酢酸菌セラミドを含む肌機能改善用組成物
【課題】 本発明は、経口摂取することにより、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果を有する肌機能改善用組成物の提供を目的とする。
【解決手段】 本発明は、酢酸菌セラミド、酢酸菌から極性溶媒を用いて抽出された酢酸菌セラミド、もしくは酢酸菌セラミドを含有する酢酸菌の細胞破砕物、を有効成分として含有する肌機能改善用組成物を提供する。溶媒としては、水、グリセリン、アルコール、ケトン、氷酢酸、又はこれらの混合溶媒が使用される。
【解決手段】 本発明は、酢酸菌セラミド、酢酸菌から極性溶媒を用いて抽出された酢酸菌セラミド、もしくは酢酸菌セラミドを含有する酢酸菌の細胞破砕物、を有効成分として含有する肌機能改善用組成物を提供する。溶媒としては、水、グリセリン、アルコール、ケトン、氷酢酸、又はこれらの混合溶媒が使用される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口摂取により、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果を有する肌機能改善用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
植物由来のセラミドは、人間の皮膚器官の構成成分であり、経口摂取により保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果があることが知られている（例えば、非特許文献１及び非特許文献２参照）。
【０００３】
セラミドは、脂肪、グリセロ脂質、及びステロール脂質を除く脂質を指すものであって、セラミドには、上記したように小麦、米、ダイズ等の植物より抽出したもの、牛脳などの動物から抽出したもの、酵母などの真核微生物や、スフィンゴモナスなどの原核微生物から抽出したものがある。しかし、ＢＳＥ問題などにより牛脳などの動物由来のセラミドは経口摂取することは敬遠される傾向があり、また、その食経験がないことよりスフィンゴモナスなどの微生物は経口摂取が敬遠されている。
【０００４】
従って、経口摂取によって、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果を期待する場合は、小麦、米、ダイズ等の植物から抽出されたセラミドが利用されていた。
【０００５】
しかしながら、小麦、米、ダイズ等の植物から抽出されたセラミドを経口摂取した場合は、その効果は十分なものではなく、より効果の強いものが求められていた。
【０００６】
本発明は、酢酸菌由来のセラミドを有効成分とすることを特徴とする肌機能改善組成物に関するものであるが、酢酸菌セラミドにおいて、植物セラミドを越えたきわめて顕著な美容効果があること、しかもその効果が経口摂取によって奏されることは、従来知られておらず、新規である。
【非特許文献１】「フレグランス・ジャーナル（Ｆｒａｇｒａｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ）」、２３巻、ｐ．８１〜８９、１９９５年
【非特許文献２】「バイオインダストリー（Ｂｉｏｉｎｄｕｓｔｒｙ）」、１９巻、ｐ．１６〜２６、２００２年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、植物セラミドよりも効果が高く、経口摂取することにより、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の効果を有する肌機能改善用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、醸造酢製造菌として古来より使用されており、安全性の高いことが認知されている酢酸菌に着目した。
【０００９】
そして、本発明者らは、醸造酢の生産に用いられている酢酸菌から抽出した酢酸菌セラミドを経口摂取することにより、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果があることを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、請求項１に記載の本発明は、酢酸菌セラミドを有効成分として含有することを特徴とする肌機能改善用組成物に関する。
また、請求項２に記載の本発明は、酢酸菌セラミドを含有する酢酸菌の細胞破砕物を有効成分として含有することを特徴とする肌機能改善用組成物に関する。
さらに、請求項３に記載の本発明は、酢酸菌セラミドが酢酸菌から極性溶媒を用いて抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の肌機能改善用組成物に関する。
また、請求項４に記載の本発明は、飲食品であることを特徴とする請求項１〜請求項３に記載の肌機能改善用組成物に関する。
そして、請求項５に記載の本発明は、飲食品が食酢であることを特徴とする請求項４に記載の肌機能改善用組成物に閲する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の酢酸菌セラミドを含有した肌機能改善組成物は、直接、酢酸菌セラミドを経口摂取することにより保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果がある。また、酢酸菌セラミドを含有する酢酸菌の細胞破壊物又は酢酸菌の極性溶媒抽出物を有効成分として含有させても、同様の肌機能改善効果が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１３】
本発明で用いる酢酸菌セラミドは、ヒト型セラミドのスフィンゴイド塩基部分のスフィンゴシンの前駆体であるスフィンガニンと脂肪酸がアミド結合した構造を有しており、例えば次のようにして得ることができる。
【００１４】
例えば、酢酸菌を原料として、極性溶媒を用いて抽出し、これを酢酸菌セラミドとして使用してもよいし、得られた抽出物を更に有機溶媒で再結晶させてもよい。
【００１５】
有機溶媒としては、アルコール、脂肪族カルボン酸エステル、ケトン等、有機溶剤であればすべてのものが、単用又は２種以上併用される。アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等各種低級アルコールが例示され、脂肪族カルボン酸エステルとしては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸等の分枝又は直鎖の飽和脂肪酸のほか、各種の不飽和脂肪酸のアルコールエステル、例えば上記アルコールのエステルが例示される。
【００１６】
ケトンとしては、アセトン、エチルメチルケトン、メチルプロピルケトン、イソプロピルメチルケトン、ブチルメチルケトン、イソブチルケトン等が例示される。
【００１７】
酢酸菌セラミドの抽出に使用する極性溶媒としては、水、グリセリン、アルコール、ケトン、氷酢酸など極性溶媒であればすべてのものが単用又は２種以上併用することができる。アルコール、ケトンとしては、上記に例示したものが適宜使用可能である。
【００１８】
酢酸菌体から、極性溶媒を用いて酢酸菌セラミドを抽出するには、例えば、酢酸菌菌体自体、又は酢酸菌菌体を適当に超音波等で破砕した後、極性溶媒で酢酸菌セラミドを抽出し、得られた抽出液はそのまま酢酸菌セラミドとして使用することができる。
【００１９】
抽出は、湿潤菌体又は乾燥菌体と溶剤とを充分に接触させて行なえばよく、常法が適宜適用される。例えば、乾燥菌体の場合、有機溶剤（必要あれば、その０．１〜１０倍、通常はそれと同量程度の水を加え）を菌体１ｋｇに対して０．５〜３０リットル、通常は５〜１５リットル程度加え、よく混合した後、遠心分離や濾過等の分離処理を行って上層を回収したり、あるいは、ソックスレー抽出器を用いて、乾燥菌体１０ｋｇに対して上記と同量のアルコール等の有機溶剤を加えて加熱還流し、得られた抽出液を減圧乾固した後、０．５〜１５リットル程度、通常は２〜８リットルのケトン類等の有機溶剤を加えて溶解し、沈澱物を分離した後の濾液（上清）を抽出液として回収すればよい。
【００２０】
また、溶媒（例えば、クロロホルム、アルコール、水の混液）を用いて抽出した後、下層を脂質粗画分として回収し、これに苛性ソーダや苛性カリその他のアルカリ溶液を加えて弱アルカリ分解し、アルカリ安定脂質を得、これを酢酸菌セラミドとしてよい。更に所望する場合、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー等で処理し、例えば、クロロホルム、酢酸の混合溶媒で洗浄した後、クロロホルム、アルコールの混合溶媒で溶出される画分を酢酸菌セラミドとして使用してもよい。
【００２１】
このようにして得られた抽出液は、そのまま、酢酸菌セラミドとして使用することができるが、更に、抽出液の処理物も使用することができ、処理物としては例えば、抽出液の濃縮物、ペースト化物、乾燥物、希釈物が使用できるほか、精製物、例えば、液体クロマトグラフィーや向流分配法などで酢酸菌セラミドを分離精製し、またそれを採取して、酢酸菌セラミドとして用いることもできる。なお、本発明において、酢酸菌セラミドには、精製物のほか、粗精製物や含有物も包含され、これらの処理物も含まれる。
【００２２】
