ポリペプチド
【課題】ポリペプチド（詳細にはアミラーゼポリペプチド）およびこれらをコードする核酸、ならびに食品を製造する際の非マルトース生成エキソアミラーゼとしてのそれらの使用法を提供する。
【解決手段】非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチドから誘導可能であるＰＳ４改変体ポリペプチドであって、特定な配列からなるアミノ酸配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１、１６１、２２３、１４６、１５７、１５８、１９８、２２９、３０３、３０９、３１６、３５３、２６、７０、１４５、１８８、２７２、３３９からなる群から選択される１つ以上の位置でのアミノ酸突然変異を含むＰＳ４改変体ポリペプチド。
【解決手段】非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチドから誘導可能であるＰＳ４改変体ポリペプチドであって、特定な配列からなるアミノ酸配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１、１６１、２２３、１４６、１５７、１５８、１９８、２２９、３０３、３０９、３１６、３５３、２６、７０、１４５、１８８、２７２、３３９からなる群から選択される１つ以上の位置でのアミノ酸突然変異を含むＰＳ４改変体ポリペプチド。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチドから誘導可能であるＰＳ４改変体ポリペプチドであって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して１４６位でのアミノ酸突然変異を含み、該ポリペプチドが、該ＰＳ４改変体ポリペプチドの該親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、ＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドがさらに、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸突然変異を含む、請求項１に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項３】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、３３位、３４位、１２１位、１３４位、１４１位、１５７位、１６１位、１７８位、１７９位、２２３位、３０７位および３３４位からなる群から選択される１つ以上の突然変異をさらに含む、請求項１または２に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項４】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐからなる群から選択される１つ以上の突然変異をさらに含む、請求項１または請求項２または請求項３に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項５】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、以下の突然変異：
（ａ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１４６Ｇ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｂ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｍ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｃ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１５８Ｔ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｄ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、１９８Ｗ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｅ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、２２９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｆ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、１９８Ｗ、２２３Ｅ、２２９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｇ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｈ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０３Ｄ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｉ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０６Ｔ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｊ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０６Ｇ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｋ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｌ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３１６Ｓ、および３３４Ｐ；
（ｍ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３１６Ｐおよび３３４Ｐ；
（ｎ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３３４Ｐおよび３５３Ｔ
の各々を含む、請求項１、請求項２または請求項３または請求項４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項６】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、以下の突然変異：
（ａ）Ｎ２６Ｅ、Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｉ１５７Ｌ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ａ、Ｈ３０７Ｌ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｂ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｃ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｄ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ１８８Ｈ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ；
（ｅ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ１８８Ｓ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ；
（ｆ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ａ；
（ｇ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ
の各々を含む、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項７】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、８７位における突然変異をさらに含む、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項８】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、突然変異８７Ｓをさらに含む、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項９】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、Ｇ８７Ｓである突然変異をさらに含む、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１０】
前記親ポリペプチドが、非マルトース生成エキソアミラーゼを含む、請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１１】
前記親ポリペプチドが、グルカン１，４−α−マルトテトラヒドロラーゼ（ＥＣ３．２．１．６０）を含む、請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１２】
前記親ポリペプチドが、シュードモナス種であるか、またはシュードモナス種から誘導可能である、請求項１〜請求項１１のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１３】
