鎮痛性化合物、それらの合成およびそれらを含む薬学的組成物
【課題】より大きな薬理学的効力を有する新規の、より選択的な分子を探索することを課題とする。
【解決手段】上記課題は、Ｎ−アシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体の加水分解によって調製される新規の鎮痛性化合物、それらの合成およびそれらを含む薬学的組成物を開示することによって解決された。これらの化合物は、驚くべきことに、肝毒性をほとんど伴わずに高い鎮痛活性を有し、これは、これらの化合物を慢性疼痛の処置において従来の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）よりも有用にする。本発明はまた、ＳＣＰ−Ｍ系の化合物と金属またはアミンとの薬学的に受容可能で安定な塩の形成を包含する。さらに、本発明は、ＳＣＰ−Ｍ系由来の化合物をオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬と組み合わせて含む、薬学的組成物を包含する。
【解決手段】上記課題は、Ｎ−アシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体の加水分解によって調製される新規の鎮痛性化合物、それらの合成およびそれらを含む薬学的組成物を開示することによって解決された。これらの化合物は、驚くべきことに、肝毒性をほとんど伴わずに高い鎮痛活性を有し、これは、これらの化合物を慢性疼痛の処置において従来の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）よりも有用にする。本発明はまた、ＳＣＰ−Ｍ系の化合物と金属またはアミンとの薬学的に受容可能で安定な塩の形成を包含する。さらに、本発明は、ＳＣＰ−Ｍ系由来の化合物をオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬と組み合わせて含む、薬学的組成物を包含する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、Ｎ−アシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体の加水分解によって調製される新規の鎮痛性化合物、それらの化合物の合成およびそれらを含む薬学的組成物に関する。これらの化合物は、驚くべきことに、肝毒性をほとんど伴わずに高い鎮痛活性を有し、これは、これらの化合物を慢性疼痛の処置において従来の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）よりも有用にする。
【背景技術】
【０００２】
（背景技術）
アセトアミノフェンおよび他のＮＳＡＩＤのような鎮痛薬は、これまでの間、疼痛の処置に使用されてきた。しかし、その肝毒性活性に関連する病的状態の結果、これらの薬物を投与する場合に相当な注意が払われなければならない。毎年約１００，０００件のアセトアミノフェン過量が存在し、約３０名が死亡している（Ｃｌｉｓｓｏｌｄ、１９８０；ＭｃＧｏｌｄｒｉｃｋら、１９９７）。アセトアミノフェンは、有毒代謝物であるＮ−アセチル−ベンゾキノンイミン（ＮＡＰＱＩ）を含み、これは、肝臓および腎臓の細胞保護内因性代謝産物であるグルタチオンを枯渇させる（Ｍａｓｏｎ および Ｆｉｓｃｈｅｒ，１９８６；Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、１９８３）。アセトアミノフェンが有する肝毒性および腎毒性は、推奨される最大鎮痛用量よりも４倍〜８倍の用量で初めて生じ得る（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、１９８０）。アセトアミノフェンと中枢作用鎮痛薬とを含む薬学的組み合わせは、アセトアミノフェン単独よりもさらに危険であり得る。繰り返し使用するにつれて、耐性の増加のため、これらの組み合わせは同じ鎮痛効果を生じるためにより多い用量を必要とする。その組み合わせの用量が鎮痛耐性を補うために増加されるにつれて、その薬物の安全性が低下する。なぜなら、アセトアミノフェン成分のより多い用量が、肝毒性および腎毒性を増大させるからである。
【０００３】
特許文献１（Ｂａｚａｎら）および特許文献２（Ｂａｚａｎら）において、本発明者らのうちの２名は、それらの明細書において、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン１，１−ジオキシド基の窒素原子にアルキレン架橋を介して結合された一連のＮアシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体（ＳＣＰ系として称される）、それとともにそれらの調製プロセスおよび疼痛を軽減するためのそれらの使用方法を開示した。これらの特許文献の開示は、参考として本明細書中に援用される。このＳＣＰ系は、構造的に、以下の一般式Ｉ：
【０００４】
【化６】
で表され、ここで、ｎは１〜５の数である。これらの新規の非麻酔性鎮痛薬は、驚くべきことに、高い鎮痛活性を有するが、血液凝固を抑制せず、肝毒性効果をほとんど示さない。
【０００５】
さらに、米国特許出願第１０／２９２，１０５号（Ｂａｚａｎら）（この開示もまた、参考として援用される）において、本発明者らのうちの２名はまた、ＳＣＰ系に由来する鎮痛薬を含む密な（ｉｎｔｉｍａｔｅ）混合物中にオピオイド鎮痛薬または非オピオイド鎮痛薬を含む、薬学的組み合わせを開示し、これは、驚くべきことに、相乗的な鎮痛を示した。
【０００６】
より大きな薬理学的効力を有する新規の、より選択的な分子の継続的な探索において、２−スルファモイル安息香酸基の窒素原子にアルキレン架橋を介して結合されたＮ−アシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体が、驚くべきことに、高い鎮痛活性を有し、肝毒性効果をほとんど有さないことが確認された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５，５５４，６３６号明細書
【特許文献２】米国特許第５，６２１，１１０号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の開示）
本発明は、Ｎ−アシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体の加水分解によって調製される新規の鎮痛性化合物に関する。その新規の鎮痛性化合物は、一般式ＩＩ：
【０００９】
【化７】
を有し、この式において、ｎは１と５との間の数である。
【００１０】
本発明のいくつかの特定の実施例は、以下：
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］メチルスルファモイル｝安息香酸；
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］エチルスルファモイル｝安息香酸；
