ＳＣＦ結合促進剤
【課題】ｃ−ｋｉｔレセプターに対するＳＣＦの結合を促進し、皮膚黒化又は白髪防止するための医薬又は化粧料として有用なＳＣＦ結合促進剤の提供。
【解決手段】アラニン、アデノシン、ホモカルノシン、４−グアニジノ酪酸及びウロカニン酸から選ばれる化合物又はその塩を有効成分とするＳＣＦ結合促進剤。
【解決手段】アラニン、アデノシン、ホモカルノシン、４−グアニジノ酪酸及びウロカニン酸から選ばれる化合物又はその塩を有効成分とするＳＣＦ結合促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ステムセルファクター（Stem cell factor、以下「ＳＣＦ」という）結合促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
人の皮膚や毛髪の色調は、皮膚及び毛髪の色素メラニンの量によって決定される。メラニンは、皮膚や毛髪の毛球部に存在する色素細胞（メラノサイト）において、酵素チロシナーゼによってチロシンから生合成されることから、メラノサイトの活性化等により、メラニン産生が亢進すれば、皮膚は褐色化し、毛髪は黒色化する。
【０００３】
近年の若年層においては、褐色の肌を望む場合も多く、わが国においては日光浴を求めたり、屋内での紫外線照射を受けることが流行し、欧米においてはジヒドロキシアセトンを主成分とするセルフタンニング剤が出回っている。しかし、このような過度の紫外線照射は皮膚に大きなダメージを与え、皮膚癌の発生を招くおそれもあり、またセルフタンニング剤においても、その作用は角層のメイラード反応により皮膚を褐色化させていることから、色合いや安定性及び紫外線防御能の低下を招く等の安全性の面で問題が指摘されている。
【０００４】
また、白髪は、毛母色素細胞の変化によってメラニンが減少する生理的老化現象の一つであるが、その発生機序は未だ解明されていない。従って、白色化した髪を黒髪へと変化させる方法として、白髪を防止又は改善する成分等の報告が数多くなされているものの、いずれも有効性や安全性の点で十分なものは得られておらず、染毛剤による染毛が中心となっているのが現状である。
【０００５】
ＳＣＦは、造血幹細胞の表面に発現しているｃ−ｋｉｔレセプターのリガンドであり、造血細胞の増殖・分化を促す膜結合型の増殖因子として知られているが、近年、ｃ−ｋｉｔが造血細胞の他に、肥満細胞、メラノサイト及び生殖細胞の表面にも発現していることが明らかになり（非特許文献１）、即時型アレルギーへの関与を始めとして、ＳＣＦの生体内作用に関する研究が進められている。最近では、皮膚にのみＳＣＦを発現させるトンラスジェニックマウスにおいて、肥満細胞の誘導とメラノサイトの増殖により、メラニン合成が増強されること（非特許文献２）、メラノサイト上のｃ−ｋｉｔのリン酸化によって、メラノジェネシスが亢進することが報告され（非特許文献３）、メラニンの過剰生産にＳＣＦが深く関与すると考えられている。
従って、メラノサイト上のｃ−ｋｉｔレセプターとＳＣＦとの結合を促進することができれば、メラニンの産生反応を促進することができ、本来メラニンが持つ生体防御能を促進させて皮膚のダメージを予防すると共に、肌の褐色化や白髪の防止又は改善が実現できると考えられる。
【０００６】
一方、Ｄ−アラニンには肌荒れ改善作用（特許文献１）、アデノシンには血行促進作用（特許文献２）、ホモカルノシンには抗酸化作用（特許文献３）、４−グアニジノ酪酸は、生体内ではメチル化を受けてクレアチンやクレアチニンに変化し、また、ベタインと併用して強心薬に用いられることが知られており（非特許文献４）、ウロカニン酸にはラジカル除去作用（特許文献５）があることが報告されているが、これらの化合物にＳＣＦ結合促進作用があることは全く知られていない。
【特許文献１】特開平１１−６０４３６号公報
【特許文献２】特開２０００−１９８７１８
【特許文献３】特表平１１−５０５５４０
【特許文献４】特表２００３−５０６５６６
【非特許文献１】J.Exp.Med.,183,2681-2686,1996
【非特許文献２】J.Exp.Med.,187,1565-1573,1998
【非特許文献３】Molecular Bioloy of the Cell 3, 197-209 1992
