インターロイキン−２１／インターロイキン−２１受容体のアゴニストを用いた免疫学的障害の治療
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）またはＩＬ−２１受容体（「ＩＬ−２１Ｒ」または「ＭＵ−１」）のアゴニストを用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１受容体（ＭＵ−１）活性を調節するための方法および組成物を開示する。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、単独で用いるか、または５つの抗炎症剤と併用して、神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症に関連する症状を治療する、例えば改善することも可能である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対するクロスリファレンス
本出願は、その内容が完全に本明細書に援用される、米国出願第６０／４５６，９２０号、２００３年３月２１日に優先権を請求する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１受容体アゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片を用いて、神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を治療するかまたは防止するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ヒトＩＬ−２１はサイトカインである。成熟型では、ＩＬ−２１は長さ約１３１アミノ酸であり、そしてＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１５に配列相同性を有する（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３）。インターロイキン・サイトカイン間の配列相同性が低いにもかかわらず、これらのサイトカインは、特徴的な「４らせん束」構造を含む、共通のフォールドを共有する。大部分のサイトカインは、クラスＩまたはクラスＩＩいずれかのサイトカイン受容体に結合する。クラスＩＩサイトカイン受容体には、ＩＬ−１０およびインターフェロンの受容体が含まれ、一方、クラスＩサイトカイン受容体には、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１１〜１３、およびＩＬ−１５の受容体とともに、造血成長因子、レプチンおよび成長ホルモンの受容体が含まれる（Ｃｏｓｍａｎ，Ｄ．（１９９３）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ５：９５−１０６）。
【０００４】
ヒトＩＬ−２１ＲはクラスＩサイトカイン受容体であり、リンパ系細胞、特にＮＫ細胞、Ｂ細胞、およびＴ細胞に発現される（Ｐａｒｒｉｃｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記）。ヒト・インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）およびその受容体（ＩＬ−２１Ｒ）をコードする典型的な核酸配列が、ＷＯ００／５３７６１、ＷＯ０１／８５７９２、Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記、およびＯｚａｋｉら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１１４３９−１１４４４に記載され、対応するアミノ酸配列も記載される。ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２受容体β鎖およびＩＬ−４受容体α鎖に高い配列相同性を示す（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記）。リガンド結合に際して、ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５の受容体に共有される、共通のガンマ・サイトカイン受容体鎖（γｃ）と会合する（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記；Ａｓａｏら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１−５）。ＩＬ−２１Ｒがリンパ系に広く分布していることから、ＩＬ−２１が免疫制御に役割を果たしていることが示唆される。実際、ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究によって、ＩＬ−２１が、Ｂ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞、並びにＮＫ細胞の機能を有意に調節することが示されてきている（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記；Ｋａｓａｉａｎ，Ｍ．Ｔ．ら（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１６：５５９−５６９）。Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）は、ＩＬ−２１が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖および成熟、抗ＣＤ４０で同時刺激された成熟Ｂ細胞集団の増殖、並びに抗ＣＤ３で同時刺激されたＴ細胞の増殖を活性化するかまたは刺激するように機能することを示唆した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明の概要
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）またはＩＬ−２１受容体（本明細書において、「ＩＬ−２１Ｒ」または「ＭＵ−１」とも称される）のアゴニスト（本明細書において、「ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト」または「アゴニスト」とも称される）を用いて、ＩＬ−２１およびＩＬ−２１Ｒの活性、および／またはこれらの間の相互作用を増加させるための方法および組成物を開示する。こうした方法および組成物を用いて、神経系の免疫学的障害、あるいはＩＬ−１０不全と関連する疾患または障害を調節することも可能である。例えば、該方法および組成物を用いて、多発性硬化症（ＭＳ）を治療するかまたは防止することも可能である。
【０００６】
我々は、例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばネズミＩＬ−２１ポリペプチドで、マウスを予防的に処置すると、実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）のマウスモデルにおいて、症状の改善が生じることを示した。ミエリン・オリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド（例えばＭＯＧ３５−５５）およびプロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ；例えばＰＬＰ１３９−１５１）を用いて生成されるマウスモデルにおいて、ＥＡＥ症状の調節が検出された。ＩＬ−２１は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞増殖を誘導した。ＩＬ−２１の存在下で培養したリンパ球は、ＩＬ−１０量の増加およびインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）レベルの減少を生じた。したがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性のアゴニストを予防的または療法的に用いて、神経系の免疫学的障害（例えば、多発性硬化症を含む、神経系の慢性免疫学的障害）を治療することも可能である。
【０００７】
したがって、１つの側面において、本発明は、被験者において、神経系の免疫学的障害（例えば、多発性硬化症を含む、神経系の慢性免疫学的障害）を治療する（例えば治癒させるか、抑制するか、改善するか、減少させるか、または遅延させる）か、または防止する（例えば開始を防止するか、または反復もしくは再発を防止する）方法を特徴とする。該方法は：免疫細胞活性および／または数を調節する（例えばサイトカインレベル、例えばサイトカイン発現、産生および／または放出を調節する）のに十分な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを被験者に投与し、それによって、神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を治療するかまたは防止することを含む。１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを症状の開始前に投与して、例えば、症状の開始を遅延させるかまたは防止し、あるいは症状の反復または再発を防止する。例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、被験者、例えばＭＳ患者が寛解期にあるときに投与することも可能である。他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを症状または発作の開始後に投与する。ＭＳの典型的な全身症状には、振戦、協調運動不全、歩行困難、および他の問題が含まれる。
【０００８】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、単独で、または本明細書に記載する他の療法様式と併用して投与することも可能である。好ましくは、被験者は、哺乳動物、例えば神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を患うヒトである。
【０００９】
１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ、好ましくは哺乳動物、例えばヒトＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒと相互作用し、例えば結合し、そして１以上のＩＬ−２１および／またはＩＬ−２１Ｒ活性を増加させるかまたは増強させる。ＩＬ−２１のアゴニストは、本明細書において、「ＩＬ−２１アゴニスト」と称され、そしてＩＬ−２１Ｒのアゴニストは、「ＩＬ−２１Ｒアゴニスト」と称される。ＩＬ−２１ポリペプチドはそれ自体、ＩＬ−２１Ｒアゴニストである。好ましいアゴニストは、高親和性で、例えば少なくとも約１０７Ｍ−１、好ましくは約１０８Ｍ−１、そしてより好ましくは約１０９Ｍ−１〜１０１０Ｍ−１の親和性定数で、またはそれより強い親和性定数で、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒに結合する。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、例えばＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片、ＩＬ−２１融合タンパク質、ペプチドアゴニスト、抗体アゴニストまたはその抗原結合断片、あるいは小分子アゴニストであることも可能である。
【００１０】
１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１ＲアゴニストはＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒト、ウシまたはネズミＩＬ−２１ポリペプチド、またはその活性断片（例えば配列番号２に示すアミノ酸配列、または配列番号１に示すヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列、あるいは該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれより同一である配列を含む、ヒトＩＬ−２１ポリペプチド）である。別の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ネズミＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片（例えば配列番号４に示すアミノ酸配列、または配列番号３に示すヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列、あるいは該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれより同一である配列を含む、ネズミＩＬ−２１ポリペプチド）である。さらに他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒトまたはネズミＩＬ−２１ポリペプチド、またはその断片を含み、そして例えば第二の部分、例えばポリペプチド（例えばＧＳＴ、Ｌｅｘ−Ａ、ＭＢＰポリペプチド配列、または例えばＦｃ断片、重鎖定常領域であって：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む多様なアイソタイプの前記重鎖定常領域を含む、免疫グロブリン鎖）に融合した、融合タンパク質；ＩＬ−２１受容体に結合するアゴニスト抗体またはその抗原結合断片；あるいは小分子またはペプチドアゴニストである。他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、機能するＩＬ−２１の発現、プロセシングおよび／または分泌を増加させることによって、ＩＬ−２１の活性またはレベルを増加させる剤である。前述のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストをコードする核酸もまた、被験者に投与することも可能である。
【００１１】
融合タンパク質は、第一の部分、例えばＩＬ−２１断片を、第二の部分、例えば免疫グロブリン断片に連結する、リンカー配列をさらに含むことも可能である。他の態様において、さらなるアミノ酸配列を融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端に付加して、発現、立体構造柔軟性、検出および／または単離または精製を容易にすることも可能である。
【００１２】
本明細書記載のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えば本明細書記載のＩＬ−２１ポリペプチドまたは融合タンパク質を、誘導体化するか、あるいは別の機能分子、例えば別のペプチドまたはタンパク質（例えばＦａｂ’断片）に連結することも可能である。例えば、融合タンパク質、あるいは抗体または抗原結合部分を、１以上の他の分子実体、例えばとりわけ抗体（例えば二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害剤または細胞分裂停止剤に（例えば化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合または他のものによって）機能するように連結することもまた可能である。
【００１３】
別の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１Ｒ、好ましくはヒトＩＬ−２１Ｒに対する抗体、例えばアゴニスト性抗体、またはその抗原結合部分である。抗体またはその抗原結合部分は、ヒト化抗体、キメラ抗体、ヒト（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ生成）抗体、またはその抗原結合断片であることも可能である。１つの態様において、抗体は二重特異性抗体、例えばＩＬ−２１Ｒおよび別の受容体鎖と相互作用する抗体である。
【００１４】
１つの態様において、該方法は、ＩＬ−１０パラメーターに関して、被験者を評価することを含む。「ＩＬ−１０パラメーター」は、ＩＬ−１０レベルまたは活性、例えばＩＬ−１０ ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルまたは活性に関する質的情報または量的情報である。該情報には、例えば、被験者由来の１以上の組織または１以上の試料中のＩＬ−１０の濃度が含まれることも可能である。例えば投与前に、例えば少なくとも第一の用量の投与前に、被験者を評価することも可能である。例えば投与後に、例えば１以上の用量の投与後に、例えば規則的な間隔で、または連続投与の場合、１以上の間隔後に、被験者を評価することも可能である。投与前および投与後、両方で、被験者を評価することも可能である。ＩＬ−１０パラメーターを評価することから得た情報を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの投与を調節することも可能である。例えば、正常範囲の値になるＩＬ−１０パラメーターにおける増加は、望ましい療法効果があったことの指標となりうる。ＩＬ−１０パラメーターにおける減少は、投与が不十分であるか、または非応答性であることの指標となりうる。同様に、対応するＩＦＮγパラメーターを評価することも可能である。こうした場合、正常範囲の値になるＩＦＮγパラメーターにおける減少は、望ましい療法効果があったことの指標となりうる。ＩＦＮγパラメーターにおける増加は、投与が不十分であるか、または非応答性であることの指標となりうる。他のサイトカインおよび因子に関連して評価可能なさらに他のパラメーターを表３に提供する。
【００１５】
１つの態様において、該方法は、神経系の免疫学的障害（例えば多発性硬化症）のリスクに関して、またはこうした障害の１以上の症状のリスクに関して、被験者を評価することを含む。リスクを評価する１つの方法は、ＩＬ−１０パラメーターを評価することを含む。
【００１６】
１つの実施において、被験者の状態の改変に応じて、例えばＭＳと関連する突発または発作に応じて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを投与する。
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）を、単回用量の形、あるいは数日、数週または数ヶ月の間隔を置いた一連の用量で投与することも可能である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）を、注射、例えば被験者の中枢神経系への注射によって投与することも可能である。例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）を腰部脳脊髄液に（クモ膜下（ｉｎｔｒａｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ））注射することも可能である。他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）を静脈内投与する。
【００１７】
１つの態様において、本明細書記載のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばその薬剤組成物を、併用療法で、すなわち他の剤、例えば神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を治療するかまたは防止するのに有用な療法剤と併用して、投与する。例えば、併用療法は、１以上のさらなる療法剤、例えば本明細書にさらに記載するような、１以上のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害剤または細胞分裂停止剤と同時配合され、そして／または同時投与される、１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片、ＩＬ−１２融合タンパク質、ペプチドアゴニスト、抗体アゴニスト、あるいは小分子アゴニストを含むことも可能である。
【００１８】
多発性硬化症を治療するため、１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと同時投与し、そして／または同時配合することも可能な療法剤の例には、限定されるわけではないが、１以上の：インターフェロン−β、例えばＩＦＮβ−１αおよびＩＦＮβ−１β；ミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質（例えば合成タンパク質、例えば酢酸グラティラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）、コパキソン（登録商標））；コルチコステロイド；ＩＬ−１阻害剤；ＴＮＦ阻害剤；ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体；ＩＬ−１２およびＩＬ−２３のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのアンタゴニスト（例えばｐ４０サブユニットに対する阻害性抗体）；ＩＬ−２２アンタゴニスト；小分子阻害剤、例えばメトトレキセート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体、例えばＣＣＩ−７７９；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２；Ｍｋ−２；ＮＦκＢ阻害剤；ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１阻害剤（例えば小分子阻害剤、抗体、例えばＰ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦκβアンタゴニストが含まれる。
【００１９】
ＴＮＦ阻害剤の例には、例えば、ＴＮＦに結合する、キメラ抗体、ヒト化抗体、有効ヒト抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体、あるいはその抗原結合断片；ＴＮＦ受容体、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体の可溶性断片またはその誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）、ｐ５５ ｋｄ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；およびＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤が含まれる。
【００２０】
１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと同時投与し、そして／または同時配合することも可能なさらなる療法剤には、１以上の：インターフェロン−β、例えばＩＦＮβ−１αおよびＩＦＮβ−１β；コパキソン（登録商標）；コルチコステロイド；ＩＬ−１阻害剤；ＴＮＦアンタゴニスト（例えばＴＮＦ受容体、例えばヒトｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体の可溶性断片またはその誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ））；ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体；並びにＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのアンタゴニスト（例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する阻害性抗体）；メトトレキセート、レフルノミド、およびシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、例えばＣＣＩ−７７９が含まれる。
【００２１】
別の側面において、本発明は、免疫細胞活性および／または数（例えば免疫細胞、例えばリンパ球（例えばＴ細胞）または免疫細胞集団、例えば混合されたかもしくは実質的に精製された免疫細胞集団の活性および／または数）を調節する、例えば増加させるかまたは減少させる方法を特徴とする。該方法は、免疫細胞活性および／または数を調節する、例えば増加させるかまたは減少させるのに十分な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えば本明細書記載のアゴニストと、免疫細胞、例えば本明細書記載の免疫細胞を接触させることを含む。１つの態様において、活性には、サイトカイン活性またはレベルの調節、例えば増加または減少が含まれる。例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、リンパ球産生またはＩＬ−１０レベルを増加させ、そして／またはインターフェロン−γ産生またはレベルを減少させることも可能である。
【００２２】
本方法を、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで培養中の細胞に用いることも可能である。例えば、免疫細胞、例えば本明細書記載のＴ細胞を、培地中、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することも可能であり、そして培地に１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）、例えば本明細書記載のアゴニストを添加することによって、接触工程を達成することも可能である。あるいは、被験者に存在する細胞（例えば本明細書記載の免疫細胞）に対して、例えばｉｎ ｖｉｖｏ（例えば療法または予防）プロトコルの一部として、該方法を行うことも可能である。
【００２３】
免疫細胞活性の変化には：参照細胞、例えば未処理免疫細胞と比較した、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと接触させた免疫細胞の、とりわけ増殖、サイトカイン分泌および／または産生、生存、分化、細胞応答性（例えば脱感作）、細胞溶解活性、エフェクター細胞活性、遺伝子発現のうちの１以上の変動（単数または複数）いずれか、例えば増加／減少が含まれる。例えば、免疫細胞をＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドと接触させると：胸腺細胞、リンパ球、リンパ節Ｔ細胞、成熟ＣＤ４＋ Ｔ細胞、成熟ＣＤ８＋ Ｔ細胞、またはマクロファージのうちの１以上の：増殖、細胞溶解活性、エフェクター細胞機能、またはサイトカイン分泌のうちの１以上を誘導可能である。１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、リンパ球産生またはＩＬ−１０レベルを増加させ、そして／またはインターフェロン−γ産生またはレベルを減少させることも可能である。
【００２４】
別の側面において、本発明は、哺乳動物被験者において、ＩＬ−１０不全、またはＩＬ−１０不全に関連する障害を調節する方法を特徴とする。該方法は、被験者におけるＩＬ−１０発現または活性を増加させる、例えば少なくとも１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、５、または１０倍増加させる、例えば１．２〜２．５倍増加させる、または２．５〜５倍増加させる、５〜１０倍増加させる、あるいは１０または２０倍より多く増加させるのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与することを含む。「ＩＬ−１０不全」は、対応する正常被験者に比較した、ＩＬ−１０の統計的に有意な減少である。例えば、減少は、０．０５未満のＰ値を有することも可能である。ＩＬ−２１または他のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを用いて、ＩＬ−１０レベルまたは活性を増加させることも可能であるため、ＩＬ−２１およびこうしたアゴニストを用いて、ＩＬ−１０不全を調節することも可能である。
【００２５】
例えば、血液、血清、または脳脊髄液中の、ＩＬ−１０レベルを監視することも可能である。ＩＬ−１０不全に関連付けることも可能な典型的な障害には、多発性硬化症、重大な炎症事象（虚血−再灌流傷害を含む）、乾癬および天疱瘡が含まれる。ＩＬ−２１は、ＩＬ−１０レベルを増加させることも可能であるため、ＩＬ−２１を用いて、これらの障害およびＩＬ−１０不全に関連する他の障害の少なくとも１つの症状を治療することも可能である。
【００２６】
別の側面において、本発明は、哺乳動物被験者、例えばヒトにおいて、多発性硬化症を改善する方法を特徴とする。該方法は：被験者における多発性硬化症または多発性硬化症の少なくとも１つの症状を改善するのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与することを含む。例えば、被験者がヒトである場合、ＩＬ−２１ポリペプチドはヒトＩＬ−２１ポリペプチド、例えば配列番号２を含むポリペプチド、または有効ヒトＩＬ−２１ポリペプチドであることも可能である。例えば、該ポリペプチドを組換え的に、例えば細菌細胞において産生する。１つの態様において、該方法は、被験者におけるＩＬ−１０発現または活性を増加させる、例えば少なくとも１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、５、または１０倍増加させる、例えば１．２〜２．５倍増加させる、または２．５〜５倍増加させる、５〜１０倍増加させる、あるいは１０または２０倍より多く増加させるのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与することを含む。該方法は、本明細書に記載する他の特徴を含むことも可能である。
【００２７】
別の側面において、本発明は、哺乳動物被験者において、免疫学的障害を治療するかまたは防止する方法を特徴とする。該方法は、哺乳動物被験者におけるＩＬ−１０パラメーターを評価し；そして評価されたＩＬ−１０パラメーターの結果に応じた量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与することを含む。例えば、ＩＬ−１０パラメーターは、ＩＬ−１０タンパク質またはＩＬ−１０ ｍＲＮＡのレベルに関する質的情報または量的情報を含む。別の例において、ＩＬ−１０パラメーターは、ＩＬ−１０タンパク質活性のレベルに関する量的情報を含む。
【００２８】
１つの態様において、免疫学的障害は、神経学的障害である。例えば、被験者はヒトであり、そして免疫学的障害は多発性硬化症であるか、あるいはミエリン鞘に損傷または改変を引き起こす免疫学的障害である。該方法は、本明細書に記載する他の特徴を含むことも可能である。
【００２９】
別の態様において、本発明は、哺乳動物被験者において、多発性硬化症の治療を評価する方法を特徴とする。該方法は：インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）（例えばＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片）を被験者に投与し；そして被験者におけるＩＬ−１０パラメーターを評価することを含む。１つの態様において、該方法は第二の用量のアゴニストを被験者に投与することをさらに含み、評価されたＩＬ−１０パラメーターの関数として、第二の用量を投与する。
【００３０】
１つの態様において、被験者はヒトであり、そしてＩＬ−２１ポリペプチドはヒトＩＬ−２１ポリペプチド、例えば配列番号２を含むポリペプチドである。
１つの態様において、第二の用量または続く用量はいずれも、例えばベースラインに比較して、例えば第一の処置前に比較して、被験者におけるＩＬ−１０発現または活性を増加させる、例えば少なくとも１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、５、または１０倍増加させる、例えば１．２〜２．５倍増加させる、または２．５〜５倍増加させる、５〜１０倍増加させる、あるいは１０または２０倍より多く増加させるのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを搬送するよう調整される。関連法において、第一の用量をこのように調整する。該方法は、本明細書に記載する他の特徴を含むことも可能である。
【００３１】
別の側面において、本発明は、薬学的に許容しうるキャリアーおよび本明細書記載の少なくとも１つのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（例えば本明細書記載のＩＬ−２１ポリペプチドまたは融合タンパク質）を含む、組成物、例えば薬剤組成物を提供する。１つの態様において、組成物、例えば薬剤組成物は、前述のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの１つの２以上の組み合わせを含む。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストおよび薬剤、例えば療法剤（例えば、本明細書にさらに記載するような、１以上のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害剤または細胞分裂停止剤）もまた、本発明の範囲内である。
【００３２】
１つの態様において、薬剤組成物は、薬学的に許容しうるキャリアー中に、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストおよび少なくとも１つのさらなる療法剤を含む。組成物、例えば薬剤組成物中に同時配合することも可能な、好ましいさらなる療法剤の例には、限定されるわけではないが、１以上の：インターフェロン−β、例えばＩＦＮβ−１αおよびＩＦＮβ−１β；ミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質（例えばコパキソン（登録商標））；コルチコステロイド；ＩＬ−１阻害剤；ＴＮＦアンタゴニスト（例えばＴＮＦ受容体、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体の可溶性断片またはその誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ））；ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体；並びにＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのアンタゴニスト（例えばｐ４０サブユニットに対する阻害性抗体）；メトトレキセート、レフルノミド、およびシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、例えばＣＣＩ−７７９が含まれる。
【００３３】
別の側面において、本発明は、（ｉ）ＩＬ−２１ポリペプチドを含む、１以上の単位用量の薬剤組成物を含む容器；および（ｉｉ）多発性硬化症を有するか、または有すると推測される被験者に、単位用量を投与するための使用説明書を含む、製品を特徴とする。例えば、使用説明書はラベル上に提供される。ラベルは、容器の外部表面上に貼られていることも可能である。１つの態様において、製品は、例えばＩＬ−２１ポリペプチドを含む薬剤組成物のさらなる単位用量を含有する、第二の容器をさらに含む。１つの態様において、製品は、多発性硬化症を治療するための剤、すなわちＩＬ−２１以外の剤を含む、第二の薬剤組成物を含む第二の容器をさらに含む。例えば、剤は、酢酸グラティラマーまたは本明細書記載の別の剤である。別の態様において、第一の容器内にＩＬ−２１ポリペプチドを含む薬剤組成物は、多発性硬化症を治療するための第二の剤、例えば酢酸グラティラマーをさらに含む。
【００３４】
用語「ＭＵ−１」および「ＩＬ−２１Ｒ」は、本明細書において、交換可能に用いられる。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書において、交換可能に用いられる。タンパク質は１以上の鎖を含むことも可能である。
【００３５】
当該技術分野に知られる方法いずれによって統計的有意性を決定することも可能である。典型的な統計検定には：スチューデントＴ−検定、マン・ホイットニーＵノンパラメトリック検定、およびウィルコクソン・ノンパラメトリック統計検定が含まれる。いくつかの統計的に有意な関係は、０．０５または０．０２未満のＰ値を有する。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストに仲介される特定の効果は、統計的に有意な相違（例えばＰ値＜０．０５または０．０２）を示すことも可能である。用語「誘導する」、「阻害する」、「増強する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」等は、例えば、２つの状態間の区別可能な質的相違または量的相違を示し、そして２つの状態間の相違、例えば統計的に有意な相違を指すことも可能である。
【００３６】
別に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する技術分野の一般の当業者に通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書記載のものと類似のまたは均等の方法および材料を、本発明の実施または試験に使用可能であるが、適切な方法および材料を以下に記載する。すべての刊行物、特許出願、特許、および本明細書に言及する他の参考文献すべてが、完全に本明細書に援用される。不一致の場合は、定義を含めて本明細書が統制する。さらに、材料、方法、および実施例は例示のみであり、そして限定を意図しない。
【００３７】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および請求項から明らかであろう。
【課題を解決するための手段】
【００３８】
発明の詳細な説明
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）またはＩＬ−２１受容体（「ＩＬ−２１Ｒ」または「ＭＵ−１」）のアゴニストを用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１受容体（ＭＵ−１）活性を調節するための方法および組成物を開示する。１つの態様において、出願者らは、マウスをＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばネズミＩＬ−２１ポリペプチドで処理すると、実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）のマウスモデルにおいて、症状の改善が生じることを示した。ミエリン・オリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド（例えばＭＯＧ３５−５５）およびプロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ）を用いて生成されるマウスモデルにおいて、ＥＡＥ症状の調節が検出された。ＩＬ−２１は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞増殖を誘導した。リンパ球をＩＬ−２１の存在下で培養すると、ＩＬ−１０量の増加およびインターフェロン−γレベルの減少が生じた。したがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性のアゴニストを用いて、神経系の免疫学的障害（例えば、多発性硬化症を含む、神経系の慢性免疫学的障害）を治療するかまたは防止することも可能である。
【００３９】
本発明をより容易に理解することが可能であるように、まず、特定の用語を定義する。さらなる定義を、詳細な説明全体に示す。
用語「インターロイキン−２１」、「ＩＬ−２１」および「ＩＬ−２１ポリペプチド」は、ＩＬ−２１Ｒ（例えば哺乳動物、例えばネズミまたはヒト・タンパク質）と相互作用する、例えば結合することが可能であり、そして以下の特徴の少なくとも１つを有するタンパク質（例えば哺乳動物、例えばネズミまたはヒト・タンパク質）を指す：（ｉ）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１またはその断片のアミノ酸配列、例えば配列番号２（ヒト）または配列番号４（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片；（ｉｉ）配列番号２（ヒト）または配列番号４（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片に、実質的に相同である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同である、アミノ酸配列；（ｉｉｉ）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１ヌクレオチド配列またはその断片（例えば配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（ネズミ）またはその断片、例えば成熟型をコードする領域）がコードする、アミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１（ヒト）または配列番号３（ネズミ）に示すヌクレオチド配列またはその断片（例えば成熟型をコードする領域）に、実質的に相同である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同であるヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；（ｖ）天然存在ＩＬ−２１ヌクレオチド配列またはその断片、例えば配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（ネズミ）またはその断片（例えば成熟型をコードする領域）に縮重しているヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；あるいは（ｖｉ）ストリンジェントな条件下、例えば非常にストリンジェントな条件下で、前述のヌクレオチドの１つの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列がコードする、少なくとも１１５アミノ酸のアミノ酸配列（例えば、該ヌクレオチド配列は成熟ＩＬ−２１タンパク質をコードする領域中でハイブリダイズする）。ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１結合は、ｓｔａｔ５またはｓｔａｔ３シグナル伝達を導くことも可能である（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記）。ＩＬ−２１ポリペプチドは、シグナル配列を含む新生タンパク質からシグナル配列が除去されて、成熟タンパク質にプロセシングされることも可能である。
【００４０】
「有効ヒト」ＩＬ−２１ポリペプチドは、該ポリペプチドが、正常なヒトにおいて、免疫原性応答を誘発しないように、そして該ＩＬ−２１ポリペプチドがヒトＩＬ−２１Ｒと相互作用するように、十分な数のヒト・アミノ酸位を含む、ＩＬ−２１ポリペプチドである。
【００４１】
用語「ＭＵ−１」、「ＭＵ−１タンパク質」、「インターロイキン−２１受容体」または「ＩＬ−２１Ｒ」は、ＩＬ−２１（例えば哺乳動物、例えばネズミまたはヒトＩＬ−２１）と相互作用する、例えば結合することが可能であり、そして以下の特徴の少なくとも１つを有する受容体（例えば哺乳動物、例えばネズミまたはヒト起源）を指す：（ｉ）天然存在哺乳動物ＭＵ−１ポリペプチドＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１またはその断片のアミノ酸配列、例えば配列番号６（ヒト）または配列番号８（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片（例えば成熟領域）；（ｉｉ）配列番号６（ヒト）または配列番号８（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片（例えば成熟領域）に、実質的に相同である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同である、アミノ酸配列；（ｉｉｉ）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ヌクレオチド配列（例えば配列番号５（ヒト）または配列番号７（ネズミ））またはその断片（例えば成熟型領域）がコードする、アミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号５（ヒト）または配列番号７（ネズミ）に示すヌクレオチド配列またはその断片（例えば成熟型領域）に、実質的に相同である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同であるヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；（ｖ）天然存在ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ヌクレオチド配列またはその断片、例えば配列番号５（ヒト）もしくは配列番号７（ネズミ）またはその断片（例えば成熟領域）に縮重しているヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；あるいは（ｖｉ）ストリンジェントな条件下、例えば非常にストリンジェントな条件下で、前述のヌクレオチド配列の１つにハイブリダイズするヌクレオチド配列がコードする、少なくとも４５０アミノ酸のアミノ酸配列。配列番号６に示すヒトＩＬ−２１Ｒの成熟領域は、ほぼアミノ酸２０〜５３８である。
【００４２】
典型的なＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ ｃＤＮＡは、寄託番号ＡＴＣＣ ９８６８７として、１９９８年３月１０日にアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託された。
【００４３】
ＩＬ−２１Ｒは、ＮＩＬＲとしても知られる、クラスＩサイトカインファミリー受容体である（ＷＯ０１／８５７９２；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３；Ｏｚａｋｉら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１１４３９−１１４４４）。ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２受容体およびＩＬ−１５受容体に共有されるβ鎖、並びにＩＬ−４受容体α鎖に相同である（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記）。リガンド結合に際して、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１は共通γサイトカイン受容体鎖（γｃ）と相互作用し（Ａｓａｏら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１−５）、そしてＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３（Ａｓａｏら（２００１））またはＳＴＡＴ５（Ｏｚａｋｉら（２０００））のリン酸化を誘導することが可能である。ＩＬ−２１Ｒは広いリンパ系組織分布を示す。
