポリオキシエチレンコレステロール等が挙げられる。
以上のような界面活性剤は１種または２種以上を組み合わせて使用することができる。
上記界面活性剤の含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、０．３〜２０質量％の範囲、好ましくは、０．４〜１５質量％の範囲である。
【００３４】
上記アルコールとしては、特に限定されないが、例えばメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール等、水と任意の割合で混合可能なものが好ましく、これらを１種または２種以上混合して用いてもよい。
上記アルコールの含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、０．１〜１０質量％の範囲、好ましくは、０．５〜５質量％の範囲である。
上記噴射剤としては、例えば、プロパン、ブタン、ペタン、またはこれらを主成分とする石油液化ガス（ＬＰＧ）、ジメチルエーテル、窒素ガス等を使用することができる。
上記噴射剤の含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、２〜７０質量％の範囲、好ましくは、５〜７０質量％の範囲である。
上記水は、泡状の洗浄剤の品質維持、成分安定性等を担保するべく、通常、蒸留水（精製水）が使用される。
上記水の含有量は、泡状の洗浄剤の質量に基づき、１５〜５０質量％の範囲、好ましくは、２０〜４０質量％の範囲である。
尚、前記液体石鹸組成物は、上記成分に加え、例えば、保湿剤、増泡剤、防腐剤、乳濁剤、殺菌剤、香料、着色料、パール剤、コンディショニング剤、増粘剤、ｐＨ調整剤等を適宜配合することができる。
【００３５】
本発明の固体、液体又は泡状の洗浄剤は、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有するものであるため、優れた抗菌活性が期待でき、そのため、殺菌用洗浄剤等に好適である。
【００３６】
本発明はまた、前記酸化誘導性が向上した緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる抗菌剤にも関する。
本発明の抗菌剤は、大腸菌（Escherichia coli）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）等に対する優れた抗菌活性が期待できる。
そのため、文房具等の日用雑貨、化粧品、トイレタリー用品、洗剤等のパーソナルケア製品、口腔ケア剤、皮膚ケア剤、うがい薬等のヘルスケア製品などに用いる抗菌剤として有利に使用し得る。
【実施例】
【００３７】
製造例１：緑茶抽出液の調製
緑茶（やぶきた Ｆ−０６３０）の乾燥茶葉１ｇを１００ｍＬの超純水に浸し、ガスバーナーで加温し、５分間煮沸した。
煮沸後速やかに常温まで冷やすことにより、緑茶抽出液を調製した。
尚、以降の試験では、上記緑茶抽出液の上澄み（沈殿物のない）を使用した。
【００３８】
製造例２：補酵素溶液の調製
以下の成分を１０ｍＬの精製水に溶解して０．４５μｍのフィルターでろ過して補酵素溶液を調製した。
成分 質量
塩化マグネシウム １６．３ｍｇ
塩化カリウム ２４．６ｍｇ
グルコース−６−リン酸 １７．０ｍｇ
ＮＡＤＰＨ ３６．２ｍｇ
ＮＡＤＨ ３０．５ｍｇ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．４）
Ｎａ2ＨＰＯ4 １１９．６ｍｇ
ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ ２４．７ｍｇ
【００３９】
実施例１：緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）の調製
製造例１で調製した緑茶１ｍＬに、０．４％タンナーゼ水溶液２５μＬ及び製造例２で調製した補酵素溶液９６５μＬを添加し、３７℃で１時間インキュベートすることにより、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を調製した。
また、比較のため、製造例１で調製した緑茶１ｍＬに、０．４％タンナーゼ水溶液２５μＬ及び超純水９６５μＬを添加し、３７℃で１時間インキュベートすることにより、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）を調製した。
【００４０】
試験例１：酸化誘導性評価
実施例１で調製した緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）、緑茶抽出液（未処理）及び超純水の各々に、２３ｍｇ／ｍＬのｄＧ（超純水に溶解）４５０μＬを加え、紫外線照射箱中で紫外線（２５４ｎｍ、６００−７００μＷ／ｃｍ2）を照射し、照射開始時（０ｈｒ）、１時間後（１ｈｒ）及び２時間後（２ｈｒ）にサンプリングを行い、等量の２０％グリセロール溶液と混和し、ＨＰＬＣ（使用カラム：ＣＡ−５０ＤＳ（エイコム社製）、移動相溶液：０．１Ｍリン酸緩衝液、３〜１０％メタノール、ＳＯＳ９０〜１００ｍｇ）により、ｄＧと８ＯＨｄＧとを分離し、該ＨＰＬＣに連結したＵＶ検出器と電気化学的検出器により８ＯＨｄＧを定量し、結果を図１に示した。尚、表中、ＰＷ（●）は、超純水を示し、緑茶（○）は、緑茶抽出液（未処理）を示し、緑茶（Ｔａｓｅ１）（△）は、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）を示し、緑茶（Ｔａｓｅ２）（□）は、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を示す。
図１より、緑茶抽出液＋（タンナーゼ酵素＋補酵素）処理の溶液（□：緑茶（Ｔａｓｅ２））が、緑茶抽出液（○：緑茶）及び緑茶抽出液＋タンナーゼ酵素処理の溶液（△：緑茶（Ｔａｓｅ１））に比して高い酸化誘導性を維持しているのが判る。
【００４１】
試験例２：抗酸化能の評価
