コルチコイドおよび／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患を処置するための、コルチコイドおよび免疫抑制剤を含んでなる医薬組合せ剤
例えばＴ細胞が病態生理に含まれるときに、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用医薬製造のためのコルチコイドおよび式Ｉ
の化合物の組合せ剤の使用。
の化合物の組合せ剤の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は医薬組合せ剤、例えば薬学的に活性な化合物の組合せ剤の、新規な使用に関する。
【０００２】
Ｔ細胞増殖、すなわちＴリンパ球の増殖を阻害する物質は、例えばグルココルチコイドのようなコルチコイドおよびそれらの誘導体を含む免疫抑制および／または免疫調節剤として治療上使用されてきた。しかし、かかる薬剤に対する耐性、例えばコルチコイド耐性が存在し、または発生し得ることが知られており、それはその後は様々な疾患の処置の成功にはかかる薬剤は有効ではないか、または十分に有効ではないことを意味する。
驚くべきことに、本発明者らは本発明において組合せ治療を適用するときにはかかる薬剤の耐性を克服し得ることを発見した。
【０００３】
ある態様において、本発明はコルチコイドおよび式
【化１】
〔式中、
Ｒ１は式
【化２】
［式中、
Ｒ５はクロロ、ブロモ、ヨードまたはアジドであり、
Ｒ６はヒドロキシまたはメトキシであり、そして
Ｒ４はヒドロキシであり、その場合１０、１１位に単結合が存在するか；または存在せず、その場合１０、１１位に二重結合が存在する］
の基（ａ）であるか、
または
Ｒ１は式
【化３】
［式中
Ｒ６は上記定義の通りであり、そして
Ｒ４はヒドロキシであり、その場合１０、１１位に単結合が存在する］
の基（ｂ）または基（ｃ）であり、
Ｒ２はオキソであり、その場合２３、２４位に単結合が存在するか；ヒドロキシであり、その場合２３、２４位に単結合または二重結合が存在するか；または存在せず、その場合２３、２４位に二重結合が存在し；
Ｒ３はメチル、エチル、プロピルまたはアリルである〕
の化合物の組合せ剤の、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用、例えば式Ｉの化合物単独でまたはコルチコイド単独で効果がないかまたは不十分な疾患の処置用医薬の製造のための使用を提供する。
【０００４】
治療上効果がないかまたは不十分とは、臨床環境において本発明の組合せ剤の化合物単独では効果を示さず、または十分な効果を示さないことを意味する。本発明者らは例えば本明細書中に記載のように、コルチコイド単独またはカルシニューリン阻害剤単独で、ある条件下において治療的処置に必要な程度にＴ細胞増殖を阻害しないインビトロ系を確立した。これらの系は、従ってコルチコイドおよび／またはカルシニューリン阻害剤耐性のインビトロ実験モデルとして使用される。
本発明者らは、３５％未満、例えば２５％未満、例えば２０％未満の阻害効果を有する本発明の組合せ剤の化合物単独では、治療処置には不十分であると定義した。他方、本発明者らは、少なくとも６０％以上、例えば８０％、９０％、実質的に１００％までの阻害効果が達成される場合には、本発明の組合せ剤の化合物単独が治療処置に十分であると定義した。
【０００５】
式Ｉの化合物は例えばＥＰ−Ｂ−０４２７６８０において開示されている。該文献において、式Ｉの化合物における好ましい置換基が示されており、該好ましい置換基はまた本発明における好ましい置換基であり；例えば式Ｉの化合物において各１つの定義された置換基は、例えば定義された他の置換基と各々無関係に、好ましい置換基であり得て；例えばＥＰ−Ｂ−０４２７６８０の実施例６６ａに“３３−エピ−３３−クロロ−ＦＲ５２０”として開示され、“ＡＳＭ９８１”としても知られているような式Ｉｐの化合物を含む。
【０００６】
他の態様において本発明は、式Ｉの化合物が式
【化４】
の化合物である、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用を提供する。
【０００７】
本発明において、コルチコイドは薬学的に活性なコルチコイドおよびその誘導体を含み、例えば薬学的な活性を示すグルココルチコイド（すなわちグルココルチコイド様活性を有する）のようなコルチコステロイド、並びにグルココルチコイドレセプターの非ステロイド性リガンドを含み、
例えば遊離形の、および
−例えばナトリウム塩のような例えば塩形のモノおよびジエステルを、例えば含むエステル形の、
−アセトニドのようなアセタール形およびケタール形の、
例えば適用可能なときには塩形および溶媒和物形の、コルチコイドを含む。
【０００８】
アルクロメタゾン（例えばジプロプリオネート(diproprionate)）、アミシノニド、ベクロメタゾン（例えばジプロピオネート）、ベタメタゾン（例えばアセテート、ベンゾエート、ジプロピオネート、ナトリウムホスフェート、バレラート）、ブデソニド、カルベノキソロン（例えばナトリウム）、シクレソニド、クロベタソール（例えばプロピオネート）、クロベタゾン（例えばブチレート）、クロコルトロン（例えばアセテート、ピバレート）、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチコトロピン（例えば亜鉛ヒドロキシド）、コルチゾル、コルチゾン（例えばアセテート）、コルチバゾル、デフラザコート、デスシノロン（例えばアセトニド）、デソニド、デキサメタゾン（例えばナトリウムホスフェート、アセテート、イソミコチネート）、デソキシメタゾン、ジフロラゾン（例えばジアセテート）、ジフルオコルトロン（例えばピバレート、バレラート）、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルドロコルチゾン、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（例えばピバレート）、フルニソリド、フルオコルチン（ブチル）、フルオシノニド、フルオシノロン（例えばアセトニド）、フルオコルトロン（例えばカプロエート）、フルオロメトロン、フルペロロン（例えばアセテート）、フルプレドニデン（例えば２１−アセタール、アセテート）、フルプレドニゾロン（例えばバレラート）、フルランドレノリド、フルチカゾン（例えばプロピオネート、バレラート）、ホルモコルタル、ハルシノニド、ハロベタゾール（例えばプロピオネート）、ハロメタゾン（例えば一水和物）、ヒドロコルチゾン（例えばアセテート、ブテプレート、ブチレート、シピオネート、ナトリウムホスフェート、コハク酸ナトリウム、ヘミスクシネート、バレラート）、メドリゾン、メチルプレドニゾロン（例えばアセテート、ナトリウムホスフェート、ナトリウムスクシネート、アセポネート）、モメタゾン（例えばフルオレート）、ニバゾール、パラメタゾン（例えばアセテート）、プレドニカルベート、プレドニゾロン（例えばアセテート、ヘミスクシネート、ナトリウムホスフェート、ナトリウムスクシネート、テブテート）、プレドニゾン、プレドニゾロン、プレドニバル、プレドニリデン、ロフレポニド（例えばパルミテート）、チカベゾン（例えばプロピオネート）、チプレダン、トラロニド、トリアムシノロン（例えばアセトニド、アセトニドナトリウムホスフェート、ジアセテート）、例えば、およびその薬力学的等価物、好ましくはヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、例えばベタメタゾン１７−バレラート、またはデキサメタゾンが、例に含まれる。
【０００９】
薬力学的等価物とは本明細書に列記した特定のコルチコイドとの比較において、類似の薬学的な活性を有するコルチコイドを含むこと意味する。
薬学的な賦形剤には例えば、適切な担体および／または希釈剤、例えば増量剤、結合剤、崩壊剤、流動調節剤、滑沢剤、糖および甘味料、芳香剤、保存剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節のための塩および／またはバッファーが含まれる。
【００１０】
他の態様において本発明は、コルチコイドがヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、例えばベタメタゾン１７−バレラートおよびデキサメタゾンからなる群から選択される、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用を提供する。
【００１１】
本発明に記載の組合せ剤の化合物は、塩および／または溶媒和物が存在するときには、遊離形、塩形、溶媒和物形または塩かつ溶媒和物形であり得る。
【００１２】
他の態様において本発明は
式Ｉの化合物が塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用；
コルチコイドが塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用；
式Ｉの化合物およびコルチコイドのいずれもが塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用を提供する。
【００１３】
コルチコイド耐性疾患は既知であり、例えば
脱毛症、例えば完全脱毛症または全身性脱毛症；
アレルギー、例えば接触アレルギー；
アミロイド症、例えば全身性アミロイド症；
動脈炎、例えば高安動脈炎；
関節炎、例えば（若年性）リウマチ性関節炎、若年性少関節炎、サルコイドーシス関節炎；
関節症、例えば脊椎関節症；
喘息、例えば気管支喘息、慢性喘息；
大腸炎；
結膜炎、例えば乾性角結膜炎；
クローン病、難治性クローン病と関連したコルチコステロイド耐性壊疽性膿皮症を含むクローン病；
嚢包性線維症；
接触性、アトピー性、接触アレルギー性および日光性皮膚炎、苔癬状皮膚炎、潰瘍性皮膚炎のような皮膚炎（＝皮膚疾患）；
多発性硬化症、例えば脳多発性硬化症；
湿疹；
グレーブス病、例えばグレーブス眼症；
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）；
血管腫；
肝炎；
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；
インシュリン依存性糖尿病；
眼内炎症性疾患；
角膜炎；
マクロファージ活性化症候群；
筋無力症、例えば重症筋無力症；
脊髄炎、例えば脳脊髄炎；
筋炎、例えば（若年性）皮膚筋炎（ＤＭ）、多発性筋炎（ＰＭ）および封入体筋炎（ＩＢＭ）；
腎炎、例えば糸球体腎炎、腎炎症候群；
眼炎、例えば交感神経性眼炎；
肺炎；
多発性関節炎、例えばスティル病のような慢性多発性関節炎；
乾癬；
肺性または肺疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；
網膜剥離；
サルコイドーシスまたは神経性サルコイドーシス；
強膜炎；
硬化症、例えば糸球体硬化症；
感染性ショック；
ショーグレン症候群；
全身性エリテマトーデス；
移植片拒絶、例えば（腎または腎臓）同種移植片拒絶；
血小板減少性紫斑病、例えば免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、（慢性）特発性血小板減少性紫斑病；
潰瘍性大腸炎；
蕁麻疹、例えば（慢性）特発性蕁麻疹、蕁麻疹様血管炎；
ブドウ膜炎、例えば前部ブドウ膜炎、慢性ブドウ膜炎、末梢ブドウ膜炎、難治性ブドウ膜炎、べーチェットブドウ膜炎、Vogt−小柳−原田病のような肉芽腫ブドウ膜炎を含む。
【００１４】
他の態様において、本発明は、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物、例えば式Ｉｐの化合物の組合せ剤の使用であって、該疾患が、Ｔ細胞介在急性もしくは慢性炎症性疾患もしくは障害または自己免疫疾患のようなＴ細胞（すなわちＴリンパ球）を疾患の病態生理に含む疾患であり、例えば疾患が、式Ｉの化合物、例えば式Ｉｐの化合物単独、またはコルチコイド単独では効果がないかまたは効果が不十分である、
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）；
例えば溶血性貧血、再生不良性貧血、真性赤血球性貧血および特発性血小板減少症を含む血液障害、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫、慢性活動性肝炎、橋本甲状腺炎、スティーブン・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、間質性肺線維症、重症筋無力症、糸球体腎炎（ネフローゼ候群を有するまたは有さない）、若年性皮膚筋炎、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、眼の免疫介在症状、例えばブドウ膜炎（前部および後部）、角膜移植、慢性角膜炎、乾性角結膜炎、春期カタルのような自己免疫疾患および炎症性症状、とりわけ自己免疫要素を含む病因を有する炎症性症状；
免疫介在性疾患の皮膚症状；
炎症性および過増殖性皮膚疾患、例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎およびさらに湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加、エリテマトーデスおよびざ瘡；
アレルギー症状、例えば春期結膜炎、眼アレルギー；
炎症性神経障害、例えば脳炎；
脳無酸素症、低酸素症または虚血；
喘息；
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；
潰瘍性大腸炎およびクローン症を含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；
多剤耐性（ＭＤＲ）；
および
円形脱毛症、
からなる群から選択される、使用を提供する。
【００１５】
他の態様において本発明はコルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用であって、該疾患がアトピー性皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、喘息、潰瘍性大腸炎およびクローン症からなる群から選択される、使用を提供する。
【００１６】
処置には処置および予防を含む。
かかる処置のために、適切な投与量は、例えば使用される本発明の化合物の化学的な性質および薬動力学のデータ、個々の宿主、投与形態並びに処置される症状の性質および重症度に依存して当然変化するだろう。しかし、一般に大型哺乳類、例えばヒトにおける満足のいく結果のために、カルシニューリン阻害剤、例えばピメクロリムスを、溶液またはクリームとして、局所投与の場合には、約０．１％〜５％ｗ／ｖまたはｗ／ｗの範囲（投与量は処置される疾患の種類並びに投与部位に依存するだろう）で、または全身投与、例えば経口投与の場合には、患者あたり１０ｍｇ〜１２０ｍｇ、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇのカルシニューリン阻害剤、例えばピメクロリムスを投与し得、そしてコルチコイドは標準的治療法として既知の投与量で、例えば局所投与の場合には例えば０．５〜５％の範囲で、または全身投与、例えば経口投与の場合には例えば０．２５〜２５００ｍｇ、好ましくは１〜５００ｍｇ、例えば１〜５０ｍｇの範囲で投与される。