【００４４】
ＩＬ−２１Ｒポリペプチドに結合する能力を保持する限り、全長に満たないＩＬ−２１タンパク質の型を本明細書記載の方法および組成物で使用することも可能である。宿主細胞において、全長ＩＬ−２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドの対応する断片を発現させることによって、または修飾タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば１以上の内部アミノ酸が除去される場合）を発現させることによって、全長に満たないＩＬ−２１タンパク質を産生することも可能である。全長に満たないＩＬ−２１ポリペプチドの１つの型は、成熟ＩＬ−２１、例えば配列番号２のＩＬ−２１である。別の型は、全長成熟ＩＬ−２１より短いポリペプチド、例えば１３１、１３０、１２９、１２８、または１２５アミノ酸より短い、例えば長さ１１５〜１３０アミノ酸のポリペプチドである。例えば、配列番号２由来のＩＬ−２１ポリペプチドは、最後の８アミノ酸が欠けているか、またはそのサブセットであることも可能であり、例えばＩＬ−２１ポリペプチドは、アミノ酸１〜１２２を含む。対応するポリヌクレオチド断片を、本発明の方法および組成物中で使用することもまた可能である。適切な望ましい欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発法を含む標準的分子生物学技術によって、あるいは適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって、上述のような修飾ポリヌクレオチドを作成することも可能である。
【００４５】
句、ＭＵ−１またはＩＬ−２１Ｒポリペプチドの「生物学的活性」は、対応する成熟ＭＵ−１タンパク質の１以上の生物学的活性を指し、こうした活性には、限定されるわけではないが：（１）ＩＬ−２１ポリペプチド（例えばヒトＩＬ−２１ポリペプチド）との相互作用、例えば結合；（２）シグナル伝達分子、例えばγｃ、ｊＡＫ−１との会合；（３）ｓｔａｔタンパク質、例えばＳＴＡＴ５および／またはＳＴＡＴ３のリン酸化および／または活性化の刺激；並びに／あるいは（４）免疫細胞、例えばＴ細胞（ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、および巨核球の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、および／または生存の調節、例えば刺激または減少が含まれる。
【００４６】
本明細書において、「ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト」は、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドの１以上の生物学的活性、例えば本明細書記載の生物学的活性を増強するか、誘導するか、または別の方式で増進する剤を指す。例えば、アゴニストは、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドと相互作用し、例えば結合する。１つの態様において、アゴニストは、ＩＬ−２１Ｒおよび別の受容体鎖、例えばγサイトカイン受容体鎖と相互作用する。例えばアゴニストはＩＬ−２１Ｒおよびγサイトカイン受容体鎖を架橋する。
【００４７】
本明細書において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの「療法的有効量」は、被験者、例えばヒト患者に、単回用量または多数用量を投与した際、障害、例えば本明細書記載の障害の１以上の症状を治癒させるか、その重症度を減少させるか、改善する、あるいはこうした治療の非存在下で予期される生存を超えて、被験者の生存を延長させるのに有効な剤の量を指す。
【００４８】
本明細書において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの「予防的有効量」は、被験者、例えばヒト患者に、単回用量または多数用量を投与した際、障害、例えば本明細書記載の障害の開始または再発の発生を防止するかまたは遅延させるのに有効なＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの量を指す。
【００４９】
例えば、２つの状態間の量的相違を示す、用語「誘導する」、「阻害する」、「増強する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」等は、２つの状態間の、少なくとも統計的に有意な相違を指す。
【００５０】
用語「併用して」は、この背景において、剤を、同時にまたは連続していずれかで、実質的に同時期に投与することを意味する。連続して投与した場合、第二の化合物投与の開始時に、好ましくは、２つの化合物の第一のものは、治療部位で、なお有効濃度で検出可能である。
【００５１】
本明細書において、「融合タンパク質」は、機能可能であるように会合した、例えば連結された２以上の部分、例えばタンパク質部分を含有するタンパク質を指す。好ましくは、部分は共有的に会合する。該部分は、直接会合することも可能であるし、あるいはスペーサーまたはリンカーを介して連結されることも可能である。
【００５２】
本明細書に開示する配列に類似のまたは相同な（例えば少なくとも約８５％配列同一性）配列もまた、本出願の一部である。いくつかの態様において、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高いことも可能である。あるいは、核酸セグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば非常にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下で、相補鎖にハイブリダイズする場合、実質的な同一性が存在する。核酸は、全細胞中、細胞溶解物中、あるいは部分的に精製された型または実質的に純粋な型で存在することも可能である。
【００５３】
２つの配列間の「相同性」または「配列同一性」（該用語は本明細書において、交換可能に用いられる）の計算を以下のように行う。最適比較目的のため、配列を並列させる（例えば、最適並列のため、第一および第二のアミノ酸または核酸配列の一方または両方に、ギャップを導入することも可能であるし、そして比較目的のため、非相同配列を無視することも可能である）。好ましい態様において、比較目的のため並列させる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、そしてさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次いで、対応するアミノ酸位またはヌクレオチド位のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第一の配列の位が、第二の配列の対応する位と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、該分子は、その位で同一である（本明細書において、アミノ酸または核酸「同一性」は、アミノ酸または核酸「相同性」と均等である）。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適並列のために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れて、配列に共有される同一の位の数の関数である。
【００５４】
数学的アルゴリズムを用いて、２つの配列間の配列比較および同一性パーセント決定を達成することも可能である。比較は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍ）のＧＡＰプログラムおよびパラメーターを用い、パラメーターにはギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を伴うＢｌｏｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスが含まれる。
【００５５】
本明細書において、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を記載する。ストリンジェントな条件は、当業者に知られ、そしてＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ニューヨーク（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出されることも可能である。水性の方法および非水性の方法が該参考文献に記載され、そしてどちらを使用することも可能である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい一例は、６ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、約５０℃での１回以上の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、６ｘＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５５℃での１回以上の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、６ｘＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６０℃での１回以上の洗浄である。好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、６ｘＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃での１回以上の洗浄である。特に好ましい非常にストリンジェントな条件（そして分子がハイブリダイゼーション限界内にあるかどうか決定するために、どの条件を適用すべきなのか、実施者が確信できない場合、使用すべき条件）は、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中、６５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳ中、６５℃での１回以上の洗浄である。
【００５６】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、機能に実質的な影響を持たない、さらなる保存的置換または非必須アミノ酸置換を有することも可能である。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖を持つアミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を持つアミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を持つアミノ酸（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を持つアミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖を持つアミノ酸（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を持つアミノ酸（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。
【００５７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト
本発明の方法および組成物で用いるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒトまたはネズミＩＬ−２１ポリペプチド、またはその活性断片（例えば配列番号２に示すアミノ酸配列、または配列番号１に示すヌクレオチド配列がコードする領域を含むアミノ酸配列、または該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれより同一である配列を含む、ヒトＩＬ−２１ポリペプチド）（例えば成熟ＩＬ−２１ポリペプチドをコードする配列番号１の領域）であることも可能である。別の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ネズミＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片（例えば配列番号４に示すアミノ酸配列、または配列番号３に示すヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列、または該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれより同一である配列を含む、ネズミＩＬ−２１ポリペプチド）、あるいは別の哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、ウシなどに由来するＩＬ−２１ポリペプチドである。
【００５８】
ＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列は、公的に知られる。例えば、ヒトＩＬ−２１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセス番号Ｘ＿０１１０８２号で入手可能である。典型的な開示されるヒトＩＬ−２１ヌクレオチド配列を以下に示す：
【００５９】
【化１】
【００６０】
さらなるヌクレオチド配列情報は、例えばＡＦ２５４０６９［ｇｉ：１１０９３５３５］から入手可能であり、これは、典型的なＩＬ−２１ポリペプチドをコードする、６４２ｂｐのｍＲＮＡ配列を提供する。いくつかの態様において、例えばシグナル配列をコードする領域を除いて、成熟ＩＬ−２１をコードするヌクレオチド配列の領域を使用すると十分である。典型的な成熟ヒトＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列を以下に示す：
【００６１】
【化２】
【００６２】
成熟配列は、Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３に基づく。全長配列は：
【００６３】
【化３】
【００６４】
である。
ヒトＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列を提供するさらなるエントリーは以下の通りである：ｇｉ｜１１１４１８７５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０６８５７５．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜１１０９３５３６｜ｇｂ｜ＡＡＧ２９３４８．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜４２５４２５８６｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２５９．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜４２５４２５８８｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６０．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜４２５４２６５７｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６１．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜４２５４２６５９｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２５８．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；およびｇｉ｜４２５４２８０７｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６２．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。ヒトＩＬ−２１ポリペプチドは、機能性を保持する限り、本明細書記載のポリペプチドの変異体であることも可能である。
【００６５】
ＩＬ−２１ポリペプチドは、本明細書記載の条件下、例えば非常にストリンジェントな条件下（例えば０．１ｘＳＳＣ、６５℃）で、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号７に示すヌクレオチド配列、またはその相補体にハイブリダイズする核酸にコードされることも可能である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒタンパク質または融合タンパク質をコードするが、遺伝暗号の縮重のため、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号７に示すヌクレオチド配列と異なる、単離ポリヌクレオチドを使用することも可能である。点突然変異によって、または誘導された修飾によって引き起こされた、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号７に示すヌクレオチド配列の変型もまた、使用可能である。
【００６６】
さらに他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒトまたはネズミＩＬ−２１ポリペプチド、またはその断片を含み、そして例えば第二の部分、例えばポリペプチド（例えばＧＳＴ、Ｌｅｘ−Ａ、ＭＢＰポリペプチド配列、または例えばＦｃ断片、重鎖定常領域であって：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む多様なアイソタイプの前記重鎖定常領域を含む、免疫グロブリン鎖）に融合した、融合タンパク質である。
【００６７】
融合タンパク質は、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ断片を第二の部分に連結するリンカー配列をさらに含むことも可能である。例えば、融合タンパク質は、ペプチドリンカー、例えば長さ約４〜２０アミノ酸、より好ましくは５〜１０アミノ酸のペプチドリンカーを含むことも可能であり；ペプチドリンカーは長さ８アミノ酸である。ペプチドリンカー中の各アミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、ＴｈｒおよびＡｌａからなる群より選択され；ペプチドリンカーはＧｌｙ−Ｓｅｒ要素を含む。他の態様において、融合タンパク質はペプチドリンカーを含み、そしてペプチドリンカーは式（Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、配列番号１１）ｙを有する配列を含み、式中、ｙは例えば１、２、３、４、５、６、７、または８である。
【００６８】
他の態様において、融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端にさらなるアミノ酸配列を付加して、発現、検出および／または単離または精製を容易にすることも可能である。例えば、ＩＬ−２１融合タンパク質を、１以上のさらなる部分、例えばＧＳＴ、Ｈｉｓ６タグ、ＦＬＡＧタグに連結することも可能である。例えば、融合タンパク質をさらにＧＳＴ融合タンパク質に連結することも可能であり、ここで融合タンパク質配列は、ＧＳＴ（すなわちグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合される。こうした融合タンパク質は、融合タンパク質の精製を容易にすることも可能である。
【００６９】
別の態様において、融合タンパク質は、Ｎ末端に異種シグナル配列（すなわちＩＬ−２１核酸にコードされるポリペプチドには存在しないポリペプチド配列）を含む。例えば、天然シグナル配列を除去し、そして別のタンパク質由来のシグナル配列と置き換えることも可能である。特定の宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）において、異種シグナル配列の使用を通じて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの発現および／または分泌を増加させることも可能である。類似の方法を用いて、ＩＬ−２１Ｒタンパク質およびその断片を産生し、例えばＩＬ−２１Ｒと相互作用するアゴナイズ抗体を得るための免疫原を提供することもまた可能である。
【００７０】
標準的組換えＤＮＡ技術によって、キメラタンパク質または融合タンパク質を産生することも可能である。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡ断片を、慣用的技術にしたがって、例えば連結のため、平滑端またはねじれ（ｓｔａｇｇｅｒ）端の制限酵素消化を使用して、適切な末端を提供し、適切なように粘着端を埋め込み、アルカリホスファターゼ処理して、望ましくない連結を回避し、そして酵素的に連結することによって、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡ断片を、ともにインフレームで連結する。別の態様において、自動化ＤＮＡ合成装置を含む慣用的技術によって、融合遺伝子を合成することも可能である。あるいは、２つの連続遺伝子断片間に相補的オーバーハングを生じさせるアンカープライマーを用いて、遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行うことも可能であり、この断片を続いてアニーリングして、そして再増幅してキメラ遺伝子配列を生成することも可能である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（監修）ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９２を参照されたい）。さらに、融合部分（例えば免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域）をコードする、多くの発現ベクターが商業的に入手可能である。融合部分が、免疫グロブリンタンパク質にインフレームで連結されるように、核酸をコードするＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストをこうした発現ベクターにクローニングすることも可能である。
【００７１】
いくつかの態様において、融合ポリペプチドは、二量体（例えばホモ二量体またはヘテロ二量体）または三量体などのオリゴマーとして存在することも可能である。当該技術分野に知られる方法を用いて、第一のポリペプチド、および／または第一のポリペプチドをコードする核酸を構築することも可能である。
【００７２】
いくつかの態様において、第一のポリペプチドには、全長ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストポリペプチド（例えばＩＬ−２１自体）が含まれる。あるいは、第一のポリペプチドは全長ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒポリペプチドに満たないものを含む。融合タンパク質に含まれることも可能なシグナルペプチドは、ＭＰＬＬＬＬＬＬＬＬＰＳＰＬＨＰ（配列番号９）である。望ましい場合、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト部分を含む第一のポリペプチド部分および第二のポリペプチド部分間に、１以上のアミノ酸をさらに挿入することも可能である。
【００７３】
第二のポリペプチドは、好ましくは可溶性である。いくつかの態様において、第二のポリペプチドは、連結されたポリペプチドの半減期（例えば血清半減期）を増進させる。いくつかの態様において、第二のポリペプチドには、第二のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストポリペプチドと該融合ポリペプチドの会合を容易にする配列が含まれる。好ましい態様において、第二のポリペプチドには、免疫グロブリンポリペプチドの少なくとも１領域が含まれる。免疫グロブリン融合ポリペプチドは当該技術分野に知られ、そして例えば米国特許第５，５１６，９６４号；第５，２２５，５３８号；第５，４２８，１３０号；第５，５１４，５８２号；第５，７１４，１４７号；および第５，４５５，１６５号に記載される。
【００７４】
いくつかの態様において、第二のポリペプチドは、全長免疫グロブリンポリペプチドを含む。あるいは、第二のポリペプチドは、全長に満たない免疫グロブリンポリペプチド、例えば重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖ、またはＦｃを含む。第二のポリペプチドには、免疫グロブリンポリペプチドの重鎖が含まれることも可能である。第二のポリペプチドには、免疫グロブリンポリペプチドのＦｃ領域が含まれることも可能である。
【００７５】
いくつかの態様において、第二のポリペプチドは、野生型免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域のエフェクター機能よりも少ないエフェクター機能を有する。Ｆｃエフェクター機能には、例えば、Ｆｃ受容体結合、補体結合およびＴ細胞枯渇活性が含まれる（例えば米国特許第６，１３６，３１０号を参照されたい）。Ｔ細胞枯渇活性、Ｆｃエフェクター機能、および抗体安定性をアッセイするための方法が当該技術分野に知られる。１つの態様において、第二のポリペプチドは、Ｆｃ受容体に低い親和性を有するかまたはまったく親和性を持たない。別の態様において、第二のポリペプチドは、補体タンパク質Ｃ１ｑに低い親和性を有するかまたはまったく親和性を持たない。
【００７６】
タンパク質を組換え的に産生するため、本明細書記載の単離ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストポリヌクレオチドを、Ｋａｕｆｍａｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９，４４８５−４４９０（１９９１）に開示されるｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベクターなどの発現調節配列に、機能可能であるように連結することも可能である。多くの適切な発現調節配列が当該技術分野に知られる。組換えタンパク質を発現する一般的な方法もまた知られ、そしてＲ．Ｋａｕｆｍａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，５３７−５６６（１９９０）に例示される。本明細書で定義するような「機能可能であるように連結された」は、連結されたポリヌクレオチド／発現調節配列で形質転換（トランスフェクション）されている宿主細胞によって、目的のタンパク質（例えばＩＬ−２１または別のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト）が発現されるように、目的のタンパク質をコードする特定のポリヌクレオチドおよび発現調節配列の間で共有結合が形成されるよう、酵素的または化学的に連結されていることを意味する。
【００７７】
用語「ベクター」は、本明細書において、連結されている別の核酸を輸送するか、または該核酸の維持または複製を持続させることが可能な核酸分子を指すよう意図される。ベクターの１つの種類は、「プラスミド」であり、これは、環状二本鎖ＤＮＡループを指し、この中にさらなるＤＮＡセグメントを連結することも可能である。別の種類のベクターはウイルスベクターであり、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノム内に連結することも可能である。特定のベクターは、導入された宿主内で自律複製することが可能である（例えば細菌複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると、宿主細胞ゲノム内に組み込まれることも可能であり、そしてそれによって宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、機能可能であるように連結された遺伝子の発現を指示することが可能である。こうしたベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般的に、組換えＤＮＡ技術において、有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、交換可能に使用可能であり、これはプラスミドが、ベクターの最も一般的に用いられる型であるためである。しかし、本発明は、均等の機能を果たす、ウイルスベクター（例えば複製不全レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ関連ウイルス）などの発現ベクターの他の形を含むと意図される。
【００７８】
用語「制御配列」は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を調節する、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現調節要素（例えばポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。こうした制御配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）に記載される。当業者は、制御配列の選択を含めて、発現ベクターの設計が、形質転換しようとする宿主細胞の選択、望ましいタンパク質の発現レベルなどの要因に応じる可能性もあることを認識するであろう。哺乳動物宿主細胞発現のための好ましい制御配列には、哺乳動物細胞において、高レベルのタンパク質発現を指示するウイルス要素、例えばＦＦ−１ａプロモーターおよびＢＧＨポリＡ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（ＣＭＶプロモーター／エンハンサーなど）、サル・ウイルス４０（ＳＶ４０）（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなど）、アデノウイルス（例えばアデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、およびポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーが含まれる。ウイルス制御要素のさらなる説明、およびその配列に関しては、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号、およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号を参照されたい。
【００７９】
組換え発現ベクターは、さらなる配列、例えば宿主細胞におけるベクターの複製を制御する配列（例えば複製起点）および選択可能マーカー遺伝子を所持することも可能である。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えばすべてＡｘｅｌらによる米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、および第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、典型的には、選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキセートなどの薬剤に対する耐性を与える。好ましい選択可能マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（ｄｈｆｒ−宿主細胞中、メトトレキセート選択／増幅とともに用いるため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が含まれる。
【００８０】
いくつかの種類の細胞が、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質の発現に適した宿主細胞として作用しうる。機能するＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒタンパク質を発現可能な細胞種いずれを使用することも可能である。適切な哺乳動物宿主細胞には、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換霊長類細胞株、正常二倍体細胞、初代組織のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養由来の細胞株、初代外植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、Ｒａｔ２、ＢａＦ３、３２Ｄ、ＦＤＣＰ−１、ＰＣ１２、Ｍ１ｘまたはＣ２Ｃ１２細胞が含まれる。
【００８１】
１以上の昆虫発現ベクター中で、適切な調節配列に、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを機能可能であるように連結し、そして昆虫発現系を使用することによって、こうしたタンパク質を産生することもまた可能である。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系の材料および方法は、例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴからキットの形（ＭＡＸＢＡＣ（登録商標）キット）で商業的に入手可能であり、そしてこうした方法は、本明細書に援用されるＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ，Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載されるように、当該技術分野に周知である。ＭＵ−１タンパク質の可溶性型もまた、上述のような適切な単離ポリヌクレオチドを用いて、昆虫細胞中で産生可能である。
【００８２】
あるいは、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質を酵母などのより低次の真核生物または細菌などの原核生物において、産生することも可能である。適切な酵母株には、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、クロイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）株、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、または異種タンパク質を発現可能な酵母株いずれかが含まれる。適切な細菌株には、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、または異種タンパク質を発現可能な細菌株いずれかが含まれる。
【００８３】
１つの態様において、シグナル配列を伴わずに（例えば原核生物シグナル配列または真核生物シグナル配列いずれも含まずに）細菌中でＩＬ−２１を産生する。細菌中の発現は、組換えタンパク質を取り込んだ封入体の形成を生じることも可能である。したがって、活性物質またはより活性である物質を産生するため、組換えタンパク質の再フォールディングが必要である可能性もある。細菌封入体から、正しくフォールディングされた異種タンパク質を得るためのいくつかの方法が、当該技術分野に知られる。これらの方法は、一般的に、封入体からタンパク質を可溶化し、次いでカオトロピック剤を用いて、該タンパク質を完全に変性させることを含む。
【００８４】
タンパク質の一次アミノ酸配列に、システイン残基が存在している場合、ジスルフィド結合の正しい形成を容易にする環境で、タンパク質を再フォールディングさせることも可能である（例えばレドックス系）。再フォールディングの一般的な方法が、Ｋｏｈｎｏ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８５：１８７−１９５（１９９０）、ＥＰ０４３３２２５およびＵ．Ｓ．５，３９９，６７７に開示されている。Ａｓａｎｏら（２００２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５２８（１−３）：７０−６は、細菌細胞で産生したＩＬ−２１を再フォールディングさせる典型的な方法を記載する。例えば、大腸菌において、不溶性封入体として、ｒＩＬ−２１（組換えＩＬ−２１）を発現させ、次いで可溶化し（例えば変性剤を用いて）そしてレドックス試薬を導入する修飾透析法を用いることによって、再フォールディングさせる。
【００８５】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質はまた、トランスジェニック動物の産物として、例えばＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含有する体細胞または生殖細胞によって特徴付けられる、トランスジェニック・ウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジのミルクの構成要素として、発現させることも可能である。
【００８６】
望ましいタンパク質を発現させるのに必要な培養条件下で、培養形質転換宿主細胞を増殖させることによって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質を調製することも可能である。次いで、生じた発現タンパク質を培地または細胞抽出物から精製することも可能である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質の可溶性型を馴化培地から精製することも可能である。発現細胞から総膜分画を調製し、そしてＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００などの非イオン性界面活性剤を用いて膜を抽出することによって、膜結合型のＭＵ−１タンパク質を精製することも可能である。
【００８７】
当業者に知られる方法を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質または融合タンパク質を精製することも可能である。例えば、商業的に入手可能なタンパク質濃縮フィルター、例えばＡＭＩＣＯＮ（登録商標）またはＭＩＬＬＩＰＯＲＥ（登録商標）ＰＥＬＬＩＣＯＮＴＭ限外ろ過装置を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質を濃縮することも可能である。濃縮工程後、濃縮物を、ゲルろ過媒体などの精製マトリックスに適用することも可能である。あるいは、陰イオン交換樹脂、例えばペンダント・ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックスまたは支持体を使用することも可能である。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロースまたはタンパク質精製に一般的に使用される他の種類であることも可能である。あるいは、陽イオン交換工程を使用することも可能である。適切な陽イオン交換基には、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む多様な不溶性マトリックスが含まれる。スルホプロピル基が好ましい（例えばＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）。培養上清からのＭＵ−１タンパク質または融合タンパク質の精製には、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）またはＣｉｂａｃｒｏｍブルー３ＧＡ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）などのアフィニティー樹脂上の１以上のカラム工程；あるいはフェニルエーテル、ブチルエーテル、またはプロピルエーテルなどの樹脂を用いた疎水性相互作用クロマトグラフィーによるカラム工程；あるいはイムノアフィニティークロマトグラフィーによるカラム工程が含まれることもまた、可能である。最後に、逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）疎水性媒体、例えばペンダント・メチルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲルを使用した、１以上のＲＰ−ＨＰＬＣ工程を使用して、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質をさらに精製することも可能である。既知の方法にしたがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質に対する抗体を含むアフィニティーカラムを精製に使用することも可能である。前述の精製工程のいくつかまたはすべてを、多様な組み合わせで、または他の既知の方法とともに使用して、実質的に精製された単離組換えタンパク質を提供することも可能である。好ましくは、他の哺乳動物タンパク質を実質的に含まないように、または細菌で産生した場合、他の細菌タンパク質、例えば内毒素を実質的に含まないように、単離ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質を精製する。
【００８８】
他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、例えばＩＬ−２１Ｒ、好ましくは、哺乳動物（例えばヒトまたはネズミ）ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒに結合し、そしてＩＬ−２１Ｒ活性を活性化させる抗体、またはその抗原結合断片である。
【００８９】
本明細書において、用語「抗体」は、少なくとも１つ、そして好ましくは２つの重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書において、ＶＨと略す）、および少なくとも１つ、そして好ましくは２つの軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書において、ＶＬと略す）を含むタンパク質を指す。さらに、ＶＨ領域およびＶＬ領域を、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と称する超可変領域にさらに分割することも可能であり、この領域間には、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称する、より保存される領域が散在する。フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の範囲は、正確に定義されてきている（本明細書に援用される、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，米国保健社会福祉局，ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号、およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照されたい）。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。
【００９０】
抗体は、重鎖および軽鎖の定常領域をさらに含むことも可能であり、それによってそれぞれ、重鎖および軽鎖の免疫グロブリン鎖が形成される。１つの態様において、抗体は、２つの重鎖免疫グロブリンおよび２つの軽鎖免疫グロブリンの四量体であり、ここで重鎖および軽鎖免疫グロブリンは、例えばジスルフィド結合によって、相互連結される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、典型的には、免疫系の多様な細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的補体系の第一の構成要素（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子に対する抗体の結合を仲介する。
【００９１】
本明細書において、用語「免疫グロブリン」は、免疫グロブリン遺伝子に実質的にコードされる１以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。認知されているヒト免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子とともに、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤまたは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端の可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸）およびＣＯＯＨ末端のカッパまたはラムダ定常領域遺伝子にコードされる。全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋＤまたは４４６アミノ酸）は、同様に、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および前述の定常領域遺伝子の１つ、例えばガンマ（約３３０アミノ酸をコードする）にコードされる。
【００９２】
本明細書において、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子にコードされる抗体クラス（例えばＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。
