高血圧を診断するための、ｈｓｇｋ１遺伝子における新規な多型の使用、および、ＱＴ延長症候群を診断および治療するための、ｓｇｋ遺伝子ファミリーの使用
本発明は、高血圧の診断における、ｈｓｇｋのフラグメントを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用に関する。前記フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、前記フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位におけるヌクレオチドＧの挿入の存在または非存在によって生じる多型をさらに含む。本発明はまた、ＱＴ延長症候群の診断における、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの直接的な相関の使用、および、ＱＴ延長症候群の診断における、ｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体の核酸、またはそのフラグメントの１つの使用に関する。ｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体における単一ヌクレオチドの多型（単一ヌクレオチド多型＝ＳＮＰ）は、特に、ＱＴ延長症候群に関する先天的な素因の診断に有用である。その他の形態において、本発明は、ＱＴ延長症候群の治療および／または予防に使用するための薬物を製造するための、ｓｇｋファミリーの遺伝子発現を高める機能的な活性化因子または転写因子の使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高血圧を診断するための、ｈｓｇｋフラグメントを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用に関し、前記フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、その上、前記フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入の存在または非存在によって生じる多型を含む。
【０００２】
その上、本発明は、ＱＴ延長症候群を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの直接的な相関の使用に関し、さらに、ＱＴ延長症候群を診断するための、ｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体の核酸、またはそのフラグメントの１つの使用に関する。特に、ｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体における個々のヌクレオチド多型（単一ヌクレオチド多型＝ＳＮＰ）はまた、本発明において、遺伝学的に決定されたＱＴ延長症候群に関する素因を診断するのに用いることができる。
【０００３】
さらなる形態において、本発明は、ＱＴ延長症候群を治療および／または予防するための医薬を製造するための、ｓｇｋファミリーの遺伝子発現を増加させる機能的な活性化因子または転写因子の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
多数の細胞外シグナルが、これらシグナルの細胞膜およびその受容体から細胞質および細胞核への迅速な移動を確実にする目的で、細胞内のリン酸化／脱リン酸化カスケードに導かれる。このような可逆的なシグナルトランスフェクションカスケードの特異性は、リン酸基を個々の基質に移動させる様々なタンパク質（特にキナーゼ）によって可能になる。
【０００５】
血清および糖質コルチコイド依存性キナーゼ（ｓｇｋ）は、血清および糖質コルチコイドによって発現が増加するセリン／トレオニンキナーゼであるが、これはラット乳ガン細胞から最初にクローニングされた（Ｗｅｂｓｔｅｒ等，１９９３年）。ｓｇｋのヒト型、すなわちｈｓｇｋ１は肝細胞からクローニングされた（Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等，１９９７年）。ｈｓｇｋ１の発現は、細胞容量を調節することにより影響を受けることが見出された。ラットｓｇｋの発現については、このような細胞容量への依存性を実証することは未だにできていない。さらに、ラットのキナーゼが、上皮性Ｎａ+チャネル（ＥＮａＣ）を刺激することも見出された（Ｃｈｅｎ等，１９９９年；Ｎａｒａｙ−Ｐｅｊｅｓ−Ｔｏｔｈ等，１９９９年）。ＥＮａＣは、また、腎臓でのＮａ+排出において重要な役割を果たす。ＥＮａＣ活性の増加により、腎臓のナトリウムイオンの停留が増加し、その結果高血圧が発症することが、ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２で実証されている。
【０００６】
最終的に、ヒトｓｇｋのヒトファミリー２種のさらなるメンバー、すなわちｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３がクローニングされており（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等，１９９９年）、これらの遺伝子はいずれもｈｓｇｋ１と同様に、ＰＩ３キナーゼ経路を経由してインスリンおよびＩＧＦ１によって活性化される。電気生理学的な実験により、ｈｓｇｋ２とｈｓｇｋ３との共発現が、同様に、ＥＮａＣ活性の顕著な増加をもたらすことが示されている。
【０００７】
ＤＥ１９７０８１７３Ａ１によれば、ｈｓｇｋ１は、細胞容量の変化が重要な病態生理学的な役割を果たしている多くの病気、例えば高ナトリウム血症、低ナトリウム血症、糖尿病、腎機能不全、過剰代謝、肝性脳症、および、細菌またはウイルス感染に関連する実質的な診断上の可能性を有することは明らかである。
【０００８】
ＷＯ００／６２７８１では、ｈｓｇｋ１は、内皮性Ｎａ+チャネルを活性化し、それにより腎臓でのＮａ+再吸収を増加させることが報告されている。増加した腎臓のＮａ+再吸収は高血圧を併うので、この場合、ｈｓｇｋ１の発現の増加は、高血圧をもたし、その一方で、ｈｓｇｋ１の発現の減少は、最終的には低血圧をもたらすと予想される。
【０００９】
ＤＥ１００４２１３７はまた、ヒト相同体ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３の過剰発現または過剰活性、ＥＮａＣの過活性化、それにより生じる腎臓のＮａ+再吸収の増加と、それにより発症する高血圧との同様の関連性を報告している。その上、この文献は、本態性高血圧に関する、キナーゼｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３の診断上の可能性をすでに論じている。
【００１０】
ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２は、ｈｓｇｋ１遺伝子における個々のヌクレオチドの２つの異なる多型（単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ））の存在と、遺伝学的に決定された高血圧に関する素因との関連を開示している。この場合において、多型は、ｈｓｇｋ１遺伝子における、イントロン６における多型（Ｔ→Ｃ）、および、エキソン８における多型（Ｃ→Ｔ）である。特に、ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２における表５から、解析されている２種のＳＮＰ間の強い相関不均衡があることは明らかである：エキソン８におけるＳＮＰのＣＣキャリアーのほとんどはまた、イントロン６ＴＴキャリアーであるが（すなわち６４％）、一方で、同時にイントロン６ＣＣキャリアーでもあるエキソン８ＴＴキャリアーはほんのわずかである（わずか２％）。このような、イントロン６およびエキソン８における多型の存在との間で観察された相関は、高血圧に関する素因を実証するためにこれら２種の多型（イントロン６およびエキソン８）に関する遺伝子型を解析しなければならないことを示しているが、これは、高度の技術的な入力と時間の消費が伴う。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
それゆえに、本発明の目的は、ｈｓｇｋ１遺伝子におけるさらなる多型を提供することであり、このような多型の、１つまたは他の型での存在は、患者における高血圧の表現型の出現と、エキソン８およびイントロン６における２種の既知の多型よりもずっと優れた相互関係を示す可能性がある。特に、高血圧に関する素因と相関し、および、それらの１つまたは他の型での存在がｈｓｇｋ１タンパク質の機能的な分子改変さえもたらすような単独のＳＮＰを提供することが極めて有利と予想される。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
この目的は、７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む多型である、ｈｓｇｋ１遺伝子の新規な多型を提供することによって達成された。このような７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入がある個体（ＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ）は、頻度がより高く、高血圧を発症させる素因はより低いことがわかってきた。その一方で、このような７３２／７３３位での挿入がない個体（ＷＴ／ＷＴ）は、頻度がより低く、高血圧を発症させる素因は著しく高い。これまでに得られた結果によれば、イントロン２における７３２／７３３位での多型に関して、この遺伝子型と高血圧を発症させる素因との相関は、エキソン８およびイントロン６における多型に関する対応する相関よりも極めて高い有意性を有すると思われる（表１を参照）。
【００１３】
その上、既知の予測プログラムを用いて得られた予測に基づき、ｈｓｇｋ１遺伝子の特異的なスプライス変異体の発現は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入の存在または非存在に依存すると考えられる。このようなｈｓｇｋ１遺伝子の特異的なスプライス変異体の発現は、ｈｓｇｋ１タンパク質の機能的な分子改変を起こす可能性があり、それにより、ｈｓｇｋ１活性が改変され、特にｈｓｇｋ１活性の増加が起こる。従って、このようなｈｓｇｋ１タンパク質の分子改変の生理学的な結果（特にｈｓｇｋ１活性の増加）は、最終的に高血圧の症状の発症をもたらす可能性がある。
【００１４】
第一の形態において、本発明は、高血圧を診断するための、配列番号１または配列番号２で示される核酸配列のフラグメントを含む、単離された一本鎖または二本鎖核酸の使用に関し、前記フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対、好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチド／塩基対、特に少なくとも２０個のヌクレオチド／塩基対であり、前記フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における多型（７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）を含む。
【００１５】
配列番号１は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位に、ヌクレオチドＧ（またはＧＴＰ）の挿入のないｈｓｇｋ１のゲノムＤＮＡ配列を記載しており、すなわちこれは、「野生型（ＷＴ）」配列と呼ばれ、配列番号２は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位に、ヌクレオチドＧ（またはＧＴＰ）の挿入のあるｈｓｇｋ１のゲノムＤＮＡ配列を記載しており、すなわちこれは、「挿入Ｇ（ＩｎｓＧ）」配列と呼ばれる。
【００１６】
第二の形態において、本発明は、高血圧を診断するためのキットに関し、本キットは、配列番号１または２に記載の配列のフラグメントを含む、単離された一本鎖または二本鎖核酸の少なくとも１つを含む。これに関連して、配列番号１または２からの前記フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対、好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチド／塩基対、特に少なくとも２０個のヌクレオチド／塩基対である。その上、配列番号１または２からの前記フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における多型（７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）を含まなければならない。
【００１７】
あるいは、高血圧を診断するためのキットは、上述の一本鎖または二本鎖核酸に加えて、またはその代わりに、このようなｈｓｇｋタンパク質の領域（ｈｓｇｋ１タンパク質におけるその存在は、対応するコードしているｈｓｇｋ遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入の存在に依存する）に対して向けられた抗体を少なくとも１つ含んでもよい。例えば、ｈｓｇｋ１遺伝子における７３２／７３３位でのＧの挿入の存在が、エキソンのスプライシングアウトを誘導する場合、このスプライシングアウトされたタンパク質領域に対して正確に向けられた抗体は、個体の多型タイプを検出するのに用いることができる。それゆえに、このような抗体は、高血圧を発症させる素因を診断するのに用いることができる。
【００１８】
第三の形態において、本発明は、高血圧を診断するための方法に関し、本方法は、以下の工程を含む：
ａ）個体から生体サンプルを採取する工程、
ｂ）場合により、ａ）に記載の生体サンプルから、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡを単離および／または増幅する工程、
ｃ）ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子を定量する工程。
【００１９】
工程ａ）において、生体サンプルは、試験個体から採取され、このような個体は、好ましくは哺乳動物であり、特にヒトである。この本発明に係る診断方法において、好ましく用いられる患者からの生体サンプルは、血液サンプルまたは唾液サンプルであり、これらは、細胞性の物質を含み、比較的少ない労力で患者から得ることができる。しかしながら、同様に細胞を含むその他の生体サンプル、例えば組織または細胞サンプルなどもまた、用いることができる。