【００１７】
他の態様において本発明はＴ細胞が病態生理に含まれるが、ただしＴ細胞が疾患の病態生理に含まれる巣状分節状糸球体硬化症を除く、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用、例えばカルシニューリン阻害剤またはコルチコイド単独では効果がないかまたは効果が不十分である疾患の処置用医薬、例えば医薬組成物の製造のための、コルチコイドおよびカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用を提供する。
【００１８】
他の態様において本発明は、該疾患が、カルシニューリン阻害剤単独でまたはコルチコイド単独で効果がないかまたは効果が不十分である、以下の群
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）；
例えば溶血性貧血、再生不良性貧血、真性赤血球性貧血および特発性血小板減少症を含む血液疾患、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫、慢性活動性肝炎、橋本甲状腺炎、スティーブン・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、間質性肺線維症、重症筋無力症、糸球体腎炎（ネフローゼ症候群を有するまたは有さない）、若年性皮膚筋炎、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、眼の免疫介在症状、例えばブドウ膜炎（前部および後部）、角膜移植、慢性角膜炎、乾性角結膜炎、春期カタルのような自己免疫性疾患および炎症性症状、とりわけ自己免疫要素を含む病因を有する炎症性症状；
免疫介在性疾患の皮膚症状；
炎症性および過増殖性皮膚疾患、例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎およびさらに湿疹様皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、エリテマトーデスおよびざ瘡；
アレルギー症状、例えば春季結膜炎、眼アレルギー；
炎症性神経障害、例えば脳炎；
脳無酸素症、低酸素症または虚血；
喘息；
潰瘍性大腸炎およびクローン症を含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；
多剤耐性（ＭＤＲ）；
潰瘍、例えば胃潰瘍；
虚血性疾患および血栓症により引き起こされる血管障害；
熱傷に関連した壊死性病変；
および
円形脱毛症、
から選択される、本発明に記載のカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の使用を提供する。
【００１９】
“コルチコイド耐性疾患”および／または“カルシニューリン阻害剤耐性疾患”は上記定義の通りである。
【００２０】
カルシニューリンは、細胞内伝達に含まれるカルシウム／カルモジュリン制御タンパク質ホスファターゼである。カルシニューリンの概説のために、例えばＲｕｓｎａｋ ａｎｄ Ｍｅｒｔｚ， Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．８０，１４８３−１５２１（２０００）およびＦｅｓｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１１，１１１７−１１３２（２００３）を参照のこと。
カルシニューリン阻害剤はカルシニューリンの適当な基質の脱リン酸を阻害する物質である。
【００２１】
本発明のカルシニューリン阻害剤は好ましくはカルシニューリン阻害活性を有するイムノフィリン結合化合物である。
イムノフィリン結合カルシニューリン阻害剤はイムノフィリン、例えばシクロフィリンおよびマクロフィリンとカルシニューリン阻害複合体を形成する化合物である。
シクロフィリン結合カルシニューリン阻害剤の例はシクロスポリンまたはシクロスポリン誘導体（以後シクロスポリン）であり、マクロフィリン結合カルシニューリン阻害剤の例はアスコマイシンおよびアスコマイシン誘導体（以後アスコマイシン）(例えばＬｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６６，８０７−８１５（１９９１）およびＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７６，７５１−７８０（１９９２）参照)並びにタクロリムス（ＦＫ５０６）である。
【００２２】
シクロスポリンおよびそれらの製造は例えばＵＳ４１１７１１８に開示されている。該文献において、式Ｉの化合物における好ましい置換基が示されており、該好ましい置換基はまた本発明における好ましい置換基であり；例えば式Ｉの化合物において各１つの定義された置換基は、例えば定義された他の置換基と各々無関係に、好ましい置換基であり得る。当初、土壌菌体Ｐｏｔｙｐａｃｉａｄｉｕｍ ｉｎｆｉｌａｔｕｍから抽出されたシクロスポリンは環状１１−アミノ酸構造を有し、そしてシクロスポリンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＧ、好ましくはシクロスポリンＡのような例えばシクロスポリンＡからＩを含む。
【００２３】
アスコマイシンおよびそれらの製造は既知である。アスコマイシン（ＦＲ５２０）はマクロライド系抗生物質であり、例えばＵＳ３２４４５９２およびＥＰ３４９０６１に開示されている。該文献において、式Ｉの化合物における好ましい置換基が示されており、該好ましい置換基はまた本発明における好ましい置換基であり；例えば式Ｉの化合物において各１つの定義された置換基は、例えば定義された他の置換基と各々無関係に、好ましい置換基であり得る。広い範囲のアスコマイシン誘導体が知られており、天然の菌体から入手するかまたは発酵手順の操作によりもしくは化学的誘導化により入手し得る。
アスコマイシンは例えば上記式Ｉの化合物、好ましくはピメクロリムスを含む。
【００２４】
他の態様において本発明は、カルシニューリン阻害剤が、該置換基が上記の通り、好ましくは式Ｉｐの化合物である式Ｉの化合物である、コルチコイドおよび本発明に記載のカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用を提供する。
【００２５】
他の態様において本発明は、カルシニューリン阻害剤が式
【化５】
［式中、
Ｒ１はヒドロキシまたは保護されたヒドロキシであり、
Ｒ２は水素、ヒドロキシルまたは保護されたヒドロキシルであり、
Ｒ３はメチル、エチル、プロピルまたはアリルであり、
ｎは１または２の整数であり、そして
線および点線の記号は単結合である］
の化合物である、本発明に記載のカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の使用を提供する。
【００２６】
式ＩＩの化合物は、例えばＥＰ−Ｂ−０１８４１６２に開示されている。該文献において、式Ｉの化合物における好ましい置換基が示されており、該好ましい置換基はまた本発明における好ましい置換基であり；例えばＥＰ−Ｂ−０１８４１６２の式Ｉの化合物において各１つの定義された置換基は、例えば定義された他の置換基と各々無関係に、好ましい置換基であり得る。好ましい化合物は式ＩＩＦＫの化合物ＦＫ５０６（タクロリムス）である。
【００２７】
他の態様において本発明は、カルシニューリン阻害剤が式
【化６】
の化合物である、本発明に記載のカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の使用を提供する。
【００２８】
他の態様において本発明は、カルシニューリン阻害剤が式
【化７】
［式中、
Ｒはメチル、エチル、プロピル、イソプロピルまたは−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３であり、好ましくはＲがエチル（シクロスポリンＡ）である］
の化合物である、本発明に記載のカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の使用を提供する。
【００２９】
他の態様において本発明は、コルチコイドが上記コルチコイドから選択される、好ましくはコルチコイドがヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、例えばベタメタゾン１７−バレラート、およびデキサメタゾンからなる群から選択される、コルチコイドおよびカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用を提供する。
【００３０】
カルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の化合物は、塩および／または溶媒和物が存在するときには、遊離形、塩形、溶媒和物形または塩かつ溶媒和物形であり得る。
【００３１】
他の態様において本発明は、
カルシニューリン阻害剤が塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載のカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用；
コルチコイドが塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載のカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用；
カルシニューリン阻害剤およびコルチコイドのいずれもが塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載のカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用
を提供する。
【００３２】
本発明に記載の組合せ剤は、１以上のカルシニューリン阻害剤および１以上のコルチコイドを含み得、そして好ましくは１個のカルシニューリン阻害剤および１個のコルチコイドを含む。
【００３３】
本発明の組合せ剤の化合物は、遊離形または薬学的に許容される塩形、例えば酸付加塩または金属塩で；所望により溶媒和物の形で使用され、例えば投与され得る。コルチコイドはさらにエステル形、アセトニド、例えばおよびさらに塩形であり得る。塩／エステル／アセトニド／溶媒和物／形の本発明の組合せ剤の化合物は遊離形の；所望により溶媒和物形の本発明に使用される化合物と同じ程度の活性を示す。
処置および投与は上記式Ｉの化合物およびコルチコイドの組合せ剤と同様である。
【００３４】
例えば式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物を含むカルシニューリン阻害剤のコルチコイドに対する比は、例えば各１つの化合物の有効性のような様々な要因に依存する。
【００３５】
他の態様において本発明は、式Ｉｐの化合物およびヒドロコルチゾンの組合せ剤、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３６】
他の態様において本発明は、式Ｉｐの化合物およびベタメタゾン、例えばベタメタゾン１７−バレラートの組み合わせ剤、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３７】
他の態様において本発明は、式Ｉｐの化合物およびデキサメタゾンの組合せ剤、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３８】
本発明に記載の組合せ剤において、薬学的に許容される賦形剤、例えば適当な担体および／または希釈剤は、例えば増量剤、結合剤、崩壊剤、流動調節剤、滑沢剤、糖および甘味剤、芳香剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節のための塩、バッファーを含む。
【００３９】
本発明の組合せ剤は、
両方の薬学的活性剤が同一の製剤中に存在する、固定された組合せ剤；
別々の製剤中に存在する両方の薬学的活性剤が、例えば共投与のための指示書と共に同一のパッケージで販売される、キット；および
薬学的活性剤が別々にパッケージされているが、同時または連続投与のための指示書が与えられる、自由な組合せ剤
を含む。
【００４０】
本発明の医薬組成物は、例えば混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥法のような、例えば類似の、常套の方法に従って製造され得る。単位投与形態は、例えば約０．５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、例えば１ｍｇ〜約５００ｍｇの薬学的に活性な化合物を含み得る。
本発明の、および、本発明にしたがい使用するための医薬組成物は任意の常套の経路、例えば経鼻、頬側、直腸、経口を含む、例えば経腸投与；例えば静脈内、筋肉内、皮下を含む、非経腸投与；または例えば皮膚上、鼻腔内、気管内を含む局所的投与；により、例えばコーティングまたは非コーティング錠剤、カプセル剤、注射用溶液または懸濁液の形態で、例えばアンプル、バイアルの形態で、クリーム、ゲル、ペースト、吸入粉末、発泡剤、チンキ、リップスティック、ドロップ、スプレーの形態で、または座薬の形態で投与し得る。
【００４１】
例えば式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物を含むカルシニューリン阻害剤並びにコルチコイドは既知であるか、または常套方法に従って、または同様にして得られ得る。
【００４２】
本発明の組合せ剤は、有効成分としてカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドに加え、さらに薬学的に活性な化合物を含み得る。このようなさらに薬学的に活性な化合物には他の抗炎症性、免疫調節性および抗増殖性剤が含まれる。
【００４３】
他の態様において本発明は、さらに他の薬学的活性剤を含む本発明の医薬組成物を提供する。
【００４４】