【非特許文献４】化学大辞典 株式会社東京化学同人 １９８９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ｃ−ｋｉｔレセプターに対するＳＣＦの結合を促進し、皮膚黒化又は白髪防止するための医薬又は化粧料として有用なＳＣＦ結合促進剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、細胞表面上のｃ−ｋｉｔレセプターに対するＳＣＦの結合を特異的に促進する物質を探索したところ、枯草菌代謝産物中の特定の物質に、ＳＣＦ結合促進活性があることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、アラニン、アデノシン、ホモカルノシン、４−グアニジノ酪酸及びウロカニン酸から選ばれる化合物又はその塩を有効成分とするＳＣＦ結合促進剤に係るものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＳＣＦ結合促進剤によれば、メラニン量を増加させることができ、本来メラニンが持つ生体防御能を促進させて皮膚のダメージを予防すると共に、肌の褐色化や白髪の防止又は改善が実現できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明のＳＣＦ結合促進剤とは、細胞表面、特にメラノサイト表面上のｃ−ｋｉｔレセプターに対するＳＣＦの結合を特異的に促進し、メラニンの産生量を増加させ、肌の褐色化や白髪の防止又は改善効果を有するものをいう。
【００１２】
本発明におけるアラニン、アデノシン、ホモカルノシン（γ−アミノブチリル−Ｌ−ヒスチジン）、４−グアニジノ酪酸及びウロカニン酸の化学構造は以下に示すとおりである。これらはいずれも枯草菌の代謝産物でもある。
ここで、アラニンは、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン又はＤＬ−アラニンのいずれでもよいが、Ｄ−アラニンが好ましい。
【００１３】
【化１】
【００１４】
本発明化合物の塩としては、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩類、ベリリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属類、１〜３級アミン類、４級アンモニウム塩類、アルギニン、リジン等のアミノ酸類等との塩基性塩、塩酸、ヨウ素酸、硫酸等の鉱酸、酢酸、クエン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸等との酸性塩が挙げられる。
【００１５】
上記化合物は、いずれも既知化合物であり、公知の有機化学合成、或いはこれらの化合物を含有する天然物や微生物代謝産物（例えば枯草菌代謝物）から周知の手法を用いて得ることができる。また、市販品を用いることもできる。斯かる市販品としては、例えば、Ｄ−アラニン（シグマ Ｇ １００１）、アデノシン（Ｗａｋｏ ０１０−１０４９１）、ホモカルノシン（シグマ Ｈ ４８８５）、４−グアニジノ酪酸（シグマ Ｇ 6503）、ウロカニン酸（東京化成工業（ＴＣＩ） Ｉ 0002）等が挙げられる。
【００１６】
本発明の化合物又はその塩は、後記実施例に示すように、ｃ−ｋｉｔへのＳＣＦの結合促進活性を有することから、例えばメラノサイト上のｃ−ｋｉｔの活性化によって引き起こされるメラニンの産生反応を促進することができると考えられる（The Journal of Biological Chemistry 275, 33321-33328, 2000）。従って、本発明の化合物又はその塩は、ＳＣＦ結合促進剤として使用することができ、またＳＣＦ結合促進剤を製造するために使用することができる。斯かるＳＣＦ結合促進剤は、肌の褐色化や白髪の防止又は改善効果を発揮する医薬品、医薬部外品、化粧品等として使用できる。また、肌の褐色化や白髪の防止又は改善等をコンセプトとし、必要に応じてその旨の表示を付した医薬部外品や化粧品としても使用可能である。
【００１７】
本発明のＳＣＦ結合促進剤を医薬品として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、外用剤、坐剤、経皮吸収剤等による非経口投与のいずれでもよい。当該医薬製剤を調製するには、本発明の化合物又はその塩を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。該製剤中の本発明化合物又はその塩の含有量は、０．１〜２０質量％、特に０．５〜１０質量％とすることが好ましい。