【００２０】
工程ｂ）では、標準的な方法（Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ．およびＲｕｓｓｅｌｌ Ｄ．Ｗ．（２００１年）コールドスプリングハーバー，ニューヨーク，ＣＳＨＬプレス）を用いて、ａ）の生体サンプルから、ゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡ、または、ｍＲＮＡのいずれかを必要に応じて調製し、および／または、それらを必要に応じて増幅することができる。これに関連して、当業者周知のあらゆる適切な方法を用いることができる。また、場合により、特にそれ自体にＰＣＲ増幅工程が含まれる検出方法の工程ｃ）が使用される場合、このＤＮＡ単離工程またはＤＮＡ増幅工程を省略することもできる。
【００２１】
最終的に、工程ｃ）において、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位にヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子の数を定量する。これに関連して、２種のＷＴ対立遺伝子を有する個体は、高血圧を発症させる素因を有すると予想される。ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位における多型に関する対立遺伝子の定量／同定は、当業者既知の様々な方法を用いて実行することができる。以下、いくつかの好ましい方法をより詳細に説明する。しかしながら、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位にヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子の数の定量は、以下で説明される好ましい方法に限定されない。好ましくは、遺伝子型（または対立遺伝子の数）は、生体サンプルからのＤＮＡ（好ましくはゲノムＤＮＡ）を、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における前記７３２／７３３位で直接配列解析することによって、７３２／７３３位における多型に関して同定することができる。これを行うために、配列解析プライマーとして、ｈｓｇｋ１遺伝子の７３２／７３３位のごく近傍に由来する配列を有する短いオリゴヌクレオチドを利用可能にする既知の配列解析方法を用いることが必要である。
【００２２】
生体サンプルからのゲノムＤＮＡと、特異的ハイブリダイゼーションプローブとをハイブリダイズすることに基づくあらゆる既知の方法は、７３２／７３３位における多型に関する遺伝子型を同定するのに（または、対立遺伝子の数を定量するのに）同様に好ましいさらなる方法を構成する。
【００２３】
サザンブロッティングは、このようなハイブリダイゼーション方法の一例である。例えば、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位でのＧの挿入の存在により、制限エンドヌクレアーゼの切断部位を破壊するか、または、切断部位を形成する場合、特異的ハイブリダイゼーションプローブを用いて、ＷＴ対立遺伝子の対応するフラグメントの長さと異なる長さの核酸フラグメントを検出できる可能性がある。このようにして、７３２／７３３位における当該多型に関して特異的な遺伝子型が検出できると予想される。
【００２４】
７３２／７３３位でのＧの挿入の存在または非存在の結果として、特定のエキソンが欠失したオルタナティブスプライス変異体が発現される場合、スプライス変異体において欠失しているエキソン由来の特異的なハイブリダイゼーションプローブを用いて、当該７３２／７３３位における多型に関する遺伝子型を検出できるとも予想される。
【００２５】
ハイブリダイゼーション方法のその他の例は、生体サンプルからのゲノムＤＮＡと、標識された一本鎖オリゴヌクレオチド（長さが好ましくは１５〜２５個のヌクレオチドであり、７３２／７３３位でのＧの挿入を含む、または含まない）とをハイブリダイズさせる方法である。既知の方法を用いて各個別のオリゴヌクレオチドに関して実験的に試験することができるような極めて特異的なハイブリダイゼーション条件下で、完全にハイブリダイズしているオリゴヌクレオチドと、１つの単一塩基のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドとを区別することができる。
【００２６】
７３２／７３３位における多型に関する遺伝子型を同定するための（または、対立遺伝子の数を定量するための）その他の好ましい方法は、特に、ＰＣＲオリゴヌクレオチド伸長分析またはライゲーション分析である。
【００２７】
ＰＣＲオリゴヌクレオチド伸長分析の場合、例えば、配列番号２に基づくフラグメントの配列を有し、その３’末端に、多型７３２／７３３位におけるＧを有するオリゴヌクレオチドを提供できると予想される。このオリゴヌクレオチドと、ＷＴ対立遺伝子のサンプルフラグメント（Ｇの挿入を含まない）とをハイブリダイズさせた場合、３’末端にミスマッチがあるために伸長できず、最終的にそれに続くＰＣＲ反応でこのフラグメントは増幅されないと予想される。その一方で、このオリゴヌクレオチドと、ＩｎｓＧ対立遺伝子とをハイブリダイズさせると、オリゴヌクレオチドの３’末端で完全な塩基対が形成されるため、伸長が起こり、最終的にＰＣＲ増幅産物を得ることができると予想される。
【００２８】
ライゲーション分析は、究極的には、ＰＣＲオリゴヌクレオチド伸長分析と同じ原理に基づいている：それらの末端で正確な塩基対を有する二本鎖核酸フラグメントのみがその他の二本鎖核酸フラグメントにライゲート可能である。それゆえに、特異的ライゲーション産物の出現は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位でのＧの挿入の存在または非存在に依存して起こる。
【００２９】
驚くべきことに、本発明に係る多型と高血圧に関する素因との相関に加えて、本発明に係る多型といわゆるＱＴ間隔の長さとの第二の相関を見出した。ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位に関してＷＴ／ＷＴ遺伝子型の個体においては、ＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ遺伝子型の個体におけるＱＴ間隔よりも著しく短いＱＴ間隔が観察されている。ヘテロ接合型（ＷＴ／ＩｎｓＧ）の個体は、中度のＱＴ間隔（表３を参照）を有する。著しく延長されたＱＴ間隔は、いわゆるＱＴ延長症候群を発症させ、これは、それ自体心調律の障害を示し、心室細動から突然の心臓死に至ることもある。それゆえに、ＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ遺伝子型を有する個体は、ＱＴ延長症候群を発症させる素因を有する可能性がある。
【００３０】
実証されたＱＴ間隔の長さとｈｓｇｋ１遺伝子の遺伝学的な構成との間、特にＱＴ間隔の長さとｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位における多型との直接的な相関のために、その他のｓｇｋファミリーのヒト相同体の核酸も同様に、ＱＴ延長症候群を診断するに適していると考えられる。
【００３１】
ＥＣＧ測定器具を用いて検出できるＱ、ＲおよびＳ波は、脱分極を評価するための実験値を構成する。ＱＴ間隔は、ＥＣＧ測定器具を用いて検出される、Ｔ波の伝播の始まり（Ｑ偏差の出現）から脱分極の終了（Ｔ波の終了により特徴付けられる）までの時間と定義される。それゆえに、ＱＴ間隔は、心臓の新しい興奮状態の開始と、静止状態への戻りとの間に経過する時間を構成する。従って、著しく延長されたＱＴ間隔は、心調律の障害をもたらし、最終的にはＱＴ延長症候群をもたらすことが、すでに述べられている。
【００３２】
それゆえに、本発明はまた、ＱＴ延長症候群を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１遺伝子）の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの間の直接的な相関性の使用に関する。
【００３３】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体（その相同体は、上記の意味において、機能的な分子改変を包含する）は、これに関連して、対応するタンパク質の特性（特に触媒特性または基質特異性）が変更されるような様式で突然変異したｓｇｋファミリーの相同体と理解される。
【００３４】
本発明に係る、ＱＴ間隔と、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の遺伝学的な構成との直接的な相関は、以下のことを示す：遺伝子ｈｓｇｋ１、ｈｓｇｋ２またはｈｓｇｋ３における個々の突然変異が個々の患者で存在し、これら突然変異によりキナーゼｈｓｇｋ１、ｈｓｇｋ２またはｈｓｇｋ３の発現レベルまたは機能的な特性を改変させ、そして、遺伝学的に誘発させたＱＴ間隔延長を導き、および、最終的に、ＱＴ延長症候群の発症に関する素因となることが予想される。このような突然変異は、例えば、調節遺伝子領域、または、ｓｇｋ遺伝子座のイントロン配列に存在する可能性がある。その一方で、ｓｇｋ遺伝子座の遺伝学的な構成における個々の差は、遺伝子のコード領域に作用する可能性もある。次に、このようなコード領域における突然変異は、場合によっては、対応するキナーゼの機能的な変化（例えばキナーゼの触媒特性が改変されること）をもたらし、これら改変された特性はまた、最終的にＱＴ間隔に影響を与える可能性もある。従って、上述のタイプの突然変異はいずれも、ＱＴ間隔延長を発生させ、それにより最終的にＱＴ延長症候群の発症に関する素因となる可能性がある。
【００３５】
上述の、患者においてＱＴ延長症候群の発症に関する素因を発生させるｓｇｋファミリーのヒト相同体における突然変異は、一般的に、これら相同体のエキソン領域またはイントロン領域のいずれかにおけるいわゆる単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）と呼ばれる。それらの低い頻度で存在する型（以下、突然変異型という）において、ｈｓｇｋ遺伝子のエキソン領域におけるＳＮＰは、場合によっては、対応するｈｓｇｋタンパク質におけるアミノ酸置換を引き起こし、その結果としてキナーゼが機能的に改変される可能性がある。それらの突然変異タイプにおいて、ｈｓｇｋ遺伝子のイントロン領域、または、調節配列におけるＳＮＰは、場合によっては、対応するキナーゼの発現レベルにおける変化を起こす可能性がある。しかしながら、イントロン領域におけるＳＮＰはまた、それらが未成熟ｍＲＮＡのオルタナティブスプライシングに作用する場合、キナーゼの機能的な改変を起こす可能性がある。
【００３６】
本発明はまた、ＱＴ延長症候群を発症させる素因を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の配列またはそのフラグメントの１つ、特にｈｓｇｋ１遺伝子それ自体またはそのフラグメントの１つを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用に関する。これに関連して、上記一本鎖または二本鎖核酸の長さは、好ましくは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対である。
【００３７】
上述の一本鎖または二本鎖核酸に加えて、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質、特にｈｓｇｋ１の基質に対して向けられた特定の抗体も、ＱＴ延長症候群および高血圧を発症させる素因を診断するのに適している。これら診断用の抗体は、好ましくは、基質のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含む、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）のエピトープに対するものである。
【００３８】
好ましい実施形態において、ユビキチンタンパク質リガーゼＮｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）が、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質として用いられる。このユビキチンタンパク質リガーゼは、ｓｇｋファミリーのヒト相同体によって特異的にリン酸化されるタンパク質である［Ｄｅｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ等，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｄｄ４−２ ｂｙ Ｓｇｋ １ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＥＭＢＯ Ｊ．，２００１年；２０：７０５２〜７０５９；Ｓｎｙｄｅｒ等，Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ Ｎｅｄｄ４−２−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２年，２７７：５〜８］。ｈｓｇｋ１のリン酸化部位は、コンセンサス配列を有し（ＲＸＲＸＸＳ／Ｔ）、式中、Ｒはアルギニン、Ｓはセリン、Ｔはトレオニン、Ｘはいずれかの任意のアミノ酸である。Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）には、上述のコンセンサス配列が適合する２つの可能性のあるｈｓｇｋ１のリン酸化部位、すなわちアミノ酸位置３８２におけるセリン、および、アミノ酸位置４６８におけるセリンが存在する。
【００３９】
それゆえに、上述のＱＴ延長症候群を発症させる素因を診断するための抗体は、好ましくは、基質Ｎｅｄｄ４−２、特に好ましくは、ｈｓｇｋ１によるリン酸化をうける可能性のある部位の配列、すなわちコンセンサス配列（ＲＸＲＸＸＳ／Ｔ）を有するＮｅｄｄ４−２タンパク質の領域に対するものである。特に、これら抗体は、２つの可能性のあるリン酸化部位の少なくとも１つ、すなわちアミノ酸位置３８２におけるセリン、および／または、アミノ酸位置４６８におけるセリンを包含するＮｅｄｄ４−２タンパク質領域に対するものである。
【００４０】