本発明者らは、コルチコイド単独で、または例えばシクロスポリンＡおよび式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物を含むカルシニューリン阻害剤単独で、Ｔ細胞増殖に全く効果がないかまたは部分的にしか効果を示さない、コルチコイドおよび／またはカルシニューリン阻害剤に対する耐性のインビトロ実験モデルに使用するヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いるインビトロ系を確立した。本明細書中にコルチコイド耐性および／またはカルシニューリン阻害剤耐性、例えば式Ｉの化合物耐性として記載のこれらの系は９６ウェルプレートにおいて、５００００〜２０００００細胞／ウェルのような高い細胞濃度、およびＴ細胞増殖の強力な刺激、すなわち超抗原ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（Staphylococcal Enterotoxin Ｂ）（ＳＥＢ）および／または抗ＣＤ３と抗ＣＤ２８モノクローナル抗体の組合せを使用する。これは、コルチコイドおよびカルシニューリン阻害剤がナノモルからナノモル以下での完全な、またはほとんど完全なＴ細胞増殖阻害を示す、より低い細胞濃度および／またはより低い刺激、例えば抗ＣＤ３抗体単独を使用する系と対照をなす。
【００４５】
驚くべきことに、本明細書中に記載の耐性系において、本発明者らは、カルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤が強くＴ細胞増殖を阻害（例えば６０％阻害から完全阻害まで）し、一方、組合せ剤の１つの構成要素は全く阻害しないかまたは３５％より多くは阻害しないことを発見した。判定および測定は実施例の“方法”に記載の通りである。
【００４６】
実施例に示したように、本発明者らは、本発明のインビトロ系において、式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩ、例えばＩｐ、ＩＩＦＫの化合物、またはシクロスポリンＡ単独、またはヒドロコルチゾン単独、またはベタメタゾン１７−バレラート単独、またはデキサメタゾン単独では本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないか、または部分的、例えば３５％未満の阻害しか示さないかもしれないが、一方、ヒドロコルチゾンおよび式Ｉｐの化合物の組合せ剤、またはベタメタゾン１７−バレラートおよび式Ｉｐの化合物の組合せ剤、またはデキサメタゾンおよび式Ｉｐの化合物の組合せ剤、またはヒドロコルチゾンおよび式ＩＩＦＫの化合物の組合せ剤、またはデキサメタゾンおよび式ＩＩＦＫの化合物の組合せ剤、またはヒドロコルチゾンおよびシクロスポリンＡの組合せ剤、またはベタメタゾン１７−バレラートおよびシクロスポリンＡの組合せ剤、またはデキサメタゾンおよびシクロスポリンＡの組合せ剤が同アッセイにおいて少なくとも６０％阻害から完全阻害までを示すことを発見した。従って本発明者らは、１つの構成成分が阻害を示さないか、または３５％未満、例えば２５％未満、例えば２０％未満の阻害を示す場合には、本発明の化合物の組合せ剤が活性を示し得ることを発見した。
【００４７】
以下の実施例において温度は摂氏（℃）で与えられ、補正はされていない。
以下の略語を用いる：
【表１】
【実施例】
【００４８】
実施例Ａ
材料
ヒトＴ細胞レセプターを刺激する、マウス抗ＣＤ３ｍＡｂ（クローンＳＰＶ−Ｔ３／１、アイソタイプＩｇＧ２ａ）が知られており（Spits H．，Keizer G．，Borst J． et al．，（１９８３） Characterization of monoclonal antibodies against cell surface molecules associated with cytotoxic activity of natural and activated killer cells and cloned CTL lines、Hybridoma ２：４２３−４３７）そして適切に用意し得る。マウス抗ＣＤ２８ｍＡｂ（クローンＣＤ２８．２、アイソタイプＩｇＧ１，κ）がＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得られる（カタログ番号５５５７２５）。ＳＥＢがＴｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．（sarasota，Florida，ＵＳＡ；カタログ番号ＴＸ−ＢＴ２０２）から得られる。ＤＮＡ合成中のＢｒｄＵ取り込みの測定に基づく細胞増殖ＥＬＩＳＡキット（比色分析）がＲｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Mannheim，Germany）から得られる。これらのキットは製造業者の説明書に従って使用する。
【００４９】
細胞培養
ＰＢＭＣを滅菌条件下でヒト軟膜からＦｉｃｏｌｌ／Ｈｙｐａｑｕｅ遠心分離器で単離し、９０％ＦＣＳ＋１０％ＤＭＳＯ中で凍結し、液体窒素中で保存する。各実験のために凍結したＰＢＭＣを解凍し、次いで洗浄し、１０％熱不活性化ＦＣＳ（Gibco）、２ｍＭグルタミン、０．１ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび１００単位／ｍｌペニシリン（Gibco）を補ったＲＰＭＩ１６４０（Gibco-BRL，Paisley，UK）からなる培養培地中で再懸濁する。得られた細胞懸濁液の０．１ｍｌを、９６ウェル平底細胞培養プレート（Nunc，Roskilde，Denmark）の２〜１１列に、ウェルごとに加えるが、１２列は培地のみを含み、培地ブランクとして使用する。内側のウェルのみが細胞を受け取り、実験に使用される（すなわち１列並びにＡおよびＨ行は除く；培地のみを入れる）。最初に溶媒対照および試験化合物（０．０５ｍｌ／ウェル添加）を細胞と３７℃／５％ＣＯ２にて２時間インキュベーションする。次いで刺激物質を、培養培地（０．０５ｍｌ／ウェル）を入れる非刺激対照を除き、全ウェルに示された最終濃度まで加え（０．０５ｍｌ／ウェル添加）、該プレートをさらに６８時間３７℃／５％ＣＯ２にてインキュベーションし、その後ＢｒｄＵ（ＥＬＩＳＡキットから０．０２ｍｌ／ウェルのＢｒｄＵ標識溶液［＝細胞培養培地中１０μＭのＢｒｄＵ］）を添加する。さらなる３７℃／５％ＣＯ２４時間でのインキュベーションの後、該プレートを１２００ｒｐｍ（３００×ｇ）１０分間室温にて遠心分離する。上清を除去した後、細胞を乾燥するために該プレートを６０℃にて１時間インキュベーションする。溶媒対照および各化合物または化合物の組合せ剤（示された最終濃度で）を３連（すなわち濃度あたり３ウェル）で試験する。試験化合物（すなわち本発明の化合物−組合せ剤およびかかる組合せ剤の１つの化合物）をＤＭＳＯ中に溶解し、次いで細胞プレート中の最終ＤＭＳＯ濃度が０.２％（ｖ／ｖ）を越えないように細胞培養培地へと希釈する。
【００５０】
Ｔ細胞増殖アッセイ
ＥＬＩＳＡキット（Roche Molecular Biochemicals）を製造業者の説明書に従って使用して、ＤＮＡ合成中のＢｒｄＵ取り込みに基づく細胞増殖の測定のために、該プレートを処理する。光学密度を、６９０ｎｍを参照波長として、マイクロタイタープレートリーダーで４５０ｎｍにて測定する。吸光度データはソフトウェアプログラムＥｘｃｅｌ（登録商標）を用いて分析する。細胞なしのウェルにおける値の平均値をブランクとして使用し、他の値から引く。各化合物および化合物の組合せ剤での吸収の平均および標準偏差を計算し、次いで１００％として定義された刺激物質を含む溶媒対照（すなわち刺激対照）に対して標準化する。各化合物または化合物の組合せ剤の阻害％も計算する。
【００５１】
以下の実施例１〜２７において、Ｔ細胞増殖アッセイを本明細書中に記載と類似の方法で行う。
０日目に細胞を９６ウェル細胞培養プレートに播種し、刺激物質の添加前に２時間あらかじめ化合物（複数も可）とインキュベーションする。３日目に（すなわち６８時間後）ＢｒｄＵを加え、４時間プレートをインキュベーションし、その後、ＢｒｄＵ ＥＬＩＳＡを介するＢｒｄＵ取り込みの測定のために処理する。
【００５２】
表において、以下の用語が定義される：
“非刺激対照”：非刺激対照（すなわち細胞−刺激物質および化合物（複数も有））の測定されたＯＤ値の平均、並びに計算されたＳＤ値。
“刺激対照”：刺激対照（すなわち細胞＋刺激物質および化合物（複数も有））の測定されたＯＤ値の平均、並びに計算されたＳＤ値。
“化合物（複数も有）”：刺激物質および化合物（複数も有）の存在下におけるサンプルについて測定したＯＤ値の平均、並びに計算されたＳＤ値。
“標準化ＯＤ［またはＳＤ］（刺激対照％）”：ＯＤおよびＳＤ値を、１００に設定された刺激対照と相関して標準化する。
“阻害％”：１００％−［（サンプルＯＤ−非刺激対照ＯＤ）／（刺激対照ＯＤ−非刺激対照ＯＤ）］×１００％と定義する。負の値は刺激対照（０％阻害と定義する）と比較して増殖の刺激を示す。１００より大きい値は非刺激対照（１００％阻害と定義する）のレベルより低い阻害を示す。
【００５３】
実施例１
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も有）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１に示したように得られた。
【表２】
【００５４】
表１から、ＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、本質的にこの系においてＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では６５％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００５５】
実施例２
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も有）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２に示したように得られた。
【表３】
【００５６】
表２から、ＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１７％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では７３％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００５７】
実施例３
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表３に示したように得られた。
【表４】
【００５８】
表３からＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９３％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００５９】
実施例４
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表４に示したように得られた。
【表５】
【００６０】
表４からＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１７％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００６１】
実施例５
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表５に示したように得られた。
【表６】
【００６２】
表５からＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００６３】
実施例６
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表６に示したように得られた。
【表７】
【００６４】
表６からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤は７９％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００６５】
実施例７
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表７に示したように得られた。
【表８】
【００６６】
表７からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８６％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００６７】
実施例８
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表８に示したように得られた。
【表９】
【００６８】
表８からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９６％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００６９】
実施例９
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表９に示したように得られた。
【表１０】
【００７０】
表９からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１９％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では１００％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００７１】
実施例１０
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１０に示したように得られた。
【表１１】
【００７２】
表１０からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独ではこの系において３４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００７３】
実施例１１
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、およびＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１１に示したように得られた。
【表１２】
【００７４】
表１１からＡＳＭ単独およびＤＥＸ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤では９６％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００７５】
実施例１２
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、およびＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１２に示したように得られた。
【表１３】
【００７６】
表１２からＡＳＭ単独およびＤＥＸ単独では、この系において２４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤では１０１％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００７７】
実施例１３