用語、抗体の「抗原結合断片」（あるいは単に「抗体部分」または「断片」）は、本明細書において、抗原（例えばＩＬ−２１Ｒ）に特異的に結合する能力を保持する全長抗体の１以上の断片を指す。用語、抗体の「抗原結合断片」に含まれる結合断片の例には（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域のジスルフィド架橋に連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）；並びに（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子にコードされているが、組換え法を用い、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対形成して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作成することを可能にする合成リンカーによって、これらを連結することも可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。こうした一本鎖抗体もまた、用語、抗体の「抗原結合断片」内に含まれると意図される。当業者に知られる慣用的技術を用いてこれらの抗体断片を得て、そして損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）抗体の場合と同じ方式で、有用性に関してスクリーニングする。「有効ヒト」免疫グロブリン可変領域は、正常なヒトにおいて、該免疫グロブリン可変領域が免疫原性応答を誘発しないように、十分な数のヒト・フレームワークアミノ酸位を含む免疫グロブリン可変領域である。「有効ヒト」抗体は、正常なヒトにおいて、該抗体が免疫原性応答を誘発しないように、十分な数のヒト・アミノ酸位を含む抗体である。ヒトおよび有効ヒト免疫グロブリン可変領域および抗体を使用することも可能である。
【００９３】
ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒタンパク質を用いて、動物（例えば非ヒト動物、およびヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物）を免疫して、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質と特異的に反応し、そしてＩＬ−２１Ｒを活性化することも可能なポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を得ることも可能である。免疫原として全ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質を用いて、またはＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ断片を用いることによって、こうした抗体を得ることも可能である。ペプチド免疫原は、さらに、カルボキシ末端にシステイン残基を含有することも可能であり、そしてこれをキーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン（ＫＬＨ）などのハプテンにコンジュゲート化する。チロシン残基を硫酸化チロシン残基で置き換えることによって、さらなるペプチド免疫原を生成することも可能である。こうしたペプチドを合成するための方法が、例えばＲ．Ｐ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９−２１５４（１９６３）；Ｊ．Ｌ．Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙら，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１１，１０（１９８７）におけるように、当該技術分野に知られる。
【００９４】
マウス系でなく、ヒト免疫グロブリン遺伝子を所持するトランスジェニックマウスを用いて、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒに対して向けられるヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を生成することも可能である。目的の抗原で免疫した、これらのトランスジェニックマウス由来の脾臓細胞を用いて、ヒト・タンパク質由来のエピトープに特異的親和性を持つヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを産生する（例えば、ＷＯ９１／００９０６、ＷＯ９１／１０７４１；ＷＯ９２／０３９１８；ＷＯ９２／０３９１７；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら １９９４ Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９；Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ら １９９４ Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ら １９９４ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−６８５５；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら １９９３ Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：３３−４０；Ｔｕａｉｌｌｏｎら １９９３ ＰＮＡＳ ９０：３７２０−３７２４；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら １９９１ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１：１３２３−１３２６を参照されたい）。
【００９５】
組換えＤＮＡ技術の当業者に知られる他の方法によって、モノクローナル抗体を生成することもまた可能である。特定の抗原特異性を有する抗体断片を同定し、そして単離するための「コンビナトリアル抗体ディスプレイ」法と称される代替法が開発されてきており、そして該方法を利用してモノクローナル抗体を産生することも可能である（コンビナトリアル抗体ディスプレイの説明に関しては、例えばＳａｓｔｒｙら １９８９ ＰＮＡＳ ８６：５７２８；Ｈｕｓｅら １９８９ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５；およびＯｒｌａｎｄｉら １９８９ ＰＮＡＳ ８６：３８３３を参照されたい）。上述のような免疫原で動物を免疫した後、生じたＢ細胞プールの抗体レパートリーをクローニングする。オリゴマー・プライマーの混合物およびＰＣＲを用いることによって、免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡ配列を得るための方法が一般的に知られる。例えば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチドプライマーとともに、保存される３’定常領域プライマーに対するプライマーを、いくつかのネズミ抗体由来の重鎖および軽鎖の可変領域のＰＣＲ増幅のために使用することも可能である（Ｌａｒｒｉｃｋら，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：１５２−１５６）。同様の戦略を用いて、ヒト抗体由来のヒト重鎖および軽鎖の可変領域を増幅することもまた可能である（Ｌａｒｒｉｃｋら，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２：１０６−１１０）。
【００９６】
当該技術分野に知られる組換えＤＮＡ技術によって、キメラ免疫グロブリン鎖を含むキメラ抗体を産生することも可能である。例えば、ネズミ（または他の種）のモノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子を制限酵素で消化して、ネズミＦｃをコードする領域を除去して、そしてヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の均等部分で置換する（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許刊行物ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願１８４，１８７；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．、欧州特許出願１７１，４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願１７３，４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際出願ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願１２５，０２３；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８ Ｓｉｃｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３）；Ｌｉｕら（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕら，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら，１９８７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗら，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照されたい）。
【００９７】
当該技術分野に知られる方法によって、抗体または免疫グロブリン鎖をヒト化することも可能である。抗原結合に直接関与しないＦｖ可変領域の配列を、ヒトＦｖ可変領域由来の均等配列で置き換えることによって、ヒト化免疫グロブリン鎖を含むヒト化抗体を生成することも可能である。ヒト化抗体を生成する一般的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７、Ｏｉら，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、およびＱｕｅｅｎら、ＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１およびＵＳ５，６９３，７６２に提供され、これら文献のすべての内容は、本明細書に援用される。これらの方法は、少なくとも１つの重鎖または軽鎖由来の免疫グロブリンＦｖ可変領域のすべてまたは一部をコードする核酸配列を単離し、操作し、そして発現させることを含む。こうした核酸の供給源は当業者に周知であり、そして例えば、あらかじめ決定されたターゲットに対する抗体を産生するハイブリドーマから得ることも可能である。次いで、ヒト化抗体をコードする組換えＤＮＡ、またはその断片を、適切な発現ベクターにクローニングすることも可能である。
【００９８】
ＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって、ヒト化またはＣＤＲ移植抗体分子または免疫グロブリンを産生することも可能であり、ここで、免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、またはすべてのＣＤＲを置き換えることも可能である。例えば、そのすべての内容が明確に本明細書に援用される、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら １９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら １９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒら １９８８ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０；Ｗｉｎｔｅｒ ＵＳ５，２２５，５３９を参照されたい。Ｗｉｎｔｅｒは、ヒト化抗体を調製するのに使用可能なＣＤＲ移植法を記載し（英国特許出願ＧＢ２１８８６３８Ａ、１９８７年３月２６日出願；Ｗｉｎｔｅｒ ＵＳ５，２２５，５３９）、その内容は明確に本明細書に援用される。特定のヒト抗体のＣＤＲすべてを、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で置き換えることも可能であるし、またはいくつかのＣＤＲのみを非ヒトＣＤＲで置き換えることも可能である。あらかじめ決定された抗原に対するヒト化抗体の結合に必要な数のＣＤＲを置き換えれば十分である。
【００９９】
いくつかの実施において、例えば抗体の他の部分、例えば定常領域を欠失させ、付加し、または置換することによって、モノクローナル抗体、キメラ抗体、およびヒト化抗体を修飾することも可能である。例えば、抗体を以下のように修飾することも可能である：（ｉ）定常領域を欠失させることによって；（ｉｉ）定常領域を別の定常領域、例えば抗体の半減期、安定性または親和性を増加させる定常領域、または別の種もしくは抗体クラス由来の定常領域で置き換えることによって；あるいは（ｉｉｉ）定常領域中の１以上のアミノ酸を修飾して、例えばとりわけグリコシル化部位の数、エフェクター細胞機能、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、補体結合を改変することによって。
【０１００】
抗体定常領域を改変するための方法が当該技術分野に知られる。抗体の定常部の少なくとも１つのアミノ酸残基を、異なる残基で置き換えることによって、機能が改変された抗体、例えば細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１構成要素などのエフェクターリガンドに対する親和性が改変された抗体を産生することも可能である（例えば、ＥＰ３８８，１５１ Ａ１、ＵＳ５，６２４，８２１およびＵＳ５，６４８，２６０を参照されたい）。ネズミまたは他の種の免疫グロブリンに適用した場合、これらの機能を減少させるかまたは除去するであろう、類似の種類の改変を記載することも可能である。
【０１０１】
例えば、明記される残基（単数または複数）を、側鎖上に適切な官能性を有する残基（単数または複数）で置き換えるか、あるいはグルタミン酸またはアスパラギン酸などの荷電官能基を導入するか、あるいはおそらくフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはアラニンなどの芳香族非極性残基を導入することによって、ＦｃＲ（例えばＦｃガンマＲ１）またはＣ１ｑ結合に関する抗体（例えばＩｇＧ、例えばヒトＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を改変することが可能である（例えばＵＳ５，６２４，８２１を参照されたい）。
【０１０２】
１つの態様において、ＩＬ−２１Ｒのアゴニストは、ＩＬ−２１Ｒおよび別の受容体サブユニット、例えばγｃと相互作用する剤である。例えば、剤は、ＩＬ−２１Ｒおよび別の受容体サブユニット、例えばγｃと相互作用するタンパク質であることも可能である。該タンパク質は、例えば、ＩＬ−２１Ｒと相互作用する１つの抗原結合部位、およびγｃと相互作用する別の抗原結合部位を含む、二重特異性抗体であることも可能である。こうしたタンパク質の結合を用いて、受容体を架橋し、そしてアゴナイズし、例えばＳＴＡＴ３またはＳＴＡＴ５のシグナル伝達を活性化するかまたは増加させることも可能である。
【０１０３】
１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１およびＩＬ−２１Ｒの一方または両方と結合することによって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ相互作用を安定化させる剤（例えば免疫グロブリン）である。
【０１０４】
当該技術分野に知られる方法を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒタンパク質のアゴニストを、例えば、ＩＬ−２１Ｒポリペプチドの結合および／または活性化に関してスクリーニングすることも可能である。固定されているかまたは固定されていない、望ましい結合タンパク質を用いた結合アッセイが当該技術分野に知られ、そして本明細書記載のＩＬ−２１Ｒタンパク質を用いて、この目的のために使用可能である。精製した細胞に基づくスクリーニングアッセイまたはタンパク質に基づく（細胞不含）スクリーニングアッセイを用いて、こうしたアゴニストを同定することも可能である。例えば、ＩＬ−２１Ｒタンパク質をキャリアー上に精製型で固定し、そして精製ＩＬ−２１Ｒタンパク質に対する潜在的なリガンドの結合を測定することも可能である。ＩＬ−２１Ｒ活性およびＳＴＡＴ３またはＳＴＡＴ５のシグナル伝達を評価するための細胞に基づくアッセイが知られる。例を本明細書に記載する。
【０１０５】
薬剤組成物
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、薬学的に許容しうるキャリアーと組み合わせると、薬剤組成物として用いることも可能である。こうした組成物は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストおよびキャリアーに加えて、多様な希釈剤、増量剤（ｆｉｌｌｅｒ）、塩、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤、および当該技術分野に周知の他の物質を含有することも可能である。用語「薬学的に許容しうる」は、活性成分（単数または複数）の生物学的活性の有効性に干渉しない、非毒性物質を意味する。キャリアーの特性は、投与経路に応じるであろう。
【０１０６】
薬剤組成物は、以下に詳細に記載するような他の抗炎症剤をさらに含有することも可能である。こうしたさらなる因子および／または剤を薬剤組成物中に含んで、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストとの相乗効果を生じるか、またはＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストに引き起こされる副作用を最小限にすることも可能である。逆に、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを特定の抗炎症剤の配合物に含んで、抗炎症剤の副作用を最小限にすることも可能である。
【０１０７】
薬剤組成物は、リポソームの形であることも可能であり、この場合は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストが、他の薬学的に許容しうるキャリアーに加えて、水性溶液中のミセル、不溶性単層、液体結晶、または薄板状層として、凝集された形で存在する、脂質などの両親媒性剤と組み合わされている。リポソーム配合物に適した脂質には、限定なしに、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸等が含まれる。こうしたリポソーム配合物の調製は、すべて本明細書に援用される、米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号に開示されるように、当該技術分野の技術レベル内である。
【０１０８】
本明細書において、用語「療法的有効量」は、薬剤組成物または方法の各活性構成要素の総量が、患者の意義ある利益、例えばこうした状態の症状の改善、その回復、または回復速度の増加を示すのに十分であることを意味する。単独で投与される個々の活性成分に適用した場合、該用語は、その成分のみを指す。併用に適用した場合、該用語は、連続してまたは同時に、併用投与したのであれ、療法効果を生じる活性成分の組み合わせた量を指す。
【０１０９】
治療法または使用の実施において、療法的有効量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを被験者、例えば哺乳動物（例えばヒト）に投与する。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを、単独で、または抗炎症剤を使用する治療などの他の療法と併用して投与することも可能である。１以上の剤と同時投与する場合、ＩＬ−２１および／またはＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを第二の剤と同時に、または連続して投与することも可能である。連続して投与する場合、他の剤と併用してＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを投与するのに適した順序を主治医が決定することも可能である。
【０１１０】
薬剤組成物中で用いるか、または本発明の方法を実施する、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストの投与を、経口摂取、頭蓋内、吸入、または皮膚、皮下、または静脈内注射または投与などの多様な慣用法で行うことも可能である。例えば、硬膜外または別の方式で、例えば脳脊髄液に組成物を搬送することも可能である。
【０１１１】
療法的有効量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを経口投与する場合、結合剤は、錠剤、カプセル、粉末、溶液またはエリキシル剤の形であろう。錠剤型で投与する場合、薬剤組成物は、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体キャリアーをさらに含有することも可能である。錠剤、カプセル、および粉末は、約５〜９５％の結合剤、そして好ましくは約２５〜９０％の結合剤を含有する。液体型で投与する場合、水、石油、動物または植物起源の油、例えばピーナツ油、ミネラルオイル、大豆油、またはゴマ油、あるいは合成油などの液体キャリアーを添加することも可能である。薬剤組成物の液体型は、生理学的生理食塩水溶液、デキストロースまたは他の糖類溶液、あるいはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールをさらに含有することも可能である。液体型で投与する場合、薬剤組成物は、重量約０．５〜９０％の結合剤、そして好ましくは、約１〜５０％の結合剤を含有する。
【０１１２】
療法的有効量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを静脈内、皮膚または皮下注射によって投与する場合、結合剤は、発熱物質不含の非経口的に許容しうる水性溶液の形であろう。ｐＨ、等張性、安定性等を十分考慮した、こうした非経口的に許容しうるタンパク質溶液の調製は、当該技術分野の範囲内である。静脈内、皮膚、または皮下注射に好ましい薬剤組成物は、結合剤に加えて、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンゲル注射液、または当該技術分野に知られる他のビヒクルなどの等張ビヒクルを含有しなければならない。本発明の薬剤組成物はまた、安定化剤、保存剤、緩衝剤、酸化防止剤、または当業者に知られる他の添加剤も含有することも可能である。
【０１１３】
本発明の薬剤組成物中のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストの量は、治療する状態の性質および重症度、並びに患者が経験した以前の治療の性質に応じることも可能である。主治医は、各個々の患者を治療するアゴニストの量を決定することも可能である。例えばまず、主治医は、低用量の結合剤を投与し、そして患者の反応を観察することも可能である。患者にとって最適な療法効果が得られるまで、より多い用量の結合剤を投与して、そして一般的にその時点で投薬量はさらに増加されないことも可能であるし、またはサイトカインレベルまたは１以上の症状を監視することによることも可能である。本発明の方法の実施に用いる多様な薬剤組成物が、体重ｋｇあたり、約０．１μｇ〜約１００ｍｇのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを含有すべきであることが意図される。例えば、有用な投薬量には、体重ｋｇあたり、約１０μｇ〜１ｍｇ、０．１〜５ｍｇ、および３〜５０ｍｇのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが含まれることも可能である。ＩＬ−２１の有用な投薬量には、さらに、体重ｋｇあたり、約５μｇ〜１ｍｇ、０．１〜５ｍｇ、および３〜２０ｍｇのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが含まれることも可能である。
【０１１４】
薬剤組成物を用いた静脈内療法の期間は、治療する疾患の重症度、並びに各個々の患者の状態および潜在的な固有の反応に応じて多様であることも可能である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストの各適用期間は、連続静脈内投与では、例えば１２〜２４時間の範囲内であることも可能である。主治医は、本発明の薬剤組成物を用いた静脈内療法の適切な期間を決定することも可能である。
【０１１５】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１アゴニストに加えて、こうしたアゴニストがタンパク質である場合、こうしたタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与または使用（例えば遺伝子治療またはＤＮＡの導入に適したベクター中）によって、疾患または障害を治療するかまたは防止することも可能である。
【０１１６】
免疫応答を増進するためのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストの使用
１つの側面において、本発明は、被験者において、神経系の免疫学的障害（例えば多発性硬化症を含む、神経系の慢性免疫学的障害）を治療する（例えば治癒させる、抑制する、改善する、該障害の開始を遅延させるかまたは防止する、あるいは該障害の反復または再発を防止する）かまたは防止するための方法を提供する。該方法は：免疫細胞活性および／または細胞数を調節する（例えばサイトカインレベル、例えばサイトカイン発現、産生および／または放出を調節する）のに十分な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを被験者に投与し、それによって、神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を治療するかまたは防止することを含む。
【０１１７】
多発性硬化症（ＭＳ）は、炎症およびミエリン鞘の欠損によって特徴付けられる中枢神経系の疾患であり、ミエリン鞘は、神経を絶縁し、そして適切な神経機能に必要な脂肪性物質である。ＩＬ−２１が調節する免疫応答から生じる炎症を、本明細書記載のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストで防止するかまたは治療することも可能である。多発性硬化症の実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）マウスモデル（Ｔｕｏｈｙら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８）１４１：１１２６−１１３０）、Ｓｏｂｅｌら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：２３９３−２４０１）、およびＴｒａｕｇｏｔｔ（Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８９）１１９：１１４−１２９））において、ＥＡＥ誘導前に、ＩＬ−２１注射でマウスを処置すると、疾患の症状が減少する。したがって、本明細書記載のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを同様に用いて、ヒトにおける多発性硬化症を治療するかまたは防止することも可能である。
【０１１８】
ＭＳ診断に関するワークショップによって定義されるような、臨床的に明確なＭＳの診断を確立する基準によって、こうした治療に適した患者を同定することも可能である（Ｐｏｓｅｒら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１３：２２７，１９８３）。簡潔には、臨床的に明確なＭＳを患う個体は、２回の発作を経験し、そして２つの病巣の臨床的徴候、または１つの病巣の臨床的徴候および別の離れた病巣のパラクリニカル（ｐａｒａｃｌｉｎｉｃａｌ）徴候のいずれかを有する。明確なＭＳはまた、２回の発作および脳脊髄液中のＩｇＧの少クローン性バンドによって、あるいは発作、２つの病巣の臨床的徴候および脳脊髄液中の少クローン性バンドの組み合わせによって、診断されることも可能である。臨床的に可能性があるＭＳの診断には、わずかに低い基準を用いる。
【０１１９】
いくつかの異なる方式で、多発性硬化症に有効な治療を調べることも可能である。以下の基準のいずれかを満たせば有効な治療であることの証明となる。３つの主な基準を用いる：ＥＤＳＳ（長期身体障害状態スケール）、再燃（ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎ）の出現またはＭＲＩ（磁気共鳴画像化法）。ＥＤＳＳは、ＭＳによる臨床的な機能障害を等級分けする手段である（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ３３：１４４４，１９８３）。神経学的機能障害の種類および重症度に関して、８つの機能系を評価する。簡潔には、治療前に、以下の系の機能障害に関して患者を評価する：錐体、小脳、脳幹、感覚、腸および膀胱、視覚、大脳、および他のもの。規定の間隔で、経過観察を行う。スケールは、０（正常）から１０（ＭＳによる死亡）の範囲である。１つの完全な段階の減少は、本発明の背景において、治療が有効であることと定義される（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：５７３−７９，１９９４）。再燃は、ＭＳに起因し、そして適切な新規神経学的異常が伴う、新たな症状の出現と定義される（ＩＦＮＢ ＭＳ研究グループ、上記）。さらに、再燃は、少なくとも２４時間持続しなければならないし、そして少なくとも３０日間の安定または改善の後でなければならない。簡潔には、患者は、臨床家による標準的神経学的検査を受ける。再燃は、神経学的評価スケール（Ｓｉｐｅら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ３４：１３６８，１９８４）の変化にしたがうと、軽度、中程度、または重度いずれかである。年間再燃率および再燃がない患者の比率を決定する。これらの測定値のいずれかに関して、処置群およびプラセボ群の間に、再燃率または再燃がない患者の比率に統計的に有意な相違がある場合、療法は有効であると見なされる。さらに、最初の再燃までの時間および再燃期間および重症度もまた、測定可能である。これに関して、療法としての有効性の測定値は、対照群に比較して、処置群における、最初の再燃までの時間または再燃期間および重症度の統計的に有意な相違である。
【０１２０】
ＭＲＩを用いて、ガドリニウム−ＤＴＰＡ増進画像化法（ＭｃＤｏｎａｌｄらＡｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：１４，１９９４）を用い、活性病巣を測定するか、またはＴ２加重技術を用い、病巣の位置および範囲を測定することも可能である。簡潔には、ベースラインＭＲＩを得る。続く研究各々で、同じ画像化平面および患者の体位を用いる。体位取りおよび画像化の順序を選択して、病巣検出を最大限にし、そして病巣追跡を容易にすることも可能である。続く研究では、同じ体位取りおよび画像化の順序を用いることも可能である。放射線医が、ＭＳ病巣の存在、位置および範囲を決定することも可能である。病巣領域の輪郭を描き、そして総病巣領域に関して、スライスごとに合計することも可能である。３つの解析を行うことも可能である：新規病巣の徴候、活性病巣出現率、病巣領域の変化パーセント（Ｐａｔｙら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４３：６６５，１９９３）。ベースラインに比較して個々の患者において、またはプラセボ群に対して治療群において、統計的に有意な改善があることによって、療法による改善を確立することも可能である。
【０１２１】
多発性硬化症に関連する典型的な症状には：視神経炎、複視、眼振、眼の測定障害、核間性眼筋麻痺、運動および音の眼内せん光、求心性瞳孔障害、不全麻痺、単不全麻痺、不全対麻痺、片側不全麻痺、四肢不全麻痺（ｑｕａｄｒａｐａｒｅｓｉｓ）、麻痺（ｐｌｅｇｉａ）、対麻痺、片麻痺、四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ、ｑｕａｄｒａｐｌｅｇｉａ）、痙縮、講語障害、筋萎縮、攣縮、痙攣、低血圧、クローヌス、筋クローヌス、筋波動症、下肢不安症候群、垂足、機能不全反射、錯感覚症、無感覚症、神経痛、神経障害性および神経原性の痛み、レルミット徴候、固有受容機能不全、三叉神経痛、運動失調症、企図振戦、測定障害、前庭性運動失調、めまい、言語行動失調、筋緊張異常、拮抗運動反復不全、頻尿、膀胱痙縮、膀胱弛緩、排尿筋−膀胱括約筋協調障害、勃起機能障害、性感異常症、冷感症、便秘、便意逼迫、糞便失禁、抑うつ症、認知機能障害、痴呆、躁うつ、感情的不安定性、多幸症、二極性症候群、不安症、失語症、神経性不全失語症、易疲労、ウトホフ症状、胃食道逆流、および睡眠障害が含まれる。
【０１２２】
防止の候補患者は、遺伝的要因の存在によって同定可能である。例えば、ＭＳ患者の大部分は、ＨＬＡ ＤＲ２ａ型およびＤＲ２ｂ型を有する。治療に適切な、ＭＳに遺伝的傾向を有するＭＳ患者は、２つの群に属する。第一群は、再発寛解型の初期疾患患者である。エントリー基準には、疾患期間１年未満、１．０〜３．５のＥＤＳＳスコア、年間０．５より高い再燃率、および研究前の２ヶ月間、臨床的再燃がないことが含まれることも可能である。第二群には、過去２年間に渡って、１．０ＥＤＳＳ単位／年より高い疾患進行の患者が含まれるであろう。防止の候補患者は、サイトカイン・パラメーター、例えばＩＬ−１０またはＩＬ−２１パラメーターを評価することによって、同定可能である。
【０１２３】
防止の背景において、以下の基準に基づいて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの有効性を判断する：限界希釈によって決定される、ＭＢＰ応答性Ｔ細胞の頻度、ＭＢＰ応答性Ｔ細胞株およびクローンの増殖応答、患者から確立されたＭＢＰに対するＴ細胞株およびクローンのサイトカイン・プロフィール。応答性細胞頻度の減少、天然のものに比較して改変されたペプチドを用いた場合のチミジン取り込みの減少、並びにＴＮＦおよびＩＦＮ−αの減少によって、有効性を確認する。臨床測定値には、１年および２年間隔の再発率、およびＥＤＳＳの変化が含まれ、６ヶ月間持続する、ＥＤＳＳ上１．０単位のベースラインからの進行までの時間が含まれる。カプラン・メイヤー曲線上で、身体障害の進行持続が遅延していれば、有効性が示される。他の基準には、ＭＲＩ上のＴ２画像の面積および体積の変化、並びにガドリニウム増進画像によって決定される病巣の数および体積の変化が含まれる。
【０１２４】
１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばその薬剤組成物を、併用療法において投与する、すなわち他の剤、例えば脳の免疫および炎症障害、例えば多発性硬化症などの病的状態または障害を治療するのに有用な療法剤と併用する。用語「併用」は、この背景において、同時にまたは連続していずれかで、実質的に同時期に投与することを意味する。連続して投与した場合、第二の化合物投与の開始時に、好ましくは、２つの化合物の第一のものは、治療部位で、なお有効濃度で検出可能である。
【０１２５】
例えば、併用療法には、１以上のさらなる療法剤、例えば以下により詳細に記載するような、１以上のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害剤または細胞分裂停止剤と同時配合され、そして／または同時投与される、１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（例えばＩＬ−２１ポリペプチドまたは融合タンパク質、ペプチドアゴニストまたは小分子アゴニスト）が含まれることも可能である。さらに、本明細書記載の１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを本明細書記載の２以上の療法剤と併用することも可能である。こうした併用療法は、より低い投薬量で投与された療法剤を好適に利用し、したがって多様な単剤療法に関与する、ありうる毒性または合併症を回避することも可能である。さらに、本明細書に開示する療法剤は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ受容体経路と異なる経路に作用して、そしてしたがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの効果を増進し、そして／またはこうした効果と同調すると予期される。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと併用する、好ましい療法剤は、自己免疫およびそれに続く炎症性応答の異なる段階に干渉する剤である。
【０１２６】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと併用可能な、多発性硬化症を治療するかまたは防止するための剤の限定されない例には、以下が含まれる：インターフェロン、例えばインターフェロン−ベータ−１α（例えばアボネックスＴＭ；Ｂｉｏｇｅｎ）およびインターフェロン−１β（ベタセロンＴＭ；１７位が置換されたヒト・インターフェロンβ；Ｂｅｒｌｅｘ／Ｃｈｉｒｏｎ）、酢酸グラティラマー（コポリマー１、Ｃｏｐ−１とも称される；コパキソンＴＭ；Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）；本明細書記載のＴＮＦアンタゴニスト；コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキセート；４−アミノプリン；およびチザニジン。ＩＬ−２１アゴニストと併用可能なさらなるアンタゴニストには、他のヒト・サイトカインまたは増殖因子、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦに対する抗体またはそれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書記載のＩＬ−２１アゴニストを、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と併用することも可能である。ＩＬ−２１アゴニストを、メトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン・アゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動剤、本明細書記載の炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達に干渉する剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤（例えばＶｘ７４０）、抗Ｐ７、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、本明細書記載の可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体、並びに抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦ）。
【０１２７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと併用可能な、多発性硬化症を治療するかまたは防止するための療法剤の例には、インターフェロン−β、例えばＩＦＮβ−１αおよびＩＦＮβ−１β、酢酸グラティラマー（例えばコパキソン（登録商標））、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体、並びにＩＬ−１２アンタゴニストが含まれる。さらなる例には、ＭＳの１以上の症状または副作用を治療するのに使用可能な剤、例えばアマンタジン、バクロフェン、ミネラルオイル、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドキュセート、シプロフロキサシン、ペモリン、ダントロレン、デスモプレッシン、デスモプレッシン、デキサメタゾン、プレドニゾン、トルテロジン（ｔｏｌｔｅｒｏｄｉｎｅ）、フェニトイン、オキシブチニン、オキシブチニン（持続放出配合）、ビサコジル、ベンラファクシン、アミトリプチリン、ドキュセート便柔軟剤便秘薬、リン酸ナトリウム、メテナミン、バクロフェン（クモ膜下内）、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、車前子親水性粘漿剤、アルプロスタジル、ギャバペンチン、ミトキサントロン、オキシブチニン、ノルトリプチリン、パロキセチン、水酸化マグネシウム、臭化プロパンテリン、アルプロスタジル、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、グリセリン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、チザニジン、およびセルトラリンが含まれる。
【０１２８】
こうした剤の例には、ＩＬ−１２アンタゴニスト、例えばＩＬ−１２（好ましくはヒトＩＬ−１２）に結合する、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体（またはその抗原結合断片）、例えばＷＯ００／５６７７２、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＢＡＳＦに開示される抗体；ＩＬ−１２受容体阻害剤、例えばヒトＩＬ−１２受容体に対する抗体；およびＩＬ−１２受容体、例えばヒトＩＬ−１２受容体の可溶性断片が含まれる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例には、ＩＬ−１５またはその受容体に対する抗体（またはその抗原結合断片）、例えばヒトＩＬ−１５またはその受容体に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体、ＩＬ−１５受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１５結合タンパク質が含まれる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例には、ヒトＩＬ−１８に対する抗体、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体（またはその抗原結合断片）、ＩＬ−１８受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、Ｍａｌｌｅｔら（２００１）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２８）が含まれる。ＩＬ−１アンタゴニストの例には、Ｖｘ７４０などのインターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤、ＩＬ−１アンタゴニスト、例えばＩＬ−１ＲＡ（ＡＮＩＫＩＮＲＡ、ＡＭＧＥＮ）、ｓＩＬ１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）、および抗ＩＬ−１受容体抗体（またはその抗原結合断片）が含まれる。
【０１２９】
ＴＮＦアンタゴニストの例には、ＴＮＦ（例えばヒトＴＮＦα）に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体（またはその抗原結合断片）、例えばＤ２Ｅ７（ヒトＴＮＦα抗体、Ｕ．Ｓ．６，２５８，５６２、ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体、レミケードＴＭ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；抗ＴＮＦ抗体断片（例えばＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体の可溶性断片またはその誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ；Ｉｍｍｕｎｅｘ；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａを参照されたい）、ｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（レネルセプトＴＭ））；酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤（例えばアルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、ＷＯ０１／５５１１２、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ ３３３３、−００５、または−０２２）；およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８４；Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照されたい）が含まれる。好ましいＴＮＦアンタゴニストは、ＴＮＦ受容体の可溶性断片、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ、およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤である。
【０１３０】
他の態様において、本明細書に記載するＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、以下の１以上と併用投与することも可能である：ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３）および／またはＩＬ−１３に対する抗体；ＩＬ−２アンタゴニスト、例えばＤＡＢ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇｅｎ、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６，１２２３を参照されたい）、および／またはＩＬ−２Ｒに対する抗体、例えば抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒ；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０ Ｍａｒ １；５０（５）：１４９５−５０２を参照されたい））。さらに別の併用には、非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤（ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ ２１０３９６（非枯渇性霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ））と併用するＩＬ−２１アンタゴニストが含まれる。さらに他の好ましい併用には、抗体、可溶性受容体、またはアンタゴニスト性リガンドを含む、ＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）同時刺激経路のアンタゴニスト；それとともに、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）；抗炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ ５２０００；組換えＩＬ−１０、ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３およびＴＧＦ、並びにそのアゴニスト（例えばアゴニスト抗体）が含まれる。