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］プロピルスルファモイル｝安息香酸；
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］ブチルスルファモイル｝安息香酸；
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］ペンチルスルファモイル｝安息香酸；
であるが、これらに限定されない。
【００１１】
一般式ＩＩの化合物（一般的に、ＳＣＰ−Ｍ系と称される）は、ＳＣＰ系の化合物を室温で１ＮのＮａＯＨ水溶液で加水分解することによって調製され得、その生成物は、エタノール中での再結晶によって精製され得る。
【００１２】
本発明はまた、ＳＣＰ−Ｍ系の化合物と金属またはアミンとの薬学的に受容可能で安定な塩の形成を包含する。カチオンで使用される金属の例は、アルカリ金属（例えば、ＮａまたはＫ）ならびにアルカリ土類金属（例えば、ＭｇおよびＣａ）である。アミンの例としては、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、クロリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミンおよびプロカインが挙げられる。
【００１３】
さらに、本発明は、ＳＣＰ−Ｍ系由来の化合物をオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬と組み合わせて含む、薬学的組成物を包含する。
【００１４】
本発明は、例えば以下を提供する。
（項目１）
式ＩＩ：
【化１】
の実質的に純粋な化合物であって、ここで、ｎは１〜５の数である、化合物。
（項目２）
限られた肝毒性効果を伴う鎮痛活性を示す薬学的組成物であって、項目１に記載の式ＩＩの少なくとも１つの化合物を含む、薬学的組成物。
（項目３）
疼痛の処置のための方法であって、該方法は、疼痛を有する被験体への項目１に記載の化合物の有効量の投与工程を包含する、方法。
（項目４）
式ＩＩ：
【化２】
の化合物を調製するためのプロセスであって、以下：
式Ｉ：
【化３】
の化合物と水酸化ナトリウム水溶液とを反応させて、式ＩＩの化合物を得る工程であって、ここで、ｎは１〜５の数である、工程
を包含する、方法。
（項目５）
鎮痛性組成物であって、
（ａ）オピオイド鎮痛薬；
（ｂ）一般式：
【化４】
の非麻酔性鎮痛薬であって、ここで、ｎは１〜５の数である、非麻酔性鎮痛薬；および
（ｃ）薬学的に受容可能なキャリア
の安全かつ薬学的に有効な量を含む、組成物。
（項目６）
前記オピオイド鎮痛薬が、アヘンのフェナントレンアルカロイドである、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記オピオイド鎮痛薬が、モルヒネアナログである、項目５に記載の組成物。
（項目８）
前記オピオイド鎮痛薬が、テバインの合成誘導体である、項目５に記載の組成物。
（項目９）
前記オピオイド鎮痛薬が、モルフィナン誘導体である、項目５に記載の組成物。
（項目１０）
前記オピオイド鎮痛薬が、ベンゾモルファン誘導体である、項目５に記載の組成物。
（項目１１）
前記オピオイド鎮痛薬が、ピペリジン誘導体である、項目５に記載の組成物。
（項目１２）
前記オピオイド鎮痛薬が、鎖状のオピオイド鎮痛薬である、項目５に記載の組成物。
（項目１３）
鎮痛性組成物であって、
（ａ）非オピオイド鎮痛薬；
（ｂ）一般式：
【化５】
非麻酔性鎮痛薬であって、ここで、ｎは１〜５の数である、非麻酔性鎮痛薬；および
（ｃ）薬学的に受容可能なキャリア
の相乗的、安全かつ薬学的に有効な量を含む、組成物。
（項目１４）
前記非オピオイド鎮痛薬が、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニストである、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記非オピオイド鎮痛薬が、α２アドレナリン作動性レセプターアゴニストである、項目１３に記載の組成物。
（項目１６）
前記非オピオイド鎮痛薬が、モノアミン再取込みインヒビターである、項目１３に記載の組成物。
（項目１７）
前記非オピオイド鎮痛薬が、混合アゴニスト−アンタゴニスト鎮痛薬である、項目１３に記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、薬物投与前ベースラインの百分率として示されるＣＦＡ誘導性温熱性痛覚過敏におけるＳＣＰ−Ｍ１の効果である。
【図２】図２は、アポトーシス促進性のＦＡＳ−リガンドアップレギュレーションおよびＣＡＲ活性化における、ＳＣＰ−Ｍ１およびアセトアミノフェンの効果の比較である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の化合物は、単独で、あるいは投与経路および標準的な薬学的実務に従って選択される薬学的ビヒクルと混合されて、例えば、経口投与、直腸投与、局所投与、非経口投与および髄腔内投与され得る。それらは、賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）を含む錠剤の形態またはカプセルの形態のいずれかで、単独でかまたは賦形剤と混合されてかのいずれかで、あるいは着色剤または香料を含むシロップまたは懸濁液の形態で経口投与され得る。本発明の化合物はまた、非経口的（例えば、筋肉内、静脈内または皮下）に注入され得る。非経口投与において、本発明の化合物は、好ましくは、滅菌水溶液の形態で使用され得、その滅菌水溶液は、その溶液を等張性にするために、例えば、任意の塩またはグルコースのような他の溶質を含み得る。
【００１７】
髄腔内投与は、脊椎穿刺注入またはカテーテル法のいずれかによって行われ得る。髄腔内薬物投与は、経口的に行われる場合のいくつかの薬物の不活性化、ならびに経口投与または静脈内投与の全身的効果を回避し得る。さらに、髄腔内投与は、一定の有効量の使用を許容し、その有効量は、経口投与または非経口投与に必要とされる有効量のごくわずかである。さらに、髄腔は、一般的に、小さいカテーテルを収容するのに十分広く、それにより長期的な薬物送達システムを可能にする。
【００１８】
慢性疼痛の髄腔内処置は、第一に、髄腔内ポンプの使用によって行われる。このポンプは、患者の腹の皮膚の下に外科的に置かれ得る。カテーテルの一方の端部はポンプに接続され、そしてカテーテルの他方の端部は患者の脊髄のＣＳＦで満たされた、くも膜下腔または髄腔に通される。移植されたポンプは、髄腔内に位置付けられたカテーテルを通して薬物を連続的にまたは断続的に注入するようにプログラム化され得る。
【００１９】