また、酢酸菌セラミドは、酢酸菌体、特にその細胞膜に存在するので、抽出工程を経ることなく酢酸菌をそのまま酢酸菌セラミドとして使用したり、含有させたりしてもよい。更にまた、体内での吸収を考慮して、高圧ホモジナイザー、フレンチプレスなど高圧式破砕機や、超音波式破砕機を用いて細胞破壊したものをそのまま酢酸菌セラミドとして使用したり、含有させたりしてもよい。酢酸菌の破砕処理は、上記のほか、常法によって適宜実施することができる。
【００２３】
酢酸菌体破砕物の場合も抽出物と同様であって、酢酸菌を破砕して（通常、湿菌体に０．５〜２倍量の水を加えた後に破砕処理する）得られた破砕物をそのまま酢酸菌セラミドとして使用できるほか、上記と同様に処理して得た各種処理物も酢酸菌セラミドとして使用することができる。
【００２４】
本発明において用いられる酢酸菌としては、特に制限はなく、例えば、グルコンアセトバクター属（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、グルコノバクター属（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、アサイア属（Ａｓａｉａ）またはアシドモナス属（Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ）に属する酢酸菌が例示される。
【００２５】
さらに詳細には、グルコンアセトバクター属（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）の酢酸菌としては、グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｈａｎｓｅｎｉｉ）、グルコンアセトバクター・ジアゾトロフィカス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ）、グルコンアセトバクター・インタメデイウス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、グルコンアセトバクター・サッカリ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓａｃｃｈａｒｉ）などが例示される。
【００２６】
また、グルコノバクター属（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）としては、グルコノバクター・フラトウリ（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｆｒａｔｅｕｒｉｉ）、グルコノバクター・セリナス（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｃｅｒｉｎｕｓ）などが例示される。
【００２７】
さらに、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）の酢酸菌としては、アセトバクター・トロピカリス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、アセトバクター・インドネシエンシス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｉｎｄｏｎｅｓｉｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・シジギイ（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｙｚｙｇｉｉ）、アセトバクター・シビノンゲンシス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｃｉｂｉｎｏｎｇｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・オリエンタリス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、アセトバクター・パスツリアヌス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ）、アセトバクター・オルレアネンシス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｏｒｌｅａｎｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・ロバニエンシス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｌｏｖａｎｉｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・アセチ（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ）、アセトバクター・ポモラム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐｏｍｏｒｕｍ）などが例示される。
【００２８】
さらに、アサイア属（Ａｓａｉａ）の酢酸菌としては、アサイア・ボゴレンシス（Ａｓａｉａ ｂｏｇｏｒｅｎｓｉｓ）、アサイア・シアメンシス（Ａｓａｉａ ｓｉａｍｅｎｓｉｓ）などが例示される。
【００２９】
また、アシドモナス属（Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ）の酢酸菌は、アシドモナス・メタノリカ（Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）などが例示される。
【００３０】
酢酸菌としては、上記のほか、寄託菌、市販菌、食酢や種酢に含有されている酢酸菌等も適宜使用可能である。寄託菌としては次のものが非限定的に例示される。
【００３１】
アセトバクター・トロピカリス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ） ＮＢＲＣ １６４７０、同インドネシエンシス（Ａ．ｉｎｄｏｎｅｓｉｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １６４７１、同シジギイ（Ａ．ｓｙｚｙｇｉｉ） ＮＢＲＣ １６６０４、同シビノンゲンシス（Ａ．ｃｉｂｉｎｏｎｇｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １６６０５、同オリエンタリス（Ａ．ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ） ＮＢＲＣ １６６０６、同パスツリアヌス（Ａ．ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ） ＤＳＭ ３５０９、同オルレアネンシス（Ａ．ｏｒｌｅａｎｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １３７５２、同ロバニエンシス（Ａ．ｌｏｖａｎｉｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １３７５３、同アセチ（Ａ．ａｃｅｔｉ）ＮＢＲＣ １４８１８、同ポモラム（Ａ．ｐｏｍｏｒｕｍ） ＤＳＭ １１８２５など。
【００３２】
グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｈａｎｓｅｎｉｉ） ＮＢＲＣ １４８２０、同ジアゾトロフィカス（Ｇａ．ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ） ＤＳＭ ５６０１、同インタメデイウス（Ｇａ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ） ＤＳＭ １１８０４、同サッカリ（Ｇａ．ｓａｃｃｈａｒｉ） ＤＳＭ １２７１７など、
グルコノバクター・フラトウリ（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｆｒａｔｅｕｒｉｉ） ＮＢＲＣ ３２６４、同セリナス（Ｇ．ｃｅｒｉｎｕｓ） ＮＢＲＣ ３２６７など、
アサイア・ボゴレンシス（Ａｓａｉａ ｂｏｇｏｒｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １６５９４、同シアメンシス（Ａ．ｓｉａｍｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １６４５７など、
アシドモナス・メタノリカ（Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ） ＤＳＭ ５４３２など。
【００３３】
これらの酢酸菌は酢酸発酵に用いられ、大量に増殖する。なお、酢酸菌は、ナタデココ、カスピ海ヨーグルト、紅茶きのこなどで食経験があり、また、食酢発酵においては発酵後に廃棄されており安価に入手することができる。
【００３４】
本発明に係る酢酸菌セラミドを含有する肌機能改善組成物の形態としては、錠剤、カプセル剤、粉末剤、液剤、顆粒剤、散剤等の剤形に製剤化したものが例示され、例えば、医薬品、経口化粧品、サプリメント等として使用することができる。さらに、飲食品の形態としては、具体的には、キャンデイ、ガム、ゼリー等の菓子、食パン、米飯等の主食品、アルコール飲料、牛乳、食酢飲料等の飲料等の飲料、また、醤油、味噌、食酢等の調味料等が挙げられる。
