代謝調節型グルタミン酸受容体（ＭＧＬＵＲＳ）の調節因子としてのテトラゾール誘導体
本発明は、式（Ｉ）、式中、Ｒ1は下記の通りである、の化合物、ｍＧｌｕＲ５受容体媒介障害の治療のための薬剤を製造するためのそれらの使用に関する。
【化１】
【化２】
【化１】
【化２】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、治療におけるそれらの使用及び該新規化合物を含む医薬組成物を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
グルタミン酸は、哺乳動物中枢神経系（ＣＮＳ）における主要な興奮性神経伝達物質である。グルタミン酸は、中枢ニューロンに対するその効果を、細胞表面受容体に結合し、そしてそれによって活性化することにより発揮する。これらの受容体は、受容体タンパク質の構造特性、受容体が細胞中へシグナルを伝達する手段、及び薬理学的特性に基づいて、イオンチャンネル型及び代謝調節型グルタミン酸受容体の２つの主要なクラスに分けられている。
【０００３】
代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）は、グルタミン酸の結合後の様々な細胞内セカンドメッセンジャー系を活性化するＧタンパク質結合受容体である。インタクト哺乳動物ニューロンにおけるｍＧｌｕＲの活性化は、１つ又はそれ以上の以下の反応を誘導する：ホスホリパーゼＣの活性化；ホスホイノシチド（ＰＩ）加水分解の増加；細胞内カルシウム放出；ホスホリパーゼＤの活性化；アデニルシクラーゼの活性化又は阻害；環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の形成増加又は減少；グアニリルシクラーゼの活性化；環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の形成増加；ホスホリパーゼＡ2の活性化；アラキドン酸放出の増加；並びに電位及びリガンド依存性イオンチャンネルの活性増加又は減少。非特許文献１、２、３、４。
【０００４】
分子クローニングにより、ｍＧｌｕＲ１からｍＧｌｕＲ８まで命名された８つの異なるｍＧｌｕＲサブタイプが同定されている。非特許文献５、３、６。更なる受容体多様性は、特定のｍＧｌｕＲサブタイプの選択的スプライシング型の発現を経由して起こる。非特許文献７、８、９。
【０００５】
代謝調節型グルタミン酸受容体サブタイプは、アミノ酸配列相同性、受容体によって利用されるセカンドメッセンジャー系に基づいて、及びそれらの薬理学的特性によって、Ｉ群、ＩＩ群、及びＩＩＩ群ｍＧｌｕＲの３群に細分することができる。Ｉ群ｍＧｌｕＲは、ｍＧｌｕＲ１、ｍＧｌｕＲ５及びそれらの選択的スプライシング変異体を含む。これらの受容体へのアゴニストの結合は、ホスホリパーゼＣの活性化及び細胞内カルシウムのその後の可動化をもたらす。
【０００６】
神経障害、精神障害及び疼痛性疾患
Ｉ群ｍＧｌｕＲの生理的役割を解明する試みは、これらの受容体の活性化が神経興奮を誘導することを示唆する。種々の研究の結果は、Ｉ群ｍＧｌｕＲアゴニストが、海馬、大脳皮質、小脳、及び視床、並びに他のＣＮＳ領域のニューロンに適用時にシナプス後興奮を引き起こし得ることを示している。この興奮がシナプス後ｍＧｌｕＲの直接活性化に因ることを明示しているが、シナプス前ｍＧｌｕＲの活性化が起こって、神経伝達物質放出の増加をもたらすことも示唆されている。非特許文献１０、２、３、１１。
【０００７】
代謝調節型グルタミン酸受容体は、哺乳動物ＣＮＳにおける多数の正常過程に関与している。ｍＧｌｕＲの活性化が、海馬の長期増強及び小脳の長期抑圧の誘導に必要なことが示されている。非特許文献１２、１３、１４、１５。痛覚及び無痛覚におけるｍＧｌｕＲ活性化の役割も実証されている。非特許文献１６、１７。加えて、ｍＧｌｕＲ活性化は、シナプス伝達、神経発達、アポトーシス性ニューロン死、シナプス可塑性、空間学習、嗅覚記憶、心臓活動の中枢調節、覚醒、運動調節及び前庭動眼反射の調節を含む様々な他の正常過程において調節性役割を果たしていることが示唆されている。非特許文献５、３、６。
【０００８】
更に、Ｉ群代謝調節型グルタミン酸受容体及び特にｍＧｌｕＲは、ＣＮＳに影響を与える様々な病態生理学的過程及び障害において役割を果たすことが示唆されている。これらは、脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏及び虚血性障害、低血糖症、てんかん、アルツハイマー病などの神経変性障害並びに疼痛を含む。非特許文献１、１８、１９、３、６、２０、２１、２２。これらの病態における大部分の病状は、ＣＮＳニューロンの過剰グルタミン酸誘導興奮に因ると考えられている。Ｉ群ｍＧｌｕＲは、シナプス後メカニズムを経由してグルタミン酸媒介神経興奮を増加させるように見え、そしてシナプス前グルタミン酸放出を増強させたことから、それらの活性化は恐らくその病状に寄与する。従って、Ｉ群ｍＧｌｕＲの選択的アンタゴニストは、特に神経保護薬、鎮痛薬又は抗痙攣薬として治療上有益となり得る。
【０００９】
一般的に代謝調節型グルタミン酸受容体、そして特にＩ群の神経生理学的役割の解明における最近の進歩は、これらの受容体を急性及び慢性神経及び精神障害並びに慢性及び急性疼痛性障害の治療における有望な薬剤標的として確立している。
【００１０】
胃腸障害
下部食道括約筋（ＬＥＳ）は間欠的に弛緩しやすい。結果として、その時点で機械的バリアが一時的に失われることから、以後「逆流」と呼ばれる事象により胃液は食道を通過することができる。
【００１１】
胃食道逆流疾患（ＧＥＲＤ）は、最も一般的な上部消化管疾患である。最近の薬物療法は、胃酸分泌を低下させること、又は食道内の酸を中和することを目的としている。逆流での主要メカニズムは、低緊張性下部食道括約筋に依存すると考えられている。しかしながら、例えば、非特許文献２３は、大部分の逆流エピソードが、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）時、即ち、嚥下で誘発されない弛緩時に起こることを示している。胃酸分泌は、通常ＧＥＲＤ患者で一般的なことも示されている。
【００１２】
本発明に記載の新規化合物は、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）の抑制、従って胃食道逆流疾患（ＧＥＲＤ）の治療に有用と想定される。
【００１３】
それらの生理学的及び病態生理学的重要性のため、ｍＧｌｕＲサブタイプ、特にＩ群受容体サブタイプ、最も特別にはｍＧｌｕＲ５に対して高選択性を示す新しい有効なｍＧｌｕＲアゴニスト及びアンタゴニストが必要とされている。また、反応性代謝物を導かず、そしてｈＥＲＧ相互作用を制限しているｍＧｌｕＲ５アンタゴニストも必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Schoepp et al., Trends Pharmacol. Sci. 14:13 (1993)
【非特許文献２】Schoepp, Neurochem. Int. 24:439 (1994)
【非特許文献３】Pin et al., Neuropharmacology 34:1 (1995)
【非特許文献４】Bordi and Ugolini, Prog. Neurobiol. 59:55 (1999)
【非特許文献５】Nakanishi, Neuron 13:1031 (1994)
【非特許文献６】Knopfel et al., J. Med. Chem. 38:1417 (1995)
【非特許文献７】Pin et al., PNAS 89:10331 (1992)
【非特許文献８】Minakami et al., BBRC 199:1136 (1994)
【非特許文献９】Joly et al., J. Neurosci. 15:3970 (1995)
【非特許文献１０】Baskys, Trends Pharmacol. Sci. 15:92 (1992)
【非特許文献１１】Watkins et al., Trends Pharmacol. Sci. 15:33 (1994)
【非特許文献１２】Bashir et al., Nature 363:347 (1993)
【非特許文献１３】Bortolotto et al., Nature 368:740 (1994)
【非特許文献１４】Aiba et al., Cell 79:365 (1994)
【非特許文献１５】Aiba et al., Cell 79:377 (1994)
【非特許文献１６】Meller et al., Neuroreport 4: 879 (1993)
【非特許文献１７】Bordi and Ugolini, Brain Res. 871:223 (1999)
【非特許文献１８】Cunningham et al., Life Sci. 54:135 (1994)
【非特許文献１９】Hollman et al., Ann. Rev. Neurosci. 17:31 (1994)
【非特許文献２０】Spooren et al., Trends Pharmacol. Sci. 22:331 (2001)
【非特許文献２１】Gasparini et al. Curr. Opin. Pharmacol. 2:43 (2002)
【非特許文献２２】Neugebauer Pain 98:1 (2002)
【非特許文献２３】Holloway & Dent (1990) Gastroenterol. Clin. N. Amer. 19, pp. 517-535
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）、特にｍＧｌｕＲ５受容体において活性を示す化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、式Ｉ：
【化１】
式中、Ｒ1は
【化２】
並びにそれらの薬学的に許容される塩、水和物、イソ型及び／又はエナンチオマーである；
の化合物を対象とする。１つの実施態様では、式Ｉの化合物はＲ−エナンチオマーである。別の実施態様では、式Ｉの化合物はＳ−エナンチオマーである。
【００１７】
別の実施態様は、有効性成分として治療有効量の式Ｉの化合物を、１つ又はそれ以上の薬学的に許容される賦形剤、医薬品添加物及び／又は不活性担体と併せて含む医薬組成物である。
【００１８】
以下に更に詳細に記載するように、他の実施態様は、治療において、ｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療において、ｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療のための薬剤の製造において使用される、式Ｉの化合物に関する。
【００１９】
更に他の実施態様は、式Ｉの化合物の治療的有効量を哺乳動物に投与することを含む、ｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療法に関する。
【００２０】
別の実施態様では、式Ｉの化合物の有効量で該受容体を含有する細胞を処理することを含む、ｍＧｌｕＲ５受容体の活性化を阻害する方法を提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の化合物は、治療において、特に、神経障害、精神障害、疼痛性障害、及び胃腸障害の治療に有用である。
【００２２】
本発明のある種の化合物は、また、溶媒和した形態で、例えば、水和した形態で、及び非溶媒和の形態で存在し得ることは、当業者に理解されるであろう。更に、本発明が、式Ｉの化合物の全てのその様な溶媒和形態を包含することは、理解されるであろう。
【００２３】
式Ｉの化合物の塩も、また、本発明の範囲内である。一般的に、本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、当該技術分野でよく知られた標準的手順を用いて、例えば、十分に塩基性の化合物、例えば、アルキルアミンを、好適な酸、例えば、ＨＣｌ又は酢酸と反応させて、薬学的に許容されるアニオンを有する塩を得ることによって得られる。また、カルボン酸又はフェノールなどの好適に酸性のプロトンを有する本発明の化合物を、１当量のアルカリ金属又はアルカリ土類金属のヒドロキシド若しくはアルコキシド（エトキシド又はメトキシドなど）、又は好適に塩基性の有機アミン（コリン又はメグルミンなど）と水性媒体中で処理し、次いで、従来の精製技法で精製することにより、対応するアルカリ金属（ナトリウム、カリウム又はリチウムなど）又はアルカリ土類金属（カルシウムなど）塩を作ることも可能である。更に、第四級アンモニウム塩は、アルキル化剤を、例えば、中性アミンに添加することにより製造することができる。
【００２４】
本発明の１つの実施態様において、式Ｉの化合物は、その薬学的に許容される塩又は溶媒和物、特に、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩又はｐ−トルエンスルホン酸塩などの酸付加塩に転換することができる。
【００２５】
本発明の更なる実施態様において、式Ｉの化合物は、スルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸（１：１及び２：１の両者）、エタンスルホン酸、硝酸、２−メシチレンスルホン酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸（１：１及び２：１の両者）又はｐ−キシレンスルホン酸を用いて、薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物へ転換することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
医薬組成物
本発明の化合物は、式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を、薬学的に許容される担体又は賦形物と合わせて含む、従来の医薬組成物に処方することができる。薬学的に許容される担体は、固体又は液体であってもよい。固体形態の製剤としては、粉剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル、カシェ剤及び坐薬が挙げられるが、それらに限定されない。
【００２７】
固体担体は、１つ又はそれ以上の物質であってもよく、それは、また、希釈剤、香味剤、溶解剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、又は錠剤崩壊剤として作用してよい。固体担体は、また、カプセル化材であってもよい。
【００２８】
粉剤においては、担体は微粉化した固体であり、それは、微粉化された本発明の化合物、又は活性成分との混合物である。錠剤においては、活性成分は好適な割合で必要な結合特性を有する担体と混合され、そして所望の形状とサイズに圧縮される。
【００２９】
坐薬組成物を調製する場合は、脂肪酸グリセリド及びココアバターの混合物などの低融点ワックスを初めに溶融し、そして活性成分を、例えば、撹拌によりその中に分散させる。溶融した均一な混合物は、次いで都合のよいサイズの型に注入し、そして冷却し固体化する。
【００３０】
好適な担体としては、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、糖類、ペクチン、デキストリン、澱粉、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウム・カルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバターなどが挙げられるが、それらに限定されない。
【００３１】
用語「組成物」は、また、活性成分と担体としてのカプセル化材との製剤を含むことを意図しており、活性成分（他の担体の有り又は無しの状態の）が、そのように活性成分と一緒になっている担体によって囲まれているカプセルを提供する。同様に、カシェ剤も含まれる。
【００３２】
錠剤、粉剤、カシェ剤及びカプセルは、経口投与に好適な固体の剤形として用いることができる。
【００３３】
液体形態の組成物としては、溶液、懸濁液及び乳化液が挙げられる。例えば、活性化合物の滅菌水又は水−プロピレングリコール溶液は、非経口投与に好適な液体製剤であり得る。液体組成物は、また、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液に処方することもできる。
【００３４】