本発明の化合物は、疼痛の処置のために、例えば、ゼラチンカプセルに被覆されてかまたはロゼンジに圧縮されて、経口投与され得る。経口治療的投与のために、上記化合物は、賦形剤と混合され得、そしてロゼンジ、錠剤、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤、チューインガムなどの形態で使用され得る。これらの調製物は、少なくとも０．５％そして約９９％までの活性化合物を含み得るが、各形態に依存して変化し得る。好ましくは、経口用調製物は、おおよそ各単位重量のうち２％と５０％との間を含む。そのような組成物中の活性化合物の量は、対応する投薬量を得るために必要な量であるべきである。本発明に従って得られる組成物および調製物は、各経口投薬単位が約０．１ｍｇと約１０００ｍｇとの間の活性化合物を含み得る様式で調製される。
【００２０】
非経口治療的投与において、本発明の活性化合物は、溶液または懸濁液中に取り込まれるべきである。これらの調製物は、少なくとも０．１％の活性化合物を含み得るが、好ましくは、おおよそその調製物の重量のうち０．５％と５０％との間で変化する。そのような組成物中の活性化合物の量は、対応する投薬量を得るために必要な量であるべきである。本発明に従って得られる組成物および調製物は、各非経口投薬単位が０．５ｍｇと１０００ｍｇとの間の活性化合物を含み得る様式で調製される。筋肉内投与は単回用量または３回までの分割用量で与えられ得るが、静脈内投与は静脈注射によってその用量を与えるための点滴デバイスを含み得る。調製物の非経口投与は、ガラスもしくはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回用量バイアルによって行われ得る。
【００２１】
髄腔内治療的投与において、本発明の活性化合物は、希釈剤を用いてもしくは希釈剤を用いずに使用され得るか、または自己髄液で再構成され得る。髄腔内投与物は、少なくとも０．１μｇの活性化合物を含み得るが、０．１μｇと１００μｇとの間の活性化合物を含み得る。
【００２２】
必然的に、処置されるべき被験体の体重および状態、ならびに選択される特定の投与経路に依存する改変体が存在する。
【００２３】
上に記載したように、本発明はまた、ＳＣＰ−Ｍ系由来の化合物をオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬と組み合わせて含む薬学的組成物を包含する。オピオイド鎮痛薬として公知のグループを含む薬物としては、特に、オピウムのフェナントレンアルカロイドが挙げられ、これは、モルヒネ、コデインおよびテバインを含む。テバインは鎮痛を生じないが、テバインは半合成オピオイドの生成における重要な中間体である。モルヒネに関連する構造および機能を有する他の薬剤としては、以下が挙げられる：（１）モルヒネアナログ（例えば、ヒドロモルホン、オキシモルホン、ヒドロコドンおよびオキシコドン）；（２）Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ付加物（例えば、エトロフィンおよびブプレノルフィン）；（３）モルフィナン誘導体（例えば、デキストロメトルファンおよびブトルファノール）；（４）ベンゾモルファン誘導体（例えば、フェナゾシン、ペンタゾシンおよびシクラゾシン）；（５）ピペリジン誘導体（例えば、メペリジンおよびアニレリジン）；ならびに（６）鎖状鎮痛薬（メタドン型化合物）（例えば、メタドンおよびプロポキシフェン）。非オピオイド鎮痛薬として公知のグループを構成する薬物としては、以下が挙げられる：（１）Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）レセプターアンタゴニスト（例えば、デキストロメトルファンおよびケタミン、ならびにＮＭＤＡレセプター関連する任意の結合部位サブカテゴリー（例えば、グリシン結合部位、フェニルシクリジン（ＰＣＰ）結合部位など）およびＮＭＤＡチャネルに対して競合することによって中枢神経感作を抑制する他のアンタゴニスト）；（２）ノルエピネフリンの放出を減少させるα２アドレナリン作動性レセプターアゴニスト（例えば、クロニジン、メトミジン、デトミジン、デクスメトミジン、デクスメデトミジンおよびキシラジン）；（３）アゴニスト効果ではなくモノアミン再取込みにおける阻害作用によって鎮痛を生じる他の薬剤（例えば、トラマドール（多くの場合、オピオイドとして誤って称される））；（４）非ステロイド性抗炎症薬（例えば、アスピリン、イブプロフェンおよびシクロオキシゲナーゼ酵素を阻害する他の薬物）、ならびに（５）混合アゴニスト−アンタゴニスト鎮痛薬（例えば、ブプレノルフィン、デゾシン、ナルブフィン）。
【００２４】
本発明の薬学的組み合わせは、従来の薬学的技術に従って調製されるＳＣＰ−Ｍ系由来の鎮痛薬を薬学的に受容可能なキャリアと共に含む密な混合物中のオピオイド鎮痛薬または非オピオイド鎮痛薬を含む。薬学的に受容可能なキャリアとしては、固形充填剤もしくは液体充填剤、希釈剤および被包性物質が挙げられる。組み合わせに関連して使用されるキャリアの量は、鎮痛薬の単位用量あたり実用的な量の材料を提供するのに十分である。
【００２５】
経口投与のための薬学的に受容可能なキャリアとしては、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、麦芽、ゼラチン、滑石、硫酸カルシウム、植物油、合成油、ポリオール、アルギニン酸、リン酸緩衝溶液、乳化剤、等張食塩水および発熱物質を含まない水が挙げられる。非経口投与のための薬学的に受容可能なキャリアとしては、等張食塩水、プロピレングリコール、オレイン酸エチル、ピロリドン、水性エタノール、ゴマ油、トウモロコシ油およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００２６】
種々の経口投薬形態が使用され得、それらとしては、固形形態（例えば、錠剤、カプセル、顆粒およびバルク粉末）が挙げられる。錠剤は、圧縮錠剤、粉薬錠剤、腸溶性錠剤、糖衣錠剤、フィルムコート錠剤または多重圧縮錠剤であり得、適切な結合剤、滑沢剤、希釈剤、崩壊剤、着色剤、矯味矯臭料、流動誘導剤および溶解剤を含む。液体経口投薬形態としては、水溶液、乳濁液、懸濁液ならびに再構成溶液および／または懸濁液が挙げられる。
【００２７】
薬学的に有効な組み合わせは、０．１ｍｇと１０００ｍｇとの間のＳＣＰ−Ｍ系由来の鎮痛薬を含み得る。好ましい薬学的に有効な組み合わせは、４００ｍｇと１０００ｍｇとの間のＳＣＰ−Ｍ系由来の鎮痛薬を含む。ＳＣＰ−Ｍ系由来の鎮痛薬を含む組み合わせ中のオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬の薬学的有効量は、アセトアミノフェンを含むオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬の対応する組み合わせに類似する。
【００２８】
（生物学的結果）