【００３５】
本発明において、食品中の酢酸菌セラミドの割合は、０．０００１〜５重量％、好ましくは、０．００１〜１重量％である。酢酸菌セラミドの添加量が０．０００１重量％未満では、保湿、肌荒れ、シワ防止等の美容効果が発現しづらく、また、５重量％を越えると該組成物製造時の粘度が上昇し、また着色や香味の劣化がおこり、経口摂取に適さなくなるので好ましくない。
【００３６】
本発明の肌機能改善用組成物としての酢酸菌セラミドの投与量は、成人１日当たり０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。成人１日当たり０．１ｍｇ未満の投与量では、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果が少なく、１００ｍｇを越えると消化吸収ができなくなる恐れがある。
【００３７】
本発明の肌機能改善用組成物は酢酸菌セラミドを有効成分として含有するが、それ以外の各種原料とを混合・均一化した後に、必要に応じて界面活性剤を混合して、安定化を図ることもできる。これらの界面活性剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルおよびレシチンなどを用いることができる。
【００３８】
また、本発明によれば、食酢その他酢酸菌含有飲食品を破砕処理したり、酢酸菌を飲食品に添加した後これを破砕処理したり、酢酸菌の破砕処理物（その処理物も含む、以下同じ）を飲食品に添加したり、酢酸菌体又はその破砕処理物の溶剤抽出物（その処理物も含む、以下同じ）を飲食品に添加したりすることによって、肌機能改善組成物を製造することもできる。したがって、本発明は、これらの破砕処理物や飲食品は、肌機能改善のために経口摂取されるものである旨の表示を付した肌機能改善組成物を提供するものであって、調味や単なる飲用といった通常の用途に使用される食酢等の飲食品とは明確に区別されるものである。
【実施例】
【００３９】
以下、本発明を実施例により更に説明するが、本発明は実施例のみに限定されるものではない。
【００４０】
（実施例１）
＜ヒト皮膚器官培養を用いた酢酸菌セラミドの抗シワ活性＞
酢酸菌セラミドの抗シワ活性を以下の要領で実施した。
【００４１】
まず、酢酸菌セラミドは、以下の方法で調製した。すなわち、酢酸菌（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＮＢＲＣ １４８１８）の１００ｇ乾燥菌体からクロロホルム−メタノール系の溶媒（グロロホルム：メタノール：水＝１：１：０．８）５リットルで抽出し、その後、２層分離を行い、下層を脂質粗画分として回収した。次に、０．４Ｎ ＮａＯＨにより脂質粗画分を弱アルカリ分解し、アルカリ安定脂質を得た。
【００４２】
得られたアルカリ安定脂質を、クロロホルムで平衡化したシリカゲルカラムにかけ、クロロホルム：酢酸＝１００：１の溶媒で洗浄後、クロロホルム：メタノール＝９７：３の溶媒で溶出して得られた画分を乾固して、約０．５ｇの酢酸菌セラミドを得た。
【００４３】
また、対照物として、ヒト型セラミド（Ｃｅｒａｍｉｄｅ： Ｍａｔｒｅｙａ社製）、及びヒト型糖セラミド（Ｃｅｒａｍｉｄｅ β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ ｆｒｏｍ ｂｒａｉｎ： Ｍａｔｒｅｙａ社製）、植物型糖セラミド（Ｃｅｒａｍｉｄｅ β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ ｆｒｏｍ ｐｌａｎｔ： Ｍａｔｒｅｙａ社製）を用いた。
【００４４】
これらの試料を用い、下記の（１）〜（８）に示す抗シワ活性評価系により、酢酸菌セラミドの抗シワ活性を、改変ブロノフ拡散チャンバーを用いて、ヒト型糖セラミド、ヒト型セラミド、植物型糖セラミドと比較評価した。改変ブロノフ拡散チャンバーは、図１にその概略を示した。図中、ＰＢＳは生理食塩水、ＰＧ−ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒはポリエチレングリコール−生物両立性ポリマー、Ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｓｌｉｃｅはヒト皮膚薄片、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍは培養液を、それぞれ示す。
【００４５】
（１）ヒト摘出皮膚片（インフォームドコンセント済み）を、改変ブロノフ拡散チャンバー（図１に概略を示した）に組込んだ。皮下側の培養液に本発明の酢酸菌セラミドならびに対照物を添加した。
（２）酢酸菌セラミドならびに対照物を添加後、２時間後に、皮膚片に紫外線Ａ波（ＵＶ−Ａ）を３Ｊ／ｃｍ2の強度で、１日当り２回照射した。なお、ランプと検体の間に珪酸ガラスを挟んだ。
（３）皮膚片を器官培養した。なお、培養基はＤＭＥＭａｂ培地（＋）１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を用いた。
（４）毎日同様な処理を行い、５〜１０目間、器官培養を行った。
（５）器官培養終了跡、チャンバーから皮膚片を単離し、実体顕微鏡／ＣＣＤビデオカメラで皮膚表面を撮影し、皮膚表面写真を得た。
（６）その後、皮膚表面に対して、シリコンゴムでレプリカ作製を行い、そのレプリカの写真を撮影して、レプリカ写真を得た。
（７）上記（６）で作製したレプリカの表面凸凹形状をスキャンして、ラインヒストグラムを作成した。
【００４６】
（８）上記の（１）〜（７）の手順で皮膚表面写真、レプリカ写真、凸凹形状を投影したラインヒストグラムを元にして、抗シワ活性をＰＯＯＲ、ＭＥＤＩＵＭ、ＧＯＯＤ、ＥＸＣＥＬＬＥＮＴの４段階に分けて評価した。なお、線状の皮溝が短く少数で規則的な場合は肌理（キメ）として認定しシワとは見なさなかった。また、広幅の皮溝で太くて長く陰影が濃い場合は、シワと認定した。なお、評価において、ＰＯＯＲは劣る、ＭＥＤＩＵＭは普通、ＧＯＯＤは良好、ＥＸＣＥＬＬＥＮＴは卓越している、をそれぞれ示す。
【００４７】
この抗シワ活性評価系は、体内で吸収した物質の皮膚への効果を見ることに優れており、真皮に分布する毛細血管を通してセラミドなどの有効成分が皮膚へ送達され、その結果、角質層セラミド／スクワレンによる細胞間質の保湿力増強、真皮での細胞外マトリックス構築促進、繊維芽細胞の増殖促進などの効能発現について調べるのに適している。
【００４８】
また、この皮膚片は４週間培養してもコラーゲン合成を９５％以上維持しているので生存していることが実証されている。
【００４９】
そして、試験に供したヒト型糖セラミドはヒト型セラミドに糖が結合した物質であり、共にヒト生体内でその存在が確認されている。
【００５０】
また、植物糖セラミドは植物由来のセラミドが共通して有する構造でセラミド部分に糖が結合しているのを特徴として有し、今までにヒト生体内での存在は示されていない。それぞれの経口摂取したセラミドの一部はそのままの構造で吸収され作用すると考えられる。
上記の結果を表１に示した。
【００５１】
表１
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
名称 評価 評価の根拠
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
ヒト型糖セラミド ＥＸＣＥＬＬＥＮＴ 肌理があって幅広や長いシワがない。
酢酸菌セラミド ＧＯＯＤ 広幅陥没がほぼ無い。細く短いシワが散見、総
じて平滑である。
ヒト型セラミド ＭＥＤＩＵＭ 皮膚表面は皮丘が僅かに存在する程度でシワ
が殆どないが、表面レプリカでは広幅で陰影
の濃い皮溝が目立つ。
植物型糖セラミド ＭＥＤＩＵＭ 幅広で長いシワが見られる。
無投与区 ＰＯＯＲ 随所に広幅の陥没部が認められる。
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
【００５２】
表１に示したように、酢酸菌セラミドは植物型糖セラミドよりも優れた抗シワ活性を有し、このことより酢酸菌セラミドは経口摂取により保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果があることが確認できた。
【００５３】
（実施例２）
＜ヒト皮膚器官培養を用いた酢酸菌セラミド体内吸収分解物の抗シワ活性＞
経口摂取したセラミドの一部は分解され吸収され作用すると考えられる。
【００５４】
試験に供したスフィンゴシン（Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｄｅ： Ａｖａｎｔｉ社製）はヒト型セラミドならびにヒト型糖セラミドの脂肪酸ならびに糖部分が分解遊離したスフィンゴイド塩基部分の物質である。
【００５５】
また、スフィンガニン（Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ： Ａｖａｎｔｉ社製）は酢酸菌セラミドの脂肪酸部分が分解遊離したスフィンゴイド塩基部分の物質であり、共にヒト生体内でその存在が確認されている。
【００５６】