経口投与用の水溶液は、活性成分を水に溶解し、そして要求に応じて、好適な着色剤、香味剤、安定化剤及び増粘剤を添加することにより調製することができる。経口用としての水性懸濁液は、微粉化した活性化合物を、天然、合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウム・カルボキシメチルセルロース、及び医薬処方技術で公知の他の懸濁剤などの粘稠物質と一緒に水中に分散させることにより作成することができる。経口用として意図する典型的な組成物は、１つ又はそれ以上の着色剤、甘味剤、香味剤及び／又は保存剤を含んでもよい。
【００３５】
投与の様式に依存して、医薬組成物は、約０．０５質量％〜約９９質量％、又は約０．１０質量％〜５０質量％の本発明の化合物を含み、全ての質量％は、組成物の全重量を基準にしている。
【００３６】
本発明を実施するための治療的有効量は、個々の患者の年齢、体重及び応答を含む公知の判定基準を用いて、通常の技術を有する当業者により決定することができ、そして治療すべき又は予防すべき疾病の状況内で解釈することができる。
【００３７】
医学的用途
本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５の興奮性活性化に関連する病態の治療、及びｍＧｌｕＲ５の興奮性活性化によって引き起こされる神経損傷を抑制するのに有用である。本化合物は、ヒトを含む哺乳動物におけるｍＧｌｕＲ５の阻害効果を誘導するのに使用することができる。
【００３８】
ｍＧｌｕＲ５を含むＩ群ｍＧｌｕＲ受容体は、中枢及び末梢神経系並びに他の組織に高発現する。このように、本発明の化合物は、急性及び慢性神経障害及び精神障害、胃腸障害、並びに慢性及び急性疼痛性障害などのｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療に好適なことが期待される。
【００３９】
本発明は、治療に用いるための前記した式Ｉの化合物に関する。
【００４０】
本発明は、ｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療に用いるための、前記した式Ｉの化合物に関する。
【００４１】
本発明は、アルツハイマー病、老年性認知症、ＡＩＤＳ誘発認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、片頭痛、てんかん、統合失調症、欝病、不安、急性不安、網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障などの眼科障害、耳鳴などの聴覚神経障害、化学療法誘発神経障害、帯状疱疹後神経痛及び三叉神経痛、トレランス、依存症、脆弱Ｘ、自閉症、精神発達遅滞、及びダウン症候群の治療に用いるための、前記した式Ｉの化合物に関する。
【００４２】
本発明は、片頭痛に関連する疼痛、炎症性疼痛、糖尿病性神経障害などの神経因性疼痛障害、関節炎及びリウマチ様疾患、腰痛、術後疼痛及び癌、アンギナ、腎又は胆石疝痛、月経、片頭痛及び痛風を含む種々の病態に関連する疼痛の治療に用いるための、上記した式Ｉの化合物に関する。
【００４３】
本発明は、脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏及び虚血性障害、低血糖症、心血管疾患及びてんかんの治療に用いるための、前記した式Ｉの化合物に関する。
【００４４】
本発明は、また、Ｉ群ｍＧｌｕＲ受容体媒介障害及び上記したあらゆる障害の治療用薬剤の製造における、前記した式Ｉの化合物の使用にも関する。
【００４５】
本発明の１つの実施態様は、胃腸障害の治療における式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４６】
本発明の別の実施態様は、一過性下部食道括約筋弛緩の抑制のための、ＧＥＲＤの治療のための、胃食道逆流の予防のための、逆流治療のための、喘息の治療のための、喉頭炎の治療のための、肺疾患の治療のための、成長不全の管理のための、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療のための、及び機能性消化不良（ＦＤ）の治療のための、式Ｉの化合物に関する。
【００４７】
本発明の別の実施態様は、一過性下部食道括約筋弛緩の抑制のための、ＧＥＲＤの治療のための、胃食道逆流の予防のための、逆流治療のための、喘息の治療のための、喉頭炎の治療のための、肺疾患の治療のための、成長不全の管理のための、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療のための、及び機能性消化不良（ＦＤ）の治療のための薬剤を製造するための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４８】
本発明の別の実施態様は、過活動膀胱又は尿失禁治療用の式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４９】
用語「ＴＬＥＳＲ」、一過性下部食道括約筋弛緩は、本明細書においては、Mittal, R.K., Holloway, R.H., Penagini, R., Blackshaw, L.A., Dent, J., 1995; 「一過性下部食道括約筋弛緩」（Transient lower esophageal sphincter relaxation）. Gastroenterology 109, pp. 601-610に従って定義される。
【００５０】
用語「逆流」は、本明細書においては、機械的バリアがその時点で一時的に失われることから、食道を通過することができる胃液と定義される。
【００５１】
用語「ＧＥＲＤ」、胃食道逆流疾患は、本明細書においては、van Heerwarden, M.A., Smout A.J.P.M., 2000;「逆流疾患の診断」（Diagnosis of reflux disease）. Bailliere's Clin. Gastroenterol. 14, pp. 759-774に従って定義される。
【００５２】
本発明の更なる実施態様は、咳治療のための薬剤を製造するための、式Ｉの化合物の使用に関する。１つの実施態様では、治療すべき咳は慢性咳である。更なる実施態様では、治療すべき咳は急性咳である。用語「慢性咳」は、８週間より長く続く咳として、Kardos
P et al (「急性及び慢性咳の患者の診断及び治療のドイツ呼吸器学会ガイドライン」（The German Respiratory Society`s Guideline for the Diagnosis and Treatment of Patients with Acute and Chronic Cough） Medizinische Klinik 2004;99(8):468-75)に従って定義される。しかしながら、慢性咳は、３週間より長く続く咳として、又は２か月より長く続く咳としても定義することができる。用語「急性咳」は、また、８週間より少なく続く咳としても、上記文献に従って定義される。
【００５３】
上記の式Ｉの化合物は、肥満又は過体重の治療又は予防（例えば、体重減少の促進及び体重減少の維持）、体重増加の予防又は反転（例えば、リバウンド、薬剤誘導又は禁煙後）、食欲及び／又は満腹、摂食障害（例えば、無茶食い、拒食症、過食症及び強迫観念の）及び渇望（薬物、たばこ、アルコール、いずれかの食欲をそそる主要栄養素又は非必須食品に対する）の調節に有用である。
【００５４】
本発明は、前記の式Ｉの化合物の有効量を患者に投与することを含む、該病態に罹患し又はそのリスクを有する患者における、ｍＧｌｕＲ５媒介障害及び上記のいずれかの障害の治療法を提供する。
【００５５】
特定の障害の治療又は予防的治療に必要な用量は、治療される当事者、投与経路及び治療する疾患の重症度に依存して、必要に応じて変動する。
【００５６】
本明細書において、用語「療法」及び「治療」は、それと反対の特定の指示がない限り、予防又は予防法を含む。用語「治療の」及び「治療的に」は状況に応じて解釈すべきである。
【００５７】
本明細書では、特に記述がない限り、用語「アンタゴニスト」及び「阻害薬」は、いずれにしても、部分的であれ完全であれ、リガンドによる反応の誘導に至る伝達経路をブロックする化合物を意味するものと考えることができる。
【００５８】
用語「障害」は、特に明記しない限り、代謝調節型グルタミン酸受容体活性に関連するいずれの病態及び疾患をも意味する。
【００５９】
非医学的用途
治療医学におけるそれらの使用に加えて、式Ｉの化合物、並びに当該化合物の塩及び水和物は、新しい治療薬の探索の一環として、ネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラット及びマウスなどの実験動物におけるｍＧｌｕＲ関連活性阻害薬の効果の評価に対し、インビトロ及びインビボ試験系の開発及び標準化における薬理学的ツールとして有用である。
【００６０】
製造方法
中間体の合成
【化３】
【００６１】
【化４】
【００６２】
最終化合物の合成
【化５】
【００６３】
一般的方法
全ての出発物質は市販されており、又は以前に文献に記載されたものである。1Ｈ及び13ＣＮＭＲは、Bruker 300、Brucker DPX 400スペクトロメーターを使用し、1ＨＮＭＲに対しては、３００及び４００ＭＨｚで操作し、参照用としてＴＭＳ又は残留溶媒シグナルを用い、特に指示のない限り、溶媒として重水素化クロロホルム中で測定した。報告された全てのケミカルシフトは、δスケールでのｐｐｍ値、及び測定時に出現するシグナルの微細分裂構造（ｓ：単一線、ｂｒ ｓ：広幅単一線、ｄ：二重線、ｑ：四重線、ｍ：多重線）である。
【００６４】
分析用インライン液体クロマトグラフィー分離とそれに続くマススペクトル検出は、Alliance 2795 (LC)、及びＺＱ単一四重極マススペクトロメーターより成るWater社のＬＣＭＳで測定した。マススペクトロメーターは、陽イオン及び／又は陰イオンモードで操作するエレクトロスプレーイオン源を備えていた。イオンスプレー電圧は±３ｋＶであり、そしてマススペクトロメーターは、ｍ／ｚ＝１００〜７００、走査時間０．８秒の条件で走査した。カラム、X-Terra MS、 Waters、Ｃ８、２．１×５０ｍｍ、３．５ｍｍ、は、５％〜１００％アセトニトリル／１０ｍＭ酢酸アンモニウム（水溶液）又は０．１％ＴＦＡ（水溶液）の線形グラジエントを適用した。分取型逆相クロマトグラフィーは、カラムとして、Xterra MS、Ｃ８、１９×３００ｍｍ、７ｍｍを用い、ダイオード・アレー検出器を備えたGilson自動分取型ＨＰＬＣで実施した。生成物の精製は、また、シリカ充填ガラスカラム中のフラッシュ・クロマトグラフィーで行った。
【００６５】
略号リスト
Ａｑ．： 水性；
ｍＣＰＢＡ： メタ−クロロ過安息香酸；
Novozyme 435（登録商標）： カンジダアンタルチカリパーゼ(candida antartica lipase)を結合したポリマーに対する登録商標名；
【実施例】
【００６６】
〔実施例１〕
中間体の合成
（２Ｚ）−クロロ［（３−メチルフェニル）ヒドラゾノ］酢酸エチル
【化６】
（２Ｚ）−クロロ［（３−メチルフェニル）ヒドラゾノ］酢酸エチルは、Farmaco Ed. Sci. 1985, 40(4), 259-271に記載の通りに合成した。
【００６７】
〔実施例２〕
（２Ｚ）−アミノ［３−メチルフェニル）ヒドラゾノ］酢酸エチル
【化７】
水酸化アンモニウム水溶液（２０％、７６８ｍＬ）を、テトラヒドロフラン（１０２４ｍＬ）中の（２Ｚ）−クロロ［（３−メチルフェニル）−ヒドラゾノ］酢酸エチル（２５６ｇ、１０６４ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しつつ５０分間かけて加えた。４０分後、石油エーテル（２５０ｍＬ）及び酢酸エチル（２５０ｍＬ）の溶媒混合物を加えた。１５分間撹拌した後２層に分離し、水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して、標題生成物（２００ｇ、８５％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．１４（ｍ，１Ｈ），６．９８（ｍ，１Ｈ），６．８８（ｍ，１Ｈ），６．７４（ｍ，１Ｈ），６．６１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），４．３８（ｍ，４Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｍ，３Ｈ）。
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ）：１６２．３，１４５．２，１３９．１，１３５．９，１２９．０，１２２．１，１１４．８，１１１．４，６２．３，２１．５，１４．２。
【００６８】
〔実施例３〕
２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−カルボン酸エチル
【化８】
酢酸（２０７ｍＬ、３．６２ｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２１７０ｍＬ）中の（２Ｚ）−アミノ［３−メチルフェニル）−ヒドラゾノ］酢酸エチルの溶液に撹拌しつつ加え、混合物を８５℃に加熱した。水（２２６ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（７４．８ｇ、１．０８ｍｏｌ）溶液を３時間かけて加えた。２０分間撹拌した後、混合物を室温に冷却した。混合物を濃縮し、そして残留物に酢酸エチル（７５０ｍＬ）及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）を加えた。層を分離し、水相を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮し、標題生成物（１７６ｇ、８４％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．９９（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｔ，１Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），４．５６（ｑ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｔ，３Ｈ）。13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ）：１５７．８，１５７．７，１４０．２，１３６．３，１３１．３，１２９．６，１２０．８，１１７．４，６２．７，２１．３，１４．２。
【００６９】
〔実施例４〕
１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル｝エタノン
【化９】
トリエチルアミン（５２０ｍＬ、３．７４ｍｏｌ）中のメチルマグネシウムブロミド（１０７０ｍＬ、１．５０ｍｏｌ、テトラヒドロフラン／トルエン中１．４Ｍ）を、無水トルエン（１，０００ｍＬ）中の２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−カルボン酸エチルの撹拌溶液に、滴下漏斗を経由して、−１０℃で５時間かけて加えた。混合物の撹拌を、−１０℃で終夜継続した。塩酸（３７％、５００ｍＬ）及び水（５００ｍＬ）の冷却（＋３℃）溶液を、２時間２０分かけて加えた。層を分離し、そして有機層を水（５００ｍＬ）及びブライン（２×２５０ｍＬ）で洗浄した。水層をトルエン（３×５００ｍＬ）で抽出し、そしてトルエンをブライン（２×２５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機抽出物を濃縮し、溶離液としてジクロロメタンを用いてシリカゲル上で精製した。濃縮した生成物の残渣を石油エーテルで粉砕し、濾過し、そして減圧下、室温で乾燥して、標題生成物（９０．８６ｇ、６０％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．９９（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），２．８３（ｍ，３Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ）。