ＳＣＰ−Ｍ系が鎮痛活性を有するか否かを決定するために、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）誘導性温熱性痛覚過敏に対するその効果を、評価した。ハロタン麻酔下で、雄ＣＤ−１マウスに対して、一本の後ろ足の無毛表面へと０．１ｍｌのＣＦＡ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，ＵＳＡ）を注射した。足蹠中に注射した場合、ＣＦＡは、限局的炎症および痛覚過敏を生じた。これらは、２時間以内に出現して、７日間〜１０日間存在する（Ｉａｄｏｒｏｌａら、１９８８）。ＣＦＡ後の４８時間目（ピーク痛覚過敏の時間）に、各マウスに、２．５ｍｍｏｌ／ｋｇのＳＣＰ−Ｍ１またはビヒクルを経口栄養によって与えた。その足を熱刺激から引っ込めるための潜伏時間（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓら、１９８８）を、無痛覚計（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｌａｎｄ
Ｈｉｌｌｓ，ＣＡ）をＨａｒｇｒｅａｖｅｓらの教示に従って使用して測定した。その刺激の強度は、約１０秒〜約１５秒のベースライン潜伏時間を生じるように設定した。２０秒間の最大潜伏時間を使用した。温熱性痛覚過敏を、薬物投与前（薬物投与前ベースライン）に測定し、そしてまた、薬物投与後の３０秒、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、および６時間に測定した。
【００２９】
グループ間の分散分析（ＡＮＯＶＡ；薬物×時間）によって、有意な薬物効果（Ｆ１，１５＝７．７４０、ｐ＝０．０１４）が明らかになった。これは、ビヒクルで処理したコントロールと比較した場合に、有意な鎮痛効果を示す。他の統計学的に有意な効果は、全く見出されなかった（時間効果：Ｆ（６，９０）＝０．４８６、ｐ＝０．８１７；薬物×時間相互作用：Ｆ（６，９０）＝０．６３４、ｐ＝０．７９３）。ＣＦＡ誘導性温熱性痛覚過敏に対するＳＣＰ−Ｍ１の効果を、図１において薬物前ベースラインの割合として示す。
【００３０】
高い鎮痛活性に加えて、ＳＣＰ−Ｍ系は、肝毒性効果をほとんどまたは全く示さない。ＳＣＰ−Ｍ１の肝毒性を、ヒト肝細胞（ＨＥＰＧ−２）において、および正常肝細胞のヒト初代培養物において、評価した。アセトアミノフェン（公知の肝毒性鎮痛薬）を、ポジティブコントロールとして使用した。位相差顕微鏡、トリパンブルー排除、Ｈｏｅｃｈｓｔ染色、およびＦＡＳ−リガンド、およびＣＡＲ（構成的アンドロスタンレセプター）誘導を、基準として使用した。ヒト肝細胞（ＨＥＰＧ−２）において、Ｈｏｅｃｈｓｔ染色は、ＳＣＰ−Ｍ１が、細胞死を誘導する際に実際上は有効ではないことを示したが、アセトアミノフェンは、重篤なアポトーシス細胞死を誘導した。初代培養物におけるヒト肝細胞において、トリパンブルー排除およびＨｏｅｃｈｓｔ染色によって測定したＳＣＰ−Ｍ１およびアセトアミノフェンの肝毒性効果の分析によって、これらの化合物によって発揮される肝毒性効果は、ＨＥＰＧ−２細胞における肝毒性と非常に同等であることが示された。アポトーシスの増強が、アセトアミノフェンによって引き起こされたが、ＳＣＰ−Ｍ１によっては引き起こされなかった。図２において観察され得るように、アポトーシス促進性ＦＡＳ−リガンドアップレギュレーションおよびＣＡＲ活性化が、ヒト初代肝臓培養物においてアセトアミノフェンによって有意に増強されたが、ＳＣＰ−Ｍ１は、効果の減少を生じた。
【００３１】
ＨＰＥＧ−２細胞を、ＮＥＡＡ（非必須アミノ酸）を含むＥＭＥＭ培地（１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充した）中で増殖させて維持し、５％ＣＯ２を一定供給しながら３７℃にてインキュベートした。初代ヒト肝臓細胞を、ＨＣＭ培地（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）において増殖させ、ＨＭＭ培地（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）において５％ＣＯ２とともに３７℃にて維持した。６ウェルプレートおよび２４ウェルプレート中でそれぞれ増殖したＨＥＰＧ２および初代肝細胞の８０％コンフルエント培養物を、無血清培地（ＥＭＥＭ、ＨＥＰＧ２については０．５％ ＦＢＳ、初代肝細胞についてはＨＭＭ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）中で６時間〜８時間維持した後に、鎮痛薬を添加した。血清飢餓細胞を、ＳＣＰ−Ｍ１またはアセトアミノフェンを用いて、３７℃にて６時間〜８時間処理した。
【００３２】
Ｈｏｅｃｈｓｔ染色を、アポトーシスの検出のために使用した。使用済み培地を、実験的に処理した細胞から除去し、この細胞を、２ｍｌ ＰＢＳ（室温）を用いて洗浄した。Ｈｏｅｃｈｓｔ溶液（２ｍｌ、２μＭ最終濃度）を、この細胞に添加し、その細胞を、３７℃にて４５分間インキュベートした。アポトーシス細胞死を、蛍光照射下で共焦点顕微鏡によって検出した。
【００３３】
ＦＡＳ−リガンド（ＦＡＳ−Ｌ）のアップレギュレーションおよびＣＡＲ（構成的アンドロスタンレセプター）の活性化を、ウェスタンブロットによって分析した。簡単に述べると、細胞抽出物を作製し、それをＢｉｏ−ｒａｄ法によってタンパク質濃度について調整した。約１５μｇ〜約２０μｇのタンパク質を、８％〜１６％ゲル（Ｂｉｏ−ｒａｄ）上にローディングし、１２０Ｖにて２時間、電気泳動を実施した。そのタンパク質を、４℃において３０Ｖにて６０分間、ニトロセルロース膜上に移した。その膜を、ＦＡＳ−Ｌ特異的抗体またはＣＡＲ（ヒト）特異的抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）のいずれかを用いてプロービングした。ＦＡＳ−ＬおよびＣＡＲのリン酸化を、ＥＣＬキットによって検出した。ＦＡＳ−Ｌタンパク質およびＣＡＲタンパク質のリン酸化の定量を、濃度計によって行った。その結果を、図２に示す。
【００３４】
（合成）
ＳＣＰ−Ｍ系の化合物を、以下の反応スキーム：
【００３５】
【化８】
に従って調製し得る。
【実施例】
【００３６】
以下の非限定的実施例は、本発明を例示する。
【００３７】
３ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液中の２−（２，３−ジヒドロ−３−オキソ−１，２−ベンゾイソチアゾール−２−イル−１，１−ジオキシド）−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、室温で２０分間攪拌した。その後、その溶液を、１Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いて酸性化し、ＡｃＯＥｔを用いて抽出した。その有機相を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、油状物を得た。この油状物を、ヘキサン−Ｃｌ２ＣＨ２（１：１）を用いて粉砕した。その生成物であるＳＣＰ−Ｍ１を、最終的には、エタノール中で再結晶化することによって、融点１９３℃〜１９５℃である白色残渣（４２０ｍｇ）として得た（収率：８０％）。
【００３８】
【表１】
当業者によって種々の改変および変更がなされ得ることが、本明細書から明らかである。従って、特許請求の範囲は、本発明の趣旨および範囲の範囲内にあるすべての改変および変更を網羅するものとして解釈されるべきことが、意図される。