尚、本発明のＳＣＦ結合促進剤を医薬品として使用する場合、成人１人当たりの１日の投与量は、本発明の化合物又はその塩として、例えば０．００１〜１０００ｍｇ、特に０．０１〜１００ｍｇであることが好ましい。
【００１８】
また、本発明のＳＣＦ結合促進剤を医薬部外品や化粧料として用いる場合は、皮膚外用剤、洗浄剤、メイクアップ化粧料、頭皮頭髪用化粧料とすることができ、使用方法に応じて、ローション、乳液、ゲル、クリーム、軟膏剤、粉末、顆粒等の種々の剤型で提供することができる。このような種々の剤型の医薬部外品や化粧料は、本発明の化合物又はその塩を単独で、又は医薬部外品、皮膚化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬効成分、香料、樹脂、防菌防黴剤、植物抽出物、アルコール類等を適宜組み合わせることにより調製することができる。尚、薬効成分としては、ホルモン剤やタンニング剤等が挙げられる。
当該医薬部外品、化粧料中の本発明化合物又はその塩の含有量は、０．０１〜１００質量％とすることが好ましく、特に０．０５〜７０質量％とすることが好ましい。
【実施例】
【００１９】
＜評価サンプルの調製＞
Ｄ−アラニン（シグマ Ｇ １００１）、アデノシン（Ｗａｋｏ ０１０−１０４９１）、ホモカルノシン（シグマ Ｈ ４８８５）、４−グアニジノ酪酸（シグマ Ｇ 6503）、ウロカニン酸（東京化成工業（ＴＣＩ） Ｉ 0002）を、それぞれ蒸留水に１ｍＭとなるように溶解して調製した。
【００２０】
実施例１ ＳＣＦ結合促進活性
ＰＢＳで２００μｇ／ｍｌに溶解したRecombinant human c-kit (Soluble c-kit ; s-kit（R&D systems社）)を９６ウェルプレートに５０μｌ／ウェルとなるように添加し、４℃で一晩放置した。翌日ウェルをＰＢＳで２回洗浄した後、５％ＢＳＡ（Bovine Serum Albumin；和光純薬工業株式会社）−ＰＢＳＴ（0.1% Tween20-PBS）をウェルが満杯になるまで添加し、室温で１時間以上放置した。ウェルをＰＢＳＴで２回洗浄後、評価サンプル（前記化合物：終濃度５％（ｖ／ｖ））、終濃度１００ｐＭのＳＣＦ（「Recombinant Human SCF」（Peprotech社））、終濃度０．５％のＢＳＡ、ＰＢＳを加え計１００μｌ／ウェルを添加し、室温で２時間以上振とうさせた。ウェルをＰＢＳＴで５回洗浄した後、終濃度０．５μｇ／ｍｌの抗ＳＣＦ抗体（「Rabbit polyclonal to SCF」（abcam社））、終濃度０．５％のＢＳＡ、ＰＢＳを加え計１００μｌ／ウェルを添加し、室温で２時間以上振とうまたは、４℃で一晩放置した。ウェルをＰＢＳＴで５回洗浄した後、０．５％ＢＳＡ−ＰＢＳＴで１０００倍希釈したＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ECL Anti-rabbit IgG（Amersham Biosciences社））を１００μｌ／ウェル添加し、室温で２時間以上振とうさせた。ウェルをＰＢＳＴで１０回洗浄した後、ＴＭＢ基質液（「TMB Microwell Peroxidase Substrate System」（KPL社））を１００μｌ／ウェル添加し、遮光して室温で１０℃、２０分放置した。さらにＴＭＢ反応停止液（「TMB Stop Solution」（KPL社））を１００μｌ／ウェル添加し反応を停止させ、プレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定しｓ−ｋｉｔに結合したＳＣＦ量を計測した。なおコントロールとして、評価サンプルの代わりにその溶媒を同量添加したウェルを作製した。また、ｓ−ｋｉｔを固相化せずに、評価サンプルの代わりにその溶媒を添加したウェルを作製し、この吸光度をブランク（非特異的結合量）とした。得られた吸光度はブランクの値を差し引くことで特異的結合量を求め、コントロールの値を１００とした相対値で表した。
【００２１】
【表１】
【００２２】
表１に示したとおり、本発明の化合物は、ｃ−ｋｉｔに対するＳＣＦの結合促進活性を有することが認められた。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ステムセルファクター（Stem cell factor、以下「ＳＣＦ」という）結合促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