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１３に示したように得られた。
【表１４】
【００７８】
表１３からＦＫ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＦＫ＋ＨＣの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では６０％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００７９】
実施例１４
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１４に示したように得られた。
【表１５】
【００８０】
表１４からＦＫ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独ではこの系において３１％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＦＫ＋ＨＣの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８０％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００８１】
実施例１５
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）の組合せ剤
結果：下記表１５に示したように得られた。
【表１６】
【００８２】
表１５からＦＫ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すがＦＫ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８８％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００８３】
実施例１６
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１６に示したように得られた。
【表１７】
【００８４】
表１６からＦＫ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＦＫ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９２％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００８５】
実施例１７
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１７に示したように得られた。
【表１８】
【００８６】
表１７からＦＫ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＦＫ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００８７】
実施例１８
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、およびＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１８に示したように得られた。
【表１９】
【００８８】
表１８からＦＫ単独およびＤＥＸ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＦＫ＋ＤＥＸの組合せ剤では９８％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００８９】
実施例１９
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１９に示したように得られた。
【表２０】
【００９０】
表１９からＣｓＡ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＣｓＡ＋ＨＣの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では７５％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００９１】
実施例２０
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２０に示したように得られた。
【表２１】
【００９２】
表２０からＣｓＡ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＨＣの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８９％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００９３】
実施例２１
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２１に示したように得られた。
【表２２】
【００９４】
表２１からＣｓＡ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＣｓＡ＋ＨＣの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９７％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００９５】
実施例２２
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２２に示したように得られた。
【表２３】
【００９６】
表２２からＣｓＡ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１７％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すがＣｓＡ＋ＨＣの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００９７】
実施例２３
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２３に示したように得られた。
【表２４】
【００９８】
表２３からＣｓＡ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独ではこの系において１４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８８％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００９９】
実施例２４
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２４に示したように得られた。
【表２５】
【０１００】
表２４からＣｓＡ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すがＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９４％より多い阻害を示すことは明らかである。
【０１０１】
実施例２５
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２５に示したように得られた。
【表２６】
【０１０２】
表２５からＣｓＡ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９８％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【０１０３】
実施例２６
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２６に示したように得られた。
【表２７】
【０１０４】
表２６からＣｓＡ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独ではこの系において１６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では１００％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【０１０５】
実施例２７
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、およびＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２７に示したように得られた。
【表２８】
【０１０６】
表２７からＣｓＡ単独およびＤＥＸ単独では、この系において２９％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤では９８％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は医薬組合せ剤、例えば薬学的に活性な化合物の組合せ剤の、新規な使用に関する。
【０００２】
Ｔ細胞増殖、すなわちＴリンパ球の増殖を阻害する物質は、例えばグルココルチコイドのようなコルチコイドおよびそれらの誘導体を含む免疫抑制および／または免疫調節剤として治療上使用されてきた。しかし、かかる薬剤に対する耐性、例えばコルチコイド耐性が存在し、または発生し得ることが知られており、それはその後は様々な疾患の処置の成功にはかかる薬剤は有効ではないか、または十分に有効ではないことを意味する。
驚くべきことに、本発明者らは本発明において組合せ治療を適用するときにはかかる薬剤の耐性を克服し得ることを発見した。
【０００３】
ある態様において、本発明はコルチコイドおよび式
【化１】
〔式中、
Ｒ１は式
【化２】
［式中、
Ｒ５はクロロ、ブロモ、ヨードまたはアジドであり、
Ｒ６はヒドロキシまたはメトキシであり、そして
Ｒ４はヒドロキシであり、その場合１０、１１位に単結合が存在するか；または存在せず、その場合１０、１１位に二重結合が存在する］
の基（ａ）であるか、
または
Ｒ１は式
【化３】
［式中
Ｒ６は上記定義の通りであり、そして
Ｒ４はヒドロキシであり、その場合１０、１１位に単結合が存在する］
の基（ｂ）または基（ｃ）であり、
Ｒ２はオキソであり、その場合２３、２４位に単結合が存在するか；ヒドロキシであり、その場合２３、２４位に単結合または二重結合が存在するか；または存在せず、その場合２３、２４位に二重結合が存在し；
Ｒ３はメチル、エチル、プロピルまたはアリルである〕
の化合物の組合せ剤の、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用、例えば式Ｉの化合物単独でまたはコルチコイド単独で効果がないかまたは不十分な疾患の処置用医薬の製造のための使用を提供する。
【０００４】
治療上効果がないかまたは不十分とは、臨床環境において本発明の組合せ剤の化合物単独では効果を示さず、または十分な効果を示さないことを意味する。本発明者らは例えば本明細書中に記載のように、コルチコイド単独またはカルシニューリン阻害剤単独で、ある条件下において治療的処置に必要な程度にＴ細胞増殖を阻害しないインビトロ系を確立した。これらの系は、従ってコルチコイドおよび／またはカルシニューリン阻害剤耐性のインビトロ実験モデルとして使用される。
本発明者らは、３５％未満、例えば２５％未満、例えば２０％未満の阻害効果を有する本発明の組合せ剤の化合物単独では、治療処置には不十分であると定義した。他方、本発明者らは、少なくとも６０％以上、例えば８０％、９０％、実質的に１００％までの阻害効果が達成される場合には、本発明の組合せ剤の化合物単独が治療処置に十分であると定義した。
【０００５】
式Ｉの化合物は例えばＥＰ−Ｂ−０４２７６８０において開示されている。該文献において、式Ｉの化合物における好ましい置換基が示されており、該好ましい置換基はまた本発明における好ましい置換基であり；例えば式Ｉの化合物において各１つの定義された置換基は、例えば定義された他の置換基と各々無関係に、好ましい置換基であり得て；例えばＥＰ−Ｂ−０４２７６８０の実施例６６ａに“３３−エピ−３３−クロロ−ＦＲ５２０”として開示され、“ＡＳＭ９８１”としても知られているような式Ｉｐの化合物を含む。
【０００６】
他の態様において本発明は、式Ｉの化合物が式
【化４】
の化合物である、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用を提供する。
【０００７】
本発明において、コルチコイドは薬学的に活性なコルチコイドおよびその誘導体を含み、例えば薬学的な活性を示すグルココルチコイド（すなわちグルココルチコイド様活性を有する）のようなコルチコステロイド、並びにグルココルチコイドレセプターの非ステロイド性リガンドを含み、
例えば遊離形の、および
−例えばナトリウム塩のような例えば塩形のモノおよびジエステルを、例えば含むエステル形の、
−アセトニドのようなアセタール形およびケタール形の、
例えば適用可能なときには塩形および溶媒和物形の、コルチコイドを含む。
【０００８】
アルクロメタゾン（例えばジプロプリオネート(diproprionate)）、アミシノニド、ベクロメタゾン（例えばジプロピオネート）、ベタメタゾン（例えばアセテート、ベンゾエート、ジプロピオネート、ナトリウムホスフェート、バレラート）、ブデソニド、カルベノキソロン（例えばナトリウム）、シクレソニド、クロベタソール（例えばプロピオネート）、クロベタゾン（例えばブチレート）、クロコルトロン（例えばアセテート、ピバレート）、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチコトロピン（例えば亜鉛ヒドロキシド）、コルチゾル、コルチゾン（例えばアセテート）、コルチバゾル、デフラザコート、デスシノロン（例えばアセトニド）、デソニド、デキサメタゾン（例えばナトリウムホスフェート、アセテート、イソミコチネート）、デソキシメタゾン、ジフロラゾン（例えばジアセテート）、ジフルオコルトロン（例えばピバレート、バレラート）、ジフルプレドネート、フルクロロニド、フルドロコルチゾン、フルドロキシコルチド、フルメタゾン（例えばピバレート）、フルニソリド、フルオコルチン（ブチル）、フルオシノニド、フルオシノロン（例えばアセトニド）、フルオコルトロン（例えばカプロエート）、フルオロメトロン、フルペロロン（例えばアセテート）、フルプレドニデン（例えば２１−アセタール、アセテート）、フルプレドニゾロン（例えばバレラート）、フルランドレノリド、フルチカゾン（例えばプロピオネート、バレラート）、ホルモコルタル、ハルシノニド、ハロベタゾール（例えばプロピオネート）、ハロメタゾン（例えば一水和物）、ヒドロコルチゾン（例えばアセテート、ブテプレート、ブチレート、シピオネート、ナトリウムホスフェート、コハク酸ナトリウム、ヘミスクシネート、バレラート）、メドリゾン、メチルプレドニゾロン（例えばアセテート、ナトリウムホスフェート、ナトリウムスクシネート、アセポネート）、モメタゾン（例えばフルオレート）、ニバゾール、パラメタゾン（例えばアセテート）、プレドニカルベート、プレドニゾロン（例えばアセテート、ヘミスクシネート、ナトリウムホスフェート、ナトリウムスクシネート、テブテート）、プレドニゾン、プレドニゾロン、プレドニバル、プレドニリデン、ロフレポニド（例えばパルミテート）、チカベゾン（例えばプロピオネート）、チプレダン、トラロニド、トリアムシノロン（例えばアセトニド、アセトニドナトリウムホスフェート、ジアセテート）、例えば、およびその薬力学的等価物、好ましくはヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、例えばベタメタゾン１７−バレラート、またはデキサメタゾンが、例に含まれる。