前記親ポリペプチドが、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａもしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉであるか、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａもしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉから誘導可能である、請求項１〜請求項１２のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１４】
前記親ポリペプチドが、配列番号１もしくは配列番号５に示した配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ由来の非マルトース生成エキソアミラーゼである、請求項１〜請求項１３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１５】
配列番号１または配列番号５と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１〜請求項１４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１６】
前記親ポリペプチドが、配列番号７もしくは配列番号１１に示した配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ由来の非マルトース生成エキソアミラーゼである、請求項１〜請求項１３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１７】
配列番号７または配列番号１１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１〜請求項１３または請求項１６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１８】
本明細書、請求項または図面に記載の配列を含む、請求項１〜請求項１７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１９】
ＳＳＭ３８１（配列番号１５）、ＳＡＳ１４０１ Ｌ１０、ＳＡＳ１３８７Ｄ１６ ｂｆ、ｐＭＤ２３６、ｐＭＤ２３７ ｂｆ、ＳＡＳ１３７９ Ｏ１３およびＳＡＳ１３７９ Ｏ９からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜請求項１８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２０】
非マルトース生成エキソアミラーゼ内に存在する１つ以上のドメインを欠失する、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２１】
デンプン結合ドメインを欠失する請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドであって、該デンプン結合ドメインが、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａ配列の位置の番号付けを参照して４２９位の後のアミノ酸に対応する、ＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２２】
６０℃における半減期（ｔ１／２）が、前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して、１５％以上増加している、請求項１〜請求項２１のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２３】
６０℃における半減期（ｔ１／２）が、前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して、５０％以上増加している、請求項１〜請求項２２のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２４】
６０℃における半減期（ｔ１／２）が、前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して、１００％以上増加している、請求項１〜請求項２３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２５】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、前記親ポリペプチドもしくは前記野生型ポリペプチドと比較して、１０％以上のエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項２４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２６】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、前記親ポリペプチドもしくは前記野生型ポリペプチドと比較して、２０％以上のエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項２５のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２７】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、前記親ポリペプチドもしくは前記野生型ポリペプチドと比較して、５０％以上のエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項２６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２８】
請求項１〜請求項２７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの少なくとも２０個の残基のフラグメントを含むポリペプチドであって、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有するポリペプチド。
【請求項２９】
請求項１〜請求項２８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド配列の１つ以上の残基での突然変異によって該ＰＳ４改変体ポリペプチドから誘導可能であるポリペプチドであって、該ＰＳ４改変体ポリペプチドの前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較してより高い熱安定性もしくはより高いエキソ特異性またはその両方を有するポリペプチド。
【請求項３０】
請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの、食品または飼料添加物としての使用。
【請求項３１】
デンプンを処理するためのプロセスであって、該デンプンを請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドと接触させる工程と、該ポリペプチドに該デンプンから１種以上の直鎖状生成物を生成させる工程とを包含するプロセス。
【請求項３２】
食品または飼料製品を調製する際の請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３３】
食品または飼料製品を調製するプロセスであって、請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを食品の成分または飼料の成分と混合する工程を包含するプロセス。
【請求項３４】
前記食品が生地もしくは生地製品、好ましくは加工された生地製品を含む、請求項３２に記載の使用、または請求項３３に記載のプロセス。
【請求項３５】
前記食品がベーカリー製品である、請求項３０〜請求項３４のいずれか１項に記載の使用またはプロセス。
【請求項３６】
ベーカリー製品を製造するためのプロセスであって：（ａ）デンプン媒質を提供する工程と；（ｂ）該デンプン媒質に請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを添加する工程と；（ｃ）ベーカリー製品を製造するために工程（ｂ）の間または工程（ｂ）の後に該デンプン媒質に熱を加える工程と、を包含するプロセス。
【請求項３７】
請求項３２〜請求項３６のいずれか１項に記載のプロセスによって得られる食品、飼料製品、生地製品またはベーカリー製品。
【請求項３８】
生地のための改善剤組成物であって、請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチド、および少なくとも１種のさらなる生地成分もしくは生地添加物を含有する、改善剤組成物。
【請求項３９】
粉および請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを含有する組成物。
【請求項４０】
生地製品において、該生地製品の硬化を遅延もしくは減少させ、好ましくは有害な老化を遅延もしくは減少させるための、請求項１〜請求項３９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの使用。
【請求項４１】
請求項１〜請求項４０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドと、Ｎｏｖａｍｙｌ、またはマルトース生成αアミラーゼ活性を有するＮｏｖａｍｙｌの改変体、ホモログ、または突然変異体との組み合わせ。
【請求項４２】
請求項１〜請求項４１のいずれか１項に記載の用途のための請求項４１に記載の組み合わせの使用。
【請求項４３】