人の皮膚や毛髪の色調は、皮膚及び毛髪の色素メラニンの量によって決定される。メラニンは、皮膚や毛髪の毛球部に存在する色素細胞（メラノサイト）において、酵素チロシナーゼによってチロシンから生合成されることから、メラノサイトの活性化等により、メラニン産生が亢進すれば、皮膚は褐色化し、毛髪は黒色化する。
【０００３】
近年の若年層においては、褐色の肌を望む場合も多く、わが国においては日光浴を求めたり、屋内での紫外線照射を受けることが流行し、欧米においてはジヒドロキシアセトンを主成分とするセルフタンニング剤が出回っている。しかし、このような過度の紫外線照射は皮膚に大きなダメージを与え、皮膚癌の発生を招くおそれもあり、またセルフタンニング剤においても、その作用は角層のメイラード反応により皮膚を褐色化させていることから、色合いや安定性及び紫外線防御能の低下を招く等の安全性の面で問題が指摘されている。
【０００４】
また、白髪は、毛母色素細胞の変化によってメラニンが減少する生理的老化現象の一つであるが、その発生機序は未だ解明されていない。従って、白色化した髪を黒髪へと変化させる方法として、白髪を防止又は改善する成分等の報告が数多くなされているものの、いずれも有効性や安全性の点で十分なものは得られておらず、染毛剤による染毛が中心となっているのが現状である。
【０００５】
ＳＣＦは、造血幹細胞の表面に発現しているｃ−ｋｉｔレセプターのリガンドであり、造血細胞の増殖・分化を促す膜結合型の増殖因子として知られているが、近年、ｃ−ｋｉｔが造血細胞の他に、肥満細胞、メラノサイト及び生殖細胞の表面にも発現していることが明らかになり（非特許文献１）、即時型アレルギーへの関与を始めとして、ＳＣＦの生体内作用に関する研究が進められている。最近では、皮膚にのみＳＣＦを発現させるトンラスジェニックマウスにおいて、肥満細胞の誘導とメラノサイトの増殖により、メラニン合成が増強されること（非特許文献２）、メラノサイト上のｃ−ｋｉｔのリン酸化によって、メラノジェネシスが亢進することが報告され（非特許文献３）、メラニンの過剰生産にＳＣＦが深く関与すると考えられている。
従って、メラノサイト上のｃ−ｋｉｔレセプターとＳＣＦとの結合を促進することができれば、メラニンの産生反応を促進することができ、本来メラニンが持つ生体防御能を促進させて皮膚のダメージを予防すると共に、肌の褐色化や白髪の防止又は改善が実現できると考えられる。
【０００６】
一方、Ｄ−アラニンには肌荒れ改善作用（特許文献１）、アデノシンには血行促進作用（特許文献２）、ホモカルノシンには抗酸化作用（特許文献３）、４−グアニジノ酪酸は、生体内ではメチル化を受けてクレアチンやクレアチニンに変化し、また、ベタインと併用して強心薬に用いられることが知られており（非特許文献４）、ウロカニン酸にはラジカル除去作用（特許文献５）があることが報告されているが、これらの化合物にＳＣＦ結合促進作用があることは全く知られていない。
【特許文献１】特開平１１−６０４３６号公報
【特許文献２】特開２０００−１９８７１８
【特許文献３】特表平１１−５０５５４０
【特許文献４】特表２００３−５０６５６６
【非特許文献１】J.Exp.Med.,183,2681-2686,1996
【非特許文献２】J.Exp.Med.,187,1565-1573,1998
【非特許文献３】Molecular Bioloy of the Cell 3, 197-209 1992
【非特許文献４】化学大辞典 株式会社東京化学同人 １９８９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ｃ−ｋｉｔレセプターに対するＳＣＦの結合を促進し、皮膚黒化又は白髪防止するための医薬又は化粧料として有用なＳＣＦ結合促進剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、細胞表面上のｃ−ｋｉｔレセプターに対するＳＣＦの結合を特異的に促進する物質を探索したところ、枯草菌代謝産物中の特定の物質に、ＳＣＦ結合促進活性があることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、アラニン、アデノシン、ホモカルノシン、４−グアニジノ酪酸及びウロカニン酸から選ばれる化合物又はその塩を有効成分とするＳＣＦ結合促進剤に係るものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のＳＣＦ結合促進剤によれば、メラニン量を増加させることができ、本来メラニンが持つ生体防御能を促進させて皮膚のダメージを予防すると共に、肌の褐色化や白髪の防止又は改善が実現できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明のＳＣＦ結合促進剤とは、細胞表面、特にメラノサイト表面上のｃ−ｋｉｔレセプターに対するＳＣＦの結合を特異的に促進し、メラニンの産生量を増加させ、肌の褐色化や白髪の防止又は改善効果を有するものをいう。