その上、本発明は、ＱＴ延長症候群、または、ＱＴ間隔延長の兆候を示すその他の病気を診断するためのキットに関する。このＱＴ延長症候群を診断するためのキットは、好ましくは、ｓｇｋタンパク質ファミリーのヒト相同体に対する抗体、または、特に、ストリンジェントな条件下でｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体とハイブリダイズできる核酸を含む。本キットはまた、ｓｇｋタンパク質ファミリーのヒト相同体に対して向けられた抗体と、ストリンジェントな条件下でｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体とハイブリダイズする核酸とを共に含んでいてもよい。特に好ましくは、本発明に係るＱＴ延長症候群を診断するためのキットはまた、ｈｓｇｋ１タンパク質に対して向けられた抗体、または、ストリンジェントな条件下でｈｓｇｋ１遺伝子とハイブリダイズできる核酸を含んでもよい。
【００４１】
これに関連して、ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション温度と、ハイブリダイゼーション溶液におけるホルムアミド含量に関して関連のある専門的な文献で説明されている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ．およびＲｕｓｓｅｌｌ Ｄ．Ｗ．（２００１年）コールドスプリングハーバー，ニューヨーク，ＣＳＨＬプレス）ハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションを意味するものと理解される。
【００４２】
特に、診断キットは、ハイブリダイゼーションプローブとして、配列番号１または２で示される配列を有する一本鎖または二本鎖核酸を含んでもよく、前記核酸の長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、およびｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位の多型（ヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）を包含する。
【００４３】
本発明に係る診断キットは、特に、ｈｓｇｋ１タンパク質の領域（そのｈｓｇｋ１タンパク質における存在が、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入の存在に依存する）に対する特異的な抗体を提供する。特に、未成熟ｍＲＮＡにおけるこのＧ挿入の存在または非存在により、オルタナティブにスプライスアウトされるため、成熟ｍＲＮＡとそれから生産されたタンパク質には存在しなくなるような領域が、診断用の抗体が結合する免疫原性エピトープとして使用するのに適している。したがって、まさに、７３２／７３３位でのＧの挿入に依存してスプライスアウトされるような遺伝子領域とハイブリダイズできるｈｓｇｋ１遺伝子の核酸領域も、診断用ハイブリダイゼーションプローブとして使用するのに適している。
【００４４】
ＱＴ延長症候群を診断するためのキットはまた、好ましくは、特異的なハイブリダイゼーションプローブとして、ｈｓｇｋ１遺伝子における既知のＳＮＰ、特に、エキソン８におけるＳＮＰ（Ｃ２６１７Ｔ，Ｄ２４０Ｄ）、イントロン６におけるＳＮＰ（Ｔ２０７１Ｃ）、および／または、イントロン２の７３２／７３３位におけるＳＮＰ（Ｇの挿入）を包含する核酸フラグメントを含んでもよい。
【００４５】
ＱＴ延長症候群、および、ＱＴ間隔を同様に伴う類似の病気の治療的処置のために、本発明の記載の範囲内で実証されているｈｓｇｋ１遺伝子のファミリーの遺伝子の遺伝学的な構成とＱＴ間隔の長さとの相関はまた、ｓｇｋファミリーの機能的な活性化因子、または正の転写調節因子の使用も可能にする。これに関連して、「機能的な活性化因子」は、ｓｇｋファミリーの対応するキナーゼの生理学的な機能を活性化する物質と理解される。「正の転写調節因子」は、ｓｇｋファミリーの対応するキナーゼの発現を活性化する物質と理解される。
【００４６】
従って、本発明はまた、ＱＴ間隔を短くするための、特に、ＱＴ延長症候群の治療および／または予防のための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）の機能的な活性化因子または正の転写調節因子の使用に関する。ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）の既知の機能的な活性化因子および／または正の転写調節因子は、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、および、多数のサイトカイン、特にＴＧＦ−βである。
【００４７】
その上、本発明は、ＱＴ延長症候群を治療および／または予防するための医薬を製造するための、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、および、サイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる物質群より選択される基質の使用に関する。本発明はまた、ＱＴ延長症候群の治療および／または予防のための、上述の物質群から選択される物質を含む医薬に関する。
【００４８】
以下の実施例によって、本発明を詳細に説明する。
【００４９】
〔実施例〕
実施例１
異なる患者（双生児）におけるｈｓｇｋ１遺伝子の遺伝子型を、これら患者で測定された収縮期および弛緩期の血圧値と比較し、次に、統計学的に評価する相関性の研究を本発明の文脈の範囲内で実施した。
【００５０】
二卵性双生児の７５ペアを、相関分析に用いた（Ｂｕｓｊａｈｎ等，Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ １９９６年，１４：１１９５〜１１９９；Ｂｕｓｊａｈｎ等，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １９９７年，２９：１６５〜１７０）。全ての被検者は、ドイツ系のコーカサス人種に属し、ドイツの異なる地域の出身である。二卵性を確認し、さらなる分子遺伝子学的解析を行うために、双生児のペアと彼等の親から血液を採取した。それぞれの被検者は、前もって健康診断を受けた。どの被検者も、医学的に認識されている慢性的な病気のいずれにも罹っていないことがわかった。５分後、被検者の座った姿勢での血圧を、熟練した医師によって、標準型水銀血圧計を用いて測定した（１分の時間間隔で２回測定した）。２回測定の平均を血圧値として用いた。
【００５１】
相関性の研究に二卵性双生児を用いる利点は、同じ年齢であることと、それらの表現型への外的な影響は最小限と判断できることである（Ｍａｒｔｉｎ等，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １９９７年，１７：３８７〜３９２）。近年、複雑な遺伝病を説明するための双生児研究の重要性がＭａｒｔｉｎ等，１９９７年によって記載されている。
【００５２】
双生児のペアの二卵性を、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、５種のマイクロサテライトマーカーを増幅することによって確認した。このマイクロサテライトマーカー分析において、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）フラグメントは、異なるヒト個人において高度に可変性の領域を含む特異的オリゴヌクレオチドを用いたＰＣＲによって増幅される。これらゲノム領域における高度の可変性は、増幅したフラグメントのサイズのわずかな差によって検出することができ、この際、対応する遺伝子の遺伝子座が多様な場合、二重のバンド、いわゆる、マイクロサテライトバンドが、ＰＣＲ産物をゲル電気泳動により分画化した後に形成される（Ｂｅｃｋｅｒ等，Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｍｅｄ １９９７年，４２：２６０〜２６６）。
【００５３】
標的遺伝子の分子遺伝学的分析を実行するために、本発明のｈｓｇｋ１遺伝子において、ｈｓｇｋ１遺伝子座の極めて近接にある３種のさらなるマイクロサテライトマーカー領域（ｄ６ｓ４７２，ｄ６ｓｌ０３８，ｄ６ｓ２７０）をＰＣＲによって増幅し、次に、その他の双子と親からの対応するサンプルと比較した。この方法で、双生児が彼等の親由来の遺伝性の対立遺伝子を有するかどうか、および、試験の下でそれらが対立遺伝子に関して同一か、または異なっているかを決定することができた。構造方程式モデリング（ＳＥＭ）モデル（Ｅａｖｅｓ等，Ｂｅｈａｖ Ｇｅｎｅｔ １９９６年，２６：５１９〜５２５；Ｎｅａｌｅ，１９９７年：ＭＸ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌｉｎｇ，Ｂｏｘ １２６ ＭＣＶ，リッチモンド，バージニア州２３２９８：Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．第四版）を用いて相関分析を行った。このモデルは、ゼロ、１または２いずれかの同一な対立遺伝子を有する確率によって特徴付けられる試験ペアの分散・共分散行列に基づいている。表現型に関する分散は、全ての遺伝子の遺伝的バックグラウンド（Ａ）に基づく分散、標的遺伝子（この場合はｈｓｇｋ１遺伝子）の遺伝的バックグラウンド（Ｑ）に基づく分散、および、外的な影響による分散（Ｅ）に分けられた。
【００５４】
〔数１〕
ＶＡＲ＝Ａ2＋Ｑ2＋Ｅ2
試験ペアの共分散を、以下のように、３種の考えられる対立遺伝子の組合せＩＢＤ0、ＩＢＤ1およびＩＢＤ2（ＩＢＤは、血統が同一であること（ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｂｙ ｄｅｓｃｅｎｔ）を意味し、０、１または２は、同一な対立遺伝子の数である）と定義した：
〔数２〕
ＣＯＶ（ＩＢＤ0）＝０．５Ａ2
ＣＯＶ（ＩＢＤ1）＝０．５Ａ2＋０．５Ｑ2
ＣＯＶ（ＩＢＤ2）＝０．５Ａ2＋Ｑ2
【００５５】
ｈｓｇｋ１遺伝子座の遺伝学的な構成と、被検者の血圧との相関性を評価するために、標的遺伝子ｈｓｇｋ１に関する遺伝学的分散を考慮したモデルと、考慮していないモデルとの差を、それぞれχ2統計値として計算した。それぞれのペアとそれぞれの遺伝子の遺伝子座に関して、対立遺伝子の比率を、親の遺伝子型に基づいて、いわゆるマルチポイントモデルの平均によって計算した（ＭＡＰＭＡＫＥＲ／ＳＩＢＳ；Ｋｒｕｇｌｙａｋ等，Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ １９９５年，５７：４３９〜４５４）。
【００５６】
近年、上述のχ2統計値と比較した分散・共分散評価に基づく分析方法の、より多くの有益な値（Ｓ．Ａ．Ｇ．Ｅ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｌｅａｓｅ ２．２．Ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｐｒｏｇｒａｍ ｐａｃｋａｇｅ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，Ｃａｓｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，クリーブランド，オハイオ州，米国，１９９６年）が模擬研究で確認された（Ｆｕｌｋｅｒ等，Ｂｅｈａｖ Ｇｅｎ １９９６年，２６：５２７〜５３２）。ＬａｎｄｅｒおよびＫｒｕｇｌｙａｋの基準（Ｌａｎｄｅｒ等，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １９９５年，１１：２４１〜２４６）に関して有意な相関であるかどうかを確かめるために、ｐ＜０．０１のエラーの確率が許容されている。
【００５７】
表１は、この相関性の研究の結果を示す。
【表１】
【００５８】
表１からわかるように、確認されたエラーの確率ｐに関する低い値は、ｐ＜０．０１の許容されたエラー確率を超過しないか、または、わずかしか超過しておらず、すなわち、ｈｓｇｋ１遺伝子の遺伝子座に関する遺伝学的分散と、表現型によって確認された測定された血圧の分散との間に直接的な相関性があることが証明された。
【００５９】
実施例２
ｈｓｇｋ１遺伝子のゲノムの構成はすでに記載されている（Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，５１，２９９［１９９８年］，http://www.ensembl.org/Homo#sapiens/geneview?gene=ENSG00000118515）。
【００６０】
その存在が高血圧を発症させる素因と関連するＳＮＰを同定するために、まず、データベースで公開されているｈｓｇｋ１遺伝子におけるＳＮＰを調査して、そのＳＮＰが真正のＳＮＰであり単なる配列解析エラーではないかどうか、および、そのＳＮＰが、高血圧に関する素因の診断検出のための基礎を形成するの十分な多型であるかどうかを決定した。エキソン８におけるＳＮＰ ｒｓ １０５７２９３（これは、ＣのＴでの置換に関する）（http://www.ensembl.org/Homo#sapiens/snpview?snp=1057293;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp#ref.cgi?type=rs&rs=1057293）、および、第二のＳＮＰ（これは、ｈｓｇｋ１遺伝子内に、イントロン６からエキソン７へのドナースプライス部位において第一のＳＮＰから正確に５５１ｂｐ離れて位置し、ＴのＣでの置換に関する）が、この方法においてすでに位置決定されている。
【００６１】
実施例３
７５の双生児ペアのランダムサンプルから、血液サンプルを採取した。血液サンプルからｈｓｇｋ１遺伝子のゲノムＤＮＡをＰＣＲによって増幅するした後、ｈｓｇｋ１遺伝子のエキソンおよびイントロン（ただし、プロモーター領域は含まず）を、適切な配列解析プライマーを用いて直接的に完全に配列解析した。異なる被検者由来のｈｓｇｋ１遺伝子の配列を比較すると、イントロン２の７３２／７３３位における追加のヌクレオチドＧの挿入で構成されるさらなる多型が見つかった。その上、この、個々の被検者のｈｓｇｋ１遺伝子における７３２／７３３位でのＧの挿入の存在または非存在は、個々の被検者で測定された血圧と有意な相関を示した：平均して、ＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ遺伝子型は、低い頻度のＷＴ／ＷＴ遺伝子型、および、ヘテロ接合型のＷＴ／ＩｎｓＧ遺伝子型で示される血圧値より、顕著に低い収縮期および弛緩期の血圧値を示した（表３を参照）。それに対して、表２に示すように、ｈｓｇｋ１遺伝子におけるその他の多型は、測定された血圧との相関があまり有意ではないか（例えば、イントロン６（Ｃ２０７１Ｔ）およびエキソン８（Ｔ２６１７Ｃ，Ｄ２４０Ｄ））、または、測定された血圧と相関を示さなかった（例えば イントロン３位置のＩｎｓ１３＋ｘＴ，Ｔ１３００〜１３１２、および、イントロン４（Ｃ１４５１Ｔ）、および、イントロン７位置の２５４４ｄｅｌＡ）。