【０１３１】
他の態様において、１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、１以上の抗炎症性薬剤、免疫抑制剤、あるいは代謝阻害剤、または酵素阻害剤と同時配合し、そして／または同時投与することも可能である。本明細書に記載するＩＬ−２１アゴニストと併用可能な薬剤または阻害剤の限定されない例には、限定されるわけではないが：非ステロイド性抗炎症性薬剤（単数または複数）（ＮＳＡＩＤ）、例えばイブプロフェン、テニダップ（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８０を参照されたい）、ナプロキセン（例えばＮｅｕｒｏ Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７，ｐｐ．１２０９−１２１３を参照されたい）、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナク、およびインドメタシン）；スルファサラジン（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８１を参照されたい）；プレドニゾロンなどのコルチコステロイド；サイトカイン抑制性抗炎症性薬剤（単数または複数）（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成の阻害剤、例えばプリン生合成の阻害剤、葉酸アンタゴニスト（例えばメトトレキセート（Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸））；およびピリミジン生合成の阻害剤、例えばジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えばレフルノミド（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１０３−１０７を参照されたい）））の１以上が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと併用する好ましい療法剤には、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、ＤＨＯＤＨ阻害剤（例えばレフルノミド）、および葉酸アンタゴニスト（例えばメトトレキセート）が含まれる。
【０１３２】
さらなる阻害剤の例には：コルチコステロイド（経口、吸入、および局所注射）；免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲ阻害剤例えばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えばエステル・ラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ−７７９（Ｅｌｉｔ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３（８）：１２４９−５３；Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ら（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３（２）：２９５−３０４））；ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達に干渉する剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブおよびその変異体、ＭＫ−９６６、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ８１を参照されたい）；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばＲ９７３４０１、（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害剤；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２を参照されたい）；ホスホリパーゼ阻害剤、例えば細胞質ゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤（例えばトリフルオロメチルケトン類似体（Ｕ．Ｓ．６，３５０，８９２））；血管内皮細胞増殖因子または増殖因子受容体の阻害剤、例えばＶＥＧＦ阻害剤および／またはＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤；および血管形成阻害剤の１以上が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと併用する、好ましい療法剤には、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えばエステル・ラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ−７７９）；ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブおよびその変異体；およびホスホリパーゼ阻害剤、例えば細胞質ゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤（例えばトリフルオロメチルケトン類似体）が含まれる。
【０１３３】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと併用可能な療法剤のさらなる例には：６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）；アザチオプリン；スルファサラジン；メサラジン；オルサラジン；クロロキニン／ヒドロキシクロロキン；ペニシラミン；アウロチオールナレート（ａｕｒｏｔｈｉｏｒｎａｌａｔｅ）（筋内および経口）；アザチオプリン；コルヒチン；ベータ−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒａｌ））；キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）；クロモグリク酸；ネドクロミル；ケトチフェン；イプラトロピウムおよびオキシトロピウム；ミコフェノール酸モフェチル；アデノシン・アゴニスト；抗血栓剤；補体阻害剤；およびアドレナリン作用剤の１以上が含まれる。
【０１３４】
本発明の別の側面は、したがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと他の療法化合物の併用投与を行うためのキットに関する。１つの態様において、該キットは、薬剤キャリアー中で配合された１以上の結合剤、および１以上の別個の薬剤調製物中で適切であるように配合された、少なくとも１つの剤、たとえば療法剤を含む。
【０１３５】
サイトカインレベルを評価するアッセイ
標準的アッセイいずれかを用いて、試料または被験者中のサイトカインレベルを評価することも可能である。例えば、被験者から試料を得るか、または試料が培養細胞を含むことも可能である。典型的な試料は、１以上の細胞、組織、あるいは血液、尿、リンパ液、脳脊髄液、または漿液などの体液、培養細胞（例えば組織培養細胞）、頬スワブ、洗口液、便、組織切片、および生検物質（例えば生検吸引物）から得られるか、またはこれらに由来することも可能である。
【０１３６】
サイトカインレベルを評価するための方法は、核酸を評価して、目的のサイトカイン（例えばＩＬ−１０またはＩＬ−２１）をコードするｍＲＮＡまたはｃＤＮＡを検出するか、またはタンパク質を評価して、サイトカイン自体を検出することを含む。例えばＲＴ−ＰＣＲ（例えば定量的ＰＣＲ）または核酸マイクロアレイを用いて、核酸を評価することも可能である。例えば質量分析またはイムノアッセイを用いて、タンパク質を評価することも可能である。
【０１３７】
ＥＬＩＳＡは、イムノアッセイの１つの好適な型を提供する。例えば、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カリフォルニア州カマリロは、＜０．２ｐｇ／ｍｌの感度でＩＬ−１０を、そして＜２ｐｇ／ｍｌの感度でＩＬ−１２を検出するのに使用可能なアッセイ試薬を提供する。同様に、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓは、＜８ｐｇ／ｍｌの感度でＩＦＮ−γを、または＜７ｐｇ／ｍｌの感度でＴＧＦ−ベータ１を検出する試薬を提供する。
【０１３８】
ＳＥＡＲＣＨＬＩＧＨＴＴＭプロテオームアレイ系（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｂｏｓｔｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ）は、多数のサイトカインを一度に評価する包括的試薬を提供する。
【０１３９】
これらの方法を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの投与を評価することも可能である。例えば、こうしたアゴニストが、サイトカイン、例えばＩＬ−１０またはＩＦＮγのレベルに統計的に有意な変化を引き起こすかどうかを決定するか、あるいはこうしたアゴニストが、許容しうる変化、例えばサイトカイン、例えばＩＬ−１０またはＩＦＮγの正常範囲内レベルへの変化を引き起こすかどうかを決定する。評価から得られる情報を用いて、アゴニストの投薬量を調節することも可能である。例えば、ＩＬ−１０レベルが正常被験者の範囲内のレベルに増加しない場合、例えば投薬量または頻度を増加させることによって、アゴニストの投与を増加させることも可能である。逆に、ＩＬ−１０レベルが、望ましい範囲を超えて増加している場合、例えば投薬量または頻度を減少させることによって、アゴニストの投与を減少させることも可能である。
【０１４０】
免疫活性化因子としてのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの活性を評価するためのアッセイ
免疫系の活性化因子としてのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの活性を、とりわけ、以下の方法によって測定することも可能である：
胸腺細胞または脾臓細胞傷害性に適したアッセイには、限定なしに：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ． Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ監修，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行（第３章，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；第７章，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｏｗｍａｎｅｔら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６１：１９９２−１９９８；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｒｏｗｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３０７９−３０９２，１９９４に記載されるものが含まれる。
【０１４１】
Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびアイソタイプスイッチングに関するアッセイ（とりわけ、Ｔ細胞依存性抗体応答を調節し、そしてＴｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響を及ぼすタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：３０２８−３０３３，１９９０；並びにＡｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｂ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｍｏｎｄ，Ｊ．Ｊ．およびＢｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｍ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．３．８．１−３．８．１６，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９４に記載されるものが含まれる。
【０１４２】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（とりわけ、主にＴｈ１およびＣＴＬ応答を生じるタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ監修，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行（第３章，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；第７章，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２に記載されるものが含まれる。
【０１４３】
樹状細胞依存性アッセイ（とりわけ、未刺激（ｎａｉｖｅ）Ｔ細胞を活性化する、樹状細胞に発現されるタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｇｕｅｒｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：５３６−５４４，１９９５；Ｉｎａｂａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７３：５４９−５５９，１９９１；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５４：５０７１−５０７９，１９９５；Ｐｏｒｇａｄｏｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １８２：２５５−２６０，１９９５；Ｎａｉｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６７：４０６２−４０６９，１９９３；Ｈｕａｎｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：９６１−９６５，１９９４；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １６９：１２５５−１２６４，１９８９；Ｂｈａｒｄｗａｊら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ９４：７９７−８０７，１９９４；およびＩｎａｂａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７２：６３１−６４０，１９９０に記載されるものが含まれる。
【０１４４】
リンパ球生存／アポトーシスに関するアッセイ（とりわけ、スーパー抗原誘導後、アポトーシスを防止するタンパク質、およびリンパ球ホメオスタシスを制御するタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １３：７９５−８０８，１９９２；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ７：６５９−６７０，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：１９４５−１９５１，１９９３；Ｉｔｏｈら，Ｃｅｌｌ ６６：２３３−２４３，１９９１；Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４５：４０３７−４０４５，１９９０；Ｚａｍａｉら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １４：８９１−８９７，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １：６３９−６４８，１９９２に記載されるものが含まれる。
【０１４５】
Ｔ細胞拘束および発達の初期段階に影響を及ぼすタンパク質に関するアッセイには、限定なしに：Ａｎｔｉｃａら，Ｂｌｏｏｄ ８４：１１１−１１７，１９９４；Ｆｉｎｅら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５５：１１１−１２２，１９９４；Ｇａｌｙら，Ｂｌｏｏｄ ８５：２７７０−２７７８，１９９５；Ｔｏｋｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８８：７５４８−７５５１，１９９１に記載されるものが含まれる。
【０１４６】
ＳＴＡＴの活性化を評価するためのアッセイは、例えばＧｉｌｍｏｕｒら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：１０７７２−１０７７６に記載される。例えば評価する細胞（例えばアゴニストまたは候補アゴニストで処理した細胞）を溶解し、そして抗ホスホチロシン抗体を用いて、チロシンリン酸化タンパク質を免疫沈降することも可能である。次いで、シグナル伝達経路構成要素に特異的な抗体、例えばＳＴＡＴタンパク質、例えばＳＴＡＴ５に対する抗体を用いて、沈降した物質を評価することも可能である。
【０１４７】
サイトカイン産生および細胞増殖／分化の調節因子としてのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの活性を測定するためのアッセイ
限定なしに、３２Ｄ、ＤＡ２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（プレＢ Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬＬ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅおよびＣＭＫを含む細胞株に関する、いくつかの日常的な因子依存性細胞増殖アッセイのいずれか１つを用いて、サイトカイン産生および細胞増殖／分化の調節因子としてのＩＬ−２１／ＩＬ２１Ｒアゴニストの活性を試験することも可能である。
【０１４８】
Ｔ細胞または胸腺細胞増殖に関するアッセイには、限定なしに：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ監修，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行（第３章，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；第７章，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１７０６−１７１２，１９９０；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２；Ｂｏｗｍａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−１７６１，１９９４に記載されるものが含まれる。
【０１４９】
脾臓細胞、リンパ節細胞または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖に関するアッセイには、限定なしに：Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ａ．Ｍ．およびＳｈｅｖａｃｈ，Ｅ．Ｍ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．３．１２．１−３．１２．１４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９４；およびＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｒ．Ｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．８．１−６．８．８，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９４に記載されるものが含まれる。
【０１５０】
造血細胞およびリンパ球産生細胞の増殖および分化に関するアッセイには、限定なしに：Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ａｎｄ Ｍｕｒｉｎｅ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ４， Ｂｏｔｔｏｍｌｙ，Ｋ．，Ｄａｖｉｓ，Ｌ．Ｓ．およびＬｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．３．１−６．３．１２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９１；ｄｅＶｒｉｅｓら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１２０５−１２１１，１９９１；Ｍｏｒｅａｕら，Ｎａｔｕｒｅ ３３６：６９０−６９２，１９８８；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２９３１−２９３８，１９８３；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６−−Ｎｏｒｄａｎ，Ｒ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．６．１−６．６．５，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９１；Ｓｍｉｔｈら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：１８５７−１８６１，１９８６；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ｌｌ−−Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｆ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．１５．１ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９１；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ９−−Ｃｉａｒｌｅｔｔａ，Ａ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．１３．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９１に記載されるものが含まれる。
【０１５１】
抗原に対するＴ細胞クローン応答に関するアッセイ（とりわけ、増殖およびサイトカイン産生を測定することによって、ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響を及ぼすとともに、Ｔ細胞効果を達成するタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ監修，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｈｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行（第３章，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ；第６章，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；第７章，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７７：６０９１−６０９５，１９８０；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１１：４０５−４１１，１９８１；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８に記載されるものが含まれる。
【０１５２】
以下の限定されない実施例において、我々は、とりわけ、ＩＬ−２１がＥＡＥマウスにおいて、部分的保護を生じることを立証する。
【実施例】
【０１５３】
実施例：ＩＬ−２１はＥＡＥマウスにおいて、部分的保護を生じる
試薬
マウス
メスＣ５７ＢＬ／６マウスおよびメスＳＪＬ／ＪマウスをＴｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得た。動物をＡＡＡＬＡＣ認可バリア施設内で飼育し、そして寄生虫とともに細菌およびウイルス病原体に関して監視した。すべてのマウスを８〜１０週齢で用いた。
【０１５４】
増殖応答
マウス・オリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）３５−５５ペプチドに曝露したＣ５７ＢＬ／６メスマウスのリンパ節細胞を、免疫２０日後にマウスから採取した。１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するダルベッコの修飾イーグル培地（ＤＭＥ）中で細胞を培養した。ＭＯＧ３５−５５ペプチド（２５μｇ／ｍｌ）で細胞を再刺激し、そしてネズミＩＬ−２１の存在下または非存在下で、平底９６ウェルマイクロタイタープレート中で増殖させた。７２時間後、０．５μＣｉのトリチル化チミジン／ウェルでプレートをパルス処理し、そして４〜６時間インキュベーションした。シンチレーションカウンターによって、３つ組ウェルにおけるＤＮＡ中のチミジンの平均取り込みを測定した。
【０１５５】
サイトカイン定量化
免疫マウス由来のリンパ節細胞を、２５μｇ／ｍｌのＭＯＧ３５−５５ペプチドで、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化した。１０％ＦＣＳおよびＩＬ−２（１０Ｕ／ｍｌ）および５ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌの範囲の多様な濃度のネズミＩＬ−２１を含有する（ＤＭＥ）中で、細胞を培養した。７２時間後、培養上清を収集し、そしてＳＥＡＲＣＨＬＩＧＨＴＴＭプロテオームアレイ系（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｂｏｓｔｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ）を用いて、サイトカインおよびケモカイン産生に関して解析した。
【０１５６】
実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）の誘導および評価
８００μｇのヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を補った完全フロイントアジュバント中で乳化した１００μｇのプロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ）１３９−１５１ペプチドを皮下注射して、メスＳＪＬ／Ｊマウスを免疫した。免疫時および４８時間後に、４００ｎｇの百日咳毒素（Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）もまた、マウスに腹腔内注射した。以下のスケールにしたがって、ＥＡＥの臨床的徴候に関して、動物を毎日スコア付けした：０、疾患なし、１、足を引きずる；２、後肢が弱いかまたは部分的麻痺；３、後肢完全麻痺；４、前肢および後肢麻痺、並びに５、瀕死。各群のマウスの個々のスコアを平均することによって、平均臨床スコアを計算した。
【０１５７】
ｉｎ ｖｉｖｏのＩＬ−２１投与
ＥＡＥに感作したマウスに、０．２ｍｌのＰＢＳ中、１００ｎｇ／日または１μｇ／日のネズミＩＬ−２１を腹腔内注射した。対照マウスに０．２ｍｌの生理食塩水を投与した。ＰＬＰ１３９−１５１ペプチドで免疫する前日に処置を始め、そして総数１０用量を１日おきに続けて与えた。
【０１５８】
ネズミＩＬ−２１に誘導される増殖応答およびサイトカイン産生
ＭＯＧ３５−５５特異的Ｔ細胞応答の誘導および拡大に対するＩＬ−２１の影響を評価した。結果によって、ＩＬ−２１が用量依存方式でリンパ球の増殖を誘導することが示される。図１Ａおよび表１において、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２１と培養したリンパ球は、ペプチドのみで刺激した細胞に比較して、３．５倍の有意な増殖増加を示した。サイトカインの力価決定（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）に際して、細胞は、対照細胞と同様の増殖能を示した。
表１：ＩＬ−２１の存在下でのリンパ球増殖
【０１５９】
【表１】
【０１６０】
図１Ｂは、１μｇ／ｍｌのプロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ）のみで処理した細胞に比較して、示した濃度のネズミＩＬ−２１（ｎｇ／ｍｌ）で培養したＰＬＰトランスジェニックマウス由来のＴ細胞の増殖増加を示す。
【０１６１】
増殖性Ｔ細胞応答が、サイトカイン産生と相関するかどうかを同定するため、リンパ球をＩＬ−２１と培養した。未処理細胞と比較して、ＩＬ−２１は、Ｔｈ２サイトカイン、ＩＬ−１０の分泌増加を誘導した。この応答は飽和性であり（図２および表２）、そしてＩＬ−２１の最高試験濃度（２５ｎｇ／ｍｌ）で、細胞は、対照群よりも、およそ２．５倍多いＩＬ−１０を産生した。
表２：ＩＬ−２１はＩＬ−１０分泌を誘導する
【０１６２】
【表２】
【０１６３】
図３は、対照細胞に比較して、示した濃度のネズミＩＬ−２１で処理した脾臓細胞によるＩＦＮγの分泌減少を示す。ＭＯＧ３３−５５で刺激した免疫マウス由来脾臓細胞に、ＩＬ−２１を添加すると、ＩＦＮγの２倍の減少が生じ、一方、ＩＬ−２１Ｒの添加は２倍の増加を生じる。リンパ節細胞をＩＬ−２１で処理すると、ＩＦＮγレベルが、２０，０００ｐｇ／ｍｌ（対照）または１５８４０ｐｇ／ｍｌ（偽処理）から３２６０ｐｇ／ｍｌ（ＩＬ−２１処理）に減少した。
【０１６４】
ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ処理の際のサイトカイン分泌変化を、以下のように表３に要約する。
表３：サイトカイン分泌の変化
【０１６５】
【表３】
【０１６６】
ＩＬ−２１で処置したマウスにおけるＥＡＥの発展
ＥＡＥの発展におけるＩＬ−２１の役割を決定するため、ＣＦＡ中の脳炎誘発性ＰＬＰ１３９−１５１ペプチドに加えて百日咳毒素でマウスを免疫し、そしてＩＬ−２１の予防的措置でこれらを処置した。生理食塩水またはＩＬ−２１で処置したマウスにおいて、ＥＡＥの臨床的経過を比較した。
【０１６７】
表４は、ネズミＩＬ−２１の存在下または非存在下で処理した２つの典型的なＰＬＰ培養物におけるサイトカイン分泌の平均変化を立証する。未処理対照細胞におけるサイトカインレベルを１００に基準化する。
表４
【０１６８】
【表４】
【０１６９】
図４および図５に示すように、対照マウスは疾患に非常に感受性である。対照的に、低用量（１００ｎｇ／日）または高用量（１μｇ／日）のＩＬ−２１のいずれかで処置したマウスは、より深刻でない臨床スコアを有した。
【０１７０】
図５および表５は、対照マウスに比較して、低用量（１００ｎｇ／日）または高用量（１μｇ／日）のネズミＩＬ−２１で処置したマウスにおける、ＥＡＥ重症度の減少を示す。
表５
【０１７１】
【表５】
【０１７２】
我々の発見によって、ＩＬ−２１がＥＡＥ進行の調節に関与し、そしてＩＬ−１０の上方制御によって、この経路が仲介されうることが示される。
本出願全体で引用される、すべての参考文献、係属中の特許出願および刊行特許の内容は、明確に本明細書に援用される。
【０１７３】
均等物
当業者は、日常的な実験以上のものを用いずに、本明細書記載の本発明の特定の態様の多くの均等物を認識するか、または確認することも可能である。こうした均等物は、請求項に含まれることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１７４】
【図１Ａ】図１Ａは、多様な希釈の２０ｎｇ／ｍｌのネズミＩＬ−２１の存在下で培養したリンパ節細胞の増殖増加を示す線グラフである。ペプチドのみで刺激した細胞に比較して、ＩＬ−２１は、例えば、１：５０希釈で、リンパ節細胞の増殖増加を引き起こした。
【図１Ｂ】図１Ｂは、プロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ）１μｇ／ｍｌのみで処理した細胞に比較して、示した濃度のネズミＩＬ−２１（ｎｇ／ｍｌ）および１μｇ／ｍｌのＰＬＰで培養したＰＬＰトランスジェニックマウス由来のＴ細胞の増殖増加を示す線グラフである。
【図２】図２は、未処理細胞に比較して、示した濃度のマウスＩＬ−２１の存在下でのＩＬ−１０の分泌増加を示す棒グラフである。応答は飽和性であり、そしてＩＬ−２１の最高試験濃度（２５ｎｇ／ｍｌ）で、細胞は、対照群のおよそ２．５倍多いＩＬ−１０を産生した。増加したレベルのＩＬ−１０が産生されたことから、ＩＬ−２１処理が、抗原特異的細胞をＴｈ２プロフィールに歪めうることが示唆される。
【図３】図３は、対照細胞に比較して、示した濃度のネズミＩＬ−２１で処理した脾臓細胞およびリンパ節細胞によるＩＦＮγの分泌の減少を示す棒グラフである。ＭＯＧ ３３−５５で刺激した免疫マウス由来脾臓細胞にＩＬ−２１を添加すると、ＩＦＮγの２倍の減少が生じ、一方、ＩＬ−２１Ｒの添加は２倍の増加を引き起こす。
【図４】図４は、ＥＡＥモデルにおける疾患の臨床的症状の減少を示す。この図は、ＩＬ−２１がＩＦＮγを抑制し、そしてＩＬ−１０を増進することを示す。図４は、ｉｎ ｖｉｖｏトランスファー後の日数に関して、未処理培養に比較して、ＩＬ−２１処理ＰＬＰ脾臓細胞で検出されるＥＡＥ症状の減少を示す線グラフである。
【図５】図５は、ＥＡＥモデルにおける疾患の臨床的症状の減少を示す。この図は、対照マウスに比較して、ネズミＩＬ−２１の低用量（１００ｎｇ／日）または高用量（１μｇ／日）いずれかで処置したマウスにおけるＥＡＥの重症度の減少を示す棒グラフである。
【配列表】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対するクロスリファレンス
本出願は、その内容が完全に本明細書に援用される、米国出願第６０／４５６，９２０号、２００３年３月２１日に優先権を請求する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１受容体アゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片を用いて、神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を治療するかまたは防止するための方法および組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
ヒトＩＬ−２１はサイトカインである。成熟型では、ＩＬ−２１は長さ約１３１アミノ酸であり、そしてＩＬ−２、ＩＬ−４およびＩＬ−１５に配列相同性を有する（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３）。インターロイキン・サイトカイン間の配列相同性が低いにもかかわらず、これらのサイトカインは、特徴的な「４らせん束」構造を含む、共通のフォールドを共有する。大部分のサイトカインは、クラスＩまたはクラスＩＩいずれかのサイトカイン受容体に結合する。クラスＩＩサイトカイン受容体には、ＩＬ−１０およびインターフェロンの受容体が含まれ、一方、クラスＩサイトカイン受容体には、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１１〜１３、およびＩＬ−１５の受容体とともに、造血成長因子、レプチンおよび成長ホルモンの受容体が含まれる（Ｃｏｓｍａｎ，Ｄ．（１９９３）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ５：９５−１０６）。
【０００４】
ヒトＩＬ−２１ＲはクラスＩサイトカイン受容体であり、リンパ系細胞、特にＮＫ細胞、Ｂ細胞、およびＴ細胞に発現される（Ｐａｒｒｉｃｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記）。ヒト・インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）およびその受容体（ＩＬ−２１Ｒ）をコードする典型的な核酸配列が、ＷＯ００／５３７６１、ＷＯ０１／８５７９２、Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記、およびＯｚａｋｉら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１１４３９−１１４４４に記載され、対応するアミノ酸配列も記載される。ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２受容体β鎖およびＩＬ−４受容体α鎖に高い配列相同性を示す（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記）。リガンド結合に際して、ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１３およびＩＬ−１５の受容体に共有される、共通のガンマ・サイトカイン受容体鎖（γｃ）と会合する（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記；Ａｓａｏら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１−５）。ＩＬ−２１Ｒがリンパ系に広く分布していることから、ＩＬ−２１が免疫制御に役割を果たしていることが示唆される。実際、ｉｎ ｖｉｔｒｏ研究によって、ＩＬ−２１が、Ｂ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞およびＣＤ８＋ Ｔ細胞、並びにＮＫ細胞の機能を有意に調節することが示されてきている（Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）上記；Ｋａｓａｉａｎ，Ｍ．Ｔ．ら（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１６：５５９−５６９）。Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）は、ＩＬ−２１が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖および成熟、抗ＣＤ４０で同時刺激された成熟Ｂ細胞集団の増殖、並びに抗ＣＤ３で同時刺激されたＴ細胞の増殖を活性化するかまたは刺激するように機能することを示唆した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
発明の概要
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）またはＩＬ−２１受容体（本明細書において、「ＩＬ−２１Ｒ」または「ＭＵ−１」とも称される）のアゴニスト（本明細書において、「ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト」または「アゴニスト」とも称される）を用いて、ＩＬ−２１およびＩＬ−２１Ｒの活性、および／またはこれらの間の相互作用を増加させるための方法および組成物を開示する。こうした方法および組成物を用いて、神経系の免疫学的障害、あるいはＩＬ−１０不全と関連する疾患または障害を調節することも可能である。例えば、該方法および組成物を用いて、多発性硬化症（ＭＳ）を治療するかまたは防止することも可能である。
【０００６】
我々は、例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばネズミＩＬ−２１ポリペプチドで、マウスを予防的に処置すると、実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）のマウスモデルにおいて、症状の改善が生じることを示した。ミエリン・オリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド（例えばＭＯＧ３５−５５）およびプロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ；例えばＰＬＰ１３９−１５１）を用いて生成されるマウスモデルにおいて、ＥＡＥ症状の調節が検出された。ＩＬ−２１は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞増殖を誘導した。ＩＬ−２１の存在下で培養したリンパ球は、ＩＬ−１０量の増加およびインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）レベルの減少を生じた。したがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性のアゴニストを予防的または療法的に用いて、神経系の免疫学的障害（例えば、多発性硬化症を含む、神経系の慢性免疫学的障害）を治療することも可能である。
【０００７】
したがって、１つの側面において、本発明は、被験者において、神経系の免疫学的障害（例えば、多発性硬化症を含む、神経系の慢性免疫学的障害）を治療する（例えば治癒させるか、抑制するか、改善するか、減少させるか、または遅延させる）か、または防止する（例えば開始を防止するか、または反復もしくは再発を防止する）方法を特徴とする。該方法は：免疫細胞活性および／または数を調節する（例えばサイトカインレベル、例えばサイトカイン発現、産生および／または放出を調節する）のに十分な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを被験者に投与し、それによって、神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を治療するかまたは防止することを含む。１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを症状の開始前に投与して、例えば、症状の開始を遅延させるかまたは防止し、あるいは症状の反復または再発を防止する。例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、被験者、例えばＭＳ患者が寛解期にあるときに投与することも可能である。他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを症状または発作の開始後に投与する。ＭＳの典型的な全身症状には、振戦、協調運動不全、歩行困難、および他の問題が含まれる。
【０００８】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、単独で、または本明細書に記載する他の療法様式と併用して投与することも可能である。好ましくは、被験者は、哺乳動物、例えば神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を患うヒトである。
【０００９】
１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ、好ましくは哺乳動物、例えばヒトＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒと相互作用し、例えば結合し、そして１以上のＩＬ−２１および／またはＩＬ−２１Ｒ活性を増加させるかまたは増強させる。ＩＬ−２１のアゴニストは、本明細書において、「ＩＬ−２１アゴニスト」と称され、そしてＩＬ−２１Ｒのアゴニストは、「ＩＬ−２１Ｒアゴニスト」と称される。ＩＬ−２１ポリペプチドはそれ自体、ＩＬ−２１Ｒアゴニストである。好ましいアゴニストは、高親和性で、例えば少なくとも約１０７Ｍ−１、好ましくは約１０８Ｍ−１、そしてより好ましくは約１０９Ｍ−１〜１０１０Ｍ−１の親和性定数で、またはそれより強い親和性定数で、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒに結合する。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、例えばＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片、ＩＬ−２１融合タンパク質、ペプチドアゴニスト、抗体アゴニストまたはその抗原結合断片、あるいは小分子アゴニストであることも可能である。
【００１０】
