エリスロポエチンポリペプチド及びそれらの使用
本発明は、特にヒト対象における治療的又は予防的処置のためのＥＰＯポリペプチド及びそれらの使用に関する。本発明はまた、前記ポリペプチドをコードする核酸、このような核酸を含むベクター及びそれらを含有する組換え細胞に関する。本発明はさらに、このようなポリペプチドを産生する方法、並びに任意のサンプル中のこれらポリペプチドを検出し、又は投薬する方法及びツールを開示する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において実質的にヘマトクリットレベルを増加させることなく、前記哺乳動物、特にヒトにおける組織保護活性を有する単離エリスロポエチン変異ポリペプチド。
【請求項２】
ａ）アミノ酸５６から１９３までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｂ）アミノ酸１から２７までの欠失及びアミノ酸５６から１９３までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｃ）配列番号１３に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｄ）配列番号１３のアミノ酸２８から５５に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｅ）
【化１】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化２】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加Ｎ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項３】
ａ）アミノ酸５６から１９３までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｂ）アミノ酸１から２７までの欠失及びアミノ酸５６から１９３までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｃ）配列番号１３に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｄ）配列番号１３のアミノ酸２８から５５に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｅ）
【化３】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化４】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｈ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｉ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４】
ａ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から８２（グルタミン酸）までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から８２（グルタミン酸）までの少なくとも１つの欠失及びアミノ酸１から２７までの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｃ）配列番号４に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｄ）配列番号４のアミノ酸２８から１６４に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｅ）
【化５】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化６】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
ａ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から８２（グルタミン酸）までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から８２（グルタミン酸）までの少なくとも１つの欠失及びアミノ酸１から２７までの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｃ）配列番号４に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｄ）配列番号４のアミノ酸２８から１６４に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｅ）
【化７】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とは異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化８】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）とは異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｈ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｉ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ａ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から１４２（グルタミン）までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から１４２（グルタミン）までの少なくとも１つの欠失及びアミノ酸１から２７までの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｃ）配列番号６に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｄ）配列番号６のアミノ酸２８から１０４に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｅ）
【化９】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化１０】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
ａ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から１４２（グルタミン）までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｂ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から１４２（グルタミン）までの少なくとも１つの欠失及びアミノ酸１から２７までの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｃ）配列番号６に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｄ）配列番号６のアミノ酸２８から１０４に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｅ）
【化１１】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とは異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化１２】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とは異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド；
ｈ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｉ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項８】
ａ）配列番号８に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号８と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含むポリペプチド
からなる群から選択される単離ポリペプチド。
【請求項９】
ａ）配列番号９に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号９のアミノ酸２８から１５４に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｃ）
【化１３】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）又はｂ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｄ）
【化１４】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）又はｂ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｅ）５７位、７８位、７９位、８０位、８２位、８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチド；
ｆ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）又はｅ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
ａ）配列番号８からなるポリペプチド又は；
ｂ）配列番号８と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
ａ）配列番号９からなるポリペプチド又は；
ｂ）配列番号９のアミノ酸２８から１５４に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｃ）