【０００９】
薬力学的等価物とは本明細書に列記した特定のコルチコイドとの比較において、類似の薬学的な活性を有するコルチコイドを含むこと意味する。
薬学的な賦形剤には例えば、適切な担体および／または希釈剤、例えば増量剤、結合剤、崩壊剤、流動調節剤、滑沢剤、糖および甘味料、芳香剤、保存剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節のための塩および／またはバッファーが含まれる。
【００１０】
他の態様において本発明は、コルチコイドがヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、例えばベタメタゾン１７−バレラートおよびデキサメタゾンからなる群から選択される、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用を提供する。
【００１１】
本発明に記載の組合せ剤の化合物は、塩および／または溶媒和物が存在するときには、遊離形、塩形、溶媒和物形または塩かつ溶媒和物形であり得る。
【００１２】
他の態様において本発明は
式Ｉの化合物が塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用；
コルチコイドが塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用；
式Ｉの化合物およびコルチコイドのいずれもが塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用を提供する。
【００１３】
コルチコイド耐性疾患は既知であり、例えば
脱毛症、例えば完全脱毛症または全身性脱毛症；
アレルギー、例えば接触アレルギー；
アミロイド症、例えば全身性アミロイド症；
動脈炎、例えば高安動脈炎；
関節炎、例えば（若年性）リウマチ性関節炎、若年性少関節炎、サルコイドーシス関節炎；
関節症、例えば脊椎関節症；
喘息、例えば気管支喘息、慢性喘息；
大腸炎；
結膜炎、例えば乾性角結膜炎；
クローン病、難治性クローン病と関連したコルチコステロイド耐性壊疽性膿皮症を含むクローン病；
嚢包性線維症；
接触性、アトピー性、接触アレルギー性および日光性皮膚炎、苔癬状皮膚炎、潰瘍性皮膚炎のような皮膚炎（＝皮膚疾患）；
多発性硬化症、例えば脳多発性硬化症；
湿疹；
グレーブス病、例えばグレーブス眼症；
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）；
血管腫；
肝炎；
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；
インシュリン依存性糖尿病；
眼内炎症性疾患；
角膜炎；
マクロファージ活性化症候群；
筋無力症、例えば重症筋無力症；
脊髄炎、例えば脳脊髄炎；
筋炎、例えば（若年性）皮膚筋炎（ＤＭ）、多発性筋炎（ＰＭ）および封入体筋炎（ＩＢＭ）；
腎炎、例えば糸球体腎炎、腎炎症候群；
眼炎、例えば交感神経性眼炎；
肺炎；
多発性関節炎、例えばスティル病のような慢性多発性関節炎；
乾癬；
肺性または肺疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；
網膜剥離；
サルコイドーシスまたは神経性サルコイドーシス；
強膜炎；
硬化症、例えば糸球体硬化症；
感染性ショック；
ショーグレン症候群；
全身性エリテマトーデス；
移植片拒絶、例えば（腎または腎臓）同種移植片拒絶；
血小板減少性紫斑病、例えば免疫性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、（慢性）特発性血小板減少性紫斑病；
潰瘍性大腸炎；
蕁麻疹、例えば（慢性）特発性蕁麻疹、蕁麻疹様血管炎；
ブドウ膜炎、例えば前部ブドウ膜炎、慢性ブドウ膜炎、末梢ブドウ膜炎、難治性ブドウ膜炎、べーチェットブドウ膜炎、Vogt−小柳−原田病のような肉芽腫ブドウ膜炎を含む。
【００１４】
他の態様において、本発明は、コルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物、例えば式Ｉｐの化合物の組合せ剤の使用であって、該疾患が、Ｔ細胞介在急性もしくは慢性炎症性疾患もしくは障害または自己免疫疾患のようなＴ細胞（すなわちＴリンパ球）を疾患の病態生理に含む疾患であり、例えば疾患が、式Ｉの化合物、例えば式Ｉｐの化合物単独、またはコルチコイド単独では効果がないかまたは効果が不十分である、
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）；
例えば溶血性貧血、再生不良性貧血、真性赤血球性貧血および特発性血小板減少症を含む血液障害、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫、慢性活動性肝炎、橋本甲状腺炎、スティーブン・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、間質性肺線維症、重症筋無力症、糸球体腎炎（ネフローゼ候群を有するまたは有さない）、若年性皮膚筋炎、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、眼の免疫介在症状、例えばブドウ膜炎（前部および後部）、角膜移植、慢性角膜炎、乾性角結膜炎、春期カタルのような自己免疫疾患および炎症性症状、とりわけ自己免疫要素を含む病因を有する炎症性症状；
免疫介在性疾患の皮膚症状；
炎症性および過増殖性皮膚疾患、例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎およびさらに湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加、エリテマトーデスおよびざ瘡；
アレルギー症状、例えば春期結膜炎、眼アレルギー；
炎症性神経障害、例えば脳炎；
脳無酸素症、低酸素症または虚血；
喘息；
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；
潰瘍性大腸炎およびクローン症を含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；
多剤耐性（ＭＤＲ）；
および
円形脱毛症、
からなる群から選択される、使用を提供する。
【００１５】
他の態様において本発明はコルチコイドおよび本発明に記載の式Ｉの化合物の組合せ剤の使用であって、該疾患がアトピー性皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、喘息、潰瘍性大腸炎およびクローン症からなる群から選択される、使用を提供する。
【００１６】
処置には処置および予防を含む。
かかる処置のために、適切な投与量は、例えば使用される本発明の化合物の化学的な性質および薬動力学のデータ、個々の宿主、投与形態並びに処置される症状の性質および重症度に依存して当然変化するだろう。しかし、一般に大型哺乳類、例えばヒトにおける満足のいく結果のために、カルシニューリン阻害剤、例えばピメクロリムスを、溶液またはクリームとして、局所投与の場合には、約０．１％〜５％ｗ／ｖまたはｗ／ｗの範囲（投与量は処置される疾患の種類並びに投与部位に依存するだろう）で、または全身投与、例えば経口投与の場合には、患者あたり１０ｍｇ〜１２０ｍｇ、例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇのカルシニューリン阻害剤、例えばピメクロリムスを投与し得、そしてコルチコイドは標準的治療法として既知の投与量で、例えば局所投与の場合には例えば０．５〜５％の範囲で、または全身投与、例えば経口投与の場合には例えば０．２５〜２５００ｍｇ、好ましくは１〜５００ｍｇ、例えば１〜５０ｍｇの範囲で投与される。
【００１７】
他の態様において本発明はＴ細胞が病態生理に含まれるが、ただしＴ細胞が疾患の病態生理に含まれる巣状分節状糸球体硬化症を除く、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用、例えばカルシニューリン阻害剤またはコルチコイド単独では効果がないかまたは効果が不十分である疾患の処置用医薬、例えば医薬組成物の製造のための、コルチコイドおよびカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用を提供する。
【００１８】
他の態様において本発明は、該疾患が、カルシニューリン阻害剤単独でまたはコルチコイド単独で効果がないかまたは効果が不十分である、以下の群
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）；
例えば溶血性貧血、再生不良性貧血、真性赤血球性貧血および特発性血小板減少症を含む血液疾患、リウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェゲナー肉芽腫、慢性活動性肝炎、橋本甲状腺炎、スティーブン・ジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫性炎症性腸疾患、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、間質性肺線維症、重症筋無力症、糸球体腎炎（ネフローゼ症候群を有するまたは有さない）、若年性皮膚筋炎、若年性糖尿病（Ｉ型糖尿病）、眼の免疫介在症状、例えばブドウ膜炎（前部および後部）、角膜移植、慢性角膜炎、乾性角結膜炎、春期カタルのような自己免疫性疾患および炎症性症状、とりわけ自己免疫要素を含む病因を有する炎症性症状；
免疫介在性疾患の皮膚症状；
炎症性および過増殖性皮膚疾患、例えば乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎およびさらに湿疹様皮膚炎、脂漏性皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、エリテマトーデスおよびざ瘡；
アレルギー症状、例えば春季結膜炎、眼アレルギー；
炎症性神経障害、例えば脳炎；
脳無酸素症、低酸素症または虚血；
喘息；
潰瘍性大腸炎およびクローン症を含む、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）；
多剤耐性（ＭＤＲ）；
潰瘍、例えば胃潰瘍；
虚血性疾患および血栓症により引き起こされる血管障害；
熱傷に関連した壊死性病変；
および
円形脱毛症、
から選択される、本発明に記載のカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の使用を提供する。
【００１９】
“コルチコイド耐性疾患”および／または“カルシニューリン阻害剤耐性疾患”は上記定義の通りである。
【００２０】
カルシニューリンは、細胞内伝達に含まれるカルシウム／カルモジュリン制御タンパク質ホスファターゼである。カルシニューリンの概説のために、例えばＲｕｓｎａｋ ａｎｄ Ｍｅｒｔｚ， Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｒｅｖ．８０，１４８３−１５２１（２０００）およびＦｅｓｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３１１，１１１７−１１３２（２００３）を参照のこと。
カルシニューリン阻害剤はカルシニューリンの適当な基質の脱リン酸を阻害する物質である。
【００２１】
本発明のカルシニューリン阻害剤は好ましくはカルシニューリン阻害活性を有するイムノフィリン結合化合物である。
イムノフィリン結合カルシニューリン阻害剤はイムノフィリン、例えばシクロフィリンおよびマクロフィリンとカルシニューリン阻害複合体を形成する化合物である。
シクロフィリン結合カルシニューリン阻害剤の例はシクロスポリンまたはシクロスポリン誘導体（以後シクロスポリン）であり、マクロフィリン結合カルシニューリン阻害剤の例はアスコマイシンおよびアスコマイシン誘導体（以後アスコマイシン）(例えばＬｉｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ ６６，８０７−８１５（１９９１）およびＤｕｍｏｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７６，７５１−７８０（１９９２）参照)並びにタクロリムス（ＦＫ５０６）である。
【００２２】
シクロスポリンおよびそれらの製造は例えばＵＳ４１１７１１８に開示されている。該文献において、式Ｉの化合物における好ましい置換基が示されており、該好ましい置換基はまた本発明における好ましい置換基であり；例えば式Ｉの化合物において各１つの定義された置換基は、例えば定義された他の置換基と各々無関係に、好ましい置換基であり得る。当初、土壌菌体Ｐｏｔｙｐａｃｉａｄｉｕｍ ｉｎｆｉｌａｔｕｍから抽出されたシクロスポリンは環状１１−アミノ酸構造を有し、そしてシクロスポリンＡ、Ｂ、Ｃ、ＤおよびＧ、好ましくはシクロスポリンＡのような例えばシクロスポリンＡからＩを含む。
【００２３】
アスコマイシンおよびそれらの製造は既知である。アスコマイシン（ＦＲ５２０）はマクロライド系抗生物質であり、例えばＵＳ３２４４５９２およびＥＰ３４９０６１に開示されている。該文献において、式Ｉの化合物における好ましい置換基が示されており、該好ましい置換基はまた本発明における好ましい置換基であり；例えば式Ｉの化合物において各１つの定義された置換基は、例えば定義された他の置換基と各々無関係に、好ましい置換基であり得る。広い範囲のアスコマイシン誘導体が知られており、天然の菌体から入手するかまたは発酵手順の操作によりもしくは化学的誘導化により入手し得る。
アスコマイシンは例えば上記式Ｉの化合物、好ましくはピメクロリムスを含む。
【００２４】
他の態様において本発明は、カルシニューリン阻害剤が、該置換基が上記の通り、好ましくは式Ｉｐの化合物である式Ｉの化合物である、コルチコイドおよび本発明に記載のカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用を提供する。
【００２５】
他の態様において本発明は、カルシニューリン阻害剤が式
【化５】