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ）：１８８．１，１６２．６，１４０．４，１３６．５，１３１．６，１２９．８，１２１．０，１１７．６，２８．３，２１．５。
【００７０】
〔実施例５〕
１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール
【化１０】
メタノール（１，０００ｍＬ）中の１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル｝エタノン（９６．８９ｇ、４７９ｍｍｏｌ）を、氷／水浴で冷却した。ナトリウムボロヒドリド（２９ｇ、７６７ｍｍｏｌ）を１時間３０分かけて加えた。４０分間撹拌した後、酢酸水溶液（７０％、２０ｍＬ）を加え、混合物を濃縮した。ジクロロメタン（４００ｍＬ）を残渣に加え、そして炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（５００ｍＬ）で抽出した。水相をジクロロメタン（１７０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を塩酸水溶液（０．５Ｍ、２５０ｍＬ）で洗浄し、次いで炭酸水素塩水溶液（２８０ｍＬ）で洗浄し、次いでブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、標題生成物（９５ｇ、９７％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．８８（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｔ，１Ｈ），７．２８（ｍ，１Ｈ），５．２９（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），１．７４（ｍ，３Ｈ）。
【００７１】
〔実施例６〕
酢酸（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エチル
【化１１】
無水トルエン（４，８００ｍＬ）中の１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール（９３ｇ、４６０ｍｍｏｌ）及びNovozyme 435（登録商標）（１０ｇ）の混合物をゆっくり撹拌した。酢酸ビニル（３９．２ｇ、４６０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５時間撹拌した。Novozyme 435（登録商標）を濾過し、トルエン（１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮し、溶離液として石油エーテル／酢酸エチル（６：１）を用いてシリカゲル上で精製し、標題生成物（４７．９２ｇ、４２％）を得た。1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．８９（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｔ，１Ｈ），７．２６（ｍ，１Ｈ），６．２７（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．１３（ｍ，３Ｈ），１．７７（ｍ，３Ｈ）。
【００７２】
〔実施例７〕
（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール
【化１２】
水酸化リチウム・一水和物（１６．６８ｇ、４００ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／水（１：１、７５０ｍＬ）中の酢酸（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エチル（４６．６ｇ、１９０ｍｍｏｌ）の溶液に撹拌しつつ加えた。反応時間３時間後、混合物を半分の体積まで濃縮した。ブライン（１００ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して、標題生成物（３８．１８ｇ、９９％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．８９（ｍ，２Ｈ），７．４２（ｔ，１Ｈ），７．２８（ｍ，１Ｈ），５．２９（ｍ，１Ｈ），２．７２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），１．７５（ｍ，３Ｈ）。
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ）：１６９．３，１３９．９，１３６．７，１３０．５，１２９．４，１２０．４，１１７．１，６２．９，２２．３，２１．３。
【００７３】
（４−メチル−５−メチルチオ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−アリールの製造
【化１３】
方法１：
対応するアリールカルボン酸（ｎ×ｍｍｏｌ）をチオニルクロリド（ｎ×１．０５ｍＬ）に溶解し、４時間還流した。過剰のチオニルクロリドを減圧下で除去し、そしてピリジン（ｎ×０．５２ｍＬ）で置換した。氷浴上で冷却しながら、４−エチル−３−チオセミカルバジド（１当量、ｎ×０．１６ｍＬ／ｍｍｏｌジクロロメタンで濯ぎ／かき落す）を少しずつ加えた。氷浴を除去し、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ピリジンを減圧下で除去し、そしてＮａＯＨ水溶液（１Ｎ、ｎ×３．１６ｍＬ）で置換し、得られた混合物を７０〜８０℃で４時間撹拌した。室温に冷却後、エタノール（ｎ×０．４２ｍＬ）中のメチルヨージド（１．５当量）を２０分間かけて滴下しながら加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。生成物をジクロロメタン（２×（ｎ×４．２ｍＬ））で抽出した。溶媒を減圧下で除去し、フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカゲル、３％メタノール／クロロホルム）で精製し、標題化合物を得た。
【００７４】
以下の化合物を方法１により合成した。
【表１】
【００７５】
方法２：
〔実施例８．３〕
２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン
【化１４】
メタノール（２５ｍＬ）を、メチルイソチオシアナート（１．０５２ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）及び５−メチルピラジン−２−カルボヒドラジド（２．１９２ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得られた混合物を６０℃で１時間加熱し、減圧下で濃縮した。残留物を水酸化ナトリウム水溶液（０．８Ｍ、２０ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）に溶解し、得られた溶液を６０℃で１９時間加熱し、次いで室温に冷却した。水酸化ナトリウム水溶液（６Ｍ、２．６ｍＬ、１５．６ｍｍｏｌ）を加え、次いでエタノール（３１ｍＬ）中のヨードメタン（１．２４ｍＬ、１９．８ｍｍｏｌ）＋追加の水（５ｍＬリンス用）を加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。生成物を水（３０ｍＬ添加）及びジクロロメタン（３００ｍＬ）の間で分配した。水層をジクロロメタン（４×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（７５ｍＬ）及びブライン（７５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を除去し、次いでフラッシュ・クロマトグラフィー（シリカゲル、２〜３％メタノール／ジクロロメタン）での精製により、標題化合物（２．５５９ｇ、８０％）を得た。
1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：９．４０（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），２．８０（ｓ，３Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ）。
【００７６】
同様にして以下の化合物を合成した。
【表２】
【００７７】
〔実施例８．５〕
３−（４−メチル−５−メチルチオ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン
【化１５】
３−（４−メチル−５−メチルチオ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジンを国際公開第２００５／０８０３７９号に記載されたように合成した。
【００７８】
［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−アリールの製造
【化１６】
方法１：
ｍ−クロロ過安息香酸（７７％、２．５当量）をジクロロメタン（ｎ×６．２５ｍＬ）中の対応する（４−メチル−５−メチルチオ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−アリール（ｎ×ｍｍｏｌ）の冷却した溶液に、２０分間かけて少しずつ加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。飽和の重炭酸ナトリウム水溶液（ｎ×６．２５ｍＬ）を加え、そして生成物をジクロロメタン（２×（ｎ×１２．５ｍＬ））で抽出した。フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカゲル、２％メタノール／クロロホルム）で精製し、標題化合物を得た。
【００７９】
以下の化合物を方法１で合成した。
【表３】
【００８０】
方法２：
〔実施例９．３〕
２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン
【化１７】
水（９５ｍＬ）中の過マンガン酸カリウム（３．３８ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）の溶液を、氷酢酸（４５ｍＬ）中の２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン（１．８５３ｇ、１１．５２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。固体の硫酸水素ナトリウムを、暗色が消え、透明の無色の溶液となるまで、小分けして加えた。生成物をクロロホルム（３５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）の間で分配し、水層をクロロホルム（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａＯＨ水溶液（４０ｍＬ、６Ｍ）及び重炭酸ナトリウム飽和水溶液（２５０ｍＬ）で、ガスの発生が止み、ｐＨ＝〜７になるまで中和した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、標題化合物（２．７１５ｇ、９３％、白色固体）を得た。
1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：９．４４（ｓ，１Ｈ），８．５５（ｓ，１Ｈ），４．３６（ｓ，３Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），２．６９（ｓ，３Ｈ）。
【００８１】
同様にして、以下の化合物を合成した。
【表４】
【００８２】
〔実施例９．５〕
３−（５−メタンスルホニル−４−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−ピリジン
【化１８】
３−（５−メタンスルホニル−４−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−ピリジンを、国際公開第２００５／０８０３５６号に記載されたように合成した。
【００８３】
最終化合物の合成
〔実施例１０．１〕
２−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリミジン
【化１９】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール（２５１ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、２−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン（２３９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（９１１ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）の混合物を、６５℃で１５時間撹拌した。室温に冷却した後、生成物を酢酸エチル（３００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）間で分配した。有機層を水（３×５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で濃縮した。フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカゲル、２〜３％メタノール／ジクロロメタン）で精製し、標題化合物（２６５ｍｇ、７３％、油状物質）を得た。
1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：８．８５（ｄ，２Ｈ）；７．９３（ｍ，２Ｈ）；７．４２（ｔ，１Ｈ）；７．２９（ｍ，２Ｈ）；６．６８（ｑ，１Ｈ）；３．８８（ｂｓ，３Ｈ）；２．４６（ｂｓ，３Ｈ）；２．０３（ｄ，３Ｈ）。
ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋＋１）３６４。
【００８４】
同様にして、以下の化合物を合成した。
【表５】
【００８５】
【表６】
【００８６】
生物学的評価
ｍＧｌｕＲＤを発現する細胞系におけるｍＧｌｕＲ５アンタゴニズムの機能評価
本発明の化合物の特性は、薬理活性の標準分析法を用いて解析することができる。グルタミン酸受容体分析の例は、例えば、Aramori et al., Neuron 8:757 (1992), Tanabe et
al., Neuron 8:169 (1992), Miller et al., J. Neuroscience 15: 6103 (1995), Balazs, et al., J. Neurochemistry 69:151 (1997）に記載のように、当技術分野で周知である。これらの刊行物に記載の方法論は、参照することにより本明細書に組み入れられている。都合のよいことに、本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５を発現する細胞中の細胞内カルシウム、［Ｃａ2+］iの可動化を測定する分析（ＦＬＩＰＲ）、又はイノシトールリン酸ターンオーバーを測定する別の分析（ＩＰ３）を用いて検討することができる。
【００８７】
ＦＬＩＰＲ分析
国際公開公報第９７／０５２５２号に記載のヒトｍＧｌｕＲ５ｄを発現する細胞を、黒色面を有するコラーゲン被覆透明底９６ウェルプレートに１００，０００細胞／ウェルの密度で播種し、そして播種の２４時間後に実験を行なった。すべての分析は、１２７ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、２ｍＭのＭｇＣｌ2、０.７ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4、２ｍＭのＣａＣｌ2、０.４２２ｍｇ／ｍｌのＮａＨＣＯ3、２.４ｍｇ／ｍｌのＨＥＰＥＳ、１.８ｍｇ／ｍｌのグルコース及び１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡフラクションＩＶ（ｐＨ７.４）を含有する緩衝液中で行なわれた。９６ウェルプレート中の細胞培養液は、０．０１％のpluronic acid (独自開発の非イオン界面活性剤ポリオール：ＣＡＳ番号９００３−１１−６）中に４μＭの蛍光カルシウム指示薬、フルオ−３のアセトキシメチルエステル型(Molecular Probes, Eugene, Oregon)、 を含有する上記の緩衝液中に６０分間負荷した。負荷