１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１ＲアゴニストはＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒト、ウシまたはネズミＩＬ−２１ポリペプチド、またはその活性断片（例えば配列番号２に示すアミノ酸配列、または配列番号１に示すヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列、あるいは該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれより同一である配列を含む、ヒトＩＬ−２１ポリペプチド）である。別の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ネズミＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片（例えば配列番号４に示すアミノ酸配列、または配列番号３に示すヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列、あるいは該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれより同一である配列を含む、ネズミＩＬ−２１ポリペプチド）である。さらに他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒトまたはネズミＩＬ−２１ポリペプチド、またはその断片を含み、そして例えば第二の部分、例えばポリペプチド（例えばＧＳＴ、Ｌｅｘ−Ａ、ＭＢＰポリペプチド配列、または例えばＦｃ断片、重鎖定常領域であって：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む多様なアイソタイプの前記重鎖定常領域を含む、免疫グロブリン鎖）に融合した、融合タンパク質；ＩＬ−２１受容体に結合するアゴニスト抗体またはその抗原結合断片；あるいは小分子またはペプチドアゴニストである。他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、機能するＩＬ−２１の発現、プロセシングおよび／または分泌を増加させることによって、ＩＬ−２１の活性またはレベルを増加させる剤である。前述のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストをコードする核酸もまた、被験者に投与することも可能である。
【００１１】
融合タンパク質は、第一の部分、例えばＩＬ−２１断片を、第二の部分、例えば免疫グロブリン断片に連結する、リンカー配列をさらに含むことも可能である。他の態様において、さらなるアミノ酸配列を融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端に付加して、発現、立体構造柔軟性、検出および／または単離または精製を容易にすることも可能である。
【００１２】
本明細書記載のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えば本明細書記載のＩＬ−２１ポリペプチドまたは融合タンパク質を、誘導体化するか、あるいは別の機能分子、例えば別のペプチドまたはタンパク質（例えばＦａｂ’断片）に連結することも可能である。例えば、融合タンパク質、あるいは抗体または抗原結合部分を、１以上の他の分子実体、例えばとりわけ抗体（例えば二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害剤または細胞分裂停止剤に（例えば化学的カップリング、遺伝子融合、非共有会合または他のものによって）機能するように連結することもまた可能である。
【００１３】
別の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１Ｒ、好ましくはヒトＩＬ−２１Ｒに対する抗体、例えばアゴニスト性抗体、またはその抗原結合部分である。抗体またはその抗原結合部分は、ヒト化抗体、キメラ抗体、ヒト（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏ生成）抗体、またはその抗原結合断片であることも可能である。１つの態様において、抗体は二重特異性抗体、例えばＩＬ−２１Ｒおよび別の受容体鎖と相互作用する抗体である。
【００１４】
１つの態様において、該方法は、ＩＬ−１０パラメーターに関して、被験者を評価することを含む。「ＩＬ−１０パラメーター」は、ＩＬ−１０レベルまたは活性、例えばＩＬ−１０ ｍＲＮＡまたはタンパク質レベルまたは活性に関する質的情報または量的情報である。該情報には、例えば、被験者由来の１以上の組織または１以上の試料中のＩＬ−１０の濃度が含まれることも可能である。例えば投与前に、例えば少なくとも第一の用量の投与前に、被験者を評価することも可能である。例えば投与後に、例えば１以上の用量の投与後に、例えば規則的な間隔で、または連続投与の場合、１以上の間隔後に、被験者を評価することも可能である。投与前および投与後、両方で、被験者を評価することも可能である。ＩＬ−１０パラメーターを評価することから得た情報を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの投与を調節することも可能である。例えば、正常範囲の値になるＩＬ−１０パラメーターにおける増加は、望ましい療法効果があったことの指標となりうる。ＩＬ−１０パラメーターにおける減少は、投与が不十分であるか、または非応答性であることの指標となりうる。同様に、対応するＩＦＮγパラメーターを評価することも可能である。こうした場合、正常範囲の値になるＩＦＮγパラメーターにおける減少は、望ましい療法効果があったことの指標となりうる。ＩＦＮγパラメーターにおける増加は、投与が不十分であるか、または非応答性であることの指標となりうる。他のサイトカインおよび因子に関連して評価可能なさらに他のパラメーターを表３に提供する。
【００１５】
１つの態様において、該方法は、神経系の免疫学的障害（例えば多発性硬化症）のリスクに関して、またはこうした障害の１以上の症状のリスクに関して、被験者を評価することを含む。リスクを評価する１つの方法は、ＩＬ−１０パラメーターを評価することを含む。
【００１６】
１つの実施において、被験者の状態の改変に応じて、例えばＭＳと関連する突発または発作に応じて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを投与する。
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）を、単回用量の形、あるいは数日、数週または数ヶ月の間隔を置いた一連の用量で投与することも可能である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）を、注射、例えば被験者の中枢神経系への注射によって投与することも可能である。例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）を腰部脳脊髄液に（クモ膜下（ｉｎｔｒａｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ））注射することも可能である。他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）を静脈内投与する。
【００１７】
１つの態様において、本明細書記載のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばその薬剤組成物を、併用療法で、すなわち他の剤、例えば神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を治療するかまたは防止するのに有用な療法剤と併用して、投与する。例えば、併用療法は、１以上のさらなる療法剤、例えば本明細書にさらに記載するような、１以上のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害剤または細胞分裂停止剤と同時配合され、そして／または同時投与される、１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片、ＩＬ−１２融合タンパク質、ペプチドアゴニスト、抗体アゴニスト、あるいは小分子アゴニストを含むことも可能である。
【００１８】
多発性硬化症を治療するため、１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと同時投与し、そして／または同時配合することも可能な療法剤の例には、限定されるわけではないが、１以上の：インターフェロン−β、例えばＩＦＮβ−１αおよびＩＦＮβ−１β；ミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質（例えば合成タンパク質、例えば酢酸グラティラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）、コパキソン（登録商標））；コルチコステロイド；ＩＬ−１阻害剤；ＴＮＦ阻害剤；ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体；ＩＬ−１２およびＩＬ−２３のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのアンタゴニスト（例えばｐ４０サブユニットに対する阻害性抗体）；ＩＬ−２２アンタゴニスト；小分子阻害剤、例えばメトトレキセート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体、例えばＣＣＩ−７７９；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８阻害剤；ＴＰＬ−２；Ｍｋ−２；ＮＦκＢ阻害剤；ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１阻害剤（例えば小分子阻害剤、抗体、例えばＰ−セレクチンに対する抗体）；エストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）アゴニストまたはＥＲＢ−ＮＦκβアンタゴニストが含まれる。
【００１９】
ＴＮＦ阻害剤の例には、例えば、ＴＮＦに結合する、キメラ抗体、ヒト化抗体、有効ヒト抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体、あるいはその抗原結合断片；ＴＮＦ受容体、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体の可溶性断片またはその誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ）、ｐ５５ ｋｄ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質；およびＴＮＦ酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤が含まれる。
【００２０】
１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと同時投与し、そして／または同時配合することも可能なさらなる療法剤には、１以上の：インターフェロン−β、例えばＩＦＮβ−１αおよびＩＦＮβ−１β；コパキソン（登録商標）；コルチコステロイド；ＩＬ−１阻害剤；ＴＮＦアンタゴニスト（例えばＴＮＦ受容体、例えばヒトｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体の可溶性断片またはその誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ））；ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体；並びにＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのアンタゴニスト（例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニットに結合する阻害性抗体）；メトトレキセート、レフルノミド、およびシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、例えばＣＣＩ−７７９が含まれる。
【００２１】
別の側面において、本発明は、免疫細胞活性および／または数（例えば免疫細胞、例えばリンパ球（例えばＴ細胞）または免疫細胞集団、例えば混合されたかもしくは実質的に精製された免疫細胞集団の活性および／または数）を調節する、例えば増加させるかまたは減少させる方法を特徴とする。該方法は、免疫細胞活性および／または数を調節する、例えば増加させるかまたは減少させるのに十分な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えば本明細書記載のアゴニストと、免疫細胞、例えば本明細書記載の免疫細胞を接触させることを含む。１つの態様において、活性には、サイトカイン活性またはレベルの調節、例えば増加または減少が含まれる。例えば、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、リンパ球産生またはＩＬ−１０レベルを増加させ、そして／またはインターフェロン−γ産生またはレベルを減少させることも可能である。
【００２２】
本方法を、例えばｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで培養中の細胞に用いることも可能である。例えば、免疫細胞、例えば本明細書記載のＴ細胞を、培地中、ｉｎ ｖｉｔｒｏで培養することも可能であり、そして培地に１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（単数または複数）、例えば本明細書記載のアゴニストを添加することによって、接触工程を達成することも可能である。あるいは、被験者に存在する細胞（例えば本明細書記載の免疫細胞）に対して、例えばｉｎ ｖｉｖｏ（例えば療法または予防）プロトコルの一部として、該方法を行うことも可能である。
【００２３】
免疫細胞活性の変化には：参照細胞、例えば未処理免疫細胞と比較した、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと接触させた免疫細胞の、とりわけ増殖、サイトカイン分泌および／または産生、生存、分化、細胞応答性（例えば脱感作）、細胞溶解活性、エフェクター細胞活性、遺伝子発現のうちの１以上の変動（単数または複数）いずれか、例えば増加／減少が含まれる。例えば、免疫細胞をＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばＩＬ−２１ポリペプチドと接触させると：胸腺細胞、リンパ球、リンパ節Ｔ細胞、成熟ＣＤ４＋ Ｔ細胞、成熟ＣＤ８＋ Ｔ細胞、またはマクロファージのうちの１以上の：増殖、細胞溶解活性、エフェクター細胞機能、またはサイトカイン分泌のうちの１以上を誘導可能である。１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、リンパ球産生またはＩＬ−１０レベルを増加させ、そして／またはインターフェロン−γ産生またはレベルを減少させることも可能である。
【００２４】
別の側面において、本発明は、哺乳動物被験者において、ＩＬ−１０不全、またはＩＬ−１０不全に関連する障害を調節する方法を特徴とする。該方法は、被験者におけるＩＬ−１０発現または活性を増加させる、例えば少なくとも１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、５、または１０倍増加させる、例えば１．２〜２．５倍増加させる、または２．５〜５倍増加させる、５〜１０倍増加させる、あるいは１０または２０倍より多く増加させるのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与することを含む。「ＩＬ−１０不全」は、対応する正常被験者に比較した、ＩＬ−１０の統計的に有意な減少である。例えば、減少は、０．０５未満のＰ値を有することも可能である。ＩＬ−２１または他のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを用いて、ＩＬ−１０レベルまたは活性を増加させることも可能であるため、ＩＬ−２１およびこうしたアゴニストを用いて、ＩＬ−１０不全を調節することも可能である。
【００２５】
例えば、血液、血清、または脳脊髄液中の、ＩＬ−１０レベルを監視することも可能である。ＩＬ−１０不全に関連付けることも可能な典型的な障害には、多発性硬化症、重大な炎症事象（虚血−再灌流傷害を含む）、乾癬および天疱瘡が含まれる。ＩＬ−２１は、ＩＬ−１０レベルを増加させることも可能であるため、ＩＬ−２１を用いて、これらの障害およびＩＬ−１０不全に関連する他の障害の少なくとも１つの症状を治療することも可能である。
【００２６】
別の側面において、本発明は、哺乳動物被験者、例えばヒトにおいて、多発性硬化症を改善する方法を特徴とする。該方法は：被験者における多発性硬化症または多発性硬化症の少なくとも１つの症状を改善するのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与することを含む。例えば、被験者がヒトである場合、ＩＬ−２１ポリペプチドはヒトＩＬ−２１ポリペプチド、例えば配列番号２を含むポリペプチド、または有効ヒトＩＬ−２１ポリペプチドであることも可能である。例えば、該ポリペプチドを組換え的に、例えば細菌細胞において産生する。１つの態様において、該方法は、被験者におけるＩＬ−１０発現または活性を増加させる、例えば少なくとも１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、５、または１０倍増加させる、例えば１．２〜２．５倍増加させる、または２．５〜５倍増加させる、５〜１０倍増加させる、あるいは１０または２０倍より多く増加させるのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与することを含む。該方法は、本明細書に記載する他の特徴を含むことも可能である。
【００２７】
別の側面において、本発明は、哺乳動物被験者において、免疫学的障害を治療するかまたは防止する方法を特徴とする。該方法は、哺乳動物被験者におけるＩＬ−１０パラメーターを評価し；そして評価されたＩＬ−１０パラメーターの結果に応じた量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与することを含む。例えば、ＩＬ−１０パラメーターは、ＩＬ−１０タンパク質またはＩＬ−１０ ｍＲＮＡのレベルに関する質的情報または量的情報を含む。別の例において、ＩＬ−１０パラメーターは、ＩＬ−１０タンパク質活性のレベルに関する量的情報を含む。
【００２８】
１つの態様において、免疫学的障害は、神経学的障害である。例えば、被験者はヒトであり、そして免疫学的障害は多発性硬化症であるか、あるいはミエリン鞘に損傷または改変を引き起こす免疫学的障害である。該方法は、本明細書に記載する他の特徴を含むことも可能である。
【００２９】
別の態様において、本発明は、哺乳動物被験者において、多発性硬化症の治療を評価する方法を特徴とする。該方法は：インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）（例えばＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片）を被験者に投与し；そして被験者におけるＩＬ−１０パラメーターを評価することを含む。１つの態様において、該方法は第二の用量のアゴニストを被験者に投与することをさらに含み、評価されたＩＬ−１０パラメーターの関数として、第二の用量を投与する。
【００３０】
１つの態様において、被験者はヒトであり、そしてＩＬ−２１ポリペプチドはヒトＩＬ−２１ポリペプチド、例えば配列番号２を含むポリペプチドである。
１つの態様において、第二の用量または続く用量はいずれも、例えばベースラインに比較して、例えば第一の処置前に比較して、被験者におけるＩＬ−１０発現または活性を増加させる、例えば少なくとも１．２、１．５、２、２．５、３、３．５、５、または１０倍増加させる、例えば１．２〜２．５倍増加させる、または２．５〜５倍増加させる、５〜１０倍増加させる、あるいは１０または２０倍より多く増加させるのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを搬送するよう調整される。関連法において、第一の用量をこのように調整する。該方法は、本明細書に記載する他の特徴を含むことも可能である。
【００３１】
別の側面において、本発明は、薬学的に許容しうるキャリアーおよび本明細書記載の少なくとも１つのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（例えば本明細書記載のＩＬ−２１ポリペプチドまたは融合タンパク質）を含む、組成物、例えば薬剤組成物を提供する。１つの態様において、組成物、例えば薬剤組成物は、前述のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの１つの２以上の組み合わせを含む。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストおよび薬剤、例えば療法剤（例えば、本明細書にさらに記載するような、１以上のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害剤または細胞分裂停止剤）もまた、本発明の範囲内である。
【００３２】
１つの態様において、薬剤組成物は、薬学的に許容しうるキャリアー中に、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストおよび少なくとも１つのさらなる療法剤を含む。組成物、例えば薬剤組成物中に同時配合することも可能な、好ましいさらなる療法剤の例には、限定されるわけではないが、１以上の：インターフェロン−β、例えばＩＦＮβ−１αおよびＩＦＮβ−１β；ミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質（例えばコパキソン（登録商標））；コルチコステロイド；ＩＬ−１阻害剤；ＴＮＦアンタゴニスト（例えばＴＮＦ受容体、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体の可溶性断片またはその誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ））；ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体；並びにＩＬ−１２および／またはＩＬ−２３のアンタゴニスト、例えばＩＬ−１２およびＩＬ−２３のｐ４０サブユニットのアンタゴニスト（例えばｐ４０サブユニットに対する阻害性抗体）；メトトレキセート、レフルノミド、およびシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、例えばＣＣＩ−７７９が含まれる。
【００３３】
別の側面において、本発明は、（ｉ）ＩＬ−２１ポリペプチドを含む、１以上の単位用量の薬剤組成物を含む容器；および（ｉｉ）多発性硬化症を有するか、または有すると推測される被験者に、単位用量を投与するための使用説明書を含む、製品を特徴とする。例えば、使用説明書はラベル上に提供される。ラベルは、容器の外部表面上に貼られていることも可能である。１つの態様において、製品は、例えばＩＬ−２１ポリペプチドを含む薬剤組成物のさらなる単位用量を含有する、第二の容器をさらに含む。１つの態様において、製品は、多発性硬化症を治療するための剤、すなわちＩＬ−２１以外の剤を含む、第二の薬剤組成物を含む第二の容器をさらに含む。例えば、剤は、酢酸グラティラマーまたは本明細書記載の別の剤である。別の態様において、第一の容器内にＩＬ−２１ポリペプチドを含む薬剤組成物は、多発性硬化症を治療するための第二の剤、例えば酢酸グラティラマーをさらに含む。
【００３４】
用語「ＭＵ−１」および「ＩＬ−２１Ｒ」は、本明細書において、交換可能に用いられる。用語「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書において、交換可能に用いられる。タンパク質は１以上の鎖を含むことも可能である。
【００３５】
当該技術分野に知られる方法いずれによって統計的有意性を決定することも可能である。典型的な統計検定には：スチューデントＴ−検定、マン・ホイットニーＵノンパラメトリック検定、およびウィルコクソン・ノンパラメトリック統計検定が含まれる。いくつかの統計的に有意な関係は、０．０５または０．０２未満のＰ値を有する。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストに仲介される特定の効果は、統計的に有意な相違（例えばＰ値＜０．０５または０．０２）を示すことも可能である。用語「誘導する」、「阻害する」、「増強する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」等は、例えば、２つの状態間の区別可能な質的相違または量的相違を示し、そして２つの状態間の相違、例えば統計的に有意な相違を指すことも可能である。
【００３６】
別に定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する技術分野の一般の当業者に通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書記載のものと類似のまたは均等の方法および材料を、本発明の実施または試験に使用可能であるが、適切な方法および材料を以下に記載する。すべての刊行物、特許出願、特許、および本明細書に言及する他の参考文献すべてが、完全に本明細書に援用される。不一致の場合は、定義を含めて本明細書が統制する。さらに、材料、方法、および実施例は例示のみであり、そして限定を意図しない。
【００３７】
本発明の他の特徴および利点は、以下の詳細な説明および請求項から明らかであろう。
【課題を解決するための手段】
【００３８】
発明の詳細な説明
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）またはＩＬ−２１受容体（「ＩＬ−２１Ｒ」または「ＭＵ−１」）のアゴニストを用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１受容体（ＭＵ−１）活性を調節するための方法および組成物を開示する。１つの態様において、出願者らは、マウスをＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばネズミＩＬ−２１ポリペプチドで処理すると、実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）のマウスモデルにおいて、症状の改善が生じることを示した。ミエリン・オリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）ペプチド（例えばＭＯＧ３５−５５）およびプロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ）を用いて生成されるマウスモデルにおいて、ＥＡＥ症状の調節が検出された。ＩＬ−２１は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞増殖を誘導した。リンパ球をＩＬ−２１の存在下で培養すると、ＩＬ−１０量の増加およびインターフェロン−γレベルの減少が生じた。したがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ活性のアゴニストを用いて、神経系の免疫学的障害（例えば、多発性硬化症を含む、神経系の慢性免疫学的障害）を治療するかまたは防止することも可能である。
【００３９】
本発明をより容易に理解することが可能であるように、まず、特定の用語を定義する。さらなる定義を、詳細な説明全体に示す。
用語「インターロイキン−２１」、「ＩＬ−２１」および「ＩＬ−２１ポリペプチド」は、ＩＬ−２１Ｒ（例えば哺乳動物、例えばネズミまたはヒト・タンパク質）と相互作用する、例えば結合することが可能であり、そして以下の特徴の少なくとも１つを有するタンパク質（例えば哺乳動物、例えばネズミまたはヒト・タンパク質）を指す：（ｉ）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１またはその断片のアミノ酸配列、例えば配列番号２（ヒト）または配列番号４（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片；（ｉｉ）配列番号２（ヒト）または配列番号４（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片に、実質的に相同である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同である、アミノ酸配列；（ｉｉｉ）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１ヌクレオチド配列またはその断片（例えば配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（ネズミ）またはその断片、例えば成熟型をコードする領域）がコードする、アミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号１（ヒト）または配列番号３（ネズミ）に示すヌクレオチド配列またはその断片（例えば成熟型をコードする領域）に、実質的に相同である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同であるヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；（ｖ）天然存在ＩＬ−２１ヌクレオチド配列またはその断片、例えば配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（ネズミ）またはその断片（例えば成熟型をコードする領域）に縮重しているヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；あるいは（ｖｉ）ストリンジェントな条件下、例えば非常にストリンジェントな条件下で、前述のヌクレオチドの１つの相補体にハイブリダイズするヌクレオチド配列がコードする、少なくとも１１５アミノ酸のアミノ酸配列（例えば、該ヌクレオチド配列は成熟ＩＬ−２１タンパク質をコードする領域中でハイブリダイズする）。ＩＬ−２１ＲへのＩＬ−２１結合は、ｓｔａｔ５またはｓｔａｔ３シグナル伝達を導くことも可能である（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記）。ＩＬ−２１ポリペプチドは、シグナル配列を含む新生タンパク質からシグナル配列が除去されて、成熟タンパク質にプロセシングされることも可能である。
【００４０】
「有効ヒト」ＩＬ−２１ポリペプチドは、該ポリペプチドが、正常なヒトにおいて、免疫原性応答を誘発しないように、そして該ＩＬ−２１ポリペプチドがヒトＩＬ−２１Ｒと相互作用するように、十分な数のヒト・アミノ酸位を含む、ＩＬ−２１ポリペプチドである。
【００４１】
用語「ＭＵ−１」、「ＭＵ−１タンパク質」、「インターロイキン−２１受容体」または「ＩＬ−２１Ｒ」は、ＩＬ−２１（例えば哺乳動物、例えばネズミまたはヒトＩＬ−２１）と相互作用する、例えば結合することが可能であり、そして以下の特徴の少なくとも１つを有する受容体（例えば哺乳動物、例えばネズミまたはヒト起源）を指す：（ｉ）天然存在哺乳動物ＭＵ−１ポリペプチドＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１またはその断片のアミノ酸配列、例えば配列番号６（ヒト）または配列番号８（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片（例えば成熟領域）；（ｉｉ）配列番号６（ヒト）または配列番号８（ネズミ）に示すアミノ酸配列またはその断片（例えば成熟領域）に、実質的に相同である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同である、アミノ酸配列；（ｉｉｉ）天然存在哺乳動物ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ヌクレオチド配列（例えば配列番号５（ヒト）または配列番号７（ネズミ））またはその断片（例えば成熟型領域）がコードする、アミノ酸配列；（ｉｖ）配列番号５（ヒト）または配列番号７（ネズミ）に示すヌクレオチド配列またはその断片（例えば成熟型領域）に、実質的に相同である、例えば少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％、９９％相同であるヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；（ｖ）天然存在ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ヌクレオチド配列またはその断片、例えば配列番号５（ヒト）もしくは配列番号７（ネズミ）またはその断片（例えば成熟領域）に縮重しているヌクレオチド配列がコードする、アミノ酸配列；あるいは（ｖｉ）ストリンジェントな条件下、例えば非常にストリンジェントな条件下で、前述のヌクレオチド配列の１つにハイブリダイズするヌクレオチド配列がコードする、少なくとも４５０アミノ酸のアミノ酸配列。配列番号６に示すヒトＩＬ−２１Ｒの成熟領域は、ほぼアミノ酸２０〜５３８である。
【００４２】
典型的なＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ ｃＤＮＡは、寄託番号ＡＴＣＣ ９８６８７として、１９９８年３月１０日にアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託された。
【００４３】
ＩＬ−２１Ｒは、ＮＩＬＲとしても知られる、クラスＩサイトカインファミリー受容体である（ＷＯ０１／８５７９２；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３；Ｏｚａｋｉら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：１１４３９−１１４４４）。ＩＬ−２１Ｒは、ＩＬ−２受容体およびＩＬ−１５受容体に共有されるβ鎖、並びにＩＬ−４受容体α鎖に相同である（Ｏｚａｋｉら（２０００）上記）。リガンド結合に際して、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１は共通γサイトカイン受容体鎖（γｃ）と相互作用し（Ａｓａｏら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１−５）、そしてＳＴＡＴ１およびＳＴＡＴ３（Ａｓａｏら（２００１））またはＳＴＡＴ５（Ｏｚａｋｉら（２０００））のリン酸化を誘導することが可能である。ＩＬ−２１Ｒは広いリンパ系組織分布を示す。
【００４４】
ＩＬ−２１Ｒポリペプチドに結合する能力を保持する限り、全長に満たないＩＬ−２１タンパク質の型を本明細書記載の方法および組成物で使用することも可能である。宿主細胞において、全長ＩＬ−２１タンパク質をコードするポリヌクレオチドの対応する断片を発現させることによって、または修飾タンパク質をコードするポリヌクレオチド（例えば１以上の内部アミノ酸が除去される場合）を発現させることによって、全長に満たないＩＬ−２１タンパク質を産生することも可能である。全長に満たないＩＬ−２１ポリペプチドの１つの型は、成熟ＩＬ−２１、例えば配列番号２のＩＬ−２１である。別の型は、全長成熟ＩＬ−２１より短いポリペプチド、例えば１３１、１３０、１２９、１２８、または１２５アミノ酸より短い、例えば長さ１１５〜１３０アミノ酸のポリペプチドである。例えば、配列番号２由来のＩＬ−２１ポリペプチドは、最後の８アミノ酸が欠けているか、またはそのサブセットであることも可能であり、例えばＩＬ−２１ポリペプチドは、アミノ酸１〜１２２を含む。対応するポリヌクレオチド断片を、本発明の方法および組成物中で使用することもまた可能である。適切な望ましい欠失突然変異体の構築、部位特異的突然変異誘発法を含む標準的分子生物学技術によって、あるいは適切なオリゴヌクレオチドプライマーを用いたポリメラーゼ連鎖反応によって、上述のような修飾ポリヌクレオチドを作成することも可能である。
【００４５】
句、ＭＵ−１またはＩＬ−２１Ｒポリペプチドの「生物学的活性」は、対応する成熟ＭＵ−１タンパク質の１以上の生物学的活性を指し、こうした活性には、限定されるわけではないが：（１）ＩＬ−２１ポリペプチド（例えばヒトＩＬ−２１ポリペプチド）との相互作用、例えば結合；（２）シグナル伝達分子、例えばγｃ、ｊＡＫ−１との会合；（３）ｓｔａｔタンパク質、例えばＳＴＡＴ５および／またはＳＴＡＴ３のリン酸化および／または活性化の刺激；並びに／あるいは（４）免疫細胞、例えばＴ細胞（ＣＤ８＋ Ｔ細胞、ＣＤ４＋ Ｔ細胞）、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、および巨核球の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、および／または生存の調節、例えば刺激または減少が含まれる。
【００４６】
本明細書において、「ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト」は、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドの１以上の生物学的活性、例えば本明細書記載の生物学的活性を増強するか、誘導するか、または別の方式で増進する剤を指す。例えば、アゴニストは、ＩＬ−２１Ｒ／ＭＵ−１ポリペプチドと相互作用し、例えば結合する。１つの態様において、アゴニストは、ＩＬ−２１Ｒおよび別の受容体鎖、例えばγサイトカイン受容体鎖と相互作用する。例えばアゴニストはＩＬ−２１Ｒおよびγサイトカイン受容体鎖を架橋する。
【００４７】
本明細書において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの「療法的有効量」は、被験者、例えばヒト患者に、単回用量または多数用量を投与した際、障害、例えば本明細書記載の障害の１以上の症状を治癒させるか、その重症度を減少させるか、改善する、あるいはこうした治療の非存在下で予期される生存を超えて、被験者の生存を延長させるのに有効な剤の量を指す。
【００４８】
本明細書において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの「予防的有効量」は、被験者、例えばヒト患者に、単回用量または多数用量を投与した際、障害、例えば本明細書記載の障害の開始または再発の発生を防止するかまたは遅延させるのに有効なＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの量を指す。
【００４９】
例えば、２つの状態間の量的相違を示す、用語「誘導する」、「阻害する」、「増強する」、「上昇させる」、「増加させる」、「減少させる」等は、２つの状態間の、少なくとも統計的に有意な相違を指す。
【００５０】
用語「併用して」は、この背景において、剤を、同時にまたは連続していずれかで、実質的に同時期に投与することを意味する。連続して投与した場合、第二の化合物投与の開始時に、好ましくは、２つの化合物の第一のものは、治療部位で、なお有効濃度で検出可能である。
【００５１】
本明細書において、「融合タンパク質」は、機能可能であるように会合した、例えば連結された２以上の部分、例えばタンパク質部分を含有するタンパク質を指す。好ましくは、部分は共有的に会合する。該部分は、直接会合することも可能であるし、あるいはスペーサーまたはリンカーを介して連結されることも可能である。
【００５２】
本明細書に開示する配列に類似のまたは相同な（例えば少なくとも約８５％配列同一性）配列もまた、本出願の一部である。いくつかの態様において、配列同一性は、約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれより高いことも可能である。あるいは、核酸セグメントが、選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば非常にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件）下で、相補鎖にハイブリダイズする場合、実質的な同一性が存在する。核酸は、全細胞中、細胞溶解物中、あるいは部分的に精製された型または実質的に純粋な型で存在することも可能である。
【００５３】
２つの配列間の「相同性」または「配列同一性」（該用語は本明細書において、交換可能に用いられる）の計算を以下のように行う。最適比較目的のため、配列を並列させる（例えば、最適並列のため、第一および第二のアミノ酸または核酸配列の一方または両方に、ギャップを導入することも可能であるし、そして比較目的のため、非相同配列を無視することも可能である）。好ましい態様において、比較目的のため並列させる参照配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、さらにより好ましくは少なくとも６０％、そしてさらにより好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％、１００％である。次いで、対応するアミノ酸位またはヌクレオチド位のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第一の配列の位が、第二の配列の対応する位と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドで占められている場合、該分子は、その位で同一である（本明細書において、アミノ酸または核酸「同一性」は、アミノ酸または核酸「相同性」と均等である）。２つの配列間の同一性パーセントは、２つの配列の最適並列のために導入する必要があるギャップの数および各ギャップの長さを考慮に入れて、配列に共有される同一の位の数の関数である。
【００５４】
数学的アルゴリズムを用いて、２つの配列間の配列比較および同一性パーセント決定を達成することも可能である。比較は、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍ）のＧＡＰプログラムおよびパラメーターを用い、パラメーターにはギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を伴うＢｌｏｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスが含まれる。
【００５５】
本明細書において、用語「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を記載する。ストリンジェントな条件は、当業者に知られ、そしてＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ニューヨーク（１９８９），６．３．１−６．３．６に見出されることも可能である。水性の方法および非水性の方法が該参考文献に記載され、そしてどちらを使用することも可能である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の好ましい一例は、６ｘ塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、約５０℃での１回以上の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件の別の例は、６ｘＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５５℃での１回以上の洗浄である。ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、６ｘＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６０℃での１回以上の洗浄である。好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、６ｘＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃での１回以上の洗浄である。特に好ましい非常にストリンジェントな条件（そして分子がハイブリダイゼーション限界内にあるかどうか決定するために、どの条件を適用すべきなのか、実施者が確信できない場合、使用すべき条件）は、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中、６５℃でのハイブリダイゼーション、その後、０．２ｘＳＳＣ、１％ＳＤＳ中、６５℃での１回以上の洗浄である。
【００５６】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、機能に実質的な影響を持たない、さらなる保存的置換または非必須アミノ酸置換を有することも可能である。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられるものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、塩基性側鎖を持つアミノ酸（例えばリジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖を持つアミノ酸（例えばアスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖を持つアミノ酸（例えばグリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖を持つアミノ酸（例えばアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、ベータ分枝側鎖を持つアミノ酸（例えばスレオニン、バリン、イソロイシン）、および芳香族側鎖を持つアミノ酸（例えばチロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が含まれる。
【００５７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト
本発明の方法および組成物で用いるＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒトまたはネズミＩＬ−２１ポリペプチド、またはその活性断片（例えば配列番号２に示すアミノ酸配列、または配列番号１に示すヌクレオチド配列がコードする領域を含むアミノ酸配列、または該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれより同一である配列を含む、ヒトＩＬ−２１ポリペプチド）（例えば成熟ＩＬ−２１ポリペプチドをコードする配列番号１の領域）であることも可能である。別の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ネズミＩＬ−２１ポリペプチドまたはその活性断片（例えば配列番号４に示すアミノ酸配列、または配列番号３に示すヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列、または該配列に少なくとも８５％、９０％、９５％、９８％またはそれより同一である配列を含む、ネズミＩＬ−２１ポリペプチド）、あるいは別の哺乳動物、例えば非ヒト霊長類、ウシなどに由来するＩＬ−２１ポリペプチドである。
【００５８】
ＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列は、公的に知られる。例えば、ヒトＩＬ−２１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）アクセス番号Ｘ＿０１１０８２号で入手可能である。典型的な開示されるヒトＩＬ−２１ヌクレオチド配列を以下に示す：
【００５９】
【化１】
【００６０】