【００１２】
本発明におけるアラニン、アデノシン、ホモカルノシン（γ−アミノブチリル−Ｌ−ヒスチジン）、４−グアニジノ酪酸及びウロカニン酸の化学構造は以下に示すとおりである。これらはいずれも枯草菌の代謝産物でもある。
ここで、アラニンは、Ｌ−アラニン、Ｄ−アラニン又はＤＬ−アラニンのいずれでもよいが、Ｄ−アラニンが好ましい。
【００１３】
【化１】
【００１４】
本発明化合物の塩としては、例えば、リチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩類、ベリリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属類、１〜３級アミン類、４級アンモニウム塩類、アルギニン、リジン等のアミノ酸類等との塩基性塩、塩酸、ヨウ素酸、硫酸等の鉱酸、酢酸、クエン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸等との酸性塩が挙げられる。
【００１５】
上記化合物は、いずれも既知化合物であり、公知の有機化学合成、或いはこれらの化合物を含有する天然物や微生物代謝産物（例えば枯草菌代謝物）から周知の手法を用いて得ることができる。また、市販品を用いることもできる。斯かる市販品としては、例えば、Ｄ−アラニン（シグマ Ｇ １００１）、アデノシン（Ｗａｋｏ ０１０−１０４９１）、ホモカルノシン（シグマ Ｈ ４８８５）、４−グアニジノ酪酸（シグマ Ｇ 6503）、ウロカニン酸（東京化成工業（ＴＣＩ） Ｉ 0002）等が挙げられる。
【００１６】
本発明の化合物又はその塩は、後記実施例に示すように、ｃ−ｋｉｔへのＳＣＦの結合促進活性を有することから、例えばメラノサイト上のｃ−ｋｉｔの活性化によって引き起こされるメラニンの産生反応を促進することができると考えられる（The Journal of Biological Chemistry 275, 33321-33328, 2000）。従って、本発明の化合物又はその塩は、ＳＣＦ結合促進剤として使用することができ、またＳＣＦ結合促進剤を製造するために使用することができる。斯かるＳＣＦ結合促進剤は、肌の褐色化や白髪の防止又は改善効果を発揮する医薬品、医薬部外品、化粧品等として使用できる。また、肌の褐色化や白髪の防止又は改善等をコンセプトとし、必要に応じてその旨の表示を付した医薬部外品や化粧品としても使用可能である。
【００１７】
本発明のＳＣＦ結合促進剤を医薬品として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与又は注射剤、外用剤、坐剤、経皮吸収剤等による非経口投与のいずれでもよい。当該医薬製剤を調製するには、本発明の化合物又はその塩を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。該製剤中の本発明化合物又はその塩の含有量は、０．１〜２０質量％、特に０．５〜１０質量％とすることが好ましい。
尚、本発明のＳＣＦ結合促進剤を医薬品として使用する場合、成人１人当たりの１日の投与量は、本発明の化合物又はその塩として、例えば０．００１〜１０００ｍｇ、特に０．０１〜１００ｍｇであることが好ましい。
【００１８】
また、本発明のＳＣＦ結合促進剤を医薬部外品や化粧料として用いる場合は、皮膚外用剤、洗浄剤、メイクアップ化粧料、頭皮頭髪用化粧料とすることができ、使用方法に応じて、ローション、乳液、ゲル、クリーム、軟膏剤、粉末、顆粒等の種々の剤型で提供することができる。このような種々の剤型の医薬部外品や化粧料は、本発明の化合物又はその塩を単独で、又は医薬部外品、皮膚化粧料及び洗浄料に配合される、油性成分、保湿剤、粉体、色素、乳化剤、可溶化剤、洗浄剤、紫外線吸収剤、増粘剤、薬効成分、香料、樹脂、防菌防黴剤、植物抽出物、アルコール類等を適宜組み合わせることにより調製することができる。尚、薬効成分としては、ホルモン剤やタンニング剤等が挙げられる。