時間の後、フルオ−３緩衝液を除去し、新鮮な分析緩衝液で置換した。ＦＬＩＰＲ実験は、０.８００Ｗのレーザーの設定及び０.４秒のＣＣＤカメラシャッター速度、並びに励起及び発光波長がそれぞれ４８８ｎｍ及び５６２ｎｍで実施した。各実験は、細胞プレートの各ウェルに存在する１６０μｌの緩衝液を用いて開始した。アンタゴニストプレートから４０μｌを加え、その後アゴニストプレートから５０μｌを添加した。アンタゴニスト及びアゴニストの添加の間に３０分の間隔をおいた。蛍光シグナルを１秒間隔で５０回サンプリングし、その後各２回の添加の直後に５秒間隔で３試料を続けた。アゴニストへの応答のピーク高さからサンプリング時間内の蛍光バックグラウンドを差し引いた差として、応答を測定した。ＩＣ50の定量を線形最小二乗あてはめプログラムを用いて行なった。
【００８８】
ＩＰ３分析
ｍＧｌｕＲ５ｄの更なる機能分析は、国際公開公報第９７／０５２５２号に記載されており、ホスファチジルイノシトール・ターンオーバーに基づいている。受容体活性化はホスホリパーゼＣ活性を刺激し、そしてイノシトール−１，４，５−トリスリン酸（ＩＰ3）の形成増加に導く。
ヒトｍＧｌｕＲ５ｄを安定的に発現するＧＨＥＫを、１μＣｉ／ウェル［３Ｈ］ミオイノシトールを含有する培地中、４０×１０4細胞／ウェルで２４ウェルポリ−Ｌ−リジン被覆プレート上に播種した。細胞を一夜（１６ｈ）インキュベートし、次いで３回洗浄し、そして１単位／ｍｌのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及び２ｍＭのピルビン酸を補充して、ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（１４６ｍＭのＮａＣｌ、４.２ｍＭのＫＣｌ、０.５ｍＭのＭｇＣｌ2、０.１％のグルコース、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４）中、３７℃で１時間インキュベートした。細胞をＨＥＰＥＳ緩衝食塩水で１回洗浄し、１０ｍＭのＬｉＣｌを含有するＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中で１０分間プレインキュベートした。化合物を重複して３７℃で１５分間インキュベートし、次いでグルタミン酸（８０Ｍ）か又はＤＨＰＧ（３０μＭ）を加え、そして更に３０分間インキュベートした。反応は、氷上で０．５ｍｌの過塩素酸（５％）を添加し、４℃で少なくとも３０分インキュベーションして停止した。試料を１５ｍｌポリエチレンチューブに収集し、そしてイノシトールリン酸をイオン交換樹脂（Dowex AG1-X8 ギ酸塩型、２００〜４００メッシュ, BIORAD) カラムを用いて分離した。イノシトールリン酸分離は、先ず８ｍｌの３０ｍＭのギ酸アンモニウムでグリセロホスファチジルイノシトールを溶離することにより行なった。次いで、総イノシトールリン酸を８ｍｌの７００ｍＭギ酸アンモニウム／１００ｍＭギ酸で溶離し、そしてシンチレーションバイアルに収集した。次いで、この溶出液を８ｍｌのシンチレーション剤と混合し、［3Ｈ］イノシトール取り込みをシンチレーション計数により測定した。重複試料のｄｐｍ数をプロットし、そしてＩＣ50の定量を線形最小二乗あてはめプログラムを用いて行なった。
【００８９】
略語
ＢＳＡ： ウシ血清アルブミン
ＣＣＤ： 電荷結合素子
ＣＲＣ： 濃度反応曲線
ＤＨＰＧ： ３，５−ジヒドロキシフェニルグリシン
ＤＰＭ： 壊変毎分
ＥＤＴＡ： エチレンジアミンテトラ酢酸
ＦＬＩＰＲ：蛍光イメージングプレートリーダー
ＧＨＥＫ： ＧＬＡＳＴ含有ヒト胚腎臓
ＧＬＡＳＴ：グルタミン酸／アスパラギン酸輸送体
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（緩衝剤）
ＩＰ3： イノシトールトリスリン酸
【００９０】
一般的に、化合物は上記分析において活性であり、ＩＣ50値は１０，０００ｎＭ未満であった。本発明の１つの態様では、ＩＣ50値は１μＭ未満であった。本発明の更なる態様では、ＩＣ50値は１００ｎＭ未満であった。
【表７】
【００９１】
ＴＬＥＳＲに対して活性な化合物のスクリーニング
パブロフスリングに立つように訓練した両性の成体ラブラドール・レトリーバを使用した。粘膜から皮膚への食道瘻造設術を行い、そしてイヌを完全に回復させてからあらゆる実験を行なった。
【００９２】
運動測定
簡潔にいえば、自由飲水で約１７時間の絶食後、胃、下部食道括約筋（ＬＥＳ）及び食道内圧を測定するために、マルチルーメン・スリーブ／側孔装置（Dentsleeve, Adelaide, South Australia) を、食道瘻造設術を介して導入した。この装置は、低コンプライアンス・マノメーター潅流ポンプ（Dentsleeve, Adelaide, South Australia）を用いて水で潅流した。空気潅流チューブを嚥下の測定のために口腔方向に通し、そしてＬＥＳの３ｃｍ上部でｐＨをアンチモン電極にてモニターした。すべての信号を増幅し、そして１０Ｈｚのパソコンにて取得した。
【００９３】
空腹時の胃／ＬＥＳフェーズＩＩＩ運動活性のないベースライン測定が行われる場合、プラセボ（０．９％ＮａＣｌ）又は試験化合物を、前脚静脈中に静脈内投与（ｉ.ｖ.、０．５ｍｌ／ｋｇ）した。ｉ.ｖ.投与の１０分後、栄養食（１０％ペプトン、５％Ｄ−グルコース、５％Intralipid、ｐＨ３．０）を、３０ｍｇ／ｋｇの最終量まで１００ｍｌ／分で装置の中心ルーメンを通して胃内に注入した。栄養食の注入後に、１０±１ｍｍＨｇの胃内圧が得られるまで空気注入を続けた。次いで、更なる空気注入又は胃からの空気の通気のために注入ポンプを用いる実験の間中、圧力をこのレベルに維持した。栄養物注入の開始から胃内送気の終了までの実験時間は４５分であった。この手順は、ＴＬＥＳＲを誘引する確実な方法と認められている。
【００９４】
ＴＬＥＳＲは、＞１ｍｍＨｇ／ｓの変化率での下部食道括約筋圧（胃内圧を基準にして）の減少と定義される。弛緩が嚥下誘導と分類される場合、弛緩はその発生の≦２ｓ前に咽頭シグナルが先行することがない。ＬＥＳ及び胃との間の圧力差は２ｍｍＨｇ未満のはずであり、そして完全弛緩の持続は１ｓより長いものでなければならない。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、治療におけるそれらの使用及び該新規化合物を含む医薬組成物を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
グルタミン酸は、哺乳動物中枢神経系（ＣＮＳ）における主要な興奮性神経伝達物質である。グルタミン酸は、中枢ニューロンに対するその効果を、細胞表面受容体に結合し、そしてそれによって活性化することにより発揮する。これらの受容体は、受容体タンパク質の構造特性、受容体が細胞中へシグナルを伝達する手段、及び薬理学的特性に基づいて、イオンチャンネル型及び代謝調節型グルタミン酸受容体の２つの主要なクラスに分けられている。
【０００３】
代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）は、グルタミン酸の結合後の様々な細胞内セカンドメッセンジャー系を活性化するＧタンパク質結合受容体である。インタクト哺乳動物ニューロンにおけるｍＧｌｕＲの活性化は、１つ又はそれ以上の以下の反応を誘導する：ホスホリパーゼＣの活性化；ホスホイノシチド（ＰＩ）加水分解の増加；細胞内カルシウム放出；ホスホリパーゼＤの活性化；アデニルシクラーゼの活性化又は阻害；環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の形成増加又は減少；グアニリルシクラーゼの活性化；環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の形成増加；ホスホリパーゼＡ2の活性化；アラキドン酸放出の増加；並びに電位及びリガンド依存性イオンチャンネルの活性増加又は減少。非特許文献１、２、３、４。
【０００４】
分子クローニングにより、ｍＧｌｕＲ１からｍＧｌｕＲ８まで命名された８つの異なるｍＧｌｕＲサブタイプが同定されている。非特許文献５、３、６。更なる受容体多様性は、特定のｍＧｌｕＲサブタイプの選択的スプライシング型の発現を経由して起こる。非特許文献７、８、９。
【０００５】
代謝調節型グルタミン酸受容体サブタイプは、アミノ酸配列相同性、受容体によって利用されるセカンドメッセンジャー系に基づいて、及びそれらの薬理学的特性によって、Ｉ群、ＩＩ群、及びＩＩＩ群ｍＧｌｕＲの３群に細分することができる。Ｉ群ｍＧｌｕＲは、ｍＧｌｕＲ１、ｍＧｌｕＲ５及びそれらの選択的スプライシング変異体を含む。これらの受容体へのアゴニストの結合は、ホスホリパーゼＣの活性化及び細胞内カルシウムのその後の可動化をもたらす。
【０００６】
神経障害、精神障害及び疼痛性疾患
Ｉ群ｍＧｌｕＲの生理的役割を解明する試みは、これらの受容体の活性化が神経興奮を誘導することを示唆する。種々の研究の結果は、Ｉ群ｍＧｌｕＲアゴニストが、海馬、大脳皮質、小脳、及び視床、並びに他のＣＮＳ領域のニューロンに適用時にシナプス後興奮を引き起こし得ることを示している。この興奮がシナプス後ｍＧｌｕＲの直接活性化に因ることを明示しているが、シナプス前ｍＧｌｕＲの活性化が起こって、神経伝達物質放出の増加をもたらすことも示唆されている。非特許文献１０、２、３、１１。
【０００７】
代謝調節型グルタミン酸受容体は、哺乳動物ＣＮＳにおける多数の正常過程に関与している。ｍＧｌｕＲの活性化が、海馬の長期増強及び小脳の長期抑圧の誘導に必要なことが示されている。非特許文献１２、１３、１４、１５。痛覚及び無痛覚におけるｍＧｌｕＲ活性化の役割も実証されている。非特許文献１６、１７。加えて、ｍＧｌｕＲ活性化は、シナプス伝達、神経発達、アポトーシス性ニューロン死、シナプス可塑性、空間学習、嗅覚記憶、心臓活動の中枢調節、覚醒、運動調節及び前庭動眼反射の調節を含む様々な他の正常過程において調節性役割を果たしていることが示唆されている。非特許文献５、３、６。
【０００８】
更に、Ｉ群代謝調節型グルタミン酸受容体及び特にｍＧｌｕＲは、ＣＮＳに影響を与える様々な病態生理学的過程及び障害において役割を果たすことが示唆されている。これらは、脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏及び虚血性障害、低血糖症、てんかん、アルツハイマー病などの神経変性障害並びに疼痛を含む。非特許文献１、１８、１９、３、６、２０、２１、２２。これらの病態における大部分の病状は、ＣＮＳニューロンの過剰グルタミン酸誘導興奮に因ると考えられている。Ｉ群ｍＧｌｕＲは、シナプス後メカニズムを経由してグルタミン酸媒介神経興奮を増加させるように見え、そしてシナプス前グルタミン酸放出を増強させたことから、それらの活性化は恐らくその病状に寄与する。従って、Ｉ群ｍＧｌｕＲの選択的アンタゴニストは、特に神経保護薬、鎮痛薬又は抗痙攣薬として治療上有益となり得る。
【０００９】
一般的に代謝調節型グルタミン酸受容体、そして特にＩ群の神経生理学的役割の解明における最近の進歩は、これらの受容体を急性及び慢性神経及び精神障害並びに慢性及び急性疼痛性障害の治療における有望な薬剤標的として確立している。
【００１０】
胃腸障害
下部食道括約筋（ＬＥＳ）は間欠的に弛緩しやすい。結果として、その時点で機械的バリアが一時的に失われることから、以後「逆流」と呼ばれる事象により胃液は食道を通過することができる。
【００１１】
胃食道逆流疾患（ＧＥＲＤ）は、最も一般的な上部消化管疾患である。最近の薬物療法は、胃酸分泌を低下させること、又は食道内の酸を中和することを目的としている。逆流での主要メカニズムは、低緊張性下部食道括約筋に依存すると考えられている。しかしながら、例えば、非特許文献２３は、大部分の逆流エピソードが、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）時、即ち、嚥下で誘発されない弛緩時に起こることを示している。胃酸分泌は、通常ＧＥＲＤ患者で一般的なことも示されている。
【００１２】
本発明に記載の新規化合物は、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）の抑制、従って胃食道逆流疾患（ＧＥＲＤ）の治療に有用と想定される。
【００１３】
それらの生理学的及び病態生理学的重要性のため、ｍＧｌｕＲサブタイプ、特にＩ群受容体サブタイプ、最も特別にはｍＧｌｕＲ５に対して高選択性を示す新しい有効なｍＧｌｕＲアゴニスト及びアンタゴニストが必要とされている。また、反応性代謝物を導かず、そしてｈＥＲＧ相互作用を制限しているｍＧｌｕＲ５アンタゴニストも必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１４】
【非特許文献１】Schoepp et al., Trends Pharmacol. Sci. 14:13 (1993)
【非特許文献２】Schoepp, Neurochem. Int. 24:439 (1994)
【非特許文献３】Pin et al., Neuropharmacology 34:1 (1995)
【非特許文献４】Bordi and Ugolini, Prog. Neurobiol. 59:55 (1999)
【非特許文献５】Nakanishi, Neuron 13:1031 (1994)
【非特許文献６】Knopfel et al., J. Med. Chem. 38:1417 (1995)
【非特許文献７】Pin et al., PNAS 89:10331 (1992)
【非特許文献８】Minakami et al., BBRC 199:1136 (1994)
【非特許文献９】Joly et al., J. Neurosci. 15:3970 (1995)
【非特許文献１０】Baskys, Trends Pharmacol. Sci. 15:92 (1992)
【非特許文献１１】Watkins et al., Trends Pharmacol. Sci. 15:33 (1994)
【非特許文献１２】Bashir et al., Nature 363:347 (1993)
【非特許文献１３】Bortolotto et al., Nature 368:740 (1994)
【非特許文献１４】Aiba et al., Cell 79:365 (1994)
【非特許文献１５】Aiba et al., Cell 79:377 (1994)
【非特許文献１６】Meller et al., Neuroreport 4: 879 (1993)
【非特許文献１７】Bordi and Ugolini, Brain Res. 871:223 (1999)
【非特許文献１８】Cunningham et al., Life Sci. 54:135 (1994)
【非特許文献１９】Hollman et al., Ann. Rev. Neurosci. 17:31 (1994)
【非特許文献２０】Spooren et al., Trends Pharmacol. Sci. 22:331 (2001)
【非特許文献２１】Gasparini et al. Curr. Opin. Pharmacol. 2:43 (2002)
【非特許文献２２】Neugebauer Pain 98:1 (2002)
【非特許文献２３】Holloway & Dent (1990) Gastroenterol. Clin. N. Amer. 19, pp. 517-535
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明の目的は、代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）、特にｍＧｌｕＲ５受容体において活性を示す化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１６】
本発明は、式Ｉ：
【化１】
式中、Ｒ1は
【化２】
並びにそれらの薬学的に許容される塩、水和物、イソ型及び／又はエナンチオマーである；
の化合物を対象とする。１つの実施態様では、式Ｉの化合物はＲ−エナンチオマーである。別の実施態様では、式Ｉの化合物はＳ−エナンチオマーである。
【００１７】
別の実施態様は、有効性成分として治療有効量の式Ｉの化合物を、１つ又はそれ以上の薬学的に許容される賦形剤、医薬品添加物及び／又は不活性担体と併せて含む医薬組成物である。
【００１８】