さらなるヌクレオチド配列情報は、例えばＡＦ２５４０６９［ｇｉ：１１０９３５３５］から入手可能であり、これは、典型的なＩＬ−２１ポリペプチドをコードする、６４２ｂｐのｍＲＮＡ配列を提供する。いくつかの態様において、例えばシグナル配列をコードする領域を除いて、成熟ＩＬ−２１をコードするヌクレオチド配列の領域を使用すると十分である。典型的な成熟ヒトＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列を以下に示す：
【００６１】
【化２】
【００６２】
成熟配列は、Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０８：５７−６３に基づく。全長配列は：
【００６３】
【化３】
【００６４】
である。
ヒトＩＬ−２１ポリペプチドのアミノ酸配列を提供するさらなるエントリーは以下の通りである：ｇｉ｜１１１４１８７５｜ｒｅｆ｜ＮＰ＿０６８５７５．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜１１０９３５３６｜ｇｂ｜ＡＡＧ２９３４８．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜４２５４２５８６｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２５９．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜４２５４２５８８｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６０．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜４２５４２６５７｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６１．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；ｇｉ｜４２５４２６５９｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２５８．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］；およびｇｉ｜４２５４２８０７｜ｇｂ｜ＡＡＨ６６２６２．１｜インターロイキン２１［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ］。ヒトＩＬ−２１ポリペプチドは、機能性を保持する限り、本明細書記載のポリペプチドの変異体であることも可能である。
【００６５】
ＩＬ−２１ポリペプチドは、本明細書記載の条件下、例えば非常にストリンジェントな条件下（例えば０．１ｘＳＳＣ、６５℃）で、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号７に示すヌクレオチド配列、またはその相補体にハイブリダイズする核酸にコードされることも可能である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒタンパク質または融合タンパク質をコードするが、遺伝暗号の縮重のため、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号７に示すヌクレオチド配列と異なる、単離ポリヌクレオチドを使用することも可能である。点突然変異によって、または誘導された修飾によって引き起こされた、配列番号１、配列番号３、配列番号５、または配列番号７に示すヌクレオチド配列の変型もまた、使用可能である。
【００６６】
さらに他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、例えばヒトまたはネズミＩＬ−２１ポリペプチド、またはその断片を含み、そして例えば第二の部分、例えばポリペプチド（例えばＧＳＴ、Ｌｅｘ−Ａ、ＭＢＰポリペプチド配列、または例えばＦｃ断片、重鎖定常領域であって：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、およびＩｇＥを含む多様なアイソタイプの前記重鎖定常領域を含む、免疫グロブリン鎖）に融合した、融合タンパク質である。
【００６７】
融合タンパク質は、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ断片を第二の部分に連結するリンカー配列をさらに含むことも可能である。例えば、融合タンパク質は、ペプチドリンカー、例えば長さ約４〜２０アミノ酸、より好ましくは５〜１０アミノ酸のペプチドリンカーを含むことも可能であり；ペプチドリンカーは長さ８アミノ酸である。ペプチドリンカー中の各アミノ酸は、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｓｎ、ＴｈｒおよびＡｌａからなる群より選択され；ペプチドリンカーはＧｌｙ−Ｓｅｒ要素を含む。他の態様において、融合タンパク質はペプチドリンカーを含み、そしてペプチドリンカーは式（Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、配列番号１１）ｙを有する配列を含み、式中、ｙは例えば１、２、３、４、５、６、７、または８である。
【００６８】
他の態様において、融合タンパク質のＮ末端またはＣ末端にさらなるアミノ酸配列を付加して、発現、検出および／または単離または精製を容易にすることも可能である。例えば、ＩＬ−２１融合タンパク質を、１以上のさらなる部分、例えばＧＳＴ、Ｈｉｓ６タグ、ＦＬＡＧタグに連結することも可能である。例えば、融合タンパク質をさらにＧＳＴ融合タンパク質に連結することも可能であり、ここで融合タンパク質配列は、ＧＳＴ（すなわちグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ）配列のＣ末端に融合される。こうした融合タンパク質は、融合タンパク質の精製を容易にすることも可能である。
【００６９】
別の態様において、融合タンパク質は、Ｎ末端に異種シグナル配列（すなわちＩＬ−２１核酸にコードされるポリペプチドには存在しないポリペプチド配列）を含む。例えば、天然シグナル配列を除去し、そして別のタンパク質由来のシグナル配列と置き換えることも可能である。特定の宿主細胞（例えば哺乳動物宿主細胞）において、異種シグナル配列の使用を通じて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの発現および／または分泌を増加させることも可能である。類似の方法を用いて、ＩＬ−２１Ｒタンパク質およびその断片を産生し、例えばＩＬ−２１Ｒと相互作用するアゴナイズ抗体を得るための免疫原を提供することもまた可能である。
【００７０】
標準的組換えＤＮＡ技術によって、キメラタンパク質または融合タンパク質を産生することも可能である。例えば、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡ断片を、慣用的技術にしたがって、例えば連結のため、平滑端またはねじれ（ｓｔａｇｇｅｒ）端の制限酵素消化を使用して、適切な末端を提供し、適切なように粘着端を埋め込み、アルカリホスファターゼ処理して、望ましくない連結を回避し、そして酵素的に連結することによって、異なるポリペプチド配列をコードするＤＮＡ断片を、ともにインフレームで連結する。別の態様において、自動化ＤＮＡ合成装置を含む慣用的技術によって、融合遺伝子を合成することも可能である。あるいは、２つの連続遺伝子断片間に相補的オーバーハングを生じさせるアンカープライマーを用いて、遺伝子断片のＰＣＲ増幅を行うことも可能であり、この断片を続いてアニーリングして、そして再増幅してキメラ遺伝子配列を生成することも可能である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（監修）ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９２を参照されたい）。さらに、融合部分（例えば免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域）をコードする、多くの発現ベクターが商業的に入手可能である。融合部分が、免疫グロブリンタンパク質にインフレームで連結されるように、核酸をコードするＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストをこうした発現ベクターにクローニングすることも可能である。
【００７１】
いくつかの態様において、融合ポリペプチドは、二量体（例えばホモ二量体またはヘテロ二量体）または三量体などのオリゴマーとして存在することも可能である。当該技術分野に知られる方法を用いて、第一のポリペプチド、および／または第一のポリペプチドをコードする核酸を構築することも可能である。
【００７２】
いくつかの態様において、第一のポリペプチドには、全長ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストポリペプチド（例えばＩＬ−２１自体）が含まれる。あるいは、第一のポリペプチドは全長ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒポリペプチドに満たないものを含む。融合タンパク質に含まれることも可能なシグナルペプチドは、ＭＰＬＬＬＬＬＬＬＬＰＳＰＬＨＰ（配列番号９）である。望ましい場合、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト部分を含む第一のポリペプチド部分および第二のポリペプチド部分間に、１以上のアミノ酸をさらに挿入することも可能である。
【００７３】
第二のポリペプチドは、好ましくは可溶性である。いくつかの態様において、第二のポリペプチドは、連結されたポリペプチドの半減期（例えば血清半減期）を増進させる。いくつかの態様において、第二のポリペプチドには、第二のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストポリペプチドと該融合ポリペプチドの会合を容易にする配列が含まれる。好ましい態様において、第二のポリペプチドには、免疫グロブリンポリペプチドの少なくとも１領域が含まれる。免疫グロブリン融合ポリペプチドは当該技術分野に知られ、そして例えば米国特許第５，５１６，９６４号；第５，２２５，５３８号；第５，４２８，１３０号；第５，５１４，５８２号；第５，７１４，１４７号；および第５，４５５，１６５号に記載される。
【００７４】
いくつかの態様において、第二のポリペプチドは、全長免疫グロブリンポリペプチドを含む。あるいは、第二のポリペプチドは、全長に満たない免疫グロブリンポリペプチド、例えば重鎖、軽鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ２、Ｆｖ、またはＦｃを含む。第二のポリペプチドには、免疫グロブリンポリペプチドの重鎖が含まれることも可能である。第二のポリペプチドには、免疫グロブリンポリペプチドのＦｃ領域が含まれることも可能である。
【００７５】
いくつかの態様において、第二のポリペプチドは、野生型免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域のエフェクター機能よりも少ないエフェクター機能を有する。Ｆｃエフェクター機能には、例えば、Ｆｃ受容体結合、補体結合およびＴ細胞枯渇活性が含まれる（例えば米国特許第６，１３６，３１０号を参照されたい）。Ｔ細胞枯渇活性、Ｆｃエフェクター機能、および抗体安定性をアッセイするための方法が当該技術分野に知られる。１つの態様において、第二のポリペプチドは、Ｆｃ受容体に低い親和性を有するかまたはまったく親和性を持たない。別の態様において、第二のポリペプチドは、補体タンパク質Ｃ１ｑに低い親和性を有するかまたはまったく親和性を持たない。
【００７６】
タンパク質を組換え的に産生するため、本明細書記載の単離ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストポリヌクレオチドを、Ｋａｕｆｍａｎら，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１９，４４８５−４４９０（１９９１）に開示されるｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベクターなどの発現調節配列に、機能可能であるように連結することも可能である。多くの適切な発現調節配列が当該技術分野に知られる。組換えタンパク質を発現する一般的な方法もまた知られ、そしてＲ．Ｋａｕｆｍａｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，５３７−５６６（１９９０）に例示される。本明細書で定義するような「機能可能であるように連結された」は、連結されたポリヌクレオチド／発現調節配列で形質転換（トランスフェクション）されている宿主細胞によって、目的のタンパク質（例えばＩＬ−２１または別のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト）が発現されるように、目的のタンパク質をコードする特定のポリヌクレオチドおよび発現調節配列の間で共有結合が形成されるよう、酵素的または化学的に連結されていることを意味する。
【００７７】
用語「ベクター」は、本明細書において、連結されている別の核酸を輸送するか、または該核酸の維持または複製を持続させることが可能な核酸分子を指すよう意図される。ベクターの１つの種類は、「プラスミド」であり、これは、環状二本鎖ＤＮＡループを指し、この中にさらなるＤＮＡセグメントを連結することも可能である。別の種類のベクターはウイルスベクターであり、さらなるＤＮＡセグメントをウイルスゲノム内に連結することも可能である。特定のベクターは、導入された宿主内で自律複製することが可能である（例えば細菌複製起点を有する細菌ベクター、およびエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞に導入されると、宿主細胞ゲノム内に組み込まれることも可能であり、そしてそれによって宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、機能可能であるように連結された遺伝子の発現を指示することが可能である。こうしたベクターは、本明細書において、「組換え発現ベクター」（または単に「発現ベクター」）と称される。一般的に、組換えＤＮＡ技術において、有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミドの形である。本明細書において、「プラスミド」および「ベクター」は、交換可能に使用可能であり、これはプラスミドが、ベクターの最も一般的に用いられる型であるためである。しかし、本発明は、均等の機能を果たす、ウイルスベクター（例えば複製不全レトロウイルス、アデノウイルスおよびアデノ関連ウイルス）などの発現ベクターの他の形を含むと意図される。
【００７８】
用語「制御配列」は、抗体鎖遺伝子の転写または翻訳を調節する、プロモーター、エンハンサーおよび他の発現調節要素（例えばポリアデニル化シグナル）を含むことが意図される。こうした制御配列は、例えば、Ｇｏｅｄｄｅｌ；Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）に記載される。当業者は、制御配列の選択を含めて、発現ベクターの設計が、形質転換しようとする宿主細胞の選択、望ましいタンパク質の発現レベルなどの要因に応じる可能性もあることを認識するであろう。哺乳動物宿主細胞発現のための好ましい制御配列には、哺乳動物細胞において、高レベルのタンパク質発現を指示するウイルス要素、例えばＦＦ−１ａプロモーターおよびＢＧＨポリＡ、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）（ＣＭＶプロモーター／エンハンサーなど）、サル・ウイルス４０（ＳＶ４０）（ＳＶ４０プロモーター／エンハンサーなど）、アデノウイルス（例えばアデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））、およびポリオーマ由来のプロモーターおよび／またはエンハンサーが含まれる。ウイルス制御要素のさらなる説明、およびその配列に関しては、例えば、Ｓｔｉｎｓｋｉによる米国特許第５，１６８，０６２号、Ｂｅｌｌらによる米国特許第４，５１０，２４５号、およびＳｃｈａｆｆｎｅｒらによる米国特許第４，９６８，６１５号を参照されたい。
【００７９】
組換え発現ベクターは、さらなる配列、例えば宿主細胞におけるベクターの複製を制御する配列（例えば複製起点）および選択可能マーカー遺伝子を所持することも可能である。選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えばすべてＡｘｅｌらによる米国特許第４，３９９，２１６号、第４，６３４，６６５号、および第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、典型的には、選択可能マーカー遺伝子は、ベクターが導入されている宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、またはメトトレキセートなどの薬剤に対する耐性を与える。好ましい選択可能マーカー遺伝子には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（ｄｈｆｒ−宿主細胞中、メトトレキセート選択／増幅とともに用いるため）およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８選択のため）が含まれる。
【００８０】
いくつかの種類の細胞が、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質の発現に適した宿主細胞として作用しうる。機能するＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒタンパク質を発現可能な細胞種いずれを使用することも可能である。適切な哺乳動物宿主細胞には、例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト腎臓２９３細胞、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ−１細胞、他の形質転換霊長類細胞株、正常二倍体細胞、初代組織のｉｎ ｖｉｔｒｏ培養由来の細胞株、初代外植片、ＨｅＬａ細胞、マウスＬ細胞、ＢＨＫ、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、Ｒａｔ２、ＢａＦ３、３２Ｄ、ＦＤＣＰ−１、ＰＣ１２、Ｍ１ｘまたはＣ２Ｃ１２細胞が含まれる。
【００８１】
１以上の昆虫発現ベクター中で、適切な調節配列に、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを機能可能であるように連結し、そして昆虫発現系を使用することによって、こうしたタンパク質を産生することもまた可能である。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系の材料および方法は、例えばＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州サンディエゴからキットの形（ＭＡＸＢＡＣ（登録商標）キット）で商業的に入手可能であり、そしてこうした方法は、本明細書に援用されるＳｕｍｍｅｒｓおよびＳｍｉｔｈ，Ｔｅｘａｓ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ Ｓｔａｔｉｏｎ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ Ｎｏ．１５５５（１９８７）に記載されるように、当該技術分野に周知である。ＭＵ−１タンパク質の可溶性型もまた、上述のような適切な単離ポリヌクレオチドを用いて、昆虫細胞中で産生可能である。
【００８２】
あるいは、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質を酵母などのより低次の真核生物または細菌などの原核生物において、産生することも可能である。適切な酵母株には、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、シゾサッカロミセス・ポンベ（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）、クロイベロミセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）株、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、または異種タンパク質を発現可能な酵母株いずれかが含まれる。適切な細菌株には、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、または異種タンパク質を発現可能な細菌株いずれかが含まれる。
【００８３】
１つの態様において、シグナル配列を伴わずに（例えば原核生物シグナル配列または真核生物シグナル配列いずれも含まずに）細菌中でＩＬ−２１を産生する。細菌中の発現は、組換えタンパク質を取り込んだ封入体の形成を生じることも可能である。したがって、活性物質またはより活性である物質を産生するため、組換えタンパク質の再フォールディングが必要である可能性もある。細菌封入体から、正しくフォールディングされた異種タンパク質を得るためのいくつかの方法が、当該技術分野に知られる。これらの方法は、一般的に、封入体からタンパク質を可溶化し、次いでカオトロピック剤を用いて、該タンパク質を完全に変性させることを含む。
【００８４】
タンパク質の一次アミノ酸配列に、システイン残基が存在している場合、ジスルフィド結合の正しい形成を容易にする環境で、タンパク質を再フォールディングさせることも可能である（例えばレドックス系）。再フォールディングの一般的な方法が、Ｋｏｈｎｏ，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．，１８５：１８７−１９５（１９９０）、ＥＰ０４３３２２５およびＵ．Ｓ．５，３９９，６７７に開示されている。Ａｓａｎｏら（２００２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．５２８（１−３）：７０−６は、細菌細胞で産生したＩＬ−２１を再フォールディングさせる典型的な方法を記載する。例えば、大腸菌において、不溶性封入体として、ｒＩＬ−２１（組換えＩＬ−２１）を発現させ、次いで可溶化し（例えば変性剤を用いて）そしてレドックス試薬を導入する修飾透析法を用いることによって、再フォールディングさせる。
【００８５】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質はまた、トランスジェニック動物の産物として、例えばＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含有する体細胞または生殖細胞によって特徴付けられる、トランスジェニック・ウシ、ヤギ、ブタ、またはヒツジのミルクの構成要素として、発現させることも可能である。
【００８６】
望ましいタンパク質を発現させるのに必要な培養条件下で、培養形質転換宿主細胞を増殖させることによって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質を調製することも可能である。次いで、生じた発現タンパク質を培地または細胞抽出物から精製することも可能である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質またはその融合タンパク質の可溶性型を馴化培地から精製することも可能である。発現細胞から総膜分画を調製し、そしてＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００などの非イオン性界面活性剤を用いて膜を抽出することによって、膜結合型のＭＵ−１タンパク質を精製することも可能である。
【００８７】
当業者に知られる方法を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質または融合タンパク質を精製することも可能である。例えば、商業的に入手可能なタンパク質濃縮フィルター、例えばＡＭＩＣＯＮ（登録商標）またはＭＩＬＬＩＰＯＲＥ（登録商標）ＰＥＬＬＩＣＯＮＴＭ限外ろ過装置を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質を濃縮することも可能である。濃縮工程後、濃縮物を、ゲルろ過媒体などの精製マトリックスに適用することも可能である。あるいは、陰イオン交換樹脂、例えばペンダント・ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックスまたは支持体を使用することも可能である。マトリックスは、アクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロースまたはタンパク質精製に一般的に使用される他の種類であることも可能である。あるいは、陽イオン交換工程を使用することも可能である。適切な陽イオン交換基には、スルホプロピル基またはカルボキシメチル基を含む多様な不溶性マトリックスが含まれる。スルホプロピル基が好ましい（例えばＳ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）。培養上清からのＭＵ−１タンパク質または融合タンパク質の精製には、コンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリン−ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ（登録商標）またはＣｉｂａｃｒｏｍブルー３ＧＡ ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（登録商標）などのアフィニティー樹脂上の１以上のカラム工程；あるいはフェニルエーテル、ブチルエーテル、またはプロピルエーテルなどの樹脂を用いた疎水性相互作用クロマトグラフィーによるカラム工程；あるいはイムノアフィニティークロマトグラフィーによるカラム工程が含まれることもまた、可能である。最後に、逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）疎水性媒体、例えばペンダント・メチルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲルを使用した、１以上のＲＰ−ＨＰＬＣ工程を使用して、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質をさらに精製することも可能である。既知の方法にしたがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質に対する抗体を含むアフィニティーカラムを精製に使用することも可能である。前述の精製工程のいくつかまたはすべてを、多様な組み合わせで、または他の既知の方法とともに使用して、実質的に精製された単離組換えタンパク質を提供することも可能である。好ましくは、他の哺乳動物タンパク質を実質的に含まないように、または細菌で産生した場合、他の細菌タンパク質、例えば内毒素を実質的に含まないように、単離ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質を精製する。
【００８８】
他の態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、例えばＩＬ−２１Ｒ、好ましくは、哺乳動物（例えばヒトまたはネズミ）ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒに結合し、そしてＩＬ−２１Ｒ活性を活性化させる抗体、またはその抗原結合断片である。
【００８９】
本明細書において、用語「抗体」は、少なくとも１つ、そして好ましくは２つの重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書において、ＶＨと略す）、および少なくとも１つ、そして好ましくは２つの軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書において、ＶＬと略す）を含むタンパク質を指す。さらに、ＶＨ領域およびＶＬ領域を、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と称する超可変領域にさらに分割することも可能であり、この領域間には、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と称する、より保存される領域が散在する。フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の範囲は、正確に定義されてきている（本明細書に援用される、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，米国保健社会福祉局，ＮＩＨ刊行物第９１−３２４２号、およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照されたい）。各ＶＨおよびＶＬは、以下の順：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で、アミノ末端からカルボキシ末端に配置された、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される。
【００９０】
抗体は、重鎖および軽鎖の定常領域をさらに含むことも可能であり、それによってそれぞれ、重鎖および軽鎖の免疫グロブリン鎖が形成される。１つの態様において、抗体は、２つの重鎖免疫グロブリンおよび２つの軽鎖免疫グロブリンの四量体であり、ここで重鎖および軽鎖免疫グロブリンは、例えばジスルフィド結合によって、相互連結される。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬで構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、典型的には、免疫系の多様な細胞（例えばエフェクター細胞）および古典的補体系の第一の構成要素（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または因子に対する抗体の結合を仲介する。
【００９１】
本明細書において、用語「免疫グロブリン」は、免疫グロブリン遺伝子に実質的にコードされる１以上のポリペプチドからなるタンパク質を指す。認知されているヒト免疫グロブリン遺伝子には、カッパ、ラムダ、アルファ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）、ガンマ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、デルタ、イプシロンおよびミュー定常領域遺伝子とともに、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５ｋＤまたは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端の可変領域遺伝子（約１１０アミノ酸）およびＣＯＯＨ末端のカッパまたはラムダ定常領域遺伝子にコードされる。全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０ｋＤまたは４４６アミノ酸）は、同様に、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および前述の定常領域遺伝子の１つ、例えばガンマ（約３３０アミノ酸をコードする）にコードされる。
【００９２】
本明細書において、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子にコードされる抗体クラス（例えばＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。
用語、抗体の「抗原結合断片」（あるいは単に「抗体部分」または「断片」）は、本明細書において、抗原（例えばＩＬ−２１Ｒ）に特異的に結合する能力を保持する全長抗体の１以上の断片を指す。用語、抗体の「抗原結合断片」に含まれる結合断片の例には（ｉ）ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインからなる一価断片である、Ｆａｂ断片；（ｉｉ）ヒンジ領域のジスルフィド架橋に連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片である、Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬドメインおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６）；並びに（ｖｉ）単離相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子にコードされているが、組換え法を用い、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対形成して一価分子を形成する単一のタンパク質鎖として作成することを可能にする合成リンカーによって、これらを連結することも可能である（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３を参照されたい）。こうした一本鎖抗体もまた、用語、抗体の「抗原結合断片」内に含まれると意図される。当業者に知られる慣用的技術を用いてこれらの抗体断片を得て、そして損なわれていない（ｉｎｔａｃｔ）抗体の場合と同じ方式で、有用性に関してスクリーニングする。「有効ヒト」免疫グロブリン可変領域は、正常なヒトにおいて、該免疫グロブリン可変領域が免疫原性応答を誘発しないように、十分な数のヒト・フレームワークアミノ酸位を含む免疫グロブリン可変領域である。「有効ヒト」抗体は、正常なヒトにおいて、該抗体が免疫原性応答を誘発しないように、十分な数のヒト・アミノ酸位を含む抗体である。ヒトおよび有効ヒト免疫グロブリン可変領域および抗体を使用することも可能である。
【００９３】
ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒタンパク質を用いて、動物（例えば非ヒト動物、およびヒト免疫グロブリン遺伝子を含む非ヒト動物）を免疫して、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質と特異的に反応し、そしてＩＬ−２１Ｒを活性化することも可能なポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を得ることも可能である。免疫原として全ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストタンパク質を用いて、またはＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ断片を用いることによって、こうした抗体を得ることも可能である。ペプチド免疫原は、さらに、カルボキシ末端にシステイン残基を含有することも可能であり、そしてこれをキーホールリンペット（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ）ヘモシアニン（ＫＬＨ）などのハプテンにコンジュゲート化する。チロシン残基を硫酸化チロシン残基で置き換えることによって、さらなるペプチド免疫原を生成することも可能である。こうしたペプチドを合成するための方法が、例えばＲ．Ｐ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９−２１５４（１９６３）；Ｊ．Ｌ．Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙら，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．２１１，１０（１９８７）におけるように、当該技術分野に知られる。
【００９４】
マウス系でなく、ヒト免疫グロブリン遺伝子を所持するトランスジェニックマウスを用いて、ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒに対して向けられるヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を生成することも可能である。目的の抗原で免疫した、これらのトランスジェニックマウス由来の脾臓細胞を用いて、ヒト・タンパク質由来のエピトープに特異的親和性を持つヒトｍＡｂを分泌するハイブリドーマを産生する（例えば、ＷＯ９１／００９０６、ＷＯ９１／１０７４１；ＷＯ９２／０３９１８；ＷＯ９２／０３９１７；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ら １９９４ Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９；Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ら １９９４ Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．ら １９９４ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１−６８５５；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら １９９３ Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：３３−４０；Ｔｕａｉｌｌｏｎら １９９３ ＰＮＡＳ ９０：３７２０−３７２４；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎら １９９１ Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１：１３２３−１３２６を参照されたい）。
【００９５】
組換えＤＮＡ技術の当業者に知られる他の方法によって、モノクローナル抗体を生成することもまた可能である。特定の抗原特異性を有する抗体断片を同定し、そして単離するための「コンビナトリアル抗体ディスプレイ」法と称される代替法が開発されてきており、そして該方法を利用してモノクローナル抗体を産生することも可能である（コンビナトリアル抗体ディスプレイの説明に関しては、例えばＳａｓｔｒｙら １９８９ ＰＮＡＳ ８６：５７２８；Ｈｕｓｅら １９８９ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５；およびＯｒｌａｎｄｉら １９８９ ＰＮＡＳ ８６：３８３３を参照されたい）。上述のような免疫原で動物を免疫した後、生じたＢ細胞プールの抗体レパートリーをクローニングする。オリゴマー・プライマーの混合物およびＰＣＲを用いることによって、免疫グロブリン分子の多様な集団の可変領域のＤＮＡ配列を得るための方法が一般的に知られる。例えば、５’リーダー（シグナルペプチド）配列および／またはフレームワーク１（ＦＲ１）配列に対応する混合オリゴヌクレオチドプライマーとともに、保存される３’定常領域プライマーに対するプライマーを、いくつかのネズミ抗体由来の重鎖および軽鎖の可変領域のＰＣＲ増幅のために使用することも可能である（Ｌａｒｒｉｃｋら，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １１：１５２−１５６）。同様の戦略を用いて、ヒト抗体由来のヒト重鎖および軽鎖の可変領域を増幅することもまた可能である（Ｌａｒｒｉｃｋら，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２：１０６−１１０）。
【００９６】
当該技術分野に知られる組換えＤＮＡ技術によって、キメラ免疫グロブリン鎖を含むキメラ抗体を産生することも可能である。例えば、ネズミ（または他の種）のモノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードする遺伝子を制限酵素で消化して、ネズミＦｃをコードする領域を除去して、そしてヒトＦｃ定常領域をコードする遺伝子の均等部分で置換する（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許刊行物ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願１８４，１８７；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．、欧州特許出願１７１，４９６；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願１７３，４９４；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際出願ＷＯ８６／０１５３３；Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４，８１６，５６７号；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願１２５，０２３；Ｂｅｔｔｅｒら（１９８８ Ｓｉｃｅｎｃｅ ２４０：１０４１−１０４３）；Ｌｉｕら（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕら，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら，１９８７，Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗら，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９を参照されたい）。
【００９７】
当該技術分野に知られる方法によって、抗体または免疫グロブリン鎖をヒト化することも可能である。抗原結合に直接関与しないＦｖ可変領域の配列を、ヒトＦｖ可変領域由来の均等配列で置き換えることによって、ヒト化免疫グロブリン鎖を含むヒト化抗体を生成することも可能である。ヒト化抗体を生成する一般的な方法は、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓ．Ｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７、Ｏｉら，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、およびＱｕｅｅｎら、ＵＳ５，５８５，０８９、ＵＳ５，６９３，７６１およびＵＳ５，６９３，７６２に提供され、これら文献のすべての内容は、本明細書に援用される。これらの方法は、少なくとも１つの重鎖または軽鎖由来の免疫グロブリンＦｖ可変領域のすべてまたは一部をコードする核酸配列を単離し、操作し、そして発現させることを含む。こうした核酸の供給源は当業者に周知であり、そして例えば、あらかじめ決定されたターゲットに対する抗体を産生するハイブリドーマから得ることも可能である。次いで、ヒト化抗体をコードする組換えＤＮＡ、またはその断片を、適切な発現ベクターにクローニングすることも可能である。
【００９８】
ＣＤＲ移植またはＣＤＲ置換によって、ヒト化またはＣＤＲ移植抗体分子または免疫グロブリンを産生することも可能であり、ここで、免疫グロブリン鎖の１つ、２つ、またはすべてのＣＤＲを置き換えることも可能である。例えば、そのすべての内容が明確に本明細書に援用される、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら １９８６ Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら １９８８ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒら １９８８ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０；Ｗｉｎｔｅｒ ＵＳ５，２２５，５３９を参照されたい。Ｗｉｎｔｅｒは、ヒト化抗体を調製するのに使用可能なＣＤＲ移植法を記載し（英国特許出願ＧＢ２１８８６３８Ａ、１９８７年３月２６日出願；Ｗｉｎｔｅｒ ＵＳ５，２２５，５３９）、その内容は明確に本明細書に援用される。特定のヒト抗体のＣＤＲすべてを、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で置き換えることも可能であるし、またはいくつかのＣＤＲのみを非ヒトＣＤＲで置き換えることも可能である。あらかじめ決定された抗原に対するヒト化抗体の結合に必要な数のＣＤＲを置き換えれば十分である。
【００９９】
いくつかの実施において、例えば抗体の他の部分、例えば定常領域を欠失させ、付加し、または置換することによって、モノクローナル抗体、キメラ抗体、およびヒト化抗体を修飾することも可能である。例えば、抗体を以下のように修飾することも可能である：（ｉ）定常領域を欠失させることによって；（ｉｉ）定常領域を別の定常領域、例えば抗体の半減期、安定性または親和性を増加させる定常領域、または別の種もしくは抗体クラス由来の定常領域で置き換えることによって；あるいは（ｉｉｉ）定常領域中の１以上のアミノ酸を修飾して、例えばとりわけグリコシル化部位の数、エフェクター細胞機能、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、補体結合を改変することによって。
【０１００】
抗体定常領域を改変するための方法が当該技術分野に知られる。抗体の定常部の少なくとも１つのアミノ酸残基を、異なる残基で置き換えることによって、機能が改変された抗体、例えば細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１構成要素などのエフェクターリガンドに対する親和性が改変された抗体を産生することも可能である（例えば、ＥＰ３８８，１５１ Ａ１、ＵＳ５，６２４，８２１およびＵＳ５，６４８，２６０を参照されたい）。ネズミまたは他の種の免疫グロブリンに適用した場合、これらの機能を減少させるかまたは除去するであろう、類似の種類の改変を記載することも可能である。
【０１０１】
例えば、明記される残基（単数または複数）を、側鎖上に適切な官能性を有する残基（単数または複数）で置き換えるか、あるいはグルタミン酸またはアスパラギン酸などの荷電官能基を導入するか、あるいはおそらくフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはアラニンなどの芳香族非極性残基を導入することによって、ＦｃＲ（例えばＦｃガンマＲ１）またはＣ１ｑ結合に関する抗体（例えばＩｇＧ、例えばヒトＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を改変することが可能である（例えばＵＳ５，６２４，８２１を参照されたい）。
【０１０２】