実施例１で調製した緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）、緑茶抽出液（未処理）及び超純水の各々に、２０ｍｇ／ｍＬの臭素酸カリウム（ＫＢｒＯ3）溶液５０μＬ及び２３ｍｇ／ｍＬのｄＧ（超純水に溶解）４００μＬを加え、紫外線照射箱中で紫外線（２５４ｎｍ、６００−７００μＷ／ｃｍ2）を照射し、照射開始時（０ｈｒ）、１時間後（１ｈｒ）及び２時間後（２ｈｒ）にサンプリングを行い、等量の２０％グリセロール溶液と混和し、ＨＰＬＣ（使用カラム：ＣＡ−５０ＤＳ（エイコム社製）、移動相溶液：０．１Ｍリン酸緩衝液、３〜１０％メタノール、ＳＯＳ９０〜１００ｍｇ）により、ｄＧと８ＯＨｄＧとを分離し、該ＨＰＬＣに連結したＵＶ検出器と電気化学的検出器により８ＯＨｄＧを定量し、結果を図２に示した。尚、表中、ＰＷ（●）は、超純水を示し、緑茶（○）は、緑茶抽出液（未処理）を示し、緑茶（Ｔａｓｅ１）（△）は、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）を示し、緑茶（Ｔａｓｅ２）（□）は、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を示す。
図２より、緑茶抽出液（未処理）（緑茶（○））及び緑茶抽出液（タンナーゼ酵素処理）（緑茶（Ｔａｓｅ１）（△））で示されている抗酸化能（酸化剤（ＫＢｒＯ3）による８ＯＨｄＧの生成を抑制する能力）が、緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）（緑
茶（Ｔａｓｅ２）（□））において減弱しているのが判る。
【００４２】
実施例２：緑茶飲料の調製
実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を１００ｍＬ調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、以下の成分を添加することにより、緑茶飲料を調製した。
成分 量（ｇ）
糖類 １．４５ｇ
塩類 ０．３２ｇ
甘味料 ０．０１ｇ
ビタミンＣ ０．０５ｇ
果汁 ０．１０ｇ
香料 ０，２０ｇ
【００４３】
実施例３：緑茶成分が配合されたキャンディーの調製
下記の成分を配合し、常法により、本発明の緑茶抽出液の濃縮物（緑茶抽出物）を含有するキャンディーを製造した。なお、緑茶抽出物は、実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、凍結乾燥することにより製造された粉末を意味する。
成分 質量部
砂糖 ５０
水飴 ３３
緑茶抽出物 ４
水 １３
【００４４】
実施例４：石鹸の製造
実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を２００ｍＬ調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、該抽出液と石鹸基材２００ｇを均一になるまで４５℃で１時間攪拌した。
この溶液を冷却固化し、切断後、含水率が１５％になるまで乾燥して固形石鹸を得た。
【００４５】
実施例５：液体石鹸の製造
下記の成分を配合し、常法により、本発明の緑茶抽出液の濃縮物（緑茶抽出物）を含有する液体石鹸を製造した。なお、緑茶抽出物は、実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、凍結乾燥することにより製造された粉末を意味する。
成分 質量％
ラウリン酸 １５．０
ミリスチン酸 ５．０
ステアリン酸 １．０
緑茶抽出物 １．０
水酸化カリウム（ｐＨ９．６に調整） 適量
精製水 残部
【００４６】
実施例６：泡状の洗浄剤の製造
下記の成分を配合し、常法により、本発明の緑茶抽出液の濃縮物（緑茶抽出物）を含有する液体石鹸を製造した。なお、緑茶抽出物は、実施例１と同様の操作で緑茶抽出液（タンナーゼ酵素＋補酵素処理）を調製し、８０℃で１０分間処理することにより、タンナーゼ酵素及び補酵素を失活させた後、凍結乾燥することにより製造された粉末を意味する。
成分 質量％
界面活性剤
（ポリエチレングリコールジラウレート） １．１７
緑茶抽出物 １．０
エタノール ３．０
水 ２５．８
香料 ０．０３
噴射剤（ＬＰＧ） ６９．０
【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液。
【請求項２】
請求項１に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食品。
【請求項３】
請求項１に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる飲料。
【請求項４】
請求項１に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる、固体、液体又は泡状の洗浄剤。
【請求項５】
請求項１に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる抗菌剤。
【請求項１】
緑茶抽出液をタンナーゼ酵素及び補酵素で処理することにより製造される、酸化誘導性が向上した緑茶抽出液。
【請求項２】
請求項１に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる食品。
【請求項３】
請求項１に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる飲料。
【請求項４】
請求項１に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる、固体、液体又は泡状の洗浄剤。
【請求項５】
請求項１に記載の緑茶抽出液又は該抽出液の濃縮物を含有してなる抗菌剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１２−１６１２９３（Ｐ２０１２−１６１２９３Ａ）
【公開日】平成２４年８月３０日（２０１２．８．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２４９８９（Ｐ２０１１−２４９８９）
【出願日】平成２３年２月８日（２０１１．２．８）
【出願人】（５０９２１６４２９）株式会社 新日本医薬 (1)
【出願人】（５０４１４５３４２）国立大学法人九州大学 (960)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年８月３０日（２０１２．８．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年２月８日（２０１１．２．８）
【出願人】（５０９２１６４２９）株式会社 新日本医薬 (1)
【出願人】（５０４１４５３４２）国立大学法人九州大学 (960)
【Ｆターム（参考）】
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