【００６２】
被検者において様に測定されたＥＣＧ値はまた、個々の被検者で決定されたＱＴ間隔と、被検者のｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位における多型に関する遺伝子型との間に著しい相関があったことを示した：これに関連して、低い頻度のＷＴ／ＷＴ遺伝子型を有する被検者は、ヘテロ接合型のＷＴ／ＩｎｓＧ被検者のＱＴ間隔に比べて著しく短いＱＴ間隔を示し、一方で、その後者は、かわりに、より高頻度のＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ遺伝子型を有する被検者のＱＴ間隔に比べて顕著に短いＱＴ間隔を示した（表３を参照）。ＱＴ間隔が長くなると、特にＱＴ延長症候群のような心調律の障害を起こす危険を増加させる。その結果として、ｈｓｇｋ１遺伝子の７３２／７３３位におけるイントロン２における多型の遺伝子型と、一方ではＱＴ延長症候群に関する素因との、および、他方では高血圧に関する素因との間の逆の相関が見い出される。これらの相関は、それぞれの場合において、高血圧およびＱＴ延長症候群の診断、治療および予防に用いることができる。
【００６３】
【表２】
【００６４】
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高血圧を診断するための、ｈｓｇｋフラグメントを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用に関し、前記フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、その上、前記フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入の存在または非存在によって生じる多型を含む。
【０００２】
その上、本発明は、ＱＴ延長症候群を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの直接的な相関の使用に関し、さらに、ＱＴ延長症候群を診断するための、ｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体の核酸、またはそのフラグメントの１つの使用に関する。特に、ｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体における個々のヌクレオチド多型（単一ヌクレオチド多型＝ＳＮＰ）はまた、本発明において、遺伝学的に決定されたＱＴ延長症候群に関する素因を診断するのに用いることができる。
【０００３】
さらなる形態において、本発明は、ＱＴ延長症候群を治療および／または予防するための医薬を製造するための、ｓｇｋファミリーの遺伝子発現を増加させる機能的な活性化因子または転写因子の使用に関する。
【背景技術】
【０００４】
多数の細胞外シグナルが、これらシグナルの細胞膜およびその受容体から細胞質および細胞核への迅速な移動を確実にする目的で、細胞内のリン酸化／脱リン酸化カスケードに導かれる。このような可逆的なシグナルトランスフェクションカスケードの特異性は、リン酸基を個々の基質に移動させる様々なタンパク質（特にキナーゼ）によって可能になる。
【０００５】
血清および糖質コルチコイド依存性キナーゼ（ｓｇｋ）は、血清および糖質コルチコイドによって発現が増加するセリン／トレオニンキナーゼであるが、これはラット乳ガン細胞から最初にクローニングされた（Ｗｅｂｓｔｅｒ等，１９９３年）。ｓｇｋのヒト型、すなわちｈｓｇｋ１は肝細胞からクローニングされた（Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等，１９９７年）。ｈｓｇｋ１の発現は、細胞容量を調節することにより影響を受けることが見出された。ラットｓｇｋの発現については、このような細胞容量への依存性を実証することは未だにできていない。さらに、ラットのキナーゼが、上皮性Ｎａ+チャネル（ＥＮａＣ）を刺激することも見出された（Ｃｈｅｎ等，１９９９年；Ｎａｒａｙ−Ｐｅｊｅｓ−Ｔｏｔｈ等，１９９９年）。ＥＮａＣは、また、腎臓でのＮａ+排出において重要な役割を果たす。ＥＮａＣ活性の増加により、腎臓のナトリウムイオンの停留が増加し、その結果高血圧が発症することが、ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２で実証されている。
【０００６】
最終的に、ヒトｓｇｋのヒトファミリー２種のさらなるメンバー、すなわちｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３がクローニングされており（Ｋｏｂａｙａｓｈｉ等，１９９９年）、これらの遺伝子はいずれもｈｓｇｋ１と同様に、ＰＩ３キナーゼ経路を経由してインスリンおよびＩＧＦ１によって活性化される。電気生理学的な実験により、ｈｓｇｋ２とｈｓｇｋ３との共発現が、同様に、ＥＮａＣ活性の顕著な増加をもたらすことが示されている。
【０００７】
ＤＥ１９７０８１７３Ａ１によれば、ｈｓｇｋ１は、細胞容量の変化が重要な病態生理学的な役割を果たしている多くの病気、例えば高ナトリウム血症、低ナトリウム血症、糖尿病、腎機能不全、過剰代謝、肝性脳症、および、細菌またはウイルス感染に関連する実質的な診断上の可能性を有することは明らかである。
【０００８】
ＷＯ００／６２７８１では、ｈｓｇｋ１は、内皮性Ｎａ+チャネルを活性化し、それにより腎臓でのＮａ+再吸収を増加させることが報告されている。増加した腎臓のＮａ+再吸収は高血圧を併うので、この場合、ｈｓｇｋ１の発現の増加は、高血圧をもたし、その一方で、ｈｓｇｋ１の発現の減少は、最終的には低血圧をもたらすと予想される。
【０００９】
ＤＥ１００４２１３７はまた、ヒト相同体ｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３の過剰発現または過剰活性、ＥＮａＣの過活性化、それにより生じる腎臓のＮａ+再吸収の増加と、それにより発症する高血圧との同様の関連性を報告している。その上、この文献は、本態性高血圧に関する、キナーゼｈｓｇｋ２およびｈｓｇｋ３の診断上の可能性をすでに論じている。
【００１０】
ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２は、ｈｓｇｋ１遺伝子における個々のヌクレオチドの２つの異なる多型（単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ））の存在と、遺伝学的に決定された高血圧に関する素因との関連を開示している。この場合において、多型は、ｈｓｇｋ１遺伝子における、イントロン６における多型（Ｔ→Ｃ）、および、エキソン８における多型（Ｃ→Ｔ）である。特に、ＷＯ０２／０７４９８７Ａ２における表５から、解析されている２種のＳＮＰ間の強い相関不均衡があることは明らかである：エキソン８におけるＳＮＰのＣＣキャリアーのほとんどはまた、イントロン６ＴＴキャリアーであるが（すなわち６４％）、一方で、同時にイントロン６ＣＣキャリアーでもあるエキソン８ＴＴキャリアーはほんのわずかである（わずか２％）。このような、イントロン６およびエキソン８における多型の存在との間で観察された相関は、高血圧に関する素因を実証するためにこれら２種の多型（イントロン６およびエキソン８）に関する遺伝子型を解析しなければならないことを示しているが、これは、高度の技術的な入力と時間の消費が伴う。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
それゆえに、本発明の目的は、ｈｓｇｋ１遺伝子におけるさらなる多型を提供することであり、このような多型の、１つまたは他の型での存在は、患者における高血圧の表現型の出現と、エキソン８およびイントロン６における２種の既知の多型よりもずっと優れた相互関係を示す可能性がある。特に、高血圧に関する素因と相関し、および、それらの１つまたは他の型での存在がｈｓｇｋ１タンパク質の機能的な分子改変さえもたらすような単独のＳＮＰを提供することが極めて有利と予想される。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
この目的は、７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む多型である、ｈｓｇｋ１遺伝子の新規な多型を提供することによって達成された。このような７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入がある個体（ＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ）は、頻度がより高く、高血圧を発症させる素因はより低いことがわかってきた。その一方で、このような７３２／７３３位での挿入がない個体（ＷＴ／ＷＴ）は、頻度がより低く、高血圧を発症させる素因は著しく高い。これまでに得られた結果によれば、イントロン２における７３２／７３３位での多型に関して、この遺伝子型と高血圧を発症させる素因との相関は、エキソン８およびイントロン６における多型に関する対応する相関よりも極めて高い有意性を有すると思われる（表１を参照）。
【００１３】
その上、既知の予測プログラムを用いて得られた予測に基づき、ｈｓｇｋ１遺伝子の特異的なスプライス変異体の発現は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入の存在または非存在に依存すると考えられる。このようなｈｓｇｋ１遺伝子の特異的なスプライス変異体の発現は、ｈｓｇｋ１タンパク質の機能的な分子改変を起こす可能性があり、それにより、ｈｓｇｋ１活性が改変され、特にｈｓｇｋ１活性の増加が起こる。従って、このようなｈｓｇｋ１タンパク質の分子改変の生理学的な結果（特にｈｓｇｋ１活性の増加）は、最終的に高血圧の症状の発症をもたらす可能性がある。
【００１４】
第一の形態において、本発明は、高血圧を診断するための、配列番号１または配列番号２で示される核酸配列のフラグメントを含む、単離された一本鎖または二本鎖核酸の使用に関し、前記フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対、好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチド／塩基対、特に少なくとも２０個のヌクレオチド／塩基対であり、前記フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における多型（７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）を含む。
【００１５】
配列番号１は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位に、ヌクレオチドＧ（またはＧＴＰ）の挿入のないｈｓｇｋ１のゲノムＤＮＡ配列を記載しており、すなわちこれは、「野生型（ＷＴ）」配列と呼ばれ、配列番号２は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位に、ヌクレオチドＧ（またはＧＴＰ）の挿入のあるｈｓｇｋ１のゲノムＤＮＡ配列を記載しており、すなわちこれは、「挿入Ｇ（ＩｎｓＧ）」配列と呼ばれる。
【００１６】
第二の形態において、本発明は、高血圧を診断するためのキットに関し、本キットは、配列番号１または２に記載の配列のフラグメントを含む、単離された一本鎖または二本鎖核酸の少なくとも１つを含む。これに関連して、配列番号１または２からの前記フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対、好ましくは少なくとも１５個のヌクレオチド／塩基対、特に少なくとも２０個のヌクレオチド／塩基対である。その上、配列番号１または２からの前記フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における多型（７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）を含まなければならない。
【００１７】
あるいは、高血圧を診断するためのキットは、上述の一本鎖または二本鎖核酸に加えて、またはその代わりに、このようなｈｓｇｋタンパク質の領域（ｈｓｇｋ１タンパク質におけるその存在は、対応するコードしているｈｓｇｋ遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入の存在に依存する）に対して向けられた抗体を少なくとも１つ含んでもよい。例えば、ｈｓｇｋ１遺伝子における７３２／７３３位でのＧの挿入の存在が、エキソンのスプライシングアウトを誘導する場合、このスプライシングアウトされたタンパク質領域に対して正確に向けられた抗体は、個体の多型タイプを検出するのに用いることができる。それゆえに、このような抗体は、高血圧を発症させる素因を診断するのに用いることができる。
【００１８】
第三の形態において、本発明は、高血圧を診断するための方法に関し、本方法は、以下の工程を含む：
ａ）個体から生体サンプルを採取する工程、
ｂ）場合により、ａ）に記載の生体サンプルから、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡを単離および／または増幅する工程、
ｃ）ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子を定量する工程。
【００１９】
工程ａ）において、生体サンプルは、試験個体から採取され、このような個体は、好ましくは哺乳動物であり、特にヒトである。この本発明に係る診断方法において、好ましく用いられる患者からの生体サンプルは、血液サンプルまたは唾液サンプルであり、これらは、細胞性の物質を含み、比較的少ない労力で患者から得ることができる。しかしながら、同様に細胞を含むその他の生体サンプル、例えば組織または細胞サンプルなどもまた、用いることができる。
【００２０】