１つの態様において、ＩＬ−２１Ｒのアゴニストは、ＩＬ−２１Ｒおよび別の受容体サブユニット、例えばγｃと相互作用する剤である。例えば、剤は、ＩＬ−２１Ｒおよび別の受容体サブユニット、例えばγｃと相互作用するタンパク質であることも可能である。該タンパク質は、例えば、ＩＬ−２１Ｒと相互作用する１つの抗原結合部位、およびγｃと相互作用する別の抗原結合部位を含む、二重特異性抗体であることも可能である。こうしたタンパク質の結合を用いて、受容体を架橋し、そしてアゴナイズし、例えばＳＴＡＴ３またはＳＴＡＴ５のシグナル伝達を活性化するかまたは増加させることも可能である。
【０１０３】
１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストは、ＩＬ−２１およびＩＬ−２１Ｒの一方または両方と結合することによって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ相互作用を安定化させる剤（例えば免疫グロブリン）である。
【０１０４】
当該技術分野に知られる方法を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒタンパク質のアゴニストを、例えば、ＩＬ−２１Ｒポリペプチドの結合および／または活性化に関してスクリーニングすることも可能である。固定されているかまたは固定されていない、望ましい結合タンパク質を用いた結合アッセイが当該技術分野に知られ、そして本明細書記載のＩＬ−２１Ｒタンパク質を用いて、この目的のために使用可能である。精製した細胞に基づくスクリーニングアッセイまたはタンパク質に基づく（細胞不含）スクリーニングアッセイを用いて、こうしたアゴニストを同定することも可能である。例えば、ＩＬ−２１Ｒタンパク質をキャリアー上に精製型で固定し、そして精製ＩＬ−２１Ｒタンパク質に対する潜在的なリガンドの結合を測定することも可能である。ＩＬ−２１Ｒ活性およびＳＴＡＴ３またはＳＴＡＴ５のシグナル伝達を評価するための細胞に基づくアッセイが知られる。例を本明細書に記載する。
【０１０５】
薬剤組成物
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、薬学的に許容しうるキャリアーと組み合わせると、薬剤組成物として用いることも可能である。こうした組成物は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストおよびキャリアーに加えて、多様な希釈剤、増量剤（ｆｉｌｌｅｒ）、塩、緩衝剤、安定化剤、可溶化剤、および当該技術分野に周知の他の物質を含有することも可能である。用語「薬学的に許容しうる」は、活性成分（単数または複数）の生物学的活性の有効性に干渉しない、非毒性物質を意味する。キャリアーの特性は、投与経路に応じるであろう。
【０１０６】
薬剤組成物は、以下に詳細に記載するような他の抗炎症剤をさらに含有することも可能である。こうしたさらなる因子および／または剤を薬剤組成物中に含んで、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストとの相乗効果を生じるか、またはＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストに引き起こされる副作用を最小限にすることも可能である。逆に、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを特定の抗炎症剤の配合物に含んで、抗炎症剤の副作用を最小限にすることも可能である。
【０１０７】
薬剤組成物は、リポソームの形であることも可能であり、この場合は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストが、他の薬学的に許容しうるキャリアーに加えて、水性溶液中のミセル、不溶性単層、液体結晶、または薄板状層として、凝集された形で存在する、脂質などの両親媒性剤と組み合わされている。リポソーム配合物に適した脂質には、限定なしに、モノグリセリド、ジグリセリド、スルファチド、リゾレシチン、リン脂質、サポニン、胆汁酸等が含まれる。こうしたリポソーム配合物の調製は、すべて本明細書に援用される、米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号に開示されるように、当該技術分野の技術レベル内である。
【０１０８】
本明細書において、用語「療法的有効量」は、薬剤組成物または方法の各活性構成要素の総量が、患者の意義ある利益、例えばこうした状態の症状の改善、その回復、または回復速度の増加を示すのに十分であることを意味する。単独で投与される個々の活性成分に適用した場合、該用語は、その成分のみを指す。併用に適用した場合、該用語は、連続してまたは同時に、併用投与したのであれ、療法効果を生じる活性成分の組み合わせた量を指す。
【０１０９】
治療法または使用の実施において、療法的有効量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを被験者、例えば哺乳動物（例えばヒト）に投与する。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを、単独で、または抗炎症剤を使用する治療などの他の療法と併用して投与することも可能である。１以上の剤と同時投与する場合、ＩＬ−２１および／またはＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを第二の剤と同時に、または連続して投与することも可能である。連続して投与する場合、他の剤と併用してＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを投与するのに適した順序を主治医が決定することも可能である。
【０１１０】
薬剤組成物中で用いるか、または本発明の方法を実施する、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストの投与を、経口摂取、頭蓋内、吸入、または皮膚、皮下、または静脈内注射または投与などの多様な慣用法で行うことも可能である。例えば、硬膜外または別の方式で、例えば脳脊髄液に組成物を搬送することも可能である。
【０１１１】
療法的有効量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを経口投与する場合、結合剤は、錠剤、カプセル、粉末、溶液またはエリキシル剤の形であろう。錠剤型で投与する場合、薬剤組成物は、ゼラチンまたはアジュバントなどの固体キャリアーをさらに含有することも可能である。錠剤、カプセル、および粉末は、約５〜９５％の結合剤、そして好ましくは約２５〜９０％の結合剤を含有する。液体型で投与する場合、水、石油、動物または植物起源の油、例えばピーナツ油、ミネラルオイル、大豆油、またはゴマ油、あるいは合成油などの液体キャリアーを添加することも可能である。薬剤組成物の液体型は、生理学的生理食塩水溶液、デキストロースまたは他の糖類溶液、あるいはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールをさらに含有することも可能である。液体型で投与する場合、薬剤組成物は、重量約０．５〜９０％の結合剤、そして好ましくは、約１〜５０％の結合剤を含有する。
【０１１２】
療法的有効量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを静脈内、皮膚または皮下注射によって投与する場合、結合剤は、発熱物質不含の非経口的に許容しうる水性溶液の形であろう。ｐＨ、等張性、安定性等を十分考慮した、こうした非経口的に許容しうるタンパク質溶液の調製は、当該技術分野の範囲内である。静脈内、皮膚、または皮下注射に好ましい薬剤組成物は、結合剤に加えて、塩化ナトリウム注射液、リンゲル注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、乳酸加リンゲル注射液、または当該技術分野に知られる他のビヒクルなどの等張ビヒクルを含有しなければならない。本発明の薬剤組成物はまた、安定化剤、保存剤、緩衝剤、酸化防止剤、または当業者に知られる他の添加剤も含有することも可能である。
【０１１３】
本発明の薬剤組成物中のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストの量は、治療する状態の性質および重症度、並びに患者が経験した以前の治療の性質に応じることも可能である。主治医は、各個々の患者を治療するアゴニストの量を決定することも可能である。例えばまず、主治医は、低用量の結合剤を投与し、そして患者の反応を観察することも可能である。患者にとって最適な療法効果が得られるまで、より多い用量の結合剤を投与して、そして一般的にその時点で投薬量はさらに増加されないことも可能であるし、またはサイトカインレベルまたは１以上の症状を監視することによることも可能である。本発明の方法の実施に用いる多様な薬剤組成物が、体重ｋｇあたり、約０．１μｇ〜約１００ｍｇのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストを含有すべきであることが意図される。例えば、有用な投薬量には、体重ｋｇあたり、約１０μｇ〜１ｍｇ、０．１〜５ｍｇ、および３〜５０ｍｇのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが含まれることも可能である。ＩＬ−２１の有用な投薬量には、さらに、体重ｋｇあたり、約５μｇ〜１ｍｇ、０．１〜５ｍｇ、および３〜２０ｍｇのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが含まれることも可能である。
【０１１４】
薬剤組成物を用いた静脈内療法の期間は、治療する疾患の重症度、並びに各個々の患者の状態および潜在的な固有の反応に応じて多様であることも可能である。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストの各適用期間は、連続静脈内投与では、例えば１２〜２４時間の範囲内であることも可能である。主治医は、本発明の薬剤組成物を用いた静脈内療法の適切な期間を決定することも可能である。
【０１１５】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１アゴニストに加えて、こうしたアゴニストがタンパク質である場合、こうしたタンパク質をコードするポリヌクレオチドの投与または使用（例えば遺伝子治療またはＤＮＡの導入に適したベクター中）によって、疾患または障害を治療するかまたは防止することも可能である。
【０１１６】
免疫応答を増進するためのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ−アゴニストの使用
１つの側面において、本発明は、被験者において、神経系の免疫学的障害（例えば多発性硬化症を含む、神経系の慢性免疫学的障害）を治療する（例えば治癒させる、抑制する、改善する、該障害の開始を遅延させるかまたは防止する、あるいは該障害の反復または再発を防止する）かまたは防止するための方法を提供する。該方法は：免疫細胞活性および／または細胞数を調節する（例えばサイトカインレベル、例えばサイトカイン発現、産生および／または放出を調節する）のに十分な量のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを被験者に投与し、それによって、神経系の免疫学的障害、例えば多発性硬化症を治療するかまたは防止することを含む。
【０１１７】
多発性硬化症（ＭＳ）は、炎症およびミエリン鞘の欠損によって特徴付けられる中枢神経系の疾患であり、ミエリン鞘は、神経を絶縁し、そして適切な神経機能に必要な脂肪性物質である。ＩＬ−２１が調節する免疫応答から生じる炎症を、本明細書記載のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストで防止するかまたは治療することも可能である。多発性硬化症の実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）マウスモデル（Ｔｕｏｈｙら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８）１４１：１１２６−１１３０）、Ｓｏｂｅｌら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：２３９３−２４０１）、およびＴｒａｕｇｏｔｔ（Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８９）１１９：１１４−１２９））において、ＥＡＥ誘導前に、ＩＬ−２１注射でマウスを処置すると、疾患の症状が減少する。したがって、本明細書記載のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを同様に用いて、ヒトにおける多発性硬化症を治療するかまたは防止することも可能である。
【０１１８】
ＭＳ診断に関するワークショップによって定義されるような、臨床的に明確なＭＳの診断を確立する基準によって、こうした治療に適した患者を同定することも可能である（Ｐｏｓｅｒら，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．１３：２２７，１９８３）。簡潔には、臨床的に明確なＭＳを患う個体は、２回の発作を経験し、そして２つの病巣の臨床的徴候、または１つの病巣の臨床的徴候および別の離れた病巣のパラクリニカル（ｐａｒａｃｌｉｎｉｃａｌ）徴候のいずれかを有する。明確なＭＳはまた、２回の発作および脳脊髄液中のＩｇＧの少クローン性バンドによって、あるいは発作、２つの病巣の臨床的徴候および脳脊髄液中の少クローン性バンドの組み合わせによって、診断されることも可能である。臨床的に可能性があるＭＳの診断には、わずかに低い基準を用いる。
【０１１９】
いくつかの異なる方式で、多発性硬化症に有効な治療を調べることも可能である。以下の基準のいずれかを満たせば有効な治療であることの証明となる。３つの主な基準を用いる：ＥＤＳＳ（長期身体障害状態スケール）、再燃（ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎ）の出現またはＭＲＩ（磁気共鳴画像化法）。ＥＤＳＳは、ＭＳによる臨床的な機能障害を等級分けする手段である（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ３３：１４４４，１９８３）。神経学的機能障害の種類および重症度に関して、８つの機能系を評価する。簡潔には、治療前に、以下の系の機能障害に関して患者を評価する：錐体、小脳、脳幹、感覚、腸および膀胱、視覚、大脳、および他のもの。規定の間隔で、経過観察を行う。スケールは、０（正常）から１０（ＭＳによる死亡）の範囲である。１つの完全な段階の減少は、本発明の背景において、治療が有効であることと定義される（Ｋｕｒｔｚｋｅ，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：５７３−７９，１９９４）。再燃は、ＭＳに起因し、そして適切な新規神経学的異常が伴う、新たな症状の出現と定義される（ＩＦＮＢ ＭＳ研究グループ、上記）。さらに、再燃は、少なくとも２４時間持続しなければならないし、そして少なくとも３０日間の安定または改善の後でなければならない。簡潔には、患者は、臨床家による標準的神経学的検査を受ける。再燃は、神経学的評価スケール（Ｓｉｐｅら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ３４：１３６８，１９８４）の変化にしたがうと、軽度、中程度、または重度いずれかである。年間再燃率および再燃がない患者の比率を決定する。これらの測定値のいずれかに関して、処置群およびプラセボ群の間に、再燃率または再燃がない患者の比率に統計的に有意な相違がある場合、療法は有効であると見なされる。さらに、最初の再燃までの時間および再燃期間および重症度もまた、測定可能である。これに関して、療法としての有効性の測定値は、対照群に比較して、処置群における、最初の再燃までの時間または再燃期間および重症度の統計的に有意な相違である。
【０１２０】
ＭＲＩを用いて、ガドリニウム−ＤＴＰＡ増進画像化法（ＭｃＤｏｎａｌｄらＡｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３６：１４，１９９４）を用い、活性病巣を測定するか、またはＴ２加重技術を用い、病巣の位置および範囲を測定することも可能である。簡潔には、ベースラインＭＲＩを得る。続く研究各々で、同じ画像化平面および患者の体位を用いる。体位取りおよび画像化の順序を選択して、病巣検出を最大限にし、そして病巣追跡を容易にすることも可能である。続く研究では、同じ体位取りおよび画像化の順序を用いることも可能である。放射線医が、ＭＳ病巣の存在、位置および範囲を決定することも可能である。病巣領域の輪郭を描き、そして総病巣領域に関して、スライスごとに合計することも可能である。３つの解析を行うことも可能である：新規病巣の徴候、活性病巣出現率、病巣領域の変化パーセント（Ｐａｔｙら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ ４３：６６５，１９９３）。ベースラインに比較して個々の患者において、またはプラセボ群に対して治療群において、統計的に有意な改善があることによって、療法による改善を確立することも可能である。
【０１２１】
多発性硬化症に関連する典型的な症状には：視神経炎、複視、眼振、眼の測定障害、核間性眼筋麻痺、運動および音の眼内せん光、求心性瞳孔障害、不全麻痺、単不全麻痺、不全対麻痺、片側不全麻痺、四肢不全麻痺（ｑｕａｄｒａｐａｒｅｓｉｓ）、麻痺（ｐｌｅｇｉａ）、対麻痺、片麻痺、四肢麻痺（ｔｅｔｒａｐｌｅｇｉａ、ｑｕａｄｒａｐｌｅｇｉａ）、痙縮、講語障害、筋萎縮、攣縮、痙攣、低血圧、クローヌス、筋クローヌス、筋波動症、下肢不安症候群、垂足、機能不全反射、錯感覚症、無感覚症、神経痛、神経障害性および神経原性の痛み、レルミット徴候、固有受容機能不全、三叉神経痛、運動失調症、企図振戦、測定障害、前庭性運動失調、めまい、言語行動失調、筋緊張異常、拮抗運動反復不全、頻尿、膀胱痙縮、膀胱弛緩、排尿筋−膀胱括約筋協調障害、勃起機能障害、性感異常症、冷感症、便秘、便意逼迫、糞便失禁、抑うつ症、認知機能障害、痴呆、躁うつ、感情的不安定性、多幸症、二極性症候群、不安症、失語症、神経性不全失語症、易疲労、ウトホフ症状、胃食道逆流、および睡眠障害が含まれる。
【０１２２】
防止の候補患者は、遺伝的要因の存在によって同定可能である。例えば、ＭＳ患者の大部分は、ＨＬＡ ＤＲ２ａ型およびＤＲ２ｂ型を有する。治療に適切な、ＭＳに遺伝的傾向を有するＭＳ患者は、２つの群に属する。第一群は、再発寛解型の初期疾患患者である。エントリー基準には、疾患期間１年未満、１．０〜３．５のＥＤＳＳスコア、年間０．５より高い再燃率、および研究前の２ヶ月間、臨床的再燃がないことが含まれることも可能である。第二群には、過去２年間に渡って、１．０ＥＤＳＳ単位／年より高い疾患進行の患者が含まれるであろう。防止の候補患者は、サイトカイン・パラメーター、例えばＩＬ−１０またはＩＬ−２１パラメーターを評価することによって、同定可能である。
【０１２３】
防止の背景において、以下の基準に基づいて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの有効性を判断する：限界希釈によって決定される、ＭＢＰ応答性Ｔ細胞の頻度、ＭＢＰ応答性Ｔ細胞株およびクローンの増殖応答、患者から確立されたＭＢＰに対するＴ細胞株およびクローンのサイトカイン・プロフィール。応答性細胞頻度の減少、天然のものに比較して改変されたペプチドを用いた場合のチミジン取り込みの減少、並びにＴＮＦおよびＩＦＮ−αの減少によって、有効性を確認する。臨床測定値には、１年および２年間隔の再発率、およびＥＤＳＳの変化が含まれ、６ヶ月間持続する、ＥＤＳＳ上１．０単位のベースラインからの進行までの時間が含まれる。カプラン・メイヤー曲線上で、身体障害の進行持続が遅延していれば、有効性が示される。他の基準には、ＭＲＩ上のＴ２画像の面積および体積の変化、並びにガドリニウム増進画像によって決定される病巣の数および体積の変化が含まれる。
【０１２４】
１つの態様において、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、例えばその薬剤組成物を、併用療法において投与する、すなわち他の剤、例えば脳の免疫および炎症障害、例えば多発性硬化症などの病的状態または障害を治療するのに有用な療法剤と併用する。用語「併用」は、この背景において、同時にまたは連続していずれかで、実質的に同時期に投与することを意味する。連続して投与した場合、第二の化合物投与の開始時に、好ましくは、２つの化合物の第一のものは、治療部位で、なお有効濃度で検出可能である。
【０１２５】
例えば、併用療法には、１以上のさらなる療法剤、例えば以下により詳細に記載するような、１以上のサイトカイン阻害剤および増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、および／または細胞傷害剤または細胞分裂停止剤と同時配合され、そして／または同時投与される、１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト（例えばＩＬ−２１ポリペプチドまたは融合タンパク質、ペプチドアゴニストまたは小分子アゴニスト）が含まれることも可能である。さらに、本明細書記載の１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを本明細書記載の２以上の療法剤と併用することも可能である。こうした併用療法は、より低い投薬量で投与された療法剤を好適に利用し、したがって多様な単剤療法に関与する、ありうる毒性または合併症を回避することも可能である。さらに、本明細書に開示する療法剤は、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒ受容体経路と異なる経路に作用して、そしてしたがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの効果を増進し、そして／またはこうした効果と同調すると予期される。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと併用する、好ましい療法剤は、自己免疫およびそれに続く炎症性応答の異なる段階に干渉する剤である。
【０１２６】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと併用可能な、多発性硬化症を治療するかまたは防止するための剤の限定されない例には、以下が含まれる：インターフェロン、例えばインターフェロン−ベータ−１α（例えばアボネックスＴＭ；Ｂｉｏｇｅｎ）およびインターフェロン−１β（ベタセロンＴＭ；１７位が置換されたヒト・インターフェロンβ；Ｂｅｒｌｅｘ／Ｃｈｉｒｏｎ）、酢酸グラティラマー（コポリマー１、Ｃｏｐ−１とも称される；コパキソンＴＭ；Ｔｅｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）；高圧酸素；静脈内免疫グロブリン；クラブリビン（ｃｌａｂｒｉｂｉｎｅ）；本明細書記載のＴＮＦアンタゴニスト；コルチコステロイド；プレドニゾロン；メチルプレドニゾロン；アザチオプリン；シクロホスファミド；シクロスポリン；メトトレキセート；４−アミノプリン；およびチザニジン。ＩＬ−２１アゴニストと併用可能なさらなるアンタゴニストには、他のヒト・サイトカインまたは増殖因子、例えばＴＮＦ、ＬＴ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１８、ＥＭＡＰ−１１、ＧＭ−ＣＳＦ、ＦＧＦ、およびＰＤＧＦに対する抗体またはそれらのアンタゴニストが含まれる。本明細書記載のＩＬ−２１アゴニストを、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ９０またはそのリガンドなどの細胞表面分子に対する抗体と併用することも可能である。ＩＬ−２１アゴニストを、メトトレキセート、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、レフルノミド、ＮＳＡＩＤ、例えばイブプロフェン、コルチコステロイド、例えばプレドニゾロン、ホスホジエステラーゼ阻害剤、アデノシン・アゴニスト、抗血栓剤、補体阻害剤、アドレナリン作動剤、本明細書記載の炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達に干渉する剤、ＩＬ−１β変換酵素阻害剤（例えばＶｘ７４０）、抗Ｐ７、ＰＳＧＬ、ＴＡＣＥ阻害剤、キナーゼ阻害剤などのＴ細胞シグナル伝達阻害剤、メタロプロテイナーゼ阻害剤、スルファサラジン、アザチオプリン、６−メルカプトプリン、アンギオテンシン変換酵素阻害剤、本明細書記載の可溶性サイトカイン受容体およびその誘導体、並びに抗炎症性サイトカイン（例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３およびＴＧＦ）。
【０１２７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと併用可能な、多発性硬化症を治療するかまたは防止するための療法剤の例には、インターフェロン−β、例えばＩＦＮβ−１αおよびＩＦＮβ−１β、酢酸グラティラマー（例えばコパキソン（登録商標））、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンドおよびＣＤ８０に対する抗体、並びにＩＬ−１２アンタゴニストが含まれる。さらなる例には、ＭＳの１以上の症状または副作用を治療するのに使用可能な剤、例えばアマンタジン、バクロフェン、ミネラルオイル、パパベリン、メクリジン、ヒドロキシジン、スルファメトキサゾール、シプロフロキサシン、ドキュセート、シプロフロキサシン、ペモリン、ダントロレン、デスモプレッシン、デスモプレッシン、デキサメタゾン、プレドニゾン、トルテロジン（ｔｏｌｔｅｒｏｄｉｎｅ）、フェニトイン、オキシブチニン、オキシブチニン（持続放出配合）、ビサコジル、ベンラファクシン、アミトリプチリン、ドキュセート便柔軟剤便秘薬、リン酸ナトリウム、メテナミン、バクロフェン（クモ膜下内）、クロナゼパム、イソニアジド、バルデナフィル、ニトロフラントイン、車前子親水性粘漿剤、アルプロスタジル、ギャバペンチン、ミトキサントロン、オキシブチニン、ノルトリプチリン、パロキセチン、水酸化マグネシウム、臭化プロパンテリン、アルプロスタジル、モダフィニル、フルオキセチン、フェナゾピリジン、グリセリン、メチルプレドニゾロン、カルバマゼピン、イミプラミン、ジアゼパム、シルデナフィル、ブプロピオン、チザニジン、およびセルトラリンが含まれる。
【０１２８】
こうした剤の例には、ＩＬ−１２アンタゴニスト、例えばＩＬ−１２（好ましくはヒトＩＬ−１２）に結合する、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体（またはその抗原結合断片）、例えばＷＯ００／５６７７２、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ／ＢＡＳＦに開示される抗体；ＩＬ−１２受容体阻害剤、例えばヒトＩＬ−１２受容体に対する抗体；およびＩＬ−１２受容体、例えばヒトＩＬ−１２受容体の可溶性断片が含まれる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例には、ＩＬ−１５またはその受容体に対する抗体（またはその抗原結合断片）、例えばヒトＩＬ−１５またはその受容体に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体、ＩＬ−１５受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１５結合タンパク質が含まれる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例には、ヒトＩＬ−１８に対する抗体、例えばキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体（またはその抗原結合断片）、ＩＬ−１８受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、Ｍａｌｌｅｔら（２００１）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２８）が含まれる。ＩＬ−１アンタゴニストの例には、Ｖｘ７４０などのインターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤、ＩＬ−１アンタゴニスト、例えばＩＬ−１ＲＡ（ＡＮＩＫＩＮＲＡ、ＡＭＧＥＮ）、ｓＩＬ１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）、および抗ＩＬ−１受容体抗体（またはその抗原結合断片）が含まれる。
【０１２９】
ＴＮＦアンタゴニストの例には、ＴＮＦ（例えばヒトＴＮＦα）に対するキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体またはｉｎ ｖｉｔｒｏ生成抗体（またはその抗原結合断片）、例えばＤ２Ｅ７（ヒトＴＮＦα抗体、Ｕ．Ｓ．６，２５８，５６２、ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体、レミケードＴＭ、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；抗ＴＮＦ抗体断片（例えばＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体の可溶性断片またはその誘導体、例えば７５ｋｄ ＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレルＴＭ；Ｉｍｍｕｎｅｘ；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａを参照されたい）、ｐ５５ ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（レネルセプトＴＭ））；酵素アンタゴニスト、例えばＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤（例えばアルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、ＷＯ０１／５５１１２、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ ３３３３、−００５、または−０２２）；およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８４；Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照されたい）が含まれる。好ましいＴＮＦアンタゴニストは、ＴＮＦ受容体の可溶性断片、例えばｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体またはその誘導体、例えば７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ、およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤である。
【０１３０】
他の態様において、本明細書に記載するＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、以下の１以上と併用投与することも可能である：ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば可溶性ＩＬ−１３受容体（ｓＩＬ−１３）および／またはＩＬ−１３に対する抗体；ＩＬ−２アンタゴニスト、例えばＤＡＢ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２（ＩＬ−２融合タンパク質；Ｓｅｒａｇｅｎ、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６，１２２３を参照されたい）、および／またはＩＬ−２Ｒに対する抗体、例えば抗Ｔａｃ（ヒト化抗ＩＬ−２Ｒ；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０ Ｍａｒ １；５０（５）：１４９５−５０２を参照されたい））。さらに別の併用には、非枯渇性抗ＣＤ４阻害剤（ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ ２１０３９６（非枯渇性霊長類化（ｐｒｉｍａｔｉｚｅｄ）抗ＣＤ４抗体；ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ））と併用するＩＬ−２１アンタゴニストが含まれる。さらに他の好ましい併用には、抗体、可溶性受容体、またはアンタゴニスト性リガンドを含む、ＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）同時刺激経路のアンタゴニスト；それとともに、Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）；抗炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ ５２０００；組換えＩＬ−１０、ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３およびＴＧＦ、並びにそのアゴニスト（例えばアゴニスト抗体）が含まれる。
【０１３１】
他の態様において、１以上のＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、１以上の抗炎症性薬剤、免疫抑制剤、あるいは代謝阻害剤、または酵素阻害剤と同時配合し、そして／または同時投与することも可能である。本明細書に記載するＩＬ−２１アゴニストと併用可能な薬剤または阻害剤の限定されない例には、限定されるわけではないが：非ステロイド性抗炎症性薬剤（単数または複数）（ＮＳＡＩＤ）、例えばイブプロフェン、テニダップ（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８０を参照されたい）、ナプロキセン（例えばＮｅｕｒｏ Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７，ｐｐ．１２０９−１２１３を参照されたい）、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナク、およびインドメタシン）；スルファサラジン（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８１を参照されたい）；プレドニゾロンなどのコルチコステロイド；サイトカイン抑制性抗炎症性薬剤（単数または複数）（ＣＳＡＩＤ）；ヌクレオチド生合成の阻害剤、例えばプリン生合成の阻害剤、葉酸アンタゴニスト（例えばメトトレキセート（Ｎ−［４−［［（２，４−ジアミノ−６−プテリジニル）メチル］メチルアミノ］ベンゾイル］−Ｌ−グルタミン酸））；およびピリミジン生合成の阻害剤、例えばジヒドロオロト酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えばレフルノミド（例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５，ｐｐ．１０３−１０７を参照されたい）））の１以上が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと併用する好ましい療法剤には、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、ＤＨＯＤＨ阻害剤（例えばレフルノミド）、および葉酸アンタゴニスト（例えばメトトレキセート）が含まれる。
【０１３２】
さらなる阻害剤の例には：コルチコステロイド（経口、吸入、および局所注射）；免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲ阻害剤例えばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えばエステル・ラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ−７７９（Ｅｌｉｔ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３（８）：１２４９−５３；Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ら（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ３（２）：２９５−３０４））；ＴＮＦαまたはＩＬ−１などの炎症促進性サイトカインによるシグナル伝達に干渉する剤（例えばＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブおよびその変異体、ＭＫ−９６６、例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ８１を参照されたい）；ホスホジエステラーゼ阻害剤、例えばＲ９７３４０１、（ホスホジエステラーゼＩＶ型阻害剤；例えばＡｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遺），Ｓ２８２を参照されたい）；ホスホリパーゼ阻害剤、例えば細胞質ゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤（例えばトリフルオロメチルケトン類似体（Ｕ．Ｓ．６，３５０，８９２））；血管内皮細胞増殖因子または増殖因子受容体の阻害剤、例えばＶＥＧＦ阻害剤および／またはＶＥＧＦ−Ｒ阻害剤；および血管形成阻害剤の１以上が含まれる。ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと併用する、好ましい療法剤には、免疫抑制剤、例えばシクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）；およびｍＴＯＲ阻害剤、例えばシロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体、例えば可溶性ラパマイシン誘導体（例えばエステル・ラパマイシン誘導体、例えばＣＣＩ−７７９）；ＣＯＸ２阻害剤、例えばセレコキシブおよびその変異体；およびホスホリパーゼ阻害剤、例えば細胞質ゾル・ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）阻害剤（例えばトリフルオロメチルケトン類似体）が含まれる。
【０１３３】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストと併用可能な療法剤のさらなる例には：６−メルカプトプリン（６−ＭＰ）；アザチオプリン；スルファサラジン；メサラジン；オルサラジン；クロロキニン／ヒドロキシクロロキン；ペニシラミン；アウロチオールナレート（ａｕｒｏｔｈｉｏｒｎａｌａｔｅ）（筋内および経口）；アザチオプリン；コルヒチン；ベータ−２アドレナリン受容体アゴニスト（サルブタモール、テルブタリン、サルメテロール（ｓａｌｍｅｔｅｒａｌ））；キサンチン（テオフィリン、アミノフィリン）；クロモグリク酸；ネドクロミル；ケトチフェン；イプラトロピウムおよびオキシトロピウム；ミコフェノール酸モフェチル；アデノシン・アゴニスト；抗血栓剤；補体阻害剤；およびアドレナリン作用剤の１以上が含まれる。
【０１３４】
本発明の別の側面は、したがって、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアンタゴニストと他の療法化合物の併用投与を行うためのキットに関する。１つの態様において、該キットは、薬剤キャリアー中で配合された１以上の結合剤、および１以上の別個の薬剤調製物中で適切であるように配合された、少なくとも１つの剤、たとえば療法剤を含む。
【０１３５】
サイトカインレベルを評価するアッセイ
標準的アッセイいずれかを用いて、試料または被験者中のサイトカインレベルを評価することも可能である。例えば、被験者から試料を得るか、または試料が培養細胞を含むことも可能である。典型的な試料は、１以上の細胞、組織、あるいは血液、尿、リンパ液、脳脊髄液、または漿液などの体液、培養細胞（例えば組織培養細胞）、頬スワブ、洗口液、便、組織切片、および生検物質（例えば生検吸引物）から得られるか、またはこれらに由来することも可能である。
【０１３６】
サイトカインレベルを評価するための方法は、核酸を評価して、目的のサイトカイン（例えばＩＬ−１０またはＩＬ−２１）をコードするｍＲＮＡまたはｃＤＮＡを検出するか、またはタンパク質を評価して、サイトカイン自体を検出することを含む。例えばＲＴ−ＰＣＲ（例えば定量的ＰＣＲ）または核酸マイクロアレイを用いて、核酸を評価することも可能である。例えば質量分析またはイムノアッセイを用いて、タンパク質を評価することも可能である。
【０１３７】
ＥＬＩＳＡは、イムノアッセイの１つの好適な型を提供する。例えば、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、カリフォルニア州カマリロは、＜０．２ｐｇ／ｍｌの感度でＩＬ−１０を、そして＜２ｐｇ／ｍｌの感度でＩＬ−１２を検出するのに使用可能なアッセイ試薬を提供する。同様に、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓは、＜８ｐｇ／ｍｌの感度でＩＦＮ−γを、または＜７ｐｇ／ｍｌの感度でＴＧＦ−ベータ１を検出する試薬を提供する。
【０１３８】
ＳＥＡＲＣＨＬＩＧＨＴＴＭプロテオームアレイ系（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｂｏｓｔｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ）は、多数のサイトカインを一度に評価する包括的試薬を提供する。
【０１３９】
これらの方法を用いて、ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの投与を評価することも可能である。例えば、こうしたアゴニストが、サイトカイン、例えばＩＬ−１０またはＩＦＮγのレベルに統計的に有意な変化を引き起こすかどうかを決定するか、あるいはこうしたアゴニストが、許容しうる変化、例えばサイトカイン、例えばＩＬ−１０またはＩＦＮγの正常範囲内レベルへの変化を引き起こすかどうかを決定する。評価から得られる情報を用いて、アゴニストの投薬量を調節することも可能である。例えば、ＩＬ−１０レベルが正常被験者の範囲内のレベルに増加しない場合、例えば投薬量または頻度を増加させることによって、アゴニストの投与を増加させることも可能である。逆に、ＩＬ−１０レベルが、望ましい範囲を超えて増加している場合、例えば投薬量または頻度を減少させることによって、アゴニストの投与を減少させることも可能である。
【０１４０】
免疫活性化因子としてのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの活性を評価するためのアッセイ
免疫系の活性化因子としてのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの活性を、とりわけ、以下の方法によって測定することも可能である：
胸腺細胞または脾臓細胞傷害性に適したアッセイには、限定なしに：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ． Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ監修，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行（第３章，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；第７章，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７８：２４８８−２４９２，１９８１；Ｈｅｒｒｍａｎｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２８：１９６８−１９７４，１９８２；Ｈａｎｄａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１５６４−１５７２，１９８５；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｏｗｍａｎｅｔら，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６１：１９９２−１９９８；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｒｏｗｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５３：３０７９−３０９２，１９９４に記載されるものが含まれる。
【０１４１】
Ｔ細胞依存性免疫グロブリン応答およびアイソタイプスイッチングに関するアッセイ（とりわけ、Ｔ細胞依存性抗体応答を調節し、そしてＴｈ１／Ｔｈ２プロフィールに影響を及ぼすタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｍａｌｉｓｚｅｗｓｋｉ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：３０２８−３０３３，１９９０；並びにＡｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｂ ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ：Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，Ｍｏｎｄ，Ｊ．Ｊ．およびＢｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｍ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．３．８．１−３．８．１６，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９４に記載されるものが含まれる。
【０１４２】
混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイ（とりわけ、主にＴｈ１およびＣＴＬ応答を生じるタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ監修，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行（第３章，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；第７章，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２に記載されるものが含まれる。