また、植物糖セラミドの脂肪酸ならびに糖部分が分解遊離したスフィンゴイド塩基部分の主要な物質はスフィンガジエンであり、小腸上皮細胞のモデル培養細胞であるＣａｃｏ−２での吸収効率試験で、スフィンガジエンはスフィンゴシンよりも吸収効率が著しく劣ることが示されている（例えば、「ジャーナル・オブ・ニュートリション（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）」、１３３巻、ｐ．２７７７〜２７８２、２００３年参照）。
【００５７】
以上のことから、ヒト型糖セラミドならびにヒト型セラミドの分解物であるスフィンゴシン、酢酸菌セラミドの分解物であるスフィンガニンの抗シワ活性について比較評価した。
【００５８】
評価系は実施例１で用いたものと同様の抗シワ活性評価系を同条件で使用した。
以上の結果を表２に示す。
【００５９】
（表２）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
名称 評価 評価の根拠
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
スフィンガニン ＥＸＣＥＬＬＥＮＴ 皮膚表面も表面レプリカもシワが殆ど存在しない。
スフインゴシン ＧＯＯＤ 皮膚表面は皮丘が幾つか見られるが、表面レプリカでは広幅の皮溝はない。
無投与区 ＰＯＯＲ 随所に広幅の陥没部が認められる。
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
【００６０】
表２の結果から、スフィンガニンがスフィンゴシンよりも優れた抗シワ活性が確認できたことより、経口投与によって一部分解された場合であっても酢酸菌セラミドは高い抗シワ活性を示すことが期待できる。このことより酢酸菌セラミドは経口摂取により保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果があることが期待できる。
【００６１】
（実施例３）
＜アトピー性皮膚炎モデルマウスを用いた酢酸菌セラミドの肌機能改善効果＞
アトピー性皮膚炎のモデルマウスとして４週齢のＮＣ／Ｎｇａ Ｔｎｄ Ｃｒｊ系オスマウスを使用した。ＮＣ／Ｎｇａ Ｔｎｄ Ｃｒｊ系オスマウスは、ＳＰＦ飼育環境下では肉眼的所見として異常を呈さないが、空気中の微生物制御を行っていない通常飼育環境下では、肌荒れ、保湿能力の低下等の強い皮膚炎症状を自然発症するマウスである。
【００６２】
酢酸菌セラミドとして、２−Ｈｙｄｒｏｘｙ−Ｃ１６−Ｄｉｈｙｄｒｏｃｅｒａｍｉｄｅ（ＭＡＴＲＥＹＡ社製）を使用した。
【００６３】
群は無投与対照区ならびに酢酸菌セラミド投与区の２群を設定し、それぞれ１０匹を１群とした。無投与対照区はＡＩＮ９３Ｇ（オリエンタル酵母工業社製）を自由摂取させた。酢酸菌セラミド投与区は、ＡＩＮ９３Ｇに酢酸菌セラミドを０．１５％外割添加した飼料を自由摂取させた。
【００６４】
試験開始２２日後に毛刈りしたマウス腹部および足蹠５ｗ／ｖ％ＰｉＣｌ溶液を１５０μｌ／匹になるように塗布し感作した。
【００６５】
感作後４日目から毛刈した背部および左右の耳（内側両側）に０．８ｗ／ｖ％ＰｉＣｌ溶液を１５０μｌ／匹になるように塗布し誘発した。投与は６７日間行い、１回／週あたりで自由飲水量を測定し、一日あたりの摂水量を算出した。結果を図２に示した。
【００６６】
図２の結果から、飼育週齢の増加に従い対照区ならびに酢酸菌セラミド投与区ともに摂水量の増加傾向にあるが、対照区では酢酸菌セラミド投与区に比較して摂水量の増加が多く、皮膚から蒸散した水分を補給するために大量の水分摂取が必要であると考えられる。このことより明らかに経口摂取によって酢酸菌セラミドが保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果を有するといえる。
【００６７】
（実施例４）
＜錠剤の調製＞
酢酸菌としてＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＮＢＲＣ １４８１８を用い、その酢酸発酵液１０キロリッターを高速遠心機器（８０００ｒｐｍ、２０分）で集菌し、湿菌体１０Ｋｇを得た。得られた湿菌体１０Ｋｇを蒸留水にて洗浄後に大型凍結乾燥機で凍結減圧乾固し、乾燥菌体１．８Ｋｇを得た。
【００６８】
得られた乾燥菌体１Ｋｇをエタノール１０リッターとともにソックスレー抽出器に仕込み、２０時間加熱還流した。得られた抽出液を減圧乾固し、５リットルのアセトンに溶解した。沈殿物をろ過で除去し、ろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固し、淡黄褐色の酢酸菌セラミド１．５ｇを得た。
【００６９】
得られた酢酸菌セラミド１ｇ（０．７重量％）、結晶セルロース３５ｇ（２６．９重量％）、乾燥コーンスターチ６７ｇ（５１．５重量％）、乳糖２２ｇ（１６．９重量％）、ステアリン酸カルシウム２ｇ（１．５重量％）、および結合剤としてポリビニルピロリドン３ｇ（２．３重量％）を加え、混合粉末化した後に、ゼラチン硬カプセルに充填した。
【００７０】
このようにして調製された錠剤は、肌機能改善組成物として、有用に経口摂取可能であることが充分に期待される。
【００７１】
（実施例５）
＜ゼリーの製造＞
酢酸菌としてＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＮＢＲＣ １４８１８を用い、その酢酸発酵液１０キロリッターを高速遠心機器（８０００ｒｐｍ、２０分）で集菌し、湿菌体１０Ｋｇを得た。得られた湿菌体１０Ｋｇを等量の蒸留水に分散させた。分散させた２０ｋｇの酢酸菌分散液を高圧ホモジナイザー（２００００ｐｓｉ）に３回通過させ細胞破壊処理を施した後に、大型凍結乾燥機で凍結減圧乾固し、乾燥菌体粉末１．５Ｋｇを得た。
【００７２】
得られた乾燥菌体粉末８ｇ（０．８重量％）、砂糖２５０ｇ（２５重量％）、カラギーナン１．６ｇ（０．１６重量％）、ローカストビーンガム０．８ｇ（０．０８重量％）、キサンタンガム０．８ｇ（０．０８重量％）を混合均一化し、粉体混合物を得た。鍋に３００ｇの水を計量し、黒糖３０ｇ（３．０重量％）を溶解し、さらに還元水あめ１５０ｇ（１５重量％）を混合し、先に得た粉体混合物をダマができないように攪拌しながら、更に混合した。それらを均一に攪拌し、残りの水２５８．８ｇを加え、加温した。溶液温度が８５℃１０分間加熱溶解後、流水で冷却し酢酸菌体含有ゼリー食品を得た。
【００７３】
このようにして調製されたゼリーは、肌機能改善用組成物として、有効に経口摂取可能であることが期待できる。
【００７４】
（実施例６）
＜飲料の製造＞
酢酸菌としてＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＮＢＲＣ １４８１８を用い、その酢酸発酵液１０キロリッターを高速遠心機器（８０００ｒｐｍ、２０分）で集菌し、湿菌体１０Ｋｇを得た。得られた湿菌体１０Ｋｇを食酢１００リッターに分散させた。分散させた酢酸菌分散液を高圧ホモジナイザー（２００００ｐｓｉ）に３回通過させ細胞破壊処理を施した。その溶液を５００ｍｌ容の瓶に分注し、７５℃まで加温により殺菌し酢酸菌体含有食酢を得た。
【００７５】
このようにして調製された飲料は、肌機能改善用組成物として、有効に経口摂取可能であることが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】改変ブロノフ拡散チャンバーの模式図を示す図である。
【図２】アトピー性皮膚炎モデルマウスを用いた酢酸菌セラミドの肌機能改善効果を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、経口摂取により、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果を有する肌機能改善用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
植物由来のセラミドは、人間の皮膚器官の構成成分であり、経口摂取により保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果があることが知られている（例えば、非特許文献１及び非特許文献２参照）。
【０００３】
セラミドは、脂肪、グリセロ脂質、及びステロール脂質を除く脂質を指すものであって、セラミドには、上記したように小麦、米、ダイズ等の植物より抽出したもの、牛脳などの動物から抽出したもの、酵母などの真核微生物や、スフィンゴモナスなどの原核微生物から抽出したものがある。しかし、ＢＳＥ問題などにより牛脳などの動物由来のセラミドは経口摂取することは敬遠される傾向があり、また、その食経験がないことよりスフィンゴモナスなどの微生物は経口摂取が敬遠されている。
【０００４】
従って、経口摂取によって、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果を期待する場合は、小麦、米、ダイズ等の植物から抽出されたセラミドが利用されていた。
【０００５】
しかしながら、小麦、米、ダイズ等の植物から抽出されたセラミドを経口摂取した場合は、その効果は十分なものではなく、より効果の強いものが求められていた。
【０００６】
本発明は、酢酸菌由来のセラミドを有効成分とすることを特徴とする肌機能改善組成物に関するものであるが、酢酸菌セラミドにおいて、植物セラミドを越えたきわめて顕著な美容効果があること、しかもその効果が経口摂取によって奏されることは、従来知られておらず、新規である。