［式中、
Ｒ１はヒドロキシまたは保護されたヒドロキシであり、
Ｒ２は水素、ヒドロキシルまたは保護されたヒドロキシルであり、
Ｒ３はメチル、エチル、プロピルまたはアリルであり、
ｎは１または２の整数であり、そして
線および点線の記号は単結合である］
の化合物である、本発明に記載のカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の使用を提供する。
【００２６】
式ＩＩの化合物は、例えばＥＰ−Ｂ−０１８４１６２に開示されている。該文献において、式Ｉの化合物における好ましい置換基が示されており、該好ましい置換基はまた本発明における好ましい置換基であり；例えばＥＰ−Ｂ−０１８４１６２の式Ｉの化合物において各１つの定義された置換基は、例えば定義された他の置換基と各々無関係に、好ましい置換基であり得る。好ましい化合物は式ＩＩＦＫの化合物ＦＫ５０６（タクロリムス）である。
【００２７】
他の態様において本発明は、カルシニューリン阻害剤が式
【化６】
の化合物である、本発明に記載のカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の使用を提供する。
【００２８】
他の態様において本発明は、カルシニューリン阻害剤が式
【化７】
［式中、
Ｒはメチル、エチル、プロピル、イソプロピルまたは−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３であり、好ましくはＲがエチル（シクロスポリンＡ）である］
の化合物である、本発明に記載のカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の使用を提供する。
【００２９】
他の態様において本発明は、コルチコイドが上記コルチコイドから選択される、好ましくはコルチコイドがヒドロコルチゾン、ベタメタゾン、例えばベタメタゾン１７−バレラート、およびデキサメタゾンからなる群から選択される、コルチコイドおよびカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用を提供する。
【００３０】
カルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤の化合物は、塩および／または溶媒和物が存在するときには、遊離形、塩形、溶媒和物形または塩かつ溶媒和物形であり得る。
【００３１】
他の態様において本発明は、
カルシニューリン阻害剤が塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載のカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用；
コルチコイドが塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載のカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用；
カルシニューリン阻害剤およびコルチコイドのいずれもが塩形である、コルチコイドおよび本発明に記載のカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用
を提供する。
【００３２】
本発明に記載の組合せ剤は、１以上のカルシニューリン阻害剤および１以上のコルチコイドを含み得、そして好ましくは１個のカルシニューリン阻害剤および１個のコルチコイドを含む。
【００３３】
本発明の組合せ剤の化合物は、遊離形または薬学的に許容される塩形、例えば酸付加塩または金属塩で；所望により溶媒和物の形で使用され、例えば投与され得る。コルチコイドはさらにエステル形、アセトニド、例えばおよびさらに塩形であり得る。塩／エステル／アセトニド／溶媒和物／形の本発明の組合せ剤の化合物は遊離形の；所望により溶媒和物形の本発明に使用される化合物と同じ程度の活性を示す。
処置および投与は上記式Ｉの化合物およびコルチコイドの組合せ剤と同様である。
【００３４】
例えば式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物を含むカルシニューリン阻害剤のコルチコイドに対する比は、例えば各１つの化合物の有効性のような様々な要因に依存する。
【００３５】
他の態様において本発明は、式Ｉｐの化合物およびヒドロコルチゾンの組合せ剤、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３６】
他の態様において本発明は、式Ｉｐの化合物およびベタメタゾン、例えばベタメタゾン１７−バレラートの組み合わせ剤、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３７】
他の態様において本発明は、式Ｉｐの化合物およびデキサメタゾンの組合せ剤、さらに薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００３８】
本発明に記載の組合せ剤において、薬学的に許容される賦形剤、例えば適当な担体および／または希釈剤は、例えば増量剤、結合剤、崩壊剤、流動調節剤、滑沢剤、糖および甘味剤、芳香剤、保存剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節のための塩、バッファーを含む。
【００３９】
本発明の組合せ剤は、
両方の薬学的活性剤が同一の製剤中に存在する、固定された組合せ剤；
別々の製剤中に存在する両方の薬学的活性剤が、例えば共投与のための指示書と共に同一のパッケージで販売される、キット；および
薬学的活性剤が別々にパッケージされているが、同時または連続投与のための指示書が与えられる、自由な組合せ剤
を含む。
【００４０】
本発明の医薬組成物は、例えば混合、造粒、コーティング、溶解または凍結乾燥法のような、例えば類似の、常套の方法に従って製造され得る。単位投与形態は、例えば約０．５ｍｇ〜約１０００ｍｇ、例えば１ｍｇ〜約５００ｍｇの薬学的に活性な化合物を含み得る。
本発明の、および、本発明にしたがい使用するための医薬組成物は任意の常套の経路、例えば経鼻、頬側、直腸、経口を含む、例えば経腸投与；例えば静脈内、筋肉内、皮下を含む、非経腸投与；または例えば皮膚上、鼻腔内、気管内を含む局所的投与；により、例えばコーティングまたは非コーティング錠剤、カプセル剤、注射用溶液または懸濁液の形態で、例えばアンプル、バイアルの形態で、クリーム、ゲル、ペースト、吸入粉末、発泡剤、チンキ、リップスティック、ドロップ、スプレーの形態で、または座薬の形態で投与し得る。
【００４１】
例えば式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物を含むカルシニューリン阻害剤並びにコルチコイドは既知であるか、または常套方法に従って、または同様にして得られ得る。
【００４２】
本発明の組合せ剤は、有効成分としてカルシニューリン阻害剤およびコルチコイドに加え、さらに薬学的に活性な化合物を含み得る。このようなさらに薬学的に活性な化合物には他の抗炎症性、免疫調節性および抗増殖性剤が含まれる。
【００４３】
他の態様において本発明は、さらに他の薬学的活性剤を含む本発明の医薬組成物を提供する。
【００４４】
本発明者らは、コルチコイド単独で、または例えばシクロスポリンＡおよび式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物を含むカルシニューリン阻害剤単独で、Ｔ細胞増殖に全く効果がないかまたは部分的にしか効果を示さない、コルチコイドおよび／またはカルシニューリン阻害剤に対する耐性のインビトロ実験モデルに使用するヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を用いるインビトロ系を確立した。本明細書中にコルチコイド耐性および／またはカルシニューリン阻害剤耐性、例えば式Ｉの化合物耐性として記載のこれらの系は９６ウェルプレートにおいて、５００００〜２０００００細胞／ウェルのような高い細胞濃度、およびＴ細胞増殖の強力な刺激、すなわち超抗原ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（Staphylococcal Enterotoxin Ｂ）（ＳＥＢ）および／または抗ＣＤ３と抗ＣＤ２８モノクローナル抗体の組合せを使用する。これは、コルチコイドおよびカルシニューリン阻害剤がナノモルからナノモル以下での完全な、またはほとんど完全なＴ細胞増殖阻害を示す、より低い細胞濃度および／またはより低い刺激、例えば抗ＣＤ３抗体単独を使用する系と対照をなす。
【００４５】
驚くべきことに、本明細書中に記載の耐性系において、本発明者らは、カルシニューリン阻害剤およびコルチコイドの組合せ剤が強くＴ細胞増殖を阻害（例えば６０％阻害から完全阻害まで）し、一方、組合せ剤の１つの構成要素は全く阻害しないかまたは３５％より多くは阻害しないことを発見した。判定および測定は実施例の“方法”に記載の通りである。
【００４６】
実施例に示したように、本発明者らは、本発明のインビトロ系において、式Ｉ、ＩＩもしくはＩＩＩ、例えばＩｐ、ＩＩＦＫの化合物、またはシクロスポリンＡ単独、またはヒドロコルチゾン単独、またはベタメタゾン１７−バレラート単独、またはデキサメタゾン単独では本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないか、または部分的、例えば３５％未満の阻害しか示さないかもしれないが、一方、ヒドロコルチゾンおよび式Ｉｐの化合物の組合せ剤、またはベタメタゾン１７−バレラートおよび式Ｉｐの化合物の組合せ剤、またはデキサメタゾンおよび式Ｉｐの化合物の組合せ剤、またはヒドロコルチゾンおよび式ＩＩＦＫの化合物の組合せ剤、またはデキサメタゾンおよび式ＩＩＦＫの化合物の組合せ剤、またはヒドロコルチゾンおよびシクロスポリンＡの組合せ剤、またはベタメタゾン１７−バレラートおよびシクロスポリンＡの組合せ剤、またはデキサメタゾンおよびシクロスポリンＡの組合せ剤が同アッセイにおいて少なくとも６０％阻害から完全阻害までを示すことを発見した。従って本発明者らは、１つの構成成分が阻害を示さないか、または３５％未満、例えば２５％未満、例えば２０％未満の阻害を示す場合には、本発明の化合物の組合せ剤が活性を示し得ることを発見した。
【００４７】
以下の実施例において温度は摂氏（℃）で与えられ、補正はされていない。
以下の略語を用いる：
【表１】
【実施例】
【００４８】
実施例Ａ
材料
ヒトＴ細胞レセプターを刺激する、マウス抗ＣＤ３ｍＡｂ（クローンＳＰＶ−Ｔ３／１、アイソタイプＩｇＧ２ａ）が知られており（Spits H．，Keizer G．，Borst J． et al．，（１９８３） Characterization of monoclonal antibodies against cell surface molecules associated with cytotoxic activity of natural and activated killer cells and cloned CTL lines、Hybridoma ２：４２３−４３７）そして適切に用意し得る。マウス抗ＣＤ２８ｍＡｂ（クローンＣＤ２８．２、アイソタイプＩｇＧ１，κ）がＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得られる（カタログ番号５５５７２５）。ＳＥＢがＴｏｘｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．（sarasota，Florida，ＵＳＡ；カタログ番号ＴＸ−ＢＴ２０２）から得られる。ＤＮＡ合成中のＢｒｄＵ取り込みの測定に基づく細胞増殖ＥＬＩＳＡキット（比色分析）がＲｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Mannheim，Germany）から得られる。これらのキットは製造業者の説明書に従って使用する。
【００４９】
細胞培養
ＰＢＭＣを滅菌条件下でヒト軟膜からＦｉｃｏｌｌ／Ｈｙｐａｑｕｅ遠心分離器で単離し、９０％ＦＣＳ＋１０％ＤＭＳＯ中で凍結し、液体窒素中で保存する。各実験のために凍結したＰＢＭＣを解凍し、次いで洗浄し、１０％熱不活性化ＦＣＳ（Gibco）、２ｍＭグルタミン、０．１ｍｇ／ｍｌストレプトマイシンおよび１００単位／ｍｌペニシリン（Gibco）を補ったＲＰＭＩ１６４０（Gibco-BRL，Paisley，UK）からなる培養培地中で再懸濁する。得られた細胞懸濁液の０．１ｍｌを、９６ウェル平底細胞培養プレート（Nunc，Roskilde，Denmark）の２〜１１列に、ウェルごとに加えるが、１２列は培地のみを含み、培地ブランクとして使用する。内側のウェルのみが細胞を受け取り、実験に使用される（すなわち１列並びにＡおよびＨ行は除く；培地のみを入れる）。最初に溶媒対照および試験化合物（０．０５ｍｌ／ウェル添加）を細胞と３７℃／５％ＣＯ２にて２時間インキュベーションする。次いで刺激物質を、培養培地（０．０５ｍｌ／ウェル）を入れる非刺激対照を除き、全ウェルに示された最終濃度まで加え（０．０５ｍｌ／ウェル添加）、該プレートをさらに６８時間３７℃／５％ＣＯ２にてインキュベーションし、その後ＢｒｄＵ（ＥＬＩＳＡキットから０．０２ｍｌ／ウェルのＢｒｄＵ標識溶液［＝細胞培養培地中１０μＭのＢｒｄＵ］）を添加する。さらなる３７℃／５％ＣＯ２４時間でのインキュベーションの後、該プレートを１２００ｒｐｍ（３００×ｇ）１０分間室温にて遠心分離する。上清を除去した後、細胞を乾燥するために該プレートを６０℃にて１時間インキュベーションする。溶媒対照および各化合物または化合物の組合せ剤（示された最終濃度で）を３連（すなわち濃度あたり３ウェル）で試験する。試験化合物（すなわち本発明の化合物−組合せ剤およびかかる組合せ剤の１つの化合物）をＤＭＳＯ中に溶解し、次いで細胞プレート中の最終ＤＭＳＯ濃度が０.２％（ｖ／ｖ）を越えないように細胞培養培地へと希釈する。
【００５０】
Ｔ細胞増殖アッセイ
ＥＬＩＳＡキット（Roche Molecular Biochemicals）を製造業者の説明書に従って使用して、ＤＮＡ合成中のＢｒｄＵ取り込みに基づく細胞増殖の測定のために、該プレートを処理する。光学密度を、６９０ｎｍを参照波長として、マイクロタイタープレートリーダーで４５０ｎｍにて測定する。吸光度データはソフトウェアプログラムＥｘｃｅｌ（登録商標）を用いて分析する。細胞なしのウェルにおける値の平均値をブランクとして使用し、他の値から引く。各化合物および化合物の組合せ剤での吸収の平均および標準偏差を計算し、次いで１００％として定義された刺激物質を含む溶媒対照（すなわち刺激対照）に対して標準化する。各化合物または化合物の組合せ剤の阻害％も計算する。
【００５１】
以下の実施例１〜２７において、Ｔ細胞増殖アッセイを本明細書中に記載と類似の方法で行う。