以下に更に詳細に記載するように、他の実施態様は、治療において、ｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療において、ｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療のための薬剤の製造において使用される、式Ｉの化合物に関する。
【００１９】
更に他の実施態様は、式Ｉの化合物の治療的有効量を哺乳動物に投与することを含む、ｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療法に関する。
【００２０】
別の実施態様では、式Ｉの化合物の有効量で該受容体を含有する細胞を処理することを含む、ｍＧｌｕＲ５受容体の活性化を阻害する方法を提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明の化合物は、治療において、特に、神経障害、精神障害、疼痛性障害、及び胃腸障害の治療に有用である。
【００２２】
本発明のある種の化合物は、また、溶媒和した形態で、例えば、水和した形態で、及び非溶媒和の形態で存在し得ることは、当業者に理解されるであろう。更に、本発明が、式Ｉの化合物の全てのその様な溶媒和形態を包含することは、理解されるであろう。
【００２３】
式Ｉの化合物の塩も、また、本発明の範囲内である。一般的に、本発明の化合物の薬学的に許容される塩は、当該技術分野でよく知られた標準的手順を用いて、例えば、十分に塩基性の化合物、例えば、アルキルアミンを、好適な酸、例えば、ＨＣｌ又は酢酸と反応させて、薬学的に許容されるアニオンを有する塩を得ることによって得られる。また、カルボン酸又はフェノールなどの好適に酸性のプロトンを有する本発明の化合物を、１当量のアルカリ金属又はアルカリ土類金属のヒドロキシド若しくはアルコキシド（エトキシド又はメトキシドなど）、又は好適に塩基性の有機アミン（コリン又はメグルミンなど）と水性媒体中で処理し、次いで、従来の精製技法で精製することにより、対応するアルカリ金属（ナトリウム、カリウム又はリチウムなど）又はアルカリ土類金属（カルシウムなど）塩を作ることも可能である。更に、第四級アンモニウム塩は、アルキル化剤を、例えば、中性アミンに添加することにより製造することができる。
【００２４】
本発明の１つの実施態様において、式Ｉの化合物は、その薬学的に許容される塩又は溶媒和物、特に、塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩又はｐ−トルエンスルホン酸塩などの酸付加塩に転換することができる。
【００２５】
本発明の更なる実施態様において、式Ｉの化合物は、スルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸（１：１及び２：１の両者）、エタンスルホン酸、硝酸、２−メシチレンスルホン酸、１，５−ナフタレンジスルホン酸（１：１及び２：１の両者）又はｐ−キシレンスルホン酸を用いて、薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物へ転換することができる。
【発明を実施するための形態】
【００２６】
医薬組成物
本発明の化合物は、式Ｉの化合物又は薬学的に許容されるその塩又は溶媒和物を、薬学的に許容される担体又は賦形物と合わせて含む、従来の医薬組成物に処方することができる。薬学的に許容される担体は、固体又は液体であってもよい。固体形態の製剤としては、粉剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル、カシェ剤及び坐薬が挙げられるが、それらに限定されない。
【００２７】
固体担体は、１つ又はそれ以上の物質であってもよく、それは、また、希釈剤、香味剤、溶解剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、又は錠剤崩壊剤として作用してよい。固体担体は、また、カプセル化材であってもよい。
【００２８】
粉剤においては、担体は微粉化した固体であり、それは、微粉化された本発明の化合物、又は活性成分との混合物である。錠剤においては、活性成分は好適な割合で必要な結合特性を有する担体と混合され、そして所望の形状とサイズに圧縮される。
【００２９】
坐薬組成物を調製する場合は、脂肪酸グリセリド及びココアバターの混合物などの低融点ワックスを初めに溶融し、そして活性成分を、例えば、撹拌によりその中に分散させる。溶融した均一な混合物は、次いで都合のよいサイズの型に注入し、そして冷却し固体化する。
【００３０】
好適な担体としては、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、糖類、ペクチン、デキストリン、澱粉、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウム・カルボキシメチルセルロース、低融点ワックス、ココアバターなどが挙げられるが、それらに限定されない。
【００３１】
用語「組成物」は、また、活性成分と担体としてのカプセル化材との製剤を含むことを意図しており、活性成分（他の担体の有り又は無しの状態の）が、そのように活性成分と一緒になっている担体によって囲まれているカプセルを提供する。同様に、カシェ剤も含まれる。
【００３２】
錠剤、粉剤、カシェ剤及びカプセルは、経口投与に好適な固体の剤形として用いることができる。
【００３３】
液体形態の組成物としては、溶液、懸濁液及び乳化液が挙げられる。例えば、活性化合物の滅菌水又は水−プロピレングリコール溶液は、非経口投与に好適な液体製剤であり得る。液体組成物は、また、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液に処方することもできる。
【００３４】
経口投与用の水溶液は、活性成分を水に溶解し、そして要求に応じて、好適な着色剤、香味剤、安定化剤及び増粘剤を添加することにより調製することができる。経口用としての水性懸濁液は、微粉化した活性化合物を、天然、合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウム・カルボキシメチルセルロース、及び医薬処方技術で公知の他の懸濁剤などの粘稠物質と一緒に水中に分散させることにより作成することができる。経口用として意図する典型的な組成物は、１つ又はそれ以上の着色剤、甘味剤、香味剤及び／又は保存剤を含んでもよい。
【００３５】
投与の様式に依存して、医薬組成物は、約０．０５質量％〜約９９質量％、又は約０．１０質量％〜５０質量％の本発明の化合物を含み、全ての質量％は、組成物の全重量を基準にしている。
【００３６】
本発明を実施するための治療的有効量は、個々の患者の年齢、体重及び応答を含む公知の判定基準を用いて、通常の技術を有する当業者により決定することができ、そして治療すべき又は予防すべき疾病の状況内で解釈することができる。
【００３７】
医学的用途
本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５の興奮性活性化に関連する病態の治療、及びｍＧｌｕＲ５の興奮性活性化によって引き起こされる神経損傷を抑制するのに有用である。本化合物は、ヒトを含む哺乳動物におけるｍＧｌｕＲ５の阻害効果を誘導するのに使用することができる。
【００３８】
ｍＧｌｕＲ５を含むＩ群ｍＧｌｕＲ受容体は、中枢及び末梢神経系並びに他の組織に高発現する。このように、本発明の化合物は、急性及び慢性神経障害及び精神障害、胃腸障害、並びに慢性及び急性疼痛性障害などのｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療に好適なことが期待される。
【００３９】
本発明は、治療に用いるための前記した式Ｉの化合物に関する。
【００４０】
本発明は、ｍＧｌｕＲ５媒介障害の治療に用いるための、前記した式Ｉの化合物に関する。
【００４１】
本発明は、アルツハイマー病、老年性認知症、ＡＩＤＳ誘発認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、片頭痛、てんかん、統合失調症、欝病、不安、急性不安、網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障などの眼科障害、耳鳴などの聴覚神経障害、化学療法誘発神経障害、帯状疱疹後神経痛及び三叉神経痛、トレランス、依存症、脆弱Ｘ、自閉症、精神発達遅滞、及びダウン症候群の治療に用いるための、前記した式Ｉの化合物に関する。
【００４２】
本発明は、片頭痛に関連する疼痛、炎症性疼痛、糖尿病性神経障害などの神経因性疼痛障害、関節炎及びリウマチ様疾患、腰痛、術後疼痛及び癌、アンギナ、腎又は胆石疝痛、月経、片頭痛及び痛風を含む種々の病態に関連する疼痛の治療に用いるための、上記した式Ｉの化合物に関する。
【００４３】
本発明は、脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏及び虚血性障害、低血糖症、心血管疾患及びてんかんの治療に用いるための、前記した式Ｉの化合物に関する。
【００４４】
本発明は、また、Ｉ群ｍＧｌｕＲ受容体媒介障害及び上記したあらゆる障害の治療用薬剤の製造における、前記した式Ｉの化合物の使用にも関する。
【００４５】
本発明の１つの実施態様は、胃腸障害の治療における式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４６】
本発明の別の実施態様は、一過性下部食道括約筋弛緩の抑制のための、ＧＥＲＤの治療のための、胃食道逆流の予防のための、逆流治療のための、喘息の治療のための、喉頭炎の治療のための、肺疾患の治療のための、成長不全の管理のための、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療のための、及び機能性消化不良（ＦＤ）の治療のための、式Ｉの化合物に関する。
【００４７】
本発明の別の実施態様は、一過性下部食道括約筋弛緩の抑制のための、ＧＥＲＤの治療のための、胃食道逆流の予防のための、逆流治療のための、喘息の治療のための、喉頭炎の治療のための、肺疾患の治療のための、成長不全の管理のための、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療のための、及び機能性消化不良（ＦＤ）の治療のための薬剤を製造するための、式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４８】
本発明の別の実施態様は、過活動膀胱又は尿失禁治療用の式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４９】
用語「ＴＬＥＳＲ」、一過性下部食道括約筋弛緩は、本明細書においては、Mittal, R.K., Holloway, R.H., Penagini, R., Blackshaw, L.A., Dent, J., 1995; 「一過性下部食道括約筋弛緩」（Transient lower esophageal sphincter relaxation）. Gastroenterology 109, pp. 601-610に従って定義される。
【００５０】
用語「逆流」は、本明細書においては、機械的バリアがその時点で一時的に失われることから、食道を通過することができる胃液と定義される。
【００５１】
用語「ＧＥＲＤ」、胃食道逆流疾患は、本明細書においては、van Heerwarden, M.A., Smout A.J.P.M., 2000;「逆流疾患の診断」（Diagnosis of reflux disease）. Bailliere's Clin. Gastroenterol. 14, pp. 759-774に従って定義される。
【００５２】
本発明の更なる実施態様は、咳治療のための薬剤を製造するための、式Ｉの化合物の使用に関する。１つの実施態様では、治療すべき咳は慢性咳である。更なる実施態様では、治療すべき咳は急性咳である。用語「慢性咳」は、８週間より長く続く咳として、Kardos
P et al (「急性及び慢性咳の患者の診断及び治療のドイツ呼吸器学会ガイドライン」（The German Respiratory Society`s Guideline for the Diagnosis and Treatment of Patients with Acute and Chronic Cough） Medizinische Klinik 2004;99(8):468-75)に従って定義される。しかしながら、慢性咳は、３週間より長く続く咳として、又は２か月より長く続く咳としても定義することができる。用語「急性咳」は、また、８週間より少なく続く咳としても、上記文献に従って定義される。
【００５３】
上記の式Ｉの化合物は、肥満又は過体重の治療又は予防（例えば、体重減少の促進及び体重減少の維持）、体重増加の予防又は反転（例えば、リバウンド、薬剤誘導又は禁煙後）、食欲及び／又は満腹、摂食障害（例えば、無茶食い、拒食症、過食症及び強迫観念の）及び渇望（薬物、たばこ、アルコール、いずれかの食欲をそそる主要栄養素又は非必須食品に対する）の調節に有用である。
【００５４】
本発明は、前記の式Ｉの化合物の有効量を患者に投与することを含む、該病態に罹患し又はそのリスクを有する患者における、ｍＧｌｕＲ５媒介障害及び上記のいずれかの障害の治療法を提供する。
【００５５】
特定の障害の治療又は予防的治療に必要な用量は、治療される当事者、投与経路及び治療する疾患の重症度に依存して、必要に応じて変動する。
【００５６】
本明細書において、用語「療法」及び「治療」は、それと反対の特定の指示がない限り、予防又は予防法を含む。用語「治療の」及び「治療的に」は状況に応じて解釈すべきである。
【００５７】
本明細書では、特に記述がない限り、用語「アンタゴニスト」及び「阻害薬」は、いずれにしても、部分的であれ完全であれ、リガンドによる反応の誘導に至る伝達経路をブロックする化合物を意味するものと考えることができる。
【００５８】
用語「障害」は、特に明記しない限り、代謝調節型グルタミン酸受容体活性に関連するいずれの病態及び疾患をも意味する。
【００５９】
非医学的用途
治療医学におけるそれらの使用に加えて、式Ｉの化合物、並びに当該化合物の塩及び水和物は、新しい治療薬の探索の一環として、ネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラット及びマウスなどの実験動物におけるｍＧｌｕＲ関連活性阻害薬の効果の評価に対し、インビトロ及びインビボ試験系の開発及び標準化における薬理学的ツールとして有用である。
【００６０】
製造方法
中間体の合成
【化３】
【００６１】
【化４】
【００６２】
最終化合物の合成
【化５】
【００６３】
一般的方法
全ての出発物質は市販されており、又は以前に文献に記載されたものである。1Ｈ及び13ＣＮＭＲは、Bruker 300、Brucker DPX 400スペクトロメーターを使用し、1ＨＮＭＲに対しては、３００及び４００ＭＨｚで操作し、参照用としてＴＭＳ又は残留溶媒シグナルを用い、特に指示のない限り、溶媒として重水素化クロロホルム中で測定した。報告された全てのケミカルシフトは、δスケールでのｐｐｍ値、及び測定時に出現するシグナルの微細分裂構造（ｓ：単一線、ｂｒ ｓ：広幅単一線、ｄ：二重線、ｑ：四重線、ｍ：多重線）である。
【００６４】
分析用インライン液体クロマトグラフィー分離とそれに続くマススペクトル検出は、Alliance 2795 (LC)、及びＺＱ単一四重極マススペクトロメーターより成るWater社のＬＣＭＳで測定した。マススペクトロメーターは、陽イオン及び／又は陰イオンモードで操作するエレクトロスプレーイオン源を備えていた。イオンスプレー電圧は±３ｋＶであり、そしてマススペクトロメーターは、ｍ／ｚ＝１００〜７００、走査時間０．８秒の条件で走査した。カラム、X-Terra MS、 Waters、Ｃ８、２．１×５０ｍｍ、３．５ｍｍ、は、５％〜１００％アセトニトリル／１０ｍＭ酢酸アンモニウム（水溶液）又は０．１％ＴＦＡ（水溶液）の線形グラジエントを適用した。分取型逆相クロマトグラフィーは、カラムとして、Xterra MS、Ｃ８、１９×３００ｍｍ、７ｍｍを用い、ダイオード・アレー検出器を備えたGilson自動分取型ＨＰＬＣで実施した。生成物の精製は、また、シリカ充填ガラスカラム中のフラッシュ・クロマトグラフィーで行った。
【００６５】
略号リスト
Ａｑ．： 水性；
ｍＣＰＢＡ： メタ−クロロ過安息香酸；