【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、Ｎ−アシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体の加水分解によって調製される新規の鎮痛性化合物、それらの化合物の合成およびそれらを含む薬学的組成物に関する。これらの化合物は、驚くべきことに、肝毒性をほとんど伴わずに高い鎮痛活性を有し、これは、これらの化合物を慢性疼痛の処置において従来の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）よりも有用にする。
【背景技術】
【０００２】
（背景技術）
アセトアミノフェンおよび他のＮＳＡＩＤのような鎮痛薬は、これまでの間、疼痛の処置に使用されてきた。しかし、その肝毒性活性に関連する病的状態の結果、これらの薬物を投与する場合に相当な注意が払われなければならない。毎年約１００，０００件のアセトアミノフェン過量が存在し、約３０名が死亡している（Ｃｌｉｓｓｏｌｄ、１９８０；ＭｃＧｏｌｄｒｉｃｋら、１９９７）。アセトアミノフェンは、有毒代謝物であるＮ−アセチル−ベンゾキノンイミン（ＮＡＰＱＩ）を含み、これは、肝臓および腎臓の細胞保護内因性代謝産物であるグルタチオンを枯渇させる（Ｍａｓｏｎ および Ｆｉｓｃｈｅｒ，１９８６；Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、１９８３）。アセトアミノフェンが有する肝毒性および腎毒性は、推奨される最大鎮痛用量よりも４倍〜８倍の用量で初めて生じ得る（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、１９８０）。アセトアミノフェンと中枢作用鎮痛薬とを含む薬学的組み合わせは、アセトアミノフェン単独よりもさらに危険であり得る。繰り返し使用するにつれて、耐性の増加のため、これらの組み合わせは同じ鎮痛効果を生じるためにより多い用量を必要とする。その組み合わせの用量が鎮痛耐性を補うために増加されるにつれて、その薬物の安全性が低下する。なぜなら、アセトアミノフェン成分のより多い用量が、肝毒性および腎毒性を増大させるからである。
【０００３】
特許文献１（Ｂａｚａｎら）および特許文献２（Ｂａｚａｎら）において、本発明者らのうちの２名は、それらの明細書において、１，２−ベンゾイソチアゾール−３（２Ｈ）−オン１，１−ジオキシド基の窒素原子にアルキレン架橋を介して結合された一連のＮアシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体（ＳＣＰ系として称される）、それとともにそれらの調製プロセスおよび疼痛を軽減するためのそれらの使用方法を開示した。これらの特許文献の開示は、参考として本明細書中に援用される。このＳＣＰ系は、構造的に、以下の一般式Ｉ：
【０００４】
【化６】
で表され、ここで、ｎは１〜５の数である。これらの新規の非麻酔性鎮痛薬は、驚くべきことに、高い鎮痛活性を有するが、血液凝固を抑制せず、肝毒性効果をほとんど示さない。
【０００５】
さらに、米国特許出願第１０／２９２，１０５号（Ｂａｚａｎら）（この開示もまた、参考として援用される）において、本発明者らのうちの２名はまた、ＳＣＰ系に由来する鎮痛薬を含む密な（ｉｎｔｉｍａｔｅ）混合物中にオピオイド鎮痛薬または非オピオイド鎮痛薬を含む、薬学的組み合わせを開示し、これは、驚くべきことに、相乗的な鎮痛を示した。
【０００６】
より大きな薬理学的効力を有する新規の、より選択的な分子の継続的な探索において、２−スルファモイル安息香酸基の窒素原子にアルキレン架橋を介して結合されたＮ−アシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体が、驚くべきことに、高い鎮痛活性を有し、肝毒性効果をほとんど有さないことが確認された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】米国特許第５，５５４，６３６号明細書
【特許文献２】米国特許第５，６２１，１１０号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の開示）
本発明は、Ｎ−アシル化４−ヒドロキシフェニルアミン誘導体の加水分解によって調製される新規の鎮痛性化合物に関する。その新規の鎮痛性化合物は、一般式ＩＩ：
【０００９】
【化７】
を有し、この式において、ｎは１と５との間の数である。
【００１０】
本発明のいくつかの特定の実施例は、以下：
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］メチルスルファモイル｝安息香酸；
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］エチルスルファモイル｝安息香酸；
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］プロピルスルファモイル｝安息香酸；
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］ブチルスルファモイル｝安息香酸；
２−｛［（４−ヒドロキシフェニル）カルバモイル］ペンチルスルファモイル｝安息香酸；
であるが、これらに限定されない。
【００１１】
一般式ＩＩの化合物（一般的に、ＳＣＰ−Ｍ系と称される）は、ＳＣＰ系の化合物を室温で１ＮのＮａＯＨ水溶液で加水分解することによって調製され得、その生成物は、エタノール中での再結晶によって精製され得る。
【００１２】
本発明はまた、ＳＣＰ−Ｍ系の化合物と金属またはアミンとの薬学的に受容可能で安定な塩の形成を包含する。カチオンで使用される金属の例は、アルカリ金属（例えば、ＮａまたはＫ）ならびにアルカリ土類金属（例えば、ＭｇおよびＣａ）である。アミンの例としては、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、クロリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミンおよびプロカインが挙げられる。
【００１３】
さらに、本発明は、ＳＣＰ−Ｍ系由来の化合物をオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬と組み合わせて含む、薬学的組成物を包含する。
【００１４】
本発明は、例えば以下を提供する。
（項目１）
式ＩＩ：
【化１】
の実質的に純粋な化合物であって、ここで、ｎは１〜５の数である、化合物。
（項目２）
限られた肝毒性効果を伴う鎮痛活性を示す薬学的組成物であって、項目１に記載の式ＩＩの少なくとも１つの化合物を含む、薬学的組成物。
（項目３）
疼痛の処置のための方法であって、該方法は、疼痛を有する被験体への項目１に記載の化合物の有効量の投与工程を包含する、方法。
（項目４）
式ＩＩ：
【化２】
の化合物を調製するためのプロセスであって、以下：
式Ｉ：
【化３】