０日目に細胞を９６ウェル細胞培養プレートに播種し、刺激物質の添加前に２時間あらかじめ化合物（複数も可）とインキュベーションする。３日目に（すなわち６８時間後）ＢｒｄＵを加え、４時間プレートをインキュベーションし、その後、ＢｒｄＵ ＥＬＩＳＡを介するＢｒｄＵ取り込みの測定のために処理する。
【００５２】
表において、以下の用語が定義される：
“非刺激対照”：非刺激対照（すなわち細胞−刺激物質および化合物（複数も有））の測定されたＯＤ値の平均、並びに計算されたＳＤ値。
“刺激対照”：刺激対照（すなわち細胞＋刺激物質および化合物（複数も有））の測定されたＯＤ値の平均、並びに計算されたＳＤ値。
“化合物（複数も有）”：刺激物質および化合物（複数も有）の存在下におけるサンプルについて測定したＯＤ値の平均、並びに計算されたＳＤ値。
“標準化ＯＤ［またはＳＤ］（刺激対照％）”：ＯＤおよびＳＤ値を、１００に設定された刺激対照と相関して標準化する。
“阻害％”：１００％−［（サンプルＯＤ−非刺激対照ＯＤ）／（刺激対照ＯＤ−非刺激対照ＯＤ）］×１００％と定義する。負の値は刺激対照（０％阻害と定義する）と比較して増殖の刺激を示す。１００より大きい値は非刺激対照（１００％阻害と定義する）のレベルより低い阻害を示す。
【００５３】
実施例１
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も有）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１に示したように得られた。
【表２】
【００５４】
表１から、ＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、本質的にこの系においてＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では６５％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００５５】
実施例２
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も有）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２に示したように得られた。
【表３】
【００５６】
表２から、ＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１７％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では７３％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００５７】
実施例３
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表３に示したように得られた。
【表４】
【００５８】
表３からＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９３％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００５９】
実施例４
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表４に示したように得られた。
【表５】
【００６０】
表４からＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１７％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００６１】
実施例５
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表５に示したように得られた。
【表６】
【００６２】
表５からＡＳＭ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＨＣの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００６３】
実施例６
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表６に示したように得られた。
【表７】
【００６４】
表６からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤は７９％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００６５】
実施例７
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表７に示したように得られた。
【表８】
【００６６】
表７からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８６％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００６７】
実施例８
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表８に示したように得られた。
【表９】
【００６８】
表８からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９６％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００６９】
実施例９
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表９に示したように得られた。
【表１０】
【００７０】
表９からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１９％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では１００％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００７１】
実施例１０
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１０に示したように得られた。
【表１１】
【００７２】
表１０からＡＳＭ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独ではこの系において３４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＡＳＭ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００７３】
実施例１１
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、およびＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１１に示したように得られた。
【表１２】
【００７４】
表１１からＡＳＭ単独およびＤＥＸ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤では９６％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００７５】
実施例１２
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＡＳＭ（３０ｎＭ）、およびＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＡＳＭ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１２に示したように得られた。
【表１３】
【００７６】
表１２からＡＳＭ単独およびＤＥＸ単独では、この系において２４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＡＳＭ＋ＤＥＸの組合せ剤では１０１％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００７７】
実施例１３
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１３に示したように得られた。
【表１４】
【００７８】
表１３からＦＫ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＦＫ＋ＨＣの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では６０％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００７９】
実施例１４
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１４に示したように得られた。
【表１５】
【００８０】
表１４からＦＫ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独ではこの系において３１％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＦＫ＋ＨＣの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８０％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００８１】
実施例１５
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）の組合せ剤
結果：下記表１５に示したように得られた。
【表１６】
【００８２】
表１５からＦＫ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すがＦＫ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８８％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００８３】
実施例１６
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１６に示したように得られた。
【表１７】
【００８４】
表１６からＦＫ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＦＫ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９２％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００８５】
実施例１７
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１７に示したように得られた。
【表１８】
【００８６】
表１７からＦＫ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＦＫ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＦＫ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００８７】
実施例１８
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＦＫ（３０ｎＭ）、およびＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＦＫ（３０ｎＭ）
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１８に示したように得られた。
【表１９】
【００８８】
表１８からＦＫ単独およびＤＥＸ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＦＫ＋ＤＥＸの組合せ剤では９８％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００８９】
実施例１９
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表１９に示したように得られた。
【表２０】
【００９０】
表１９からＣｓＡ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＣｓＡ＋ＨＣの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では７５％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００９１】
実施例２０
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２０に示したように得られた。
【表２１】
【００９２】
表２０からＣｓＡ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＨＣの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８９％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００９３】
実施例２１
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２１に示したように得られた。
【表２２】
【００９４】
表２１からＣｓＡ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において本質的にＴ細胞増殖の阻害を示さないが、ＣｓＡ＋ＨＣの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９７％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００９５】
実施例２２
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＨＣ（１０μＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＨＣ（１０μＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２２に示したように得られた。
【表２３】
【００９６】
表２２からＣｓＡ単独、ＨＣ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において１７％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すがＣｓＡ＋ＨＣの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９９％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【００９７】
実施例２３