【非特許文献１】「フレグランス・ジャーナル（Ｆｒａｇｒａｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ）」、２３巻、ｐ．８１〜８９、１９９５年
【非特許文献２】「バイオインダストリー（Ｂｉｏｉｎｄｕｓｔｒｙ）」、１９巻、ｐ．１６〜２６、２００２年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、植物セラミドよりも効果が高く、経口摂取することにより、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の効果を有する肌機能改善用組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、醸造酢製造菌として古来より使用されており、安全性の高いことが認知されている酢酸菌に着目した。
【０００９】
そして、本発明者らは、醸造酢の生産に用いられている酢酸菌から抽出した酢酸菌セラミドを経口摂取することにより、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果があることを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
すなわち、請求項１に記載の本発明は、酢酸菌セラミドを有効成分として含有することを特徴とする肌機能改善用組成物に関する。
また、請求項２に記載の本発明は、酢酸菌セラミドを含有する酢酸菌の細胞破砕物を有効成分として含有することを特徴とする肌機能改善用組成物に関する。
さらに、請求項３に記載の本発明は、酢酸菌セラミドが酢酸菌から極性溶媒を用いて抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の肌機能改善用組成物に関する。
また、請求項４に記載の本発明は、飲食品であることを特徴とする請求項１〜請求項３に記載の肌機能改善用組成物に関する。
そして、請求項５に記載の本発明は、飲食品が食酢であることを特徴とする請求項４に記載の肌機能改善用組成物に閲する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の酢酸菌セラミドを含有した肌機能改善組成物は、直接、酢酸菌セラミドを経口摂取することにより保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果がある。また、酢酸菌セラミドを含有する酢酸菌の細胞破壊物又は酢酸菌の極性溶媒抽出物を有効成分として含有させても、同様の肌機能改善効果が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１３】
本発明で用いる酢酸菌セラミドは、ヒト型セラミドのスフィンゴイド塩基部分のスフィンゴシンの前駆体であるスフィンガニンと脂肪酸がアミド結合した構造を有しており、例えば次のようにして得ることができる。
【００１４】
例えば、酢酸菌を原料として、極性溶媒を用いて抽出し、これを酢酸菌セラミドとして使用してもよいし、得られた抽出物を更に有機溶媒で再結晶させてもよい。
【００１５】
有機溶媒としては、アルコール、脂肪族カルボン酸エステル、ケトン等、有機溶剤であればすべてのものが、単用又は２種以上併用される。アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール等各種低級アルコールが例示され、脂肪族カルボン酸エステルとしては、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸等の分枝又は直鎖の飽和脂肪酸のほか、各種の不飽和脂肪酸のアルコールエステル、例えば上記アルコールのエステルが例示される。
【００１６】
ケトンとしては、アセトン、エチルメチルケトン、メチルプロピルケトン、イソプロピルメチルケトン、ブチルメチルケトン、イソブチルケトン等が例示される。
【００１７】
酢酸菌セラミドの抽出に使用する極性溶媒としては、水、グリセリン、アルコール、ケトン、氷酢酸など極性溶媒であればすべてのものが単用又は２種以上併用することができる。アルコール、ケトンとしては、上記に例示したものが適宜使用可能である。
【００１８】
酢酸菌体から、極性溶媒を用いて酢酸菌セラミドを抽出するには、例えば、酢酸菌菌体自体、又は酢酸菌菌体を適当に超音波等で破砕した後、極性溶媒で酢酸菌セラミドを抽出し、得られた抽出液はそのまま酢酸菌セラミドとして使用することができる。
【００１９】
抽出は、湿潤菌体又は乾燥菌体と溶剤とを充分に接触させて行なえばよく、常法が適宜適用される。例えば、乾燥菌体の場合、有機溶剤（必要あれば、その０．１〜１０倍、通常はそれと同量程度の水を加え）を菌体１ｋｇに対して０．５〜３０リットル、通常は５〜１５リットル程度加え、よく混合した後、遠心分離や濾過等の分離処理を行って上層を回収したり、あるいは、ソックスレー抽出器を用いて、乾燥菌体１０ｋｇに対して上記と同量のアルコール等の有機溶剤を加えて加熱還流し、得られた抽出液を減圧乾固した後、０．５〜１５リットル程度、通常は２〜８リットルのケトン類等の有機溶剤を加えて溶解し、沈澱物を分離した後の濾液（上清）を抽出液として回収すればよい。
【００２０】
また、溶媒（例えば、クロロホルム、アルコール、水の混液）を用いて抽出した後、下層を脂質粗画分として回収し、これに苛性ソーダや苛性カリその他のアルカリ溶液を加えて弱アルカリ分解し、アルカリ安定脂質を得、これを酢酸菌セラミドとしてよい。更に所望する場合、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー等で処理し、例えば、クロロホルム、酢酸の混合溶媒で洗浄した後、クロロホルム、アルコールの混合溶媒で溶出される画分を酢酸菌セラミドとして使用してもよい。
【００２１】
このようにして得られた抽出液は、そのまま、酢酸菌セラミドとして使用することができるが、更に、抽出液の処理物も使用することができ、処理物としては例えば、抽出液の濃縮物、ペースト化物、乾燥物、希釈物が使用できるほか、精製物、例えば、液体クロマトグラフィーや向流分配法などで酢酸菌セラミドを分離精製し、またそれを採取して、酢酸菌セラミドとして用いることもできる。なお、本発明において、酢酸菌セラミドには、精製物のほか、粗精製物や含有物も包含され、これらの処理物も含まれる。
【００２２】
また、酢酸菌セラミドは、酢酸菌体、特にその細胞膜に存在するので、抽出工程を経ることなく酢酸菌をそのまま酢酸菌セラミドとして使用したり、含有させたりしてもよい。更にまた、体内での吸収を考慮して、高圧ホモジナイザー、フレンチプレスなど高圧式破砕機や、超音波式破砕機を用いて細胞破壊したものをそのまま酢酸菌セラミドとして使用したり、含有させたりしてもよい。酢酸菌の破砕処理は、上記のほか、常法によって適宜実施することができる。
【００２３】
酢酸菌体破砕物の場合も抽出物と同様であって、酢酸菌を破砕して（通常、湿菌体に０．５〜２倍量の水を加えた後に破砕処理する）得られた破砕物をそのまま酢酸菌セラミドとして使用できるほか、上記と同様に処理して得た各種処理物も酢酸菌セラミドとして使用することができる。
【００２４】
本発明において用いられる酢酸菌としては、特に制限はなく、例えば、グルコンアセトバクター属（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、グルコノバクター属（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、アサイア属（Ａｓａｉａ）またはアシドモナス属（Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ）に属する酢酸菌が例示される。
【００２５】
さらに詳細には、グルコンアセトバクター属（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）の酢酸菌としては、グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｈａｎｓｅｎｉｉ）、グルコンアセトバクター・ジアゾトロフィカス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ）、グルコンアセトバクター・インタメデイウス（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ）、グルコンアセトバクター・サッカリ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓａｃｃｈａｒｉ）などが例示される。
【００２６】
また、グルコノバクター属（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ）としては、グルコノバクター・フラトウリ（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｆｒａｔｅｕｒｉｉ）、グルコノバクター・セリナス（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｃｅｒｉｎｕｓ）などが例示される。