請求項４１に記載の組み合わせを用いた処理によって製造された食品または飼料製品。
【請求項４４】
請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドをコード可能である核酸。
【請求項４５】
配列番号６または配列番号１２と少なくとも７５％同一である核酸配列を有する、請求項４４に記載の核酸。
【請求項４６】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有するポリペプチドをコード可能である、請求項４０または請求項４５に記載の核酸の少なくとも６０残基のフラグメントを含む核酸。
【請求項４７】
親配列から誘導可能である核酸配列であって、該親配列が非マルトース生成エキソアミラーゼをコード可能であり、該核酸配列は、該核酸が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して特定された１４６位における突然変異をコードするように１つ以上の残基において置換を含み、該核酸によってコードされる該ポリペプチドが、該親配列もしくは野生型配列によってコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、核酸配列。
【請求項４８】
請求項４７に記載の核酸配列であって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して特定された位置における以下の突然変異、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅの１つ以上をコードするように１つ以上の残基において置換を含む、核酸配列。
【請求項４９】
１つ以上のヌクレオチド残基の置換によって非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする親配列から誘導される、請求項４４〜請求項４８のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸配列。
【請求項５０】
請求項４４〜請求項４９のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸を含むプラスミド。
【請求項５１】
請求項４４〜請求項５０のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸を含むか、または請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能である発現ベクター。
【請求項５２】
請求項５０に記載のプラスミドまたは請求項５１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞であって、好ましくは該プラスミドまたは該発現ベクターを用いて形質転換されている宿主細胞。
【請求項５３】
請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能である細胞。
【請求項５４】
細菌細胞、真菌細胞または酵母細胞である、請求項５２に記載の宿主細胞、または請求項５３に記載の細胞。
【請求項５５】
ＰＳ４改変体ポリペプチドを発現する方法であって、請求項５２、請求項５３または請求項５４に記載の宿主細胞もしくは細胞を得る工程と、該細胞もしくは該宿主細胞から該ポリペプチドを発現させる工程と、および必要に応じて該ポリペプチドを精製する工程と、を包含する方法。
【請求項５６】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内に（配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して）、１４６位にアミノ酸置換を導入する工程によってポリペプチドの配列を変化させる方法であって、該変化させたポリペプチドが、該親配列もしくは野生型配列によってコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、方法。
【請求項５７】
さらに、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内に（配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して）、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ，１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ，１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、および、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を導入する工程による、請求項５６に記載のポリペプチドの配列を変化させる方法。
【請求項５８】
配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１４６位に置換を導入する工程によって非マルトース生成エキソアミラーゼの配列を変化させる方法であって、該変化させた非マルトース生成エキソアミラーゼが、親配列もしくは野生型配列によってコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、方法。
【請求項５９】
さらに、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ，１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ，１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、および、３３９Ｅからなる群から選択される置換を導入する工程による、請求項５８に記載の非マルトース生成エキソアミラーゼの配列を変化させる方法。
【請求項６０】
前記非マルトース生成エキソアミラーゼの配列が非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸の配列を変化させる工程によって変化させられる、請求項５６または５９に記載の方法。
【請求項６１】
ＰＳ４改変体ポリペプチドを製造する方法であって、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内にアミノ酸置換を導入する工程であって、該アミノ酸置換が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して１４６位であり、該製造されたＰＳ４ポリペプチドが、親配列もしくは野生型配列によてコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、方法。
【請求項６２】
請求項６１に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドを製造する方法であって、さらに、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内にアミノ酸置換を導入する工程を包含し、該アミノ酸置換が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択される、方法。
【請求項６３】
前記親ポリペプチドをコードする核酸の配列が前記アミノ酸置換を導入するように変化させられる、請求項６０、６１または６２に記載の方法。
【請求項６４】
非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸配列を変化させる方法であって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１４６位のアミノ酸残基をコードするコドンを該配列に導入する工程を、包含し、該核酸によってコードされる該ポリペプチドが、親配列もしくは野生型配列によってコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、方法。
【請求項６５】
請求項６４に記載の非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸配列を変化させる方法であって、該方法は、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、および、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸残基をコードするコドンを該配列に導入する工程をさらに包含する、方法。
【請求項６６】
ポリペプチドの熱安定性、もしくはエキソ特異性、またはその両方を増加させる方法であって、請求項５４〜請求項６５のいずれか１項に記載の工程を包含する方法。
【請求項６７】
前記ポリペプチドが単離されるかもしくは精製される、または単離されかつ精製される、請求項５４〜請求項６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
請求項５４〜請求項６７のいずれか１項に記載の方法によって得られ得るポリペプチド。
【請求項６９】
請求項５４〜請求項６８のいずれか１項に記載の方法によって得られたポリペプチド。
【請求項７０】
実質的に、添付の図面を参考として上述しそして添付の図面に示した通りである、ＰＳ４改変体ポリペプチド、使用、プロセス、食品、飼料製品、生地製品、ベーカリー製品、改善剤組成物、組成物、核酸、ベクターもしくは宿主細胞。