工程ｂ）では、標準的な方法（Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ．およびＲｕｓｓｅｌｌ Ｄ．Ｗ．（２００１年）コールドスプリングハーバー，ニューヨーク，ＣＳＨＬプレス）を用いて、ａ）の生体サンプルから、ゲノムＤＮＡもしくはｃＤＮＡ、または、ｍＲＮＡのいずれかを必要に応じて調製し、および／または、それらを必要に応じて増幅することができる。これに関連して、当業者周知のあらゆる適切な方法を用いることができる。また、場合により、特にそれ自体にＰＣＲ増幅工程が含まれる検出方法の工程ｃ）が使用される場合、このＤＮＡ単離工程またはＤＮＡ増幅工程を省略することもできる。
【００２１】
最終的に、工程ｃ）において、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位にヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子の数を定量する。これに関連して、２種のＷＴ対立遺伝子を有する個体は、高血圧を発症させる素因を有すると予想される。ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位における多型に関する対立遺伝子の定量／同定は、当業者既知の様々な方法を用いて実行することができる。以下、いくつかの好ましい方法をより詳細に説明する。しかしながら、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位にヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子の数の定量は、以下で説明される好ましい方法に限定されない。好ましくは、遺伝子型（または対立遺伝子の数）は、生体サンプルからのＤＮＡ（好ましくはゲノムＤＮＡ）を、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における前記７３２／７３３位で直接配列解析することによって、７３２／７３３位における多型に関して同定することができる。これを行うために、配列解析プライマーとして、ｈｓｇｋ１遺伝子の７３２／７３３位のごく近傍に由来する配列を有する短いオリゴヌクレオチドを利用可能にする既知の配列解析方法を用いることが必要である。
【００２２】
生体サンプルからのゲノムＤＮＡと、特異的ハイブリダイゼーションプローブとをハイブリダイズすることに基づくあらゆる既知の方法は、７３２／７３３位における多型に関する遺伝子型を同定するのに（または、対立遺伝子の数を定量するのに）同様に好ましいさらなる方法を構成する。
【００２３】
サザンブロッティングは、このようなハイブリダイゼーション方法の一例である。例えば、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位でのＧの挿入の存在により、制限エンドヌクレアーゼの切断部位を破壊するか、または、切断部位を形成する場合、特異的ハイブリダイゼーションプローブを用いて、ＷＴ対立遺伝子の対応するフラグメントの長さと異なる長さの核酸フラグメントを検出できる可能性がある。このようにして、７３２／７３３位における当該多型に関して特異的な遺伝子型が検出できると予想される。
【００２４】
７３２／７３３位でのＧの挿入の存在または非存在の結果として、特定のエキソンが欠失したオルタナティブスプライス変異体が発現される場合、スプライス変異体において欠失しているエキソン由来の特異的なハイブリダイゼーションプローブを用いて、当該７３２／７３３位における多型に関する遺伝子型を検出できるとも予想される。
【００２５】
ハイブリダイゼーション方法のその他の例は、生体サンプルからのゲノムＤＮＡと、標識された一本鎖オリゴヌクレオチド（長さが好ましくは１５〜２５個のヌクレオチドであり、７３２／７３３位でのＧの挿入を含む、または含まない）とをハイブリダイズさせる方法である。既知の方法を用いて各個別のオリゴヌクレオチドに関して実験的に試験することができるような極めて特異的なハイブリダイゼーション条件下で、完全にハイブリダイズしているオリゴヌクレオチドと、１つの単一塩基のミスマッチを有するオリゴヌクレオチドとを区別することができる。
【００２６】
７３２／７３３位における多型に関する遺伝子型を同定するための（または、対立遺伝子の数を定量するための）その他の好ましい方法は、特に、ＰＣＲオリゴヌクレオチド伸長分析またはライゲーション分析である。
【００２７】
ＰＣＲオリゴヌクレオチド伸長分析の場合、例えば、配列番号２に基づくフラグメントの配列を有し、その３’末端に、多型７３２／７３３位におけるＧを有するオリゴヌクレオチドを提供できると予想される。このオリゴヌクレオチドと、ＷＴ対立遺伝子のサンプルフラグメント（Ｇの挿入を含まない）とをハイブリダイズさせた場合、３’末端にミスマッチがあるために伸長できず、最終的にそれに続くＰＣＲ反応でこのフラグメントは増幅されないと予想される。その一方で、このオリゴヌクレオチドと、ＩｎｓＧ対立遺伝子とをハイブリダイズさせると、オリゴヌクレオチドの３’末端で完全な塩基対が形成されるため、伸長が起こり、最終的にＰＣＲ増幅産物を得ることができると予想される。
【００２８】
ライゲーション分析は、究極的には、ＰＣＲオリゴヌクレオチド伸長分析と同じ原理に基づいている：それらの末端で正確な塩基対を有する二本鎖核酸フラグメントのみがその他の二本鎖核酸フラグメントにライゲート可能である。それゆえに、特異的ライゲーション産物の出現は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位でのＧの挿入の存在または非存在に依存して起こる。
【００２９】
驚くべきことに、本発明に係る多型と高血圧に関する素因との相関に加えて、本発明に係る多型といわゆるＱＴ間隔の長さとの第二の相関を見出した。ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位に関してＷＴ／ＷＴ遺伝子型の個体においては、ＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ遺伝子型の個体におけるＱＴ間隔よりも著しく短いＱＴ間隔が観察されている。ヘテロ接合型（ＷＴ／ＩｎｓＧ）の個体は、中度のＱＴ間隔（表３を参照）を有する。著しく延長されたＱＴ間隔は、いわゆるＱＴ延長症候群を発症させ、これは、それ自体心調律の障害を示し、心室細動から突然の心臓死に至ることもある。それゆえに、ＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ遺伝子型を有する個体は、ＱＴ延長症候群を発症させる素因を有する可能性がある。
【００３０】
実証されたＱＴ間隔の長さとｈｓｇｋ１遺伝子の遺伝学的な構成との間、特にＱＴ間隔の長さとｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位における多型との直接的な相関のために、その他のｓｇｋファミリーのヒト相同体の核酸も同様に、ＱＴ延長症候群を診断するに適していると考えられる。
【００３１】
ＥＣＧ測定器具を用いて検出できるＱ、ＲおよびＳ波は、脱分極を評価するための実験値を構成する。ＱＴ間隔は、ＥＣＧ測定器具を用いて検出される、Ｔ波の伝播の始まり（Ｑ偏差の出現）から脱分極の終了（Ｔ波の終了により特徴付けられる）までの時間と定義される。それゆえに、ＱＴ間隔は、心臓の新しい興奮状態の開始と、静止状態への戻りとの間に経過する時間を構成する。従って、著しく延長されたＱＴ間隔は、心調律の障害をもたらし、最終的にはＱＴ延長症候群をもたらすことが、すでに述べられている。
【００３２】
それゆえに、本発明はまた、ＱＴ延長症候群を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１遺伝子）の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの間の直接的な相関性の使用に関する。
【００３３】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体（その相同体は、上記の意味において、機能的な分子改変を包含する）は、これに関連して、対応するタンパク質の特性（特に触媒特性または基質特異性）が変更されるような様式で突然変異したｓｇｋファミリーの相同体と理解される。
【００３４】
本発明に係る、ＱＴ間隔と、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の遺伝学的な構成との直接的な相関は、以下のことを示す：遺伝子ｈｓｇｋ１、ｈｓｇｋ２またはｈｓｇｋ３における個々の突然変異が個々の患者で存在し、これら突然変異によりキナーゼｈｓｇｋ１、ｈｓｇｋ２またはｈｓｇｋ３の発現レベルまたは機能的な特性を改変させ、そして、遺伝学的に誘発させたＱＴ間隔延長を導き、および、最終的に、ＱＴ延長症候群の発症に関する素因となることが予想される。このような突然変異は、例えば、調節遺伝子領域、または、ｓｇｋ遺伝子座のイントロン配列に存在する可能性がある。その一方で、ｓｇｋ遺伝子座の遺伝学的な構成における個々の差は、遺伝子のコード領域に作用する可能性もある。次に、このようなコード領域における突然変異は、場合によっては、対応するキナーゼの機能的な変化（例えばキナーゼの触媒特性が改変されること）をもたらし、これら改変された特性はまた、最終的にＱＴ間隔に影響を与える可能性もある。従って、上述のタイプの突然変異はいずれも、ＱＴ間隔延長を発生させ、それにより最終的にＱＴ延長症候群の発症に関する素因となる可能性がある。
【００３５】
上述の、患者においてＱＴ延長症候群の発症に関する素因を発生させるｓｇｋファミリーのヒト相同体における突然変異は、一般的に、これら相同体のエキソン領域またはイントロン領域のいずれかにおけるいわゆる単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）と呼ばれる。それらの低い頻度で存在する型（以下、突然変異型という）において、ｈｓｇｋ遺伝子のエキソン領域におけるＳＮＰは、場合によっては、対応するｈｓｇｋタンパク質におけるアミノ酸置換を引き起こし、その結果としてキナーゼが機能的に改変される可能性がある。それらの突然変異タイプにおいて、ｈｓｇｋ遺伝子のイントロン領域、または、調節配列におけるＳＮＰは、場合によっては、対応するキナーゼの発現レベルにおける変化を起こす可能性がある。しかしながら、イントロン領域におけるＳＮＰはまた、それらが未成熟ｍＲＮＡのオルタナティブスプライシングに作用する場合、キナーゼの機能的な改変を起こす可能性がある。
【００３６】
本発明はまた、ＱＴ延長症候群を発症させる素因を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の配列またはそのフラグメントの１つ、特にｈｓｇｋ１遺伝子それ自体またはそのフラグメントの１つを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用に関する。これに関連して、上記一本鎖または二本鎖核酸の長さは、好ましくは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対である。
【００３７】
上述の一本鎖または二本鎖核酸に加えて、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質、特にｈｓｇｋ１の基質に対して向けられた特定の抗体も、ＱＴ延長症候群および高血圧を発症させる素因を診断するのに適している。これら診断用の抗体は、好ましくは、基質のリン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含む、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）のエピトープに対するものである。
【００３８】
好ましい実施形態において、ユビキチンタンパク質リガーゼＮｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）が、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質として用いられる。このユビキチンタンパク質リガーゼは、ｓｇｋファミリーのヒト相同体によって特異的にリン酸化されるタンパク質である［Ｄｅｂｏｎｎｅｖｉｌｌｅ等，Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｅｄｄ４−２ ｂｙ Ｓｇｋ １ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＥＭＢＯ Ｊ．，２００１年；２０：７０５２〜７０５９；Ｓｎｙｄｅｒ等，Ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ Ｎｅｄｄ４−２−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｎａ（＋）ｃｈａｎｎｅｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２年，２７７：５〜８］。ｈｓｇｋ１のリン酸化部位は、コンセンサス配列を有し（ＲＸＲＸＸＳ／Ｔ）、式中、Ｒはアルギニン、Ｓはセリン、Ｔはトレオニン、Ｘはいずれかの任意のアミノ酸である。Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）には、上述のコンセンサス配列が適合する２つの可能性のあるｈｓｇｋ１のリン酸化部位、すなわちアミノ酸位置３８２におけるセリン、および、アミノ酸位置４６８におけるセリンが存在する。
【００３９】
それゆえに、上述のＱＴ延長症候群を発症させる素因を診断するための抗体は、好ましくは、基質Ｎｅｄｄ４−２、特に好ましくは、ｈｓｇｋ１によるリン酸化をうける可能性のある部位の配列、すなわちコンセンサス配列（ＲＸＲＸＸＳ／Ｔ）を有するＮｅｄｄ４−２タンパク質の領域に対するものである。特に、これら抗体は、２つの可能性のあるリン酸化部位の少なくとも１つ、すなわちアミノ酸位置３８２におけるセリン、および／または、アミノ酸位置４６８におけるセリンを包含するＮｅｄｄ４−２タンパク質領域に対するものである。
【００４０】
その上、本発明は、ＱＴ延長症候群、または、ＱＴ間隔延長の兆候を示すその他の病気を診断するためのキットに関する。このＱＴ延長症候群を診断するためのキットは、好ましくは、ｓｇｋタンパク質ファミリーのヒト相同体に対する抗体、または、特に、ストリンジェントな条件下でｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体とハイブリダイズできる核酸を含む。本キットはまた、ｓｇｋタンパク質ファミリーのヒト相同体に対して向けられた抗体と、ストリンジェントな条件下でｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体とハイブリダイズする核酸とを共に含んでいてもよい。特に好ましくは、本発明に係るＱＴ延長症候群を診断するためのキットはまた、ｈｓｇｋ１タンパク質に対して向けられた抗体、または、ストリンジェントな条件下でｈｓｇｋ１遺伝子とハイブリダイズできる核酸を含んでもよい。