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２３に示したように得られた。
【表２４】
【００９８】
表２３からＣｓＡ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独ではこの系において１４％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では８８％より多い阻害を示すことは明らかである。
【００９９】
実施例２４
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２４に示したように得られた。
【表２５】
【０１００】
表２４からＣｓＡ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２５％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すがＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９４％より多い阻害を示すことは明らかである。
【０１０１】
実施例２５
細胞／ウェル：５００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２５に示したように得られた。
【表２６】
【０１０２】
表２５からＣｓＡ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独では、この系において２６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では９８％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【０１０３】
実施例２６
細胞／ウェル：２０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、ＢＥＴＡ（３００ｎＭ）、ＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３０ｎＭ）の組合せ剤およびＢＥＴＡ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：ＳＥＢ（０．１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２６に示したように得られた。
【表２７】
【０１０４】
表２６からＣｓＡ単独、ＤＥＸ単独およびＢＥＴＡ単独ではこの系において１６％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤およびＣｓＡ＋ＢＥＴＡの組合せ剤では１００％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【０１０５】
実施例２７
細胞／ウェル：１０００００
化合物（複数も可）：ＤＥＸ（３００ｎＭ）、ＣｓＡ（３００ｎＭ）、およびＤＥＸ（３００ｎＭ）＋ＣｓＡ（３００ｎＭ）の組合せ剤
刺激物質：抗ＣＤ３ｍＡｂ（０．１μｇ／ｍｌ）＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ（１μｇ／ｍｌ）
結果：下記表２７に示したように得られた。
【表２８】
【０１０６】
表２７からＣｓＡ単独およびＤＥＸ単独では、この系において２９％未満のＴ細胞増殖の阻害を示すが、ＣｓＡ＋ＤＥＸの組合せ剤では９８％より多い阻害（すなわち本質的に完全阻害）を示すことは明らかである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
コルチコイドおよび式
【化１】
〔式中、
Ｒ１は式
【化２】
［式中、
Ｒ５はクロロ、ブロモ、ヨードまたはアジドであり、
Ｒ６はヒドロキシまたはメトキシであり、そして
Ｒ４はヒドロキシであり、その場合１０、１１位に単結合が存在するか；または存在せず、その場合１０、１１位に二重結合が存在する］
の基（ａ）であるか、
または
Ｒ１は式
【化３】
［式中
Ｒ６は上記定義の通りであり、そして
Ｒ４はヒドロキシであり、その場合１０、１１位に単結合が存在する］
の基（ｂ）または基（ｃ）であり、
Ｒ２はオキソであり、その場合２３、２４位に単結合が存在するか；ヒドロキシであり、その場合２３、２４位に単結合または二重結合が存在するか；または存在せず、その場合２３、２４位に二重結合が存在し；
Ｒ３はメチル、エチル、プロピルまたはアリルである〕
の化合物の組合せ剤の、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用医薬の製造のための使用。
【請求項２】
式Ｉの化合物が式
【化４】
の化合物である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
コルチコイドがヒドロコルチゾン、ベタメタゾンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される、請求項１または２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４】
Ｔ細胞が疾患の病態生理に含まれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
該疾患がアトピー性皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、喘息、潰瘍性大腸炎およびクローン病からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
Ｔ細胞が疾患の病態生理に含まれるが、ただしＴ細胞が病態生理に含まれる巣状分節状糸球体硬化症は除く、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用医薬の製造のためのコルチコイドおよびカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用。
【請求項７】
カルシニューリン阻害剤が式
【化５】
［式中、置換基は請求項１に定義の通りである］
の化合物である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
カルシニューリン阻害剤が式
【化６】
［式中、
Ｒ１はヒドロキシまたは保護されたヒドロキシであり、
Ｒ２は水素、ヒドロキシルまたは保護されたヒドロキシルであり、
Ｒ３はメチル、エチル、プロピルまたはアリルであり、
ｎは１または２の整数であり、そして
線および点線の記号は単結合である］
の化合物である、請求項６に記載の使用。
【請求項９】
カルシニューリン阻害剤が式
【化７】
［式中、Ｒはメチル、エチル、プロピル、イソプロピルまたは−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３である］
の化合物である、請求項６に記載の使用。
【請求項１０】
カルシニューリン阻害剤が請求項２に記載の式Ｉｐの化合物である、請求項６または７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
カルシニューリン阻害剤が式
【化８】
の化合物である、請求項６または８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
カルシニューリン阻害剤が式ＩＩＩの化合物（Ｒがエチル）である、請求項６または９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
コルチコイドがヒドロコルチゾン、ベタメタゾンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される、請求項６〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
カルシニューリン阻害剤、コルチコイド、またはその両方が塩形である、請求項６〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
式Ｉｐの化合物およびヒドロコルチゾンの組合せ、その上薬学的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１６】
式Ｉｐの化合物およびベタメタゾンの組合せ、その上薬学的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１７】
式Ｉｐの化合物およびデキサメタゾンの組合せ、その上薬学的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１】
コルチコイドおよび式
【化１】
〔式中、
Ｒ１は式
【化２】
［式中、
Ｒ５はクロロ、ブロモ、ヨードまたはアジドであり、
Ｒ６はヒドロキシまたはメトキシであり、そして
Ｒ４はヒドロキシであり、その場合１０、１１位に単結合が存在するか；または存在せず、その場合１０、１１位に二重結合が存在する］
の基（ａ）であるか、
または
Ｒ１は式
【化３】
［式中
Ｒ６は上記定義の通りであり、そして
Ｒ４はヒドロキシであり、その場合１０、１１位に単結合が存在する］
の基（ｂ）または基（ｃ）であり、
Ｒ２はオキソであり、その場合２３、２４位に単結合が存在するか；ヒドロキシであり、その場合２３、２４位に単結合または二重結合が存在するか；または存在せず、その場合２３、２４位に二重結合が存在し；
Ｒ３はメチル、エチル、プロピルまたはアリルである〕
の化合物の組合せ剤の、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用医薬の製造のための使用。
【請求項２】
式Ｉの化合物が式
【化４】
の化合物である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
コルチコイドがヒドロコルチゾン、ベタメタゾンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される、請求項１または２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４】
Ｔ細胞が疾患の病態生理に含まれる、請求項１〜３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
該疾患がアトピー性皮膚炎、乾癬、乾癬性関節炎、リウマチ性関節炎、喘息、潰瘍性大腸炎およびクローン病からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
Ｔ細胞が疾患の病態生理に含まれるが、ただしＴ細胞が病態生理に含まれる巣状分節状糸球体硬化症は除く、コルチコイド耐性疾患および／またはカルシニューリン阻害剤耐性疾患の処置用医薬の製造のためのコルチコイドおよびカルシニューリン阻害剤の組合せ剤の使用。
【請求項７】
カルシニューリン阻害剤が式
【化５】
［式中、置換基は請求項１に定義の通りである］
の化合物である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
カルシニューリン阻害剤が式
【化６】
［式中、
Ｒ１はヒドロキシまたは保護されたヒドロキシであり、
Ｒ２は水素、ヒドロキシルまたは保護されたヒドロキシルであり、
Ｒ３はメチル、エチル、プロピルまたはアリルであり、
ｎは１または２の整数であり、そして
線および点線の記号は単結合である］
の化合物である、請求項６に記載の使用。
【請求項９】
カルシニューリン阻害剤が式
【化７】
［式中、Ｒはメチル、エチル、プロピル、イソプロピルまたは−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３である］
の化合物である、請求項６に記載の使用。
【請求項１０】
カルシニューリン阻害剤が請求項２に記載の式Ｉｐの化合物である、請求項６または７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１１】
カルシニューリン阻害剤が式
【化８】
の化合物である、請求項６または８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１２】
カルシニューリン阻害剤が式ＩＩＩの化合物（Ｒがエチル）である、請求項６または９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
コルチコイドがヒドロコルチゾン、ベタメタゾンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される、請求項６〜１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
カルシニューリン阻害剤、コルチコイド、またはその両方が塩形である、請求項６〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１５】
式Ｉｐの化合物およびヒドロコルチゾンの組合せ、その上薬学的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１６】
式Ｉｐの化合物およびベタメタゾンの組合せ、その上薬学的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１７】
式Ｉｐの化合物およびデキサメタゾンの組合せ、その上薬学的に許容される賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【公表番号】特表２００６−５１７２１７（Ｐ２００６−５１７２１７Ａ）
【公表日】平成１８年７月２０日（２００６．７．２０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０１７８２（Ｐ２００６−５０１７８２）
【出願日】平成１６年２月９日（２００４．２．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００１１７９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６９２６７
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年７月２０日（２００６．７．２０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年２月９日（２００４．２．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００１１７９
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０６９２６７
【国際公開日】平成１６年８月１９日（２００４．８．１９）
【出願人】（５９７０１１４６３）ノバルティス アクチエンゲゼルシャフト (942)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]