【請求項１】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチドから誘導可能であるＰＳ４改変体ポリペプチドであって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して１４６位でのアミノ酸突然変異を含み、該ポリペプチドが、該ＰＳ４改変体ポリペプチドの該親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、ＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドがさらに、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸突然変異を含む、請求項１に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項３】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、３３位、３４位、１２１位、１３４位、１４１位、１５７位、１６１位、１７８位、１７９位、２２３位、３０７位および３３４位からなる群から選択される１つ以上の突然変異をさらに含む、請求項１または２に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項４】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐからなる群から選択される１つ以上の突然変異をさらに含む、請求項１または請求項２または請求項３に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項５】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、以下の突然変異：
（ａ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１４６Ｇ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｂ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｍ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｃ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１５８Ｔ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｄ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、１９８Ｗ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｅ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、２２９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｆ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、１９８Ｗ、２２３Ｅ、２２９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｇ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｈ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０３Ｄ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｉ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０６Ｔ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｊ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０６Ｇ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｋ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｌ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３１６Ｓ、および３３４Ｐ；
（ｍ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３１６Ｐおよび３３４Ｐ；
（ｎ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３３４Ｐおよび３５３Ｔ
の各々を含む、請求項１、請求項２または請求項３または請求項４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項６】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、以下の突然変異：
（ａ）Ｎ２６Ｅ、Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｉ１５７Ｌ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ａ、Ｈ３０７Ｌ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｂ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｃ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｄ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ１８８Ｈ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ；
（ｅ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ１８８Ｓ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ；
（ｆ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ａ；
（ｇ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ
の各々を含む、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項７】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、８７位における突然変異をさらに含む、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項８】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、突然変異８７Ｓをさらに含む、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項９】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、Ｇ８７Ｓである突然変異をさらに含む、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１０】
前記親ポリペプチドが、非マルトース生成エキソアミラーゼを含む、請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１１】
前記親ポリペプチドが、グルカン１，４−α−マルトテトラヒドロラーゼ（ＥＣ３．２．１．６０）を含む、請求項１〜請求項１０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１２】
前記親ポリペプチドが、シュードモナス種であるか、またはシュードモナス種から誘導可能である、請求項１〜請求項１１のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１３】
前記親ポリペプチドが、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａもしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉであるか、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａもしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉから誘導可能である、請求項１〜請求項１２のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１４】
前記親ポリペプチドが、配列番号１もしくは配列番号５に示した配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ由来の非マルトース生成エキソアミラーゼである、請求項１〜請求項１３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１５】
配列番号１または配列番号５と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１〜請求項１４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１６】
前記親ポリペプチドが、配列番号７もしくは配列番号１１に示した配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｔｚｅｒｉ由来の非マルトース生成エキソアミラーゼである、請求項１〜請求項１３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１７】