の化合物と水酸化ナトリウム水溶液とを反応させて、式ＩＩの化合物を得る工程であって、ここで、ｎは１〜５の数である、工程
を包含する、方法。
（項目５）
鎮痛性組成物であって、
（ａ）オピオイド鎮痛薬；
（ｂ）一般式：
【化４】
の非麻酔性鎮痛薬であって、ここで、ｎは１〜５の数である、非麻酔性鎮痛薬；および
（ｃ）薬学的に受容可能なキャリア
の安全かつ薬学的に有効な量を含む、組成物。
（項目６）
前記オピオイド鎮痛薬が、アヘンのフェナントレンアルカロイドである、項目５に記載の組成物。
（項目７）
前記オピオイド鎮痛薬が、モルヒネアナログである、項目５に記載の組成物。
（項目８）
前記オピオイド鎮痛薬が、テバインの合成誘導体である、項目５に記載の組成物。
（項目９）
前記オピオイド鎮痛薬が、モルフィナン誘導体である、項目５に記載の組成物。
（項目１０）
前記オピオイド鎮痛薬が、ベンゾモルファン誘導体である、項目５に記載の組成物。
（項目１１）
前記オピオイド鎮痛薬が、ピペリジン誘導体である、項目５に記載の組成物。
（項目１２）
前記オピオイド鎮痛薬が、鎖状のオピオイド鎮痛薬である、項目５に記載の組成物。
（項目１３）
鎮痛性組成物であって、
（ａ）非オピオイド鎮痛薬；
（ｂ）一般式：
【化５】
非麻酔性鎮痛薬であって、ここで、ｎは１〜５の数である、非麻酔性鎮痛薬；および
（ｃ）薬学的に受容可能なキャリア
の相乗的、安全かつ薬学的に有効な量を含む、組成物。
（項目１４）
前記非オピオイド鎮痛薬が、ＮＭＤＡレセプターアンタゴニストである、項目１３に記載の組成物。
（項目１５）
前記非オピオイド鎮痛薬が、α２アドレナリン作動性レセプターアゴニストである、項目１３に記載の組成物。
（項目１６）
前記非オピオイド鎮痛薬が、モノアミン再取込みインヒビターである、項目１３に記載の組成物。
（項目１７）
前記非オピオイド鎮痛薬が、混合アゴニスト−アンタゴニスト鎮痛薬である、項目１３に記載の組成物。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、薬物投与前ベースラインの百分率として示されるＣＦＡ誘導性温熱性痛覚過敏におけるＳＣＰ−Ｍ１の効果である。
【図２】図２は、アポトーシス促進性のＦＡＳ−リガンドアップレギュレーションおよびＣＡＲ活性化における、ＳＣＰ−Ｍ１およびアセトアミノフェンの効果の比較である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の化合物は、単独で、あるいは投与経路および標準的な薬学的実務に従って選択される薬学的ビヒクルと混合されて、例えば、経口投与、直腸投与、局所投与、非経口投与および髄腔内投与され得る。それらは、賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）を含む錠剤の形態またはカプセルの形態のいずれかで、単独でかまたは賦形剤と混合されてかのいずれかで、あるいは着色剤または香料を含むシロップまたは懸濁液の形態で経口投与され得る。本発明の化合物はまた、非経口的（例えば、筋肉内、静脈内または皮下）に注入され得る。非経口投与において、本発明の化合物は、好ましくは、滅菌水溶液の形態で使用され得、その滅菌水溶液は、その溶液を等張性にするために、例えば、任意の塩またはグルコースのような他の溶質を含み得る。
【００１７】
髄腔内投与は、脊椎穿刺注入またはカテーテル法のいずれかによって行われ得る。髄腔内薬物投与は、経口的に行われる場合のいくつかの薬物の不活性化、ならびに経口投与または静脈内投与の全身的効果を回避し得る。さらに、髄腔内投与は、一定の有効量の使用を許容し、その有効量は、経口投与または非経口投与に必要とされる有効量のごくわずかである。さらに、髄腔は、一般的に、小さいカテーテルを収容するのに十分広く、それにより長期的な薬物送達システムを可能にする。
【００１８】
慢性疼痛の髄腔内処置は、第一に、髄腔内ポンプの使用によって行われる。このポンプは、患者の腹の皮膚の下に外科的に置かれ得る。カテーテルの一方の端部はポンプに接続され、そしてカテーテルの他方の端部は患者の脊髄のＣＳＦで満たされた、くも膜下腔または髄腔に通される。移植されたポンプは、髄腔内に位置付けられたカテーテルを通して薬物を連続的にまたは断続的に注入するようにプログラム化され得る。
【００１９】
本発明の化合物は、疼痛の処置のために、例えば、ゼラチンカプセルに被覆されてかまたはロゼンジに圧縮されて、経口投与され得る。経口治療的投与のために、上記化合物は、賦形剤と混合され得、そしてロゼンジ、錠剤、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤、チューインガムなどの形態で使用され得る。これらの調製物は、少なくとも０．５％そして約９９％までの活性化合物を含み得るが、各形態に依存して変化し得る。好ましくは、経口用調製物は、おおよそ各単位重量のうち２％と５０％との間を含む。そのような組成物中の活性化合物の量は、対応する投薬量を得るために必要な量であるべきである。本発明に従って得られる組成物および調製物は、各経口投薬単位が約０．１ｍｇと約１０００ｍｇとの間の活性化合物を含み得る様式で調製される。
【００２０】
非経口治療的投与において、本発明の活性化合物は、溶液または懸濁液中に取り込まれるべきである。これらの調製物は、少なくとも０．１％の活性化合物を含み得るが、好ましくは、おおよそその調製物の重量のうち０．５％と５０％との間で変化する。そのような組成物中の活性化合物の量は、対応する投薬量を得るために必要な量であるべきである。本発明に従って得られる組成物および調製物は、各非経口投薬単位が０．５ｍｇと１０００ｍｇとの間の活性化合物を含み得る様式で調製される。筋肉内投与は単回用量または３回までの分割用量で与えられ得るが、静脈内投与は静脈注射によってその用量を与えるための点滴デバイスを含み得る。調製物の非経口投与は、ガラスもしくはプラスチック製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回用量バイアルによって行われ得る。
【００２１】
髄腔内治療的投与において、本発明の活性化合物は、希釈剤を用いてもしくは希釈剤を用いずに使用され得るか、または自己髄液で再構成され得る。髄腔内投与物は、少なくとも０．１μｇの活性化合物を含み得るが、０．１μｇと１００μｇとの間の活性化合物を含み得る。
【００２２】
必然的に、処置されるべき被験体の体重および状態、ならびに選択される特定の投与経路に依存する改変体が存在する。
【００２３】