【００２７】
さらに、アセトバクター属（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ）の酢酸菌としては、アセトバクター・トロピカリス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）、アセトバクター・インドネシエンシス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｉｎｄｏｎｅｓｉｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・シジギイ（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｙｚｙｇｉｉ）、アセトバクター・シビノンゲンシス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｃｉｂｉｎｏｎｇｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・オリエンタリス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、アセトバクター・パスツリアヌス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ）、アセトバクター・オルレアネンシス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｏｒｌｅａｎｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・ロバニエンシス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｌｏｖａｎｉｅｎｓｉｓ）、アセトバクター・アセチ（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ）、アセトバクター・ポモラム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｐｏｍｏｒｕｍ）などが例示される。
【００２８】
さらに、アサイア属（Ａｓａｉａ）の酢酸菌としては、アサイア・ボゴレンシス（Ａｓａｉａ ｂｏｇｏｒｅｎｓｉｓ）、アサイア・シアメンシス（Ａｓａｉａ ｓｉａｍｅｎｓｉｓ）などが例示される。
【００２９】
また、アシドモナス属（Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ）の酢酸菌は、アシドモナス・メタノリカ（Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ）などが例示される。
【００３０】
酢酸菌としては、上記のほか、寄託菌、市販菌、食酢や種酢に含有されている酢酸菌等も適宜使用可能である。寄託菌としては次のものが非限定的に例示される。
【００３１】
アセトバクター・トロピカリス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ） ＮＢＲＣ １６４７０、同インドネシエンシス（Ａ．ｉｎｄｏｎｅｓｉｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １６４７１、同シジギイ（Ａ．ｓｙｚｙｇｉｉ） ＮＢＲＣ １６６０４、同シビノンゲンシス（Ａ．ｃｉｂｉｎｏｎｇｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １６６０５、同オリエンタリス（Ａ．ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ） ＮＢＲＣ １６６０６、同パスツリアヌス（Ａ．ｐａｓｔｅｕｒｉａｎｕｓ） ＤＳＭ ３５０９、同オルレアネンシス（Ａ．ｏｒｌｅａｎｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １３７５２、同ロバニエンシス（Ａ．ｌｏｖａｎｉｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １３７５３、同アセチ（Ａ．ａｃｅｔｉ）ＮＢＲＣ １４８１８、同ポモラム（Ａ．ｐｏｍｏｒｕｍ） ＤＳＭ １１８２５など。
【００３２】
グルコンアセトバクター・ハンゼニイ（Ｇｌｕｃｏｎａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｈａｎｓｅｎｉｉ） ＮＢＲＣ １４８２０、同ジアゾトロフィカス（Ｇａ．ｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃｕｓ） ＤＳＭ ５６０１、同インタメデイウス（Ｇａ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｓ） ＤＳＭ １１８０４、同サッカリ（Ｇａ．ｓａｃｃｈａｒｉ） ＤＳＭ １２７１７など、
グルコノバクター・フラトウリ（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ ｆｒａｔｅｕｒｉｉ） ＮＢＲＣ ３２６４、同セリナス（Ｇ．ｃｅｒｉｎｕｓ） ＮＢＲＣ ３２６７など、
アサイア・ボゴレンシス（Ａｓａｉａ ｂｏｇｏｒｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １６５９４、同シアメンシス（Ａ．ｓｉａｍｅｎｓｉｓ） ＮＢＲＣ １６４５７など、
アシドモナス・メタノリカ（Ａｃｉｄｏｍｏｎａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａ） ＤＳＭ ５４３２など。
【００３３】
これらの酢酸菌は酢酸発酵に用いられ、大量に増殖する。なお、酢酸菌は、ナタデココ、カスピ海ヨーグルト、紅茶きのこなどで食経験があり、また、食酢発酵においては発酵後に廃棄されており安価に入手することができる。
【００３４】
本発明に係る酢酸菌セラミドを含有する肌機能改善組成物の形態としては、錠剤、カプセル剤、粉末剤、液剤、顆粒剤、散剤等の剤形に製剤化したものが例示され、例えば、医薬品、経口化粧品、サプリメント等として使用することができる。さらに、飲食品の形態としては、具体的には、キャンデイ、ガム、ゼリー等の菓子、食パン、米飯等の主食品、アルコール飲料、牛乳、食酢飲料等の飲料等の飲料、また、醤油、味噌、食酢等の調味料等が挙げられる。
【００３５】
本発明において、食品中の酢酸菌セラミドの割合は、０．０００１〜５重量％、好ましくは、０．００１〜１重量％である。酢酸菌セラミドの添加量が０．０００１重量％未満では、保湿、肌荒れ、シワ防止等の美容効果が発現しづらく、また、５重量％を越えると該組成物製造時の粘度が上昇し、また着色や香味の劣化がおこり、経口摂取に適さなくなるので好ましくない。
【００３６】
本発明の肌機能改善用組成物としての酢酸菌セラミドの投与量は、成人１日当たり０．０１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは０．１ｍｇ〜１００ｍｇである。成人１日当たり０．１ｍｇ未満の投与量では、保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果が少なく、１００ｍｇを越えると消化吸収ができなくなる恐れがある。
【００３７】
本発明の肌機能改善用組成物は酢酸菌セラミドを有効成分として含有するが、それ以外の各種原料とを混合・均一化した後に、必要に応じて界面活性剤を混合して、安定化を図ることもできる。これらの界面活性剤としては、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステルおよびレシチンなどを用いることができる。
【００３８】
また、本発明によれば、食酢その他酢酸菌含有飲食品を破砕処理したり、酢酸菌を飲食品に添加した後これを破砕処理したり、酢酸菌の破砕処理物（その処理物も含む、以下同じ）を飲食品に添加したり、酢酸菌体又はその破砕処理物の溶剤抽出物（その処理物も含む、以下同じ）を飲食品に添加したりすることによって、肌機能改善組成物を製造することもできる。したがって、本発明は、これらの破砕処理物や飲食品は、肌機能改善のために経口摂取されるものである旨の表示を付した肌機能改善組成物を提供するものであって、調味や単なる飲用といった通常の用途に使用される食酢等の飲食品とは明確に区別されるものである。
【実施例】
【００３９】
以下、本発明を実施例により更に説明するが、本発明は実施例のみに限定されるものではない。
【００４０】
（実施例１）
＜ヒト皮膚器官培養を用いた酢酸菌セラミドの抗シワ活性＞
酢酸菌セラミドの抗シワ活性を以下の要領で実施した。
【００４１】
まず、酢酸菌セラミドは、以下の方法で調製した。すなわち、酢酸菌（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＮＢＲＣ １４８１８）の１００ｇ乾燥菌体からクロロホルム−メタノール系の溶媒（グロロホルム：メタノール：水＝１：１：０．８）５リットルで抽出し、その後、２層分離を行い、下層を脂質粗画分として回収した。次に、０．４Ｎ ＮａＯＨにより脂質粗画分を弱アルカリ分解し、アルカリ安定脂質を得た。