配列番号７または配列番号１１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１〜請求項１３または請求項１６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１８】
本明細書、請求項または図面に記載の配列を含む、請求項１〜請求項１７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１９】
ＳＳＭ３８１（配列番号１５）、ＳＡＳ１４０１ Ｌ１０、ＳＡＳ１３８７Ｄ１６ ｂｆ、ｐＭＤ２３６、ｐＭＤ２３７ ｂｆ、ＳＡＳ１３７９ Ｏ１３およびＳＡＳ１３７９ Ｏ９からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜請求項１８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２０】
非マルトース生成エキソアミラーゼ内に存在する１つ以上のドメインを欠失する、請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２１】
デンプン結合ドメインを欠失する請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドであって、該デンプン結合ドメインが、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａ配列の位置の番号付けを参照して４２９位の後のアミノ酸に対応する、ＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２２】
６０℃における半減期（ｔ１／２）が、前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して、１５％以上増加している、請求項１〜請求項２１のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２３】
６０℃における半減期（ｔ１／２）が、前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して、５０％以上増加している、請求項１〜請求項２２のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２４】
６０℃における半減期（ｔ１／２）が、前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して、１００％以上増加している、請求項１〜請求項２３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２５】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、前記親ポリペプチドもしくは前記野生型ポリペプチドと比較して、１０％以上のエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項２４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２６】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、前記親ポリペプチドもしくは前記野生型ポリペプチドと比較して、２０％以上のエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項２５のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２７】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、前記親ポリペプチドもしくは前記野生型ポリペプチドと比較して、５０％以上のエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項２６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２８】
請求項１〜請求項２７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの少なくとも２０個の残基のフラグメントを含むポリペプチドであって、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有するポリペプチド。
【請求項２９】
請求項１〜請求項２８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド配列の１つ以上の残基での突然変異によって該ＰＳ４改変体ポリペプチドから誘導可能であるポリペプチドであって、該ＰＳ４改変体ポリペプチドの前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較してより高い熱安定性もしくはより高いエキソ特異性またはその両方を有するポリペプチド。
【請求項３０】
請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの、食品または飼料添加物としての使用。
【請求項３１】
デンプンを処理するためのプロセスであって、該デンプンを請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドと接触させる工程と、該ポリペプチドに該デンプンから１種以上の直鎖状生成物を生成させる工程とを包含するプロセス。
【請求項３２】
食品または飼料製品を調製する際の請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項３３】
食品または飼料製品を調製するプロセスであって、請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを食品の成分または飼料の成分と混合する工程を包含するプロセス。
【請求項３４】
前記食品が生地もしくは生地製品、好ましくは加工された生地製品を含む、請求項３２に記載の使用、または請求項３３に記載のプロセス。
【請求項３５】
前記食品がベーカリー製品である、請求項３０〜請求項３４のいずれか１項に記載の使用またはプロセス。
【請求項３６】
ベーカリー製品を製造するためのプロセスであって：（ａ）デンプン媒質を提供する工程と；（ｂ）該デンプン媒質に請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを添加する工程と；（ｃ）ベーカリー製品を製造するために工程（ｂ）の間または工程（ｂ）の後に該デンプン媒質に熱を加える工程と、を包含するプロセス。
【請求項３７】
請求項３２〜請求項３６のいずれか１項に記載のプロセスによって得られる食品、飼料製品、生地製品またはベーカリー製品。
【請求項３８】
生地のための改善剤組成物であって、請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチド、および少なくとも１種のさらなる生地成分もしくは生地添加物を含有する、改善剤組成物。
【請求項３９】
粉および請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを含有する組成物。
【請求項４０】
生地製品において、該生地製品の硬化を遅延もしくは減少させ、好ましくは有害な老化を遅延もしくは減少させるための、請求項１〜請求項３９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの使用。
【請求項４１】
請求項１〜請求項４０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドと、Ｎｏｖａｍｙｌ、またはマルトース生成αアミラーゼ活性を有するＮｏｖａｍｙｌの改変体、ホモログ、または突然変異体との組み合わせ。
【請求項４２】
請求項１〜請求項４１のいずれか１項に記載の用途のための請求項４１に記載の組み合わせの使用。
【請求項４３】
請求項４１に記載の組み合わせを用いた処理によって製造された食品または飼料製品。
【請求項４４】
請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドをコード可能である核酸。
【請求項４５】
配列番号６または配列番号１２と少なくとも７５％同一である核酸配列を有する、請求項４４に記載の核酸。
【請求項４６】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有するポリペプチドをコード可能である、請求項４０または請求項４５に記載の核酸の少なくとも６０残基のフラグメントを含む核酸。
【請求項４７】
親配列から誘導可能である核酸配列であって、該親配列が非マルトース生成エキソアミラーゼをコード可能であり、該核酸配列は、該核酸が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して特定された１４６位における突然変異をコードするように１つ以上の残基において置換を含み、該核酸によってコードされる該ポリペプチドが、該親配列もしくは野生型配列によってコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、核酸配列。
【請求項４８】
請求項４７に記載の核酸配列であって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して特定された位置における以下の突然変異、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅの１つ以上をコードするように１つ以上の残基において置換を含む、核酸配列。