上に記載したように、本発明はまた、ＳＣＰ−Ｍ系由来の化合物をオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬と組み合わせて含む薬学的組成物を包含する。オピオイド鎮痛薬として公知のグループを含む薬物としては、特に、オピウムのフェナントレンアルカロイドが挙げられ、これは、モルヒネ、コデインおよびテバインを含む。テバインは鎮痛を生じないが、テバインは半合成オピオイドの生成における重要な中間体である。モルヒネに関連する構造および機能を有する他の薬剤としては、以下が挙げられる：（１）モルヒネアナログ（例えば、ヒドロモルホン、オキシモルホン、ヒドロコドンおよびオキシコドン）；（２）Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ付加物（例えば、エトロフィンおよびブプレノルフィン）；（３）モルフィナン誘導体（例えば、デキストロメトルファンおよびブトルファノール）；（４）ベンゾモルファン誘導体（例えば、フェナゾシン、ペンタゾシンおよびシクラゾシン）；（５）ピペリジン誘導体（例えば、メペリジンおよびアニレリジン）；ならびに（６）鎖状鎮痛薬（メタドン型化合物）（例えば、メタドンおよびプロポキシフェン）。非オピオイド鎮痛薬として公知のグループを構成する薬物としては、以下が挙げられる：（１）Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸（ＮＭＤＡ）レセプターアンタゴニスト（例えば、デキストロメトルファンおよびケタミン、ならびにＮＭＤＡレセプター関連する任意の結合部位サブカテゴリー（例えば、グリシン結合部位、フェニルシクリジン（ＰＣＰ）結合部位など）およびＮＭＤＡチャネルに対して競合することによって中枢神経感作を抑制する他のアンタゴニスト）；（２）ノルエピネフリンの放出を減少させるα２アドレナリン作動性レセプターアゴニスト（例えば、クロニジン、メトミジン、デトミジン、デクスメトミジン、デクスメデトミジンおよびキシラジン）；（３）アゴニスト効果ではなくモノアミン再取込みにおける阻害作用によって鎮痛を生じる他の薬剤（例えば、トラマドール（多くの場合、オピオイドとして誤って称される））；（４）非ステロイド性抗炎症薬（例えば、アスピリン、イブプロフェンおよびシクロオキシゲナーゼ酵素を阻害する他の薬物）、ならびに（５）混合アゴニスト−アンタゴニスト鎮痛薬（例えば、ブプレノルフィン、デゾシン、ナルブフィン）。
【００２４】
本発明の薬学的組み合わせは、従来の薬学的技術に従って調製されるＳＣＰ−Ｍ系由来の鎮痛薬を薬学的に受容可能なキャリアと共に含む密な混合物中のオピオイド鎮痛薬または非オピオイド鎮痛薬を含む。薬学的に受容可能なキャリアとしては、固形充填剤もしくは液体充填剤、希釈剤および被包性物質が挙げられる。組み合わせに関連して使用されるキャリアの量は、鎮痛薬の単位用量あたり実用的な量の材料を提供するのに十分である。
【００２５】
経口投与のための薬学的に受容可能なキャリアとしては、糖、デンプン、セルロースおよびその誘導体、麦芽、ゼラチン、滑石、硫酸カルシウム、植物油、合成油、ポリオール、アルギニン酸、リン酸緩衝溶液、乳化剤、等張食塩水および発熱物質を含まない水が挙げられる。非経口投与のための薬学的に受容可能なキャリアとしては、等張食塩水、プロピレングリコール、オレイン酸エチル、ピロリドン、水性エタノール、ゴマ油、トウモロコシ油およびそれらの組み合わせが挙げられる。
【００２６】
種々の経口投薬形態が使用され得、それらとしては、固形形態（例えば、錠剤、カプセル、顆粒およびバルク粉末）が挙げられる。錠剤は、圧縮錠剤、粉薬錠剤、腸溶性錠剤、糖衣錠剤、フィルムコート錠剤または多重圧縮錠剤であり得、適切な結合剤、滑沢剤、希釈剤、崩壊剤、着色剤、矯味矯臭料、流動誘導剤および溶解剤を含む。液体経口投薬形態としては、水溶液、乳濁液、懸濁液ならびに再構成溶液および／または懸濁液が挙げられる。
【００２７】
薬学的に有効な組み合わせは、０．１ｍｇと１０００ｍｇとの間のＳＣＰ−Ｍ系由来の鎮痛薬を含み得る。好ましい薬学的に有効な組み合わせは、４００ｍｇと１０００ｍｇとの間のＳＣＰ−Ｍ系由来の鎮痛薬を含む。ＳＣＰ−Ｍ系由来の鎮痛薬を含む組み合わせ中のオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬の薬学的有効量は、アセトアミノフェンを含むオピオイド鎮痛薬および非オピオイド鎮痛薬の対応する組み合わせに類似する。
【００２８】
（生物学的結果）
ＳＣＰ−Ｍ系が鎮痛活性を有するか否かを決定するために、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）誘導性温熱性痛覚過敏に対するその効果を、評価した。ハロタン麻酔下で、雄ＣＤ−１マウスに対して、一本の後ろ足の無毛表面へと０．１ｍｌのＣＦＡ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ，ＵＳＡ）を注射した。足蹠中に注射した場合、ＣＦＡは、限局的炎症および痛覚過敏を生じた。これらは、２時間以内に出現して、７日間〜１０日間存在する（Ｉａｄｏｒｏｌａら、１９８８）。ＣＦＡ後の４８時間目（ピーク痛覚過敏の時間）に、各マウスに、２．５ｍｍｏｌ／ｋｇのＳＣＰ−Ｍ１またはビヒクルを経口栄養によって与えた。その足を熱刺激から引っ込めるための潜伏時間（Ｈａｒｇｒｅａｖｅｓら、１９８８）を、無痛覚計（ＩＩＴＣ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｏｏｄｌａｎｄ
Ｈｉｌｌｓ，ＣＡ）をＨａｒｇｒｅａｖｅｓらの教示に従って使用して測定した。その刺激の強度は、約１０秒〜約１５秒のベースライン潜伏時間を生じるように設定した。２０秒間の最大潜伏時間を使用した。温熱性痛覚過敏を、薬物投与前（薬物投与前ベースライン）に測定し、そしてまた、薬物投与後の３０秒、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、および６時間に測定した。
【００２９】
グループ間の分散分析（ＡＮＯＶＡ；薬物×時間）によって、有意な薬物効果（Ｆ１，１５＝７．７４０、ｐ＝０．０１４）が明らかになった。これは、ビヒクルで処理したコントロールと比較した場合に、有意な鎮痛効果を示す。他の統計学的に有意な効果は、全く見出されなかった（時間効果：Ｆ（６，９０）＝０．４８６、ｐ＝０．８１７；薬物×時間相互作用：Ｆ（６，９０）＝０．６３４、ｐ＝０．７９３）。ＣＦＡ誘導性温熱性痛覚過敏に対するＳＣＰ−Ｍ１の効果を、図１において薬物前ベースラインの割合として示す。
【００３０】
高い鎮痛活性に加えて、ＳＣＰ−Ｍ系は、肝毒性効果をほとんどまたは全く示さない。ＳＣＰ−Ｍ１の肝毒性を、ヒト肝細胞（ＨＥＰＧ−２）において、および正常肝細胞のヒト初代培養物において、評価した。アセトアミノフェン（公知の肝毒性鎮痛薬）を、ポジティブコントロールとして使用した。位相差顕微鏡、トリパンブルー排除、Ｈｏｅｃｈｓｔ染色、およびＦＡＳ−リガンド、およびＣＡＲ（構成的アンドロスタンレセプター）誘導を、基準として使用した。ヒト肝細胞（ＨＥＰＧ−２）において、Ｈｏｅｃｈｓｔ染色は、ＳＣＰ−Ｍ１が、細胞死を誘導する際に実際上は有効ではないことを示したが、アセトアミノフェンは、重篤なアポトーシス細胞死を誘導した。初代培養物におけるヒト肝細胞において、トリパンブルー排除およびＨｏｅｃｈｓｔ染色によって測定したＳＣＰ−Ｍ１およびアセトアミノフェンの肝毒性効果の分析によって、これらの化合物によって発揮される肝毒性効果は、ＨＥＰＧ−２細胞における肝毒性と非常に同等であることが示された。アポトーシスの増強が、アセトアミノフェンによって引き起こされたが、ＳＣＰ−Ｍ１によっては引き起こされなかった。図２において観察され得るように、アポトーシス促進性ＦＡＳ−リガンドアップレギュレーションおよびＣＡＲ活性化が、ヒト初代肝臓培養物においてアセトアミノフェンによって有意に増強されたが、ＳＣＰ−Ｍ１は、効果の減少を生じた。