【００４１】
これに関連して、ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションは、ハイブリダイゼーション温度と、ハイブリダイゼーション溶液におけるホルムアミド含量に関して関連のある専門的な文献で説明されている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ．およびＲｕｓｓｅｌｌ Ｄ．Ｗ．（２００１年）コールドスプリングハーバー，ニューヨーク，ＣＳＨＬプレス）ハイブリダイゼーション条件下でのハイブリダイゼーションを意味するものと理解される。
【００４２】
特に、診断キットは、ハイブリダイゼーションプローブとして、配列番号１または２で示される配列を有する一本鎖または二本鎖核酸を含んでもよく、前記核酸の長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、およびｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位の多型（ヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）を包含する。
【００４３】
本発明に係る診断キットは、特に、ｈｓｇｋ１タンパク質の領域（そのｈｓｇｋ１タンパク質における存在が、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのＧの挿入の存在に依存する）に対する特異的な抗体を提供する。特に、未成熟ｍＲＮＡにおけるこのＧ挿入の存在または非存在により、オルタナティブにスプライスアウトされるため、成熟ｍＲＮＡとそれから生産されたタンパク質には存在しなくなるような領域が、診断用の抗体が結合する免疫原性エピトープとして使用するのに適している。したがって、まさに、７３２／７３３位でのＧの挿入に依存してスプライスアウトされるような遺伝子領域とハイブリダイズできるｈｓｇｋ１遺伝子の核酸領域も、診断用ハイブリダイゼーションプローブとして使用するのに適している。
【００４４】
ＱＴ延長症候群を診断するためのキットはまた、好ましくは、特異的なハイブリダイゼーションプローブとして、ｈｓｇｋ１遺伝子における既知のＳＮＰ、特に、エキソン８におけるＳＮＰ（Ｃ２６１７Ｔ，Ｄ２４０Ｄ）、イントロン６におけるＳＮＰ（Ｔ２０７１Ｃ）、および／または、イントロン２の７３２／７３３位におけるＳＮＰ（Ｇの挿入）を包含する核酸フラグメントを含んでもよい。
【００４５】
ＱＴ延長症候群、および、ＱＴ間隔を同様に伴う類似の病気の治療的処置のために、本発明の記載の範囲内で実証されているｈｓｇｋ１遺伝子のファミリーの遺伝子の遺伝学的な構成とＱＴ間隔の長さとの相関はまた、ｓｇｋファミリーの機能的な活性化因子、または正の転写調節因子の使用も可能にする。これに関連して、「機能的な活性化因子」は、ｓｇｋファミリーの対応するキナーゼの生理学的な機能を活性化する物質と理解される。「正の転写調節因子」は、ｓｇｋファミリーの対応するキナーゼの発現を活性化する物質と理解される。
【００４６】
従って、本発明はまた、ＱＴ間隔を短くするための、特に、ＱＴ延長症候群の治療および／または予防のための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）の機能的な活性化因子または正の転写調節因子の使用に関する。ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）の既知の機能的な活性化因子および／または正の転写調節因子は、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、および、多数のサイトカイン、特にＴＧＦ−βである。
【００４７】
その上、本発明は、ＱＴ延長症候群を治療および／または予防するための医薬を製造するための、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、および、サイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる物質群より選択される基質の使用に関する。本発明はまた、ＱＴ延長症候群の治療および／または予防のための、上述の物質群から選択される物質を含む医薬に関する。
【００４８】
以下の実施例によって、本発明を詳細に説明する。
【００４９】
〔実施例〕
実施例１
異なる患者（双生児）におけるｈｓｇｋ１遺伝子の遺伝子型を、これら患者で測定された収縮期および弛緩期の血圧値と比較し、次に、統計学的に評価する相関性の研究を本発明の文脈の範囲内で実施した。
【００５０】
二卵性双生児の７５ペアを、相関分析に用いた（Ｂｕｓｊａｈｎ等，Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ １９９６年，１４：１１９５〜１１９９；Ｂｕｓｊａｈｎ等，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ １９９７年，２９：１６５〜１７０）。全ての被検者は、ドイツ系のコーカサス人種に属し、ドイツの異なる地域の出身である。二卵性を確認し、さらなる分子遺伝子学的解析を行うために、双生児のペアと彼等の親から血液を採取した。それぞれの被検者は、前もって健康診断を受けた。どの被検者も、医学的に認識されている慢性的な病気のいずれにも罹っていないことがわかった。５分後、被検者の座った姿勢での血圧を、熟練した医師によって、標準型水銀血圧計を用いて測定した（１分の時間間隔で２回測定した）。２回測定の平均を血圧値として用いた。
【００５１】
相関性の研究に二卵性双生児を用いる利点は、同じ年齢であることと、それらの表現型への外的な影響は最小限と判断できることである（Ｍａｒｔｉｎ等，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １９９７年，１７：３８７〜３９２）。近年、複雑な遺伝病を説明するための双生児研究の重要性がＭａｒｔｉｎ等，１９９７年によって記載されている。
【００５２】
双生児のペアの二卵性を、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いて、５種のマイクロサテライトマーカーを増幅することによって確認した。このマイクロサテライトマーカー分析において、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）フラグメントは、異なるヒト個人において高度に可変性の領域を含む特異的オリゴヌクレオチドを用いたＰＣＲによって増幅される。これらゲノム領域における高度の可変性は、増幅したフラグメントのサイズのわずかな差によって検出することができ、この際、対応する遺伝子の遺伝子座が多様な場合、二重のバンド、いわゆる、マイクロサテライトバンドが、ＰＣＲ産物をゲル電気泳動により分画化した後に形成される（Ｂｅｃｋｅｒ等，Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｍｅｄ １９９７年，４２：２６０〜２６６）。
【００５３】
標的遺伝子の分子遺伝学的分析を実行するために、本発明のｈｓｇｋ１遺伝子において、ｈｓｇｋ１遺伝子座の極めて近接にある３種のさらなるマイクロサテライトマーカー領域（ｄ６ｓ４７２，ｄ６ｓｌ０３８，ｄ６ｓ２７０）をＰＣＲによって増幅し、次に、その他の双子と親からの対応するサンプルと比較した。この方法で、双生児が彼等の親由来の遺伝性の対立遺伝子を有するかどうか、および、試験の下でそれらが対立遺伝子に関して同一か、または異なっているかを決定することができた。構造方程式モデリング（ＳＥＭ）モデル（Ｅａｖｅｓ等，Ｂｅｈａｖ Ｇｅｎｅｔ １９９６年，２６：５１９〜５２５；Ｎｅａｌｅ，１９９７年：ＭＸ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｍｏｄｅｌｉｎｇ，Ｂｏｘ １２６ ＭＣＶ，リッチモンド，バージニア州２３２９８：Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ．第四版）を用いて相関分析を行った。このモデルは、ゼロ、１または２いずれかの同一な対立遺伝子を有する確率によって特徴付けられる試験ペアの分散・共分散行列に基づいている。表現型に関する分散は、全ての遺伝子の遺伝的バックグラウンド（Ａ）に基づく分散、標的遺伝子（この場合はｈｓｇｋ１遺伝子）の遺伝的バックグラウンド（Ｑ）に基づく分散、および、外的な影響による分散（Ｅ）に分けられた。
【００５４】
〔数１〕
ＶＡＲ＝Ａ2＋Ｑ2＋Ｅ2
試験ペアの共分散を、以下のように、３種の考えられる対立遺伝子の組合せＩＢＤ0、ＩＢＤ1およびＩＢＤ2（ＩＢＤは、血統が同一であること（ｉｄｅｎｔｉｃａｌ ｂｙ ｄｅｓｃｅｎｔ）を意味し、０、１または２は、同一な対立遺伝子の数である）と定義した：
〔数２〕
ＣＯＶ（ＩＢＤ0）＝０．５Ａ2
ＣＯＶ（ＩＢＤ1）＝０．５Ａ2＋０．５Ｑ2
ＣＯＶ（ＩＢＤ2）＝０．５Ａ2＋Ｑ2
【００５５】
ｈｓｇｋ１遺伝子座の遺伝学的な構成と、被検者の血圧との相関性を評価するために、標的遺伝子ｈｓｇｋ１に関する遺伝学的分散を考慮したモデルと、考慮していないモデルとの差を、それぞれχ2統計値として計算した。それぞれのペアとそれぞれの遺伝子の遺伝子座に関して、対立遺伝子の比率を、親の遺伝子型に基づいて、いわゆるマルチポイントモデルの平均によって計算した（ＭＡＰＭＡＫＥＲ／ＳＩＢＳ；Ｋｒｕｇｌｙａｋ等，Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ １９９５年，５７：４３９〜４５４）。
【００５６】
近年、上述のχ2統計値と比較した分散・共分散評価に基づく分析方法の、より多くの有益な値（Ｓ．Ａ．Ｇ．Ｅ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｆｏｒ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｌｅａｓｅ ２．２．Ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｐｒｏｇｒａｍ ｐａｃｋａｇｅ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ，Ｃａｓｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｒｅｓｅｒｖｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，クリーブランド，オハイオ州，米国，１９９６年）が模擬研究で確認された（Ｆｕｌｋｅｒ等，Ｂｅｈａｖ Ｇｅｎ １９９６年，２６：５２７〜５３２）。ＬａｎｄｅｒおよびＫｒｕｇｌｙａｋの基準（Ｌａｎｄｅｒ等，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ １９９５年，１１：２４１〜２４６）に関して有意な相関であるかどうかを確かめるために、ｐ＜０．０１のエラーの確率が許容されている。
【００５７】
表１は、この相関性の研究の結果を示す。
【表１】
【００５８】
表１からわかるように、確認されたエラーの確率ｐに関する低い値は、ｐ＜０．０１の許容されたエラー確率を超過しないか、または、わずかしか超過しておらず、すなわち、ｈｓｇｋ１遺伝子の遺伝子座に関する遺伝学的分散と、表現型によって確認された測定された血圧の分散との間に直接的な相関性があることが証明された。
【００５９】
実施例２
ｈｓｇｋ１遺伝子のゲノムの構成はすでに記載されている（Ｗａｌｄｅｇｇｅｒ等，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，５１，２９９［１９９８年］，http://www.ensembl.org/Homo#sapiens/geneview?gene=ENSG00000118515）。
【００６０】
その存在が高血圧を発症させる素因と関連するＳＮＰを同定するために、まず、データベースで公開されているｈｓｇｋ１遺伝子におけるＳＮＰを調査して、そのＳＮＰが真正のＳＮＰであり単なる配列解析エラーではないかどうか、および、そのＳＮＰが、高血圧に関する素因の診断検出のための基礎を形成するの十分な多型であるかどうかを決定した。エキソン８におけるＳＮＰ ｒｓ １０５７２９３（これは、ＣのＴでの置換に関する）（http://www.ensembl.org/Homo#sapiens/snpview?snp=1057293;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP/snp#ref.cgi?type=rs&rs=1057293）、および、第二のＳＮＰ（これは、ｈｓｇｋ１遺伝子内に、イントロン６からエキソン７へのドナースプライス部位において第一のＳＮＰから正確に５５１ｂｐ離れて位置し、ＴのＣでの置換に関する）が、この方法においてすでに位置決定されている。
【００６１】
実施例３
７５の双生児ペアのランダムサンプルから、血液サンプルを採取した。血液サンプルからｈｓｇｋ１遺伝子のゲノムＤＮＡをＰＣＲによって増幅するした後、ｈｓｇｋ１遺伝子のエキソンおよびイントロン（ただし、プロモーター領域は含まず）を、適切な配列解析プライマーを用いて直接的に完全に配列解析した。異なる被検者由来のｈｓｇｋ１遺伝子の配列を比較すると、イントロン２の７３２／７３３位における追加のヌクレオチドＧの挿入で構成されるさらなる多型が見つかった。その上、この、個々の被検者のｈｓｇｋ１遺伝子における７３２／７３３位でのＧの挿入の存在または非存在は、個々の被検者で測定された血圧と有意な相関を示した：平均して、ＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ遺伝子型は、低い頻度のＷＴ／ＷＴ遺伝子型、および、ヘテロ接合型のＷＴ／ＩｎｓＧ遺伝子型で示される血圧値より、顕著に低い収縮期および弛緩期の血圧値を示した（表３を参照）。それに対して、表２に示すように、ｈｓｇｋ１遺伝子におけるその他の多型は、測定された血圧との相関があまり有意ではないか（例えば、イントロン６（Ｃ２０７１Ｔ）およびエキソン８（Ｔ２６１７Ｃ，Ｄ２４０Ｄ））、または、測定された血圧と相関を示さなかった（例えば イントロン３位置のＩｎｓ１３＋ｘＴ，Ｔ１３００〜１３１２、および、イントロン４（Ｃ１４５１Ｔ）、および、イントロン７位置の２５４４ｄｅｌＡ）。
【００６２】