【００４２】
得られたアルカリ安定脂質を、クロロホルムで平衡化したシリカゲルカラムにかけ、クロロホルム：酢酸＝１００：１の溶媒で洗浄後、クロロホルム：メタノール＝９７：３の溶媒で溶出して得られた画分を乾固して、約０．５ｇの酢酸菌セラミドを得た。
【００４３】
また、対照物として、ヒト型セラミド（Ｃｅｒａｍｉｄｅ： Ｍａｔｒｅｙａ社製）、及びヒト型糖セラミド（Ｃｅｒａｍｉｄｅ β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ ｆｒｏｍ ｂｒａｉｎ： Ｍａｔｒｅｙａ社製）、植物型糖セラミド（Ｃｅｒａｍｉｄｅ β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ ｆｒｏｍ ｐｌａｎｔ： Ｍａｔｒｅｙａ社製）を用いた。
【００４４】
これらの試料を用い、下記の（１）〜（８）に示す抗シワ活性評価系により、酢酸菌セラミドの抗シワ活性を、改変ブロノフ拡散チャンバーを用いて、ヒト型糖セラミド、ヒト型セラミド、植物型糖セラミドと比較評価した。改変ブロノフ拡散チャンバーは、図１にその概略を示した。図中、ＰＢＳは生理食塩水、ＰＧ−ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒはポリエチレングリコール−生物両立性ポリマー、Ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｓｌｉｃｅはヒト皮膚薄片、Ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍは培養液を、それぞれ示す。
【００４５】
（１）ヒト摘出皮膚片（インフォームドコンセント済み）を、改変ブロノフ拡散チャンバー（図１に概略を示した）に組込んだ。皮下側の培養液に本発明の酢酸菌セラミドならびに対照物を添加した。
（２）酢酸菌セラミドならびに対照物を添加後、２時間後に、皮膚片に紫外線Ａ波（ＵＶ−Ａ）を３Ｊ／ｃｍ2の強度で、１日当り２回照射した。なお、ランプと検体の間に珪酸ガラスを挟んだ。
（３）皮膚片を器官培養した。なお、培養基はＤＭＥＭａｂ培地（＋）１０％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）を用いた。
（４）毎日同様な処理を行い、５〜１０目間、器官培養を行った。
（５）器官培養終了跡、チャンバーから皮膚片を単離し、実体顕微鏡／ＣＣＤビデオカメラで皮膚表面を撮影し、皮膚表面写真を得た。
（６）その後、皮膚表面に対して、シリコンゴムでレプリカ作製を行い、そのレプリカの写真を撮影して、レプリカ写真を得た。
（７）上記（６）で作製したレプリカの表面凸凹形状をスキャンして、ラインヒストグラムを作成した。
【００４６】
（８）上記の（１）〜（７）の手順で皮膚表面写真、レプリカ写真、凸凹形状を投影したラインヒストグラムを元にして、抗シワ活性をＰＯＯＲ、ＭＥＤＩＵＭ、ＧＯＯＤ、ＥＸＣＥＬＬＥＮＴの４段階に分けて評価した。なお、線状の皮溝が短く少数で規則的な場合は肌理（キメ）として認定しシワとは見なさなかった。また、広幅の皮溝で太くて長く陰影が濃い場合は、シワと認定した。なお、評価において、ＰＯＯＲは劣る、ＭＥＤＩＵＭは普通、ＧＯＯＤは良好、ＥＸＣＥＬＬＥＮＴは卓越している、をそれぞれ示す。
【００４７】
この抗シワ活性評価系は、体内で吸収した物質の皮膚への効果を見ることに優れており、真皮に分布する毛細血管を通してセラミドなどの有効成分が皮膚へ送達され、その結果、角質層セラミド／スクワレンによる細胞間質の保湿力増強、真皮での細胞外マトリックス構築促進、繊維芽細胞の増殖促進などの効能発現について調べるのに適している。
【００４８】
また、この皮膚片は４週間培養してもコラーゲン合成を９５％以上維持しているので生存していることが実証されている。
【００４９】
そして、試験に供したヒト型糖セラミドはヒト型セラミドに糖が結合した物質であり、共にヒト生体内でその存在が確認されている。
【００５０】
また、植物糖セラミドは植物由来のセラミドが共通して有する構造でセラミド部分に糖が結合しているのを特徴として有し、今までにヒト生体内での存在は示されていない。それぞれの経口摂取したセラミドの一部はそのままの構造で吸収され作用すると考えられる。
上記の結果を表１に示した。
【００５１】
表１
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
名称 評価 評価の根拠
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
ヒト型糖セラミド ＥＸＣＥＬＬＥＮＴ 肌理があって幅広や長いシワがない。
酢酸菌セラミド ＧＯＯＤ 広幅陥没がほぼ無い。細く短いシワが散見、総
じて平滑である。
ヒト型セラミド ＭＥＤＩＵＭ 皮膚表面は皮丘が僅かに存在する程度でシワ
が殆どないが、表面レプリカでは広幅で陰影
の濃い皮溝が目立つ。
植物型糖セラミド ＭＥＤＩＵＭ 幅広で長いシワが見られる。
無投与区 ＰＯＯＲ 随所に広幅の陥没部が認められる。
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
【００５２】
表１に示したように、酢酸菌セラミドは植物型糖セラミドよりも優れた抗シワ活性を有し、このことより酢酸菌セラミドは経口摂取により保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果があることが確認できた。
【００５３】
（実施例２）
＜ヒト皮膚器官培養を用いた酢酸菌セラミド体内吸収分解物の抗シワ活性＞
経口摂取したセラミドの一部は分解され吸収され作用すると考えられる。
【００５４】
試験に供したスフィンゴシン（Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｄｅ： Ａｖａｎｔｉ社製）はヒト型セラミドならびにヒト型糖セラミドの脂肪酸ならびに糖部分が分解遊離したスフィンゴイド塩基部分の物質である。
【００５５】
また、スフィンガニン（Ｄ−ｅｒｙｔｈｒｏ−ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ： Ａｖａｎｔｉ社製）は酢酸菌セラミドの脂肪酸部分が分解遊離したスフィンゴイド塩基部分の物質であり、共にヒト生体内でその存在が確認されている。
【００５６】
また、植物糖セラミドの脂肪酸ならびに糖部分が分解遊離したスフィンゴイド塩基部分の主要な物質はスフィンガジエンであり、小腸上皮細胞のモデル培養細胞であるＣａｃｏ−２での吸収効率試験で、スフィンガジエンはスフィンゴシンよりも吸収効率が著しく劣ることが示されている（例えば、「ジャーナル・オブ・ニュートリション（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ）」、１３３巻、ｐ．２７７７〜２７８２、２００３年参照）。
【００５７】
以上のことから、ヒト型糖セラミドならびにヒト型セラミドの分解物であるスフィンゴシン、酢酸菌セラミドの分解物であるスフィンガニンの抗シワ活性について比較評価した。
【００５８】
評価系は実施例１で用いたものと同様の抗シワ活性評価系を同条件で使用した。
以上の結果を表２に示す。
【００５９】
（表２）
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
名称 評価 評価の根拠
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
スフィンガニン ＥＸＣＥＬＬＥＮＴ 皮膚表面も表面レプリカもシワが殆ど存在しない。
スフインゴシン ＧＯＯＤ 皮膚表面は皮丘が幾つか見られるが、表面レプリカでは広幅の皮溝はない。
無投与区 ＰＯＯＲ 随所に広幅の陥没部が認められる。
――――――――――――――――――――――――――――――――――――――――
【００６０】
表２の結果から、スフィンガニンがスフィンゴシンよりも優れた抗シワ活性が確認できたことより、経口投与によって一部分解された場合であっても酢酸菌セラミドは高い抗シワ活性を示すことが期待できる。このことより酢酸菌セラミドは経口摂取により保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果があることが期待できる。
【００６１】
（実施例３）
＜アトピー性皮膚炎モデルマウスを用いた酢酸菌セラミドの肌機能改善効果＞
アトピー性皮膚炎のモデルマウスとして４週齢のＮＣ／Ｎｇａ Ｔｎｄ Ｃｒｊ系オスマウスを使用した。ＮＣ／Ｎｇａ Ｔｎｄ Ｃｒｊ系オスマウスは、ＳＰＦ飼育環境下では肉眼的所見として異常を呈さないが、空気中の微生物制御を行っていない通常飼育環境下では、肌荒れ、保湿能力の低下等の強い皮膚炎症状を自然発症するマウスである。
【００６２】
酢酸菌セラミドとして、２−Ｈｙｄｒｏｘｙ−Ｃ１６−Ｄｉｈｙｄｒｏｃｅｒａｍｉｄｅ（ＭＡＴＲＥＹＡ社製）を使用した。
【００６３】
群は無投与対照区ならびに酢酸菌セラミド投与区の２群を設定し、それぞれ１０匹を１群とした。無投与対照区はＡＩＮ９３Ｇ（オリエンタル酵母工業社製）を自由摂取させた。酢酸菌セラミド投与区は、ＡＩＮ９３Ｇに酢酸菌セラミドを０．１５％外割添加した飼料を自由摂取させた。
【００６４】