【化１５】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）又はｂ）とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｄ）
【化１６】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）又はｂ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｅ）５７位、７８位、７９位、８０位、８２位、８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド；
ｆ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）又はｅ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｇ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）又はｅ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
追加のアミノ酸ドメインに作動可能に結合した請求項１から１１までのいずれか一項に記載のポリペプチドを含む融合タンパク質。
【請求項１３】
前記ポリペプチドが、ＧＳＴ配列、Ｈｉｓタグ配列、多量体化ドメイン、免疫グロブリン分子の定常領域又はヒト柔毛膜性生殖腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）などのヘテロ二量体タンパク質ホルモンに作動可能に結合した請求項１２に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする単離核酸分子。
【請求項１５】
ｃＤＮＡ分子である請求項１４に記載の単離核酸分子。
【請求項１６】
【化１７】
又はそれらの相補鎖若しくは縮重配列、或いは
【化１８】
のポリペプチドをコードする核酸又は相補鎖からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる請求項１４又は１５に記載の単離核酸分子。
【請求項１７】
請求項１４から１６までのいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項１８】
請求項１４から１６までのいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項１７に記載のベクターを含む組換え宿主細胞。
【請求項１９】
原核細胞又は真核細胞である請求項１８に記載の宿主細胞。
【請求項２０】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載のポリペプチドを産生する方法であって、請求項１８又は１９に記載の組換え宿主細胞を核酸分子の発現を可能にする条件下で培養すること、及び産生されたポリペプチドを回収することを含む方法。
【請求項２１】
活性な結合体又は複合体の形態である請求項１から１３までのいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
ペグ化された請求項２１に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載のポリペプチドに選択的に結合する抗体、又はその断片若しくは誘導体。
【請求項２４】
モノクローナル抗体、又はその断片若しくは誘導体である請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
ヒト若しくはヒト化抗体、又はその断片若しくは誘導体である請求項２３又は２４に記載の抗体。
【請求項２６】
非相同部分に結合した請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体を含む免疫結合体。
【請求項２７】
薬剤として使用するための、請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１４から１６までのいずれか一項に記載の核酸分子、請求項１７に記載のベクター、又は請求項１８又は１９に記載の細胞、及び薬学的に許容できる担体、賦形剤、又は安定化剤を含む医薬組成物。
【請求項２９】
患者の障害症状、ＥＰＯ発現又は活性の調節不全を含む障害を治療、予防又は改善する方法であって、請求項２８に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む方法。
【請求項３０】
前記障害が、貧血、慢性腎不全患者の高血圧、小児透析患者、ヘマトクリット濃度不足に関連する疾患又は病態、化学療法治療に関係した障害、癌、循環器病、一次的神経系症状又は精神医学的症状を有する中枢神経系（ＣＮＳ）疾患又は末梢神経系疾患からなる群から選択される患者の障害症状を治療、予防又は改善する方法であって、請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項２８に記載の医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む方法。
【請求項３１】
患者の障害、即ち貧血、慢性腎不全患者の高血圧、小児透析患者、ヘマトクリット濃度不足に関連する疾患又は病態、化学療法治療に関係した障害、癌、循環器病、一次的神経系症状又は精神医学的症状を有する中枢神経系（ＣＮＳ）疾患又は末梢神経系疾患からなる群から選択される障害を治療するための薬剤の製造における、請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項２８に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３２】
前記障害が、貧血、癌、アルツハイマー病、パーキンソン病、リー病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、虚血性再灌流傷害、心筋梗塞からなる群から選択される請求項３０又は３１に記載の方法又は使用。
【請求項３３】
前記障害が、慢性腎不全（ＣＲＦ）に関連する貧血、ジドブジン治療ＨＩＶ感染患者の貧血、化学療法又は放射線療法に対する癌患者の貧血、非骨髄性癌の進行に関連する貧血、ウィルス性感染（ＨＩＶなど）に関連する貧血及び慢性疾患の貧血からなる群から選択される貧血であるか、又は腎臓、前立腺、卵巣又は乳房の腺癌、リンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、中枢神経系に影響を及ぼす腫瘍からなる群から選択される癌である請求項３２に記載の方法又は使用。
【請求項３４】
薬剤として使用するための、請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体、又はその断片若しくは誘導体。
【請求項３５】
請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体、又はその断片若しくは誘導体、及び薬学的に許容できる担体、賦形剤、又は安定化剤を含む医薬組成物。
【請求項３６】
対象における癌の症状を治療、予防又は改善する方法であって、請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体、又はその断片若しくは誘導体の治療有効量を患者に投与することを含む方法。
【請求項３７】
癌を治療するための薬剤の製造における、請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体、又はその断片若しくは誘導体の使用。
【請求項３８】
請求項１４から１６までのいずれか一項に記載の核酸又はその相補鎖に選択的にハイブリダイズする核酸プローブ。
【請求項３９】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも１つの特有の断片を増幅させるために使用できる核酸プライマー。
【請求項４０】
神経圧潰後、少なくとも約０．０２ｍｓの複合性筋活動電位（ＣＭＡＰ）潜伏時間の減少を誘導する請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の産生を、好ましくは、少なくとも約５％刺激する請求項１から１３まで、又は請求項２１若しくは２２、又は請求項４０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４２】
野生型ＥＰＯの血液栄養活性の５０％未満を保持する請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２、又は請求項４０若しくは４１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４３】
ベースラインのヘマトクリット濃度と比較して、ヘマトクリット濃度を約１０％未満増加させる請求項１から１３まで、又は請求項２１若しくは２２、又は請求項４０から４２までのいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１】
哺乳動物において実質的にヘマトクリットレベルを増加させることなく、前記哺乳動物、特にヒトにおける組織保護活性を有する単離エリスロポエチン変異ポリペプチド。
【請求項２】
ａ）アミノ酸５６から１９３までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｂ）アミノ酸１から２７までの欠失及びアミノ酸５６から１９３までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｃ）配列番号１３に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｄ）配列番号１３のアミノ酸２８から５５に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｅ）
【化１】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化２】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加Ｎ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項３】