被検者において様に測定されたＥＣＧ値はまた、個々の被検者で決定されたＱＴ間隔と、被検者のｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位における多型に関する遺伝子型との間に著しい相関があったことを示した：これに関連して、低い頻度のＷＴ／ＷＴ遺伝子型を有する被検者は、ヘテロ接合型のＷＴ／ＩｎｓＧ被検者のＱＴ間隔に比べて著しく短いＱＴ間隔を示し、一方で、その後者は、かわりに、より高頻度のＩｎｓＧ／ＩｎｓＧ遺伝子型を有する被検者のＱＴ間隔に比べて顕著に短いＱＴ間隔を示した（表３を参照）。ＱＴ間隔が長くなると、特にＱＴ延長症候群のような心調律の障害を起こす危険を増加させる。その結果として、ｈｓｇｋ１遺伝子の７３２／７３３位におけるイントロン２における多型の遺伝子型と、一方ではＱＴ延長症候群に関する素因との、および、他方では高血圧に関する素因との間の逆の相関が見い出される。これらの相関は、それぞれの場合において、高血圧およびＱＴ延長症候群の診断、治療および予防に用いることができる。
【００６３】
【表２】
【００６４】
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高血圧を診断するための、配列番号１または配列番号２で示される核酸配列のフラグメントを含む単離された一本鎖または二本鎖核酸の使用であって、該フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、該フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における多型を含む（７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）ことを特徴とする、上記使用。
【請求項２】
請求項１に記載の単離された一本鎖または二本鎖核酸の少なくとも１つを含む、高血圧を定量的に診断するキット。
【請求項３】
ｈｓｇｋタンパク質の領域に対して向けられた抗体の少なくとも１つを含み、該ｈｓｇｋ１タンパク質の領域の存在は、それをコードするｈｓｇｋ遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入の存在に依存することを特徴とする、高血圧を定量的に診断するキット。
【請求項４】
ａ）生体サンプルを採取する工程、
ｂ）適当なら、ａ）に記載の生体サンプルから、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡを単離および／または増幅する工程、
ｃ）ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子を定量する工程、
を含む、高血圧を診断するための方法。
【請求項５】
工程ａ）からの生体サンプルは、血液、唾液、組織、および細胞からなる群より選択されることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
立遺伝子は、工程ｃ）に従って、生体サンプルから単離されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを直接配列解析することによって定量されることを特徴とする、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、生体サンプルから単離されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡと特異的にハイブリダイズさせることによって定量されることを特徴とする、請求項４〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、ＰＣＲオリゴ伸長分析、または、ライゲーション分析によって定量されることを特徴とする、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＱＴ延長症候群を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの直接的な相関性の使用。
【請求項１０】
ＱＴ延長症候群を診断するための、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対の長さを有するｓｇｋファミリーのヒト相同体の配列もしくはそのフラグメントの１つを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用。
【請求項１１】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体は、ｈｓｇｋ１遺伝子であることを特徴とする、請求項９または１０に記載の使用。
【請求項１２】
ｈｓｇｋ１遺伝子またはそのフラグメントの１つの核酸の長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、該核酸は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位の多型を含む（ヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）ことを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
ＱＴ延長症候群を発症させる素因を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質に対する抗体の使用であって、該抗体は、リン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含むヒト相同体のエピトープに対するものである、上記使用。
【請求項１４】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質は、Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）であることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
ｓｇｋタンパク質ファミリーのヒト相同体に対する抗体、もしくは、ストリンジェントな条件下でｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体とハイブリダイズできる核酸を含む、または、これら抗体と核酸とを共に含む、ＱＴ延長症候群を診断するためのキット。
【請求項１６】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体は、ｈｓｇｋ１遺伝子であることを特徴とする、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
ＱＴ間隔を短くするための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）の機能的な活性化因子、または、正の転写調節因子の使用。
【請求項１８】
機能的な活性化因子または正の転写調節因子は、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
ＱＴ延長症候群の治療および／または予防用医薬を製造するための、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる群より選択される物質の使用。
【請求項２０】
ＱＴ延長症候群の治療および／または予防のための、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる物質群より選択される少なくとも１つの物質を含む医薬。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高血圧を診断するための、配列番号１または配列番号２で示される核酸配列のフラグメントを含む単離された一本鎖または二本鎖核酸のインビトロでの使用であって、該フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、該フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における多型を含む（７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）ことを特徴とする、上記使用。
【請求項２】
請求項１に記載の単離された一本鎖または二本鎖核酸の少なくとも１つを含む、高血圧を定量的に診断するキット。
【請求項３】
ｈｓｇｋタンパク質の領域に対して向けられた抗体の少なくとも１つを含み、該ｈｓｇｋ１タンパク質の領域の存在は、それをコードするｈｓｇｋ遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入の存在に依存することを特徴とする、高血圧を定量的に診断するキット。
【請求項４】
ａ）生体サンプルを採取する工程、
ｂ）適当なら、ａ）に記載の生体サンプルから、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡを単離および／または増幅する工程、
ｃ）ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子を定量する工程、
を含む、インビトロで高血圧を診断するための方法。
【請求項５】
工程ａ）からの生体サンプルは、血液、唾液、組織、および細胞からなる群より選択されることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、生体サンプルから単離されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを直接配列解析することによって定量されることを特徴とする、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、生体サンプルから単離されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡと特異的にハイブリダイズさせることによって定量されることを特徴とする、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、ＰＣＲオリゴ伸長分析、または、ライゲーション分析によって定量されることを特徴とする、請求項４〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ＱＴ延長症候群をインビトロで診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの直接的な相関性の使用。
【請求項１０】
ＱＴ延長症候群をインビトロで診断するための、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対の長さを有する、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の配列もしくはそのフラグメントの１つを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用。
【請求項１１】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体は、ｈｓｇｋ１遺伝子であることを特徴とする、請求項９または１０に記載の使用。
【請求項１２】
ｈｓｇｋ１遺伝子またはそのフラグメントの１つの核酸の長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、該核酸は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位の多型を含む（ヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）ことを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
ＱＴ延長症候群を発症させる素因をインビトロで診断するための、Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）に対する抗体の使用であって、該抗体は、リン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含むヒト相同体のエピトープに対するものである、上記使用。
【請求項１４】
ｓｇｋタンパク質ファミリーのヒト相同体に対する抗体、または、一本鎖もしくは二本鎖核酸フラグメント（長さが少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、ストリンジェントな条件下でｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体とハイブリダイズできる）を含む、または、これら抗体と核酸とを共に含む、ＱＴ延長症候群を診断するためのキット。
【請求項１５】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体は、ｈｓｇｋ１遺伝子であることを特徴とする、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
特異的なハイブリダイゼーションプローブとして、ｈｓｇｋ１遺伝子における、エキソン８におけるＳＮＰ（Ｃ２６１７Ｔ、Ｄ２４０Ｄ）、イントロン６におけるＳＮＰ（Ｔ２０７１Ｃ）、または、イントロン２の７３２／７３３位におけるＳＮＰ（Ｇ挿入）の少なくとも１つを含む核酸フラグメントを含むことを特徴とする、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
ＱＴ間隔を短くするための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）の機能的な活性化因子、または、正の転写調節因子の使用。
【請求項１８】
機能的な活性化因子または正の転写調節因子は、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
ＱＴ延長症候群の治療および／または予防用医薬を製造するための、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる群より選択される物質の使用。
【請求項２０】
ＱＴ延長症候群の治療および／または予防のための、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピンおよび、サイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる物質群より選択される少なくとも１つの物質を含む医薬。