Novozyme 435（登録商標）： カンジダアンタルチカリパーゼ(candida antartica lipase)を結合したポリマーに対する登録商標名；
【実施例】
【００６６】
〔実施例１〕
中間体の合成
（２Ｚ）−クロロ［（３−メチルフェニル）ヒドラゾノ］酢酸エチル
【化６】
（２Ｚ）−クロロ［（３−メチルフェニル）ヒドラゾノ］酢酸エチルは、Farmaco Ed. Sci. 1985, 40(4), 259-271に記載の通りに合成した。
【００６７】
〔実施例２〕
（２Ｚ）−アミノ［３−メチルフェニル）ヒドラゾノ］酢酸エチル
【化７】
水酸化アンモニウム水溶液（２０％、７６８ｍＬ）を、テトラヒドロフラン（１０２４ｍＬ）中の（２Ｚ）−クロロ［（３−メチルフェニル）−ヒドラゾノ］酢酸エチル（２５６ｇ、１０６４ｍｍｏｌ）の溶液に、撹拌しつつ５０分間かけて加えた。４０分後、石油エーテル（２５０ｍＬ）及び酢酸エチル（２５０ｍＬ）の溶媒混合物を加えた。１５分間撹拌した後２層に分離し、水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して、標題生成物（２００ｇ、８５％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．１４（ｍ，１Ｈ），６．９８（ｍ，１Ｈ），６．８８（ｍ，１Ｈ），６．７４（ｍ，１Ｈ），６．６１（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），４．３８（ｍ，４Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），１．３９（ｍ，３Ｈ）。
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ）：１６２．３，１４５．２，１３９．１，１３５．９，１２９．０，１２２．１，１１４．８，１１１．４，６２．３，２１．５，１４．２。
【００６８】
〔実施例３〕
２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−カルボン酸エチル
【化８】
酢酸（２０７ｍＬ、３．６２ｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（２１７０ｍＬ）中の（２Ｚ）−アミノ［３−メチルフェニル）−ヒドラゾノ］酢酸エチルの溶液に撹拌しつつ加え、混合物を８５℃に加熱した。水（２２６ｍＬ）中の亜硝酸ナトリウム（７４．８ｇ、１．０８ｍｏｌ）溶液を３時間かけて加えた。２０分間撹拌した後、混合物を室温に冷却した。混合物を濃縮し、そして残留物に酢酸エチル（７５０ｍＬ）及び飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）を加えた。層を分離し、水相を酢酸エチル（２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮し、標題生成物（１７６ｇ、８４％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．９９（ｍ，２Ｈ），７．４４（ｔ，１Ｈ），７．３４（ｍ，１Ｈ），４．５６（ｑ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），１．４８（ｔ，３Ｈ）。13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ）：１５７．８，１５７．７，１４０．２，１３６．３，１３１．３，１２９．６，１２０．８，１１７．４，６２．７，２１．３，１４．２。
【００６９】
〔実施例４〕
１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル｝エタノン
【化９】
トリエチルアミン（５２０ｍＬ、３．７４ｍｏｌ）中のメチルマグネシウムブロミド（１０７０ｍＬ、１．５０ｍｏｌ、テトラヒドロフラン／トルエン中１．４Ｍ）を、無水トルエン（１，０００ｍＬ）中の２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−カルボン酸エチルの撹拌溶液に、滴下漏斗を経由して、−１０℃で５時間かけて加えた。混合物の撹拌を、−１０℃で終夜継続した。塩酸（３７％、５００ｍＬ）及び水（５００ｍＬ）の冷却（＋３℃）溶液を、２時間２０分かけて加えた。層を分離し、そして有機層を水（５００ｍＬ）及びブライン（２×２５０ｍＬ）で洗浄した。水層をトルエン（３×５００ｍＬ）で抽出し、そしてトルエンをブライン（２×２５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機抽出物を濃縮し、溶離液としてジクロロメタンを用いてシリカゲル上で精製した。濃縮した生成物の残渣を石油エーテルで粉砕し、濾過し、そして減圧下、室温で乾燥して、標題生成物（９０．８６ｇ、６０％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．９９（ｍ，２Ｈ），７．４５（ｔ，１Ｈ），７．３５（ｍ，１Ｈ），２．８３（ｍ，３Ｈ），２．４８（ｓ，３Ｈ）。
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ）：１８８．１，１６２．６，１４０．４，１３６．５，１３１．６，１２９．８，１２１．０，１１７．６，２８．３，２１．５。
【００７０】
〔実施例５〕
１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール
【化１０】
メタノール（１，０００ｍＬ）中の１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル｝エタノン（９６．８９ｇ、４７９ｍｍｏｌ）を、氷／水浴で冷却した。ナトリウムボロヒドリド（２９ｇ、７６７ｍｍｏｌ）を１時間３０分かけて加えた。４０分間撹拌した後、酢酸水溶液（７０％、２０ｍＬ）を加え、混合物を濃縮した。ジクロロメタン（４００ｍＬ）を残渣に加え、そして炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（５００ｍＬ）で抽出した。水相をジクロロメタン（１７０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を塩酸水溶液（０．５Ｍ、２５０ｍＬ）で洗浄し、次いで炭酸水素塩水溶液（２８０ｍＬ）で洗浄し、次いでブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濃縮して、標題生成物（９５ｇ、９７％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．８８（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｔ，１Ｈ），７．２８（ｍ，１Ｈ），５．２９（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），１．７４（ｍ，３Ｈ）。
【００７１】
〔実施例６〕
酢酸（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エチル
【化１１】
無水トルエン（４，８００ｍＬ）中の１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール（９３ｇ、４６０ｍｍｏｌ）及びNovozyme 435（登録商標）（１０ｇ）の混合物をゆっくり撹拌した。酢酸ビニル（３９．２ｇ、４６０ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で５時間撹拌した。Novozyme 435（登録商標）を濾過し、トルエン（１００ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮し、溶離液として石油エーテル／酢酸エチル（６：１）を用いてシリカゲル上で精製し、標題生成物（４７．９２ｇ、４２％）を得た。1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．８９（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｔ，１Ｈ），７．２６（ｍ，１Ｈ），６．２７（ｍ，１Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），２．１３（ｍ，３Ｈ），１．７７（ｍ，３Ｈ）。
【００７２】
〔実施例７〕
（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール
【化１２】
水酸化リチウム・一水和物（１６．６８ｇ、４００ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／水（１：１、７５０ｍＬ）中の酢酸（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エチル（４６．６ｇ、１９０ｍｍｏｌ）の溶液に撹拌しつつ加えた。反応時間３時間後、混合物を半分の体積まで濃縮した。ブライン（１００ｍＬ）を加え、混合物を酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮して、標題生成物（３８．１８ｇ、９９％）を得た。
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ）：７．８９（ｍ，２Ｈ），７．４２（ｔ，１Ｈ），７．２８（ｍ，１Ｈ），５．２９（ｍ，１Ｈ），２．７２（ｂｒ．ｓ，１Ｈ），２．４６（ｓ，３Ｈ），１．７５（ｍ，３Ｈ）。
13ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ）：１６９．３，１３９．９，１３６．７，１３０．５，１２９．４，１２０．４，１１７．１，６２．９，２２．３，２１．３。
【００７３】
（４−メチル−５−メチルチオ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−アリールの製造
【化１３】
方法１：
対応するアリールカルボン酸（ｎ×ｍｍｏｌ）をチオニルクロリド（ｎ×１．０５ｍＬ）に溶解し、４時間還流した。過剰のチオニルクロリドを減圧下で除去し、そしてピリジン（ｎ×０．５２ｍＬ）で置換した。氷浴上で冷却しながら、４−エチル−３−チオセミカルバジド（１当量、ｎ×０．１６ｍＬ／ｍｍｏｌジクロロメタンで濯ぎ／かき落す）を少しずつ加えた。氷浴を除去し、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。ピリジンを減圧下で除去し、そしてＮａＯＨ水溶液（１Ｎ、ｎ×３．１６ｍＬ）で置換し、得られた混合物を７０〜８０℃で４時間撹拌した。室温に冷却後、エタノール（ｎ×０．４２ｍＬ）中のメチルヨージド（１．５当量）を２０分間かけて滴下しながら加えた。反応混合物を室温で１６時間撹拌した。生成物をジクロロメタン（２×（ｎ×４．２ｍＬ））で抽出した。溶媒を減圧下で除去し、フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカゲル、３％メタノール／クロロホルム）で精製し、標題化合物を得た。
【００７４】
以下の化合物を方法１により合成した。
【表１】
【００７５】
方法２：
〔実施例８．３〕
２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン
【化１４】
メタノール（２５ｍＬ）を、メチルイソチオシアナート（１．０５２ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）及び５−メチルピラジン−２−カルボヒドラジド（２．１９２ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得られた混合物を６０℃で１時間加熱し、減圧下で濃縮した。残留物を水酸化ナトリウム水溶液（０．８Ｍ、２０ｍＬ、１６ｍｍｏｌ）に溶解し、得られた溶液を６０℃で１９時間加熱し、次いで室温に冷却した。水酸化ナトリウム水溶液（６Ｍ、２．６ｍＬ、１５．６ｍｍｏｌ）を加え、次いでエタノール（３１ｍＬ）中のヨードメタン（１．２４ｍＬ、１９．８ｍｍｏｌ）＋追加の水（５ｍＬリンス用）を加え、得られた混合物を室温で１時間撹拌した。生成物を水（３０ｍＬ添加）及びジクロロメタン（３００ｍＬ）の間で分配した。水層をジクロロメタン（４×１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水（７５ｍＬ）及びブライン（７５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を除去し、次いでフラッシュ・クロマトグラフィー（シリカゲル、２〜３％メタノール／ジクロロメタン）での精製により、標題化合物（２．５５９ｇ、８０％）を得た。
1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：９．４０（ｓ，１Ｈ），８．４６（ｓ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），２．８０（ｓ，３Ｈ），２．６５（ｓ，３Ｈ）。
【００７６】
同様にして以下の化合物を合成した。
【表２】
【００７７】
〔実施例８．５〕
３−（４−メチル−５−メチルチオ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン
【化１５】
３−（４−メチル−５−メチルチオ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジンを国際公開第２００５／０８０３７９号に記載されたように合成した。
【００７８】
［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］−アリールの製造
【化１６】
方法１：
ｍ−クロロ過安息香酸（７７％、２．５当量）をジクロロメタン（ｎ×６．２５ｍＬ）中の対応する（４−メチル−５−メチルチオ−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−アリール（ｎ×ｍｍｏｌ）の冷却した溶液に、２０分間かけて少しずつ加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。飽和の重炭酸ナトリウム水溶液（ｎ×６．２５ｍＬ）を加え、そして生成物をジクロロメタン（２×（ｎ×１２．５ｍＬ））で抽出した。フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカゲル、２％メタノール／クロロホルム）で精製し、標題化合物を得た。
【００７９】
以下の化合物を方法１で合成した。
【表３】
【００８０】
方法２：
〔実施例９．３〕
２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン
【化１７】
水（９５ｍＬ）中の過マンガン酸カリウム（３．３８ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）の溶液を、氷酢酸（４５ｍＬ）中の２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン（１．８５３ｇ、１１．５２ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。得られた混合物を室温で終夜撹拌した。固体の硫酸水素ナトリウムを、暗色が消え、透明の無色の溶液となるまで、小分けして加えた。生成物をクロロホルム（３５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）の間で分配し、水層をクロロホルム（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮａＯＨ水溶液（４０ｍＬ、６Ｍ）及び重炭酸ナトリウム飽和水溶液（２５０ｍＬ）で、ガスの発生が止み、ｐＨ＝〜７になるまで中和した。有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、標題化合物（２．７１５ｇ、９３％、白色固体）を得た。
1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：９．４４（ｓ，１Ｈ），８．５５（ｓ，１Ｈ），４．３６（ｓ，３Ｈ），３．６２（ｓ，３Ｈ），２．６９（ｓ，３Ｈ）。
【００８１】
同様にして、以下の化合物を合成した。
【表４】