試験開始２２日後に毛刈りしたマウス腹部および足蹠５ｗ／ｖ％ＰｉＣｌ溶液を１５０μｌ／匹になるように塗布し感作した。
【００６５】
感作後４日目から毛刈した背部および左右の耳（内側両側）に０．８ｗ／ｖ％ＰｉＣｌ溶液を１５０μｌ／匹になるように塗布し誘発した。投与は６７日間行い、１回／週あたりで自由飲水量を測定し、一日あたりの摂水量を算出した。結果を図２に示した。
【００６６】
図２の結果から、飼育週齢の増加に従い対照区ならびに酢酸菌セラミド投与区ともに摂水量の増加傾向にあるが、対照区では酢酸菌セラミド投与区に比較して摂水量の増加が多く、皮膚から蒸散した水分を補給するために大量の水分摂取が必要であると考えられる。このことより明らかに経口摂取によって酢酸菌セラミドが保湿、肌荒れ防止改善、シワ防止改善等の美容効果を有するといえる。
【００６７】
（実施例４）
＜錠剤の調製＞
酢酸菌としてＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＮＢＲＣ １４８１８を用い、その酢酸発酵液１０キロリッターを高速遠心機器（８０００ｒｐｍ、２０分）で集菌し、湿菌体１０Ｋｇを得た。得られた湿菌体１０Ｋｇを蒸留水にて洗浄後に大型凍結乾燥機で凍結減圧乾固し、乾燥菌体１．８Ｋｇを得た。
【００６８】
得られた乾燥菌体１Ｋｇをエタノール１０リッターとともにソックスレー抽出器に仕込み、２０時間加熱還流した。得られた抽出液を減圧乾固し、５リットルのアセトンに溶解した。沈殿物をろ過で除去し、ろ液をロータリーエバポレーターで蒸発乾固し、淡黄褐色の酢酸菌セラミド１．５ｇを得た。
【００６９】
得られた酢酸菌セラミド１ｇ（０．７重量％）、結晶セルロース３５ｇ（２６．９重量％）、乾燥コーンスターチ６７ｇ（５１．５重量％）、乳糖２２ｇ（１６．９重量％）、ステアリン酸カルシウム２ｇ（１．５重量％）、および結合剤としてポリビニルピロリドン３ｇ（２．３重量％）を加え、混合粉末化した後に、ゼラチン硬カプセルに充填した。
【００７０】
このようにして調製された錠剤は、肌機能改善組成物として、有用に経口摂取可能であることが充分に期待される。
【００７１】
（実施例５）
＜ゼリーの製造＞
酢酸菌としてＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＮＢＲＣ １４８１８を用い、その酢酸発酵液１０キロリッターを高速遠心機器（８０００ｒｐｍ、２０分）で集菌し、湿菌体１０Ｋｇを得た。得られた湿菌体１０Ｋｇを等量の蒸留水に分散させた。分散させた２０ｋｇの酢酸菌分散液を高圧ホモジナイザー（２００００ｐｓｉ）に３回通過させ細胞破壊処理を施した後に、大型凍結乾燥機で凍結減圧乾固し、乾燥菌体粉末１．５Ｋｇを得た。
【００７２】
得られた乾燥菌体粉末８ｇ（０．８重量％）、砂糖２５０ｇ（２５重量％）、カラギーナン１．６ｇ（０．１６重量％）、ローカストビーンガム０．８ｇ（０．０８重量％）、キサンタンガム０．８ｇ（０．０８重量％）を混合均一化し、粉体混合物を得た。鍋に３００ｇの水を計量し、黒糖３０ｇ（３．０重量％）を溶解し、さらに還元水あめ１５０ｇ（１５重量％）を混合し、先に得た粉体混合物をダマができないように攪拌しながら、更に混合した。それらを均一に攪拌し、残りの水２５８．８ｇを加え、加温した。溶液温度が８５℃１０分間加熱溶解後、流水で冷却し酢酸菌体含有ゼリー食品を得た。
【００７３】
このようにして調製されたゼリーは、肌機能改善用組成物として、有効に経口摂取可能であることが期待できる。
【００７４】
（実施例６）
＜飲料の製造＞
酢酸菌としてＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ａｃｅｔｉ ＮＢＲＣ １４８１８を用い、その酢酸発酵液１０キロリッターを高速遠心機器（８０００ｒｐｍ、２０分）で集菌し、湿菌体１０Ｋｇを得た。得られた湿菌体１０Ｋｇを食酢１００リッターに分散させた。分散させた酢酸菌分散液を高圧ホモジナイザー（２００００ｐｓｉ）に３回通過させ細胞破壊処理を施した。その溶液を５００ｍｌ容の瓶に分注し、７５℃まで加温により殺菌し酢酸菌体含有食酢を得た。
【００７５】
このようにして調製された飲料は、肌機能改善用組成物として、有効に経口摂取可能であることが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００７６】
【図１】改変ブロノフ拡散チャンバーの模式図を示す図である。
【図２】アトピー性皮膚炎モデルマウスを用いた酢酸菌セラミドの肌機能改善効果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酢酸菌セラミドを有効成分として含有することを特徴とする肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項２】
酢酸菌セラミドを含有する酢酸菌の細胞破砕物を有効成分として含有することを特徴とする肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項３】
酢酸菌セラミドが酢酸菌から極性溶媒を用いて抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項４】
該組成物が飲食品、あるいは、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、散剤、液剤の少なくともひとつの経口摂取用剤形に製剤化したものであること、を特徴とする請求項１〜３のいずれか1項に記載の肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項５】
飲食品が食酢であること、を特徴とする請求項４に記載の肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項６】
酢酸菌含有飲食品を破砕処理すること、を特徴とする肌機能改善用飲食品組成物の製造方法。
【請求項７】
酢酸菌を飲食品に添加した後、破砕処理すること、を特徴とする肌機能改善用飲食品組成物の製造方法。
【請求項８】
酢酸菌体の破砕処理物を飲食品に添加すること、を特徴とする肌機能改善用飲食品組成物の製造方法。
【請求項９】
酢酸菌体破砕物の極性溶媒抽出物を飲食品に添加すること、を特徴とする肌機能改善用飲食品組成物の製造方法。
【請求項１】
酢酸菌セラミドを有効成分として含有することを特徴とする肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項２】
酢酸菌セラミドを含有する酢酸菌の細胞破砕物を有効成分として含有することを特徴とする肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項３】
酢酸菌セラミドが酢酸菌から極性溶媒を用いて抽出されたものであることを特徴とする請求項１に記載の肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項４】
該組成物が飲食品、あるいは、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、散剤、液剤の少なくともひとつの経口摂取用剤形に製剤化したものであること、を特徴とする請求項１〜３のいずれか1項に記載の肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項５】
飲食品が食酢であること、を特徴とする請求項４に記載の肌機能改善用飲食品組成物。
【請求項６】
酢酸菌含有飲食品を破砕処理すること、を特徴とする肌機能改善用飲食品組成物の製造方法。
【請求項７】
酢酸菌を飲食品に添加した後、破砕処理すること、を特徴とする肌機能改善用飲食品組成物の製造方法。
【請求項８】
酢酸菌体の破砕処理物を飲食品に添加すること、を特徴とする肌機能改善用飲食品組成物の製造方法。
【請求項９】
酢酸菌体破砕物の極性溶媒抽出物を飲食品に添加すること、を特徴とする肌機能改善用飲食品組成物の製造方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２００８−５６６９５（Ｐ２００８−５６６９５Ａ）
【公開日】平成２０年３月１３日（２００８．３．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２８５８０１（Ｐ２００７−２８５８０１）
【出願日】平成１９年１１月２日（２００７．１１．２）
【分割の表示】特願２００５−１３３８２（Ｐ２００５−１３３８２）の分割
【原出願日】平成１７年１月２０日（２００５．１．２０）
【出願人】（３９８０６５５３１）株式会社ミツカングループ本社 (157)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年３月１３日（２００８．３．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月２日（２００７．１１．２）
【分割の表示】特願２００５−１３３８２（Ｐ２００５−１３３８２）の分割
【原出願日】平成１７年１月２０日（２００５．１．２０）
【出願人】（３９８０６５５３１）株式会社ミツカングループ本社 (157)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]