【請求項１】
高血圧を診断するための、配列番号１または配列番号２で示される核酸配列のフラグメントを含む単離された一本鎖または二本鎖核酸の使用であって、該フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、該フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における多型を含む（７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）ことを特徴とする、上記使用。
【請求項２】
請求項１に記載の単離された一本鎖または二本鎖核酸の少なくとも１つを含む、高血圧を定量的に診断するキット。
【請求項３】
ｈｓｇｋタンパク質の領域に対して向けられた抗体の少なくとも１つを含み、該ｈｓｇｋ１タンパク質の領域の存在は、それをコードするｈｓｇｋ遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入の存在に依存することを特徴とする、高血圧を定量的に診断するキット。
【請求項４】
ａ）生体サンプルを採取する工程、
ｂ）適当なら、ａ）に記載の生体サンプルから、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡを単離および／または増幅する工程、
ｃ）ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子を定量する工程、
を含む、高血圧を診断するための方法。
【請求項５】
工程ａ）からの生体サンプルは、血液、唾液、組織、および細胞からなる群より選択されることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
立遺伝子は、工程ｃ）に従って、生体サンプルから単離されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを直接配列解析することによって定量されることを特徴とする、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、生体サンプルから単離されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡと特異的にハイブリダイズさせることによって定量されることを特徴とする、請求項４〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、ＰＣＲオリゴ伸長分析、または、ライゲーション分析によって定量されることを特徴とする、請求項４〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
ＱＴ延長症候群を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの直接的な相関性の使用。
【請求項１０】
ＱＴ延長症候群を診断するための、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対の長さを有するｓｇｋファミリーのヒト相同体の配列もしくはそのフラグメントの１つを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用。
【請求項１１】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体は、ｈｓｇｋ１遺伝子であることを特徴とする、請求項９または１０に記載の使用。
【請求項１２】
ｈｓｇｋ１遺伝子またはそのフラグメントの１つの核酸の長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、該核酸は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位の多型を含む（ヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）ことを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
ＱＴ延長症候群を発症させる素因を診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質に対する抗体の使用であって、該抗体は、リン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含むヒト相同体のエピトープに対するものである、上記使用。
【請求項１４】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体の基質は、Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）であることを特徴とする、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
ｓｇｋタンパク質ファミリーのヒト相同体に対する抗体、もしくは、ストリンジェントな条件下でｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体とハイブリダイズできる核酸を含む、または、これら抗体と核酸とを共に含む、ＱＴ延長症候群を診断するためのキット。
【請求項１６】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体は、ｈｓｇｋ１遺伝子であることを特徴とする、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
ＱＴ間隔を短くするための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）の機能的な活性化因子、または、正の転写調節因子の使用。
【請求項１８】
機能的な活性化因子または正の転写調節因子は、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
ＱＴ延長症候群の治療および／または予防用医薬を製造するための、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる群より選択される物質の使用。
【請求項２０】
ＱＴ延長症候群の治療および／または予防のための、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる物質群より選択される少なくとも１つの物質を含む医薬。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
高血圧を診断するための、配列番号１または配列番号２で示される核酸配列のフラグメントを含む単離された一本鎖または二本鎖核酸のインビトロでの使用であって、該フラグメントの長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、該フラグメントは、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２における多型を含む（７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）ことを特徴とする、上記使用。
【請求項２】
請求項１に記載の単離された一本鎖または二本鎖核酸の少なくとも１つを含む、高血圧を定量的に診断するキット。
【請求項３】
ｈｓｇｋタンパク質の領域に対して向けられた抗体の少なくとも１つを含み、該ｈｓｇｋ１タンパク質の領域の存在は、それをコードするｈｓｇｋ遺伝子のイントロン２における７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入の存在に依存することを特徴とする、高血圧を定量的に診断するキット。
【請求項４】
ａ）生体サンプルを採取する工程、
ｂ）適当なら、ａ）に記載の生体サンプルから、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡを単離および／または増幅する工程、
ｃ）ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位でのヌクレオチドＧの挿入がある対立遺伝子を定量する工程、
を含む、インビトロで高血圧を診断するための方法。
【請求項５】
工程ａ）からの生体サンプルは、血液、唾液、組織、および細胞からなる群より選択されることを特徴とする、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、生体サンプルから単離されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡを直接配列解析することによって定量されることを特徴とする、請求項４または５に記載の方法。
【請求項７】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、生体サンプルから単離されたゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡと特異的にハイブリダイズさせることによって定量されることを特徴とする、請求項４〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
対立遺伝子は、工程ｃ）に従って、ＰＣＲオリゴ伸長分析、または、ライゲーション分析によって定量されることを特徴とする、請求項４〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
ＱＴ延長症候群をインビトロで診断するための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の過剰発現または機能的な分子改変と、ＱＴ間隔の長さとの直接的な相関性の使用。
【請求項１０】
ＱＴ延長症候群をインビトロで診断するための、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対の長さを有する、ｓｇｋファミリーのヒト相同体の配列もしくはそのフラグメントの１つを含む一本鎖または二本鎖核酸の使用。
【請求項１１】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体は、ｈｓｇｋ１遺伝子であることを特徴とする、請求項９または１０に記載の使用。
【請求項１２】
ｈｓｇｋ１遺伝子またはそのフラグメントの１つの核酸の長さは、少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、該核酸は、ｈｓｇｋ１遺伝子のイントロン２の７３２／７３３位の多型を含む（ヌクレオチドＧの挿入を含む、または、含まない）ことを特徴とする、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
ＱＴ延長症候群を発症させる素因をインビトロで診断するための、Ｎｅｄｄ４−２（受託番号ＢＡＡ２３７１１）に対する抗体の使用であって、該抗体は、リン酸化部位（リン酸化型または非リン酸化型のいずれか）を含むヒト相同体のエピトープに対するものである、上記使用。
【請求項１４】
ｓｇｋタンパク質ファミリーのヒト相同体に対する抗体、または、一本鎖もしくは二本鎖核酸フラグメント（長さが少なくとも１０個のヌクレオチド／塩基対であり、ストリンジェントな条件下でｓｇｋ遺伝子ファミリーのヒト相同体とハイブリダイズできる）を含む、または、これら抗体と核酸とを共に含む、ＱＴ延長症候群を診断するためのキット。
【請求項１５】
ｓｇｋファミリーのヒト相同体は、ｈｓｇｋ１遺伝子であることを特徴とする、請求項１４に記載のキット。
【請求項１６】
特異的なハイブリダイゼーションプローブとして、ｈｓｇｋ１遺伝子における、エキソン８におけるＳＮＰ（Ｃ２６１７Ｔ、Ｄ２４０Ｄ）、イントロン６におけるＳＮＰ（Ｔ２０７１Ｃ）、または、イントロン２の７３２／７３３位におけるＳＮＰ（Ｇ挿入）の少なくとも１つを含む核酸フラグメントを含むことを特徴とする、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
ＱＴ間隔を短くするための、ｓｇｋファミリーのヒト相同体（特にｈｓｇｋ１）の機能的な活性化因子、または、正の転写調節因子の使用。
【請求項１８】
機能的な活性化因子または正の転写調節因子は、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
ＱＴ延長症候群の治療および／または予防用医薬を製造するための、糖質コルチコイド、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピン、およびサイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる群より選択される物質の使用。
【請求項２０】
ＱＴ延長症候群の治療および／または予防のための、鉱質コルチコイド、アルドステロン、ゴナドトロピンおよび、サイトカイン（特にＴＧＦ−β）からなる物質群より選択される少なくとも１つの物質を含む医薬。
【公表番号】特表２００６−５２０５８７（Ｐ２００６−５２０５８７Ａ）
【公表日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０１７３９（Ｐ２００６−５０１７３９）
【出願日】平成１６年２月５日（２００４．２．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００１０５１
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０７００５７
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５０１４９６６０３）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年９月１４日（２００６．９．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年２月５日（２００４．２．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００１０５１
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０７００５７
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５０１４９６６０３）
【Ｆターム（参考）】
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