【０１４３】
樹状細胞依存性アッセイ（とりわけ、未刺激（ｎａｉｖｅ）Ｔ細胞を活性化する、樹状細胞に発現されるタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｇｕｅｒｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３４：５３６−５４４，１９９５；Ｉｎａｂａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７３：５４９−５５９，１９９１；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５４：５０７１−５０７９，１９９５；Ｐｏｒｇａｄｏｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １８２：２５５−２６０，１９９５；Ｎａｉｒら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ６７：４０６２−４０６９，１９９３；Ｈｕａｎｇら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６４：９６１−９６５，１９９４；Ｍａｃａｔｏｎｉａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １６９：１２５５−１２６４，１９８９；Ｂｈａｒｄｗａｊら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ９４：７９７−８０７，１９９４；およびＩｎａｂａら，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １７２：６３１−６４０，１９９０に記載されるものが含まれる。
【０１４４】
リンパ球生存／アポトーシスに関するアッセイ（とりわけ、スーパー抗原誘導後、アポトーシスを防止するタンパク質、およびリンパ球ホメオスタシスを制御するタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｄａｒｚｙｎｋｉｅｗｉｃｚら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １３：７９５−８０８，１９９２；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｌｅｕｋｅｍｉａ ７：６５９−６７０，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：１９４５−１９５１，１９９３；Ｉｔｏｈら，Ｃｅｌｌ ６６：２３３−２４３，１９９１；Ｚａｃｈａｒｃｈｕｋ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １４５：４０３７−４０４５，１９９０；Ｚａｍａｉら，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ １４：８９１−８９７，１９９３；Ｇｏｒｃｚｙｃａら，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １：６３９−６４８，１９９２に記載されるものが含まれる。
【０１４５】
Ｔ細胞拘束および発達の初期段階に影響を及ぼすタンパク質に関するアッセイには、限定なしに：Ａｎｔｉｃａら，Ｂｌｏｏｄ ８４：１１１−１１７，１９９４；Ｆｉｎｅら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５５：１１１−１２２，１９９４；Ｇａｌｙら，Ｂｌｏｏｄ ８５：２７７０−２７７８，１９９５；Ｔｏｋｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８８：７５４８−７５５１，１９９１に記載されるものが含まれる。
【０１４６】
ＳＴＡＴの活性化を評価するためのアッセイは、例えばＧｉｌｍｏｕｒら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：１０７７２−１０７７６に記載される。例えば評価する細胞（例えばアゴニストまたは候補アゴニストで処理した細胞）を溶解し、そして抗ホスホチロシン抗体を用いて、チロシンリン酸化タンパク質を免疫沈降することも可能である。次いで、シグナル伝達経路構成要素に特異的な抗体、例えばＳＴＡＴタンパク質、例えばＳＴＡＴ５に対する抗体を用いて、沈降した物質を評価することも可能である。
【０１４７】
サイトカイン産生および細胞増殖／分化の調節因子としてのＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストの活性を測定するためのアッセイ
限定なしに、３２Ｄ、ＤＡ２、ＤＡ１Ｇ、Ｔ１０、Ｂ９、Ｂ９／１１、ＢａＦ３、ＭＣ９／Ｇ、Ｍ＋（プレＢ Ｍ＋）、２Ｅ８、ＲＢ５、ＤＡ１、１２３、Ｔ１１６５、ＨＴ２、ＣＴＬＬ２、ＴＦ−１、Ｍｏ７ｅおよびＣＭＫを含む細胞株に関する、いくつかの日常的な因子依存性細胞増殖アッセイのいずれか１つを用いて、サイトカイン産生および細胞増殖／分化の調節因子としてのＩＬ−２１／ＩＬ２１Ｒアゴニストの活性を試験することも可能である。
【０１４８】
Ｔ細胞または胸腺細胞増殖に関するアッセイには、限定なしに：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ監修，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行（第３章，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ３．１−３．１９；第７章，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：１７０６−１７１２，１９９０；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １３３：３２７−３４１，１９９１；Ｂｅｒｔａｇｎｏｌｌｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：３７７８−３７８３，１９９２；Ｂｏｗｍａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：１７５６−１７６１，１９９４に記載されるものが含まれる。
【０１４９】
脾臓細胞、リンパ節細胞または胸腺細胞のサイトカイン産生および／または増殖に関するアッセイには、限定なしに：Ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ Ｔ ｃｅｌｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ａ．Ｍ．およびＳｈｅｖａｃｈ，Ｅ．Ｍ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．３．１２．１−３．１２．１４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９４；およびＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｇａｍｍａ，Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｒ．Ｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．８．１−６．８．８，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９４に記載されるものが含まれる。
【０１５０】
造血細胞およびリンパ球産生細胞の増殖および分化に関するアッセイには、限定なしに：Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｕｍａｎ ａｎｄ Ｍｕｒｉｎｅ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ２ ａｎｄ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ４， Ｂｏｔｔｏｍｌｙ，Ｋ．，Ｄａｖｉｓ，Ｌ．Ｓ．およびＬｉｐｓｋｙ，Ｐ．Ｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．３．１−６．３．１２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９１；ｄｅＶｒｉｅｓら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１２０５−１２１１，１９９１；Ｍｏｒｅａｕら，Ｎａｔｕｒｅ ３３６：６９０−６９２，１９８８；Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８０：２９３１−２９３８，１９８３；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６−−Ｎｏｒｄａｎ，Ｒ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．６．１−６．６．５，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９１；Ｓｍｉｔｈら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８３：１８５７−１８６１，１９８６；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ｌｌ−−Ｂｅｎｎｅｔｔ，Ｆ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｅ．ｅ．ａ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．１５．１ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９１；Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ ｍｏｕｓｅ ａｎｄ ｈｕｍａｎ Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ９−−Ｃｉａｒｌｅｔｔａ，Ａ．，Ｇｉａｎｎｏｔｔｉ，Ｊ．，Ｃｌａｒｋ，Ｓ．Ｃ．およびＴｕｒｎｅｒ，Ｋ．Ｊ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．中 Ｊ．Ｃｏｌｉｇａｎ監修 Ｖｏｌ １ ｐｐ．６．１３．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，トロント １９９１に記載されるものが含まれる。
【０１５１】
抗原に対するＴ細胞クローン応答に関するアッセイ（とりわけ、増殖およびサイトカイン産生を測定することによって、ＡＰＣ−Ｔ細胞相互作用に影響を及ぼすとともに、Ｔ細胞効果を達成するタンパク質を同定するもの）には、限定なしに：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ，Ａ．Ｍ．Ｋｒｕｉｓｂｅｅｋ，Ｄ．Ｈ．Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ，Ｅ．Ｍ．Ｓｈｅｖａｃｈ，Ｗ Ｓｔｒｏｂｅｒ監修，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ−Ｉｈｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ刊行（第３章，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ Ｍｏｕｓｅ Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ；第６章，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；第７章，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ ｓｔｕｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ）；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．７７：６０９１−６０９５，１９８０；Ｗｅｉｎｂｅｒｇｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１１：４０５−４１１，１９８１；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３４９４−３５００，１９８６；Ｔａｋａｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：５０８−５１２，１９８８に記載されるものが含まれる。
【０１５２】
以下の限定されない実施例において、我々は、とりわけ、ＩＬ−２１がＥＡＥマウスにおいて、部分的保護を生じることを立証する。
【実施例】
【０１５３】
実施例：ＩＬ−２１はＥＡＥマウスにおいて、部分的保護を生じる
試薬
マウス
メスＣ５７ＢＬ／６マウスおよびメスＳＪＬ／ＪマウスをＴｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから得た。動物をＡＡＡＬＡＣ認可バリア施設内で飼育し、そして寄生虫とともに細菌およびウイルス病原体に関して監視した。すべてのマウスを８〜１０週齢で用いた。
【０１５４】
増殖応答
マウス・オリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）３５−５５ペプチドに曝露したＣ５７ＢＬ／６メスマウスのリンパ節細胞を、免疫２０日後にマウスから採取した。１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含有するダルベッコの修飾イーグル培地（ＤＭＥ）中で細胞を培養した。ＭＯＧ３５−５５ペプチド（２５μｇ／ｍｌ）で細胞を再刺激し、そしてネズミＩＬ−２１の存在下または非存在下で、平底９６ウェルマイクロタイタープレート中で増殖させた。７２時間後、０．５μＣｉのトリチル化チミジン／ウェルでプレートをパルス処理し、そして４〜６時間インキュベーションした。シンチレーションカウンターによって、３つ組ウェルにおけるＤＮＡ中のチミジンの平均取り込みを測定した。
【０１５５】
サイトカイン定量化
免疫マウス由来のリンパ節細胞を、２５μｇ／ｍｌのＭＯＧ３５−５５ペプチドで、ｉｎ ｖｉｔｒｏで活性化した。１０％ＦＣＳおよびＩＬ−２（１０Ｕ／ｍｌ）および５ｎｇ／ｍｌ〜２５ｎｇ／ｍｌの範囲の多様な濃度のネズミＩＬ−２１を含有する（ＤＭＥ）中で、細胞を培養した。７２時間後、培養上清を収集し、そしてＳＥＡＲＣＨＬＩＧＨＴＴＭプロテオームアレイ系（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｂｏｓｔｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｅｎｔｅｒ）を用いて、サイトカインおよびケモカイン産生に関して解析した。
【０１５６】
実験自己免疫脳炎（ＥＡＥ）の誘導および評価
８００μｇのヒト結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｆｃｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を補った完全フロイントアジュバント中で乳化した１００μｇのプロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ）１３９−１５１ペプチドを皮下注射して、メスＳＪＬ／Ｊマウスを免疫した。免疫時および４８時間後に、４００ｎｇの百日咳毒素（Ｌｉｓｔ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）もまた、マウスに腹腔内注射した。以下のスケールにしたがって、ＥＡＥの臨床的徴候に関して、動物を毎日スコア付けした：０、疾患なし、１、足を引きずる；２、後肢が弱いかまたは部分的麻痺；３、後肢完全麻痺；４、前肢および後肢麻痺、並びに５、瀕死。各群のマウスの個々のスコアを平均することによって、平均臨床スコアを計算した。
【０１５７】
ｉｎ ｖｉｖｏのＩＬ−２１投与
ＥＡＥに感作したマウスに、０．２ｍｌのＰＢＳ中、１００ｎｇ／日または１μｇ／日のネズミＩＬ−２１を腹腔内注射した。対照マウスに０．２ｍｌの生理食塩水を投与した。ＰＬＰ１３９−１５１ペプチドで免疫する前日に処置を始め、そして総数１０用量を１日おきに続けて与えた。
【０１５８】
ネズミＩＬ−２１に誘導される増殖応答およびサイトカイン産生
ＭＯＧ３５−５５特異的Ｔ細胞応答の誘導および拡大に対するＩＬ−２１の影響を評価した。結果によって、ＩＬ−２１が用量依存方式でリンパ球の増殖を誘導することが示される。図１Ａおよび表１において、２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２１と培養したリンパ球は、ペプチドのみで刺激した細胞に比較して、３．５倍の有意な増殖増加を示した。サイトカインの力価決定（ｔｉｔｒａｔｉｏｎ）に際して、細胞は、対照細胞と同様の増殖能を示した。
表１：ＩＬ−２１の存在下でのリンパ球増殖
【０１５９】
【表１】
【０１６０】
図１Ｂは、１μｇ／ｍｌのプロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ）のみで処理した細胞に比較して、示した濃度のネズミＩＬ−２１（ｎｇ／ｍｌ）で培養したＰＬＰトランスジェニックマウス由来のＴ細胞の増殖増加を示す。
【０１６１】
増殖性Ｔ細胞応答が、サイトカイン産生と相関するかどうかを同定するため、リンパ球をＩＬ−２１と培養した。未処理細胞と比較して、ＩＬ−２１は、Ｔｈ２サイトカイン、ＩＬ−１０の分泌増加を誘導した。この応答は飽和性であり（図２および表２）、そしてＩＬ−２１の最高試験濃度（２５ｎｇ／ｍｌ）で、細胞は、対照群よりも、およそ２．５倍多いＩＬ−１０を産生した。
表２：ＩＬ−２１はＩＬ−１０分泌を誘導する
【０１６２】
【表２】
【０１６３】
図３は、対照細胞に比較して、示した濃度のネズミＩＬ−２１で処理した脾臓細胞によるＩＦＮγの分泌減少を示す。ＭＯＧ３３−５５で刺激した免疫マウス由来脾臓細胞に、ＩＬ−２１を添加すると、ＩＦＮγの２倍の減少が生じ、一方、ＩＬ−２１Ｒの添加は２倍の増加を生じる。リンパ節細胞をＩＬ−２１で処理すると、ＩＦＮγレベルが、２０，０００ｐｇ／ｍｌ（対照）または１５８４０ｐｇ／ｍｌ（偽処理）から３２６０ｐｇ／ｍｌ（ＩＬ−２１処理）に減少した。
【０１６４】
ＩＬ−２１またはＩＬ−２１Ｒ処理の際のサイトカイン分泌変化を、以下のように表３に要約する。
表３：サイトカイン分泌の変化
【０１６５】
【表３】
【０１６６】
ＩＬ−２１で処置したマウスにおけるＥＡＥの発展
ＥＡＥの発展におけるＩＬ−２１の役割を決定するため、ＣＦＡ中の脳炎誘発性ＰＬＰ１３９−１５１ペプチドに加えて百日咳毒素でマウスを免疫し、そしてＩＬ−２１の予防的措置でこれらを処置した。生理食塩水またはＩＬ−２１で処置したマウスにおいて、ＥＡＥの臨床的経過を比較した。
【０１６７】
表４は、ネズミＩＬ−２１の存在下または非存在下で処理した２つの典型的なＰＬＰ培養物におけるサイトカイン分泌の平均変化を立証する。未処理対照細胞におけるサイトカインレベルを１００に基準化する。
表４
【０１６８】
【表４】
【０１６９】
図４および図５に示すように、対照マウスは疾患に非常に感受性である。対照的に、低用量（１００ｎｇ／日）または高用量（１μｇ／日）のＩＬ−２１のいずれかで処置したマウスは、より深刻でない臨床スコアを有した。
【０１７０】
図５および表５は、対照マウスに比較して、低用量（１００ｎｇ／日）または高用量（１μｇ／日）のネズミＩＬ−２１で処置したマウスにおける、ＥＡＥ重症度の減少を示す。
表５
【０１７１】
【表５】
【０１７２】
我々の発見によって、ＩＬ−２１がＥＡＥ進行の調節に関与し、そしてＩＬ−１０の上方制御によって、この経路が仲介されうることが示される。
本出願全体で引用される、すべての参考文献、係属中の特許出願および刊行特許の内容は、明確に本明細書に援用される。
【０１７３】
均等物
当業者は、日常的な実験以上のものを用いずに、本明細書記載の本発明の特定の態様の多くの均等物を認識するか、または確認することも可能である。こうした均等物は、請求項に含まれることが意図される。
【図面の簡単な説明】
【０１７４】
【図１Ａ】図１Ａは、多様な希釈の２０ｎｇ／ｍｌのネズミＩＬ−２１の存在下で培養したリンパ節細胞の増殖増加を示す線グラフである。ペプチドのみで刺激した細胞に比較して、ＩＬ−２１は、例えば、１：５０希釈で、リンパ節細胞の増殖増加を引き起こした。
【図１Ｂ】図１Ｂは、プロテオリピド・タンパク質（ＰＬＰ）１μｇ／ｍｌのみで処理した細胞に比較して、示した濃度のネズミＩＬ−２１（ｎｇ／ｍｌ）および１μｇ／ｍｌのＰＬＰで培養したＰＬＰトランスジェニックマウス由来のＴ細胞の増殖増加を示す線グラフである。
【図２】図２は、未処理細胞に比較して、示した濃度のマウスＩＬ−２１の存在下でのＩＬ−１０の分泌増加を示す棒グラフである。応答は飽和性であり、そしてＩＬ−２１の最高試験濃度（２５ｎｇ／ｍｌ）で、細胞は、対照群のおよそ２．５倍多いＩＬ−１０を産生した。増加したレベルのＩＬ−１０が産生されたことから、ＩＬ−２１処理が、抗原特異的細胞をＴｈ２プロフィールに歪めうることが示唆される。
【図３】図３は、対照細胞に比較して、示した濃度のネズミＩＬ−２１で処理した脾臓細胞およびリンパ節細胞によるＩＦＮγの分泌の減少を示す棒グラフである。ＭＯＧ ３３−５５で刺激した免疫マウス由来脾臓細胞にＩＬ−２１を添加すると、ＩＦＮγの２倍の減少が生じ、一方、ＩＬ−２１Ｒの添加は２倍の増加を引き起こす。
【図４】図４は、ＥＡＥモデルにおける疾患の臨床的症状の減少を示す。この図は、ＩＬ−２１がＩＦＮγを抑制し、そしてＩＬ−１０を増進することを示す。図４は、ｉｎ ｖｉｖｏトランスファー後の日数に関して、未処理培養に比較して、ＩＬ−２１処理ＰＬＰ脾臓細胞で検出されるＥＡＥ症状の減少を示す線グラフである。
【図５】図５は、ＥＡＥモデルにおける疾患の臨床的症状の減少を示す。この図は、対照マウスに比較して、ネズミＩＬ−２１の低用量（１００ｎｇ／日）または高用量（１μｇ／日）いずれかで処置したマウスにおけるＥＡＥの重症度の減少を示す棒グラフである。
【配列表】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者において、多発性硬化症の症状を改善する方法であって：
多発性硬化症の症状を改善するのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）のアゴニストを被験者に投与し、ここで前記アゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片からなる群より選択される
ことを含む、前記方法。
【請求項２】
アゴニストが、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一である配列を含み、そしてＩＬ−２１Ｒに結合可能である、ＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１の方法。
【請求項３】
アゴニストが、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一である配列を含み、そしてＩＬ−２１Ｒに結合可能である、ＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１の方法。
【請求項４】
アゴニストが、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１の方法。
【請求項５】
アゴニストが、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１の方法。
【請求項６】
アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体がヒト抗体である、請求項５の方法。
【請求項７】
少なくとも１つの抗炎症剤を被験者に投与することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項８】
抗炎症剤が、ＩＦＮβ−１α、ＩＦＮβ−１β、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−２３アンタゴニスト、メトトレキセート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）、およびＣＣＩ−７７９からなる群より選択される、請求項７の方法。
【請求項９】
被験者が哺乳動物である、請求項１の方法。
【請求項１０】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを単回用量の形で投与する、請求項１の方法。
【請求項１１】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、数日、数週または数ヶ月の間隔を置いた一連の用量として投与する、請求項１の方法。
【請求項１２】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを注射によって投与する、請求項１の方法。
【請求項１３】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを中枢神経系に注射する、請求項１２の方法。
【請求項１４】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストをクモ膜下（ｉｎｔｒａｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ）注射または静脈内注射する、請求項１２の方法。
【請求項１５】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを腰部脳脊髄液に注射する、請求項１２の方法。
【請求項１６】
被験者のＩＬ−１０パラメーターを評価することによって、多発性硬化症リスクに関して被験者を評価することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項１７】
投与前に、被験者のＩＬ−１０パラメーターを評価することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項１８】
投与後、被験者のＩＬ−１０パラメーターを評価することをさらに含み、ＩＬ−１０パラメーターの増加は療法に効果があったことの指標となる、請求項１７の方法。
【請求項１９】
投与後、被験者のＩＬ−１０パラメーターを評価することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項２０】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストおよび抗炎症剤を含む薬剤組成物であって、前記ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが、ＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片からなる群より選択される、前記薬剤組成物。
【請求項２１】
ＩＬ−２１ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一である配列を有し、そしてＩＬ−２１Ｒに結合可能である、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２２】
ＩＬ−２１ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一である配列を有し、そしてＩＬ−２１Ｒに結合可能である、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２３】
前記ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２４】
抗炎症剤が、ＩＦＮβ−１α、ＩＦＮβ−１β、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−２３アンタゴニスト、メトトレキセート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）、およびＣＣＩ−７７９からなる群より選択される、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２５】
アゴニストが、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体またはその抗原結合断片である、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２６】
アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体がヒト抗体である、請求項２５の薬剤組成物。
【請求項２７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、およびミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質を含む、薬剤組成物であって、前記ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが、ＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片からなる群より選択される、前記薬剤組成物。
【請求項２８】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１ＲアゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドを含むタンパク質であり、そしてミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質が酢酸グラティラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）を含む、請求項２７の薬剤組成物。
【請求項２９】
哺乳動物被験者において、多発性硬化症を改善する方法であって：
被験者における多発性硬化症または多発性硬化症の少なくとも１つの症状を改善するのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与する
ことを含む、前記方法。
【請求項３０】
被験者がヒトであり、そしてＩＬ−２１ポリペプチドがヒトＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項２９の方法。
【請求項３１】
ＩＬ−２１ポリペプチドが配列番号２を含む、請求項３０の方法。
【請求項３２】
ＩＬ−２１ポリペプチドが組換え的に産生される、請求項３０の方法。
【請求項３３】
ＩＬ−２１ポリペプチドが、細菌細胞において、組換え的に産生される、請求項３０の方法。
【請求項３４】
哺乳動物被験者において、ＩＬ−１０不全、またはＩＬ−１０不全に関連する障害を調節する方法であって：
被験者におけるＩＬ−１０発現または活性を増加させるのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与する
ことを含む、前記方法。
【請求項３５】
哺乳動物被験者において、免疫学的障害を治療するかまたは防止する方法であって：
哺乳動物被験者におけるＩＬ−１０パラメーターを評価し；そして
評価されたＩＬ−１０パラメーターの結果に応じた量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与する
ことを含む、前記方法。
【請求項３６】
ＩＬ−１０パラメーターが、ＩＬ−１０タンパク質またはＩＬ−１０ ｍＲＮＡのレベルに関する量的情報を含む、請求項３５の方法。
【請求項３７】
ＩＬ−１０パラメーターが、ＩＬ−１０タンパク質活性のレベルに関する量的情報を含む、請求項３５の方法。
【請求項３８】
免疫学的障害が神経学的障害である、請求項３５の方法。
【請求項３９】
被験者がヒトであり、そして免疫学的障害が多発性硬化症である、請求項３８の方法。
【請求項４０】
免疫学的障害が、ミエリン鞘に損傷または改変を引き起こす、請求項３８の方法。
【請求項４１】
哺乳動物被験者において、多発性硬化症の治療を評価する方法であって：
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）のアゴニストを被験者に投与し；そして
被験者におけるＩＬ−１０パラメーターを評価する
ことを含む、前記方法。
【請求項４２】
第二の用量のアゴニストを被験者に投与することをさらに含み、評価されたＩＬ−１０パラメーターの関数として、第二の用量を投与する、請求項４１の方法。
【請求項４３】
アゴニストが、ＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片からなる群より選択される、請求項４１の方法。
【請求項４４】
アゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項４３の方法。
【請求項４５】
被験者がヒトであり、そしてＩＬ−２１ポリペプチドがヒトＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項４４の方法。
【請求項４６】
ＩＬ−２１ポリペプチドが配列番号２を含む、請求項４４の方法。
【請求項４７】
（ｉ）ＩＬ−２１ポリペプチドを含む、１以上の単位用量の薬剤組成物を含む容器；および
（ｉｉ）多発性硬化症を有するか、または有すると推測される被験者に、単位用量を投与するための使用説明書
を含む、製品。
【請求項４８】
使用説明書がラベル上に提供される、請求項４７の製品。
【請求項４９】
ラベルが、容器の外部表面上に貼られている、請求項４８の製品。
【請求項１】
被験者において、多発性硬化症の症状を改善する方法であって：
多発性硬化症の症状を改善するのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）のアゴニストを被験者に投与し、ここで前記アゴニストは、ＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片からなる群より選択される
ことを含む、前記方法。
【請求項２】
アゴニストが、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一である配列を含み、そしてＩＬ−２１Ｒに結合可能である、ＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１の方法。
【請求項３】
アゴニストが、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一である配列を含み、そしてＩＬ−２１Ｒに結合可能である、ＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１の方法。
【請求項４】
アゴニストが、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項１の方法。
【請求項５】
アゴニストが、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体またはその抗原結合断片である、請求項１の方法。
【請求項６】
アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体がヒト抗体である、請求項５の方法。
【請求項７】
少なくとも１つの抗炎症剤を被験者に投与することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項８】
抗炎症剤が、ＩＦＮβ−１α、ＩＦＮβ−１β、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−２３アンタゴニスト、メトトレキセート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）、およびＣＣＩ−７７９からなる群より選択される、請求項７の方法。
【請求項９】
被験者が哺乳動物である、請求項１の方法。
【請求項１０】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを単回用量の形で投与する、請求項１の方法。
【請求項１１】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを、数日、数週または数ヶ月の間隔を置いた一連の用量として投与する、請求項１の方法。
【請求項１２】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを注射によって投与する、請求項１の方法。
【請求項１３】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを中枢神経系に注射する、請求項１２の方法。
【請求項１４】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストをクモ膜下（ｉｎｔｒａｔｈｅｔｉｃａｌｌｙ）注射または静脈内注射する、請求項１２の方法。
【請求項１５】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストを腰部脳脊髄液に注射する、請求項１２の方法。
【請求項１６】
被験者のＩＬ−１０パラメーターを評価することによって、多発性硬化症リスクに関して被験者を評価することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項１７】
投与前に、被験者のＩＬ−１０パラメーターを評価することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項１８】
投与後、被験者のＩＬ−１０パラメーターを評価することをさらに含み、ＩＬ−１０パラメーターの増加は療法に効果があったことの指標となる、請求項１７の方法。
【請求項１９】
投与後、被験者のＩＬ−１０パラメーターを評価することをさらに含む、請求項１の方法。
【請求項２０】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストおよび抗炎症剤を含む薬剤組成物であって、前記ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが、ＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片からなる群より選択される、前記薬剤組成物。
【請求項２１】
ＩＬ−２１ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９０％同一である配列を有し、そしてＩＬ−２１Ｒに結合可能である、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２２】
ＩＬ−２１ポリペプチドが、配列番号２のアミノ酸配列に少なくとも９５％同一である配列を有し、そしてＩＬ−２１Ｒに結合可能である、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２３】
前記ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが、配列番号２のアミノ酸配列を含む、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２４】
抗炎症剤が、ＩＦＮβ−１α、ＩＦＮβ−１β、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−２３アンタゴニスト、メトトレキセート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）、およびＣＣＩ−７７９からなる群より選択される、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２５】
アゴニストが、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体またはその抗原結合断片である、請求項２０の薬剤組成物。
【請求項２６】
アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体がヒト抗体である、請求項２５の薬剤組成物。
【請求項２７】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニスト、およびミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質を含む、薬剤組成物であって、前記ＩＬ−２１／ＩＬ−２１Ｒアゴニストが、ＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片からなる群より選択される、前記薬剤組成物。
【請求項２８】
ＩＬ−２１／ＩＬ−２１ＲアゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドを含むタンパク質であり、そしてミエリン塩基性タンパク質を刺激するタンパク質が酢酸グラティラマー（ｇｌａｔｉｒａｍｅｒ）を含む、請求項２７の薬剤組成物。
【請求項２９】
哺乳動物被験者において、多発性硬化症を改善する方法であって：
被験者における多発性硬化症または多発性硬化症の少なくとも１つの症状を改善するのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与する
ことを含む、前記方法。
【請求項３０】
被験者がヒトであり、そしてＩＬ−２１ポリペプチドがヒトＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項２９の方法。
【請求項３１】
ＩＬ−２１ポリペプチドが配列番号２を含む、請求項３０の方法。
【請求項３２】
ＩＬ−２１ポリペプチドが組換え的に産生される、請求項３０の方法。
【請求項３３】
ＩＬ−２１ポリペプチドが、細菌細胞において、組換え的に産生される、請求項３０の方法。
【請求項３４】
哺乳動物被験者において、ＩＬ−１０不全、またはＩＬ−１０不全に関連する障害を調節する方法であって：
被験者におけるＩＬ−１０発現または活性を増加させるのに十分な量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与する
ことを含む、前記方法。
【請求項３５】
哺乳動物被験者において、免疫学的障害を治療するかまたは防止する方法であって：
哺乳動物被験者におけるＩＬ−１０パラメーターを評価し；そして
評価されたＩＬ−１０パラメーターの結果に応じた量のインターロイキン−２１（ＩＬ−２１）ポリペプチドを被験者に投与する
ことを含む、前記方法。
【請求項３６】
ＩＬ−１０パラメーターが、ＩＬ−１０タンパク質またはＩＬ−１０ ｍＲＮＡのレベルに関する量的情報を含む、請求項３５の方法。
【請求項３７】
ＩＬ−１０パラメーターが、ＩＬ−１０タンパク質活性のレベルに関する量的情報を含む、請求項３５の方法。
【請求項３８】
免疫学的障害が神経学的障害である、請求項３５の方法。
【請求項３９】
被験者がヒトであり、そして免疫学的障害が多発性硬化症である、請求項３８の方法。
【請求項４０】
免疫学的障害が、ミエリン鞘に損傷または改変を引き起こす、請求項３８の方法。
【請求項４１】
哺乳動物被験者において、多発性硬化症の治療を評価する方法であって：
インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）／ＩＬ−２１受容体（ＩＬ−２１Ｒ）のアゴニストを被験者に投与し；そして
被験者におけるＩＬ−１０パラメーターを評価する
ことを含む、前記方法。
【請求項４２】
第二の用量のアゴニストを被験者に投与することをさらに含み、評価されたＩＬ−１０パラメーターの関数として、第二の用量を投与する、請求項４１の方法。
【請求項４３】
アゴニストが、ＩＬ−２１ポリペプチド、アゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体およびアゴニスト性抗ＩＬ−２１Ｒ抗体の抗原結合断片からなる群より選択される、請求項４１の方法。
【請求項４４】
アゴニストがＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項４３の方法。
【請求項４５】
被験者がヒトであり、そしてＩＬ−２１ポリペプチドがヒトＩＬ−２１ポリペプチドである、請求項４４の方法。
【請求項４６】
ＩＬ−２１ポリペプチドが配列番号２を含む、請求項４４の方法。
【請求項４７】
（ｉ）ＩＬ−２１ポリペプチドを含む、１以上の単位用量の薬剤組成物を含む容器；および
（ｉｉ）多発性硬化症を有するか、または有すると推測される被験者に、単位用量を投与するための使用説明書
を含む、製品。
【請求項４８】
使用説明書がラベル上に提供される、請求項４７の製品。
【請求項４９】
ラベルが、容器の外部表面上に貼られている、請求項４８の製品。
【図１Ａ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【公表番号】特表２００６−５２３６８２（Ｐ２００６−５２３６８２Ａ）
【公表日】平成１８年１０月１９日（２００６．１０．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０７４７８（Ｐ２００６−５０７４７８）
【出願日】平成１６年３月２２日（２００４．３．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００８８３３
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８４８３５
【国際公開日】平成１６年１０月７日（２００４．１０．７）
【出願人】（３０２０４２２０９）ワイス (7)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年１０月１９日（２００６．１０．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年３月２２日（２００４．３．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／００８８３３
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８４８３５
【国際公開日】平成１６年１０月７日（２００４．１０．７）
【出願人】（３０２０４２２０９）ワイス (7)
【Ｆターム（参考）】
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