当該医薬部外品、化粧料中の本発明化合物又はその塩の含有量は、０．０１〜１００質量％とすることが好ましく、特に０．０５〜７０質量％とすることが好ましい。
【実施例】
【００１９】
＜評価サンプルの調製＞
Ｄ−アラニン（シグマ Ｇ １００１）、アデノシン（Ｗａｋｏ ０１０−１０４９１）、ホモカルノシン（シグマ Ｈ ４８８５）、４−グアニジノ酪酸（シグマ Ｇ 6503）、ウロカニン酸（東京化成工業（ＴＣＩ） Ｉ 0002）を、それぞれ蒸留水に１ｍＭとなるように溶解して調製した。
【００２０】
実施例１ ＳＣＦ結合促進活性
ＰＢＳで２００μｇ／ｍｌに溶解したRecombinant human c-kit (Soluble c-kit ; s-kit（R&D systems社）)を９６ウェルプレートに５０μｌ／ウェルとなるように添加し、４℃で一晩放置した。翌日ウェルをＰＢＳで２回洗浄した後、５％ＢＳＡ（Bovine Serum Albumin；和光純薬工業株式会社）−ＰＢＳＴ（0.1% Tween20-PBS）をウェルが満杯になるまで添加し、室温で１時間以上放置した。ウェルをＰＢＳＴで２回洗浄後、評価サンプル（前記化合物：終濃度５％（ｖ／ｖ））、終濃度１００ｐＭのＳＣＦ（「Recombinant Human SCF」（Peprotech社））、終濃度０．５％のＢＳＡ、ＰＢＳを加え計１００μｌ／ウェルを添加し、室温で２時間以上振とうさせた。ウェルをＰＢＳＴで５回洗浄した後、終濃度０．５μｇ／ｍｌの抗ＳＣＦ抗体（「Rabbit polyclonal to SCF」（abcam社））、終濃度０．５％のＢＳＡ、ＰＢＳを加え計１００μｌ／ウェルを添加し、室温で２時間以上振とうまたは、４℃で一晩放置した。ウェルをＰＢＳＴで５回洗浄した後、０．５％ＢＳＡ−ＰＢＳＴで１０００倍希釈したＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体（ECL Anti-rabbit IgG（Amersham Biosciences社））を１００μｌ／ウェル添加し、室温で２時間以上振とうさせた。ウェルをＰＢＳＴで１０回洗浄した後、ＴＭＢ基質液（「TMB Microwell Peroxidase Substrate System」（KPL社））を１００μｌ／ウェル添加し、遮光して室温で１０℃、２０分放置した。さらにＴＭＢ反応停止液（「TMB Stop Solution」（KPL社））を１００μｌ／ウェル添加し反応を停止させ、プレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定しｓ−ｋｉｔに結合したＳＣＦ量を計測した。なおコントロールとして、評価サンプルの代わりにその溶媒を同量添加したウェルを作製した。また、ｓ−ｋｉｔを固相化せずに、評価サンプルの代わりにその溶媒を添加したウェルを作製し、この吸光度をブランク（非特異的結合量）とした。得られた吸光度はブランクの値を差し引くことで特異的結合量を求め、コントロールの値を１００とした相対値で表した。
【００２１】
【表１】
【００２２】
表１に示したとおり、本発明の化合物は、ｃ−ｋｉｔに対するＳＣＦの結合促進活性を有することが認められた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アラニン、アデノシン、ホモカルノシン、４−グアニジノ酪酸及びウロカニン酸から選ばれる化合物又はその塩を有効成分とするＳＣＦ結合促進剤。
【請求項１】
アラニン、アデノシン、ホモカルノシン、４−グアニジノ酪酸及びウロカニン酸から選ばれる化合物又はその塩を有効成分とするＳＣＦ結合促進剤。
【公開番号】特開２００８−３１０９１（Ｐ２００８−３１０９１Ａ）
【公開日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２０６３９６（Ｐ２００６−２０６３９６）
【出願日】平成１８年７月２８日（２００６．７．２８）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年７月２８日（２００６．７．２８）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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