【００８２】
〔実施例９．５〕
３−（５−メタンスルホニル−４−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−ピリジン
【化１８】
３−（５−メタンスルホニル−４−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）−ピリジンを、国際公開第２００５／０８０３５６号に記載されたように合成した。
【００８３】
最終化合物の合成
〔実施例１０．１〕
２−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリミジン
【化１９】
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中の（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール（２５１ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）、２−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン（２３９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）及び炭酸セシウム（９１１ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）の混合物を、６５℃で１５時間撹拌した。室温に冷却した後、生成物を酢酸エチル（３００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）間で分配した。有機層を水（３×５０ｍＬ）及びブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で濃縮した。フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカゲル、２〜３％メタノール／ジクロロメタン）で精製し、標題化合物（２６５ｍｇ、７３％、油状物質）を得た。
1ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ）：８．８５（ｄ，２Ｈ）；７．９３（ｍ，２Ｈ）；７．４２（ｔ，１Ｈ）；７．２９（ｍ，２Ｈ）；６．６８（ｑ，１Ｈ）；３．８８（ｂｓ，３Ｈ）；２．４６（ｂｓ，３Ｈ）；２．０３（ｄ，３Ｈ）。
ＬＣ−ＭＳ（Ｍ＋＋１）３６４。
【００８４】
同様にして、以下の化合物を合成した。
【表５】
【００８５】
【表６】
【００８６】
生物学的評価
ｍＧｌｕＲＤを発現する細胞系におけるｍＧｌｕＲ５アンタゴニズムの機能評価
本発明の化合物の特性は、薬理活性の標準分析法を用いて解析することができる。グルタミン酸受容体分析の例は、例えば、Aramori et al., Neuron 8:757 (1992), Tanabe et
al., Neuron 8:169 (1992), Miller et al., J. Neuroscience 15: 6103 (1995), Balazs, et al., J. Neurochemistry 69:151 (1997）に記載のように、当技術分野で周知である。これらの刊行物に記載の方法論は、参照することにより本明細書に組み入れられている。都合のよいことに、本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５を発現する細胞中の細胞内カルシウム、［Ｃａ2+］iの可動化を測定する分析（ＦＬＩＰＲ）、又はイノシトールリン酸ターンオーバーを測定する別の分析（ＩＰ３）を用いて検討することができる。
【００８７】
ＦＬＩＰＲ分析
国際公開公報第９７／０５２５２号に記載のヒトｍＧｌｕＲ５ｄを発現する細胞を、黒色面を有するコラーゲン被覆透明底９６ウェルプレートに１００，０００細胞／ウェルの密度で播種し、そして播種の２４時間後に実験を行なった。すべての分析は、１２７ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＫＣｌ、２ｍＭのＭｇＣｌ2、０.７ｍＭのＮａＨ2ＰＯ4、２ｍＭのＣａＣｌ2、０.４２２ｍｇ／ｍｌのＮａＨＣＯ3、２.４ｍｇ／ｍｌのＨＥＰＥＳ、１.８ｍｇ／ｍｌのグルコース及び１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡフラクションＩＶ（ｐＨ７.４）を含有する緩衝液中で行なわれた。９６ウェルプレート中の細胞培養液は、０．０１％のpluronic acid (独自開発の非イオン界面活性剤ポリオール：ＣＡＳ番号９００３−１１−６）中に４μＭの蛍光カルシウム指示薬、フルオ−３のアセトキシメチルエステル型(Molecular Probes, Eugene, Oregon)、 を含有する上記の緩衝液中に６０分間負荷した。負荷
時間の後、フルオ−３緩衝液を除去し、新鮮な分析緩衝液で置換した。ＦＬＩＰＲ実験は、０.８００Ｗのレーザーの設定及び０.４秒のＣＣＤカメラシャッター速度、並びに励起及び発光波長がそれぞれ４８８ｎｍ及び５６２ｎｍで実施した。各実験は、細胞プレートの各ウェルに存在する１６０μｌの緩衝液を用いて開始した。アンタゴニストプレートから４０μｌを加え、その後アゴニストプレートから５０μｌを添加した。アンタゴニスト及びアゴニストの添加の間に３０分の間隔をおいた。蛍光シグナルを１秒間隔で５０回サンプリングし、その後各２回の添加の直後に５秒間隔で３試料を続けた。アゴニストへの応答のピーク高さからサンプリング時間内の蛍光バックグラウンドを差し引いた差として、応答を測定した。ＩＣ50の定量を線形最小二乗あてはめプログラムを用いて行なった。
【００８８】
ＩＰ３分析
ｍＧｌｕＲ５ｄの更なる機能分析は、国際公開公報第９７／０５２５２号に記載されており、ホスファチジルイノシトール・ターンオーバーに基づいている。受容体活性化はホスホリパーゼＣ活性を刺激し、そしてイノシトール−１，４，５−トリスリン酸（ＩＰ3）の形成増加に導く。
ヒトｍＧｌｕＲ５ｄを安定的に発現するＧＨＥＫを、１μＣｉ／ウェル［３Ｈ］ミオイノシトールを含有する培地中、４０×１０4細胞／ウェルで２４ウェルポリ−Ｌ−リジン被覆プレート上に播種した。細胞を一夜（１６ｈ）インキュベートし、次いで３回洗浄し、そして１単位／ｍｌのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及び２ｍＭのピルビン酸を補充して、ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（１４６ｍＭのＮａＣｌ、４.２ｍＭのＫＣｌ、０.５ｍＭのＭｇＣｌ2、０.１％のグルコース、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４）中、３７℃で１時間インキュベートした。細胞をＨＥＰＥＳ緩衝食塩水で１回洗浄し、１０ｍＭのＬｉＣｌを含有するＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中で１０分間プレインキュベートした。化合物を重複して３７℃で１５分間インキュベートし、次いでグルタミン酸（８０Ｍ）か又はＤＨＰＧ（３０μＭ）を加え、そして更に３０分間インキュベートした。反応は、氷上で０．５ｍｌの過塩素酸（５％）を添加し、４℃で少なくとも３０分インキュベーションして停止した。試料を１５ｍｌポリエチレンチューブに収集し、そしてイノシトールリン酸をイオン交換樹脂（Dowex AG1-X8 ギ酸塩型、２００〜４００メッシュ, BIORAD) カラムを用いて分離した。イノシトールリン酸分離は、先ず８ｍｌの３０ｍＭのギ酸アンモニウムでグリセロホスファチジルイノシトールを溶離することにより行なった。次いで、総イノシトールリン酸を８ｍｌの７００ｍＭギ酸アンモニウム／１００ｍＭギ酸で溶離し、そしてシンチレーションバイアルに収集した。次いで、この溶出液を８ｍｌのシンチレーション剤と混合し、［3Ｈ］イノシトール取り込みをシンチレーション計数により測定した。重複試料のｄｐｍ数をプロットし、そしてＩＣ50の定量を線形最小二乗あてはめプログラムを用いて行なった。
【００８９】
略語
ＢＳＡ： ウシ血清アルブミン
ＣＣＤ： 電荷結合素子
ＣＲＣ： 濃度反応曲線
ＤＨＰＧ： ３，５−ジヒドロキシフェニルグリシン
ＤＰＭ： 壊変毎分
ＥＤＴＡ： エチレンジアミンテトラ酢酸
ＦＬＩＰＲ：蛍光イメージングプレートリーダー
ＧＨＥＫ： ＧＬＡＳＴ含有ヒト胚腎臓
ＧＬＡＳＴ：グルタミン酸／アスパラギン酸輸送体
ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（緩衝剤）
ＩＰ3： イノシトールトリスリン酸
【００９０】
一般的に、化合物は上記分析において活性であり、ＩＣ50値は１０，０００ｎＭ未満であった。本発明の１つの態様では、ＩＣ50値は１μＭ未満であった。本発明の更なる態様では、ＩＣ50値は１００ｎＭ未満であった。
【表７】
【００９１】
ＴＬＥＳＲに対して活性な化合物のスクリーニング
パブロフスリングに立つように訓練した両性の成体ラブラドール・レトリーバを使用した。粘膜から皮膚への食道瘻造設術を行い、そしてイヌを完全に回復させてからあらゆる実験を行なった。
【００９２】
運動測定
簡潔にいえば、自由飲水で約１７時間の絶食後、胃、下部食道括約筋（ＬＥＳ）及び食道内圧を測定するために、マルチルーメン・スリーブ／側孔装置（Dentsleeve, Adelaide, South Australia) を、食道瘻造設術を介して導入した。この装置は、低コンプライアンス・マノメーター潅流ポンプ（Dentsleeve, Adelaide, South Australia）を用いて水で潅流した。空気潅流チューブを嚥下の測定のために口腔方向に通し、そしてＬＥＳの３ｃｍ上部でｐＨをアンチモン電極にてモニターした。すべての信号を増幅し、そして１０Ｈｚのパソコンにて取得した。
【００９３】
空腹時の胃／ＬＥＳフェーズＩＩＩ運動活性のないベースライン測定が行われる場合、プラセボ（０．９％ＮａＣｌ）又は試験化合物を、前脚静脈中に静脈内投与（ｉ.ｖ.、０．５ｍｌ／ｋｇ）した。ｉ.ｖ.投与の１０分後、栄養食（１０％ペプトン、５％Ｄ−グルコース、５％Intralipid、ｐＨ３．０）を、３０ｍｇ／ｋｇの最終量まで１００ｍｌ／分で装置の中心ルーメンを通して胃内に注入した。栄養食の注入後に、１０±１ｍｍＨｇの胃内圧が得られるまで空気注入を続けた。次いで、更なる空気注入又は胃からの空気の通気のために注入ポンプを用いる実験の間中、圧力をこのレベルに維持した。栄養物注入の開始から胃内送気の終了までの実験時間は４５分であった。この手順は、ＴＬＥＳＲを誘引する確実な方法と認められている。
【００９４】
ＴＬＥＳＲは、＞１ｍｍＨｇ／ｓの変化率での下部食道括約筋圧（胃内圧を基準にして）の減少と定義される。弛緩が嚥下誘導と分類される場合、弛緩はその発生の≦２ｓ前に咽頭シグナルが先行することがない。ＬＥＳ及び胃との間の圧力差は２ｍｍＨｇ未満のはずであり、そして完全弛緩の持続は１ｓより長いものでなければならない。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
式中、Ｒ1は、
【化２】
の化合物、並びに薬学的に許容されるその塩、水和物、イソ型及び／又はエナンチオマー。
【請求項２】
化合物がＳ−エナンチオマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
化合物がＲ−エナンチオマーである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
２−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリミジン；
５−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリミジン；
２−メチル−５−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピラジン；
２−メチル−４−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン；及び
３−｛４−メチル−５−［（１Ｒ）−１−（２−（３−メチルフェニル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−エトキシ］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−ピリジン；
から選択される請求項１に記載の化合物、並びに薬学的の許容されるその塩、水和物、イソ型及び／又はエナンチオマー。
【請求項５】
治療に使用するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
薬理学的に及び薬学的に許容される担体と一緒に、活性成分として請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項７】
ｍＧｌｕＲ５受容体媒介障害の治療のための薬剤を製造するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項８】
障害が神経障害である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
障害が精神障害である、請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
障害が胃腸障害である、請求項７に記載の使用。
【請求項１１】
請求項７に記載の使用であって、障害が、胃食道逆流疾患、ＩＢＳ、機能性消化不良、咳、肥満、アルツハイマー病、老年性認知症、ＡＩＤＳ誘発認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、片頭痛、てんかん、統合失調症、欝病、不安、急性不安、強迫性障害、網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障などの眼科障害、耳鳴などの聴覚神経障害、化学療法誘発神経障害、帯状疱疹後神経痛及び三叉神経痛、トレランス、依存症、嗜癖及び渇望障害、脆弱Ｘを含む神経発生障害、自閉症、精神発達遅滞、及びダウン症候群、片頭痛に関連する疼痛、炎症性疼痛、糖尿病性神経障害などの神経因性疼痛障害、関節炎及びリウマチ様疾患、腰痛、術後疼痛、アンギナ、腎又は胆石疝痛、月経、片頭痛及び痛風を含む種々の病態に関連する疼痛；脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏及び虚血性障害、低血糖症、心血管疾患及びてんかんのいずれか１つである使用。
【請求項１２】
障害が慢性疼痛性障害である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
障害が急性疼痛性障害である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
障害が不安である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１５】
障害が欝病である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１６】
害がパーキンソン病である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１７】
該疼痛性障害が神経因性疼痛障害である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１８】
疼痛性障害が片頭痛である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１９】
疼痛性障害が炎症性疼痛である、請求項１１に記載の使用。
【請求項２０】
障害が胃食道逆流疾患である、請求項１１に記載の使用。
【請求項２１】
障害が咳である、請求項１１に記載の使用。
【請求項２２】
ｍＧｌｕＲ５受容体媒介障害の治療又は予防のための方法であって、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の有効量を当該治療又は予防を必要とする対象者に投与する方法。
【請求項２３】
障害が神経障害である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
障害が精神障害である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