【００３１】
ＨＰＥＧ−２細胞を、ＮＥＡＡ（非必須アミノ酸）を含むＥＭＥＭ培地（１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充した）中で増殖させて維持し、５％ＣＯ２を一定供給しながら３７℃にてインキュベートした。初代ヒト肝臓細胞を、ＨＣＭ培地（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）において増殖させ、ＨＭＭ培地（Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）において５％ＣＯ２とともに３７℃にて維持した。６ウェルプレートおよび２４ウェルプレート中でそれぞれ増殖したＨＥＰＧ２および初代肝細胞の８０％コンフルエント培養物を、無血清培地（ＥＭＥＭ、ＨＥＰＧ２については０．５％ ＦＢＳ、初代肝細胞についてはＨＭＭ（Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）中で６時間〜８時間維持した後に、鎮痛薬を添加した。血清飢餓細胞を、ＳＣＰ−Ｍ１またはアセトアミノフェンを用いて、３７℃にて６時間〜８時間処理した。
【００３２】
Ｈｏｅｃｈｓｔ染色を、アポトーシスの検出のために使用した。使用済み培地を、実験的に処理した細胞から除去し、この細胞を、２ｍｌ ＰＢＳ（室温）を用いて洗浄した。Ｈｏｅｃｈｓｔ溶液（２ｍｌ、２μＭ最終濃度）を、この細胞に添加し、その細胞を、３７℃にて４５分間インキュベートした。アポトーシス細胞死を、蛍光照射下で共焦点顕微鏡によって検出した。
【００３３】
ＦＡＳ−リガンド（ＦＡＳ−Ｌ）のアップレギュレーションおよびＣＡＲ（構成的アンドロスタンレセプター）の活性化を、ウェスタンブロットによって分析した。簡単に述べると、細胞抽出物を作製し、それをＢｉｏ−ｒａｄ法によってタンパク質濃度について調整した。約１５μｇ〜約２０μｇのタンパク質を、８％〜１６％ゲル（Ｂｉｏ−ｒａｄ）上にローディングし、１２０Ｖにて２時間、電気泳動を実施した。そのタンパク質を、４℃において３０Ｖにて６０分間、ニトロセルロース膜上に移した。その膜を、ＦＡＳ−Ｌ特異的抗体またはＣＡＲ（ヒト）特異的抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ，ＣＡ）のいずれかを用いてプロービングした。ＦＡＳ−ＬおよびＣＡＲのリン酸化を、ＥＣＬキットによって検出した。ＦＡＳ−Ｌタンパク質およびＣＡＲタンパク質のリン酸化の定量を、濃度計によって行った。その結果を、図２に示す。
【００３４】
（合成）
ＳＣＰ−Ｍ系の化合物を、以下の反応スキーム：
【００３５】
【化８】
に従って調製し得る。
【実施例】
【００３６】
以下の非限定的実施例は、本発明を例示する。
【００３７】
３ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ水溶液中の２−（２，３−ジヒドロ−３−オキソ−１，２−ベンゾイソチアゾール−２−イル−１，１−ジオキシド）−Ｎ−（４−ヒドロキシフェニル）アセトアミド（０．５ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を、室温で２０分間攪拌した。その後、その溶液を、１Ｎ ＨＣｌ水溶液を用いて酸性化し、ＡｃＯＥｔを用いて抽出した。その有機相を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、油状物を得た。この油状物を、ヘキサン−Ｃｌ２ＣＨ２（１：１）を用いて粉砕した。その生成物であるＳＣＰ−Ｍ１を、最終的には、エタノール中で再結晶化することによって、融点１９３℃〜１９５℃である白色残渣（４２０ｍｇ）として得た（収率：８０％）。
【００３８】
【表１】
当業者によって種々の改変および変更がなされ得ることが、本明細書から明らかである。従って、特許請求の範囲は、本発明の趣旨および範囲の範囲内にあるすべての改変および変更を網羅するものとして解釈されるべきことが、意図される。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【請求項１】
明細書に記載の発明。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１０−１９５８２６（Ｐ２０１０−１９５８２６Ａ）
【公開日】平成２２年９月９日（２０１０．９．９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−１２４８５６（Ｐ２０１０−１２４８５６）
【出願日】平成２２年５月３１日（２０１０．５．３１）
【分割の表示】特願２００６−５３４４６３（Ｐ２００６−５３４４６３）の分割
【原出願日】平成１６年１０月１２日（２００４．１０．１２）
【出願人】（５０４０２７１３０）ボード オブ スーパーバイザーズ オブ ルイジアナ ステイト ユニバーシティ アンド アグリカルチュラル アンド メカニカル カレッジ (2)
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＳＵＰＥＲＶＩＳＯＲＳ ＯＦ ＬＯＵＩＳＩＡＮＡ ＳＴＡＴＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＡＮＤ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＡＮＤ ＭＥＣＨＡＮＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年９月９日（２０１０．９．９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年５月３１日（２０１０．５．３１）
【分割の表示】特願２００６−５３４４６３（Ｐ２００６−５３４４６３）の分割
【原出願日】平成１６年１０月１２日（２００４．１０．１２）
【出願人】（５０４０２７１３０）ボード オブ スーパーバイザーズ オブ ルイジアナ ステイト ユニバーシティ アンド アグリカルチュラル アンド メカニカル カレッジ (2)
【氏名又は名称原語表記】ＢＯＡＲＤ ＯＦ ＳＵＰＥＲＶＩＳＯＲＳ ＯＦ ＬＯＵＩＳＩＡＮＡ ＳＴＡＴＥ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＡＮＤ ＡＧＲＩＣＵＬＴＵＲＡＬ ＡＮＤ ＭＥＣＨＡＮＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ
【Ｆターム（参考）】
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