ａ）アミノ酸５６から１９３までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｂ）アミノ酸１から２７までの欠失及びアミノ酸５６から１９３までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｃ）配列番号１３に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｄ）配列番号１３のアミノ酸２８から５５に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｅ）
【化３】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化４】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｈ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｉ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項４】
ａ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から８２（グルタミン酸）までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から８２（グルタミン酸）までの少なくとも１つの欠失及びアミノ酸１から２７までの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｃ）配列番号４に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｄ）配列番号４のアミノ酸２８から１６４に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｅ）
【化５】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化６】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項５】
ａ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から８２（グルタミン酸）までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から８２（グルタミン酸）までの少なくとも１つの欠失及びアミノ酸１から２７までの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｃ）配列番号４に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｄ）配列番号４のアミノ酸２８から１６４に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｅ）
【化７】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とは異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化８】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、又はｅ）とは異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｈ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｉ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】
ａ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から１４２（グルタミン）までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から１４２（グルタミン）までの少なくとも１つの欠失及びアミノ酸１から２７までの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｃ）配列番号６に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｄ）配列番号６のアミノ酸２８から１０４に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｅ）
【化９】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化１０】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載の単離ポリペプチド。
【請求項７】
ａ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から１４２（グルタミン）までの少なくとも１つの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｂ）配列番号３のアミノ酸５４（トレオニン）から１４２（グルタミン）までの少なくとも１つの欠失及びアミノ酸１から２７までの欠失により、配列番号３に示された配列とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｃ）配列番号６に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｄ）配列番号６のアミノ酸２８から１０４に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｅ）
【化１１】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とは異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｆ）
【化１２】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチドであって、前記変異の位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド又は；
ｇ）８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）又はｆ）とは異なるポリペプチドを含むポリペプチドであって、前記位置が、配列番号３のアミノ酸の位置に関して規定されるポリペプチド；
ｈ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｉ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）、ｅ）、ｆ）又はｇ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項８】
ａ）配列番号８に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号８と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有する配列を含むポリペプチド
からなる群から選択される単離ポリペプチド。
【請求項９】
ａ）配列番号９に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｂ）配列番号９のアミノ酸２８から１５４に示された配列を含むポリペプチド又は；
ｃ）
【化１３】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）又はｂ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｄ）
【化１４】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）又はｂ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｅ）５７位、７８位、７９位、８０位、８２位、８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とはまったく異なるポリペプチドを含むポリペプチド；
ｆ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）又はｅ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
ａ）配列番号８からなるポリペプチド又は；
ｂ）配列番号８と少なくとも７５％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
ａ）配列番号９からなるポリペプチド又は；
ｂ）配列番号９のアミノ酸２８から１５４に示された配列からなるポリペプチド又は；
ｃ）
【化１５】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）又はｂ）とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｄ）
【化１６】
からなる群から選択される１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ又は１０の変異により、ａ）又はｂ）とはまったく異なるポリペプチドからなるポリペプチド又は；
ｅ）５７位、７８位、７９位、８０位、８２位、８４位、９６位、１１３位、１１５位、１１６位又は１４１位に少なくとも１つの追加のＮ−結合グリコシル化部位を含むことにより、ａ）、ｂ）、ｃ）又はｄ）とは異なるポリペプチドからなるポリペプチド；
ｆ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）又はｅ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドを含むポリペプチド又は；
ｇ）ａ）、ｂ）、ｃ）、ｄ）又はｅ）のポリペプチドと少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドからなるポリペプチド
からなる群から選択される請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
追加のアミノ酸ドメインに作動可能に結合した請求項１から１１までのいずれか一項に記載のポリペプチドを含む融合タンパク質。
【請求項１３】
前記ポリペプチドが、ＧＳＴ配列、Ｈｉｓタグ配列、多量体化ドメイン、免疫グロブリン分子の定常領域又はヒト柔毛膜性生殖腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）などのヘテロ二量体タンパク質ホルモンに作動可能に結合した請求項１２に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載のポリペプチドをコードする単離核酸分子。
【請求項１５】
ｃＤＮＡ分子である請求項１４に記載の単離核酸分子。
【請求項１６】
【化１７】
又はそれらの相補鎖若しくは縮重配列、或いは
【化１８】
のポリペプチドをコードする核酸又は相補鎖からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むか、又はそれからなる請求項１４又は１５に記載の単離核酸分子。
【請求項１７】
請求項１４から１６までのいずれか一項に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項１８】
請求項１４から１６までのいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項１７に記載のベクターを含む組換え宿主細胞。
【請求項１９】
原核細胞又は真核細胞である請求項１８に記載の宿主細胞。
【請求項２０】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載のポリペプチドを産生する方法であって、請求項１８又は１９に記載の組換え宿主細胞を核酸分子の発現を可能にする条件下で培養すること、及び産生されたポリペプチドを回収することを含む方法。
【請求項２１】
活性な結合体又は複合体の形態である請求項１から１３までのいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
ペグ化された請求項２１に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載のポリペプチドに選択的に結合する抗体、又はその断片若しくは誘導体。
【請求項２４】
モノクローナル抗体、又はその断片若しくは誘導体である請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
ヒト若しくはヒト化抗体、又はその断片若しくは誘導体である請求項２３又は２４に記載の抗体。
【請求項２６】
非相同部分に結合した請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体を含む免疫結合体。
【請求項２７】
薬剤として使用するための、請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２８】
請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド、請求項１４から１６までのいずれか一項に記載の核酸分子、請求項１７に記載のベクター、又は請求項１８又は１９に記載の細胞、及び薬学的に許容できる担体、賦形剤、又は安定化剤を含む医薬組成物。
【請求項２９】
患者の障害症状、ＥＰＯ発現又は活性の調節不全を含む障害を治療、予防又は改善する方法であって、請求項２８に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む方法。
【請求項３０】
前記障害が、貧血、慢性腎不全患者の高血圧、小児透析患者、ヘマトクリット濃度不足に関連する疾患又は病態、化学療法治療に関係した障害、癌、循環器病、一次的神経系症状又は精神医学的症状を有する中枢神経系（ＣＮＳ）疾患又は末梢神経系疾患からなる群から選択される患者の障害症状を治療、予防又は改善する方法であって、請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項２８に記載の医薬組成物の治療有効量を患者に投与することを含む方法。
【請求項３１】
患者の障害、即ち貧血、慢性腎不全患者の高血圧、小児透析患者、ヘマトクリット濃度不足に関連する疾患又は病態、化学療法治療に関係した障害、癌、循環器病、一次的神経系症状又は精神医学的症状を有する中枢神経系（ＣＮＳ）疾患又は末梢神経系疾患からなる群から選択される障害を治療するための薬剤の製造における、請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド、又は請求項２８に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３２】
前記障害が、貧血、癌、アルツハイマー病、パーキンソン病、リー病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、虚血性再灌流傷害、心筋梗塞からなる群から選択される請求項３０又は３１に記載の方法又は使用。
【請求項３３】
前記障害が、慢性腎不全（ＣＲＦ）に関連する貧血、ジドブジン治療ＨＩＶ感染患者の貧血、化学療法又は放射線療法に対する癌患者の貧血、非骨髄性癌の進行に関連する貧血、ウィルス性感染（ＨＩＶなど）に関連する貧血及び慢性疾患の貧血からなる群から選択される貧血であるか、又は腎臓、前立腺、卵巣又は乳房の腺癌、リンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、中枢神経系に影響を及ぼす腫瘍からなる群から選択される癌である請求項３２に記載の方法又は使用。
【請求項３４】
薬剤として使用するための、請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体、又はその断片若しくは誘導体。
【請求項３５】
請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体、又はその断片若しくは誘導体、及び薬学的に許容できる担体、賦形剤、又は安定化剤を含む医薬組成物。
【請求項３６】
対象における癌の症状を治療、予防又は改善する方法であって、請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体、又はその断片若しくは誘導体の治療有効量を患者に投与することを含む方法。
【請求項３７】
癌を治療するための薬剤の製造における、請求項２３から２５までのいずれか一項に記載の抗体、又はその断片若しくは誘導体の使用。
【請求項３８】
請求項１４から１６までのいずれか一項に記載の核酸又はその相補鎖に選択的にハイブリダイズする核酸プローブ。
【請求項３９】
請求項１から１３までのいずれか一項に記載のＥＰＯポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも１つの特有の断片を増幅させるために使用できる核酸プライマー。
【請求項４０】
神経圧潰後、少なくとも約０．０２ｍｓの複合性筋活動電位（ＣＭＡＰ）潜伏時間の減少を誘導する請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４１】
ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）の産生を、好ましくは、少なくとも約５％刺激する請求項１から１３まで、又は請求項２１若しくは２２、又は請求項４０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４２】
野生型ＥＰＯの血液栄養活性の５０％未満を保持する請求項１から１３まで又は請求項２１若しくは２２、又は請求項４０若しくは４１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項４３】
ベースラインのヘマトクリット濃度と比較して、ヘマトクリット濃度を約１０％未満増加させる請求項１から１３まで、又は請求項２１若しくは２２、又は請求項４０から４２までのいずれか一項に記載のポリペプチド。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図９】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図１０】
【図９】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【公表番号】特表２００９−５１７００９（Ｐ２００９−５１７００９Ａ）
【公表日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４１７５０（Ｐ２００８−５４１７５０）
【出願日】平成１８年１１月２３日（２００６．１１．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／０６８８５９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６０２１３
【国際公開日】平成１９年５月３１日（２００７．５．３１）
【出願人】（５０７３９９４２７）ラボラトワ セローノ エス．エイ． (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年４月３０日（２００９．４．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１１月２３日（２００６．１１．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００６／０６８８５９
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０６０２１３
【国際公開日】平成１９年５月３１日（２００７．５．３１）
【出願人】（５０７３９９４２７）ラボラトワ セローノ エス．エイ． (2)
【Ｆターム（参考）】
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