【請求項４９】
１つ以上のヌクレオチド残基の置換によって非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする親配列から誘導される、請求項４４〜請求項４８のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸配列。
【請求項５０】
請求項４４〜請求項４９のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸を含むプラスミド。
【請求項５１】
請求項４４〜請求項５０のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸を含むか、または請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能である発現ベクター。
【請求項５２】
請求項５０に記載のプラスミドまたは請求項５１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞であって、好ましくは該プラスミドまたは該発現ベクターを用いて形質転換されている宿主細胞。
【請求項５３】
請求項１〜請求項２９のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能である細胞。
【請求項５４】
細菌細胞、真菌細胞または酵母細胞である、請求項５２に記載の宿主細胞、または請求項５３に記載の細胞。
【請求項５５】
ＰＳ４改変体ポリペプチドを発現する方法であって、請求項５２、請求項５３または請求項５４に記載の宿主細胞もしくは細胞を得る工程と、該細胞もしくは該宿主細胞から該ポリペプチドを発現させる工程と、および必要に応じて該ポリペプチドを精製する工程と、を包含する方法。
【請求項５６】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内に（配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して）、１４６位にアミノ酸置換を導入する工程によってポリペプチドの配列を変化させる方法であって、該変化させたポリペプチドが、該親配列もしくは野生型配列によってコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、方法。
【請求項５７】
さらに、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内に（配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して）、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ，１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ，１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、および、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を導入する工程による、請求項５６に記載のポリペプチドの配列を変化させる方法。
【請求項５８】
配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１４６位に置換を導入する工程によって非マルトース生成エキソアミラーゼの配列を変化させる方法であって、該変化させた非マルトース生成エキソアミラーゼが、親配列もしくは野生型配列によってコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、方法。
【請求項５９】
さらに、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ，１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ，１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、および、３３９Ｅからなる群から選択される置換を導入する工程による、請求項５８に記載の非マルトース生成エキソアミラーゼの配列を変化させる方法。
【請求項６０】
前記非マルトース生成エキソアミラーゼの配列が非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸の配列を変化させる工程によって変化させられる、請求項５６または５９に記載の方法。
【請求項６１】
ＰＳ４改変体ポリペプチドを製造する方法であって、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内にアミノ酸置換を導入する工程であって、該アミノ酸置換が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して１４６位であり、該製造されたＰＳ４ポリペプチドが、親配列もしくは野生型配列によてコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、方法。
【請求項６２】
請求項６１に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドを製造する方法であって、さらに、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内にアミノ酸置換を導入する工程を包含し、該アミノ酸置換が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択される、方法。
【請求項６３】
前記親ポリペプチドをコードする核酸の配列が前記アミノ酸置換を導入するように変化させられる、請求項６０、６１または６２に記載の方法。
【請求項６４】
非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸配列を変化させる方法であって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１４６位のアミノ酸残基をコードするコドンを該配列に導入する工程を、包含し、該核酸によってコードされる該ポリペプチドが、親配列もしくは野生型配列によってコードされるポリペプチドと比較して高い熱安定性もしくは高いエキソ特異性またはその両方を有する、方法。
【請求項６５】
請求項６４に記載の非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸配列を変化させる方法であって、該方法は、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、および、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸残基をコードするコドンを該配列に導入する工程をさらに包含する、方法。
【請求項６６】
ポリペプチドの熱安定性、もしくはエキソ特異性、またはその両方を増加させる方法であって、請求項５４〜請求項６５のいずれか１項に記載の工程を包含する方法。
【請求項６７】
前記ポリペプチドが単離されるかもしくは精製される、または単離されかつ精製される、請求項５４〜請求項６６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６８】
請求項５４〜請求項６７のいずれか１項に記載の方法によって得られ得るポリペプチド。
【請求項６９】
請求項５４〜請求項６８のいずれか１項に記載の方法によって得られたポリペプチド。
【請求項７０】
実質的に、添付の図面を参考として上述しそして添付の図面に示した通りである、ＰＳ４改変体ポリペプチド、使用、プロセス、食品、飼料製品、生地製品、ベーカリー製品、改善剤組成物、組成物、核酸、ベクターもしくは宿主細胞。
【公開番号】特開２０１２−７０７５１（Ｐ２０１２−７０７５１Ａ）
【公開日】平成２４年４月１２日（２０１２．４．１２）
【国際特許分類】
【外国語出願】
【出願番号】特願２０１１−２５８１７６（Ｐ２０１１−２５８１７６）
【出願日】平成２３年１１月２５日（２０１１．１１．２５）
【分割の表示】特願２００７−５１９８８４（Ｐ２００７−５１９８８４）の分割
【原出願日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【出願人】（３９７０６０５８８）ダニスコ エイ／エス (67)
【出願人】（５９５１６３６３０）ダニスコ・ユーエス・インコーポレイテッド (12)
【氏名又は名称原語表記】Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ Ｉｎｃ．
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年４月１２日（２０１２．４．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２５８１７６（Ｐ２０１１−２５８１７６）
【出願日】平成２３年１１月２５日（２０１１．１１．２５）
【分割の表示】特願２００７−５１９８８４（Ｐ２００７−５１９８８４）の分割
【原出願日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【出願人】（３９７０６０５８８）ダニスコ エイ／エス (67)
【出願人】（５９５１６３６３０）ダニスコ・ユーエス・インコーポレイテッド (12)
【氏名又は名称原語表記】Ｄａｎｉｓｃｏ ＵＳ Ｉｎｃ．
【Ｆターム（参考）】
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