請求項２２に記載の方法であって、障害が、胃食道逆流疾患、ＩＢＳ、機能性消化不良、咳、肥満、アルツハイマー病、老年性認知症、ＡＩＤＳ誘発認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、片頭痛、てんかん、統合失調症、欝病、不安、急性不安、強迫性障害、網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障などの眼科障害、耳鳴などの聴覚神経障害、化学療法誘発神経障害、帯状疱疹後神経痛及び三叉神経痛、トレランス、依存症、嗜癖及び渇望障害、脆弱Ｘを含む神経発生障害、自閉症、精神発達遅滞、及びダウン症候群、片頭痛に関連する疼痛、炎症性疼痛、糖尿病性神経障害などの神経因性疼痛障害、関節炎及びリウマチ様疾患、腰痛、術後疼痛、アンギナ、腎又は胆石疝痛、月経、片頭痛及び痛風を含む種々の病態に関連する疼痛；脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏及び虚血性障害、低血糖症、心血管疾患及びてんかんのいずれか１つである方法。
【請求項２６】
障害が慢性疼痛性障害である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
障害が急性疼痛性障害である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
障害が不安である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
障害が欝病である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
障害がパーキンソン病である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
疼痛性障害が神経因性疼痛障害である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
疼痛性障害が片頭痛である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
疼痛性障害が炎症性疼痛である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
障害が胃食道逆流疾患である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】
障害が咳である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
（２Ｚ）−アミノ［３−メチルフェニル）ヒドラゾノ］酢酸エチル；
２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−カルボン酸エチル；
１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル｝エタノン；
酢酸（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エチル；
（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール；
２−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン；
５−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン；
２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン；
２−メチル−４−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリジン；
２−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン；
５−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン；
２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン；及び
２−メチル−４−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリジン；
から選択される化合物。
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
式中、Ｒ1は、
【化２】
の化合物、並びに薬学的に許容されるその塩、水和物、イソ型及び／又はエナンチオマー。
【請求項２】
化合物がＳ−エナンチオマーである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
化合物がＲ−エナンチオマーである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
２−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリミジン；
５−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリミジン；
２−メチル−５−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピラジン；
２−メチル−４−（４−メチル−５−｛（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エトキシ｝−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）ピリジン；及び
３−｛４−メチル−５−［（１Ｒ）−１−（２−（３−メチルフェニル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−エトキシ］−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル｝−ピリジン；
から選択される請求項１に記載の化合物、並びに薬学的の許容されるその塩、水和物、イソ型及び／又はエナンチオマー。
【請求項５】
治療に使用するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
薬理学的に及び薬学的に許容される担体と一緒に、活性成分として請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項７】
ｍＧｌｕＲ５受容体媒介障害の治療のための薬剤を製造するための、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項８】
障害が神経障害である、請求項７に記載の使用。
【請求項９】
障害が精神障害である、請求項７に記載の使用。
【請求項１０】
障害が胃腸障害である、請求項７に記載の使用。
【請求項１１】
請求項７に記載の使用であって、障害が、胃食道逆流疾患、ＩＢＳ、機能性消化不良、咳、肥満、アルツハイマー病、老年性認知症、ＡＩＤＳ誘発認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、片頭痛、てんかん、統合失調症、欝病、不安、急性不安、強迫性障害、網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障などの眼科障害、耳鳴などの聴覚神経障害、化学療法誘発神経障害、帯状疱疹後神経痛及び三叉神経痛、トレランス、依存症、嗜癖及び渇望障害、脆弱Ｘを含む神経発生障害、自閉症、精神発達遅滞、及びダウン症候群、片頭痛に関連する疼痛、炎症性疼痛、糖尿病性神経障害などの神経因性疼痛障害、関節炎及びリウマチ様疾患、腰痛、術後疼痛、アンギナ、腎又は胆石疝痛、月経、片頭痛及び痛風を含む種々の病態に関連する疼痛；脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏及び虚血性障害、低血糖症、心血管疾患及びてんかんのいずれか１つである使用。
【請求項１２】
障害が慢性疼痛性障害である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
障害が急性疼痛性障害である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
障害が不安である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１５】
障害が欝病である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１６】
害がパーキンソン病である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１７】
該疼痛性障害が神経因性疼痛障害である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１８】
疼痛性障害が片頭痛である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１９】
疼痛性障害が炎症性疼痛である、請求項１１に記載の使用。
【請求項２０】
障害が胃食道逆流疾患である、請求項１１に記載の使用。
【請求項２１】
障害が咳である、請求項１１に記載の使用。
【請求項２２】
ｍＧｌｕＲ５受容体媒介障害の治療又は予防のための方法であって、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物の有効量を当該治療又は予防を必要とする対象者に投与する方法。
【請求項２３】
障害が神経障害である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
障害が精神障害である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
請求項２２に記載の方法であって、障害が、胃食道逆流疾患、ＩＢＳ、機能性消化不良、咳、肥満、アルツハイマー病、老年性認知症、ＡＩＤＳ誘発認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、片頭痛、てんかん、統合失調症、欝病、不安、急性不安、強迫性障害、網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障などの眼科障害、耳鳴などの聴覚神経障害、化学療法誘発神経障害、帯状疱疹後神経痛及び三叉神経痛、トレランス、依存症、嗜癖及び渇望障害、脆弱Ｘを含む神経発生障害、自閉症、精神発達遅滞、及びダウン症候群、片頭痛に関連する疼痛、炎症性疼痛、糖尿病性神経障害などの神経因性疼痛障害、関節炎及びリウマチ様疾患、腰痛、術後疼痛、アンギナ、腎又は胆石疝痛、月経、片頭痛及び痛風を含む種々の病態に関連する疼痛；脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏及び虚血性障害、低血糖症、心血管疾患及びてんかんのいずれか１つである方法。
【請求項２６】
障害が慢性疼痛性障害である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
障害が急性疼痛性障害である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
障害が不安である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
障害が欝病である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
障害がパーキンソン病である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
疼痛性障害が神経因性疼痛障害である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
疼痛性障害が片頭痛である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
疼痛性障害が炎症性疼痛である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３４】
障害が胃食道逆流疾患である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３５】
障害が咳である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３６】
（２Ｚ）−アミノ［３−メチルフェニル）ヒドラゾノ］酢酸エチル；
２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−カルボン酸エチル；
１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル｝エタノン；
酢酸（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エチル；
（１Ｒ）−１−［２−（３−メチルフェニル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］エタノール；
２−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン；
５−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン；
２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン；
２−メチル−４−［４−メチル−５−（メチルチオ）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリジン；
２−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン；
５−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリミジン；
２−メチル−５−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピラジン；及び
２−メチル−４−［４−メチル−５−（メチルスルホニル）−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル］ピリジン；
から選択される化合物。
【公表番号】特表２０１１−５００６７３（Ｐ２０１１−５００６７３Ａ）
【公表日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２９９００（Ｐ２０１０−５２９９００）
【出願日】平成２０年１０月１７日（２００８．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＳＥ２００８／０５１１７０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０５１５５６
【国際公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【出願人】（３９１００８９５１）アストラゼネカ・アクチエボラーグ (625)
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ ＡＫＴＩＥＢＯＬＡＧ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年１月６日（２０１１．１．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月１７日（２００８．１０．１７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＳＥ２００８／０５１１７０
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０５１５５６
【国際公開日】平成２１年４月２３日（２００９．４．２３）
【出願人】（３９１００８９５１）アストラゼネカ・アクチエボラーグ (625)
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ ＡＫＴＩＥＢＯＬＡＧ
【Ｆターム（参考）】
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